Dissertations / Theses: 'Espèces réactives de l'oxygène'

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Brerro-Saby, Christelle. "Espèces réactives de l'oxygène et contrôle sensorimoteur musculaire." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20691.

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Abstract:

Le contrôle sensorimoteur est le fondement des adaptations musculaires à l’environnement. L’hyperproduction des espèces réactives de l’oxygène (ROS) est le lieu commun de la suractivité physique en condition de normoxie et de l’hyperoxie. L’hyperoxie potentialise cette production de ROS. Notre travail de thèse avait pour but de montrer les conséquences du stress oxydatif sur le système sensorimoteur. Nous avons émis l’hypothèse que les ROS pouvaient intervenir dans les phénomènes de modulation de la transduction du signal nerveux par les fuseaux neuromusculaires (FNM) et les afférences du groupet IV (métaborécepteurs). Chez l’Homme sain, nos études ont associé des méthodes d’électrophysiologie non invasives (réponse tonique à la vibration ou TVR, explorant la boucle réflexe fusoriale ; onde M ; réflexe d’Hoffman ou H ; analyse spectrale de l’électromyogramme ou EMG) et des dosages sanguins d’acide lactique, de marqueurs du stress oxydatif (substances réactives à l’acide thiobarbiturique ou TBARS, et acide ascorbique réduit ou RAA) et d’une protéine de stress (Hsp27). Ces mesures ont été effectuées au repos et après un exercice de handgrip conduisant à la fatigue, en conditions de normoxie ou d’hyperoxie normobare. Les résultats de nos trois études humaines ont montré : 1) en condition de normoxie et indépendamment de toute modification de la commande motrice centrale, une réduction de TVR traduisant une dépression des propriétés de transduction des FNM, associée à l’hyperproduction d’acide lactique. Cette réponse dépressive initiale est suivie d’une facilitation de TVR, concomitante de l’hyperproduction des ROS. Les modifications biochimiques induites par l’exercice (acidose et stress oxydatif) influencent donc la mécanosensibilité ; 2) en condition d’hyperoxie et chez le sujet au repos, une facilitation de la conduction nerveuse périphérique (onde M) et centrale (réflexe H) associée à une diminution de TVR. L’hyperoxie produit un stress oxydatif et élève le taux sanguin d’Hsp27 ; 3) en condition d’hyperoxie et chez l’individu maintenant un handgrip statique, le stress oxydatif faisant suite à l’exercice est aboli et la réponse des Hsp27 est doublée. Ainsi la combinaison de deux circonstances extrêmes (hyperoxie et exercice) semble induire une réponse adaptative, protégeant le muscle contre une production excessive des ROS, semble-t-il en rapport avec le rôle des protéines chaperonnes (Hsp). Chez le Rat, nous avons combiné l’enregistrement de l’activité des FNM et des fibres IV ou métaborécepteurs du nerf péronier commun et des dosages intramusculaires (isoprostanes, cytokines IL-6), et étudié les modifications de ces variables à la stimulation électrique fatigante, à l’injection d’un oxydant majeur (péroxyde d’hydrogène, H2O2) et /ou d’un antioxydant (superoxyde dismutase, SOD). Ces études confirment l’intervention des ROS dans la modulation des messages afférents d’origine musculaire. Ainsi, les ROS sont un stimulus efficace aussi bien des FNM que des afférences musculaires de type IV. En conclusion, les résultats obtenus chez l’Homme et chez l’animal mettent en avant le rôle clé des ROS, dans la régulation du contrôle sensorimoteur par les afférences métabosensibles ou mécanosensibles. Ceci suggère la possibilité d'un effet bénéfique des ROS qui pourrait intervenir dans les adaptations de la commande sensorimotrice musculaire à l'exercice.

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Mouret, Jean-François. "Oxydations de l'ADN par des espèces réactives de l'oxygène." Grenoble 1, 1990. http://www.theses.fr/1990GRE10130.

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Abstract:

La mise au point de methodes de detection de lesions des bases de l'adn est necessaire pour l'etude des effets deleteres des especes reactives de l'oxygene sur l'adn. Ceci requiert la synthese de molecules temoins et la connaissance de leurs proprietes chromatographiques et chimiques. Ces methodes ont permis, apres digestion enzymatique de l'adn modifie, de quantifier et de caracteriser de facon non ambigue la lesion. C'est ainsi que l'adenine n-1 oxyde l'hydroxymethyl-5 uracile et l'oxo-8 dihydro-7,8 guanine ont ete mise en evidence dans un adn isole mis en contact avec de l'eau oxygenee. Ces memes lesions ont ete mesurees dans l'adn de proteus mirabilis soumis a l'action de l'eau oxygenee. Enfin l'adenine n-1 oxyde, lesion specifique de l'eau oxygenee, a ete quantifiee dans un adn fibroblastique expose a l'eau oxygenee ou apres irradiation des cellules par la lumiere du proche ultraviolet. Ceci tend a prouver que le rayonnement du proche ultraviolet, en particulier sa composante uv-a (340-380 nm), conduit a la formation d'eau oxygenee dans des cellules fibroblastiques en culture

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Boufraqech, Myriem. "Implication des espèces réactives de l'oxygène (ROS) dans la radiocarcinogenèse thyroïdienne." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00747797.

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Abstract:

La radiothérapie est utilisée seule ou en association avec la chimiothérapie dans le traitement de plus de 50% des cancers. En dépit des nombreux progrès dans le but d'améliorer le rapport bénéfice/risque, l'irradiation est à l'origine de nombreux effets secondaires. Une des origines connues des cancers de la thyroïde est l'exposition pendant l'enfance aux radiations ionisantes, soit accidentelles, soit suite à un traitement par radiothérapie externe pour une autre pathologie. Les mécanismes par lesquels les radiations ionisantes provoquent l'apparition d'un cancer de la thyroïde sont nombreux et encore incomplètement connus. Les radiations ionisantes sont des agents génotoxiques qui induisent des dommages au niveau de l'ADN telles que des cassures et des aberrations chromosomiques. Bien que les mécanismes qui sous-tendent ces effets ne soient pas complètement compris, il est généralement admis que les radiations ionisantes induisent des dommages à l'ADN soit de manière directe soit de manière indirecte en générant des espèces réactives de l'oxygène (ROS). Durant ma thèse, nous avons étudié le rôle des ROS produit lors de l'irradiation dans la génération des dommages à l'ADN dans les cellules thyroïdiennes. Nos résultats montrent que les ROS produites après irradiation participent à la formation des réarrangements chromosomiques RET/PTC1 retrouvés dans 70% des cancers papillaires radioinduits. Les ROS engendrées par la radiolyse de l'eau ont une durée de vie extrêmement courte ce qui limite leur diffusion. Néanmoins, par des mécanismes redox, ils provoquent des modifications au niveau cellulaire qui conduisent à leur tour à l'activation de systèmes générateurs de ROS, parmi lesquels on trouve les NADPH oxydases. Nos résultats montrent que l'irradiation induit l'expression de la NADPH oxydase DUOX1 via la sécrétion d'IL-13, plusieurs jours après l'exposition aux radiations ionisantes. L'inactivation de DUOX1 par ARNs interférents diminue de manière significative les dommages de l'ADN observés plusieurs jours après irradiation. Ces résultats suggèrent un rôle de DUOX1 dans le stress oxydatif chronique qui contribue à l'instabilité génétique.

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St-Louis, Ronald. "Implication des espèces réactives de l'oxygène dans le contrôle central de l'osmorégulation." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00636859.

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Abstract:

Parmi les différentes fonctions du système hypothalamo-neurohypophysaire, il est notamment mis en jeu dans les voies de contrôle de l'osmolalité plasmatique et il est en particulier stimulé lors d'une déshydratation de l'organisme. Ce système reçoit des afférences provenant de la périphérie, telles que celles issues du sinus carotidien, mais aussi des informations intrinsèques au système nerveux central (SNC) en provenance de certains organes circumventriculaires. Le système de contrôle de l'osmorégulation passe par ces structures et des informations telles que l'osmolalité plasmatique peuvent être rapidement intégrées pour adapter le niveau de libération de l'arginine-vasopressine (AVP), hormone anti-diurétique qui contrôle la réabsorption de l'eau au niveau du néphron. Le noyau supraoptique (NSO), où siègent les neurones magnocellulaires synthétisant l'AVP, reçoit donc de nombreuses afférences qui modulent son activité, telles que des afférences impliquant la noradrénaline (NA), majoritaires, ainsi que des afférences aminoacidergiques qui libèrent le glutamate, l'aspartate et le GABA. Notre équipe s'intéresse aux mécanismes de régulation de l'expression et de libération d'AVP par les afférences noradrénergiques. L'effet de la noradrénaline passe par une voie nitrergique (NO) pour le contrôle de l'expression de l'AVP (Grange-Messent et al, 2004). Par ailleurs, les travaux de S. Mélik-Parsadaniantz et de son équipe ont démontré que l'expression des chimiokines, notamment la chimiokine SDF1 ainsi que son récepteur CXCR4, augmentait au cours de la déshydratation (Callewaere et al., 2006). La démonstration de la présence de chimiokines dans les neurones magnocellulaires et de leur implication au cours de la déshydratation ainsi que les résultats que nous avons obtenus sur le NO suggèrent que les médiateurs inflammatoires sont des molécules de signalisation endogènes qui participent à la chaîne de signalisation mise en jeu lors de l'osmorégulation. L'objectif de la thèse est de s'intéresser au métabolisme oxydatif dans les noyaux magnocellulaires puisque, dans les processus de plasticité post-lésionnels, les modifications de l'expression des médiateurs inflammatoires sont accompagnées de modifications de ce métabolisme et de la production de radicaux libres qualifiés d'espèces réactives de l'oxygène (EROs). Notre modèle d'étude est la souris C3H/HeJ adulte soumise à une hyperosmolarité plasmatique. Ce paradigme est connu pour stimuler l'axe osmorégulateur et pour causer une augmentation de l'AVP sans provoquer de stress. Dans le cas d'une stimulation hyperosmolaire chronique, les résultats obtenus montrent que lors de l'activation de l'axe osmorégulateur, démontrée par l'expression de la protéine c-fos, la synthèse d'AVP est accompagnée d'une production d'EROs, prise en charge par la superoxyde dismutase de type 2 (SOD 2) et la catalase. Les mesures de l'osmolalité plasmatique montrent que la réponse osmorégulatrice exercée par l'AVP se met en place progressivement et qu'après 8 jours de stimulation osmotique, le système retourne au niveau contrôle montrant un nouvel équilibre allostatique. Dans le cas d'une stimulation hyperosmolaire aiguë, les EROs sont produits dès la phase précoce de l'hyperosmolarité démontrée par l'expression de c-fos, et sont pris en charge par la SOD 2 et la catalase. De plus, cette production d'EROs est indispensable à l'augmentation de synthèse d'AVP en réponse à une hyperosmolarité plasmatique, puisqu'en présence d'un antioxydant, l'acide -lipoïque (AAL) administré avant la stimulation osmotique, il y a une inhibition de la synthèse de novo d'AVP. La deuxième partie de ma thèse cherche à déterminer la place des EROs dans le contrôle exercé par les afférences noradrénergiques via le monoxyde d'azote (NO). Les résultats obtenus montrent que les souris transgéniques Tg8, qui présentent des taux élevés en NA dans le SNC, ont des niveaux de production d'EROs dans le NSO plus élevés que leurs contrôles non transgéniques, les souris C3H/HeJ, donnant une indication que la voie noradrénergique est impliquée in vivo. Afin de confirmer la place des EROs dans la voie de signalisation noradrénergique, nous avons analysé ex vivo l'effet de la NA sur des tranches d'hypothalamus maintenues en survie. Ceci nous a permis également de préciser plus avant les contributions respectives du NO et des EROs dans la voie de régulation noradrénergique de l'expression de l'AVP. Ces résultats démontrent pour la première fois l'importance des EROs comme signaux endogènes dans la voie de régulation osmotique. Il permet de faire émerger un rôle nouveau et original des EROs en tant que médiateurs physiologiques des voies de signalisation intracellulaires.

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Doyen, Denis. "Régulation de l'échangeur Na[+]/[H+] 1 par les espèces réactives de l'oxygène." Electronic Thesis or Diss., Université Côte d'Azur, 2023. http://www.theses.fr/2023COAZ6007.

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Abstract:

L'échangeur NHE1 Na[+]/H[+] joue un rôle clef dans la régulation du pH et du volume intracellulaire. Son rôle est paradoxal au cours des phénomènes d'ischémie-reperfusion où son activation provoque une surcharge en sodium et indirectement en calcium ce qui peut provoquer des troubles lors de la reperfusion notamment dans les tissus excitables comme le coeur. Cet échangeur est régulé par le pH intracellulaire, le volume cellulaire et par une multitude de voies de signalisation. Plusieurs études et résultats préliminaires ont indiqué une possible régulation par les espèces réactives de l'oxygène qui sont produites lors de l'ischémie-reperfusion. L'objectif de cette étude est d'analyser par quels mécanismes ces espèces réactives de l'oxygène et en particulier l'anion superoxyde O2.- régulent l'activité de NHE1 et de comprendre quelles régions et quels acides-aminés de NHE1 sont importants pour cette régulation.L'activité de NHE1 wild type a été mesurée en présence de donneurs d'O2.- (Ménadione) ou en inhibition de production d'O2.- (Diphényliodonium (DPI) inhibiteur de la NaDPH oxydase). L'activité NHE1 a été quantifiée par flux de lithium en fonction du pH intracellulaire. La Ménadione a ainsi entraîné une activation de NHE1 tandis que le DPI a diminué l'activité de NHE1, démontrant que NHE1 est donc régulé par O2.-. Cette activation par Ménadione et inhibition par DPI sont perdues chez le mutant Cysless de NHE1 dépourvu de toutes ses cystéines. Les cystéines jouent donc un rôle clef dans la régulation de NHE1 par O2.-. Nous avons ensuite testé l'inhibition par le DPI sur des mutants de NHE1 sur chacune de ses cystéines. Cela a permis d'identifier plus précisément 3 cystéines clefs dans ce mécanisme.Afin d'approfondir les groupements structurels des cystéines potentiellement impliqués dans cette régulation, une analyse des modifications covalentes possibles a été menée incluant la recherche de nitrosylation par biotin switch, la recherche de ponts disulfure par exposition à l'iodoacétamide, et la glutathionylation. Cela a permis de montrer la présence de nitrosylation des cystéines, mais pas de ponts disulfures.Parallèlement, nous avons constaté un profil d'adhésion et de migration très différent des cellules selon le type de mutant cystéine de NHE1 exprimé. Nous avons donc analysé l'expression de protéines d'adhésion et la liaison de NHE1 au cytosquelette. Par coimmunoprécipitation de NHE1 avec le complexe ERM (Ezrine/Radixine/Moesine) nous avons pu montrer que les cystéines de ce transporteur sont cruciales pour sa liaison avec le complexe ERM et donc à l'actine corticale.Cette thèse a donc permis de montrer que l'activité de NHE1 est régulée par l'anion superoxyde O2.- et que cette régulation met en jeu certaines cystéines de NHE1 que nous avons identifiées. Nous avons aussi pu montrer que certaines des cystéines de NHE1 sont cruciales pour l'interaction avec le cytosquelette d'actine et jouent un rôle clef dans l'adhésion et la migration cellulaire. L'ensemble de ce travail identifie une connexion clef entre production d'espèces réactives de l'oxygène, la régulation du pH intracellulaire et la motilité et l'adhésion
The NHE1 Na[+]/H[+] exchanger plays a key role in regulating pH and intracellular volume. Its role is paradoxical during ischemia-reperfusion where its activation causes an overload in sodium and indirectly in calcium which can cause disorders during reperfusion, particularly in excitable tissues such as the heart. This exchanger is regulated by intracellular pH, cell volume and by a multitude of signaling pathways. Several studies and preliminary results have indicated a possible regulation by reactive oxygen species that are produced during ischemia-reperfusion. The objective of this study is to analyze by which mechanisms these reactive oxygen species and in particular the superoxide anion O2.- regulate the activity of NHE1 and to understand which regions and which amino acids of NHE1 are important for this regulation.The activity of NHE1 wild type was measured in the presence of O2.- donors (Menadione) or in inhibition of O2.- production (Diphenyliodonium (DPI) NaDPH oxidase inhibitor). NHE1 activity was quantified by lithium flux as a function of intracellular pH. Menadione thus caused an activation of NHE1 while DPI decreased the activity of NHE1, demonstrating that NHE1 is therefore regulated by O2.-. This activation by Menadione and inhibition by DPI are lost in the Cysless mutant of NHE1 deprived of all its cysteines. Cysteines therefore play a key role in the regulation of NHE1 by O2.-. We then tested the inhibition by DPI on mutants of NHE1 on each of its cysteines, which made it possible to identify more precisely 3 key cysteines in this mechanism.In order to deepen the structural groups of cysteines potentially involved in this regulation, an analysis of possible covalent modifications was carried out including the search for nitrosylation by biotin switch, the search for disulfide bridges by exposure to iodoacetamide, and glutathionylation. This showed the presence of nitrosylation of the cysteines, but no disulphide bridges.At the same time, we observed a very different adhesion and migration profile of cells depending on the type of NHE1 cysteine mutant expressed. We therefore analyzed the expression of adhesion proteins and the binding of NHE1 to the cytoskeleton. By coimmunoprecipitation of NHE1 with the ERM complex (Ezrin/Radixin/Moesin) we showed that the cysteines of this transporter are crucial for its binding to the ERM complex and therefore to cortical actin.This thesis has therefore made it possible to show that the activity of NHE1 is regulated by the superoxide anion O2.- and that this regulation involves certain cysteines of NHE1 that we have identified. We also showed that some of the cysteines of NHE1 are crucial for the interaction with the actin cytoskeleton and play a key role in cell adhesion and migration. All of this work identifies a key connection between the production of reactive oxygen species, the regulation of intracellular pH and motility and adhesion

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Sjöberg, Béatrice. "Oxydation des protéines par les espèces réactives de l'oxygène : l'importance de l'environnement protéique." Phd thesis, Université de Franche-Comté, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01024104.

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Abstract:

Les espèces réactives de l'oxygène sont générées dans l'environnement biologique dans le cadre du métabolisme, mais elles peuvent aussi être produites en excès dans le cas de stress oxydatif provoqué par exemple par une exposition aux rayons UV. Dans le travail présenté ici, nous sommes intéressés par l'oxydation des protéines par deux de ces espèces réactives de l'oxygène : le peroxyde d'hydrogène, oxydant plutôt faible avec un temps de vie long, et l'oxygène singulet, oxydant fort avec un temps de vie court. L'action de ce dernier sur les protéines est étudiée en utilisant la spectroscopie de phosphorescence résolue en temps et l'oxydation des protéines par le peroxyde d'hydrogène est suivie par spectroscopie Raman. Dans ce cas, un travail préliminaire a été nécessaire afin d'attribuer de manière précise les bandes Raman des chaînes latérales des résidus d'acides aminés. Pour les deux types d'oxydations, les constantes de vitesse des réactions ont été déterminées pour trois protéines modèles. La stratégie suivie est d'utiliser de petits fragments de protéines tels que des acides aminés libres et des tripeptides pour comprendre ce qui se passe à l'échelle de la protéine. Cela nous aide à souligner l'importance de l'environnement protéique. Dans le cas de l'étude par spectroscopie Raman, l'influence du nombre de liaisons peptidiques sur les spectres obtenus depuis l'acide aminé libre, au tripeptide, jusqu'à la protéine est aussi mis en évidence.

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Hoarau, Emmanuelle. "Etude du rôle des espèces réactives de l'oxygène dans le développement du pancréas." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015PA05T007.

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Abstract:

Le pancréas est un organe hétérogène composé d’une partie exocrine, responsable de la synthèse d’enzymes pour la digestion, et d’une partie endocrine, essentielle pour l’homéostasie glucidique. Notamment la sécrétion d’insuline par les cellules β contrôle la glycémie. Les dysfonctionnements des cellules β sont une des causes du diabète, première épidémie non infectieuse au monde. Il est actuellement possible d’en traiter les symptômes mais pas de le guérir. De nombreux laboratoires recherchent un protocole idéal de production de cellules β afin de pouvoir greffer ces cellules aux patients. L’identification des facteurs qui gouvernent chaque étape du développement des cellules β devrait permettre de progresser dans ce sens. Le but de ma thèse a été d’étudier le rôle des Espèces Réactives de l’Oxygène (ROS) au cours du développement pancréatique. Cette question a été soulevée lorsque nous avons analysé l’expression des gènes codant pour les enzymes détoxifiantes des ROS: leur expression était extrêmement réduite dans les pancréas embryonnaires comparés aux pancréas adultes, suggérant que les précurseurs sont particulièrement sensibles aux variations des ROS. Nous avons ensuite montré que la réduction des ROS in vivo, obtenue par un traitement avec un antioxydant (NAC), diminue le développement des cellules β. Une analyse in vitro a permis de détailler les mécanismes de l’action des ROS. En effet, le peroxyde d’hydrogène favorise la différenciation des cellules β en augmentant l’expression du facteur pro-endocrine Ngn3 dans les progéniteurs. Ce processus implique l’activation la voie ERK1/2 par les ROS. Au contraire, la diminution des ROS induite par des méthodes génétiques ou pharmacologiques altère la différenciation des cellules β. Nos résultats indiquent également que la mitochondrie est impliquée dans ce processus. Nous avons donc montré que la présence des ROS est essentielle pour le bon développement du pancréas. Ces recherches devraient donc permettre de progresser vers une thérapie cellulaire du diabète
The pancreas is an heterogenous gland composed by exocrine tissue, responsible for digestive enzyme secretions, and endocrine tissue, essential for glucose homeostasis. In particular β cells secrete insulin which controls glycemia. Moreover, β cell failure is one of the primary causes of diabetes and this pathology is nowadays considered as the first non infectious worldwide outbreak. There is unfortunately no cure for this disease. Many laboratories are currently improving β cell generation protocols in order to inject those cells into patients. This is the reason why it appears mandatory to be able to identify factors that govern each step of β cell development. The aim of my work was to study the role of the Reactive Oxygen Species (ROS) during pancreatic development. First we found out that the expression of genes coding for antioxidant enzymes was extremely low in embryonic pancreas compared to adult pancreas. This suggested that progenitors could be sensitive to ROS variations. We then showed in vivo using an antioxidant component (NAC) that decreasing ROS level diminishes β cell development. Analysis in vitro allowed us to better describe the role of ROS. Indeed, hydrogen peroxyde favors β cell differentiation by increasing the pro-endocrine marker NGN3 expression in the progenitors. In this process, ROS activate the ERK1/2 signaling pathway. On the contrary, lowering ROS level using both pharmacologic and genetic approaches, decreases β cell differentiation. Our results also point out a role of the mitochondria in this process. Altogether, our data define the effects of ROS on β cell differentiation and open new perspectives to improve protocols of β cell generation

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Tulard, Anne. "Implication des espèces réactives de l'oxygène dans la réponse cellulaire à une irradiation." Paris 11, 2004. http://www.theses.fr/2004PA11TO26.

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Boufraqech, Myriem. "Implication des espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans la radiocarcinogenèse thyroïdienne." Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA11T069/document.

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Abstract:

La radiothérapie est utilisée seule ou en association avec la chimiothérapie dans le traitement de plus de 50% des cancers. En dépit des nombreux progrès dans le but d’améliorer le rapport bénéfice/risque, l’irradiation est à l’origine de nombreux effets secondaires. Une des origines connues des cancers de la thyroïde est l’exposition pendant l’enfance aux radiations ionisantes, soit accidentelles, soit suite à un traitement par radiothérapie externe pour une autre pathologie. Les mécanismes par lesquels les radiations ionisantes provoquent l’apparition d’un cancer de la thyroïde sont nombreux et encore incomplètement connus. Les radiations ionisantes sont des agents génotoxiques qui induisent des dommages au niveau de l’ADN telles que des cassures et des aberrations chromosomiques. Bien que les mécanismes qui sous-tendent ces effets ne soient pas complètement compris, il est généralement admis que les radiations ionisantes induisent des dommages à l’ADN soit de manière directe soit de manière indirecte en générant des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Durant ma thèse, nous avons étudié le rôle des ROS produit lors de l’irradiation dans la génération des dommages à l’ADN dans les cellules thyroïdiennes. Nos résultats montrent que les ROS produites après irradiation participent à la formation des réarrangements chromosomiques RET/PTC1 retrouvés dans 70% des cancers papillaires radioinduits. Les ROS engendrées par la radiolyse de l’eau ont une durée de vie extrêmement courte ce qui limite leur diffusion. Néanmoins, par des mécanismes redox, ils provoquent des modifications au niveau cellulaire qui conduisent à leur tour à l’activation de systèmes générateurs de ROS, parmi lesquels on trouve les NADPH oxydases. Nos résultats montrent que l’irradiation induit l’expression de la NADPH oxydase DUOX1 via la sécrétion d’IL-13, plusieurs jours après l’exposition aux radiations ionisantes. L’inactivation de DUOX1 par ARNs interférents diminue de manière significative les dommages de l’ADN observés plusieurs jours après irradiation. Ces résultats suggèrent un rôle de DUOX1 dans le stress oxydatif chronique qui contribue à l’instabilité génétique
Radiotherapy is used alone or in combination with chemotherapy to treat over 50% of cancers. Despite much progress in order to improve the benefit / risk ratio, the radiation causes many side effects. One of the known origins of thyroid cancer is exposure during childhood to ionizing radiation, either accidentally or as a result of external radiation therapy for another disease. The mechanisms by which ionizing radiation causes the appearance of thyroid cancer are numerous and not yet fully known. Ionizing radiations are genotoxic agents that induce DNA damage such as breaks and chromosomal aberrations. Although the mechanisms underlying these effects are not completely understood, it is generally accepted that ionizing radiations induce DNA damage either directly or indirectly by generating reactive oxygen species (ROS). During my PhD, we studied the role of ROS produced during irradiation in the generation of DNA damage in thyroid cells. Our results show that ROS produced after irradiation participate in the formation of RET/PTC1 rearrangements found in 70% of radiation-induced papillary cancers. ROS generated by radiolysis of water have a very short lifetime that limits their diffusion. However, by redox mechanisms, they cause changes at the cellular level, which in turn lead to the activation of ROS generating systems, which include the NADPH oxidases. Our results show that irradiation induces the expression of NADPH oxidase DUOX1 via the secretion of IL-13, several days after exposure to ionizing radiation. Inactivation of DUOX1 by interfering RNAs significantly reduces the DNA damage observed several days after irradiation. These results suggest a role DUOX1 in chronic oxidative stress that contributes to genetic instability

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Ramon, Olivier. "Activité du facteur de transcription Sp1 et équilibre glucidique : implication des espèces réactives de l'oxygène." Université Joseph Fourier (Grenoble), 2000. http://www.theses.fr/2000GRE18010.

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Tabellion, Aurore. "Effets vasculaires des espèces réactives de l'oxygène et de l'azote dans différents modèles physiopathologiques murins." Nancy 1, 2006. http://www.theses.fr/2006NAN10232.

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Abstract:

Cette thèse porte sur les effets vasculaires des espèces relatives de l'oxygène (ERO) et de l'azote (ERN) dans différents modèles murins de physiopathologies vasculaires humaines (vieillissement et choc septique). Dans la première partie de la thèse, nous avons étudié l'implication des ERN (notamment l'oxyde nitrique (NO) et des ERO, dans la perte de la sensibilité induite par 3 jours d'incubation de la vasoconstriction pharmacomécanique et comment l'incubation d'anneaux aortiques issus de rats adultes (12 mois) mime la perte de vasoréactivité pharmacomécanique vue avec le vieillissement ( > 24 mois). Les anneaux aortiques de rats jeunes (3 mois) et adultes ont été incubés pendant 3 jours. L'incubation des anneaux issus des rats adultes réduit la contraction isométrique induite par un agoniste, la noradrénaline (NA) à un niveau similaire à celui observé pour des anneaux non incubés issus de rats âgés. Il n'y pas d'effet de l'incubation sur la vasoconstriction électromécanique induite par [K+]e. L'incubation produit une augmentation de l'expression des ARNm de la NOS inductible (iNOS) ; l'addition de NG-nitro L-arginie méthylester (L-NAME) restaure partiellement la contraction induite par la NA. Ces résultats suggèrent que le NO est impliqué dans la perte de vasoconstriction pharmacomécanique induite par l'incubation. De plus, l'addition d'anti-oxydants (pyrrolidine dithiocarbamate, glutathion) restaure totalement la contraction suggérant aussi l'implication des ERO. De plus, l'activité de la catalase diminue avec l'âge et la glutathion réductase augmente avec l'incubation pour les anneaux de rats jeunes uniquement. Nous en concluons que l'incubation d'anneaux aortiques produit une réduction de la contraction pharmacomécanique impliquant les ERO et les ERN, et que c'est un processus similaire à celui observé lors du vieillissement. La seconde partie de la thèse traite des possibles effets mécaniques des ERN (NO et peroxynitrite) dans le choc septique qui est caractérisé par une augmentation du NO responsable de la perte de vasocontractilité observée. Par ailleurs, le NO peut modifier, via la nitration d’acides aminés, les propriétés physicochimiques et mécaniques des scléroprotéines. Nous avons donc évalué les propriétés mécaniques (angle d'ouverture et module élastique) de la paroi aortique de rats jeunes ayant subit une ligature et une perforation cecale (CLP). Nous avons aussi examiné les effets de traitements avec le L-NAME chez les rats CLP et un donneur de NO, le morpholinosydnonimine 1 (SIN-1), chez les rats « sham-operated ». Les CLP sont caractérisés par une augmentation du niveau plasmatique des nitrite/nitrate (Nox) ( de 17 # 1 à 50 # 5 umol1/L à 24 h, n = 5) et une perte de vasoréactivité ([K+]e : - 16% et NA : - 27%). Le SIN-1 augmente les Nox (51 # 7 umol1/L) ) à un niveau similaire à celui observé chez les rats CLP. Le traitement des rats CLP avec le L-NAME ne baisse pas les Nox ( 53 # 4 umol1/L). In vitro, l'angle d'ouverture de la paroi aortique diminue chez les CLP ( 28 # 9° versus « sham-operated » 79 # 19°). Le SIN-1 baisse l'angle d'ouverture des rats « sham-operated » (31 # 6°). Chez les rats CLP, L-NAME restaure l'angle d'ouverture (56 # 6°). In vivo, le rapport module élastique / contrainte pariétale augmente de 55% chez les rats CLP. En conclusion, nous pouvons dire que le sepsis modifie la mécanique de la paroi aortique et que le NO est impliqué dans cette modification. En résumé, nous avons mis en évidence que dans deux modèles animaux – incubation d'anneaux aortiques ex vivo et choc septique in vivo – les ERO et les ERN peuvent modifier les protéines intracellulaires impliquées dans la vasoconstriction pharmacomécanique et les protéines extracellulaires impliquées dans la mécanique de la paroi des vaisseaux.

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Tabellion, Aurore. "Effets vasculaires des espèces réactives de l'oxygène et de l'azote dans différents modèles physiopathologiques murins." Nancy, 2006. http://www.theses.fr/2006NAN12509.

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Abstract:

Cette thèse porte sur les effets vasculaires des espèces relatives de l'oxygène (ERO) et de l'azote (ERN) dans différents modèles murins de physiopathologies vasculaires humaines (vieillissement et choc septique). Dans la première partie de la thèse, nous avons étudié l'implication des ERN (notamment l'oxyde nitrique (NO) et des ERO, dans la perte de la sensibilité induite par 3 jours d'incubation de la vasoconstriction pharmacomécanique et comment l'incubation d'anneaux aortiques issus de rats adultes (12 mois) mime la perte de vasoréactivité pharmacomécanique vue avec le vieillissement ( > 24 mois). Les anneaux aortiques de rats jeunes (3 mois) et adultes ont été incubés pendant 3 jours. L'incubation des anneaux issus des rats adultes réduit la contraction isométrique induite par un agoniste, la noradrénaline (NA) à un niveau similaire à celui observé pour des anneaux non incubés issus de rats âgés. Il n'y pas d'effet de l'incubation sur la vasoconstriction électromécanique induite par [K+]e. L'incubation produit une augmentation de l'expression des ARNm de la NOS inductible (iNOS) ; l'addition de NG-nitro L-arginie méthylester (L-NAME) restaure partiellement la contraction induite par la NA. Ces résultats suggèrent que le NO est impliqué dans la perte de vasoconstriction pharmacomécanique induite par l'incubation. De plus, l'addition d'anti-oxydants (pyrrolidine dithiocarbamate, glutathion) restaure totalement la contraction suggérant aussi l'implication des ERO. De plus, l'activité de la catalase diminue avec l'âge et la glutathion réductase augmente avec l'incubation pour les anneaux de rats jeunes uniquement. Nous en concluons que l'incubation d'anneaux aortiques produit une réduction de la contraction pharmacomécanique impliquant les ERO et les ERN, et que c'est un processus similaire à celui observé lors du vieillissement. La seconde partie de la thèse traite des possibles effets mécaniques des ERN (NO et peroxynitrite) dans le choc septique qui est caractérisé par une augmentation du NO responsable de la perte de vasocontractilité observée. Par ailleurs, le NO peut modifier, via la nitration d’acides aminés, les propriétés physicochimiques et mécaniques des scléroprotéines. Nous avons donc évalué les propriétés mécaniques (angle d'ouverture et module élastique) de la paroi aortique de rats jeunes ayant subit une ligature et une perforation cecale (CLP). Nous avons aussi examiné les effets de traitements avec le L-NAME chez les rats CLP et un donneur de NO, le morpholinosydnonimine 1 (SIN-1), chez les rats « sham-operated ». Les CLP sont caractérisés par une augmentation du niveau plasmatique des nitrite/nitrate (Nox) ( de 17 # 1 à 50 # 5 umol1/L à 24 h, n = 5) et une perte de vasoréactivité ([K+]e : - 16% et NA : - 27%). Le SIN-1 augmente les Nox (51 # 7 umol1/L) ) à un niveau similaire à celui observé chez les rats CLP. Le traitement des rats CLP avec le L-NAME ne baisse pas les Nox ( 53 # 4 umol1/L). In vitro, l'angle d'ouverture de la paroi aortique diminue chez les CLP ( 28 # 9° versus « sham-operated » 79 # 19°). Le SIN-1 baisse l'angle d'ouverture des rats « sham-operated » (31 # 6°). Chez les rats CLP, L-NAME restaure l'angle d'ouverture (56 # 6°). In vivo, le rapport module élastique / contrainte pariétale augmente de 55% chez les rats CLP. En conclusion, nous pouvons dire que le sepsis modifie la mécanique de la paroi aortique et que le NO est impliqué dans cette modification. En résumé, nous avons mis en évidence que dans deux modèles animaux – incubation d'anneaux aortiques ex vivo et choc septique in vivo – les ERO et les ERN peuvent modifier les protéines intracellulaires impliquées dans la vasoconstriction pharmacomécanique et les protéines extracellulaires impliquées dans la mécanique de la paroi des vaisseaux.

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Hanot, Maïté. "Irradiation par microfaisceau de particules alpha : Implication des espèces réactives de l'oxygène dans l'effet de voisinage." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00429902.

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Abstract:

L'effet de voisinage radio-induit s'observe dans les cellules voisines de cellules irradiées mais non directement touchées par l'irradiation. A ce jour, les espèces réactives de l'oxygène (EROs) sont considérées comme ayant un rôle actif dans la survenue de réponse au voisinage, mais leur implication n'est pas encore totalement définie. Afin de déterminer leur impact dans la réponse au voisinage, à la fois temporellement et spatialement, des irradiations par microfaisceau de particules sont mises au point afin de cibler une fraction définie de cellules au niveau du noyau dans une culture cellulaire. Les irradiations sont pratiquées sur des cellules normales ostéoblastiques, à sous-confluence, nommées MC3T3-E1. L'observation directe de la génération d'EROs cellulaires et mitochondriales révèle que la réponse bystander est caractérisée par un stress cellulaire d'origine double et temporellement distinct. A court terme, la signalisation issue de la membrane induit une importante production d'EROs impliquée dans l'apparition de cassures double brin de l'ADN retardées. Les mitochondries produisant des EROs jusque 6 heures après l'irradiation semblent être impliquées dans un processus à long terme différent. L'étude indépendante de la réponse des cellules ciblées et voisines met en évidence un phénomène nouveau. L'effet de voisinage induit une réponse des cellules voisines mais est aussi impliqué dans une amplification de la réponse des cellules ciblées par l'irradiation. Ainsi toute cellule, irradiée ou non, peut recevoir ces signaux bystander et répondre. L'ensemble de cette étude mène à considérer les cultures cellulaires comme des réseaux complexes de communication; leurs réponses à l'irradiation indiquent une relation mêlée entre signaux relatifs à l'irradiation elle-même et réponse au voisinage. Cette complexité du phénomène d'effet de voisinage peut justifier que son incidence sur l'établissement de règles de radioprotection et sur la courbe linéaire sans seuil n'est pas encore clairement déterminée.

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Houde, Martin. "Rôles des espèces réactives de l'oxygène et de l'apolipoprotéine E dans la réactivité plaquettaire chez la souris." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2010. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4027.

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Abstract:

Des études récentes au laboratoire ont montré que la bradykinine (BK) et l'endothéline-1 (ET-1) administrées de façon systémique chez la souris inhibent l'agrégation plaquettaire ex vivo induite par l'adénosine 5'-diphosphate (ADP). Cette inhibition est dépendante de la relâche endothéliale de prostacycline (PGI[indice inférieur 2]) dans la circulation. La PGI[indice inférieur 2] augmente l'adénosine 3'5'-monophosphate cyclique (AMPc) plaquettaire afin d'empêcher l'activation des plaquettes (LABONTE et al. , 2001). De plus, il a été montré au laboratoire que dans un modèle de souris déficientes pour l'oxyde nitrique synthase inductible (iNOS[indice supérieur -/-]), l'ET-1 perd sa capacité à induire une hausse du stress oxydatif, à induire la relâche endothéliale de PGI[indice inférieur 2] et à inhiber l'agrégation plaquettaire ex vivo (CARRIER et al. , 2007). Nous avons évalué l'effet d'un traitement antioxydant sur l'activité antiplaquettaire de l'ET-1 chez la souris. Nous avons donc voulu évaluer le rôle du stress oxydant dans l'inhibition de l'agrégation plaquettaire par l'ET-1 chez la souris de type sauvage. Les souris soumises à un traitement antioxydant, l'inhibiteur de la NAPDH oxydase, l'apocynine, et le mimétique de la superoxyde dismutase (SOD), le TEMPOL, durant 24 jours répondent de façon semblable aux souris non-traitées à l'ET-1 et à la BK i.v. au. niveau de la pression artérielle moyenne (PAM). Par contre, le traitement antioxydant réduit la capacité de l'ET-1, mais pas celle de la BK, à inhiber l'agrégation plaquettaire ex vivo . De plus, la capacité de l'ET-1 à augmenter les niveaux d'AMPc in vivo est réduite, contrairement à celle de la BK. Nous montrons ainsi l'importance la production du superoxyde dans l'activité antiplaquettaire de l' ET-1. Nous avons ensuite évalué le comportement des plaquettes dans un modèle murin d'athérosclérose qui consiste en des souris déficientes pour l'apolipoprotéine E (ApoE[indice supérieur -/-]). Nous avons d'abord observé une hausse de la réactivité plaquettaire en fonction de l'âge chez les souris ApoE[indice supérieur -/-]. De plus, des résultats dans le laboratoire indiquent que la BK, malgré une relâche normale de PGI[indice inférieur 2] dans la circulation, perd sa capacité à inhiber l'agrégation plaquettaire ex vivo . Nous avons alors évalué l'inhibition de l'agrégation plaquettaire ex vivo suite à l'infusion i.v. de PGI[indice inférieur 2]. Alors que l'infusion de PGI[indice inférieur 2] réduit la PAM de façon similaire chez les souris de type sauvage (WT) et ApoE[indice supérieur -/-], elle inhibe l'agrégation plaquettaire ex vivo chez les souris WT et les souris ApoE[indice supérieur -/-] âgées de 8-10 semaines, mais pas les souris ApoE[indice supérieur -/-] de 18-20 semaines. Étonnamment, autant la BK que la PGI[indice inférieur 2] sont en mesure d'augmenter les niveaux d'AMPc plaquettaire in vivo , autant chez les souris WT ou ApoE[indice supérieur -/-], 8-10 semaines et 18-20 semaines. Nos résultats montrent donc le rôle important du stress oxydatif sur l'activité antiplaquettaire de l'ET-1 ainsi qu'une perte de l'activité antiplaquettaire de la PGI[indice inférieur 2] chez les souris ApoE[indice supérieur -/-] soufrant d'athérosclérose.

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Couasnon, Thais. "Rôle des espèces réactives de l'oxygène et substances exopolymeriques des bactéries dans le processus de biominéralisation du manganèse." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2019. http://www.theses.fr/2019USPCC038.

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Abstract:

L’objectif de ce travail de thèse a été de déterminer quels sont les facteurs physico- chimiques locaux qui déclenchent la précipitation du manganèse dans des biofilms d’Escherichia coli. Pour étudier le rôle de la structure du biofilm sur la biominéralisation, trois mutants d’E. coli MG1655 et deux d’E. coli 1094 produisant différents types de EPS ont été utilisés. Ce travail de doctorat démontre que les espèces réactives de l’oxygène, y compris les anions superoxyde, sont produites par E. coli et régulées pendant les stades de croissance bactérienne. Le superoxyde est produit par les bactéries dans leur phase exponentielle de croissance et est dégradé lorsqu’elles atteignent leur phase stationnaire. Ces travaux fournissent également des informations sur le contrôle de ces molécules lorsque les bactéries sont organisées sous forme de biofilm. Les superoxydes ne sont pas produits dans l’ensemble du biofilm, mais ce dernier peut créer des microenvironnements caractérisés par des concentrations distinctes de superoxydes. Ce travail démontre également que dans nos conditions d’étude, le superoxyde scontribue à l’oxydation du manganèse pour former des nanoparticules sur les surfaces bactériennes et dans les EPS. En conséquence, E. coli est capable, dans certaines conditions et pour certaines souches, d’oxyder le MnII et de produire des phases minérales oxydées de Mn. Les espèces réactives de l’oxygène sont présentes naturellement dans l’environnement mais la présence d’organismes vivant permet de contrôler leurs concentrations relatives. L’activité oxydante des biofilms pour le MnII est renforcée par la présence de lumière confirmant le rôle des espèces réactives de l’oxygène dans cette oxydation. La distribution spatiale des nanoparticules de Mn oxydé dépend de l’exopolymère sécrété et suggère donc que l’emplacement de la minéralisation est régi par la nature des EPS. Ces résultats sont confirmés par des expériences de micro- scopie électronique in situ en cellule liquide qui mettent en évidence le rôle de la densité des sites fonctionnalisés chargés sur la localisation, la morphologie et la cinétique de la formation des minéraux de manganèse
The aim of this PhD work was to determine what are the local physico-chemical factors that trigger the precipitation of manganese in biofilms using three mutants of Escherichia coli MG1655 and two of E. coli 1094 that produce different types of EPS. This work has shown that E. coli MG1655 is able to oxidize MnII by a yet unknown mechanism. We propose that this process is driven by superoxide anions produced by the bacteria and released in the biofilm porosity. We have shown that the strains of E. coli studied here produced superoxide anions and that globally biofilms were scavenging these reactive oxygen species. More specifically, we propose that in the biofilm porosity, superoxyde is produced by bacteria in their log phase, and scavenged in their late stationary phase. In a biofilm form, superoxides are also locally sequestrated in the porosity providing microen- vironments with distinct superoxide concentrations. The oxidative activity is enhanced under light exposure, confirming the role of ROS in the mechanism. Spatial distribution of the formed oxidized Mn-rich nanoparticles is dependent on the exopolymer secreted and therefore suggests that the location of mineralization is governed by the nature of EPS. Such results are further confirmed using in situ experiments by transmission electron mi- croscopy in a liquid cell highlighting the role of the density of charged functionalized sites on mineral localization, morphology and formation kinetics. These latter results bring new perspectives towards the identification of transient species that can direct mineralization on organic polymers and cell surface

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Floc'h, Nicolas. "Les propriétés oncogéniques des facteurs Twist sont régulées grâce à ses propriétés antioxydantes." Montpellier 2, 2009. http://www.theses.fr/2009MON20219.

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Abstract:

La tumorigénèse résulte d'une série d'altérations génétiques et épigénétiques capables de promouvoir la transformation d'une cellule en perturbant les étapes clés impliquées dans le contrôle de la prolifération et de l'homéostasie tissulaire. Ces altérations peuvent induire l'activation de proto-oncogènes ainsi que l'inactivation de gènes suppresseurs de tumeurs. Ces événements induisent une inhibition des programmes de sauvegarde cellulaire tels que l'apoptose, la sénescence, ce qui constitue un pré-requis dans la conversion de cellules saines en cellules malignes. Le but de mon travail de thèse a été de comprendre comment les gènes embryonnaires de la famille Twist régulent ces processus. Cette famille est composée de 2 membres, Twist1 et 2. Comme différents gènes qui régulent le développement embryonnaire, ils sont également impliqués dans le processus tumoral. En effet, plusieurs études ont caractérisé leurs multiples activités pro-oncogéniques telles que l'inhibition de l'apoptose, de la sénescence et la promotion de l'invasion cellulaire. Toutefois, la régulation de ces activités reste peu définie. A travers une série d'études fonctionnelles des 2 membres de la famille Twist, j'ai pu faire plusieurs observations qui m'ont conduit à identifier une nouvelle fonction de Twist : Twist présente une activité anti-oxydante. J'ai démontré que ces facteurs sont capables d'inhiber l'accumulation dans la cellule d'espèces réactives de l'oxygène. De plus, mes travaux m'ont permis de dire que cette activité anti-oxydante est impliquée dans l'inhibition de l'apoptose et de la sénescence, et que grâce à cette activité, Twist protège les cellules de l'apparition de dommages à l'ADN induits par les oncogènes ou par le stress oxydatif. Ce travail devrait permettre de mieux comprendre les fonctions des gènes Twist, et de façon plus générale, la manière dont les oncogènes sont capables de réguler la progression tumorale
Tumorigenesis results from a series of genetic and epigenetic alterations that promote the malignant transformation of the cell by disrupting key processes involved in normal growth control and tissue homeostasis. These alterations, often identified as DNA lesions can provoke the activation of proto-oncogenes and the inactivation of tumor suppressor genes. This leads to the inhibition of cellular safeguard programs such as apoptosis or senescence which is a general prerequisite for malignant conversion. The goal of my PhD thesis was to understand how the embryonic genes of the Twist family regulate such process. This family comprises two members, Twist-1 and Twist-2. Similarly to other genes controlling embryonic development, TWIST-1 and -2 are also involved in tumorigenesis and have been reported to display multiple pro-oncogenic activities such as invasion, inhibition of apoptosis and senescence. How Twist-1 &-2 control these different activities is not fully understood. Through a functionnal study of both members, I made a serie of unexpected observations that led me to identify a new function of Twist. I found indeed that Twist displays an antioxidant activity. I've demonstrated that these factors are able to inhibit the accumulation of reactive oxygen species. Moreover, I've shown that this activity is involved in inhibition of both apoptosis and senescence and that Twist protects cells from oncogene and oxydative stress induced DNA damage through this new function. This discovery should better help understanding the function of Twist and more generally how oncogenes regulate tumor progression

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Amérand, Aline. "Approche in vitro des intéractions métabolisme énergétique-espèces réactives dérivées de l'oxygène dans le muscle de poissons : influence d'un facteur environnemental, la pression hydrostatique." Brest, 2006. http://www.theses.fr/2006BRES3204.

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Abstract:

Le fonctionnement de la chaîne respiratoire fait de la mitochondrie le site majeur de production des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Si la relation positive entre production de ROS et intensité du métabolisme est connue chez les endothermes, elle l’est moins chez les ectothermes et notamment chez le poisson. L’étude comparative rat, truite et anguille montre l’existence d’une corrélation positive production de ROS/intensité du métabolisme dans le muscle du poisson, différente de celle observée chez les endothermes. L’exploration dynamique et comparative du métabolisme des ROS montre que parmi les mécanismes antioxydants étudiés, l’anguille utilise peu la fuite de protons, coûteuse en énergie. Cette stratégie doit être considérée dans le cadre d’un budget énergétique global évitant le gaspillage d’énergie réservée alors à certaines activités vitales pour l’anguille comme la nage et la reproduction au cours de sa migration. Cette dernière ayant lieu en profondeur, les effets de la pression hydrostatique (PH) sur la production de ROS et le métabolisme ont été étudiés. Chez l’anguille jaune (non migrante) acclimatée à PH, les effets sont les mêmes que ceux observés lors de la métamorphose en argentée (migrante), à savoir une optimisation du métabolisme énergétique se traduisant par une diminution de la production de ROS. Chez l’anguille argentée, si PH exerce peu ou pas d’effets sur le métabolisme des ROS, on note toutefois que le sens de la relation -production de ROS/intensité du métabolisme- est différent selon les sexes
The respiratory chain functioning makes mitochondrion the main production site for reactive oxygen species (ROS). If a positive relationship between ROS production and metabolic rate is known in endotherms, it is less studied in ecotherms especially in fish. A comparative study between rat, trout and eel demonstrates the existence of a positive ROS production/metabolic rate relationship in fish muscle, but different from what is observed in endotherms. Dynamic and comparative exploration of ROS metabolism shows that, among the studied antioxidant mechanisms, proton leak is little used by the eel probably because it requires many energy. This strategy must be considered in the global view of energy budget, preventing the eel from a waste of energy which can be used for vital activities like swimming and/or reproduction which occur during the migration. This latter takes place at depth, so hydrostatic pressure (HP) effects on ROS production and metabolic rate have been studied. In HP acclimatized yellow eel (non-migrating eel); pressure effects are similar to those observed during metamorphosis in silver migrating-eel at atmospheric pressure i. E. Optimization of energy metabolism by the way of a ROS production decrease. At the silver stage, HP has no or few effects on ROS metabolism but the relationship between ROS production and the metabolic rate is reversed according to the animal sex

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Sharif, Tanveer. "Étude des effets anticancéreux de polyphénols d'origine naturelle : rôle essentiel des espèces réactives de l'oxygène et des gènes suppresseurs de tumeurs." Thesis, Strasbourg, 2012. http://www.theses.fr/2012STRAJ103.

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Abstract:

Ce travail de recherche montre que les différentes sources de polyphénols (polyphénols de vin rouge, jus d'aronia melanocarpa, jus de cassis) ont de puissants effets chemothérapeutiques et chemopréventifs sur différentes lignées de culture cellulaires, mais également in vivo sur un modèle de tumorigenèse. Ces polyphénols inhibent la prolifération des cellules cancéreuses (leucémie lymphoblastique aigüe, cellules souches) en induisant un arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose. Les effets anti-cancéreux sont dépendants de l' induction du stress oxydatif mettant en jeu les anions superoxydes et le peroxyde d·hydrogène qui à son tour, activent les voies de signalisation conduisant à une surexpression des gènes suppresseurs de tumeurs comme p73 et p53 et ainsi que caspase 3. Celle étude montre également que les polyphénols contrôlent la prolifération des cellules cancéreuses au niveau épigénétique en diminuant l'expression d'UHRF1 (un intégrateur épigénétique de prolifération). Cependant l'effet anticancéreux de ces polyphénols est sélectif et agit sur les cellules cancéreuses et non sur les cellules normales. Le fractionnement de ces sources riches en polyphénols et les études menées en utilisant des composés purs montrent que les effets anticancéreux sont attribués à plusieurs composés différents. Cette étude montre l' identification de cyanidine-3-glucoside et de cyanidine-3-rutinoside comme source de composés anticancéreux actifs
This research work shows that different sources of polyphenols (RWPs, AMJ and blackcurrant) have strong chemotherapeutic and chemopreventive effects on several cancer cells lines (acute lymphoblastic leukemia and cancer stem cells) and also in vivo in a model of tumorigenesis in mouse. These polyphenols inhibit the proliferation of various cancer cells by inducing cell cycle arrest and apoptosis. The anti-cancer effect is dependent on the induction of oxidative stress involving superoxide anions and hydrogen peroxide which, in turn, activate the signaling pathways leading to the re-expression of tumor suppressor genes such as p73 and p53 and executor of apoptosis such as caspase 3. This study also shows that polyphenols control the proliferation of cancer cells at epigenetic level by decreasing the expression of UHRF1 (an epigenetic integrator of proliferation). Moreover, the anticancer effect of these polyphenols is selective towards cancer cells and not in normal cells. Fractionation of these rich sources of polyphenols and studies on the commercially available pure products shows that anti-cancer effects of these polyphenols involve several different compounds. This study leads to the identification of cyaniding-3-O-glucoside and cyaniding-3-O-rutinoside as active anticancer compounds

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Ragu, Sandrine. "Instabilité génomique et mort cellulaire induites par stress oxydatif et implication de la régulation redox chez la levure Saccharomyces cerevisiae." Paris 11, 2008. http://www.theses.fr/2008PA112283.

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Abstract:

Le maintien de la stabilité génomique est crucial pour la croissance et la survie des cellules. Les GCRs (Gros Réarrangements Chromosomiques) sont des instabilités génomiques observées dans des cancers. L’absence de TSA1 (peroxyrédoxine clé) de Saccharomyces cerevisiae entraîne la formation d’un large spectre de mutations parmi lesquelles des GCRs et cause la mort cellulaire en absence de Rad51, Mre11 (gènes de la recombinaison homologue) et Rad6. Nous avons montré que l’induction des GCRs chez les mutants tsa1 est indépendant de l’activité translésionnelle (TLS) des ADN polymérases, mais la croissance en anaérobie diminue significativement les taux de mutations GCRs chez la levure sauvage et les mutants tsa1, et restaure la viabilité cellulaire des mutants tsa1 rad51, tsa1 mre11 et tsa1 rad6. Le métabolisme de l’oxygène associé aux espèces réactives d’oxygène (ROS) est donc la majeure source de dommages endogènes de l’ADN chez ces mutants. Nous montrons que la tension en oxygène affecte différemment les taux de GCRs dans les cellules déficientes en réparation de l’ADN. Nous avons identifié la mutation du gène TRR1 comme suppresseur de létalité de tsa1 rad51. Une hypothèse est que l’absence de Trr1 entraîne l’accumulation dans le noyau de la forme oxydée active de Yap1 (facteur de transcription régulant des antioxydants induits par H2O2), et une induction accrue des activités antioxydantes, qui compensent l’absence de Tsa1 d’où tsa1 rad51 trr1 devient viable en aérobie. Des expériences de génétique et biologie moléculaire ont été faites pour vérifier cette hypothèse. Nos travaux montrent l’importance d’une régulation redox fine et les différentes facettes des ROS
Maintaining genome stability is crucial for cell growth and cell survival. One type of genomic instability observed frequently in many cancers is gross chromosomal rearrangements (GCRs). The absence of Tsa1, a key peroxiredoxin, in Saccharomyces cerevisiae caused the accumulation of a broad spectrum of mutations including GCRs, and synthetic lethality when combined with mutations in recombination repair pathway. Tsa1-associated GCRs were independent of the activity of the translesion DNA polymerases, but anaerobic growth conditions greatly reduced GCR rates of wild-type and tsa1 mutants, and restored the cellular viability of tsa1 rad51, tsa1 mre11 and tsa1 rad6 double mutants. Therefore oxygen metabolism and reactive oxygen species are important sources of DNA damages. However, the effect of oxygen tension on the GCR formation of different mutants depended on the genetic defect underlying the increased GCR rate. We identified that the mutation of gene TRR1 is the suppressor of tsa1 rad51. One hypothesis is that the absence of Trr1 induces nuclear accumulation of the oxidized and active form of Yap1 (transcription factor regulating the majority of the anti-oxidants in response to H2O2), resulting in increased intracellular antioxidant activities, which compensate for the absence of Tsa1. Consequently, triple mutant tsa1 rad51 trr1 becomes viable in aerobe. We further performed genetic and molecular biology experiments to verify this hypothesis. Our results show the importance of a fine redox regulation and the different facets of ROS

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Kouoh, Elombo Ferdinand. "Modèles physiopathologiques de stress oxydatif et d'évaluation des propriétés anti-oxydantes ou anti-élastases de médicaments." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2P006.

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Chedid, Pia. "L'adiponectine, médiateur émergent de l'inflammation : régulation de la NADPH oxydase phagocytaire." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077021.

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Abstract:

La fonction microbicide des phagocytes repose sur la production de formes réactives de l'oxygène (FRO) par le complexe enzymatique NADPH oxydase. L'adiponectine AcrpSO est une adipokine retrouvée dans le liquide synovial des patients atteints de polyarthrite rhumatoïde (PR). Elle présente des homologies de structure avec la protéine du complément C1q et le tumor necrosis factor-a (TNF-a). Une hyperactivation de la NADPH oxydase phagocytaire est impliquée dans les maladies inflammatoires articulaires. Notre but a été d'identifier l'effet d'AcrpSO et de gAcrp30 sur l'activité de la NADPH oxydase phagocytaire. Nos résultats montrent que gAcrpSQ (minoritaire dans la circulation) représente 25% de l'adiponectine totale dans le liquide synovial. GAcrpSO potentialise l'activation (agent primant) de la NADPH oxydase induite par le peptide bactérien N-formylé fMLF par une voie dépendante des mitogen-activatedprotein kinases (MAPK) p38 MAPK et ERK1/2. Ces kinases convergent pour phosphoryler la sous-unité régulatrice p47phox sur le résidu Ser345. En revanche, les formes entières oligomériques inhibent la production des FRO induite par le fMLF ainsi que le priming induit par gAcrp30 ou TNF-a. Acrp30 n'a pas d'effet sur la phosphorylation de p38 MAPK et ERK1/2 mais induit la phosphorylation de YAMP-activated protein kinase (AMPK), un régulateur négatif de la NADPH oxydase. Nos données établissent l'adiponectine comme un nouveau régulateur de la NADPH oxydase et suggèrent que l'équilibre entre les isoformes pro- et anti-inflammatoires de l'adiponectine participe à la physiopathologie de la PR
The anti-microbial fonction of phagocytes is based on the production of reactive oxygene species (ROS) by the enzymatic complex NADPH oxidase. Adiponectin Acrp30 is an adipokine found in synovial fluids of rheumatoid arthritis (RA) patients. Adiponectin contains structural homologies with thé Clq complement protein and tumor necrosis factor-a (TNF-a). Hyperactivation of phagocytic NADPH oxidase is associated with inflammatory joint diseases. Our aim was to identify the effect of Acrp30 and gAcrp30 on phagocytic NADPH oxidase activity. Our results show that gAcrp30 (the minest form in the plasma), represents 25% of total adiponectin in synovial fluid. GAcrp30 potentiates (priming agent) NADPH oxidase activation induced by the bacterial N-formyl peptide flVILF via a mitogen-activated protein kinases (MAPK) p38 MAPK and ERKl/2-dependant pathway. These kinases converge to phosphorylate the regulatory sub-unit p47phox on residue Ser345. On the other hand, full length adiponectin oligomers inhibit fMLF-induced ROS production and gAcrp30 or TNF-a-induced priming of NADPH oxidase. Acrp30 has no effect on p38 MAPK and ERK1/2 phosphorylation but induces phosphorylation of AMP-activated protein kinase (AMPK), a negative regulator of NADPH oxidase. Our data establish adiponectin as a novel NADPH oxidase regulator and suggests that an imbalance between pro- and anti-inflammatory adiponectin isoforms participates in the pathophysiology of RA

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Larue, Ludivine. "Développement de nouvelles plateformes pour l’amélioration du traitement du glioblastome par thérapie photodynamique." Electronic Thesis or Diss., Université de Lorraine, 2021. http://www.theses.fr/2021LORR0045.

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Abstract:

Le traitement des tumeurs malignes du cerveau, dont le glioblastome multiforme est la forme la plus agressive, est un défi majeur de la cancérologie. La thérapie photodynamique (PDT) apparaît comme une technique prometteuse dans ce contexte. La PDT permet une destruction des cellules cancéreuses par l’action de trois éléments à savoir un photosensibilisateur (PS), la lumière et l’oxygène. Après photoexcitation sous lumière visible, le PS engendre, en présence d’oxygène, la formation d’espèces réactives de l’oxygène dont d’oxygène singulet (1O2), toxiques, qui vont détruire les tissus avoisinants. Malheureusement, la PDT souffre de deux inconvénients majeurs qui sont le manque de sélectivité de nombreux PSs actuellement utilisés cliniquement ainsi que le besoin d’oxygène pour être efficace. Pour pallier le manque de sélectivité, le ciblage des néovaisseaux tumoraux est une approche prometteuse. L’affinité du peptide KDKPPR pour le récepteur NRP–1 surexprimé sur les cellules endothéliales a déjà été prouvée par notre équipe. Concernant le manque d’oxygène, nous nous sommes intéressés aux alcoxyamines capables de générer des radicaux alkyles toxiques par activation lumineuse, même en milieu hypoxique. Ces alcoxyamines photoactivables sont décrites dans la littérature mais jamais utilisées dans le traitement de tumeurs. Dans le cadre de cette thèse, nous avons développé une plateforme trimodale combinant un PS et un alcoxyamine photoactivable pour une PDT en milieu normoxique et hypoxique, respectivement, et un peptide pour cibler NRP–1. La synthèse de cette plateforme a été réalisée avec succès. L’étude de cette plateforme a montré un maintien de la capacité à former de l’1O2 et de l’affinité pour NRP–1. Grâce à la technique de spectroscopie RPE, les radicaux engendrés par l’illumination de l’alcoxyamine ont pu être détectés. Bien que prometteuse, cette plateforme n’est pas applicable en PDT en raison d’une photoactivation de l’alcoxyamine à une longueur d'onde UV inadaptée. La seconde partie de cette thèse a donc été consacrée à l’optimisation de cette plateforme. Nous nous sommes focalisés sur trois pistes : 1) le design d’une nouvelle alcoxyamine absorbant à de plus hautes longueurs d’onde 2) l’amélioration de la solubilité de la plateforme en greffant une cyclodextrine et 3) le développement d’un nouveau peptide ciblant NRP–1 et pouvant être internalisé dans les cellules
The treatment of malignant brain tumors, of which glioblastoma multiform is the most aggressive form, is a major challenge in oncology. Photodynamic therapy (PDT) appears to be a promising technique in this context. PDT destroys cancer cells by the action of three elements: a photosensitizer (PS), light and oxygen. After photoexcitation under visible light, PS generates, in the presence of oxygen, the formation of reactive oxygen species including singlet oxygen (1O2), toxic, which will destroy surrounding tissues. Unfortunately, PDT suffers from two major drawbacks which are the lack of selectivity of many PSs currently used clinically as well as the need for oxygen to be effective. To overcome the lack of selectivity, targeting tumor neovessels is a promising approach. The affinity of KDKPPR peptide for the overexpressed NRP–1 receptor on endothelial cells has already been demonstrated by our team. Regarding the lack of oxygen, we were interested in alkoxyamines able of generating toxic alkyl radicals by light activation, even in hypoxic environment. These photoactivatable alkoxyamines are described in the literature but never used in tumor treatment. In this thesis, we developed a trimodal platform combining a PS and a photoactivatable alkoxyamine for PDT in normoxic and hypoxic medium, respectively, and a peptide to target NRP–1. The synthesis of this platform was successfully performed. The platform study confirmed the conservation of the ability to form 1O2 and the NRP–1 affinity. The detection of the photogenerated radicals from alkoxyamine is detected by EPR spectroscopy. Although promising, this platform is not applicable in PDT due to the use of an unsuitable UV wavelength for photoactivation of alkoxyamine. The second part of this thesis was devoted to the platform optimization. We focused on three avenues: 1) Design of a new alkoxyamine absorbing at higher wavelengths, 2) Improvement of the platform solubility by grafting a cyclodextrin and 3) Development of a new NRP–1–targeted peptide which can be internalized in cells

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Moulet, Hélène. "Mort cellulaire initiée par l'oxygène singulet : mise en évidence d'effets à longue portée." Thesis, Lille 1, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL1R004/document.

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Abstract:

L'oxygène singulet (1O2) , premier état électronique excité du dioxygène, est l'agent cytotoxique majeur en photo-thérapie dynamique. Nous avons utilisé l'activation optique directe du dioxygène pour faire un lien quantitatif entre taux de production d'1O2 et mort cellulaire. Dans des sphéroïdes tumoraux, qui reproduisent in vitro la géométrie des tumeurs, nous mettons en évidence de la mort cellulaire à longue portée qui ne peut être expliquée par l'action directe de 1O2 . Cette mort est due à de l' 1O2 produit au sein des sphéroïdes mais à l'extérieur des cellules. Nous avons mis en place une expérience qui nous permets de contrôler spatialement la production de 1O2 à l'extérieur des cellules. La mort cellulaire observée à longue portée dans ces expériences implique la présence d'espèces réactives de l'oxygène secondaires.Enfin, certaines modalités de mort sont privilégiées du point de vue thérapeutique pour, entre autres, limiter la réponse inflammatoire. Nous avons mis en place une expérience in vitro qui nous permet d'observer différentes modalités de mort en fonction du taux de production de 1O2 et de la durée d'exposition
Singlet oxygen (1O2) is the first excited state of molecular oxygen. It is the major cytotoxic agent in photo-dynamic therapy. We use direct optical excitation of oxygen to quantitatively estimate 1O2 production rate in cells and to study its cytotoxic effects.In multicellular tumor spheroids, which mimic tumor geometry in vitro, we highlight long-range cell death that cannot be explained by singlet oxygen alone. This death is caused by 1O2 generated within spheroids but outside of the cells. We set up an experiment enabling spatial control of extra-cellular 1O2 production. The measured long-range cell death in these experiments implies the presence of secondary reactive oxygen species. Lastly, some cell death modalities are preferred from a treatment perspective, in order, for example, to limit inflammatory response. We set up an in vitro experiment that enabled us to observe different cell death modalities according to 1O2 production rates and exposure times

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Ponderand, Léa. "Caractérisation de la réponse immunitaire innée cytosolique antibactérienne en réponse à l'infection par Francisella tularensis; comparaison avec Francisella novicida." Electronic Thesis or Diss., Université Grenoble Alpes, 2024. http://www.theses.fr/2024GRALV009.

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Abstract:

Caractérisation de la réponse immunitaire innée cytosolique antibactérienne en réponse à l'infection par Francisella tularensis ssp holarctica; comparaison avec Francisella novicidaFrancisella tularensis est une bactérie intracellulaire facultative, responsable de la Tularémie, qui envahit préférentiellement les cellules immunitaires phagocytaires tels que les macrophages en s’y répliquant. Après être phagocytée, Francisella s’échappe du phagosome par un mécanisme encore inconnu et se réplique dans le cytosol de la cellule, provoquant la mort cellulaire par pyroptose et sa dissémination.L’intérêt de la stimulation des macrophages par IFNγ sur la restriction de la réplication cytosolique de Francisella a été démontré depuis 1992. Différents effecteurs ont été identifiés pour expliquer l’effet de l’IFNγ tels que le blocage de l’échappement du phagosome, le rôle des espèces réactives de l’oxygène/azote ou encore l’implication des GBPs (Guanylate Binding Protein). Cependant ces études ont été réalisées avec des souches de Francisella non pathogènes pour l’Homme (Francisella novicida). Or les souches virulentes de F. tularensis échappent à la restriction médiée par l’IFNγ.Des résultats préliminaires réalisés sur des souches de Francisella tularensis ssp holarctica issues de la collection de souches cliniques du Centre National de Référence, ont montré que la restriction de la réplication intracellulaire de Francisella est non seulement dépendante de la stimulation macrophagique par IFNγ mais également du milieu de culture dans lequel se trouve les cellules infectées.L’objectif de ce travail était donc d’étudier les mécanismes de restriction de la réplication des souches virulentes. Plus précisément, il s’agissait de déterminer les effecteurs macrophagiques, dépendant de l’IFNγ et du milieu de culture, impliqués dans la restriction de réplication intracellulaire d’une souche de F. tularensis subsp holarctica et les facteurs de virulence bactériens permettant à Francisella de résister à l’effet de l’IFNγ.Dans une première partie, une approche dite phénotypique a été effectuée en se basant sur l‘analyse des mécanismes et/ou des effecteurs décrits dans la littérature. La réplication intracellulaire de Francisella et l’évaluation de la mort macrophagique ont été mesurées dans un modèle d’infection de BMDMs (Bone Marrow Derived Macrophages) « wild type » ou délétés pour les GBPs dans différentes conditions expérimentales. Ces éléments ont permis de mettre en évidence l’implication des espèces radicalaires de l’azote et de l’oxygène dans la réponse dépendante de l’IFNγ et le rôle partiel des GBPs. L’observation de la colocalisation de la bactérie avec différentes protéines phagosomales en immunofluorescence a permis d’explorer les mécanismes d’échappement du phagosome. L’impact de la stimulation macrophagique par IFNγ sur l’échappement de la bactérie n’a cependant pas pu être évalué dans ce travail.Dans une deuxième partie, une approche génotypique a été réalisée en s’appuyant sur l’analyse du transcriptome des macrophages murins après infection par Francisella. Ces résultats ont permis de confirmer l’induction de l’expression de gènes spécifiques en fonction du milieu de culture utilisé, indépendamment de la stimulation par IFNγ. Une surexpression de gènes codant des protéines et enzymes impliquées dans la génération des espèces radicalaires de l’azote et de l’oxygène a été retrouvée.Ces travaux ont permis de valider le fait que les mécanismes de restriction de la réplication intracellulaire de Francisella sont variables selon l’espèce bactérienne et démontrent le rôle des conditions immunométaboliques dans le contrôle de l’infection. Ainsi, l’immunité innée macrophagique médiée par l’IFNγ contre les souches virulentes de F. tularensis ssp holarctica semble faire intervenir les espèces radicalaires de l’azote et de l’oxygène devant les GBPs ou le blocage de l’échappement phagosomal
Deciphering the antibacterial cytosolic innate immunity: from a model strain to clinical and virulent Francisella tularensis strainsFrancisella tularensis is a facultative intracellular bacterium, responsible for Tularemia, which preferentially invades and replicates within phagocytic immune cells such as macrophages. After phagocytosis, Francisella escapes the phagolysosome and replicates in the cell’s cytosol, causing cell death by pyroptosis and bacterial dissemination.The interest of IFNγ stimulation of macrophages leading Francisella replication restriction have been described since 1992, nevertheless the specific mechanisms are not fully understood. Different effectors have been identified to explain the IFNγ restriction effect: reactive oxygen or nitrogen species production, phagosomal escape prevention or the involvement of GBPs (Guanylate Binding Protein). However, these studies were mainly performed with non-virulent Francisella strains such as Francisella novicida, whereas virulent strains of F. tularensis escape IFNy-mediated restriction.Preliminary results performed on Francisella tularensis ssp holarctica strains from the National reference Centre collection have shown that restriction of intracellular Francisella replication is not only dependant on stimulation by IFNy, but also on the cells culture medium.The objective of this work was to explore the restriction mechanisms of both IFNγ and culture media dependent. More precisely, the aim was to determine the IFNy and medium-dependant macrophagic effectors involved in the intracellular replication restriction of F. tularensis subsp holarctica and the bacterial virulence factors allowing Francisella to resist to the IFNγ effect.In a first part, a phenotypic approach was realized, based on analysis of the mechanism and/or effectors described in the literature. Intracellular Francisella replication and macrophage cell death were measured in an infection model of “wild type” BMDMs (Bone Marrow Derived Macrophages) or GBP-deleted BMDMs under different experimental conditions. These elements highlighted the implication of reactive nitrogen and oxygen species in the IFNγ dependent response, and the partial role of GBPs. The observation of the bacterial colocalization with phagosomal protein using immunofluorescence assays allowed us to explore Francisella phagosomal escape mechanisms. However, the impact of the IFNγ stimulation on the bacterial escape could not be assessed in this work.In a second part, a genotypic approach was developed, based on the transcriptome analysis of murine macrophage after infection with Francisella. These results confirmed the existence of a specific gene expression pattern dependant of the culture medium used, and independent of IFNγ stimulation. Overexpression of genes encoding proteins involved in the reactive nitrogen and oxygen species generation was observed.This work has validated the fact that the restriction of intracellular Francisella replication mechanisms are variable depending on the bacterial species, and demonstrates the role of immunometabolic conditions in the control of infection. Thus, IFNγ mediated macrophages innate immunity against virulent F. tularensis ssp holarctica strains appears to involve the nitrogen and oxygen radical species, before the GBPs or blocking phagosomal escape

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Farhat, Firas. "Fonction mitochondriale et espèces réactives dérivées de l'oxygène : effets du genre et de l'entraînement en endurance chez le rat Wistar et l'anguille européenne." Thesis, Brest, 2015. http://www.theses.fr/2015BRES0018/document.

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Abstract:

La mitochondrie est le siège principal de la production d’énergie sous forme d’ATP en conditions aérobies, mais aussi d’espèces réactives dérivées de l’oxygène (ROS). La fonction mitochondriale est étroitement liée à la production de ROS puisque ces derniers, selon leur taux, peuvent altérer ou optimiser le rendement énergétique. La plasticité structurale et fonctionnelle de la mitochondrie est essentielle au maintien de l’homéostasie dans toute situation qui nécessite des ajustements métaboliques comme l’exercice physique. Les mécanismes adaptatifs de la fonction mitochondriale et des ROS lors de l’entrainement sont encore loin d’être élucidés ainsi que l’impact du genre sur ces réponses. Dans cette perspective, deux modèles animaux (rat Wistar et anguille européenne) ont été choisis. Les effets d’un entrainement en endurance de même intensité (70% de la vitesse maximale aérobie de course ou de nage) ont été étudiés chez le rat Wistar et l’anguille européenne argentée. Cette dernière est une espèce endurante capable d’effectuer une migration de reproduction de 6000 km et caractérisée par un dimorphisme sexuel de taille. Des mesures in vitro de la consommation d’oxygène, la production radicalaire et d’ATP ont été effectuées simultanément à partir de fibres perméabilisées de cœur et de muscle squelettique. La vulnérabilité ou résistance de la fonction mitochondriale à l’exposition à un système générateur de ROS (mimant un stress oxydant) a également été étudiée. Avant entrainement, chez le rat Wistar, la femelle présente une fonction mitochondriale plus efficiente énergétiquement et plus résistante aux ROS, alors que chez l’anguille, ce profil métabolique et radicalaire est plutôt observé chez le mâle. Après entrainement, quelle que soit l’espèce, la meilleure performance physique observée s’accompagne de modifications métaboliques et radicalaires différentes selon le genre et l’espèce. Chez le rat, l’amélioration de la fonction mitochondriale se traduit différemment selon le sexe. Chez le mâle, l’entrainement induit une amélioration du rendement énergétique via un meilleur couplage entre oxydation et phosphorylation et/ou une meilleure utilisation des électrons au niveau de la chaine respiratoire. Chez la femelle, l’augmentation de la production d’ATP serait liée à l’augmentation de la consommation d’oxygène mitochondriale. Comme chez le rat, l’entraînement induit globalement chez l’anguille une amélioration du rendement énergétique et de la résistance de la fonction mitochondriale aux ROS, mais uniquement chez le mâle. L’ensemble de ces résultats montre des réponses métaboliques et radicalaires dépendantes du genre. Quelle que soit l’espèce, l’entrainement semble être chez le mâle plus bénéfique que chez la femelle en termes d’efficacité énergétique mitochondriale et de résistance de la fonction mitochondriale à un stress oxydant. Dans le contexte de la migration de l’anguille, ces adaptations permettraient au mâle, largement plus petit que la femelle, une efficacité de nage supérieure, permettant leur synchronisation d’arrivée sur le lieu de reproduction. Les similitudes interspécifiques de réponse à l’entraînement selon le genre confortent l’intérêt d’utilisation du modèle poisson dans le champ de la physiologie de l’exercice
Mitochondrion is the main site of aerobic energy (ATP) and reactive oxygen species (ROS) productions. Mitochondrial function is closely linked to ROS, which, according their rate, can alter or optimize energy efficiency. Structural and functional plasticity of mitochondria is essential to maintain homeostasis in any situation that requires metabolic adjustments as physical exercise. The adaptive mechanisms of mitochondrial function and ROS during training and the impact of gender on these responses are still far from being solved. In this perspective, two animal models (Wistar rat and European eel) were chosen.The effects of endurance training of the same intensity (70% of maximal aerobic speed running or swimming) were studied in Wistar rat and silver European eel. The latter is an enduring species capable of performing a spawning migration of 6000 km and characterized by sexual dimorphism in size. In vitro measurements of oxygen consumption, free radical and ATP productions were carried out simultaneously from heart and skeletal muscle permeabilized fibers. The vulnerability or resistance of the mitochondrial function to a ROS generating system exposure (mimicking oxidative stress) was also studied.Before training, in rat, female has a mitochondrial function energetically more efficient and more resistant to ROS, whereas in eel, this metabolic and radical profile is observed rather in male. After training, whatever the species, the improved physical performance observed is associated with various metabolic and radical changes which depending on gender and species. In rats, the improving of mitochondrial function translates differently according to gender. In male, training induces improvement in energy efficiency through a better coupling between oxidation and phosphorylation and/or better use of electrons at the respiratory chain level. In female, increasing in ATP production may be related to the increase in mitochondrial oxygen consumption. As in rats, training induces globally in eel an improvement in energy efficiency and resistance of mitochondrial function to ROS, but only in male. All these results show metabolic and radical responses depending on gender. Whatever the species, training seems to be most beneficial in males than in females in terms of mitochondrial energy efficiency and resistance of mitochondrial function to oxidative stress. In the context of eel migration, these adaptations allow to male, largely smaller than female, a higher swim efficiency, allowing their synchronization on breeding site. Interspecific similarities in training response by gender confirm the interest of fish model’s using in the field of exercise physiology

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Guillerey, Camille. "Etude de l'initiation des réponses immunitaires innées et adaptatives par les cellules dendritiques plasmacytoïdes." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077250.

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Abstract:

Les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) sont connues pour leur capacité à sécréter d'importantes quantités d'interférons de type I. Nous avons généré un nouveau modèle murin dépourvu de pDC : les souris IK L/L Rag -/-. Ce modèle est basé sur une mutation hypomorphique du gène Ikaros sur un fond Rag2 KO, conduisant à l'absence de pDC, de lymphocytes B et T. En utilisant les souris IK L/L Rag -/-, nous avons établi que les pDC sont essentielles pour l'induction d'une activité NK en réponse à une stimulation par le CpG, un agoniste de TLR-9. Nous avons également démontré que les pDC sont critiques pour la production systémique de chimiokines participant au recrutement de cellules innées en réponse à une stimulation TLR-9. De plus, l'injection de splénocytes de souris C57BL/6 préalablement déplétés en pDC aux souris IK L/L Rag -/- reconstitue les compartiments lymphoïdes B et T, permettant ainsi l'utilisation des souris IK L/L Rag -/- pour l'étude des réponses adaptatives en absence de pDC. Enfin, la dernière partie de cette thèse a porté sur les mécanismes induits par l'activation et permettant la présentation croisée d'antigènes par les pDC. Nous avons démontré d'une part, qu'une stimulation par un ligand de TLR-7 permet la protection des antigènes internalisés en régulant le pH phagosomal des pDC et d'autre part, que les espèces réactives de l'oxygène participent à l'augmentation de l'expression des molécules de co-stimulation et à l'activation des lymphocytes T par les pDC. L'ensemble de ces résultats contribue à l'avancée des connaissances concernant le rôle des pDC dans l'immunité innée et des mécanismes par lesquels elles induisent une réponse adaptative
Plasmacytoid dendritic cells (pDCs) are well known for their ability to secrete huge amounts of type I interferons. We generated a new mouse model lacking pDCs : the IK L/L Rag -/- mice. This model is based on an hypomorphic mutation of the Ikaros gene on a Rag 2 deficient background, leading to the absence of pDCs, B and T cells. Using the IK L/L Rag -/- mice, we established that pDCs are essential for NK cell responses to a TLR-9 stimulation by CpG. We also demonstrated that pDCs are crucial for the systemic production of chemokines required for innate cell recruitment following TLR-9 triggering. Moreover, by injecting pDC-depleted splenocytes to IK L/L Rag -/- mice, we were able to reconstitute both B and T cell compartments. Thus, these mice can be used to study adaptive immune responses in the absence of pDCs. Finally, we studied the activation- induced mechanisms that allow antigen cross-presentation by pDCs. Finally, we studied the activation-induced mechanisms that allow antigen cross-presentation by pDCs. We showed that a TLR-7 stimulation allows the protection of internalized antigens by regulating pDC phagosomal pH. In addition, we found that reactive oxygen species participate to the up-regulation of co--stimulatory molecule and to T cell activation by pDCs. Altogether, these results contribute to a better understanding of how pDCs initiate innate and adaptive immune responses

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Poncelet, Louise. "Développement et caractérisation d'un nouveau modèle cellulaire permettant l'étude de la maturation de la NADPH oxydase Duox en association avec son activateur DuoxA." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2019. https://dipot.ulb.ac.be/dspace/bitstream/2013/288456/3/Manuscrit.pdf.

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Abstract:

Ce travail de thèse consiste en l’étude de deux membres de la famille des NADPH oxydases :Duox1 et Duox2, et leurs partenaires DuoxA1 et DuoxA2. Exprimées dans la thyroïde, ces deux enzymes sont essentielles à la synthèse des hormones thyroïdiennes, puisqu’elles produisent du peroxyde d’hydrogène (H2O2), indispensable à l’organification de l’iodure par la thyroperoxydase. Duox1 et Duox2 sont également exprimées dans de nombreux autres tissus, comme les voies respiratoires et le tractus digestif, au sein desquels elles jouent un rôle primordial dans la défense de l’organisme contre les pathogènes. Afin d’être exprimées à la surface des cellules où elles sont actives, les protéines Duox nécessitent la présence de facteurs de maturation, appelés DuoxA1 et DuoxA2. Initialement identifiées comme des protéines résidentes du réticulum endoplasmique lors de leur découverte en 2006, les protéines DuoxA ont été détectées à la surface des cellules et pourraient dès lors former un complexe membranaire avec les protéines Duox. Les mécanismes d’activation des Duox par leurs facteurs de maturation DuoxA ne sont pas encore complètement connus à ce jour et la preuve formelle d’une interaction entre les deux partenaires à la surface des cellules était encore manquante lorsque ce travail de thèse a débuté. Nous avons généré des clones de cellules HEK293 Tet-On3G exprimant de manière constitutive les protéines Duox1 ou Duox2, ainsi que les protéines DuoxA1 ou DuoxA2 sous le contrôle d’un promoteur inductible à la doxycycline, et ce pour les 4 combinaisons suivantes :D1DA1, D2DA2, D1DA2 et D2DA1. Ces cellules ont permis d’étudier l’expression, la stabilité et l’activité des enzymes Duox en fonction de l’expression modulée de DuoxA. De plus, la présence d’étiquettes HA et V5 au niveau de l’extrémité NH2-terminale des protéines Duox et DuoxA, respectivement, a permis de comparer de manière fiable l’expression des protéines dans les différents types de clones et de mettre en évidence une interaction entre les deux partenaires. Nous avons confirmé l’efficacité de ce système cellulaire pour reconstituer l’expression des protéines DuoxA1 et DuoxA2, ainsi que la maturation et l’activité concomitantes des protéines Duox1 et Duox2. Lorsqu’elles sont exprimées seules, ni les protéines Duox ni les protéines DuoxA ne sont exprimées à la surface des cellules. Dans les cellules exprimant les partenaires non pairés (Duox1/DuoxA2 et Duox2/DuoxA1), l’expression des protéines à la surface des cellules est plus faible, tout comme la production d’H2O2 ionomycine-dépendante qui y est associée. En normalisant cette production d’H2O2 à l’expression des protéines Duox et DuoxA à la surface des cellules, nous avons montré que l'association Duox2/DuoxA2 était plus active que le partenariat Duox1/DuoxA1, ce qui justifie que Duox2/DuoxA2 constitue le système générateur majeur de peroxyde d’hydrogène dans la thyroïde. Par ailleurs, nous avons montré que l’H2O2 produit par les cellules exprimant le couple Duox2/DuoxA2 induisait des cassures double brins à l’ADN, après stimulation de l’activité de Duox2 par l’ionomycine et le PMA. Enfin, nous avons montré que les protéines Duox et DuoxA stabilisent leur partenaire respectif. Lorsqu’elles sont associées à leur partenaire pairé (D1DA1 et D2DA2), les protéines Duox et DuoxA sont plus stables et leur temps de demi-vie est augmenté, par rapport aux couples non pairés (D1DA2 et D2DA1). Nous avons montré une interaction spécifique entre les protéines Duox et DuoxA à la surface des 4 types de clones HEK293 Tet-On3G, à l’aide de la technique de Duolink®. Les complexes formés par les couples pairés se sont avérés encore une fois plus stables au cours du temps que les complexes non pairés. Finalement, nous avons démontré l’importance de la glycosylation des facteurs de maturation dans leur expression à la surface, ainsi que dans la maturation et l’activité des enzymes Duox. Ce travail de thèse a permis de démontrer que le système générateur d’H2O2 tel qu’il est retrouvé au pôle apical des thyrocytes est un complexe enzymatique membranaire constitué de la NADPH oxydase DUOX1/2 qui interagit avec les DUOXA1/2 respectivement. Le complexe DUOX2/DUOXA2 est le plus actif et des mutations dans l’un des partenaires sont fréquemment responsables d’hypothyroïdies congénitales.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques (Médecine)
info:eu-repo/semantics/nonPublished

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Roumieux, Marie. "Homéostasie des espèces oxygénées réactives et physiopathologie de l'hypertrophie/insuffisance cardiaque : focus sur l'isoforme Nox4 de la NADPH oxydase : comparaison d'un inhibiteur synthétique sélectif GKT137831 avec PROVINOLS tm concentré polyphénolique de vin rouge." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077105.

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Abstract:

L'insuffisance cardiaque est un risque majeur de morbidité et de mortalité dans les pays industrialisés et constitue un problème majeur de santé publique. Ce syndrome est la voie finale de nombreuses maladies cardiaques qui induisent dans un premier temps un remodelage adaptatif du myocarde, l'hypertrophie du ventricule gauche. Il est de plus en plus évident que les espèces oxygénées réactives interviennent dans le développement de l'hypertrophie et de l'insuffisance cardiaque, en impactant sur des voies moléculaires essentielles à la régulation du trophisme des cellules cardiaques ou à leur survie. Le système NADPH Oxidase dédié à la production de ROS, source majoritaire dans le système cardiovasculaire, est particulièrement impliqué dans le processus physiopathologique cardiaque. Nous avons confirmé que l'activité NADPH Oxidase est augmentée par des stress pro-trophiques, tant in vitro qu'in vivo, et que cette augmentation potentialise le développement de l'hypertrophie et de la défaillance cardiaque. Nous avons constaté les effets antioxydants d'un concentré du contenu en polyphénols de vin rouge, le Provinols tm, grâce auxquels nous supposons qu'il provoque l'adaptation bénéfique du coeur, en réponse à la surcharge chronique de pression, dans un modèle de sténose aortique (TAC), chez le rat. L'isoforme Nox4 est majoritairement sollicité par une stimulation pro-trophique, in vitro. L'utilisation de son inhibiteur pharmacologique sélectif, le GKT137831, ne nous a pas permis de faire la démonstration du rôle joué par l'augmentation de son activité de production de ROs, in vivo, dans le modèle chirurgical de TAC, chez le rat ou la souris. Nous restons, à ce jour, dans l'impossibilité de conclure, quant à son rôle délétère ou protecteur, au cours du remodelage morphologique et fonctionnel cardiaque, grâce à cet outil pharmacologique
Left Ventricular Hypertrophy (LVH) and most importantly heart failure are major causes of morbidity and mortality worldwide. Reactive Oxygen Species (ROS) such as anion superoxide (O2-) and H2O2 play an important role in regulating growth and death of cardiac myocytes and the hypertrophic process is mediated, in part, by oxidative stress-modulated signaling pathways. NADPH Oxidases (Nox) isoforms are a major source of ROS and play an important role in cardiovascular pathophysiology. Here, we demonstrate that NADPH Oxidase activity is augmented by hypertrophic stimuli, in vitro and in vivo. The latter is characterized by an increased Nox-dependent ROS production that may potentiate the development of LVH and its progression towards heart failure. Indeed, we suppose that a daily oral administration of Provinols tm, a mix of red wine polyphenols compounds, by limitating ROS production from NADPH Oxidase system, maintains an adaptative LVH and prevents cardiac dysfunction, in a model of pressure- overload induced by Thoracic Aortic Constriction (TAC) in rats. NADPH Oxidase 4 (Nox4) protein is overexpressed and produce more ROS in neonatal cardiomyocytes stimulated by PE, in vitro. Thus, its overactivation significantly enhanced PE-induced hypertrophy in cardiomyocytes, as evaluated by protein neosynthesis and cell area analysis. We have validated the effect of a new pharmacological selective inhibitor of Nox4 activity, GKT137831, on cultured cardiomyocytes. We have also investigated the impact of a daily oral administration of GKT137831 on cardiac remodeling and dysfunction occurred following TAC, in rats and further in mice. However, further investigation is still needed to understand whether Nox4 is beneficial or detrimental for myocardial adaptation to a chronic mechanical stress

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Bos, Julia. "Etude des Méthionines sulfoxydes réductases chez Escherichia coli : rôle dans l'assimilation de la Méthionine sulfoxyde et régulation de l'expression du gène msrB." Aix-Marseille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX22064.

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Abstract:

Les méthionines sont parmi les résidus les plus sensibles au stress oxydant et s'oxydent en méthionine sulfoxyde (Met-SO). Cette modification est réparée par le système enzymatique ubiquitaire, Msr (méthionine sulfoxyde réductase), MsrA réduit les Met-S-SO et MsrB les Met-R-SO. Chez E. Coli, un double mutant msrA msrB est toujours capable de réduire la Met-SO, suggérant qu'il existe d'autre(s) activités msr. Durant ma thèse, nous avons identifié la protéine biotine sulfoxyde réductase, BisC, comme étant une Met-S-SO réductase, spécifique de la réduction de la Met-S-SO libre et nous avons étudié le rôle de ces activités Msr dans l'assimilation de la Met-SO chez E. Coli. D'autre part, nous avons étudié la régulation de l'expression du gène msrB. MsrB (E. Coli) code pour une protéine à fer. Nous avons montré que l'expression de msrB était réprimée en carence de fer, par le petit ARN non codant RyhB, senseur de l'homéostasie du fer. RyhB s'apparie avec L'ARNm msrB au niveau de deux sites localisés en amont des signaux d'initiation de traduction et au niveau de ces signaux. In vivo, l'appariement de RyhB bloque la traduction de MsrB et entraîne la dégradation de l'ARNm. Enfin d'un motif conservé sur L'ARNm msrB au sein des sites 1 et 2 d'interaction avec RyhB, a ouvert la voie vers l'identification de cibles potentielles de RyhB, qui n'ont pas de lien évident avec le fer. Cela suggèrerait un nouveau rôle pour RyhB.

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Fournier, Carole. "Le strontium comme inhibiteur de l'adipogenèse et modulateur du statut redox des cellules souches mésenchymateuses." Thesis, Saint-Etienne, 2011. http://www.theses.fr/2011STET004T.

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Abstract:

L’ostéoporose liée à l’âge se caractérise par une perte osseuse et une augmentation de l’adiposité médullaire tout en s’accompagnant d’un stress oxydant général. L’ostéoblaste et l’adipocyte ont un précurseur commun, la cellule souche mésenchymateuse (CSM), dont la capacité à se renouveler et à se différencier est influencée par le statut redox cellulaire. Le Strontium (Sr) est un élément possédant un effet antifracturaire significatif in vivo cependant, il n’affecte que peu les marqueurs d’activités des cellules osseuses différenciées. Partant de ce constat, nous avons émis l’hypothèse que les CSMs pouvaient être une cible cellulaire du Sr, et notamment que l’inhibition de leur différenciation adipocytaire pouvait diminuer la lipotoxicité médullaire néfaste à la survie des ostéoblastes au cours du vieillissement. Nous montrons chez des souris traitées 3 semaines au Sr une diminution de l’adiposité médullaire et une augmentation du volume osseux trabéculaire par rapport aux animaux témoins. Nos résultats démontrent que le Sr inhibe rapidement l’adipogenèse des cellules multipotentes mésenchymateuses (CMMs) C3H10T1/2 en réprimant PPARγ2 et l’accumulation des gouttelettes lipidiques de façon partiellement dépendante de la voie ERK. Ce mécanisme serait dépendant de son effet proliférateur puisque que nous observons qu’en présence de Sr plus la Cycline D1 est exprimée, plus PPARγ2 est réprimé. De plus, le Sr prévient la mise en place de processus impliqués dans le statut redox cellulaire et nécessaires à la maturation d’un adipocyte comme la biogenèse mitochondriale, l’accumulation de Rac1 (une sous unité régulatrice de l’activité de la Nadph oxydase) et l’augmentation de l’expression des enzymes antioxydantes. Nous montrons aussi que le Sr diminue la production d’espèces réactives de l’oxygène (ERO) de façon précoce ce qui pourrait expliquer son action anti-adipogénique. En effet, les ERO sont indispensables à l’engagement des CSMs vers l’adipogenèse et elles oxydent des lipides qui sont alors activateurs de PPARγ. L’ensemble de ces données nous montre que le Sr, en modifiant la production d’ERO intracellulaire, maintiendrait un statut redox favorable à la prolifération des CMMs et défavorable à leur différenciation adipocytaire. Ainsi la capacité antioxydante et antiadipogénique de futures molécules pourraient définir de nouvelles approches dans le traitement de l’ostéoporose
Age-related osteoporosis is associated with both an increased marrow adiposity while bone mass decreased and an increased oxidative stress. Mesenchymal stem cells (MSCs) differentiate into osteoblasts or adipocytes and their capacity of self-renewal and differentiation is influenced by cell redox status. Strontium (Sr) have an anti-fracture effect in vivo however, it doesn’t clearly modulate markers of mature bone cell activities. Starting from this observation, we hypothesized that MSCs could be a cellular target of Sr, and particularly the inhibition of their adipocyte differentiation could reduce the marrow lipotoxicity which is deleterious for the osteoblast survival during aging. Our study showed that Sr-treated mice presented a lower medullary adiposity and a higher trabecular bone volume as compared to control animals. It was demonstrated that Sr rapidly inhibited adipogenesis of multipotent mesenchymal cells (MMCs) C3H10T1/2 by repressing PPARγ2 and droplet lipid formation in a partially ERK-dependant pathway. This mechanism was linked to its proliferative effect since in presence of Sr the higher Cyclin D1 gene expression; the lower was that of PPARγ2. Moreover, Sr prevented the establishment of processes involved in the cell redox status and necessary for the adipocyte maturation such as mitochondrial biogenesis, Rac1 protein accumulation (a NADPH oxidase regulatory subunit) and increase of the antioxidant enzyme expression. Sr also induced intracellular reactive oxygen species (ROS) decrease that could explain its anti-adipogenic action. Indeed, ROS are essential for the CSM commitment toward adipogenesis and they oxidize lipids which could in turn activate PPAR. Taken together, these data showed that Sr by modulating the intracellular ROS production maintained a redox status supporting the MMCs proliferation and preventing adipocyte differentiation. Thus, the antioxidant and anti-adipogenic capacities of future molecules could define new therapeutic approaches for osteoporosis treatment

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Isabelle, Marc. "Etude expérimentale de la dysfonction cardiaque induite par la cocaïne : mise en évidence des espèces réactives de l'oxygène et des enzymes impliquées dans leur production." Rouen, 2006. http://www.theses.fr/2006ROUE05NR.

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Abstract:

L'usage prolongé de cocaïne provoque une cardiopathie hypertrophique et altère la fonction cardiaque. Le stress oxydant joue un rôle clé dans l'initiation et le développement de cette cardiopathie mais les différents acteurs responsables de ce stress oxydant n'ont encore jamais été clairement définis. Dans ce travail, nous montrons que chez le rat la cocaïne induit, via la stimulation des récepteurs alpha1-adrénergiques par un excès de catécholamines, l'activité myocardique de la NADPH oxydase ou de la xanthine oxydase permet de prévenir la dysfonction cardiaque induite par la cocaïne
Prolonged use of cocaine induces hypertrophic cardiomyopathy and left ventricular dysfunction. Oxidative stress appears to be involved in the initiation and the development of this cardiac dysfunction. Nvertheless, the enzymes involved in reactive oxygen species production are not clearly defined. In the present work, we show that in rat cocaine induces NADPH oxidase by alpha1-adrenoreceptor stimulation. The overproduction of superoxide and peroxynitrite due to the increase in NADPH oxidase activity contributes to the xanthine oxidase activation, an other major pro-oxydant enzyme in cardiovascular system and catalase inactivation, an anti-oxydant enzyme. Finally, we show that blockade of alpha1-adrenoreceptor as NADPH oxidase or xanthine oxidase inhibition prevents the cardiac dysfunction induced by cocaine

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Camont, Laurent. "Etude radiolytique du trans-resvératrol et d'un dérivé hydroxylé, le picéatannol : action des espèces réactives de l'oxygène en solution aqueuse et dans différents modèles lipidiques." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05P635.

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Abstract:

Le resvératrol (3,5,4’-trihydroxystilbène) est une molécule d’intérêt majeur depuis de nombreuses années de par sa contribution au «French Paradox » qui correspond à une faible prévalence des maladies cardio-vasculaires dans les populations du Sud de la France, malgré un régime riche en acides gras insaturés et en cholestérol. Le resvératrol se présente sous deux formes isomères, trans- et cis-, qui présentent des activités physico-chimiques et biologiques différentes. La forme trans- semble être plus efficace en termes d’activité. Il a été montré que le trans-resvératrol était un bon piégeur des radicaux hydroxyles produits par la réaction de Fenton, mais il est difficile de faire la part de l’activité chélatrice et de l’activité piégeur d’espèces réactives de l’oxygène (ERO). En outre, il semble être aussi capable de réagir avec des radicaux peroxyles intervenant dans la peroxydation lipidique. Dans la perspective de trouver des molécules possédant des capacités antioxydantes accrues, nous nous sommes également intéressés à l’un de ses dérivés, le picéatannol (trans-3,5,3’,4’-tétrahydroxystilbène). La première partie du travail a consisté à développer une méthode reposant sur la spectrophotométrie UV-visible nous permettant de déterminer le rapport trans-/cis-resvératrol en solution aqueuse. Nous avons ainsi proposé des formules mathématiques en vue de calculer ce rapport ce qui nous a permis pour nos études ultérieures de nousassurer que seul le trans-resvératrol, notre molécule d’étude, était présent en solution aqueuse. La suite du travail a permis d’étudier les propriétés antioxydantes du trans-resvératrol et du picéatannol, in vitro, vis-à-vis des radicaux HO·, O2·- et RO2· qui caractérisent les phénomènes de stress oxydant. Pour mener à bien ces travaux, nous avons utilisé la méthode de la radiolyse g (de l’eau ou de l’éthanol) qui permet de produire sélectivement et quantitativement ces espèces radicalaires. La seconde partie de notre travail a ainsi été consacrée à l’étude des radicaux HO· et/ou O2·- sur le trans-resvératrol. Si la réactivité des radicaux hydroxyles (HO·) s’est avérée être importante, il n’en a pas été de même de celle des radicaux superoxydes (O2·-) qui est restée faible. Dans le cas des radicaux HO·, nous avons identifié et caractérisé les produits formés, par chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse (CLHP/SM). C’est ainsi que nous avons montré que le produit d’oxydation majoritaire du trans-resvératrol est l’acide 3,5-dihydroxybenzoïque, et que se forment en moindre quantité le picéatannol, le 3,5-dihydroxybenzaldéhyde, et le 4-hydroxybenzaldéhyde. Les mécanismes réactionnels correspondants ont été discutés. Le picéatannol semble présenter une réactivité similaire à celle du trans-resvératrol vis-à-vis des radicaux HO·/O2·-. La troisième partie de notre travail porte sur l’étude des radicaux peroxyles (RO2·) issus de différents systèmes modèles : radiolyse de l’éthanol, peroxydation de l’acide linoléique en milieu micellaire et peroxydation de lipoprotéines de faible densité humaines (LDL). Nous avons montré que dans le système des micelles d’acide linoléique et dans celui des LDL, le picéatannol est un meilleur protecteur vis-à-vis de la peroxydation lipidique que ne l’est le trans-resvératrol, probablement en relation avec la présence d’un groupement hydroxyle supplémentaire comparativement au resvératrol. L’interprétation des résultats fait appel à des réactions en compétition impliquant les radicaux peroxyles
Resveratrol (3,5-4’-trihydroxystilbene) has been studied for a long time to explain the « French paradox » associated with a low incidence of cardiovascular diseases in the South of France, despite a diet relatively rich in saturated fats and cholesterol. Resveratrol occurs in both trans and cis isoforms, which may have different physico-chemical and biological effects. The trans- isoform seems to exhibit a greater activity. Trans-resveratrol was shown to be especially able to scavenge hydroxyl radicals produced by a Fenton reaction but it is difficult to distinguish between a chelating effect towards transition metals and a direct scavenging of reactive oxygen species (ROS). Furthermore, resveratrol seems also able to scavenge peroxyl radicals involved in lipid peroxidation. In order to find molecules with higher antioxidant effects, one derivative has been studied, called piceatannol (trans-3,5,3’,4’-tetrahydroxystilbene). The first part of our work was the development of a simple and reliable UV-visible spectrophotometric method to assess the trans-/cis-resveratrol ratio in aqueous solutions. Thus, we proposed formulae to calculate this ratio, which allowed us for our later studies to make sure that trans-resveratrol, our studied molecule, was the only molecule present in aqueous solutions. Next, we have studied the antioxidant properties of trans-resveratrol and piceatannol, in vitro, towards HO·, O2·- and RO2· radicals that contribute to oxidative stress phenomena. This has been achieved by using water gamma radiolysis (or ethanol gamma radiolysis) which allows to selectively and quantitatively produce these radical species. The second part of our work aimed at studying the reactivity of HO·and/or O2·- radicals on trans-resveratrol. It has been shown that HO· radicals initiate trans-resveratrol oxidation, whereas O2·- radicals react weakly with trans-resveratrol. We have characterized and identified the oxidation products by high performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC/MS). It has been shown that the major oxidation product of trans-resveratrol is the 3,5-dihydroxybenzoic acid, whereas piceatannol, 3,5-dihydroxybenzaldehyde and 4-hydroxybenzaldehyde were produced in lower amounts. The mechanisms of the one-oxidation electron oxidation of trans-resveratrol by HO· radicals have been discussed. Piceatannol seems to exhibit a similar reactivity as that of trans-resveratrol towards HO·and O2·- radicals. The third part of our work has focused on the study of peroxyl radicals (RO2·) by means of three different models, i. E. , ethanol gamma radiolysis, peroxidation of linoleic acid micelles and peroxidation of low density human lipoproteins (LDL). We have demonstrated in micelles of linoleic acid and in LDL that piceatannol showed a higher ability to inhibit radiation-induced lipid peroxidation as compared to resveratrol, partly due to the presence of an additional hydroxyl group. These results could be explained by competitive reactions with peroxyl radicals

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Castier, Yves. "Remodelage vasculaire associé à une augmentation chronique du flux sanguin." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077051.

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Abstract:

Toute altération des conditions hémodynamiques (flux ou pression), hormonales ou métaboliques, ou encore tout traumatisme induisent dans les vaisseaux un processus d'adaptation, conduisant à terme à un remaniement de la paroi, le remodelage vasculaire. Afin d'étudier les mécanismes moléculaires et cellulaires qui sous-tendent deux types de remodelage vasculaire associés à une modification chronique du flux, nous avons dans un premier temps mis au point un modèle de fistule unilatérale carotido-jugulaire chez la souris. Ce modèle murin a l'avantage de ne pas entraîner de modifications hémodynamiques systémiques. Ensuite, à l'aide de ce modèle, nous avons démontré que les radicaux libres oxygénés jouent un rôle majeur dans la dilatation artérielle associée à une augmentation chronique du flux. Plus spécifiquement, nous avons montré que la NADPH oxydase comprenant la sous-unité p47phox était un pourvoyeur important des radicaux libres oxygénés produits en réponse à l'augmentation des contraintes de cisaillement. De plus, nos résultats suggèrent que le péroxynitrite (ONOO-), qui résulte de la réaction entre le NO avec Fanion superoxyde, active les métalloprotéases, favorisant ainsi l'élargissement artériel. Par ailleurs, nous avons caractérisé Phyperplasie intimale qui se développe au niveau de l'anastomose carotido-jugulaire chez les animaux fistulisés. Nous avons montré que seules les cellules progénitrices endothéliales étaient recrutées au sein de la lésion d'hyperplasie intimale dans notre modèle, participant probablement à la formation de microvaisseaux, alors que les cellules progénitrices musculaires lisses ne contribuaient pas à la formation de la lésion
All change in haemodynamic conditions (blood flow or pressure), in hormonal or metabolic status, and ail traumatism or external constriction of the vessel can lead to vascular remodeling. We have studied the vascular remodeling associated with chronic changes in blood flow. We developed a mouse model of peripheral arteriovenous fistula, Connecting the common carotid artery with the jugular vein, which does not modify the blood pressure. Using transgenic animals and different strains of the mouse available we studied two different aspects of the vascular remodeling associated with a chronic increase in blood flow. We demonstrated that reactive oxygen species play a fundamental role in flow-induced vascular enlargement. Moreover, we showed that NADPH oxidase comprising p47phox subunit is the major generator of shear stress-induced reactive oxygen species in the vascular wall. Together with NO derived from eNOS activation, reactive oxygen species produce peroxynitrite, which in ail probability accounts for MMP activation and enlargement of flow-loaded vessels. We characterized the neointimal hyperplasia at the site of the anastomosis that evolves after the creation of an arteriovenous in our mouse model and we investigated the role of progenitor cells in the neointima formation. We showed that smooth muscle cells of the neointima lesion do not originale from bone marrow stem cells. Conversely, the lesion contains microvessels of which a significant number of endothelial cells are derived from bone marrow stem cells

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Diallo, Devy. "Protéomique des lipoprotéines de haute densité (HDL) : biomarqueurs et applications thérapeutiques." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC131.

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Abstract:

Au cours de cette thèse, nous nous sommes attachés à identifier des biomarqueurs et en particulier des modifications des lipoprotéines de haute densité (HDL) en situation d'agression : protéolytique, oxydative et bactérienne. Dans un premier temps, nous nous sommes intéressés aux marqueurs solubles issus de la protéolyse de l'hémoglobine dans l'athérothrombose carotidienne et dans l'anévrysme de l'aorte abdominale (AAA). Nous avons identifié un peptide de 3327 Da issu de la protéolyse de la chaine alpha de l'hémoglobine par l'élastase leucocytaire, localisé majoritairement dans la couche luminale du thrombus d'AAA et dans la zone hémorragique des plaques carotidiennes. Dans un deuxième travail réalisé sur des patients porteurs d'un AAA, nous avons montré que l'activation neutrophilaire est un élément clé de l'environnement pro-oxydant dans les thrombus AAA participant aux phénomènes de modifications et de dysfonctionalité des HDL dans cette pathologie. En effet, nous avons montré chez ces patients une diminution des propriétés antioxydantes des HDL vis-àvis de l'oxydation des LDL et de la production de formes réactives de l'oxygène par les cellules musculaires lisses. Ces patients présentent aussi une réduction du taux des petites sous-fractions de HDL (antiathérogènes). Cette activation neutrophilaire chronique dans la pathologie anévrysmale pourrait être reliée au passage de bactéries parodontales dans la circulation sanguine. Dans un dernier travail, nous avons analysé les modifications des HDL dans un contexte d'infection bactérienne sévère, le choc septique. Dans cette étude, nous avons montré qu'en plus d'avoir un taux très bas de HDL, les patients septiques présentaient une variation du profil des sous-fractions de HDL : une diminution des petites HDL au profit des HDL de grande taille. Nous avons pu également démontrer in vitro que cette modification serait en partie liée à la fixation des composants bactériens sur les HDL
During this thesis, we aimed of identifying biomarkers and particularly changes in high-density lipoproteins (HDL) in a situation of proteolytic, oxidative and bacterial aggression. In the first study, we identified soluble markers resulting from the proteolysis of hemoglobin in carotid atherothrombosis and abdominal aortic aneurysms (AAA). A peptide with a mass of 3327 Da was characterized by proteomics predominantly in the luminal layer of the AAA thrombus, and in the hemorrhagic area of carotid plaques. This peptide is issued from the proteolysis of the alpha chain of hemoglobin by the action of leukocyte elastase. In the second study, we have shown that the neutrophil activation observed in AAA patients largely contributes to the pro-oxidant state of this pathology and that this environment plays an active role in HDL modification and dysfunction in AAA. Indeed, we have shown the loss of their protective effect on LDL oxidation and on production of reactive oxygen species by smooth muscle cells. A decrease in circulating small HDL fractions (anti-atherogenic) was also observed in AAA patients. In AAA, the chronic neutrophil activation could be linked to the entry of periodontal bacteria in the bloodstream. In the last study, we analyzed modifications of HDL in the pathological context of severe infection: the septic shock. We have shown that besides having very low circulating levels of HDL, small HDL were decreased in favor of large HDL. We also observed in vitro that this phenomenon could result from the binding of bacterial compounds to HDL particles

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Moné, Yves. "Bases moléculaires du polymorphisme de compatibilité dans l’interaction Schistosoma mansoni – Biomphalaria glabrata." Perpignan, 2011. http://www.theses.fr/2011PERP1059.

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Abstract:

La dynamique co-évolutive qui joue dans les systèmes hôte-parasite conduit à une véritable course aux armements entre les deux protagonistes qui se traduit, dans certaines interactions comme celle qui est traitée dans cette thèse, par un polymorphisme de compatibilité dont les bases moléculaires sont méconnues. L’objectif de cette thèse était de progresser dans la connaissance des mécanismes moléculaires sous-jacents à ce polymorphisme de compatibilité dans l’interaction Biomphalaria glabrata/Schistosoma mansoni. Une approche protéomique comparative entre des souches de parasites compatibles et incompatibles nous a permis d’identifier des déterminants moléculaires clés de l’interaction exprimés par le parasite. Il s’agit d’une part de mucines hautement polymorphes potentiellement antigéniques, les « Schistosoma mansoni Polymorphic Mucin » (SmPoMucs), et d’autre part de molécules anti-oxydantes (« ROS scavengers »). Afin d’aborder la question de la course aux armements de manière complète, nous avons également recherché la « contre-partie moléculaire » exprimée par le mollusque et susceptible d’expliquer ce polymorphisme de compatibilité. Dans ce but, des approches de co-précipitation ont été menées. Elles ont permis de montrer que les SmPoMucs interagissaient avec des récepteurs immunitaires diversifiés du mollusque, les Fibrinogen-related Proteins (FREPs). Nous montrons ainsi pour la première fois dans une interaction parasite/hôte invertébré l’intervention d’un « système de type antigène-anticorps » impliquant un répertoire individuel polymorphe d’antigènes potentiels du parasite (les SmPoMucs) et un répertoire individuel diversifié de récepteurs immunitaires de son hôte (les FREPs). Nous avons également montré que le complexe immun formé par les deux dernières molécules citées incluait un troisième partenaire, une thioester-containing protein (TEP) qui appartient à une classe de molécules connue pour son rôle dans la phagocytose ou l’encapsulation. La présence de ce troisième partenaire au sein d’un même complexe renforce le rôle potentiellement immunitaire de ce complexe dans la reconnaissance et l’élimination du parasite. Au travers de cette thèse, nous nous sommes également intéressés à la course aux armements jouant sur les mécanismes effecteurs de l’immunité du mollusque. Dans notre modèle, les effecteurs responsables de la destruction du parasite sont principalement des espèces réactives de l’oxygène (ROS). Dans ce cas aussi, nous avons montré qu’il existe une concordance phénotypique entre la production de ROS par l’hôte et le niveau de « ROS scavengers » produits par le parasite pour contrecarrer la réaction de l’hôte. Ainsi, les mécanismes moléculaires responsables du polymorphisme de compatibilité dans l’interaction B. Glabrata/S. Mansoni s’appuieraient au moins sur deux facteurs d’une part sur la confrontation de répertoires de molécules polymorphes et/ou diversifiées en ce qui concerne les mécanismes de reconnaissance immunitaire, et d’autre part sur une adaptation réciproque quantitative en ce qui concerne certains mécanismes effecteurs de l’immunité
The coevolutionary dynamic playing in the host-parasite interaction leads to an arms race between host and parasite. In certain models, this arms race results in a compatibility polymorphism for which the molecular bases remain largely unknown. The aim of this PhD thesis was to identify the molecular determinants of the compatibility polymorphism that exists in the Biomphalaria glabrata/Schistosoma mansoni interaction. First, we developed a comparative proteomics approach between compatible and incompatible strains of the parasite. This approach allows us to identify molecules that could play a key role in this interaction. They consist in highly polymorphic mucin-like proteins, the « Schistosoma mansoni Polymorphic Mucin » (SmPoMucs), and scavengers of reactive oxygen species (ROS scavengers). In order to study more completely the arms race that takes place in the B. Glabrata/S. Mansoni interaction, we investigate the molluscan counterparts of these molecules. Co-precipitation approaches allow us to show that SmPoMucs interact with diversified immune receptors from the mollusk, the Fibrinogen-related Proteins (FREPs). This is the first evidence of the interaction between an individual repertoire of polymorphic potential parasite antigens (SmPoMucs) and an individual repertoire of diversified potential immune receptors (FREPs) from an invertebrate host. We found a third partner associated with FREPs and SmPoMucs, a thioester-containing Protein (TEP). TEP belongs to a class of molecules involved in the phagocytosis or in encapsulation. The presence of TEP in this immune complex argues in favor of the involvement of the formed complex in parasite immune recognition and elimination. We are also interested in the effector mechanisms responsible for the destruction of the parasite, in B. Glabrata they rely essentially on the production of Reactive Oxygen Species (ROS). We show that a phenotypic concordance exists between the levels of host ROS production and parasite ROS scavengers’ production. The compatibility polymorphism in the B. Glabrata/S. Mansoni interaction seems to be based on the confrontation of polymorphic and/or diversified molecules concerning immune recognition mechanisms and on quantitative reciprocal adaptations concerning immune effector mechanisms

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Ben, Rejeb Kilani. "Implication des espèces réactives de l'oxygène (ero) dans la régulation de la capacité antioxydante et du métabolisme de la proline chez Arabidopsis Thaliana sous contraintes hydriques." Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066307/document.

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Abstract:

La caractérisation de la réponse au sel d'un mutant d'A.thaliana déficient dans la synthèse de la proline (p5cs1-4) a montré que la salinité affecte de la même manière les relations hydriques et l'homéostasie ionique chez les deux génotypes. La pulvérisation foliaire de proline sous contrainte saline améliore la capacité antioxydante chez le mutant p5cs1-4 et rétablit sa croissance ainsi que son activité photosynthétique. L'analyse des relations entre la production précoce de H2O2 par la NADPH oxydase et la défense antioxydante chez A. thaliana soumise à la salinité a montré que l'exposition des plantes sauvages à 200 mM NaCl pendant 24 h conduit à une accumulation transitoire de H2O2, suivie d'une augmentation des activités des enzymes Catalases, Ascorbate peroxydases et Glutathione reductases. En présence de sel, le prétraitement des plantes par le DMTU, un chélateur de H2O2, ou le DPI et l'imidazole, deux inhibiteurs des NADPH oxydases, conduit à de faibles activités des enzymes antioxydantes. Le double mutant affiche également des activités faibles de ses enzymes antioxydantes. La meilleure performance des plantes sauvages par rapport aux mutants se traduisant par une meilleure aptitude de protéger ces tissus contre le stress oxydatif. En outre, l'accumulation de la proline est précédée par des niveaux élevés de H2O2 et l'utilisation de DMTU supprime l'accumulation de la proline chez les plantes soumises aux contraintes osmotiques. Les résultats ont montré également que de DPI, ainsi que des mutants knock-out conduisent à une inhibition de l'activité de l'enzyme-clé de la synthèse de la proline
Characterization of salt stress response in A. thaliana p5cs1-4 mutant defective in proline biosynthesis showed that no significant difference was observed in the leaf water status and Na+/K+ ratio between salt-treated WT and p5cs1-4 seedlings, suggesting that the salt hypersensitivity of the mutant was not due to the disruption of water uptake or Na+/K+ homeostasis. Foliar application of proline under salt stress increased the antioxidant activity in the p5cs1-4 mutant and restored its photosynthetic activity. The analysis of the relationship between the early production of H2O2 by the NADPH oxidase and the antioxidant defense in A. thaliana subjected to salinity showed that short-term salt exposure led to a transient and significant increase of H2O2 concentration, followed by a marked increase in Catalase, Ascorbate peroxidase and Glutathion reductase activities, pre-treatment with either dimethylthiourea, a chemical trap for H2O2, or two NADPH oxidase inhibitors such as imidazol and diphenylene iodonium, significantly decreased the above-mentioned enzyme activities under salinity. atrbohd/f double mutant plants failed to induce the antioxidant response under the culture conditions. The better performance of the WT was related to the plant ability to deal with the salt-induced oxidative stress as compared to atrbohd/f. In addition NaCl or mannitol stress resulted in a transient increase in H2O2 content followed by an accumulation of proline upon stress. In contrast DMTU and DPI were found to significantly inhibit proline accumulation. Expression level of the key enzyme involved in the biosynthesis of proline was observed to be diminished by DPI and in atrboh mutants

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Santini, Jérémie. "Caractérisation physiologique et biochimique de la tolérance au stress photooxydatif chez les espèces ancestrales d'agrumes." Corte, 2012. http://www.theses.fr/2012CORT0005.

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Abstract:

Le groupe des « agrumes vrais » est composé de trois principaux genres : Poncirus, Fortunella et Citrus. Ce dernier est constitué d’une multitude d’espèces dont trois seulement sont à l’origine de cette importante diversité : le cédratier, le mandarinier et le pamplemoussier. Chacune de ces espèces est originaire de zones distinctes d’Asie du Sud-est dans lesquelles les conditions climatiques ne sont pas les mêmes. L’objectif de cette étude est d’évaluer le comportement d’un génotype de chacune des trois espèces ancestrales et celui d’un génotype du genre Fortunella (kumquat) en réponse à deux types de stress photooxydatif, l’un engendré par un froid naturel et l’autre par une variation d’intensité lumineuse. Ces génotypes ont été comparés au niveau physiologique, en déterminant la photosynthèse nette (Pnet), la conductance stomatique (Gs) et la fluorescence chlorophyllienne (Fv/Fm), puis au niveau biochimique en évaluant les activités des enzymes antioxydantes (superoxyde dismutase, catalase…) et les concentrations en peroxyde d’hydrogène (H2O2), malondialdéhyde (MDA), ascorbate et glutathion. D’après nos résultats, le cédratier présente une sensibilité marquée aux deux catégories de stress en raison des fortes diminutions de ses performances photosynthétiques, des accumulations excessives d’H2O2 et MDA et de l’activation insuffisante du système antioxydant. A l’inverse, le pamplemoussier est tolérant aux deux types de stress au vu des faibles diminutions des paramètres physiologiques, des faibles accumulations d’H2O2 et MDA et de l’activation importante du système antioxydant. Le mandarinier présente un comportement proche du pamplemoussier aux basses températures et un profil similaire au cédratier en condition de stress lumineux. Enfin, le kumquat montre une réponse intermédiaire entre le cédratier et le mandarinier/pamplemoussier en situation de froid tandis que son comportement est proche du pamplemoussier en situation d’excès de lumière
The "true citrus" group is composed of three main genera:Poncirus, Fortunella and Citrus. The latter consists of a multitude of species. Only three of them are responsible for this important diversity: citron, mandarin and pummelo. Each of these species originates from Southeastern Asia in a large area with various climates. The aim of this study is to evaluate the behaviour of a genotype belonging to each of the three fundamental species and that of a genotype from Fortunella genus (kumquat) in response to two kinds of hotooxidative stress. The former is caused by a natural chilling period and the latter by a change in light intensity. These genotypes were first compared at the physiological level by determining net photosynthesis (Pnet), stomatal conductance (Gs) and chlorophyll luorescence (Fv/Fm) and then at the biochemical level by assessing the activities of the main antioxidant enzymes (superoxide dismutase, catalase. . . ) and the concentrations of hydrogen peroxide (H2O2), malondialdehyde (MDA), ascorbate and glutathione. According to our results, citron is sensitive to both types of stress with a marked decrease in photosynthetic performances, a large accumulation of H2O2 and MDA and insufficient activation of the antioxidant system. Conversely, pummelo is tolerant to both types of stress, showing the lowest down-regulation of physiological parameters and the lowest accumulation of H2O2 and MDA associated with efficiency of its antioxidant system. Mandarin exhibits a behaviour equivalent to pummelo atlow temperatures and a behaviour similar to citron under light stress. Finally, kumquat shows intermediate response between citron and mandarin/pummelo under chilling stress while its behaviour is close to pummelo under excess light

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Fresquet, Fleur. "Rôle du monoxyde d'azote endothélial et des espèces réactives dérivées de l'oxygène dans la régulation de la vasomotricité des artères pulmonaires des souris normoxiques et hypoxiques." Bordeaux 2, 2006. http://www.theses.fr/2006BOR21332.

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Abstract:

Dans ce travail, nous avons analysé le rôle du NO et des espèces réactives dérivées de l'oxygène (ERO) dans la fonction endothéliale des artères pulmonaires de souris. En plus du NO, les ERO sont impliquées comme médiateur de la relaxation à l'acétylcholine dans les artères extrapulmonaires. Dans l'hypertension artérielle pulmonaire induite par l'hypoxie, une augmentation des ERO et une dysfonction endothéliale à l'acétylcholine ont été observées. Il apparaît que dans les artères extrapulmonaires, la composante ERO est préservée suite à l'hypoxie chronique, alors que la composante NO-dépendante est abolie. Dans les artères intrtapulmonaires, la sous-unité gp91phox de la NADPH oxydase est responsable de la dysfonction endothéliale induite par l'hypoxie chronique. Enfin, nous avons mis en évidence une relaxation β2-adrénergique dans les artères pulmonaires, totalement dépendante de la voie du NO endothélial, et qui est préservée suite à l'hypoxie chronique
The role of NO and reactive oxygen species (ROS) in endothelial function of pulmonary arteries is investigated in mice. In addition to NO, ROS participate as mediator of relaxation to acetylcholine in extrapulmonary arteries, bu not intrapulmonary arteries. In pulmonary arterial hypertension induced by chronic hypoxia, an increase in ROS and an endothelial dysfunction to acetylcholine are observed. In extrapulmonary arteries, the ROS component of acetylcholine-induced relaxation is preserved following chronix hypoxia, whereas the NO-dependent component is abolished. In intrapulmonary arteries, the gp91phox subunit of NADPH oxidase is responsible for endothelial dysfunction to acetylcholine induced by chronic hypoxia. Finally, a β2-adrenergic relaxation is demonstrated in pulmonary arteries, which is completely dependent of endothelial NO, and which is preserved following chronic hypoxia

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Ben, Rejeb Kilani. "Implication des espèces réactives de l'oxygène (ero) dans la régulation de la capacité antioxydante et du métabolisme de la proline chez Arabidopsis Thaliana sous contraintes hydriques." Electronic Thesis or Diss., Paris 6, 2015. https://accesdistant.sorbonne-universite.fr/login?url=https://theses-intra.sorbonne-universite.fr/2015PA066307.pdf.

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Abstract:

La caractérisation de la réponse au sel d'un mutant d'A.thaliana déficient dans la synthèse de la proline (p5cs1-4) a montré que la salinité affecte de la même manière les relations hydriques et l'homéostasie ionique chez les deux génotypes. La pulvérisation foliaire de proline sous contrainte saline améliore la capacité antioxydante chez le mutant p5cs1-4 et rétablit sa croissance ainsi que son activité photosynthétique. L'analyse des relations entre la production précoce de H2O2 par la NADPH oxydase et la défense antioxydante chez A. thaliana soumise à la salinité a montré que l'exposition des plantes sauvages à 200 mM NaCl pendant 24 h conduit à une accumulation transitoire de H2O2, suivie d'une augmentation des activités des enzymes Catalases, Ascorbate peroxydases et Glutathione reductases. En présence de sel, le prétraitement des plantes par le DMTU, un chélateur de H2O2, ou le DPI et l'imidazole, deux inhibiteurs des NADPH oxydases, conduit à de faibles activités des enzymes antioxydantes. Le double mutant affiche également des activités faibles de ses enzymes antioxydantes. La meilleure performance des plantes sauvages par rapport aux mutants se traduisant par une meilleure aptitude de protéger ces tissus contre le stress oxydatif. En outre, l'accumulation de la proline est précédée par des niveaux élevés de H2O2 et l'utilisation de DMTU supprime l'accumulation de la proline chez les plantes soumises aux contraintes osmotiques. Les résultats ont montré également que de DPI, ainsi que des mutants knock-out conduisent à une inhibition de l'activité de l'enzyme-clé de la synthèse de la proline
Characterization of salt stress response in A. thaliana p5cs1-4 mutant defective in proline biosynthesis showed that no significant difference was observed in the leaf water status and Na+/K+ ratio between salt-treated WT and p5cs1-4 seedlings, suggesting that the salt hypersensitivity of the mutant was not due to the disruption of water uptake or Na+/K+ homeostasis. Foliar application of proline under salt stress increased the antioxidant activity in the p5cs1-4 mutant and restored its photosynthetic activity. The analysis of the relationship between the early production of H2O2 by the NADPH oxidase and the antioxidant defense in A. thaliana subjected to salinity showed that short-term salt exposure led to a transient and significant increase of H2O2 concentration, followed by a marked increase in Catalase, Ascorbate peroxidase and Glutathion reductase activities, pre-treatment with either dimethylthiourea, a chemical trap for H2O2, or two NADPH oxidase inhibitors such as imidazol and diphenylene iodonium, significantly decreased the above-mentioned enzyme activities under salinity. atrbohd/f double mutant plants failed to induce the antioxidant response under the culture conditions. The better performance of the WT was related to the plant ability to deal with the salt-induced oxidative stress as compared to atrbohd/f. In addition NaCl or mannitol stress resulted in a transient increase in H2O2 content followed by an accumulation of proline upon stress. In contrast DMTU and DPI were found to significantly inhibit proline accumulation. Expression level of the key enzyme involved in the biosynthesis of proline was observed to be diminished by DPI and in atrboh mutants

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Cabou, di Baradat Cendrine. "Détermination des mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation coordonnée de la sensibilité à l'insuline et du flux artériel fémoral par l'insuline et le GLP-1 cérébral chez la souris diabétique." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/237/.

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Abstract:

Le flux artériel est intimement contrôlé par des mécanismes nerveux et endocriniens. Nos résultats montrent que l'insuline et le GLP-1, hormones sécrétées lors d'un repas, agissent sur le cerveau et contrôlent la production de NO et des espèces réactives de l'oxygène, ce qui régule le flux artériel fémoral. Ce mécanisme, altéré chez des souris diabétiques, est normalisé par l'inactivation du récepteur au GLP-1 et implique un excès d'activité des protéines kinases C. Ce mécanisme pourrait rendre compte de la vasoconstriction et l'insulinorésistance observée chez les diabétiques. Ainsi, les hormones contrôlant l'utilisation musculaire du glucose sont intimement liées aux mécanismes vasodilatateurs de l'action cérébrale de l'insuline et vasoconstricteurs du GLP-1. Un déséquilibre de cette balance contribuerait à l'insulinorésistance et l'hypertension artérielle
The arterial blood flow is tightly controlled by neural and endocrine mechanisms. We here show that insulin and GLP-1, secreted during a meal, trigger the brain to regulate the local production of NO and reactive oxygen species. This mechanism regulates arterial femoral blood flow and is altered in diabetic mice. It is reversed by the mean of a brain infusion of a GLP-1 receptor antagonist which involves PKC activity. Such effect could account for insulin resistance and vasoconstriction in type 2 diabetic patients. Hence, hormones controlling muscle glucose utilization depend on the vasodilator role of insulin and the vasoconstrictor role of GLP-1. Any impairment of this balance could lead to insulin resistance and hypertension

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Wang, Ying. "Electrochemical sensor as a tool for the investigation of reactive oxygen species and antioxidants." Perpignan, 2010. http://www.theses.fr/2010PERP1022.

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Abstract:

Le mémoire de thèse a pour objectif la mise au point de capteurs électrochimiques comme outil de mesure des espèces réactives de l'oxygène (ROS) et du pouvoir antioxydant. Parmi les ROS, ×OH est l'espèce la plus toxique et H2O2 est la plus stable. Dans une première phase, il a été mis au point un capteur original pour la détection des ROS en les piégeant avec de l'acide 4-hydroxybenzoique (4-HBA) qui est transformé en acide 3. 4-dihydroxybenzoique (3, 4-DHBA). Les différences des propriétés électrochimiques entre les deux acides permettent de déterminer la quantité de ROS de l'échantillon. Un deuxième capteur a ensuite été développé pour la détection du peroxyde d'hydrogène basé sur le transfère électronique direct entre l'électrode et le cytochrome c. La mise au point de ce capteur est basé sur l'emploi d'un nouveau matériau : la mousse de silice macroporeuse ordonnée (MOSF). Le capteur développé a un temps de réponse très bref, une très grande gamme de linéarité, une détection limite faible, une bonne reproductibilité et stabilité. La dernière partie de la thèse est consacrée à la préparation d'un capteur électrochimique pour le NADH, coenzyme très importante dans les processus métaboliques, basé sur la modification d'une électrode de carbone vitreux par différents matériaux de carbone mésoporeux (CMM). Grâce à sa surface spécifique très importante et aux propriétés électro catalytiques du CMM, le potentiel d'oxydation du NADH décroît à 595 mV vs Ag/AgCI dans une solution aqueuse neutre. Ce résultat permet d'envisager son utilisation pour développer des biocapteurs enzymatiques avec des déshydrogénasses à NAD
The reactive oxygen species (ROS) have been suggested to play an important role in many pathological processes. A simple and sensitive electrochemical sensor for the determination of antioxidant capacity toward ×OH radicals has been studied chapter 2. This work was based on the inhibition oxidation of 4-hydroxybenzoic acid (4-HBA) by the antioxidant and therefore, the antioxidants scavenging ability was correlated to the decrease of the oxidation product 3,4-dihydroxybenzoic acid (3,4-DHBA) peak current. In chapter 3, a sensitive H2O2 biosensor based on the direct electron transfer of cytochrome c immobilized on macroporous ordered silica foam (MOSF) was developed. The proposed biosensor exhibited fats amperometric reponse, wide linear range, low detection limit, good reproducibility and stability. Finally, we also investigated a mesoporous materials-based sensor for electrocatalytic oxidation of b-nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), an important coenzyme involved in many metabolic processes. Due to the large surface area and electro-catalytic properties of CMM, the overpotential of the electrodes toward the oxidation of NADH in decreased by 595 mV in aqueous solution at neutral pH. The results enable NADH to be sensed at a low potential and are promising with respect to the design of dehydrogenasebased amperometric biosensors

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Savall, Mathilde. "Etude de la réponse au stress oxydant de hépatocarcinomes présentant une hyperactivation de la voie β-caténine." Thesis, Université de Paris (2019-....), 2020. https://theses.md.univ-paris-diderot.fr/SAVALL_Mathilde_va2.pdf.

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Abstract:

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est la 2nde cause de mortalité par le cancer dans le monde. Notre équipe s’intéresse aux CHC mutés CTNNB1 représentant 30 à 40% des CHC. A l’aide de modèles murins mimant cette carcinogénèse, nous avons montré que ces tumeurs présentent une oxydation lipidique accrue indispensable à la tumorigénèse et au développement des CHC CTNNB1. De plus, ces cellules présentent une respiration mitochondriale accrue. L'activation de la β-caténine induit également une augmentation de l'expression des CYP450 qui, avec une respiration mitochondriale accrue, sont générateurs d'espèces réactives de l'oxygène (ERO). L'accumulation d'ERO mène à un stress oxydant, néfaste pour la cellule, s'il n'est pas détoxifié. Les cellules présentant un taux élevé d'ERO nécessitent donc la mise en place de systèmes antioxydants (SAO) dont elles sont dépendantes pour survivre. L'objectif de mon projet de thèse a été d'étudier le statut redox de ces tumeurs, d'identifier les SAO et de cibler ces mécanismes afin de tester s'ils peuvent être la base d'une approche thérapeutique. Mes résultats montrent que les cellules β-caténine activées pré-néoplasiques génèrent plus d’ERO mais qu’elles sont protégées grâce à la voie de détoxification Nrf2, expliquant ainsi la croissance tumorale dans un contexte délétère. Nous montrons également que l’inhibition de la détoxification Nrf2 par un inhibiteur pharmacologique (Halofuginone) est délétère pour ces cellules pré-néoplasiques. Après avoir montré que les tumeurs β-caténine activées sont également protégées contre le stress oxydant par l’activation du programme Nrf2, nous montrons également que le traitement de ces tumeurs à l’halofuginone engendre une diminution de la croissance tumorale. De façon intéressante, grâce à l’analyse des données du TCGA, nous avons pu montrer qu’une signature Nrf2 est significativement associées au CHC CTNNB1 mutés chez l’homme et que ce programme Nrf2 associé au CHC CTNNB1 mutés aggrave le pronostique de survie des patients en comparaison à des CHC CTNNB1 mutés ne présentant pas de signature Nrf2. Ainsi, l’inhibition de ce programme pourrait alors constituer une stratégie anticancer pour cibler les CHC β-caténine activés. Mes résultats montrent également que le programme Nrf2 participe au phénotype métabolique des hépatocytes β-caténine activés pré-néoplasiques. En effet, l’activation de la β-caténine mène à une oxydation accrue des acides gras au sein de laquelle Nrf2 redirige l’acétyl-CoA vers le cycle de Krebs au détriment de la synthèse des corps cétoniques. D’autre part, de par l’augmentation de l’expression des cytochromes P450 par l’activation de la β-caténine, ces cellules sont sensibles à l'APAP. Des traitements à l’APAP engendrent donc la mort des cellules tumorales β-caténine activées et une diminution de la croissance tumorale. Ainsi cette étude permet de montrer deux potentielles stratégie anti-cancer en ciblant la balance redox
Hepatocellular carcinoma (HCC) is the 2nd leading cause of cancer related death worldwide. For many years, our team has been interested in β-catenin activated HCC which represent 30 to 40% of all HCCs. With murine models mimicking carcinogenesis, we were able to show that these tumors present an increase in fatty acid oxidation. We also showed that this β-oxidation is essential for β-catenin activated tumorigenesis and tumor progression and that they present an increased activity of the mitochondrial respiration chain.β-catenin activated cells also have an increased expression of P450 cytochromes which, with the increase of mitochondrial respiration chain, are known to generate reactive oxygen species (ROS). ROS accumulation can create an oxidative stress which is deleterious for the cell if not taken in charge by an anti-oxidantdefense (AOD). Cancer cells are known to have a high level of ROS that requires the establishment of an AOD in order to survive and proliferate. By changing the AOD, it is possible to modify the redox balance and hence reach a toxic threshold leading to cell death without compromising normal cells.The aims of my PhD were to 1) characterize the redox status of these tumors, 2) to identify the protection mechanisms again oxidative stress and 3) to see if it could be used as a therapeutic approach. My results show that pre-neoplasic β-catenin activated cells generate a bigger amount of ROS but that they are better protected against oxidative stress thanks to the activation of the Nrf2 pathway. This should explain the tumoral growth seen in this deleterious context. We also showed that the inhibition of the Nrf2 program with a pharmacological inhibitor (Halofuginone) is deleterious for these cells. Moreover, after having shown that β-catenin activated tumors are also protected thanks to the Nrf2 pathway, we also demonstrate that Halofuginone treatments lead to a decrease in tumor growth rate. Interestingly, thanks to the analyses of the TCGA data, we were able to show that an Nrf2 signature is associated with CTNNB1-mutated HCCs and that this program worsen the prognosis of CTNNB1 mutated patients. Hence, the inhibition of the Nrf2 program could be an anti-cancer strategy to target β-catenin activated HCCs. My results also showed that the Nrf2 program participate in the metabolic phenotype of pre-neoplasic β-catenin activated hepatocytes. Indeed, the oncogenic activation of the β-catenin lead the an increased β-oxydation in which Nrf2 rewire acetyl coA towards the Krebs cycle at the expense of ketogenesis. Moreover, our studie showed that β-catenin activated cells are sensible to Acetaminophen (APAP) because of the increased expression of cytochromes P450. APAP treatments lead to the death of β-catenin activated tumoral cells and to the decrease of the tumoral growth. In conclusion, this study shows to possible anti-cancer strategies by using the redox balance

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Bana, Émilie. "Inhibition des phosphatases CDC 25 dans le cadre d'une thérapie anticancéreuse : étude mécanistique de nouveaux inhibiteurs." Thesis, Université de Lorraine, 2013. http://www.theses.fr/2013LORR0105/document.

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Abstract:

Dans le cadre de la recherche de nouvelles cibles pour le traitement du cancer, les phosphatases Cdc25 sont des candidats intéressants dont l'inhibition devrait permettre de ralentir la croissance tumorale et éventuellement d'améliorer les traitements actuellement en usage. Les objectifs de ce projet de thèse sont de concevoir et synthétiser de nouveaux composés capables d'inhiber les CDC25, et de déterminer l'efficacité des meilleurs composés dans les lignées cellulaires du cancer du sein. L'évaluation du potentiel inhibiteur des composés est réalisée in vitro par une méthode fluorimétrique très sensibilité (substrat 3-OMFP). Les effets des composés sont évalués dans les lignées cellulaires MCF-7 et MDA-MB-231 : La viabilité des cellules est évaluée par la méthode colorimétrique du MTT, la cytotoxicité est évaluée par coloration au bleu trypan et par observation microscopique avec le système de vidéomicroscopie Incucyte. La mort cellulaire est caractérisée par la détection de marqueurs apoptotiques (caspases) et de marqueurs des dommages de l'ADN (H.2AX Histone PARP) par western blot. L'analyses des mécanismes liés à la mort cellulaire sont explorées par cytométrie en flux via la détection d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) avec les sondes H2DCFDA et Redox Sensor Red. L'inhibition de CDC25 dans les cellules est évaluée indirectement par détection des formes phosphorylées dse CDK en Western Blot. L'évaluation in vitro de 93 molécules synthétisées nous a permis d'identifier de nouveaux composés actifs. Ils appartiennent à diverses familles chimiques comprenant des stéroïdes, thiophènes, coumarines, imidazoles ainsi que des dérivés de quinone. Les dérivés coumariniques ont montré une intéressante inhibition de CDC25, non décrite jusqu'à présent. Une nouvelle structure coumarine-soufre-quinone, nommée SV37, a été conçue pour optimiser le potentiel d'inhibition. Ce composé présente un fort potentiel inhibiteur des CDC25 in vitro (CI50 < 5uM pour CDC25 A et C). L'effet de SV37 sur la croissance cellulaire a été évalué sur les lignées cellulaires MCF-7, MDA-MB-231, hTERT-HME1 et HepG2 sur lesquelles une inhibition de la croissance cellulaire est observée (CI50 de 9 à 18 µM). L'analyse de la viabilité des cellules traitées à la CI50 indique l'absence de mort cellulaire pour la lignée MCF7, tandis que pour la lignée MDA-MB-231 la diminution de la croissance cellulaire est liée à une augmentation de la mort cellulaire. Afin d'étudier les mécanismes liés à la mort cellulaire, nous nous sommes concentrés sur l'étude du modèle triple négatif MDA-MB- 231. Les modifications morphologiques de ces cellules sont caractérisées par l'apparition d'altérations cellulaires compatibles avec la mort cellulaire. Le clivage des caspase-3 et 7 a été observé dès 16h de traitement, ce qui suggère l'induction d'une mort apoptotique. Par ailleurs, des ERO ont été détectées 15 min après le début du traitement, cette émission d'ERO a pu être totalement bloquée par un prétraitement avec la N-acétylcystéine (NAC). La détection de marqueurs des dommages de l'ADN, entre 16 et 28 heures après début du traitement, corrobore l'activation des caspases et les observations réalisées en vidéo-microscopie. Après traitement à CI50, une accumulation des pCDK dans les cellules a été observée après 4 et 8 heures, suggérant une inhibition de l'activité CDC25. De plus, les cellules prétraitées avec la NAC n'ont montré aucune accumulation de pCDK après traitement par SV37. Ces résultats suggèrent un lien direct entre la production de ROS induit par le composé SV37 et l'inhibition des CDC25. Ce projet a permis de définir les coumarines en tant que nouvelle classe de composés inhibitrice des phosphatases CDC25. Ces travaux ont de plus permis l'identification d'un composé coumarine-soufre-quinone SV37 qui constitue une structure de base pour le développement d'inhibiteurs de plus en plus efficaces,
Within the context of research for new targets for cancer therapy, Cdc25 phosphatases are interesting candidates, the inhibition of which being able to slow down tumor growth and eventually improve the cancer treatments currently in use. The objectives of this PhD project are to design and synthesize new compounds able to inhibit CDC25 and to determine efficiency of identified compounds in breast cancer cell lines. In vitro evaluation of inhibitory potential of compound is realized through a high sensitivity fluorometric method (3-OMFP substrate). Cellular effects were evaluated in MCF-7 and MDA-MB-231 cell lines. Effects on cell viability are assessed through MTT assays, and cytotoxicity is evaluated through trypan blue assays and microscopic observations with Incucyte videomicroscopy system. Cell death was characterized by detection of apoptotic markers (caspases) and DNA damages markers (PARP Histone H.2AX) by Western Blotting. The analyses of mechanisms underlying cell death were explored through cytometric detection of reactive oxygen species (ROS) with H2DCFDA and Redox Sensor Red probes. Inhibition of CDC25 in cells was indirectly evaluated through detection of phosphorylated forms of CDK by Western Blotting. In vitro evaluation of 93 synthesized compounds allowed us to find new active compound in various chemical families including steroid, thiophene, coumarinic, imidazole and quinone derivatives. The coumarinic derivatives showed potent CDC25 inhibition. A new coumarin-sulfurquinone combined structure, named SV37, was designed to optimize efficiency of inhibition. In vitro tests on this compound, showed a strong CDC25 inhibitory potential (IC50 under 5µM for CDC25 A and C). Effect of SV37 on cell growth was evaluated on various cell lines (MCF-7, MDA-MB-231, hTERT-HME1 and HepG2). Results indicate inhibition of cell growth (IC50 values from 9 to 18 µM). Analysis of cell viability indicates no remarkable cell death in MCF7 at IC50 value whereas in MDA-MB-231 the cell growth decrease was characterized by an increase of cell death. For deeper investigations on the cell death and on the underlying mechanisms, we focused the study on the triple negative model MDA-MB-231. The morphological changes of MDA-MB-231 cells during the treatment were characterized by the appearance of cellular alterations compatible with a cellular demise and culminating with a disruption of cells after 20h. Caspase-3 and 7 cleavages were observed 16h after beginning of the treatment, suggesting an apoptotic cell death. A ROS induction was observed 15 min after the beginning of the treatment and was totally prevented by Nacetylcysteine (NAC) pretreatment. DNA damage markers were detected between 16 and 28 hours after beginning of treatment, a timing falling with caspase activation and with the appearance of cell demise observed by video microscopy. Accumulation of pCDK in cells was observed after 4 and 8 hr of treatment by SV37 at IC50 suggesting an inhibition of CDC25 activity, and cells pretreated with NAC showed no accumulation of pCDK after SV37 treatment. This strongly suggests a direct link between ROS generation by the compound SV37 and the accumulation of pCDK. This project increased knowledge on inhibitors of CDC25 phosphatases and allowed the identification of coumarine compound as new CDC25 inhibitors. This work will enable the development of ever more efficient inhibitors, leading to efficient inhibition of CDC25 and inhibition of tumor development

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Xu, Dongdong. "The roles of specific Monodehydroascorbate Reductases in the Arabidopsis thaliana antioxidative system." Electronic Thesis or Diss., université Paris-Saclay, 2024. http://www.theses.fr/2024UPASB071.

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Abstract:

Le peroxyde d'hydrogène (H₂O₂) est une molécule de signalisation importante chez les plantes, et son contenu est contrôlé par divers systèmes, notamment les catalases (CAT) et les ascorbate peroxydases (APX). Le fonctionnement continu de l'APX nécessite la régénération de l'ascorbate, pour laquelle plusieurs possibilités existent. Un type d'enzyme régénérant l'ascorbate est la monodéshydroascorbate réductase (MDHAR), une protéine dépendante du NAD(P)H qui est codée par cinq MDAR gènes chez Arabidopsis. Ce travail visait à examiner l'importance de ces gènes en utilisant des mutants à perte de fonction spécifiques alliés à d'autres techniques. L'analyse des transcrits a révélé que des mutants knock-out pouvaient être obtenus pour tous les gènes. Les dosages de l'activité de MDHAR dans des extraits de feuilles ont révélé que la MDAR1 peroxysomale codait la majeure partie de l'activité dépendante du NADH, tandis que l'activité dépendante du NADPH était principalement codée par MDAR1, aux côtés de la MDAR2 cytosolique. À l'exception du mutant mdar4, qui nécessitait du sucre pour la germination et la croissance post-germinative précoce, tous les mutants montraient un phénotype de type sauvage lorsqu'ils étaient cultivés dans des conditions standard. Pour explorer si l'absence d'impact phénotypique des mutations était due à la redondance des gènes, deux approches ont été utilisées. Dans la première, les mutants ont été croisés avec le mutant cat2, qui présente une activité de catalase foliaire fortement réduite, afin de tester les interactions entre différents systèmes d'élimination du H₂O₂. Dans la seconde, nous avons cherché à explorer une redondance entre les deux gènes MDAR codant des isoformes peroxysomales en produisant des mutants doubles mdar1 mdar4. Sur la base de l'analyse moléculaire et biochimique de toutes ces lignées, il peut être conclu que l'expression d'au moins une isoforme peroxysomale pourrait être nécessaire à la viabilité des plantes et que la MDAR2 cytosolique semble coder la MDHAR la plus importante dans les conditions de stress oxydatif. Il est intéressant de noter que, l'introduction du mutant mdar2 dans le fond génétique cat2 a affaibli, plutôt que renforcé, certaines réponses au stress oxydatif, ce qui suggère des mécanismes de signalisation inédits liés à l'activité de la MDHAR
Hydrogen peroxide (H₂O₂) is an important signalling molecule in plants, and contents are controlled by various systems, notably catalases (CAT) and ascorbate peroxidases (APX). Continued function of APX requires regeneration of ascorbate, for which several possibilities exist. One type of ascorbate-regenerating enzyme is monodehydroascorbate reductase (MDHAR), an NAD(P)H-dependent protein which is encoded by five MDAR genes in Arabidopsis. This work aimed to examine the importance of these genes using specific loss-of-function mutants allied to other techniques. Transcript analysis showed that knockout mutants could be obtained for all the genes. Assays of MDHAR activity in leaf extracts revealed that the peroxisomal MDAR1 encoded most of the NADH-dependent activity while NADPH-dependent activity was chiefly encoded by MDAR1 alongside cytosolic MDAR2. Apart from mdar4, which required sugar for germination and early post-germinative growth, all mutants showed a wild-type phenotype when grown in standard conditions. To explore whether the lack of phenotypic impact of the mutations was caused by gene redundancy, two approaches were undertaken. In the first, mutants were crossed with the cat2 mutant, which has greatly decreased leaf catalase activity, to test for interactions between different H₂O₂-removing systems. In the second, we sought to examine redundancy between the two MDAR genes encoding peroxisomal isoforms by producing double mdar1 mdar4 mutants. Based on molecular and biochemical analysis of all these lines, it can be concluded that expression of at least one peroxisomal isoform might be required for plant viability and that the cytosolic MDAR2 seems to encode the most important MDHAR in oxidative stress conditions. Intriguingly, introduction of mdar2 into the cat2 background weakened rather than enforced some responses to oxidative stress, pointing to novel signalling mechanisms related to MDHAR activity

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Ristic, Marko. "ROS/SUMO relationship in the chemotherapeutic treatment of Acute Myeloid Leukemia." Thesis, Montpellier, 2015. http://www.theses.fr/2015MONTT047.

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Les leucémies aiguë myéloïde (LAM) sont un groupe d’hémopathies malignes, dont le traitement est généralement composé de deux génotoxiques : la cytarabine (Ara-C) et la daunorubicine (DNR). Nous avons montré que l’Ara-C et la DNR induisent la déconjugaison rapide de SUMO (Small Ubiquitin-related Modifier) de ses protéines cibles. Cette deSUMOylation est dûe à l'inactivation des enzymes E1 et E2 de SUMOylation par les espèces réactives de l'oxygène (ROS) produites par l’Ara-C et la DNR et est impliquée dans l'activation de l'apoptose. En outre, cet axe ROS/SUMO est anergisé dans les LAM chimiorésistantes. Cependant, il peut être réactivé par des pro-oxydants ou par inhibition de la voie SUMO par l'acide anacardique. Pour identifier les protéines contrôlées par l’axe ROS/SUMO nous avons effectué une approche de spectrométrie de masse quantitative (SILAC). Parmi les 1000 protéines SUMOylées identifiées, la plupart des 114 protéines qui perdent leur SUMOylation lors du traitement sont impliquées dans la régulation de l'expression des gènes. De plus, un ChIP-Seq avec des anticorps anti SUMO-2 a permis de montrer que les génotoxiques, en particulier la DNR, induisent une diminution massive de la présence de protéines SUMOylées sur la chromatine. La recherche de motifs au sein des séquences fixant SUMO a permis d’identifier le motif de liaison de CTCF à l’ADN. De plus, CTCF a été trouvé dans la SILAC comme l’une des protéines déSUMOylées par les traitements. En utilisant des données publiques de Chip-Seq pour CTCF, nous avons identifié 55 gènes qui fixent à la fois CTCF et SUMO et dont l’expression est régulée par les traitements. Dans la dernière partie de ce travail, nous avons étudié le groupe de 19 protéines dont la SUMOylation augmente suite aux traitements génotoxiques. Parmi ces protéines, nous avons trouvé diverses protéines centromériques, y compris CENP-B et CENP-C. En utilisant le PLA (Proximity Ligation Assay) nous avons pu montrer que CENP-B et CENP-C colocalisent avec SUMO et yH2AX après traitement. Cela suggère que la SUMOylation des protéines centromériques se produit sur les sites de cassure et pourrait jouer un rôle dans la réparation des dommages de l'ADN
Acute Myeloid Leukemias (AML) are a group a severe hematological malignancies, which treatment is generally composed of two genotoxics: Cytarabine (Ara-C) and Daunorubicin (DNR). We have shown that these drugs induce the rapid deconjugation of the Small Ubiquitin-related Modifier (SUMO) from its target protein. This is due to the inactivation of SUMO E1 and E2 enzymes by Reactive oxygen species (ROS). This deSUMOylation participated in the activation of specific genes and is involved the induction of apoptosis. In addition, this ROS/SUMO axis is anergized in chemoresistant AMLs. However, it can be reactivated by pro-oxidants or inhibition of the SUMO pathway with anacardic acid, an inhibitor of the SUMO E1. To identify which proteins are regulated by this ROS/SUMO axis, we performed a quantitative mass spectrometry approach. Among the 1000 identified SUMO targets, most of the 114 proteins, which SUMOylation decrease upon treatment, are involved in the regulation of gene expression. In addition, we showed by ChIP-Seq with SUMO-2 antibodies that genotoxics, in particular DNR, induce a massive decrease of the presence of SUMOylated proteins on the chromatin. Motif search analysis of the SUMO binding sequences in these genes identified CTCF binding motif. Interestingly, CTCF was found in the SILAC as deSUMOylated by the drugs. Using publicly available ChIP-Seq data for CTCF, we found 55 genes which are occupied by both SUMO-2 and CTCF and which expression is regulated by the drugs. In the last part of this work, we got interested in the 19 proteins that get up-SUMOylated upon treatment. Among them, we found centromeric proteins, including CENP-B and CENP-C. Using Proximity Ligation Assay, we could show that CENP-B and CENP-C colocalize with both SUMO and yH2AX upon DNR treatment. Altogether, this suggests that centromeric protein up-SUMOylation occurs at sites of DNA damage and might play a role in DNA damage repair

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Owusu, Stephenson Boakye. "Effects of gamma irradiation-induced reactive oxygen species on phagocytes NADPH oxidase." Thesis, université Paris-Saclay, 2021. http://www.theses.fr/2021UPASF006.

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Abstract:

Les neutrophiles jouent un rôle très important dans la défense immunitaire humaine contre les infections pathogènes. Les acteurs prédominants dans ce rôle lors de l'activation des neutrophiles sont la libération d'agents cytotoxiques stockés dans les granules et les vésicules sécrétoires, et la production d'espèces réactives de l'oxygène (ROS) initiée par une enzyme NADPH oxydase. La NADPH oxydase est organisée comme un complexe de protéines membranaires et cytosoliques à l'état actif. Il est constitué d’un flavocytochrome b₅₅₈ membranaire (cytb₅₅₈) qui comprend deux sous-unités, gp91phox et p22phox; et quatre composants cytosoliques: p47phox, p67phox, p40phox et Rac. Le dysfonctionnement de l'un des composants du complexe conduit à la maladie granulomateuse septique chronique (CGD) qui rend les patients très vulnérables aux infections. L'hyper-activation de la NADPH oxydase conduit à un stress oxydatif qui entraîne des maladies dégénératives et cardiovasculaires. Ainsi, l'activité de la NADPH oxydase doit être régulée. Le but de cette thèse était d'étudier l'impact du stress oxydatif sur les neutrophiles humains et en particulier sur la NADPH oxydase. Dans ce travail, le stress oxydatif sur les neutrophiles, isolés à partir sang de donneur sain humain, a été simulé en utilisant l’irradiation gamma ⁶⁰Co qui conduit en solution à la présence d’O₂•⁻, OH• et H₂O₂, de manière similaire au stress oxydatif. Les résultats ont montré que le stress oxydatif mimé par une irradiation de 25 Gy (8.5 µM O₂•⁻ et 6.75 µM OH•) et de 50 Gy (17 µM O₂•⁻ et 13.5 OH•), pré-active l’enzyme NADPH oxydase. Cette pré-activation comprend i) une localisation accrue du cytb₅₅₈ au niveau de la membrane plasmique, ii) une phosphorylation partielle de p47phox (sur la sérine 345) iii) le recrutement des protéines cytosoliques (sauf RAC) à la membrane, ce qui a abouti à iv) une petite mais détectable augmentation de la production de ROS. De plus, un faible niveau de stress oxydatif mimé par une irradiation de 0.2 Gy (0.07 µM O₂•⁻ et 0.06 µM of OH•) et de 2 Gy (0.68 µM O₂•⁻ et 0.56 µM of OH•) sur des lignées de cellules PLB différenciées en neutrophiles a également révélé une présence accrue de cytb₅₅₈ au niveau de la membrane plasmique. En général, notre analyse a montré une forte corrélation entre le fonctionnement de la NADPH oxydase et l'augmentation du niveau de stress oxydatif. Enfin, un niveau de stress oxydatif très élevé (135 Gy correspondant à 45.9 µM et 37.8 µM of OH•) a révélé une forte présence de cytochrome c associé à la membrane plasmique en défaveur du cytb₅₅₈. Ce résultat est surprenant car le cytochrome c est presque totalement absent dans les neutrophiles. Considéré comme l'un des principaux acteurs apoptotiques, le cytochrome c est libéré des mitochondries, peu présentes dans le neutrophiles, lors d’un processus apoptotique. Cette découverte met en évidence l'importance des mitochondries dans le mécanisme de mort des cellules neutrophiles, rôle qui comme par le passé, a induit en erreur. Nos résultats suggèrent que le stress oxydatif est probablement un activateur potentiel de la NADPH oxydase des neutrophiles et pourrait jouer un rôle dans la thérapeutique et dans la pathogenèse des maladies associées
Neutrophils play a very key role in the human immune defence against pathogenic infections. The predominant players in this role during activation of neutrophils are the release of cytotoxic agents stored in the granules and secretory vesicles, and the production of reactive oxygen species (ROS) initiated by an enzyme NADPH oxidase. NADPH oxidase is organized as a complex of membrane and cytosolic proteins in the active state. It constitutes a membrane-bound flavocytochrome b₅₅₈ (cytb₅₅₈) which comprises two subunit, gp91phox and p22phox; and four cytosolic components: p47phox, p67phox, p40phox and Rac. Dysfunction in any of NADPH oxidase components leads to chronic granulomatous disease (CGD), a condition which makes patients susceptible to infections. Hyper-activation of NADPH oxidase leads to oxidative stress which implicates in degenerative and cardiovascular disease. Thus, NADPH oxidase activity must be tightly regulated. The aim of this thesis was to investigate the impact of oxidative stress on human neutrophils. The major focus was on NADPH oxidase at the molecular and cellular levels. In this work, oxidative stress on neutrophils, isolated from human blood, was mimicked using ⁶⁰Co gamma irradiation (leading to O₂•⁻, OH• and H₂O₂ in water solution) and the effects were studied. The results showed that oxidative stress, mimicked by 25 Gy (8.5 µM O₂•⁻ and 6.75 µM OH•) and 50 Gy (17 µM O₂•⁻ and 13.5 OH•), of gamma irradiation pre-activated neutrophil NADPH oxidase. This pre-activation comprised i) increased cytb₅₅₈ localization at the plasma membrane, ii) partial phosphorylation of p47 phox (on serine 345) iii) recruitment of NADPH oxidase cytosolic proteins (except RAC) to the membrane, which resulted in iv) small but detectable increased ROS production. Furthermore, low level of oxidative stress mimicked by 0.2 Gy (0.07 µM O₂•⁻ and 0.06 µM of OH•) and 2 Gy (0.68 µM O₂•⁻ and 0.56 µM of OH•) of irradiation on PLB-cell lines differentiated into neutrophils also revealed an increased cytb₅₅₈ at the plasma membrane. In general, our analysis showed a strong correlation between the pre-activation of NADPH oxidase and an increase in the level of oxidative stress. Finally, a test on a very high level of oxidative stress mimicked by 135 Gy (45.9 µM and 37.8 µM of OH•) revealed a strong presence of cytochrome c in association with the plasma membrane in disfavour of cytb₅₅₈. This result was surprising since cytochrome c is almost completely absent in human neutrophils. Believed to be one of the principal apoptotic players, cytochrome c is released from mitochondria upon an apoptotic insult. This discovery highlights the importance of mitochondria in the death mechanism of neutrophil cells, role that as in the past misleading. Our results suggest that oxidative stress is likely a potential activator of neutrophil NADPH oxidase and may play a role in therapeutics and in pathogenesis of related diseases

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Lakhal, Raja. "Etude de l'effet de l'oxygène sur la physiologie et le métabolisme de la bactérie hyperthermophile anaérobie thermotoga maritima." Thesis, Aix-Marseille 1, 2011. http://www.theses.fr/2011AIX10052/document.

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Abstract:

La bactérie hyperthermophile Thermotoga maritima a été cultivée dans un fermenteur dans lequel la concentration en O2 a été rigoureusement contrôlée. A 80°C et pH 7, il a été démontré que T. maritima pouvait survivre à des expositons de durées variables à l’O2 et qu’elle était capable de le consommer. La vitesse spécifique de consommation de l’O2 a été estimée à 73.6 µmoles O2.min-1.g protéines-1 lors d’une courte exposition à l’O2 (30 min). De longues expositions à l’O2 (20 h) nous ont permis de démontrer que la présence d’O2 ralentissait la croissance de T. maritima et conduisait à un shift du métabolisme vers la production de lactate aux dépens de l’acétate et à un arrêt de production d’H2. Dans ces conditions, il a été constaté que 73% du glucose était consommé selon un métabolisme partiellement oxydatif faisant intervenir simultanément les deux voies Embden-Meyerhof et Entner-Doudoroff de la glycolyse. En l’occurrence, l’oxydation incomplète du glucose est corrélée à la réduction de l’O2 en eau. Les études transcriptomiques ont montré que cette réduction de l’O2 résultait d’une cascade de réactions intermédiaires faisant intervenir des enzymes de type peroxydases [activation de l’expression des enzymes Ahp (alkyl hydroperoxyde réductase), Bcp1 et Bcp2 (thiol peroxydase thioredoxin-dépendante)] qui acheminent les électrons libérés via les radicaux libres. D’autres enzymes comme la rubréryhtrine et la neelarédoxine interviendraient pour détoxiquer les espèces réactives d’O2. Les électrons libérés seraient au final utilisés pour réduire l’O2 en H2O par l’enzyme FprA, dont l’expression varie en fonction du potentiel redox du milieu de culture. Ce schéma est proposé comme un des éléments essentiels du dispositif enzymatique permettant la consommation de l’O2 et la protection des cellules contre les effets des espèces réactives de l’oxygène chez T. maritima
Batch cultures of the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima were performed in a bioreactor where O2 concentrations in the gas phase were strictly controlled. At 80°C and pH 7, we demonstrated that T. maritima survived despite being exposed to oxygen at different times and that it consumed it. O2 uptake rate was estimated at 73.6 µmoles O2 min-1g proteins-1 during a short exposure to O2 (30 minutes). A long time exposure of T. maritima cultures to oxygen (20h) led to a drastic reduction in growth, together with a shift in glucose metabolism towards lactate instead of acetate production and a stop in H2 production. Under these conditions, it has been observed that 73% of glucose was partially oxidised by using both Embden-Meyerhof and Entner-Doudoroff glycolytic payhways. Uncomplete oxidation of glucose is correlated to a reduction of O2 to H2O. Transcription analyses revealed that this reductive process of O2 involved enzymes like peroxidases [activation of alkyl hydroperoxide reductase (ahp), bcp1 and thioredoxin-dependent thiol peroxidase (bcp 2)]. Moreover, genes encoding reactive oxygen species (ROS)-scavenging systems (neelaredoxin and rubrerythrin), were found to be upregulated during oxygen exposure. The oxygen reductase FprA, which expression was shown to depend on the redox level of the culture medium, is proposed as a primary consumer of O2. All these enzymes are essential for T. maritima to consume O2 consumption and to fight against the toxic effects of ROS in cells

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Delaval, Mathilde. "Effets des nanoparticules d'oxyde de cerium sur l'epithelium respiratoire in vitro." Sorbonne Paris Cité, 2015. http://www.theses.fr/2015USPCC204.

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Abstract:

L'utilisation croissante des NPCe02 conduit à leur émission dans l'air intérieur et extérieur, rendant nécessaire l'étude de leurs effets pulmonaires potentiels. Notre objectif était d'étudier la capacité des NPCe02 à induire des effets à court et long terme sur des modèles bronchiques in vitro. Les propriétés physico-chimiques des NPCe02, de contrôles positifs (Mn203 and Ti02) et négatifs (BaSO4) ont été caractérisées, notamment en développant un test haut-débit pour évaluer leur potentiel oxydant intrinsèque. Une stratégie toxicologique in vitro basée sur la capacité des NPs à induire une cytotoxicité, réponse pro-inflammatoire et défense antioxydante de cellules épithéliales bronchiques humaines a été utilisée. Les modèles in vitro ont été traités avec une dose unique de NPCeO2 pendant 6, 24, 48 heures ou jusqu'à 28 jours, ou avec des doses répétées de NPCeO2 pendant 1 ou 4 semaines. Notre étude révèle un potentiel toxique intermédiaire des NPCeO2 par rapport aux autres NPs. Les NPCeO2 induisent l'expression d'ARNm d'antioxydants et un relargage de cytokines pro-inflammatoires. Notre étude demontre que les cellules primaires sont moins sensibles que la lignée cellulaire bronchique. Le développement de cultures primaires mucociliaires différenciées traitées en interface air-liquide a permis de détecter une réponse pro-inflammatoire retardée en réponse aux NPCeO2. Ces NPs induisent des effets cellulaires persistant jusqu'à 4 semaines d'exposition répétées et unique à forte dose. En conclusion, notre étude met en évidence la nécessité d'utiliser des modèles in vitro plus complexes permettant des expositions répétées et long-terme, afin de révéler les effets néfastes des NPCeO2
Considering the increased use of Ce02 NPs, which induces indoor and outdoor airborne emissions, there is a need to assess potential pulmonary responses to Ce02 NPs. Therefore, our objective was to examine the ability of Ce02 NPs to induce short and long-term effects on in vitro bronchial models with increasing complexity. Physicochemical properties of Ce02 NPs, positive controls (Mn203 and Ti02) and negative control (BaSO4) were characterized, especially by developing a high throughput assay to assess the intrinsic oxidative potential of NPs. An in vitro toxicological strategy based on their ability to induce cytotoxicity, pro-inflammatory response and antioxidant defense in human bronchial epithelial cells was used. In vitro models were treated with one single dose of Ce02 NPs for up to 48 hours or 28 days, or with repeated doses of Ce02 NPs for 1 or 4 weeks. Our study revealed an intermediate toxicological potential of Ce02 NPs in comparison to other NPs. Ce02 NPs induced antioxidant mRNA expressions and release of pro¬inflammatory cytokines. Our study also demonstrated that primary cells are less sensitive than the bronchial cell line but the development of differentiated mucociliary primary cultures treated at air-Iiquid interface allowed the detection of a delayed pro-inflammatory response. Ce02 NPs induced persistent cellular effects for up to 4 weeks of repeated exposure and surprisingly also after one single exposure at high dose. In conclusion, our study emphasized the necessity to use more complex in vitro models allowing long-term and repeated exposures, in order to reveal the adverse effects of Ce0, NPs

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Tanguy, Stéphane. "Etude de l'implication des espèces réactives dérivées de l'oxygène dans les manifestations du syndrome de reperfusion du myocarde ischémique au cours du vieillissement : effet d'une supplémentation alimentaire en sélénium." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10025.

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Abstract:

Ce travail constitue une contribution originale a l'etude de l'implication des especes reactives derivees de l'oxygene (erdo) dans les manifestations du syndrome de reperfusion post-ischemique du cur isole perfuse de rat au cours du vieillissement. Dans la premiere partie, nous avons mis en evidence une limitation significative des arythmies de la reperfusion sous l'effet de diverses interventions modulant le stress oxydatif induit par la reperfusion. Cette limitation a pu etre obtenue aussi bien en utilisant une molecule pharmacologique originale presentant des proprietes antiradicalaires catalytiques qu'en induisant une augmentation de l'activite intracellulaire de la glutathion peroxydase a la suite d'un regime enrichi en selenium. Ces resultats nous ont permis de confirmer l'existence d'une implication directe des especes reactives derivees de l'oxygene dans le syndrome de reperfusion. La deuxieme partie de nos travaux, consacree a l'etude de l'evolution de la sensibilite du myocarde a l'ischemie / reperfusion au cours du vieillissement, nous a permis de mettre en evidence une augmentation de la sensibilite du cur de rat age aussi bien vis a vis de l'ischemie que de la reperfusion. Ceci nous a conduits a verifier si une evolution avec l'age de la sensibilite au stress radicalaire pouvait etre impliquee dans cette plus grande vulnerabilite du cur age. Nous avons ainsi demontre que le vieillissement s'accompagne d'une augmentation de la sensibilite du cur de rat au stress radicalaire medie par le peroxyde d'hydrogene. Enfin, dans la troisieme partie de ce travail, nous avons demontre que la sensibilite du myocarde age a une sequence d'ischemie / reperfusion pouvait etre prevenue par un renforcement de l'activite cardiaque de la glutathion peroxydase.

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Zang, Lili. "Deciphering the nitrate signaling pathway leading to a reduction of primary root growth in Medicago truncatula Nitrate inhibits primary root growth by reducing accumulation of reactive oxygen species in the root tip in Medicago truncatula." Thesis, Angers, 2020. http://www.theses.fr/2020ANGE0007.

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Abstract:

Chez Medicago truncatula, le nitrate, perçu comme un signal par MtNPF6.8, inhibe la croissance de la racine primaire en réduisant l’élongation des cellules. Comme les espèces réactives de l’oxygène (ROS) produites et converties (O2•−→ H2O2→ •OH) dans l’apex des racines contrôlent l'élongation cellulaire, nous avons évalué si les ROS pouvaient médier ce signal. Nous avons constaté que le nitrate réduit la teneur en ROS de l’apex de la racine primaire chez trois génotypes sauvages sensibles au nitrate (dont R108), mais pas chez des mutants npf6.8 (fond génétique R108) insensibles au nitrate. La diminution de la teneur en ROS observée chez R108 en réponse au nitrate est orchestrée par les peroxydases (POD) de paroi cellulaire qui éliminent H2O2 et empêchent sa conversion en •OH, espèce responsable du relâchement de la paroi et de l'allongement des cellules. Ces résultats démontrent que les ROS et les POD sont des médiateurs du signal nitrate. Nous avons également identifié une NADPH oxydase (MtRBOHF), comme autre médiateur du signal nitrate, la croissance de la racine primaire de mutants rbohF étant insensible au nitrate. En parallèle, une analyse couplée du transcriptome et du protéome de l’apex de la racine primaire de R108 et npf6.8, cultivés en absence ou en présence de nitrate, a été réalisée. Les résultats montrent que la sensibilité de la racine primaire au nitrate est fortement liée à la fonctionnalité de MtNPF6.8 et que de nombreux gènes qui répondent au nitrate sont impliqués dans l'homéostasie des ROS et l'organisation de la paroi cellulaire ou codent des facteurs de transcription
In Medicago truncatula, nitrate, acting as a signal perceived by MtNPF6.8, inhibits primary root growth through a reduction of root cell elongation. We evaluated here whether reactive oxygen species (ROS) could mediate the nitrate signal since ROS produced and converted (O2•−→ H2O2 → •OH) in the root tip have been reported to control cell elongation. We found that nitrate reduces the content in ROS of the primary root tip in three wild type genotypes (including R108) sensitive to nitrate, but not in the npf6.8 mutants (in the R108 genetic background), insensitive to nitrate. The decrease in ROS content observed in R108 in response to nitrate is orchestrated by cell wall peroxidases (PODs) that eliminate H2O2 and impair its conversion in •OH, the species responsible for cell wall loosening and cell elongation. These results demonstrate that ROS and PODs are downstream mediators of the nitrate signal. We further identified a NADPH oxidase (MtRBOHF), as another mediator in the nitrate signaling pathway, the primary root growth of rbohF mutants being insensitive to nitrate. We finally performed a coupled transcriptomic and proteomic analysis with R108 and npf6.8 grown in absence or presence of nitrate to uncover novel aspects of legume primary root tip response to nitrate. We found that the sensitivity of the primary root is strongly linked to the functionality of MtNPF6.8 and many nitrate responsive genes encompass genes involved in ROS homeostasis and cell wall organization, or encode transcription factors

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Dissertations / Theses on the topic 'Espèces réactives de l'oxygène'

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