Dissertations / Theses on the topic 'Enzyme de synthèse du monoxyde d'azote'

Le monoxyde d’azote (NO), un neurotransmetteur important en biologie, a attiré l’attention ces dernières années pour son rôle majeur joué dans l’apparition d’une myriade de maladies telles que certains cancers, diabètes etc. Comprendre les mécanismes biologiques liés à la production du NO pourrait aboutir à la découverte de nouveaux moyens thérapeutiques. Cependant, le fonctionnement de l’enzyme qui produit le monoxyde d’azote, la NO-Synthase, n’est pas complétement élucidé. Dans ce but, des approches biomimétiques peuvent apporter une solution. Les microréacteurs ou proto-cellules, enveloppes imitant sommairement la compartimentation cellulaire sont un outil de choix, permettant de répliquer un environnement contrôlé où les concentrations et distances de réactions sont proches d’une cellule, permettant ainsi d’étudier le fonctionnement de la NO-Synthase. Cette thèse présente trois problématiques qui ont pour but de développer un tel microréacteur encapsulant la NO-Synthase : (1) la libération contrôlé d’espèces réactives déclenchée par un stimulus lumineux, (2) le suivi de l’activité de l’enzyme par des sondes fluorescentes et (3) le contrôle de la réaction enzymatique dans l’espace et dans le temps. Deux systèmes ont été étudiés pour libérer de manière contrôlée des espèces: la première consiste à déstabiliser des nano polymersomes par photo-clivage du copolymère qui le constitue. Le deuxième système est basé sur une rapide augmentation de la pression osmotique par irradiation à l’intérieur des polymersomes, induisant un éclatement de ceux-ci et la libération d’espèces encapsulées. La deuxième problématique abordée est le suivi de l’activité enzymatique au moyen de sondes hydrophobes et hydrophiles fluorescentes qui détectent le monoxyde d’azote à différent endroits du microréacteur. Le dernier point abordé est l’étude des microréacteur et la libération contrôlé en leur sein
Nitric oxide (NO) has been identified as an important chemical messenger in cells and living organisms. Understanding the mechanism involved in NO production by NO-synthase is of fundamental importance. Mimicking basic cell functions by encapsulating NO-synthase in a controlled and confined cell like environment, could help provide information about the enzyme. Polymersomes resulting from the self-assembly of amphiphilic block copolymers were used as the synthetic cell like microreactor. To this end, three major challenges were addressed in this thesis: (1) controlling species release and concentration inside the microreactor, (2) measuring the enzyme response by NO detection and (3) controlling enzymatic reactions in space and time inside a microreactor. Light was used as the exogenous stimulus to induce release; its application is instantaneous, non-invasive and easy to control spatially and temporally. Two different ways to release species via light excitation were explored. The first strategy involves destabilization of nanopolymersomes by block separation, induced by copolymer photocleavage. The second strategy was to induce fast osmotic pressure increase of the polymersomes internal medium, resulting in bursting and species release. In order to monitor NO production by NO-synthase in different parts of the microreactor, hydrophobic and hydrophilic fluorescent NO probes have been synthesized and studied showing excellent correlation with NO concentration. The release of species inside microreactor was finally achieved in order to control enzymatic reaction

Afin d'évaluer l'importance de la voie L-arginine-monoxyde d'azote (NO) dans l'homéostasie circulatoire, nous avons étudié les conséquences du blocage chronique de la NO synthase à l'aide d'un antagoniste de l'arginine (NG-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME) chez le rat Wistar normotendu. L'administration de L-NAME entraîne une hypertension artérielle d'un niveau manométrique comparable à celui des autres modèles d'hypertension artérielle. L'hypertension artérielle induite par la L-NAME se caractérise par une absence d'hypertrophie ventriculaire gauche pendant les premières semaines, l'apparition d'intenses lésions de néphroangiosclérose s'accompagnant d'une activation du système rénine angiotensive, et enfin l'existence d'infarctus de la moelle épinière. L'administration de L-NAME pendant 4 mois entraîne la mort de tous les animaux. L'activité de la NO synthase paraît normale chez le rat spontanément hypertendu. Par contre, nous avons observé deux situations au cours desquelles l'activité de la NO synthase est modifiée de façon chronique. La prolifération des cellules endothéliales en culture entraîne une augmentation de l'expression du gène de la NO synthase ainsi que celle de son activité. Les taux circulants de glutamine inhibent l'activité de la NO synthase, cette inhibition pouvant être réservée par de fortes concentrations d'arginine.

Le travail presente dans cette these s'inscrit dans le cadre de la chimie de l'evolution et concerne plus particulierement la chimie de l'evolution. Dans la premiere partie de ces travaux, les possibilites competitives de synthese d'-aminoacide et de n-carbamoylaminoacide ont ete analysee. Dans les conditions prebiotiques presumees, l'equilibre resultant du systeme rcho/nh3/hcn entre l'-hydroxynitrile (>99,9%) et l'-aminonitrile (<0,1%) a pu etre cinetiquement deplace vers le precurseur de l'-aminoacide (l'-aminonitrile) dans des conditions diluees extremement douces, selon deux processus catalytiques utilisant le formaldehyde et l'anhydride carbonique. Une etude cinetique du comportement des composes intermediaires de ces deux processus catalytiques a permis de montrer la preeminence des n-carbamoylaminoacides. Dans la deuxieme partie de cette these, le comportement cinetique des -aminoacides en presence de solutions aqueuses de cyanate a ete etudie en prenant en compte les differents processus catalytiques d'hydrolyse des cyanates. La glycine, aminoacide modele dans cette etude, meme a faible concentration (10-3 mol. L-1) est convertie au ph de l'ocean primitif en n-carbamoylglycine. La derniere partie de ces travaux est relative a l'activation chimique des n-carbamoylaminoacides par le systeme gazeux nitrosant no/o2 en phase solide aussi bien qu'en solvant organique. La nitrosation des n-carbamoylaminoacides constitue une voie d'acces simple aux n-carboxyanhydrides avec une tres bonne selectivite et sans rejets autres que n2 et h2o. Cette synthese correspond a une nouvelle voie efficace de preparation des n-carboxyanhydrides, veritables precurseurs peptidiques.

La relaxation vasculaire est en majeure partie régulée par le monoxyde d'azote (NO) synthétisé par l'isoforme endothéliale de la NO synthase (NOS III). La NOS III localisée au niveau d'une unité fonctionnelle la cavéolae, est elle-même dépendante de la concentration intracellulaire de la Ca2+ libre ([Ca2+]i), de réactions de phosphorylation et de l'homéostasie calcique cavéolaire. Récemment, l'implication des tyrosines kinases, de la Ca2+/calmoduline protei͏̈ne kinase II (CaMK II) et de l'échangeur Na+/Ca2+ dans la synthèse de NO ont été supposées. L'objet de cette étude a été de caractériser le rôle de ces trois systèmes dans la relaxation d'anneaux d'aorte de rat et la production de NO par une lignée de cellule endothéliale d'aorte de porc. Les effets des tyrosines kinases, de la CaMK II et de l'échangeur Na/+Ca2+ ont été étudiés par l'intermédiaire d'activateurs et d'inhibiteurs des kinases et de l'échangeur. La relaxation a été suivie sur les anneaux en chambre d'organe par leur allongements isométriques après stimulation par différents activateurs de la NOS III. La production de NO cellulaire a été quantifiée par la concentration des nitrites et nitrates dans le milieu de culture ou la détermination en temps-réel du NO libéré par sonde ampérométrique. Les inhibiteurs des tyrosines kynases et phosphatases ont montré une diminution de la relaxation dépendante de l'endothélium et une diminution de la production de NO. Ces effets n'ont pas été associés à la phosphorylation des radicaux tyrosyls de la NOS III. Au total, nos résultats confirment l'implication des tyrosines kinases, de la CaMK II et de l'échangeur Na+/Ca2 +dans la régulation de la NOS III. Si les tyrosines kynases solubles interviennent via la régulation de la [Ca2+] i , la CaMK II phosphoryle directement la NOS III alors que l'échangeur Na+/Ca2+ en mode Ca2+ entrant régule la concentration de Ca2+ libre cavéolaire. Ces trois systèmes supposent de nouveaux niveaux de régulation de la NOS III et la perspective de développements pharmacologiques.

La symbiose entre Medicago truncatula et Sinorhizobium meliloti conduit à la formation de nodosités racinaires capables de fixer l’azote atmosphérique. Le glutathion (GSH) et l’homoglutathion (hGSH) sont deux molécules antioxydantes qui participent à des fonctions essentielles pour la plante. Au cours de ce travail de thèse, la régulation de l’expression des gènes de synthèse du GSH et de l’hGSH par le monoxyde d’azote (NO) a été analysée, et une étude transcriptomique a été réalisée afin d’identifier des gènes cibles du (h)GSH lors de la symbiose. Deux donneurs chimiques de NO sont capables d’augmenter la quantité d’ARNm correspondant à la γ-glutamylcystéine synthétase et à la glutathion synthétase, mais pas de l’homoglutathion synthétase, suggérant que ces deux thiols pourraient avoir des rôles différents. L’accumulation du GSH a été corrélée à l’expression des gènes, montrant que le NO induit la synthèse du GSH dans les racines de Medicago truncatula. L’étude transcriptomique réalisée a permis d’identifier 181 gènes dont l’expression est modifiée chez des plantes déficientes en (h)GSH au cours de la mise en place de la symbiose, parmi lesquels des gènes liés à la formation des méristèmes, à la transduction du signal et à la défense de la plante. L’analyse du profil d’expression de gènes de défense induits par l’acide salicylique suggère que les mécanismes de défense liés à cette hormone affectent la nodulation des plantes déficientes en (h)GSH. Les résultats obtenus dans cette thèse ouvrent de nouvelles perspectives d’étude sur les multiples rôles du h(GSH) dans les mécanismes de la nodulation, et plus généralement dans les interactions plantes-microorganismes
Symbiosis between Medicago truncatula and Sinorhizobium meliloti leads to the formation of root nodules able to reduce atmospheric nitrogen. Glutathione (GSH) and its homologue homoglutathione (hGSH) are two antioxidants involved in many essential plant functions. During this PhD work, regulation of GSH and hGSH biosynthesis genes by nitric oxide (NO) was studied and a transcriptomic analysis was carried out in order to identify (h)GSH target genes during the nodulation process. Two chemical NO donors, are able to increase the amount of γ-glutamylcysteine synthetase and glutathione synthetase transcripts, but not homoglutathione synthetase transcripts, suggesting the two thiols could have different roles. GSH accumulation correlated with gene expression, showing NO induces GSH synthesis in Medicago truncatula roots. NO, which has been detected in nitrogen fixative nodules, could therefore be involved in antioxidant defence during symbiosis by the activation of GSH synthesis. Transcriptomic analysis by cDNA-AFLP allowed us to identify 181 genes regulated by (h)GSH depletion during the nodulation process ; amongst them, genes related to meristem development, signal transduction and plant defence. Expression profile analysis of genes induced by salicylic acid suggest defence mechanisms linked to this hormone are impaired in (h)GSH-depleted plants. The results obtained during this work bring us new elements on (h)GSH implication in plant defence regulation and open the way to new studies on the various roles of this molecule in nodulation mechanisms, and more generally in plant-microorganism interactions

Le monoxyde d'azote (NO) est impliqué dans un grand nombre de fonctions physiologiques, tant dans le système nerveux ou le systèine immunitaire que dans le système cardio-vasculaire. Le NO est l'un des produits générés par une famille d'enzymes, les synthases du monoxyde d'azote (NOS). Ces synthases partagent de nombreuses caractéristiques structurelles et de cofacteurs communs. Dans le système cardio-vasculaire le NO est produit principalement par les cellules endothéliales vasculaires et joue un rôle majeur dans le maintien du tonus vasodilatateur artériel et dans la régulation de la pression artérielle. L'isoforme endothéliale des NOS, la eNOS, ou NOS III, est exprimée constitutivement dans les cellules endothéliales et dans plusieurs autres types cellulaire. Son expression est cependant modulée aux niveaux transcriptionnel et post-transcriptionnel par de nombreux effecteurs, en particulier le VEGF. Le gène humain de la eNOS a été localisé dans la région télomérique du chromosome 7, en 7q36. Les facteurs de transcription des familles Ets, GATA, ou Sp-1 ont été impliqués dans la régulation de l'expression basale du promoteur du gène. Aucun de ces facteurs, pris isolément ou en combinaison avec les autres, ne permettent d'expliquer la restriction endothéliale de l'expression de la eNOS, nous avons entrepris d'identifier de nouvelles régions régulatrices dans le gène de la eNOS. Par des techniques d'hypersensibilité à la DNase 1 et de transfections, nous avons identifié un élément de régulation localisé à 4. 9 kb en amont du site principal de démarrage de la transcription. Cet élément activateur de 269 pb, qui présente les caractéristiques d'un "enhancer", est spécifiquement actif dans les cellules endothéliales lorsqu'il est placé dans sa configuration native. Plusieurs régions distinctes au sein de cet activateur sont importantes pour sa fonction et contiennent des sites de fixation pour les facteurs de transcription de type MZF, Sp-1 et AP-2 et Ets. Une première analyse indique qu'un des facteurs Ets impliqués serait la protéine Erg.

L’hypertension et le déclin de la fonction rénale observés en insuffisance rénale sont associés à une diminution de la biodisponibilité du monoxyde d’azote (NO) et à une augmentation de la formation d’angiotensine II (AngII). L’objectif de notre première étude est d’évaluer les altérations cardiovasculaires et rénales causées par l’inhibition chronique de la synthèse du NO chez le rat Harlan Sprague-Dawley (Hsd : SD) ainsi que le rôle de l’AngII. La synthèse du NO est inhibée par l’administration d’un analogue de la L-arginine, le L-NAME (100 mg/kg/jour), administré dans l’eau à boire pendant 3 semaines. Le rôle de l’AngII est évalué à l’aide d’un antagoniste des récepteurs AT1 de l’AngII, le losartan (20 mg/kg/jour). À la fin de l’étude, les rats L-NAME ont une pression artérielle systolique (PAS) élevée par rapport aux animaux témoins. Ils présentent une augmentation de la créatinine sérique et de la protéinurie indiquant une atténuation importante de la fonction rénale. Les dommages rénaux sont caractérisés par de l’ischémie glomérulaire, de l’atrophie tubulaire et de la prolifération myointimale. Les animaux L-NAME présentent une augmentation de l’expression de l’ET-1 et du TGF-β dans les vaisseaux et les reins. On observe également une augmentation des taux d’anion superoxide (•O2-), une espèce réactive de l’oxygène (ROS), dans la paroi des vaisseaux. Le traitement avec le losartan freine l’élévation de la PAS, atténue l’élévation de la créatinine sérique et de la protéinurie. Le losartan prévient également les dommages glomérulaires, tubulaires et vasculaires observés dans le rein. En plus, le losartan normalise l’expression vasculaire et rénale de l’ET-1 et du TGF-β ainsi que le taux des ROS dans l’aorte thoracique. Afin de déterminer le rôle de l’ET-1, du TGF-β1 et des ROS chez le rat Harlan traité au L-NAME, nous avons administré un antagoniste des récepteurs ETA de l’ET-1 (LU135252), un anticorps monoclonal neutralisant le TGF-β (1D11) et un antioxydant (acide lipoïque). L’effet de ces traitements sur la PAS, la créatinine sérique, la protéinurie et les dommages cardiovasculaires et rénaux est évalué après 3 semaines. Malgré l’augmentation au niveau vasculaire et rénale de l’expression de l’ET-1, du TGF-β et des ROS chez les animaux L-NAME, le blocage individuel de chacun de ces facteurs avec soit le LU135252, l’anticorps 1D11 ou l’acide lipoïque n’a eu aucun effet sur l’élévation de la PAS, de la créatinine sérique, de la protéinurie et l’apparition des dommages cardiovasculaires et rénaux. Dans une deuxième étude, nous avons évalué l’influence du degré d’inhibition de la synthèse du NO sur le développement de l’hypertension et l’apparition des dommages cardiovasculaires et rénaux chez le rat Hsd : SD et l’implication de l’AngII. L’inhibition de la synthèse du NO est obtenue par le traitement au L-NAME à différentes doses (100, 30 et 5 mg/kg/jour). Le rôle de l’AngII est évalué à l’aide du losartan (20 mg/kg/jour). L’effet de ces traitements sur le taux urinaire de nitrates/nitrites, la PAS, la créatinine sérique, la protéinurie et les dommages histologiques vasculaires et rénaux est évalué après 3, 4 et 12 semaines. Les différentes doses de L-NAME diminuent les taux urinaires de nitrates/nitrites de 95%, 91% et 80% comparativement aux animaux contrôles. Le L-NAME aux doses de 100mg et 30mg/kg/jour augmente la PAS (p<0.01), la créatinine sérique et la protéinurie en 3-4 semaines. Ces animaux présentent des lésions ischémiques rénales associées à des dommages vasculaires sévères dont de la prolifération myointimale. Par contre, à la dose de 5mg/kg/jour de L-NAME, l’hypertension se développe de façon modérée et les dommages cardiovasculaires et rénaux apparaissent tardivement à 12 semaines. Le traitement avec le losartan atténue l’augmentation de la PAS, de la créatinine sérique, de la protéinurie et des dommages cardiovasculaires et rénaux aux différentes doses de L-NAME. En conclusion, mes travaux démontrent l’importance du NO dans le maintien de la fonction endothéliale. En effet, l’inhibition chronique de la synthèse du NO chez le rat Hsd : SD cause une hypertension sévère et des dommages cardiovasculaires et rénaux majeurs qui dépendent du degré d’inhibition. Ces effets pathophysiologiques sont causés, en partie, par l’action accrue de l’AngII qui peut moduler, entre autres, la production d’ET-1, du TGF-β et des ROS. Le blocage individuel de chacun de ces facteurs ne parvient cependant pas à freiner l’élévation de la PAS, le déclin de la fonction rénale et l’apparition des dommages cardiovasculaires et rénaux lors de l’inhibition chronique de la synthèse du NO à forte dose (100 mg/kg/jour). Finalement, ces résultats démontrent une relation étroite entre l’AngII et le NO dans la pathogenèse de l’hypertension et des dommages cardiovasculaires et rénaux.
Impaired nitric oxide (NO) bioavailability and increased angiotensin II sensitivity has been implicated in the pathogenesis of hypertension associated with chronic renal failure. The present study was designed to investigate the cardiovascular and renal damages induced by chronic NO synthesis inhibition in Harlan Sprague-Dawley rats (Hsd : SD) and the role of AngII. NO synthesis inhibition is induced by treatment with the L-arginine analogue, L-NAME (100 mg/kg/day), administered in the drinking water for 3 weeks. The role of AngII is evaluated with the AT1 receptor antagonist losartan (20 mg/kg/day). At the end of the study, L-NAME treated rats exhibited increased systolic blood pressure (SBP) compared to control animals. They also showed increased serum creatinine and proteinuria indicating a decline in the renal function. These changes were associated with the development of glomerular ischemia, tubular atrophy and neointimal hypertrophy. L-NAME treated rats also exhibited increased expression of ET-1 and TGF-β1 in the vessels and the kidney. They also presented increased formation of superoxide anion, a reactive oxygen species (ROS), in the thoracic aorta. Treatment with losartan attenuated the increased in SBP, serum creatinine and proteinuria and prevented the glomerular, tubular and vascular damages observed in the kidney. Losartan also normalized vascular and renal expression of ET-1 and TGF-β1 and overproduction of ROS in the thoracic aorta. To determine the specific role of ET-1, TGF-β1 and ROS in L-NAME treated rats, we administered respectively an ETA receptor antagonist (LU135252), a monoclonal antibody neutralizing TGF-β (1D11) and an antioxidant (α-lipoic acid). The effect of these treatments on SBP, serum creatinine, proteinuria and cardiovascular and renal damages was evaluated after 3 weeks. Despite increased level of vascular and renal expression of ET-1, TGF-β and ROS in L-NAME treated rats, treatment with LU135252, the monoclonal antibody 1D11 and the antioxidant α-lipoic acid taken each alone had no effect on the elevation of SBP, serum creatinine, proteinuria and cardiovascular and renal damages. In a second study, we evaluated the effect of different degrees of NO synthesis inhibition on hypertension and cardiovascular and renal damages in Hsd : SD rats and the implication of AngII. Chronic NO synthesis inhibition is induced by treatment with L-NAME at different doses (100, 30, 5 mg/kg/day). The role of AngII is evaluated with losartan (20 mg/kg/day). The effect of these treatments on urinary nitrates/nitrites, SBP, serum creatinine, proteinuria and vascular and renal damages are evaluated after 3, 4 and 12 weeks. The different L-NAME doses decreased urinary nitrates/nitrites by 95%, 91% and 80% as compared to control animals. L-NAME at a dose of 100 and 30 mg/kg/day increased SBP (p<0.01), serum creatinine and proteinuria within 3-4 weeks. These animals showed renal ischemic lesions associated with myointimal proliferation and lumen obstruction. At a dose of 5 mg/kg/day of L-NAME, SBP increased moderately (p<0.01) and cardiovascular and renal damages appeared later (week 12). Treatment with losartan attenuated the increased in SBP, serum creatinine, proteinuria and cardiovascular and renal damages at all doses of L-NAME utilized. In conclusion, these studies demonstrate the importance of basal NO release in the maintain of endothelial function. In fact, chronic NO synthesis inhibition in Hsd : SD rats cause severe hypertension and cardiovascular and renal damages which depend on the degree of inhibition. These pathological effects are caused, in part, by the action of AngII which can modulate the production of ET-1, TGF-β and ROS. However, the individual blockade of these factors do not attenuate the elevation of SBP, serum creatinine, proteinuria and the apparition of cardiovascular and renal damages caused by chronic NOS inhibition at a high dose (100 mg/kg/day). Finally, these results demonstrate a close relationship between NO and AngII in the pathogenesis of hypertension and cardiovascular and renal damages.

Les Escherichia coli entérohémorragiques (EHEC) sont des bactéries qui colonisent l'intestin de l'homme et produisent des Shiga-toxines (Stx) ; ces dernières sont responsables du développement du syndrome hémolytique et urémique (SHU), la 1ère cause d'insuffisance rénale aigüe chez l'enfant à travers le monde. Nous avons analysés différents aspects des interactions entre les EHEC et le monoxyde d'azote (NO). NO produit par la NO synthase inductible (iNOS) est un médiateur incontournable de la réponse innée chez l'homme. No est un agent antibactérien, peut induire des modification transcriptionnelles chez les procaryotes et moduler l'inflammation. L'objectif de mes travaux de thèse a été d'étudier différents aspects des interactions moléculaires et physiologiques entre NO et les EHEC. Nous avons démontré que le NO inhibe l'attachement des EHEC aux cellules épithéliales intestinales humaines en réprimant l'expression de gènes du locus d'effacement des entérocytes qui code pour un système de sécrétion de type III via le système Gad. Par ailleurs, en agissant sur les senseurs bactériens NorR et NsR, NO produit par des donneurs chimique de NO ou par des cellules épithéliales humaines activées sensibilise les EHEC et diminue la réponse SOS bactérienne, la transcription du gène stx et la production de Stx. En retour, les EHEC induisent l'hème oxygénase-1 (HO-1) dans les cellules épithéliales. Cette enzyme produit du monoxyde de carbone qui interfère avec la voie de signalisation IFN-γ/STAT-1, réprimant ainsi l'expression de la iNOS et la production de NO par les entérocytes activés par les cytokines de type 1. Enfin, des muqueuses coliques de rats axéniques infectés par des EHEC montrent moins d'infiltration de cellules immunes et d'expression de gènes codant pour des cytokines pro-inflammatoires et pour la iNOS que des rats infectés par une souche commensale humaine de E. Coli. En revanche, les EHEC, et non les E. Coli commensaux, ont stimulé la production de HO-1 dans les côlons des animaux.

Les anomalies congénitales induites par la délétion du gène du récepteur de la sérotonine 5-HT2B conduisent au développement d’une cardiomyopathie dilatée chez les souris mâles adultes. Les souris femelles knock-out (KO) pour le récepteur 5-HT2B étant moins affectées que les mâles KO, concernant le phénotype cardiaque, nous avons évalué le pouvoir cardioprotecteur des hormones ovariennes. Nous avons montré que l’ovariectomie à la puberté, entraîne une accélération de l'hypertrophie développementale mais indépendamment du récepteur 5-HT2B. Par conséquent les hormones ovariennes ne protègent pas les femelles KO pour le récepteur 5-HT2B de la cardiomyopathie dilatée. En absence d'altération fonctionnelle cardiaque apparente, les femelles KO ont été utilisées pour l'étude des fonctions vasculaires du récepteur 5-HT2B. L'induction d'une hypertension artérielle, par inhibition chronique des Nitric Oxide Synthases (NOSs), a permis la mise en évidence du caractère multi-phasique de ce modèle d'hypertension. Alors que les femelles sauvages développent deux phases d'hypertension, les femelles KO ne développent qu'une seule phase, suggérant que le récepteur 5-HT2B est impliqué dans le développement de l'une de ces phases. Les femelles KO sont plus sensibles à court terme, mais, paradoxalement, moins sensibles à long terme que les femelles sauvages vis-à-vis de l’hypertension par inhibition des NOSs. La protection à long terme confirme le rôle majeur du récepteur 5-HT2B dans l’étiologie de l’hypertension artérielle chronique. L'hypersensibilité à court terme des femelles KO est reliée à un défaut de compliance artérielle spécifique de l'inhibition des NOSs et à la réduction de 30% de l’activité basale des NOSs endothéliales au niveau de l’aorte. En conclusion, le récepteur 5-HT2B participe au contrôle de la pression artérielle notamment en modulant le tonus vasculaire de base et en participant, indépendamment, à l’étiologie de l’hypertension artérielle chronique
5-HT2B receptor knockout (KO) mice display congenital cardiac defects leading to dilated cardiomyopathy in adult KO males. Because 5-HT2B-KO females exhibit a less severe cardiac phenotype than KO males, we investigated the potential cardioprotective role of ovarian hormones in 5-HT2B-KO females. Bilateral ovariectomy, at puberty, induced an accelerated developmental cardiac hypertrophy but independently of the 5-HT2B receptor. Consequently, ovarian hormones are not the cause of gender difference in KO mice. Taking advantage of apparent normal cardiac function in KO females, we investigated the vascular function of the 5-HT2B receptor in vivo. Using, the chronic NOS (Nitric Oxide Synthase) inhibition induced-hypertension model, we describe for the first time, two independent phases of hypertension in wild type mice. Surprisingly, KO females display only one phase, indicating that the 5-HT2B receptor is necessary for one of the two phases of NOS-inhibition-induced hypertension. Moreover, KO females exhibit an hypersensitivity to NOS inhibition in the first phase of hypertension compare to wild type females but, paradoxically, they are protected from the second phase of hypertension. This protection confirms the major role of the 5-HT2B receptor in etiology of hypertension. Finally, we have shown that hypersensitivity to short term NOS inhibition is specifically associated to a decrease of vascular compliance and to a 30% reduction of basal endothelial NOS activity in aorta of KO females compare to wild type. We conclude that the 5-HT2B receptor is involved in blood pressure regulation by controlling basal vascular tonus, trough NOS activation, and independently participates to the development of long-term hypertension

Deux dioxydes d'étain de surface spécifique élevée après calcination sous flux de O2 à 600°C ont été synthétisés : SnO2-HNO3 (24 m2 g-1) et SnO2-N2H4 (101 m2 g-1). Le solide SnO2-N2H4 se caractérise par un plus grand nombre d'espèces hydroxyles de surface que SnO2-HNO3. Le traitement thermique sous O2 entraîne la formation de lacunes d'oxygène principalement mono-ionisées, menant à des dioxydes d'étain sous stœchiométriques. Un refroidissement jusqu'à 25°C sous O2 conduit à une surface exempte de lacunes d'oxygène. Un traitement spécifique comme l'évacuation sous vide dynamique à des températures supérieures à 300-400°C, est nécessaire pour arracher des atomes d'oxygène de surface. L'adsorption de CO à la température de l'azote liquide sur le solide SnO2-N2H4 a révélé l'existence de deux sites cationiques Sn4+, possédant des acidités de Lewis différentes. En ce qui concerne les groupements OH, on a pu distinguer : i) des OH inaccessibles aux molécules de CO, ii) des OH de surface très faiblement acides et iii) des OH de surface présentant une acidité de Brönsted faible. Une étude des interactions entre le solide SnO2-N2H4 calciné à 600°C et différents gaz polluants a ensuite été menée par spectroscopie IRTF en transmission. Le dioxyde de carbone interagit avec la surface de SnO2 pour donner des espèces CO2 adsorbées sur des sites cationiques ainsi que des espèces carbonates et hydrogénocarbonates. L'absence de participation d'électrons libres aux réactions de surface envisagées, explique que les capteurs à base de SnO2 ne présentent aucune sensibilité vis-à-vis de CO2. Le monoxyde de carbone provoque la réduction partielle de la surface de SnO2 par réaction de CO avec les atomes d'oxygène de surface pour former des espèces carbonates et CO2. Cette réduction s'accompagne d'une libération d'électrons et de la formation de lacunes d'oxygène de surface, entraînant des variations importantes de la transmission qui traduisent la grande sensibilité de SnO2 vis-à-vis de CO. En ce qui concerne NO2, nous avons pu constater la présence d'espèces NO+, nitrites et surtout nitrates adsorbées. Les réactions de surface dans lesquelles ces espèces interviennent ont permis d'interpréter les variations de conductivité de SnO2 en présence de NO2. L'adsorption de NO sur SnO2-N2H4 a montré la formation d'espèces à la fois donneurs (espèces nitrites et nitrates) et capteurs (espèces nitrosyles) d'électrons. La présence de ces espèces explique, en partie, les variations complexes de conductivité avec la température. Enfin, en ce qui concerne la réduction catalytique sélective (RCS) des NOX par le propène en présence d'un excès d'oxygène, le dioxyde d'étain s'est révélé actif à haute température (> 350°C) et sélectif en N2. Cependant, les sites actifs sont bloqués par des espèces polymères oxygénés du propène (coke). Dans le cas du solide SnO2-N2H4, la présence d'eau permet d'inhiber la formation du coke, entraînant une légère amélioration de l'activité catalytique, tandis que pour un SnO2 commercial, l'eau a un effet inhibiteur sur la RCS des NOX. Une plus grande acidité de surface pour le solide SnO2-N2H4 pourrait expliquer ce comportement.

Parmi les nombreux effets cellulaires du monoxyde d'azote (no), nous nous sommes interesses a: (1) l'inhibition de la synthese d'adn et (2) la depletion en fer. Le premier effet resulte en partie de l'inhibition par no de la ribonucleotide reductase (rnr), enzyme essentielle a la synthese d'adn. Quant au deuxieme, il est probable qu'il fasse intervenir certaines proteines du metabolisme du fer. Nous avons examine, par l'usage de la spectroscopie rpe, les interactions possibles in vitro, de no avec la sous-unite r2 de la rnr et trois proteines du metabolisme du fer: la ferritine, proteine du stockage du fer, et les deux proteines de transport, la transferrine et la lactoferrine. La ferritine forme avec no des complexes paramagnetiques. Il a ete montre que no, libere du nitroprussiate, conduisait a un relargage du fer de la ferritine. Cherchant a developper ces resultats, nous avons demontre que la methode precedemment utilisee etait artefactuelle. La transferrine et la lactoferrine forment egalement un complexe paramagnetique de type fe#2#+-no avec no. Cependant, le fer ferrique specifiquement lies aux deux lobes de ces proteines n'est pas affecte par la formation du complexe. Le complexe n'est forme qu'en presence d'ascorbate et de fer serait lie aux proteines de facon non specifique mais non elimine par un traitement aux resines echangeuses d'ions metalliques. La sous-unite r2 contient plusieurs centres capables de reagir avec no: le radical tyrosinyle et le centre binucleaire fe#3#+-o-fe#3#+. En reprenant l'etude des interactions entre no et les sous-unites r2 murine et bacterienne, nous avons montre que no provoque la disparition reversible du radical tyrosinyle de la sous-unite r2 murine par un mecanisme consistant en une nitrosation reversible du residu tyrosine critique pour l'activite. Nous avons egalement montre que no accelere le relargage du fer, majoritairement sous forme ferrique, du centre metallique de la sous-unite r2 de souris, alors qu'il est sans effet sur celui de la bacterie

De nombreuses réactions enzymatiques sont à l’origine de processus physiologiques au sein des organismes vivants. Ces réactions sont basées sur des transferts de protons et d’électrons et con-duisent souvent à la production d’espèces secondaires. Parmi elles, les espèces réactives de l’oxygène et de l’azote (ROS, RNS) présentent un intérêt particulier puisqu’elles jouent un double rôle : d’une part en permettant à l’organisme de réagir à un stress par l’activation de voie de signalisation redox, et d’autre part ces ROS et RNS peuvent causer des dommages tissulaires et être à l’origine de dys-fonctionnement (stress oxydant) au sein de l’organisme. La haute réactivité de ces espèces induit leurs faibles durées de vie (ns-min) et rend l’étude de certaines réactions enzymatiques difficiles en solu-tion. Ce projet de thèse a pour objectif de développer un microréacteur biomimétique pour l’étude d’activités enzymatiques produisant des ROS/RNS. En effet, en confinant une réaction au sein d’un compartiment de taille équivalente à celle d’une cellule (20-100 μm de diamètre), les espèces générées (H2O2, NO•, NO2-) doivent pouvoir être sondées in situ avec une résolution cinétique et quantitative. Des vésicules unilamellaires géantes sont formées en conditions physiologiques et servent de micro-réacteurs pour l’analyse des activités enzymatiques de la glucose oxydase et des NO-synthases. La microscopie de fluorescence permet l’observation des vésicules et le suivi du déclenchement de la réaction assuré par microinjection. Les espèces produites sont ensuite détectées en temps réel par électrochimie afin de déchiffrer à terme les différentes voies enzymatiques des NO-Synthases
Enzymatic reactions are involved in many physiological phenomena in living organisms. These reactions are based on protons and electrons transfers and can lead to the production of by-products. Among them, reactive oxygen and nitrogen species (ROS and RNS) are of great interest as they play a double role: on the one hand by allowing the organism to react to a stress by the activation of signaling redox pathways, and on the other hand, ROS and RNS can cause oxidative damages to tissues ensuing dysfunctions in the organism. The high reactivity of such species induce their short lifetimes (ns-min) and leads to uncertainties when it comes to the study of some enzymatic reactions in bulk. This PhD project aims to develop a biomimetic microreactor for the study of enzymatic ac-tivities producing ROS/RNS. Indeed, by confining a reaction within a cell-sized compartment (20-100 μm diameter), the generated species (H2O2, NO•, NO2-) could be analyzed in situ with a quantita-tive and kinetic resolution. Giant unilamellar vesicles are formed in physiological conditions and are used as microreactors for the monitoring of enzymatic activities of glucose oxidase and NO-synthases. Fluorescence microscopy allows individual vesicle observation and the monitoring of reactions trig-gered by microinjection. Then, released species are detected in real-time by electrochemistry in order to decipher the diverse enzymatic pathways of NO-Synthases

Le monoxyde d’azote (NO), dont le rôle biologique a été découvert à la fin du 20ème siècle, est impliqué dans la régulation de nombreux processus à l’échelle de la cellule et de l’organisme. Sa biosynthèse est réalisée par les enzymes NO synthases (NOS), et met en jeu la liaison de NADPH à leur domaine réductase suivie d’une série de transfert d’électrons vers leur domaine oxygénase, où la formation de NO se produit par oxydation de la L-arginine. En s’inspirant de mimes photo-activables de NADPH précédemment décrits dans la littérature, appelés nano-déclencheurs (NT, de l’anglais nanotriggers), induisant la production de NO par illumination, nous avons conçu et synthétisé de nouvelles générations de composés potentiellement capables d’initier l’activité catalytique de NOS sous irradiation. Ils comportent une unité de reconnaissance de NOS dérivée de l’adénosine et une unité chromophorique de type diaminophényl butadiène, liées entre elles par un groupement triazole. Ces structures modulables, facilement assemblées par chimie « click » ont permis la préparation d’une librairie de nano-déclencheurs, dont les propriétés photophysiques et la stabilité dans des conditions physiologiques ont été évaluées. Ces nouvelles générations de composés offrent des perspectives intéressantes pour le contrôle de processus biologiques par la lumière
Nitric oxide (NO), whose biological role has been discovered in the late 20th century, is involved in the regulation of many processes in cell and organism. Its biosynthesis is carried out by enzymes named nitric oxide synthases (NOS) and involves NADPH binding to their reductase domain followed by a series of electron transfers to their oxygenase domain, where the formation of NO takes place by oxidation of L-arginine. Inspired by photoactivatable NADPH mimics called nano-triggers (NT), previously described in the literature, able to produce NO upon illumination, we designed and synthesized new generations of compounds potentially capable of initiating the catalytic activity of NOS under irradiation. They contain a recognition unit for NOS derived from adenosine and a diaminophenyl butadiene chromophoric moiety, linked together by a triazole group. These modular structures, easily assembled by "click" chemistry allowed the preparation of a library of nano-triggers, whose photophysical properties and stability under physiological conditions were evaluated. These new generations of compounds offer interesting perspectives for the control of biological processes by light

Les inhibiteurs de l' enzyme de conversion de l' angiotensine I (ECA) peuvent améliorer la fonction endothéliale dans le diabète expérimental de type I et la sensibilité à l' insuline dans les états associés à une résistance à l' insuline. Ces effets résulteraient en partie de la protection de la bradykinine (BK) endogène. In vivo, l' ECA est la principale enzyme impliquée dans la dégradation de la BK pour des concentrations physiologiques du peptide. Cependant, lorsque l' ECA est inhibée, l' endopeptidase neutre 24-11 (NEP) participe également au métabolisme du peptide. Ainsi, en assurant une meilleure protection de la BK endogène , l' inhibition conjointe de ces deux enzymes pourrait corriger plus efficacement la dysfonction endothéliale et la résistance à l' insuline obs ervées dans différentes formes de diabète. Le rat rendu hyperglycémique par injection de streptozotocine, modèle de diabète de type I, présente une vasoconstriction importante du territoire vasculaire fémoral due à une altération de la fonction endothéliale [. . . ]
Angiotensin-converting enzyme (ACE) inhibitors may improve endothelial dysfunction in insulin-dependant diabetes mellitus [. . . ]

Depuis sa découverte, le monoxyde d'azote n'a pas cessé d'intéresser la communauté scientifique. Sa biosynthèse est catalysée par les NO Synthases, qui est une famille de trois isoenzymes. La NOS neuronale et la NOS endothéliale sont constitutives et produisent du NO impliqué dans la neurotransmission et la vasodilatation respectivement. La NOS inductible quant à elle produit du NO impliqué dans la réponse immunitaire innée. Une surproduction de monoxyde d'azote est impliqué dans de nombreuses pathologies comme les maladies neuro-dégénératives ou les maladies chroniques à composantes inflammatoires. L'inhibition de iNOS et nNOS présente donc un grand intérêt thérapeutique. Cependant l'enjeu est de développer des inhibiteurs hautement sélectifs, afin de préserver les fonctions vitales de eNOS.Nous avons choisi de synthétiser des composés constitués d'un analogue de substrat tel que thiocitrulline et S-alkyl-isothiocitrulline auquel est ajouté, par un lien peptidique ou hétérocyclique, un résidu susceptible de se lier dans le canal d'accès du substrat, région moins conservée du site actif pouvant fournir des interactions spécifiques. La synthèse de ces composés a été réalisée sur support solide selon une méthode d'ancrage par la chaîne latérale développée au laboratoire, ou pour certains composés, selon une méthode classique d'ancrage par l'amine alpha, ces deux méthodes offrant un fort potentiel en chimie combinatoire. Les différents composés synthétisés ont été testés sur les trois isoformes recombinantes.Un second travail est brièvement exposé dans ce manuscrit. La synthèse de cyclopeptides basés sur le motif RGD impliqué dans la liaison aux intégrines a été réalisée selon un mode de cyclisation développé au laboratoire faisant intervenir la formation d'un pont guanidine qui sera ensuite diversement substitué. L'étude RMN et l'évaluation de leur activité biologique sur les récepteur opioïdes semble montrer un influence de la substitution du pont sur leur conformation et leur activité
Since its discovery, Since its discovery, the nitric oxide did not stop interesting the scientific community. Its biosynthesis is catalyzed by NO synthases, a family of three isoenzymes. Neuronal NOS and endothelial NOS are constitutive and produce NO involved in neurotransmission and vasodilation process respectively. Inducible NOS produces NO involved in the innate immune response. An overproduction of nitric oxide is involved in many diseases such as neurodegenerative diseases or chronic diseases with inflammatory components. Thus, its inhibition should be of high therapeutical interest. However, it is necessary to develop highly selective inhibitors to preserve the vital functions of eNOS.We chose to synthesize compounds constituted of one substrate analogue as thiocitrulline or S-alkyl-isothiocitrulline which linked by a peptide bond or heterocycles to a residue able to bind into the substrate access channel, a less conserved region into the active site were specific interactions could be established. The synthesis of these compounds was performed on solid support according to an anchoring method through the side chain developed at the laboratory or, for some compounds, according to a conventional anchoring method through the alpha amine. These approaches are particulary interesting for a combinatory chemistry approach. All compounds were tested on the three recombinant isoforms.A second work is outlined in this manuscript. It consist of synthesizing cyclopeptides based on RGD motif involved in the binding to integrins and enkephalins analogues. The cyclisation method was developed in the lab and involves the formation of a guanidine bridge diversely substituted. NMR studies and biological evaluations on opioid receptor suggests that the diverse bridge substitutions could modulate the conformation and activity of the peptides

L’oxyde nitrique (NO) est un messager gazeux jouant de nombreux rôles physiologiques, en particulier au niveau du système cardiovasculaire. Sa biodisponibilité est limitée par sa demi-vie très courte et sa combinaison avec les thiols le stabilise et en assure le stockage et le transport. La diminution de la production endogène de NO observée dans les maladies cardiovasculaires place les médicaments donneurs de NO au centre de nouvelles stratégies thérapeutiques. Cette étude a été dédiée au développement de nouveaux matériaux réservoirs de NO. Tout d’abord, la serumalbumine (SA) a été nitrosée selon trois processus afin d’obtenir un composé mono-S-nitrosé biocompatible. Ensuite, en vue d’obtenir un réservoir à forte capacité de charge en NO, des nanoparticules d’or recouvertes par l’acide dihydrolipoïque, AuNP@DHLA ont été greffées par un nombre élevé de molécules de glutathion réduit (GSH). Il en résulte un fort pouvoir anti-oxydant des nanoparticules synthétisées (AuNP@DHLA-(GSH)n) qui devrait éviter de perturber l’état redox in vivo. De plus, ce nano-objet s’avère poly-S-nitrosable, en s’appuyant sur l’expérience acquise avec la macromolécule SA-SNO. Enfin, des nanoparticules stabilisées par les ions citrate (AuNP-citrate) très instables en condition physiologique ont été incorporées à des films multicouches de polyélectrolytes, obtenus par assemblage couche-par-couche. Il en résulte une stabilisation des AuNP et le film les contenant présente une excellente cyto/hémocompatibilité. Ces travaux ouvrent la voie à l’incorporation des nanoparticules AuNP@DHLA-(GSH)n dans un film multicouches, à leur nitrosation et au dépôt du matériau final en tant que réservoir de NO sur des dispositifs médicaux pour le traitement de maladies cardiovasculaires
Nitric oxide (NO) is a gaseous messenger playing numerous physiological roles, especially in the cardiovascular system. However, its bioavailability is limited due to a short half-life. The combination to thiols increases its stability and facilitates its storage and transport. Thus NO donor drugs represent a promising therapeutic approach in such diseases. The present study aimed at developing NO reservoirs. Firstly, serum albumin (SA) was S-nitrosated through three chemical pathways to prepare SA-SNO. Then, potential NO reservoirs with high loading capacity were developed by anchoring reduced glutathione (GSH) to dihydrolipoic acid capped gold nanoparticles, AuNP@DHLA. The obtained AuNP@DHLA-(GSH)n showed stronger antioxidant power and they will be able not to disturb the cell homeostasis. Its further poly-S-nitrosation will benefit from the S-nitrosation of SA as both macromolecular possess free thiols. In parallel, citrate ions stabilized AuNP were entrapped in multilayer polyelectrolyte films using layer-by-layer (LbL) assemblies, providing proof-of-concept of multilayer films as a useful tool to protect AuNP from degradation and increase the cyto/hemocompatibility toward biological elements. The present work opens the window to S-nitrosate AuNP@DHLA-(GSH)n either as a colloidal solution or immobilized in the multilayer system, which is expected to be applied into developing of NO eluting stent for the treatment of cardiovascular diseases

Le système kallicréine-kinines est un système peptidergique complexe impliqué dans les processus inflammatoires, le contrôle du tonus et de la perméabilité vasculaire. Les effets biologiques des kinines sont accomplis par l’intermédiaire de deux types de récepteurs couplés aux protéines G, soit le récepteur B1 (B1R) et le récepteur B2 (B2R). Alors que le B2R est un récepteur constitutif, le B1R est faiblement exprimé en situation physiologique; il est induit par le stress oxydatif, les cytokines pro-inflammatoires (interleukine-1β (IL-1β) et le facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α)) ou par des endotoxines bactériennes à la fois au niveau systémique et local, notamment dans la rétine. Des études récentes de notre laboratoire ont montré l’implication du B1R dans la pathogenèse et la progression de la rétinopathie diabétique et de la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA). Les objectifs des travaux présentés dans cette thèse consistent à déterminer : 1) le mécanisme par lequel le B1R est impliqué dans la rétinopathie diabétique chez le rat; 2) l’implication de la iNOS en aval dans la cascade inflammatoire activée par le B1R; 3) l’expression et la localisation cellulaire du B1R dans les rétines humaines atteintes de DMLA exsudative et atrophique. Nos résultats ont permis de démontrer une implication du B1R dans la rétinopathie diabétique via l’activation de l’enzyme de synthèse du monoxyde d’azote inductible (iNOS) dans un modèle de diabète de type 1 induit par la streptozotocine (STZ) chez le rat. En plus de sa localisation généralisée dans toute la rétine, le B1R est exprimé dans la couche de l’épithélium pigmentaire qui forme la barrière hémato-rétinienne externe. Les taux d’expression (protéique et ARNm) du B1R, de la iNOS, de la carboxypeptidase M (impliquée dans la biosynthèse des agonistes B1R), de l'IL-1β, du TNF-α, du facteur de croissance de l'endothélium vasculaire A (VEGF-A) et de son récepteur, le VEGF-R2, ainsi que des protéines nitrosylées augmentent à deux semaines dans la rétine diabétique. Ces augmentations ainsi que l’hyperperméabilité vasculaire rétinienne induite par le diabète et par l’injection intravitréenne d’un agoniste du B1R (R-838) sont bloquées par un inhibiteur de la iNOS (1400W) appliqué topiquement à la surface de l’œil pendant 1 semaine (premier article). Les résultats du deuxième article montrent une augmentation significative de l'immunoréactivité du B1R dans les rétines humaines prélevées de patients atteints de DMLA exsudative. Toutefois, les changements d’immunoexpression du B1R ne sont pas significatifs dans les rétines des patients atteints de DMLA atrophique. La réactivité des cellules gliales est plus marquée dans la forme exsudative que dans la forme atrophique de DMLA. Une colocalisation du B1R est observée avec des marqueurs des cellules de Müller, des astrocytes, de la microglie, de la iNOS et de la fibrose, suggérant une implication du B1R dans le processus inflammatoire et la formation de fibrose dans la DMLA exsudative. En revanche, l’expression du B2R demeure stable dans les rétines de DMLA exsudative et atrophique par rapport aux rétines témoins; ce résultat ne supporte pas la possibilité que ce récepteur puisse être impliqué dans la DMLA chez l’humain.
The kallikrein-kinins system is a peptidergic system involved in inflammatory processes, the control of the vascular tone and permeability. These effects are mediated by two G proteincoupled receptors, the Bradykinin type 1 (B1R) and type 2 (B2R) receptors. While the B2R is a constitutive receptor, B1R is almost undetectable in physiological condition; it is, however, induced by oxidative stress, pro-inflammatory cytokines (interleukin-1β (IL-1β) and tumor necrosis factor-α (TNF-α)) or by bacterial endotoxins at both systemic and local levels, notably in the retina. Recent studies from our laboratory supported an implication of B1R in the pathogenesis and progression of diabetic retinopathy and age-related macular degeneration (AMD). This thesis aims at unraveling: 1) the mechanism by which B1R is involved in diabetic retinopathy in rats; 2) the involvement of iNOS in the inflammatory cascade downstream to the B1R; and, 3) the expression and cellular localization of B1R in human retinae with exudative and atrophic AMD. Our results have shown the implication of B1R in diabetic retinopathy via the activation of the inducible nitric oxide synthase (iNOS) in a type 1 model of diabetes induced by streptozotocin (STZ) in rats. In addition to its generalized localization throughout the retina, B1R is expressed in the retinal pigment epithelium which forms the outer blood-retinal barrier. The protein and transcript expression of inflammatory markers; iNOS, carboxypeptidase M, IL-1β, TNF-α, vascular endothelium growth factor A (VEGF-A) and its receptor, VEGF-R2, including B1R as well as nitrosylated proteins are increased in the retina of diabetic rats at 2 weeks post-STZ. These upregulations, as well as the retinal vascular hyperpermeability induced by diabetes and by the intravitreal injection of an B1R agonist (R-838) are blocked by a topical one-week treatment by eye-drop with the selective iNOS inhibitor (1400W) (first manuscript). The results of the second manuscript show significant increases in the immunoreactivity of B1R in exudative AMD retinae. Despite a slight increase, B1R immunostaining does not reach statistical significance in the retina of donors with atrophic AMD. The reactivity of glial cells is more impressive in the exudative than in the atrophic form of AMD. B1R is co-expressed with markers of Müller cells, astrocytes, microglia, iNOS and fibrosis, suggesting an involvement of B1R in the inflammatory events and the formation of fibrosis in exudative AMD. On the other hand, the expression of B2R remains stable in the retinae of exudative and atrophic AMD, supporting a secondary role of this receptor in AMD in humans.