Academic literature on the topic 'Ectima contagioso'

É descrito um surto de ectima contagioso em ovinos no Rio Grande do Sul nos meses de junho e julho. Setenta (78%) de um total de 90 cordeiros de 10 a 45 dias de idade foram afetados. Não houve mortes. Também 3 ovelhas adultas desenvolveram lesões discretas na pele ao redor da boca. Os cordeiros apresentavam proliferações crostosas firmes, nodulares ou em forma de placas na pele da boca e junção mucocutânea da cavidade oral. Lesões proliferativas não ulceradas em forma de placa eram observadas no palato duro e almofada dental. Lesões proliferativas extensas, vegetantes, ocorriam na gengiva ao longo dos molares superiores e inferiores. Um cordeiro fêmea de 45 dias de idade foi sacrificado e necropsiado. As principais lesões microscópicas consistiam de epitélio hiperplástico pseudoepiteliomatoso com hiper e paraqueratose, cobrindo a derme ou a lâmina própia que se encontrava acentuadamente infiltrada por macrófagos, neutrófilos e linfócitos. Inclusões acidofílicas intracitoplasmáticas eram vistas nas células epiteliais da pele e da mucosa oral. Pústulas foram observadas na epiderme e mucosa oral. Vasculite associada a trombose era vista nos vasos da derme e lâmina própia. Numerosas partículas víricas com morfologia compatível com parapoxvírus foram encontradas em associação com as lesões epiteliais, ao exame no microscópio eletrônico. A epidemiologia, patogenia, meios de diagnóstico e profilaxia do ectima contagioso são discutidos.

RESUMO A enfermidade ectima contagioso está difundida em todo o estado de São Paulo. Foram amostrados 42 (8,64%) cuidadores de animais e 444 (91,36%) ovinos (n=486). A prevalência de reagentes para vírus-neutralização foi de 67% (IC95%=62-71%) nos ovinos, e em seus cuidadores de 76% (IC95%=63-89%), sendo P=0,22, ou seja, não houve diferença estatística significativa entre as espécies. A distribuição dos títulos teve diferença estatística significativa entre as espécies, com P=0,0048. As variações de titulação foram de 0,6 a 2,1 tanto nos ovinos quanto nos seus cuidadores. Dentre os 42 cuidadores de ovinos participantes do estudo, 32 apresentaram títulos de anticorpos expressos por log10 acima de 0,6.

O ectima contagioso (também conhecido como orf), é uma doença debilitante de ovinos e caprinos causada pelo vírus do orf (ORFV). A vacinação tem sido usada com relativo sucesso no controle da doença. No entanto, as vacinas atuais contêm amostras virulentas do agente, são produzidas por escarificação cutânea de animais, e apresentam eficácia questionável. Assim, o presente trabalho teve como objetivo produzir e testar a eficácia de uma vacina experimental produzida em cultivo celular. A cepa IA-82 do ORFV foi submetida a 21 passagens em cultivo de células BHK-21 e usada para vacinar ovinos jovens (n=30), por escarificação cutânea na face interna da coxa. A vacinação produziu pústulas e crostas em 16 dos 30 ovinos vacinados, indicando imunização adequada. Noventa dias após a vacinação, ovinos vacinados (n=16) e controles (n=16) foram inoculados com uma cepa virulenta do ORFV (10(6,9)DICC50/mL) após escarificação na comissura labial. Todos os animais desenvolveram lesões típicas de ectima, incluindo hiperemia, vesículas, pústulas e crostas. No entanto, os animais vacinados desenvolveram lesões mais leves e passageiras do que os controles, e os escores clínicos foram estatisticamente diferentes (p<0,05) entre os dias 10 e 22 pós-desafio. Além disso, o tempo de duração da doença foi significativamente inferior (p<0,05) nos animais vacinados. Os animais vacinados também excretaram menor quantidade de vírus (p<0,05) e por um período significativamente mais curto do que os controles (13 dias versus 22 dias, p<0,001). Esses resultados demonstram a proteção parcial conferida pela vacina experimental e, dependendo da melhoria dos índices de imunização e proteção, são promissores no sentido da utilização de vacinas contra o ORFV produzidas em cultivo celular.

The virus of contagious ecthyma (CEV), also known as orf virus (ORFV) is the etiological agent of contagious ecthyma (CE) in sheep and goat and belongs to the Parapoxvirus genus, family Poxviridae. In some cases, CE can be confused with vesicular diseases so there is need for differentiation especially because, according to the standards of the National Program for the Eradication of FMD (PNEFA), goats and sheep are not vaccinated against Foot and Mouth Disease (FMD), acting as sentinel animals. Although initial studies have demonstrated the usefulness of the polymerase chain reaction (PCR) as a diagnostic test, there are no studies involving its use on Brazilian field samples, which may be genetically distinct from previously studied samples, as described in a study of restriction sites analysis of Brazilian CE samples. This work was conducted with the goal of standardizing a PCR (qPCR) test using SYBR Green I dye for molecular diagnosis of EC in DNA extracted from lesions of affected animal or cell culture inoculated in field samples. The products were detected with qPCR dissociation curve analysis which showed a peak at 88 ºC indicating that positive samples have only one specific amplification product. All DNA samples tested (29 animals crusts and their cell cultures) were positive in the qPCR. The qPCR was able to detect the DNA of at least 10,000 times dilution corresponding to 0.056 ng of DNA. It is believed that with the additional qPCR validations reported in this study, it can be used for differential diagnosis in the health surveillance of PNEFA.

O objetivo desse trabalho foi caracterizar os sistemas de produção de ovinos e caprinos na microrregião de Castanhal - Pará. Entre março de 2014 a maio de 2015 foram realizadas visitas a 60 propriedades criadoras de ovinos e caprinos da microrregião de Castanhal - PA, onde aplicou-se um questionário epidemiológico para obtenção de dados relacionados ao manejo produtivo, nutricional, sanitário e reprodutivo do rebanho, infraestrutura e gerenciamento das propriedades. O tipo de criação predominante era extensivo, com pastejo contínuo, com suplementação mineral somente em 46,6% das propriedades. Em 93,4% das propriedades o reprodutor era mantido junto com as fêmeas o ano inteiro, enquanto em apenas 3,4% utilizavam estação de monta e em 3,4% faziam monta controlada. As doenças relatadas como frequentes foram: parasitoses gastrointestinais (90%), afecções podais (80%), mortalidade de cordeiros (48,4%), linfadenite caseosa (31,7%), mastites (25%) e dermatite alérgica (20%). Também foram relatados abortos (10%), problemas respiratórios (6,7%), alterações nervosas (8,4%), ceratoconjuntivite (13,4%) e ectima contagioso (13,4%). A bovinocultura era a principal atividade desenvolvida pela maioria das propriedades do estudo e a ovinocaprinocultura secundária. Em 88,3% das propriedades não eram comercializados animais para o abate ou os reprodutores. Os resultados deste trabalho demonstraram que o nível de organização das criações de pequenos ruminantes era precário, sem utilização de técnicas de manejo e não possuíam assistência técnica, apresentando elevados índices de mortalidade, principalmente, pelas parasitoses gastrointestinais e problemas podais.

Foi realizado um estudo das doenças de pele diagnosticadas em ovinos e caprinos, no semi-árido dos Estados da Paraíba, Pernambuco e Rio Grande do Norte. De janeiro de 2000 a novembro de 2006 foram registrados no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande, em Patos, Paraíba, 656 diagnósticos em caprinos e 324 em ovinos, além do estudo de espécimes de necropsia ou biópsia da pele de 31 em caprinos e 45 em ovinos enviados para exame histológico. Dos casos atendidos 80 (8,16%) apresentavam alterações na pele, destes 35 ocorreram em caprinos (5,33% do total de casos diagnosticados nesta espécie) e 45 em ovinos (13,88% dos casos diagnosticados nesta espécie). Das doenças de pele, a mais freqüente foi a miíase (10 casos em caprinos e 7 em ovinos) seguida do ectima contagioso (8 casos em caprinos e 2 em ovinos), carcinoma epidermoide (4 casos em caprinos e 5 em ovinos), dermatofilose (8 casos em ovinos), dermatite alérgica (1 caso em ovino e 1 em caprino). Além disso, foram diagnosticados dois casos de pitiose em ovinos, dois casos de epidermólise bolhosa em caprinos, um caso de intoxicação por Brachiaria brizantha (fotossensibilização) e outro de intoxicação por Leucaena leucocephala (alopecia) em ovinos e um caso de papilomatose, um de pênfigo foliáceo, um de prototecose e um de rabdomiossarcoma em caprinos. Em 4 casos em ovinos e 19 em caprinos não foi realizado diagnóstico etiológico da doença. A informação gerada sobre a ocorrência e epidemiologia das doenças de pele permite estabelecer medidas adequadas de controle.

As doenças do sistema digestório de caprinos e ovinos na região semi-árida do nordeste do Brasil foram avaliadas através de um estudo retrospectivo de 2.144 atendimentos de pequenos ruminantes no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Campina Grande, Patos, Paraíba, no período de janeiro de 2000 a dezembro de 2011. Os registros foram revisados para determinar a ocorrência e as principais características clínicas, epidemiológicas e patológicas dessas enfermidades. De um total de 512 casos (23,9%) de distúrbios digestivos, 367 (71,7%) ocorreram em caprinos e 145 (28,3%) em ovinos. As helmintoses gastrintestinais e a coccidiose foram as doenças mais frequentes, com um total de 330 casos. Os distúrbios da cavidade ruminoreticular (acidose, indigestão simples, timpanismo, e compactação ruminal) totalizaram 94 casos. O abomaso foi afetado primária e secundariamente por úlceras. Casos de obstrução e compressão do trato gastrointestinal também foram observados. Malformações como atresia anal e fenda palatina foram registradas em ambas as espécies, sendo esta última associada à ingestão de Mimosa tenuiflora. Entre as doenças infecciosas foram observados cinco casos de ectima contagioso, dois casos de paratuberculose e dois casos de pitiose gastrointestinal. Em sete animais suspeitou-se de enterotoxemia e 31 casos foram diagnosticados como enterite inespecífica. A não utilização de práticas de controle integrado de parasitas e a utilização de alimentos inadequados durante o período de escassez de forragem contribuiu para a ocorrência de um grande número de doenças. A prática de conservação de forragens poderia reduzir substancialmente a ocorrência de distúrbios digestivos na região semiárida.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Orf virus (ORFV) belongs to the family Poxviridae, subfamily Chordopoxvirinae and genus Parapoxvirus and is the agent of contagious ecthyma, a mucocutaneous disease that affects mainly young sheep and goats and, occasionally, may affect people. The clinical lesions progress through stages of hyperemia, papules, vesicles, pustules, ulcers and proliferative and scabby lesions, located mainly on the labial commissure, lips and nostrils. Variable clinical lesions with different degrees of severity often occur in sheep and goats, and may be associated with host and/or viral genetics. The present study aimed to investigate the phenotype in vivo and to characterize virulence genes of four ORFV isolates recovered from contagious ecthyma outbreaks in Rio Grande do Sul State, Brazil. Twenty sheep, aged 6 and 8 months, were divided into five groups of four animals each and inoculated in the labial commissure with homogenates of scabs (viral titers 105.6TCID50/ml) obtained from different outbreaks: SV269/11, SV252/11, SV581/11 and SV820/10-Canguçu. The animals were evaluated for 30 days in clinical and virological aspects by clinical inspection and swab collection for virus isolation. A clinical score was established for each animal and group. All ORFV inoculated animals developed classical ecthyma contagious lesions, characterized by hyperemia, papules, macules, vesicles, pustules and scabs in varied degrees and duration. SV269/10 and SV820/10-Canguçu isolates induced more severe lesions resulting in higher clinical scores and longer duration of lesions. The animals inoculated with SV581/11 developed milder lesions and clinical scores significantly lower than other groups, but they shed virus for a longer period of time. For genetic analyses, PCR amplification and nucleotide sequencing of three virulence genes (VEGF, VIR and IL-10v) were performed. Deletion and mutations on VEGF and IL-10v amino acid sequence of SV581/11 and SV252/11 isolates were identified. The degree of amino acid identity among ORFV sequences was variable, and the lowest homology was found in the VEGF gene of SV581/11 when compared with the standard strains and other viruses. Thus, the present results showed that SV581/11 and SV252/11 isolates, particularly the former, are less virulent in sheep than SV269/11 and SV820/10-Canguçu. Possibly, the variable phenotypic observed in vivo is due to genetic alterations detected in the analyzed virulence genes.
O vírus da orf (ORFV) pertence à família Poxviridae, subfamília Chordopoxvirinae gênero Parapoxvirus e é o agente etiológico do ectima contagioso, uma doença mucocutânea que afeta principalmente ovinos e caprinos jovens e pode, ocasionalmente, afetar pessoas. Clinicamente, a enfermidade evolui com a formação de áreas hiperêmicas, vesículas, pústulas, úlceras e lesões proliferativas e crostosas sobre a pele dos lábios, comissura labial e narinas. Apresentações clínicas variáveis, com diferentes graus de severidade, ocorrem frequentemente e podem estar associadas a características do hospedeiro e, principalmente, a características genéticas do agente. O presente trabalho teve como objetivo investigar o fenótipo in vivo e caracterizar genes de virulência de quatro amostras de ORFV oriundas de surtos no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Para isso, foram utilizados vinte ovinos, com idade entre 6 e 8 meses, divididos em cinco grupos de quatro animais cada. Os ovinos foram inoculados na comissura labial com homogeneizados de crostas (títulos virais 105,6 DICC50/ml) obtidas dos surtos (amostras SV269/11, SV252/11, SV581/11 e SV820/10-Canguçu). Os animais foram avaliados durante 30 dias com relação aos aspectos clínicos e virológicos, por inspeção clínica e coleta de suabes das lesões para detecção da excreção viral. As manifestações clínicas foram convertidas em um escore clínico, para cada animal e para os grupos. Os animais inoculados com os as quatro amostras desenvolveram lesões típicas de ectima contagioso, caracterizadas por hiperemia, pápulas, máculas, vesículas e pústulas, e formação de crostas em diferentes graus de intensidade e duração. As amostras SV269/10 e SV820/10-Canguçu induziram lesões mais graves, escores clínicos maiores e maior tempo de duração das lesões. Os animais inoculados com a amostra SV581/11 desenvolveram lesões e escores clínicos significativamente inferiores aos demais grupos, mas excretaram o vírus por período mais longo. Para a caracterização genética, foi realizada a amplificação por PCR e sequenciamento de nucleotídeos de três genes de virulência (VEGF, VIR e IL-10v). Foram identificadas deleções e mutações nas sequências dos genes VEGF e IL-10v das amostras SV581/11 e SV252/11. O grau de identidade de aminoácidos entre as amostras foi variável, sendo que a menor homologia foi encontrada no gene VEGF da amostra SV581/11, quando comparado com os demais vírus e a cepa padrão. Assim, os resultados obtidos demonstram que as amostras SV581/11 e SV252/11, em especial a primeira, foram menos virulentas em ovinos do que as amostras SV269/11 e SV820/10-Canguçu. Possivelmente essa diferença fenotípica observada in vivo seja resultado das alterações genéticas detectadas nos genes de virulência.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Contagious ecthyma (orf) is a cutaneous disease that affects sheep and goats, and may be occasionally transmitted to humans. The disease is caused by orf virus (ORFV). ORFV infection produces croustous and proliferative lesions, usually on the nostrils and labial commissures of lambs, and also in the udder, teat skin and coronary bands of adults animals. The pathogenesis of ORFV infection is poorly understood and a search for an adequate animal model is required, yet the disease has been already reproduced in sheep, goats and rabbits. This dissertation relates the clinical, virological and pathological aspects of ORFV infection in rabbits and mice experimental inoculated. Ten rabbits, ten mice and two lambs were inoculated intradermally after skin scarification with an hypodermic needle. A viral suspension of ORFV IA-82 strain (108.5TCID50/mL) was inoculated in the internal face of the ear, back skin and labial commissure of rabbits; internal face of the ear of mice. Lambs were inoculated in the labial commissures and in the internal face of hind limbs. All animals were monitored clinically, virologically, and pathologically for 21 days. All rabbits developed clinical signs in the inoculation sites, begining with mild hyperemia that evolved to macules, papules, vesicle, pustules and scabs. Lesions appeared at days 3 and 4 post-inoculation (pi) and lasted to 3 to 10 days. Viral shedding was detected from days 2 to 14pi. Histological examination of lesions revealed focal proliferative dermatitis with ballooning degeneration and eosinophilic intracytoplasmic inclusions in keratinocytes, histological hallmarks of contagious ecthyma in sheep. A similar, albeit much milder clinical course was observed in 5 out of 10 inoculated mice. All lambs presented characteristic contagious ecthyma clinical and histopathologycal lesions from days 3 to 18pi, and the virus was recovered from lesions between days 2 and 19pi. At day 28pi, seroneutralization test (SN) was unable to detect neutralizing antibodies in all inoculated animals. These findings show that ORFV replicates and produce local lesions in rabbits and mice. However, rabbits are more susceptible to infection and disease, and may be used as an animal model to study some aspects of ORFV pathogenesis.
O ectima contagioso (ou orf) é uma doença infecto-contagiosa de pele que afeta principalmente ovinos e caprinos, e que ocasionalmente pode acometer o homem. O seu agente etiológico é o vírus da orf (ORFV). O ORFV produz lesões proliferativas, geralmente na comissura labial e no plano naso-labial de cordeiros, e também na pele do úbere, nos tetos e no rodete coronário dos cascos de animais adultos. A patogenia da infecção pelo ORFV é pouco conhecida, embora a doença já tenha sido reproduzida em ovinos, caprinos e coelhos. Essa dissertação relata os achados clínicos, virológicos e histopatológicos da infecção experimental de coelhos e camundongos pelo ORFV. Para isso, coelhos, camundongos e cordeiros foram inoculados pela via intradérmica (ID), após escarificação da pele com agulha hipodérmica. A inoculação dos cordeiros serviu como controle positivo. Uma suspensão viral da cepa IA-82 do ORFV (108,5DICC50/mL) foi inoculada na face interna da orelha, na pele do dorso e na comissura labial dos coelhos; na face interna da orelha dos camundongos; e na comissura labial e face interna do membro pélvico dos cordeiros. Os animais foram monitorados por 21 dias nos aspectos clínicos, virológicos e patológicos. Todos os coelhos inoculados apresentaram lesões semelhantes nos locais de inoculação, iniciando com hiperemia, evoluindo para máculas, pápulas, vesículas, pústulas e crostas. Os sinais surgiram 3 a 4 dias pós inoculação (pi) e duraram por 3 a 10 dias. Excreção viral foi detectada entre os dias 2 e 14pi. A análise histológica das lesões revelou dermatite focal proliferativa, com degeneração balonosa e corpúsculos de inclusão intracitoplasmáticos eosinofílicos nos queratinócitos, semelhante às alterações histológicas observadas nos cordeiros. Lesões similares, mas de menor intensidade foram observadas em 5 de 10 camundongos. Os cordeiros, utilizados como controles positivos, apresentaram lesões clínicas e histopatológicas características de ectima contagioso entre os dias 3 e 18pi, sendo que o vírus foi recuperado das lesões entre os dias 2 e 19dpi. No dia 28pi, pelo teste de soroneutralização (SN), não foram detectados anticorpos neutralizantes no soro dos animais inoculados. Esses resultados demonstram que a inoculação de ORFV resulta em replicação viral e produção de lesões em coelhos e camundongos, porém a doença é reproduzida de forma mais consistente em coelhos. Portanto, sugere-se que coelhos possam ser utilizados como modelos para estudos in vivo com o ORFV.

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Made available in DSpace on 2016-11-03T13:19:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosana Leo de Santana.pdf: 1515110 bytes, checksum: 27fa86f8f333295d8921b44bc59f3dcb (MD5) Previous issue date: 2012-02-13
Contagious ecthyma is a severe and proliferative viral disease affecting ovine and caprine species, and eventually men, caused by the contagious ecthyma virus (ECV) of the Parapoxvirus genus. The disease is spread worldwide, including in Brazil, where in the state of Pernambuco, due to its endemicity, can be mistaken by other vesicular diseases such as the Foot and mouth Disease, which requires its diagnostic differentiation. Meanwhile, the control of the infection in endemic regions is limited due to the difficulties in replicating the virus in cell cultures, for the development of vaccines. The purpose of this work is to evaluate the behavior of ECV samples in primary cultures of fetal caprine cornea cells, and also to establish an efficient molecular diagnostic method for field samples, and to analyze the phylogenetic profile of the virus samples studied. Crust samples from twenty-two sheep and seven goats from the states of Pernambuco, Bahia, Sergipe and Paraiba presenting the clinical symptoms of EC were inoculated in cell monolayers, during seven consecutive passages at weekly intervals. During all passages, starting at 24 hours post-infection was observed a cytopathic effect (CE) characterized by cell rounding, cell fusion with the formation of small syncytia, cytoplasmic inclusion and vacuolization. The intensity of cell detachment from the layers ranged from 25% to 100% which varied according to the viral sample. We concluded that the primary cultures of the fetal caprine cornea cell appeared highly permissible to replication of ECV and the isolated samples of ECV seemed to adapt to the utilized culture with a slight variation among samples, and the identification by PCR showed to be an applicable method to the differential diagnosis of vesicular diseases, especially to support the actions of PNEFA, where goats and sheep are considered sentinel animals. The phylogenetic analysis showed that ORFV sequences from the northeastern of Brazil are highly correlated showing identical sequences up to 99%. In addition, they present more than 80% sequence identity with other isolates of ORFV worldwide.
Ectima contagioso (EC) ou orf é uma doença infecto-contagiosa da pele causada pelo vírus do ectima contagioso (ECV) ou ORFV, que acomete principalmente ovinos e caprinos, e ocasionalmente o homem. Protótipo do gênero Parapoxvírus da família Poxviridae, está amplamente disseminado em todo mundo, inclusive no Brasil, especialmente na Região Nordeste, onde a caprinovinocultura é amplamente praticada para a produção de pele, carne e leite. Em Pernambuco, a doença ocorre de forma endêmica e pode ser confundida com enfermidades vesiculares, como a Febre Aftosa (FA), havendo a necessidade de diferenciação, sobretudo como suporte às ações do Programa Nacional de Erradicação da Febre Aftosa (PNEFA). Uma grande limitação no controle da doença é a dificuldade de replicação do vírus em cultivo celular, visando sua manipulação biotecnológica para a produção de vacinas. O objetivo deste trabalho é isolar e avaliar o comportamento de amostras de ECV em cultura primária de células de córnea fetal caprina, além de estabelecer um diagnóstico molecular eficiente para amostras de campo e avaliar o perfil filogenético das amostras de campo estudadas. Amostras de crostas de 22 ovinos e de sete caprinos que apresentavam sinais clínicos de EC, originários dos Estados de Pernambuco, Bahia, Sergipe e Paraíba, foram inoculadas em monocamadas de células epiteliais de córnea de feto caprino, durante sete passagens consecutivas, a intervalos semanais. Para realização do diagnóstico molecular foi utilizado para amplificação de um fragmento de 235pb do gene do envelope B2L o par de primers, PPP-3 e PPP-4 denominados pan-parapoxvirus. Observou-se em todas as passagens, a partir de 24 horas pós-infecção, efeito citopático (ECP) caracterizado pelo arredondamento celular, fusão com formação de pequenos sincícios, vacuolização e corpúsculos de inclusão citoplasmática, com intensidade de 25% a 100% de desprendimento da camada celular, que variou de acordo com a amostra viral. Conclui-se que as culturas de células primárias de córnea fetal caprina mostraram-se altamente permissíveis à replicação do ECV e que as amostras virais isoladas mostraram-se adaptadas ao cultivo utilizado, com pequena variação entre as amostras virais, e que, a identificação viral através da PCR é um método aplicável ao diagnóstico diferencial de enfermidades vesiculares, sobretudo como suporte às ações do PNEFA, no qual caprinos e ovinos são considerados animais sentinelas. A análise filogenética mostrou que as seqüências de ORFV do Nordeste do Brasil estão altamente relacionadas entre si, com seqüências idênticas acima de 99%. Além de apresentarem mais de 80% de identidade com seqüências de outros isolados de ORFV em todo mundo.

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Made available in DSpace on 2016-11-04T13:11:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rosana Leo de Santana.pdf: 693786 bytes, checksum: b9d2b7d60669ce82e4b87ed63463daad (MD5) Previous issue date: 2008-02-28
Contagious ectima is a severe and proliferartive virus among ovine and caprine caused by the contagious ectima virus (ECV) of the Parapoxvirus genus. The control of the infection in endemic regions is done with vaccines, however there are limitations in the vaccine production due to the difficulties in replicating the virus in cell cultures. The purpose of this paper is to evaluate the behavior of ECV samples in primary cultures of fetal caprine cornea cells, a system of cultures yet untested for the replication of ECV. Crust samples from nine sheep and two goats from the states of Bahia, Sergipe and Paraiba and presenting the clinical symptoms of EC were inoculated in monolayers of the cells, during seven consecutive passages at weekly intervals. During all the occasions we observed, after 24 hours of infection, the cytopathic effect (CE) characterized by cell rounding, fusion with the formation of small sincicia, cytoplasmatic inclusion and vacuolation. The intensity of detachment from the cell layers ranged from 25% to 100% which varied according to the sample. We concluded that the primary cell cultures of the fetal caprine cornea appeared highly permissible to replication of ECV and the isolated samples of ECV appeared to adapt to the utilized culture with slight variation among samples.
Ectima contagioso (EC) é uma virose aguda e proliferativa de ovinos e caprinos, causada pelo vírus do ectima contagioso (ECV), do gênero Parapoxvirus. O controle da infecção em regiões endêmicas é realizado através de vacinação, porém existem limitações nas técnicas de produção de vacinas, que é a dificuldade de replicação do vírus em cultivo celular. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de isolar e avaliar o comportamento das amostras de ECV em cultivo primário de células de córnea fetal caprina (CFC), sistema de cultivo ainda não testado para replicação de ECV. Amostras de crostas de nove ovinos e de dois caprinos que apresentavam sintomatologia clínica de EC, originários dos Estados da Bahia, Sergipe e Paraíba, foram inoculadas em monocamadas de células epiteliais de córnea de feto caprino, durante sete passagens consecutivas, a intervalos semanais. Observou-se em todas passagens, a partir de 24 horas pós infecção, efeito citopático (ECP) caracterizado pelo arredondamento celular, fusão com formação de pequenos sincícios, vacuolização e corpúsculos de inclusão citoplasmático, com intensidade de 25% a 100% de desprendimento da camada celular, que variou de acordo com a amostra. Conclui-se que as culturas de células primárias de córnea fetal caprina mostraram-se altamente permissíveis à replicação do ECV e que as amostras de ECV isoladas mostraram-seadaptadas ao cultivo utilizado, com pequena variação entre as amostras.

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Responsável por perdas econômicas significativas nos rebanhos afetados, o Ectima Contagioso é uma enfermidade causada pelo Orf vírus pertencente ao gênero Parapoxvirus, epiteliotrófico, da família Poxviridae e subfamília Chordopoxvirinae. Pode ser transmitida a humanos que manipulam e trabalham com ovinos infectados, causando lesões crostosas e proliferativas na pele e nas junções mucocutâneas, tanto em animais como em humanos. O estudo evidenciou a difusão da enfermidade no Estado de São Paulo. Foram amostrados 42 (8,64%) cuidadores de animais e 444 (91,36%) ovinos (n=486). Dentre estes, 453 (93,21%) não apresentaram sinais clínicos, enquanto que 33 (6,79%) casos suspeitos da doença (32 ovinos e um cuidador) que foram biopsiados e realizados os testes histopatológicos e de PCR. Deste total amostrado (n= 486), foram sugestivos para Ectima Contagioso 6,38% e 0,41% sugestivos para outras lesões de pele no exame histopatológico. No exame de PCR dentre os 486 amostrados, 4,32% foram positivas, enquanto 2,47% apresentaram resultado negativo. A prevalência de reagentes por virusneutralização foi de 67% nos ovinos e em seus cuidadores de 76% (p= 0,22). A distribuição dos títulos teve diferença estatística significativa entre as espécies com p = 0,0048. Todas as 486 amostras pesquisadas, foram negativas no exame de PCR do sangue. A prevalência de animais com crosta resultou em 7,2% e em seus cuidadores 2,4%. As análises estatísticas foram realizadas com o programa SAS (SAS Institute, 2011) em nível de significância de 0,05. Concluiu-se teste de virusneutralização no soro entre as espécies foi significativo estatisticamente (p = 0,048), com isso, sugere-se que quanto maior a convivência dos ovinos com seus cuidadores; a concordância entre os métodos diagnósticos de virusneutralização, PCR e histopatológico são importantes associações para o diagnóstico conclusivo da doença; a enfermidade está difundida no...
Responsible for significant economic losses in affected flocks, the Contagious Ecthyma is a disease caused by Orf virus belonging to the genus Parapoxvirus, epitheliotropic, the Poxviridae family and subfamily Chordopoxvirinae. It could be transmitted to humans who handle and work with infected sheep, causing crusted lesions and proliferative skin and the mucocutaneous junction, both in animals and in humans. The study showed the disease diffusion in São Paulo. They sampled 42 (8.64%) Animal caregivers and 444 (91.36%) sheep (n = 486). Of these, 453 (93.21%) showed no clinical signs, while 33 (6.79%) suspected cases of the disease (32 sheep and a caregiver) that were biopsied and performed histopathological and PCR tests. This all samples (n = 486) were suggestive of Ecthyma Contagious 6.38% and 0.41% suggestive of other skin lesions on histopathological examination. In examining PCR among 486 sampled, 4.32% were positive, while 2.47% were negative. The prevalence of reagents for virus neutralization was 67% in sheep and their caregivers 76% (p = 0.22). The distribution of titles had statistically significant differences between species with p = 0.0048. All surveyed 486 samples were negative in PCR test blood. The prevalence of animals with crust resulted in 7.2% and 2.4% their caregivers. Statistical analyzes were performed with SAS software (SAS Institute, 2011) at 0.05 significance level. Virus neutralization test in conclusion serum between species was statistically significant (p = 0.048), therefore, it is suggested that the higher the coexistence of sheep with their caregivers; the correlation between the diagnostic methods of virus neutralization, PCR and histopathology are important associations for the conclusive diagnosis of the disease; the disease is widespread in São Paulo and the geographical distribution did not influence the genetic similarity of the virus

Orientador: Rafael Modolo
Coorientador: Cassiano Victoria
Banca: Simone Baldini Lucheis
Banca: Liria Hiromi Okuda
Banca: Claudia Del Fava
Resumo: Responsável por perdas econômicas significativas nos rebanhos afetados, o Ectima Contagioso é uma enfermidade causada pelo Orf vírus pertencente ao gênero Parapoxvirus, epiteliotrófico, da família Poxviridae e subfamília Chordopoxvirinae. Pode ser transmitida a humanos que manipulam e trabalham com ovinos infectados, causando lesões crostosas e proliferativas na pele e nas junções mucocutâneas, tanto em animais como em humanos. O estudo evidenciou a difusão da enfermidade no Estado de São Paulo. Foram amostrados 42 (8,64%) cuidadores de animais e 444 (91,36%) ovinos (n=486). Dentre estes, 453 (93,21%) não apresentaram sinais clínicos, enquanto que 33 (6,79%) casos suspeitos da doença (32 ovinos e um cuidador) que foram biopsiados e realizados os testes histopatológicos e de PCR. Deste total amostrado (n= 486), foram sugestivos para Ectima Contagioso 6,38% e 0,41% sugestivos para outras lesões de pele no exame histopatológico. No exame de PCR dentre os 486 amostrados, 4,32% foram positivas, enquanto 2,47% apresentaram resultado negativo. A prevalência de reagentes por virusneutralização foi de 67% nos ovinos e em seus cuidadores de 76% (p= 0,22). A distribuição dos títulos teve diferença estatística significativa entre as espécies com p = 0,0048. Todas as 486 amostras pesquisadas, foram negativas no exame de PCR do sangue. A prevalência de animais com crosta resultou em 7,2% e em seus cuidadores 2,4%. As análises estatísticas foram realizadas com o programa SAS (SAS Institute, 2011) em nível de significância de 0,05. Concluiu-se teste de virusneutralização no soro entre as espécies foi significativo estatisticamente (p = 0,048), com isso, sugere-se que quanto maior a convivência dos ovinos com seus cuidadores; a concordância entre os métodos diagnósticos de virusneutralização, PCR e histopatológico são importantes associações para o diagnóstico conclusivo da doença; a enfermidade está difundida no...
Abstract: Responsible for significant economic losses in affected flocks, the Contagious Ecthyma is a disease caused by Orf virus belonging to the genus Parapoxvirus, epitheliotropic, the Poxviridae family and subfamily Chordopoxvirinae. It could be transmitted to humans who handle and work with infected sheep, causing crusted lesions and proliferative skin and the mucocutaneous junction, both in animals and in humans. The study showed the disease diffusion in São Paulo. They sampled 42 (8.64%) Animal caregivers and 444 (91.36%) sheep (n = 486). Of these, 453 (93.21%) showed no clinical signs, while 33 (6.79%) suspected cases of the disease (32 sheep and a caregiver) that were biopsied and performed histopathological and PCR tests. This all samples (n = 486) were suggestive of Ecthyma Contagious 6.38% and 0.41% suggestive of other skin lesions on histopathological examination. In examining PCR among 486 sampled, 4.32% were positive, while 2.47% were negative. The prevalence of reagents for virus neutralization was 67% in sheep and their caregivers 76% (p = 0.22). The distribution of titles had statistically significant differences between species with p = 0.0048. All surveyed 486 samples were negative in PCR test blood. The prevalence of animals with crust resulted in 7.2% and 2.4% their caregivers. Statistical analyzes were performed with SAS software (SAS Institute, 2011) at 0.05 significance level. Virus neutralization test in conclusion serum between species was statistically significant (p = 0.048), therefore, it is suggested that the higher the coexistence of sheep with their caregivers; the correlation between the diagnostic methods of virus neutralization, PCR and histopathology are important associations for the conclusive diagnosis of the disease; the disease is widespread in São Paulo and the geographical distribution did not influence the genetic similarity of the virus
Doutor

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico
Orf virus (ORFV), the type member of the genus Parapoxvirus of the family Poxviridae, is the etiologic agent of orf or contagious ecthyma, a contagious and ubiquitous disease of sheep and goats. ORFV genome consists of a double stranded DNA molecule with approximately 138 Kb, and contains 131 putative genes. Among those, 15 are novel genes, unique to parapoxviruses, which lack homology to other known viral or cellular genes. In the present study we describe the functional characterization of three of these genes, ORFV024, ORFV002, and ORFV121. Results presented here demonstrate that the proteins encoded by these genes inhibit the activation of the nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling pathway. ORFV-encoded ORFV024 inhibits activation of the NF-κB signaling pathway in the cell cytoplasm by inhibiting phosphorylation of the IκB kinases, IKKα and IKKβ, consequently inhibiting the activation of the IKK complex. Deletion of ORFV024 from the ORFV genome had no significant effect on disease severity, progression or time to resolution in sheep, indicating that ORFV024 does not contribute to ORFV virulence. ORFV-encoded ORFV002 functions in the cell nucleus, where it interacts with the NF-κB subunit NF-κB-p65, inhibiting its acetylation, a p300-mediated modification of NF-κB-p65 which modulates its transcriptional activity. Similarly to ORFV024, deletion of ORFV002 from the ORFV genome had no significant effect on ORFV virulence and disease pathogenesis in sheep. ORFV-encoded ORFV121 functions in the cell cytoplasm, where it binds to and inhibits phosphorylation and nuclear translocation of NF-κB-p65. Deletion of ORFV121 from the ORFV genome resulted in a marked attenuated disease phenotype in sheep, indicating that ORFV121 is a determinant of virulence of ORFV in the natural host. These results indicate that ORFV, like other poxviruses, has evolved multiple strategies to modulate NF-κB, targeting different steps of the signaling pathway. Results obtained in the pathogenesis studies performed here suggest that multiple NF-κB inhibitors encoded by ORFV may exert complementary and/or redundant functions to effectively block host cell responses regulated by the NF-κB signaling pathway. Additionally, it is possible that ORFV-encoded NF-κB inhibitors modulate distinct cellular processes regulated by NF-κB in vivo. A better understanding of ORFV-host interactions may provide valuable insights for the development of improved vaccines against orf, or yet for the development of novel ORFV-based therapeutic agents and vaccine vectors with enhanced safety and efficacy, and a broader applicability.
O vírus da orf (ORFV), protótipo do gênero Parapoxvirus da família Poxviridae, é o agente etiológico da orf ou ectima contagioso, uma enfermidade contagiosa de distribuição mundial que afeta primariamente ovinos e caprinos. O genoma do ORFV consiste de uma molécula de DNA de fita dupla com aproximadamente 138 Kb, que contém presumidamente 131 genes. Dentre estes, 15 são genes novos, identificados apenas nos parapoxvírus e que não possuem homologia com outros genes de origem viral ou celular. O presente estudo descreve a caracterização funcional de três destes genes, ORFV024, ORFV002 e ORFV121. Os resultados apresentados no presente estudo demonstram que as proteínas codificadas pelos genes ORFV024, ORFV002 e ORFV121 inibem a ativação da via de sinalização do fator de transcrição nuclear-kappa B (NF-κB). O produto da ORFV024 bloqueia a ativação da via do NF-κB no citoplasma celular, inibindo a fosforilação das quinases IκB (IKK), IKKα e IKKβ e, consequentemente inibindo a ativação do complexo IKK. A deleção do gene ORFV024 do genoma do ORFV não alterou a severidade, a progressão, ou o tempo de resolução das lesões produzidas pelo ORFV em ovinos, indicando que o produto deste gene não contribui para a virulência do vírus. O gene ORFV002 codifica um inibidor do NF-κB que atua no núcleo das células. O produto do ORFV002 interage com a subunidade NF-κB-p65 do NF-κB, inibindo a sua acetilação, uma modificação pós-traducional do NF-κB-p65 mediada pela acetiltransferase p300 que regula a sua atividade transcripcional. Semelhante ao ORFV024, a deleção do gene ORFV002 do genoma do ORFV não afetou a virulência do vírus nem alterou a patogenia da enfermidade em ovinos. O produto do gene ORFV121 atua no citoplasma das células, onde esta proteína viral interage com o NF-κB-p65 inibindo sua fosforilação e translocação nuclear. A deleção do gene ORFV121 do genoma do ORFV reduziu significativamente a severidade, a progressão e o tempo de resolução da doença em ovinos, indicando que este produto viral constitui-se em um fator de virulência para o ORFV em seu hospedeiro natural. Estes resultados demonstram que, assim como outros poxvírus, o ORFV também desenvolveu múltiplas estratégias para modular a via de sinalização do NF-κB, codificando proteínas que atuam em diferentes eventos desta complexa via de sinalização intracelular. Os resultados obtidos nos estudos de patogenia sugerem que os inibidores do NF-κB codificados pelo ORFV desempenham funções complementares e/ou redundantes, provavelmente, para promover um bloqueio efficiente dos processos biológicos regulados pelo NF-κB. Além disso, estes produtos virais podem modular diferentes processos biológicos controlados pelo NF-κB in vivo. Um melhor entendimento das interações do ORFV com o seu hospedeiro pode favorecer o desenvolvimento de vacinas mais eficazes para o ectima contagioso, ou ainda, promover o desenvolvimento de vacinas vetoriais ou imunoterápicos, baseados no ORFV, mais eficazes e com uma maior espectro de aplicações.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Contagious ecthyma, also known as orf, is an infectious disease of sheep and goats caused by orf virus (ORFV), the prototype of the genus Parapoxvirus (PPV) of the family Poxviridae. Current vaccines against the disease contain virulent virus, are empirically produced through skin scarification of live lambs and present questionable efficacy. Likewise, the epidemiology of the infection, especially the mechanisms used by the virus to be perpetuated in herds and possible genetic and antigenic variations are poorly understood. Thus, the objectives of this study were: a. Development and efficacy testing of a vaccine produced in tissue culture; b. Investigation of viral persistence in experimentally infected lambs and, c. Phylogenetic analysis of Brazilian strains. Chapter 1 describes the development and testing of a ORFV vaccine produced in tissue culture. For this, ORFV strain IA-82 was submitted to 21 passages in BHK-21 cells and used to immunize lambs (n=30) through skin scarification of the internal face of the hind limb. Vaccination produced localized pustules and scabs lesions in 16 out of 30 animals, indicating an adequate replication of the vaccine virus. Ninety days after vaccination, vaccinated (n=16) and control lambs (n=16) were inoculated with a virulent ORFV strain in the labial commissure. Vaccinated and control lambs developed typical orf lesions, characterized by hyperemia, vesicles, pustules and scab formation. Nonetheless, vaccinated animals developed milder lesions compared to controls and the clinical scores were significantly lower (p<0.05) between days 10 and 22 post-challenge. In addition, the mean duration of clinical disease was significantly reduced in vaccinated animals (p<0.05). Furthermore, vaccinated animals excreted much less virus (p<0.05) and for a significantly shorter period of time than did the controls (13.4 days versus 22.6 days, p<0.001). These results demonstrate partial protection by the experimental vaccine and, upon improvement of immunization and protection indices, are promising towards the use of tissue culture-based ORFV vaccines. Chapter 2 presents the investigation of ORFV persistence in experimentally infected lambs. For this, infected lambs were monitored for virus and viral DNA at different intervals after infection. Concomitantly, virus viability in scabs maintained at environmental temperatures was monitored. During acute infection, virus produced typical lesions of ecthyma in all inoculated lambs (n=10), with lesions during over 22 days. Infectious virus was recovered from lesions in titers up to 105.5 TCID50/ml, with peaks of virus excretion between days 10 and 12 post inoculation (pi). The virus was detected continuously in lesions of all animals up to day 24 pi; four lambs shed virus until day 44 pi and one up to day 51 pi. Viral DNA was detected by PCR in all skin biopsies up to day 37 pi, in four animals at day 51, in three animals at day 65 and one at day 79 pi. Infectious virus was detected in scabs maintained under environmental temperatures for up to 6 months. These results demonstrate that ORFV may be maintained and excreted for a long period by infected animals. Chapter 3 presents the sequence analysis of the major envelope glycoprotein gene (B2L) of nine Brazilian ORFV strains from sheep and goats obtained between 2008 and 2011 and three vaccine strains. Comparative sequence analysis revealed that Brazilian strains were highly related among themselves and with vaccine strains. Brazilian strains shared 97.7- 100% and 96.1-100% sequence identity of nucleotides and amino acids, respectively. With vaccine strains, Brazilian ORFVs showed 98.7-100% nucleotide identity and 97.7-100% amino acid similarity. Phylogenetic analysis based on deduced amino acid sequences showed that the Brazilian strains from sheep and vaccine strains clustered in the same branches; goat strains clustered into a separate branch. In summary, the obtained results contribute to the knowledge about the ORFV biology and epidemiology and are promising towards the use of a tissue culture based vaccine.
O ectima contagioso, também conhecido como Orf, é uma enfermidade contagiosa que afeta principalmente ovinos e caprinos e que está mundialmente distribuída. O agente da enfermidade, vírus do Orf (ORFV), é o protótipo do gênero Parapoxvirus (PPV), família Poxviridae. As vacinas atuais contra a doença apresentam eficácia questionável e são produzidas por métodos cruentos. Da mesma forma, a epidemiologia da infecção, especialmente os mecanismos utilizados pelo vírus para se perpetuar nos rebanhos e as suas possíveis variações genéticas e antigênicas são pouco conhecidas. Assim, os objetivos do presente trabalho foram: a. Desenvolvimento e teste de eficácia de uma vacina para o ORFV produzida em cultivo celular, b. Investigação da persistência viral em ovinos infectados experimentalmente, c. Análise filogenética de amostras brasileiras. O capítulo 1 relata a produção e teste de eficácia de uma vacina produzida em cultivo celular. Para isto, a cepa IA- 82 do ORFV foi submetida a 21 passagens em cultivo de células BHK-21 e usada para vacinar ovinos jovens (n=30), por escarificação cutânea na face interna da coxa. A vacinação produziu pústulas e crostas em 16 dos 30 ovinos vacinados, indicando imunização adequada em 53% dos animais. Noventa dias após a vacinação, ovinos vacinados (n=16) e controles (n=16) foram inoculados com uma cepa virulenta do ORFV (106,9DICC50/mL) após escarificação na comissura labial. Todos os animais desenvolveram lesões típicas de ectima, incluindo hiperemia, vesículas, pústulas e crostas. No entanto, os animais vacinados desenvolveram lesões mais leves e passageiras do que os controles, e os escores clínicos foram estatisticamente diferentes (p<0,05) entre os dias 10 e 22 pós-desafio. Além disso, o tempo de duração da doença foi significativamente inferior (p<0,05) nos animais vacinados. Os animais vacinados também excretaram menor quantidade de vírus (p<0,05) e por um período significativamente mais curto do que os controles (13,4 dias versus 22,6 dias, p<0,001). Esses resultados demonstram a proteção parcial conferida pela vacina experimental e, dependendo da melhoria dos índices de imunização e proteção, são promissores no sentido da utilização de vacinas contra o ORFV produzidas em cultivo celular. O capítulo 2 relata a investigação da persistência do ORFV em ovinos infectados experimentalmente. Para isto, ovinos inoculados com a cepa IA-82 foram submetidos a pesquisa de vírus e de DNA nas lesões a diferentes intervalos após a inoculação. A viabilidade do vírus também foi investigada em crostas de animais infectados mantidas à temperatura ambiente. Durante a infecção aguda, o vírus produziu lesões típicas de ectima em todos os animais inoculados (n=10), com duração de aproximadamente 22 dias. O vírus foi detectado continuamente nas lesões de todos os animais até o dia 24 pós inoculação (pi); quatro animais excretaram vírus até o dia 44 pi e um deles ainda excretava vírus no dia 51 pi. O vírus foi excretado em títulos de até 105,5 DICC50/ml, com picos de excreção viral entre os dias 10 e 12 pi. O DNA viral foi detectado por PCR em biópsias coletadas de todos os animais no dia 37 pi, e em um animal o DNA viral foi detectado até o dia 79 pi. O vírus foi recuperado, por isolamento viral, nas crostas mantidas a temperatura ambiente por até seis meses após a coleta. Esses resultados demonstram que o ORFV pode persistir e ser excretado por longo período em animais infectados, mesmo após a resolução clínica das lesões. O capítulo 3 relata a análise filogenética de nove amostras brasileiras de ORFV obtidas de ovinos e caprinos entre 2008 e 2011, além de três cepas vacinais. A sequência parcial do gene B2L, que codifica para uma proteína de envelope altamente imunogência, foi amplificada por PCR e o fragmento gerado (594 bp) foi submetido ao sequenciamento. A análise das sequências revelou que as amostras brasileiras possuem um alto grau de similaridade, quando comparados entre si e com as cepas vacinais. As amostras brasileiras apresentaram um grau de similaridade de nucleotídeos de 97, 7 a 100% e de aminoácidos de 96,1 a 100%. Quando comparadas com as cepas vacinais, as amostras analisadas apresentaram um grau de similaridade de nucleotídeos de 98,7 a 100% e de aminoácidos de 97,7 a 100%. A análise filogenética baseada na sequência deduzida de aminoácidos mostrou que as amostras de ovinos se agruparam junto com as cepas vacinais, e as amostras de caprinos se agruparam separadamente. Conjuntamente, esses resultados contribuem para o conhecimento acerca da biologia e epidemiologia do ORFV, e são promissores no sentido do uso de vacinas produzidas em cultivo celular.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
The immunostimulatory properties of inactivated parapoxvirus ovis (iPPVO) have been investigated in different animal species and experimental settings. This study investigated the effects of administration of iPPVO on selected events of the innate response in mice. Neutrophil activation, phagocytic activity of macrophages, serum bactericidal activity, induction and antiviral activity of interferon type I (IFN - I) and expression of several classes of cytokines were assayed following intraperitoneal inoculation of Mus musculus with iPPVO (107 TCID50). Serum from iPPVO-treated animals showed IFN-I activity against murine encephalomyocarditis virus (EMCV) between 6 and 12 hours post infection (hpi), as shown by plaque reduction. A significant activation of neutrophils at 6hpi was observed by NBT reduction test in animals treated with the iPPVO. Peritoneal macrophages from mice treated with iPPVO demonstrated a significant increase (p<0.01) in phagocytic activity against Candida albicans both in vivo (between 12 and 96 hpi) and in vitro (24 and 72 hpi). iPPVO treated mice showed increased serum bactericidal activity against Escherichia coli (p<0.05) at two periods (24 and 72 hpi). A second study evaluated the expression of cytokines in response to inoculation of iPPVO. For this, spleens and serum samples were collected from mice treated with iPPVO at different intervals after inoculation and subjected to quantification of messenger RNA (mRNA) by real time PCR (qRT-PCR) and detection/quantification of serum cytokines by ELISA. Quantification of mRNA identified a significant and transient increase in the expression of various cytokines, with variable magnitude and kinetics. mRNA expression of proinflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α and IL-8) peaked at 24 hpi (5.4 times increase) and 48 hpi (3 and 10 times, respectively). A 15-fold increase in expression of INF-γ and 6-fold for IL-12 was observed at 48 and 24 hpi, respectively. An increase in the expression of self-regulatory cytokines (Th2) cells, especially IL-10 and IL-4 was detected at later periods (72 and 96 hpi) with peaks of 4.7 and 4.9 fold, respectively. The determination of the concentration of serum cytokines by ELISA showed an increase in IL-1β, TNF-α, IL- 12, IFN-γ and IL-10 with kinetics similar to that observed by qPCR, especially for IL-1 and INF-γ. In summary, these results demonstrate that inoculation with iPPVO stimulates transiently a number events associated with cellular and humoral innate immune responses. If taken together, these effects would likely contribute for the enhanced resistance to certain pathogens observed in animals treated with iPPVO.
As propriedades imunoestimulatórias do Parapoxvirus ovis inativado (iPPVO) têm sido verificadas em diferentes espécies animais e condições experimentais. No presente trabalho foram investigados os efeitos da administração do iPPVO sobre eventos da resposta inata de camundongos. Ativação de neutrófilos, atividade fagocítica de macrófagos, atividade bactericida do soro, indução e atividade antiviral do interferon tipo I (INF-I) e expressão de várias classes de citocinas foram investigados em diferentes intervalos após inoculação de Mus musculus pela via intraperitonial com iPPVO (dose 107 TCID50). O soro de animais tratados com iPPVO apresentou atividade de INF-I frente ao vírus da encefalomiocardite murina (EMCV) entre 6 e 12 horas pós inoculação (hpi), como demonstrado pela redução significativa de formação de placas virais. Uma significativa ativação dos neutrófilos circulantes foi observada pela técnica de redução do NBT em animais tratados com o iPPVO às 6 hpi. Macrófagos peritoneais de camundongos tratados com iPPVO demonstraram um aumento significativo (p<0,01) na atividade fagocítica frente a Candida albicans tanto in vivo (entre 12 e 96 hpi) quanto in vitro (24 e 72hpi). Camundongos tratados com iPPVO apresentaram aumento na atividade bactericida do soro frente à Escherichia coli (p<0,05) em dois períodos avaliados (24 e 72 hpi). Um segundo estudo avaliou a expressão de citocinas em resposta à inoculação do iPPVO. Para isso, amostras de baço e soro foram coletados de camundongos tratados com iPPVO em diferentes intervalos após a inoculação e submetidas a quantificação de RNA mensageiro (RNAm) por PCR em tempo real (qRT-PCR) e detecção/quantificação de citocinas no soro por ELISA. A quantificação de RNAm permitiu detectar um aumento significativo e transitório da expressão de várias citocinas, com magnitude e cinética variáveis. A expressão de RNAm das citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, TNF-α e IL-8) atingiu o pico às 24 hpi (aumento de 5,4 vezes), 48 hpi (3 e 10 vezes, respectivamente). Um aumento de 15 vezes na expressão gênica do INF-γ, e de 6 vezes para a IL-12 foi observado às 48 e 24 hpi, respectivamente. Um incremento na expressão das citocinas auto-regulatórias (Th2), principalmente IL-10 e IL-4, foi detectado em períodos mais tardios (72 e 96 hpi) com picos de 4,7 e 4,9 vezes, respectivamente. A determinação da concentração das citocinas séricas por ELISA revelou um aumento nos níveis de IL-1β, TNF- α, IL-12, INF-γ e IL-10, com uma cinética similar à observada pela técnica de qPCR, especialmente para IL-1β e INF-γ. Em resumo, esses resultados demonstram que o tratamento com iPPVO estimula de forma significativa e transitória uma série de eventos celulares e humorais ligados à resposta imune inata. Esses efeitos, se considerados em conjunto, provavelmente contribuem para o aumento da magnitude da resposta imunológica a certos patógenos observada em animais tratados com o iPPVO.

Toxic infectious exfoliative conditions include staphylococcal toxic shock syndrome (TSS), streptococcal toxic shock syndrome (STSS), and staphylococcal scalded skin syndrome (SSSS). All three are mediated by bacterial toxin production and are considerations in the differential diagnosis of a febrile, hypotensive patient with a rash. Meningococcemia is potentially fatal and extremely contagious with a short incubation period. Disseminated gonococcal infection (DGI) presents with tenosynovitis, dermatitis, and polyarthralgias without purulent arthritis or with purulent arthritis but without skin lesions. Ecthyma gangrenosum (EG) is a cutaneous manifestation of Pseudomonas aeruginosa infection. Rocky Mountain Spotted Fever (RMSF) is caused by Rickettsia rickettsii, most commonly transmitted by the American dog tick. Patients present with nonspecific symptoms, such as fever, headache, myalgias, arthralgias, nausea, vomiting, and abdominal pain. Finally, vibrio vulnificus is a gram-negative bacterium that causes serious wound infections, sepsis, and diarrhea in patients exposed to shellfish or marine water.

Orf (‘ecthyma contagiosum’) is caused by an epitheliotropic parapox DNA virus of sheep and goats that is able to subdue the host’s immune response. It is an occupational zoonosis of people working with these animals. A painful papule/pustule develops, usually on a finger, the site of contact with lesions on the animal’s muzzle. Systemic effects are unusual, but include local lymphadenopathy, fever, erythema multiforme, and other generalized rashes. Spontaneous resolution within 6 weeks is usual. Multiple, giant lesions may develop in the immunosuppressed. Topical cidofovir is effective in severe cases....