Dissertations / Theses on the topic 'Endocrinologia'

Dissertação de Doutoramento em Ciências Biomédicas apresentada ao Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar da Universidade do Porto
A importância da cultura do camarão peneídeo Penaeus japonicus, bem como a existência no sul de Portugal da espécie autóctone P. kerathurus justificam o aprofundamento dos conhecimentos sobre o seu ciclo reprodutivo. O presente trabalho resulta de uma abordagem morfológica e endocrinológica da reprodução nestas espécies, através do estudo das alterações morfológicas do ovário e da ultrastrutura do ovócito bem como da sua relação com os níveis de hormonas ecdisteróides e esteróides sexuais durante a ovogénese.O estudo histológico do ovário de P. japonicus e P. kerathurus permitiu definir cinco fases vitelogénicas: Fase I Previtelogénese. Fase II - Previtelogénese avançada ou vitelogénese primária. Fase III - Vitelogénese (vitelogénese secundária). Fase IV - Maturação (formação de vesículas corticais). Fase V Desova. O presente trabalho constitui o primeiro estudo ultrastrutural da vitelogénese na espécie P. kerathurus, demonstrando pela primeira vez nos peneídeos, a formação do retículo endoplásmico e a origem dos grânulos densos. A origem dos vacúolos autofágicos e a presença simultânea de dois tipos de células foliculares nos crustáceos, bem como a presença de pontes intercelulares ("nurse-cells") na sub-classe malacostraca, constituem igualmente observações inéditas deste trabalho. Em P. kerathurus o vitelo tem uma origem mista, i. e., intraovocítica e extraovocítica. No início da vitelogénese predominam os fenómenos de endocitose mediada por receptores. Numa fase posterior, o processo vitelogénico é fundamentalmente intraovocítico, exibindo apenas escassos fenómenos de endocitose. A síntese de vitelo endógeno, que nesta espécie apresenta características peculiares, é descrito detalhadamente. Finalizada a vitelogénese, observa-se a formação das especializações corticais (vesículas corticais com estruturas do tipo "proteoglicano") cuja origem e desenvolvimento são descritas pela primeira vez nos peneídeos.Tendo como objectivo a quantificação de hormonas este ...

Dissertação de Doutoramento em Ciências Biomédicas apresentada ao Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar da Universidade do Porto
A importância da cultura do camarão peneídeo Penaeus japonicus, bem como a existência no sul de Portugal da espécie autóctone P. kerathurus justificam o aprofundamento dos conhecimentos sobre o seu ciclo reprodutivo. O presente trabalho resulta de uma abordagem morfológica e endocrinológica da reprodução nestas espécies, através do estudo das alterações morfológicas do ovário e da ultrastrutura do ovócito bem como da sua relação com os níveis de hormonas ecdisteróides e esteróides sexuais durante a ovogénese.O estudo histológico do ovário de P. japonicus e P. kerathurus permitiu definir cinco fases vitelogénicas: Fase I Previtelogénese. Fase II - Previtelogénese avançada ou vitelogénese primária. Fase III - Vitelogénese (vitelogénese secundária). Fase IV - Maturação (formação de vesículas corticais). Fase V Desova. O presente trabalho constitui o primeiro estudo ultrastrutural da vitelogénese na espécie P. kerathurus, demonstrando pela primeira vez nos peneídeos, a formação do retículo endoplásmico e a origem dos grânulos densos. A origem dos vacúolos autofágicos e a presença simultânea de dois tipos de células foliculares nos crustáceos, bem como a presença de pontes intercelulares ("nurse-cells") na sub-classe malacostraca, constituem igualmente observações inéditas deste trabalho. Em P. kerathurus o vitelo tem uma origem mista, i. e., intraovocítica e extraovocítica. No início da vitelogénese predominam os fenómenos de endocitose mediada por receptores. Numa fase posterior, o processo vitelogénico é fundamentalmente intraovocítico, exibindo apenas escassos fenómenos de endocitose. A síntese de vitelo endógeno, que nesta espécie apresenta características peculiares, é descrito detalhadamente. Finalizada a vitelogénese, observa-se a formação das especializações corticais (vesículas corticais com estruturas do tipo "proteoglicano") cuja origem e desenvolvimento são descritas pela primeira vez nos peneídeos.Tendo como objectivo a quantificação de hormonas este ...

Orientador: Marco Antonio Alvarenga
Resumo: Respostas superovulatórias satisfatórias têm sido reportadas em éguas com o uso do Extrato de Pituitária Eqüina (EPE) e FSH purificado eqüino (eFSH), contudo as taxas de recuperação embrionária permanecem inconsistentes. O objetivo deste estudo foi avaliar as concentrações plasmáticas de estradiol, inibina, FSH e LH em éguas superovuladas com eFSH e EPE (em doses constantes ou decrescentes): antes, durante e imediatamente após o término da administração hormonal. Foram utilizadas seis éguas as quais foram submetidas aos seguintes tratamentos: Grupo I (GI) recebeu 25mg de EPE intramuscular (I.M.), Grupo II (GII) foram tratadas com EPE (I.M.) em doses decrescentes. No Grupo IIl (GIII), o EPE foi substituído por 12,5mg de eFSH (I.M.). O Grupo IV (GIV) foi utilizado como controle. Sangue foi coletado diariamente para avaliar as concentrações hormonais por radioimunoensaio. As coletas foram iniciadas dois dias antes da primeira aplicação medicamentosa, encerrando 48horas após a última ovulação do estro. As diferenças nos níveis plasmáticos hormonais foram comparadas utilizando-se o ANOVA, sendo considerada diferença estatística quando P0,05. O número médio de ovulações foi de 3,3; 4,8; 5,0 e 1,0 nos grupos 1 a 4, respectivamente, tendo sido maior (P<0,05) em todos os grupos superovulados em relação ao controle. As concentrações de estrógeno, inibina, FSH e LH não diferiram entre os grupos durante o período 1. No período 2, os valores de estradiol foram maiores (P<0,05) em éguas sob tratamento superovulatório com eFSH (GIII) 29,52pg/ml, os grupos I e II, apresentaram valores intermediários (GI: 16,75pg/ml, GII: 16,26pg/ml) e o GIV (7,78pg/ml) menor estatisticamente aos demais. Foi verificada uma correlação altamente positiva (R=0,615; P=0,01) entre os valores de estradiol e inibina, os quais, durante os tratamentos, foram maiores (P<0,05)... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Satisfactory superovulatory responses have been reported in mares with the use of equine pituitary extract (EPE) and purified equine FSH (eFSH), however embryo recovery rates are still inconsistent. Recent studies demonstrated that the superovulatory treatment disturbs oocyte maturation and transport. The main objective of the present study was to evaluate the plasmatic concentrations of estradiol, inhibin, FSH and LH in super ovulated mares treated with eFSH and EPE (with constant or decreasing doses): Six mares were used in a crossover experiment in four different groups: Group I mares received 25mg of EPE every twelve hours, Group II received EPE in decreasing doses and Group IlI mares received 12.5mg of eFSH (IM). Group IV served as control. Embryo flushes were performed 8 days pos ovulation. Blood was collected daily to evaluate hormonal concentrations through radioimuneassay, starting two days before the first administration, until 48 hours post-ovulation. Mean and daily hormonal concentrations of estradiol, inhibin, FSH and LH were evaluated. Hormonal concentrations were submitted to statistical analysis using ANOVA. Significance levels were set as P<0.05. Mean number of ovulations was 3.3; 4.8; 5.0 and 1.0 in groups 1 to 4, respectively, being higher (P<0.05) in all super ovulated groups, when compared to control. Concentrations of estrogen, inhibin, FSH and LH did not differ between groups during the first period. In period 2, estradiol levels were higher (P<0.05) in mares with superovulatory treatment eFSH (GIII) 29.52pg/ml, the groups GI and GII (GI: 16.75pg/ml, GII: 16.26pg/ml) values intermediary, and GIV (7.78pg/ml) levels lower. A positive correlation between estradiol levels and number of follicles ≥30mm (R=0.917; P<0.05), recovered embryos (R=0.945; P<0.05) and ovulations (R=0.75; P<0.05) was identified in super ovulated mares. A positive correlation (R=0.615; P=0.01) between estradiol and inhibin concentrations.
Mestre

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior
Thyroid hormones regulate the body metabolism, with changes in cellular oxygen usage profile. As a result, there may be production of reactive oxygen species that induce oxidative stress and cellular dysfunction in various tissues. The study aims to evaluate the levels of oxidative stress in women diagnosed with primary hypothyroidism. The study included 25 female patients from the Endocrinology Clinic of the University Hospital Walter CantÃdio (HUWC) in Fortaleza, CearÃ, with primary hypothyroidism. Blood samples of patients were collected in the hypothyroid condition and euthyroid. We evaluated the thyroid hormone function, biochemical and haematological profile of patients, beyond the parameters of oxidative stress from measurements of malondialdehyde, nitrite/nitrate, superoxide dismutase and catalase. We observed a significant reduction of total cholesterol, HDL, LDL and triglycerides and leukocytes after correction of hypothyroidism. In relation to oxidative stress, there was a significant reduction of catalase activity (50,12 Â12,75 vs 63,77 Â 23,8 atv/min; p = 0.03) when we compared two moments. There was no change in nitrite / nitrate concentration (p = 0.18), malonaldehyde (p = 0.67) and superoxide dismutase activity (p = 0.93) when we analyzed the whole group. There was no significant difference in the concentration of malonaldehyde in both situations (P = 0.67). The concentration of nitrite / nitrate was increased in cases of hypothyroidism with metabolic syndrome (34.07 Â 10.89 Vs 30.12 Â 10.12, p = 0.03). These data suggest that hypothyroidism alters oxidative stress, and catalase activity is the most sensitive marker. When hypothyroidism occurs with metabolic syndrome, NO levels increase, suggesting different mechanisms in oxidative stress in these two clinical conditions.
Os hormÃnios tireoidianos regulam o metabolismo corporal, com mudanÃa no perfil de utilizaÃÃo de oxigÃnio celular. Como consequÃncia, pode ocorrer a produÃÃo de espÃcies reativas de oxigÃnio que induzem o estresse oxidativo e disfunÃÃes celulares em diversos tecidos. O estudo tem como objetivo avaliar os nÃveis de estresse oxidativo em mulheres diagnosticadas com hipotireoidismo primÃrio. Participaram do estudo 25 pacientes do sexo feminino, atendidas no ambulatÃrio de Endocrinologia do Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio (HUWC) em Fortaleza-CearÃ, com hipotireoidismo primÃrio. As amostras de sangue dos pacientes foram coletadas na condiÃÃo de hipotireoidismo e em eutireoidismo. Avaliou-se a funÃÃo hormonal tireoideana, o perfil bioquÃmico e hematolÃgico dos pacientes, alÃm dos parÃmetros do estresse oxidativo a partir das dosagens de malonaldeÃdo, nitrito/nitrato, catalase e superÃxido dismutase. Observamos reduÃÃo significativa do colesterol total, LDL e triglicÃrideos apÃs a correÃÃo do hipotireoidismo. Em relaÃÃo ao estresse oxidativo, houve aumento da atividade da catalase (50,25  12,75 vs 63,77  23,8 atv/min; p = 0,03) quando comparamos os dois momentos. NÃo houve alteraÃÃo no nitrito/nitrato (p=0,18), malonaldeÃdo (p=0,67) e na atividade da superÃxido dismutase (p=0,93) quando analisamos o grupo inteiro. A concentraÃÃo de nitrito/nitrato estava aumentada nos casos de hipotireoidismo com sÃndrome metabÃlica (34,07  10,89 vs 30,12 Â10,12; p=0,03). Esses dados sugerem que o hipotireoidismo altera o estresse oxidativo, sendo que a atividade da catalase à o marcador mais sensÃvel. Quando o hipotireoidismo està associado à sÃndrome metabÃlica, os nÃveis de NO aumentam, o que sugere mecanismos diferentes no estresse oxidativo nessas duas condiÃÃes clÃnicas.

Dissertação de Mestrado em Psicologia Legal
Os cães de protecção e os cães de condução de gado expressam em contexto de trabalho padrões de comportamento muito diferentes. Os cães de protecção de gado, para os animais do rebanho, exibem sequências de comportamento social e raramente expressam em algum momento da sua ontogenia comportamento predatório definido. Os cães de condução de gado, exibem um comportamento homólogo ao padrão motor predatório do ancestral lobo mas truncado numa fase precoce. Este trabalho teve como objectivos: a análise qualitativa e quantitativa dos padrões elementares de comportamento exibidos pelo cão Serra da Estrela, em contexto de trabalho; a análise de níveis plásmicos de testosterona em cães de protecção e em cães de condução de gado. Os padrões elementares de comportamento do cão Serra da Estrela, observados em contexto de trabalho, são os característicos de um cão de protecção de gado; sequências de comportamento social que têm como receptor o gado, marcação odorífera, vocalização em resposta a estímulos novos e significantes, errar em patrulha. Não expressa comportamento predatório. Também a análise quantitativa está de acordo com os dados da literatura; o cão surge adormecido a maior parte do tempo mas a frequência do padrão de comportamento vigilância é alta. Os dados indicam que há diferenças estatisticamente significativas entre cães de protecção e cães de condução de gado (machos) nos níveis plásmicos de testosterona. Mais, os níveis plásmicos de testosterona encontrados em cães de protecção de gado (raça Serra da Estrela) são muito inferiores aos que surgem como referência para a espécie na literatura.

A endocrinologia reprodutiva do muriqui do sul B. arachnoides foi avaliada em quatro fêmeas adultas pela dosagem de metabólitos fecais de estrógenos e em quatro machos adultos e um macho subadulto pela dosagem de metabólitos de testosterona e glicocorticóides durante um período de onze meses em duas diferentes condições restritivas, ilha de 600m2, Curitiba (PPC) e viveiro (15,40x5,85x4,70m) Rio de Janeiro (CPRJ). As fêmeas apresentaram grande variação individual nas concentrações de estrógenos e progestinas fecais ao longo do período de estudo, três não apresentaram atividade ovariana no período de outubro-dezembro e apenas uma apresentou atividade durante todos os períodos amostrados. Mesmo com níveis baixos de esteróides as fêmeas apresentaram comportamento perceptivo e cópulas. Os machos do PPC apresentaram níveis significativamente mais altos de glicocorticóides e níveis significativamente mais baixos de testosterona do que os machos do CPRJ (p<0,05) apresentaram. O macho subadulto apresentou níveis significativamente mais baixos para metabólitos de testosterona. Nos machos as cópulas ocorreram próximo às elevações das concentrações de testosterona. Em três situações grandes elevações dos níveis de glicocorticóides fecais puderam ser relacionadas a situações estressantes. Nosso estudo comprovou a eficácia do método empregado para monitoramento reprodutivo bem como para avaliar situações estressantes.
The reproductive endocrinology of the southern muriqui (Brachyteles. Arachnoids) was evaluated through the dosage of fecal metabolites steroids for 04 adult females and fecal metabolites of testosterone and glucocorticoids for 04 adult males and 01 subadult male. The study was conducted over an eleven month period at two environmental conditions: a) an island of 600 m2, with natural vegetation, at Curitiba Zoo (PPC) and b) a large cage of 15,40X5,85X4,70m at Rio de Janeiro Primatological Centre (CPRJ). It was observed that females had large strogen interindividual variation and fecal progestins: three females did not show ovarian activity over a partial period of the study, while ovarian activity was observed for all sample periods for one female. Despite the detection of low levels of steroids, proceptive behaviour and copulations were observed. The PPC males showed significant levels of glicorticoids and testosteorne when compared to the CPRJ males (p<0.05). The subadult male exhibited the lowest level of testosterone metabolites and those differences were significant when compared to the adult males (p<0.05). For all males, copulations occurred when testosterone levels were highest and peaks of glucorticoids were linked to stressfull situations. This study have shown that the method used was effective for reproductive monitoring as well as for evaluating stressfull situations.

O hipertiroidismo é a endocrinopatia mais prevalente em gatos com idade superior a oito anos. A prevalência da mesma tem vindo a aumentar ao longo dos últimos anos devido, maioritariamente, a uma maior consciencialização dos tutores e dos médicos veterinários quanto à doença, sabendo reconhecer inclusive as alterações comportamentais características. A presente dissertação tem como objetivo identificar as principais alterações comportamentais de gatos hipertiroideus, reportadas pelos respetivos tutores. Tal foi concretizado com um inquérito feito a todos os tutores dos gatos através de contacto telefónico. Adicionalmente, pretendeu-se relacionar determinadas alterações comportamentais de gatos hipertiroideus com o nível de concentração sérica de T4 total. Conclui-se que as principais alterações comportamentais reportadas em gatos hipertiroideus foram a vocalização excessiva (30%), a ansiedade generalizada (26,7%) e a hiperatividade (26,7%). Os resultados sugerem também uma associação significativa entre conjuntos de alterações comportamentais e a concentração de T4 total em gatos hipertiroideus; ABSTRACT: Retrospective study of the main behavioural problems and its relationship with basal total serum T4 concentration in hyperthyroid cats Hyperthyroidism is the most prevalent endocrinopathy in cats older than eight years old, and this prevalence has been increasing over the years, mainly because of the increased awareness by owners and veterinarians, including how to recognize characteristic behavioural problems. The present study’s major objective is to survey the main behavioural issues in hyperthyroid cats, as reported by their respective owners. The same inquiry form was made to all the cats’ owners through telephonic contact. Additionaly, it was intended to prove a relationship between certain behavioural problems in hyperthyroid cats and basal total serum T4 concentration. In conclusion, the main reported behavioural problems in hyperthyroid cats were excessive vocalization (30%), general anxiety (26,7%) and hyperactivity (26,7%). The results suggest as well that there’s an apparent correlation between basal total serum T4 concentration and sets of behavioural problems in hyperthyroid cats.

O presente relatório vem no seguimento do estágio curricular feito no Hospital VetSet, para conclusão do Mestrado Integrado em Medicina Veterinária. Este relatório incluirá três componentes: descrição da casuística acompanhada; monografia sobre o tema do hipertiroidismo felino; e relato de dois casos clínicos sobre o mesmo tema. Durante o estágio foram acompanhadas as áreas de medicina preventiva, clínica médica e cirúrgica, sendo a espécie canina a mais consultada. As subáreas da vacinação, gastroenterologia e glândulas anexas, e cirurgia de tecidos moles, foram, respetivamente, as mais observadas. Quanto à monografia: o Hipertiroidismo é a doença endócrina mais comummente diagnosticada entre a população felina, em especial na fase sénior. Com um quadro clínico variável e uma série de fatores apontados como predisponentes, esta entidade clínica pode ser diagnosticada através do doseamento sérico das hormonas tiroideias. O seu prognóstico é geralmente favorável, existindo na atualidade várias modalidades terapêuticas disponíveis; Abstract: Clinic and surgery of small animal – Feline Hyperthyroidism This report follows the curricular traineeship done at the VetSet Hospital, for the conclusion of the master’s degree in veterinary medicine. This report will include three components: description of the followed casuistry; A monograph about feline hyperthyroidism; and a report of two clinical cases on the same topic. During the internship, the areas of preventive medicine, medical and surgical clinic, were observed, being the canine species the most consulted. The sub-areas of vaccination, gastroenterology and attached glands, and soft tissue surgery, respectively, were the most represented. Hyperthyroidism is the most commonly diagnosed endocrine disease among the feline population, especially in the senior phase. With a variable clinical presentation and a large number of factors identified as the predisposing ones, this disease can be diagnosed by serum thyroid hormone measurement. Its prognosis is generally favorable, and there are currently several available therapeutic modalities.

O presente relatório foi elaborado no âmbito do mestrado integrado em Medicina Veterinária e encontra-se dividido em duas partes. A primeira parte tem como objetivo descrever a casuística observada durante o estágio curricular decorrido no período de 2 de janeiro de 2019 a 30 de abril de 2019, no Hospital Veterinário Muralha de Évora. Na segunda parte é feita uma revisão bibliográfica sobre o hipoadrenocorticismo em cães, seguida pela descrição de um caso clínico acompanhado durante o estágio. O hipoadrenocorticismo é uma doença pouco comum, tanto em cães como em gatos. O grande desafio de diagnóstico assenta no facto da sua apresentação clínica ser semelhante a diversas outras doenças, sendo assim apelidado de “o grande imitador”; Abstract: Small animal medicine and surgery The current report was carried out for the completion of the Master’s Degree in Veterinary Medicine and it is divided in two parts. The first part aims to describe the clinical cases observed during the internship that took place from January the 2nd, 2019 to April 30th of 2019, at the Muralha de Évora Veterinary Hospital. The second part is constituted by a bibliographical review of hypoadrenocorticism in dogs, including a description of a clinical case followed during the internship. Hypoadrenocorticism is an uncommon disease, both in dogs and cats. The major diagnostic challenge lies in the fact that its clinical presentation is similar to many other diseases, hence the nickname “the great pretender”.

O presente relatório foi realizado no âmbito do mestrado integrado em Medicina Veterinária e está dividido em duas partes. A primeira parte é constituída por uma descrição da casuística observada durante o estágio curricular de seis meses realizado no Hospital Veterinário das Laranjeiras. Da segunda parte fazem parte uma revisão bibliográfica acerca da resolução cirúrgica de neoplasias das glândulas adrenais caninas e a discussão de um caso clínico seguido durante o estágio no relativo ao mesmo tema. As neoplasias das glândulas adrenais podem ter origem cortical ou medular, produzindo substâncias distintas que resultam na manifestação de sinais clínicos também eles distintos. O diagnóstico definitivo só é possível mediante histopatologia, mas o estabelecimento de um diagnóstico presuntivo através da história clínica, exame físico, exames laboratoriais e exames complementares é essencial para decidir qual o maneio peri-operatório adequado. O tratamento de eleição para estes pacientes é a remoção da glândula adrenal afetada; ABSTRACT: Small animal veterinary surgery and clinics The current report was carried out for the completion of the Master degree in Veterinary Medicine and is divided in two parts. The first part is formed by a description of the cases followed during the six months’ traineeship completed in “Laranjeiras” Veterinary Hospital. The second part is composed by a bibliographic review about the surgical resolution of canine adrenal neoplasms and a report of a case seen during the traineeship, concerning the same subject. The adrenal glands neoplasms can arise from the adrenal cortex or from the adrenal medulla, producing distinct substances that also result in distinct clinical signs. The definitive diagnosis can only be made with histopathology, but the establishment of a presumptive diagnosis is essential to decide the correct peri-operative approach. The treatment of choice for these patients is the affected adrenal gland removal.

Tese de Doutoramento apresentada à Faculdade de Ciências, Universidade de Lisboa
Com a presente dissertação pretende-se estudar os aspectos funcionais e causais envolvidos no comportamento social dos Ciclídeos africanos incubadores bucais, sobretudo no que diz respeito às interacções entre as hormonas e o comportamento, e ao seu significado funcional, tendo sido escolhida como modelo para estudo a Tilápia de Moçambique Oreochromis mossambicus (Peters 1852). Nesta perspectiva, a presente dissertação apresenta-se, grosso modo, organizada em duas partes complementares: na primeira, procede-se à caracterização do comportamento social da espécie em estudo, nomeadamente no que diz respeito às hierarquias de dominância e à dinâmica das interacções sociais, e na segunda, analisam-se os correlatos comportamentais, morfo-funcionais e endócrinos do estatuto social nos machos, dando-se especial atenção às inter-relações entre as hormonas e o comportamento. Finalmente, apresentam-se dados recolhidos durante o presente trabalho que apontam para a existência de tácticas alternativas de reprodução nos machos desta espécie, e procede-se, ainda, à caracterização do comportamento das fêmeas durante o ciclo de incubação bucal dos alevins. De seguida apresenta-se um pequeno resumo do conteúdo de cada um dos capítulos. Na Parte I (capítulos 1 a 4) procede-se à apresentação do problema e à revisão da literatura relevante para o presente trabalho. Assim, faz-se uma caracterização da biologia social dos Ciclídeos africanos, especialmente no que diz respeito aos modos de reprodução e aos tipos de cuidados parentais existentes neste grupo. De igual modo, apresenta-se uma sinopse da biologia geral da espécie em estudo, nos seus múltiplos aspectos: sistemática e zoogeografia, factores abióticos, ecologia alimentar e reprodução. Finalmente, é apresentada uma resenha monográfica das inter-relações entre hormonas e comportamento em Teleósteos, englobando os seguintes aspectos: caracterização dos esteróides sexuais em Teleósteos, o papel dos androgénios e dos progestogénios no comportamento social em machos de Teleósteos; os ciclos sazonais de esteróides sexuais e a sua relação com o comportamento reprodutor, os mecanismos de acção dos esteróides sexuais sobre o comportamento e a relação bidireccional hormonas-comportamento; e, quais as estratégias de investigação em endocrinologia comportamental. Na Parte II (capítulo 5) é apresentada a metodologia geral comum a todo o trabalho, sendo fornecidos dados sobre a manutenção e reprodução dos indivíduos em cativeiro, e sobre os procedimentos experimentais e estatísticos utilizados. E de referir que o presente trabalho se baseou em três estudos, tendo-se tido a preocupação de sacrificar o menor número de animais possível, maximizando-se a informação recolhida dos indivíduos de cada estudo. Em cada um dos estudos foram realizadas observações de comportamento de indivíduos mantidos em grupos padronizados (estudo 1: 8 grupos heterossexuais de ó indivíduos cada, estudo 2: 8 grupos heterossexuais de 6 indivíduos cada; estudo 3: 4 grupos machos de 4 indivíduos cada, aos quais são adicionadas 2 fêmeas ovuladas por grupo ao fim de 5 dias), e no final os indivíduos foram sacrificados para recolha de amostras biológicas (i.e. gónadas, encéfalos, biometrias), excepto no caso do estudo de curto-prazo (estudo 3) em que se utilizaram amostras de urina para o doseamento dos esteróides sexuais, tendo-se evitado o sacrifício dos animais envolvidos neste estudo. Na Parte III (capítulos 6 a 13) são apresentados e discutidos os resultados dos estudos levados a cabo, os quais estão resumidos abaixo. No capítulo 6 procedeu-se à inventariação e descrição dos padrões elementares de comportamento e de coloração, como forma de caracterizar o repertório comportamental da espécie. Discutiu-se qual a função adaptativa da construção e defesa de ninhos pelos machos em espécies incubadoras bucais maternas, e analisou-se a possível evolução e o design das posturas de submissão em Ciclídeos. No capítulo 7 caracterizou-se a organização social dos grupos em cativeiro (estudo 1), tendo sido detectada a formação de hierarquias de dominância, com estrutura linear e semi-despótica (o indivíduo a participa em mais de metade das interacções do grupo). O tamanho do corpo e o sexo dos indivíduos são factores importantes na decisão das interacções agonísticas: os indivíduos α (dominantes) de cada grupo são sempre machos e são os membros de maiores dimensões dos grupos a que pertencem. Embora os indivíduos tenham sido criados juntos durante um longo período de tempo, são comuns interacções agonísticas que envolvem agressão de alta intensidade, o que indica que neste estádio (maturação sexual) os indivíduos efectuam avaliações frequentes das capacidades competitivas dos outros elementos do grupo. Foram ainda analisadas as redes de interacções no interior dos grupos, tendo sido desenvolvidas para o efeito técnicas de estatística de simulação para a análise de dados sociométricos. As interacções agonísticas são especialmente comuns entre machos, sendo menos frequentes entre machos e fêmeas, e entre fêmeas. Os indivíduos ω (subordinados) participam em menos encontros agonísticos do que o esperado. De acordo com a distância hierárquica, os vizinhos na hierarquia estão envolvidos em menos interacções agonísticas do que o esperado, excepto para as interacções simétricas, as quais representam uma pequena proporção do número total de interacções. Este dado é contrário às expectativas, mas pode ser explicado pelo facto de a agressão ser iniciada preferencialmente pelos indivíduos dominantes contra indivíduos que lhes são claramente subordinados, presumivelmente para manterem o seu estatuto social. Foi ainda demonstrado que o índice de dominância, vitórias/ (vitórias + derrotas), é um muito bom preditor da posição hierárquica dos indivíduos nas ordens de dominância dos seus grupos. É argumentado que, em espécies nas quais as interacções agonísticas não são controladas por processos que envolvem operações cognitivas complexas, este índice de dominância pode ser um indicador biologicamente realista da motivação agressiva dos indivíduos. No capítulo 8 estudou-se a dinâmica do estabelecimento das hierarquias de dominância e sua estabilidade ao longo do tempo. No estudo de curto-prazo (7 dias, estudo 3), durante o processo de formação de grupos de machos foi detectada consistentemente a seguinte sequência temporal de actividades predominantes: (a) avaliação mútua dos membros do grupo e formação das hierarquias de dominância; (b) estabelecimento dos territórios e construção dos ninhos; (c) cortejamento. Sugere-se que estes resultados reflectem a sequência provável de acontecimentos que ocorrem durante o processo de formação de uma arena reprodutora na natureza, no início de cada episódio de reprodução. Do estudo de longo-prazo (8 semanas, estudo 2) foi concluído embora a maior parte das estruturas de dominância seja linear, elas são instáveis de semana para semana. Isto é, sucedem-se no tempo estruturas lineares nas quais, no entanto, os indivíduos não ocupam as mesmas posições hierárquicas relativas. A estabilidade das posições hierárquicas é superior nos indivíduos dominantes de cada grupo, os quais sofrem menos reversões hierárquicas do que os subordinados. As reversões na ordem de dominância de um grupo são especialmente comuns entre vizinhos hierárquicos. As hierarquias de dominância não estabilizaram durante o período de tempo deste estudo. No capítulo 9 avaliaram-se as relações existentes entre o estatuto social dos indivíduos e um conjunto de variáveis comportamentais, entre as quais a territorialidade, os padrões de coloração, o acesso às fêmeas, a construção e manutenção dos ninhos, os comportamentos agonísticos e os comportamentos sexuais. Os indivíduos dominantes apresentam uma coloração mais escura do corpo, têm prioridade no estabelecimento de territórios, constroem ninhos de maiores dimensões e monopolizam o acesso às fêmeas do grupo a que pertencem. Os dados sustentam a hipótese de que os indivíduos dominantes são os que investem mais em comportamentos agonisticos, tendo como benefício deste investimento um maior acesso às fêmeas, segundo uma cascata comportamental: dominância social —> estabelecimento de um território —> construção do ninho —> acesso a fêmeas. No capítulo 10 investigaram-se as relações existentes entre o estatuto social e um conjunto de caracteres morfo-fisiológicos, entre os quais medidas biométricas (e.g. comprimento, peso, dimensões das barbatanas, etc.), indicadores da maturidade sexual (e.g. índice gonado-somático); das condições bioenergéticas (índice hepatosomático e factor de condição), e dos níveis de androgénios (dilatação da papila urogenital). Para uma avaliação correcta das variáveis biométricas foi realizado um estudo prévio sobre a existência de alometrias e de dimorfismo sexual na morfologia externa da espécie, tendo sido detectados dois complexos morfológicos sexualmente dimórficos: altura das barbatanas anal e dorsal, focinhos afilados com mandíbulas robustas nos machos. Colocou-se a hipótese destes caracteres morfológicos terem evoluído por selecção sexual, uma vez que conferem vantagens fenotípicas em termos de mecanismos comportamentais de defesa territorial e escolha do parceiro sexual por parte das fêmeas. Uma vez identificados estes complexos morfológicos procedeu-se à averiguação da sua expressão em machos com diferente estatuto social, verificando-se que os indivíduos dominantes apresentam uma acentuação destes caracteres. Comof simultaneamente, estes indivíduos também apresentam papilas maiores, as quais são utilizadas como indicadores dos níveis fisiológicos de androgénios, colocou-se a hipótese de a dominância social, através de uma elevação dos níveis de androgénios circulantes, acentuar a expressão de características sexualmente dimórficas. Foi também demonstrado que os indivíduos dominantes possuem índices gonado-somáticos superiores aos dos subordinados, não diferindo estas duas classes de machos no que diz respeito às variáveis bioenergéticas (i.e. índice hepato-somático e factor de condição). Observou-se ainda que os indivíduos dominantes têm o aparelho sónico (i.e. placas faríngicas e musculatura sónica) mais desenvolvido do que o dos subordinados, o que deixa adivinhar um papel importante da produção de sons para o estabelecimento das relações de dominância. No capítulo 11 estudaram-se os correlatos endócrinos do estatuto social, nomeadamente a relação de causa-efeito entre o estatuto social nos machos e os níveis de esteróides sexuais, i.e. androgénios e progestogénios, e sua modulação pelo contexto social, através do doseamento das hormonas na urina por radio-imunoensaios (RIA), e a metabolização neural dos androgénios. No estudo de curto-prazo, após 8 dias de isolamento social nenhum dos esteróides estudados (i.e. testosterona, 11-cetotestosterona, 17,20α-P, e 17,20β-P) era bom preditor da dominância social desenvolvida após a subsequente formação dos grupos de machos. Um dia após a formação dos grupos os índices de dominância são já bons preditores das concentrações urinárias de todos os esteróides sexuais. Assim, as interacções sociais têm um efeito importante de curto-prazo na modulação das concentrações dos esteróides sexuais em O. mossambicus. Os índices de dominância e as concentrações de androgénios, medidos após a formação dos grupos só de machos, estão correlacionados positivamente com a territorialidade, a taxa de cortes, e as dimensões dos ninhos. Foram detectadas relações semelhantes para os progestogénios, com a excepção de que a 17,20β-P e a taxa de cortes não se encontram correlacionadas. A formação dos grupos só de machos foi acompanhada de um aumento das concentrações urinárias dos esteróides sexuais em machos territoriais e um decréscimo em machos não-territoriais, com excepção para a testosterona, que aumenta em ambos os grupos. A introdução de fêmeas ovuladas nos grupos causou um retorno das concentrações de esteróides para níveis próximos dos do isolamento social, excepto para 17r20a-P que apresenta um grande incremento nos indivíduos territoriais. É discutido o possível papel de cada um dos esteróides. Foi também desenvolvido um ensaio radiométrico para a quantificação da actividade da aromatase, que controla a metabolização de androgénios em estrogénios. Investigou-se a distribuição neuroquimica da aromatase no sistema nervoso central e as suas eventuais relações com o comportamento sexual masculino e com o estatuto social. Não foram detectadas relações entre a actividade deste enzima e o estatuto social. No entanto, existem diferenças significativas entre os dois sexos, sendo o enzima mais activo nos machos. Neuroanatomicamente o enzima apresenta uma maior actividade no tálamo e no telencéfalo, duas estruturas classicamente consideradas como estando envolvidas no controlo dos comportamentos sociais e do eixo reprodutor nos Vertebrados. No capítulo 12 descreveu-se a existência de tácticas alternativas de acasalamento nos machos. Assim, enquanto os dominantes estabelecem territórios para os quais atraem as fêmeas, os subordinados, que não são bem sucedidos territorialmente, adoptam o comportamento das fêmeas, deixando-se cortejar e mantendo-se assim na imediação dos ninhos. Nas ocasiões em que se verificaram desovas os machos subordinados interferiram com o par tentando fertilizar alguns dos ovos da postura. No capítulo 13 caracterizou-se o comportamento social feminino ao longo do ciclo de incubação bucal. As fêmeas não apresentam nenhuns indícios de comportamentos agressivos durante todo o ciclo excepto na fase em que incubam alevins com alimentação exógena. Nesta fase, o padrão de coloração das fêmeas altera-se e passam a defender um espaço na sua vizinhança no qual não permitem a presença de outros indivíduos. Este espaço parece ser destinado às excursões que os alevins realizam fora da cavidade bucal materna nesta fase. Observou-se ainda que o tamanho das posturas incubadas diminui gradualmente ao longo do ciclo de incubação bucal, colocando-se a hipótese de as fêmeas praticarem canibalismo filial como um meio de viabilizarem a restante postura e de evitarem um abaixamento da sua condição física, uma vez que durante todo o ciclo se abstêm de se alimentar. Na Parte IV os resultados são integrados numa discussão final subordinada ao tema "Uma abordagem causal e funcional do sistema de acasalamento de Oreochromis mossambicus" (capítulo 14). São ainda analisados alguns temas teóricos, cuja discussão se tornou pertinente no âmbito do presente trabalho, nomeadamente a selecção sexual (capítulo 15), e a evolução da 11-cetotestosterona nos Teleósteos como principal esteróide sexual masculino (capítulo 16).

Orientador: Mario Jose Abdalla Saad
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-13T21:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alegre_SarahMonte_M.pdf: 1003695 bytes, checksum: 98678a517d39762917dbfd632e223759 (MD5) Previous issue date: 1990
Resumo: A deficiência de Glicose 6 Fosfato Desidrogenase (G - 6 - PD) é um erro inato do metabolismo de carboidratos em que a atividade e/ou estabilidade da G -6 PD (enzima que cataliza a reação inicial da via das pentoses -fosfato) está reduzida. Uma variedade de alterações é esperada pois a referida enzima está presente em diferentes células e tecidos incluindo o pâncreas.Objetivando investigar o papel da via das pentoses na secreção de insulinar foram estudados 12 indivíduos com deficiência de G - 6 - PD e 11 indivíduos normais (grupo controle) que após jejum de 12 - 14 horas foram submetidos aos testes oral e venoso de tolerância à glicose ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital.
Abstract: Glucose - 6 - Phosphate Dehydrogenase Deficiency (G - 6 - PD) is an inborn error of carbohydrate metabolism in which the ativity and/or stability of G- 6 - PD (enzyme that catalyses the initial reation of the pentose phosphate pathway) is decresead. Recognition that deficiency of G - 6 - PD also occurs in other cells tissues and biologic fluids of affected persons raises the question of whether and under what circunstances impairment of glucose induce insulin secretion might occur in such persons. It was the aim of the present study to investigate insulin responses during intravenous tolerance test and oral glucose tolerance test in patients with G- 6 - PD deficiency ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations.
Mestrado
Mestre em Medicina

En esta tesis se desarrolla una metodología estadística que permite obtener clasificaciones de modelos linalizables a través de una distancia basada en el concepto de información de Shamon. Se han obtenido explícitamente expresiones algebraicas de los estimadores que nos sirvieron para comparar dos o mas de dichas curvas estableciendo su relación con los contrastes de hipótesis propias del análisis de la varianza en el caso de que las curvas fueran asociadas a un modelo lineal normal de varianzas iguales. Finalmente, y como aplicación, se hace un análisis y una clasificación de distintos tipos de respuesta al TTOG en una muestra de niños, dando posteriormente un método de diagnostico automatizado que cuantifica sus errores.

Lo Pseudoipoparatiroidismo (PHP) è la prima sindrome da resistenza ormonale descritta, e oggi questo termine descrive un gruppo eterogeneo di rare malattie metaboliche, tutte caratterizzate dalla resistenza d’organo all’azione dell’ormone paratiroideo (PTH). I due principali sottotipi di PHP, tipo Ia e Ib (PHP-Ia, PHP-Ib), sono causati da alterazioni molecolari all’interno o a monte del locus GNAS. In particolare, circa il 70% dei pazienti PHP-Ia, che sono affetti da Osteodistrofia Ereditaria di Albright (AHO) associata a resistenza a diversi ormoni (PTH/TSH/GHRH/gonadotropine), hanno mutazioni inattivanti sull’allele materno degli esoni 1-13 di GNAS (il gene che codifica la Gsα, cioè la subunità alpha stimolatoria della proteina G eterotrimerica, un elemento chiave della via di trasduzione del segnale del cAMP). Le stesse mutazioni, quando ereditate dal padre, causano lo pseudo-PHP (PPHP), caratterizzato da AHO in assenza di anomalie endocrine. Inoltre, circa il 60% dei pazienti PHP-Ib, che classicamente hanno una resistenza ormonale limitata al PTH e al TSH senza segni di AHO, è affetto da difetti di metilazione di GNAS (sporadici o su base genetica). Durante l'ultimo decennio, i dati ottenuti su queste malattie complesse hanno messo in dubbio l’attuale classificazione delle malattie associate a GNAS. In particolare, in un sottogruppo di pazienti con PHP e livelli variabili di AHO, sono stati rilevati difetti epigenetici di GNAS simili a quelli trovati classicamente in pazienti PHP-Ib, suggerendo una sovrapposizione molecolare tra PHP-Ia e Ib. Nonostante i progressi nello studio dei meccanismi molecolari alla base dello PHP, il 30-40% dei pazienti rimane ancora senza una diagnosi molecolare e non è chiaro se i difetti dell’imprinting considerati fino ad oggi come "sporadici" sono in realtà secondari a difetti genetici.

O presente trabalho teve como objetivo estudar a psicodinâmica das Representações Sociais (RS) de endocrinologistas de hospital público sobre obesidade, identificando-as e buscando detectar seu inconsciente relativo, ou seja, a lógica emocional segundo a qual se estruturam. Foram realizadas 10 (dez) entrevistas com médicos endocrinologistas de rede pública, (05 do sexo feminino e 05 do sexo masculino) com idade variável de 28 a 44 anos de idade. O tempo de especialização variou de dois a dezoito anos. As entrevistas foram semi-estruturadas, no sentido de haver uma pré-estrutura mínima, permitindo ao entrevistado espontaneidade e fluência de expressão. Usou-se técnicas encobertas, com perguntas gerais e abrangentes. Desejou-se que o tema - obesidade - surgisse espontaneamente. O tratamento dos dados foi de acordo com o referencial psicodinâmico, numa abordagem qualitativa. Conclui-se que o médico é o intérprete das ideologias socialmente circulantes a respeito da obesidade. Suas condutas são pautadas pelas características de personalidade, pelas informações científicas, e pela influência midiática
Not informed by the author

Orientador: João Hamilton Romaldini
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Made available in DSpace on 2018-07-14T02:17:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tambascia_MarcosAntonio_D.pdf: 2000917 bytes, checksum: 3bc29ab2ff39b28274f70307eb7364bb (MD5) Previous issue date: 1992
Resumo: Embora a tiroidite subaguda tenha características bem definidas na literatura internacional existe uma relativa carência de dados disponíveis no Brasil. Para tanto esse estudo foi conduzido para descrever as características clínicas, laboratoriais, imunogenéticas e citológicas dos pacientes afetados por tiroidite subaguda atendidos pelo Serviço de Endocrinologia do Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas. Durante os anos de 1982 a 1986 foram atendidos nesse Hospital das Clínicas 61 pacientes. Não obstante alguns casos terem sido atendidos inicialmente pelos Serviços de Urgência, todos os 61 pacientes foram acompanhados desde a fase aguda da doença até a sua resolução. Foram, inclusive, estudados 5 anos após o episódio doloroso para a análise da taxa de recidiva. Os dados de anamnese e exame físico completo foram obtidos diretamente com os pacientes. O estado funcional da tiróide foi avaliado pela medic:l dos níveis séricos de TI e T4 e pela cintilografia. Uma amostragem dos pacierites foi submetida a tipificação dos antígenos Classe II do Sistema HLA e alguns submetidos a punção aspirativa de tiróide para análise citológica. Clinicamente a doença é caracterizada por ser uma afecção febril, com dor na região cervical anterior, difusa ou localizada e podendo irradiar para ombro, ouvido ou mandíbula. Afeta particularmente mulheres adultas e jovens, de raça caucasóide. A tiróide caracteristicamente está aumentada, difusamente ou em nódulos, é extremamente dolorosa e não apresenta sinais de supuração local. Laboratorialmente, na fase aguda, encontra-se aumento da velocidade de hemos sedimentação, que se relaciona com o quadro doloroso. A imagem cintilo gráfica é ausente e em 50% dos casos é encontrado hipertiroidismo clínico e laboratorial. A tiroidite subaguda está associada indiscutivelmente com a presença do alelo B35 do Sistema HLA (83,3% dos casos). O esfref:aço cito lógico é típico, sendo encontrado células multinucleadas gigantes em cerca de 70% dos casos. O estudo permitiu definir a tiroidite subaguda como uma doença auto-limitada, evoluindo para a normalidade, mesmo nos casos com hipertiroidismo transitório.
Abstract: Internationalliterature has defined Subacute Thyroiditis characteristics but there is scare data concerning Brazilian cases. This study was carried out to describe the clinical, laboratorial, immunogenetical and cytological pattern of the patients affected by this disease followed up by the Service of Endocrinology of the Hospital das Clínicas da Universidade Estadual de Campinas. From 1982 to 1986 61 patients witli Subacute Thyroiditis underwent treatment. Most of the cases were seen initially by the emergencies services and all of them were followed up from the acute phase to the resolution by uso They were also studied 5 years after the painful period to analyse the relapse rate. The functional thyroid status was evaluated measuring the total TI and total T4 and also by scintilography. Some patients were typed to HLA Class TI antigens while others were submited to a fine needle thyroid biopsy in order to analyse the cytological aspects. The disease was characterized as a febrile affection with anterior diffuse or localized cervical pain, going on to shoulder, ears or jaws. Adult and white women are particulary affected. The thyroid was diffused or enlarged with some nodules, tender, painful and without suppuration. Scintilographic image was usually absent and half of the patients became clinically and laboratorially hyperthyroid. The cytologic smear typically showed the presence of multinucleary giant cells in about 70% of the cases. Subacute Thyroiditis was undoubtedly associated with the presence of B 35 alele in 83.3% of the cases. Oar data has allowed us to define Subacute Thyroiditis as an autolimiting disease that involves the thyroid restoration, even in cases with transitory hyperthyroidism.
Doutorado
Doutor em Medicina

Introdução: O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune crônica e progressiva caracterizada por descompensações metabólicas frequentemente acompanhadas por desidratação e cetoacidose. Os agentes virais parecem ter um papel importante no desencadeamento da destruição autoimune que leva ao desenvolvimento do DM1. Entre as cepas virais estudadas, a família dos enterovírus foi associada ao surgimento da doença em humanos. Um dos mediadores do dano viral é o RNA fita dupla (RNAfd) gerado durante a replicação e transcrição do RNA e DNA viral. O gene TLR3 codifica um receptor endoplasmático pertencente à família dos Pattern- Recognition Receptors (PRR), o qual reconhece o RNAfd, tendo um importante papel na resposta imune inata desencadeada por infecção viral. A ligação do RNAfd ao TLR3 desencadeia a liberação de citocinas proinflamatórias, como interferons, as quais exibem uma potente ação anti-viral; assim, protegendo as células não infectadas e induzindo apoptose naquelas já contaminadas. Dessa forma, esse estudo teve como objetivo investigar a associação entre polimorfismos no gene TLR3 e o DM1. Métodos: As frequências dos polimorfismos rs5743313, rs11721827, rs3775291, rs13126816 e rs7668666 no gene TLR3 foram analisadas em 476 pacientes com DM1 e em 507 indivíduos não-diabéticos saudáveis. Os haplótipos construídos a partir da combinação dos cinco polimorfismos estudados e suas frequências foram inferidos utilizando o programa Phase 2.1, o qual implementa o método estatístico bayesiano. Resultados: Todos os genótipos estão de acordo com o esperado pelo Equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os polimorfismos rs3775291 e rs13126816 foram associados com risco para DM1 em diferentes modelos de herança, com a associação mais forte sendo observada para o modelo aditivo [OR= 2,3 (IC 95% 1,3-4,1) e OR= 2,1 (IC 95% I 1,4-3,2); respectivamente]. Os demais polimorfismos estudados não foram associados ao DM1. Interessantemente, a frequência de DM1 aumentou quanto maior o número de alelos mutados dos cinco polimorfismos estudados presente nos haplótipos (p-trend= 0,002). Além disso, em pacientes com DM1, os alelos mais raros dos polimorfismos rs5743313 e rs11721827 foram associados com menor idade de diagnóstico do DM1 e a um pior controle glicêmico. Conclusão: Os polimorfismos rs3775291 e rs13126816 no gene TLR3 estão associados com risco para o DM1 em indivíduos do Sul do Brasil, enquanto os polimorfismos rs5743313 e rs11721827 estão associados com idade de diagnóstico precoce e a um pior controle glicêmico. O número de alelos de risco nos haplótipos formados pelos cinco polimorfismos estudados no gene TLR3 parece influenciar o risco para DM1, sugerindo que esses polimorfismos interagem na suscetibilidade para a doença.
Introduction: Type 1 diabetes mellitus (T1DM) is a chronic, progressive autoimmune disease characterized by metabolic decompensation often leading to dehydration and ketoacidosis. Viral agents seem to have an important role in triggering the autoimmune destruction that leads to the development of T1DM. Among several viral strains investigate so far, the enterovirus family has been consistently associated with the onset of T1DM in humans. One of the mediators of viral damage is the double-stranded RNA (dsRNA) generated during replication and transcription of viral RNA and DNA. The Toll-like receptor 3 (TLR3) gene codes for an endoplasmic receptor of the patternrecognition receptors (PRRs) family that recognizes dsRNA, playing an important role in the innate immune response triggered by viral infection. Binding of dsRNA to the TLR3 triggers the release of proinflammatory cytokines, such as interferons, which exhibit potent antiviral action; thus, protecting uninfected cells and inducing apoptosis of infected ones. Therefore, this study aimed to investigate whether TLR3 polymorphisms were associated with T1DM. Methods: Frequencies of the TLR3 rs5743313, rs11721827, rs3775291, rs13126816 and rs7668666 polymorphisms were analyzed in 476 T1DM patients and in 507 healthy subjects. Haplotypes constructed from the combination of these polymorphisms were inferred using Bayesian statistical method. Results: All genotypes are in agreement with those predicted by the Hardy-Weinberg equilibrium. The rs3775291 and rs13126816 polymorphisms were associated with T1DM in different inheritance models, with the strongest association being observed for the additive model [OR= 2.3 (95% CI 1.3-4.1) and OR= 2.1 (95% CI 1.4-3.2); respectively]. The other three polymorphisms were not significantly associated with T1DM. Interestingly, the prevalence of T1DM was higher as more risk alleles of the five polymorphisms were present (P trend = 0.002). Moreover, in T1DM patients, the minor alleles of the rs5743313 and rs117221827 polymorphisms were associated with an early age at diagnosis and worse glycemic control. Conclusion: The TLR3 rs3775291 and rs13126816 polymorphisms are associated with risk for T1DM in Southern Brazilian subjects, while the rs5743313 and rs11721827 polymorphisms are associated with age at T1DM diagnosis and worst glycemic control. The number of risk alleles of the five TLR3 polymorphisms in the haplotypes seems to influence the risk for T1DM, suggesting that these polymorphisms might interact in the susceptibility for the disease.

Nowadays obesity can be defined as a global epidemic. The precise identification of circulating biomarkers involved in this pathology could be essential to early diagnose potential co-morbidities and to better address the development of future therapeutic strategies. Published evidences show that circulating steroid hormones and endocannabinoids might have a role in the physiopathology of obesity; however, a precise and reliable quantification of these molecules is still lacking. In the first part of the present thesis, we developed a sensitive, specific and accurate quantification method for nine steroid hormones using a liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) system. This method has been used first for a comparative study with immunoassays, currently used in the clinical practice to quantify these molecules and then to redefine circulating reference intervals in healthy subjects. Furthermore, we measured circulating steroid hormones in three groups of subjects: normo-weight, over-weight and obese, defining different steroid hormones profiles depending on the obesity state. The role of circulating endocannabinoids in humans is still unclear, however there are several evidences concerning their involvement in obesity. In the second part of the thesis, we determined changes of circulating endocannabinoids in obese patients after a weight loss induced by bariatric surgery, currently the most effective long-term treatment for obesity, using LC/MS-MS. We measured basal and dynamic endocannabinoids plasma levels in 12 patients with severe obesity before, one month after and six months after the Roux-en-Y gastric bypass intervention, currently one of the most performed types of bariatric surgery. All together the findings illustrated in this thesis project will help better define the role of steroid hormones and endocannabinoids in the framework of obesity in humans and the role that each type of molecule might have in its pathophysiology.

Nowadays obesity can be defined as a global epidemic. The precise identification of circulating biomarkers involved in this pathology could be essential to early diagnose potential co-morbidities and to better address the development of future therapeutic strategies. Published evidences show that circulating steroid hormones and endocannabinoids might have a role in the physiopathology of obesity; however, a precise and reliable quantification of these molecules is still lacking. In the first part of the present thesis, we developed a sensitive, specific and accurate quantification method for nine steroid hormones using a liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) system. This method has been used first for a comparative study with immunoassays, currently used in the clinical practice to quantify these molecules and then to redefine circulating reference intervals in healthy subjects. Furthermore, we measured circulating steroid hormones in three groups of subjects: normo-weight, over-weight and obese, defining different steroid hormones profiles depending on the obesity state. The role of circulating endocannabinoids in humans is still unclear, however there are several evidences concerning their involvement in obesity. In the second part of the thesis, we determined changes of circulating endocannabinoids in obese patients after a weight loss induced by bariatric surgery, currently the most effective long-term treatment for obesity, using LC/MS-MS. We measured basal and dynamic endocannabinoids plasma levels in 12 patients with severe obesity before, one month after and six months after the Roux-en-Y gastric bypass intervention, currently one of the most performed types of bariatric surgery. All together the findings illustrated in this thesis project will help better define the role of steroid hormones and endocannabinoids in the framework of obesity in humans and the role that each type of molecule might have in its pathophysiology.

La valutazione del profilo steroideo mediante cromatografia liquida abbinata alla spettrometria di massa (LC-MS/MS è di grande utilità nella diagnosi e tipizzazione delle masse del surrene. Abbiamo analizzato il profilo steroideo basale e post test di soppressione al desametasone, in 302 pazienti con incidentaloma surrenalico, mediante un metodo LC-MS/MS per la quantificazione di 11 steroidi. Abbiamo poi valutato le associazioni con la salute cardiovascolare durante il periodo di follow-up. Lo scopo secondario prevedeva lo studio della steroidogenesi intra-tumore ed il confronto con il tessuto surrenalico normale corrispondente, mediante lo sviluppo di un nuovo metodo LC-MS/MS per la caratterizzazione di un pannello di 22 steroidi surrenalici. Da tale studio è emerso che i soggetti con adenoma unilaterale e secrezione disregolata di cortisolo avevano valori basali più elevati di cortisolo, 11-desossicortisolo e corticosterone e livelli ridotti di DHEA rispetto ai pazienti con adenoma non funzionante. I pazienti con secrezione disregolata hanno mostrato la mancata soppressione di cortisolo, 11-desossicortisolo e corticosterone post test al desametasone indipendentemente dalla morfologia della lesione. I livelli di cortisolo e corticosterone post test al desametasone erano inoltre associati con una prevalenza più elevata del peggioramento dell’ipertensione. Pazienti con adenoma unilaterale e secrezione disregolata avevano un’incidenza più elevata del peggioramento dell’ipertensione e per l’insorgenza di nuovi eventi cardiovascolari rispetto ai non secernenti, con il cortisolo post desametasone (Hazard Ratio 1.02, 95% CI 1.01-1.03, P<0.001) ed il corticosterone basale (Hazard Ratio 1.06, 95% CI 1.01-1.12, P<0.031) come maggiori predittori. Dallo studio della sterodogenesi tissutale è emerso il potenziale valore informativo di alcuni steroidi non tradizionali, le cui variazioni erano frequentemente riscontrate nel tessuto tumorale rispetto al tessuto surrenalico normale. I pazienti con incidentaloma surrenalico hanno mostrato un profilo steroideo differente in relazione allo status funzionale ed alla morfologia dei surreni che si associava a differenti livelli di rischio cardiovascolare.
The assessment of steroid profile by liquid-chromatography tandem mass spectrometry has proved to be of great usefulness in the diagnosis and characterization of the adrenal masses. We analyzed the circulating steroid profile in 302 patients with adrenal incidentaloma, by an LC-MS/MS method for the quantification of 11 steroids. We then assessed the associations with cardiovascular health during the follow-up period (median 39 months). The secondary aim was the exploratory study of intra-tumor steroidogenesis and the comparison with the corresponding normal tissue, through the development of a new LC-MS/MS method for the characterization of a panel of 22 adrenal steroids. We found that subjects with unilateral adenoma and dysregulated cortisol secretion had higher basal values of cortisol, 11-deoxychortisol and corticosterone and reduced DHEA levels compared to patients with non-functioning adenoma. Moreover, subjects with hyperplasia and dysregulated cortisol secretion had high cortisol and reduced androgen levels compared to non-functioning hyperplasia. Patients with dysregulated secretion showed no suppression of cortisol, 11-deoxycortisol and corticosterone post dexamethasone-test regardless of lesion morphology. After suppression-test, cortisol and corticosterone levels were also associated with higher prevalence of worsening hypertension. Patients with unilateral adenoma and dysregulated secretion had higher incidence of worsening hypertension and of onset of new cardiovascular events than non-secreting, with post-dexamethasone cortisol (Hazard Ratio 1.02, 95%CI 1.01-1.03, P<0.001) and basal corticosterone (Hazard Ratio 1.06, 95%CI 1.01-1.12, P<0.031) as major predictors. The study of tissue sterodogenesis revealed the usefulness of non-classical steroids, such as the metabolites of cortisol, progesterone, 16-hydroxyprogesterone and some 11-oxidized C19-androgens such as 11-hydroxydrostenedione, 11-ketoadrostenedione and 11-hydroxytestosterone whose variations were frequently found in adrenal lesions compared to normal adrenal tissue. We concluded that patients with adrenal incidentaloma showed a different steroid profile in relation to the functional status and morphology of the adrenals, which was associated with different levels of cardiovascular risk.

A jararaca-ilhoa (Bothrops insularis) é uma serpente criticamente ameaçada, endêmica da Ilha da Queimada Grande (IQG), litoral sul de São Paulo. Com a sua população em declínio, foi estabelecido um programa de reprodução em cativeiro, porém o conhecimento da sua biologia reprodutiva ainda é incipiente. Até o momento considera-se essa espécie como sazonal, com período de espermatogênese e cópulas associado, ocorrendo do outono até início da primavera, porém não existem estudos a cerca da endocrinologia reprodutiva. O objetivo desse trabalho foi validar um método de avaliação hormonal não invasiva por meio das fezes e realizar o monitoramento dos metabólitos fecais de testosterona em conjunto com avaliação plasmática de testosterona. Ao longo de 36 meses foram coletadas 156 amostras de fezes e 30 amostras de sangue de oito machos cativos. As concentrações de metabólitos fecais de testosterona variaram entre 10,9 à 249,3 ng/g de fezes, enquanto as concentrações de testosterona plasmática variaram de 0,07 à 0,30 ng/mL de plasma. Não houve diferença significativa entre as concentrações plasmáticas de testosterona e de metabólitos fecais de testosterona ao longo do ano, apesar dos machos demonstrarem comportamento reprodutivo durante esse período. Os dados corroboram com outros estudos de estocagem espermática, qualidade seminal e volume gonadal, porém vão de encontro à resultados de histologia testicular. São discutidas a possibilidade da espécie ser assazonal ou desses resultados serem uma consequência das condições do cativeiro. Esse estudo contribui com a validação de um novo método de avaliação longitudinal de esteroides sexuais em B. insularis, com o conhecimento da biologia reprodutiva de serpentes tropicais e com a conservação de animais ameaçados de extinção
The golden lancehead pitviper (Bothrops insularis) is a critically endangered snake, endemic of the Queimada Grande Island, southeastern Brazil. With its declining population, a captive breeding program was established, but the knowledge of its reproductive biology is incipient. By the time this species is considered as seasonal, with spermatogenesis period and matting associated, occurring from autumn until early spring, but there are no studies about their reproductive endocrinology. The aim of this study was to validate a noninvasively hormonal evaluation method through feces and carry out the monitoring of androgens in conjunction with plasma testosterone evaluation. Over 36 months 156 stool samples and 30 blood samples were collected from eight captive males. The fecal androgen concentrations ranged from 10.9 to 249.3 ng / g of feces and the plasma testosterone concentrations ranged from 0.07 to 0.30 ng / mL of plasma. There was no significant difference between the concentrations of fecal androgens and plasma throughout the year, although the males had shown successfully reproductive behavior during this period. The data corroborate whith other studies of sperm storage, sperm quality and gonadal volume, but disagreeded of the results of testicular histology. We discuss the possibility of the species be assazonal or these results are a consequence of the captivity conditions. This study contributes to the validation of a new longitudinal evaluation method of sex steroids in B. insularis, with the knowledge of the reproductive biology of tropical snakes and the conservation of endangered animals

A endocrinologia ovariana de cinco fêmeas de bugio da espécie Alouatta caraya foi estudada por meio de extração e dosagem de metabólitos fecais de estrógenos e progestinas durante um período de cinco meses. Adicionalmente observou-se a presença de eritrócitos por meio de citologia vaginal em três das fêmeas estudadas. Duas fêmeas, uma em condição nutricional desfavorável e outra pré-púbere, apresentaram concentrações basais de estrógenos com mediana menor que 3,7 ng/g e de progestinas menor que 29,7 ng/g de fezes úmidas. Nas outras três fêmeas a mediana dos valores de pico de estrógenos fecais foi 711,55 ng/g e dos valores basais 130,51 ng/g de fezes úmidas. Para as progestinas fecais a mediana dos valores de pico foi 2653,54 ng/g e dos valores basais foi 149,88 ng/g de fezes úmidas. Nestes três animais as concentrações de ambos os metabólitos apresentaram uma variação cíclica e o intervalo entre picos de estrógenos fecais foi 19,6±1,9 dias (média±EPM). Estes metabólitos permaneceram elevados durante 9,1±0,9 dias. Elevações sustentadas de metabólitos fecais de progestinas acompanhadas de pico e elevações de metabólitos fecais de estrógenos foram observadas em apenas quatro períodos. Nestes casos ambos os metabólitos elevaram-se aproximadamente ao mesmo tempo e estimou-se que a ovulação tivesse ocorrido antes do início destas elevações. Os períodos de sangramento coincidiram com a queda nas concentrações de estrógenos e progestinas fecais.
The ovarian endocrinology was assessed in five female howler monkeys (Alouatta caraya) by means of estrogen and progestogen metabolites extracted from fecal samples. Measurements were conducted for a period of five months, and erythrocytes were observed by vaginal cytology, in three females. In one subadult and in one undernourished female, estrogen concentrations remained at median basal levels <3.7ng/g, and the progestogen concentrations were <29.7ng/g of wet feces for almost the entire period of the experiment. For the other three females, median fecal estrogen peak concentration was 711.55ng/g and basal concentration was 130.51ng/g of wet feces. Median fecal progestogen concentration was 2653.54ng/g and for basal concentration was 149.88 ng/g of wet feces. The three females were found with a cyclical pattern for both metabolites concentrations, with fecal estrogen peak intervals of 19.6±1.9 (mean±SEM) days and the estrogen metabolites remained elevated for 9.1±0.9 days. Fecal progestogen showed sustained elevations concurrently with fecal estrogen increase only in four periods and it was presumed that ovulation had occurred before the onset of those elevations. Bleeding periods occurred with the falling of both steroid metabolites.

Com o objetivo de usar o cão doméstico (Canis familiaris) como modelo biológico no monitoramento endocrinológico de populações de canídeos selvagens foram comparadas as concentrações de progesterona sérica com as concentrações dos metabólitos deste hormônio nas fezes dos animais. Foram colhidas amostras diárias de sangue e fezes, durante o proestro e estro, e duas vezes por semana durante o diestro ou gestação, de 17 cadelas da Raça Boxer, com idade entre 2 e 7 anos. Os metabólitos fecais de progesterona, após a extração, e a progesterona sérica foram mensurados por radioimunoensaio (RIE). As correlações encontradas entre a progesterona sérica e seus metabólitos nas fezes foram de r = 0,26; p⁢0,05. Pelo teste de análise de variância verificou-se pequena diferença estatística entre as fases do ciclo estral avaliadas (p⁢0,05). Os resultados mostraram uma grande variabilidade individual. Existe diferença média estatisticamente significante entre as fases do ciclo seja em soro quanto no extrato fecal (p⁢0,05). Existe significativa diferença estatística entre os períodos de estro / diestro e proestro / diestro (p⁢0,05). Averiguou-se ainda que em todas as fases a concentração média do hormônio nas fezes é sempre maior que a do soro (p⁢0,001). Há uma grande variabilidade nas informações, principalmente nas fezes, obrigando as coletas a serem seriadas e em grande número. Em avaliações individuais, cinco cadelas obtiveram uma correlação considerada boa (p≤0,05) ou ótima (p⁢0,001). A correlação melhora se for comparada a concentração de Progesterona sérica com a concentração de Progestinas fecais do dia seguinte (r=0,33; p⁢0,05)
It was studied and analyzed the domestic dog (Canis familiaris) as biological model applying an endocrinological monitoring in the wild canines population. The main goal of this work is to compare serum progesterone with metabolics concentration of hormones in animal feces. It was collected blood and feces samples during proestus and estrus period and after that during the diestrus period, twice a week, from 17 boxer bitches, aged between 02 and 07 years old. Progesterone fecal metabolities and serum progesterone were measured by radioimmunoassay (RIA). The correlations that were found between serum progesterone and their metabolities in feces were r = 0,26 p⁢0,05. It was verified a small difference between the estral cycle phases evaluated (p⁢0,05), by the ANOVA test. The outcomes have presented a great individual variability and an average statistical difference between the phases in the serum and feces stratum (p⁢0,05). It is important to mention that there is a significant difference between estrus / diestrus and proestrus / diestrus periods (p⁢0,05). It was noticed that in all the phases the average amount of hormones in feces was always higher than the one that was found in serum (p⁢0,001). There is a great variability in all the gathered information specially when dealing with feces, establishing a need to prepare several amounts of in-series samples. In individual evaluation, only 05 bitches had the following correlation: good (p≤0,05) or excellent (p⁢0,001). The correlation between serum progesterone and progesterone fecal metabolities improves if we compare it with the concentration of progesterone fecal metabolities measured in the following next day (r=0,33; p⁢0,05)

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:18:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Vanessa Pimentel de Faria.pdf: 2466878 bytes, checksum: b861fc3c8a06c44e7646fb5d2a403ae8 (MD5) Previous issue date: 2009-03-25
Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior
Hyperthyroidism is the most common endocrine disorder of older cats. Due to the progressive nature of the disease, the identification of a sublcinical stage is essential in order to have a better control of the disease. The present study was a survey of the frequency of feline hyperthyroidism in Rio de Janeiro, from March, 2007 to April, 2008. The purpose of this study was to perform an evaluation of the clinical, laboratorial and echocardiographic aspects in a feline population of naturally acquired hyperthyroidism. Moreover, this study wants to emphasize the palpation and classification of thyroid lobes. This is the first report in Brazil that classifies the thyroid lobes in a standardized scale. A total of 51 cats coming from 20 different districts of Rio de Janeiro and also from Niter?i were evaluated in a feline practice in Botafogo. The selection of the cats was done by the documentation of an elevation of total T4 levels by radioimmunoassay. The animals were dividided in two groups according to the thyroid palpation: group I (nonpalpable thyroid lobe) and group II (palpable thyroid lobe). Laboratorial and complete clinical evaluation were performed in all cats. The clinical evaluation included behavioral evaluation, body weight, body condition, dermatologic, cardiopulmonary auscultation, thyroid palpation and systolic blood pressure reading. Besides the total T4, the following exams were performed: urea, creatinine, alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP) and glucose. Thirty one cats had an echocardiogram performed. This study concluded that the clinical, laboratorial and echocardiographic parameters were similar between the two groups. However, the T4 levels were significantly lower in the nonpalpable thyroid group. Vocalization, tachypnea, changes in cardiopulmonary auscultation, hypertension, increase in alanine aminotransferase and echocardiographic changes observed in cats from group I emphasizes the importance of an early diagnosis before the disease attacks organs as liver, kidneys and heart.
O hipertireoidismo ? a endocrinopatia mais comum em gatos idosos. Devido ? natureza progressiva da doen?a, a identifica??o de um est?gio subcl?nico se torna essencial para melhor controle da doen?a. O presente estudo compreendeu um levantamento da freq??ncia de gatos hipertire?ideos durante o per?odo de mar?o de 2007 a abril de 2008, no estado do Rio de Janeiro. O objetivo deste trabalho foi avaliar os aspectos cl?nicos, laboratoriais e ecocardiogr?ficos em uma popula??o de gatos dom?sticos com hipertireoidismo naturalmente adquirido, al?m de enfatizar a palpa??o dos lobos tireoidianos, assim como a classifica??o dos mesmos. Este ? o primeiro estudo no pa?s que classifica lobos tireoidianos dentro de uma escala padronizada. A popula??o estudada foi composta por 51 gatos, provenientes de 20 bairros distintos dentro do munic?pio do Rio de Janeiro e tamb?m do munic?pio de Niter?i. Esses animais foram atendidos em uma cl?nica privada exclusiva para gatos no bairro de Botafogo. A sele??o dos animais foi realizada atrav?s da detec??o do valor de T4 total acima dos valores de refer?ncia com a t?cnica de radioimunoensaio. Os animais foram divididos em dois grupos com base na identifica??o de aumento da tire?ide ? palpa??o: grupo I (tire?ide n?o palp?vel) e grupo II (tire?ide palp?vel). Avalia??es cl?nica e laboratorial completas foram realizadas em todos os gatos do estudo. A avalia??o cl?nica incluiu avalia??o comportamental, peso, escore de condi??o corporal, pele e pelagem, ausculta??o cardiopulmonar, palpa??o tireoidiana e aferi??o da press?o arterial sist?lica. Al?m do T4 total, os seguintes exames laboratoriais foram realizados: hemograma, ur?ia, creatinina, alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (FA) e glicose. Trinta e um animais foram submetidos ? avalia??o card?aca, atrav?s de ecocardiograma. Este estudo concluiu que os par?metros cl?nicos, laboratoriais e ecocardiogr?ficos foram muito semelhantes entre os dois grupos. No entanto, os n?veis s?ricos de T4 total foram significativamente menores nos gatos com tire?ide n?o palp?vel. Vocaliza??o, taquipn?ia, altera??es em ausculta cardiopulmonar, hipertens?o arterial sist?mica, aumento da enzima alanina aminotransferase e altera??es em ecocardiograma observados em gatos do grupo I enfatizam a import?ncia do diagn?stico precoce para que o hipertireoidismo seja identificado antes do acometimento de ?rg?os como f?gado, rins e cora??o.

O estágio curricular do Mestrado Integrado em Medicina Veterinária da Universidade de Évora realizado durante seis meses no Hospital Veterinário de São Bento, em Lisboa, deu origem ao presente relatório. Este relatório é constituído por duas partes. Na primeira parte fez-se uma breve análise descritiva dos casos clínicos assistidos durante o período de estágio, abordando de forma sumária as patologias mais relevantes para a estagiária. Por sua vez, a segunda parte compreende uma monografia com o tema “Diabetes Mellitus Felina”, onde se realizou uma revisão bibliográfica abordando a fisiologia do pâncreas, a classificação da afeção, a etiologia e patofisiologia, a epidemiologia, a apresentação clínica, o diagnóstico, o tratamento, as complicações associadas, a monitorização e o prognóstico. A Diabetes Mellitus é uma doença endócrina comum no paciente felino que é identificada pela presença de sinais clínicos típicos. Por fim, foi apresentado um caso clínico num gato sendo realizada uma discussão do mesmo; Abstract: Feline Diabetes Mellitus The internship of the master’s degree in Veterinary medicine from the University of Évora, was held for six months at Hospital Veterinário São Bento, in Lisbon, and resulted in the present report. This report consists of two parts. The first part, was held a brief descriptive analysis of clinical cases assisted during the probationary period, briefly addressing the most relevant pathologies for the intern. In turn, the second part is comprised of the monography with the theme Feline Diabetes Mellitus, where a literature review was carried out addressing physiology of the pancreas, classification of the disease, etiology and pathophysiology, epidemiology, clinical presentation, diagnosis, treatment, associated complications, monitoring and prognosis. Diabetes Mellitus is a common endocrine disease in feline patients that is identified by specific clinical signals. Lastly, a clinical case in a cat was presented and a discussion was carried out.

Actualment no existeix cap medicament aprovat pel tractament de la Síndrome de l’Ovari Poliquístic (PCOS), un dels desordres endocrins més freqüent en dones en edat reproductiva, amb una prevalença creixent i que es caracteritza per tenir una fisiopatologia complexa amb interacció de múltiples factors. La comunitat científica ha posat de manifest la necessitat d’incrementar la recerca de nous tractaments dirigits a la normalització del component endocrino-metabòlic causant de la síndrome, els quals suposarien un canvi de paradigma en el tractament de la PCOS i permetrien reduir les complicacions derivades i per tant, l’impacte socioeconòmic d’aquesta síndrome. L’ús en combinació de dos fàrmacs sensibilitzants a la insulina i un fàrmac antiandrogènic ha demostrat, en la darrera dècada, ser una aproximació terapèutica molt prometedora capaç de millorar la simptomatologia de la PCOS a través de la reducció del greix hepato-visceral. Aprofitant l’evidència disponible, i l’interès creixent en PCOS, es proposa desenvolupar un nou medicament basat en la combinació de 3 principis actius coneguts i elaborar un pla de desenvolupament viable i òptim pel seu registre com a medicament a Europa (EU) i Estats Units (EUA). El desenvolupament farmacèutic basat en la qualitat des del disseny i centrat en la combinació a dosis fixes dels tres principis actius (50mg espironolactona, 7,5mg pioglitazona, 850mg metformina; SPIOMET) ha permès desenvolupar una formulació viable i estable del nou medicament SPIOMET en forma de comprimits d’administració oral, amb una biodisponibilitat comparable als productes de referència individuals existents. El pla de desenvolupament clínic proposat s’ha basat en l’agrupació de l’evidència disponible de l’ús dels tres fàrmacs administrats individualment per PCOS com a base principal de l’evidència clínica de SPIOMET i s’ha contrastat en un procés d’assessorament científic amb les agències del medicament Europea (EMA) i Americana (FDA). El pla clínic resultant inclou una seqüència d’estudis de Fase I, II i III que haurien de permetre demostrar la seguretat i l’eficàcia de SPIOMET amb un balanç benefici-risc favorable per la futura autorització del nou medicament per PCOS a EU i EUA. En conjunt, el pla de desenvolupament global elaborat per aquest projecte, gràcies al racional científic i regulatori que el suporta, podria ser més accelerat i amb una inversió menor que altres productes innovadors per noves indicacions, en un escenari en què no es produïssin resultats tècnics inesperats ni canvis imprevistos de regulació, i amb un ús adequat dels recursos. Això transforma SPIOMET en un projecte diferencial i molt atractiu.
Actualmente no existe ningún medicamento aprobado para el tratamiento del Síndrome del Ovario Poliquístico (PCOS), uno de los desórdenes endocrinos más frecuentes en mujeres en edad reproductiva, con una prevalencia creciente y caracterizado por tener una fisiopatología compleja con interacción de múltiples factores. La comunidad científica ha destacado la necesidad de incrementar la investigación de nuevos tratamientos dirigidos a la normalización del componente endocrino-metabólico causante del síndrome, los cuales supondrían un cambio de paradigma en el tratamiento del PCOS y permitirían reducir las complicaciones derivadas y, por tanto, el impacto socioeconómico de este síndrome. El uso en combinación de dos fármacos sensibilizantes a la insulina y un fármaco antiandrogénico ha demostrado, en la última década, ser una aproximación terapéutica muy prometedora capaz de mejorar la sintomatología de PCOS a través de la reducción de la grasa hepato-visceral. Aprovechando la evidencia disponible, y el interés creciente en PCOS, se propone desarrollar un nuevo medicamento basado en la combinación de tres principios activos conocidos y elaborar un plan de desarrollo viable y óptimo para su registro como medicamento en Europa (EU) y Estados Unidos (EUA). El desarrollo farmacéutico basado en la calidad desde el diseño y centrado en la combinación a dosis fijas de los tres principios activos (50mg espironolactona, 7,5mg pioglitazona, 850mg metformina; SPIOMET) ha permitido desarrollar una formulación viable y estable del nuevo medicamento SPIOMET en forma de comprimidos de administración oral, con una biodisponibilidad comparable a los productos de referencia individuales existentes. El plan de desarrollo clínico propuesto se ha basado en la agrupación de la evidencia disponible del uso de los tres fármacos administrados individualmente para PCOS como base principal de la evidencia clínica de SPIOMET y se ha contrastado en un proceso de asesoramiento científico con las agencias del medicamento Europea (EMA) y Americana (FDA). El plan clínico resultante incluye una secuencia de estudios de Fase I, II y III que deberían permitir demostrar la seguridad y la eficacia de SPIOMET con un balance beneficio-riesgo favorable para la futura autorización del nuevo medicamento para PCOS en EU y EUA. En conjunto, el plan de desarrollo global elaborado en este proyecto, gracias al racional científico y regulatorio que lo soporta, podría ser más acelerado y con una inversión menor que otros productos innovadores para nuevas indicaciones, en un escenario en que no se produjeran resultados técnicos inesperados ni cambios imprevistos de regulación y con un uso adecuado de los recursos. Esto transforma SPIOMET en un proyecto diferencial y muy atractivo.
There is currently no drug approved specifically for the treatment of Polycystic Ovary Syndrome (PCOS), one of the most common endocrine disorder of reproductive-aged women, with a growing prevalence and characterized by complex pathophysiology with an interplay of multiple factors. The scientific community has highlighted the need to increase the research for new treatments aimed primarily at normalizing the endocrine-metabolic features underlying the syndrome, this would represent a new paradigm in the treatment of PCOS that would reduce the known long-term morbidities, and therefore the socioeconomic impact of this syndrome. The use in combination of two insulin sensitizing drugs and an antiandrogenic drug has shown in the last decade to be promising therapeutic approach able to improve PCOS symptomatology through the reduction of hepato-visceral fat. Taking advantage of the available evidence, and the growing interest in PCOS, it is proposed to develop a new fixed-dose combination drug of the three known active ingredients and to design a viable and optimal development plan for a new drug application in Europe (EU) and United States of America (USA). The pharmaceutical development based on quality by design and focused on the fixed dose combination of the three active ingredients (50mg spironolactone, 7.5mg pioglitazone, 850mg metformin; SPIOMET) has enabled the development of a viable and stable formulation of the new SPIOMET tablets for oral administration, with a comparable bioavailability to the existing individual reference products. The proposed clinical development plan has been based on the available evidence of the use of the three drugs administered as individual products or co-administered in PCOS as the main basis of the clinical evidence of SPIOMET and has been submitted in a scientific advice with European (EMA) and American (FDA) drug agencies. The resulting clinical plan includes a sequence of Phase I, II and III studies that should allow to demonstrate the safety and the effectiveness of SPIOMET with a favorable risk-benefit ratio for the future authorization of the new PCOS treatment in EU and USA. Overall, thanks to the scientific and regulatory rational supporting the project, the development plan designed could be more accelerated and with less investment than other innovative products for new indications, in a scenario that no unexpected technical results or unforeseen changes in regulation occurred and with a proper use of the resources. This turns SPIOMET into a differential and very attractive project.

Insulinomas are extremely rare pancreatic neuroendocrine (PNET) tumours that develop from the β-cells of the pancreas.β-cells are the only cells capable of producing the hormine insulin, and play a major role in glucose homeostasis but have extremely low proliferative ability under normal physiological conditions. Insulinomas feature dysregulation of insulin secretion and aberrant proliferation. Insulinoma development has been associated with genetic and epigenetic alterations leading to loss of cell fate. We collected a large set of insulinoma and human islet samples, and utilised published data from other PNETs. ChIP-seq of H3K27ac, ATAC-seq and RNA-seq were performed to infer the regulatory landscape of insulinomas and control samples. In silico pipelines and analyses methods were developed in order to characterise the β-cell physiological and aberrant regulatory networks, across different layers of gene regulation. By comparing unaffacted pancreatic islets and insulinomas I have identified widespread changes in enhancer activity and gene expression. I have described the gene-regulatory landscape of insulinomas, identified putative drivers and mechanisms of tumour development, and built thefirst insulinoma-specific gene regulatory networks.

HMb, metabólito da leucina, utilizado para aumentar a síntese protéica. Investigamos o efeito do HMb sobre o eixo somatotrófico, bem como o mRNA de IGF-I e miostatina muscular. Ratos tratados com HMb (320 mg/Kg de peso corporal /mL de salina-0,9%), ou salina (controle), gavagem, 4 semanas, decapitados, sangue para avaliação sérica: insulina (RIE), glicose (colorimetria) e IGF-I (RIE). Extração de RNA total, para avaliação do mRNA de IGF-I e miostatina (Fígado, músculo extensor digital longo, Sóleo), avaliação da expressão do mRNA do GH, por Northern Blot, e expressão do GH ,Western blotting (hipófise). Dados analisados pelo teste-T de Student (P<0,05). Tratamento aumentou o conteúdo de mRNA de GH (> 60%), da proteína GH (>20%), do mRNA do IGF-I (~24%), da concentração sérica de IGF-I (p<0,05), indicando uma ativação do eixo somatotrófico pelo HMb, sem alterações no mRNA de miostatina e IGF-I muscular, ainda um aumento da insulina (~2x), sem alterações na glicose sérica, resultado do efeito hiperglicemiante do GH, ou um efeito direto do HMb na secreção de insulina.
HMb, metabolite of leucine, used to increase protein synthesis. Evaluate the effect HMb on the somatotrophic axis activity, as well as muscle mRNA IGF-I and myostatin. Rats treated with HMb (320 mg / kg body weight / mL of saline-0, 9%) or saline (control), gavage, 4 weeks, decapitated, blood for evaluation of serum: insulin (RIA), glucose (colorimetric) and IGF-I (RIA). Extraction of RNA total, for evaluation the mRNA IGF-I and myostatin (liver, muscle extensor digitalis longus (EDL) and soleus), evaluation of the GH mRNA expression of by Northern blot, and GH content, western blotting (pituitaries). Data analyzed by Student t-test (P <0.05). HMb treatment increased the content of GH mRNA (> 60%), GH (> 20%), IGF-I mRNA (~ 24%), IGF-I (p <0.05), indicates that the somatotrophic axis activity is increased by the HMb, without changes in mRNA of myostatin and muscle IGF-I, insulin also increased (~ 2x), without changes in serum glucose, hyperglycemiant result of the effect of GH or a direct effect of HMb in the secretion of insulin.

O relatório de estágio apresentado é elaborado na sequência da finalização do mestrado integrado em medicina veterinária. O presente trabalho é dividido em duas partes distintas. A primeira parte consiste na apresentação de uma relação casuística das atividades desenvolvidas durante o estágio curricular, realizado no Hospital Veterinário Central (HVC), sendo que em alguns dos temas abordados existe uma breve descrição de uma entidade clínica escolhida pela autora. A segunda parte compreende uma revisão bibliográfica sobre a síndrome de insuficiência de corticoesteroides associada à doença crítica (CIRCI - Critical Illness-related Corticosteroid Insufficiency), sendo que também inclui uma exposição relativa ao eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (HHA) e às alterações associadas à glândula adrenal, para melhor compreensão da síndrome escolhida; Abstract: Small animal clinic and surgery The present report was elaborated for the conclusion of the author’s integrated master’s degree in veterinary medicine, and it consists of two distinct parts. The first section of the report offers a description of the activities performed throughout a curricular internship that took part at Hospital Veterinário Central (HVC). Some of the clinical areas described in this section are accompanied by the analysis of a particular clinical entity, chosen by the author. The second part of the report provides a literature review regarding critical illness-related corticosteroid insufficiency (CIRCI), which includes a description of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis and the CIRCI-associated alterations of the adrenal glands.

Orientador: Ernesto Jose Dottaviano
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-07-14T00:42:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Venturini_SuelyAparecidaLazarek_M.pdf: 1389122 bytes, checksum: c42543f52af541db56507acc6666629f (MD5) Previous issue date: 1991
Resumo: A ocitocinase é uma enzima de origem placentária que inativa as propriedades biológicas da ocitocina através de hidrólise da ligação peptidica entre a cistina N-Terminal e a titosina adjacente, estando sua ação relacionada ao processo de manutenção da gravidez e inicio do parto. O aumento da atividade ocitocinásica é um dos fatores que levam ao disturbio ou diminuição da contratilidade do útero. Como entre as intercorrencias clínicas, o estado hipertensivo é um dos que mais influencia o prognóstico do concepto e sendo controvertidas as informações encontradas na literatura quanto aos níveis enzimicos exibidos por gestantes que desenvolvem hipertensão durante a gravidez, decidiu-se dosar o nível de ocitocinase ao longo de todo período gravídico em nulíparas e multíparas portadoras de hipertensão e comparar os resultados obtidos em pacientes normotensas ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital
Abstract: Oxytocinase is an enzyme synthetized by placenta and capable of hydrolysing the peptic bond between cystine N-Terminal and adjacent tyrosine of the oxytocin molecule. The increase of oxyocinase activity is one of the factors that lead a disturbance or decrease of uterine contractions. As in the clinical intercorrences, the hypertensive state is one of the factors that influence a lot the prediction of the concept. Although there are controversies about enzymatic levels showed by pregnant women who have developed hypertension during pregnancy, we decided to mesure oxytocinase levels during all gestational stages in hypertensive nulliparous and multiparous and to compare the results obtained with normal patients ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations
Mestrado
Fisiologia
Mestre em Ciências Biológicas

Il riscontro di bassi livelli di testosterone durante la fase acuta di una lesione midollare è un dato consolidato da decenni nella Letteratura Internazionale. I meccanismi patogenetici di questo evento sono ben noti e comuni a tutti gli stadi acuti di patologie ad interessamento sistemico. Nell’ultimo decennio è emerso come lo stato di carenza androgenica si riscontra con un’alta prevalenza anche nella fase cronica della lesione midollare. Con l’allungarsi della vita media di questi individui, per il miglioramento delle cure ricevute, il medico che ha in cura uomini con mielolesione cronica deve sempre più frequentemente confrontarsi con questo aspetto emergente. Oltre la sfera sessuale e riproduttiva, peraltro già fortemente compromesse dalla lesione neurologica di per sé, quali le conseguenze per la salute generale di una così marcata e prolungata carenza androgenica per questi individui? Analizzando una casistica di uomini con lesione midollare da più di 12 mesi, con un’età compresa tra i 20 e gli 80 anni, reclutati mediante un programma di riabilitazione psico-motoria, abbiamo indagato i correlati clinici di tale carenza androgenica biochimica nell’uomo con lesione midollare e le possibili implicazioni prognostiche a medio e lungo termine sulla salute ed il benessere generale di tale popolazione. I nostri dati indicavano come bassi livelli di testosterone totale e libero calcolato erano significativamente associati a bassi livelli di 25-idrossi-vitamina D, marcatore quest’ultimo di una scarsa condizione di salute generale. Inoltre, abbiamo dimostrato come il venir meno dell’asse ipotalamo-ipofisi-testicolo, renda in questi soggetti molto evidente l’asse testicolo-osso, attraverso la relazione tra livelli serici di androgeni e di osteocalcina. Infatti, bassi livelli di oesteocalcina rappresentano un determinante predittivo ed indipendente di carenza androgenica in uomini con lesione midollare cronica. Ridotti livelli di testosterone e disfunzione erettile sono i principali determinanti di una scarsa soddisfazione della propria vita, a sottolineare che il percorso riabilitativo e di re-inserimento sociale deve tenere in considerazione anche gli aspetti andrologici. Infine abbiamo portato all’evidenza come i livelli circolanti di androgeni siano i principali determinanti del volume prostatico, indipendentemente dalla lesione midollare. Ciò spiegherebbe la bassa incidenza di cancro della prostata in uomini con mielolesione cronica, da noi dimostrata in precedenti studi. In conclusione la carenza androgenica in uomini con lesione midollare cronica rappresenta un marcatore di scarso benessere generale e dovrebbe essere tenuta in considerazione per selezionare soggetti più fragili che richiedono un maggior impegno in termini di cure ricevute.

L’iperaldosteronismo primario (PA) è una patologia caratterizzata da ipertensione arteriosa e da una serie di complicanze che coinvolgono cuore, vasi, rene e metabolismo. I meccanismi patogenetici che sottendono la relazione tra PA e lo sviluppo delle sue complicanze non sono ancora noti e il tessuto adiposo potrebbe avere un ruolo chiave. Lo scopo del lavoro è stato: 1) valutare il rischio cardiovascolare (CVR) secondo le Linee Guida ESH-ESC su 102 pazienti affetti da PA alla diagnosi e dopo terapia, confrontandolo con 132 ipertesi essenziali (EH) di pari età, sesso e durata di malattia; 2) studiare l’espressione di geni coinvolti nel metabolismo glico-lipidico e nell’infiammazione nel tessuto adiposo omentale di pazienti con adenoma aldosterone secernente (APA) sottoposti a surrenectomia. Per lo studio clinico, oltre al grado di ipertensione, abbiamo valutato l’assetto lipidico, la glicemia a digiuno e dopo carico, la circonferenza vita, la funzionalità renale, la familiarità, il fumo, le comordità ed eseguito ecocardiogramma e ecodoppler vasi epiaortici. Per lo studio molecolare abbiamo effettuato un'analisi microarray seguita poi da real time-PCR su adipe di 16 pazienti con APA e di 10 pazienti con adenoma surrenalico noniperfunzionante, per quantificare l’espressione di alcuni geni selezionati (esochinasi 1, IL-1R1, IL- 6, colesterolo-25-idrossilasi, lipoprotein lipasi, omentina, visfatina). Il CVR è risultato essere più elevato nei PA rispetto agli EH per la presenza di più elevati valori pressori, maggiore prevalenza di iperglicemia, sindrome metabolica, abitudine tabagica e ipertrofia ventricolare sinistra. Dopo terapia, il CVR si è ridotto in entrambe le popolazioni ed è diventato sovrapponibile tra PA ed EH, nonostante i PA presentassero valori di pressione arteriosa più alti, grazie ad una riduzione di alcuni fattori di rischio ed una parziale regressione del danno d’organo. E’ stata inoltre rilevata un’aumentata espressione del gene dell’interleuchina 6, una citochina proinfiammatoria coinvolta nello sviluppo di insulino-resistenza e di patologie vascolari, a livello del tessuto adiposo omentale di pazienti con APA, che potrebbe, almeno in parte, contribuire alla patogenesi della sindrome cardiometabolica e all’elevato rischio cardiovascolare che caratterizza questi soggetti.
Primary aldosteronism is an endocrine disease characterized by hypertension and several cardiovascular, renal and metabolic complications. The pathogenetic mechanisms that explain the relationship between PA and the development of such complications are still unknown but adipose tissue could play a key role. The aims of this study were: 1) to evaluate the cardiovascular risk (CVR) according to the ESH-ESC Guidelines in 102 patients with PA at diagnosis and after treatment, and compare it with the CVR of 132 patients with essential hypertension (EH) matched for age, sex and duration of hypertension, 2) to study the expression of genes involved in glucolipid metabolism and inflammation in adipose tissue of patients with aldosterone- producing adenoma (APA) who underwent adrenalectomy. For the clinical study, in addition to the grading of hypertension, we evaluated the lipid profile, fasting glucose and glucose tolerance test, waist circumference, renal function, family history, smoking habit, comorbidities and we performed echocardiographic and carotid ultrasound studies. For the molecular study we performed microarray analysis followed by real-time PCR on adipose tissue samples of 16 patients with APA and 10 patients with non-functioning adrenal adenoma, to quantify the expression of selected genes (hexokinase 1, IL- 1R1, IL-6-25-hydroxylase cholesterol, lipoprotein lipase, omentin, visfatin). The CVR was higher in PA patients than in EH for the presence of higher blood pressure values, higher prevalence of hyperglycemia, metabolic syndrome, smoking habit and left ventricular hypertrophy. After treatment, the CVR was reduced in both populations and became comparable between PA and EH, although the PA group presented higher blood pressure levels, due to the reduction of several risk factors and a partial regression of organ damage . We also found an increased gene expression of interleukin 6, a proinflammatory cytokine involved in the development of insulin resistance and vascular disease, in omental adipose tissue of patients with APA, which can be likely claimed, at least in part, as contributor to the pathogenesis of the cardiometabolic syndrome frequently observed in these subjects.

Un aumento dello stress ossidativo contribuisce alla patogenesi del Diabete Mellito (DM) e delle sue complicanze. La perossiredossina 6 (PRDX6) è un enzima antiossidante rilevante per il mantenimento dell'omeostasi dello stato redox, con abilità peculiare nella neutralizzazione di perossidi, perossinitriti e fosfolipidi idroperossidi. Lo scopo del presente studio è stato quello di definire il ruolo della PRDX6 nella patofisiologia del diabete di tipo 2 (DT2) utilizzando modelli murini PRDX6 knockout (-/-). Le risposte alle stimolazioni con glucosio e insulina sono state valutate con i rispettivi test di tolleranza. La sensibilità periferica all'insulina è stata determinata attraverso il clamp euglicemico iperinsulinemico, e lo studio molecolare della via di trasduzione del segnale insulinico è stato condotto mediante analisi di Western Blot. Sono stati, inoltre, valutati i parametri infiammatori e quelli coinvolti nel metabolismo lipidico. I risultati ottenuti dimostrano che topi PRDX6-/- sviluppano uno stato precoce di DT2 indotto sia da una ridotta secrezione insulinica glucosio-mediata che da un aumentato stato di insulino resistenza. A livello muscolare questi animali , inoltre, presentano significative alterazioni nella via metabolica dell'insulina, a livello di IRS1, che conducono ad una ridotta captazione del glucosio. Alterazioni morfologiche e ultra strutturali sono state osservate nelle isole di Langerhans e nel fegato di topi PRDX6-/-. Il profilo lipidico e i parametri infiammatori risultano alterati nel -/- rispetto al wt. In conclusione, i nostri dati dimostrato per la prima volta, che la PRDX6 è un mediatore chiave dell'iperglicemia conclamata aprendo interessanti prospettive nelle strategie terapeutiche per la cura del diabete.
Enhanced oxidative stress contributes to the pathogenesis of Diabetes Mellitus (DM) and its complications. Peroxiredoxin 6 (PRDX6) is a key regulator of cellular redox balance, with the peculiar ability to neutralize peroxides, peroxynitrite and phospholipid hydroperoxides. In the present study we aimed to define the role of PRDX6 in the pathophysiology of type 2 diabetes (T2D) using PRDX6 knockout(-/-) mice. Glucose and insulin responses were evaluated respectively by intraperitoneal glucose and insulin tolerance test. Peripheral insulin sensitivity was analyzed by euglycemic hyperinsulinemic clamp, and molecular tools were employed to investigate insulin signaling. Moreover, inflammatory and lipids parameters were evaluated. We demonstrated that PRDX6-/- mice developed a phenotype similar to early stage T2D caused by both reduced glucose-dependent insulin secretion and increased insulin resistance. Impaired insulin signaling was present in PRDX6-/- mice leading to reduction of muscle glucose uptake. Morphological and ultra-structural changes were observed in islets of Langerhans and liver of mutant animals, as well as altered plasma lipid profiles and inflammatory parameters. In conclusion, we demonstrated that PRDX6 is a key mediator of overt hyperglycemia in T2D glucose metabolism opening new perspectives for targeted therapeutic strategies in diabetes care.

Inflammation is an essential component of malignancies, including differentiated thyroid cancer (DTC). Thyroid cancer microenvironment is composed of a mixture of immune cells and soluble mediators. Among them, the chemokine CXCL8 exerts multiple pro-tumorigenic activities, including a chemotactic action on circulating neutrophils, induction of tumor cells growth, increase in angiogenesis and induction of the epithelial to mesenchymal transition, which promotes cell migration. Clinical studies in patients affected by several types of cancer evidenced that CXCL8 serum levels reflect the tumor burden and are related with the tumor aggressiveness. Solid evidence indicates that CXCL8 targeting can reduce tumor progression. The controversial relationship between inflammation and thyroid cancer tumorigenesis involves also the debated topic of the association between chronic-autoimmune-thyroiditis (CAT) and (DTC). DTCs are often diagnosed in the context of CAT and display an inflammatory-immune cells infiltration at histology, but whether the malignant transformation is promoted by the inflammatory response, or the peri-tumoral inflammation is induced by cancer-specific inflammatory molecules is still a matter of debate. This thesis project had two principal aims, i) to investigate the role of a pro-tumorigenic chemokine (CXCL8) in thyroid cancer microenvironment and to test in vitro the modulating properties of two different pharmacologic agents (PLX4720 and phenformin) and ii) to evaluate if CAT is a risk factor for the de novo development of DTC through a longitudinal population study. For Aim 1, thyroid cancer cell lines both BRAFV600E mutated (BCPAP, 8305C, 8505C) and RET/PTC rearranged (TPC-1), and normal human thyrocytes (NHT) were cultured alone or after treatment with two PLX4720 ore phenformin at increasing concentrations. CXCL8 concentrations were measured in the cell supernatants. Cell viability was evaluated through WST-1 and Annexin/propidium assay. Metastatic potential was assessed with migration assay and colony formation assay. For Aim 2, a retrospective longitudinal cohort study was designed including 510 CAT patients with a 10-years follow-up. The results of the first part of the thesis demonstrate that thyroid cancer cells secrete high amounts of CXCL8 and that both PLX4720 and phenformin are able to exert several anti-cancer activities within cancer microenvironment that are in part due to the inhibition of CXCL8 secretion. The results of the second part of the study indicate that the presence of CAT is not a risk factor for the new onset of DTC during long-term follow-up. The results of this thesis project suggest that two different kinds of inflammation (cancer-related and autoimmunity-related) exert different effects on DTC microenvironment and could have opposite effects on DTC development and prognosis.

Background. Acromegaly is a severe chronic endocrine disease. Achieving biochemical control often needs a multimodal treatment approach, including prolonged medical treatment. The global pandemic due to Coronavirus Disease (COVID-19) represents the toughest challenge faced by the healthcare systems in the modern history and affected the management of many chronic diseases, such as acromegaly. Aim of the study is to evaluate the burden of treatment direct costs with respect to the different therapeutic strategies, disease control, and follow-up length. Besides, it is to report the impact of the pandemic in our Unit of Endocrinology during the 2020. Methods. Single center retrospective study on 73 patients referred to our center between 1st January 2002 and 31st December 2018. Costs of acromegaly treatments were computed based on a detailed revision of patients’ clinical charts. Finally, we evaluated the number of outpatient visits and the disease control rate in 2019 and 2020 of as many patients actively followed. Results. Median total treatment cost/patient was €47393 during the entire follow-up (8.7 years), while median treatment cost/patient/year was €6811. The majority of patients received medical therapy (71/73, 97.3%). Median cost for first-line medical treatment (first-generation somatostatin receptor ligands) was lower compared to second-line treatments (pegvisomant monotherapy or combination therapies), considering both total (€22825 vs €76140; p < 0.001), and yearly cost/patient (€4927 vs €9161; p < 0.001). Sixty patients (82.2%) reached biochemical control at last follow-up (IGF-1 ≤ 1 x upper limit of normality range (ULN)). The yearly cost/patient was comparable between controlled and uncontrolled patients (€6936 vs €6688; p = 0.829). Follow-up duration was significantly longer in controlled patients compared to the uncontrolled ones (8.7 vs 3.5 years; p = 0.019). Finally, we compared data between 31th December 2019 and 31th December 2020. A total of 177 on-site visits were performed in 2019 (median: 2 visits/patient/year), while this number felt down to 118 evaluations in 2020 (median: 1 visit/patient/ year). This 33% reduction of on-site evaluations was partially mitigated performing 21 phone visits. Looking to the patients’ biochemical control, we found that median IGF-1 levels in 2019 were superimposable compared to those observed at the end of 2020 (IGF-1 xULN, median (IQR): 0.735 vs 0.740, p = 0.339). Therefore, we observed that the percentage of biochemically controlled patients did not change significantly between 2019 and 2020, ranging from 75% to 79%. Conclusions. Direct costs for the management of acromegaly have a significant burden on the healthcare systems. However, more than 80% of our patients reached biochemical control using multimodal approaches. Treatment modalities and yearly costs did not significantly differ between controlled and uncontrolled patients, while follow-up length represented a major determinant of biochemical outcome. Cure rate in tertiary centers is high, and patients’ follow-up is usually long enough to build up a strong relationship with the patients, thus improving adherence and persistence to treatment, as well as of self-management. Dealing with a chronic disease has given us the opportunity to mitigate the effects of the pandemic in the short-term.

Background Primary aldosteronism (PA) is the most common cause of arterial hypertension characterized by high levels of aldosterone, resulting in excessive mineralocorticoid receptor (MR) stimulation, and extensive hypertensive-mediated organ damage (HMOD). Current guidelines recommend one or more exclusion tests in patients performed the screening test with the measurement of aldosterone-to-renin ratio (ARR) to avoid further lateralization procedures in those who tested false-positive. To date the diagnostic gain provided by these exclusion tests over the ARR was examined only in few studies, and, therefore, stands on a weak level of evidence. Moreover, growing experimental evidence has shown that immune system, especially T cells is involved in aldosterone-induced HOMD through MR activation. MR activation in animal models of hyperaldosteronism promoted T cells differentiation to the pro-inflammatory T helper 17 (Th17) subsets while decreasing the number of anti-inflammatory T regulatory (Tregs). Alteration of the balance between Th17 and Tregs contributed to the pathogenesis of hypertension and the associated complications. Furthermore, our previous work provided proof on the MR gene expression and protein expression in both human CD4+ and CD8+ T cells by Droplet Digital PCR and immunoblotting, respectively. However, up to now, there was no relevant research focused on the function of Th17 and Tregs in PA patients, and evaluate the effect of MR antagonists and surgery on these cells in patients with PA. Aims - To meta-analyze available studies of exclusion tests to furnish a more accurate picture of their diagnostic accuracy and gain in the work-up of PA with a higher level of confidence. - To investigate the levels of circulating Th17 and Tregs in PA patients and evaluate the effect of MR antagonists and surgery on these cells in PA patients. Materials and methods - Eligible studies reported on the diagnostic performance of the ARR and the exclusion tests for identifying unilateral PA (uPA) were selected using the “gold” standard (biochemical cure after adrenalectomy), or, whenever unavailable, a “golden” standard (adrenal imaging and/or AVS) as reference. Then, pooled sensitivity, specificity, the summary receiver operating characteristic (sROC) curve, and corresponding area under the curve (sAUC) were examined. - Blood samples from PA patients were obtained at 3-time points: before surgery, when patients had high PAC and were not treated with MR antagonists (T0); before surgery when patients had high PAC and were treated with MR antagonists (T1); one month after surgery when patients had normal PAC (T2). Immunologic markers on Th17 (CD4+IL17+), pathogenic IL-23-dependent Th17 (CD4+IL17+IL23R+), and Tregs (CD4+CD25+FoxP3+) were analyzed by multicolor flow cytometry. Results - By increasing the overall sample size of the patients studied by these tests and comprising the experience gained in multiple centers, we found that two most popluar exclusion tests, captopril challenge test (CCT) and saline infusion test (SIT), had no diagnostic gain over ARR for diagnosing uPA. - The percentage of circulating Th17 in PA patients was significantly lower after treatment of MR antagonists and post-surgery biochemical cure; meanwhile, there was a decrease in pathogenic Th17 one month after surgery. Although there were no differences in the percentage of Tregs at these 3-time points, Th17/Tregs ratio was markedly decreased after treatment with MR antagonists and post-surgically cure of the hyperaldosteronism. Conclusions This meta-analysis revealed that the use of exclusion tests in patients with a high post-test probability of uPA, as identified by ARR values, could be unnecessary, if not confounding. Meanwhile, our current study showed that treatment with MR antagonists and post-surgery biochemical cure can decrease the percentage of circulating Th17 and the ratio of Th17/Tregs in PA patients.
Background Primary aldosteronism (PA) is the most common cause of arterial hypertension characterized by high levels of aldosterone, resulting in excessive mineralocorticoid receptor (MR) stimulation, and extensive hypertensive-mediated organ damage (HMOD). Current guidelines recommend one or more exclusion tests in patients performed the screening test with the measurement of aldosterone-to-renin ratio (ARR) to avoid further lateralization procedures in those who tested false-positive. To date the diagnostic gain provided by these exclusion tests over the ARR was examined only in few studies, and, therefore, stands on a weak level of evidence. Moreover, growing experimental evidence has shown that immune system, especially T cells is involved in aldosterone-induced HOMD through MR activation. MR activation in animal models of hyperaldosteronism promoted T cells differentiation to the pro-inflammatory T helper 17 (Th17) subsets while decreasing the number of anti-inflammatory T regulatory (Tregs). Alteration of the balance between Th17 and Tregs contributed to the pathogenesis of hypertension and the associated complications. Furthermore, our previous work provided proof on the MR gene expression and protein expression in both human CD4+ and CD8+ T cells by Droplet Digital PCR and immunoblotting, respectively. However, up to now, there was no relevant research focused on the function of Th17 and Tregs in PA patients, and evaluate the effect of MR antagonists and surgery on these cells in patients with PA. Aims - To meta-analyze available studies of exclusion tests to furnish a more accurate picture of their diagnostic accuracy and gain in the work-up of PA with a higher level of confidence. - To investigate the levels of circulating Th17 and Tregs in PA patients and evaluate the effect of MR antagonists and surgery on these cells in PA patients. Materials and methods - Eligible studies reported on the diagnostic performance of the ARR and the exclusion tests for identifying unilateral PA (uPA) were selected using the “gold” standard (biochemical cure after adrenalectomy), or, whenever unavailable, a “golden” standard (adrenal imaging and/or AVS) as reference. Then, pooled sensitivity, specificity, the summary receiver operating characteristic (sROC) curve, and corresponding area under the curve (sAUC) were examined. - Blood samples from PA patients were obtained at 3-time points: before surgery, when patients had high PAC and were not treated with MR antagonists (T0); before surgery when patients had high PAC and were treated with MR antagonists (T1); one month after surgery when patients had normal PAC (T2). Immunologic markers on Th17 (CD4+IL17+), pathogenic IL-23-dependent Th17 (CD4+IL17+IL23R+), and Tregs (CD4+CD25+FoxP3+) were analyzed by multicolor flow cytometry. Results - By increasing the overall sample size of the patients studied by these tests and comprising the experience gained in multiple centers, we found that two most popluar exclusion tests, captopril challenge test (CCT) and saline infusion test (SIT), had no diagnostic gain over ARR for diagnosing uPA. - The percentage of circulating Th17 in PA patients was significantly lower after treatment of MR antagonists and post-surgery biochemical cure; meanwhile, there was a decrease in pathogenic Th17 one month after surgery. Although there were no differences in the percentage of Tregs at these 3-time points, Th17/Tregs ratio was markedly decreased after treatment with MR antagonists and post-surgically cure of the hyperaldosteronism. Conclusions This meta-analysis revealed that the use of exclusion tests in patients with a high post-test probability of uPA, as identified by ARR values, could be unnecessary, if not confounding. Meanwhile, our current study showed that treatment with MR antagonists and post-surgery biochemical cure can decrease the percentage of circulating Th17 and the ratio of Th17/Tregs in PA patients.

Diabetes mellitus (DM) is one of the first leading cause of death in most high-income countries and there is evidence that it is epidemic in many economically developing and newly industrialized nations. Beside these considerations, there are epidemiologic evaluations that show a dramatic increase of the number of diabetic and with impaired glucose tollerance patients in the next years. It is also important to underline that complications from diabetes, such as coronary artery and peripheral vascular disease, stroke, diabetic neuropathy, renal failure and blindness result in increasing disability, reduced life expectancy and enormous health costs for virtually every society. In particular, diabetic peripheral neuropathy can account for the 50-75% of non traumatic amputations; diabetes is therefore undoubtedly one of the most challenging health problems of our century. Recently, in an animal model of diabetic neuropathy (i.e. the rat raised diabetic with the injection of streptozotocin - STZ), it has been demonstrated that, in plasma and in sciatic nerve, the levels of neuroactive steroids are dramatically decreased. Promising results have been obtained in the same experimental model after treatments with progesterone, testosterone and their derivatives. The use of molecules able to increase the neuroactive steroid levels directly in the nervous system could be an interesting therapeutic approach because it may avoid the endocrine side effects usually observed after systemic treatment with steroids. In order to evaluate the possible neuroprotective effects mediated by an increase of neuroactive steroid levels in the peripheral nervous system, using the model of the STZ rat we here analyzed the effects of two different pharmacological approaches. In the first part of this thesis, we analyzed the effect of Ro5-4864, a ligand of the translocator protein of 18 kDa (TSPO). TSPO is a key regulator of neuroactive steroid synthesis and it is involved in the rate limitig step of this process (i.e. the entrance of cholesterol into the mitochondria). Indeed, it has been recently demonstrated that injection of TSPO ligands, like for instance Ro5-4864, was able to increase the capability of steroidogenic machinery in adrenal cortex, placenta, testis, ovary and glial cells. In the second part of this thesis, the effect of GW3965, a ligand of the Liver X Receptor (LXR), was analyzed. The rationale of this approach was based on the finding that cholesterol homeostasis is partially controlled by the regulation of different genes activated by LXR. Moreover, LXR activation is able to increase the steroidogenesis in the adrenal glands. At 2 months after STZ injection, two different protocols of TSPO ligand administration were assessed; in particular, animals were injected every 2 days or once a week whit the ligand (i.e., they received 16 or 4 injections). In the case of GW3965 treatment, at 2 months, diabetic animals were treated once a week (i.e., they received 4 injections). Functional and behavioural parameters, like for instance hot plate test and the recording of nerve conduction velocity, as well as biochemical parameters, like Na+,K+-ATPase activity and myelin protein gene expression, were analyzed in order to assess the neuroprotective effects of treatments. Moreover, in the case of Ro5-4864 treatment, the intra-epidermal nerve fiber density was quantified in the skin of the hindpaw footpad. Furthermore, in the experiment with GW3965 treatment, the levels of gene expression of LXR targets and of steroidogenic enzimes were determined in the sciatic nerve of diabetic animals. Data obtained showed that activation of TSPO and of LXR using their ligands once a week resulted in an increased levels of neuroactive steroids and protection of the sciatic nerve from neuropathy induced by diabetes. Conversely, 16 treatments with Ro5-4864 did not produced any protective effects. The increase of neuroactive steroid levels observed in the sciatic nerve after the treatment with the two molecules was in agreement with the improve of functional and biochimical parameters observed in diabetic rats, like for istance the thermal nociceptive activity, nerve conduction velocity, and Na+,K+-ATPase activity. Moreover, a recover of the intra-epidermal nerve fiber density after Ro5-4864 injection and a significant increase of the gene expression of some enzymes of steroidogenesis after GW3965 administration were detected. In contrast to what observed after TSPO activation, treatment with GW3965 did not consistently countered the diabetes-induced decrease in expression of the myelin protein zero observed in the sciatic nerve of STZ-treated animals. This observation suggests somewhat different mechanisms of action for LXR and TSPO ligands, an issue that it should be explored in the future. In conclusion the data here reported show that Ro5-4864 and GW3965 are neuroprotective in an animal model of diabetic peripheral neuropathy. Since a pharmacological treatment for this pathology is not yet available, data here provide suggest that these two molecules may represent promising candidates for the treatment of diabetic neuropathy.

Increased and unregulated growth hormone (GH) production, usually caused by a GH-secreting pituitary tumor (somatotroph tumor), characterizes acromegaly. The pharmacological treatment involves the use of somatostatin analogs (SS), which binding to specific receptor subtypes (SST2, SST5) coupled to inhibitory G proteins, reducing tumor growth and hormonal secretion. SST- mediated signaling involves the inhibition of adenylate cyclase and the activation of K+ channels and closing of channels to the voltage-dependent Ca++, with a consequent inhibition of GH secretion. The antiproliferative effects of SS are mediated by multiple pathways, including MAPK pathway inhibition or stimulation of protein phosphatases activity by SST5 and SST2 receptor subtypes, respectively, moreover SST2 and SST3 subtypes induce apoptosis, through the tireosin protein phosphatase. However, about 30% of acromegalic patients is resistant to medical therapy and the molecular events involved in resistance to SS are not fully understood. One of the hypotheses focuses on the search for alterations in the downstream mechanisms of SSTs activation and proteins associated with them. Several studies identified specific protein-protein interactions as determinant in the regulation of receptor anchoring and signaling, in fact, it has been demonstrated the crucial role of a cytoskeleton ubiquitous protein, Filamin A (FLNA), in the regulation of expression, localization, and signaling of many GPCRs. A pituitary level, the FLNA is crucial for dopamine receptor D2R signal transduction and expression on the plasma membrane. Recently, has been demonstrated interaction with the receptor SST2 and FLNA. From these evidences, the aim of my study was to investigate the role of FLNA in the modulation of SST2 expression, intracellular localization and signal transduction in GH-secreting adenomas and in somatotroph rat GH3 cells. We have shown by co-immunoprecipitation the interaction between FLNA and SST2 in GH-secreting adenomas and GH3 cells. In addition, by immunohistochemisty and Western blot analysis, we found a variable pattern of FLNA expression between different GH- secreting adenoma samples, with no obvious correlation with SST2 expression. As demonstrated by gene silencing techniques in primary cultures of GH-secreting adenomas, FLNA do not seem to be necessary for the stability of SST2 expression and for its correct targeting to the plasma membrane. While, as shown by the expression of cyclin D1 level, FLNA is required to mediate the inhibition of cell proliferation.To further study the molecular mechanisms underlying these effects , we used GH3 cells , which express endogenously both FLNA that SST2 , and we transfected them with truncated forms of FLNA that act as dominant negative; in particular FLNA 19-20, containing the binding region to SST2 , abolishes the ability of FLNA to bind SST2 and FLNA 21-24 , containing the region mostly involved in the binding of signal transduction molecules, affects the function of FLNA scaffold. Our data show that the SST2 interaction with FLNA is crucial for the stability of SST2 expression after prolonged stimulation with the selective agonist BIM23120. In fact, agonist treatment does not influence the total amount of expressed receptor in control cells, while is observed a strong reduction of SST2 expression after incubation with BIM23120 (55 ± 5 % vs. basal) in cells transfected with FLNA 19-20. To investigate the role of FLNA in SST2 signal transduction, we evaluated the SST2 ability to induce apoptosis by measuring caspase activity after stimulation with BIM23120. We observed a significant increase of apoptosis in control cells (77 ± 54 % vs basal), while this effect was completely abolished in cells transfected with FLNA 19-20 and 21-24. The result obtained with FLNA 19-20 shows that SST2 signal transduction require association with FLNA , while the effect of FLNA 21-24 , which competes with the endogenous FLNA for the binding of molecules necessary for the signal transduction suggests that FLNA also has a functional role probably by acting as a scaffold protein. Further investigate the role of FLNA in SST2 regulation in this cellular model could be crucial to identify possible molecular mechanisms involved in drug resistance to SS analogs among a percentage of patients with acromegaly.

Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is the hepatic manifestation of metabolic syndrome and become one of the most common causes of chronic liver disease over the last decade in developed countries. The general prevalence of NAFLD is reported ranging between 20–30 % and 87 % in obese people. It is commonly associated with visceral obesity, type 2 diabetes mellitus, dyslipidemia and hypertension, all components of the metabolic syndrome, so that NAFLD might be considered an additional component of metabolic syndrome itself. As the rate of obesity, diabetes, and metabolic syndrome continue to increase, NAFLD will bring a tremendous impact on health care in the upcoming years. The underlying causes of the disease progression in NAFLD are unclear. Recent evidences suggest the development of lipid droplets (steatosis), subsequent generation of reactive oxygen species (ROS) and fibrosis deposition in the progression to non-alcoholic steatohepatitis (NASH). Moreover, continued elucidation has needed to understand fibrosis progression and regression. The paradigm of hepatic stellate cell (HSCs) activation remains the foundation for defining key translational challenges in order to accelerate the development of new therapies for patients with chronic liver disease. L-Carnitine (LCARN) is an essential nutrient that converts fat into energy in mitochondria. LCARN plays an important role in lipid metabolism; it acts as an essential cofactor for the β-oxidation of fatty acids. Very recently, LCARN has been proposed for the treatment of various diseases, including liver injury and several studies have shown that LCARN administration can ameliorate or prevent liver damage of various etiologies. We investigated the potential antioxidant and antifibrotic role of LCARN supplementation on methionine choline deficient (MCD)-diet-induced NAFLD in C57BL/6 mice. Mice were divided into three groups of CONTR (normal diet without any treatment), MCDD (MCD diet only), MCDD+LCARN 200 mg/kg/die group. Liver and heart weight, histological changes and fibrosis progression were assessed after 6 weeks of experiments. The MCD-diet induced severe hepatic fatty accumulation, but the fatty change was reduced in the MCDD+LCARN group. LCARN supplementation showed a role in controlling liver ROS generation and consequently coordinating the HSCs activation. Additionally, the same antioxidant and antifibrotic effect was observed in the myocardium. In conclusion, our findings indicate that LCARN has a potential role in control NAFLD progression to NASH. Therefore, our data suggest that LCARN may acts as a novel and potent supplementation agent against NAFLD cardiac complications.

DOTTORATO DI RICERCA IN MEDICINA CLINICA E SPERIMENTALE (XXIX ciclo) Abstract ENG Cognome: TREPPIEDI Nome: DONATELLA Matricola n.: R10592 Title: "High-resolution spatiotemporal analysis of Somatostatin Receptor Type 2 (SSTR2) – Filamin A (FLNA) interaction by single-molecule imaging" Background: SSTR2 is the main pharmacological target to treat acromegalic patients harboring GH-secreting pituitary adenomas. However, about 30% of patients displays resistance to somatostatin analogues (SSAs). Recent published data from our group demonstrated that the cytoskeletal protein FLNA plays an essential role in tumor responsiveness by regulating SSTR2 signaling and stability after prolonged stimulation. To date, there are no evidence in the literature describing the dynamic of SSTR2-FLNA interaction at the plasma membrane in vivo. Aim: Aim of my PhD project was to follow the spatiotemporal behavior of SSTR2-FLNA complexes in real time by high resolution strategy. In particular I wanted to investigate the presence of a spatial distribution of SSTR2-FLNA complexes at the plasma membrane, estimate SSTR2 lateral mobility and elucidate a possible involvement of FLNA in regulating this biological phenomenon. A further goal was to evaluate the impact of FLNA-SSTR2 binding on ligand-induced SSTR2 clusters organization and internalization. Materials and Methods: To characterize the dynamics of SSTR2-FLNA complexes in living CHO cells we used the single-molecule imaging approach, a method that combines the labelling of SNAP/CLIP-tagged proteins (SNAP-tagged SSTR2 and CLIP-tagged FLNA) with small organic fluorophores and the use of a total internal reflection fluoresence (TIRF) microscope. To calculate SSTR2 lateral mobility, mean square displacement (MSD) analysis were performed using the u-track algorithm implemented in Matlab. Confocal microscopy was used to evaluate the receptor surface distribution, agonist-mediated clusterization and alignment with actin filaments. Immunofluoresce experiments were assessed to evaluate the colocalization between SSTR2 clusters and AP-2, one of the early endocytosis marker, whereas the overall SSTR2 internalization process was analyzed by both imaging (confocal microscopy) and biochemical (biotinylation assay) strategies. All these SSTR2 aspects were evaluated in the presence or the absence of FLNA interaction. In particular, the overexpression of the dominant negative mutant FLNA 19-20 was used to abolish SSTR2-FLNA binding. Results: First, the motion of freely diffusing SSTR2 particles was observed to slow down in CHO cells treated with 100nM BIM23120 for 5-10min (mean diffusion coefficients from 0,123µm2*s-1 to 0,101µm2*s-1). MSD analysis showed a significant increase in the SSTR2 fraction with diffusion coefficient values ≤ 0.05μm2*s-1 with respect to unstimulated cells (28,1% vs 14,4%, 100nM BIM23120 vs control, respectively, expressed as fraction of total particles, P < 0.05). The presence of the FLNA truncated mutant, that selectively prevents SSTR2-FLNA binding (FLNA 19-20), did not influence the SSTR2 agonist effect on receptor mobility. Such data was further confirmed in melanoma cell lines A7 (FLNA-expressing cells), M2 (FLNA-lacking cells). Then, we described the nature of the interactions between SSTR2 particles and FLNA fibers as extremely dynamic and transient under resting condition, whereas they resulted long-lasting and more stable after100nM BIM23120 exposure. Interestingly, when both FLNA and SSTR2 were expressed at single molecule level, SSTR2-FLNA complexes formation was seen to occur preferentially along actin filaments, in stimulated cells only. Furthermore, when overexpressed and activated by the agonist, SSTR2 was observed to undergo clusters formation, and FLNA-SSTR2 binding was required to preserve SSTR2 clusters alignment on actin structures and colocalization with the clathrin coated pits marker AP-2. In addition, quantitative analysis of the agonist-triggered SSTR2 internalization demonstrated a significant reduction of the internalization rate in the presence of FLNA 19-20 compared to negative control (FLNA 17-18), at all the tested time points (eg. 45,3%±1,4% internalization vs 71,4%±3,1% in FLNA 19-20 vs FLNA 17-18 transfected cells after 30min stimulation with 100nM BIM23120, respectively, P < 0,001), accordingly with biotinylation results. Discussion: The behavior of SSTR2-FLNA interactions were characterized for the first time by means high spatio-temporal resolution strategy. In particular we observed that the SSTR2 agonist is able to modulate the dynamic properties of receptor particles, as demonstrated by a significant increase in the immobile receptor fraction observed upon stimulation, compared to the basal state. Even though FLNA does not contribute to the enrichment of the static receptor population, it seems to act as scaffold platform where ligand-activated receptors preferentially stop, likely to initiate their signaling transduction, then followed by internalization. Moreover, we highlighted a key role of FLNA in anchoring SSTR2 complexes to the cortical actin cytoskeleton. In fact, the abolished SSTR2-FLNA interaction resulted in a remarkably reduced alignment of agonist-induced SSTR2 clusters along actin filaments, revealing that SSTR2 clusters cannot properly associate with the actin cytoskeleton without binding to FLNA. Furthermore, we demonstrated that like for other GPCRs and transmembrane proteins, FLNA interaction is required to initiate and sustain ligand triggered-SSTR2 endocytosis. Indeed, a decrease colocalization between SSTR2 clusters and AP2-defined pits, and a strong impairment of the internalization rate were both associated to the overexpression of FLNA-19-20. Altogether these results let us to speculate that, by tethering SSTR2 to actin filaments, FLNA may facilitate the formation of ligand-inducible complexes with interacting proteins that are necessary for the efficient endocytosis of the receptor into clathrin-coated vesicles. Conclusion: In conclusion, the present work provides evidence for the involvement of FLNA and the cortical actin cytoskeleton in the formation of compartmentalized domains at the plasma membrane, where SSTR2 are first assembled into functional units, and then subjected to endocytosis. Indeed, the deep understanding of these aspects may be useful to clarify the molecular mechanisms by which the cells can modulate the amount of active receptors at their surface, thus determining a variable responsiveness to SSAs, with possible implications in the pharmacological resistance to the clinical management of acromegaly.