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Dissertations / Theses on the topic 'Érythropoïèse'
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Bonafoux, Béatrice. "Le transcriptome du réticulocyte : marqueurs moléculaires de la lignée érythroïde, intérêt en biologie humaine." Montpellier 1, 2005. http://www.theses.fr/2005MON1T028.
Full textAbstract:
Nous avons établi le profil d'expression des gènes de réticulocytes humains purifiés dans le but d'étudier les mécanismes moléculaires impliqués dans l'érythropoïèse, la différenciation et les pathologies érythrocytaires. Pour cela, les réticulocytes circulants de dix adultes sains ont été purifiés et étudiés par la technique SADE (SAGE Analysis of Downsized Extracts). L'analyse des résultats a révélé que 64% des signatures de gènes (tags) correspondent à des gènes connus et principalement à celui de la bêta globine (HBB). Parmi les tags, 9% correspondent à des ESTs et 27% à des gènes inconnus. Nous avons également démontré la présence d'ARNm dont la séquence correspond à la séquence inversée un transcrit HBB. Il s'agit de la première description d'un transcrit antisens du gène HBB dont la signification reste à établir. Les gènes identifiés dans cette banque SAGE correspondent à des gènes spécifiques de la lignée érythroïde, à des gènes "de ménage" mais également à des gènes non encore décrits dans cette cellule. Ce profil d'expression a mis en évidence des marqueurs régulés au cours de la différenciation érythroïde, que nous avons étudié sur un modèle de lignée cellulaire érythroïde et sur un modèle de réticulocytes de nouveau-nés. L'analyse de ce transcriptome ouvre des perspectives pour l'étude des pathologies de la lignée érythroïde (rôle des marqueurs régulés) et pour l'étude de la régulation de la transcription du gène HBB (rôle de l'ARN antisens).
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Niloofar, Reihani. "Nouveaux rôles des progéniteurs érythoïdes et du globule rouge dans la physiopathologie de la maladie de Gaucher." Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC110.
Full textAbstract:
La maladie de Gaucher (MG) est une maladie génétique rare due à un déficit de l'enzyme Glucocérébrosidase qui entraine une altération du métabolisme des glucosphingolipides et leur accumulation dans les monocytes/macrophages. Les atteintes viscérales, osseuses et hématologiques sont les symptômes principaux de la MG. L'étude des paramètres hématologiques des patients anémiés montre qu'ils présentent i) un nombre de réticulocyte circulant non-adapté au degré de l'anémie, ii) une concentration élevée de l'Erythropoïétine et du Growth differentiation factor-15, iii) mais ne présentent aucun indice plasmatique lié à une hémolyse. Ces données suggèrent une origine centrale de l'anémie dans la MG. Les expériences d'érythropoïèse in vitro réalisées à partir de CD34+ issus de patients atteints de la MG ont révélé une accélération de la différenciation érythroïde comparé aux contrôles. Cette dysérythropoïèse est observée en présence, mais aussi en l'absence des macrophages, suggérant une anomalie intrinsèque aux progéniteurs érythroïdes Gaucher. Les précédents travaux du laboratoire ont montré que les globules rouges (GR) des patients atteints de la MG possèdent des propriétés anormales. L'étude de l'effet du traitement par enzymothérapie de substitution (ERT) sur ces propriétés a montré que l'ERT normalise les anomalies morphologiques et celles liées à la déformabilité des GR. En revanche l'ERT n'a pas d'effet sur l'adhérence et l'agrégation des GR. Ces propriétés étant essentielles à la circulation normale des GR, nos résultats suggèrent une implication des GR dans les phénomènes de vaso-occlusion et d'infarctus osseux dans la MG qui persistent parfois malgré l'ERTGaucher disease (GD) is an inherited rare disease caused by P-Glucocerebrosidase deficiency, leading to glycosphingolipid accumulation in cells of the mononuclear-macrophage lineage. Visceral enlargement, bone involvement, thrombocytopenia and mild anemia are the major manifestations of GD. We investigated the hematological characteristics of GD patients. We did not find any index related to hemolysis but some features of anemia with a central origin were evidenced. Lndeed, anemic patients exhibit low reticulocyte counts than expected, despite elevated erythropoietin, Growth differentiation factor-15 and soluble Transferrine receptor's levels (markers of ineffective erythropoiesis) in plasma. In vitro erythropoiesis experiences from peripheral CD34+ cells revealed an accelerated differentiation of erythroid progenitors in GD patients when experiments were performed with, but even without macrophages (MP), suggesting an inherent defect in erythroid progenitors. Our previous studies demonstrated red blond cells (RBC) abnormalities in GD. We studied the effects of enzyme replacement therapy (ERT) on RBC abnormalities. We showed that ERT normalized morphological and deformability defects of GD RBC but not their adherence and aggregation properties. These results suggested a role of RBCs in vaso-occlusion crises and bone infarcts in GD and could explain the persistence of these symptoms in some treated patients. These experiments demonstrate an anemia with central defect and the dyserythropoiesis independently of MP defects in GD. They confirm RBC abnormalities, in part normalized by the ERT and highlight the role of the erythroid compartment in the physiopathology of GD
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Claessens, Yann-Erick. "Etude de la dysérythropoièse au cours des syndromes myélodysplasiques de bas grade." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05P632.
Full textAbstract:
L'anémie est une anomalie communément rencontrée dans les syndromes myélodysplasiques (SMD) de bas grade. Les mécanismes qui en sont responsables restent à ce jour non résolus. Nous décrivons un modèle en culture liquide permettant le développement in vitro de la lignée érythroi͏̈de à partir de cellules CD34+ issues de patients porteurs de SMD de bas grade. Nous retrouvons une augmentation de l'apoptose et une diminution des capacités d'expansion dans les cultures de SMD. Le couple Fas-Fas ligand est responsable du défaut de développement de la lignée érythroi͏̈de dans notre modèle. Nous modulons ce système par l'utilisation d'un dominant négatif de l'adaptateur FADD permettant l'inhibition de la caspase-8, permettant d'envisager une nouvelle cible thérapeutique. La signification de la surexpression du système Fas reste néanmoins inconnue à ce jourAnemia is a common feature in low grade myelodysplastic syndromes (MDS). However mechanisms responsible for this are unresolved. We describe a model of liquid cultures allowing the in vitro development of the erythroid lineage from CD34+ cells from MDS and control patients. We found an increased apoptosis and a decrease in expansion properties in MDS cultures. The Fas-Fas ligand system was responsible for the impairment of the erythroid development. We modulate this apoptotic signalling via inhibition of caspase-8 using a dominant negative of the adapter FADD, thus openening new therapeutic pathways. Significance of the enhanced apoptotic pathway mediated by Fas remains unresolved so far
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Le, Gall-Ianotto Christelle. "Régulation neuro-endocrine de l'hématopoïèse : rôle de la Substance P et de son dérivé, la Substance P(1-4), dans la régulation négative de l'érythropoïèse dans la polyglobulie de Vaquez." Brest, 2007. http://www.theses.fr/2007BRES3203.
Full textAbstract:
Il existe une communication bidirectionnelle entre les systèmes nerveux et hématopoïétique, médiée par des mécanismes complexes impliquant la libération de facteurs solubles et la présence de récepteurs spécifiques. La substance P (SP), tachykinine de li acides aminés, est un exemple type de neuropeptide synthétisé et libéré dans la moelle osseuse, capable d’agir sur l’hématopoïèse. Des métabolites comme la SP(l-4), issus de la dégradation de la SP par des peptidases présentes dans la moelle, sont également présents et actifs. Le but de ce travail a été de déterminer l’action de la SP et de la SP(l-4) dans un contexte d’érythropoïèse pathologique comme celle caractérisant la polyglobulie de Vaquez (PV). La PV est un syndrome myéloprolifératif chronique, secondaire à l’expansion clonale de cellules souches, qui peut être mise e évidence in vitro par une pousse spontanée, c’est-à-dire sans addition de facteurs de croissance, des progéniteurs érythroblastiques issus de moelle ou de sang. Les résultats montrent que ces deux molécules sont capables d’inhiber efficacement et à des concentrations physiologiques, la pousse spontanée, en agissant directement sur les progéniteurs érythroïdes par une voie dépendante d’un récepteur de type NK-1R pour la SP, et l’implication d’un autre récepteur couplé à des protéines G (RCPG) pour la SP(l-4). L’expression majoritaire de la forme tronquée du NK-lR sur les progéniteurs érythroïdes de PV suggère le rôle préférentiel de ce récepteur dans l’action de la SP. Ces différences de voies membranaires entre les deux molécules sont sans doute à l’origine de l’action différentielle sur la PKCɛ et sur les mouvements calciques intracellulaires. Pour la SP comme pour la SP( l-4), cette inhibition se traduit par une diminution de la différenciation érythroïde terminale et une augmentation de la mort cellulaire. L’implication du monoxyde d’azote ou NO (« nitric oxide ») dans la transduction du signal inhibiteur de la SP et de la SPU -4) constitue une étape importante dans l’analyse des mécanismes intracellulaires impliqués dans ces deux processus. L’adhésion cellulaire est un processus physiologique indispensable à la survie et à la prolifération des cellules in vitro et in vivo. Nous montrons que l’inhibition exercée par la SP et la SP(l-4) sur les cellules de PV, n’est pas la conséquence d’une rupture de cette adhésion. Outre, cette action in vitro, la SP est présente en quantité plus importante dans le sérum de patients atteints de PV, et n’ est pas corrélée avec la présence de fibrose. Nous pensons que ces données reflètent un mécanisme mis en place par l’organisme pour maintenir l’homéostasie chez ces patients. Ce travail s’inscrit dans l’optique d’identifier les molécules capables d’inhiber la pousse spontanée des progéniteurs érythroïdes de PV et de comprendre les mécanismes impliqués dans cet effet inhibiteur ainsi que ceux impliqués dans la pousse spontanée en généralThe hematopoietic and nervous systems communicate bidirectionally through the release of soluble factors and specific receptors. Substance P (SP), an undecapeptide belonging to the tachykinin family, is an example 0f a neurotransmitter that could be synthetized and released in the bone marrow (BM). SP could act as a hematopoietic modulator and can be further digested by peptidases ubiquitously expressed in BM. SP fragments as SP(1 -4) could exert hematopoietic regulation too. The aim of this study was to determine effect of SP and its derivate, SP( 1-4), on pathologie erythropoiesis. Polycythemia vera (PV) is a chronic myeloproliferative disorder characterized by the abnormal proliferation of multipotent hematopoietic progenitor. Endogenous erythroid colonies (EEC) formation is the biological hallmark of the PV. Resuits obtained show that SP and SP(1-4), at physiological concentration, are potent inhibitors of EEC formation by direct action on erythroid progenitors. SP-induced inhibition is mediated by a NK-1R-type dependent mechanism and another G coupled-protein receptor (GPCR) for SP( 1-4) effect. High expression of the truncated form of NK-1 R on PV erythroid progenitor suggests preferential implication in the SP effect, Difference in membranar signaling pathway for SP and SP(l-4) could explain the differential implication of PKCɛ and intracellular calcium rise, However, for both molecules, inhibitory effect is characterized by inhibition of terminal erythroid differentiation and increase cell death. Nitric oxide (NO) implication in signal transduction constitutes an important information to explain these mechanisms. Furthermore, inhibitory effect of SP and SP(1-4) is independent of action on adhesion molecules and rupture of cell adhesion of PV progenitors. In addition to its role in vitro, high concentrations of SP were detected in PV patients sera and was not correlated with fibrosis. We propose that this phenomenon reflect a mechanism induces by the organism to maintain homeostasis in PV patients. This work participates to the identification of new molecules able to inhibit spontaneous growth of PV erythroid progenitor and in the understanding of mechanisms implicated in the EEC formation and inhibition of this phenomenon
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Rio, Bénédicte. "Intérêt des cultures de progéniteurs érythroblastiques en hématotoxicologie in vitro : application à l'étude de contaminants alimentaires et environnementaux." Brest, 1997. http://www.theses.fr/1997BRES2041.
Full textAbstract:
L’évaluation in vitro de la toxicité de xénobiotiques sur l'érythropoïèse est souvent restreinte à l'étude des effets sur la prolifération des progéniteurs érythroblastiques, sans envisager les effets sur la différenciation, et la synthèse de l'hémoglobine, faute de méthodologie. Les objectifs de ce travail étaient de mettre au point des méthodes d'étude in vitro de la toxicité de xénobiotiques sur la prolifération et la différenciation des BFU-E/CFU-E, puis d'envisager leur application, en toxicologie alimentaire et environnementale, à l'étude des effets de molécules aussi différentes que des métaux lourds, des pesticides et des mycotoxines. L’étude réalisée sur les effets du plomb sur le développement des progéniteurs érythropoïétiques humains, a permis de valider les techniques mises au point, et d'apporter de nouveaux éléments concernant les effets toxiques du plomb sur l'erythropoïèse. Les résultats obtenus montrent que le plomb organique, est capable d'inhiber, la synthèse de l'hémoglobine in vitro. L’évaluation des effets de pesticides, sur le développement des progéniteurs érythropoïétiques in vitro, a permis de montrer que deux molécules, appartenant a la même famille d'herbicides, les diphenyl-ethers, agissant selon le même mode d'action, par inhibition de la synthèse des porphyrines chez les végétaux, n'ont pas le même effet chez l'homme. Contrairement a l'acifluorfène, l'oxyfluorfène est capable de bloquer la synthèse de l'hème par les progéniteurs érythropoïétiques, pour une concentration égale a 10-4 m. Ce travail a également permis de montrer que des molécules connues pour être hématotoxiques (le lindane), ou connues pour inhiber la synthèse des porphyrines constitutives des cytochromes (le diazinon), n'interfèrent pas obligatoirement avec le développement des progéniteurs erythropoietiques humains, et la synthèse des porphyrines, chez l'homme. L’étude menée sur les effets de mycotoxines montrent que, les progéniteurs erythropoietiques, comme les progéniteurs granulo-monocytaires, sont des cibles des trichothécènes, toxines responsables de troubles hématologiques, mais ne sont pas sensibles aux effets de la fumonisine B1. Les applications réalisées dans le cadre de l'évaluation de la toxicité de xénobiotiques sur l'érythropoïèse in vitro, permettent de valider les méthodes mises au point et de justifier de leur utilisation en toxicologie alimentaire et environnementale.
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Hafid-Medheb, Khalid. "Rôle de la protéine anti-apoptotique Bcl-Xl dans la différenciation érythroi͏̈de terminale des cellules de Friend." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/2001PA05S025.
Full textAbstract:
Les cellules érythroleucémiques de Friend sont un bon modèle de différenciation érythroi͏̈de inductible pour étudier l'expression des gènes au cours de la différenciation érythroi͏̈de. En effet ces cellules sont des précurseurs érythroi͏̈des bloqués à un stade précoce de la différenciation érythroi͏̈de capables de se différencier sous l'action d'inducteurs chimiques tels que le DMSO. Les cellules traitées par le DMSO subissent des changements phénotypiques qui ressemblent à ceux observés dans l'érythropoi͏̈èse normale. Ces cellules induites sont engagées irréversiblement vers la différenciation érythroi͏̈de terminale, conduisant à la formation de cellules spécialisées dans la production d'hémoglobine ayant perdu leur potentiel prolifératif. .Friend murine erythroleukaemia cells are a useful model for studying gene expression during erythroid differentiation. These cells are erythroid precursors blocked at a relatively early stage in erythroid differentition and are able to differentiate by exposure to chemical inducers such as DMSO. DMSO-treated cells undergo phenotypic changes that resemble the final stages of normal erythropoiesis. Induced cells commit towards terminal erythroid differentiation, leading to the formation of cells which synthesize haemoglobin with a loss of proliferative capacity. .
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Laurent, Benoît. "Fonctions et modes d'action du facteur de transcription Gfi-1B au cours de l'érythropoïese normale et pathologique." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T029.
Full textAbstract:
L'érythropoïèse, processus de formation des érythrocytes à partir de cellules souches hématopoïétiques, requiert l'activation d'un programme transcriptionnel spécifique. Le facteur de transcription répresseur Gfi-1B est essentiel au bon déroulement de l'érythropoïèse puisque les souris invalidées pour ce gène meurent in utero par absence totale d'hématies. L'objectif de mes recherches doctorales était de caractériser les fonctions et les modes d'action du facteur de transcription Gfi-1B au cours de l'érythropoïèse adulte. Mes résultats montrent : l/ que l'expression de Gfi-1B augmente dans les stades initiaux et reste élevée jusqu'aux stades terminaux de la différenciation érythroïde adulte humaine. La diminution du recrutement des co-répresseurs de Gfi-1B au niveau de son propre promoteur permet le maintien de son activité transcriptionnelle au cours de la différenciation érythroïde. Il que la protéine HMGB2 est indispensable à l'érythropoïèse en contrôlant le niveau d'expression de Gfi-1B. 3/ que Gfi-lB est indispensable à l'érythropoïèse au niveau des progéniteurs bipotents érythro-mégacaryocytaires en régulant la signalisation TGF-(3 via le contrôle de l'expression du récepteur de type III du TGF-P, un gène cible de Gfi-1B. 4/ que la répression transcriptionnelle par le complexe LSDl/CoREST/HDAC nécessite la méthylation d une isoforme de Gfî-lB. De manière intéressante, une diminution d'expression de Gfi-1B et de son isoforme ont été mis en évidence chez la plupart des patients myelodysplasiquesErythropoiesis, process of erythrocytes production from hematopoietic stem cells, involves the activation of a specific transcriptional program. The transcriptional represser Gfi-1B is essential for erythropoiesis as mice knocked-out for this gene die in utero because of an absence of red cells. The aim of my doctoral researches was to study and characterize functions and actions of the transcription factor Gfi-1B during adult erythropoiesis. My results have shown: II that Gfi-1B expression increases strongly during erythroid differentiation and stays high till terminal stages. Decrease of Gfi-1B co-repressor recruitment on its own promoter allows its transcriptional activity throughout erythroid differentiation. 2/ that HMGB2 protein is necessary for erythropoiesis by controlling Gfi-1B expression 3/ that Gfi-1B is necessary at the bipotent erythro-megakaryocytic progenitor stage by regulating TGF-P signalling via the control of the expression of TGF-P receptor type III, a Gfi-1B target gene. 4/ that transcriptional repression by the LSDl/CoREST/HDAC complex involves the methylation of a Gfi-1B isoform. Interestingly, a decrease hi the Gfi-1B expression and its isoform was shown in most of the erythroid progenitors from myelodysplasic patients
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Coulon, Séverine. "Rôle des immunoglobulines A1 dans la régulation positive de l'érythropoïèse." Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T105.
Full text
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Montel, Amélie. "Transport du glucose et de la vitamine C dans les érythrocytes : un lien entre GLUT1 et l'évolution." Montpellier 2, 2008. http://www.theses.fr/2008MON20033.
Full textAbstract:
La production des cellules sanguines ou hématopoïèse implique la survie, la prolifération et la différenciation de cellules progénitrices. Les besoins énergétiques associés dépendent nécessairement du métabolisme du glucose, un facteur de régulation crucial pourtant peu étudié. Du fait que les érythrocytes humains expriment les plus hauts niveaux du transporteur de glucose GLUT1, mes travaux de thèse ont consisté à étudier son rôle au niveau de l'érythropoïèse. Ainsi l'expression de GLUT1 augmente au cours de la différenciation mais sans corrélation avec une augmentation de la captation du glucose. En fait, j'ai pu déterminer que contrairement aux cellules nucléées, les érythrocytes humains, favorisent le transport de l'acide déhydroascorbique (DHA), forme oxydée de la vitamine C, via GLUT1. Ceci semble régulé par la stomatine, une protéine de la membrane érythrocytaire qui lie GLUT1. Nous avons établit que seuls les érythrocytes des espèces incapables de synthétiser la vitamine C (primates supérieurs, chauve-souris frugivore et cochon d'Inde) expriment GLUT1. Sachant que le GLUT1 érythrocytaire permet un recyclage de l'acide ascorbique, sa présence constitue un mécanisme de compensation qui aurait co-évolué avec la défi cience en vitamine C. Nous avons de plus montré que GLUT1 érythrocytaire est curieusement présent à la naissance chez tous les autres mammifères testés et qu'il est ensuite rapidement perdu. Utilisant le modèle murin, j'ai déterminé que GLUT4 est exprimé chez l'adulte mais ne permet pas le transport du DHA. De plus, l'érythropoïèse massive liée à une anémie post-natale entraine l'induction accrue de GLUT4 mais pas de GLUT1. Les processus concomitants de répression de GLUT1 et d'induction de GLUT4 à la naissance sont associés à un changement dans la balance entre les facteurs de transcription Sp1 et Sp3. Cette étude ouvre de nouvelles perspectives, notamment au niveau de l'implication des transporteurs de glucose dans les pathologies érythrocytairesThe generation of blood cells, a process termed hematopoiesis, involves cell survival, proliferation and differentiation. The high levels of energy required in this process suggest that glucose metabolism should be an important regulator, but this question has not been extensively studied. Human erythrocytes express the highest level of the GLUT1 glucose transporter, and my PhD research focused on the role of GLUT1 during erythropoiesis. GLUT1 expression increased during differentiation but was not associated with an increased glucose transport. Indeed, I determined that in contrast to nucleated cells, erythrocytes preferentially transport L-dehydroascorbic acid (DHA), an oxidized form of ascorbic acid (AA). I identifi ed stomatin, an integral erythrocyte membrane protein that binds GLUT1, as regulating the switch from glucose to DHA transport. Notably though, we found that erythrocyte GLUT1 and associated DHA uptake are unique traits of humans and the few other mammals (higher primates, guinea pig and fruit bat) unable to synthesize vitamin C. As erythrocyte GLUT1 allows AA recycling, this constitutes an evolutionary strategy compensating for vitamin C defi ciency. Significantly, we found that erythrocytes from all tested mammalian species express high levels of GLUT1 at birth, a trait that is rapidly lost during the neonatal period. Using a murine model, I determined that GLUT4 is expressed during the adult period but does not permit DHA transport. Moreover, in adult mice, anemia induced erythropoiesis resulted in a dramatic induction of GLUT4, but not GLUT1. The concomitant repression of GLUT1 and induction of GLUT4 was associated with a change in the balance of Sp3/Sp1 transcription factors. This study raises new perspectives in erythropoiesis, notably on the implications of glucose transporters in erythrocyte pathologies
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Stuhl-Gourmand, Laetitia. "Role de Naca et de ses partenaires moléculaires dans la différenciation érythroïde normale et pathologique des syndromes myélodysplasiques." Thesis, Aix-Marseille 2, 2010. http://www.theses.fr/2010AIX20661/document.
Full textAbstract:
L’érythropoïèse est un processus complexe qui aboutit à la formation de 100 milliards de globules rouges/jour. Elle est finement régulée pour permettre d’adapter la production de globules rouges aux besoins en oxygène des tissus périphériques. La compréhension des processus complexes mis en jeu lors de la régulation de l’érythropoïèse requière l’étude de nouveaux acteurs moléculaires tel que la protéine NACA (chaîne alpha du complexe associé aux polypeptides naissants), mise en évidence comme un régulateur positif de la différenciation érythroïde humaine. Nous avons identifié ERGIC-53 comme nouvel interacteur de NACA. ERGIC-53 est une lectine mannose spécifique membranaire impliquée dans le transport des glycoprotéines du Réticulum Endoplasmique (RE) vers le compartiment ERGIC (Endoplasmic Reticulum Golgi Intermediate Compartment). Nous avons démontré que ERGIC-53 et NACA participent à la régulation du trafficking de l’EPO-R. NACA est aussi un régulateur négatif de l’apoptose médié par FADD. Nous avons initié l’étude de NACA dans les Syndromes Myélodysplasiques de bas risque (ES-MDS) présentant une déficiente de l’érythropoïèse due à l’apoptose des progéniteurs érythroïdes. Nous avons démontré que la transduction de NACA des progéniteurs CD34+ de ES-MDS restore la différenciation érythroïde et augmente la survie des progéniteurs érythroïdes. De plus, cette étude suggère que la quantification du mRNA NACA pourrait être un nouveau marqueur prédictif de réponse au traitement par rhEPO. En conclusion, notre travail a souligné qu’une simple molécule de la machinerie cellulaire est impliquée dans la différenciation érythroïde normale et des ES-MDSThe erythropoiesis is a complex process that leads to the formation of 100 billion red cells per day. It is finely regulated to adjust the production of red blood cells according to oxygen needs of peripheral tissues. To understand the complex processes involve in the regulation of erythropoiesis, it requires the study of molecular actors such as the NACA protein (the alpha chain of the nascent polypeptide-associated complex), highlighted as a positive regulator of erythroid human differentiation. We have identified ERGIC-53 as a novel interactor of NACA. ERGIC-53 is a lectin mannose-specific membrane involved in the transport of glycoproteins from the Endoplasmic Reticulum (ER) to the ERGIC compartment (Golgi Endoplasmic Reticulum Compartment Intermediate). We have shown that ERGIC-53 and NACA are involved in the regulation of trafficking of EPO-R. NACA may be also a negative regulator of apoptosis mediated by FADD. We investigated the role of NACA in early stages of myelodysplastic syndromes (ES-MDS) which have ineffective erythropoiesis due to apoptosis of erythroid progenitors. We have demonstrated that transduction of NACA in CD34 + progenitor cells from ES-MDS restores erythroid differentiation and increased survival of erythroid progenitors. Moreover, this study suggests that the level of mRNA NACA may be a new predictive marker of response to rhEPO treatment. In conclusion, our work highlighted that a molecule of the cellular machinery is involved in erythroid differentiation of both normal and ES-MDS CD34+ cells
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Orsini, Marion. "Inhibition de l’érythropoïèse par la voie TNFα/sphingomyélinase/céramide : rôle du réseau de régulation microARN/facteurs de transcription et impact sur l’autophagie." Thesis, Université de Lorraine, 2017. http://www.theses.fr/2017LORR0225/document.
Full textAbstract:
L’anémie est un symptôme fréquent chez les patients atteints de cancer. La libération de la cytokine pro-inflammatoire TNFα, un inhibiteur connu de l’érythropoïèse, en est l’une des causes. L’érythropoïèse est un processus nécessitant l’arrêt de la prolifération et l’autophagie. Les résultats précédents ont montré que le TNFα inhibe l’expression des marqueurs érythroïdes et module l’expression de facteurs de transcription (FT) hématopoïétiques. Notre objectif est d’étudier l’implication de la voie TNFα/sphingomyélinase (SMase)/céramide dans l’inhibition de l’érythropoïèse en utilisant des cellules souches hématopoïétiques CD34+ induites à se différencier par l’érythropoïétine recombinante (Epo). Par l’utilisation de céramides exogènes, de SMase bactérienne et d’inhibiteurs de SMases, nous montrons l’implication de la voie SMase/céramide dans l’inhibition de l’expression des marqueurs érythroïdes mais également dans l’induction de la différenciation myéloïde avec une augmentation de l’expression du CD11b. Cet effet sur la différenciation est corrélé à la modulation du réseau FT/miR impliquant GATA-1, GATA-2 et PU.1 et les miR-144, 451, 155, 146a et 223. De plus, l’analyse par microscopie électronique à transmission, l’absence de formation de punctae GFP-LC3 et l’accumulation de SQSTM1/p62 montrent que le TNFα et les céramides inhibent l’autophagie induite par l’Epo. L’analyse des protéines impliquées dans la régulation de l’autophagie montre que le TNFα et les céramides activent mTOR. Son implication est confirmée par l’utilisation de rapamycine et l’inhibition de ULK1 et Atg13. De plus, le TNFα et les céramides inhibent l’expression de bécline 1 et de la formation du complexe Atg5-Atg12. Ces résultats démontrent que la voie TNFα/SMase/céramide joue un rôle dans l’homéostasie hématopoïétique par l’inhibition de l’érythropoïèse au profit de la myélopoïèse, en impactant les réseaux de régulation FT/miR et le processus d’autophagieAnemia is a common symptom in cancer patients. It can be caused by the release of pro-inflammatory cytokines such as TNFα, a known inhibitor of erythropoiesis. Erythropoiesis involves proliferation arrest and autophagy. Our previous studies showed that TNFα inhibits the expression of erythroid markers as well as hematopoietic transcription factors (TF) expression. The aim is to study the involvement of TNFα/sphingomyelinase (SMase)/ceramide pathway in erythropoiesis inhibition using recombinant erythropoietin (Epo)-induced CD34+ hematopoietic stem cells. Using exogenous ceramides, a bacterial SMase and sphingomyelinase inhibitors, we show the involvement of SMase/ceramide pathway in the inhibition of erythroid markers as well as the induction of myeloid differentiation as shown by the increase in CD11b expression. This effect is correlated to the modulation of the TF/miR network involving GATA-1, GATA-2 and PU.1 as well as miR-144, 451, 155, 146a and 223. We show that TNFα and ceramides inhibit Epo-induced autophagy through transmission electron microscopy analysis, the absence of GFP-LC3 punctae formation and SQSTM1/p62 accumulation. Analysis of proteins involved in autophagy regulation showed that TNFα and ceramides activate mTOR, which is confirmed using rapamycin as well as the inhibition of ULK1 and Atg13. Moreover, TNFα and ceramides inhibit Beclin 1 expression and Atg5-Atg12 complex formation. These results demonstrate the role of TNFα/SMase/ceramide pathway in hematopoietic homeostasis through an erythropoiesis-myelopoiesis switch resulting from perturbation of TF/miR network and autophagy
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Doyonnas, Régis. "Etude de deux inhibiteurs de la différenciation érythroïde : ADIF et DIP." Lyon 1, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO10243.
Full textAbstract:
Les cellules erythroleucemiques aviaires lscc-hd3 secretent un facteur autocrine nomme adif (autocrine differentiation-inhibiting factor) responsable du blocage de la differenciation de ces memes cellules. La secretion de ce facteur est induite par l'un des oncogenes (v-erbb) du virus de l'erythroblastose aviaire (aev). Nous avons mis en evidence un deuxieme inhibiteur de la differenciation erythroide, nomme dip (differentiation-inhibiting protein), present dans la circulation sanguine des patients atteints d'erythroblastopenie (aplasie des cellules de la lignee rouge). La presence de cet inhibiteur, en proportion anormale dans le sang des malades, se traduit par un ralentissement de la differenciation erythroide, provoquant ainsi une reduction considerable du nombre d'erythrocytes chez le malade. L'addition de l'un ou de l'autre inhibiteur, dans le milieu de culture des cellules erythroides normales, empeche specifiquement la differenciation des progeniteurs bfu-e humains et murins vers les formes erythrocytaires, sans pour autant affecter la differenciation des cellules souches ou des cellules plus matures telles que les cfu-e. Le phenomene d'arret de la differenciation des cellules erythroides est accompagne a la fois par une reduction severe de l'hemoglobinisation et par une diminution importante du niveau de phosphorylation des proteines. Il est important de souligner que ces inhibiteurs n'ont pas d'effet sur la differenciation des autres progeniteurs hematopoietiques. Notre effort a principalement porte sur la purification de ces deux facteurs proteiques. Nous avons pu, ainsi, obtenir une sequence preliminaire n-terminale de 10 amino-acides d'adif. La nature de la sequence de ce decapeptide permet de suggerer, par son homologie, qu'elle est codee par une fraction de l'un des genes de la n-cam (neural cell-adhesion molecule). Ces resultats ouvrent de nouvelles voies d'etudes sur le role des facteurs qui inhibent specifiquement la differenciation cellulaire dans les leucemies et dans certains types d'aplasies
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Chambard, Pascale. "Étude de l'expression d'un antigène embryonnaire au cours de la différenciation des cellules de la lignée érythrocytaire du poulet : approche cellulaire et moléculaire." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO1T116.
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Dijon, Marilyne. "Rôle d'ikaros dans l'érythropoïèse humaine : surexpression d'un dominant-négatif d'ikaros par une approche lentivirale." Aix-Marseille 2, 2007. http://www.theses.fr/2007AIX20668.
Full textAbstract:
Le gène Ikaros ou Lyf1 code pour le facteur de transcription Ikaros dont les multiples isoformes sont obtenues après épissage alternatif : certaines d’entre elles, comme Ikaros 6, sont dépourvues d’un domaine de liaison à l’ADN fonctionnel et possèdent un rôle de dominant-négatif. L’absence d’Ikaros chez la souris, entraîne des défauts de la lymphopoïèse, la myélopoïèse et l’érythropoïèse, cependant les étapes régulées par ce facteur sont encore largement méconnues. Afin d’approfondir les connaissances du rôle d’Ikaros au cours de l’érythropoïèse, nous avons surexprimé un dominant-négatif d’Ikaros, Ikaros 6, à l’aide d’un vecteur lentiviral. Ces vecteurs, dérivés du virus du HIV-1, permettent d’augmenter l’efficacité du transfert de gènes dans les cellules souches hématopoïétiques (HSC) sans modifier leur propriété de multipotence. Nous avons élaboré un vecteur comportant deux gènes sous le contrôle de deux promoteurs distincts, afin de pouvoir détecter les HSC humaines transduites. Cependant, cette construction n’est pas fonctionnelle dans notre système expérimental. La surexpression du dominant-négatif d’Ikaros, Ikaros 6, à l’aide d’un vecteur lentiviral à une unité transcriptionnelle, entraîne un défaut du nombre de cellules en culture associé à une augmentation de la mort cellulaire. Le blocage de la fonction d’Ikaros influence également l’expression des gènes érythrocytaires ainsi que l’hémoglobinisation. Par cette étude, nous avons donc pu mettre en évidence un rôle important d’Ikaros au cours de l’érythropoïèse humaineHematopoiesis is a complex process which is regulated by expression of many transcription factors, such as Ikaros. This gene encodes several isoformes by alternative splicing : some of them without functional DNA binding act as dominant-negative. Lack of Ikaros induced defects of lymphopoiesis, myelopoiesis and erythropoiesis, however, critical steps regulated by Ikaros are largely unknown. To study further Ikaros involvement in erythropoiesis, we overexpressed a dominant-negative isoform, Ikaros 6, using lentiviral vector. This type of vector, derived from HIV-1, is main tool to tranfer gene into hematopoietic stem cells without alter multipotence properties. We developed a lentiviral vector containing two genes controlled by two different promoters to detect transduced HSC. However, problems of gene expression showed unfunctionally construct in our experimental system. Study of Ikaros in human erythropoiesis will be realised with basal lentiviral vector. Overexpression of dominant-negatif, Ikaros 6, displayed a defect of erythroid cell number and an increase of cell death. Inhibited function of Ikaros also induced a decrease of erythroid gene expression and hemoglobinisation. This work underlined important role of Ikaros in human erythropoiesis by regulating of erythroid gene expression
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Campario, Hugo. "Rôle du facteur de transcription hsf1 dans l’érythropoïèse du poisson zèbre." Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2020. http://www.theses.fr/2020UBFCI004.
Full textAbstract:
Il a été démontré que les protéines de choc thermique (HSP) jouent un rôle important dans l'érythropoïèse. Or, l'expression des gènes HSP est contrôlée par le facteur de choc thermique 1 (HSF1), un facteur de transcription hautement conservé. Jusqu'à présent, une compréhension détaillée de la fonction d’HSF1 dans l'érythropoïèse reste à établir. Dans notre étude, nous avons utilisé le poisson zèbre, modèle animal pertinent, pour étudier le rôle du gène hsf1 pendant l'érythropoïèse embryonnaire. Nous avons établi des lignées de poisson-zèbre invalidées pour le gène hsf1 en utilisant la technologie CRISPR/Cas9 et nous avons effectué des analyses phénotypiques tout au long de l'embryogenèse. Nous avons constaté que les embryons déficients en Hsf1 ont un nombre réduit d'érythrocytes primitifs, alors que le nombre d'érythrocytes chez les poissons zèbres adultes reste inchangé. L'expression des gènes embryonnaires des chaînes a et b-globines est réduite ainsi que l'expression de gata1. De plus, la morphologie des érythrocytes révèle une inhibition de la maturation des érythrocytes. En revanche, aucun changement significatif n'a été observé dans les cellules myéloïdes.Nos résultats montrent que le gène hsf1 est un régulateur positif de la maturation des érythrocytes in vivoHeat shock proteins (HSPs) are reported to play an important role in erythropoiesis. The expression of HSP genes is mainly controlled by Heat shock factor 1 (HSF1), a highly conserved transcription factor. So far, a detailed understanding of the function of HSF1 in erythropoiesis remains uncharacterized. This study has employed zebrafish as a relevant model to investigate the role of Hsf1 during embryonic erythropoiesis. We established hsf1-disrupted zebrafish lines using the CRISPR/Cas9 technology and performed phenotypic analyses throughout embryogenesis. We found that Hsf1 deficient embryos had a decreased number of primitive erythrocytes, while erythrocyte number in adults was unchanged. In Hsf1 deficient embryos, expression of embryonic a and b-globin genes was reduced as well as gata1 expression. In addition, the morphology of erythrocytes suggested an inhibition of erythrocyte maturation. On the other hand, no significant changes were observed in myeloid cells.Altogether our results support a key role for Hsf1 in erythrocyte maturation in vivo
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Pissard, Serge. "Contribution à l'étude de la régulation des gènes de globines : clonage et études de deux régions régulatrices." Paris 12, 1996. http://www.theses.fr/1996PA120076.
Full textAbstract:
La reactivation de l'expression des genes de globines foetale est une voie therapeutique importante dans la recherche de traitements des hemoglobinopathies severes. Nous avons decrit et etudie un nouveau mutant naturel de l'expression de ces genes. L'interet de cette nouvelle phhf: la phhf tunisia, reside dans le niveau particulierement eleve de l'hb f produite. La mutation, l'insertion d'une cytidine reside dans une region riche en gc et siege de nombreuses autres mutations phhf. Nous avons demontre en souris transgenique que la mutation caracterisee etait bien responsable du phenotype. L'exploration fonctionnelle n'a pas reussit a eclaircir le mecanisme moleculaire. Des experiences en cours devront dire si le mecanisme est lie a des differences d'affinite de facteurs se fixant sur les boites sp-1/caccc ou bien si il fait intervenir une structure non conventionnelle de l'adn (adn h) que cette region est susceptible d'adopter. Nous avons decrit et caracterise une region dont les polymorphisme sont lies au haplotypes de restrictions du locus globines. Les etudes fonctionnelles de cette region montrent que la fixation d'un facteur majeur de la differenciation erythroide est modifiee (gata1) et modifie la fixation d'un groupe de facteurs ubiquistes se fixant sur le motif cre. Nous avons developpe un modele in vivo utilisant une lignee transformee humaine bipotente qui nous a permis d'apporte des elements montrant que cette region n'est pas polymorphisme neutre du cluster mais qu'elle peut reagir differement dans des environnements de differenciation erythroide ou myeloide
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Tordjman, Rafaèle. "Interactions entre processus angiogéniques et hématopoïèse." Paris 7, 2000. http://www.theses.fr/2000PA077265.
Full textAbstract:
Le stroma médullaire participe à la régulation du devenir des cellules souches hématopoïétiques (CSH): la survie, l'autorenouvellement et l'engagement. Cette régulation est relayée par des protéines d'interaction cellulaire. Afin de caractériser ces protéines, nous avons développé une technique originale de piégeage de gènes qui codent pour des protéines transmembranaires ou sécrétées. Elle a été appliquée à la lignée stromale MS-5, capable de mimer les fonctions du stroma médullaire. Cette approche a permis d'identifier des gènes candidats: thrombospondine-l, entactine, neuropiline-l (Np-l). Ce travail a été particulièrement axé sur la Np-let ses ligands. La Np-1 est un récepteur qui participe au guidage axonal au cours de l'embryogenèse. Nous avons montré que la Np-l est exprimée à la surface des cellules du stroma médullaire et qu'elle est capable de lier deux ligands, la sémaphorine III et le VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor). L'addition de VEGF sur les cellules stromales qui expriment la Np-l induit la synthèse de thrombopoïétine et de Flt3-Ligand, cytokines impliquées dans les étapes précoces de l'hématopoïèse. La Np-l pourrait ainsi relayer des actions entre cellules stromales et CSH. En recherchant la présence de ligands de la Np-1 dans les cellules hématopoïétiques, nous avons montré in vivo que les érythroblastes humains sont les seules cellules qui expriment à la fois le VEGF et un autre facteur angiogénique, le P1GF (Placenta Growth Factor). La sécrétion de ces deux protéines augmente au cours de la différenciation érythrocytaire. Les cellules endothéliales et les macrophages sont des cibles potentielles du VEGF et du PlGF érythrocytaires puisqu'ils expriment des récepteurs pour ces facteurs et sont au contact des érythroblastes dans la moelle. Le surnageant des érythroblastes est en effet capable de faire migrer les monocytes (précurseurs des macrophages) et les cellules endothéliales et d'induire une perméabilité vasculaire. Ces effets sont relayés par le VEGF et le PIGF. Ces deux facteurs sécrétés par les érythroblastes pourraient donc jouer un rôle: (i) dans la formation de l'îlot érythroblastique (unité de maturation des érythroblastes dans la moelle) par migration du macrophage vers les érythroblastes, (ii) dans les interactions entre cellules endothéliales et érythroblastes impliquées en particulier dans le passage des cellules érythroides vers la circulation. Le concept d'interaction entre processus hématopoïétiques et angiogénèse ouvre un champ de réflexion à la fois dans chacun de ces deux domaines mais également dans celui des hémopathies malignes.
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Villeval, Jean-Luc. "Étude cellulaire des temps précoces de l'érythropoièse humaine normale et leucémique : phénotype et régulation "in vitro"." Paris 12, 1987. http://www.theses.fr/1987PA120019.
Full text
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Astori, Audrey. "Caractérisation fonctionnelle du facteur nucléaire RINF au cours de l’hématopoïèse normale et pathologique." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T101.
Full textAbstract:
L’hématopoïèse regroupe l'ensemble des mécanismes qui assurent le renouvellement continu et régulé des cellules sanguines, à partir des cellules souches hématopoïétiques. La différenciation des cellules souches en cellules matures est un phénomène finement orchestré par divers signaux (facteurs de croissance, hormones, cytokines et microenvironnement médullaire) capables de stimuler la prolifération de cellules quiescentes ainsi que leur engagement dans diverses voies de la maturation hématopoïétique. Ces processus sont généralement régulés via l’activation de facteurs de transcription, mais également par des mécanismes épigénétiques. Le gène RINF/CXXC5 a initialement été décrit comme essentiel pour les processus de différenciation granulocytaire normale. Toutefois, son implication dans d’autres voies de l’hématopoïèse n’avait pas été étudiée. Afin de définir son rôle dans la différenciation et l’engagement vers des lignages hématopoïétiques autres que la voie granulocytaire, notamment érythroïde et monocytaire, sa contribution fonctionnelle dans des lignées hématopoïétiques et dans des cellules primaires CD34+ de moelle osseuse (donneurs sains) a été étudiée par une approche de perte ou gain de fonction. Ces expériences, dans des modèles de la voie granulocytaire (lignée NB4 et HL60 traitées par les rétinoïdes) et de la voie érythroïde (lignées K562 et UT7/GM traitées par l’hémine ou l’EPO) démontrent l’implication de RINF dans la maturation terminale de ces deux lignages. Ces données ont ensuite été validées dans des progéniteurs hématopoïétiques (tests clonogéniques) où l’expression de RINF favorise la différenciation granuleuse et interfère négativement avec la différenciation érythroïde, sans impacter la voie monocytaire. En effet, l’extinction de son expression diminue le nombre des colonies granuleuses et augmente le nombre de colonies érythroïdes. Des dérégulations au niveau de l’expression des facteurs ou co-facteurs de trancription qui régulent l’hématopoïèse peuvent aboutir à des hémopathies, telles que les Leucémies Aiguës Myéloïdes. Ces pathologies sont la résultante de l’association d’une augmentation de la prolifération cellulaire et d’un blocage des processus de différenciation. Au vu de son rôle important au cours de la granulopoïèse et de l’érythropoïèse, l’hypothèse que des dérégulations de RINF pourraient intervenir dans les processus de leucémogenèse a été testée par l’étude de son niveau d’expression dans les différentes Leucémies Aiguës Myéloïdes. Ainsi, il a été démontré que parmi les patients dont le niveau d’expression de RINF est le plus élevé, le pronostic vital est mauvais, associé à une résistance aux traitements chimiothérapeutiques. L’ensemble de ces données a permis d’aboutir à la conclusion que des dérégulations de l’expression de RINF pourraient contribuer au processus de leucémogenèse, et qu’ainsi RINF pourrait être une potentielle cible thérapeutique dans le cadre des LAM. D’un point de vue moléculaire, le mode d’action de la protéine RINF reste à ce jour du domaine de l’hypothèse, mais la présence d’un doigt de zinc de type CXXC lui permettrait d’intervenir dans des mécanismes des régulations épigénétiques, tels que la méthylation de l’ADN. Une meilleure compréhension des mécanismes régulés par la protéine pourrait permettre à terme une meilleure compréhension des régulations de l’hématopoïèse, voire des processus de leucémogenèseDuring hematopoiesis, hematopoietic stem cells (HSC) differentiation is orchestred by different signals, able to stimulate cell proliferation of quiescent cells, and their commitment in the different hematopoietic lineages. These process are regulated by transcription factors activation, as well by epigenetic mecanisms. By a microarray approach, we have identified a novel retinoid-responsive gene (CXXC5) encoding a Retinoid-Inducible Nuclear Factor (RINF) that plays an essential role during in vitro human hematopoiesis. Indeed, expression studies and gene silencing experiments both demonstrate RINF requirement during in vitro terminal differentiation of myeloid leukemia cells (NB4, HL60), but also during normal myelopoiesis of bone marrow progenitors (CD34+ HSPC cells in presence of cytokines). In the present study, we demonstrate that in cell lines, RINF overexpression provokes an earlier myeloid differentiation under retinoids treatement and slow-downs erythroid maturation induced by hemin whereas its down-regulation accelerates erythroid terminal differentiation. In normal CD34+ HSCP, we demonstrated that RINF down regulation (1) promotes differentiation in erythroid lineage at the expense of granulocyte lineage, and (2) accelerates terminal erythroid differentiation. Overexpression, contribute to promote myeloid pathway even though cells are in erythroid conditions. Because of its role during hematopoiesis regulation and its gene localization in 5q31.2, we investigated CXXC5/RINF expression in primary human acute myeloid leukemia (AML) cells derived from 594 patients. A wide variation in CXXC5/RINF mRNA levels was observed in the immature leukemic myeloblasts. Furthermore, patients with low-risk cytogenetic abnormalities showed significantly lower levels compared to patients with high-risk abnormalities, and high RINF/CXXC5/ mRNA levels were associated with decreased overall survival for patients receiving intensive chemotherapy for newly diagnosed AML. CXXC5/RINF knockdown in AML cell lines caused increased susceptibility to chemotherapy-induced apoptosis, and regulation of apoptosis also seemed to differ between primary human AML cells with high and low RINF expression. The association with adverse prognosis together with the antiapoptotic effect of CXXC5/RINF suggests that targeting of CXXC5/RINF should be considered as a possible therapeutic strategy, especially in high-risk patients who show increased expression in AML cells compared with normal hematopoietic cells
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Garderet, Laurent. "Le microenvironnement dans la physiopathologie du myélome et des myélodysplasies de bas grade." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077094.
Full textAbstract:
Le microenvironnement est souvent incriminé dans la physiopathologie des hémopathies malignes. Nous nous sommes interrogés sur son rôle au cours du myélome et des myélodysplasies (SMD) de bas grade. Le myélome est caractérisé par des lésions osseuses. Les cellules ostéoblastiques qui participent à la reconstruction osseuse sont déficientes. Nous avons analysé leur cellule d'origine, les cellules souches mésenchymateuses (CSM) dont l'altération pourrait expliquer en partie ce déficit. Effectivement, les CFU-F sont diminués, le temps à confluence est augmenté et leur capacité d'expansion très diminuée. Ce déficit s'expliquerait par une diminution de récepteurs à certains facteurs de croissance. Ces CSM sécrètent également en excès le DKK1, puissant inhibiteur des ostéoblastes, et l'IL-6 puissant stimulant des cellules plasmocytaires tumorales. Les CSM sont donc pathologiques dans le myélome et contribuent aux anomalies osseuses. A l'inverse, l'implication des CSM dans les myélodysplasies est discutée. Dans un système de co-culture stroma-progéniteurs établi dans le laboratoire, elles permettent une érythropoïèse normale à partir de progéniteurs hématopoïétiques CD34+ sains. De façon inattendue, et qui va à rencontre du dogme actuel, nous avons observé que les progéniteurs de SMD co-cultivés avec des CSM saines peuvent se différencier totalement jusqu'au stade terminal d'énucléation. Nous avons fait l'hypothèse que la dysérythropoïèse des SMD de bas grade n'est pas liée à un trouble de la différenciation mais uniquement liée à un trouble de la prolifération par apoptose excessive. Pour le vérifier, nous avons étudié le syndrome 5q-, SMD de bas grade qui présente une anomalie génétique facilement identifiable, pour suivre le clone pathologique. Nous montrons, à l'échelon clonal, que l'engagement érythroïde des progéniteurs est normal et complet, que leur capacité proliférative est très diminuée mais que contrairement à ce qui est aujourd'hui admis, la différenciation érythroïde terminale n'est pas altérée. Les globules rouges énucléent normalement. D'après nos résultats, le syndrome 5q- est donc un trouble quantitatif et non qualitatif. Cette observation pourrait se confirmer dans les autres SMD de bas gradeThe microenvironment is often incriminated in the physiopathology of malignant haemopathies. We investigated its role in the evolution of myeloma and low-grade myelodysplasia (myelodysplastic syndrome, MDS). Myeloma is characterized by bone lesions, the osteoblasts which participate in bone reconstruction being deficient. We studied the cells from which they originate, mesenchymal stem cells (MSC), whose alteration could partly explain this deficit. Numbers of CFU-F were indeed diminished in myeloma, the time to attain confluence was increased and their expansion capacity was strongly reduced. This defect could be due to a diminution of receptors for certain growth factors. These MSC likewise secreted excess DKK1, a powerful inhibitor of osteoblasts, and IL-6 which is a strong stimulator of tumoral plasma cells. The MSC are therefore pathological in myeloma and contribute to the bone anomalies. On the contrary, the involvement of MSC in myelodysplasia is subject to controversy. In a stroma-progenitor co-culture System established in our laboratory, they support thé normal erythropoiesis of healthy CD34+ haematopoietic progenitors. Unexpectedly, however, and contrary to current belief, we found that MDS progenitors co-cultured with healthy MSC could differentiate completely to the stage of terminal enucleation. We speculated that the dyserythropoiesis of low-grade MDS is not linked to a differentiation disorder but solely to a proliferation defect due to excessive apoptosis. To verify this hypothesis, we studied 5q- syndrome, a low-grade MDS which presents a readily identifiable genetic anomaly allowing one to follow the pathological clone. We showed that at the clonal level, the erythroid commitment of the progenitors is normal and complete although their proliferative capacity is strongly diminished, whereas in contrast to what has been believed until now, their terminal erythroid differentiation is not modified. The red blood cells enucleate normally. According to our results, 5q- syndrome is thus a quantitative rather than a qualitative disorder. This finding might also prove to be true in other low-grade MDS
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Back, Jonathan. "Rôles versatiles du facteur de transcription PU. 1 dans l'hématopoïèse murine." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2004. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2004/BACK_Jonathan_2004.pdf.
Full textAbstract:
Le facteur de transcription PU. 1 a été initialement identifié sous le nom de spi-1, un oncogène impliqué dans les érythroleucémies murines induites par le virus de friend, en tant que site d'insertion majeur pour ce virus. Par la suite, PU. 1 a été caractérisé comme un régulateur positif crucial du développement myéloïde et lymphoïde, mais sans fonction au cours de l'érythropoïèse. Nous avons généré une lignée de souris porteuse d'une mutation nulle ciblant le premier exon du locus PU. 1, en y insèrant le gène rapporteur GFP. L'étude de cette lignée de souris déficiente pour PU. 1 a permis d'étendre le rôle de PU. 1 dans les précurseurs érythroïdes, où sa fonction est fortement corrélée à l'effet pathologique de PU. 1 dans les érythroleucémies de Friend. Ainsi, l'absence de PU. 1 (ou sa réduction comme dans les hétérozygotes) est liée à une réduction de la capacité de prolifération des PE ainsi qu'à une différenciation accentuée. L'analyse de l'activité du locus PU. 1 in vivo, à l'aide du gène rapporteur a révélé que l'expression de PU. 1 est régulée de façon hautement dynamique et s'étend dans quasiment l'ensemble du système hématopoïétique. Ces données suggèrent de nouvelles implications pour PU. 1 aussi bien dans le compartiment des progéniteurs que dans certaines cellules matures. La synthèse de ces données érige PU. 1 comme un facteur central contrôlant de multiples aspects de l'hématopoïèse, en exerçant des effets antagonistes selon le lignage et son taux d'expressionPU. 1 transcription factor, first known as spi-1 an oncogene involved in the Friend virus-induced erythroleukemia, has been characterized as a crucial positive regulator of myeloid and lymphoid differentiation, but as not important for erythropoiesis. We have generated a PU. 1 deficient mouse line in which the PU. 1 locus has been targeted with the GFP reporter transgene. The analysis of the PU. 1 null mice revealed a new crucial function for PU. 1 in erythroid precursors, highly correlated with its pathological involvement in friend erythroleukemia. Absence (or reduction as shown by the heterozygous phenotype) of PU. 1 in erythroid progenitors alters their self-renewal capacity and increases their tendency to differentiate. PU. 1 locus activity, visualized with the GFP reporter, underlined a highly dynamic expression in nearly all the hematopoietic system. These data imply PU. 1 in various compartments of the hematopoietic system, suggesting new functions. All together, theses results set PU. 1 as a central regulator of hematopoiesis, exerting antagonistic activities depending on the lineage and the dosage of its expression
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Royet, Julien. "Mise en évidence dans les extraits rénaux et dans le surnageant de cellules stromales médullaires d'une nouvelle activité érythropoïétique : caractérisation de cette activité et étude de son rôle physiologique." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO10218.
Full textAbstract:
Chez les vertebres, l'erythropoiese resulte de la differenciation d'une sequence de progeniteurs issus de la cellle souche hematopoietique pluripotente. Les techniques de culture clonale ont permis la caracterisation de trois types de progeniteurs erythropoietiques: la bfu-e precoce (bfu-ep), la bfu-e tardive (bfu-et) et la cfu-e. La differenciation de ces progeniteurs est controlee in vitro par deux principaux types de regulateurs: 1) les molecules a activite bpa (burst promoting activity) qui supportent la proliferation des bfu-e. Les principales cytokines a activite bpa sont l'il3, l'il4, l'il9, le gm-csf, l'epa, l'hilda/lif et l'activine; 2) l'erythropoietine (epo) qui assure la differenciation des cfu-e et dont la presence est egalement necessaire a la differenciation terminale des bfu-e. Dans les cultures a long terme de moelle osseuse, l'erythropoiese reste bloquee, en l'absence d'apport exogene d'epo, au stade de la bfu-et. L'addition d'epo aux cultures a long terme induit la differenciation des progeniteurs erythroides et la synthese de molecules capables de stimuler la croissance des bfu-et en milieu semi-solide. Ces molecules ont ete appelees mbpa (mature burst promoting activity) en raison de leur specificite d'action sur les bfu-et (bfu-e matures en anglais). Nous avons montre que le mbpa est stocke dans les cellules stromales de cultures a long terme et que son emission dans le surnageant est liee a la stimulation des cultures a long terme par l'epo. Afin de caracteriser les molecules a la base de cette activite, nous avons immortalise une lignee de cellules stromales qui produit de maniere constitutive le mbpa: la lignee n. A partir du milieu conditionne par cette lignee, nous avons demontre que l'activite bpa observee etait due a une ou plusieurs proteines glycosilees et fortement hydrophobes. Par chromatographie de gel-filtration, nous avons determine la masse moleculaire apparente des molecules a activite bpa. On retrouve trois pics d'activite dans des fractions de chromatographie correspondant a des molecules de 100-130, 30-40, et 10-15 kda. Nous avons egalement detecte dans les extraits renaux, une activite bpa partageant de nombreuses caracteristiques avec le mbpa. Les activites bpa stromale et renale ont la meme cellule cible (la bfu-et) et la masse moleculaire apparente des molecules a activite bpa est identique dans les deux sources. Par ailleurs, comme cela a deja ete decrit pour l'erythropoietique, le taux de mbpa renal varie en fonction des etats erythropoietiques de l'animal. Il est augmente en cas d'anemie et diminue lors d'une forte polyglobulie. La disparition du mbpa renal endogene chez la souris polyglobulique s'accompagne d'une accumulation spectaculaire des bfu-et dans la rate et la moelle osseuse de l'animal traite. La differenciation de ces progeniteurs semble totalement dependante de la presence de mbpa. Le mbpa renal est egalement capable de stimuler l'erythropoiese dans les cultures a long terme. Enfin, l'injection de mbpa renal provoque une augmentation transitoire mais importante de la population des progeniteurs erythropoietiques spleniques du receveur. Nous avons pu apporter la preuve que l'activite bpa detectee dans les cellules stromales et dans les extraits renaux ne pouvait etre attribuee a aucune des cytokines actuellement connues. L'ensemble de ces resultats nous conduisent a penser que le mbpa pourrait etre un facteur erythropoietique original intervenant dans la regulation de l'erythropoiese in vivo
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Moniz, Hélène Soledade. "Etude de la prolifération et de la différenciation érythroïde in vitro et de la potentielle implication de la voie de p53 au cours de l'anémie de Blackfan-Diamond (ABD)." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077124.
Full textAbstract:
L'anémie de Blackfan-Diamond (ABD) est une érythroblastopénie congénitale rare. Le phénotype et le génotype des patients sont hétérogènes. 40% des patients ont des malformations congénitales et 50% sont porteurs d'une mutation dans un gène d'une protéine ribosomique (PR), principalement RPS19 (25%), RPL5 (7%) et RPL11 (5%). Il en résulte un défaut de maturation des ARNr. Cependant, les mécanismes qui expliquent les liens particuliers entre les anomalies de la biogenèse des ribosomes et de l'érythropoïèse restent obscurs. Des modèles animaux reproduisant la maladie ont montré une activation de p53. L'activation de la voie p53 après génération d'un stress nucléolaire due au défaut de maturation des ARNr pourrait être responsable de l'érythroblastopénie, caractéristique de l'ABD. Pour vérifier cette hypothèse, nous avons étudié au cours de la différenciation érythroïde terminale, la prolifération, la différenciation érythroïde, le niveau d'apoptose, le cycle cellulaire et la voie p53, dans des cellules CD34+ issues de patients et dans des CD34 de sang de cordons infectées par des lentivirus inhibant spécifiquement l'expression de RPS19, RPL5 ou RPL11. Nous montrons qu'il existe différents niveaux d'activation de la p53 selon la PR invalidée et qu'une haploinsuffisance en RPS19 s'accompagne d'une prolifération érythroïde diminuée, une différenciation érythroïde normale et peu ou pas d'apoptose tandis qu'une haploinsuffisance en RPL5 et RPL11 conduit à une diminution drastique de la prolifération et un retard de différenciation érythroïde avec un excès d'apoptose. Dans tous les cas, on note un arrêt du cycle cellulaire en phase Go/Gl. Nous confirmons ainsi le postulat initialDiamond-Blackfan anemia (DBA) is a rare congenital erythroblastopenia, characterized by an aregenerative anemia. The DBA phenotype and genotype is heterogeneous: 40% of DBA cases have various congenital malformations and 50% of the patients carry a mutation in a ribosomal protein (RP) gene, mostly RPS19 (25%), RPL5 (7%), RPL11 (5%). This RP gene mutation leads to a defect in the rRNA maturation. However, the exact mechanisms that explain the special link between the defects in the ribosome biogenesis and in erythropoiesis are still to be defined. Animal models reproducing the disease exhibited a p53 activation pathway. Activation of p53 after generation of a nucleolar stress due to the defect in rRNA could explain the erythroblastopenia, the main characteristic of DBA. To verify this hypothesis, we studied the erythroid prolifération and differentiation, the degree of apoptosis, the cell cycle and the p53 pathway, either in CD34+ cells from DBA patients or in CD34+ cells from cord blood infected with specific shRNA against RPS19, RPL5 and RPL11. We found différent levels of p53 activation depending of the RP. Haploinsufficiency in RPS19 leads to a decreased erythroid proliferation, a normal erythroid differentiation and no apoptosis. By contrast, haploinsuffïciency in RPL5 or RPL11 leads to a dramatic decreased in erythroid proliferation and a delayed in differentiation, with an important activation of apoptosis. In any case, we observed a cell cycle arrest in Go/Gl phase. Thus, after p53 activation, cell cycle arrest after RPS19, RPL5 or RPL11 inhibition and cell cycle arrest and activation of apoptosis after RPL5 or RPL11 inhibition may explain DBA erythroblastopenia
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Arlet, Jean-Benoît. "Rôle de la chaperonne HSP 70 dans l'éythropoïèse inefficace des béta-thalassémies majeures." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01059816.
Full textAbstract:
L'érythropoïèse inefficace joue un rôle central dans la physiopathologie de l'anémie des β-TM. Ses caractéristiques sont triple: accélération de la différenciation érythroïde, arrêt de maturation au stade d'érythroblaste polychromatophile et mort par apoptose à ce stade de différenciation. Les mécanismes précis de cette apoptose et de l'arrêt de la maturation n'ont pas encore été élucidés. Il a été montré, au cours de l'érythropoïèse physiologique, que la protéine chaperonne Hsp70, en se localisant dans le noyau des érythroblastes en cours de différenciation, protège GATA-1 (facteur de transcription érythroïde majeur) de sa destruction par la caspase-3. Cette enzyme clé de l'apoptose est en effet activée physiologiquement au cours de la différenciation érythroïde et peut cliver GATA-1. Notre travail se base sur l'hypothèse suivante : Hsp70 pourrait, au cours de l'érythropoïèse des β-TM, être séquestrée dans le cytoplasme des érythroblastes matures (stade d'une intense hémoglobinisation) afin d'exercer son rôle de chaperonne des chaînes d'-globine libres. Cela aurait comme conséquence néfaste l'absence de localisation nucléaire d'Hsp70 et, en conséquence, la destruction de GATA-1 à l'origine de l'arrêt de maturation et de la mort cellulaire. Nous avons montré dans ce travail qu'Hsp70 était localisée principalement dans le cytoplasme des érythroblastes matures dans la moelle de patients β-TM, avec un défaut d'expression nucléaire. Par ailleurs, GATA-1 n'est plus exprimé dans ces cellules. Nous avons confirmé ces résultats dans un système de culture cellulaire érythroïde humaine en milieu liquide reproduisant les étapes de la différenciation érythroïde terminale. Une intéraction physique directe entre Hsp70 et l'-globine a été identifiée par techniques de microscopie confocale, d'immunoprécipitation et de double hybride. Enfin, la transduction dans les érythroblastes de β-TM d'un mutant d'Hsp70-S400A, principalement nucléaire, ou d'un mutant de GATA-1 non clivable par la caspase-3 corrige l'érythropoïèse inefficace.Une modélisation mathématique du complexe Hsp70/-globine nous a permis de préciser les domaines impliqués dans l'intéraction, ce qui ouvre la voie à une possibilité de criblage de petites molécules permettant la rupture de ce complexe afin de ramener Hsp70 dans le noyau avec un espoir thérapeutique pour améliorer l'érythropoïèse inefficace des β-TM.
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Badaoui, Sabrina. "Etude du rôle du peptide AcSDKP dans l'hématopoïèse chez la souris et de l'angiotensine II dans l'érythropoïèse humaine." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077043.
Full textAbstract:
Le système rénine-angiotensine semble jouer un rôle dans la régulation de l'hématopoïèse par l'intermédiaire des peptides N-acetyl- seryl-aspartyl-lysyl-proline (AcSDKP), un régulateur négatif de l'hématopoïèse, et angiotensine II, un facteur de croissance, respectivement catabolisé et métabolisé par l'enzyme de conversion de l'angiotensine I (EGA). Les traitements anticancéreux induisent des effets myélosuppresseurs qui pourraient être limités par l'adjonction d'inhibiteurs du cycle cellulaire tel qu'AcSDKP. Chez la souris, nous avons montré que l'utilisation d'un inhibiteur de l'ECA dans un modèle d'irradiation létale induit une radioprotection liée à l'inhibition de la production d'angiotensine II. Pour établir la fonction de AcSDKP, Fhématopoïèse de souris « knock in» du domaine N-terminal de l'ECA présentant une accumulation d'AcSDKP sans modification du taux d'angiotensine II a été étudié. Ces souris ont une hématopoïèse nonnale qui ne diffère pas de celle des souris sauvages à l'état de base comme après traitement au 5-Fluoro-Uracil suggérant qu'AcSDKP ne joue pas un rôle important dans le contrôle du cycle des progéniteurs hématopoïétiques in vivo. Le rôle de l'angiotensine II a été étudié sur l'érythropoïèse humaine in vitro comme modèle pour montrer son rôle de facteur de croissance. In vitro, l'angiotensine II a un rôle direct mineur sur l'érythropoïèse en augmentant la prolifération induite par l'Epo. Cet effet mineur est lié au faible niveau d'expression de son récepteur ATI. Les effets de ce peptide sur l'érythropoïèse, et non la production d'Epo, pourraient donc être indirects en agissant sur les cellules stromales qui composent la niche hématopoïétiqueThe renin angiotensin System has critical functions in regulating blood pressure and may act on the hematopoietic System. Angiotensin I converting enzyme (ACE) is the key molecule in the SRA by cleaving angiotensin I into angiotensin II and hydrolyzing bradykinin but it also hydrolyses other substrates as a molecule inhibiting the entry in S phase of early hematopoietic progenitors: the peptide N-acetyl-seryl-aspartyl-lysyl-prolyl (AcSDKP). The negative regulators of hematopoiesis may preserve the hematopoietic toxicity of irradiation but the clinical application of AcSDKP is limited by its short half-life. To prevent its degradation, we tested if pharmacologic inhibition of ACE induces a myeloprotective effect in a mouse irradiation model. A signifîcant radioprotection was observed, but was likely due to angiotensin II production inhibition. To study the role of AcSDKP on hematopoiesis we used a mouse ACE « Knock in » (ACE 7/7) characterized by an increased concentration of AcSDKP without modification of the angiotensin II concentration. We demonstrate that in vivo chronic elevation of AcSDKP has no effect on hematopoiesis in basal or stress conditions after induction of a myelosuppression. We study the role of angiotensin II as growth factor of human adult erythropoiesis. In vitro, angiotensin II has a minor direct effect on erythropoiesis by weakly increasing the erythropoietin (EPO) induced erythroid proliferation and reinforcing EPO signaling. This moderate effect contrasting with the marked effect of angiotensin II on in vivo erythropoiesis suggests that a part of the effects of angiotensin II may be indirect and mediated through regulatory cells such as stromal cells
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Rouzbeh, Shaghayegh. "La maturation terminale des cellules érythroïdes à partir des cellules souches pluripotentes." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077124.
Full textAbstract:
Les cellules souches pluripotentes fournissent un modèle unique et une ressource importante pour une meilleure compréhension du développement et de la différenciation de nombreux types cellulaires. Dans ce travail de thèse afin de mieux comprendre les mécanismes impliqués dans la différenciation terminale erythroïde, nous avons utilisé un modèle de différenciation erythroïde à partir de cellules souches embryonnaires humaines. Dans cette optique, nous avons analysé les profils d'expression des gènes et des Micrornas de deux populations de corps embryoïdes (EB9 VS EB20) issues de cellules souches embryonnaires humaines, A J0 et A J18 de la culture erythroïde. Les multiples analyses des profils transcriptomiques ainsi que l'analyse intégrative d'expression des gènes et des Mirnas, nous ont permis d'identifie des groupes de gènes et 5 Mirnas potentiellement impliqués dans la régulation de l'erythropoïese terminale. Grâce à l'analyse fonctionnelle d'extinction de ces Mirnas, nous avons identifié le MIR-30A comme un régulateur clé de l'énucleation des erythroblastesHuman embryonic stem cells (HESC) provide a unique model and an important resource for a deeper understanding of development and differentiation of multiple cell types. In order to better understand the mechanisms underlying erythroid terminal differentiation i. E. Enucleation we employed an erythroid differentiation model from HESC. By choosing two extreme conditions of erythroid culture from HESC we provide a unique erythroid differentiation model that gives us the opportunity to study the enucleation of erythroid cells by analyzing the genes expression profiles of erythroid cells from these two culture conditions. Using an integrated analysis of microrna expression and MRNA transcriptomee we identified 5 Mirnas potentially involved in erythroblasts enucleation. Finally by performing knockdown experiments of these 5 Mirnas we identified MIR-30A as a key regulator of erythroblast enucleation in HESC
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Ladli, Meriem. "Rôle de l’AMPK au cours de l’érythropoïèse murine et humaine." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCB089.
Full textAbstract:
L’érythropoïèse adulte est un processus complexe qui a lieu dans la moelle osseuse, il aboutit à la formation de globules rouges (GR) à partir des cellules souches hématopoïétiques. L’AMPK (AMP-activated protein kinase) est un complexe hétérotrimérique (αβγ) connu pour son rôle de régulateur du métabolisme énergétique cellulaire. L'implication de l’AMPK dans le maintien de la survie et de l’intégrité des globules rouges murins a été démontrée. En effet, les souris invalidées pour Ampk α1, β1 ou γ1 présentent une anémie hémolytique due à une anomalie de la déformabilité des globules rouges. Nous avons émis l’hypothèse que les altérations observées dans les érythrocytes déficients en AMPK pourraient se mettre en place au cours du processus de différenciation des érythroblastes. L’objectif de ce travail est donc d’étudier le rôle de l'AMPK au cours de l’érythropoïèse murine et humaine adulte. Chez la souris, nos résultats démontrent que l’absence de l’AMPK n’affecte ni la prolifération ni la survie ni la différenciation des érythroblastes Ampkα1-/-. De la même façon, l’activation de l’AMPK n’a pas d’effet sur les érythroblastes murins. Chez l’homme, nous avons montré par une approche shRNA que l’inhibition de l’expression de la sous-unité α1 de l’AMPK induit un ralentissement de la prolifération cellulaire et une anomalie de l’érythropoïèse révélée par une modification de l’expression des protéines membranaires à la surface des érythroblastes au cours de la différenciation. Nous avons également montré que l’AMPK est fortement activée dans les érythroblastes immatures (Pro-E –Baso-E) et que cette activation diminue dans les érythroblastes matures (Poly-E – Retic). Une activation de l’AMPK par des activateurs directs (GSK621 et 991) dans les érythroblastes immatures n’a pas d’effet. Par contre, le maintien de son activation par les activateurs directs dans les érythroblastes matures induit, un arrêt du cycle cellulaire en phase S, une induction de l’autophagie, une apoptose caspase dépendante conduisant à un arrêt de la différenciation au stade Baso-E. Ces résultats montrent l’importance de la diminution de l’activation de l’AMPK pour la survie et la différenciation des érythroblastes matures. L’AMPK est donc importante pour la différenciation des cellules érythroïdes humaines alors que chez la souris, elle est impliquée dans le fonctionnement du globule rouge. Notre travail illustre donc un nouveau point de divergence entre l’érythropoïèse murine et l’érythropoïèse humaineAMPK (AMP-activated protein kinase) is a heterotrimeric complex containing α, β, and γ subunits, known for its role in the maintenance of cellular energy homeostasis. It has been shown that Ampk is involved in maintaining integrity of murine RBCs as well as their survival. Indeed, Ampk α1-/- and Ampk γ1-/- mice present a hemolytic anemia, and their RBCs show elasticity defects in their plasma membrane. We hypothesized that the alterations observed in AMPK-deficient erythroblasts were the results of a lack of Ampk earlier during erythroid differentiation. Therefore, we aim to study the role of AMPK during human and murine erythropoiesis. We showed that the absence or activation of Ampk in mice does not affect either the survival, proliferation, or the differentiation of KO erythroblasts compared to WT ones. In human, our data show that the knockdown of the α1 subunit expression by shRNA induces a slowing down of cell proliferation and a dyserythropoiesis, indicated by the shift in pattern of cell surface markers expression during differentiation. In addition, we showed that phosphorylation of AMPK (Thr172) and its target ACC (Ser 79) are elevated in immature (Pro-E –Baso-E) erythroblasts, and then decreased conjointly with the erythroid differentiation. AMPK activation in immature erythroblasts has no effect. Conversely, in mature (Poly-E – Retic) erythroblasts, the persistence of AMPK expression induces a cell cycle arrest in S phase, followed by the induction of autophagy, and of caspase-dependent apoptosis with a differentiation arrest at basophilic erythroblast stage. Our results demonstrate the importance of finely-tuned regulation of AMPK during adult human erythropoiesis. AMPK is needed for efficient erythropoiesis in human, whereas it is involved solely in RBCs function in mice, showcasing yet another contrasting point between human and mouse erythropoiesis
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Vandekerckhove, Julie. "Mécanismes de régulation de GATA-1 par les protéines de choc Hsp27 et Hsp70 au cours de la différenciation érythroïde terminale." Phd thesis, Paris 11, 2009. http://www.theses.fr/2009PA11T078.
Full text
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Tounkara, Fatoumata Korika. "Étude des effets de l'hyperthermie légère sur la prolifération et la différenciation des cellules souches hématopoïétiques CD34+ issues du sang de cordon ombilical." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/26949/26949.pdf.
Full text
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Hatia, Sarah. "Etude des souris invalidées pour le gène Tph1 : implication de la sérotonine dans l'érythropoïèse." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00630418.
Full textAbstract:
L'érythropoïèse est le processus de formation des globules rouges (GR) ayant lieu principalement dans la moelle osseuse. Il débute par l'engagement de cellules souches hématopoïétiques vers la lignée érythroïde, qui donnent lieu à des progéniteurs, puis à des précurseurs érythroïdes. Des changements morphologiques accompagnent la différenciation érythroïde, incluant une réduction de la taille des cellules, l'acquisition d'hémoglobine et finalement, l'expulsion du noyau qui survient au stade réticulocytes. Ces réticulocytes sont à l'origine des GR retrouvés dans la circulation sanguine. L'anémie est définie par une diminution de la teneur en hémoglobine dans le sang et peut être causée par une diminution de la production de GR, ou par une augmentation de leur destruction. La sérotonine (5-HT) est depuis longtemps connue comme un neurotransmetteur dans le système nerveux central (SNC), où elle est impliquée dans de nombreuses fonctions. Sa disponibilité dépend de l'expression de la tryptophane hydroxylase (TPH), dont une étude récente a révélé l'existence de deux isoformes, la TPH2 exprimée dans le SNC et la TPH1 en périphérie. Cette découverte a ravivé l'intérêt d'étudier les fonctions potentielles de la 5-HT en dehors du SNC. De plus, des rôles non suspectés de la 5-HT dans de nombreux systèmes physiologiques en périphérie ont été révélés par la caractérisation du modèle murin KO pour la Tph1 (Tph1-/-). Dans ce manuscrit, nous présentons des données in vivo, montrant que les souris Tph1-/- présentent une érythropoïèse inefficace. Le défaut majeur survient dans la moelle osseuse, où l'absence de 5-HT altère la progression des précurseurs érythroïdes, qui expriment les récepteurs 5-HT2A et 5-HT2B, vers la différenciation terminale. Ces précurseurs expriment également la Tph1, suggérant une synthèse locale de 5-HT. De plus, des cultures in vitro nous ont permis de démontrer l'action directe de la 5-HT sur les précurseurs érythroïdes, par l'ajout de 5-HT qui augmente la capacité proliférative des cellules issues des souris sauvages et mutées. D'autre part, les GR issus des souris Tph1-/- sont plus sensibles à la phagocytose par les macrophages et ont une durée de vie significativement réduite par rapport à des GR sauvages. Cette dégradation augmentée des GR associée à l'érythropoïèse inefficace dans la moelle osseuse, conduisent à un phénotype d'anémie macrocytaire des souris Tph1-/-. Lorsqu'elles vieillissent, les souris développent une splénomégalie, due à une érythropoïèse accrue dans la rate. L'ensemble de nos résultats démontre que la 5-HT est un facteur clef dans la production et la survie des GR.
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Fournier, Simon. "Étude des rôles des protéines HSP27 et HSP70 dans la différenciation des cellules CD34+ en cellules érythroides." Thesis, Université Laval, 2013. http://www.theses.ulaval.ca/2013/29550/29550.pdf.
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Renucci, Armand. "Expression des proto-oncogènes C-erb A au cours du développement embryonnaire chez le poulet." Lyon 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LYO10077.
Full text
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Deni, Ioanna. "Deciphering the role of extracellular vesicles in erythropoiesis inhibition induced by malaria parasites." Electronic Thesis or Diss., Université Paris Cité, 2024. http://www.theses.fr/2024UNIP5286.
Full textAbstract:
Le paludisme reste un problème de santé mondial, souvent associé à de nombreuses anomalies des globules rouges, telles que l'anémie. Malgré les efforts déployés pour lutter contre le paludisme dans de nombreuses régions du monde, le rôle que joue l'infection palustre dans l'anémie reste peu étudié. Le paludisme est causé par l'infection des globules rouges par les parasites Plasmodium. Chez des patients impaludés, la présence de parasites Plasmodium falciparum a été mise en évidence dans des tissus tels que le parenchyme de la moelle osseuse, où se produit la différenciation érythroïde, ce qui suggère que les parasites du paludisme pourraient interférer avec l'érythropoïèse. Des travaux antérieurs ont montré que des vésicules extracellulaires (VE) sécrétées par les érythrocytes infectés par P. falciparum peuvent influencer la différenciation érythroide. Ici, nous apportons également la preuve d'un retard de l'érythropoïèse in vitro par des VE purifiées à partir du plasma d'enfants béninois infectés par P. falciparum. Cependant, l'identité moléculaire du (des) facteur(s) présent(s) dans les VE qui entraîne(nt) une altération de l'érythropoïèse et leur(s) cible(s) humaine(s) reste à identifier. Nous nous sommes donc intéressés au mécanisme d'inhibition de l'érythropoïèse par les VE provenant d'érythrocytes infectés par P. falciparum. Nous avons effectué une analyse protéomique de ces VE pour sélectionner des protéines parasitaires susceptibles de jouer un rôle dans le retard de l'érythropoïèse. L'expression hétérologue d'une de ces protéines candidates dans une lignée hématopoïétique est suffisante pour inhiber la prolifération cellulaire. L'expression des protéines candidates tagguées a permis de les localiser dans l'érythroblaste par microscopie confocale et d'immunoprécipiter leurs partenaires. La compréhension des mécanismes par lesquels le parasite influence ses hôtes est cruciale pour améliorer nos outils de lutte contre les nombreuses déficiences sanguines auxquelles les patients atteints de paludisme sont confrontésMalaria remains a global health problem, often associated with numerous red blood cell defects, such as anemia. Despite the successful efforts to control malaria in many areas of the world, the important role played by malaria infection in anemia remains poorly researched. Malaria is caused by infection of red blood cells by Plasmodium parasites. There has been evidence that Plasmodium falciparum parasites accumulate in patient tissues such as the bone marrow parenchyma, where the erythroid differentiation occurs, suggesting that malaria parasites may interfere with erythropoiesis. Accordingly, previous studies reported that extracellular vesicles (EVs) secreted by P. falciparum infected erythrocytes can influence red blood cell differentiation in vitro. Here, we also provide evidence of delay of erythropoiesis in vitro by EVs purified from plasma of P. falciparum infected children from Benin. However, the molecular identity of the factor(s) in the EVs that drive impaired erythropoiesis and their human target(s) remain to be identified. We, therefore, address the mechanism of inhibition of erythropoiesis mediated by EVs from P. falciparum infected erythrocytes. We performed proteomics analysis of EVs to select parasite candidate proteins likely to play a role in the erythropoiesis delay. Heterologous expression of one of these candidates in hematopoietic stem line was sufficient to inhibit cell proliferation. Expression of the tagged protein allowed to perform localization studies in erythroblasts by confocal microscopy and immunoprecipitation of interacting partners. Understanding the mechanisms by which the parasite influences its hosts is crucial for improving our tools against the numerous blood related deficiencies that patients with malaria face even after their treatments
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Millot, Sarah. "Etude de l'erythropoïèse dans un modéle murin d'anémie chronique : Réponse à l'injection d'Erythropoïètine." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T057.
Full textAbstract:
L'anémie des maladies chroniques est l'anémie la plus fréquente chez les patients hospitalisés pour diverses pathologies : infections, désordres auto-immuns et cancers. Plusieurs facteurs physiopathologiques contribuent, à différents degrés, au développement de cette anémie. La production massive de cytokines induit une altération du métabolisme du fer (avec rétention du fer dans le système réticulo-endothélial), une altération de la prolifération des précurseurs érythroïdes, une réduction de la demi-vie des globules rouges et une diminution de la synthèse d'érythropoiétine (EPO). Dans le but d'étudier les relations entre érythropoïèse, inflammation et anémie prolongée, nous avons, au cours de ce travail, développé un modèle murin d'anémie chronique par injection de Zymosan, associé ou non à des injections d'Epo. Nos résultats montrent que l'inflammation réprime l'érythropoïèse médullaire même en présence d'injection d'Epo. En revanche, la rate semble devenir l'organe érythropoïétique majeur capable de produire de nouveaux érythrocytes en réponse à l'injection d'Epo, mécanisme appelé "érythropoïèse de stress". Cette réponse de compensation est le résultat d'une part d'un microenvironnement unique de la rate avec synthèse de BMP4 par les macrophages de la pulpe rouge, et d'autre part de précurseurs érythroïdes spécifiques résidents dans la rate. Ce mécanisme permet une correction partielle de l'anémieThe anemia of chronic disease is the most frequent anemia in hospitalized patients for different diseases : infections, auto-immune disorders and cancers. Several physiopathological features may contribute to the development of anemia of chronic desease. The massive cytokines production induces disturbances of iron metabolism (retention of iron within the reticulo-endothelial system), impaired proliferation of eruthroid progenitors, reduced life span of red blood cells and reduced erythropoietin (Epo) synthesis. In order to study relationship between erythropoiesis inflammation and prolonged anemia, we have developed a mice model of chronic anemia based on Zymosan injection associated or not to erythropoietin injections. Our results show that inflammation represses bone marrow erythropoiesis even if Epo is injected. In contrast, the spleen seems to be the major erythropoietic organ able to produce new erythrocytes in response to Epo injection, a mechanism known as "stress erythropoiesis". This compensatory process is the result of a microenvironment unique to the spleen with BMP4 synthesis by red pulp macrophages and specific resident spleen erythroid precursors. This process allows partial recovery of anemia
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Garçon, Loïc. "Mécanismes physiologiques de l'érythropoïèse : de STAT5 à Gfi-1B." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077245.
Full textAbstract:
L'érythropoïèse est un processus finement régulé dont la phase terminale est essentiellement sous la dépendance de l'érythropoïétine (EPO). Cette hormone, en activant son récepteur spécifique à la surface des érythroblastes, active de nombreuses voies de signalisation intracellulaire impliquées dans la prolifération, la survie et la différenciation érythroïde. Nous avons observé que l'activation de la voie STAT5 ou encore que la présence de Bel-XL, molécule anti-apoptotique activée par STAT5 au cours de l'érythropoïèse, sont nécessaires et suffisantes pour induire une différenciation érythroïde en l'absence d'EPO. Parallèlement, nous avons identifié par analyse comparative de banques d'expression un facteur de transcription, GfMB, dont l'expression prédomine dans le lignage érythroïde. Nous avons montré par modulation de son expression dans des lignées leucémiques et dans les cellules primaires humaines que GfMB jouait un rôle crucial dans l'induction de la différenciation érythroïde terminaleRegulation of erythropoiesis is totally dependent on erythropoietin (EPO). After binding to its receptor, EPO activates many transduction pathways implicated in cell prolifération, survival and differentiation. We observed that either expression of a constitutively active form of STAT5 or overexpression of its anti-apoptotic target Bel-XL were sufficient for induction of erythroid differentiation in human primary cells. In parallel, using a comparative analysis of cDNA libraries, we identified the transcription factor Gfi-1B as preferentially expressed in erythroid cells. We observed that a knock-down of Gfi-1B delayed the terminal differentiation of K562 and primary cells. In contrast, forced expression of Gfi-1B in UT7 and K562 cells led to induction of erythroid differentiation. We concluded that Gfi-1B played a critical role in terminal differentiation of human erythroid progenitor cells
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Raimbault, Anna. "Le ribosome au cours de l'érythropoïèse." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCB251.
Full textAbstract:
La biogenèse du ribosome est un processus indispensable à la prolifération cellulaire car elle permet la synthèse protéique assurant la croissance avant la division cellulaire. Les ribosomopathies telles que le syndrome myélodysplasique 5q- et l’anémie de Blackfan-Diamond sont dues respectivement à une mutation d’un gène codant une protéine ribosomique (RP) et à l’haploinsuffisance en RPS14, RP de la petite sous-unité du ribosome. Les patients atteints de l’une de ces ribosomopathies présentent un défaut de l’érythropoïèse suggérant que celle-ci est particulièrement dépendante du ribosome. L’érythropoïèse est le processus qui permet la formation de globules rouges à partir de cellules souches hématopoïétiques et consiste en différents stades de différenciation appelés érythroblastes. C’est dans ce contexte que je me suis intéressée au ribosome au cours de l’érythropoïèse. Dans un premier temps, nous avons caractérisé la biogenèse du ribosome dans des cellules érythroïdes primaires humaines et murines. Pour cela nous avons adapté une technique de SILAC pulsé et mis au point la ribomique, technique de protéomique permettant l’analyse de la biogenèse du ribosome dans des échantillons de cellules primaires basée sur l’identification presque exhaustive des protéines ribosomiques. À l’aide de la ribomique et par d’autres techniques, nous avons mis en évidence une diminution de la biogenèse du ribosome après le stade érythroblaste basophile. Nous avons également montré que cette biogenèse du ribosome est en partie sous le contrôle de la voie mTORC1 régulée par les deux cytokines fondamentales de l’érythropoïèse : le Stem Cell Factor (SCF) et l’érythropoïétine (EPO). L’expression par l’érythroblaste des récepteurs des deux cytokines permet une biogenèse du ribosome optimale. L’inhibition de la biogenèse du ribosome par le CX-5461, inhibiteur spécifique de l’ARN polymérase I, ou par la rapamycine, inhibiteur de mTORC1, entraîne une accélération de la différenciation érythroïde soulignant un rôle de la biogenèse du ribosome au cours de l’érythropoïèse. L’inhibition de la voie mTORC1 modifie l’ordre de clivage de l’ARNr, reflet d’une modification de sa maturation. Les expériences de ribomique dans les érythroblastes humains ont également permis de mettre en évidence la présence de paralogues de RP et la sous-représentation de certaines RPs au sein des ribosomes suggérant une hétérogénéité des ribosomes dans les érythroblastes humains. Parallèlement, un modèle mimant le syndrome 5q- a été développé par une approche shRPS14 dans une lignée humaine érythroleucémique dépendante de l’EPO. L’inhibition de RPS14 entraîne un défaut de biogenèse de la sous-unité 40S du ribosome aboutissant à une diminution des ribosomes entiers formés et une diminution de la traduction globale. Cependant une traduction est maintenue. Le défaut de biogenèse de la sous-unité 40S entraîne une augmentation de la quantité de c-KIT, récepteur du SCF et une diminution de la quantité de GATA1, facteur de transcription spécifique de l’érythropoïèse. Nous avons mis en évidence que la diminution de GATA1 est due à une diminution de sa traduction tandis que la traduction d’autres protéines est conservée dans ce contexte d’altération de la biogenèse du ribosome. Nous avons ensuite réalisé une analyse des transcrits présents dans les fractions polysomales correspondants à la traduction la plus efficace. Nous avons montré grâce à ce traductome que les propriétés thermodynamiques des parties 5’ et 3’UTR des ARNm modulent leur traduction dans le contexte d’inhibition de RPS14. Ces données suggèrent que l’altération de la biogenèse du ribosome peut aboutir à une modification du programme traductionnel. Ce travail montre que la biogenèse du ribosome diminue au cours de l’érythropoïèse et participe à la différenciation érythroïde. La voie mTORC1 participe au contrôle de cette biogenèseRibosome biogenesis is a key event allowing cell growth before division. Defective RB recognized in ribosomopathyinherited Diamond-Blackfan anemia and 5q- syndrom. In this study, we aimed at investigating the regulatory role of RB during the erythroid precursor maturation which is characterized by a cell size reduction during 2 to 3 rapid cell divisions. We used two in vitro systemsé of expansion and differentiation of erythroblasts (E.) derived of immature hematopoietic progenitors from human mobilized peripheral blood or mouse fetal liver. The expansion step is supported by the Stem Cell Factor (SCF) and the second step depends on erythropoietin (EPO). The structure of the nucleolus was studied by electron microscopy. Compared to immature proerythroblasts (proE), a dramatic size reduction and change in nucleolar structure (ie. the disappearance of fibrillar and dense fibrillar components) is observed at the stage of mature polychromatophilic E. suggesting a loss of functionality. RB was measured by a pulsed SILAC (Stable Isotopic Labeling by Amino acids in Culture cell) proteomic assay that quantified the incorporation of newly synthesized ribosomal proteins in the ribosome. Both in mouse and human models, immature proE expanded upon SCF and EPO demonstrate a maximal RB with a renewal rate of 60% and 50% every 14h and 24h, respectively. By contrast, RB rapidly interrupted with the disappearance of proE and basophilic E after the switch to EPO alone. Consistently, the quantities of ribosomal RNA (rRNA) 45S precursor estimated by qPCR are maximal in proE and almost null in orthochromatophilic E. Inhibition of RB at proE stage by RNApol I specific inhibitor (CX-5461) accelerates the onset of terminal erythroid differentiation suggesting that RB is a rate limiting factor for final maturation. We then hypothesize that degree of signaling intensity in response to SCF and EPO may control the level of RB. To address this question, we investigated the mTORC1 (mechanistic Target Of Rapamycin Complex 1) pathway which is directly involved in RB through its substrate p70S6Kinase. Activation of P-p70S6Kinase and P-Rps6, as well as ribosome renewal, are twice more elevated in response to SCF and EPO than to EPO alone. Furthermore, inhibition of mTORC1/p70S6K/Rps6 pathway by rapamycin disrupts RB and leads to an acceleration of terminal erythroid differentiation.This study demonstrates that the collapse of RB promotes erythroid cell terminal maturation and shows the regulatory role of mTORC1 pathway on RB during erythropoiesis
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Loufrani, Jane. "Valeur des paramètres réticulocytaires : mesures par cytométrie en flux pour le suivi des sorties d'aplasie après chimiothérapie ou greffe de moe͏̈lle osseuse." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P108.
Full text
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Aguissa, Toure Almass-Houd. "Bases moléculaires de l'anémie de Diamond-Blackfan : étude structure-fonction de la protéine ribosomique RPS19 chez Saccharomyces cerevisiae." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/427/.
Full textAbstract:
L'anémie de Diamond-Blackfan (ADB) est une érythroblastopénie congénitale rare associée à des mutations mono-alléliques dans plusieurs gènes de protéine ribosomique. Cette liaison suggère une relation causale entre l'altération de la biogenèse ou de la fonction des ribosomes et cette pathologie. Le gène RPS19 est le plus fréquement muté (25% des patients). Pour comprendre l'impact des mutations, en particulier les mutations ponctuelles faux-sens, nous avons engagé une étude structure-fonction de l'homologue de la protéine RPS19 chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Parallèlement, nous avons mené un travail collaboratif pour déterminer la structure cristalline de l'homologue de RPS19 de l'archeae Pyrococcus abyssi. Nos résultats distinguent deux types de mutations : certaines, enfouies dans la structure, affectent le repliement et la stabilité de la protéine, tandis que d'autres, en surface de la protéine, inhibent l'incorporation de RPS19 dans les particules pré-ribosomiques 40S. Par ailleurs, nous avons déterminé la séquence de localisation nucléaire et les déterminants moléculaires de l'adressage nucléaire de RPS19. Les différentes mutations de RPS19 n'interfèrent pas avec ce mécanisme de transport. Ainsi, les mutations faux-sens de la protéine RPS19 affectent en premier lieu la capacité de la protéine à être incorporée dans les pré-ribosomes, ce qui altère la biogenèse des ribosomes. Ceci pourrait d'une part activer une réponse de stress et d'autre part conduire à un déficit en ribosomes, deux facteurs qui pourraient être fatals dans certains processus physiologiques comme l'érythropoïèse. Ce mécanisme peut être étendu à toute protéine ribosomique mutée dans l'ADBDiamond-Blackfan Anaemia (DBA) is a rare congenital erythroblastopenia associated with mono-allelic mutations in several ribosomal protein genes. This linkage suggests a causal relationship between alteration of ribosome biogenesis or functions and this pathology. ?The RPS19 gene is the most frequently mutated (25% of patients). To understand the impact of the mutations, especially missense mutations, we undertook a structure-function study of RPS19 homolog in yeast Saccharomyces cerevisiae and we conducted a collaborative work to determine the crystal structure of archeae Pyrococcus abyssi RPS19. Our results distinguish two types of mutations: some affect residues buried in the structure and alter the protein folding and stability, while others change amino acids at the protein surface and prevent incorporation of RPS19 into 40S pre-ribosomal particles. In addition, we determined the nuclear localization sequence and the molecular determinants of RPS19 transport to the nucleus. Mutations linked to DBA do not interfere with the nuclear localization of the protein. Thus, missense mutations in RPS19 primarily affect the ability of the protein to be incorporated into pre-ribosomes, which alters ribosome biogenesis. This could on the one hand activate a stress response and on the other hand lead to ribosome shortage, two events that could be fatal to some physiological processes like erythropoiesis. A similar mechanism can be proposed for any ribosomal protein mutated to the DBA
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Iturri, Torrea Lorea. "Building a hierarchical tree of erythro-myeloid progenitor (EMP)-derived haematopoiesis." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2020. http://www.theses.fr/2020SORUS108.
Full textAbstract:
Les progéniteurs érythro-myéloïdes (EMP) sont des progéniteurs hématopoïétiques restreints au développement qui produisent les premières cellules hématopoïétiques définitives de l'embryon. Surtout, ils donnent naissance aux mastocytes et macrophages résidents qui colonisent les différents organes pendant la gestation et s’auto-renouvellent pendant la vie adulte sans apport de la moelle osseuse. Ces cellules sont des cellules immunitaires spécialisées qui contribuent à l'homéostasie des tissus aussi bien dans les tissus sains que suite à des blessures ou des infections. Ce projet de doctorat visait à caractériser la contribution des EMP au système hématopoïétique de l'embryon, avec un accent particulier sur leur niche d'origine, le sac vitellin. En utilisant des modèles génétiques de souris, la cytométrie de flux à paramètres élevés et l'analyse de l'expression au niveau unicellulaire, ce projet i) caractérise les principales populations de progéniteurs définitifs dans le sac vitellin, ii) identifie une nouvelle voie de mégacaryopoïèse directe à partir des EMP et iii) découvre deux vagues de potentiel EMP émergeant à des stades différents du développement. Ce projet a pour but de mieux comprendre la complexité de l'hématopoïèse embryonnaire et pourrait avoir des implications sur les études d'ontogenèse des macrophages et les troubles myéloprolifératifs infantilesErythro-myeloid progenitors (EMP) are developmentally restricted hematopoietic progenitors that produce the first definitive hematopoietic cells in the embryo. Importantly, it has been shown that they give rise to tissue-resident macrophages and mast cells that colonize organs during gestation and self-maintain during adult life without contribution from the bone marrow. These cells are specialized immune cells that contribute to the homeostasis of the tissues throughout steady state and tissue challenge (wounds or infections). This PhD project aimed to characterise the contribution of EMPs to the hematopoietic system of the embryo, with special focus to their niche of origin, the yolk sac. With the use of genetic mouse models, high parameter flow cytometry and single cell expression analysis, this project i) characterises the major definitive progenitor populations in the yolk sac, ii) identifies a novel pathway of direct megakaryopoiesis from EMPs and iii) uncovers two waves of EMP potential emerging at different stages. This work sheds light on the poorly characterised early definitive embryonic haematopoiesis and could have potential implications on macrophage ontogeny studies and early childhood myeloproliferative disorders
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Bouyssou, Isabelle. "Deciphering Plasmodium vivax invasion pathway(s) in Duffy-negative patients." Electronic Thesis or Diss., Sorbonne université, 2023. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2023SORUS180.pdf.
Full textAbstract:
Le paludisme à Plasmodium vivax est une maladie infectieuse causée par le parasite protozoaire Plasmodium vivax et transmise par les moustiques femelles Anopheles. Cette maladie est prévalente en Amérique, Asie, Moyen-Orient, Pacifique, Afrique du Nord-Est et Afrique du Sud mais demeure rare en Afrique sub-saharienne. Historiquement, la maladie était considérée bégnine et peu dangereuse du fait de l'observation de faibles parasitémies chez les patients Duffy-positifs et de l'absence virtuelle d'infections chez les individus Duffy-négatifs. Des études ont montré que les individus d'origine africaines ou afro-américaines étaient naturellement résistants à P. vivax. Les parasitologistes pensaient que cela était dû à l'absence de récepteurs Duffy Antigen Receptor for Chemokines (DARC) à la surface de leurs érythrocytes. Ensuite, l'identification du ligand P. vivax Duffy Binding Protein (PvDBP) spécifique à DARC et la preuve de l'importance de l'interaction PvDBP-DARC dans le mécanisme d'invasion ont conduit à l'établissement d'un paradigme scientifique selon lequel les mérozoïtes de P. vivax envahissent exclusivement les érythrocytes Duffy-positifs. La recherche sur le paludisme à P. vivax a donc longtemps été négligée et d'importantes lacunes demeurent. Cependant, le nombre de cas de paludisme à P. vivax stagne dans certains pays et un nombre croissant de cas d'infection chez des patients Duffy-négatifs est reporté en Afrique. Cela a soulevé des interrogations quant aux mécanismes d'invasion de P. vivax. Une première hypothèse est que le parasite a évolué vers un nouveau mécanisme d'invasion outrepassant la Duffy-négativité. Alternativement, une seconde hypothèse est que les populations Duffy-négatives ont toujours représenté un réservoir silencieux et insidieux d'infection. Mon projet de thèse vise à décrypter les mécanismes d'invasion de P. vivax chez les patients Duffy-négatifs. 1.Etude bibliographique: comprendre le contexte et les enjeux liés à l'émergence du paludisme à P. vivax en Afrique sub-saharienne et étudier les connaissances actuelles sur les mécanismes d'invasion de P. vivax obtenues grâce aux technologies omiques. 2.Etude d'épidémiologie moléculaire: comprendre l'épidémiologie du paludisme à P. vivax en Ethiopie, disséquer le génome d'isolats de P. vivax circulant en Afrique sub-saharienne et rechercher une signature moléculaire de l'invasion via des techniques de séquençage. 3.Etude fonctionnelle: caractériser les érythroblastes Duffy-négatifs pendant leur différentiation et évaluer la capacité des mérozoïtes de P. vivax à les envahir via des essais fonctionnels in vitro. Les résultats de l'étude bibliographique ont montré que, malgré de récentes avancées, la recherche sur le paludisme à P. vivax est entravée par le manque de données scientifiques et de techniques expérimentales. Par ailleurs, les résultats des études d'épidémiologie moléculaire ont révélé que les souches de P. vivax se regroupent en clusters géographiques. Mais ils n'ont pas permis d'identifier une association entre la diversité génétique des souches de P. vivax et une adaptation aux hôtes humains Duffy-négatifs. Ce qui suggère que les parasites P. vivax n'ont pas évolué vers une voie d'invasion alternative pour infecter les patients Duffy-négatifs. En fait, les résultats de l'étude fonctionnelle ont démontré qu'une sous-population d'érythroblastes Duffy-négatifs est capable d'exprimer la protéine fonctionnelle DARC, et que les mérozoïtes P. vivax sont capables de les envahir. Ainsi, l'ensemble de ces travaux de recherche va à l'encontre du paradigme scientifique établi selon lequel les mérozoïtes de P. vivax envahissent exclusivement les érythrocytes Duffy-positifs et supporte l'hypothèse que les populations africaines Duffy-négatives représentent un réservoir silencieux et insidieux d'infection. Ce qui entraine d'importantes conséquences pour le contrôle et l'éradication du paludisme à P. vivax en Afrique sub-saharienneVivax malaria is an acute debilitating illness caused by the parasitic protozoan Plasmodium vivax and transmitted by female Anopheline mosquitoes. It is mainly prevalent in America, South-East Asia, Middle East, Western Pacific, Eastern Africa, and Southern Africa but considered rare in Sub-Saharan Africa. Historically, the disease has often been regarded as a benign self-limiting infection. This is due to the observation of low parasitemia in Duffy-positive patients and virtual absence of infections in Duffy-negative individuals. Indeed, previous studies showed that individuals with African and African American origins were naturally resistant to P. vivax. Parasitologists thought that this resistance was due to the absence of Duffy Antigen Receptor for Chemokines (DARC) on the surface of their erythrocytes. Subsequently, the identification of the ligand P. vivax Duffy Binding Protein (PvDBP) specific to DARC and the evidence that the interaction PvDBP- DARC was crucial for invasion led to a scientific paradigm by which P. vivax merozoites exclusively invade Duffy-positive erythrocytes. Consequently, research on vivax malaria has long been neglected and many knowledge and tool gaps remain to be filled. However, since a few years, the stagnating burden of the disease in many countries associated with the increasing report of P. vivax infections in Duffy-negative patients raised questions about P. vivax invasion pathways. A first hypothesis was that P. vivax may have evolved to a new invasion pathway that would overcome Duffy-negativity. Alternatively, a second hypothesis was that Duffy-negative populations may have always been a silent and insidious reservoir of infection which had previously gone unnoticed. My thesis project aimed at deciphering Plasmodium vivax invasion pathways in Duffy-negative patients. 1.Bibliographical study: understand the global context and key issues of the presence of vivax malaria in Sub-Saharan Africa and review current knowledge on P. vivax invasion pathways through the lens of omics technologies. 2.Molecular epidemiological study: understand vivax malaria epidemiology in Ethiopia, dissect the genome of P. vivax strains circulating in Sub-Saharan Africa and search for potential molecular signature in genes encoding proteins involved in P. vivax invasion pathways using next generation sequencing techniques. 3.Functional study: characterize Duffy-negative erythroblasts during terminal erythroid differentiation and assess the ability of P. vivax merozoites to invade Duffy-negative erythroblasts by developing reproducible in vitro functional assays. Findings of the bibliographical study showed that despite the recent advances of omics technologies, key knowledge and tool gaps remain in vivax malaria research. Besides, findings of the molecular epidemiological studies revealed that P. vivax strains cluster in distinct geographic clusters. However, these findings did not reveal any association between genetic diversity and adaptation to Duffy-negative human hosts. This suggests that the parasites did not evolve towards an alternative invasion pathway. In fact, findings of the in vitro functional study demonstrated that a subset of Duffy-negative erythroblasts can express functional DARC during terminal erythroid differentiation and that P. vivax merozoites can invade them. Taken together, these findings contrast with the established scientific paradigm by which P. vivax merozoites exclusively invade Duffy-positive erythrocytes and support the assumption that African Duffy-negative populations may be a silent and insidious reservoir of infection, with all the consequences that this entails for the control and eradication of vivax malaria in Sub-Saharan Africa
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Montanari, Pierre. "Étude des kinases PIMs dans l’érythropoïèse normale et pathologique." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2017. http://www.theses.fr/2017USPCB094.
Full textAbstract:
L’érythropoïèse désigne l’ensemble des phénomènes de prolifération et de maturation qui permettent d’obtenir les globules rouges à partir de cellules souches médullaires. C’est un processus de différenciation continue qui génère des cellules érythroïdes de plus en plus matures. L’érythropoïétine (EPO) est le principal régulateur de l’érythropoïèse. En effet, il est indispensable à la survie et à la prolifération des progéniteurs érythroïdes et des précurseurs érythroblastiques. Le rôle des Pims kinases dans la régulation de l'érythropoïèse n’a pas été étudié bien qu’il ait été montré que les souris invalidées pour les trois gènes de la famille Pim présentent une anémie. De plus, une forte diminution du nombre de progéniteurs érythroïdes est observée chez les souries invalidées pour le gène Pim2 et Pim1, suggérant l’importance de cette kinase dans l’érythropoïèse murine. Aucune étude n’a été réalisée pour comprendre le rôle des PIMs dans l’érythropoïèse humaine. Nous avons donc cherché à comprendre l'implication des PIMs kinases dans l'érythropoïèse normale humaine. Nous avons pu montrer que les PIMs kinases sont exprimées dans des érythroblastes humains normaux. En effet, elles sont fortement exprimées en début de différenciation et leur expression diminue au cours de la maturation terminale. Nous avons mis en évidence que l'expression des trois PIMs est régulée au niveau transcriptionnel par l'EPO. Nous avons également montré que les PIMs kinases régulent positivement la prolifération des cellules érythroïdes immatures. Nous avons aussi observé qu'elles soutiennent l'expression du récepteur de la transferrine (TFR1) à la surface des érythroblastes immatures. TFR1 est important pour les érythroblastes car il permet de faire entrer le fer dans ces cellules, où il est intégré dans l’hème permettant la synthèse de l'hémoglobine. L'hémoglobine est nécessaire à la fonction du globule rouge dans le transport de l'oxygène ainsi que pour l'oxygénation des cellules. Ensuite, nous avons voulu étudier le rôle de chacune de ces trois kinases dans les érythroblastes. Nous avons mis en évidence que la kinase PIM2 joue un rôle clef dans l'érythropoïèse normale en étant indispensable à la survie des cellules érythroïdes. Au niveau moléculaire, l’inhibition de PIM2 ne modifie pas la balance des facteurs pro et anti-apoptotiques mais entraîne des dommages à l’ADN. L'apparition de ces dommages est suivie d'une induction de l'apoptose cellulaire. Dans une pathologie comme la Maladie de Vaquez (MV), nous avons mis en évidence que l'inhibition des PIMs diminue le nombre et la taille des colonies érythroïdes, entraîne la diminution de prolifération cellulaire et aussi, pour certains patients, l'apoptose de leurs cellules. Nos résultats mettent donc en évidence que les PIMs sont importantes dans l’érythropoïèse normale humaine et que les inhibiteurs des PIMs pourraient être un traitement alternatif aux traitements classiques dans la MVErythropoiesis encompasses both the proliferation and maturation of bone marrow stem cells, leading to the production of Red Blood Cells (RBCs). It is a process of continuous differentiation that generates more and more mature erythroid cells. Survival and proliferation of erythroid progenitors and erythroblastic precursors is dependent on the cytokine Erythropoietin (EPO), which is the main regulator of erythropoiesis. The PIMs kinases are proto-oncogenes involved in survival and proliferation, whose family is comprised of three members in Humans. The role of PIMs kinases in the regulation of erythropoiesis has not been studied, although it has been shown that mice knocked out for all three genes of the PIM family have anemia. In addition, a sharp decrease in the number of erythroid progenitors is observed in mice knocked out for both the Pim2 and Pim1 gene. All in all, it suggests the importance of these kinases in murine erythropoiesis, and may be also relevant in human erythropoiesis. Therefore, we sought to understand the involvement of PIMs kinases in normal human erythropoiesis. We have been able to show that PIMs kinases are expressed in normal human erythroblasts. Indeed, they are strongly expressed at the beginning of the erythroid differentiation, and their expression decreases during terminal maturation. We have shown that the expression of the three PIMs kinases is regulated at the transcriptional level by EPO. We also have shown that PIMs kinases positively regulate the proliferation of immature erythroid cells. We observed that they support the expression of the transferrin receptor 1 (TFR1) on the surface of immature erythroblasts. TFR1 is crucial for erythroblasts as it allows iron to enter these cells, where it is used for hemoglobin synthesis. Hemoglobin is absolutely required for RBCs function as oxygen transporters, responsible for the oxygenation of the whole organism. Then, we wanted to study the role of each of these three kinases in erythroblasts. We have shown that PIM2 kinase plays a key role in normal erythropoiesis by being essential for the survival of erythroid cells. At the molecular level, inhibition of PIM2 does not alter the balance of pro- and anti-apoptotic factors, but results in damages to DNA. The appearance of these damages is followed by an induction of cellular apoptosis. In a pathology such as Polycythemia Vera (PV), we have demonstrated that the inhibition of PIMs decreases both the number and the size of erythroid colonies. It also slows down cell proliferation, and for some patients, it induces cellular apoptosis. Our results highlight that PIMs are important in human normal erythropoiesis and that inhibitors of PIMs could be an alternative to conventional treatments in PV
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El, Hoss Sara. "Novel insights into the role of fetal hemoglobin in spleen function, red cell survival and ineffective erythropoiesis in sickle cell disease." Thesis, Université de Paris (2019-....), 2019. https://theses.md.univ-paris-diderot.fr/ELHOSS_Sara_va2_20190924.pdf.
Full textAbstract:
La drépanocytose est une maladie génétique héréditaire récessive causée par la substitution d'un acide aminé dans la chaîne β-globine aboutissant à la production d'hémoglobine anormale (HbS). Dans des conditions hypoxiques, l’HbS polymérise entraînant une falciformation et une perte de déformabilité des globules rouges (GR). Au cours de la drépanocytose, le dysfonctionnement splénique entraîne des complications potentiellement mortelles, en particulier chez les jeunes enfants. Généralement, une asplénie fonctionnelle précède la survenue d’une asplénie anatomique avec cependant une grande variabilité inter-individuelle du fait de facteurs modulateurs génétiques et environnementaux. L’hémoglobine fœtale (HbF) est le principal modulateur de la gravité de la maladie, car la présence d’HbF inhibe la polymérisation d’HbS, retardant et prévenant ainsi les complications graves, améliorant la qualité de vie des patients et augmentant leur survie. Il existe une hétérogénéité assez bien caractérisée de la concentration et de la distribution cellulaire d'HbF dans les GR circulants, mais le rôle de l'HbF au cours de l'érythropoïèse est mal documenté.Dans le but de mieux comprendre le rôle de l’HbF dans la perte de fonctionnalité splénique, la survie des GR et l'érythropoïèse inefficace, nous avons étudié 1) l'histoire naturelle du dysfonctionnement splénique chez les enfants drépanocytaires, 2) l'expression cellulaire et la distribution de l'HbF comparativement chez les enfants, chez les patients naïfs et ceux traités par hydroxycarbamide (HC) et 3) le rôle de l'HbF au cours de l'érythropoïèse terminale.Nous avons d’abord développé une méthode de cytométrie en flux à haut débit pour mesurer la fonction de filtration splénique et avons montré que la perte de fonction splénique est présente très tôt dans la vie, dès 3 à 6 mois chez les enfants drépanocytaires, puis diminue avec l'âge. Nous avons également mis en évidence que les cellules irréversiblement falciformées (ISC) jouaient un rôle dans la survenue de la séquestration splénique aiguë, laquelle entraîne à son tour une perte supplémentaire de fonction. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons mis en place une approche originale pour déterminer la distribution d'HbF à l’échelle cellulaire. En utilisant une cohorte longitudinale de patients traités par HC (inducteur d'HbF), nous avons montré que celui-ci avait un impact positif global sur les GR, en augmentant non seulement le contenu en HbF, mais également le volume de tous les GR, indépendamment de leur contenu en HbF. Nous avons par ailleurs montré que les cellules riches en HbF (High-F) étaient un marqueur précis d’efficacité de l'HC. Dans la dernière partie de la thèse, nous avons démontré pour la première fois une érythropoïèse inefficace chez les patients drépanocytaires et avons révélé un nouveau rôle de l'HbF au cours de l'érythropoïèse terminale, celui de protéger les érythroblastes de l'apoptose.En conclusion, ce travail montre que l'HbF a un effet bénéfique supplémentaire sur la drépanocytose en conférant non seulement une survie préférentielle des cellules F dans la circulation, mais en diminuant également l'érythropoïèse inefficace. Ce résultat suggère que la persistance d’HbF dans la drépanocytose serait davantage la conséquence d’un enrichissement en F-érythroblastes au cours de la différenciation érythroïde terminale survenant peu après la naissance plutôt qu’un retard du switch des hémoglobinesSickle cell disease (SCD) is caused by a single point mutation in the β-globin gene generating sickle hemoglobin (HbS). Hypoxia drives HbS polymerization that is responsible for red blood cell (RBC) sickling and reduced deformability. In SCD, splenic dysfunction results in life-threatening complications, particularly in early childhood. During the course of the disease, the spleen functionally declines and anatomically disappears, although with great individual variability depending on modulating genetic and environmental factors. The key modulator of disease severity is fetal hemoglobin (HbF), as the presence of HbF inhibits HbS polymerization, thus delaying and preventing severe complications, ameliorating patients’ quality of life and increasing survival. There is a rather well characterized hetero cellular concentration of HbF and distribution in circulating RBCs but the role of HbF during erythropoiesis, is poorly documented. With the aim of better understanding the role of HbF in spleen function, red cell survival and ineffective erythropoiesis we investigated 1) the natural history of spleen dysfunction in SCD children, 2) the cellular expression and distribution of HbF in SCD children, in untreated patients and patients treated with Hydroxycarbamide and 3) ineffective erythropoiesis and the role of HbF during terminal erythropoiesis.We developed a flow cytometry high-throughput method to measure splenic filtration function and showed that splenic loss of function is present very early in life at 3-6 months in SCD children and further declines with age. We also highlighted that irreversibly sickled cells (ISCs) are a potential contributor to acute splenic sequestration (ASS) which in turn results in further loss of splenic function. In the second part of this work, we set up an original approach to determine HbF distribution per cell. Using a longitudinal cohort of patients treated with hydroxycarbamide (HC - an inducer of HbF), we showed that HC has a global positive impact on RBCs, by not only increasing HbF content but also by increasing the volume of all RBCs independent of HbF. We moreover showed that High F-cells are a more precise marker of HC efficacy. In the last part of the thesis, we showed for the first time clear evidence of ineffective erythropoiesis in SCD and revealed a new role of HbF during terminal erythropoiesis protecting erythroblasts from apoptosis. In conclusion, this work shows that HbF has an additional beneficial effect in SCD by not only conferring a preferential survival of F-cells in the circulation but also by decreasing ineffective erythropoiesis. Importantly, it suggests that the delay in hemoglobin switch in SCD might be also due to an enrichment in F-erythroblasts during terminal erythroid differentiation occurring very early in infancy, shortly after birth
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Ribeil, Jean-Antoine. "Hsp70 est un nouveau régulateur majeur de l'érythropoïèse empêchant le clivage du facteur de transcription GATA-1 par la caspase-3 au cours de la différenciation." Phd thesis, Université Paris-Diderot - Paris VII, 2010. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00451047.
Full textAbstract:
La production de globules rouges dépend du taux apoptose des précurseurs érythroïdes et est principalement régulé par l'érythropoïétine (Epo). La privation en Epo aboutit à l'activation de la caspase-3 (casp-3) qui clive GATA-1 ce qui entraîne l'apoptose des érythroblastes immatures. L'activation de la casp-3 est également indispensable aux modifications morphologiques caractéristiques observées au cours de la différenciation érythroïde terminale humaine, sans qu'il n'y ait ni d'apoptose ni de clivage de GATA-1. L'objectif de cette thèse était de mettre en évidence si Hsp70 inductible, dont un des rôles principaux est la régulation de l'apoptose, est impliquée dans la protection sélective des substrats de la casp-3 activée au cours de la différenciation érythroïde terminale humaine. Nous avons mis en évidence que lors de la différentiation érythroïde terminale pendant la phase d'activation des caspases, Hsp70 a une expression nucléo-cytoplasmique constitutive et co-localise avec GATA-1 dans le noyau. La localisation nucléaire d'Hsp70 est régulée par l'Epo : après privation des cellules en Epo, il y a une importante diminution de la localisation nucléaire d'Hsp70 et GATA-1 est clivée. L'inhibition de l'expression d'Hsp70 par une approche siRNA a comme conséquence le clivage de GATA-1 lors de l'activation de la casp-3 avec un arrêt de différenciation et une augmentation de la mort cellulaire. Hsp70 est une nouvelle protéine anti-apoptotique de la différenciation érythroïde terminale. Nous proposons un modèle dans lequel l'Epo détermine le destin des érythroblastes (apoptose vs différenciation) en aval de la casp-3 en régulant la localisation nucléaire d'Hsp70.
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Houdiard, Soizic. "Rôle des ERKs dans la régulation de l'hématopoièse murine : étude de l'isoforme ERK1." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077089.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est un processus hautement régulé, initié au niveau des cellules souches hématopoïétiques (CSHs) et dont la régulation est assurée à travers une hiérarchie cellulaire. Ceci implique un mécanisme de régulation dynamique des fonctions des CSHs et de leur descendance. Les ERKS sont des acteurs clés de la régulation de la prolifération et de la différenciation dans de nombreux types cellulaires, suggérant un rôle important dans l'hématopoïèse qui n'a pas encore été étudié in vivo. L'étude des souris ERK1 ̄/ ̄ a mis en évidence une splénomégalie, caractérisée par une accumulation de progéniteurs érythroïdes et une augmentation du nombre d'érythroblastes immatures. L'activation de la voie de signalisation BMP4 permet la mise en place d'une érythropoïèse splénique et le développement de BFU-Es de stress. Dans les souris ERK1 ̄/ ̄ nous avons observé une forte augmentation du nombre de BFU-E de stress et de l'ARNm codant pour BMP4. Notre étude nous a donc permis de démontrer que ERK1 régule l'érythropoïèse splénique par son action sur l'expression de BMP4. De plus, l'étude de l'hématopoïèse médullaire a montré une augmentation du nombre de CSHs ainsi qu'un défaut de différenciation granulo-macrophagique dans les souris ERK1 ̄/ ̄. Des radiographies ont permis d'observer une augmentation de la densité osseuse dans des souris ERK1 ̄/ ̄, suggérant une ostéopétrose. Les mécanismes mis en jeu seront caractérisés par des expériences de transplantation de CSHs, par l'analyse de la différenciation monocytaire et mégacaryocytaire et par l'étude de l'ostéogénèseHematopoiesis is a highly regulated process, initiated by hematopoietic stem cells (HSCs), which implies a dynamic regulation of the functions of HSC and its descent. The ERKs kinases are keys regulators of proliferation and differentiation of different cells types. Their role could be important in hematopoiesis and have not been studied in vivo yet. We have examined the role of ERK1 in adult hematopoiesis in ERK1 ̄/ ̄ mice. Loss of ERK1 resulted in an enhanced splenic erythropoiesis, characterized by an accumulation of erythroid progenitors and an enhanced number of immature erythroblasts in the spleen. Splenic stress erythropoiesis response has been shown to require BMP4-dependent signalling in vivo and to rely on the expansion of stress BFU-Es. A great expansion of stress BFU-Es and an increased level of BMP4 mRNA were found in ERK1 ̄/ ̄ spleens, suggesting that ERK1 controls a BMP4-dependent step, regulating thé steady state of splenic erythropoiesis. Study of medullar hematopoiesis had also show an enhanced numbers of HSCs and a defect in granulo-macrophagic differentiation in ERK1 ̄/ ̄ mice. X-Rays analysis of wild-type and ERK1 ̄/ ̄ mice allowed us to observe an enhanced bone density in ERK1 KO mice. So, loss of ERK1 induces osteopetrosis. Mechanisms involved will be caracterised by HSCs transplantation experiments, analysis of monocyte and megacaryocyte differentiation and by study of osteogenesis
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Maragno, Ana-Leticia. "Etude du rôle D'ISG15, une protéine apparentée à l'ubiquitine, au cours dela différentiation érythroide." Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA11T010.
Full textAbstract:
L’érythropoïèse constitue un processus continu et ordonné au cours duquel des progéniteursérythroides commis prolifèrent et se différencient en globules rouges. Au cours d’un criblage visant à identifierdes gènes dont l’expression est régulée au cours de la différenciation terminale, nous avons identifié ISG15comme un gène dont l’expression est induite dans les stades tardifs de la différenciation érythroïde. ISG15appartient à la famille des protéines apparentées à l’ubiquitine et est conjuguée directement à des résidus Lysinede protéines cibles. La séquence des évènements moléculaires qui président à la modification de résidus Lysinedes protéines par ISG15 (ISGylation) est très semblable à ceux mis en oeuvre dans l’ubiquitination des protéines.Nous avons montré que l’expression d’ISG15 et des enzymes liées au processus d’ISGylation Ube1L, UbcM8 etHerc6 est induite au cours de l’érythropoièse in vivo et aussi dans des érythroblastes en culture induits à sedifférencier en réponse à l’Epo. Grâce à ce système de culture in vitro, nous avons montré que l’induction de cesgènes est majoritairement indépendante de la voie de signalisation IFN, et partiellement dépendante de la voie designalisation Epo. La comparaison de l’érythropoïèse dans des souris contrôles et des souris dans lesquelles legène ISG15 a été inactivé (ISG15-/-), montre une diminution du nombre de progéniteurs BFU-E et CFU-E dansla moelle osseuse avec une augmentation des BFU-E/CFU-E dans la rate des animaux ISG15-/-. Nous avonsaussi montré que les érythroblastes ISG15-/- sont inhibés dans leur différenciation terminale, à la fois in vivo et invitro. A l’inverse, la surexpression d’ISG15 dans les érythroblastes se révèle faciliter la différenciationérythroide. Au niveau moléculaire, nous avons montré que des acteurs importants de la différenciation érythroidepeuvent être ISGylés, comme par exemple STAT5, Globine, PLCγ et ERK2. En ce qui concerne plusprécisément STAT5, nous avons montré que son ISGylation est induite au cours de la différenciation et avonscherché à identifier les conséquences de son ISGylation. Dans le contexte d’une protéine de fusion, STAT5ISGylée se lie mieux à son site de liaison à l’ADN, une propriété associée avec une régulation positive de TfR etBCL-XL, deux gènes précédemment décrits comme étant régulés par STAT5 dans les érythroblastes. L’ensemblede ces résultats établit un nouveau rôle pour ISG15 au cours de la différenciation érythroide, en plus de sesfonctions anti-virales bien caractériséesErythropoiesis is an orderly continuous process during which committed erythroid progenitorcells proliferate and differentiate into mature red blood cells. In a search for genes that are deregulated duringthis differentiation process, we have identified ISG15 as being induced during the late stages of erythroiddifferentiation. ISG15 belongs to the ubiquitin-like protein family and is covalently linked to target proteins bythe enzymes of the ISGylation machinery. Using both in vivo and in vitro differentiating erythroblasts, we haveshown that expression of ISG15 as well as the ISGylation process related enzymes Ube1L, UbcM8 and Herc6are induced during erythroid differentiation. Moreover, using in vitro differentiating erythroblasts, we haveshown that the induction of these genes is mostly independent of IFN signaling, while it is partially dependent onEpo signaling in these cells. Our analysis of the ISG15 deficient mice have shown a decreased number of BFUE/CFU-E in the bone marrow, associated with an increased number of these cells in the spleen of these animals,a phenotype reminiscent of stress erythropoiesis. While ISG15-/- bone marrow and spleen-derived erythroblastsshowed a less differentiated phenotype both in vivo and in vitro, over-expression of ISG15 in erythroblasts wasfound to facilitate erythroid differentiation. At the molecular level, we have shown that important effectors oferythroid differentiation can be ISGylated, including STAT5, Globin, PLCγ and ERK2. Attempt to identify theconsequences of ISGylation has only been performed for STAT5. When studied in the context of a fusionprotein, ISGylated STAT5 was found endowed with a higher capacity to bind DNA, a property associated withup-regulation of TfR and Bcl-XL, two genes previously described as being regulated by STAT5 during erythroiddifferentiation. This establishes a new role for ISG15, in addition to its well-characterized anti-viral functions,during erythroid differentiation
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Allard, Diane d'. "Erythropoïèse normale et pathologique, internalisation de c-Kit et morphologie du nucléole." Thesis, Paris 5, 2013. http://www.theses.fr/2013PA05S026/document.
Full textAbstract:
L’érythropoïèse est le processus aboutissant à la production des hématies à partir d’une cellule souche hématopoïétique. La différenciation érythroïde implique des changements morphologiques en partie liés à la perte d’expression membranaire du récepteur à activité tyrosine kinase de classe III, c-Kit. En réponse à son ligand, le SCF, c-Kit est activé puis internalisé et dégradé par la voie du protéasome, via l’ubiquitine E3-ligase c-Cbl, ou par la voie lysosomale suite à une endocytose. Dans la première partie de ce travail, nous avons pu mettre en évidence qu’en absence de SCF et en réponse à un inhibiteur de tyrosine kinase, l’imatinib, les érythroblastes cultivés ex vivo perdent l’expression membranaire de c-Kit et accélèrent leur entrée en différenciation terminale. Au vu de ces observations, nous avons cherché à comprendre les mécanismes impliqués. Sur un modèle de cellules érytholeucémiques dépendantes de l’érythropoïétine, mais exprimant de manière endogène c-Kit, nous avons montré que l’imatinib induit une internalisation du récepteur ainsi que sa dégradation par la voie lysosomale et de manière indépendant de c-Cbl. De plus, nous avons montré que cet effet est réversible et que l’imatinib ne bloque pas la réexpression de c-Kit après son internalisation en réponse au SCF. Des marquages métaboliques ont permis de montrer que l’imatinib ne modifie ni la synthèse ni la maturation de c-Kit et que le profil phospho-tyrosine des cellules traitées à l’imatinib est globalement inchangé. Enfin, nous avons montré que la fixation de l’imatinib à la poche catalytique de c-Kit est indispensable à son internalisation, et par conséquent à sa dégradation. Il apparait donc que l’imatinib lève l’auto-inhibition de c-Kit, qui semble nécessaire pour son maintien à la membrane. Dans la seconde partie de ce travail, nous nous sommes intéressés aux changements morphologiques subis par les nucléoles, lieu de la biogenèse des ribosomes, au cours de différenciation des érythroblastes. L’étude de la taille et du potentiel prolifératif des cellules, ainsi que l’analyse morphologique des nucléoles, nous a permis de confirmer que la réduction de taille des cellules est contemporaine d’un ralentissement de leur prolifération ainsi que de la réduction du volume et de la surface du composé granulaire (CG), « matrice » du nucléole. En microscopie électronique, nous montrons la persistance des CG en fin de maturation. Enfin, nous avons également étudié l’évolution des nucléoles dans un contexte pathologique de syndromes myélodysplasiques de faible risque, qui se caractérisent par une hématopoïèse inefficace. Nous observons que les cellules pathologiques immatures ont des CG plus volumineux que les cellules normales immatures, et qu’au cours de la différenciation, la morphologie des nucléoles est identique entre les cellules normales et pathologiques. En conclusion, ce travail a permis de décrire 1) le mécanisme d’internalisation d’un récepteur à activité tyrosine kinase de classe III, c-Kit par l’imatinib et 2) la morphologie du nucléole au cours de la différenciation érythroïde normale et pathologique des syndromes myélodysplasiques de faible risqueErythropoiesis is the process leading to the production of red blood cells from hematopoietic stem cell. The erythroid differentiation involves morphological cell changes, in part related to the loss of membrane expression of the type III receptor tyrosine kinase, c-Kit. In response to its ligand SCF, c-Kit is activated, then internalized and degraded by the proteasome pathway via the E3 ubiquitin ligase c-Cbl, or by the lysosomal pathway, after endocytosis. In the first part of this work, we demonstrated that in the absence of SCF and in response to tyrosine kinase inhibitor, imatinib, erythroblasts cultured ex vivo, lose membrane expression of c-Kit and accelerate their terminal differentiation. In view of these observations, we sought to understand the mechanisms involved. On an erythropoietin dependent cell line expressing c-Kit at the membrane, we showed that imatinib induces receptor internalization and degradation by the lysosomal pathway, independently of c -Cbl. Furthermore, we showed that this effect is reversible and that imatinib does not block the c-Kit re-expression after its internalization, in response to SCF. Metabolic labelling showed that imatinib does not alter synthesis or maturation of c -Kit and that the phospho-tyrosine profile of cells treated with imatinib is generally unchanged. Finally, we showed that the binding of imatinib to the catalytic pocket of c-Kit is essential for its internalization, and therefore its degradation. So, it appears that imatinib removes c-Kit self-inhibition, which seems necessary to its retention at the membrane. In the second part of this work, we studied the morphological changes of nucleoli, the site of ribosome biogenesis, during erythroid differentiation. We showed that the reduction of cell size takes place at the same time than reduction of cell proliferation and reduction of surface and volume of the Granular Compound (GC), the “matrix” of the nucleolus. Moreover, we showed by electronic microscopy, the persistence of GC at the end of maturation. Finally, we also studied the evolution of nucleoli in a pathological context of low risk myelodysplastic syndromes, which are characterized by ineffective hematopoiesis. We observed that immature pathological cells have larger GC than immature normal cells, but that during differentiation, the morphology of nucleoli is identical between normal and pathological cells. In conclusion, this work has allowed us to describe 1) the mechanisms of internalization of a class III receptor tyrosine kinase, c-Kit by imatinib and 2) the morphology of the nucleolus during normal and pathological low risk myelodysplastic syndromes of erythroid differentiation
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Saby, Manon Juliette. "Identification de gènes candidats pour l'anémie de Blackfan-Diamond et caractérisation phénotypique." Thesis, Université de Paris (2019-....), 2019. https://theses.md.univ-paris-diderot.fr/SABY_Manon_va2.pdf.
Full textAbstract:
L’anémie de Blackfan-Diamond (ABD) est une érythroblastopénie congénitale rare secondaire à un blocage de la maturation des cellules érythroïdes entre les stades BFU-e (EPO indépendant) et CFU-e (EPO dépendant). La maladie se manifeste par une anémie arégénérative, le plus souvent macrocytaire. Dans 50% des cas, à l’anémie s’associe un syndrome malformatif affectant l’aire céphalique et les extrémités et incluant un retard de croissance. Bien que très hétérogène tant phénotypiquement que génotypiquement, l'ABD est due à des mutations toujours hétérozygotes dans des gènes de protéines ribosomiques (RP) pour 80% des cas. Le premier gène identifié comme impliqué dans l’ABD est le gène de la RPS19 (RPS19), faisant de l’ABD la première ribosomopathie décrite. A ce jour, 20 gènes de RP ont été identifiés. L'haplo-insuffisance en RP entraîne un défaut de maturation des ARN ribosomiques (ARNr) générant un stress nucléolaire, qui lui-même conduit à la stabilisation de la protéine p53. La p53 stabilisée induit l’apoptose et l'arrêt du cycle cellulaire qui sont responsables en grande partie de l’érythroblastopénie. Plus rarement, l’ABD peut être la conséquence de mutations présentes sur le gène GATA-1 (facteur de transcription majeur de l’érythropoïèse), le gène TSR2 (interagissant avec la protéine RPS26 et intervenant dans la biogenèse des ribosomes) ou encore le gène EPO (cytokine clé de l’érythropoïèse). Cependant, 20% des patients atteints d’ABD ne sont toujours pas génotypiquement diagnostiqués : de nouveaux gènes candidats sont encore à découvrir chez ces patients. Dans cette perspective, l’objectif de ma thèse a donc été de caractériser le rôle fonctionnel de nouveaux gènes candidats afin de confirmer leur lien avec l’ABD. Nous avons procédé à un séquençage d’exomes chez 25 familles ce qui a permis d’identifier 8 gènes candidats. Nous présentons ici quatre de ces gènes dont deux gènes codant pour un chaperon ribosomique : HSPA14 et HEATR3, un gène codant pour une RP : RPL9 et un gène codant un facteur de croissance : CECR1.Les protéines chaperons du ribosome représentent un nouveau groupe de gènes pouvant être associé à la maladie. Mes travaux de thèse ont permis d’étudier la prolifération, la division, l’amplification, la différenciation et la viabilité des cellules primaires érythroïdes issues des patients porteurs de variations alléliques dans ces gènes. Ces expériences ont permis de mettre en évidence un défaut de prolifération érythroïde chez l’ensemble des patients testés accompagné d’une diminution de l’amplification et de la division cellulaire ainsi qu’un retard de différenciation. Ces résultats sont objectivés par la persistance des marqueurs d’immaturité CD34 et IL-3R ainsi que d’un retard d’apparition des marqueurs terminaux tels que la BAND3 ou l’alpha4-intégrine. L’étude transcriptionnelle et protéique met en évidence une stabilisation de p53, conduisant à une activation de ces cibles p21 et de bax. Le travail est finalisé pour HEATR3 (manuscrit en préparation) et en cours de finalisation pour HSPA14.L’étude sur le gène RPL9 grâce à un travail collaboratif a permis de mettre en évidence deux phénotypes différents en fonction du variant allélique identifié : un phénotype ABD pour un variant allélique de la 5’UTR ou un phénotype associé à un risque de cancer. L’étude de la différenciation érythroïde montre un impact sur la différenciation et la prolifération pour le variant lié à l’ABD uniquement. Parallèlement, une étude en collaboration sur le gène RPL13, a permis de confirmer le rôle spécifique de certaines protéines RP dans d’autres pathologies que l’ABD et d’ajouter une nouvelle maladie à la liste des ribosomopathies.Le facteur de croissance CECR1, identifié comme muté chez plusieurs familles du consortium EURODBA, représente un nouveau groupe de gènes pouvant être associés à la maladieDiamond-Blackfan anemia (DBA) is a congenital rare erythroblastopenia due to a blockage in the maturation of erythroid cells between the BFU-e and CFU-e stages. DBA is characterized by an aregenerative, usually macrocytic, anemia, associated with the total absence or less than 5% of erythroid precursors in the bone marrow. In 50% of DBA cases, anemia is associated with congenital malformations affecting the cephalic area and the extremities of the limbs and a growth delay. The DBA phenotype and genotype are heterogeneous, however a mutation in a ribosomal protein (RP) gene, always at heterozygous state, is found in 80% of cases. Up to date, 20 RP genes have been associated with DBA pathophysiology, establishing DBA as the first identified ribosomopathy. Mutations of these RP induce a defect in rRNA maturation. Therefore, for ribosome dysfunction, cell cycle arrest and p53-mediated apoptosis induction are responsible for erythroblastopenia in patients. More rarely, DBA may be the consequence of mutations present on a non-PR gene: the GATA-1 gene (major transcription factor of erythropoiesis), the TSR2 gene (interacting with the RPS26 protein and involved in ribosome biogenesis) or the EPO gene (erythropoiesis key cytokine) have been identified so far. However, 20% of the DBA patients are still not genotypically diagnosed, leaving room for the discovery of new candidate genes. In this perspective, the aim of my PhD was therefore to identify new candidate genes involved in DBA etiology and characterize their functional roles of in order to confirm their link with DBA. For this purpose, we sequenced exomes on 25 families and identified 8 candidate genes. In this manuscript, I will present my work as part of a bigger project to validate four new genes involved in BDA pathophysiology.RPL9 is a RP of the large 60S ribosomal subunit. Mutations in this gene lead to two different phenotypes depending on the allelic variant: a DBA phenotype for an allelic variant of the 5' UTR or a phenotype associated with a cancer risk. As part of a collaborative work that compared the two RPL9 variants, I showed that the DBA variant only has an impact on erythroid differentiation Compared to a healthy individual, patients presenting the DBA variant exhibit a reduced proliferation rate and a delay in the acquisition of erythroid markers. P53-dependent activation of p21 in those cells is most likely responsible for the cell cycle arrest. Activation of caspases sign an induction of apoptosis and is consistent with the reduced viability of erythroid progenitors. A collaborative study on the RPL13 gene confirmed the specific role of certain RP proteins in non-DBA diseases and added a new disease to the list of ribosomopathiesXRibosome chaperone proteins represent a new group of genes that may be associated with DBA. I investigated the proliferation, division, amplification, differentiation and viability of primary erythroid cells from patients with allelic variations in one of these genes: HEATR3. These experiments revealed a lack of erythroid proliferation, with a defect in cell division. The mRNA and protein quantifications showed a stabilization of p53, leading to an activation of its targets: p21, controlling cell cycle, and Bax, involved in apoptosis induction. We also observed a delay in differentiation with the persistence of CD34 and IL-3R immaturity markers and a delay in the appearance of terminal markers such as BAND3 or alpha4-integrin. The role of HSP70 controlling GATA1 localization in early stages of the erythroid differentiation was recently elucidated. In this work, I identified as a new candidate gene for DBA, a HSP70 family member, HSPA14, and I characterized the defects in erythroid differentiation induced by this variant. Furthermore, I was able to identify an association of DBA with a variant in CECR1 gene encoding an adenosine deaminase in several families of the EURODBA consortium
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Kurbatova, Polina. "Modélisation hybride de l'érythropoïèse et des maladies sanguines." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00752835.
Full textAbstract:
La thèse est consacrée au développement de nouvelles méthodes de modélisations mathématiques en biologie et en médecine, du type "off-lattice" modèles hybrides discret-continus, et de leurs applications à l'hématopoïèse et aux maladies sanguines telles la leucémie et l'anémie. Dans cette approche, les cellules biologiques sont considérées comme des objets discrets alors que les réseaux intracellulaire et extracellulaire sont décrits avec des modèles continus régis par des équations aux dérivées partielles et des équations différentielles ordinaires. Les cellules interagissent mécaniquement et biochimiquement entre elles et avec le milieu environnant. Elles peuvent se diviser, mourir par apoptose ou se différencier. Le comportement des cellules est déterminé par le réseau de régulation intracellulaire et influencé par le contrôle local des cellules voisines ou par la régulation globale d'autres organes. Dans la première partie de la thèse, les modèles hybrides du type "off-lattice" dynamiques sont introduits. Des exemples de modèles, spécifiques aux processus biologiques, qui décrivent au sein de chaque cellule la concurrence entre la prolifération et l'apoptose, la prolifération et la différenciation et entre le cycle cellulaire et de l'état de repos sont étudiés. L'émergence des structures biologiques est étudiée avec les modèles hybrides. L'application à la modélisation des filamente de bactéries est illustrée. Dans le chapitre suivant, les modèle hybrides sont appliqués afin de modéliser l'érythropoïèse ou production de globules rouges dans la moelle osseuse. Le modèle inclut des cellules sanguines immatures appelées progéniteurs érythroïdes, qui peuvent s'auto-renouveler, se différencier ou mourir par apoptose, des cellules plus matures appelées les réticulocytes, qui influent les progéniteurs érythroïdes par le facteur de croissance Fas-ligand, et des macrophages, qui sont présents dans les îlots érythroblastiques in vivo. Les régulations intracellulaire et extracellulaire par les protéines et les facteurs de croissance sont précisées et les rétrocontrôles par les hormones érythropoïétine et glucocorticoïdes sont pris en compte. Le rôle des macrophages pour stabiliser les îlots érythroblastiques est montré. La comparaison des résultats de modélisation avec les expériences sur l'anémie chez les souris est effectuée. Le quatrième chapitre est consacré à la modélisation et au traitement de la leucémie. L'érythroleucémie, un sous-type de leucémie myéloblastique aigüe (LAM), se développe à cause de la différenciation insuffisante des progéniteurs érythroïdes et de leur auto-renouvellement excessif. Un modèle de type "Physiologically Based Pharmacokinetics-Pharmacodynamic" du traitement de la leucémie par AraC et un modèle de traitement chronothérapeutique de la leucémie sont examinés. La comparaison avec les données cliniques sur le nombre de blast dans le sang est effectuée. Le dernier chapitre traite du passage d'un modèle hybride à un modèle continu dans le cas 1D. Un théorème de convergence est prouvé. Les simulations numériques confirment un bon accord entre ces deux approches.
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Aït-Oudhia, Sihem. "Modélisation pharmacocinétique et pharmacodynamique de l'érythropoïétine humaine recombinante : étude préclinique chez le rat normal, et clinique chez le patient cancéreux et anémique." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05P605.
Full textAbstract:
L’érythropoïèse est le processus par lequel les globules rouges (GR) sont produits. L’érythropoïétine (EPO) est une glycoprotéine d’origine rénale régulant l’érythropoïèse. La rHuEPO est une EPO recombinante utilisée dans le traitement des anémies. Dans ce travail, sa pharmacocinétique (PK) et sa pharmacodynamie (PD) après injections répétées ont été investiguées chez le rat normal et le patient cancéreux. Premièrement, l’étude PK/PD de la rHuEPO chez le rat a permis de caractériser sa PK et les effets de tolérance/rebond observés sur les réticulocytes (RET), les GR et l’hémoglobine (HB). Les données expérimentales ont été modélisées par un modèle mathématique basé sur le mécanisme d’élimination par endocytose pour la PK et la durée de vie moyenne des cellules pour la PD. La PK non stationnaire a été captée par une rétro-régulation négative à partir des GR sur la clairance. Ensuite, une méthode mathématique a été développée pour convertir le nombre absolu des RET mesuré par la méthode de cytométrie de flux en temps de maturation pour devenir GR. La durée de vie des RET a été estimée à 1,8 jours en condition d’érythropoïèse de stress. La PK de la rHuEPO a été étudiée chez des patients cancéreux par approche non linéaire à effets mixtes. Plusieurs facteurs comme le poids corporel, l’âge, les RET, l’HB, le nombre de cycles de chimiothérapie reçus et leur composition en platine ont été identifiés comme covariables significatives pour sa clairance. En conclusion, ces travaux illustrent les bénéfices des méthodes de modélisation PK/PD pour décrire et quantifier les mécanismes complexes de la PK de la rHuEPO et ses effets sur l’érythropoïèse physiologique et pathologiqueErythropoiesis is the process by which red blood cells (RBC) are produced. Erythropoietin (EPO) is a glycoprotein synthetized in the kidney and regulates erythropoesis. RHuEPO is a recombinant human EPO used in the treatment of anemia. In this work, the pharmacokinetics (PK) and pharmacodynamics (PD) of rHuEPO upon repeated intravenous injections were investigated in rats and cancer patients. First, a PK/PD study in rats allowed to characterize rHuEPO non stationary PK and to describe tolerance/rebound phenemona for reticulocytes (RET), RBC, and hemoglobin (HB). The experimental data were fitted by a mathematical model based upon receptor-mediated endocytosis for PK and lifespan-based indirect response model for PD. The non stationary PK was captured by a negative feedback loop from the RBC on the linear clearance. Then, a mathematical approach was developed to convert absolute RET count measured using flow cytometry technique into a maturation time to become mature RBC. This time was 1. 8 days in condition of stress erythropoiesis. The PK of rHuEPO was also studied in anemic cancer patients using a non-linear mixed effects approach, allowing the estimation of typical values and inter-individual variability. Several descriptors such as body weight, age, RET, HB, the total number of received chemotherapies and their platinum-based composition were significant covariates for rHuEPO clearance. In conclusion, the present work illustrates the benefits of utilizing PK/PD modeling techniques to describe and quantify the complex mechanisms of rHuEPO PK and its subsequent effects on erythropoiesis in physiologic and pathological settings
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Grigorakaki, Christine. "Etude des mécanismes cellulaires et moléculaires de l'inhibition de l'érythropoïèse par la cytokine pro-inflammatoire Tumor necrosis factor (TNF)-alpha." Thesis, Nancy 1, 2011. http://www.theses.fr/2011NAN10106/document.
Full textAbstract:
Les anémies liées au cancer et aux inflammations chroniques sont suspectées d'être provoquées par la libération de la cytokine pro-inflammatoire, le «tumor necrosis factor» (TNF)-[alpha]. Il a été décrit comme un inhibiteur potentiel de la production de l'érythropoïétine (Epo) au niveau du rein, conduisant à une diminution de l'érythropoïèse. Cependant, des études in vitro ont suggéré que le TNF[alpha] pouvait agir directement sur les cellules érythroblastiques.Des études réalisées au laboratoire LBMCC sur des lignées érythroleucémiques humaines ont montré que le TNF[alpha] limite la surexpression de gènes érythroïde-spécifiques en corrélation à l'inhibition du facteur de transcription GATA-1. Afin d'étudier l'effet inhibiteur du TNF[alpha] sur l'induction de l'érythropoïèse par l'Epo, nous avons utilisé des cellules souches hématopoïétiques CD34+ comme modèle. Dans notre système de culture in vitro, nous avons pu reproduire les différents stades de l'érythropoïèse en présence d'Epo, permettant ainsi d'étudier l'effet du TNF[alpha] sur cette voie. L'étude de la production d'hémoglobine, de la morphologie cellulaire et l'analyse des marqueurs membranaires spécifiques, a montré que le TNF[alpha] réduit la capacité de l'Epo à engager les cellules vers une différenciation érythroïde terminale. Au niveau moléculaire, nous avons corrélé cet effet à la réduction de l'expression de gènes érythroïdes. De plus, il réduit l'activité trans-activatrice du facteur de transcription GATA-1 et induit son interaction avec le facteur PU.1 via l'activation de la protéine p38MAPK. Enfin, l'expression du facteur GATA-2 est induite et la balance GATA-1/GATA-2 est en partie perturbée par l'inhibition des miR 144/451 par le TNF[alpha]Cancer-related anemia is thought to be mediated by the release of tumor necrosis factor (TNF[alpha]). TNF[alpha] is one of the major mediators of inflammation and has been linked to the inhibition of the erythropoietin (Epo) production from kidney, leading thus to anemia. However, the inhibitory effect of TNF[alpha] on erythroblast differentiation has been suggested by several in vitro studies. Previous results from the LBMCC lab on human leukemia cell lines showed that TNF[alpha] prevents over-expression of erythroid-specific genes in human erythroleukemia cell lines. In all cases, the inhibitory effect of TNF[alpha] was in correlation with the inhibition of the erythroid key transcription factor, GATA-1. In order to study the inhibitory effect of TNF[alpha] on the Epo-mediated erythropoiesis, we used CD34+ hematopoietic stem cells (HSC) as a model. In our in vitro model, we reproduced different stages of erythropoiesis, allowing us to use this model for the study of TNF[alpha] and the erythroid lineage. The study of hemoglobin production, the cell morphology and the analysis of specific erythroid membrane markers, have shown the limited capacity of Epo to stimulate HSC erythroid differentiation under TNF[alpha] treatment. At the molecular level, we have correlated this effect to the reduced expression of erythroid-specific genes. Moreover, TNF[alpha] reduces the transcriptional activity of GATA-1 and induces its interaction with PU.1 via p38MAPK activation. Furthermore, GATA-2 expression is increased and the GATA-1/GATA-2 balance, which is critical for erythropoiesis, is partially disturbed by 144/451 miRs inhibition from TNF[alpha]