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Dissertations / Theses on the topic 'Électrophorèse capillaire'
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Nehme, Hala. "Etude des réactions enzymatiques par électrophorèse capillaire." Thesis, Orléans, 2013. http://www.theses.fr/2013ORLE2041.
Full textAbstract:
Les enzymes sont les catalyseurs de toutes les réactions biochimiques. Leur dérégulation peut être impliquée dans de nombreuses pathologies graves. L’étude de ces réactions est importante pour dépister les anomalies, mieux comprendre le fonctionnement des enzymes et rechercher des modulateurs de leur activité. Le présent travail de thèse présente différents types d’essais enzymatiques basés sur l’électrophorèse capillaire pour étudier la cinétique d’enzymes variées. Le mode pré-capillaire où la réaction enzymatique est effectuée à l’extérieur du capillaire et les essais homogènes en-ligne en mode discontinu où la réaction est réalisée dans le capillaire, sont appliqués. Les méthodes développées sont optimisées pour assurer un mélange optimal des réactifs et une bonne séparation électrophorétique. Les constantes cinétiques et d’inhibition (Vmax, Km et IC50) de la réaction enzymatique sont déterminées et comparées à celles obtenues par les techniques classiques. Pour les essais en-ligne, plusieurs types de mélange (par application d’un champ électrique, par diffusion longitudinale ou diffusion transversale) des créneaux de réactifs sont utilisés selon le système enzymatique étudié. Finalement, jusqu’à quatre réactifs injectés successivement dans le capillaire sont mélangés avec succès. De nombreux essais sont effectués sur des matrices complexes (cellules, extraits de plantes). Le criblage d’inhibiteurs de référence et de synthèse est réalisé sur plusieurs kinases humaines : CDK1/cycline B, CDK5/p25, DYRK1A, GSK3!, PI3K, Akt et mTOR. Les essais développés se sont avérés être simples, rapides, quantitatifs, économes en réactifs et répétablesEnzymes catalyze all enzymatic reactions. Their deregulation can be involved in several severe diseases. The study of these reactions is important to detect anomalies, to better understand enzyme functioning and to seek modulators of their activity. This thesis presents capillary electrophoresis based enzymatic assays developed to study kinetics of various enzymes. The pre-capillary mode in which the enzymatic reaction occurs outside the capillary and the incapillary plug-plug mode of homogenous assays where the reaction is performed inside the capillary are applied. The methods developed are optimized to ensure optimum reactant mixing and a good electrophoretic separation. The kinetic and inhibition constants (Vmax, Km and IC50) of the enzymatic reaction are determined by these assays and compared to the results obtained using conventional techniques. For in-capillary assays, several mixing types (by application of an electric field, by longitudinal diffusion or transverse diffusion) of the reactant plugs are used depending on the enzymatic system studied. Finally, up to four reactants injected successively in the capillary are successfully mixed. Many assays are performed on complex matrices (cells, plant extracts). Screening of referenced and synthesized inhibitors on several human kinases: CDK1/cyclin B, CDK5/p25, DYRK1A, GSK3!, PI3K, Akt and mTOR are performed. Developed assays proved to be quantitative, simple, economic, fast and robust
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Nehmé, Reine. "Etude des greffages non-covalents de capillaires pour l'analyse des peptides et des protéines en électrophorèse capillaire." Montpellier 1, 2008. http://www.theses.fr/2008MON13519.
Full textAbstract:
L'électrophorèse capillaire (EC) est une méthode de choix pour la séparation des biomolécules. Cependant, un défit majeur pour l'analyse des biomolécules en EC, en particulier des peptides et protéines, est d'éliminer les phénomènes d'adsorption sur les parois des capillaires en silice. L'utilisation de greffages non-covalents avec des polyélectrolytes hautement chargés est une solution efficace, simple et rapide. Si des résultats très encourageants ont été obtenus, aucune étude décrit l'influence des conditions de greffage sur la performance des séparations. Le présent travail de thèse peut se diviser en deux volets. Le premier consiste en une étude fondamentale de l'influence de diverses conditions sur la stabilité de recouvrements non-covalents de capillaires avec une ou plusieurs couches de polyélectrolytes et sur leur efficacité à limiter l'adsorption de peptides et protéines modèles en vue de déterminer les conditions optimales de greffage. La nature et la concentration des polyélectrolytes, la force ionique de la solution de greffage ainsi que les procédures de recouvrement, de stabilisation et de conservation des capillaires greffés sont parmi les plus importantes conditions étudiées. La stabilité des recouvrements ainsi développés vis-à-vis de différentes conditions extrêmes (pH, solvants organiques. . . ) a également été analysée. Le deuxième volet consiste en une application des résultats de l'étude fondamentale précédente pour l'analyse de protéines et peptides d'intérêt biologique. Ainsi, les protocoles de recouvrements développés ont été employés pour l'analyse de l'hémoglobine (Hb) dans le sang total d'un patient diabétique. Le dosage de la forme glycquée de l'Hb permet le dépistage de la maladie ainsi que l'évaluation de l'efficacité des traitements chez les patients. D'autre part, les résultats obtenus suite à l'étude fondamentale ont été utilisés pour le développement d'une méthode d'analyse par EC pour le contrôle isomérique d'un puissant sécrétagogue de l'hormone de croissance (GH) et qui est actuellement en essai clinique de phase III. Des résultats inattendus ont été obtenus et la performance de la séparation est comparée à celle obtenue avec des capillaires en silice vierge et de capillaires recouverts d'un polymère neutre (le polyéthylène oxyde ou PEO).
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Mario, Nathalie. "Etude qualitative et quantitative des hémoglobines par électrophorèse capillaire." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05P632.
Full text
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Ric, Audrey Marie Amélie. "Caractérisation d'aptamères par électrophorèse capillaire couplée au séquençage haut-débit Illumina." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30388/document.
Full textAbstract:
Les aptamères sont des oligomères d'ADN ou d'ARN simple brin qui, en se repliant sous forme de structures tridimensionnelles peuvent avoir des interactions fortes et spécifiques envers un certain nombre de cibles. L'objectif de cette thèse a été de compléter les études existantes sur l'utilisation de l'électrophorèse capillaire (CE) et les aptamères afin de mettre au point une méthode de sélection d'aptamères par CE couplée à la fluorescence induite par laser et le séquençage haut-débit Illumina. Dans un premier temps, nous avons mis au point une méthode de détection et de séparation par électrophorèse capillaire couplée à la double détection UV-LEDIF d'une banque d'ADN en interaction avec une cible : la thrombine. C'est un modèle déjà étudié pour lequel deux aptamères ont fait l'objet de publications. Nous avons utilisé l'aptamère T29 dans le cadre de notre étude car c'est celui qui présente la meilleure affinité. L'électrophorèse capillaire est un puissant outil analytique qui facilite l'efficacité de sélection des aptamères et précise la détermination des paramètres d'interactions. Nous avons ainsi pu déterminer la constante d'affinité KD par CE-UV-LEDIF sur le modèle de base : la thrombine. Par ailleurs, nous montrons également comment l'utilisation du tampon Tris peut dégrader un ADN simple brin en électrophorèse capillaire et nous proposons comme alternative l'utilisation d'un tampon sodium phosphate dibasique qui évite ce phénomène de dégradation. Enfin, nous expliquons la difficulté d'amplification par qPCR et PCR d'un aptamère comme le T29 ayant une structure en G-quadruplex. Nous avons montré que le séquençage haut-débit Illumina nous a permis de trouver une corrélation entre le nombre de molécules séquencées et le nombre de séquences obtenues. L'analyse des séquences obtenues montre une quantité importante (20%) de séquences de T29 qui ne correspondent pas à la séquence de cet aptamère. Cela prouve que les étapes de PCR et de séquençage haut débit pour la détection de G-quadruplex peuvent induire un biais dans l'identification de ces moléculesAptamers are oligomers of small single-stranded DNA or RNA which can have strong and specific interactions with some targets when they fold into three-dimensional structures. The objective of this thesis was to complete existing studies on the use of capillary electrophoresis in order to develop a method for the selection of aptamers by CE coupled to laser induced fluorescence and Illumina high-throughput sequencing. In a first step, we developed a method of detection and separation by capillary electrophoresis coupled with the double detection UV-LEDIF of a DNA library interacting with a target: thrombin. It is a model already studied and for which two aptamers have been published. We used aptamer T29 as part of our study because it has the best affinity. Capillary Electrophoresis is a powerful analytical tool that facilitates the selection efficiency of aptamers and specifies the determination of the interaction parameters. We thus were able to determine the affinity constant KD by CE-UV-LEDIF on the basic model: thrombin. Moreover, we also show how the use of Tris buffer can degrade single-stranded DNA during capillary electrophoresis and we propose as an alternative the use of a dibasic sodium phosphate buffer which avoids the phenomenon of degradation. Finally, we explain the difficulty of amplification by qPCR and PCR of an aptamer such as T29 with a G-quadruplex structure. We showed that the Illumina high-throughput sequencing allowed us to find a correlation between the number of sequenced molecules and the number of sequences obtained. Analysis of the sequences obtained shows a significant amount (20%) of T29 sequences which do not correspond to the sequence of this aptamer. This shows that the PCR and high-throughput sequencing steps for the detection of G-quadruplex can induce bias in the identification of these molecules
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Blanco, Stéphane. "Mécanismes de séparation des protéines par électrophorèse. Modélisation et analyse de sensibilité." Toulouse 3, 1996. http://www.theses.fr/1996TOU30326.
Full textAbstract:
L'electrophorese est un procede qui permet de separer des particules ou macromolecules chargees en utilisant leur migration sous l'effet d'un champ electrique. La modelisation des phenomenes electrophoretiques developpee dans le cadre de cette etude a l'aide du formalisme d'evolution par transfert et du logiciel zoom, a pour principal objectif d'atteindre un meilleur niveau de comprehension des mecanismes siegeant dans ce type de procede. L'application a des macromolecules du type proteines a necessite de construire, sur une base theorique, un modele mathematique de conductivite electrique d'une suspension de particules moderement chargees.
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Marie, Anne-Lise. "Electrophorèse capillaire couplée ou non à la spectrométrie de masse pour l’évaluation ou le contrôle qualité de protéines à visée thérapeutique." Thesis, Université Paris-Saclay (ComUE), 2015. http://www.theses.fr/2015SACLS044/document.
Full textAbstract:
Au cours de cette thèse, nous avons été amenés à développer des méthodes analytiques afin de contrôler la qualité de protéines thérapeutiques en tant que produits finis ou d'évaluer le potentiel de certaines protéines à être des candidats médicaments. Deux protéines ont été étudiées : l'albumine de sérum humain (HSA) et l'antithrombine (AT). Ces protéines diffèrent par leur structure, leur glycosylation et leurs activités biologiques. Une méthode d'électrophorèse capillaire de zone (CZE) a permis de séparer neuf formes dans des préparations commerciales d'HSA plasmatique, dont des formes native, cystéinylée, glyquées et tronquées. Une autre méthode CZE a permis de séparer plus de huit formes dans des préparations commerciales d'AT plasmatique, dont des formes native, latente et hétérodimérique. Les deux méthodes CZE développées ont permis de mettre en évidence des différences significatives quant à la composition de préparations commerciales d'HSA ou d'AT produites par cinq fournisseurs différents. Des méthodes d'électrophorèse capillaire couplée à la spectrométrie de masse (CE-MS), avec un analyseur quadripôle-temps de vol (Q-TOF) et une ionisation électrospray (ESI), ont également été développées. Ces méthodes CE-MS ont permis d'identifier non seulement de nombreuses glycoformes et formes apparentées de l'AT, mais également des formes dimériques. Une méthode CE-MS en conditions non-dénaturantes a permis de montrer que la forme native et la forme latente de l'AT (deux conformères) présentaient un spectre de masse spécifique, permettant de les différencier sans ambiguïté. Afin d'évaluer l'affinité de variants d'AT pour l'héparine, une méthode d'électrophorèse capillaire d'affinité (ACE) a été développée. Cette méthode ACE a permis d'analyser les variants d'AT directement à partir des surnageants de culture cellulaire dans lesquels ils sont produits. Ainsi, il a été montré que certains variants présentaient une affinité très élevée pour l'héparine, en accord avec les mutations réalisées. Enfin, dans le cadre des études d'affinité entre l'AT et l'héparine, nous avons exploré une méthode nouvelle basée sur l'analyse de la dispersion de Taylor (TDA)During this Ph.D., we developed analytical methods in order to check the quality of therapeutic proteins as finished products or to assess the potential of some proteins to be drug candidates. Two proteins were studied : human serum albumin (HSA) and antithrombin (AT). These proteins are very different regarding their structure, glycosylation, and biological functions. A capillary zone electrophoresis (CZE) method enabled to separate nine forms in commercial preparations of HSA issued from human plasma, among which native, cysteinylated, glycated, and truncated forms. Another CZE method allowed separating more than eight forms in commercial preparations of AT issued from human plasma, among which native, latent, and heterodimeric forms. Both CZE methods enabled to highlight significant differences in the composition of marketed preparations produced by five competitive pharmaceutical companies. Capillary electrophoresis-mass spectrometry (CE-MS) methods, using a quadrupole-time of flight (Q-TOF) analyzer and electrospray ionization (ESI), were also developed. These CE-MS methods enabled to identify not only a high number of glycoforms and related forms of AT, but also dimeric forms. A CE-MS method developed in non-denaturing conditions showed that native and latent forms of AT (two conformers) exhibited a specific mass spectrum, allowing to unambiguously distinguish them. With the aim to assess the binding affinity of AT variants toward heparin, we developed an affinity capillary electrophoresis (ACE) method. This ACE method enabled to analyze AT variants directly from the cell culture supernatants used to produce them. It has been shown that some AT variants had a very high affinity for heparin, in good agreement with the performed mutations. Finally, a new method based on Taylor Dispersion Analysis (TDA) was investigated to study the affinity between AT issued from plasma and heparin
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Nouadje, Georges. "Electrophorèse capillaire et détection colinéaire de fluorescence induite par laser." Toulouse 3, 1996. http://www.theses.fr/1996TOU30054.
Full textAbstract:
L'electrophorese capillaire est une methode qui permet de separer efficacement des composes organiques ou mineraux a l'interieur d'un capillaire rempli d'un electrolyte, et de diametre interieur compris entre dix et cent micrometres. Elle souffre cependant de la faible sensibilite des detecteurs qui lui sont dedies, en raison notamment de l'etroitesse du capillaire et donc des faibles volumes d'echantillon injectes. Son application a l'analyse des traces de molecules organiques contenues dans les fluides biologiques, necessite l'utilisation d'un mode de separation et d'un systeme de detection qui conferent une bonne selectivite et une grande sensibilite. Dans la premiere partie de notre travail, et a partir des proprietes physico-chimiques des derives thyocarbamyle-fluoresceines d'acides amines et d'amines biogenes, nous avons developpe et verifie les modeles qui permettent d'optimiser la separation de ces solutes par un mode particulier de l'electrophorese capillaire, la chromatographie capillaire micellaire electrocinetique. Dans la deuxieme partie, nous avons developpe sur la base d'un microscope a epi-fluorescence, un detecteur de fluorescence induite par laser colineaire a lentille spherique qui autorise la detection de derives d'acides amines et d'amines biogenes et ce jusqu'a des concentrations de l'ordre de dix moins douze moles par litre. Dans la derniere partie, nous avons combine la chromatographie capillaire micellaire electrocinetique avec ce detecteur pour doser les acides amines et les amines biogenes que contiennent diverses matrices biologiques, dont le liquide cephalo-rachidien et le vin. Cette methode est egalement appliquee a la realisation d'une etude cinetique rapide de la racemisation de la l-serine. Ce travail a permis l'industrialisation et la mise sur le marche de ce detecteur
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Ouadah, Nesrine. "Caractérisation de chlorhydrates d’aluminium et étude de leurs interactions avec des protéines par électrophorèse capillaire." Thesis, Montpellier, 2018. http://www.theses.fr/2018MONTS007.
Full textAbstract:
Les sels d’aluminium sont utilisés par l’industrie cosmétique comme actifs anti-transpirants pour limiter la sudation. Leur mécanisme d’action, lié en partie à leur structure très complexe, est encore mal élucidé. Le développement de nouveaux outils de caractérisation pour améliorer la compréhension de leur action anti-transpirante au niveau moléculaire est donc crucial, pour, à terme, optimiser leur utilisation, voire pouvoir les remplacer par d’autres composés actifs. L’objectif de ce travail de thèse a été, d’une part, de caractériser, par une nouvelle approche analytique, les oligomères contenus dans les chlorhydrates d’aluminium (ACH) utilisés comme agents anti-transpirants et, d’autre part, d’étudier les interactions entre ces ingrédients cosmétiques et des protéines modèles. Dans une première partie, une méthode en électrophorèse capillaire de zone (CZE) a été développée pour la séparation, la caractérisation et l’analyse quantitative de la distribution des oligomères d’ACH (notamment, Al13 et Al30). Les choix du contre-ion, de la force ionique et du greffage du capillaire se sont révélés cruciaux pour le succès de la séparation, la stabilité des espèces au cours du processus électrophorétique et la répétabilité / reproductibilité de la séparation. L’optimisation des paramètres de séparation a permis d’étendre l’application de cette méthode à l’analyse d’autres espèces oligomères et colloïdales de l’aluminium, et de mettre en place un couplage en ligne avec l’analyse de la dispersion de Taylor (TDA). L’isotachophorèse capillaire (ITP) a également été explorée pour l’analyse d’échantillon à des concentrations élevées en ACH, se rapprochant de celles des formules anti-transpirantes. Les résultats obtenus montrent qu’il est possible d’analyser des échantillons jusqu’à 40 g/L en ACH. Enfin, le mécanisme d’obstruction du canal sudoripare semblant impliquer des phénomènes de complexations entre les oligomères d’aluminium et des protéines de la sueur lors de l’application de l’antitranspirant, l’enjeu du dernier volet de la thèse a été de développer une méthode en électrophorèse capillaire d’affinité (ACE) pour l’étude des interactions entre ACH et des protéines modèles (BSA et lysozyme). Pour cela l’électrolyte utilisé en ACE est uniquement constitué de ligands (ACH), sur une gamme de concentrations élevée (jusqu’à 50 g/L), afin de se rapprocher des conditions d’application. D’un point de vue analytique, le défi de ce travail a été de corriger les mobilités électrophorétiques des protéines des paramètres expérimentaux variant avec la concentration en ACH (échauffement par effet Joule, viscosité, état de charge de la protéine en fonction du pH, force ionique). Il a été possible de mettre en évidence des différences quantitatives de comportement électrophorétique traduisant des différences d’interaction entre les deux protéines modèles étudiées (BSA et lysozyme) et les ACHAluminum chlorohydrates (ACH) are used by the cosmetics industry as antiperspirant active ingredients to limit sweating. Their mechanism of action, is still poorly understood. The development of new characterization tools to improve the understanding of their antiperspirant action at the molecular level is therefore crucial, to ultimately optimize their use, or even to replace them with other active compounds. The purposed of this work, was to characterize by a new analytical approach the oligomers contained in ACH and to study their interactions with model proteins. In a first part, a method was developed by capillary electrophoresis zone (CZE) for the separation, characterization and quantitative analysis of ACH oligomers (in particular Al13 and Al30). The choice of counter-ion, ionic strength and capillary coating was crucial for the success of the separation, the stability of the species during the electrophoretic process and the repeatability / reproducibility of the separation. The optimization of the separation conditions has made it possible to the separation of other oligomeric and colloidal species of aluminum, and to set up an on-line coupling of CZE to Taylor dispersion. analysis (TDA). Capillary isotachophoresis (ITP) was also explored for ACH analysis at high concentrations, close to those used in antiperspirant formulations. It was shown that it is possible to analyze samples up to 40 g / L in ACH. Finally, interactions of ACH with model proteins (BSA and lysozyme) were studied by capillary affinity electrophoresis (ACE) to shed more light on the phenomena of complexation leading to the obstruction of the sweat duct. The electrolyte used in ACE consists solely of ligands (ACH), at relatively high concentrations (up to 50 g / L), in order to mimic the conditions of application. From an analytical point of view, the challenge of this work was to correct the electrophoretic mobilities of the proteins from the experimental parameters varying with the concentration ACH (Joule heating, viscosity, state of charge of the protein as a function of the pH, ionic strength). It was possible to quantitatively demonstrate differences in the interactions between ACH and the two studied model proteins (BSA and lysozyme)
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Renard, Charly. "Nouvelles approches pour la quantification et la réduction de l’adsorption de biomolécules en électrophorèse capillaire : capillaires superhydrophobes et multicouches de polyélectrolytes." Thesis, Montpellier, 2020. http://www.theses.fr/2020MONTS013.
Full textAbstract:
L’objectif de cette thèse est d’étudier différentes approches pour la modification de la paroi interne des capillaires d’électrophorèse capillaire pour améliorer les efficacités de séparation de biomolécules (peptides et/ou protéines modèles) en milieu acide. Le premier chapitre (hors étude bibliographique) est consacré à l’étude des revêtements superhydrophobes, dans le but d’empêcher l’adsorption des analytes en supprimant toute interaction entre la paroi superhydrophobe et les analytes (absence de mouillage). Un protocole de greffage original a été développé pour obtenir des capillaires superhydrophobes en étudiant l’influence du nombre de couches déposées, la nature du revêtement, et les pressions de remplissage et de rinçage du capillaire lors du dépôt des couches. Des capillaires superhydrophobes ont pu être obtenus, pour la première fois, avec des diamètres internes allant de 50 µm à 180 µm. Les caractéristiques hydrodynamiques et électrocinétiques de ces capillaires ont été étudiées, donnant une longueur de glissement de 23 µm et des efficacités de séparation électrophorétique 2 fois supérieures à celles obtenues sur un capillaire de silice vierge dans les mêmes conditions électrophorétiques. Le second chapitre étudie la génération de microbulles d’air dans des capillaires superhydrophobes. ). Les paramètres expérimentaux (tension, rayonnement UV, marqueur, revêtement superhydrophobe) nécessaires à l’obtention de ces microbulles ont été identifiés). Ces bulles ont été caractérisées (diamètre ~35-39 µm ; longueur ~10 mm ; potentiel zeta ~ -62.6 mV). Le troisième chapitre propose une méthodologie expérimentale, basée sur la théorie de l’électrochromatographie, permettant d’évaluer l’adsorption résiduelle de protéines sur la paroi des capillaires. Cette nouvelle approche présente deux intérêts : (i) pouvoir comparer les performances séparatives sur différents greffages via l’adsorption résiduelle, et (ii) optimiser les paramètres expérimentaux (longueur, diamètre interne, tension appliquée) afin de minimiser l’impact de l’adsorption sur les efficacités de séparationThe main objective of this thesis is to study different approaches for the modification of the electrophoresis capillary intern wall to enhance separation efficiency and reproducibility for biomolecules (model peptides and/or proteins) in acidic conditions. The first chapter (outside of bibliographic study) is dedicated to superhydrophobic coatings study. The goal is to prevent analytes adsorption by suppressing any interaction between the superhydrophobic wall and the analytes (anti-wettability). An original coating process has been developed to obtain superhydrophobic capillaries by studying the influence of layers number, coating nature, and filling and flushing pressure during layers deposition. Superhydrophobic coatings have been obtained, for the first time, with diameters from 50 µm to 180 µm. Hydrodynamic and electrokinetic characteristics have been studied, giving slipping length of 23 µm and efficiency separation increased twofold compared to fused silica capillary in the same electrophoretic conditions. The second chapter studies an air microbubbles generation process using superhydrophobic capillaries. The experimental parameters (voltage, UV ray, marker, superhydrophobic coating) needed to obtain those bubbles have been identified. Those bubbles have been characterized (diameter ~35-39 µm; length ~10 mm; zeta potential ~ -62.6 mV). The third chapter offer an experimental methodology, based on the electrochromatography theory, allowing to evaluate the residual adsorption of proteins on the capillary wall. This approach have two interesting points: (i) allowing to compare separative performances of different coatings via residual adsorption, and (ii) optimizing the experimental parameters (length, internal diameter, applied voltage) to minimize the impact of adsorption on the separation efficiencies
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Danel, Cécile. "Séparation des énantiomères d'inhibiteurs potentiels de l'aromatase par chromatographie liquide haute performance et électrophorèse capillaire." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2P014.
Full text
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Bekri, Samya. "Étude de revêtements à base de polyélectrolytes et de polyzwitterions pour la séparation de protéines en électrophorèse capillaire." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTS284.
Full textAbstract:
L’objectif de cette thèse est d’étudier différentes natures de revêtements de la paroi interne des capillaires pour la séparation de protéines modèles (lysozyme, β-lactoglobuline A, ribonucléase A, myoglobine et inhibiteur de trypsine) en milieu acide par électrophorèse capillaire. Les séparations ont été réalisées en utilisant un électrolyte volatil compatible avec un couplage avec la spectrométrie de masse. Le premier chapitre est consacré à l’étude de revêtements à base de multicouches de polyélectrolytes en faisant varier la nature chimique des polyélectrolytes, le nombre de couches, le pH et la force ionique du milieu de construction. Plus de 20 couples de polyélectrolytes ont été testés. Il a été montré que la nature du polycation placé en couche terminale, mais aussi la nature du polyanion dans les couches intermédiaires, ont une très grande influence sur les efficacités de séparation et sur la répétabilité. Les meilleurs résultats ont été obtenus avec le revêtement poly(diallyl dimethyl ammonium)/poly(L-lysine citramide) qui présente une excellente stabilité testée sur 100 analyses successives. Pour les revêtements les moins stables, la stabilité des revêtements peut être durablement améliorée par réticulation chimique des multicouches à l’intérieur du capillaire avec des efficacités de pics comparables. L’effet de la structure chimique du polyanion et du polycation a aussi été étudié en comparant notamment des poly(L-lysine) linéaires et ramifiées (dendrimères greffés de lysine de différentes générations). Le second chapitre est dédié à l’étude de la force ionique de l’électrolyte de séparation sur un capillaire modifié par des multicouches de polyélectrolytes. Par la représentation dite du « slope-plot », il a été démontré que la mobilité électrophorétique des protéines diminuait de 30 à 40 % par décade de force ionique par rapport à sa valeur à une force ionique de 5 mM. Les conditions optimales de séparation des protéines ont été obtenues à faible force ionique (5~10 mM). Le troisième chapitre s’intéresse aux revêtements monocouches à base de copolymères polyzwitterioniques connus pour leurs propriétés antiadhésives (ou antifouling). Les performances séparatives des revêtements poly(sulfobétaine méthacrylate-co-acide acrylique) (poly(SBMA-co-AA)) ayant différents taux de zwitterion ont été évaluées. L’influence du prétraitement du capillaire a également été étudiée sur le meilleur revêtement. Un lavage préalable du capillaire avec du méthanol, de la soude puis de l’acide chlorhydrique a donné les meilleurs résultatsThe main objective of this thesis is to study different natures of capillary coatings for the separation of model proteins (lysozyme, β-lactoglobulin A, ribonuclease A, myoglobin and trypsin inhibitor) in acidic medium by capillary electrophoresis. Separations were performed in volatile electrolyte compatible with the coupling to mass spectrometry. The first chapter is devoted to the study of coatings based on polyelectrolyte multilayers by varying the chemical nature of the polyelectrolytes, the number of layers, and the pH and ionic strength of the construction medium. More than 20 polyelectrolyte couples have been tested. It has been demonstrated that the nature of the polycation placed on the terminal layer, as well as the nature of the polyanion located in intermediate layers, have a great influence on the separation performances and repeatability. Best results were obtained using poly(diallyl dimethyl ammonium chloride)/poly(L-lysine citramide) coating with an excellent stability tested on 100 successive runs. For unstable coatings, the coating stability can be permanently stabilized by chemical crosslinking of the multilayers with comparable peak efficiencies. The effect of chemical structure of polyanion and polycation was also studied by comparing linear and ramified poly(L-lysine)s (dendrigraft polylysine of different generations).The second chapter is dedicated to the influence of the background electrolyte ionic strength using polyelectrolyte multilayer coatings. Using the so-called "slope-plot" approach, it has been demonstrated that the electrophoretic mobility of proteins systematically decreases by 30-40 % per ionic strength decade compared to the value obtained at 5 mM ionic strength. Optimal protein separations was obtained using background electrolytes of low ionic strength (5~10 mM).The third section is focused on monolayer coatings based on polyzwitterionic copolymers known for their antiadhesive (antifouling) properties. Separation performances of poly(sulfobetaine methacrylate-co-acrylic acid) coatings with different monomer ratios have been evaluated. The influence of the capillary pretreatment was also studied on the best coating. A pretreatment of the capillary with methanol, sodium hydroxide and hydrochloric acid has given the best results
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Manegrier, Sabine. "Etude comparative des différentes possibilités d'élimination de l'adsorption des protéines à la paroi du capillaire en électrophorèse capillaire de zone." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P077.
Full text
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Xu, Run Juan. "Séparation des protéines par électrophorèse capillaire : effet des tensioactifs sur le comportement électrophorétique des protéines." Paris 12, 1997. http://www.theses.fr/1997PA120064.
Full textAbstract:
La separation des proteines basiques par electrophorese capillaire (ec) est souvent compliquee par l'adsorption de ces proteines sur la paroi du capillaire, ce qui provoque l'elargissement et la trainee des pics et donc reduit l'efficacite de la separation. Dans ce travail nous presentons la methode de preparation d'un nouveau revetement des capillaires de silice auxquels on greffe des copolymeres de vinylpyrrolidone (vp) et vinylimidazole (vi). La polymerisation est realisee dans le capillaire et accompagne la fixation du polymere sur la silice. Le flux electroosmotique (feo) est fortement attenue. La presence de charges positives a la surface du revetement, due a la forme cationique du vi aux ph inferieurs a 7, empeche l'adsorption des proteines basiques a la surface du capillaire par repulsion electrostatique. Dans les capillaires modifies la separation des proteines a ph=5 est tres reproductible. L'influence du ph, de la concentration en sel et de la composition de polymere sur le feo et sur l'efficacite de la separation est discutee. L'electrophorese capillaire d'affinite (eca) est une methode analytique rapide pour l'etude des associations proteine-tensioactif. L'analyse repose sur l'estimation des stabilites des complexes proteine-tensioactif par mesure le changement de la mobilite electrophoretique effective des proteines. Le comportement electrophoretique des proteines du lait (l'-lactalbumine et les -lactoglobulines a et b) en presence de tensioactif non charge (tween 20, brij 35 ou brij 78) est etudie par eca. La modification des mobilites de proteines est observee et cette variation permet d'estimer les interactions proteine-tensioactif. D'apres nos resultats, la -lactoglobuline semble former un complexe avec ces tensioactifs par effet hydrophobe, dans le cas de l'-lactalbumine la structure semble modifiee. Le ph du tampon et le type du tensioactif influencent considerablement les interactions proteine-tensioactif.
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Bauvais, Cyril. "Mécanisme et Modélisation de reconnaissance chirale par des antibiotiques macrocycliques en électrophorèse capillaire." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077113.
Full textAbstract:
Le contrôle de la chiralité présente un intérêt majeur pour la chimie et la pharmacochimie. L'électrophorèse capillaire chirale est une technique qui permet l'obtention de molécules énantiopures par séparation de racémiques, en utilisant la vancomycine en tant que sélecteur chiral. Le but de ce travail est d'utiliser la modélisation moléculaire pour comprendre les principaux mécanismes mis en jeu lors de cette discrimination. Pour cela, deux approches distinctes ont été menées. Tout d'abord, dans le cadre de l'approche basée sur le récepteur, la géométrie et la stabilité des complexes avec la vancomycine sont étudiées par dynamique moléculaire. La dynamique moléculaire étant influencée par les structures initiales, nous avons développé un outil de recherche exhaustif, appelé cartographie, pour déterminer les zones de la vancomycine qui présente des propriétés éventuelles de complexation. Une seconde approche, basée uniquement sur l'information du ligand a été menée. Les modèles de corrélations linéaires ou non, sont utilisés afin de tenter de prédire les temps de rétention en nous appuyant sur les résultats précédents de modélisation moléculaire et des descripteurs chimiques. Ces méthodes, dites de QSPR (Quantitative Structure Property Relationships), ont permis d'établir des modèles statistiquement valides. L'analyse des descripteurs chimiques sélectionnés permet de mieux comprendre les phénomènes majoritaires intervenant lors de la discrimination chiraleChirality is an important consideration for many kinds of compounds such as pharmaceuticals or biological molecules. Chiral capillary electrophoresis is one of the ways to get chiral compounds, where different affinities between the chiral selector, like vancomycin, with each enantiomers, will lead to chiral recognition. The aim of our work is to study main mechanisms of this recognition. For this study, we followed two main approaches. The first one was based on receptor, vancomycin, an his interactions with enantiomers. For that, we studied complexation mechanism between vancomycine and enantiomers by molecular modelling. Indeed, complex energy differences should be responsible of chiral discrimination. The second way of approach was QSPR studies, based on enantiomers structures
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Fayad, Syntia. "Développement d’outils ultra-performants de criblage enzymatique de produits naturels par électrophorèse capillaire." Thesis, Orléans, 2017. http://www.theses.fr/2017ORLE2032.
Full textAbstract:
Le vieillissement de la peau est l'un des signes extérieurs du passage du temps. Avec l’âge, la peau devient plus sèche et se ride suite à la dégradation des macromolécules de la matrice extracellulaire par des enzymes cutanées telles que l’élastase, l’hyaluronidase et la collagénase. L’objectif de ce travail de thèse est de développer des tests enzymatiques miniaturisés en électrophorèse capillaire pour cribler des extraits de plantes et identifier de nouveaux bioactifs pour la cosmétique et le bienêtre de la peau. Ces essais ont été développés soit en dehors du capillaire (qui sert uniquement de milieu de séparation) ou dans le capillaire (qui sert alors de nanoréacteur enzymatique), puis optimisés pour permettre la détermination des constantes cinétiques (Km, Vmax et IC₅₀). La diffusion transversale des réactifs (TDLFP) a été appliquée pour mélanger les créneaux de réactifs injectés dans le capillaire. Des détecteurs tels que la fluorescence induite par laser ou la spectrométrie de masse à haute résolution ont été couplés à l’électrophorèse capillaire afin d’atteindre de fortes sensibilités de détection et la possibilité d’identifier les produits de la réaction enzymatique. Ces essais miniaturisés ont été appliqués à des algues extraites par électroporation ou à des plantes régionales extraites par des technologies vertes afin d’évaluer leur activité biologique vis-à-vis des enzymes de la peau. Les essais développés sont fiables, robustes et économes en réactifs. Enfin, l’utilisation d’une nouvelle technique d’analyse, la thermophorèse à micro-échelle, s’est montrée très utile et pleine d’espoir pour l’étude des interactions enzyme-effecteurSkin aging is one of the exterior/external signs of the passage of time. With age, the skin becomes drier and gets wrinkled due to the degradation of macromolecules of the extracellular matrix by skin enzymes such as elastase, hyaluronidase and collagenase. The aim of this thesis is to develop miniaturized enzymatic assays by capillary electrophoresis to screen plant extracts and identify new bioactives for cosmetics and skin wellbeing. These assays were developed either outside the capillary (which serves only as a separation tool) or in the capillary (which then serves as an enzymatic nanoreactor) then optimized to allow the determination of kinetic constants (Km, Vmax and IC₅₀). Tranvserse diffusion of laminar flow profiles (TDLFP) was applied to mix the reactants injected into the capillary. Detectors such as laser-induced fluorescence or high-resolution mass spectrometry have been coupled to capillary electrophoresis to achieve high sensitivities of detection and the possibility of identifying the products of the enzymatic reaction. These miniaturized assays were applied to algae extracted by electroporation or to regional plants extracted by green technologies in order to evaluate their biological activity towards skin enzymes. The assays developed are reliable, robust and economic in reactants consumption. Finally, the use of a new analytical technique, microscale thermophoresis, was shown to be very useful and hopeful for the study of enzyme-effector interactions
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Anres, Philippe. "Développement de nouvelles méthodologies de préconcentration électrocinétique in-situ en électrophorèse capillaire pour l'analyse de traces." Paris 6, 2012. http://www.theses.fr/2012PA066345.
Full textAbstract:
L’électrophorèse capillaire, quoiqu’étant une technique analytique très puissante, souffre d’un manque en sensibilité avec les détecteurs spectrophotométriques. Pour palier ce problème il est possible d’utiliser des méthodes de préconcentration électrocinétiques in-situ. Les travaux menés au cours de cette thèse se sont attachés à développer de nouvelles méthodologies de préconcentration électrocinétique. Tout d’abord, il a été montré que le greffage des capillaires de silice avec du polyacrylamide linéaire permet en milieu acide complexe de réduire fortement l’écoulement électroosmotique ce qui favorise la mise en œuvre des techniques de préconcentration. Ensuite, le couplage de deux méthodes de préconcentration, l’amplification de champ électrique avec une injection électrocinétique et du sweeping a été examiné. En étudiant le mécanisme grâce à des plans d’expérience et de la simulation, l’influence des paramètres expérimentaux ainsi que leurs rôles ont été éclaircis et la procédure d’optimisation simplifiée. A la suite de ces résultats, une procédure d’analyse d’herbicides présents dans des eaux de distribution a été développée, permettant leur détection à un niveau proche de celui spécifié par l’Union Européenne sans étape préalable d’extraction. Ensuite, l’utilisation de liquides ioniques à longue chaîne pour améliorer la sensibilité d’une méthode appelée « Micelle to Solvent Stacking » a été étudiée et des améliorations d’un facteur 10 ont été obtenues par rapport aux gains obtenus avec des surfactants classiques (application à des herbicides et des anti-inflammatoires). Enfin, pour améliorer les gains en sensibilité avec de plus une spécificité élevée, une preuve de concept a été développée en utilisant un aptamère pour l’analyse sélective d’Ochratoxine A à l’état de trace dans le vin, ce qui ouvre de nouvelles perspectives pour l’utilisation de cet outil biologique en électrophorèse capillaireCapillary electrophoresis is a powerful separation technique, but it suffers from a lack of sensitivity when optical detectors are used. In order to resolve this problem, in-situ electrokinetic preconcentration techniques are available. During these researches, some of these techniques had been investigated. First of all, it was shown the coating of silica capillary walls by linear polyacrylamide reduced efficiently the electroosmotic flow even in complex acidic media which improve the electrokinetic preconcentration yields. Secondly, the hyphenation of field amplification with electrokinetic injection and “sweeping” was examined. The mechanism of this technique was deeply studied thanks to chemometric approaches and simulation. The results allowed to clarify the influence of experimental parameters and to simplify the optimization procedure. Following these results, an analytical procedure for the analyses of herbicides in tap water was developed and detection near to the specified level of European Union was obtained without any extraction procedure. Thirdly, it was shown the utilization of ionic liquids in the so-called technique “Micelle to Solvent Stacking” provided sensibility enhancements of 10 by comparison with classical surfactants (application to herbicides and anti-inflammatory drugs). Finally, thanks to the use of a specific aptamer, a proof of concept was developed for the selective preconcentration of Ochratoxine A in wine. This last work open new perspectives for the utilization of these biological tools in capillary electrophoresis
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Le, Floch François. "Production et glycosylation d'EPO par cellules CHO : caractérisation par électrophorèse capillaire au cours de procédés discontinus." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2003. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/INPL_T_2003_LE_FLOCH_F.pdf.
Full textAbstract:
Ce travail a pour objectif d'améliorer la maîtrise de la glycosylation des protéines recombinantes produites par culture de cellules animales, ceci par l'étude de l'influence du procédé de culture sur la structure glycannique d'une protéine modèle: l'érythopoi͏̈étine (EPO) produite par cellules CHO. La construction du système d'étude a d'abord nécessité plusieurs étapes: la génération d'un clone CHO producteur d'EPO performant, la mise au point d'une méthode de purification de la protéine par immuno- affinité et l'adaptation d'une technique d'analyse de la glycosylation aux contraintes de notre système. Deux paramètres particuliers du procédé de culture ont donc été plus précisément étudiés au cours de ce travail: l'avancement de la culture et la présence de sérum dans le milieu. L'étude du suivi de la glycosylation de l'EPO en cours de culture discontinue avec sérum a mis en évidence une désialylation progressive de la protéine durant la deuxième partie de la culture, de même qu'une lyse cellulaire importante. Une activité sialidasique significative ayant également été observée simultanément, une dégradation enzymatique faisant suite à la lyse cellulaire semble être à l'origine de ce phénomène en présence de sérum. Après adaptation des cellules au milieu sans sérum, la désialylation de l'EPO s'est par contre révélée stable tout au long des cultures réalisées en l'absence de sérum. L'étude de la glycosylation de l'EPO produite en présence de sérum par des cellules adaptées à la culture sans sérum a montré que la désialylation de l'EPO était directement liée à la présence de sérum, et non à la procédure d'adaptation des cellules au milieu sans sérum. En conclusion, cette étude a mis en évidence l'influence significative que pouvait avoir certains paramètres du procédé de culture sur la qualité de l'EPO produite par notre systèmeThe scope of this work is to improve the control of the glycosylation of recombinant proteins produced by animal cell culture by studying the influence of the culture process on the glycan structure of a model protein : CHO cell produced EPO. For building the system, several step were necessary : the generation of a high-EPO-producer CHO cell clone, the set-up of an immuno-affinity purification method and the adaptation of a technique for analysis of protein glycosylation to our system constraints. Then, two parameters of the culture process were studied more precisely : the culture time and the presence of serum. By monitoring EP9 glycosylation in the course of serum-containing batch cultures, we observed a progressive desialylation of the protein during the second part of the culture and an important cell lysis. Since a significative siaiidase activitv was also found in the same time, this phenomenon seemed to be induced by an enzymatic degradation following cell lysis in serum-containing cultures. On the other band, after serum-free adaptation, EPO sialylation was found constant during the whole serum-free cultures. Anaiysis of EPO glycosylation produced in serum-containing medium by serum-free adapted cells showed that the occurring desialylation was directly linked to the presence of serum and not to the serum-free adaptation procedure. To conclude, this work clearly shows the important influence of sorne process parameters on the quality of EPO when produced in our system
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Tohala, Luma. "Etude par électrophorèse capillaire des propriétés de résolution chirale des oligonucléotides en série ADN." Thesis, Université Grenoble Alpes (ComUE), 2018. http://www.theses.fr/2018GREAV016.
Full textAbstract:
De nos jours, la stéréochimie des médicaments est devenue un enjeu important aussi bien pour l'industrie pharmaceutique que pour les autorités réglementaires. Il a été démontré que les nucléotides / nucléosides ou les structures en double hélice et tétrade de guanine présentaient certaines propriétés énantio sélectives. Néanmoins, à ce jour, très peu d’études se sont focalisées sur l’utilisation de l’ADN en tant que sélecteur chiral. Grâce à l’utilisation d’une méthode de remplissage partiel, les propriétés de discrimination chirale d'un répertoire d'oligonucléotides (ONs) en série ADN caractérisé par diverses compositions de bases et de structures ont été testées sur une large gamme de mélanges racémiques par électrophorèse capillaire (EC), méthode séparative performante utilisant de faibles volumes d’échantillons. A des concentrations d'ADN sub-millimolaire, il a été montré que tous les ONs en série ADN testés, présentaient des capacités d'énantio discrimination vis-à-vis de plusieurs composés pertinents. Les couples d’énantiomères séparés sont, soit des composés cationiques possédant un groupement phényle, soit des analytes sans charge nette ou avec une charge positive et comportant deux cycles aromatiques. Une étude portant sur les capacités séparatives de plusieurs séquences d'homopolymères poly-dT de longueurs différentes (de 5 à 60-mer) a ensuite été menée sur certains couples d’énantiomères. Les résultats ont montré qu’une longueur minimale de 30 bases, où l'ADN semble adopter une conformation de type pelote, présentait de meilleures propriétés d'énantioséparation qu’une séquence constituée d’un maximum de 10 bases. De plus, la reconnaissance chirale des ONs en série ADN implique principalement des bases d'ADN libres dont la diversité chimique augmente leur capacité d'énantio résolution. Finalement, afin d'étudier la contribution thermodynamique impliquée dans les séparations énantiomériques obtenues par les ONs simples brins testés, des mesures de constantes d’affinité pour les énantiomères du tryptophane ont été réalisées vis-à-vis du Poly-dT30 par trois techniques différentes. Les méthodes utilisées n’ont pas permis de déterminer une différence d’affinité entre les deux énantiomèresNowadays, drug stereochemistry has become a significant issue for both the pharmaceutical industry and the regulatory authorities. It has been demonstrated that nucleotides/ nucleosides or duplex and G-quadruplex structures showed some enantioselective properties. Nevertheless, to date, the use of DNA as chiral selector has been largely neglected. Using partial filling capillary electrophoresis (CE) method, highly efficient technique with little volume consumption need, the assessment of the enantioselective properties of a repertoire of arbitrarily chosen DNA oligonucleotides (ONs) characterized by diverse base compositions and structural features was studied for a series of various racemates. Under (sub) millimolar DNA concentration conditions, it was shown that all the ONs tested presented enantiodiscrimination properties for interesting organic compounds. The resolved compounds are either cationic carrying one phenyl group or contain two aromatic cycles with no net or one positive charge. Then, sequence prerequisites of ONs for the CE enantioseparation process were studied for a series of homopolymeric sequences (Poly-dT) of different lengths (from 5 to 60-mer) and for the discrimination of various enantiomers. The results showed that the sequence length of 30-mer (or more) of the ONs was better for the enantioseparation properties, where the DNA adopted a coil-like conformation, than ONs with a sequence length ≤ 10-mer. The base-unpaired state constituted also an important factor in the chiral resolution ability of ONs. Moreover, the chemical diversity enhanced the enantioresolution ability of single-stranded ONs. Finally, several attempts have been conducted to study the thermodynamic contribution involved in enantiomeric separation obtained with DNA strands. Binding affinity constants were determined for tryptophan enantiomers towards Poly-dT30 by three different techniques. The used methods did not allow determining a difference of affinity between enantiomers
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Lambert, Alexandrine. "Mécanisme de l'énantiosélectivité des cyclodextrines : illustration dans la série des acides arylalcanoïques." Nancy 1, 1999. http://www.theses.fr/1999NAN12011.
Full textAbstract:
De nombreuses molécules thérapeutiques présentent une dissymétrie qui conduit à l'existence de deux formes dites énantiomères. Ces énantiomères, qui ont des propriétés physicochimiques identiques dans un milieu isotrope, peuvent présenter des comportements pharmacologiques complètement différents. Il est donc devenu indispensable de disposer de techniques analytiques permettant leur séparation. Les cyclodextrines en tant que sélecteur chiral s'avèrent particulièrement intéressantes et sont très utilisées. Toutefois, malgré les modèles théoriques développés dans la littérature et les études, encore peu nombreuses, sur la reconnaissance chirale, les mécanismes de séparation des énantiomères par des sélecteurs chiraux de la famille des cyclodextrines ne sont pas encore bien compris. Afin d'aborder ce problème, une série de 11 molécules appartenant à la famille des acides arylalcanoïques a été utilisée, dont quatre étaient disponibles sous formes d'énantiomère R et S. Ce travail s'est attaché à l'obtention de données expérimentales par électrophorèse capillaire, à l'explication des séparations observées en terme d'inclusion et d'énantiosélectivité par la mise en oeuvre de méthodes d'analyse structurale (RMN) et de modélisation moléculaire et au transfert à un exemple d'analyse pharmaceutique.
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Vayaboury, Willy. "Polymérisation du N-carboxyanhydride de la N[epsilon]-trifluoroacétyl-L-lysine : étude mécanistique et caractérisation par électrophorèse capillaire." Montpellier 2, 2003. http://www.theses.fr/2003MON20160.
Full text
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Giorgetti, Jérémie. "Caractérisation d’anticorps monoclonaux à différents niveaux à l’aide d’un couplage électrophorèse capillaire – spectrométrie de masse." Thesis, Strasbourg, 2019. http://www.theses.fr/2019STRAF051.
Full textAbstract:
Les anticorps monoclonaux (mAbs) sont des biomolécules complexes utilisées pour traiter divers cancers et autres pathologies. Ce sont des glycoprotéines qui possèdent de nombreuses micro hétérogénéités pouvant altérer l'efficacité des traitements. De ce fait, l'analyse de ces variants nécessite le développement de méthodes analytiques rapides et précises afin d'élucider la structure des mAbs. Les travaux présentés dans cette thèse portent sur le développement du couplage électrophorèse capillaire - spectrométrie de masse (CE-MS) afin d'obtenir une caractérisation des variants de mAbs à différents niveaux. D'abord, une validation de la méthode CE-MS au niveau bottom-up a été réalisée pour caractériser les structures des glycosylations et les quantifier relativement. Afin d'éviter les modifications artéfactuelles produites lors des étapes de préparation d' échantillon, des analyses ont été réalisées à des niveaux plus complexes de ces molécules. Pour cela, des méthodes ont été développées afin d'analyser les mAbs partiellement digérés via une enzyme spécifique pour confirmer les résultats et obtenir une répartition des modifications post traductionnelles. Enfin, des séparations des mAbs intacts ont été effectuées afin d'avoir une représentation la plus proche possible de la répartition des variants dans les échantillons. La caractérisation fine des variants permettra alors d'orienter les processus de fabrication des mAbs afin d'optimiser les traitementsMonoclonal antibodies (mAbs) are therapeutic biomolecules employed as treatment against cancer and other pathologies. These glycoproteins are subject to numerous micro-heterogeneities which cou Id affect treatment efficiency. Hence, mAbs variants analysis requires powerful, rapid and accurate analytical methods to elucidate their structure. ln this thesis, works have been done to develop methods leaning on a capillary electrophoresis - mass spectrometry coupling (CE-MS) to get a multi-level mAbs isoforms analysis. First, method assessment and validation of glycosylation forms analysis by CE-MS have been done to characterize and set up a relative quantitation of these modifications. ln order to avoid potential artifactual modifications due to the sample preparation process, higher order analyses have been performed at tougher analytical levels. For that purpose, methods involving partial and total enzymatic digestion have been developed and optimized to assess the plenty of post-translational modification linked to the protein structure. Finally, whole protein analyses have been completed to get a more accurate illustration from variants heterogeneity of the medication administered. The comprehensive analysis of mAbs and their variants should help to guide the manufacturing process and go a step further in treatment optimization
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Kpaibé, André Philippe Sawa. "Empreintes électrophorétiques : une approche innovante pour le contrôle qualité de substances pharmaceutiques d'origine naturelle : cas des venins de serpent." Thesis, Montpellier, 2017. http://www.theses.fr/2017MONTT202.
Full textAbstract:
Les médicaments à base de substances naturelles telles que les plantes et les venins sont de plus en plus développés dans l’industrie pharmaceutique. Le contrôle qualité des matières premières ou teintures mères d’origine végétales ou animales, obligatoire dans un environnement BPF, est bien plus complexe que celui des petites molécules pharmaceutiques de synthèse. En effet, les substances responsables de l’activité thérapeutique recherchée sont souvent mal identifiées et on observe une variabilité qualitative et quantitative naturelle parfois importante, ce qui peut modifier de façon significative leur efficacité. Afin de s’assurer de l’homogénéité de chaque souche reçue, il est demandé, entre autre, de développer des méthodes de contrôle analytique permettant d’obtenir un « profil ou empreinte » analytique de la souche considérée, assimilable à une « carte d’identité » qui servira de référence pour le contrôle des lots utilisés en production. L’empreinte analytique (spectre, chromatogramme, électrophérogramme …) devra permettre une séparation la plus complète possible de l’ensemble des composés présents dans la souche considérée tout en tenant compte de sa « variabilité naturelle » afin d’assurer un contrôle qualitatif et semi-quantitatif.L’étude présentée a consisté à développer une approche analytique originale, combinant électrophorèse capillaire et chimiométrie, afin d’établir des profils électrophorétiques spécifiques («fingerprint») permettant d’effectuer le contrôle qualité de souches brutes de venins de serpents utilisés en thérapeutique. Les venins de serpent sont des mélanges complexes de peptides et de protéines, de plus en plus utilisés dans la conception de nouveaux médicaments. Comme toutes les substances naturelles, la composition des venins de serpents est sujette à une variabilité intra et inter individus relativement importante. De fait, la qualité de la matière première pour la production de médicament devient un challenge. Dans cette étude, l’électrophorèse capillaire s’est révélée comme une technique efficace pour la séparation des divers constituants composant les souches brutes de venins de serpent et l’obtention de leurs empreintes analytiques. L’étude a porté sur 4 venins de serpent, Lachesis muta, Bothrops lanceolatus, Vipera aspis aspis, Naja naja qui sont parmi les plus utilisés en thérapeutique. Une approche chimiométrique a alors été développée afin de tenir compte de variabilité qualitative et quantitative observée entre différents lots. Cette approche originale nous a permis d’extraire les pics d’intérêts (i.e. présents dans chaque lot d’un même venin) et d’établir une empreinte analytique de référence avec des seuils de conformité quantitatifsAlthough the therapeutic potential of natural substances is known for thousands of years in traditional medicine, it knows an increasing renewed interest in modern pharmaceutical industry as being an inexhaustible source of therapeutic active substances for various diseases.However, the quality control of these products, which is necessary to obtain reproducible biological activities and new commercial approvals, remains a great analytical challenge. Indeed, natural substances show a myriad of biological activities that can result from a specific or synergistic effects of many different components and this information remains still mostly unknown. Furthermore, because they are derived from living organisms and hence are affected by biotic and abiotic factors, it is extremely difficult to ensure a constant qualitative and quantitative composition for these natural substances among different batches. Consequently, there is a need to develop analytical strategies able to assess the “sameness” of natural productions that is analytical strategies able to assess required similarity between different batches by integrating acceptable qualitative and quantitative variations.To achieve this, the concept of analytical fingerprint has become more and more popular and is now starting to be accepted by regulatory authorities such as the FDA. This so-called “pattern-approach” aims at: (i) gaining effective and stable information about common features of a given strain (ii) evaluating similarity and difference with chemometric methods.If this concept has been quite largely studied for the quality assessment of herbal medicines, it is very still very little developed for animal active substances like snake venoms, which are of increasing interest in therapeutic research due to their rich composition in peptides and proteins. The routine quality control of venom raw substances is still often limited to a single gel electrophoresis which is clearly insufficient in terms of components resolution to achieve similarity-/dissimilarity between strains.MethodsIn this context, we have developed an original analytical fingerprint strategy that combines capillary electrophoresis and chemometrics. CE is a particularly well suited technique for peptides/proteins separation allowing to obtain complex specific fingerprints. Batches of different snake venoms have been analyzed with many replicates. All electropherograms have been processed using several chemometrics approaches (baseline correction, signals alignment, automatic recognition of common peaks …) to obtain a representative analytical trace that can be used for the quality assessment of different production lots.ResultsWe show that CE is a very well adapted method to produce highly specific and repeatable analytical profiles of different venom strains. Chemometric methods applied are very efficient to produce an average fingerprint for each strain that integrates features common to all batches and define acceptable variations in quantitative composition. Similarity/dissimilarity of different batches can then be assessed in an automatic manner.ConclusionAll presented results show the efficacy of CE combined with chemometrics to assess the quality of snake venom raw substances. It can be easily implemented in industrial quality control. This strategy can be implemented in future for other type of therapeutic substances of animal origin
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Ait-Adoubel, Abderrahim. "Nouvelles approches en électrophorèse capillaire pour l'énantioséparation d'acides aminés aromatiques ou aliphatiques non dérivés." Rouen, 2004. http://www.theses.fr/2004ROUES027.
Full textAbstract:
Ce mémoire rapporte l'étude des potentialités de deux approches, en Electrophorèse Capillaire, en vue de la résolution chirale des acides aminés non dérivés qui reste un défi: (i)l'échange de ligands avec divers sélecteurs chiraux: L-Proline, Trans-4-Hydroxy L-Proline (LECE); (ii) l'emploi de cyclodextrines anioniques (CD-CZE). Ces deux approches se sont révélées complémentaires. En effet, en croisant ces techniques nous sommes parvenus à résoudre les racémiques des acides aminés aromatiques et soufrés non dérivés, ainsi que certains acides aminés aliphatiques également non dérivés. Pour rationaliser certains résultats expérimentaux paradoxaux, nous avons entrepris, dans une démarche originale, des simulations tant de la formation des complexes ternaires, en LECE, que de l'inclusion des acides aminés non dérivés dans la cavité des cyclodextrines (CD-CZE), par Mécanique Moléculaire. Une corrélation satisfaisante a pu être obtenue entre résultats expérimentaux et approches théoriquesThis manuscript deals with the potentialities study of two Capillary Electrophoresis approaches: (i) ligands exchange with various chiral selectors: L-Proline, Trans-4-Hydroxy L-Proline (LECE), (ii) use of anionic cyclodextrins (CD-CZE), for the chiral resolution of not derivatized amino acids. This chiral resolution constitutes still, today, a challenge. These two approaches appeared complementary. In fact, by using one after the other we were able to resolve the racemic of not derivatized aromatic or sulphur amino acids as well as some racemic of not derivatized aliphatic amino acids. To rationalize some paradoxical experimental results, we undertook simulations, using Molecular Mechanics, as well for the formation of the ternary complexes, in LECE, as for the inclusion of the not derivatized amino acids in the cyclodextrines cavity, in CD-CZE. Satisfactory correlations were obtained between experimental results and theoretical approaches
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Tomao, Valérie. "Contribution à l'étude de l'utilisation de la b-cyclodextrine en électrophorèse capillaire et préparative." Aix-Marseille 3, 1999. http://www.theses.fr/1999AIX30011.
Full textAbstract:
La -cyclodextrine, selecteur chiral, permet la resolution de nombreuses molecules en sciences de separations. Nous avons mene deux etudes independantes concernant la -cyclodextrine, la premiere en electrophorese capillaire, la seconde en electrophorese preparative. Le travail en electrophorese capillaire a consiste a mettre au point une methode de quantification de colorants alimentaires de synthese extraits de matrices alimentaires. Dans cette optique, un melange de six colorants frequemment utilises dans les industries agroalimentaires est analyse et plusieurs parametres optimises. Les conditions retenues sont appliquees en presence de la -cyclodextrine dans l'electrolyte qui par complexation selective permet dans certains cas d'ameliorer nettement la separation. Enfin, les conditions optimales ont ete mises en application sur des colorants alimentaires de synthese extraits de matrices alimentaires simples. Les colorants ont ainsi ete identifies et quantifies a l'aide de la methode de calibration par etalonnage externe. Dans le cadre du developpement de la chiralite en electrophorese preparative, nous avons mis au point une methode de greffage de la -cyclodextrine sur un support tres particulier constitue de microfibres de verre. Le support a ete caracterise par microscopie electronique a balayage afin d'acquerir la repartition spatiale dans l'espace ou le diametre nominal de celles-ci. La surface specifique a ete determinee par l'analyse d'images issues de la microscopie confocale et confirmee par adsorption gazeuse. Les resultats de cette etude preliminaire nous ont conduits a traiter le support par lixiviation pour augmenter sa surface specifique d'une part et exalter le taux de silanols d'autre part. C'est sur un tel support que les -cyclodextrines ont pu etre greffees a l'aide d'un bras espaceur de type aminopropylsilane.
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Lounis, Feriel Meriem. "Etude des interactions entre polyélectrolytes de charges opposées par électrophorèse capillaire et titration calorimétrique isotherme." Thesis, Montpellier, 2016. http://www.theses.fr/2016MONTT187/document.
Full textAbstract:
L’objectif de cette thèse est d’étudier les interactions entre polyélectrolytes (PE) de charges opposées par analyse frontale continue en électrophorèse capillaire (FACCE) et par titration calorimétrique isotherme (ITC), en fonction de la force ionique du milieu et des paramètres physico-chimiques relatifs aux deux partenaires (taux de charge chimique, masse molaire, ramification). Un copolymère statistique d’acrylamide et de 2-acrylamido-2-méthyl-propane sulfonate (PAMAMPS) de taux de charge variant entre 15% et 100% a été synthétisé et caractérisé pour cette étude. En tant que polycation modèle, la poly(L-lysine) a été retenue, sous sa forme linéaire (PLL) ou ramifiée / hyperbranchée (DGL). Des mesures par turbidimétrie ont permis d’étudier la stabilité des complexes de polyélectrolytes (PEC) en fonction de la force ionique du milieu. La détermination de la stœchiométrie des PEC par 1H-RMN a permis d’établir une règle générale pour prédire les stœchiométries de charge des PEC. Les paramètres thermodynamiques d’interactions (constantes et stœchiométries d’interaction, contribution entropique et enthalpique) ont été déterminés, par le tracé systématique des isothermes d’adsorption, en considérant le modèle d’interactions des sites indépendants de même énergie. Une dépendance linéaire entre le logarithme des constantes d’interactions et le logarithme de la force ionique a été observée. Cette dépendance en force ionique confirme le caractère entropique des interactions entre PE de charges opposées. Elle permet aussi de quantifier le nombre de contre-ions relargués lors de la formation du PEC. Cette quantité de contre-ions libérés a pu être comparée à la quantité totale de contre-ions condensés. Cette modélisation permet, en outre, de prédire les constantes d’interaction pour des taux de charge intermédiaires et à différentes forces ioniquesThe aim of this thesis is to study the interactions between oppositely charged polyelectrolytes (PE) by frontal analysis continuous capillary electrophoresis (FACCE) and isothermal titration calorimetry (ITC) as a function of the ionic strength of the medium and the physico-chemical properties related to the two partners (chemical charge density, molar mass, ramification). Statistical copolymers of acrylamide and 2-acrylamido-2-methyl-propane sulfonate (PAMAMPS) with chemical charge densities varying between 15% and 100% were synthesized and characterized for this study. Poly(L-lysine) under their linear (PLL) or ramified/hyperbranched (DGL) forms were used as model polycations. Turbidity measurements allowed the study of the stability of the polyelectrolyte complexes (PEC) as a function of the ionic strength of the medium. PEC charge stoichiometries were measured by 1H-NMR, and a general predictive rule that estimates the PEC charge stoichiometry was enounced. The thermodynamic binding parameters (binding constant, stoichiometry, enthalpic and entropic contributions) were determined, by systematically plotting the isotherms of adsorption, and using the model of independent and identical interacting sites. A linear dependence between the logarithm of the binding constants and the logarithm of the ionic strength was observed. This linear dependence confirmed the entropic character of the interactions between oppositely charged PE and allowed quantifying the number of released counter-ions that were compared to the total number of condensed counter-ions. Furthermore, this modelling allowed predicting the binding constants for intermediate chemical charge densities and at different ionic strengths
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Gahoual, Rabah. "Développement du couplage électrophorèse capillaire - spectrométrie de masse haute sensibilité : application à la caractérisation fine de protéines." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAF040/document.
Full textAbstract:
Les interfaces permettant le couplage entre l'électrophorèse capillaire (CE) et la spectrométrie de masse (MS) à source ESI souffrent actuellement d'un manque de robustesse ou de sensibilité. Les travaux présentés décrivent la mise en oeuvre d'un nouveau type d'interface CE-ESl-MS â haute sensibilité CESl-MS. La caractérisation du spray généré par CESl-MS a montré la production d'un nanoESI induisant une augmentation importante de la sensibilité par rapport au régime ESI classique. Le système CESl-MS a pu ainsi être mis en oeuvre comme plateforme d'infusion nanoESI et utilisé pour l'étude de complexes non-covalents de haut poids moléculaires en MS native. Une méthodologie par CESl-MS/MS a également été développée pour la caractérisation complète de la structure primaire d'anticorps monoclonaux (mAbs). Les résultats montrent la possibilité en une unique injection de caractériser l'ensemble de la séquence d'acides aminés, un nombre significatif de glycosylations et l'ensemble des modifications d'intérêts. Cette méthodologie a pu être appliquée pour déterminer la similarité entre des mAbs commerciaux et leur candidat biosimilaire respectifInterfacings allowing the hyphenation of capillary electrophoresis (CE) to ESI mass spectrometry(MS) currently suffer from lack of robustness and sensitivity. This work describes the application of a new design of CE-ESl-MS coupling referred as the CESl-MS. Characterization of the ESI generated through the CESl-MS system showed the production of a nanoESI allowing to increase drastically the sensitivity compared to conventional ESI. The CESl-MS was used as a nanoESI infusion platform allowing to study high molecular masses noncovalent complexes in native MS. A CESl-MS/MS method was developed enabling the complete primary structure characterization o fmonoclonal antibodies (mAbs). Results showed the ability of the methodology in a single injection to simultaneously characterize the entire amino acid sequence, a significant number of glycosylation and all the posttranslational modifications of interest. Finally the methodotogy was applied to assess the similarity between marketed mAbs and their respective biosimilar candidate
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Petit, Jéremy. "Apports des techniques analytiques couplées à la connaissance de la spéciation de l'uranium en conditions naturelles." Thesis, Châtenay-Malabry, Ecole centrale de Paris, 2009. http://www.theses.fr/2009ECAP0018/document.
Full textAbstract:
La compréhension des mécanismes de transport et du comportement des radionucléides dans la biogéosphère sont nécessaires à l’évaluation des risques sanitaires et environnementaux de l’industrie nucléaire. Ces mécanismes sont contrôlés par la spéciation des radioéléments, c’est-à-dire leur répartition entre leurs différentes formes physico-chimiques dans l’environnement. Dans cette optique, cette thèse traite de la spéciation de l’uranium en milieu naturel. La biogéochimie de l’uranium a fait l’objet d’une synthèse bibliographique détaillée, qui a permis de restreindre le sujet à la complexation de l’uranium par l’acide oxalique, un acide organique hydrophile fréquemment rencontré dans les sols et doté de bonnes propriétés de complexation. L’établissement de diagrammes de spéciation à partir des constantes de complexation de la littérature a permis de définir les conditions analytiques de formation des complexes. Le choix de la technique analytique s’est porté sur le couplage d’une technique séparative (chromatographie liquide LC ou électrophorèse capillaire EC) à la spectrométrie de masse (ICPMS). La présence des complexes étudiés dans les échantillons synthétiques a été vérifiée par spectrophotométrie UV/visible. Les analyses menées par LC-ICPMS ont prouvé la labilité des complexes uranyle-acides organiques, c’est-à-dire leur propension à se dissocier pendant l’analyse, ce qui empêche une détermination fiable de la spéciation de l’uranium. En revanche, l’étude des complexes labiles d’un système métal-ligand par ECICPMS a été rendue possible par l’emploi de la méthode d’affinité, permettant de déterminer les constantes de complexations et les mobilités électrophorétiques. Cette thèse a permis de comparer les différentes méthodes de traitement mathématique de l’isotherme de complexation et de prendre en compte la force ionique et la concentration réelle du ligand. La méthode d’affinité a été employée avec succès sur les systèmes lanthane-oxalate, pris comme modèle, et uranyle-oxalate. Les résultats obtenus ont été validés sur un système naturel (site du Bouchet). Ceci montre l’apport de la méthode mise au point dans la modélisation de la spéciation de l’uraniumTo understand the transport mechanisms and the radionuclides behaviour in the biogeosphere is necessary to evaluate healthy and environmental risks of nuclear industry. These mechanisms are monitored by radioelements speciation, namely the distribution between their different physico-chemical forms in the environment. From this perspective, this PhD thesis deals with uranium speciation in a natural background. A detailed summary of uranium biogeochemistry has been written, which enables to restrict the PhD issue to uranium complexation with oxalic acid, a hydrophilic organic acid with good binding properties, ubiquitous in soil waters. Analytical conditions have been established by means of speciation diagrams. The speciation diagrams building by means of literature stability constants has allowed to define the analytical conditions of complex formation. The chosen analytical technique is the hyphenation of a separative technique (liquid chromatography LC or capillary electrophoresis CE) with mass spectrometry (ICPMS). The studied complexes presence in the synthetic samples has been confirmed with UV/visible spectrophotometry. LC-ICPMS analyses have proved the lability of the uranyl-organic acid complexes, namely their tendency to dissociate during analysis, which prevents from studying uranium speciation. CE-ICPMS study of labile complexes from a metal-ligand system has been made possible by employing affinity capillary electrophoresis, which enables to determine stability constants and electrophoretic mobilities. This PhD thesis has allowed to compare the different mathematical treatments of binding isotherm and to take into account ionic strength and real ligand concentration. Affinity CE has been applied successfully to lanthanum-oxalate (model system) and uranium-oxalate systems. The obtained results have been applied to a real system (situated in Le Bouchet). This shows the contribution of the developed method to the modelling of uranium speciation
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Caron, Isabelle. "Cyclodextrines méthylées : analyse et caractérisation par chromatographie en phase liquide : utilisation en électrophorèse capillaire chirale." Orléans, 1998. http://www.theses.fr/1998ORLE2077.
Full textAbstract:
Les dyméthyl-b-cyclodextrines (DM-b-CDs) sont utilisés dans de nombreux domaines pour leur capacité à inclure dans leur cavité de nombreuses molécules insolubles ou peu solubles dans l'eau. Les DM-b-CDs actuellement disponibles commercialement n'existent que sous forme de mélanges de CDs plus ou moins méthylées. La chromatographie en phase liquide (CPL) couplée au détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) a été mise en oeuvre afin d'analyser et caractériser cinq mélanges commerciaux. En chromatographie à polarité de phases inversée, pour un échantillon donné, des profils chromatographiques variés sont observés selon la nature de la silice et du greffon apolaire (C8, C18 ou phényl). Les conditions d'une bonne séparation sont liées directement aux possibilités d'interactions simultanées de type hydrophile entre les supports chromatographiques et les solutés. La phase Nucléosil 50-5-C8 associée à un éluant acétonitrile/eau et une température d'analyse de 50C° offre les meilleures séparations des constituants des DM-b-CDs. Les études réalisées par chromatographie à polarité de phases normale ont démontré que l'éluant constitué des trois solvants heptane, chloroforme et méthanol permet d'obtenir la meilleure séparation des constituants des mélanges et ceci quelle que soit la phase stationnaire polaire sélectionnée (silice vierge, diol, amino, nitro et nitrile). Le couplage des systèmes chromatographiques optimisés avec la spectrométrie de masse "Ionspray" a permis d'obtenir les masses moléculaires des différents constituants des DM-b-CDs et a permis de mettre en évidence la complémentarité des différents systèmes chromatographiques : la séparation entre isomères de position est plus aisée en chromatographie à polarité de phases inversée tandis que celle entre isomères de substitution est meilleure en chromatographieà polarité de phases normale. Enfin, l'influence non négligeable de la composition des DM-b-CDs, sur la séparation énantiosélective de molécules d'intérêt pharmaceutique, a été démontrée par électrophorèse capillaire.
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Schlenck, Alexandra. "Apports de l'électrophorèse capillaire dans l'approche gène-candidat de risque cardiovasculaire : cas de l'apolipoprotéine E." Nancy 1, 1999. http://www.theses.fr/1999NAN12005.
Full textAbstract:
Les concentrations plasmatiques en lipides et en apolipoprotéines sont les marqueurs biologiques les plus souvent considérés dans l'évaluation du risque d'athérosclérose. L'estimation des effets quantitatifs du polymorphisme commun de l'apoE sur ces traits phénotypiques, à l'exception du cholestérol, et leurs implications dans le risque cardio-vasculaire ne sont pas établies de manière homogène. Le but de nos travaux était de mettre au point et de valider des méthodes de détection des variations génétiques de l'apoE et de mesure des sous fractions lipoprotéiniques, en utilisant l'électrophorèse capillaire. Elles nous permettraient ensuite d'approfondir avec fiabilité l'investigation épidémiologique des effets alléliques de l'apoE sur le métabolisme lipidique. [. . . ]
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Delgado, Christine. "L'électrophorèse capillaire : application et développement dans le domaine des industries agroalimentaires et des agroressources." Toulouse, INPT, 1993. http://www.theses.fr/1993INPT026G.
Full textAbstract:
L'electrophorese capillaire (e. C. ) est une technique analytique repondant aux exigences en matiere d'analyses en milieu aqueux. C'est principalement en raison des possibilites analytiques prometteuses, degagees de l'etude bibliographique, que notre objectif general fut de developper l'e. C. Dans le domaine des industries agroalimentaires et des agroressources, elargissant de ce fait les horizons de cette technique. Ainsi les potentialites de l'e. C. Ont ete etudiees pour la separation de differentes molecules biologiques comme par exemple pour la recherche d'acides organiques et d'ions inorganiques dans le vin, le lait ou les melasses de betteraves, pour la recherche de sucres dans les hydrolysats de vegetaux ou encore pour la separation d'acides phenoliques dans des extraits alcooliques de feuilles d'artichauts et dans les tanins de bois de chene. Notre etude s'est ensuite polarisee sur une famille de composes rencontres dans presque tout le regne vegetal: les flavonoides, le modele biologique retenu etant le miel. L'objectif specifique fut alors de determiner une methodologie complementaire et alternative basee sur la technique d'e. C. , permettant d'analyser les flavonoides du miel et devenant ainsi un nouvel outil pour la reconnaissance botanique et geographique des miels
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Danger, Grégoire. "Des N-carboxyanhydrides d’acides α-aminés (NCA) aux peptides : nouvelles réactions d’intérêt prébiotique et applications : préconcentration et contrôle du flux électroosmotique pour l’analyse de peptides en électrophorèse capillaire." Montpellier 2, 2006. http://www.theses.fr/2006MON20043.
Full text
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Soukri, Mustapha. "2,3-Dihydro-1,4-dioxino[2,3-b]pyridines : synthèse, fonctionnalisation et applications pharmacologiques." Orléans, 2001. http://www.theses.fr/2001ORLE2058.
Full textAbstract:
Les objectifs du présent travail concernent, principalement, la préparation de 2,3-dihydro-1,4-dioxino[2,3-b]pyridines substituées en position 2 via le réarrangement de Smiles. Ils sont à la fois mécanistiques et synthétiques. La première partie décrit la synthèse du squelette 2,3-dihydro-1,4-dioxino[2,3-b]pyridinique fonctionnalisé sur l'entité oxygénée, d'une part, en position 3 au moyen d'une séquence déjà développée au Laboratoire, et, d'autre part, sur le sommet 2 via le réarrangement de Smiles. Les différents paramètres influençant ce réarrangement ont été étudiés et, notamment, la nature du couple base/solvant, du nucléofuge, du contre-ion et du substrat. Au cours de ce travail, une étude mécanistique, en particulier stéréochimique, a été également réalisée, mettant en évidence que cette transposition a lieu avec rétention de configuration. La pureté énantiomérique a été déterminée par électrophorèse capillaire en utilisant des cyclodextrines comme sélecteur chiral. La seconde partie du mémoire est consacrée à la synthèse et la réactivité de spirodioxinopyridines fonctionnalisées sur la partie hétérocyclique oxygénée. Les structures de différents isomères élaborés durant cette étude ont été formellement établies par RMN 2D (HMQC et HMBC) et par radiocristallographie. En parallèle, nous nous sommes également intéressés à la préparation de 2,5-dihydro-1,6-benzodioxocines diversement substituées sur le noyau aromatique et ce, via une réaction de métathèse faisant appel au catalyseur de Grubbs commercial. Dans la mesure où certains des dérivés synthétisés sont substitués sur la partie hétérocyclique oxygénée par différents motifs habituellement rencontrés dans diverses molécules présentant une affinité pour les récepteurs sérotoninergiques, ces composés ont fait l'objet de tests de binding afin d’évaluer leur affinité pour les récepteurs 5-HT4, 5-HT6 et 5-HT7.
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Biacchi, Michael. "Développement du couplage électrophorèse capillaire-spectrométrie de masse à source MALDI : applications à la caractérisation de protéines." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAF033/document.
Full textAbstract:
Au cours de ce travail, nous avons mis au point une nouvelle interface CE/MALDI-MS automatisée, équipée d’une cellule UV/visible déportée, et d’une distribution automatique de matrice intégrée. Ce nouveau système a été évalué sur des mélanges différents de protéines entières, de digestats de protéines et d’anticorps monoclonaux (mAbs). Les résultats obtenus lors de cette évaluation ont montré la complémentarité de la nouvelle interface avec les systèmes analytiques classiques. De plus, nous avons montré la première séparation et analyse de mAbs entier par CE/MALDI-MS. Dans un second travail, la nouvelle interface a été utilisée pour effectuer la première analyse Top Down de proteine entière et de mAbs par collecte et enrichissement de fraction. Cette stratégie a montré la répétabilité du système permettant de séparer des analytes d’intérêt et d’enrichir les dépôts MALDI jusqu'à de très hautes quantités d’analytes permettant l’obtention de spectre Top Down. Au cours du troisième travail, le nouveau système CE/MALDI-MS a été utilisé dans une stratégie originale à 2 dimensions de séparation et de collecte d’isoformes de mAbs entiers ou partiellement digérés suivi d’infusions et analyses à l’aide du nanosprayer CESI. Pour cela, nous avons mis au point des conditions électrophorétiques dit « asymétriques » séparant les mAbs dans des conditions très salées mais collectés dans un milieu compatible avec l’ESI-MS. Cette stratégie inédite a permis d’effectuer la première séparation et caractérisation de mAbs par CE-MS. Parallèlement, nous avons mis au point le premier dosage plasmatique d’ITPP par MALDI-TOF MS et surtout la création de CEToolbox, une application Androïd gratuite pour smartphone et tablette permettant le calcul des principales grandeurs mathématiques pour la caractérisation et l’optimisation des séparations par électrophorèse capillaireIn this work, we developed a new interface CE/MALDI-MS automated, equipped with a UV/visible cell remote, and integrated automatic distribution of matrix. This new system has been evaluated on different mixtures of intact protein, digested protein and monoclonal antibodies (mAbs). The results obtained during this evaluation showed the complementarity of the new interface with conventional analytical systems. Furthermore, we have shown the first separation and analysis of mAbs by CE/MALDI-MS. In a second work, the new interface was used to perform the first Top Down analysis for intact protein and mAbs by fraction collection and enrichment. This strategy has shown the repeatability of the system for separating analytes and the enrichissment the MALDI deposits up to very high amounts compatible for Top Down approach. In the third work, the new system CE/MALDI-MS has been used in an original 2-dimensional strategy of separating and collecting intact mAbs isoforms or partially digested followed by infusions and analyzes with CESI nanosprayer. For this, we have developed electrophoretic condition so-called "asymmetric" allowing the separation of mAbs under very salty conditions but collected in a totally compatible solution with ESI-MS. This novel strategy allowed for the first separation and characterization of mAbs by CE-MS. Meanwhile, we have developed the first plasma level of ITPP by MALDI-TOF-MS and particularly the creation of CEToolbox as a Free Android application for smartphone and tablet enabling the calculation of the main mathematical quantities for characterization and optimization of CE separations
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Anrès, Philippe. "Développement de nouvelles méthodologies de préconcentration électrocinétique in-situ en électrophorèse capillaire pour l'analyse de traces." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2012. http://pastel.archives-ouvertes.fr/pastel-00744659.
Full textAbstract:
L'électrophorèse capillaire, quoiqu'étant une technique analytique très puissante, souffre d'un manque en sensibilité avec les détecteurs spectrophotométriques. Pour palier ce problème il est possible d'utiliser des méthodes de préconcentration électrocinétiques in-situ. Les travaux menés au cours de cette thèse se sont attachés à développer de nouvelles méthodologies de préconcentration électrocinétique. Tout d'abord, il a été montré que le greffage des capillaires de silice avec du polyacrylamide linéaire permet en milieu acide complexe de réduire fortement l'écoulement électroosmotique ce qui favorise la mise en œuvre des techniques de préconcentration. Ensuite, le couplage de deux méthodes de préconcentration, l'amplification de champ électrique avec une injection électrocinétique et du sweeping a été examiné. En étudiant le mécanisme grâce à des plans d'expérience et de la simulation, l'influence des paramètres expérimentaux ainsi que leurs rôles ont été éclaircis et la procédure d'optimisation simplifiée. A la suite de ces résultats, une procédure d'analyse d'herbicides présents dans des eaux de distribution a été développée, permettant leur détection à un niveau proche de celui spécifié par l'Union Européenne sans étape préalable d'extraction. Ensuite, l'utilisation de liquides ioniques à longue chaîne pour améliorer la sensibilité d'une méthode appelée " Micelle to Solvent Stacking " a été étudiée et des améliorations d'un facteur 10 ont été obtenues par rapport aux gains obtenus avec des surfactants classiques (application à des herbicides et des anti-inflammatoires). Enfin, pour améliorer les gains en sensibilité avec de plus une spécificité élevée, une preuve de concept a été développée en utilisant un aptamère pour l'analyse sélective d'Ochratoxine A à l'état de trace dans le vin, ce qui ouvre de nouvelles perspectives pour l'utilisation de cet outil biologique en électrophorèse capillaire.
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Huynh, Thi Ngoc Suong. "Stratégie analytique combinant électrophorèse capillaire et ICP/MS pour la caractérisation des cibles biologiques de l'uranium." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTS052/document.
Full textAbstract:
Déterminer les protéines cibles de l’uranium est un enjeu majeur dans la détermination de la toxicité de ce métal et la conception d’agents décorporants. Dans ce contexte, ce travail étudie les possibilités offertes par le couplage CE-ICP/MS dans la détection de complexes protéine-uranium. Par des conditions de séparation judicieusement choisies, il est possible d’obtenir une distribution de l’uranium dans des échantillons de complexité moyenne. Cette approche a été validée sur des protéines cibles connues (seules ou en mélange) pour lesquelles les constantes d’équilibre apparentes ont été déterminées avec une justesse comparable à celle des méthodes biophysiques. L’intérêt de ce couplage a été illustré au travers de diverses applications. Ainsi l’analyse directe de sérum a confirmé l’implication forte de la fétuine, une glycoprotéine humaine, dans le devenir de l’uranium dans le sang. De plus, l’intégration ce couplage dans une approche multi-techniques (ICP/MS, DLS, CE-ICP/MS) a permis d’étudier l’influence de l’uranium dans la formation de particules de calciprotéines et fournit la preuve du maintien de l’interaction protéine-uranium dans de tels édificesIdentification of proteins targeted by uranium is of major concern in the determination of uranium toxicity and the development of decorporation agents. In this study, we examine the capabilities offered by hyphenated CE - ICP/MS for the detection of protein-uranium complexes. With judicious separation conditions, it is possible to obtain the uranium distribution in samples of moderate complexity. This approach was validated by using known proteins targeted by uranium (individually or in simple mixtures). Apparent equilibrium constants were determined with an accuracy similar to the ones obtained by biophysical methods. The interest of using this hyphenation was illustrated through diverse applications. The direct analysis of human serum confirmed the strong involvement of fetuin, a human glycoprotein, in the uranium blood distribution. Last but not least, the integration of this hyphenation into a multi-techniques approach (ICP/MS, DLS, CE-ICP/MS) allowed evaluating the influence of uranium on the formation of calciprotein particles and provided a proof of the preservation of protein-uranium complexes in such conditions
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Oukacine, Farid. "Nouvelle méthodologie analytique pour l'étude de l'activité antibactérienne des dendrimères greffés de la L-lysine par électrophorèse capillaire." Thesis, Montpellier 2, 2011. http://www.theses.fr/2011MON20089/document.
Full textAbstract:
Ces travaux de thèse ont permis de mettre en œuvre une méthode de criblage de l'activité antibactérienne des dendrimères greffés de la L-lysine (DGL) par électrophorèse capillaire (EC). Le principe de la méthode est basé sur le suivi du profil électrophorétique des bactéries avant et après leur rencontre avec une bande de composé cationique dont on souhaite cribler l'activité. La mise en œuvre de cette méthode a nécessité plusieurs étapes. Dans la première étape, une nouvelle méthodologie permettant la focalisation, la mobilisation et la quantification des bactéries par EC a été développée. Cette méthode a été appliquée pour la quantification de la flore totale dans des eaux naturelles. Dans la seconde étape, plusieurs revêtements neutres de capillaire ont été comparés pour l'analyse simultanée de composés polycationiques et polyanioniques. Dans la dernière partie, la méthodologie de criblage a été mise en œuvre pour l'étude de l'activité des DGLIn this work, a new analytical methodology has been implemented for the screening of antibacterial activity of dendrigraft poly-L-lysines (DGL) by capillary electrophoresis (CE). The principle of this methodology is based on the monitoring of the electrophoretic profile of bacteria before and after the meeting with a zone containing the cationic compound to be screened. The implementation of this methodology has required several steps. In a first experimental part, a new methodology has been developed for the focalization, mobilization and quantification of bacteria. This focusing mode has been applied for the quantification of bacteria in natural waters. In a second experimental part, several neutral capillary coatings were compared for the simultaneous CE analysis of polyanionic and polycationic compounds. In the last experimental part, the screening of antibacterial activity has been implemented on DGL
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Fermas, Soraya. "Apport du couplage de l’électrophorèse capillaire à la spectrométrie de masse pour l’étude de complexes protéines : oligosaccharides." Evry-Val d'Essonne, 2007. http://www.biblio.univ-evry.fr/theses/2007/2007EVRY0028.pdf.
Full textAbstract:
L’intérêt croissant pour les glucides bioactifs et leurs complexes avec des protéines requiert une méthodologie adaptée à leur caractérisation. L’électrophorèse capillaire (CE) présente de nombreux avantages pour l’étude d’interactions non covalentes de molécules libres en solution, permettant notamment la détermination de constantes de dissociations. La spectrométrie de masse par ionisation electrospray (ESIMS) est reconnue comme étant une méthode de choix pour l’analyse d’interactions non covalentes mais également de protéines et d’oligosaccharides sulfatés. Nous avons donc mis en œuvre des stratégies de couplage CE-ESIMS appliquées à l’étude de complexes non covalents protéine /oligosaccharide. La validité de ce couplage a d’abord été évaluée par l’analyse du complexe modèle antithrombine / héparine. En fonction des objectifs recherchés, il a été possible soit de maintenir ce complexe non covalent soit de le dissocier en source grâce à des conditions dénaturantes ou non. Le maintien du complexe permet une détermination de sa stœchiométrie, tandis que sa dissociation ouvre la voie de l’identification des ligands. La seconde stratégie a concerné la caractérisation de complexe chimiokines / oligosaccharides. L’étude des complexes non covalents nous a permis d’évaluer les effets de la liaison d’oligosaccharides sur la formation d’oligomères protéiquesThe increasing interest in protein / carbohydrate interaction is accompanied by a demand for viable and high throughput methodologies for their characterization. Capillary electrophoresis (CE) offers powerful attributes for the study of non covalent complexes, particularly as regard the determination of binding parameters. Electrospray mass spectrometry (ESIMS) is widely recognized as a powerful analytical method for the characterisation of sulfated oligosaccharides and non covalent interactions. Therefore, we present data on the implementation of analytical strategies based on CE-ESIMS for the characterisation of protein / carbohydrate complexes. The CE-ESIMS methodology was first applied to the analysis of the prototypic complex between antithrombin and heparin. Ionisation conditions were optimised either to preserve the non covalent complex in the MS source, or allow its dissociation using denaturing conditions. In one hand, the stoichiometry of the complex could be obtained through the MS analysis of the native complex in non-denaturing conditions. In the other hand, the structural characterisation of the sulfated ligand could be performed through dissociation of the complex. This CE-ESIMS approach was also used to investigate on the non covalent complexes formation between the chemokines and oligosaccharides. The isolation of the non covalent complex allowed studying the binding effect on the oligomerisation status of these proteins
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Deloffre, Laurence. "Contribution à l'étude des facteurs impliqués dans l'osmorégulation chez la sangsue Theromyzon tessulatum." Lille 1, 2001. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2001/50376-2001-61.pdf.
Full textAbstract:
Chez la sangsue Theromyzon tessulatum, après chaque repas, il y a mise en place de mécanismes osmorégulateurs. Après les deux premiers repas de sang, l'animal est soumis à une diurèse assurant la concentration des cellules sanguines ingérées. Le passage au stade 3 est marqué par une profonde antidiurése, indispensable à la reproduction. Ces caractéristiques font de cette sangsue d'eau douce, un modèle de choix pour l'étude de l'osmorégulation. Si plusieurs molécules à effet diurétique ont été caracterisées chez la sangsue, la nature des peptides responsables de l'antidiurèse reste, à ce jour, encore énigmatique. En couplant des approches biochimiques à des essais biologiques, nous avons démontré que deux peptides, le PLG-amide et le LORF, correspondent à des facteurs antidiurétiques. L'activité du LORF a été testée suite à la mise au point d'un système original basé sur la détection de protéines par électrophorèse capillaire. L'effet du LORF serait indirect et s'exercerait en inhibant spécifiquement l'activité de l'enzyme de conversion de l'angiotensine (ECA), laquelle fait partie du système rénine-angiotensine (SRA) qui, chez les Vertébrés, joue un rôle prépondérant dans l'osmorégulation en permettant la formation d'angiotensine II (AII). Contrairement à la situation des Vertébrés où elle inhibe la diurèse, l'AII exerce un effet diurétique chez les Hirudinées, effet qui cesserait suite à l'action du LORF. La sangsue est à ce jour le seul invertebre dont tous les composants du SRA ont été mis en evidence par des approches biochimiques. Par contre, du SRA, seule l'enzyme de conversion de l'angiotensine a été caractérisée chez les Arthropodes. Elle n'aurait cependant pas de rôle osmorégulateur. Afin de mieux comprendre ces [. . . ]
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Carbonnier, Benjamin. "Propriétés énantiosélectives de copolymères à base de bêta-cyclodextrines modifiées : application à l'électrophorèse capillaire et à la chromatographie liquide haute performance." Lille 1, 2001. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2001/50376-2001-339.pdf.
Full text
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Salvador, Arnaud. "Cyclodextrines méthylées : analyse, caractérisation et utilisation comme sélecteurs chiraux en électrophorèse capillaire et chromatographique en phase supercritique." Orléans, 1998. http://www.theses.fr/1998ORLE2078.
Full textAbstract:
Les cyclodestrines (CDs) méthyĺées ont trouvé, depuis quelques années, de nombreuses applications du fait de leur aptitude à former des complexes d'inclusion avec un grand nombre de molécules et ce malgré leur commercialisation sous forme de mélanges de plusieurs composés à nombre et positions de méthyles différents. Les travaux présentés dans ce mémoire s'insèrent dans le cadre du développement de nouvelles méthodologies d'analyses de ces CDs méthylées. Dans une première partie, trois méthodologies différentes par chromatographies en phases gazeuse, liquide et supercritique sont proposées pour déterminer le nombre et les positions des méthyles des différentes unités glucopyranose après hydrolyse des CDs méthylées. Dans une seconde partie, l'analyse par spectrométrie de masse simple (SM) et tandem (SM-SM), des mélanges de CDs intactes a permis non seulement de déterminer les proportions relatives des différentes CDs méthylées présentes dans les mélanges, mais également de montrer qu'il existe pour certaines masses moléculaires des isomères de position. La séparation de ces composés a ensuite été réalisée par chromatographie en phase supercritique (CPS) et leur identification par CPS-SM. Une phase stationnaire silice greffées NO2 avec une phase mobile CO2/MeOH s'est avérée être très performante pour l'analyse de CDs méthylées uniquement sur les positions 2,6 et 2,3,6. Dans ce cas, la rétention se fait par nombre de méthyles décroissant. Pour les autres CDs méthylées de façon aléatoire, les meilleures empreintes chromatographiques ont été obtenues avec une phase stationnaire de silice vierge et une phase mobile CO2/MeOH/ACN/Eau. Enfin, dans la dernière partie de ce travail, ces différentes CDs méthylées ont été employées comme sélecteurs chiraux. En électrophorèse capillaire (EC), il a été démontré que la composition du mélange de CD méthylées utilisé a une influence considérable sur les constantes de complexation de dérivés d'amphétamine. En CPS, une nouvelle méthodologie d'analyse chirale utilisant les CDs méthylées comme additifs chiraux de la phase mobile a été proposée. Les principaux paramètres chromatographiques influençant l'équilibre dynamique du système, la séparation chirale et les mécanismes de reconnaissance chirale ont été déterminés. Tout comme en EC, la composition du sélecteur chiral est importante, puisque selon la composition des mélanges, il y a séparation chirale ou non.
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Wu, Ting. "Développement et application des systèmes microanalytiques dans le domaine de l'environnement." Phd thesis, École normale supérieure de Cachan - ENS Cachan, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00463218.
Full textAbstract:
Trois micro-systèmes ont été développés pour la détection des polluants dans l'environnement. Un système microfluidique basé sur l'extraction en phase solide et sur une détection fluorimétrique a été mis en point pour la détermination de traces de Pb2 + dans l'eau potable. Le mécanisme et la cinétique chimique de la complexation entre le senseur et le plomb ont été étudiés en détail. Un autre dispositif pour la détection des ions de métaux lourds est un capteur optofluidique basé sur une microcavité laser. Une grande attention est portée sur la recherche de matériaux efficaces pour élaborer la microcavité. Les copolymères biblocks ont été choisis dans notre étude. Le troisième dispositif est l'électrophorèse capillaire miniaturisée avec une détection électrochimique pour l'analyse des perturbateurs endocriniens (PE) dans les eaux usées. Tous ces dispositifs ont de bonnes performances et ils sont à la base de futures appareils miniaturisés pour l'analyse sur le terrain.
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Lemée, Frédéric. "Composés polyioniques contraints bioactifs libres et supportés : accès à de nouveaux matériaux antibactériens." Thesis, Université de Lorraine, 2015. http://www.theses.fr/2015LORR0047/document.
Full textAbstract:
La mise au point de nouveaux matériaux possédant des propriétés antibactériennes est un sujet intéressant le monde médical et environnemental. Pour cela, les polymères commerciaux de Merrifield et de Wang-benzaldéhyde ont été modifiés par greffage de motifs calixarèniques polycationiques antibactériens inspirés des travaux du laboratoire et désignés pour interagir avec la surface bactérienne chargée négativement. Ces calixarènes ont été modifiés sur la partie basse, de façon contrôlée, par incorporation d'un groupe espaceur fonctionnel permettant d'accéder à un greffage ciblé du polymère. Nous avons en premier lieu évalué plusieurs types de fonctionnalités introduites sur le calixarène, permettant la fixation de ces motifs sur le support polymérique. Ainsi une amination réductrice a été choisie pour l’ancrage sur la résine de Wang-benzaldéhyde, tandis qu’un point d’ancrage de type pyridinium, pour la résine de Merrifield, a retenu notre attention et s'est avéré être un excellent candidat pour le greffage des calixarènes. La validité de ce point d’ancrage pyridinium a pu être vérifiée par l’incorporation d’une sonde fluorescente (pyrène) et caractérisée par fluorescence à l’état solide, par spectroscopie infrarouge et analyse élémentaire, ces deux dernières étant appliquées à l'ensemble des polymères préparés par la suite. Au travers d'une étude de capture–relargage en milieu aqueux de deux antibiotiques carboxyliques (type quinolone et ß-lactame) le polymère pyridinium modèle, sans calixarène, a montré tout son intérêt, face à la cholestyramine (Questran®) ou à l'Amberlite IRA-400, en tant que résine échangeuse d'anions et pouvant mener à une utilisation en tant que dépolluant/décontaminant. En amont des études antibactériennes de ces nouveaux matériaux nous avons cherché à quantifier la capacité du matériau à retenir/séquestrer des bactéries. L’électrophorèse capillaire, méthode analytique rapide et sensible, s’est présentée comme une solution adéquate. Sur le modèle E. coli., les résines polycationiques synthétisées ont été évaluées en tant que séquestrants en milieu aqueux. Les résultats obtenus prouvent l’efficacité de certaines d’entre elles; la capture a finalement été confirmée par microscopie de fluorescence confocale. Le nombre de bactéries fixées à la surface du matériau a pu être visuellement évaluéDevelopment of new materials with antibacterial properties is a major concern in medical and environmental world. It’s for that reason that, Merrifield and Wang commercial polymers were modified by grafting polycationic calixarenic sub-units inspired by laboratory work and designed to interact with negatively charged bacterial surface. Those calixarenes were modified on the lower part, in a controlled manner, by the incorporation of a functional spacer group leading to a targeted grafting of the polymer. We have, at first, evaluated several kinds of functionalities introduced on the calixarene, giving us the opportunity to graft them on the polymeric support. Like this, a reductive amination was chosen to anchor the Wang-benzaldehyde resin, whereas a pyridinium anchoring point was pointed out as a very good candidate for the grafting of calixarenes. The validation of this pyridinium anchoring point was checked by incorporation of a fluorescent probe (pyrene) and characterized by solid state fluorescence, by infrared spectroscopy, those two lasts analysis were applied for all the other grafted polymers grafted after that. Through a capture-release study in aqueous media of two carboxylic antibiotics (quinolone and ß–lactame kind), the pyridinium polymer model, without calixarène, showed his interest faced to Cholestyramine (Questran®) or Amberlite IRA-400, as an anion exchange resin and leading to depoluting/decontamination applications. Before antibacterial studies of thoses new materials, we wanted to find a way to quantify the material capacity to catch/hold bacteria. Capillary electrophoresis, rapid and sensitive analytical method, appeared as a perfect solution. Using E. coli model, synthesized polycationic resins were evaluated as sequestering agent in aqueous media. Results obtained prove the efficiency of some of them; capture was finally confirmed by confocal fluorescent microscopy. The number of bacteria fixed by material surface could be visually evaluated
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Dabat, Duval Marilyne. "Etude des différences de structure entre des héparines d'origines animales diverses par électrophorèse capillaire et chromatographie d'échange d'ions." Rouen, 1995. http://www.theses.fr/1995ROUES007.
Full textAbstract:
L'objectif de cette étude est d'établir une méthode de différenciation des héparines en fonction de leur origine animale (le plus souvent porcine mais parfois bovine) et de leur origine tissulaire (mucus d'intestin ou poumon). En effet, la détermination de l'origine des héparines entrant dans la fabrication du principe actif d'un médicament est un facteur déterminant de la qualité de celui-ci. De nos jours, les autorités de la santé publique sont particulièrement vigilantes et attentives aux cas des médicaments dont le principe actif est extrait à partir d'organes animaux. L'accent est plus particulièrement mis sur les produits d'origine bovine en raison de l'occurence d'une maladie qui touche essentiellement les bovins: l'encéphalite spongiforme. Bien que toutes les héparines commercialisées devraient dorénavant être d'origine porcine, il est de l'interêt général de disposer d'une méthode d'analyse permettant de vérifier l'origine animale des héparines et d'être capable de quantifier par un pourcentage la présence éventuelle d'héparine d'intestin de boeuf dans un lot d'héparine d'intestin de porc. Dans le cadre de cette étude, nous nous sommes intéressés à la différenciation de l'origine animale des héparines, par l'analyse de leur produit de dépolymérisation. Les héparines ont été successivement depolymérisées chimiquement (par l'acide nitreux) ou enzymatiquement (par les héparinases I et II). L'analyse des produits de dépolymérisation est effectuée en HPLC d'échange d'ions et en électrophorèse capillaire pour la réalisation de cartographies des différentes héparines. En conclusion, la digestion des héparines par l'héparinase II produit un mélange de disaccharides dont l'analyse quantitative en HPLC d'échange d'ions et en électrophorèse capillaire, permet la détection de 5 a 10% d'héparine bovine dans un lot d'héparine porcine
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Laskaridou-Monnerville, Andromaque. "Étude des minéraux, vitamines et autres substances biologiques dans les fruits et légumes réunionnais par électrophorèse capillaire." La Réunion, 1997. http://elgebar.univ-reunion.fr/login?url=http://thesesenligne.univ.run/97_02_Laskaridou.pdf.
Full textAbstract:
Ce travail est consacré à l'étude des anions, cations, acides organiques et vitamine C contenus dans les fruits et légumes de l'île de la Réunion, Océan Indien. La méthode d'analyse choisie est l'électrophorèse capillaire. Les anions organiques et inorganiques sont séparés et dosés, au moyen d'un électrolyte chromate de sodium avec un modificateur du flux électroosmotique, détection en UV indirecte, a 254 nm. Les cations sont séparés au moyen de deux électrolytes: un premier à base d'une amine avec tropolone et éther couronne 18C6, détection en UV indirecte à 185 nm pour certains d'entre eux et un deuxième composé d'acide lactique avec 4-Methyl-Benzylamine, détection en UV indirecte à 214 nm. Concernant les vitamines, nous avons été contraints de travailler avec les hydrosolubles et plus particulièrement avec le L-acide ascorbique. Parmi les méthodes que nous avons abordées, il en existe une particulièrement sensible et simple avec un électrolyte à base de tricine, détection en UV directe a 254 nm. Dans ce contexte, nous nous sommes penchés particulièrement sur le Psidium Cattleianum Sabine (goyavier fraise). Une autre voie prometteuse qui s'est ouverte au cours de notre travail est celle qui se consacre aux alcaloïdes et flavonoïdes. Nous avons, pour l'instant, étudié la capsaicine et la dihydrocapsaicine, composés actifs du piment. Nous aimerions continuer notre étude sur cette voieThis doctoral thesis has the aim of studying anoins, cations, organics acids and vitamin C contained in fruits and vegetables from the Reunion Island, Indian Ocean. Capillary electrophoresis is the method chosen for this study. Anions and organic acids are separeted and determined quantitavely with a sodium chromate solution and an electroosmotic flow modifier, inverse UV detection at 254 nm. Cations are separated and determined quantitatively with two electrolytes : the first one is composed of an amine with tropolone and crown ether, inverse UV detection at 185 nm and the second one is composed of lactic acid with 4-methyl-benzylamine and crown ether, inverse UV detection at 214 nm. Among vitamins, we are interesed in L-ascorbic acid. A very sensitive and easy method based on a tricine electrolyte is chosen. Direct UV detection is performed at 254 nm. Under these conditions, we studied more particulary four different maturity levels of Psidium Cattleianam Sabine (strawberry guyava). Another promising area is the one with alcaloids and flavonoids. We developed an electrolyte allowing us to separate and measure capsaicin and dihydrocapsaicin, active pungent compounds of hot chili peppers. We would like to continue our research on this field
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Alinat, Elodie. "Développement de nouvelles stratégies utilisant l'électrophorèse capillaire pour la caractérisation physico-chimique des nitrocelluloses en vue de leur identification dans des prélèvements pré-ou post-attentat." Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066489/document.
Full textAbstract:
La nitrocellulose (NC) est un ester nitrique de cellulose dont le taux de nitration détermine ses propriétés physiques et chimiques ainsi que ses applications industrielles. En effet, les NC ayant des taux de nitration inférieurs à 12,5% sont utilisées dans des produits courants (encres, peintures, vernis et membranes) alors que les NC présentant des taux de nitration supérieurs à 12,5% sont utilisées dans la fabrication de produits explosifs (dynamites et poudres propulsives). Il est donc nécessaire du point de vue forensique de disposer de méthodes permettant d’une part, d’identifier la présence de NC, d’autre part, de les discriminer. Les méthodes existantes sont très anciennes, lourdes, voire dangereuses, quand elles ne font pas totalement défaut. Par conséquent, il y a un réel besoin de disposer de méthodes plus modernes, moins lourdes et plus sûres, permettant d’identifier la présence de NC et de les discriminer. Dans une première partie, le rendement de dénitration des NC obtenu après hydrolyse alcaline a été optimisé à l’aide d’un plan d’expériences. Les ions nitrite et nitrate libérés après hydrolyse ont été quantifiés par électrophorèse capillaire (CE). Ensuite, une nouvelle méthode permettant de déterminer le taux de nitration des NC a été développée. Cette méthode est basée sur une relation linéaire entre le ratio molaire des concentrations en ions nitrite et nitrate libérés et le taux de nitration de la NC. Ces différentes méthodes ont été appliquées avec succès à l’analyse de NC contenues dans différentes matrices. Dans une seconde partie, les produits obtenus après dépolymérisation en milieu acide de la NC ont été étudiés dans l’objectif d’obtenir une empreinte électrophorétique présentant un intérêt forensique. Pour cela, les produits de dépolymérisation acide partielle de la NC ont été dérivés par le 8-aminopyrène-1,3,6-trisulfonate (APTS), détectés par fluorescence induite par laser, puis identifiés à l’aide d’étalons de cellodextrines, eux-mêmes dérivés par l’APTS. Les produits de dépolymérisation de la NC pourront également être analysés par une nouvelle méthode électrophorétique utilisant un électrolyte très basique avec une détection UV directe impliquant une réaction de photo-oxydation dans la fenêtre de détection. Enfin, la miniaturisation et l’automatisation de l’instrumentation de la CE a été mise à profit afin de déterminer les viscosités intrinsèques d’échantillons de NC. Après avoir déterminé les paramètres de la relation de Mark-Houwink, les masses moléculaires moyennes en poids d’échantillons de NC pourront être déterminéesNitrocellulose (NC) is a nitrate cellulose ester polymer whose nitrogen content determines its physical and chemical properties, and its industrial applications. Indeed, NCs with a nitrogen content less than 12.5% are widely used as raw material in daily use products (printing inks, paints, lacquers, varnishes and filter membranes), whereas highly-nitrated NCs (nitrogen content > 12.5%) are employed in the manufacturing of explosive materials (smokeless gunpowders and dynamites). Therefore, and also for regulation reasons, methods for the determination of nitrogen content in NCs are needed , and there is a strong need in developing more modern, simpler, faster, and safer methods. In a first part, the denitration yield obtained after alkaline hydrolysis of NCs was optimized by means of an experimental design. Capillary electrophoresis (CE) was used to follow the reaction through the quantitation of nitrite and nitrate ions released during hydrolysis. Then, a new method to determine the nitrogen content of NCs, based on a linear relationship between it and the molar ratio of nitrite to nitrate ions released after alkaline hydrolysis was developed. These methods were successfully applied to various explosive and non-explosive NC-containing samples. The second part aimed at studying the products obtained after partial acid depolymerization in an attempt to generate a mixture of oligosaccharides retaining information on the initial NC sample and/or the cellulose used to prepare it, which would be of forensic interest. To this end, NC fingerprinting was achieved by CE with laser induced fluorescence detection (LIF) after acid depolymerization, and derivatization with 8-aminopyrene-1,3,6-trisulfonic acid (APTS). The resulting derivatized oligomers were identified using APTS-derivatized cellodextrin standards. These depolymerization products can also be analyzed with a new CE method with a high-alkaline background electrolyte containing sodium chloride and detection was performed by mid-UV absorbance after photo-oxidation in the detection window. Finally, the advantages of CE instrumentation (miniaturization of the assay and automation) were used to determine the intrinsic viscosity of various NC samples. Thanks to the calculation of Mark Houwink parameters, the weight-average molecular weight of unknown NC samples could be determined
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Baalbaki, Bassem. "Apport de l'électrophorèse capillaire au contrôle de qualité de spécialités pharmaceutiques." Montpellier 1, 2003. http://www.theses.fr/2003MON13509.
Full textAbstract:
L'électrophorèse capillaire est une technique de séparation encore peu implémentée dans l'industrie pharmaceutique malgré l'efficacité élevée, la rapidité de la mise en œuvre, la flexibilité et le faible coût d'utilisation. Dans un contexte industriel, nous avons mis au point des méthodes originales permettant de suivre la cinétique de dissolution d'un principe actif à partir de comprimés gastro-résistants, de doser trois conservateurs dans une pommade et de suivre la stabilité d'un principe actif dans un gel commercialisé. Les méthodes proposées ont été validées suivant les critères de la Conférence Internationale d'Harmonisation. Elles sont en accord avec les requis pour l'autorisation de la mise sur le marché des médicaments et sont bien adaptées à un contrôle qualité de routine. Les protocoles de préparation des échantillons sont simples et les séparations sont rapides, moins de trois minutes. Dans les cas étudiés, l'électrophorèse capillaire s'est révélée supérieure à la chromatographie liquide.
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Casiot, Corinne. "Développement de techniques analytiques couplées (HPLC-ICP-MS et EC-ICP-MS) pour la spéciation de métalloi͏̈des (arsenic, sélénium, antimoine et tellure)." Pau, 1999. http://www.theses.fr/1999PAUU3026.
Full textAbstract:
Les éléments traces et en particulier les métalloïdes tels que l'arsenic, le sélénium, l'antimoine et le tellure peuvent se présenter dans l'environnement sous différentes formes chimiques, qui conditionnent leur toxicité, leur biodisponibilité et leur capacité à migrer. Ce travail présente le développement de deux techniques analytiques de spéciation multiélémentaire, associant une technique séparative (chromatographie liquide, électrophorèse capillaire) et un détecteur spécifique et très sensible, l'ICP-MS. La chromatographie d'échange d'anions couplée à l'ICP-MS a permis la séparation simultanée de onze espèces organiques et inorganiques de l'arsenic (As III, As V, MMa, DMa), du sélénium (Se IV, Se VI, SeCyst, SeMet), de l'antimoine (Sb V) et du tellure (Te IV et Te VI). Les limites de détection, comprises entre 0,02 et 3 g/l, ont permis l'analyse d'extraits de sols et de tissus biologiques (poisson, levures). Plusieurs protocoles ont été testés pour l'extraction du sélénium contenu dans une levure. Différentes classes de composés séléniés (protéines, acides aminés, composés inorganiques) ont été mises en évidence par chromatographie d'exclusion stérique. L'adénosyl-séléhomocystéine a été identifiée par spectrométrie de masse electrospray. Un couplage entre l'électrophorèse capillaire (EC) et l'ICP-MS a été développé. Trois nébuliseurs ont été testés pour l'interface : le Babington, le MCN-100 et le Micromist. Ce dernier a permis des séparations reproductibles et une amélioration de la sensibilité par rapport à l'UV. Les limites de détection sont comprises entre 6 et 58 g/l pour les espèces étudiées de As, Se, Sb et Te. L'analyse d'extraits de sols a montré les possibilités de cette technique pour l'analyse d'échantillons réels.
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Arnoult, Eric. "Modélisation et simulation numérique d'oligomères du MM 2. 1. 2 : contribution à l'analyse de ses propriétés d'agrégation." Orléans, 2004. http://www.theses.fr/2004ORLE2027.
Full textAbstract:
Les nanotechnologies utilisées dans le traitement de certaines pathologies permettent actuellement de concevoir des systèmes transporteurs acheminant les principes actifs jusqu'à leurs cibles. Les enjeux sont considérables puisque ces systèmes offrent une protection au principe actif, augmentent la pénétration intracellulaire et le ciblage et donc réduisent les doses à administrer et les effets secondaires. Ces systèmes, appelés vecteurs, peuvent être constitués de polymère biodégradable. Le poly(méthylidène malonate 2. 1. 2), développé par la société de recherche pharmaceutique Virsol, est un des polymères utilisables dans ce domaine. Il présente une faible toxicité et la synthèse relativement aisée de particules à base de ce polymère rend son développement intéressant. Une étude complète de ses propriétés d'agrégation a nécessité la modélisation et la simulation numérique en solvatation explicite d'oligomères de méthylidène malonate 2. 1. 2. Après un chapitre d'introduction sur les vecteurs colloi͏̈daux, nous présenterons les résultats obtenus en dynamique moléculaire puis ceux issus de calculs ab initio.
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Sarazin, Cédric. "Recherche et identification de traces d'explosifs sur des prélèvements après attentat : application de l'électrophorèse capillaire à cette problèmatique." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066406.
Full textAbstract:
Les investigations menées après attentat par les services de police technique et scientifique ont pour but d’identifier la composition de la charge explosive employée, mais la tâche peut se révéler particulièrement difficile d’un point de vue analytique. En effet, les résidus de charge explosive sont le plus souvent présents à l’état de traces dans des matrices variées et complexes, d’où la nécessité de disposer de protocoles analytiques performants et rapides. Ces travaux ont donc tout d’abord consisté à développer trois méthodes par électrophorèse capillaire pour l’analyse (i) d’anions inorganiques, puis (ii) de cations inorganiques et enfin (iii) d’anions et de cations inorganiques simultanément. La seconde partie de ce travail a été dédiée à l’analyse par électrophorèse capillaire de carbohydrates. Un électrolyte de séparation très alcalin, à base de soude, a permis de séparer, mais aussi de détecter les carbohydrates via une réaction photochimique se déroulant lors du passage des analytes dans la fenêtre du détecteur. Une séparation en moins de 20 min de neuf carbohydrates a été finalement optimisée à l’aide d’une approche multivariée et d’une analyse de désirabilité. Enfin, le développement d’une méthode d’analyse de l’eau oxygénée, grâce à sa complexation avec les ions borate, a été réalisé. Toutes les méthodes, ainsi développées, ont été validées et appliquées avec succès à des échantillons réels. L’électrophorèse capillaire apparaît alors comme une technique de grand intérêt, complémentaire de la chromatographie ionique ou de la chromatographie sur couche mince
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Hermouet-Bernard, Dominique-Anne. "Développement d'une méthode associant chromatographie liquide et électrophorèse capillaire en vue de l'analyse des peptides dans les milieux biologiques." Lyon 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LYO10150.
Full textAbstract:
Le but de cette theseaa ete de developper une methode associant extraction sur phase solide, chromatographie liquide a polarite de phase inversee et electrophorese capillaire de zone (cze), en vue d'analyser les neuropeptides contenus dans des milieux biologiques. Des protocoles d'extraction bases sur l'echange d'ions, la phase inverse ou la chromatographie d'affinite sur metal immobilise ont ete etudies. Ensuite, l'analyse par cze a ete optimisee afin de pouvoir realiser les separations pour differents ph du tampon electrolyte. L'angiotensine ii, l'arginine vasopressine et la neurotensine (nt) migrent pour des ph compris entre 2,5 et 10,5 et leur pi peut etre determine a partir des courbes =f(ph). Par contre, la substance p, le neuropeptide y, le peptide histidine isoleucinamide et le peptide intestinal vasoactif (vip) ne migrent que dans la zone de ph acide ou basique, et interagissent avec la paroi du capillaire a ph neutre. Les courbes 1/t=f(e) suggerent que ces interactions sont surtout liees a des interactions coulombiennes entre la paroi du capillaire et les peptides. Afin de diminuer ces interactions, une etude comparative de differents additifs a ete effectuee. La lysine et le cyclen se sont reveles les plus efficaces. Les courbes f/t=f(e) suggerent que ces deux additifs agissent differemment. L'approche developpee a ete utilisee pour analyser la nt et la vip dans des tissus de rat. Les separations cze ont ete effectuees dans differents tampons de separation, permettant ainsi d'identifier sans ambiguite ces neuropeptides.