Dissertations / Theses: 'Dystrophie musculaire de Becker'

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Gaïda, Philippe. "Dystrophie musculaire de Becker : étude d'une série de 31 patients." Bordeaux 2, 1996. http://www.theses.fr/1996BOR23051.

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Robert, Bernard. "La myopathie de becker : donnees classiques et actuelles ; a propos de 60 observations." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO1M473.

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LANG, CATHERINE. "Aspects moleculaires des myopathies de duchenne et de becker." Strasbourg 1, 1994. http://www.theses.fr/1994STR15058.

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Guilbaud, Marine. "Identification d'ARNs non-codants impliqués dans les dystrophinopathies." Thesis, Sorbonne université, 2018. http://www.theses.fr/2018SORUS042/document.

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Abstract:

Les dystrophies musculaires de Duchenne (DMD) et de Becker (BMD) sont dues à des mutations dans le gène DMD codant la Dystrophine. De nombreux aspects des mécanismes pathophysiologiques de ces maladies ne sont pas encore expliqués. Nous nous sommes intéressés à l'étude d'ARN non-codants pouvant participer à ces processus. Une première étude a été centrée sur l’identification de micro-ARNs (miARNs) impliqués dans la régulation de l’oxyde nitrique synthase neuronale (nNOS) une protéine partenaire de la Dystrophine et associée à des caractéristiques de ces pathologies telles que la fatigabilité musculaire. 617 miARNs ont été criblés par Taqman Low Density Array dans des muscles de sujets sains et de patients BMDdel45-55. 4 miARNs candidats ont été sélectionnés de cette étude pour leur surexpression chez les patients BMDdel45-55 et leur capacité théorique à cibler nNOS. Des expériences de modulation de l’expression de ces miARNs dans des myoblastes humains sains ou dystrophiques nous ont permis d’identifier que le miR-708-5p et le miR-34-5p pouvaient cibler nNOS et moduler son expression.Un deuxième axe a été mené sur l’étude des longs ARNs non-codants (lncARNs). Les introns 44 et 55, qui bornent les exons 45 à 55 délétés chez les patients BMDdel45-55, sont de grandes régions contenant des lncARNs décrits comme régulant la Dystrophine. Les points de cassure introniques des mutations de ces patients n’étant pas décrites, nous avons supposé l’existence de profils de lncARNs différents. L’analyse de l’ADN de ces patients montre en effet des profils de lncARNs différents, révélant ainsi l’importance d’une étude plus précise des zones de délétion des patients BMDdel45-55
Duchenne (DMD) and Becker (BMD) muscular dystrophies are due to mutations in DMD gene, encoding Dystrophin. Many aspects of pathophysiological mechanisms of these diseases are not yet well understood. We were interested in the study of non-coding RNAs that could be involved in these pathological processes. A first study focused on micro-RNAs (miRNAs) that could modulate expression of the neuronal nitric oxide synthase (nNOS), a partner of Dystrophin which is linked to pathological features as muscular fatigability. 617 miRNAs were screened by Taqman Low Density Array in muscle biopsies of healthy subjects or BMDdel45-55 patients. 4 candidate miRNAs were selected from this study since they were overexpressed in BMDdel45-55 patients and for their theoretical ability to target nNOS. Experiments modulating the expression of these miRNAs in healthy or dystrophic human myoblasts enabled us to identify that miR-708-5p and miR-34-5p could target nNOS and modulate its expression.A second axis was conducted on long non-coding RNA (lncRNA). Introns 44 and 55, which bound exons 45-55 deleted in BMDdel45-55 patients, are large regions containing lncRNAs described as regulating Dystrophin. Since intronic breakpoints of DMD mutations of these pateints were not described, we have assumed the existence of different profiles of lncRNAs. DNA analysis of these patients actually showed different lncRNAs profiles, thus revealing the significance of a more precise analysis of deletion areas in DMD gene of BMDdel45-55 patients

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Humbertclaude, Véronique. "Variabilité phénotypique et corrélations génotype – phénotype des dystrophinopathies : contribution des banques de données." Thesis, Montpellier 1, 2011. http://www.theses.fr/2011MON1T028/document.

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Abstract:

L'objectif de ce travail est de développer la partie clinique de la banque de données du gène DMD, afin d'étudier l'histoire naturelle des dystrophinopathies et les corrélations génotype–phénotype, et de faciliter la sélection des patients pour les futurs essais thérapeutiques. La méthodologie créée pour le gène DMD peut être généralisée et utilisée pour d'autres banques de données dédiées à des maladies génétiques. La collecte de 70 000 données cliniques chez 600 patients avec un suivi longitudinal moyen de 12 ans permet de décrire l'histoire naturelle des dystrophies musculaires de Duchenne et de Becker et des formes symptomatiques chez les femmes. Nous avons pu préciser l'hétérogénéité phénotypique sur le plan moteur, orthopédique et respiratoire (forme sévère et forme intermédiaire de la dystrophie musculaire de Duchenne), sur le plan cardiaque (absence de corrélation entre les atteintes motrice et cardiaque, variabilité de l'atteinte cardiaque), et sur le plan cérébral (atteinte intellectuelle chez les patients avec dystrophie musculaire de Becker, troubles psychologiques des dystrophinopathies). L'utilisation de cet outil par les cliniciens et les généticiens devrait faciliter le travail de recherche clinique et la réalisation des futurs essais cliniques. Ceci nécessite maintenant de développer l'accessibilité de la banque de données et d'envisager sa pérennisation
The objective of this work is to develop the clinical part of the French dystrophinopathy data-base, in order to study the natural history and the genotype-phenotype correlations, and to facilitate the selection of the patients for the future therapeutic trials. The methodology developed for the DMD gene can be generalized and used for the other databases dedicated to genetic diseases. The collection of 70 000 clinical data for 600 patients with an average lon-gitudinal follow-up of 12 years allows to clarify the natural history of the muscular dystrophies of Duchenne and Becker and in symptomatic females. We were able to specify the pheno-typic heterogeneity of the motor, orthopaedic and respiratory involvements (severe form and intermediary form of the Duchenne muscular dystrophy), of the cardiac disorder (absence of correlation between motor and cardiac involvements, variability of the cardiomyopathy), and of the brain function (mental deficiency in the patients with Becker muscular dystrophy, psychological disorders in dystrophinopathies). The use of this tool by the clinicians and the ge-neticists should facilitate their clinical research work and the realization of the future clinical trials. This requires now to develop the accessibility of the database and to ensure its continued existence

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Couillandre, Annabelle. "Incidence de la posture initiale sur la programmation de la marche : contrôle du centre des masses lors de l'initiation de la marche sur l'avant-pied." Paris 11, 2002. http://www.theses.fr/2002PA112296.

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Abstract:

Par rapport à un objectif vitesse, la progression du corps au cours de l'initiation de la marche (IM) résulte du contrôle des forces gravitaires par les forces musculaires et du choix des paramètres locomoteurs. Dans ce travail, nous utilisons le modèle d'analyse de l'IM pour comprendre l'incidence de la posture initiale sur la programmation de la marche: d'une part, chez le sujet sain à qui on impose une posture, talons décollés du sol et d'autre part, chez le sujet avec la Dystrophie Musculaire de Becker (BMD), qui présente fréquemment naturellement cette posture. Celle-ci a pour conséquence de réduire la base posturale, restreindre l'amplitude de recul du centre des pressions des pieds (CP) au cours des Ajustements Posturaux Anticipateurs (APA). En associant les techniques dynamique, électromyographique (EMG) et dynamométrique, nous mettons en évidence, dans chacune des phases de l'IM, des modifications mais aussi des invariances des paramètres biomécaniques et EMG. Le contrôle des forces gravitaires par les forces musculaires chez le sujet sain adoptant la posture, talons décollés du sol diffère de celui mis en évidence chez le sujet présentant la BMD. Cette différence de contrôle est à l'origine de la perturbation de la séquence motrice normalement observée. Chez le sujet adoptant la posture, talons décollés du sol comme chez le patient, des synergies musculaires autres que celles normalement observées assistent la mise en place de cette séquence motrice, dans le but de conserver des APA adéquats pour la progression. Ceux-ci préparent la configuration posturale pour le mouvement à venir, assistent la performance motrice et présentent des caractéristiques dépendant des paramètres de la posture et du mouvement. De plus, l'ajustement entre vitesse du centre de gravité et du CP traduit des adaptations du schéma corporel dynamique. La stratégie de modulation de la vitesse du CP permet de discerner un comportement locomoteur spécifique des contraintes posturales
According to a velocity objective, body progression during gait initiation results from a control of the gravity forces by the muscular forces and a choice of the locomotor parameters. In this study, we use a gait initiation analysis model in order to understand the incidence of the initial posture on gait programming: on one hand, on the healthy subject to whom a heel-off posture is imposed and on the other hand, on the subject with Becker Muscular Dystrophy (BMD), who naturally frequently displays this posture. This latter consequently reduces the postural basis, limits the centre of foot pressure (CP) backward shift during the Anticipatory Postural Adjustments (APA). Using dynamic, electromyographical (EMG) and dynamometric techniques, we show, in each of the gait initiation phases, some modifications but also some invariances of the biomechanical and EMG parameters. The control of the gravity forces by the muscular forces in the healthy subject, adopting the heel-off posture differs from the one displayed by the subject with BMD. This difference of control is at the origin of the perturbation on the motor sequence normally observed. In the healthy subject adopting the heel-off posture as well as in the patient, muscular synergies other than the ones normally observed assist the occurence of this motor sequence in order to preserve appropriate APA for progression. These prepare the postural configuration for the forthcoming movement, assist the motor performance and present characteristics in relation with the parameters of the posture and movement. Moreover, the adjustement between centre of gravity and CP velocities may represent adaptations of the dynamic body scheme. The strategy of CP velocity modulation allows to distinguish a locomotor behaviour specific to the postural constraints

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Vincent, Lacaze Nathalie. "Expression du gène de la dystrophine et perspectives thérapeutiques des dystrophines musculaires de Duchenne et de Becker." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD12.

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Abstract:

Le gène de la dystrophine dont l'atteinte est responsable de la dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) code pour un transcrit musculaire de 14 kilobases et pour une famille de transcrits issus de promoteurs et/ou d'épissages alternatifs. Il existe une hétérogénéité des manifestations cliniques associées à la présence de mutations dans le gène de la dystrophine qui incitent à rechercher un ou plusieurs autres gènes non encore caractérisés tout entiers contenus dans une des introns de ce gène, ou intriqués avec lui. Nous avons caractérisé différents transcrits initiés à partir d'un promoteur alternatif localisé dans l'intron 62. Le criblage de banques d' ADNc de foie et de lymphocytes humains ne nous a pas permis de mettre en évidence de nouveaux transcrits alternatifs. Afin d'élargir la recherche à des transcrits totalement distincts de ceux déjà connus, nous avons entrepris d'utiliser la sélection d' ADNc par hybridation sur des chromosomes artificiels de levures (YAC). Nous avons utilisé des fragments de PCR-Alu obtenus à partir d'un YAC couvrant la région génomique correspondant aux exons 1 à 25 de la dystrophine pour sélectionner dans une banque de cœur d'éventuels ADNc issus du locus DMD. Nous avons isolé un clone de 270 bases, dont nous avons localisé l'origine dans l'intron 2 du gène. La deuxième partie de ce travail a été consacrée à une collaboration avec le laboratoire de Michel Perricaudet (Villejuif), portant sur le transfert d'un minigène de dystrophine médié par un vecteur adénoviral dans le muscle de souris mdx. Nous avons démontré l'efficacité de cette approche chez des souris nouveau-nées, en obtenant une expression dans 5 à 60% des fibres musculaires et une correction à long terme (6 mois) des anomalies histologiques observées chez ces mutants dépourvus de dystrophine. Nous avons testé l'effet de la dose injectée, et de l'âge des animaux au moment de l'injection. Ceci a permis de mettre en évidence, en même temps que d'autres équipes, l'existence d'une réaction immunologique chez les animaux lorsqu'ils ne sont pas injectés dans les premiers jours de vie, ainsi qu'une baisse nette du nombre de fibres infectées à partir de l'âge de 25 jours.

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Kaspar, Rita Wen. "Genotype-Phenotype Association Analysis of Dilated Cardiomyopathy in Becker Muscular Dystrophy." The Ohio State University, 2009. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1243469474.

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Frishman, Natalia, Kristin Caspers Conway, Jennifer Andrews, Jacob Oleson, Katherine Mathews, Emma Ciafaloni, Joyce Oleszek, et al. "Perceived quality of life among caregivers of children with a childhood-onset dystrophinopathy: a double ABCX model of caregiver stressors and perceived resources." BIOMED CENTRAL LTD, 2017. http://hdl.handle.net/10150/623121.

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Abstract:

Background: Duchenne and Becker muscular dystrophies, collectively referred to as dystrophinopathies, are recessive X-linked disorders characterized by progressive muscle weakness and ultimately cardiac and respiratory failure. Immediate family members are often primary caregivers of individuals with a dystrophinopathy. Methods: We explored the impact of this role by inviting primary caregivers (n = 209) of males diagnosed with childhood-onset dystrophinopathy who were identified by the Muscular Dystrophy Surveillance, Tracking, and Research Network (MD STARnet) to complete a mailed questionnaire measuring perceived social support and stress, spirituality, and family quality of life (FQoL). Bivariate and multivariate analyses examined associations between study variables using the Double ABCX model as an analytic framework. Results: Higher stressor pile-up was associated with lower perceived social support (r = -0.29, p <.001), availability of supportive family (r = -0.30, p <.001) or non-family (r = -0.19, p <.01) relationships, and higher perceived stress (r = 0.33, p <.001); but not with spirituality (r = -0.14, p > 0.05). FQoL was positively associated with all support measures (correlations ranged from: 0.25 to 0.58, p-values 0.01-0.001) and negatively associated with perceived stress and control (r = -0.49, p <.001). The association between stressor pile-up and FQoL was completely mediated through global perceived social support, supportive family relationships, and perceived stress and control; supportive non-family relationships did not remain statistically significant after controlling for other mediators. Conclusions: Findings suggest caregiver adaptation to a dystrophinopathy diagnosis can be optimized by increased perceived control, supporting family resources, and creation of a healthy family identity. Our findings will help identify areas for family intervention and guide clinicians in identifying resources that minimize stress and maximize family adaptation.

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Tandon, Animesh. "Dystrophin genotype-cardiac phenotype correlations in Duchenne and Becker muscular dystrophy using cardiac magnetic resonance imaging." University of Cincinnati / OhioLINK, 2014. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=ucin1396453528.

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Gardner, Rebecca Jane. "Mutation analysis of Duchenne and Becker muscular dystrophies." Thesis, King's College London (University of London), 1996. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.321813.

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Winnard, Alissa Vira. "Exception patients in Duchenne and Becker muscular dystrophy /." The Ohio State University, 1993. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=osu1487847309050842.

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Cockburn, David James. "Analysis of DMD translocations." Thesis, University of Oxford, 1991. http://ora.ox.ac.uk/objects/uuid:ab53825b-b18e-4f60-954a-4ea9e0435126.

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Abstract:

Duchenne and Becker muscular dystrophies (DMD, BMD) are allelic X-linked diseases which affect approximately one in 3500 male newborns. They are caused by mutations in a gene positioned on the short arm of the X chromosome at Xp21. The first indication of the location of this gene was the description of rare females expressing DMD and who were found to have constitutional X;autosome translocations with an X chromosome breakpoint at this site. There are now 24 such females known worldwide. They express DMD as a consequence of preferential inactivation of the normal X chromosome. In order to contribute to the understanding of the aetiology of mutations causing DMD and the aetiology of constitutional translocations, two types of study have been performed here. Firstly, the detailed mapping of the X chromosome breakpoints of DMD-associated X;autosome translocations has been investigated. The results of this study have been compared with data on the physical distribution of mutations causing DMD in male patients. Secondly, one translocation, an X;l translocation with an autosomal breakpoint at Ip34, has been selected for more detailed investigation and the DNA sequence has been determined at the site of the rearrangement. Translocation breakpoint mapping studies were performed by somatic cell hybrid analysis. Hybrids were karyotyped and this information was used to construct a hybrid panel for the purpose of determining the autosomal localisations of anonymous DNA probes. The mapping of seven probes using this panel is described. The work described in this thesis revealed that the distribution of translocation breakpoints within the DMD gene appears to be random and may differ from the distribution of mutations in male patients. The X;l translocation whose breakpoints are cloned and sequenced was found to involve two expressed loci, one coding for dystrophin on the X chromosome and one for the leukocyte antigen related protein on chromosome 1. Sequence data revealed that a deletion of four to seven nucleotides from the X chromosome and a duplication of two to five nucleotides are associated with the translocation. The possible involvement of trinucleotides adjacent to the breakpoints, and of a LINE, a SINE and a stretch of potential Z-DNA within 1 kb of the X chromosome or the chromosome 1 breakpoint, is discussed.

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Hoogerwaard, Edo Marc. "Duchenne and Becker muscular dystrophy neurological, cardiological and genetic studies in carriers and patients /." [S.l. : Amsterdam : s.n.] ; Universiteit van Amsterdam [Host], 2000. http://dare.uva.nl/document/55600.

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Khudai, Chandni. "A Descriptive Study on the Effect of Carrier Status on Mothers’ Wellbeing and Adaptation to Duchenne and Becker Muscular Dystrophy." University of Cincinnati / OhioLINK, 2012. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=ucin1343068081.

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BOURSIER, MICHEL. "La dystrophie musculaire oculo-pharyngee : description, evolution du concept." Angers, 1991. http://www.theses.fr/1991ANGE1063.

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WILLEMSE, CARPENTIER SYLVIE. "La dystrophie musculaire congenitale : a propos de trois observations." Aix-Marseille 2, 1988. http://www.theses.fr/1988AIX20432.

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Klein, Pierre. "Les rôles de PABPN1 dans la dystrophie musculaire oculopharyngée." Thesis, Paris 6, 2016. http://www.theses.fr/2016PA066217/document.

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Abstract:

PABPN1 est une protéine de liaison à l'ARN nucléaire et ubiquitaire impliquée dans de nombreux mécanismes de régulation post-transcriptionnelle des ARN. Une expansion anormale de triplets GCN dans le gène PABPN1 conduit à une dystrophie musculaire appelée dystrophie musculaire oculopharyngée (OPMD). A l'heure actuelle les mécanismes moléculaires conduisant d'une expansion de quelques triplets dans le gène d'une protéine ubiquitaire vers cette pathologie où seulement quelques muscles sont touchés ne sont pas connus. La caractéristique phénotypique majeure de la maladie est la présence d'agrégats intranucléaires dans les noyaux des muscles atteints et non atteints. Cependant le rôle exact de ces agrégats et leur implication dans la pathologie reste encore incertain. A l'heure actuelle il n'y a pas de traitements curatifs pour l'OPMD. Dans ce contexte, ce projet de thèse a porté sur 1) l'étude des mécanismes moléculaires dérégulés dans la pathologie, 2) l'étude de la contribution des agrégats nucléaires et 3) le développement d'un stratégie de thérapie génique. Au cours de ce travail il a été mis en évidence des défauts mitochondriaux et les mécanismes moléculaires sous-jacents ont été élucidés. L'étude de l'implication des agrégats dans la maladie a révélé la présence de défauts d'épissage et en particulier dans un ARN muscle spécifique codant la protéine TNNT3. Le projet de thérapie génique dit de remplacement consiste à éteindre PABPN1 par interférence à ARN et amener un ADNc (PABopt) qui code la forme saine et qui est non ciblée par les outils interférence grâce à la redondance du code génétique. Les résultats obtenus ont été très positifs à la fois in vitro et in vivo
PABPN1 is an RNA binding protein involved in many post-transcriptional RNA regulation mechanisms. A pathological expansion of the GCN triplet in the gene leads to a muscular dystrophy called Oculopharyngeal muscular dystrophy (OPMD). The molecular mechanisms leading to a small expansion in an ubiquitous protein to a disease, where only few muscles are impaired are still not fully understood. The main pathological hallmark is the presence in the myonuclei of nuclear aggregates of the PABPN1 protein. Today there is no cure for OPMD patients. In this context the projects developed during this thesis have been to 1) study the molecular mechanisms involved in OPMD, 2) study the contribution of the nuclear aggregates in the physiopathology of the disease and 3) develop a gene therapy strategy. We found mitochondrial dysfunctions present in OPMD muscles and we decipher the molecular mechanism involved. Study of PABPN1 aggregates in OPMD has highlighted splicing deregulation events. Among them TNNT3, a RNA which encodes a muscle specific protein is deregulated and we found that the pre-mRNA is trapped in nuclear aggregates outsides speckles nuclear domain containing its natural splicing factor (SC35), leading to an imbalance of the ratio of two mutually exclusives exons of the transcript. The gene therapy strategy developed is a replacement strategy that consists of silencing PABPN1 using RNAi and also bringing a novel version of the protein using a cDNA, untargeted by RNAi thanks to the genetic code redundancy, which encodes a wild-type form of PABPN1. We obtained promising results both in vitro and in vivo in mice OPMD model with a rescue of the pathological phenotype

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Boulanger, Piette Antoine. "La communication os-muscle dans la dystrophie musculaire : une interaction musculaire hors triade pour l'ostéoprotégérine." Doctoral thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/40332.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne est caractérisée par une dégénérescence musculaire progressive accompagnée d’une fragilité osseuse exacerbée par la norme de soins actuelle. Au-delà de la relation mécanique qui unit leur croissance, maintenance ou dégénérescence, les muscles et les os interagiraient à l’échelle moléculaire via des sentiers signalétiques communs. La voie RANK/RANKL/OPG, un gouverneur du remodelage osseux, est au nombre de ces voies suite à la découverte de la triade en contexte musculaire, de la capacité des cellules musculaires à sécréter de l’OPG, de la localisation du récepteur RANK au sarcolemme et de l’effet inotropique de la délétionmusculaire de RANK sur l’atrophie induite par dénervation. Élément déterminant, le bénéfice musculaire d’un traitement au FL-OPG-Fc, protagoniste de la triade fusionnée à un fragment Fc, est supérieur aux stratégies pharmacologiques ou génétiques d’inhibitionde RANK/RANKL pour la souris dystrophique et suggère un effet biologique hors-triade. Malgré ces évidences morcelées et compte tenu de la structure du FL-OPG-Fc, un potentiel mécanisme d’action musculaire est inconnu. Ce mécanisme constitue l’idée originale de cette thèse et nécessite investigation à l’aide d’un modèle pré-clinique prédictif et fidèle au déroulement de la pathologie. Le but de cette thèse est 1) caractériser à différents stades de vie les propriétés fonctionnelles et contractiles d’un nouveau modèle dystrophique pré-clinique murin ainsi que les paramètres discriminants par rapport à la souris sauvage, 2) mettre à jour les connaissances sur la cohésion signalétique ainsi que le dialogue moléculaire bidirectionnel muscle-os en contexte de dystrophie musculaire et 3) investiguer la capacité du FL-OPG-Fc à interagir directement avec les cellulesmusculaires, en explorer la signalisation cellulaire puis vérifier la présence d’un effet bénéfique aigu sur la contractilité de muscles dystrophiques. Premièrement, nos recherches sur le nouveau modèle ont démontré que l’haploinsuffisance en utrophine dans la souris délétée en dystrophine n’a pas d’impact sur sa performance fonctionnelle et contractile à 1, 2 et 5 mois d’âge. Ces données ont permis d’établir que la souris déficiente en dystrophine était pertinente pour nos études,moyennant l’utilisation préférentielle de variables expérimentales discriminantes par rapport à la souris sauvage telles que la force maximale spécifique et la résistance aux contractions excentriques. Deuxièmement, en ce qui a trait aux voies communes et aux dialogues muscle-os en contexte de dystrophie musculaire, nos travaux de synthèse ont répertorié des interactions basées sur des myokines, ostéokines et cytokines de double origine déclenchant des sentiers signalétiques menant entre autres à l’inflammation, la fibrose, la synthèse ou la dégradation protéique. Collectivement, les sources citées par notre ouvrage soulignent l’importance de considérer les muscles et les os en tant qu’unité pour orienter les recherches précliniques vers le développement d’approches multifonctionnelles efficaces à traiter ces affections musculaires et osseuses de manière simultanée. Troisièmement, nos travaux de recherche ont montré que le FL-OPG-Fc peut directement associer et influencer le muscle squelettique grâce à son domaine de liaison à l’héparine tant pour les fibres saines que celles déficientes en dystrophine, et ce, au moins en partie de manière indépendante du récepteur RANK. Puis, cette liaison musculaire peut engendrer une cascade de signalisation cellulaire incluant les protéines FAK/Akt/CaMKII/PLN. Concrètement, nos résultats ont indiqué que le FL-OPG-Fc peut avoir un effet protecteur dans les cellules musculaires contre les dommages causés par une surcharge calcique. Finalement, le FL-OPG-Fc peut avoir un effet potentiateur sur les contractions tétaniques des muscles dystrophiques de phénotype rapide, effet nécessitant la présence du domaine de liaison à l’héparine pour s’opérer. Globalement, cette thèse apporte une contribution à l’avancement des connaissances sur le développement scientifique de modèles précliniques de DMD, sur les sentiers communs aux muscles et aux os, sur l’existence ainsi que le domaine de l’interaction du FL-OPG-Fc directement sur les cellules musculaires et sur une des voies de signalisation potentielles par laquelle le FL-OPG-Fc peut les influencer. Ces avancées biologiques repoussent les connaissances au sujet de la voie RANK/RANKL/OPG au sein de la communication muscle-os. Ces résultats peuvent également être mis en perspective de situations physiologiques comme la croissance, la maintenance et l’homéostasie, où ce dialogue pourrait s’exprimer dans la régulation réciproque du muscle et de l’os. Finalement, les connaissances générées au sujet de la protéine OPG pourront contribuer à la compréhension des rôles hors-triade de l’OPG répertoriés pour de multiples types cellulaires non-osseux.

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Gladstone, Amy R. "Assessing the Genetic Counseling Needs of Parents who have Adopted a Child with Duchenne or Becker Muscular Dystrophy." University of Cincinnati / OhioLINK, 2013. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=ucin1367924226.

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Tymczuk, Tremblay Sophie. "Aspects cliniques, fonctionnels et généalogiques de la dystrophie musculaire oculo-pharyngee au Saguenay-Lac-Saint-Jean /." Thèse, Québec : Université Laval, École des gradués, 1992. http://theses.uqac.ca.

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Abstract:

Mémoire (M.Sc.)-- Université du Québec à Chicoutimi, 1992.
"Mémoire présenté pour l'obtention du grade de maître es sciences (M.Sc.)" Ce mémoire a été réalisé à l'UQAC dans le cadre du programme de maîtrise en médecine expérimentale (génétique) extensionné de l'Un. Laval à l'UQAC. CaQCU CaQCU Bibliogr.: f. 75-80. Document électronique également accessible en format PDF. CaQCU

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Priez, Alain. "Évolution d'une dystrophie musculaire : caractérisation par l'analyse de l'EMG de surface." Compiègne, 1989. http://www.theses.fr/1989COMPD161.

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Abstract:

L'électromyogramme de surface (EMG) est analysé dans le but d'une part de quantifier chez un sujet le degré d'atteinte par la myopathie de Duchenne, d'autre part de suivre l'évolution de la maladie. Après une présentation du muscle strié squelettique, du signal EMG et des paramètres qui lui sont associés, la myopathie est située par rapport aux autres maladies neuromusculaires puis considérée sous différents aspects (clinique, histochimique, physiologique, génétique,. . . ). Le protocole expérimental permet de recueillir les signaux EMG sur deux muscles fléchisseurs du coude (biceps brachial, long supinateur) lors d'un effort sous-maximal réalisé en utilisant un ergomètre développé spécifiquement pour cette étude. Ces signaux sont transférés sur microordinateur, divers paramètres spectraux en sont extraits. Chaque expérimentation est caractérisée par deux tableaux bi-dimensionnels, un par muscle, constitués chacun de 25 paramètres évoluant dans le temps. Chaque muscle est étudié séparément. Différents algorithmes d'analyse de données sont développés afin de distinguer, à partir des différences d'évolution des paramètres, dans un premier temps des sujets myopathes de sujets sains, puis des sujets myopathes entre eux en fonction de leur niveau d'atteinte. La validité des méthodes est vérifiée par projection d'individus supplémentaires. Un indice du niveau d'atteinte est proposé.

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Richard, Isabelle. "Etiologie moleculaire de la dystrophie musculaire des ceintures type 2a (lgmd2a)." Paris 7, 1996. http://www.theses.fr/1996PA077273.

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Abstract:

Les dystrophies musculaires des ceintures (lgmd ou limb girdle muscular dystrophy) sont un groupe de maladies genetiques cliniquement heterogenes et caracterisees par une atrophie et une faiblesse progressive des muscles des ceintures. La premiere localisation d'une forme recessive avait ete determinee en 15q15. 1-q21. 1 grace a l'etude d'un groupe de familles reunionnaises. Cette these relate l'identification du gene correspondant, realisee par clonage positionnel. Apres construction de cartes physiques, restriction de l'intervalle candidat par analyse genetique et recherche de genes presents dans la region, l'identification de mutations chez des patients lgmd2a a permis de demontrer l'implication du gene codant pour une protease intracellulaire, la calpaine 3 specifique du muscle squelettique comme etant le site genetique responsable de cette forme de dystrophie des ceintures. L'analyse systematique de ce gene a conduit a l'identification de 50 mutations differentes dans des familles de toutes origines, demontrant la grande variete des defauts moleculaires. Afin de pouvoir entreprendre des etudes chez l'animal, nous avons ensuite caracterise la sequence de l'adnc de souris et d'une partie de l'organisation genomique du gene correspondant. Ces informations ont servi a la construction d'un modele murin de la maladie par recombinaison homologue. Ces travaux ont demontre, par l'implication de canp3 dans lgmd2a, l'existence d'un nouveau mecanisme conduisant a un processus dystrophique par opposition a des defauts dans des proteines structurales de la membrane musculaire presents dans les autres myopathies

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Charton, Karine. "Etude de la physiopathologie de la dystrophie musculaire tibiale et de la dystrophie des ceintures 2J et stratégies thérapeutiques." Thesis, Evry-Val d'Essonne, 2010. http://www.theses.fr/2010EVRY0026/document.

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Abstract:

La titine est une protéine géante exprimée dans les muscles squelettiques et cardiaque. Un certain nombre de mutations pathogéniques ont été identifiées dans son dernier exon codant. La mutation la plus fréquente, FINmaj, conduit au remplacement de 4 acides aminés et est retrouvée chez de nombreux patients en Finlande. Cette mutation cause une dystrophiemusculaire tibiale (TMD) à l‟état hétérozygote et une dystrophie des ceintures de type 2J(LGMD2J) à l‟état homozygote.Pour obtenir une modèle d‟étude de la physiopathologie de ces maladies et évaluer des stratégiesthérapeutiques, nous avons introduit la mutation FINmaj dans le génome murin par une stratégiede Knock-In par recombinaison homologue. Ce modèle a été caractérisé et a permis de montrer qu‟il reproduit en grande partie les symptômes de la TMD et de la LGMD2J aux niveaux histologique et moléculaire. L‟étude de ce modèle murin a permis une meilleure compréhension de la physiopathologie de ces deux maladies et nous amené à étudier plus attentivement les interactions de la titine en C-ter avec ses partenaires afin de mieux comprendre l‟implication de la ligne M dans la vie du sarcomère. L‟ étude de la physiopathologie de la TMD et de la LGM2J a permis de montrer que la calpaïne 3 (une protéase à l‟origine d‟une autre dystrophie des ceintures), jouait un rôle majeur dans laTMD. Cette constatation nous a permis d‟envisager une approche thérapeutique pour cette dernière visant à diminuer les symptômes en régulant négativement la calpaïne 3. Une approche de thérapie génique a aussi été testée dans le but de traiter ces deux pathologies: le trans-épissage des derniers exons de la titine. En effet, étant donné la grande taille de l'ADNc de la titine (~100 kb), des stratégies classiques de transfert de gène n‟étaient pas envisageables. Pour s'affranchir de ce problème, nous avons testé une approche de trans-épissage de l‟ARN pour remplacer le ou les derniers exons du messager de la titine. Nous avons pu ainsi démontrer la faisabilité de la correction de la titine in vitro
Titin is a giant protein expressed in both skeletal muscles and heart. Several pathogenic mutations were identified in its last coding exon. The most frequent mutation commonly referred to as FINmaj, results in the replacement of 4 amino acids and affects a subset of patients in Finland. The mutation causes a Tibial Muscular Dystrophy (TMD) when present on one allele and a Limb Girdle Muscular Dystrophy phenotype 2J (LGMD2J) when present on both alleles.To obtain a model for studying the physiopathology of these diseases and evaluating therapeutic strategies, we introduced the FINmaj mutation in the murine genome by a knock-in strategy by homologous recombination. This model was characterized and showed that it reproduces mainly the symptoms of both the human TMD and LGMD2J at histological and molecular levels.The study of this mouse model has allowed a better understanding of the pathophysiology of these two diseases and we have to study more carefully the interactions beyond titin C-ter with its partners to better understand the involvement of the M line in life of the sarcomere.The study of the pathophysiology of TMD and LGM2J showed that calpain 3 (a protease thatlind to an other limb-girdle muscular dystrophy), played a major role in TMD. This finding allowed us to consider a treatment approach for TMD to reduce symptoms by regulating negatively calpain 3. A gene therapy approach was also tested: the trans-splicing of the last exon of titin.Indeed, given the large size of the cDNA of titin (~ 100 kb), conventional strategies of genetransfer were not envisaged. To overcome this problem, we tested an approach to exchange the last exon or the last exons of the titin messenger. We were able to demonstrate the correction of titin in vitro

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Nicolas, Aurélie. "Etude in silico de dystrophines tronquées dans les myopathies de Duchenne et de Becker." Rennes 1, 2012. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01343326.

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Abstract:

La dystrophine est une protéine impliquée dans les myopathies de Duchenne (DMD) et de Becker (BMD). Malgré les nombreuses recherches cliniques et thérapeutiques effectuées sur la DMD, le rôle moléculaire précis de la dystrophine est largement méconnu rendant la corrélation entre génotype et phénotype difficile à établir. Elle est pourtant indispensable pour proposer de nouvelles thérapies aux patients. C'est pourquoi nous proposons d'étudier la fonctionnalité des dystrophines mutées exprimées chez les patients BMD afin de la corréler aux phénotypes cliniques. La base de données eDystrophin permet d’avoir un aperçu global des phénotypes associés à ces mutations ainsi qu’une vue d’ensemble des conséquences de chaque mutation répertoriée sur les propriétés d’interactions et la structure 3D de la protéine par l’intermédiaire de modèles par homologie. De plus, La majorité des mutations répertoriées sont des délétions d’exons entiers tronquant une partie du domaine central composé de 24 répétitions homologues à la spectrine. L’utilisation combinée des informations répertoriées dans eDystrophin, de la modélisation et de la dynamique moléculaire a mis en évidence deux types de structures à la jonction des délétions : des répétitions hybrides conservant la structure en faisceau de trois hélices des répétitions natives et des répétitions fracturées ne conservant pas cette structuration. Les analyses des dynamiques moléculaires indiquent que les répétitions fracturées sont globalement plus délétères que les répétitions hybrides. Une première corrélation a pu être établie avec les phénotypes cliniques d’une cohorte de patients
Dystrophin is involved in Duchenne (DMD) and Becker (BMD) Muscular Dystrophies. A lot of clinical and therapeutic researches are published on DMD but precise molecular role of dystrophin is largely unknown, and consequently the correlation between genotype and phenotype is difficult to establish. However, this relation is essential to offer new therapies to patients. That is why we propose to study function of BMD patient mutated dystrophin to correlate with clinical phenotypes. The database eDystrophin provides an overview of phenotypes associate with these mutations and consequences of each mutation on function and 3D-structures of mutated protein through homology models. The great majority of these mutations are exon deletions located in the central rod domain composed by 24 spectrin-like repeats. The use of eDystrophin, models and molecular dynamics highlights two types of structures at the deletion junction: hybrid repeats that reconstitute a triple coiled-coil like native repeats and fractional repeats that do not reconstitute this structure. Molecular dynamics analysis reveals that fractional repeats may be more deleterious than hybrid repeats A first correlation between clinical phenotypes and the protein structure is established

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Patte, Karine. "L'analyse de la marche au cours de la dystrophie musculaire de Duchenne." Montpellier 1, 1998. http://www.theses.fr/1998MON11106.

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FOUGEROUSSE, FRANCOISE. "Cartographie d'une region genetique impliquee dans la dystrophie musculaire des ceintures (lgmd2)." Paris 7, 1994. http://www.theses.fr/1994PA077140.

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Abstract:

La dystrophie musculaire des ceintures est une myopathie hereditaire transmise sur un mode autosomal et presentant une heterogeneite clinique. Il existe deux formes: dominante et recessive. Un gene responsable de la forme recessive, lgmd2, a ete localise sur le bras long du chromosome 15 en 1991. Le travail presente ici concerne la cartographie de la region du chromosome 15 contenant lgmd2. Compte tenu de l'absence de donnees cytogenetiques, biochimiques ou autres pour cette myopathie, l'approche gene candidat n'a pu etre appliquee et l'identification du gene a ete envisagee selon la demarche de clonage positionnel qui fait appel a des techniques de cartographies genetique et physique. La cartographie genetique a permis de demontrer l'heterogeneite non allelique de ce phenotype clinique. Par ailleurs, l'intervalle contenant lgmd2 a ete precise et evalue a 7 cm. Parallelement, en vue du clonage du gene, la construction de la carte physique de la region a ete entreprise a partir des marqueurs l'encadrant. Cette region etant pauvre en stss, trois sortes de stss ont ete developpes pour cribler la banque de yacs du ceph: (i) ceux derives de genes deja sequences, (ii) des marqueurs microsatellites localises apres genotypage sur les familles de malades a proximite de la region lgmd2, (iii) des sequences des extremites de yacs ou des segments de la pcr inter-alu. Pres de 150 yacs ont ete identifies et une partie d'entre eux caracterises pour leur taille et leur chimerisme. Differentes approches ont ete pratiquees jusqu'a l'etablissement d'un continuum ininterrompu de yacs, de 15q15. 1 a 15q21. 1, soit 10-12 mb. La construction de la carte physique de la region a permis le developpement cible de nouveaux marqueurs. Cette strategie sera poursuivie jusqu'a restriction suffisante de l'intervalle par des approches genetiques avant de debuter une recherche systematique des transcrits

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Moradei, Jean Charles. "Dystrophies musculaires congénitales : mise au point à propos de 5 observations." Montpellier 1, 1992. http://www.theses.fr/1992MON11012.

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Botteron, Sebastien. "La fonction et la morphologie dento-faciale dans la Dystrophie Musculaire de Duchenne /." Genève : [s.n.], 2007. http://www.unige.ch/cyberdocuments/theses2007/BotteronS/these.pdf.

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Metlej, Racha. "Étude du profil immunogénique des fibres révertantes dans la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Université Laval, 2012. http://www.theses.ulaval.ca/2012/29039/29039.pdf.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie neuromusculaire récessive liée au chromosome X. Elle se manifeste par une dégénérescence musculaire progressive, menant finalement à la perte de la marche et à la mort. Elle est causée par une mutation au niveau du gène dmd codant pour une protéine, la dystrophine. Cette mutation altère le cadre de lecture normal du gène causant la perte de l’expression de la dystrophine, essentielle pour la protection des muscles contre la dégénérescence suite à l’effort. Par contre, la majorité des patients DMD ainsi que la souris mdx (modèle animal de la DMD), expriment de rares fibres musculaires révertantes qui expriment la dystrophine. Cette expression est due à une mutation somatique qui restore le cadre de lecture normal du gène et mène à la synthèse d’une dystrophine recombinante. Il a été suggéré que la dystrophine exprimée par les fibres révertante puisse induire une tolérance immunologique, conduisant à l’accumulation des fibres révertantes. Alternativement, ces rares fibres révertantes peuvent provoquer une réponse auto-immune qui limiterait les approches thérapeutiques visant à réexprimer la dystrophine. Dans mon étude, j’ai cherché à vérifier si la dystrophine néoformée provoque une réponse immunitaire dans la souris mdx. Tout d’abord, j’ai examiné, par immunohistochimie, les Tibialis antérieurs (TA) de souris mdx (souris dystrophiques) et Rag/mdx (dystrophiques et lymphopéniques) afin de comparer le nombre de fibres révertantes entre les souris immunocompétentes et les souris immunodéficientes. Cette étude permettait donc d’évaluer l’influence du système immunitaire sur la présence des fibres révertantes. Ensuite, j’ai tenté de vérifier, in vivo, la présence d’une réaction immunitaire cellulaire envers la dystrophine. Des splénocytes de souris mdx et 10J ont alors été transférés par injection intra-veineuse dans des souris Rag et Rag/mdx. Les muscles de ces dernières ont été examinés par marquage immunohistochimique afin de détecter la présence d’infiltration de cellules immunitaires autour des fibres révertantes. iii Enfin, pour étudier la réponse humorale, j’ai examiné les sérums de souris mdx par immunohistochimie et Western-Blot, afin de vérifier si des anticorps contre la dystrophine étaient présents. Mes travaux ont montré que les souris immunodéficientes avaient un nombre plus élevé de fibres dystrophine-positives, ce qui suggère que le système immunitaire est impliqué dans l’élimination des fibres révertantes chez les souris mdx immunocompétentes. En plus, la détection d’une infiltration de lymphocytes T dans les muscles de souris Rag/mdx, contenant des fibres révertantes, vient appuyer notre hypothèse. Cependant, le sérum de souris mdx ne contenait pas d’anticorps contre la dystrophine. Ces résultats suggèrent que les fibres révertantes n’induisent pas une tolérance immunitaire envers la dystrophine néoformée et qu’au contraire, elles induisent l’activation du système immunitaire. Cette activation se traduit par une réponse à médiation cellulaire et n’implique probablement pas une réponse à médiation humorale.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an X-linked recessive neuromuscular disease. It is characterized by progressive muscle degeneration, eventually leading to loss of ambulation and death. It is caused by a mutation in the dmd gene which encodes for the dystrophin protein. This mutation alters the normal reading frame of the gene causing the loss of dystrophin expression, essential for the protection of muscles from degeneration, following an effort. However, the majority of DMD patients and mdx mice (animal model of DMD) have rare revertant muscle fibers that express dystrophin. This expression is due to a somatic mutation, which restores of the normal reading frame of the gene and leads to the synthesis of a recombinant dystrophin. It was suggested that the dystrophine expressed by the revertant fibers could induce immunological tolerance, leading to the accumulation of revertant fibers. Alternatively, these rare revertant fibers could induce an autoimmune response that limits the success of therapeutical approaches to induce the expression of dystrophin. The aim of my study was to verify whether the newly formed dystrophin triggers an immune response in the mdx mouse. The Tibialis anterior (TA) muscle of mdx (dystrophic) and Rag/mdx (dystrophic, lymphopenic) mice were first examined by immunohistochemical staining to compare the number of revertant fibers present in immunocompetent and immunodeficient mice. This study allowed us to evaluate the influence of the immune system on the presence of revertant fibers. The presence of a potential cellular immune response against dystrophin was then investigated in vivo. Splenocytes from mdx and 10J mice were transferred intravenously into Rag and Rag/mdx. The muscules of these mice were examined by immunohistochemical staining to detect the presence of immune cellular infiltration around the revertant fibers. Finally, to study the humoral response, I examined sera from mdx mice using immunohistochemical staining and Western blotting to check for antibodies against dystrophin. My research showed that immunodeficient mice had a significantly higher number v of dystrophin-positive fibers, suggesting that the immune system is involved in the elimination of revertant fibers in immunocompetent mdx mice. In addition, T cells obtained from mdx mice and injected in Rag/mdx mice infiltrated muscles of Rag/mdx mice containing revertant fibers supporting the hypothesis that mdx mice do make a cellular immune response against the dystrophin revertant fibers. However, the mdx mouse serum did not contain any antibodies against dystrophin. These results suggest that revertant fibers do not induce an immune tolerance to the newly formed dystrophin, but on the contrary, they trigger the activation of the immune system. This activation results in a cell-mediated immunity but not a humoral immunity.

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Gueneau, Lucie. "Recherche de nouveaux gènes majeurs et modificateurs de la dystrophie musculaire d'Emery-Dreifuss." Paris 6, 2009. http://www.theses.fr/2009PA066444.

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Abstract:

La Dystrophie Musculaire d’Emery-Dreifuss se caractérise par des rétractions tendineuses, une atteinte musculaire et une cardiomyopathie. Notre étude épidémiologique montre que 8,5% des patients sont mutés dans le gène EMD pour la forme liée à l'X et 26,5% dans LMNA pour la forme autosomique, laissant 65% sans diagnostic. Nous avons identifié 7 nouvelles mutations dans le gène FHL1 dans 3 familles liées et chez 4 autres patients. L’étude fonctionnelle a montré une réduction de l’expression de FHL1 et un retard de la différenciation myogénique. Parmi les familles mutées dans LMNA, il existe une hétérogénéité familiale importante. Une étude statistique utilisant des traits quantitatifs sur une famille a identifié un locus lié à l’âge de début des symptômes musculaires. L’analyse de 2 gènes candidats et leurs régions régulatrices n’a pas détecté de variant pour le moment. L’identification de gènes modificateurs dans ces familles permettra un meilleur suivi de la maladie chez les patients.

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Pal, Gheorghe. "Autorégulation de l'expression de PABPN1, le gène muté dans la dystrophie musculaire oculopharyngée." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2015. http://hdl.handle.net/11143/6814.

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Abstract:

Les PABPs sont des protéines liant les répétitions d’adénosines se trouvant à l’extrémité 3’ des transcrits d’acides ribonucléiques messagers (ARNm) et par conséquent pouvant interagir avec la majorité d’entres eux. Cette classe de protéine est retrouvée chez la majorité des eucaryotes, mais elle semble absente chez les procaryotes. Il existe deux classes de PABPs : cytoplasmique et nucléaire. Mis à part les PABPs cytoplasmiques, il existe une PABP avec une localisation majoritairement nucléaire appelée PABPN1. Chez l’humain, PABPN1 est impliquée dans plusieurs processus cellulaires : la polyadénylation nucléaire des ARNms, le clivage et la polyadénylation alternative, l’expression de certains longs ARNs non-codant (lncARN) et l’export des ARNms du noyau vers le cytoplasme. La protéine contient plusieurs domaines dont une région riche en alanine. Cette région est sujette à des expansions trinucléotidiques qui ont pour conséquence l’ajout d’alanines supplémentaires. Ces ajouts entrainent, à long terme, l’apparition de la dystrophie musculaire oculopharyngée (DMOP). L’influence des expansions trinucléotidiques chez les patients atteints de la maladie est encore mal connue. En utilisant des cellules exprimant le transgène GFP-PABPN1, nous avons observé une régulation de l’expression de la protéine endogène, ce qui suggère une autorégulation du gène PABPN1. De plus, nous avons observé la présence de deux populations de transcrits du gène : un premier transcrit mature (ARNm) et le deuxième contenant l’intron terminal de PABPN1 (pre-ARNm). Expérimentalement, nous avons observé que l’expression du transgène module le ratio pre-ARNm/ARNm de l’endogène. Aussi, en utilisant un gène rapporteur (GFP-6/7) qui se comporte comme l’endogène, nous avons démontré que l’autorégulation de PABPN1 nécessite la présence d’un intron terminal ayant une séquence non optimale pour l’épissage. En plus, nos expériences suggèrent que l’autorégulation est indépendante des répétitions d’adénosines présentes à la fin du transcrit (queue poly-A). Par la suite, nous avons remarqué la présence d’une séquence riche en adénosine (A-riche) à l’intérieur de l’exon terminal de PABPN1. Nous avons démontré que cette séquence est liée par PABPN1 in vitro et in cellulo qu’elle influence l’autorégulation en inhibant l’épissage du transcrit. De plus, nous avons mis en évidence que le mécanisme de l’autorégulation passe par une compétition entre des facteurs qui influencent l’épissage et la dégradation du pre-ARNm par l’exosome nucléaire.

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Tuffery-Giraud, Sylvie. "Les myopathies de Duchenne et de Becker : contribution à l'étude de la pathologie moléculaire du gène de la dystrophine (délétions et mutations ponctuelles)." Montpellier 1, 1994. http://www.theses.fr/1994MON1T031.

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Caron, Nicolas. "Transduction de protéines dans le développement d'un traitement pour la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Université Laval, 2004. http://www.theses.ulaval.ca/2004/21775/21775.pdf.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie causée par l’absence de dystrophine, qui se manifeste par une dégénérescence progressive des muscles squelettiques et cardiaque. Les garçons atteints ont une espérance de vie d’environ 20 ans. Même si la prise de certains médicaments peut ralentir la progression de la maladie, il n’existe à ce jour aucune thérapie curative. La transplantation autologue de myoblastes génétiquement corrigés peut restaurer l’expression de la dystrophine, mais les myoblastes des patients DMD ont une capacité proliférative très limitée. Leur prolifération nécessite l'immortalisation avec un oncogène viral, un processus augmentant les risques associés à la transplantation de myoblastes. Les protéines fusionnées au domaine de transduction de Tat peuvent transduire les cellules en culture et plusieurs tissus in vivo. La transduction de protéines pourrait s’avérer utile dans le développement de nouvelles approches thérapeutiques. Nos objectifs étaient de tester la capacité des protéines de fusion Tat à transduire les fibres musculaires, de mieux comprendre le mécanisme de transduction, d’optimiser le ciblage efficace des cellules en culture et de développer des outils permettant l’immortalisation transitoire des myoblastes avant leur transplantation. In vivo, nos travaux indiquent que les fibres musculaires résistent à l’internalisation des protéines de fusion Tat, qui se retrouvent en périphérie associées à la matrice extracellulaire. In vitro, la distribution intracellulaire ponctuée, la cinétique d’internalisation, la sensibilité aux basses températures et l’augmentation fonctionnelle exercée par les agents lysosomotropiques révèlent un mécanisme d’endocytose classique. Ces données suggèrent que les protéines de fusion Tat, entrent par la voie endosomale, évitent les lysosomes, et sont ensuite séquestrées en périphérie du noyau. Un trafic intracellulaire inadéquat serait le principal facteur limitant l’efficacité de l’internalisation fonctionnelle des cargos fusionnés au domaine de transduction de Tat. Cette meilleure compréhension du mécanisme d’internalisation des protéines de fusion Tat, nous permit de développer une méthode efficace pour immortaliser de façon réversible les myoblastes d'un patient DMD. En utilisant un protéine de fusion Tat-Cre, nous avons déimmortalisé des myoblastes DMD transformés par l'AgT flanqué de sites LoxP. Cette technique permet de proliférer extensivement les myoblastes DMD, tout en rendant plus sécuritaire la déimmortalisation.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is caused by the absence of dystrophin and leads to progressive weakness in heart and skeletal muscles. Affected boys can only hope to live for 20 years since there is still no effective therapy for DMD. Autologous transplantation of genetically modified myoblasts can restore dystrophin expression, but the rapid death, the specific immune response and limited cellular migration severely limit the efficiency of the treatment. Immortalization, although a risky procedure, is necessary to proliferate myoblasts isolated from dystrophic patients, since by age five; their myogenic cells are practically senescent. Proteins and cargos fused to the Tat protein (HIV) can be internalized in cells and living tissue. The mechanism of Tat internalization is still misunderstood and controversial. Our objectives were to test the susceptibility of muscle fibers to be transduced by Tat fusion proteins, to better understand the mechanism of entry of Tat fusions, to optimize intracellular delivery and to develop techniques allowing the immortalization reversal of myoblasts using Tat-fusion proteins. The low susceptibility of muscle fibers to be transduced and the strong interaction between Tat-fusion proteins and the extracellular matrix surrounding muscle fibers resulted in poor protein delivery. Our work shows that the nuclear localization signal comprised in Tat is not sufficient to confer nuclear delivery to eGFP. The punctuate intracellular distribution, the internalization kinetics, the inhibitory effect of low temperatures and the functional increase exerted by lysosomotropic agents are coherent with a classical endocytosis internalisation mechanism. Our data suggests that Tat-fusion proteins proceed through the endosomal pathway, avoid lysosomes and are then sequestered in the periphery of the nucleus. Hence, improper intracellular trafficking is the main factor limiting the efficiency of Tat-mediated protein internalization. With a better understanding of this internalization mechanism, we were able to optimize the delivery of a Tat-Cre fusion protein to mediate the complete and efficient removal of an oncogene necessary for the proliferation of myoblasts isolated from DMD patients. Therefore this technique should help in the design of a successful treatment based on the autologous transplantation genetically-modified cells.

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Wattin, Marion. "Modulation des mécanismes de Contrôle Qualité des Protéines dans la dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1323/document.

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Abstract:

De nombreuses études ont mis en évidence l’importance du contrôle qualité des protéines, c’est à dire des mécanismes de reconformation (chaperons moléculaires) et de dégradation (autophagie, proteasome) des protéines dans différentes pathologies musculaires telles que la dystrophie musculaire d’Ullrich (UCMD), de Duchenne (DMD) ou d’Emery-Dreifuss (EDMD) ; cependant, à l’heure actuelle, aucune n’a été menée sur l’ensemble de ces mécanismes dans un seul et même modèle et sur des cellules musculaires avant leur différenciation en muscles. Nous nous sommes donc intéressés à la fonctionnalité des mécanismes de Contrôle Qualité des Protéines et à leurs interconnexions dans des myoblastes immortalisés de donneurs sains ou de patients atteints de DMD. Nous avons observé une augmentation de l’agrégation protéique dans les cellules DMD. Ce phénomène s’accompagne d’une dérégulation des mécanismes de séquestration par les chaperons moléculaires, conséquence d’une modulation de l’expression des protéines HSPB5 et HSPB8. Les mécanismes de dégradation sont également dérégulés; en effet, nous avons observé d’une part, une diminution de l’activité enzymatique du protéasome ainsi que des molécules d’adressage des protéines multiubiquitinées au protéasome et d’autre part, une augmentation de l’activité du facteur de transcription NF?B, de l’expression de protéines intervenant dans l’autophagie et des complexes BAG3/HspB8 conduisant à une augmentation du flux autophagique. L’ensemble de ces dérégulations reflète l’existence d’un stress d’agrégation protéique dans les myoblastes issus de patients DMD. Dans ce contexte, la modulation pharmacologique du PQC dans ces cellules pourrait représenter une nouvelle stratégie thérapeutique pour la Dystrophie Musculaire de Duchenne
Various studies have highlighted the importance of Protein Quality Control (PQC), including protein refolding (molecular chaperones) and degradation (autophagy, proteasome) mechanisms in inherited muscle disorders such as Ullrich Congenital Muscular Dystrophy (UCMD), Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) or Emery-Dreifuss Muscular Dystrophy (EDMD); however, to date, no extensive study has been conducted on these mechanisms in a same model, in muscle cells before muscle differentiation. Thus, we were interested in PQC mechanisms functionality and their interconnection in human immortalized myoblasts from healthy donors or patients suffering from DMD. We observed an increase of protein aggregation in DMD cells. This phenomenon is accompanied by a deregulation of sequestration mechanisms by molecular chaperones, reflected by the modulation of HSPB5 and HSPB8 expression. Degradation mechanisms are also deregulated; indeed, we observed on one hand a decrease of proteasome enzymatic activity and multiubiquitinated proteins UPS-adressing molecules and on the other hand, an increase of NF?B transcription factor’s activity, involved in autophagy, and of BAG3/HSPB8 complexes, leading to an increase of the autophagic flux. These PQC defects reflect the existence of a protein aggregation stress in myoblasts coming from DMD patients. In this context, pharmacological modulation of PQC in these cells could represent a new therapeutic strategy for Duchenne Muscular Dystrophy

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Iyombe, Jean-Paul. "Correction du gène de la dystrophine avec la méthode CRISPR induced deletion (CinDel)." Doctoral thesis, Université Laval, 2019. http://hdl.handle.net/20.500.11794/35026.

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Abstract:

La dystrophie musculaire est une maladie génétique monogénique récessive liée au chromosome X. Elle atteint 1 garçon sur 3500 naissances mâles. Le garçon atteint de la maladie présente des troubles de la locomotion à l’âge de 3-4 ans et la perd vers l’âge de 11 ans. La mort survient entre 18-30 ans suite à des complications cardio-pulmonaires. Il n’existe pas à ce jour un traitement curatif efficace contre cette grave maladie. Nous avons développé une approche de thérapie génique appelée CRISPR-induced deletion (CinDel) pour corriger le gène DMD muté. Elle utilise deux ARNg qui ciblent les exons précédant et suivant la délétion responsable du décalage du cadre de lecture. La reconnaissance des sites ciblés par les deux ARNg permet le recrutement de la nucléase Cas9 qui génère des coupures double-brin. Les séquences exoniques et introniques situées entre les deux coupures sont ensuite délétées. Les restes des exons sont joints par la recombinaison non homologue (NHEJ) pour produire un exon hybride, rétablir le cadre de lecture et permettre la synthèse d’un edystrophine tronquée ayant une structure correcte des répétitions de type spectrine (Spectrin-Like Repeat: SLR) et des heptades. Cette approche CinDel a été utilisée dans le cadre de ce projet d’abord pour corriger le gène DMD muté dans les myoblastes d’un patient avec une délétion des exons 51-53. Les exons 50 et 54 ont été ciblés avec deux ARNg et la Spcas9 pour produire des coupures double-brin et déléter les séquences situées entre ces deux sites et produire par NHEJ un exon hybride 50-54. L’approche a également permis de corriger in vivo le gène DMD muté dans le modèle animal, la souris transgénique avec un gène DMD humain ayant une délétion de l’exon 52 (del52hDMD) en utilisant un vecteur viralAAV9 contenant le gène SpCas9 et deux ARNgs. Pour vérifier la localisation par rapport au sarcolemme de la dystrophine tronquée avec ou sans une structure correcte des SLR et des heptades, nous avons électroporé les muscles Tibialis anteriorde souris mdx/mdx avec des plasmides codant pour les gènes normal et tronqué de la dystrophine fusionnée avec le gène de l’EGFP. Les résultats de cette expérience montrent que les dystrophines tronquées et normale se localisent correctement sous le sarcolemme. En vue de réprimer efficacement le gène de la SpCas9 et éviter son expression prolongée qui peut être à la base de coupures aléatoires et inattendues (off-target effects) dans le génome, nous avons mis au point une méthode de répression appelée Hara-Kiri moléculaire. Elle utilise la méthode CinDel et consiste à cibler deux régions du gène de SpCas9 avec deux ARNg. Le recrutement de la nucléase permet à celle-ci de couper son propre gène (Hara-Kiri). La séquence située entre les deux sites de coupures est délétée. Par NHEJ, les restes du gène de SpCas9 sont joints en générant un codon stop TAA au point de jonction. Cette approche a permis de réprimer efficacement le gène de SpCas9 in vitro et in vivo
Duchenne Muscular Dystrophy (DMD) is an X-linked genetically recessive genetic disorder. It affects 1 boy out of 3500 male births. The boy with the disorder presents walking disorders at the age of 3-4 years and loses it around the age of 11. Death occurs around 18-30 years of age from cardiopulmonary complications. To date, there is no effective cure for this serious disease. We have developed a gene therapy approach called CRISPR-induced deletion (CinDel) to correct the mutated DMD gene. It uses two gRNAs that target the exons preceding and following the deletion responsible for the frame shift. The recognition of the target sites by the two gRNAs allows the recruitment of the Cas9 nuclease, which generates double-strand breaks. The exonic and intronic sequences located between the two cuts are then deleted and the remains of the exons are fused by Non-Homologous End Joining (NHEJ) to produce a hybrid exon and restore the reading frame and to allow the synthesis of the truncated dystrophin with correct SLR structure and heptads. The CinDel approach was used in this project to correct the mutated DMD gene in the myoblasts of a patient with a 51-53 deletion. Exons 50 and 54 were targeted by SpCas9 and two gRNAs and to produce double strand breaks, delete the sequences between the two cleavage sites and produce a hybrid exon 50-54 by NHEJ. This restored the normal reading frame and allowed the expression of truncated dystrophin in the patient's myotubes. The approach also made it possible to correct in vivo the mutated DMD gene in the animal model, the transgenic mouse with a human DMD gene having a deletion of exon 52 (del52hDMD) using an AAV9 viral vector containing the SpCas9 gene and two ARNgs. To verify the location with respect to the sarcolemma of truncated dystrophin with or without a correct SLR structure and heptads, we electroporated the Tibialis anterior muscles of mdx/mdx mice with the plasmids encoding the normal or the truncated dystrophin gene fused with the eGFP gene. The results of this experiment show that truncated and normal dystrophins were well localized under sarcolemma. In order to effectively repress the SpCas9 gene and avoid its prolonged expression that may be the basis of random and unexpected (off-target effects) cuts in the genome, we have developed a method of repression called molecular Hara-Kiri. It uses the CinDel method and consists of targeting two regions of the SpCas9 gene with two gRNAs. Recruiting nuclease allows it to cut its own gene (Hara-Kiri). The sequence between the two cleavage sites is deleted. The residues of the SpCas9 gene are then joined by NHEJ generating a TAA stop codon at the junction point. This approach effectively repressed the SpCas9 gene in vitro and in vivo.

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Barthélémy, Inès. "Développement d'outils d'évaluation d'un modèle pré-clinique de dystrophie musculaire de Duchenne, le chien GRMD." Phd thesis, Université Paris-Est, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00630718.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) touche un garçon sur 3500, contraint à l'usage du fauteuil roulant à l'âge de 10 ans, et entraîne le décès à une vingtaine d'années. Cette maladie demeure incurable, et les pistes thérapeutiques envisagées nécessitent d'être validées en amont, dans les modèles murins, puis au stade pré-clinique, dans les modèles canins.L'un d'eux, le chien GRMD (Golden Retriever Muscular Dystrophy), est le plus largement utilisé, et présente l'intérêt de partager, avec le patient qu'il modélise, de nombreuses similitudes génotypiques et phénotypiques. Les différentes fonctions touchées doivent donc pouvoir faire l'objet de mesures objectives et quantitatives, à l'aide d'outils dédiés. Par ailleurs, une problématique inhérente à l'utilisation de ce modèle est sa grande variabilité sur le plan phénotypique.L'objectif du travail mené ici a été de développer des outils d'évaluation du chien GRMD, afin de mieux connaître et maîtriser cette hétérogénéité clinique.La mesure de force de flexion du tarse a permis de démontrer que la force tétanique maximale pouvait être utilisée comme indice d'évaluation à différents stades de la maladie, sans que le déficit de force musculaire puisse être relié à l'atteinte motrice globale. De plus, la relaxation s'est avérée altérée chez les chiens GRMD, en corrélation avec leur atteinte motrice.La locomotion, évaluée par accélérométrie tri-dimensionnelle, a pu montrer des altérations multiples, mesurées par différentes variables. Certaines variables sont altérées de manière précoce, tandis que d'autres anomalies s'installent durant les premiers mois, traduisant l'aggravation de la fonction locomotrice.La dysfonction respiratoire, évaluée par spirométrie en respiration de Tidal, et cinématique diaphragmatique sur images radioscopiques, a également pu être objectivée par différents indices. Une moindre mobilité diaphragmatique, une rétraction caudale du diaphragme, et un effondrement du débit expiratoire en fin d'expiration, s'installent au cours des premiers mois.Afin de contrôler l'hétérogénéité clinique ainsi mesurée, une recherche de marqueurs prédictifs de l'évolution clinique a été menée. Différents indices histologiques et cliniques ont été évalués sur leur valeur pronostique à un stade précoce. La fréquence des cycles locomoteurs à 2 mois et le défaut de relaxation à 4 mois se sont avérés prédictifs de formes accélérées.Enfin, les différents outils mis en place ont été évalués dans le cadre du suivi d'animaux au cours d'un essai thérapeutique, qui a, de plus, permis de disposer d'une population de référence sous traitement immunosuppresseur. Une amélioration fonctionnelle des animaux traités a pu être démontrée par nombre des indices mesurés.Ces résultats démontrent que les outils développés sont utilisables au cours d'essais pré-cliniques, et permettent, malgré l'hétérogénéité clinique qu'ils mesurent, de démontrer un bénéfice fonctionnel. Plus largement, ces données permettent d'optimiser l'utilisation pré-clinique du modèle GRMD.

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Sacconi, Sabrina. "Dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale : étude physiopathologique sur myoblastes humains et applications en thérapie cellulaire." Nice, 2008. http://www.theses.fr/2008NICE4046.

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Abstract:

La DMFSH est associée à une contraction de l’allèle D4Z4 localisé sur le chromosome 4q35 et à une dérégulation de la transcription des gènes situés en proximité, parmi lesquels FRG1 et ANT1. Nous avons analysé les propriétés biologiques de myoblastes obtenus à partir de muscles non dystrophiques et dystrophiques de patients atteints de DMFSH et sujets contrôles, ainsi que l’expression des gènes et protéines ANT1 et FRG1 et l’épissage des certains pre-ARNms spécifiques par ces cellules. A la différence des myoblastes provenant des muscles non dystrophiques, ceux provenant des muscles dystrophiques montrent une morphologie altérée et un défaut dans la prolifération et la différenciation myogénique. Le défaut de prolifération est associé à un blocage du cycle cellulaire en G0/G1 et à un processus de sénescence cellulaire précoce. De façon intéressante, le degré de dystrophie des muscles de patients atteints de DMFSH corrèle d’une part avec l’importance des anomalies biologiques détectées dans les cultures cellulaires correspondantes et d’autre part avec la surexpression de FRG1 et ANT1. De plus, la surexpression de la protéine FRG1 est associée avec la dérégulation de l’épissage des pre-ARNms spécifiques. Nos résultats suggèrent que dans la DMFSH, l’hétérogénéité de l’atteinte musculaire dépend de la susceptibilité différentielle des myoblastes à la contraction du locus D4Z4, qui se traduit par une dérégulation spécifique de l’expression de ANT1 et FRG1 et par des altérations de la biogenèse de ARNm. Ces résultats nous ont permis d’envisager un essai clinique de phase I/II de transfert autologue des myoblastes chez des patients atteints de DMFSH. Les résultats préliminaires de cet essai sont présentés et discutés
FSHD is associated to contraction of D4Z4 allele on chromosome 4q35 inducing a deregulation in expression of some proximal genes, including ANT1 and FRG1. We analyzed the biological properties of myoblasts cultured from dystrophic and non dystrophic muscles of FSHD patients and matched controls, together with the gene and protein expression of FRG1 and ANT1, and the splicing pattern of specific pre-RNAs. In contrast with myoblasts derived from non dystrophic territories, myoblasts derived from dystrophic muscles display altered morphology, proliferation and differentiation abilities in vitro and in vivo. Proliferation defect is related to a cell cycle arrest at G0/G1 and to premature cell senescence. Interestingly, the degree of dystrophic changes in FSHD muscles correlates with the extent of the abnormalities detected in corresponding cell cultures and with FRG1 and ANT1 gene and protein over-expression. Moreover FRG1 overexpression is associated with aberrant splicing patterns of specific pre-RNAs. Based upon these results we speculate that, in FSHD, heterogeneity of muscle wasting might be related to different susceptibilities of myoblasts to D4Z4 contraction, resulting in differential ANT1 and FRG1 overexpression and aberrant splicing of specific pre-mRNAs. Moreover, a phase I/II clinical trial of autologous myoblast transfer was set up in our Department. The preliminary results will be presented and discussed

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Bouazza, Belaid. "Contribution à l'étude des mécanismes moléculaires de la dystrophie musculaire oculopharyngée : recherche de pistes thérapeutiques." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066118.

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Abstract:

La Dystrophie musculaire oculopharyngée (DMOP) est une myopathie congénitale causée par une mutation du gène PABPN1 (Poly Adenosine Binding Protein Nuclear 1), codant pour une protéine nucléaire impliquée dans le transport, la polyadénylation des ARNm et la régulation de la transcription. La DMOP a comme expression clinique prédominante un ptosis (chute des paupières) et des troubles de la déglutition (dysphagie). Les mécanismes physiopathologiques en cause restent inconnus. Afin d’étudier l’influence de la mutation PABPN1 sur le profil d’expression protéique des cellules satellites de patients DMOP, nous avons analysé les protéomes des cellules satellites isolées des muscles atteints et non atteints de patients DMOP comparés à ceux des cellules satellites de sujets sains par électrophorèse assistée par dialyse (DAGE). Nous avons observé que les cellules satellites issues des muscles atteints présentent une perte de myogénicité importante et une diminution des capacités prolifératives en culture cellulaire. Après avoir optimisé la DAGE sur un modèle de myoblastes humains, nos analyses ont montré que le protéome des myoblastes en prolifération subit des modifications importantes au cours de la différenciation in vitro. En suite, nous avons démontré que le protéome des cellules satellites de patients DMOP présente des dérégulations importantes au niveau du métabolisme énérgétique, mitochondrial, de la maturation des ARNm, des voies de l’ubiquitine-protésome et du trafic cellulaire, avec un protéome beaucoup plus perturbé dans les cellules myogéniques des muscles atteints de la DMOP par rapport à celui des cellules de muscles non atteints. Nous avons également montré qu’il existe des anomalies de l’acétylation des histones qui sont compensées par un inhibiteur des histones désacétylases, la Trichostatin A. Enfin, en utilisant des puces à anticorps, nous avons montré que l’expression de nombreux facteurs de croissances et cytokines est modifiée dans les muscles atteints comparativement aux muscles non atteints de DMOP, et plusieurs d’entre eux sont associés à la formation de la fibrose hépatique ou pulmonaire. En conclusion, nos résultats, indiquent que les inhibiteurs de désacétylases et les traitements anti-fibrose utilisés dans la fibrose hépatique pourraient représenter des pistes thérapeutiques dans la DMOP.

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Hamoudi, Dounia. "Implication de la voie RANK/RANKL/OPG dans la physiopathologie musculaire et potentiel thérapeutique de l’anti-RANKL pour la dystrophie musculaire de Duchenne." Doctoral thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/69507.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie génétique neuromusculaire provoquée par des mutations du gène codant pour la dystrophine situé sur le chromosome Xp21. L'absence de cette protéine membranaire engendre une dégénérescence progressive des cellules, une augmentation de la concentration du calcium intracellulaire, des dommages oxydatifs, inflammatoires et ultimement une fibrose musculaire. Les patients souffrent également de plusieurs autres anomalies dont les plus importantes sont la cardiomyopathie et l'ostéoporose. Il n'y a actuellement aucune stratégie curative pour la DMD. Les corticostéroïdes sont prescrits pour prolonger la mobilité et l'espérance de vie, mais sont associés à une ostéotoxicité élevée. Bien qu'il existe une association entre l'ostéoporose et la dégénérescence musculaire, nous avons été les premiers à étudier le rôle du récepteur-activateur du facteur nucléaire kB (RANK), son ligand RANKL et du récepteur soluble ostéoprotégérine (OPG), principaux régulateurs du remodelage osseux, dans le contexte des maladies musculaires. Nos travaux antérieurs montrent que les myotubes différenciés secrètent l'OPG, expriment le récepteur RANK à leurs surfaces et dans le contexte de DMD l'expression de l'ARNm de RANK est 4 fois plus élevée dans les muscles de souris dystrophiques comparativement aux muscles sains. L'objectif de la présente thèse vise à exploiter cette voie afin de comprendre le mécanisme d'action de ces cytokines sur la physiopathologie musculaire et d'établir une stratégie thérapeutique pour la DMD en traitement unique ou combinée aux glucocorticoïdes. Dans un premier temps, nous avons investigué l'impact de la neutralisation systémique à long terme de RANKL sur l'intégrité et la fonction musculaire et osseuse dans un modèle sévère de dystrophie déficient en dystrophine/haploinsuffisant en utrophine. Ensuite, nous avons étudié les rôles physiopathologiques de l'OPG sur les tissus musculaires en caractérisant la fonction musculaire de souris déficientes en OPG. Finalement, nous avons débuté une étude sur l'effet de neutralisation systémique de RANKL sur l'ostéoporose associée à un traitement au deflazacort, un glucocorticoïde prescrit pour la DMD. Ainsi nous avons démontré que le traitement à long terme à l'anti-RANKL améliore la fonction et l'intégrité musculaire et osseuse chez les souris dystrophiques et protège contre l'ostéoporose induite par les glucocorticoïdes. À l'opposé, l'absence d'OPG induit, possiblement via RANKL, une faiblesse osseuse et musculaire et une atrophie sélective des fibres musculaires les plus puissantes. Ces avancées repoussent les connaissances au sujet de la voie RANK/RANKL/OPG au sein de la communication muscle-os et appuient l'anti-RANKL comme perspective thérapeutique chez les patients atteints de la DMD.

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El, Khatib Nour. "Identification des mécanismes moléculaires et physiopathologiques impliqués dans la dystrophie facioscapulohumérale." Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONTT039.

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Abstract:

La dystrophie musculaire facioscapulohumérale (FSHD) est une maladie autosomique dominante, caractérisée par une faiblesse et une atrophie progressive de certains muscles squelettiques. La FSHD est liée à une répression inefficace de la région des macrosatellites D4Z4 sur le chromosome 4, entraînant l'expression inappropriée dans le muscle squelettique, d’un gène à double homeobox 4 (DUX4), et la dérégulation des gènes avoisinants. La surexpression de DUX4 est responsable du phénotype atrophié des myotubes FSHD et induit la dérégulation de gènes impliqués dans la réponse au stress oxydant. Malgré les avancés majeures dans la compréhension du locus morbide, les mécanismes exacts impliqués dans la FSHD ne sont pas totalement compris et aucun traitement curatif n’est disponible. Cependant, de nombreuses données montrent le rôle prépondérant du stress oxydant dans la FSHD. Récemment, nous avons caractérisé la présence d’un stress oxydant dans les biopsies musculaires et les prélèvements sanguins des patients atteints de FSHD. Nous avons démontré que ce stress est corrélé à une altération de la fonction musculaire chez ces patients et qu’une supplémentation en antioxydants adaptée améliore la fonction musculaire et réduit les dommages oxydatifs. Par ailleurs, nous avons démontré que les myoblastes dérivés des biopsies FSHD sont plus sensibles à des agents pro-oxydants et présentent des défauts de différenciation. L’objectif de nos travaux est de caractériser les mécanismes moléculaires impliqués dans la FSHD afin de faciliter la mise en place d’approches thérapeutiques. Ce projet de thèse original réunit à la fois une approche fondamentale et clinique.Grâce à la mise en place d’un nouveau modèle in vitro de culture primaire de myoblastes de patients atteints de FSHD, nous avons montré la présence d’un stress oxydant dans ces myoblastes corroborant les observations précédemment obtenues aux niveaux systémiques et musculaires chez ces patients. Par ailleurs, les traitements par des agents pro-oxydants (paraquat et peroxyde d'hydrogène) ont un effet différentiel sur l’expression des enzymes antioxydantes par rapport aux contrôles suggérant un défaut dans les mécanismes d'adaptation au stress oxydant chez les patients atteints de FSHD.D’autre part, afin d'améliorer les procédures de réadaptation pour les patients atteints de FSHD, nous avons proposé d'étudier la faisabilité, la sécurité et l'efficacité de l’entraînement de force par électrostimulation neuromusculaire (ESNM) pour contrer la faiblesse musculaire des quadriceps chez ces patients. Cette étude, en cours, semble être une stratégie de réhabilitation prometteuse pour les patients atteints de FSHD et n’a montré aucun effets indésirables jusqu’à présent
Facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD) is an autosomal dominant disease, characterized by progressive weakness and atrophy of specific skeletal muscles. FSHD is linked to an inefficient repeat-mediated epigenetic repression of the D4Z4 macrosatellite repeat array on chromosome 4, resulting in the unappropriated expression in skeletal muscle of the double homeobox 4 (DUX4) retrogene. DUX4 overexpression leads to atrophic myotubes phenotype and dysregulation of antioxidant genes. Despite major progress in the understanding of the genetic locus, exact mechanisms that lead to FSHD defects are not completely understood and no curative treatment is available. However, several lines of evidence have proposed oxidative stress and myogenesis defect as the major biological processes affected in FSHD. Recently, we characterized oxidative stress in skeletal muscle biopsies and blood samples from patients with FSHD. We demonstrated that oxidative stress is associated with reduced physical performance in patients with FSHD and that antioxidants adapted strategy was effective to reduce oxidative stress and maintain muscle functions. Furthermore, satellite cell-derived myoblasts from these patients were more susceptible to pro-oxidant agents than control myoblasts and showed a defect in differentiation. The originality of this project relies on creating a synergy between basic and clinical research. The major goal of this work is to identify molecular mechanisms involved in FSHD oxidative stress in order to identify therapeutic approaches.Using in vitro cell model of FSHD, recently developed and optimized in our team, we demonstrate the presence of oxidative stress in FSHD primary myoblast cultures that corroborates previous observations at systemic and muscular levels. Furthermore, treatments with different pro-oxidant agents (paraquat and hydrogen peroxide) have a differential effect on the expression of antioxidant enzymes compared to controls, suggesting a defect in the oxidative stress adaptive response in FSHD myoblasts.Furthermore, in order to improve rehabilitation procedures for patients affected with FSHD, we proposed to investigate the feasibility, safety, and effectiveness of neuromuscular electrostimulation (NMES) strength training to counteract quadriceps muscle weakness in these patients. This ongoing study appears to be a promising rehabilitation strategy and shows no adverse effect for patients with FSHD

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DEVOISINS, JEAN-MARC. "Myopathie inflammatoire congenitale : a propos d'une observation." Toulouse 3, 1993. http://www.theses.fr/1993TOU31096.

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Boisserie-Lacroix, Vincent. "Dystrophie musculaire facio-scapulo-humérale de Landouzy-Dejerine chez l'enfant : à propos de trois formes d'évolution péjorative." Bordeaux 2, 1987. http://www.theses.fr/1987BOR25072.

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Paré, Hélène. "Aspects biologiques et psychologiques du développement intellectuel et affectif des garçons atteints de dystrophie musculaire de Duchenne." Thesis, National Library of Canada = Bibliothèque nationale du Canada, 1997. http://www.collectionscanada.ca/obj/s4/f2/dsk3/ftp05/nq26711.pdf.

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Quenneville, Simon. "Vers une thérapie génique ex vivo de la dystrophie musculaire de Duchenne : approches lentivirale et intégrase PhiC31." Thesis, Université Laval, 2007. http://www.theses.ulaval.ca/2007/24614/24614.pdf.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne est une maladie génétique liée au chromosome X qui atteint un garçon sur 3 500. Cette maladie est caractérisée par l'absence de dystrophine à la surface des fibres musculaires. Sans cette protéine, les fibres se brisent plus fréquemment et une faiblesse musculaire progressive apparait. Les patients décèdent généralement au début de la vingtaine. Il n'y a présentement aucun traitement pour cette pathologie. La greffe de cellules myogéniques est une thérapie possible, mais se heurte à un rejet par le système immunitaire du patient. Pour contourner ce problème, il est possible de développer une thérapie génique ex vivo, basée sur la greffe de cellules autologues modifiées génétiquement. Malheureusement, aucune technique efficace de modification génétique des cellules n'était disponible il y a quatre ans. Nous avons testé deux nouvelles techniques de modification génétique. Une première est non virale et la seconde utilise les lentivirus. La première consiste à transfecter un plasmide d'expression de la dystrophine par Nucléofection. Pour intégrer les séquences, un second plasmide, codant pour l'intégrase PhiC31, est aussi introduit dans les cellules. Cette technique nous a permis de stabiliser des plasmides allant de 7 kb à 21 kb, ce qui en fait les plus grosses séquences jamais stabilisées dans des cellules de culture primaire humaine. Cette expression a pu être détectée dans les fibres musculaires après une greffe. Nous avons aussi utilisé des lentivirus pour effectuer une modification génétique des cellules. Ce vecteur viral est très efficace pour introduire des cassettes d'expression pour des versions tronquées de la dystrophine. L'expression de cette dystrophine est détectable in vitro, mais aussi in vivo après la transplantation. De plus, une cassette servant à faire le saut d'exon thérapeutique a aussi été introduite dans des cellules myogéniques et a permis de faire exprimer une dystrophine presque complète par des cellules issues de patients DMD. Cette expression a aussi été détectée dans des modèles murins. Ces travaux constituent une preuve de principe de la faisabilité d'une thérapie génique ex vivo pour la DMD. Plusieurs améliorations restent à apporter, mais il semble que ces travaux laissent croire qu'un essai clinique sera réalisable.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe X-linked muscle genetic illness that afflicts one boy per 3 500. Cell therapy is a possible cure for this illness that usually kills patients around age 25. Transplantation of the heterologus myogenic cells is, however, restricted by the immune rejection by the patient. Ex vivo gene therapy offers an evasion to this problem. Introduction of the therapeutic gene into the patient’s own myogenic precursor cells, followed by transplantation is the base of this therapeutic. Four years ago, no efficient procedure to stably modify myogenic cells was available. New gene introduction techniques were thus tested in the present thesis. The first one is a non-viral method. We used a new transfection technology (Nucleofection) to introduce plasmid DNA coding for dystrophin with success. To stabilize the expression, human myogenic cells were co-nucleofected with a PhiC31 expressing plasmid. This integrase was capable of stabilising expression plasmids ranging from 7 kb to 21 kb. This very large sequence was the largest plasmid ever stabilised into human primary cultured cells. The presence of full-length dystrophin protein was detected in vitro and confirmed in vivo, after the transplantation of the myogenic precursor. Another technique was used: the lentiviral vectors. These viral vectors were designed to deliver an expression cassette for a truncated version of the dystrophin gene. The viral vector was efficient at modifying the cells. The expression was shown in vitro and in vivo after the transplantation of the modified cells. The lentiviral vectors were also essayed to deliver a U7 exon skipping cassette into DMD cells. It was then possible to demonstrate that this introduction led to the expression of a quasi normal dystrophin protein in vitro. The expression was also shown in vivo after the transplantation into SCID mice model. A non-viral approach combining nucleofection and the PhiC31 integrase may eventually permit safe auto-transplantation of genetically modified cells. The utilisation of lentiviral vectors also provided evidences that an ex vivo gene therapy is possible for DMD. We believe these results are paving the way to an eventual clinical trial for ex vivo gene therapy.

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Maltais, Chantale. "Thérapie génique ex vivo de la dystrophie musculaire de Duchenne à l'aide de cellules souches pluripotentes induites." Thesis, Université Laval, 2014. http://www.theses.ulaval.ca/2014/30769/30769.pdf.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une myopathie héréditaire due à l'absence de dystrophine. Parmi les thérapies possibles, la greffe autologue de myoblastes dérivés de cellules souches pluripotentes induites (hiPSCs) provenant du patient dystrophique, préalablement corrigés génétiquement, est envisageable. Lors de la première partie de ma recherche, j'ai transplanté des hiPSCs de patient DMD différenciés en myoblastes chez la souris Rag/mdx. Ces cellules avaient été corrigées génétiquement à l'aide d'un vecteur lentiviral codant pour la micro-dystrophine, une dystrophine tronquée, mais toujours fonctionnelle. Mes résultats ont démontré l'expression de cette micro-dystrophine dans certaines fibres hybrides. Cependant, le protocole de différenciation des hiPSCs en myoblastes doit être amélioré. La deuxième partie de mon projet consistait donc à induire la myogenèse à l’aide de protéines recombinantes. Pour cela, des facteurs de transcription régulateurs de la myogenèse, fusionnés à un peptide de pénétration cellulaire, ont été produits et purifiés d’un système bactérien. Leur pénétration dans des cellules mésenchymateuses a été observée in vitro et leurs effets sur les cellules sont en cours d’étude. Lorsque ces approches thérapeutiques seront mises au point, elles pourraient être appliquées cliniquement pour traiter des patients dystrophiques.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a hereditary myopathy due to the absence of dystrophin. Among the possible therapies, there is the autologous transplantation of genetically corrected myoblasts derived from human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) of a dystrophic patient. In the first part of my research project, I have transplanted myoblasts differentiated from iPSCs of a DMD patient in the Rag/mdx mouse. These cells had been previously genetically corrected with a lentiviral vector coding for micro-dystrophin, a functional truncated version of dystrophin. The results demonstrated the expression of this micro-dystrophin in some of the hybrid fibers. However, in order to increase the graft success, the protocol of differentiation of hiPSCs in myoblasts must be improved. The second part of my project was the induction of myogenesis from hiPSCs using recombinant proteins. To accomplish this, myogenic transcription factors fused with a cell penetrating peptide were produced and purified from the bacterial system. Their capacity to enter into mesenchymal-like cells in vitro was observed and their effects on the cells are currently under study. Once optimized, these therapeutic approaches could be clinically applied to treat dystrophic patients.

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Warnez-Soulie, Julie. "Dystrophie musculaire des ceintures de type 2A : étude de phénomènes inflammatoires et développement d'outils de thérapie génique." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0424/document.

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Abstract:

De précédents travaux de recherche ont montré la présence de phénomènes inflammatoires dans les muscles de patients souffrant d’une maladie génétique rare nommée dystrophie musculaire des ceintures de type 2A (en anglais, LGMD2A), et ceci très tôt dans le développement de cette maladie. Il a aussi été observé les mêmes phénomènes chez le modèle animal de la maladie. C’est pourquoi nous avons mené une étude sur l’animal pour tenter d’étudier ces phénomènes afin d’en comprendre leur origine et leur(s) mécanisme(s). En parallèle de ce projet, nous avons développé et testé deux outils de thérapie génique : il s’agit de deux concepts qui vont permettre soit de réparer l’ARN au niveau du transcrit du gène CAPN3 muté responsable de la maladie, soit de permettre aux cellules du muscle de produire une protéine calpaïne-3 fonctionnelle, qui ne peut exercer son rôle correctement à cause des mutations qui la rende non opérationnelle
Previous research works showed inflammatory phenomena early in muscles of patients affected with a rare genetic disease called Limb Girdle Muscular Dystrophy type 2A (LGMD2A). This very same phenomena have been observed in LGMD2A animal models. For these reasons we conducted an animal-oriented study to apprehend these phenomena from its origin to mechanism(s). In parallel of this project, we designed and evaluated two gene therapy tools: one to repair RNA on CAPN3 gene transcript that is responsible of LGMD2A, another one to help muscle cells to produce a functional calpain-3 protein based on an inter molecular compensation with vector expressing domains of calpain 3

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Broux, Odile. "Localisation, identification et etude d'un gene responsable d'une forme autosomique recessive de dystrophie musculaire de ceintures (lgmd2e)." Littoral, 1997. http://www.theses.fr/1997DUNK0008.

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Abstract:

Les dystrophies musculaires des ceintures representent un groupe heterogene de myopathies hereditaires transmises selon un mode autosomique dominant (lgmd1) ou recessif (lgmd2). L'analyse de la forme recessive lgmd2a a conduit a la demonstration d'une heterogeneite genetique au sein de la communaute amish de l'etat d'indiana aux etats-unis, suggerant l'existence d'un nouveau locus, appele lgmd2e, implique dans l'etiologie des formes recessives de dystrophie des ceintures. Une demarche de clonage positionnel a ete adoptee en vue de l'identification du gene, conduisant a la localisation primaire du locus morbide dans la region pericentromerique du chromosome 4. L'analyse genetique a permis la definition d'un intervalle contenant le locus lgmd2e, estime a 3 cm, sur lequel a ete entreprise la construction d'une carte physique sous forme d'un continuum de clones de yacs. Parallelement a cette etude, le gene de la -sarcoglycane, une glycoproteine de 43 kda du complexe associe a la dystrophine, a ete clone et caracterise. Ce gene, localise en 4q12, representait un excellent candidat pour cette myopathie. Des travaux communs ont permis d'identifier une mutation segregeant a l'etat homozygote dans le gene de la -sarcoglycane chez tous les patients amish etudies et de reveler une reduction concomitante de la proteine au niveau du sarcolemme, confirmant son implication dans la dystrophie des ceintures de forme lgmd2e. La determination de la sequence complete du gene de la -sarcoglycane a ensuite ete effectuee par sequencage aleatoire d'un cosmide. L'assemblage des sequences, effectue par le programme xbap du package staden, a conduit a l'etablissement d'un continuum unique de 36159 pb. L'organisation genomique du gene de la -sarcoglycane a ete deduite de la comparaison de cette sequence consensus avec les sequences d'adnc publiees. Six exons ont ete mis en evidence, representant une sequence codante de 954 paires de bases.

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Chaigneau, Anne. "Aspects pragmatiques du langage et dystrophie musculaire de Duchenne : étude comparative des interactions verbales en milieu familial." Poitiers, 1999. http://www.theses.fr/1999POIT5006.

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Agudelo, Daniel. "Développement d'un traitement thérapeutique pour la dystrophie musculaire de Duchenne à l'aide des protéines TALENs ou Cas9." Master's thesis, Université Laval, 2017. http://hdl.handle.net/20.500.11794/27455.

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Abstract:

La dystrophie musculaire de Duchenne (DMD) est une maladie héréditaire liée au chromosome X. Elle est principalement causée par la délétion d’un ou plusieurs exons du gène DMD, ce qui entraine un changement du cadre de lecture et l’obtention d’une protéine dystrophine tronquée et inactive. L’édition de génome par les systèmes TALEN ou CRISPR/Cas9 est devenue dans les dernières années un grand espoir pour le développement de traitements pour ce type de maladie. Dans ce travail, nous illustrons la faisabilité d’un traitement pour la DMD en utilisant les protéines TALENs ou le complexe CRISPR/Cas9 purifiés. Ces protéines sont donc transduites afin de générer des cassures double brin dans l’ADN génomique. Ainsi, la correction de cette mutation par recombinaison non homologue pourra corriger le cadre de lecture du gène codant pour la protéine dystrophine, produisant ainsi une protéine tronquée, mais active, telle que pour les patients Becker. Bien que les protéines TALENs montrent une bonne activité in vitro, l’efficacité de coupure n’a pas pu être observée dans les cellules, ce qu’indiquerait un défaut lors de la transduction protéique. Toute fois, dans le cas du système CRISPR/Cas9, l’essai surveyor a permis d’observer les produits de coupure attendus lors de la transduction de ce système avec des lipides cationiques. Ceci indique donc que le système CRISPR/Cas9 peut être utilisé de façon efficace sous forme protéique tout en ciblant le gène DMD. Finalement, l’utilisation de ce système a été confirmée in vivo chez la souris hDMD, où il a été possible d’observer la présence des délétions ciblées. La transduction de protéines en utilisant le système CRISPR/Cas9 illustre donc une approche thérapeutique prometteuse dans le but de développer un traitement pour les maladies génétiques.
Duchenne muscular dystrophy (DMD) is an hereditary disease linked to chromosome X. It is mainly caused by the deletion of one or more exons of the DMD gene, which causes a change in the reading frame, obtaining a truncated and inactive protein. Genome editting by TALEN or CRISPR/cas9 systems has become in the recent years a powerfull tool for developing treatments for this type of disease. However, the use of plasmids encoding these systems leads to a prolonged expression, which may increase the off-target risk. Thus, it is important to note that today, viruses vectors remain the most effective delivery system for these plasmids, which always entails a risk of integration into the genome, increasing the probability of side effects for a treatment. In this work, we illustrate the development of a genome edditing treatment for DMD, but using purified protein TALENs or Cas9. These proteins are transduced in order to generate double strand breaks in the genomic DNA. Thus, the correction of this mutation by non-homologous end joining can correct the reading frame of the gene, producing a functional Dystrophin protein, as for Becker patients. Although TALEN proteins show a good activity in vitro, the cut-effectiveness has not been observed in the cells. It would indicate a defect in the protein transduction. However, in the case of CRISPR/cas9 system, we have obtained the expected cleavage products during the transduction with cationic lipids in both cell lines. These results are similar with those obteined when the plasmids coding for both systems were transfected. This indicates that the CRISPR/cas9 system can be used effectively in protein form while targeting a gene specifically. Protein therapy using the CRISPR/cas9 system can be a promising method in order to develop an alternative treatment for genetic diseases. Finally, in order to confirm that this system can be used in vivo, we will soon test it in the hDMD mouse model, containing the complete human DMD gene.

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Dissertations / Theses on the topic 'Dystrophie musculaire de Becker'

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