Dissertations / Theses: 'Embriones'

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Lara, Espinoza Sara Violeta, and Hernández Karin Soledad Naranjo. "Disponibilidad de los embriones crioconservados." Tesis, Universidad de Chile, 2007. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/112930.

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Abstract:

Memoria (licenciado en ciencias jurídicas y sociales)
Antes de entrar de lleno en materia, definiremos una serie de conceptos que estarán presentes a lo largo de estas páginas. Luego, trataremos temas, que si bien no son, en estricto rigor, propios de esta Memoria, es necesario considerarlos previamente, como son las teorías sobre el comienzo de la vida y los derechos reproductivos. Posteriormente, la primera parte de esta Memoria se abocará al análisis de las diversas técnicas de reproducción humana asistida que se desarrollan actualmente para enfrentar los problemas de infertilidad. Se mencionan las opiniones tanto favorables como contrarias a cada una de estas técnicas. A continuación, analizaremos la naturaleza jurídica del embrión humano, examinando las diferentes posturas que existen al respecto, para luego indicar fundadamente cual es nuestra posición en este tema. En la tercera parte trataremos, al fin, el tema específico de nuestro trabajo, esto es, daremos respuesta a la pregunta sobre qué hacer con los embriones supranumerarios, señalando los distintos destinos que pueden otorgárseles. En el capítulo siguiente, examinaremos el tratamiento de esta temática en el derecho internacional, derecho comparado y legislación nacional. Finalmente, plantearemos nuestra postura sobre cómo la legislación nacional debiese abordar esta materia.

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Novo, Bruña Sergio. "Etiquetaje directo de ovocitos y embriones." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2013. http://hdl.handle.net/10803/129337.

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Abstract:

La correcta trazabilidad de las muestras derivadas de la práctica de las técnicas de reproducción asistida principalmente ovocitos, semen y embriones es esencial, tanto en la reproducción asistida de humanos como de animales de renta. Los sistemas actualmente destinados a mantener identificada la muestra durante su paso por el laboratorio y a preservar dicha trazabilidad presentan ciertas limitaciones. En esta tesis se ha desarrollado un sistema de etiquetaje directo de ovocitos y embriones utilizando microdispositivos codificados de polisilicio que permite mantener la muestra identificada, y por lo tanto trazarla durante todo su procesamiento cubriendo así la mayoría de las limitaciones detectadas en los sistemas actualmente disponibles para esta función.
The correct traceability of samples derived from the practice of assisted reproductive technologies mainly oocytes, semen and embryos is essential, both in human and livestock assisted reproduction. Current systems designed to maintain the sampleidentifiedduringallthe laboratory procedures and to preserve its traceability have certain limitations. In this thesis a direct tagging system for oocytes and embryos, using encoded polysilicon microdevices, has been developed. This system keeps the sample identified throughout its processing, allowing its traceability at any time. Thus, the limitations detected in the systems currently available can be overpassed by means of the implementation of the direct tagging system developed here.

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Izquierdo, i. Tugas M. Dolors. "Cultivo de embriones caprinos producidos in vitro." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 1997. http://hdl.handle.net/10803/5613.

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Pereyra, Revuelta Carol Rocio. "Regulación jurídica sobre manipulación genética de embriones humanos - clonación." Universidad Mayor de San Andrés. Programa Cybertesis BOLIVIA, 2005. http://www.cybertesis.umsa.bo:8080/umsa/2005/pereyra_rc/html/index-frames.html.

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Abstract:

En la actualidad, la humanidad se ve enfrentada a dilemas que plantea el avance científico, tecnológico, biomédico, que afectan de cierta manera los derechos del hombre, el ordenamiento jurídico y la concepción ética de la vida. En el ámbito de los derechos humanos, la posible clonación humana significaría una violación de los dos principios fundamentales en los que se basan todos los derechos del hombre: el principio de igualdad entre los seres humanos y el principio de no discriminación El reciente descubrimiento del Genoma Humano y la posibilidad de la Clonación nos lleva a la discusión a estar o no de acuerdo con estas prácticas, la razón del rechazo radica en la negación de la dignidad de la persona sujeta a clonación y en la negación misma de la dignidad de la procreación humana. La investigación científica en beneficio del hombre representa una esperanza para la humanidad, encomendada al genio y al trabajo de los científicos, cuando tiende a buscar remedio a las enfermedades, aliviar el sufrimiento, para hacer que la ciencia biomédica mantenga y refuerce su vínculo con el verdadero bien del hombre y de la sociedad. Existen dos posiciones o formas de clonación que se enfrentan una a la otra, por un lado están aquellas que tienen fines terapéuticos y las otras que el objetivo es crear seres genéticamente idénticos. Por lo que clonación es un procedimiento técnico, producto de avanzadas técnicas de Ingeniería Genética, mediante el cual se obtiene un nuevo individuo a partir de una célula extraída de otro individuo ya existente e introducida en un óvulo previamente enucleizado, de modo que los clonados son idénticos al original. Al presenciar el avance científico de la clonación, el objetivo principal será regular la misma a fin de que esta se realice con el propósito de utilizar para el beneficio de la salud en la humanidad y porque no hacerlo si en estos casos de manipulación genética de embriones de humanos, en las investigaciones se emplean embriones desechados en tratamientos de fertilización in vitro. En cuanto a la Regulación de la Clonación podríamos indicar que todos los países están en contra de la clonación reproductiva por diversos aspectos éticos, jurídicos, morales, fuera de éste ámbito se esta comenzando a hablar de lo que es la clonación terapéutica, aquella destinada a curar enfermedades, los embriones antes del estadio pre – implantatorio no son personas ni hay vida humana, y que a todos los efectos jurídicos se le aplican las disposiciones aplicables a las cosas. Asimismo, las declararía cosas fuera del comercio

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Pérez, Bravo María Luisa. "La condición jurídica de los embriones criopreservados en el Perú." Bachelor's thesis, Pontificia Universidad Católica del Perú, 2020. http://hdl.handle.net/20.500.12404/18763.

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Abstract:

El presente artículo aborda la problemática referida a la condición jurídica de los embriones criopreservados en el Perú para, a partir de ello, poder determinar si es posible o no descartarlos en caso ya no sean transferidos al útero. El trabajo resalta la importancia de la Fecundación In Vitro como Técnica de Reproducción, pero también las complicaciones existentes por el manejo de gametos y las consecuencias jurídicas que ello conlleva, mucho más si se tiene en cuenta la inexistente regulación sobre la materia en el país. A partir del análisis del derecho comparado y la jurisprudencia internacional, hemos llegado a la conclusión de que se pueden descartar los embriones, pero es necesario que se establezca un marco normativo donde se regule la materia de forma precisa y detallada en lo referido al manejo de la criopreservación como plazos y autorizaciones. En nuestro país se emitieron dos Proyectos de Ley para tratar de regular el tema en el 2018; sin embargo, no fue sino hasta mayo del 2020 que el Congreso aprueba el Dictamen que integra los textos de los Proyectos de Ley. A pesar de ello, el texto sigue siendo poco claro porque no señala las consecuencias de consentir el cese de la criopreservación

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Ispizúa, Muñoz Jorge Antonio. "Criopreservación : bancos de gametos y embriones y su regulación jurídica." Tesis, Universidad de Chile, 2004. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/114961.

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Abstract:

Memoria (licenciado en ciencias jurídicas y sociales)
No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo
Los objetivos perseguidos en la presente memoria, apuntan a demostrar que es posible aceptar los procesos de criopreservación de gametos, pronúcleos, y embriones, no solo porque representa una realidad en muchas partes del mundo. Si fuera ese el argumento para aceptarla, sería lo mismo que no dar fundamento alguno. Entonces, lo primero que debemos lograr, es demostrar que nuestro ordenamiento jurídico, debe dar acogida a los procesos antes referidos. Para ello, deberemos preocuparnos de manera previa, de la naturaleza jurídica de gametos, pronúcleos, y embriones. Nuestro análisis apuntará a dejar en evidencia, que de las células mencionadas, solamente los embriones, ya implantados en las paredes del útero de una mujer, podrán tener conocimiento legal, como si se tratase de personas, o al menos de una que está por nacer. Antes de ese momento, consideramos que el tratamiento, y por ende el tutelaje del que pueden ser merecedores, será más cercano al otorgado a las cosas.

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Acevedo, López Juana. "Manual de Procedimientos de producción in vivo de embriones bovinos." Tesis de Licenciatura, Universidad Autónoma del Estado de México, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.11799/49812.

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Abstract:

La primera transferencia de un embrión de la especie bovina fue reportada por Unbaugh en el año de 1949 y el nacimiento del primer becerro producto de la transferencia de embriones fue dos años después (Willet et al., 1951). La aplicación de la transferencia de embriones con todas las biotecnologías que implica, se inició en la década de 1970, cuando el sistema de producción de ganado bovino doble propósito de Europa se hizo popular en Norte América, Australia y Nueva Zelanda (Seidel y Seidel, 1991). La técnica de transferencia embrionaria fue establecida alrededor de los años setenta. Inicialmente, era exclusivamente quirúrgica, sin embargo, hacia los años ochenta la mayoría de embriones eran transferidos mediante la técnica no quirúrgica (Jones y Lamb, 2008).
El uso de las biotecnologías de la reproducción animal tiene como objetivo principal el hacer más rentables todas las unidades de producción. Es por ello que la producción in vivo de embriones bovinos, surge con la finalidad de producir una mayor cantidad de animales seleccionados con elevada calidad genética, dentro del menor tiempo posible. La información presentada, se recabó a través de la búsqueda y análisis de literatura en diferentes fuentes especializadas. Este manual tiene como objetivo el brindar información clara y suficiente para que el lector conozca los diferentes aspectos a considerar, para poder aplicar las biotecnologías que implica la producción in vivo de embriones bovinos. La información presentada abarca desde los inicios de la puesta en marcha de las primeras biotecnologías reproductivas que se desarrollaron previamente, hasta lograr la puesta en marcha de los programas de transferencia embrionaria en una unidad productiva.

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Vásquez, Eslava Martha Elizabeth. "Evaluación de dos métodos de criopreservación de embriones sobre las tasas de sobrevivencia in vitro y preñez en llamas." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2008. https://hdl.handle.net/20.500.12672/1248.

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Abstract:

El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de dos métodos de riopreservación sobre la sobrevivencia in Vivo e in Vitro de embriones de llama. Setenta y tres embriones en estadío de blastocisto eclosionado fueron recuperados no quirúrgicamente al día 6.5 después de la monta de llamas tratadas con 1000 UI de eCG, y fueron distribuidos aleatoriamente a cada uno de los 3 grupos experimentales: Control (n=14), Vitrificación (n=30) y congelación lenta (n=29). Vitrificación:
The aim of the present study was to evaluate the effect of two cryopreservation methods on the llama embryo in Vivo and in vitro survival. Seventy three hatched blastocysts were collected non-surgically at day 6.5 after mating from llamas treated with 1000 IU eCG, and were randomly allocated to each one of three experimental groups: Control (n=14), Vitrification (n=30) and slow freezing (n=29). Vitrification
Tesis

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Ramírez, Concha Alicia. "Determinación de la muerte en embriones y fetos : eutanasia fetal y neonatal." Tesis, Universidad de Chile, 2002. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/115199.

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Abstract:

Memoria (licenciado en ciencias jurídicas y sociales)
No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo
El primer objetivo de esta memoria consiste en dar a conocer la eutanasia, una figura jurídica que no existe en nuestra legislación y, en el segundo, la factibilidad de que ésta sea considerada por nuestro sistema jurídico. Para esto es fundamental el Derecho Comparado, el cual nos permitirá tener una visión actual de cómo ha sido tratada en los diversos ordenamientos jurídicos, tanto en los que la aceptan como en aquellos que la prescriben. El procedimiento utilizado consiste, en una primera etapa, en exponer la eutanasia de un modo general, para conocer su evolución histórica, las diversas clases de eutanasia y el tratamiento de ésta en los diversos ordenamientos legales. El capítulo segundo expone de manera particular la eutanasia fetal, entendiendo que ésta es una figura autónoma y distinta del aborto. Además, se analiza la posibilidad de que ésta -la eutanasia fetal- pudiera ser legalizada en Chile. Por último, el capítulo tercero trata de manera extensa la viabilidad de la eutanasia neonatal como una figura jurídica independiente y su posible legalización en nuestro país.

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Murillo, Ríos Antonio Vinicio. "SISTEMA DE CULTIVO PARA MEJORAR LA VIABILIDAD DE EMBRIONES BOVINOS PRODUCIDOS IN VITRO." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2018. http://hdl.handle.net/10251/111541.

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Abstract:

El objetivo general de este trabajo de tesis doctoral fue optimizar un sistema de cultivo para mejorar la calidad y la viabilidad de embriones bovinos in vitro. En primer lugar, evaluamos los efectos de la eliminación de proteína sobre el desarrollo de blastocitos durante un período corto de cultivo individual. La viabilidad del embrión a diferentes plazos fue analizada mediante supervivencia a la criopreservación y recuento diferencial de células embrionarias; porcentajes de gestación; y duración de la gestación, peso y morfometría de los terneros nacidos. Además, se realizó un análisis de expresión génica en blastocistos expandidos de día 7 tanto antes como después de la criopreservación. De este capítulo se puede concluir que el cultivo de embriones individuales durante 24 h en un medio libre de proteína produce menos blastocistos pero aumenta los porcentajes de nacimiento después de la vitrificación y la transferencia a receptoras. A continuación se abordó la evaluación de la viabilidad de los blastocistos expandidos producidos en función de la cinética del embrión y la restricción de proteína durante un periodo corto en cultivo individual. Así, las mórulas y los blastocistos tempranos de día 6 se cultivaron individualmente con y sin proteína durante 24 h. El desarrollo y el contenido de lípidos se analizaron en blastocistos expandidos derivados de mórulas (M-XB) y de blastocistos tempranos (EB-XB). La expresión de genes implicados en el metabolismo lipídico, las respuestas al estrés y la apoptosis se analizaron en M-XB frescos y vitrificados, producidos con y sin proteína. Los índices de gestación, los porcentajes de nacimientos y el peso al nacimiento se registraron después de la transferencia de embriones. Los resultados indican que la cinética embrionaria y la vitrificación impactan en los fenotipos al nacimiento, al menos en el subconjunto de las terneras. Las alteraciones pueden involucrar la proteína exógena y la movilización de las reservas de lípidos. Posteriormente, se investigó si una concentración muy baja de FCS (0.1%) en cultivo desde el día 1 hasta el día 6 podría mejorar los porcentajes de blastocisto temprano (EB) y, a continuación, aumentar los porcentajes de blastocisto expandido (XB) en día 7 después de un cultivo individual sin proteína. La calidad de los embriones producidos se evaluó en términos de supervivencia a la criopreservación, porcentaje de apoptosis, acumulación de lípidos y transferencia a receptoras. Se concluye en este capítulo que la concentración mínima de FCS mejora los porcentajes de EB en el Día 6, permitiendo obtener más XB después de 24h de cultivo individual sin proteína. La calidad de los XB producidos con FCS es similar a los XB producidos con BSA en términos de apoptosis, acumulación de lípidos e índice de gestación. Finalmente, el objetivo en el cuarto capítulo fue cuantificar la proteína total HDGF en el fluido uterino (FU) mediante multiple reaction monitoring (MRM), técnica que permite reconocer la proteína total. Además, analizamos los efectos de rHDGF en etapas embrionarias específicas con embriones bovinos de día 6 cultivados in vitro con y sin proteína (BSA); y sobre la viabilidad de la preñez y los fenotipos de los terneros después de la transferencia de embriones a receptoras. Además, se cuantificó el ARNm de HDGF en células endometriales cocultivadas con un embrión macho o un embrión hembra. De este capítulo se puede concluir que el HDGF total cuantificado por MRM tendió a aumentar en el FU sin embriones, mientras que el sexo del embrión podría regular la expresión endometrial de HDGF. Sin embargo, se debe ser cauteloso con el uso de suplementos macromoleculares específicos en cultivo, ya que pueden contener el GF en estudio, como ocurre con la presencia de HDGF en la BSA comercial, lo que puede alterar los resultados de los experimentos. En última instancia, el uso d
The aim of this thesis was to optimize an embryo culture system in order to improve quality and viability of in vitro bovine embryos. First, we evaluated the effects of protein removal during a short period of individual culture on blastocyst development. Embryo viability was analyzed at different terms through survival to cryopreservation and differential cell counts; pregnancy rates and gestation length, weight and morphometry of calves born. In addition, gene expression analysis was performed on Day-7 expanded blastocysts both before and after cryopreservation. From this work it may be concluded that individual embryo culture for 24 h in a protein-free medium, reduced Day-7 expanded blastocyst rates but improved birth rates after vitrification and transfer to recipients. Next, we evaluated how embryo kinetics and protein restriction during a short step in individual culture would affect the viability of the expanded blastocyst produced. Thus, Day-6 morulae and early blastocysts were cultured individually with and without protein for 24 h. Development and lipid content were analysed in expanded blastocysts derived from morulae (M-XB) and from early blastocysts (EB-XB). Expression of genes involved in lipid metabolism, stress responses and apoptosis was analysed in fresh and vitrified/warmed M-XB produced with and without protein. Pregnancy rates, birth rates and calf birthweight were recorded after transfer of embryos. The results indicate that embryonic kinetics and vitrification impact birth phenotypes, at least in females. Alterations might involve exogenous protein and mobilisation of lipid stocks. Subsequently, we investigated whether very low FCS concentration (0.1%) in culture from Day-1 to Day-6 would improve early blastocyst (EB) rates and, subsequently, increase expanded blastocyst (XB) rates on Day-7 after single culture in protein-free medium. The quality of the produced embryos was evaluated in terms of survival to cryopreservation, apoptosis percentage, lipid accumulation and transfer to recipients. In conclusion, minute FCS concentration improves EB rates on Day-6 leading, after 24h of single culture without protein, to more XBs. The quality of XB produced with FCS compares well with XB produced with BSA in terms of apoptosis, lipid accumulation and pregnancy. Finally, the aim of the last chapter was quantify total HDGF protein in uterine fluid (UF) by multiple reaction monitoring (MRM), and analysed effects of rHDGF on specific embryonic stages with Day-6 bovine embryos cultured in vitro with and without protein (BSA), and on pregnancy viability and calf phenotypes after embryo transfer to recipients. In addition, mRNA abundance of HDGF in endometrial cells co-cultured with one male or one female embryo was quantified. From this chapter it may be concluded that total HDGF quantified by MRM tended to increase in UF without embryos, and that HDGF endometrial expression can be regulated by embryonic sex. Furthermore, rHDGF acts selectively on specific embryonic stages. Nevertheless caution is advised when adding specific macromolecular supplements in culture. It cannot be ruled out that the GF under study can be present in such supplements as verified with HDGF presence in commercial BSA. Small GF traces can alter experimental results. Ultimately, the use of rHDGF is compatible with pregnancy and birth of normal calves.
L'objectiu general d'este treball de tesi doctoral va ser optimitzar un sistema de cultiu per a millorar la qualitat i la viabilitat d'embrions bovins in vitro. En primer lloc, vam avaluar els efectes de l'eliminació de proteïna sobre el desenvolupament de blastocists durant un període curt de cultiu individual. La viabilitat de l'embrió a diferents terminis va ser analitzada per mitjà de la supervivència a la criopreservació i recompte diferencial de cèl¿lules embrionàries; percentatges de gestació; i duració de la gestació, pes i morfometria dels vedells nascuts. A més, es va realitzar un anàlisi d'expressió gènica en blastocists expandits de dia-7 tant abans com després de la criopreservació. D'este capítol es pot concloure que el cultiu d'embrions individuals durant 24 h en un medi lliure de proteïna produeix menys blastocists però augmenta els percentatges de naixement després de la vitrificació i la transferència a receptores. A continuació es va abordar l'avaluació de la viabilitat dels blastocists expandits produïts en funció de la cinètica de l'embrió i la restricció de proteïna durant un període curt en cultiu individual. Així, les mòrules i els blastocists primerencs de dia 6 es van cultivar individualment amb i sense proteïna durant 24 h. El desenvolupament i el contingut de lípids es van analitzar en blastocists expandits derivats de mòrules (M- XB) i de blastocistos primerencs (EB-XB). L'expressió de gens implicats en el metabolisme lipídic, les respostes a l'estrès i l'apoptosi es van analitzar en M-XB frescs i vitrificats, produïts amb i sense proteïna. Els índexs de gestació, els percentatges de naixements i el pes al naixement es van registrar després de la transferència d'embrions. Els resultats indiquen que la cinètica embrionària i la vitrificació impacten en els fenotips al naixement, almenys en el subconjunt de les vedelles. Les alteracions poden involucrar la proteïna exògena i la mobilització de les reserves de lípids. Posteriorment, es va investigar si una concentració molt baixa de FCS (0.1%) en cultiu des del dia 1 fins al dia 6 podria millorar els percentatges de blastocists primerenc (EB) i, a continuació, augmentar els percentatges de blastocists expandits (XB) en dia 7 després d'un cultiu individual sense proteïna. La qualitat dels embrions produïts es va avaluar en termes de supervivència a la criopreservació, percentatge d'apoptosi, acumulació de lípids i transferència a receptores. Es conclou en este capítol que la concentració mínima de FCS millora els percentatges d'EB en el Dia 6, permetent obtindre més XB després de 24h de cultiu individual sense proteïna. La qualitat dels XB produïts amb FCS és semblant als XB produïts amb BSA en termes d'apoptosi, acumulació de lípids e índex de gestació. Finalment, l'objectiu en el quart capítol va ser quantificar la proteïna total HDGF en el fluid uterí(FU) per mitjà de multiple reaction monitoring (MRM), tècnica que permet reconèixer la proteïna total. A més, analitzem els efectes de rHDGF en etapes embrionàries específiques amb embrions bovins de Dia-6 cultivats in vitro amb i sense proteïna (BSA); i sobre la viabilitat del prenyat i els fenotips dels vedells després de la transferència d'embrions a receptores. A més, es va quantificar l'ARNm de HDGF en cèl¿lules endometrials cocultivades amb un embrió mascle o un embrió femella. D'este capítol es pot concloure que el HDGF total quantificat per MRM va tendir a augmentar en l'FU sense embrions, mentre que el sexe de l'embrió podria regular l'expressió endometrial de HDGF. No obstant això, s'ha de ser cautelós amb l'ús de suplements macromoleculars específics en cultiu, ja que poden contindre el GF en estudi, com ocorre amb la presència de HDGF en la BSA comercial, la qual cosa pot alterar els resultats dels experiments. En última instància, l'ús de rHDGF és compatible amb la gestació i el na
Murillo Ríos, AV. (2018). SISTEMA DE CULTIVO PARA MEJORAR LA VIABILIDAD DE EMBRIONES BOVINOS PRODUCIDOS IN VITRO [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/111541
TESIS

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Cieza, Dominguez Marco Antonio. "Programa de bioética personalista, haciendo uso del video-forum para educar las actitudes sobre la vida del embrión humano." Master's thesis, Universidad Católica Santo Toribio de Mogrovejo, 2016. http://tesis.usat.edu.pe/handle/usat/1088.

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Abstract:

La defensa de la dignidad y del valor de la vida humana es la primera condición necesaria para encontrar la justicia y la paz en nuestra herida convivencia ciudadana. Esta investigación de enfoque cuantitativo, tipo descriptiva con propuesta educativa, tuvo como objetivo el diseño de un programa de bioética personalista, haciendo uso del vídeo- fórum, para educar las actitudes sobre la vida del embrión humano, en estudiantes de cuarto a quinto año de secundaria de una institución educativa de Batán Grande 2014. Para ello, se aplicó como instrumento a 213 estudiantes un test con escala tipo Likert donde se consideró las actitudes sobre el aborto. El instrumento ha sido tomado del investigador Cruz García Lirios; de su documento de trabajo social «actitudes hacia el aborto legal asistido»; por lo tanto es un instrumento que se encuentra previamente validado. Después de aplicarse el test se recogió y analizó los resultados de manera estadística, lo cual orientó a la elaboración de un diagnóstico y posteriormente a diseñar un programa con bases en los aportes de la bioética personalista”.
Tesis

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Gómez, Pérez Camila Alejandra. "Expresión de ARNs mensajeros de genes apoptóticos (Bax, Caspasa-9, Caspasa-3 y Bcl-2) en embriones tempranos de Seriola lalandi con diferente nivel de flotalidad." Tesis, Universidad de Chile, 2018. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/151075.

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Abstract:

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La flotabilidad de los embriones tempranos de peces pelágicos se asocia a la calidad y sobrevivencia de éstos. En cautiverio se ha observado una alta mortalidad embrionaria que se ha relacionado con la pérdida de flotabilidad de los huevos, proponiéndose la participación de mecanismos apoptóticos. El objetivo de este estudio fue evaluar la expresión de genes relacionados con la apoptosis celular durante el desarrollo embrionario temprano de Seriola lalandi y su relación con el nivel de flotabilidad. Para esto, se evaluó mediante RT-qPCR la expresión relativa de Bax, Caspasa-9, Caspasa-3 y Bcl-2 en cinco estadíos del desarrollo previamente clasificados como embriones flotantes y no flotantes. Se observó una mayor expresión de Bax en embriones no flotantes, la cual aumentó significativamente hasta este estadío de gástrula. Caspasa-9 presentó niveles estables de expresión en las muestras flotantes hasta gástrula. En blástulas no flotantes se presentó la mayor expresión de este gen, la cual fue estadísticamente superior a la encontrada en blástulas flotantes. En blástulas y gástrulas, Caspasa-3 presentó mayor expresión en muestras no flotantes. La mayor expresión de los factores pro-apoptóticos Bax, Caspasa-9 y Caspasa-3 en algunos embriones no flotantes de S. lalandi, permitirían relacionar la pérdida de flotabilidad de estos embriones con la participación de mecanismos de apoptosis celular. Por otro lado, la expresión de ARNm que codifica para Bcl-2 no presentó diferencias entre embriones flotantes y no flotantes, lo que sugiere la participación de este factor anti-apoptótico como protector de la viabilidad celular del embrión a través del desarrollo.
The buoyancy of the early embryos in pelagic fish is associated with it is quality and survival. High mortality of early embryos in captivity conditions has been associated with the loss of buoyancy of the eggs, where apoptotic mechanisms have been proposed. Therefore, the aim of this study was to evaluate the expression of genes related to the apoptosis process during the early embryonic development of Seriola lalandi and its relationship with the buoyancy level of the embryos. For this, the relative expression of Bax, Caspase-9, Caspase-3 and Bcl- 2 was evaluated by RT-qPCR in five development stages, previously classified as floating and non-floating ones. High Bax expression levels was observed in non-floating embryos, which increased significantly until gastrula stage. Caspase-9 showed stable expression levels in floating samples up to gastrula. In non-floating samples, the highest expression of this gene was observed at blastula stage, which was higher than floating blastulae. At both blastula and gastrula stage, Caspasa-3 showed higher expression in non-floating samples. The higher expression of the pro-apoptotic factors Bax, Caspase-9 and Caspase-3 in some non-floating embryos of S. lalandi would allow us to relate the low buoyancy of these embryos with the participation of cellular apoptosis mechanisms. On the other hand, the expression of mRNA encoding Bcl-2 does not present differences between floating and nonfloating embryos, suggesting the participation of this anti-apoptotic factor as a protector of the cellular viability of the embryo through development
Proyecto FONDECYT 11140639

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Simonetti, Laura. "Simplificación de los métodos de superovulación en ovejas de la raza Corriedale." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2008. http://hdl.handle.net/10251/3784.

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Abstract:

RESUMEN La superovulación permite aumentar la tasa de mejoramiento genético a través de las hembras. En ovinos, la raza Corriedale de doble propósito (lana, carne) es numéricamente importante en Argentina, donde se distribuye en toda su superficie y es criada bajo condiciones extensivas. Sin embargo, la información sobre la respuesta superovulatoria en ovejas Corriedale es escasa y no se han realizado estudios para el desarrollo de protocolos sencillos de estimulación apropiados para estos rebaños extensivos. El objetivo del estudio fue evaluar la viabilidad de simplificar los tratamientos superovulatorios en ovejas de la raza Corriedale durante la estación de cría. Se realizaron dos experimentos, utilizándose ovejas Corriedale dentro de la estación reproductiva del otoño. Las ovejas fueron sincronizadas con esponjas intravaginales con progestágeno y superovuladas según diferentes tratamientos. En el Experimento 1, se evaluaron protocolos simplificados de administración de FSH ovina (FSHo) en combinación o no con eCG: A1 (n=13): 176 unidades FSHo en una única inyección en vehículo salino junto con 500 UI eCG aplicadas 48 h antes de la retirada de las esponjas (PRE-RE); B1 (n=12): 176 unidades FSHo repartidas en 4 dosis iguales en vehículo salino cada 12 h comenzando 24 h PRE-RE; C1 (n=13): 176 unidades FSHo en una única inyección en vehículo retardante (polivinilpirrolidona; PVP) 24 h PRE-RE; D1 (n=14): 176 unidades FSHo repartidas en 6 dosis iguales en vehículo salino cada 12 h comenzando 48 h PRE-RE; E1 (n=7): 132 unidades FSHo repartidas en 4 dosis iguales en salino cada 12 h comenzando 24 h PRE-RE y asociadas a 500 UI eCG junto con la primera inyección; F1 (n=7): 132 unidades FSHo en una única inyección en PVP junto con 500 UI eCG, 24 h PRE-RE. En el Experimento 2, el protocolo simplificado que obtuvo el mejor desempeño en el Experimento 1 (A1) fue seleccionado, A2 (n=16), y comparado con el mismo protocolo, pero usando una dosis de FSHo reducida (1
Simonetti, L. (2008). Simplificación de los métodos de superovulación en ovejas de la raza Corriedale [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/3784
Palancia

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Cortell, Nicolau Carmela. "EFECTO DE LA APLICACIÓN DE GONADOTROPINAS RECOMBINANTES HUMANAS SOBRE LA PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE OVOCITOS Y EMBRIONES EN CONEJA." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2013. http://hdl.handle.net/10251/19091.

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Abstract:

El objetivo de la presente tesis ha sido evaluar la utilización de las gonadotropinas recombinantes humanas (rhFSH y rhLH)) sobre la respuesta superovulatoria en conejas, estudiando el efecto de la utilización de las mismas sobre la calidad de los ovocitos y embriones obtenidos, y sobre la viabilidad embrionaria tras un proceso de crioconservación. Así, en el primer experimento se evaluó el efecto de la aplicación de 25 UI de rhFSH junto con un 0, 5 ó 10% de rhLH sobre el desarrollo de embriones frescos y congelados-descongelados. Se obtuvo una tasa de desarrollo hasta el estadio de blastocisto expandido significativamente mayor en embriones no superovulados frente a los superovulados con rhFSH y 10% de rhLH. En cuanto a la tasa de desarrollo de los embriones congelados-descongelados, fue similar en todos los grupos, alcanzando el estadio de blastocisto expandido el 83,5% de los embriones. Por otra parte, se estudió la evolución de la tasa de ovulación y la respuesta inmunitaria por hembra hasta el cuarto tratamiento de superovulación. Se observó que la tasa de ovulación disminuía a partir del segundo tratamiento mientras que el nivel de anticuerpos anti-FSH circulantes aumentaba a partir de la tercera aplicación del tratamiento de superovulación. En el segundo experimento se estudió cómo afectaba el protocolo de administración y la hormona utilizada en el tratamiento de superovulación a la calidad de los ovocitos producidos, analizando la cantidad de ATP presente en los mismos. Para ello, se comparó la administración cada 24 horas de rhFSH y de FSH porcina diluidas en PVP y la administración cada 12 horas de FSH porcina diluida en suero fisiológico. La concentración de ATP en el grupo de FSH porcina diluida en suero fisiológico fue significativamente menor que en los otros dos grupos de superovulación (5,63±0,14 frente a 6,42±0,13 y 6,19±0,15 para el grupo de rhFSH y pFSH, respectivamente). Esa disminución de la concentración de ATP podría estar relacionada c
Cortell Nicolau, C. (2012). EFECTO DE LA APLICACIÓN DE GONADOTROPINAS RECOMBINANTES HUMANAS SOBRE LA PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE OVOCITOS Y EMBRIONES EN CONEJA [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/19091
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Saenz, de Juano Ribes María de los Desamparados. "Estudio del efecto de la crioconservación sobre la expresión génica de embriones de conejo." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2014. http://hdl.handle.net/10251/36957.

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Abstract:

La crioconservación de los embriones por congelación o vitrificación reduce la supervivencia de los embriones de conejo (Oryctolagus cuniculus) entre un 20 y 50% dependiendo de la estirpe genética y el procedimiento utilizado. En embriones vitrificados de conejo se ha observado un elevada mortalidad tras la implantación que sugeriría que el proceso tiene efectos tardíos y negativos sobre el desarrollo fetal. El objetivo de la tesis fue estudiar el transcriptoma embrionario previo a la implantación (6 días) y el desarrollo embrionario y fetal de embriones de conejo crioconservados mediante dos procedimientos habituales en esta especie. Específicamente, el objetivo del capítulo I fue la evaluación de los efectos del procedimiento de congelación sobre el desarrollo y expresión génica de embriones de conejo. Para ello, evaluamos primero la distribución de pérdidas durante la gestación analizando las tasas de desarrollo a blastocisto tardío, implantación y nacimiento. Después comparamos el perfil transcriptómico de embriones de 6 días, previamente congelados y transferidos en el estadio de mórula, con embriones desarrollados in vivo (6 días post-inseminación). Para ello, llevamos a cabo un análisis microarray de dos colores y usamos una plataforma genérica específica de conejo. Las tasas de desarrollo a blastocisto tardío, implantación y nacimiento fueron más bajas para los embriones congelados. Así mismo, también se observaron diferencias a nivel de expresión, y los embriones viables de 6 días del grupo congelado presentaron 70 genes diferencialmente expresados. Esta fue la primera aproximación que nos proporcionó una lista de genes candidatos que podrían provocar fallos en el diálogo materno-embrionario, implantación y formación de la placenta. El capítulo II evaluó la distribución de pérdidas durante la gestación debidas al proceso de vitrificación. Sin embargo, en este caso, para evaluar los efectos de la vitrificación sobre la expresión génica de blastocistos tardíos usamos la técnica de PCR cuantitativa (qPCR) con 10 genes candidatos, elegidos por estar diferencialmente expresado en los embriones congelados del anterior trabajo (SCGB1A1, EMP1, C1QTNF1, ANXA3, EGFLAM y TNFAIP6 ), o por su rol en el desarrollo embrionario e implantación (OCT4, VEGF, HBA and LAMA 4 ). Además, introdujimos también datos ecográficos sobre el tamaño del saco embrionario, feto, la placenta fetal y materna desde el día 10 hasta el 14 de gestación. Los resultados mostraron dos picos principales de pérdidas durante la gestación: Uno situado antes de la implantación y el otro después. Asimismo, también detectamos una reducción en el tamaño del feto y de la placenta materna entre los días 10 y 14. Finalmente, pudimos observar que, comparado con los embriones de 6 días desarrollados en condiciones in vivo, la expresión relativa de los transcritos SCGB1A1, EMP1, C1QTNF1, ANXA3, EGFLAM y TNFAIP6 estaba significativamente alterada en los embriones vitrificados, siguiendo además el patrón previamente observado en los embriones congelados. En el capítulo III se compararon directamente los transcriptomas de los embriones de 6 días obtenidos de embriones congelados y vitrificados de 3 días. Siguiendo los mismos procedimientos que en los trabajos anteriores, evaluamos la distribución de pérdidas a lo largo de la gestación analizando las tasas de desarrollo a blastocisto tardío, implantación y nacimiento. Asimismo, empleando la misma plataforma genérica microarray del primer experimento realizamos un análisis dos colores microarray en el que comparamos directamente el perfil transcriptómico a día 6 de desarrollo de embriones congelados y vitrificados. Los resultados reportaron que la congelación y la vitrificación tienen los mismos efectos dañinos sobre el desarrollo a día 6, pero la distribución de pérdidas difiere durante la implantación y el desarrollo, siendo las tasas de implantación y nacimiento mayores para el grupo vitrificado. Las similitudes a día 6 de desarrollo también se reflejaron en el patrón de expresión génica, porque no se detectaron diferencias a nivel transcriptómico entre los dos tipos de embriones. En el capítulo IV se analizó el transcriptoma de los embriones vitrificados de 6 días y placentas fetales de 14 días frente al transcriptoma de embriones y placentas control no vitrificados pero que fueron recuperados y transferidos, aislando así el efecto del proceso de vitrificación. Al igual que observamos en el capítulo II, los embriones vitrificados que eran capaces de llegar al estadio de blastocisto tardío eran también capaces de implantar, pero no todos los embriones implantados tenían la capacidad de finalizar la gestación. Teniendo en cuenta los resultados de las ecografías del trabajo anterior, tomamos datos del peso del feto, la placenta fetal y materna a día 14 de desarrollo y del peso al nacimiento. En los resultados detectamos un descenso en los pesos del feto y la placenta materna, así como un incremento en el peso al nacimiento de los embriones vitrificados. En este experimento, para la evaluación de la expresión génica introdujimos unas cuantas modificaciones en el diseño experimental. Así, empleamos una plataforma microarray específica para embrión de conejo y realizamos un análisis microarray de un color. En el caso de los embriones de 6 días no encontramos diferencias significativas en la expresión génica, pero en el caso de las placentas identificamos 60 genes sobreexpresados. Llegados a este punto, realizamos un análisis 2D-DIGE en as placentas fetales para encontrar diferencias a nivel proteómico. Así, detectamos 89 proteínas diferencialmente expresadas en las placentas de 14 días de desarrollo derivadas de embriones vitrificados. Debido a los anteriores resultados de alteraciones a nivel transcriptómico y proteómico en las placentas pocos días después de la implantación, el capítulo V lo centramos en el estudio de las alteraciones proteómicas en placentas fetales de 24 días de desarrollo. En este trabajo pretendimos comparar los perfiles proteicos de placentas fetales de embriones vitrificados y controles en la última parte de la gestación, pocos días antes del nacimiento. Tras realizar un análisis 2D-DIGE encontramos que había 32 proteínas diferencialmente expresadas entre los grupos experimentales. Estos resultados demostraron que la vitrificación induce cambios sustanciales en la expresión de proteínas placentarias al final de la gestación, y que aparte de las consecuencias a corto plazo, la crioconservación embrionaria puede provocar consecuencias a largo plazo en esos fetos que al final nacen. Los resultados de esta tesis nos permiten suponer que la crioconservación embrionaria, bien sea por congelación o vitrificación, no debe ser neutral. Además, por primera vez se han observado modificaciones en los embriones vitrificados ya implantados. Basándonos en estos resultados, nuestro trabajo deja abierta la cuestión de si los efectos causados por la vitrificación durante el desarrollo fetal pueden conllevar algún tipo de alteraciones metabólicas o fisiológicas en la vida adulta.
Saenz De Juano Ribes, MDLD. (2014). Estudio del efecto de la crioconservación sobre la expresión génica de embriones de conejo [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/36957
TESIS
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Mamani, Herrera Patricia Mirelly. "Producción de embriones pre implantacionales in vitro mediante ICSI Y FIV en Vicugna pacos." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019. https://hdl.handle.net/20.500.12672/10294.

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Abstract:

Produce embriones preimplantacionales de alpaca in vitro utilizando el procedimiento ICSI así como la Fertilización in vitro convencional. Las muestras biológicas fueron colectadas en el camal municipal de Huancavelica y trasladadas en una solución de NaCl al 0.9% a 4 °C en un plazo de 20 a 22 horas aproximadamente. En el laboratorio, los complejos cumulus - oophorus (CCO) fueron aislados y cultivados a 38.5 °C, 5% de CO2 y 100% de humedad relativa durante 30 a 36 horas. Se trabajó con espermatozoides aislados de la zona caudal del epidídimo, estos fueron seleccionados por el método de Percoll y Swim up. La fertilización in vitro se llevó a cabo con una concentración de 2x106 esp/mL en medio HAM suplementado con heparina y PHE (Penicilamina-Heparina - Hipotaurina) como agentes capacitantes durante 18 horas, posteriormente fueron evaluadas y cultivadas en medio de desarrollo KSOM suplementado con SFB, piruvato sódico y gentamicina durante 7 días. Por otro lado, el procedimiento ICSI se realizó en el medio Global Total con Hepes con ayuda del microscopio invertido y sus accesorios para micromanipulación, posteriormente este protocolo fue complementado con una activación química de los ovocitos inyectados que consiste en la incubación en ionomicina 5uM durante 5 minutos seguido de una segunda incubación de 3 horas en 6-DMAP, el cual es necesario para algunas especies según la literatura. Al evaluar los resultados, se obtuvieron 17 embriones mediante FIV y 5 embriones mediante ICSI, es decir 36.9% y 31.3%, respectivamente. Se demostró que es posible la producción de embriones pre implantacionales de alpaca utilizando tanto la técnica de FIV como la de ICSI, pero que el porcentaje de éxito para ambos métodos no presenta diferencia significativa (p>0.05).
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Flores, Garrido Karín Margot. "Regeneración de blastómeros de trucha arco iris Oncorhynchus mykiss, Walbaum 1792 (Pisces : Salmonidae)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2002. https://hdl.handle.net/20.500.12672/819.

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Abstract:

Se evaluó la capacidad regenerativa de blastómeros de Oncorhynchus mykiss de 60 horas de desarrollo utilizando vitamina A, insulina, suero 2% (v/v) de “Trucha arco iris” en estadíos previos y posteriores al desove y medio Leibovitz L-15. Primero se obtuvo la sangre de trucha anestesiando a los peces en un baño de clorobutanol (600 mg/ml). A partir de ello, la relación encontrada entre el peso del animal, el tiempo de sedación y el tiempo de recuperación fue directa y en promedio la inducción se realizó en un tiempo menor que el reportado para el anestésico. Luego, el suero de trucha obtenido fue tratado con varias temperaturas por separado, obteniéndose la inactivación de las proteínas del complemento sólo con el suero tratado a 30°C. A continuación, las concentraciones más adecuadas de vitamina A e insulina para obtener regeneración de blastómeros fueron 0.6 UI/ml de vitamina A y 0.7 UI/ml de insulina. Utilizando otros tipos de sueros, como los de mujeres grávidas y no grávidas, se estableció que ninguno de ellos son útiles para este tipo de cultivo por tanto la utilidad del suero de “Trucha arco iris” es específica en la concentración probada (2%v/v). Finalmente, cada uno de los elementos componentes del medio regeneratriz – vitamina A, insulina, suero de trucha, medio Leibovitz L-15- desempeñan diferentes roles en el proceso. En ausencia de vitamina A e insulina de manera simultánea, de vitamina A, de suero, y en presencia sólo de medio Leibovitz la capacidad regenerativa de los embriones fue casi nula a diferencia de los cultivos sin insulina. La vitamina A fue de mayor importancia debido a su rol morfógeno y la insulina jugó un papel permisivo en el proceso regenerativo. Los resultados de la ausencia del suero demostraron que este elemento es clave para mantener la adherencia entre los blastómeros del embrión de trucha mientras que el medio Leibovitz no tuvo ninguna participación en el proceso regenerativo. Se establecieron las necesidades del proceso de regeneración de blastómeros de “Trucha arco iris”, basado en la importancia de cada uno de los factores que contribuyeron en el proceso regenerativo, con concentraciones adecuadas de vitamina A e insulina necesarias para desencadenar dicho fenómeno. Su aplicación futura es de suma relevancia tanto en acuicultura, medicina veterinaria y medicina humana.
--- The regenerative capacity of the 60 hours development Oncorhynchus mykiss blastomeres was evaluated utilizing vitamin A, insulin, pre or post-spawning rainbow trout serum 2%(v/v) and medium Leibovitz L-15. First, trout blood was obtained when the fishes were anesthetized with a bath of clorobutanol at 600 mg/ml. The relationship among animal weight, sedation time and recovery time was proportionally direct and the induction is realized in a less time than the reported for the anesthetic. Then, the trout serum obtained was treated with several temperatures, the proteins complement inactivation was optimal on treated serum at 30°C. Next, the more adequate concentrations of vitamin A and insulin for blastomeres regeneration were 0.6 IU/ml vitamin A and 0.7 IU/ml insulin. Using another kind of sera such as from pregnant and non-pregnant women, it is found out that no one was useful for the culture, so the usefulness of rainbow trout serum is specific in the proven concentration (2% v/v). Finally, each regenerating medium components – vitamin A, insulin, trout serum, medium Leibovitz– have different roles into the process. Without vitamin A and insulin of simultaneous manner, without vitamin A, serum and only utilizing medium Leibovitz the embryos regenerative capacity was almost null. The vitamin A was the more important factor to its morphogenic role and the insulin played a permissive paper in the regenerative process. The results from free-serum culture showed that element is key to maintain the adherence between blastomeres of trout embryo while medium Leibovitz had no participation into regenerative process. It is established the necessities for regeneration process in rainbow trout blastomeres, based on the importance of each factors that contributed for regeneration with adequate concentrations of vitamin A and insulin to trigger this phenomenon. Its application is relevant in aquaculture, veterinary and human medicine.
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Rodríguez, González Elisabeth. "Producción in vitro de embriones caprinos: sistemas de maduración citoplasmática de ovocitos de hembras prepúberes." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2003. http://hdl.handle.net/10803/5636.

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Abstract:

La producción in vitro (PIV) de embriones caprinos mediante técnicas de maduración, fecundación y cultivo embrionario in vitro (MIV-FIV-CIV) proporciona un elevado número de embriones utilizables a nivel científico y/o comercial.
El objetivo del este estudio ha sido seleccionar ovocitos de cabra prepuber y sistemas de maduración in vitro para mejorar la producción in vitro de embriones. Los ovocitos se maduraron en medio TCM199 + piruvato sódico + L-glutamina + gentamicina + 10% suero bovino de macho castrado (SS) + 10 mg/ml LH + 10 mg/ml o-FSH + 1 mg/ml 17b-estradiol. Tras 27 h de MIV, los ovocitos se inseminaron con semen fresco (3.5x106 espermatozoides/ml) en medio TALP suplementado con 1 mg/ml de hipotaurina. A las 24 h post-inseminación, se cultivaron en medio SOFm y se mantuvieron 7 días en cultivo.
En el Estudio 1, se evaluó la utilidad del test de Azul de Cresol Brillante (BCB) para seleccionar los ovocitos de cabras prepúberes. Los ovocitos BCB+ (ovocitos con citoplasma coloreado de azul, crecimiento finalizado) presentaron un mayor diámetro (136.6 ¡À 6.3 mm; P<0.001) y mayores tasas de maduración nuclear (81.4%; P<0.05), fecundación normal (23.5%; P<0.0001) y desarrollo más allá del estadio de 8 células (41.3%; P<0.001) y de mórulas más blastocistos (12.0%; P<0.05) que los ovocitos no coloreados de azul.
En el Estudio 2, se utilizó el Factor de Crecimiento Epid¨¦rmico (EGF), para la maduración in vitro. Para ello, se comparó un medio suplementado con hormonas (LH, FSH y 17b-estradiol) y suero (SS o FCS) con un medio suplementado con 10 ng de EGF en ausencia de suero y hormonas. El porcentaje de ovocitos fecundados de forma normal fue inferior (P<0.05) cuando se empleó EGF (17.3%) que SS (SS: 27.2%; FCS: 29.0%). Las tasas de embriones totales (71.5%) y de embriones que superaron el estadio de 8 células (26.2%) fueron superiores (P<0.05) al emplear SS y hormonas en el medio de maduración.
En el Estudio 3, se analizó el efecto de la adición de compuestos tiol (100 ¦ÌM de cisteamina, 100 ¦ÌM de b-mercaptoetanol, 0.57 mM de cisteína y 0.57 mM de cistina) al medio de MIV. Los ovocitos madurados en presencia de cisteamina y b-mercaptoetanol mostraron mayor capacidad (P<0.01) para formar el pronúcleo masculino tras la penetración espermítica (88.0% y 97.1%) y para ser fecundados (P<0.01) de forma normal (72.0% y 77.1%) comparados con el grupo control (62.2% y 37.8%, respectivamente). Asimismo, la adición de cisteamina al medio de MIV mejoró (P<0.05) el porcentaje de embriones que alcanzaron los estadios de mórula y blastocisto (22.2%) y la tasa de blastocistos expandidos (13.0%) respecto al grupo control (6.4% y 2.6%, respectivamente). La concentración de GSH intracelular (pmol/ovocito) fue superior en los ovocitos MIV que en los ovocitos inmaduros.
En el Estudio 4 se evaluó el efecto de la adición de cisteamina al medio de maduración de ovocitos de cabra prepúber seleccionados mediante el test de Azul de Cresol Brillante (BCB) sobre la maduración nuclear, fecundación y desarrollo embrionario in vitro. En presencia de cisteamina, el porcentaje de ovocitos BCB+ y madirados con cisteamina mejoraron la maduración nuclear, los fecundados normales, la formación del pronucleo masculino y el porcentage de embriones a las 8 celulas, comparados con el control y BCB-. En presencia de cisteamina, la formación de mórulas y blastocistos fue superior (P<0.001) en los ovocitos BCB+ (23.8%).
En conclusión, la selección ovocitaria mediante el test de BCB y la MIV en presencia de cisteamina permiten una mayor capacidad de desarrollo tras MIV-FIV-CIV. Sin embargo, a pesar de obtener resultados aceptables en los parámetros de maduración nuclear y de fecundación in vitro, el desarrollo embrionario continúa siendo reducido.
In vitro production (IVP) of caprine embryos using techniques of in vitro maturation, fertilization and embryo culture (IVM-IVF-IVC) provide a high number of embryos.
The aim of the present studies has been the establishment of a system of selection and in vitro maturation of oocytes adequate for competence to develop until blastocyst after in vitro fertilization and embryo culture. For this, oocytes were matured in TCM199 + sodium pyruvate + L-glutamine + gentamicine + 10% steer serum (SS) + 10 mg/ml LH + 10 mg/ml o-FSH + 1 mg/ml 17b-estradiol. After 27 h of IVM, the oocytes were inseminated with fresh sperm (3.5x106 sperm/ml) in TALP medium supplemented with 1 mg/ml hypotaurine. A t 24 h post-insemination, the presuntive zygotes were cultued in SOFm medium and were maintained 7 days in culture.
In Study 1, the utility of the Brilliant Cresyl Blue (BCB) test was evaluated . The BCB+ oocytes (oocytes with blue coloured cytoplasm, fully-grown oocytes) presented a bigger diameter(136.6 ¡À 6.3 mm; P<0.001) and higher rates of nuclear maturation (81.4%; P<0.05), normal fertilization (23.5%; P<0.0001), development beyond the 8-cell stage (41.3%; P<0.001) and morulae plus blastocyts (12.0%; P<0.05) .
In Study 2, the use of an chemically defined medium, based in Epidermal Growth Factor (EGF) for the in vitro maturation of prepubertal goat oocytes was investigated. A medium supplemented with hormones and serum (SS or FCS) was compared with a medium with 10 ng EGF. The percentage of normally fertilized oocytes was lower when EGF (17.3%) was employed (SS: 27.2%; FCS: 29.0%). The rate of total embryos (71.5%) and embryos that developed beyond the 8-cell stage (26.2%) were higher (P<0.05) when SS and hormones was used.
In Study 3, the effect of the addition of thiol compounds (100 ¦ÌM cysteamine, 100 ¦ÌM b-mercaptoethanol, 0.57 mM cysteine and 0.57 mM cystine) to the IVM medium was analyzed. The oocytes matured in the presence of cysteamine and b-mercaptoethanol showed a better ability to form the MPN and to be normally fertilized (P<0.01; 72.0% y 77.1%) compared to the control group. The addition of cysteamine to the IVM medium improved the percentage of embryos that reached the m¨®rula plus blastocyst stage (22.2%) and the expanded blastocyst formation rate (13.0%) related to the control group. The intracellular GSH concentration (pmol/oocyte), was higher in the oocytes tIVM than immature oocytes.
In Study 4, the addition of cysteamine to the IVM medium of oocytes selected by the Brilliant Cresyl Blue (BCB) was studied. The control group oocytes, no exposed to the BCB test, were matured in the same medium, but without cysteamine. In the presence of cyteamine, the percentage of oocytes that matured nuclearly was of BCB+ oocytes (89.5%)., while this rate was higher in the presence of cysteamine (77.8%). 97.0% of the penetrated oocytes exhibited ability to form MPN and a 69.7% were able to develop the 2 pronuclei, being these percentages significantly higher. The exposed oocytes to the BCB with cysteamine showed a lower percentage of non-decondensed heads (3.0%) than the control group (25.6%). Embryos developed beyond the 8-cell stage was higher in the BCB+ (68.3%). Likewise, in the presence of cysteamine, the morule plus blastocysts formation rate was higher (P<0.001) in the BCB+ oocytes (23.8%) related to the BCB- oocytes (5.1%).
In conclusion, oocytes selection using the BCB test and the IVM in the presence of cysteamine allow a better development ability after IVM-IVF-IVC. In the present studies, we have been able to confirm an improvement in the oocytes development in relation with the initial IVM system, acting on growing and final maturation phases.

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García, Mengual María Elena. "OPTIMIZACIÓN DE LAS ESTRATEGIAS REPRODUCTIVAS DE MICROMANIPULACIÓN PARA LA PRODUCCIÓN IN VITRO DE EMBRIONES PORCINOS." Doctoral thesis, Universitat Politècnica de València, 2016. http://hdl.handle.net/10251/61448.

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Abstract:

[EN] In vitro production (IVP) of embryos has multiple applications, including the development of transgenic / genetically modified animals that are of broad utility in the biomedical field and could reach to be so in agriculture. In this sense, the intracytoplasmic sperm injection (ICSI) with transfected sperm, such as somatic cell nuclear transfer (SCNT) with transfected cells, have proved to be valid strategies to generate animals with stably integrated exogenous DNA, capable of transmitting to their offspring. However, to make it feasible the availability of a large number of IVP embryos it's necessary. Despite the development of IVP systems of pig embryos for these strategies in the last decades, and a high variety of protocols, there are still some critical issues that limit embryonic development and therefore its application on a large scale. The main objective of this thesis has then pursued, optimizing the ICSI and SCNT protocols in order to improve the viability of IVP porcine embryos. The initial approach was to address the study both in vitro maturation (IVM) and oocyte activation within the SCNT frame. To this end, the most efficient electrical activation protocol under our working conditions was selected from among three proposals, and we then studied the effect of serum supplement on IVM medium, noticing that it doesn't increase the development of partenogenetic embryos produced by electrical activation nor of those produced by SCNT. Moreover, and in order to optimize the ICSI technique, different aspects such as Ca2+ concentration in the microinjection medium, sperm pretreatment with Triton X-100 (TX) and the addition of cysteine or caffeine supplements to the in vitro culture (IVC) medium post-ICSI, were studied in order to promote sperm nucleus decondensation and oocyte activation. Noticing that: i) the concentration of Ca2+ did not influence the cleavage rate, or the development of partenogenic embryos from microinjected oocytes without sperm (sham injection); ii) caffeine did not increase either the pronuclear formation neither the subsequent embryo development, in combination with TX sperm pre-treatment it reduced oocyte activation and embryo development rates; iii) the pronuclear formation was not increased by the sperm pre-treatment with TX nor by the cysteine treatment, regardless of the time of the study assessment.
[ES] La producción in vitro (PIV) de embriones goza de múltiples aplicaciones, entre las que cabe destacar la obtención de animales transgénicos/modificados genéticamente que resultan de amplia utilidad en el ámbito biomédico y podrían llegar a resultarlo en el agropecuario. En este sentido, tanto la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) con espermatozoides transfectados, como la transferencia nuclear de células somáticas (SCNT) con células transfectadas, han demostrado ser estrategias válidas para generar animales con ADN exógeno integrado de manera estable, capaces de transmitirlo a su descendencia. Sin embargo, para lograrlo es necesario disponer de un gran número de embriones PIV. A pesar del desarrollo durante las últimas décadas de sistemas de PIV de embriones de porcino para estas estrategias, y la disponibilidad de gran variedad de protocolos, persisten aún ciertos puntos críticos que limitan el desarrollo embrionario y por lo tanto su aplicación a gran escala. El objetivo principal de esta tesis ha perseguido por lo tanto, la optimización de los protocolos de ICSI y SCNT con el fin de mejorar la viabilidad de los embriones PIV de porcino. El planteamiento inicial consistió en abordar el estudio tanto de la maduración in vitro (MIV) como de la activación oocitaria en el marco de la SCNT. Para ello se seleccionó de entre tres propuestas de activación artificial, el protocolo de activación eléctrica (que resultó ser el más eficiente bajo nuestras condiciones de trabajo), y se estudió a continuación el efecto del suplemento de suero en el medio de MIV, constatando que no se incrementaba el desarrollo de embriones partenogenotas producidos mediante activación eléctrica ni de aquellos producidos mediante SCNT. Por otra parte, y con el fin de optimizar la técnica de ICSI se abordaron diferentes aspectos como la concentración de Ca2+ en el medio de microinyección, el pre-tratamiento espermático con Triton X-100 (TX), así como la adición de suplementos de cafeína o cisteína al medio de cultivo in vitro (CIV) pos-ICSI, con el fin de favorecer la descondensación del núcleo espermático y la activación oocitaria. Observando que: i) la concentración de Ca2+ no influyó en la tasa de división, ni en la de desarrollo de embriones partenogenotas procedentes de oocitos microinyectados sin espermatozoide (sham injection); ii) la cafeína no incrementó la formación pronuclear ni en el desarrollo embrionario posterior, y en combinación con el pre-tratamiento espermático con TX redujo la activación oocitaria y el desarrollo embrionario; iii) la formación pronuclear no se vio incrementada por el pre-tratamiento espermático con TX ni por el tratamiento con cisteína, independientemente del momento de la evaluación estudiado.
[CAT] La producció in vitro (PIV) d'embrions gaudeix de múltiples aplicacions, entre les quals cap assenyalar l'obtenció d'animals transgènics/modificats genèticament que resulten d'àmplia utilitat en el àmbit biomèdic y podrien arribar a ser-ho en el àmbit agropecuari. En aquest sentit, tant la injecció intracitoplasmàtica d'espermatozoïds (ICSI) amb espermatozoïds transfectats, com la transferència nuclear de cèl.lules somàtiques (SCNT) amb cèl.lules transfectades, han demostrat ser estratègies vàlides per a l'obtenció d'animals amb ADN exogen integrat de manera estable, capaços de transmetrela a la seva descendència. No obstant això, per aconseguir-ho és necessari disposar d'un gran nombre d'embrions PIV. Malgrat el desenvolupament durant les últimes dècades de sistemes de PIV d'embrions de porcí per a aquestes estratègies, i la disponibilitat de gran varietat de protocols, persisteixen encara certs punts crítics que limiten el desenvolupament embrionari i per tant la seva aplicació a gran escala. L'objectiu principal d'aquesta tesi ha perseguit per tant, l'optimització dels protocols d' ICSI i SCNT per tal de millorar la viabilitat dels embrions PIV de porcí. El plantejament inicial va consistir en abordar l'estudi tant de la maduració in vitro (MIV) com de l'activació oocitària en el marc de la SCNT. Per a això es va seleccionar entre tres propostes d'activació artificial, el protocol d'activació elèctrica (que va resultar ser el més eficient sota les nostres condicions de treball), i es va estudiar a continuació l'efecte del suplement de sèrum en el medi de MIV, constatant que no va incrementar el desenvolupament d'embrions partenogenotes produïts mitjançant activació elèctrica ni d'aquells produïts mitjançant SCNT. D'altra banda, i per tal d'optimitzar la tècnica de l'ICSI es van abordar diferents aspectes com la concentració de Ca2 + en el medi de microinjecció, el pretractament espermàtic amb Triton X-100 (TX), així com l'addició de suplements de cafeïna o cisteïna al mitjà de cultiu in vitro (CIV) pos-ICSI, per tal d'afavorir la descondensació del nucli espermàtic i l'activació oocitària. Observant que: i) la concentració de Ca2+ no va influir en la taxa de divisió, ni en la de desenvolupament d'embrions partenogenotes procedents d'oòcits microinjectats sense espermatozoïd (sham injection); ii) la cafeïna no va incrementar la formació pronuclear ni en el desenvolupament embrionari posterior, i en combinació amb el pretractament espermàtic amb TX va reduir l'activació oocitària i el desenvolupament embrionari; iii) la formació pronuclear no es va veure incrementada pel pretractament espermàtic amb TX ni pel tractament amb cisteïna, independentment del moment de l'avaluació estudiat.
García Mengual, ME. (2016). OPTIMIZACIÓN DE LAS ESTRATEGIAS REPRODUCTIVAS DE MICROMANIPULACIÓN PARA LA PRODUCCIÓN IN VITRO DE EMBRIONES PORCINOS [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/61448
TESIS

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Valdivieso, Díaz Gustavo Adolfo. "Efecto del extracto acuoso de Maytenus macrocarpa “Chuchuwasi” sobre embriones preimplantacionales de ratón (Mus musculus)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016. https://hdl.handle.net/20.500.12672/4911.

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Abstract:

Maytenus macrocarpa (MM) (Ruiz & Pav.) Briq. es un árbol utilizado por poblaciones amazónicas de forma medicinal, para el control de la fertilidad. El objetivo de este trabajo es evaluar el efecto abortivo potencial de diferentes dosis del extracto acuoso de Maytenus macrocarpa “chuchuwasi” (25, 50 y 100 mg/kg) sobre embriones preimplantacionales de ratón de la cepa albina Swiss Rockfeller. El extracto es administrado a los ratones vía intraperitoneal entre el primer y cuarto día de gestación. Evalúa la calidad y desarrollo de los embriones. Aplica el test de Micronucleo (MN) a fin de conocer si el extracto de MM era genotoxico. Ninguno de los tratamientos muestra significancia en el número de embriones degradados o inviables y en la tasa de MN. Los resultados sugieren que el extracto acuoso de M. macrocarpa no tiene un efecto sobre el desarrollo normal de los embriones.
Tesis

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Gil, Corbalán María Antonia. "Influencia de diferentes condiciones de cocultivo sobre la fecundación y la producción in vitro de embriones porcinos." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2001. http://hdl.handle.net/10803/10979.

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Abstract:

Para reducir la incidencia de las penetraciones polispérmicas en los sistemas de fecundación in vitro porcina (FIV), los objetivos del presente trabajo fueron estudiar: 1) el efecto de tres volúmenes de medio de coincubación (2, 1 y 0'1 ml) y tres números de ovocitos (50, 30 y 15), inseminados con 6 x 105 espermatozoides /ml (primera experiencia) y 2000:1 espermatozoides:ovocito (segunda experiencia); 2) el efecto de la presencia de células del cumulus durante la FIV de ovocitos inseminados con diferentes ratios espermatozoides:ovocito (2000:1; 3000:1; 4000:1, 6000:1 y 8000:1), en 0'1 ml de medio de fecundación, con 30 ovocitos. Ovocitos madurados in vitro y denudados inseminados con 2000 espermatozoides por ovocito fueron el grupo control; y 3) el efecto de tiempos cortos de coincubación ovocitos-espermatozoides durante la FIV (10, 30 y 60 min) sobre la eficiencia de la FIV porcina.
To decrease the high incidence of polyspermy penetration of porcine oocytes fertilized in vitro (IVF), the aim of this study was to evaluate: 1) the effect of three volume of co-incubation medium (2, 1 and 0.1 ml) and three number of oocytes (50, 30 and 15), inseminated with 6 x l05 sperm/ml (first experience) and 2000:1 spermatozoa:oocyte (second experience); 2) the effect of cumulus cells during IVF of oocytes inseminated with different espermatozoa:oocytes rates (2000: 1, 3000: 1, 4000: 1, 6000: 1 and 8000: 1), in 0.1 ml of volume of IVF medium, with 30 oocytes. Denuded matured oocytes inseminated with 2000 spermatozoa:oocyte were the control group; and 3) the effect of short-times that oocytes are exposed to the sperm during IVF (10, 30 and 60 min) on the efficiency of pig IVF.

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Rodríguez, Limidoro Javiera Ignacia. "Expresión de enzimas involucradas en la adquisición de la flotabilidad de huevos y embriones de Seriola lalandi." Tesis, Universidad de Chile, 2016. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/144986.

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Abstract:

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario.
En especies pelágicas como S. lalandi, se ha descrito que la flotabilidad en huevos y embriones es el reflejo de la viabilidad y calidad de estos. Esta característica, se adquiere con la proteólisis del vitelo provocando la hidratación y generando nutrientes para el desarrollo del embrión. Las enzimas involucradas en este proceso son las catepsinas, por lo que han sido propuestas como biomarcadores de calidad en estas especies. Con el objeto de conocer aspectos moleculares involucrados en la adquisición de la flotabilidad en S. lalandi, se evaluó la relación entre la expresión del mRNA que codifica para las catepsinas B, D y L y el nivel de flotabilidad de huevos y embriones tempranos de S. lalandi previamente categorizados como flotantes y no flotantes. Para esto, se colectaron muestras con distintos niveles de flotabilidad y en diferentes etapas del desarrollo. La expresión se evaluó en forma relativa mediante RT-qPCR utilizando partidores diseñados por alineamiento de secuencias de otros peces teleósteos. Los niveles de mRNA de catepsina B fueron mayores en los estadíos de huevo, mórula y blástula, sin diferencias significativas (p> 0,05) entre estadíos. En el estadío de gástrula la expresión de catepsina B disminuyó significativamente, sin presentar cambios en embriones de 24 horas. El mayor nivel de expresión de catepsina D se registró en los huevos no flotantes en comparación con los flotantes. En otros estadíos la expresión de catepsina D no presentó diferencias relacionadas con la flotabilidad de los embriones. Catepsina L, por el contrario, tuvo mayores niveles de expresión en huevos flotantes, así como también en los estadíos de gástrula y embriones de 24 horas con flotabilidad positiva. La expresión del mRNA de estas enzimas en diferentes etapas del desarrollo temprano de S. lalandi confirman su rol descrito en especies pelágicas, cumpliendo funciones específicas en la degradación de las proteínas del vitelo. Además, los perfiles de expresión observados en muestras flotantes y no flotantes permiten proponer a catepsina L como un marcador de buena calidad y a catepsina D como un marcador de mala calidad para los huevos de S. lalandi.
In pelagic species such as S. lalandi, it has been described that the buoyancy in eggs and embryos reflect their viability and quality. This feature is acquired with the yolk proteolysis, which is responsible for the hydration process and generates nutrient for the embryos. The enzymes involved in this process are the cathepsins, which have been proposed as quality biomarkers in these species. In order to know molecular aspects involved in the acquisition of buoyance in S. lalandi, the expression of cathepsin B, D and L was assessed in eggs and early embryos previously classified as floating and non- floating samples. For this, floating and non- floating samples in different developmental stages were collected. Relative expression was evaluated by RT-qPCR using primers designed from sequence alignment of others teleost fish. Cathepsin B mRNA expression levels where higher in eggs, morula and blastocyst stage, with none- statistically significant differences (p> 0,05) between these stages. In gastrula stage, the cathepsin B expression decreased significantly, without changes in 24 hours embryos. The highest expression level of cathepsin D was recorded in non-floating eggs, in comparison with those floating. In others stages, cathepsin D expression did not show differences related with the embryo buoyancy. On the contrary, cathepsin L had higher expression levels in floating eggs as well as in gastrula stage and 24 hours embryos with positive buoyancy. The enzymes mRNA expression during different early development stages in S. lalandi confirms their role described in pelagic species in the yolk protein degradation. In addition, the expression profiles observed in floating and non-floating samples allow proposing to cathepsin L as a good quality marker and cathepsin D as poor quality marker in S. lalandi eggs.
Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 11140639.

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Urdaneta, Vargas Aixa Efrailda. "Utilización de compuestos tiol en la producción in vitro de embriones a partir de ovocitos de cabras prepúberes." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2005. http://hdl.handle.net/10803/5659.

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Abstract:

Con el fin de mejorar la producción in vitro de embriones (PIVE) desde ovocitos de cabra perpúber, fueron diseñados tres estudios en esta investigación. El objetivo del primer estudio fue determinar en ovocitos seleccionados mediante el test azul de cresol brillante (BCB), el efecto de la adición de gutatión (GSH) solo o en combinación con glucosa al medio de cultivo in vitro (CIV), sobre el desarrollo embrionario de ovocitos de cabra perpúber. Los ovocitos fueron expuestos al test de BCB y fueron clasificados como: ovocitos con citoplasma azul (BCB+) y ovocitos sin el citoplasma azul (BCB-). Los ovocitos BCB+ mostraron mayor porcentaje de maduración nuclear que los ovocitos BCB- y grupo control (82.6%, 55.7% y 74.7% respectivamente). El porcentaje de ovocitos poliespérmicos fue mayor en ovocitos BCB- que en los BCB+. La suplementación del medio de cultivo (CIV) con 1 mM de GSH, no afectó el desarrollo embrionario, pero el porcentaje de embriones totales desarrollados después del cultivo fue mayor en ovocitos BCB+ que en los BCB-, independientemente de la suplementación con GSH. La adición de glucosa, sola o con GSH no afectó el desarrollo embrionario. La finalidad del segundo estudio era evaluar el efecto de agregar diferentes concentraciones de cisteamina (100μM, 200μM o 400μM) al medio de MIV y al medio de CIV (50 μM o 100 μM) sobre el desarrollo embrionario de ovocitos de cabra perpúber seleccionados por el test BCB. La adición de 400 μM de cisteamina al medio MIV mejoró la fecundación normal y desarrollo embrionario de ovocitos BCB- a los mismos niveles de los ovocitos BCB+. Las proporciones de mórulas mas blastocistos desarrollados no fueron afectados por los tratamientos. Finalmente, fue estudiado el efecto de la adición de cisteamina (400 μM) para el medio de MIV, glutatión (1mM) al medio FIV e ionomicina al medio de capacitación espermática. Este tratamiento mejoró la fecundación normal, cigotos con pronúcleos masculinos y el desarrollo embrionario de ovocitos de cabra prepuber, sin embargo no mejoró el desarrollo de blastocistos.
With the aim of trying to improve in vitro embryo production (IVEP) from prepubertal goat oocytes, three studies were designed in this investigation. The objetive of first study was to assess, in oocytes selected by the brillant cresyl blue (BCB) test, the effect of the addition to in vitro culture (IVC) medium of either glutathione (GSH) alone or GSH in combination with glucose on the embryo development. Oocytes were exposed to BCB and were classified as: oocytes with a blue cytoplasm (BCB+) and oocytes without blue cytoplasm (BCB-). BCB+ oocytes showed higher percentage of nuclear maturation than the BCB- and control group (82.6%, 55.7% and 74.7%, respectively). The percentage of polyspermic oocytes was higher in BCB- than BCB+ oocytes. Supplementation of in vitro culture (IVC) medium with 1mM de GSH did not affect embryo development, but the porcentage of total embryos developed after culture was higher in BCB+ oocytes than in BCB- oocytes independently of the GSH supplementation. The addition of glucose, alone or with GSH, did not affect embryo development. The aim of the second study was to evaluate the effect of adding different concentrations (100μM, 200μM and 400 μM) of cyteamine to the IVM medium and to the in vitro embryo culture (IVC) medium (50 μM or 100 μM) on the embryo development of prepubertal goat oocytes BCB-selected. The addition of 400 μM cysteamine to the IVM improved normal fertilisation and embryo development of BCB- oocytes at the same rates as those obtained from BCB+ oocytes. The proportions of morulae plus blastocyst development were not affects by the treatments. Finally, was studied the effect of adding cysteamine (400 μM) to IVM medium, glutathione (1mM) to IVF medium and ionomycin to the sperm capacitation medium. This treatment improved normal fertilisation, zygotes with male pronucleus and embryo development of prepubertal goat oocytes, however did not improve blastocyst development.

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Morales, Puga Agus. "Luz y materia. La poesía última y la pintura de Rabindranath Tagore como embriones de la modernidad india." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2012. http://hdl.handle.net/10803/96702.

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Abstract:

La obra del poeta indio Rabindranath Tagore (1861-1941) ha recibido notable atención académica pero su recepción en Occidente se ha visto dificultada por problemas de traducción y por una interpretación esencialista de la etapa Gitanjali u Ofrenda lírica, que precedió a la concesión del Premio Nobel de Literatura al escritor bengalí en 1913. La penetración de su vasta obra en Occidente y en particular en el mundo hispano es desigual e ignora tanto su obra última como sus incursiones en otros ámbitos como la pintura, la filosofía o la narrativa. Esta tesis hace dialogar la lírica última (1937-1941) y la pintura de Tagore (1924-1941). El estudio se centra en libros de poesía prácticamente desconocidos para el lector occidental: Prantik, Senjuti, Akashpradip, Nabajatak, Rogsayay, Arogya, Janmadine y Sesh Lekha; y en las aproximadamente 2.300 obras pictóricas de Rabindranath, que incluyen dibujos y pinturas. De los poemas postreros, la tesis destaca su “giro lingüístico oriental”, es decir, la intensa conciencia lingüística del escritor bengalí en sus últimos años, que le hace plantearse cuestiones fundamentales de la filosofía del siglo XX como la cortedad del decir y el poder del lenguaje. Es necesario el adjetivo “oriental” porque sus versos conservan el sentido de la inmanencia y un panteísmo poético construido a partir de la innovación métrica. Sus poemas, que décadas atrás eran largos y densos, tienden hacia el epigrama y la meditación. Luz y materia propone una mirada fresca a los “papeles” de Tagore, llamados así porque el escritor bengalí dibujó y pintó casi siempre sobre esta superficie. La tesis huye de los planteamientos que someten su pintura a su ingente obra escrita y da plena autonomía al medio artístico. En concreto, sitúa al legado pictórico de Tagore como uno de los tres vértices de la modernidad artística india, junto a las obras de Jamini Roy y Amrita Sher-Gil. El embrión de su tardía obra plástica es el manuscrito del libro de poemas Purabi (1925). Sus primeras creaciones fantásticas, que nacen de la letra bengalí, van independizándose con los años y destacan por usar un vocabulario indio en la órbita del expresionismo y el primitivismo. Este trabajo comparativo señala a la poesía última y la pintura de Tagore como un corpus fundamental para la construcción del lenguaje moderno poético y pictórico de la India. Establece que el diálogo entre los dos ámbitos fue imprescindible para espolear la exploración de los límites expresivos de ambos. Es un diálogo transformador que parte de una reflexión sobre el lenguaje poético y pictórico y que convierte este legado en un embrión de la modernidad india. Una de las aportaciones más originales de la tesis es la propuesta de dos marcos teóricos para el estudio de la cultura india. La modernidad literaria india (1800-1941) se caracteriza por la lenta desaparición de la poesía oral, el cambio de paradigma lingüístico propiciado por la introducción del inglés como nueva lengua de prestigio y la revisión crítica de la civilización india. La modernidad artística (1850-1941) tiene como ejes la aparición fugaz del realismo victoriano, la respuesta orientalista y la superación de ambos horizontes. En cuanto a Tagore, la tesis arroja luz sobre una región pálida de su poesía y descubre su pintura como un pico oculto del arte universal. En el texto se incluyen por primera vez poemas del escritor indio traducidos directamente del bengalí al español.

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Machuca, Vargas Alejandra Patricia. "EFECTO DE LA ESTRATIFICACIÓN DE EMBRIONES Y ESCARIFICACIÓN DE SEMILLAS SOBRE EL CRECIMIENTO DE Alstroemeria spp. IN VITRO." Tesis, Universidad de Chile, 2006. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/101853.

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Jervis, Secaira Miguel Eduardo. "Determinación del potencial de migración y estimulación de angiogénesis in vitro de células madre mesenquimáticas derivadas de médula ósea y tejido adiposo fetal bovino." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/145010.

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Abstract:

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias.
Las células madres mesenquimáticas (MSC) se han caracterizado inicialmente por su potencial de autorenovación y diferenciación in vitro hacia linajes celulares mesodérmicos. Sin embargo; el potencial terapéutico de las MSC se basa principalmente en sus capacidades de migración y angiogénesis importantes para la regeneración tisular. El objetivo del presente estudio fue determinar los potenciales de migración y angiogénesis de las MSC derivadas de médula ósea (MSC-MO) y de tejido adiposo (MSC-TA) fetales bovinas. El ensayo de migración scratch se utilizó para determinar la capacidad migratoria de las MSC, utilizando fibroblastos (FB) fetales como controles biológicos. Para este ensayo se cultivaron 44 x 103 células/cm2 hasta alcanzar 80% de confluencia. Luego de 24 horas, se realizó el scratch en la monocapa de cada línea celular y el área de migración fue cuantificada en el tiempo 0 y luego de 24 horas mediante el software ImageJ. El análisis de migración transwell, se utilizó para determinar el potencial de migración celular en respuesta al quimiotáctico factor derivado de células estromales-1 (SDF-1). Para este análisis se cultivaron 25x103 células/mL por 24 horas, en respuesta a SDF-1 ulilizando 5% suero fetal bovino (SFB) y medio DMEM como controles. Las células que migraron hacia el lado inferior de la membrana transwell fueron observadas y cuantificadas mediante el software ImageJ. Para el análisis del potencial angiogénico de MSC, se realizó el ensayo de formación de túbulos. Células endoteliales de aorta bovina fetal fueron aisladas y resuspendidas en medios condicionados de MSC-MO, MSC-TA y FB. Luego de 6 horas de incubación a 38°C en 5% CO2 se observó y cuantificó la formación de estructuras tubulares utilizando el software ImageJ. La expresión de genes de migración, SDF-1, su receptor CXCR4 y la quimiocina secretada y expresada por linfocitos T normales regulada por activación (RANTES) y de genes de angiogénesis, factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y angiopoyetina 1 (ANGPT1) fue cuantificada mediante PCR cuantitativo (Q-PCR). Los datos obtenidos fueron analizados estadísticamente por ANOVA de una vía y para las diferencias entre los promedios se utilizó el post test de tuckey, utilizando el software InfoStat. Mediante ensayo scratch se determinó un mayor (p<0,05) porcentaje de migración in vitro en cultivos de MSC-MO comparado con FB. Sin embargo; los porcentajes de migración no fueron distintos (p>0,05) entre MSC-MO y MSC-TA. El ensayo transwell permitió determinar un mayor (p<0,05) número de células migrantes en cultivos tratados con DMEM suplementado con 5% de SFB. Sin embargo; no se detectaron diferencias significativas entre líneas celulares. Se determinó que los niveles de mRNA de SDF-1 fueron mayores (p<0,05) en MSC-TA comparado con MSC-MO y FB. Los niveles de mRNA de RANTES fueron mayores (p<0,05) en MSC-TA comparado con FB. Sin embargo; los niveles de mRNA de CXCR4 no fueron distintos (p>0,05) entre las líneas celulares en estudio. El medio condicionado concentrado de MSC-TA indujo mayor (p<0,05) formación de túbulos, comparado con MSC-MO, FB y sus controles DMEM con 5% de SFB y DMEM. Además, se cuantificó una mayor (P<0,05) expresión de VEGF en MSC-TA comparado con las otras líneas celulares. En comparación, la expresion de ANGPT1 fue mayor (p<0,05) en MSC-MO y FB comparado con MSC-TA. En conclusión, el potencial de migración entre MSC-MO y MSC-TA es similar, lo cual puede estar determinado por niveles de expresión similares del receptor CXCR4. A su vez, una mayor expresión de VEGF en MSC-TA puede determinar que estas células presenten una mayor capacidad angiogénica comparado con MSC-MO.
Mesenchymal stem cells (MSCs) were initially characterized by their potential for self-renewal and in vitro differentiation into mesodermal cell lines. However, the therapeutic potential of MSCs is primarily based on their migration and angiogenic capacities, which are important for tissue regeneration. The objective of the present study was to determine the migration and angiogenic potentials of MSCs derived from bone marrow (MSC-MO) and adipose fetal bovine tissue (MSC-TA). The scratch migration assay was used to determine the migratory capacity of MSC, using fetal fibroblasts (FB) as biological controls. For this, 44 x 103 cells/cm2 were cultured until 80% confluence. After 24 hours, the scratch was performed in the monolayer of each cell line culture and the migration area was quantified at time 0 and after 24 hours using ImageJ software. The transwell migration analysis was used to determine cell migration capacity in response to the chemokine stromal differentiation factor-1 (SDF-1). For this assay, 25x103 cells/mL were grown for 24 hours in response to SDF-1, using as SFB 5% and DMEM as controls. Cells that migrated to the underside of the transwell membrane were observed and quantified using the ImageJ software. In order to determine the angiogenic potential of MSC, the tubule formation test was performed. Endothelial cells of bovine aorta were isolated and resuspended in conditioned media of each cell line. After 6 hours of incubation, the number of tubular structures was quantified and analyzed using ImageJ software. The relative expression levels of migration genes SDF-1, its receptor CXR4, regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted (RANTES) and angiogenic genes vascular endothelial growth factor (VEGF) and angiopoietin (ANGPT1) were analyzed using quantitative-PCR (Q-PCR). The data obtained were statistically analyzed by one-way ANOVA and the tuckey post test was used to determine differences between means, using InfoStat software.The scratch test allowed to determine a higher (p<0.05) percentage of migration in MSC-MO cultures compared to FB. However, migration rates were not different (p>0.05) between MSC-MO and MSC-TA. The highest (p <0.05) number of migrant cells in the transwell test was detected in cultures treated with DMEM supplemented with 5% FBS. However, no significant differences were detected between cell lines. SDF-1 mRNA levels were higher (p <0.05) in MSC-TA compared to MSC-MO and FB. Similarly, RANTES mRNA levels were higher (p <0.05) in MSC -TA compared to FB. CXCR4 mRNA levels were not different (p> 0.05) between cell lines. Concentrated conditioned (CC) media of MSC-TA induced greater (p <0.05) tubule formation, compared to CC of MSC-MO, FB and its controls. Moreover, the highest (P <0.05) expression of VEGF was observed in MSC-TA, compared to the other cell lines. In the case of the expression of ANGPT1 the expression was higher in MSC-MO and FB compared to MSC-TA. In conclusión, a similar migration potential between MSC-MO and MSC-TA may be associated to similar expression of the CXCR4 receptor. Moreover, higher expression of VEGF in MSC-TA may explain the greater angiogenic capacity of these cells compared to MSC-MO.
Financiamiento: Proyecto Fondef ID 15I10129.

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Reyes, Hernández Paulina. "Producción de anticuerpos policlonales contra el silenciador de la transcripción del elemento represor (REST) de Xenopus laevis." Tesis, Universidad de Chile, 2005. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/130917.

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Abstract:

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La regulación transcripcional negativa es un mecanismo importante de control de la expresión de genes que contribuyen en el fenotipo neuronal. El elemento represor de la transcripción REST/NRSF ha sido propuesto como un regulador negativo de muchos genes de diferenciación neuronal terminal, expresándose en células no neuronales, precursores neuronales y neuronas en diferenciación. El papel de REST in vivo durante la diferenciación del sistema nervioso aún se desconoce, dada, entre otras, la letalidad de la pérdida de función de REST en ratones. El laboratorio en el que se desarrolló esta memoria de título ha utilizado otro organismo modelo, Xenopus laevis, a partir del cual se han obtenido resultados compatibles con la participación de REST en procesos muy tempranos del desarrollo neural. La interpretación de estos resultados requiere del análisis de los patrones de expresión de la proteína REST, lo que origina el objetivo principal de esta memoria de título: generar anticuerpos policlonales contra REST/NRSF de Xenopus laevis, para luego ser probados en embriones de Xenopus en diferentes estadíos del desarrollo. La electrotransferencia de extractos de embriones, evidenció que el suero antiREST es inmunoreactivo a una proteína de ~200 KDa, la cual está presente en embriones en los estadíos de clivaje, blástula, gástrula, neurula y organogénesis. En embriones inyectados con un morfolino antisentido de REST, el suero antiREST no detectó ninguna proteína; a diferencia de los embriones control no inyectados, en los cuales reconoció una proteína de ~200 KDa. Estos resultados son compatibles con la idea de que el suero antiREST reconoce la proteína REST endógena de Xenopus laevis. Por otra parte, el suero antiREST no resultó ser de utilidad en el reconocimiento de la proteína REST en embriones y en cortes de ellos mediante inmunohistoquímica

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Apari, Cossio Eduardo Fabio. "Descripción de cambios transcripcionales durante estadios tempranos del desarrollo del lenguado Paralichthys adspersus." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2019. https://hdl.handle.net/20.500.12672/11517.

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Abstract:

Describe los cambios transcripcionales ocurridos durante los estadios tempranos del desarrollo de P. adpsersus con el fin de identificar genes involucrados en su desarrollo normal. Así a partir de secuenciación del ARN de individuos pre-metamórficos (3 días post eclosión, dpe), metamórficos (40 dpe) y post-metamórficos (60 dpe), y obtención de supertranscriptomas, se realizó el análisis de expresión diferencial de transcriptos para seleccionar aquellos sobreexpresados en cada estadio. Se observó un perfil de expresión similar entre estadíos de desarrollo de 40 y 60 dpe, mientras que para 3 dpe ocurren procesos de sobreexpresión y subexpresión génica. Por otro lado, el mayor número de transcriptos sobreexpresados se registró, en la comparación por pares, en la etapa pre-metamórfica de 3 dpe (n=344), seguido por la etapa de post metamorfosis a 60 dpe (n=144), y la de menor número durante la etapa final de la metamorfosis a 40 dpe (p<0.001, fold change = 4); mientras que el mayor número de términos ontológicos se obtuvo a partir de transcriptos obtenidos durante larvas de 3 dpe (n=429), seguido por 60 dpe (n=120), y el menor número durante 40 dpe (n=2). Finalmente, se registraron 33, 0 y 2 genes relacionados con el desarrollo en los individuos de 3, 40 y 60 dpe respectivamente, los cuales estarían involucrados en la formación del sistema nervioso, sistema óseo, sistema circulatorio, tejido cardíaco, tejido pancreático, tejido muscular, diferenciación de células epiteliales, hematopoyesis, vías de señalización, etc. La lista de genes reportada en esta tesis podría servir como posibles marcadores para realizar monitoreo durante desarrollo de P. adspersus, disminuyendo así, la alta tasa de mortalidad de larvas debido a fallos en la formación de órganos vitales y anormalidades en el desarrollo que afectaría a la calidad de la producción.
Tesis

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Peña, Palominos Lorena Andrea. "Cruzamientos interespecíficos en Alstroemeria sp. y rescate de embriones in vitro como base del mejoramiento genético de la especie." Tesis, Universidad de Chile, 2007. http://www.repositorio.uchile.cl/handle/2250/101870.

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Huaman, Casazola Olger. "Evaluación del potencial de proliferación, inmunomodulación e inmunogenicidad in vitro de células madre mesenquimáticas derivadas de médula ósea y tejido adiposo fetal bovino." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/145004.

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Abstract:

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias.
Las células madre mesenquimáticas (del inglés Mesenchymal Stem Cells, MSC), son células adultas indiferenciadas, que poseen propiedades de autorenovación, inmunomodulación y cuentan con una baja inmunogenicidad. Debido a ello son actualmente consideradas como potenciales agentes terapéuticos celulares para el tratamiento de variadas patologías. En el presente estudio se comparó el potencial de proliferación, inmunomodulación e inmunogenicidad in vitro de MSC derivadas de médula ósea (MO) y tejido adiposo (TA) fetal bovino. Las MSC fueron asiladas en base a su capacidad de adherencia al plástico y a su morfología fibroblastoide. El potencial de proliferación se determinó en dos concentraciones celulares (5000 y 8500 células/cm2) durante 10 y 15 días de cultivo, respectivamente. La expresión de genes de inmunomodulación indolamina 2,3 dioxigenasa (IDO), interleuquina 6 (IL-6), factor de crecimiento de transformante β1 (TGFβ1), prostaglandina E2 (PGE2) e interleuquina 10 (IL-10) fue cuantificada mediante PCR cuantitativo (Q-PCR) en MSC-MO y MSC-TA estimuladas con interferón γ (IFNγ). Adicionalmente, se cuantificaron los niveles de expresión de genes de inmunogenicidad complejo principal de histocompatibilidad I y II (MHC-I y II) y moléculas coestimuladoras de linfocitos T (CD80 y CD86). Además, se evaluó el efecto de medio condicionado de ambas líneas celulares estimuladas con IFNγ sobre la proliferación de linfocitos de sangre periférica (PBL) bovina activadas con aloantígenos. La población de MSC provenientes de MO y TA adherentes al plástico expresaron mayores (P<0,05) niveles de mRNA de marcadores mesenquimales (CD105, CD90 y CD73) en comparación a marcadores hematopoyéticos (CD45 y CD34). Las MSC-MO doblaron su población en menor (P<0,01) tiempo en comparación a MSC-TA (2,9 vs 4,4 días, respectivamente). La exposición de MSC-MO y MSC-TA a IFNγ activó la expresión de mRNA de IDO y aumentó (P<0,05) la concentración del metabolito de IDO, quinurenina en el medio condicionado de MSC. Además, ambas líneas celulares expresaron niveles de mRNA de IL-6, PGE2, TGFβ1 e IL-10 con o sin tratamiento de IFNγ. Las MSC-MO expresan mayores (P<0,05) niveles de mRNA de MHC-II en comparación con MSC-TA. El medio condicionado de ambas líneas celulares suprime la proliferación de PBL bovino. En conclusión, los potenciales de proliferación e inmunogenicidad de MSC son dependientes de la fuente de origen tisular, debido a que las MSC-MO poseen alto potencial de proliferación e inmunogenicidad en comparación a MSC-TA. Sin embargo, ambas líneas de MSC poseen similares potenciales de inmunomodulación.
Mesenchymal stem cells (MSC) are undifferentiated adult cells that possess self-renewal, immunomodulating and low immunogenicity properties. Hence, they are currently considered as potential therapeutic agents for the treatment of various pathologies. In the present study, proliferation, immunomodulation and immunogenicity in vitro potentials were compared between MSCs derived from bone marrow (BM) and adipose fetal bovine tissue (AT). MSC were isolated based on their ability to adhere to plastic and fibroblastoid morphology. The proliferation potential was determined at two cell concentrations (5000 and 8500 cells / cm2) during 10- and 15-days culture periods, respectively. Relative expression of indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO), interleukin-6 (IL-6), transforming growth factor β1 (TGFβ1), prostaglandin E2 (PGE2) and interleukin-10 (IL-10) were quantified using quantitative PCR (Q PCR) in MSC-BM and MSC-AT stimulated with IFNγ. Additionally, the mRNA levels of immunogenicity genes, major histocompatibility complex I and II (MHC-I and II) and T-cell costimulatory molecules (CD80 and CD86) were determined. In addition, the effect of conditioned medium from IFNγ-stimulated MSC was estimated on the proliferation of alloantigen-activated bovine peripheral blood lymphocytes (PBL). The plastic-adherent population of MSC derived from BM and AT expressed higher (P <0.05) mRNA levels of mesenchymal markers (CD105, CD90 and CD73) compared to hematopoietic markers (CD45 and CD34). MSC-MO doubled population in a shorter (P <0.01) time period compared to MSC-AT (2.9 vs. 4.4 days, respectively). Exposure of MSC-BM and MSC-AT to IFNγ activated the expression of IDO mRNA and increased (P <0.05) IDO-metabolite kinurenine concentration in conditioned medium of MSC. Both MSC lines expressed levels of IL-6, PGE2, TGFβ1 and IL-10 mRNA with or without IFNγ treatment. MSC-BM expresses higher (P <0.05) mRNA levels of MHC-II mRNA in comparison to MSC-AT. Conditioned medium of MSC cell lines suppress the proliferation of bovine PBL. In conclusion, the potential for proliferation and immunogenicity are tissue-source dependent, since MSC-MO has a high potential for proliferation and immunogenicity compared to MSC-TA. However, both MSC lines display similar potential for immunomodulation.
Financiamiento: Proyecto Fondef Idea ID15I10129 y PRONABEC y Beca Presidente de la República del Perú.

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Herrera, Arcos Brenda Wendolyn. "Análisis comparativo de la proliferación celular en el mesodermo de embriones transgénicos de ratón con expresión generalizada del Gen Oct4." Thesis, Universidad de las Américas Puebla, 2010. http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lbi/herrera_a_bw/.

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Abstract:

Oct-4 es un factor de transcripción involucrado en el establecimiento de la pluripotencialidad celular. Se expresa en las líneas celulares pluripotentes, en las células de carcinoma embrionario (EC por sus siglas en inglés embryonal carcinomal cells), en las células tallo (ES por sus siglas en inglés embryonic stem cells) y en las células germinales embrionarias (EG por sus siglas en inglés embryonic germ cells). Hasta el estadio de mórula, Oct-4 se expresa en el núcleo de todas las células y después de la implantación se expresa en el epiblasto. Conforme avanza la gastrulación, la expresión disminuye gradualmente a partir de la región anterior del embrión y al término del desarrollo embrionario su expresión está confinada solo a las células germinales primordiales. Dependiendo de los niveles de expresión de Oct4, las células se diferencian. Cuando el nivel se eleva por arriba de lo normal diferencian a endodermo primitivo y si disminuye se diferencian en trofoectodermo. En el presente trabajo se analizó la proliferación celular inducida por la sobre-expresión generalizada de Oct-4.
(cont.) Nos enfocamos en la región del mesodermo presomítico que da lugar a las somitas, que al diferenciarse generan los huesos y cartílago de vértebras y costillas, músculo esquelético de la espalda, de la pared corporal y las extremidades. Para este análisis utilizamos ratones transgénicos que integran en su genoma distintos transgenes, que al expresarse resultan en la activación generalizada del gen Oct4 en todo el embrión. Estos embriones transgénicos se denominan tgo7. Nuestros resultados muestran que no existe una diferencia significativa en la proliferación celular entre los embriones transgénicos y los silvestres. Por ello se sugiere que podría haber una migración celular defectuosa en los embriones tgO7, la cual generaría una acumulación celular excesiva, provocando así un aumento en el tamaño de la parte caudal de los embriones transgénicos. .

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Gomis, Almendro Jesús. "Avances en criopreservación y transferencia no quirúrgica de embriones porcinos = Advances in cryopreservation and non-surgical transfer of porcine embryos." Doctoral thesis, Universidad de Murcia, 2013. http://hdl.handle.net/10803/123857.

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Abstract:

Tesis por compendio de publicaciones
La industria porcina tiene un considerable interés en el uso de la transferencia de embriones, incluyendo la criopreservación de los mismos. Sin embargo, la utilización comercial de la transferencia de embriones en esta especie ha sido muy limitada debido principalmente a la necesidad de utilizar procedimientos quirúrgicos para la obtención y transferencia de los embriones, y a las dificultades encontradas para la criopreservación de dichos embriones mediante los protocolos tradicionales. Últimamente, se han abierto nuevas expectativas para la utilización comercial de esta tecnología gracias al desarrollo de un procedimiento para transferir embriones por vía no quirúrgica y al desarrollo de la vitrificación como método alternativo a los procedimientos tradicionales de criopreservación. El objetivo de esta tesis es mejorar la transferencia vía no quirúrgica de embriones vitrificados-calentados y, desarrollar un protocolo de vitrificación eficiente para los estadios tempranos de desarrollo de embriones porcinos obtenidos, pudiendo aumentar su viabilidad post-calentamiento.
The swine industry has a considerable interest for the use of embryo transfer and cryopreservation since these technologies may allow the transport and storage of valuable genetic material with minimal health risks and cost. However, the commercial application of embryo transfer in pig has been traditionally limited due to the need of surgical transfer procedures and the difficulties for long-term storage of pig embryos by using traditional cryopreservation methods. However, new perspectives for embryo transfer and embryo cryopreservation have occurred with the development of a new device, for non-surgical embryo transfer and with the development of vitrification as an alternative to traditional cryopreservation methods. This thesis was designed to improve the non-surgical deep intrauterine embryo transfer procedure with vitrified embryos and develop an efficient and practical vitrification protocol for porcine embryos at very early developmental stages.

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Muñoz, Montecinos Carlos Humberto. "Establecimiento de un modelo de xenotrasplante para el estudio del comportamiento de células tumorales humanas en embriones de pez cebra." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/145555.

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Abstract:

Ingeniero en Biotecnología Molecular
En el cáncer, la compleja relación espacio-temporal entre las células tumorales y su microambiente es determinante en el crecimiento, invasión y capacidad de metástasis de los tumores. Es por eso que el estudio de esta enfermedad en un contexto in vivo que simule este ambiente, es fundamental para el avance en su comprensión y el desarrollo de posibles terapias. El trasplante de células tumorales humanas en modelos animales ha sido una de las estrategias más utilizadas para entender, bajo un contexto fisiológico, cómo progresa esta enfermedad. Dentro de estos modelos, el pez cebra ha destacado en los últimos años por las ventajas que brinda su transparencia en estadios tempranos de su desarrollo, la cual permite seguir en tiempo real el comportamiento de las células tumorales. En este trabajo se realizaron trasplantes de células tumorales humanas de neuroblastoma y leucemia promielocitica aguda en embriones de pez cebra, con el objetivo de comprender cómo las células tumorales se comportan dentro del pez, y cómo pueden afectar el desarrollo de éste. Se logró determinar que las células de neuroblastoma de las líneas SK-N-SH y SH-SY5Y mantienen su posición tras varios días post inyección, y no proliferan. Por otro lado, las células de leucemia de la línea HL-60 son capaces de colonizar el tejido caudal hematopoyético del pez, y de responder a estímulos inflamatorios. Mediante el uso de proteómica cuantitativa se propuso estudiar tanto la respuesta del pez cebra al trasplante de células humanas de leucemia, como la respuesta de estas células ante una infección por Salmonella Thyphimurium. De esta 2 forma, de un total de 192 proteínas humanas que modificaron sus niveles de abundancia significativamente en respuesta a la infección bacteriana, se determinó que 28 estaban relacionadas a la respuesta inmune y a la diferenciación celular, mientras que en el pez cebra, 36 de 335 proteínas relacionadas a procesos de desarrollo modificaron sus niveles tras el xenotrasplante. Estos resultados muestran que las células tumorales modulan el microambiente en el que se desarrollan y viceversa. Además muestran que células humanas de linaje inmune mantienen su capacidad de respuesta ante estímulos inflamatorios en el contexto fisiológico del pez cebra, lo que también sugiere el uso de este animal como un excelente modelo para el estudio de la función inmune de células humanas.
In cancer, the complex space-temporal relationship between tumor cells and their microenvironment is critical for sustained tumor growth, invasion and metastasis. In this regard, the study of this disease in an in vivo context is essential for our understanding and the development of future therapies. Transplantation of human tumor cells in animal models has become a broadly used approach to understand cancer progression under a physiological context. Among these, the zebrafish has emerged as a versatile model for the study of human cancer mainly due to its transparency in its early developmental stages, which allow to carry out in vivo imaging and tracking of the xenotransplanted cells. In this work, neuroblastoma and acute promyelocytic leukemia human tumor cells were transplanted in zebrafish embryos to study the behavior of these cells inside the fish, and investigate how the human cells could affect its development. While neuroblastoma cells from cell lines SK-N-SH and SH-SY5Y were immotile and unable to proliferate, leukemia cells from cell line HL-60 showed specific homing towards the caudal hematopoietic tissue of the zebrafish embryo, and were able to respond to an inflammatory stimulus. Moreover, using quantitative proteomic analysis, we intended to determine which proteins were involved in the zebrafish response towards the human xenograft, as well as human proteins involved in the response of the cells to Salmonella Typhimurium, infection. From a total of 192 human proteins, which showed significantly different abundance levels in response to the bacterial infection, 28 were found to be related to immune response and cell differentiation processes. Meanwhile, in 4 the zebrafish, 36 from the 335 proteins, which modified their abundance levels after the xenotransplantation, were related to developmental process. These results suggest that tumor cells modulate the microenvironment in which they grow and vice versa. Furthermore, these results show that human myeloid progenitor cells are able to respond to inflammatory stimulus in the physiological context of the zebrafish, which suggests the use of this animal as an excellent model for the study of the human immune system and its components.

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Otárola, Carrasco María Teresa. "Expresión del sistema FAS/FAS-L y caspasa-8 en embriones tempranos de Seriola lalandi con diferente nivel de flotabilidad." Tesis, Universidad de Chile, 2018. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/168238.

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Abstract:

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
La mortalidad embrionaria que se ha observado en condiciones de cultivo del pez dorado Seriola lalandi, puede ser mencionada entre los principales obstáculos que han frenado el desarrollo acuícola de esta especie en nuestro país. Esta mortalidad se relaciona a la pérdida de flotabilidad de los huevos y embriones tempranos, la cual se debería a la participación del mecanismo de apoptosis celular. Estudios previos demostraron una mayor expresión de moléculas que participan en la vía intrínseca de este proceso, en huevos y embriones de S. lalandi con bajo nivel de flotabilidad. Por lo tanto, en este trabajo se propuso determinar si en esta pérdida de flotabilidad participan también moléculas de la vía extrínseca, como el sistema Fas/FasL y Caspasa 8. Para esto, se evaluó mediante la técnica de Western Blot la expresión de las proteínas Fas y Fas-L y mediante RT-qPCR la expresión del ARNm de Caspasa 8 en embriones tempranos de S. lalandi clasificados como flotantes y no flotantes. La proteína Fas se expresó como una banda de 50 kDa en todos los estadios en las muestras flotantes. Sin embargo, en los no flotantes este receptor se detectó en tres bandas reactivas de 40, 50 y 65 kDa. FasL (44 kDa) sólo fue detectado en embriones flotantes de 24 horas, mientras que en las muestras no flotantes este ligando se detectó en todos los estadios con un aumento (p<0,05) en su expresión, en la medida que avanzó el desarrollo. Por otro lado, los mayores niveles (p<0,05) de ARNm de Caspasa 8 se observaron en embriones de 24 horas en las muestras flotantes y a partir del estado de gástrula en los no flotantes. Además, la expresión de Caspasa 8 fue mayor (p<0,05) en las muestras no flotantes, en comparación con las flotantes en todos los estadios del desarrollo. Estos resultados, confirman la presencia de moléculas de la vía extrínseca de la apoptosis en huevos y embriones tempranos de S. lalandi, con perfiles de expresión en las muestras no flotantes que representarían un estado pre-apoptótico de estas muestras. Sin embargo, se requieren estudios especie-específicos y complementarios para entender principalmente, la naturaleza del agente inductor de la activación de esta vía. Finalmente, se asume que existió una viabilidad funcional comparable entre las muestras flotantes y no flotantes en todos los estadios del desarrollo analizados, debido a que no se encontraron diferencias (p<0,05) en los valores promedio de Ct, entre estas muestras, de cuatro genes constitutivos (ACTB, 18S, GAPDH y MAP1β).
The embryonic mortality observed under captivity in the yelow-tail kingfish Seriola lalandi could be mentioned among the main obstacles that have avoided its aquaculture development in our country. This mortality has been related to low buoyancy of eggs and early embryos, which would be due to the participation of the apoptosis mechanism. Previous results in S. lalandi have demonstrated greater expression of apoptosis intrinsic pathway molecules in eggs and embryos with low buoyancy level. Therefore, this work aimed in to determine if molecules of the extrinsic pathway such as Fas/FasL system and Caspase 8 are involved in the buoyancy losing. For this, Fas/FasL system and Caspase 8 expression were evaluated in early embryos of S. lalandi previously classified as floating and non-floating, by Western Blot and RT-qPCR, respectively. Fas protein was expressed as a 50 kDa band in all floating developmental stages. However, in non-floating this receptor was detected in three reactive bands of 40, 50 and 65 kDa. FasL (44 kDa) was only detected in 24-hour floating embryos, whereas in the non-floating samples this ligand was detected in all stages with an increase (p<0,05) in its expression as development progressed. By other hand, the highest levels (p<0,05) of Caspase 8 mRNA were observed in 24 hours embryos in floating samples and from gastrula stage in the non-floating ones. In addition, Caspase 8 expression was higher (p<0,05) in non-floating than floating samples, in all developmental stages. These results confirm the presence of apoptosis extrinsic pathway molecules in eggs and early embryos of S. lalandi, which show expression profiles in the non-floating samples that could be interpreted as apoptotic pre-activation. However, species-specific studies are required to understand the nature of the apoptotic pathway trigger. Finally, a comparable viability between floating and non-floating samples used in this study could be assumed since no differences (p<0,05) in Ct value of constitutive genes (ACTB, 18S, GAPDH and MAP1 β) were detected these samples.
Proyecto Fondecyt 11140639.

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Medrano, Ramos Jonathan Castro. "Aplicación de la técnica no quirúrgica de transferencia de embriones bovinos en un establo de la cuenca lechera de Lima." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/13731.

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Abstract:

Publicación a texto completo no autorizada por el autor
Pretende obtener una tasa de concepción superior al 50% utilizando la técnica no quirúrgica de transferencia de embriones en vacas lecheras bajo las condiciones de un establo de la Cuenca Lechera de Lima. Se utilizaron 8 vacas donadoras de primer a quinto parto, distribuidas al azar en 2 grupos por año de estudio: 4 donadoras en el 2008 y 4 donadoras en el 2009. Todas las donadoras fueron sincronizadas con estrógenos, progestágenos y agentes luteolíticos; superovuladas con 400 mg de FSH, e inseminadas con 2 dosis de semen congelado. Se utilizaron 28 hembras receptoras (22 vaquillas mayores de 13 meses de edad y 6 vacas de primer a tercer parto), distribuidas en 2 grupos por año de estudio: en el año 2008 se utilizaron 10 vaquillas y 6 vacas, que fueron tratadas con el protocolo Presynch y en el año 2009 se utilizaron 12 vaquillas, que fueron tratadas con el protocolo CIDRsynch. Ambos tratamientos se realizaron con el fin de sincronizar el celo de las receptoras con las vacas donadoras. Siete días posteriores a la inseminación de las donadoras, se realizó la recolección de embriones en las donadoras mediante la técnica no quirúrgica de transferencia de embriones. Se realizó la búsqueda y clasificación de los embriones, e inmediatamente fueron transferidos a las hembras receptoras. El diagnóstico de gestación se realizó mediante ultrasonografía transrectal al día 28 post transferencia. Se obtuvieron un total de 23 embriones, consiguiendo una tasa de recuperación de embriones de 53.84% (14 embriones de 26 cuerpos lúteos) en el año 2008 y de 24.32% (9 embriones de 37 cuerpos lúteos) en el año 2009. Los embriones transferidos fueron 11 (2008) y 6 (2009), utilizando 9 y 6 vaquillas receptoras respectivamente. El primer año se obtuvo una tasa de concepción de 22.22% (2/9) y en el segundo año de 66.67% (4/6). En conclusión, la respuesta variada de las vacas donadoras al protocolo de super ovulación es uno de los factores más importantes de la transferencia de embriones, mientras que la tasa de concepción en vaquillas receptoras es superior al 50% cuando se utiliza el protocolo de sincronización CIDRsynch.
Tesis

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Helfer, Llerena de Tapia Olga Mercedes, and Tapia Baltazar Sergio Carlos Tapia. "Incorporación de criterios bioéticos y biojurídicos, ante la probable modificación de la norma sobre técnicas de reproducción artificial." Master's thesis, Universidad Católica Santo Toribio de Mogrovejo, 2016. http://tesis.usat.edu.pe/handle/usat/938.

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Abstract:

Las técnicas de producción artificial (TRA) generan vida humana desprovista de familia. Nuestro objetivo general fue establecer los criterios bioéticos y biojurídicos para modificar la norma sobre las TRA en el Perú. Nos propusimos tres objetivos específicos: 1) Analizar el contenido y consecuencias de las TRA; 2) Analizar el vigente artículo 7° de la Ley N° 26842 – Ley General de Salud (LGS) y una de sus propuestas modificatorias de la comisión del Ministro de Justicia y Derechos Humanos, y 3) Establecer los criterios bioéticos y biojurídicos para regular las TRA, derogando el artículo 7 de la LGS. Y, proponiendo un proyecto de ley. La investigación de tipo cualitativa mediante el método bibliográfico, para establecer relaciones teórico-doctrinarias, nos permitió conocer en profundidad el artículo 7 de la LGS, e identificar la naturaleza profunda del problema de las TRA. Para el abordaje descriptivo, explicativo e interpretativo, recurrimos a las fichas bibliográficas, textuales y de resumen; para recoger, almacenar, organizar y presentar la información extraída de fuentes provenientes de 51 autores desde: 26 libros, 2 artículos de revistas, 5 tesis, 12 normas legales, 28 linkografías. El procedimiento se destinó a elegir el tema de la investigación. La primera recopilación de datos bibliográficos nos permitió conocer en profundidad las TRA y el contenido del Artículo 7° de la LGS. La bibliografía adicional nos otorgó una sólida base de conocimiento sobre las TRA. El análisis cualitativo y de documentos nos permitió conocer la situación legal y de hecho de las TRA en el Perú. Mediante el abordaje metodológico antropológico y jurídico, analizamos los documentos mediante un enfoque científico-humanista. Los criterios éticos para el tema de fondo se enmarcaron en la interdisciplinariedad de la bioética y la búsqueda de un estatuto jurídico del concebido y los límites éticos que deben regir la ciencia y la tecnología. Los criterios éticos para la investigación formal fueron la verdad del registro y análisis de documentos de la referencia bibliográfica, y el uso de la información con respeto a la propiedad intelectual. Los criterios de rigor científico fueron la claridad para el desarrollo de los objetivos, y la credibilidad y profundidad de las fuentes de información. Los principales resultados apuntan a comprender que el ordenamiento jurídico del Perú es proteccionista del concebido, pero no el artículo 7 de la LGS que autorizó las TRA, las que han escapado del control normativo, por lo que implican riesgos para la vida y la salud de los embriones humanos producidos. Nuestra investigación se centra en determinar los criterios bioéticos y biojurídicos, para que una norma regule las biotecnologías del inicio de la vida prohibiendo las TRA, por respeto al derecho de los embriones humanos, acorde a su estatuto biológico, ontológico y jurídico.
Tesis

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Páez, Hurtado Santiago Andrés. "Factores que afectan la pérdida embrionaria - fetal (30 a 60 ds) en vacas Holstein en Chile central." Tesis, Universidad de Chile, 2013. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/131669.

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Abstract:

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario
A nivel mundial, la tendencia en producción de leche es a un aumento importante en la producción lechera por vaca, pero acompañado de un descenso continuo en la fertilidad. Esta disminución provoca importantes repercusiones económicas negativas para los planteles lecheros. Un aspecto relevante en la fertilidad de una vaca es el alto porcentaje de pérdidas gestacionales, en especial las ocurridas en el período embrionario y fetal temprano. El objetivo de este estudio fue determinar los porcentajes de pérdida embrionaria-fetal entre los 30 y los 60 días de preñez, tanto en vacas como en vaquillas lecheras de la zona central de Chile, y a su vez determinar la relación de ésta con posibles factores de riesgo. El estudio se realizó en dos lecherías de alta producción de la zona central de Chile, en la Región de Valparaíso. Se analizó la información proveniente de 3.422 gestaciones; 2.231 en vacas y 1.191 en vaquillas, iniciadas en un período de un año y medio. La gestación se determinó por ultrasonografía transrectal 30 a 36 días después de la inseminación artificial (IA) y se realizó un segundo diagnóstico de la gestación por palpación transrectal para determinar la pérdida de la preñez a los 60 a 66 días posteriores a la IA. Para cada preñez, se registró información de posibles factores de riesgo como: el predio de origen, la condición corporal (CC) al parto, la CC a la concepción, el cambio de CC desde el parto al posparto (aproximadamente 40 días posparto), la producción de leche, el tipo de inseminación artificial (inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) o a celo detectado), los días en leche a la concepción, el número ordinal del parto (NOP) y la presencia de mastitis clínica dentro del periodo en estudio. La asociación de estos posibles factores de riesgo con la pérdida embrionaria-fetal entre los 30 y los 60 días posteriores a la concepción, se analizó a través de un modelo de regresión logística, utilizando el programa estadístico InfoStat®. Se obtuvieron las razones de riesgo (odd ratios, OR) con sus intervalos de confianza al 95% (IC 95%). Se observó un 11% de pérdida embrionaria-fetal en vacas, mientras que en vaquillas la pérdida fue de un 3,2%. El primer análisis (regresión logística binaria univariada), mostró que las vacas tuvieron 3,74 veces la probabilidad de perder su gestación en comparación con las vaquillas (IC 95%: 2,64 - 5,31; p < 0,0001). Dentro de las vacas, los factores predio de origen, cambio de CC desde el parto al posparto, estación del año a la concepción y tipo de inseminación se relacionaron significativamente con la pérdida gestacional (p < 0,05). Por otro lado, factores como NOP, CC al parto, CC a la concepción, producción de leche el día de la concepción, producción de leche acumulada hasta los 100 días de lactancia, días en leche a la concepción y mastitis clínica no mostraron un efecto significativo sobre la pérdida de la gestación. El modelo estadístico final incluyó los factores que fueron significativos en el primer análisis, y mostró una tendencia a una mayor probabilidad de pérdida gestacional en las vacas del predio 2 en comparación a las del predio 1 (IC 95%: 0,94 - 2,49; p = 0,09). También mostró que las vacas que perdieron 1 punto o más de CC al posparto tuvieron 2,02 veces la probabilidad de perder la gestación, en comparación con aquellas que bajaron 0,25 puntos o menos de CC en el mismo periodo (IC 95%: 1,02 - 4,00; p = 0,04). En relación a la estación del año, las vacas que comenzaron su gestación en invierno o verano tuvieron 2,03 (IC 95%: 1,12 - 3,7; p = 0,02) y 1,84 (IC 95%: 1,03 - 3,3; p = 0,04) veces, respectivamente, la probabilidad de perder la gestación, con respecto a aquellas que iniciaron su gestación en primavera. En cuanto al tipo de inseminación, se observó una tendencia a una mayor pérdida gestacional en las vacas inseminadas bajo protocolos de IATF, en comparación con las inseminadas a celo natural (IC 95%: 0,93 - 1,95; p = 0,12). En vaquillas, el modelo sólo incluyó los factores predio de origen y estación del año al inicio de la gestación. Se observó una fuerte tendencia a una mayor probabilidad de pérdida embrionaria-fetal en las vaquillas del predio 2, en comparación con las del predio 1 (IC 95%: 0,94 - 3,73; p = 0,08) y no se determinó una asociación estadísticamente significativa entre la estación del año a la concepción y pérdida gestacional. Los resultados de este estudio muestran una pérdida embrionaria-fetal notoriamente mayor en vacas que en vaquillas. Dentro de las vacas, la pérdida excesiva de CC al posparto y la estación del año a la concepción (invierno o verano), fueron factores de riesgo de pérdida de la gestación entre los 30 a 60 días de preñez. El efecto de la estación del año a la concepción fue menos evidente y no fue significativo en vaquillas. Por lo tanto, en vacas sería recomendable poner énfasis en el mejoramiento de los factores de riesgo identificados en este estudio, tales como manejando adecuadamente la alimentación en el periodo de posparto, y haciendo diseños y manejos de las instalaciones que mejoren el confort de los animales y que limiten los efectos adversos del invierno y el verano. Este tipo de manejos podría contribuir a aumentar la fertilidad y, por ende, la rentabilidad de las lecherías de la zona central de Chile

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Carnero, Salazar Sylvia. "Transferencia embrionaria ipsilateral y contralateral a la posición del cuerpo lúteo y sobrevivencia embrionaria en llamas." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2007. https://hdl.handle.net/20.500.12672/718.

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Abstract:

El presente trabajo se realizó con el propósito de evaluar el efecto de la transferencia embrionaria ipsilateral y contralateral a la posición del cuerpo lúteo sobre la tasa de preñez en llamas. Se utilizaron 43 llamas hembras receptoras de 4 a 6 años, distribuidas aleatoriamente en 4 grupos de estudio: G1 (n=10): Cuerpo lúteo en ovario derecho y transferencia ipsilateral, G2 (n=10): Cuerpo lúteo en ovario derecho y transferencia contralateral, G3 (n=15): Cuerpo lúteo en ovario izquierdo y transferencia ipsilateral y G4 (n=8): Cuerpo lúteo en ovario izquierdo y transferencia contralateral. Se utilizaron 10 llamas hembras como donadoras de embriones, las cuales fueron sincronizadas con LH (1ml), superovuladas con 1000 UI de eCG y se provocó luteólisis con prostaglandina (1ml), siendo empadradas posteriormente. El día del empadre las llamas receptoras recibieron tratamiento con LH, con el propósito de sincronizarlas con las donadoras. Siete días post empadre se realizó el lavado uterino para la recolección, evaluación y transferencia de los embriones. La transferencia embrionaria a los grupos experimentales se realizó con embriones frescos el mismo día. Los resultados obtenidos señalan una tasa de preñez de 60% (G1) y 75% (G3) en las hembras con transferencia embrionaria ipsilateral derecha e izquierda respectivamente, mientras que en la transferencia contralateral derecha e izquierda fueron 30% (G2) y 25%(G4) respectivamente. Sin embargo, no se registraron diferencias significativas (p>0.05) entre el grupo G1 con los grupos G2, G3 y G4, además G2 no muestra diferencias significativas (p>0.05) con G4. Mientras que se encontró diferencia (p menor 0.05) entre el grupo G3 con los grupos G2 y G4. Estos resultados indicarían una mayor tasa de sobrevivencia embrionaria en llamas al realizar la transferencia en el cuerno ipsilateral a la posición del cuerpo lúteo ubicado en el ovario izquierdo.
The study was carried out with the objective of to evaluate the embryo survival after the embryo transfer to the uterine horn ipsilateral and contralateral to the corpus luteum (CL) in llamas. Fourtythree llamas recipient females, from 4 to 6 years old were randomly assigned in 4 groups: G1 (n=10): CL in right ovary and ipsilateral embryo transfer, G2 (n=10): CL in right ovary and contralateral transfer, G3 (n=15): CL in left ovary and ipsilateral transfer, and G4 (n=8): CL in left ovary and contralateral transfer. Ten llamas were used as embryo donors, they were synchronized with LH (1ml), then superovulated with 1000 UI eCG and induced to luteolysis with PGF2α; after that, all of them were mated. The same day of mating, the recipients were treated with LH, with the purpose of synchronization with donors. Seven days postmating, the uterine horns were flushed to recover, evaluate and transfer the embryos. The nonsurgical embryo transfer was used the same day with fresh embryos. The results of pregnancy rate were 60% (G1) and 75% (G3) in recipient females with ipsilateral embryo transfer right and left respectively. On the other hand, contralateral embryo transfer right and left were 30% (G2) and 25% (G4) respectively. However, the differences did not reach significance (p>0.05) between G1 with G2, G3 and G4. Furthermore, G2 not differ (p>0.05) from G4. Whereas, there is difference (p less 0.05) between G3 with G2 and G4. These results indicate that pregnancy rate is major in llamas when the embryo transfer was to the uterine horn ipsilateral to the CL in the left ovary.
Tesis

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Ayala, Quintanilla Beatriz Paulina. "La transferencia de un blastocisto el día 5 de desarrollo embrionario produce una mayor incidencia de embarazos y recién nacidos vivos." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2006. https://hdl.handle.net/20.500.12672/10706.

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Abstract:

Busca realizar una adecuada selección del número de embriones, así como del día y estadío de desarrollo embrionario que permitirá escoger embriones de alta calidad con la finalidad de conseguir una mayor incidencia de embarazos exitosos en pacientes con problemas de infertilidad y simultáneamente reducir la incidencia de embarazos multiples los cuales tienen mayores riesgos obstétricos y neonatales. Presenta un estudio observacional, descriptivo, retrospectivo y comparativo en el cual se revisaron 555 historias clínicas de pacientes a las que se les realizó la transferencia de un embrión único y que recibieron tratamiento por problemas de infertilidad en el Servicio de Ginecología de la Unidad de Fertilidad del Hospital de la Universidad de Hirosaki, Aomori, Japón; en el periodo comprendido desde enero de 1995 hasta Enero del 2006. Determina la incidencia de embarazos y recién nacidos vivos después de realizar la transferencia de un embrión en estadío de blastocisto el día 5 de desarrollo embrionario. Determina la frecuencia de embarazos y recién nacidos vivos después de realizar la tranferencia de un embrión único el día 3 y el día 4 de desarrollo embrionario. Evalúa que estadio de desarrollo embrionario proporciona la mayor incidencia de embarazos y recièn nacidos vivos. Se obtiene que el 14.3% de embarazos cuando se realizó la transferencia de un embrión el día 3 ( 4-16 blastómeras), 23.4 % de embarazos cuando se realizó la transferencia de un embrión el día 4 (estadío de Morula) y 45% de embarazos cuando se realizó la transferencia de un embrión el día 5 (estadío de blastocisto). El porcentaje de recién nacidos vivos fue de un 42.9% el día 3( 4-16 blastómeras), 42.3 % el día 4 (estadío de Morula) y 77.8% el día 5 (estadío de blastocisto). En cuanto a la paridad principalmene las pacientes fueron nulíparas: 75% (día 3), 69.2% (día 4) y 55.6% (día 5). Encuentra que el grupo etáreo más frecuente estuvo comprendido entre los 36 a 40 años con un 46.4% el día 3( 4-16 blastómeras), un 42.3% el día 4 (estadío de Morula) un 44.4% el día 5 (estadío de blastocisto). La técnica de reproduccion asistida más utilizada fue la fecundacion in vitro: 75% (día 3), 80.8% (día 4) y 77.8% (día 5). El factor de tubárico y masculino fueron los más frecuentes: 42.85% (día 3), 42.3% (día 4) y 66.6% (día 5). Concluye que realizar la transferencia de un embrión en el dia 5 y durante el estadío de blastocisto de desarrollo embrionario permite obtener un mayor número de embarazos y nacimientos vivos, asì como el menor nùmero de complicaciones obstètricas en las parejas con problemas de infertilidad.
Trabajo de investigación

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Diaz, Cánova Diana Karina. "Transformación genética de embriones somáticos de Ipomoea batatas (L.) LAM. “camote”, (convolvulaceae) vía Agrobacterium tumefaciens para conferir resistencia a Cylas spp. (coleoptera)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016. https://hdl.handle.net/20.500.12672/5499.

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Abstract:

Publicación a texto completo no autorizado por el autor
Realiza eventos transgénicos de los cultivares Imby, CIP440163 y Jonathan de I. batatas con los genes de resistencia cry3Ca1 y cry7Aa1 vía A. tumefaciens. Para ello, se evalúa la sensibilidad de los callos embriogénicos de los tres cultivares de camote al antibiótico kanamicina (agente de selección) y se determina la eficiencia de transformación de callos embriogénicos de los tres cultivares de camote vía A. tumefaciens (portando el plásmido pCIP100) a las 8 semanas. Se observa que la concentración óptima de kanamicina para los tres cultivares fue de 10 mg/l y la eficiencia de transformación de los callos fue de 40,3 %, 22,3 % y 12,6 % en los cultivares Imby, Jonathan y CIP440163, respectivamente. La transformación genética de los embriones somáticos de los tres cultivares de camote vía A. tumefaciens utilizando los genes cry3Ca1 y cry7Aa1 (plásmido pCIP84) y su regeneración vía embriogénesis somática, da como resultado 35 eventos transgénicos del cultivar Imby, 16 del cultivar Jonathan y 4 del cultivar CIP440163, con una eficiencia de transformación de 3,2 %, 2,8 % y 0,4 %, respectivamente. El método de transformación genética por embriogénesis somática fue eficiente en los tres cultivares evaluados y la relación entre sus eficiencias de transformación se mantuvo, aunque se usaron diferentes construcciones genéticas (plásmido pCIP100 y pCIP84).
Tesis

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Ascencio, Santiago Josías Noé. "Efecto del estadio de desarrollo de la onda folicular sobre la respuesta ovárica, tasa de recuperación y calidad de embriones en alpacas." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12672/7233.

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Abstract:

Evalúa el efecto del estadio de desarrollo de la onda folicular: crecimiento, estático y regresión del folículo dominante previo al servicio sobre la tasa de ovulación, tasa de recuperación y la calidad embrionaria en alpacas luego del servicio por monta natural. El estudio fue realizado durante los meses de enero a abril del 2015, en el departamento de Puno. Se trabajó con alpacas hembras vacías (n = 53) seleccionadas de acuerdo a la presencia de un folículo dominante ≥ de 7 mm; las cuales fueron evaluadas con un ecógrafo Aloka SSD 500 y transductor lineal 7.5 MHz, para ser sincronizadas y distribuidas a uno de los siguientes tratamientos: T1 (n=16): Fase crecimiento; T2 (n=19): Fase estática y T3 (n=18): Fase regresión. Posteriormente las alpacas hembras fueron sometidas a empadre controlado por un periodo de tiempo mayor a 15 minutos, para asegurar la ovulación y posterior fecundación. El día del empadre fue considerado el día 0, las evaluaciones ecográficas posteriores se realizaron en el día 2 (ocurrencia de la ovulación) y el día 7 (tamaño del cuerpo lúteo); el lavado uterino se realizó a los 7 días post servicio. Todos los animales en estudio fueron alimentados con pastos naturales y recibieron las mismas condiciones de manejo. Al realizar los lavados del grupo T1 (n=16) se recuperó 56.3% embriones (n1=9) y no ovularon 12.5%; en el T2 (n=19): Se recuperó 47.4% embriones (n2=9) y todos ovularon y en el T3 (n=18): Se recuperó 50% embriones (n3=9) y ovularon todos los animales. Los resultados obtenidos mostraron que para cada grupo se recuperaron 9 embriones. Para el T1 (n1=9): 44.4% excelente y 55.6% buena calidad, T2 (n2=9): 66.7% excelente y 33.3% buena calidad y T3 (n3=9): 33.3% buena, 33.3% regular y 33.4% mala calidad. Los resultados sugieren que la calidad embrionaria es mejor en la fase de crecimiento y estática en comparación con la fase de regresión con una diferencia estadísticamente significativa.
Tesis

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Dueñas, Tamayo Fernando. "Diferenciación neurogénica de células madre mesenquimáticas (CMM) obtenidas desde médula ósea fetal bovina." Tesis, Universidad de Chile, 2017. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/144998.

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Abstract:

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Ciencias Animales.
Las células madre mesenquimales (CMM) son células progenitoras multipotentes que poseen potenciales de auto-renovación y diferenciación multilinaje (osteogénico, condrogénico y adipogénico). La capacidad de diferenciación de las CMM se extiende principalmente hacia linajes mesodérmicos como osteogénico, condrogénico y adipogénico; sin embargo, estudios recientes in vitro han demostrado que las CMM poseen capacidad para diferenciarse hacia tejidos ectodérmicos como el neuronal. El objetivo del presente estudio fue determinar la capacidad de diferenciación neurogénica in vitro de CMM bovinas aislada desde medula ósea (MO) fetal. La detección de marcadores mesenquimales CD90, CD105 y CD73, hematopoyéticos CD34 y CD45 y de pluripotencia OCT4 y NANOG fue realizada por medio de PCR-cuantitativo (Q-PCR) y citometría de flujo. El protocolo 1 de diferenciación neurogénica consistió en una pre-inducción neuronal por 24 horas con medio DMEM suplementado con 20% de suero fetal bovino (SFB) y una posterior inducción neuronal con Betamercaptoetanol (BME) durante 6 días. El protocolo 2 de diferenciación neurogénica consistió en medio DMEM suplementado con Fibroblast Growth Factor-basic (bFGF), Epidermal Growth Factor (EGF) durante 24 horas y posteriormente durante 120 horas con medio de cultivo suplementado con hidroxianisol butilado (BHA), cloruro de potasio, ácido valproico, forskolina y suplemento neuronal. Muestras celulares fueron obtenidas a las 0, 24, 96 y 144 horas de cultivo. La expresión de genes fue evaluada por Q-PCR e inmunofluorescencia. Los análisis de Q-PCR en CMM indiferenciadas, detectaron mayores (P<0,05) niveles de mRNA de marcadores mesenquimaticos CD73, CD90 y CD105 en relación a los niveles de CD34 (151.2, 245.1 y 238.1 veces, respectivamente). Mediante citometría de flujo se determinó una alta proporción de CMM positivas para marcadores mesenquimáticos CD29 (76,3%), CD73 (96,8%) y marcadores de pluripotencia Oct4 (94,6%) y Nanog (88,4%). En contraste, una alta proporción de CMM fue negativa para marcadores hematopoyéticos CD34 y CD45 (93,4% y 95,6%, respectivamente). Durante el el protocolo 1 de diferenciación neuronal se detectó una disminución (P<0,05) de los niveles de mRNA de NESTIN a las 24, 96 y 144 horas (3,7; 2 y 1 veces expresión de la hora 0). En comparación, los niveles de mRNA de MAP2 aumentaron (P<0,05) a las 24, 96 y 144 horas (2,4; 18,9 y 16 veces expresión de la hora 0). Los niveles de mRNA de TRKA aumentaron (P<0,05) a las 96 y 144 horas (6,6 y 8 veces expresión de la hora 0). En tanto los niveles de mRNA de NGF y de NANOG no fueron distintos entre el grupo control y diferenciación. Durante el protocolo 2 se detectó una disminución (P<0,05) de los niveles de mRNA de NESTIN a las 24, 96 y 144 horas (3,74; 0,3; 0,1 veces expresión de la hora 0). En comparación, la expresión de MAP2 aumentó (P<0,05) a las 96 y 144 horas (4,1; 22,8 veces expresión de la hora 0). Asimismo, los niveles de TRKA aumentaron (P<0,05) luego de 96 y 144 horas (51,3; 111,7 veces expresión de la hora 0) de diferenciación. Además, NGF presento un menor nivel de expresión en las CMM diferenciadas a las 0, 24, 96 y 144 horas de cultivo (1; 0,8; 16,2 y 17,4 veces la expresión de la hora 0), en comparación con el control (1; 5,8; 47,8 y 25,7 veces la expresión de la hora 0), respectivamente. El perfil de expresión relativa de genes obtenido en el protocolo 2 es concordante con el obtenido en el ensayo de inmunoflorescencia asociada a NESTIN, MAP2, TRKA y PrPC. A pesar de que las CMM expuestas a BME presentan cambios morfológicos similares a un perfil neuronal, los valores de expresión génica no indican la adopción de un fenotipo neurogénico. Como ha sido reportado previamente, estos cambios pueden deberse a efectos citotóxicos del BME más que a inducción neurogénica. Sin embargo, el protocolo 2 utilizado en este estudio indujo cambios morfológicos y un perfil de expresión génica asociado a diferenciación neurogénica. En conclusión, las CMM de origen fetal bovino indiferenciadas poseen mayoritariamente un perfil mesenquimático y bajo condiciones de cultivo in vitro adecuadas poseen un potencial de diferenciación neurogénica.
Mesenchymal stem cells (MSC) are multipotent progenitor cells that possess the potential for self-renewal and multilineage differentiation (osteogenic, chondrogenic and adipogenic). Despite MSC have been isolated from several tissues, the most common source of isolation is the bone marrow (BM), both for clinical and research purposes. The differentiation capacity of MSC extends primarily to mesodermal lineages; however, recent studies have shown that MSC have also the potential to differentiate into ectodermal cell types such as neuronal. The aim of this study was to determine the potential for in vitro neurogenic differentiation of MSC isolated from fetal bovine BM. Detection of mesenchymal markers CD90, CD105 and CD73, hematopoietic markers CD34 and CD45 was performed by Quantitative-PCR (Q-PCR) and flow cytometry. Protocol 1 of neurogenic differentiation consisted in pre-induction for 24 hours with DMEM supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS), and induction with beta-mercaptoethanol (BME) for 6 days. Protocol 2 of neurogenic differentiation consisted in culture of MSC in DMEM supplemented with Fibroblast Growth Factor-basic (FGFb) and Epidermal Growth Factor (EGF) for 24 hours, followed by culture in DMEM supplemented with butylated hydroxyanisole, KCl, valproic acid, forskolin, neural supplement for 120 hours. Cell samples were taken at 0, 24, 96 and 144 hours of culture. Analyses indicated that mRNA levels of mesenchymal markers CD73, CD90 and CD105 were higher (151.2, 245.1 and 238.1 fold, respectively; P <0.05) relative to CD34. Moreover, flow cytometry detected a high proportion of MSC positive for mesenchymal markers CD29 (76.3%), CD73 (96.8%), pluripotent markers Oct4 (94.6%) and Nanog (88.4%). In contrast, high proportion of MSC were negative to hematopoietic markers CD34 and CD45 (93.4% and 95.6%, respectively). During protocol 1 of neuronal differentiation, NESTIN mRNA levels decreased (P <0.05) at 24, 96 and 144 hours (3,7; 2 and 1 fold 0 hours). In contrast, levels of mRNA of MAP2 increased (P <0.05) at 24, 96 and 144 hours (2,4; 18,9 and 16 fold 0 hours). Similarly, levels of TRKA mRNA increased (P<0.05) at 96 and 144 hours (6,6 and 8 fold 0 hours). NGF and NANOG mRNA levels were not significantly different between treatments. During protocol 2, NESTIN mRNA levels decreased (P <0.05) at 24, 96 and 144 hours (3.74, 0.3, 0.1 fold 0 hours). In comparison, MAP2 mRNA levels increased (P <0.05) at 96 and 144 hours (4,1; 22,8 fold 0 hours). In addition, NGF mRNA levels were lower (P<0,05) in differentiated MSC at 0, 24, 96 and 144 hours of culture (1; 0.8; 16.2 and 17.4 fold the expression at 0 hours) compared to control (1; 5.8; 47.8 and 25.7 fold 0 hours). The gene relative expression values in differentiated MSC were consistent with immunofluorescence patterns. Although BME induced neuron-like changes in MSC morphology, gene expression profiles showed no indication of the adoption of a neurogenic phenotype. As reported before, BME-induced morphological changes may be due to cytotoxic effects rather than neurogenic induction. However, the second protocol induced morphologic changes and a gene expression pattern associated to neurogenic differentiation. In conclusion, undifferentiated MSC isolated from fetal bovine BM possess a mesenchymal profile and under adequate in vitro culture conditions may be induced into neurogenic differentiation.
Financiamiento: Proyecto Fondecyt 11100205.

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Helfer, Llerena de Tapia Olga Mercedes, and Tapia Sergio Carlos Baltazar Tapia. "Incorporación de criterios bioéticos y biojurídicos, ante la probable modificación de la norma sobre técnicas de reproducción artificial." Master's thesis, Universidad Católica Santo Toribio de Mogrovejo, 2016. http://hdl.handle.net/20.500.12423/938.

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Abstract:

Las técnicas de producción artificial (TRA) generan vida humana desprovista de familia. Nuestro objetivo general fue establecer los criterios bioéticos y biojurídicos para modificar la norma sobre las TRA en el Perú. Nos propusimos tres objetivos específicos: 1) Analizar el contenido y consecuencias de las TRA; 2) Analizar el vigente artículo 7° de la Ley N° 26842 – Ley General de Salud (LGS) y una de sus propuestas modificatorias de la comisión del Ministro de Justicia y Derechos Humanos, y 3) Establecer los criterios bioéticos y biojurídicos para regular las TRA, derogando el artículo 7 de la LGS. Y, proponiendo un proyecto de ley. La investigación de tipo cualitativa mediante el método bibliográfico, para establecer relaciones teórico-doctrinarias, nos permitió conocer en profundidad el artículo 7 de la LGS, e identificar la naturaleza profunda del problema de las TRA. Para el abordaje descriptivo, explicativo e interpretativo, recurrimos a las fichas bibliográficas, textuales y de resumen; para recoger, almacenar, organizar y presentar la información extraída de fuentes provenientes de 51 autores desde: 26 libros, 2 artículos de revistas, 5 tesis, 12 normas legales, 28 linkografías. El procedimiento se destinó a elegir el tema de la investigación. La primera recopilación de datos bibliográficos nos permitió conocer en profundidad las TRA y el contenido del Artículo 7° de la LGS. La bibliografía adicional nos otorgó una sólida base de conocimiento sobre las TRA. El análisis cualitativo y de documentos nos permitió conocer la situación legal y de hecho de las TRA en el Perú. Mediante el abordaje metodológico antropológico y jurídico, analizamos los documentos mediante un enfoque científico-humanista. Los criterios éticos para el tema de fondo se enmarcaron en la interdisciplinariedad de la bioética y la búsqueda de un estatuto jurídico del concebido y los límites éticos que deben regir la ciencia y la tecnología. Los criterios éticos para la investigación formal fueron la verdad del registro y análisis de documentos de la referencia bibliográfica, y el uso de la información con respeto a la propiedad intelectual. Los criterios de rigor científico fueron la claridad para el desarrollo de los objetivos, y la credibilidad y profundidad de las fuentes de información. Los principales resultados apuntan a comprender que el ordenamiento jurídico del Perú es proteccionista del concebido, pero no el artículo 7 de la LGS que autorizó las TRA, las que han escapado del control normativo, por lo que implican riesgos para la vida y la salud de los embriones humanos producidos. Nuestra investigación se centra en determinar los criterios bioéticos y biojurídicos, para que una norma regule las biotecnologías del inicio de la vida prohibiendo las TRA, por respeto al derecho de los embriones humanos, acorde a su estatuto biológico, ontológico y jurídico.
Tesis

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Sulca, Cervan Catherine Claudia. "Aislamiento y enriquecimiento in vitro de células madre espermatogoniales de alpaca (Vicugna pacos) y caracterización de co-cultivos con células de Sertoli." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021. https://hdl.handle.net/20.500.12672/16372.

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Abstract:

Establece un protocolo de enriquecimiento de las células madre espermatogoniales (SSC) mediante gradientes discontinuas de Percoll y desarrollar co-cultivos con células de Sertoli que permita el cultivo continuo de las SSC, sentando las bases para futuros trabajos que busquen contribuir con la conservación del material genético de especies con problemas de fertilidad. Veinte muestras testiculares de alpacas adultas provenientes del Camal Municipal de Huancavelica fueron seleccionadas según sus parámetros espermáticos. Las biopsias testiculares fueron sometidas a dos digestiones enzimáticas, cuya suspensión resultante fue denominada Grupo Control (GC), y la purificación de éstas mediante las gradientes discontinuas, Grupo Post Percoll (GPP). Las muestras fueron evaluadas mediante Citometría de Flujo (CF) y Microscopía de Fluorescencia (MF) empleando el conjugado DBA-FITC con el que se identificó a las SSC como el grupo celular con mayor intensidad de fluorescencia (sDBA+). La evaluación por CF de 8 muestras y el análisis por MF de las 12 muestras restantes mostraron una mayor media porcentual de la población de SSC en el GPP en comparación a la del GC, afirmando el enriquecimiento de las SSC mediante las gradientes de Percoll (p<0.05). Además, la comparación de la viabilidad celular entre ambos grupos (GC: 92.59 ± 6.92% y GPP: 92.47 ± 5.79%) no mostró diferencia significativa (p>0.05). Estas poblaciones celulares iniciales (GC y GPP) fueron cultivadas durante 8 días en medio DMEM, denominándose Grupo Cultivo Control (GCC) y Grupo Cultivo Post Percoll (GCP) y fueron evaluados por CF y MF, encontrándose un aumento de la población de SSC en los post-cultivos. El análisis por CF no mostró diferencia significativa entre los grupos iniciales y sus respectivos cultivos (GC: 37.02 ± 29.21% vs GCC: 44.80 ± 19.63% y GP: 62.46 ± 33.15% vs GCP: 53.16 ± 14.49%); por el contrario, la evaluación por MF sí mostró un incremento significativo de la población sDBA+ en los cultivos (GC: 13.33 ± 18.88% vs GCC: 50.36 ± 8.07% y GP: 30.85 ± 21.98% vs GCP: 60.46 ± 7.31%). Paralelamente, se aislaron las células de Sertoli del grupo de células testiculares empleando la lectina DSA y se cultivaron en medio DMEM + 10%SBF. Una vez alcanzado el 90% de confluencia, éstas se co-cultivaron con las SSC enriquecidas en medio DMEM. En los primeros tres días se observó un rápido crecimiento de las SSC en contacto con las células de Sertoli y la formación de quistes sincitiales de SSC luego de aproximadamente dos semanas, lo que no se observó en los cultivos de células madre espermatogoniales enriquecidas sin células de Sertoli. Del presente estudio se concluye que el empleo de las gradientes de Percoll es un buen método de enriquecimiento de SSC y el co-cultivo con células de Sertoli es capaz de promover la proliferación de las SSC en cultivos de corto plazo.
Perú. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Vicerrectorado de Investigación y Posgrado. Programa de Promoción de Tesis de Pregrado. B18100194,

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Ferrer, Molina Paula. "Ensayo clínico, prospectivo, aleatorizado, comparativo, para determinar la eficacia y seguridad de dos protocolos para preparación endometrial en mujeres subsidiarias de transferencia de embriones." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2015. http://hdl.handle.net/10803/322811.

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Abstract:

INTRODUCCIÓN: En la práctica clínica de la Reproducción Asistida, cada vez es más habitual la realización de ciclos de transferencia de embriones. Este incremento no solo sucede por la edad avanzada de las pacientes y la consecuente indicación de ovodonación y embriodonación, sino también por el aumento del número de ciclos de criotransferencia. La introducción de la vitrificación como técnica de criopreservación y el aumento de la supervivencia y desarrollo embrionario permiten la existencia de un excedente de embriones, que pueden ser criopreservados para su posterior transferencia. La preparación endometrial previa a la transferencia puede realizarse siguiendo el ciclo natural de la paciente o administrando estrógenos exógenos durante la fase proliferativa. La vía de administración de los estrógenos más popular es la oral, si bien la transdérmica podría ofrecer ciertas ventajas sobre ella. OBJETIVOS: Nuestro objetivo principal es confirmar que la vía transdérmica es igual o superior a la vía oral para la administración de estrógenos en los ciclos de preparación endometrial para la transferencia de embriones, teniendo como variable principal el número de días necesarios para obtener un endometrio trilaminar de más de 7 mm. Como variables secundarias, evaluaremos la comodidad de la vía y satisfacción de la paciente, los niveles plasmáticos de estradiol y las tasas de embarazo, aborto y parto. MATERIAL Y MÉTODOS: Planteamos un estudio prospectivo, randomizado y comparativo, en el que 140 pacientes que van a realizar un ciclo de transferencia de embriones son aleatorizadas en 2 grupos: al grupo I se le asignará una pauta con comprimidos de valerato de estradiol; el grupo II recibirá una pauta con parches de estradiol hemidrato. Se medirá el grosor endometrial, mediante ecografía transvaginal, el día 10+1 de ciclo y, en caso de que no se haya alcanzado un endometrio de más de 7 mm, se realizará una segunda medición el día +15. Se realizará una determinación de los niveles de estradiol en sangre el día que la línea endometrial sea superior a 7 mm. Las pacientes rellenarán un cuestionario de satisfacción, en el que evaluarán la comodidad y efectos secundarios del tratamiento. RESULTADOS: Las pacientes del grupo II alcanzaron un endometrio significativamente mayor el día del primer control que las del grupo I (7.59 mm vs 7.01 mm; p:0.026), con menores niveles de estradiol en sangre (159.16 pg//ml vs 237.14 pg/ml; p:0.000) . Las pacientes del grupo I encontraron su tratamiento más cómodo que las del grupo II. En el grupo II, se reportaron más casos de mastalgia y dermatitis. No hubo diferencias significativas en cuanto a tasa de embarazo, aborto y parto. CONCLUSIONES: El tratamiento con estrógenos transdérmicos permite alcanzar un mayor grosor endometrial en menor número de días, con menores niveles plasmáticos de estradiol, aunque es peor tolerado por las pacientes.
INTRODUCTION: In the clinical practice of Assisted Reproduction, it is more and more frequent the performance of embryos transfer’s cycles. This increment is due not only to the patient’s advanced age and the subsequent indication of egg donation and embryos donation, but also to the increasing number of frozen embryos transfer. The introduction of vitrification as cryopreservation technique and the increment of embryo survival and development allow the existence of extra embryos that can be cryopreserved for its posterior transfer. Previous endometrial preparation can be performed following patient’s natural cycle or administering exogenous estrogens during the proliferative phase. The most common way of estrogens administration is the oral one, although the transdermal way might offer some advantages over the oral one. OBJECTIVE:Our fundamental aim is to confirm that the transdermal way is equal or superior than the oral way for the estrogens administration in endometrial preparation cycles for embryos transfer, taking as principal variable the number of days necessary for obtaining a triple line endometrium thicker than 7mm. As secondary variables, we evaluate comfort and patient’s satisfaction, plasmatic levels of estradiol as well as pregnancy, miscarriage and delivery rates. MATERIALS AND METHODS: We outlined a prospective, randomized and comparative study. In this study, 140 patients who are going to undergo an embryo transfer cycle are randomized in 2 groups: group I will follow a protocol with pills of estradiol valerate; group II will receive a protocol with patches of estradiol hemihydrate. Endometrial thickness will be measured with transvaginal ultrasound on day 10 of the cycle. Should the lining not measure more than 7mm, a second measurement will be performed on day 15 of the cycle. A blood analysis of estradiol level will be performed when the lining is thicker than 7mm. Patients will complete a satisfaction survey to evaluate treatment’s comfort and side effects. RESULTS: Patients of group II reached a significantly thicker endometrium on the day of first control compared to group I’s patients (7.59 mm vs 7.01 mm; p:0.026), with lower level of estradiol in blood (159.16 pg//ml vs 237.14 pg/ml; p:0.000). Patients of group I found their treatment more comfortable than patients of group II. In group II more cases of mastalgia and dermatitis were detected. No significant differences were found in terms of pregnancy, miscarriage and birth rates. CONCLUSIONS:Treatment with transdermal estrogens allows to reach a higher endometrial thickness in less days, with lower plasmatic levels of estradiol, although it is worst tolerated by patients.

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Benavides, Idrogo Lenin Adolfo. "Efecto del Método de Colección y Tensión de Oxígeno sobre el desarrollo embrionario de Ovocitos Bovinos fecundados y cultivados In Vitro." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/1571.

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Abstract:

Existen muchos factores que influyen en el éxito de la técnica de producción de embriones in vitro (PIV), muchos de los cuales aun son desconocidos o bien su efecto no ha sido totalmente esclarecido. El método de colección a elegir en condiciones de laboratorio y la óptima tensión de oxígeno para lograr un mejor desarrollo de los embriones siguen siendo materia de discusión entre los investigadores. Los métodos más usados para obtener ovocitos cultivables son la aspiración de folículos y la disección de la corteza ovárica, mientras que para el oxígeno las tensiones de 5% y 20% son las que se usan comúnmente en la producción de embriones. El objetivo de este estudio fue evaluar la influencia del método de colección y la tensión de oxígeno sobre los parámetros de PIV (porcentaje de divisiones a las 72 horas y porcentaje de blastocistos a los 7 y 9 días post fecundación). En el experimento 1, el efecto de dos métodos de colección, aspiración y disección, sobre la tasa de divisiones y desarrollo embrionario fue comparado. El porcentaje de divisiones a las 72 horas post inseminación obtenido con el método de aspiración (71.39%) fue significativamente mayor respecto al porcentaje obtenido con el método de disección (60.98%); en tanto que la tasa de blastocistos al día 7 y 9 post fecundación para el método de aspiración (17.63% y 11.4%, respectivamente) no mostró diferencia estadística con los resultados obtenidos con el método de disección (22.9% y 12.09%, respectivamente). Adicionalmente se observó que el número de ovocitos recuperados por ovario fue significativamente mayor con el método de disección. En el experimento 2 se compararon dos tensiones de oxígeno en la etapa de cultivo, 5% y 20 % de oxígeno, y se obtuvo mayor tasa de divisiones y mayor tasa de blastocistos al día 7 post fecundación con una tensión de oxígeno del 5% (69.71% y 29.79%, respectivamente) comparado con una tensión de oxígeno del 20% (59.69% y 19.26%, respectivamente), no se registró diferencia en cuanto a los blastocistos obtenidos al día 9 post fecundación. Los resultados obtenidos sugieren que el método de aspiración folicular y el cultivo con una tensión de oxígeno del 5% deberían ser considerados como factores adecuados para lograr las condiciones óptimas en el proceso de producción de embriones in vitro. Palabras clave: embrión, oxígeno, colección, bovino, PIV
--- There are many factors that influence the success of the technique of in vitro embryo production (IVP), many of which are still poorly understood or the influence mechanism has not yet been clarified. The collection method to choose in laboratory conditions and the optimal oxygen tension for better embryo development are still a matter of debate among researchers. The methods used to obtain cultivable oocytes are follicle aspiration and cortex dissection from the ovary, whereas two oxygen tension, 5% and 20%, are commonly used in the embryo production. The objective of this study was to evaluate the influence of the collection method and oxygen tension on PIV parameters (cleavage rate and blastocyst rate). In Experiment 1, the effect of two collection methods, aspiration and dissection, on embryonic development was compared. The highest percentage of cleavage at 48 hours post insemination was obtained with the aspiration method (71.39%), but no difference was observed in the percentage of blastocysts at 7 and 9 days post insemination, additionally it was noted that the number of oocytes recovered per ovary was significantly higher with the dissection method. In Experiment 2, it was compared two oxygen tensions in the culture stage, 5% and 20% oxygen, and it was obtained higher cleavage and blastocyst rate at day 7 post insemination with an 5% oxygen tension. Then, according to these results it can be concluded that follicular aspiration method and a 5% oxygen tension are included within the optimal conditions for the PIV. Keywords: embryo, oxygen, collection, bovine, IVP
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Torres, Trujillo Angelo Edward. "Efecto de Vasconcellea pubescens “papaya de monte” sobre la calidad espermática de ratones machos tratados con ciclofosfamida y el efecto en el desarrollo de embriones preimplantacionales." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12672/6535.

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Abstract:

Evalúa el efecto del extracto etanólico de Vasconcellea pubescens (de nombre común “Papaya de monte”) sobre las características espermáticas en ratones tratados con ciclofosfamida y su efecto en el desarrollo de embriones preimplantacionales. Para ello conforma cuatro grupos de ratones a los que se le suministró por vía oral, durante 6 días por semana, durante 6 semanas, los siguientes tratamientos: agua destilada (control), extracto de V. pubescens (300 mg/kg), ciclofosfamida (6 mg/kg), y extracto de V. pubescens (300 mg/kg) conjugado a ciclofosfamida (6 mg/kg). No existe diferencia significativa entre los tratamientos en el peso de epidídimos ni en la concentración espermática. Respecto al porcentaje de la movilidad espermática, disminuyó significativamente en el grupo tratado con ciclofosfamida en relación al control, y el extracto de V. pubescens atenuó el efecto tóxico del fármaco. En la evaluación de los embriones en el cuarto día de desarrollo in vivo, en el tratamiento con extracto de V. pubescens conjugado a ciclofosfamida se obtuvo un mayor porcentaje de embriones detenidos en estadio de clivaje y un menor porcentaje de embriones que alcanzaron el estadio de blastocisto. El tratamiento con ciclofosfamida mostró un porcentaje menor de embriones con calidad celular óptima. Estos resultados indican que a la dosis suministrada, el extracto de V. pubescens tiene efecto inocuo en los parámetros espermáticos de ratones adultos. Sin embargo, es posible que genere daños mínimos, los cuales se incrementan por la suministración de ciclofosfamida, retrasando el desarrollo embrionario.
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Menéndez, Blanco Irene. "In vitro embryo production in goats by intracytoplasmic sperm injection (ICSI): gamete treatments." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2020. http://hdl.handle.net/10803/670680.

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Abstract:

El desenvolupament de la tècnica de microinjecció intracitoplasmàtica d’espermatozous (ICSI) va suposar un gran avanç per als laboratoris de reproducció assistida. Aquesta tècnica és de gran utilitat en casos d’infertilitat masculina, gàmetes criopreservats i ovòcits de baixa qualitat. Els oòcits de baixa qualitat són un dels principals factors que afecten negativament la producció d’embrions in vitro tant d’humans com en animals. En aquesta tesi utilitzem els ovòcits de cabra prepúber com a model d’estudi d’ovòcits de baixa qualitat per a: 1) Estudiar l’efecte de la criopreservació de gàmetes masculins i femenins (Estudis 1 i 2) sobre el desenvolupament embrionari després de la ICSI i 2) estudiar l’efecte de la suplementació amb un antioxidant natural, durant la maduració in vitro (MIV) dels oòcits, sobre el seu desenvolupament embrionari després de la ICSI. En el primer estudi comparem la utilització d’espermatozoides frescos i congelats per a la tècnica d’ICSI avaluant el seu efecte en el desenvolupament embrionari i la seva relació amb els paràmetres de capacitació dels espermatozoides. Els resultats van mostrar un nivell significativament més alt de capacitació en els espermatozoides congelats. No obstant això, aquestes diferències no es van traduir en diferències en formació pronuclear o desenvolupament embrionari després d’ICSI. El segon estudi va examinar l’efecte de la vitrificació en oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro en: el dany sobre els ovòcits avaluat mitjançant l’anàlisi de les espècies reactives d’oxigen (ROS) i el desenvolupament embrionari amb ICSI i l’activació partenogenètica (AP). Els resultats van mostrar que el grup dels ovòcits vitrificats tenien nivells de ROS més alts en comparació amb els ovòcits no vitrificats. Després de la ICSI la formació normal de zigots i de blastocists no presentava diferències entre els dos grups. No obstant això, després d’AP, la divisió dels ovòcits i la formació de blastocists van disminuir significativament després de la vitrificació. L’estudi 3 va tenir com a objectiu millorar la competència dels oòcits de cabres prepúbers suplementant el medi de maduració amb crocetina, un antioxidant natural. Vam avaluar l’efecte de la crocetina sobre paràmetres moleculars i cel·lulars relacionats amb la competència dels ovòcits (ROS, glutatió (GSH) i activitat mitocondrial) i el desenvolupament embrionari després de fecundació in vitro (FIV), ICSI, i AP. No es van observar diferències significatives en la formació de blastocists entre les diferents concentracions de crocetina 0 µM (control), 0.5 µM, 1 µM i 2 µM després de la FIV. No obstant això, vam demostrar que una concentració de 1 µM de crocetina en el medi de maduració va reduir significativament els nivells de ROS encara que no va modificar la concentració de GSH o l’activitat mitocondrial. Analitzant l’efecte de la crocetina sobre el desenvolupament embrionari després de la ICSI i l’AP no vam observar cap diferència estadísticament significativa en el percentatge de divisió dels ovòcits, la formació de blastocists o el nombre total de cèl·lules per blastòcit entre els grups. No obstant això, en el grup d’ICSI amb crocetina vam observar lleugeres millores com una major divisió dels ovòcits i major formació de blastocists que en els oòcits madurats sense antioxidant. En conclusió, en aquesta tesi vam demostrar que el semen congelat pot ser tan eficient com el semen fresc per produir embrions de oòcits de cabres prepúbers mitjançant ICSI. No obstant això, amb el protocol utilitzat, els oòcits de cabres prepúbers després de la vitrificació no es van poder desenvolupar fins a blastocist després de ser fertilitzats per ICSI. L’addició d’un antioxidant com la crocetina al medi de maduració redueix significativament els nivells de ROS, i pot millorar lleugerament el desenvolupament embrionari després d’ICSI.
El desarrollo de la técnica de microinyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) supuso un gran avance para los laboratorios de reproducción asistida. Esta técnica es de gran utilidad en casos de infertilidad masculina, gametos criopreservados y ovocitos de baja calidad. Los ovocitos de baja calidad son uno de los principales factores que afectan negativamente la producción de embriones in vitro (PIVE) tanto de humanos como en animales. En esta tesis utilizamos los ovocitos de cabra prepúber como modelo de estudio de ovocitos de baja calidad para: 1) Estudiar el efecto de la criopreservación de gametos masculinos y femeninos (Estudios 1 y 2) sobre el desarrollo embrionario después de la ICSI y 2) Estudiar el efecto de la suplementación con un antioxidante natural, durante la maduración in vitro (MIV) de los ovocitos, sobre su desarrollo embrionario después de la ICSI. En el primer estudio comparamos la utilización de espermatozoides frescos y congelados para la técnica de ICSI evaluando su efecto en el desarrollo embrionario y su relación con los parámetros de capacitación de los espermatozoides. Los resultados mostraron un nivel significativamente más alto de capacitación en los espermatozoides congelados. Sin embargo, estas diferencias no se tradujeron en diferencias en formación pronuclear o desarrollo embrionario después de ICSI. El segundo estudio examinamos el efecto de la vitrificación en ovocitos de cabras prepúberes madurados in vitro en: el daño sobre los ovocitos evaluado mediante el análisis de las especies reactivas de oxigeno (ROS) y el desarrollo embrionario con ICSI y activación partenogenética (AP). Los resultados mostraron que el grupo de los ovocitos vitrificados tenían niveles de ROS más altos comparación con los ovocitos no vitrificados. Después de la ICSI la formación normal de cigotos y de blastocistos no presentaba diferencias entre ambos grupos. Sin embargo, después de AP, la división de los ovocitos y la formación de blastocistos disminuyeron significativamente tras la vitrificación. El estudio 3 tuvo como objetivo mejorar la competencia de los ovocitos de cabras prepúberes suplementando el medio de maduración con crocetina, un antioxidante natural. Evaluamos el efecto de la crocetina sobre parámetros moleculares y celulares relacionados con la competencia de los ovocitos (ROS, glutatión (GSH) y actividad mitocondrial) y el desarrollo embrionario después de fecundación in vitro (FIV), ICSI, y AP. No se observaron diferencias significativas en la formación de blastocistos entre las distintas concentraciones de crocetina 0 µM (control), 0.5 µM, 1 µM y 2 µM después de la FIV. Sin embargo, demostramos que una concentración de 1 µM de crocetina en el medio de maduración reduce significativamente los niveles de ROS aunque no modificó la concentración de GSH o la actividad mitocondrial. Analizando el efecto de la crocetina sobre el desarrollo embrionario después de la ICSI y la AP no observamos ninguna diferencia estadísticamente significativa en el porcentaje de división de los ovocitos, la formación de blastocistos o el número total de células por blastocisto entre los grupos. Sin embargo, en el grupo de ICSI con crocetina se observaron ligeras mejoras como una mayor división de los ovocitos y mayor formación de blastocistos que en los ovocitos madurados sin antioxidante. En conclusión, en este estudio hemos demostrado que el semen congelado puede ser tan eficiente como el semen fresco para producir embriones de ovocitos de cabras prepúberes mediante ICSI. Sin embargo, con el protocolo utilizado, los ovocitos de cabras prepúberes después de la vitrificación no pudieron desarrollarse hasta blastocisto después de ser fertilizados por ICSI. La adición de un antioxidante como la crocetina al medio de maduración reduce significativamente los niveles de ROS, y puede mejorar ligeramente el desarrollo embrionario después de ICSI.
The development of the intracytoplasmic sperm microinjection technique (ICSI) was a great advance for assisted reproduction laboratories. This technique is very useful in cases of male infertility, cryopreserved gametes and low-quality oocytes. Low-quality oocytes are one of the main factors that negatively affect in vitro embryo production (IVEP) in both humans and animals. In this thesis we use prepubertal goat oocytes as a study model for low-quality oocytes to: 1) Study the effect of cryopreservation of male and female games (Studies 1 and 2) on embryonic development after ICSI and 2) To study the effect of supplementation with a natural antioxidant called Crocetin, during in vitro maturation (IVM) of oocytes, on their embryonic development after ICSI. In study 1, we compared the use of fresh and frozen sperm for the ICSI technique, evaluating its effect on embryonic development and its relationship with sperm capacitation parameters. The results showed significantly higher level of capacitated spermatozoa in frozen-thawed sample. However, these differences were not translated into differences in pronuclear formation or embryonic development after ICSI between groups. The second study examined the effect of vitrification on IVM prepubertal goat oocytes on: damage to oocytes assessed by analysis of reactive oxygen species (ROS) and embryonic development with ICSI and parthenogenetic activation (PA). The results showed that the group of vitrified oocytes had higher ROS levels compared to non-vitrified oocytes. After ICSI, the normal formation of zygotes and blastocysts did not show differences between both groups. However, after PA, oocyte division and blastocyst formation decreased significantly with vitrification process. Study 3 was aimed at improving the competence of prepubertal goat oocytes by supplementing the maturing medium with crocetin, a natural antioxidant. We evaluated the effect of crocetin on molecular and cellular parameters related to oocyte competence (ROS, glutathione (GSH) and mitochondrial activity) and embryonic development after in vitro fertilization (IVF), ICSI, and PA. No significant difference in blastocyst formation was observed between the different concentrations of crocetin 0 µM (control), 0.5 µM, 1 µM and 2 µM after IVF. However, we demonstrate that a 1 µM concentration of crocetin in the maturation medium significantly reduced ROS levels although it did not modify the GSH concentration or mitochondrial activity. Analyzing the effect of crocetin on embryonic development after ICSI and PA, we did not observe any statistically significant difference in the percentage of oocyte division, blastocyst formation or the total number of cells per blastocyst between groups. However, slight improvements such as increased oocyte division and greater blastocyst formation were observed in the crocetin ICSI group whose oocytes where matured with 1 µM crocetin. In conclusion, we have demonstrated that fresh and frozen-thawed semen can be useful for ICSI of prepubertal goat oocytes without compromising the results. However, with the protocol used, prepubertal goat oocytes after vitrification were not able to develop up to blastocyst after being fertilized by ICSI. The crocetin addition to IVM has not shown significant effects on embryo production from prepubertal goat oocytes in spite of the significant reduction on ROS level and slightly improvement on embryo development after ICSI.

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Vilca, Ypanaqué Eliana Rosavel. "Descripción macroscópica y microscópica de los ovarios durante la etapa fetal en la alpaca (Vicugna pacos)." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2021. https://hdl.handle.net/20.500.12672/16100.

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Abstract:

Realiza la descripción macroscópica y microscópica de los ovarios de alpaca durante la etapa fetal. Se trabajó con 18 fetos recolectados en el camal Municipal de Huancavelica provenientes de alpacas destinadas al consumo humano. El procesamiento y análisis de las muestras colectadas se realizó en la FMV – UNMSM, Lima. Se calculó la edad fetal mediante la medida del diámetro biparietal dividiéndolo en tres grupos: Grupo I (60 – 150 días), Grupo II (151 – 239 días) y Grupo III (240 – 335 días). Se registró el peso, largo y ancho del feto y ovarios. El peso de los ovarios fue de 0.02 ± 0.01, 0.03 ± 0.01 y 0.03 ± 0.01 gramos en el primer, segundo y tercer grupo, respectivamente. Los ovarios fueron pares, ovoidales, de superficie lisa y color crema, ubicados en la región sublumbar a nivel de la 6ta y 7ma vértebra lumbar presentando corteza y médula visible desde el tercer mes. Microscópicamente, en el Grupo I se observó la presencia de ovogonias, la distinción entre la corteza y médula, folículos primordiales y primarios unilaminares, proceso de atresia y segmentación de las células germinativas. En el Grupo II, las células foliculares empiezan a proliferar y se observó folículos primarios multilaminares o preantrales. En el Grupo III, se observó la presencia de folículo preovulatorio. Estos resultados indican que los ovarios tienen un mayor crecimiento en el primer y segundo grupo y disminuyen ligeramente en el tercero. Además, se concluye que, a partir del día 68 de la etapa fetal de las alpacas, los ovarios presentan características macroscópicas similares a la etapa adulta así mismo microscópicamente los ovarios en fetos de alpaca presentaron ovogonias, folículos primordiales, folículos primarios unilaminares, folículos multilaminares o preantrales, folículo preovulatorio, así como la degeneración de las células germinales.
Perú. Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Perú). Fondo Nacional de Desarrollo Científico y Tecnológico (Fondecyt). Círculos de investigación en ciencia y tecnología. 025-2016-FONDECYT

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Choque, Mayta Janette Silvia. "Evaluación de embriones de haba (Vicia faba L.) en diferentes medios de cultivo In vitro y efecto de sustratos, para la obtención de semilla de alta calidad." Universidad Mayor de San Andrés. Programa Cybertesis BOLIVIA, 2009. http://www.cybertesis.umsa.bo:8080/umsa/2009/choque_mj/html/index-frames.html.

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Abstract:

El cultivo de haba (Vicia faba L.), es considerado el más importante entre las leguminosas de la zona Andina boliviana, gracias a su adaptación permite la producción en departamentos como: Potosí, Cochabamba, La Paz, Oruro y Chuquisaca. El valor de esta leguminosa radica principalmente en la producción de semilla, logrando abrir mercados para su exportación, debido al desarrollo eficiente de esta cadena productiva, la evolución de superficies cultivadas es progresiva. El principal problema es la restricción en producción de semilla bajo el sistema formal (prebásica, básica, registrada, certificada), a causa de la proliferación de plagas y enfermedades. Sin embargo una alternativa fue la producción de semilla de alta calidad mediante el cultivo de tejidos vegetales en el área de Biotecnología Vegetal del Instituto Boliviano de Ciencia y Tecnología Nuclear (IBTEN), usando el ecotipo Gigante de Copacabana.

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Dissertations / Theses on the topic 'Embriones'

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