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Dissertations / Theses on the topic 'Facteur de transcription NF-kB'
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Bottero, Virginie. "Dissection des mécanismes d'activation du facteur de transcription NF-KB." Nice, 2002. http://www.theses.fr/2002NICE5720.
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Derudder, Emmanuel. "Mécanismes de contrôle du facteur de transcription RelB, un membre de la famille NF-kB/Rel." Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066091.
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Charles, richard John lalith. "FACT, réparation par excision de bases et fixation du facteur de transcription NF-kB sur la chromatine." Phd thesis, Université de Grenoble, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00770327.
Full textAbstract:
FACT est une protéine clé, qui joue de multiples rôles, y compris dans la transcription et la réparation de l'ADN endommagé. Néanmoins, comment FACT participe à la réparation et à la transcription de la chromatine n'est pas élucidé. Dans ce travail nous avons tout d'abord étudié le rôle de FACT dans le processus de réparation par excision de base (BER). Nous avons utilisé des nucléosomes reconstitués avec de l'ADN à uracile incorporé au hasard. Nous avons trouvé que l'enzyme UDG est capable d'enlever les uraciles localisés du côté de la solution et pas les uraciles se trouvant en face de l'octamère d'histone. La présence simultanée de FACT et de RSC (facteur de remodelage de la chromatine, impliqué dans la réparation) permet un enlèvement efficace des uraciles localisés du côté de l'octamère d'histone par l'UDG. De plus, l'action concertée de FACT et RSC contribue à l'enlèvement de la lésion oxidative 8-oxoG, autrement inaccessible, de la matrice nucléosomale par l'enzyme OGG1. Ce résultat est obtenu grâce à une activité " co-remodelatrice " de la protéine FACT. Dans ce travail nous décrivons pour la première fois cette nouvelle propriété de FACT et nous montrons par une série d'expériences biochimiques que FACT est capable de stimuler l'activité de remodelage du RSC. Nos expériences montrent que la présence de FACT augmente l'efficacité de RSC à transformer l'énergie libérée par l'hydrolyse de l'ATP en travail " mécanique ". Les données obtenues suggèrent une nature stochastique du BER in vivo, FACT étant un facteur clé dans le processus de réparation. Nous avons également investigué l'implication de l'activité co-remodelatrice de FACT dans la fixation de NF-kB aux matrices nucléosomales. La production de nucléosomes remodelés, mais non - mobilisés (remosomes) n'est pas suffisante pour promouvoir la fixation de NF-kB. Pourtant, la mobilisation des nucléosomes par l'intermédiaire de RSC permet une interaction efficace entre NF-kB et l'ADN nucléosomal. Toutes ces données sont essentielles pour le décryptage du mécanisme moléculaire par lequel FACT agit dans le BER et dans la transcription médiée par NF-kB.
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Charles, Richard John Lalith. "FACT, réparation par excision de bases et fixation du facteur de transcription NF-kB sur la chromatine." Thesis, Grenoble, 2012. http://www.theses.fr/2012GRENV034/document.
Full textAbstract:
FACT est une protéine clé, qui joue de multiples rôles, y compris dans la transcription et la réparation de l'ADN endommagé. Néanmoins, comment FACT participe à la réparation et à la transcription de la chromatine n'est pas élucidé. Dans ce travail nous avons tout d'abord étudié le rôle de FACT dans le processus de réparation par excision de base (BER). Nous avons utilisé des nucléosomes reconstitués avec de l'ADN à uracile incorporé au hasard. Nous avons trouvé que l'enzyme UDG est capable d'enlever les uraciles localisés du côté de la solution et pas les uraciles se trouvant en face de l'octamère d'histone. La présence simultanée de FACT et de RSC (facteur de remodelage de la chromatine, impliqué dans la réparation) permet un enlèvement efficace des uraciles localisés du côté de l'octamère d'histone par l'UDG. De plus, l'action concertée de FACT et RSC contribue à l'enlèvement de la lésion oxidative 8-oxoG, autrement inaccessible, de la matrice nucléosomale par l'enzyme OGG1. Ce résultat est obtenu grâce à une activité « co-remodelatrice » de la protéine FACT. Dans ce travail nous décrivons pour la première fois cette nouvelle propriété de FACT et nous montrons par une série d'expériences biochimiques que FACT est capable de stimuler l'activité de remodelage du RSC. Nos expériences montrent que la présence de FACT augmente l'efficacité de RSC à transformer l'énergie libérée par l'hydrolyse de l'ATP en travail « mécanique ». Les données obtenues suggèrent une nature stochastique du BER in vivo, FACT étant un facteur clé dans le processus de réparation. Nous avons également investigué l'implication de l'activité co-remodelatrice de FACT dans la fixation de NF-kB aux matrices nucléosomales. La production de nucléosomes remodelés, mais non - mobilisés (remosomes) n'est pas suffisante pour promouvoir la fixation de NF-kB. Pourtant, la mobilisation des nucléosomes par l'intermédiaire de RSC permet une interaction efficace entre NF-kB et l'ADN nucléosomal. Toutes ces données sont essentielles pour le décryptage du mécanisme moléculaire par lequel FACT agit dans le BER et dans la transcription médiée par NF-kBFACT is a vital protein which has multiple roles including one in transcription and repair of damaged DNA. However, how FACT assists repair and transcription remains elusive. In this work, we have first studied the role of FACT in Base Excision Repair (BER). We used nucleosomes containing DNA with randomly incorporated uracil. We found that the enzyme UDG is able to remove uracils facing the solution and not the uracils facing the histone octamer. The simultaneous presence of FACT and RSC (a chromatin remodeler involved in repair) allows, however, a very efficient removal of uracil facing the histone octamer by UDG. In addition, the concerted action of FACT and RSC permits the removal of the otherwise un-accessible oxidative lesion 8-oxoG from nucleosomal templates by OGG1. This was achieved thanks to the co-remodeling activity of FACT. Here we described for the first time this novel property of FACT and we show in a series of biochemical experiments that FACT is able to boost the remodeling activity of RSC. The experiments reveal that the presence of FACT increases the efficiency of RSC to transform the energy freed by ATP hydrolysis into “mechanical” work. The presented data suggest a stochastic nature of BER functioning in vivo, FACT being a key factor in the repair process. The implication of the co-remodeling activity of FACT in NF-kB factor binding to nucleosomal templates was also investigated. The generation of remodeled, but not mobilized nucleosomes (remosomes), was not sufficient to promote NF-kB binding. However, the RSC-induced nucleosome mobilization allows efficient NF-kB interaction with nucleosomal DNA. Our data are instrumental in deciphering the molecular mechanism of FACT implication in BER and NF-kB mediated transcription
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VALLEE, SEBASTIEN. "Role du facteur de transcription nf-kb dans la survie et la differenciation de la cellule tumorale." Paris 11, 2001. http://www.theses.fr/2001PA112079.
Full textAbstract:
Nf-kb est un facteur de transcription regissant de nombreux mecanismes cellulaires, il est preponderant dans les phenomenes inflammatoires. Il regule positivement ou le plus souvent negativement l'apoptose suivant le type cellulaire. Cet effet l'impliquerait dans la progression tumorale des adenocarcinomes. Ce facteur intervient egalement dans les pathologies inflammatoires du tube digestif. Dans une 1 e r e partie, nous mettons en evidence une dualite des effets de l'igf-1 sur le controle de genes portant le site kb : l'igf-1 inhibe la degradation de ikb, l'inhibiteur naturel de nf-kb et freine la translocation de nf-kb, alors qu'il potentialise la transcription du gene de l'il-8 dont l'expression est dependante de nf-kb. Dans une 2 e m e partie, nous avons etudie les mecanismes d'activation de nf-kb par l'il-1, une cytokine pro-inflammatoire. Dans les cellules ht29-d4 non differenciees, on observe une perte d'activation de nf-kb en reponse a l'il-1. Cette perte est correlee avec l'absence de translocation subcellulaire de la pkc. L'activation de nf-kb dependante de l'il-1 est restauree lorsque les cellules ht29-d4 se differencient. De plus, la translocation des pkc est egalement restauree et l'inhibition des pkc bloque l'activation de nf-kb. Ces changements au niveau de la voie de signalisation regulee par l'il-1 pourraient etre lies a une modification dans l'etat du cytosquelette intervenant dans la dedifferenciation cellulaire car la translocation des pkc est dependante de la structure du cytosquelette. Dans la 3eme partie, en comparant deux types cellulaires ht29-d4 et hbl 100, nous avons montre l'existence d'une correlation entre la depolymerisation des microtubules par des agents depolymerisants, l'activation de nf-kb
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Laguillier, Christelle. "Inhibition spécifique de facteurs de transcription impliqués dans la cancérogenèse : application à NF-KB et STAT3." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077122.
Full textAbstract:
L'émergence de tumeurs résulte de la dérégulation de plusieurs fonctions cellulaires, dont les voies impliquant des facteurs transcriptionnels (FTs) clés comme NF-KB et STAT3. L'objectif du travail était l'étude des effets et des mécanismes d'action d'inhibiteurs spécifiques de ces FTs dans des lignées tumorales. L'expression d'un dominant négatif mute�� de I-KB dans des lignées de lymphocytes B, entraîne une diminution de l'activité de NF-KB et sensibilise les cellules à l'apoptose induite par le TNFα. En revanche, l'inactivation du TNFa par un anticorps monoclonal est sans effet. Les oligonucléotides-leurres (ODNs) peuvent inhiber spécifiquement les FTs en bloquant leur domaine de liaison à l'ADN, ils empêchent ainsi la transcription de leurs gènes cibles. Un ODN, en épingle à cheveux, s'est révélé efficace pour bloquer spécifiquement NF-KB dans le cytoplasme de lignées cellulaires dérivées d'un cancer colorectal (SW480) et d'un cancer mammaire (MCF7), induisant ainsi l'apoptose. Nous avons obtenu des résultats similaires dans les cellules SW480 avec un ODN en épingle à cheveux dirigé contre STAT3. Mais, cet ODN inhibe aussi STAT1 activé protégeant les cellules contre la mort induite par l'interféron y. Cela montre l'importance de l'équilibre entre les formes actives de STAT1 et STAT3 dans l'évolution des cellules SW480 vers la survie ou vers la mort. Nos travaux montrent que l'inhibition spécifique par des ODNs, de FTs impliqués dans la prolifération cellulaire permet d'induire l'apoptose des cellules des lignées tumorales dans lesquelles ces FTs sont activés. La modélisation moléculaire devrait permettre d'augmenter la spécificité des ODNs pour leur cibleThe growth of tumour cells results in part from deregulation of several cellular functions, including that of pathways involving key transcriptionnal factors (TFs) such as NF-KB or STAT3. In this work we studied the effects and the mechanism of action of specific inhibitors of NF-KB and STAT3 in tumour cell lines. By expressing a mutated form of I-LB in B cell lines, we observed a decreased NF-KB activity and increased induction of apoptosis by TNFα , on the other hand an antibody to TNFa had no direct effect on these cells. Decoy oligonucleotides (decoy ODN) allow the specific inhibition of the TFs by interacting with their DNA binding region. An NF-KB hairpin decoy ODN specifically blocked NF-KB in a colorectal cancer cell line (SW480) and in a mammary cancer cell line (MCF7), thereby inducing apoptosis of these cells. We obtained identical results in the SW480 cells with a STAT3 hairpin decoy ODN. Interestingly, this decoy ODN also inhibited interferony-activated STAT1 resulting in the protection of the cells against interferony-induced apoptosis. These results suggest that a balance between the levels of activated STAT1 and activated STAT3 play a role in the orientation of the SW480 cells toward proliferation or cell death. Thus, targeting TFs involved in cell proliferation with ODNs can efficiently inhibit them and induce the death of the cancer cell lines in which they are activated. Molecular modelling should allow to increase the specificity of the decoy ODNs for their target
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Ben, Ameur Lamya. "Rôle de l’activation chronique de la voie NF-kB induite par l’oncoprotéine Tax du virus HTLV-1 dans la régulation de l’épissage alternatif." Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1136.
Full textAbstract:
La voie de signalisation NF-kB (nuclear factor kB) régule la transcription de gènes impliqués dans la réponse immune et l’inflammation. L’activation chronique de cette voie est fréquemment retrouvée associée à des désordres inflammatoires et des cancers. Les impacts fonctionnels de l’activation de la voie NF-kB ont été jusqu’à présent étudiés à l’échelle des promoteurs. Néanmoins, les études récentes de la distribution chromatinienne de NF-kB indiquent que la sous-unité NF-kB RelA se localise majoritairement dans les régions intragéniques, incluant des exons et des introns, où ses fonctions restent inconnues. Mes travaux ont consisté à adresser cette question dans le contexte de l’infection par le virus HTLV-1, un activateur chronique de la voie NF-kB, responsable de la leucémie T de l’adulte. Mes données montrent que l’activation de la voie NF-kB par l’oncogène viral Tax de HTLV-1 s’accompagne de modifications de l’épissage alternatif d’exons riches en GC qui coïncident avec le recrutement chromatinien de RelA à proximité de ces exons régulés. Les analyses intégratives des profils d’épissage et du remodelage de la chromatine, combinées à des essais de ciblage expérimental de la chromatine (TALE), démontrent que la fixation intragénique de RelA permet de recruter le régulateur d'épissage DDX17 pour moduler l’épissage alternatif de l’exon via son activité hélicase. Ces données révèlent que, outre ses fonctions transcriptionnelles, le facteur NF-kB RelA agit comme une ancre chromatinienne pour le facteur d’épissage DDX17 et fournit une spécificité de régulation d’épissage alternatif. Ces données revisitent nos connaissances des mécanismes physiopathologiques des maladies associées à HTLV-1 ainsi que d'autres désordres reliés à l’activation chronique de la voie NF-kBThe NF-kB (nuclear factor kB) signaling pathway regulates gene transcription of genes involved in immune response and inflammation. Chronic activation of NF-kB frequently associated with inflammatory disorders and cancer. The functional impacts of NF-kB have long been studied at the promoter level. Nevertheless, recent studies of the chromatin distribution of RelA indicate that this NF-kB subunit is predominantly localized in intragenic regions, including exons and introns, where its functions remain unknown. My work has addressed this question in the context of HTLV-1 infection, which is a constitutive activator of NF-kB, and the causative agent of the Adult T-cell Leukemia. The results show that the activation of NF-kB by the viral oncoprotein Tax results in changes in alternative splicing regulations of GC-rich exons that coincide with the chromatin recruitment of RelA in the vicinity of these exons. Integrative analysis of RNA splicing and chromatin occupancy, combined with experimental chromatin tethering assays (TALE) demonstrate that the intragenic binding of RelA leads to the recruitment of the splicing regulator DDX17, which modulates the inclusion rate of exon thanks to its helicase activity. Altogether, these data reveal that, besides its transcriptional role, NF-kB RelA acts as a chromatin anchor for the splicing factor DDX17 and provides alternative splicing specificity. These data revisit our knowledge of the physiopathologic mechanisms of HTLV-1 associated diseases , as well as other disorders related to the chronic activation of the NF-kB pathway
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Kfoury, Youmna. "Mécanismes moléculaires de l'activation de la voie NF-KB par l'oncoprotéine virale d'HTLV-1 : Tax." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077022.
Full textAbstract:
Le virus humain lymphotrope de type-1 (HTLV-I) est lié à plusieurs pathologies humaines comme la Leucémie T de l'adulte et la paraparésie spastique tropicale ou myélopathie associée à HTLV-1 (TSP/HAM). L'activation de la voie NF-KB par l'oncoprotéine virale Tax joue un rôle clé dans l'induction et le maintien de la prolifération cellulaire ainsi que l'inhibition de l'apoptose. Les modifications post-traductionnelles de Tax par Pubiquitylation et la SUMOylation sont impliquées dans l'activation de la voie NF-KB, mais les mécanismes moléculaires qui gouvernent cette activation restent assez mal compris. Nous avons montré que Tax ubiquitylée n'est pas associée avec l'IKK active dans le cytoplasme mais qu'elle se lie avec les trois sous-unités d'IKK et les cible dans le centrosome. En fait Tax est différentiellement ubiquitylée : Tax ubiquitylée avec des chaînes K-48 est destinée à la dégradation par le protéasome et est ainsi stabilisée en présence de l'inhibiteur du protéasome PS-341, alors que Tax ubiquitylée avec des chaînes K-63 se localise dans le centrosome avec IKK-y, puis recrute IKK-α et IKK-β. Le centrosome constitue ainsi la plateforme d'interaction entre Tax et IKK. Nous avons également montré que la même molécule de Tax fait le trafic entre des corps nucléaires Ubc9 et le centrosome. En fait, Pubiquitylation de Tax cible Tax et NEMO dans des corps Ubc9 riches en SUMO. Par ailleurs, Tax induit la SUMOylation et le ciblage nucléaire de NEMO. En somme, nous avons montré que Pubiquitylation et la SUMOylation de Tax contrôlent le trafic bidirectionnel et dynamique de Tax et NEMO entre les corps nucléaires Ubc9 et le centrosomeThe human T-lymphotropic virus type-1 (HTLV-I) is associated with several human pathologies such as adult T-cell leukemia/lymphoma and tropical spastic paraparesis/HTLV-I associated myelopathy. NF-Kβ activation by the viral oncoprotein Tax plays a crucial role in the induction and maintenance of cellular proliferation and inhibition of apoptosis. Tax post-translational modification by ubiquitylation and SUMOylation is involved in NF-KB activation but the molecular mechanisms underlying this activation remain unclear. We showed that ubiquitylated Tax does not interact with active IKK in the cytoplasm but binds the three IKK subunits and targets them to the centrosome. Actually, Tax is differentially ubiquitylated: K-48 ubiquitylated Tax is destined for proteasomal degradation and is stabilized upon treatment with the proteasome inhibitor PS-341. On the other hand, K-63 ubiquitylated Tax colocalizes with IKK-y in the centrosome where IKK-α and IKK-β are also recruited. Hence, the centrosome represents the platform for Tax/IKK interaction. We also showed that the same Tax molecules shuttle between Ubc9 nuclear bodies and the centrosome. Indeed, Tax ubiquitylation targets Tax and NEMO into Ubc9- and SUMO- rich nuclear bodies. Moreover, Tax induces NEMO SUMOylation and accumulation in the nuclear fraction. In conclusion, Tax ubiquitylation and SUMOylation control the bidirectional and dynamic trafficking of Tax and NEMO between the Ubc9 nuclear bodies and the centrosome
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Poalas, Konstantinos. "Ubiquitinylation and deubiquitinylation in the regulation of the transcription factor NF-kB activation." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00926894.
Full textAbstract:
Large signalosome assembly is a prerequisite for NF-κB signaling upon engagement of various immunoreceptors. Adaptor proteins containing protein-protein interaction domains oligomerise in response to such stimuli in order to propagate signaling. Each immunoreceptor uses distinct adaptors, as well as common ones, to achieve that. The main characteristic shared by these proteins is their ability to undergo poly-ubiquitinylation in a non-degradative manner, leading to optimal NF-κB activation. In this work, we aimed to identify novel deubiquitinylating enzymes that control ubiquitinylation status. That is how USP34 came up to be a negative regulator of NF-κB signaling in TCR-activated Jurkat cells, a T lymphocyte cell line. Our data suggest a model whereby USP34 prevents excessive NF-κB activation by acting rather late, directly or indirectly on the NF-κB:IκBα dimers, downstream of IKK, altering transcription factor DNA binding affinity. In parallel, studies of the endocellular membrane microenvironment that hosts mature signalosomes in response to TCR-, TNFR- and CD40 ligation led to the identification of an ER-residing protein, Metadherin (MTDH), which seems to globally integrate signaling before forwarding it to downstream pathway components able to activate IKK.
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Roy, Evelyne. "Modulation de la réponse inflammatoire intestinale par la kinase DNA-PK." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2007. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3931.
Full textAbstract:
Des résultats obtenus antérieurement au laboratoire ont démontré l'induction des facteurs de transcription C/EBPs par l'IL-1? ainsi que leur implication dans la régulation de la transcription de gènes de réponse inflammatoire telle que l'haptoglobine au niveau de la cellule épithéliale intestinale. En outre, il a déjà été démontré que la phosphoiylation des C/EBPs peut moduler leur activité et des études au laboratoire ont démontré l'interaction in vitro entre l'isoforme C/EBP? et la kinase DNA-PK. Par l'utilisation de l'inhibiteur non spécifique de la famille PI(3)K, la wortmannine, il a été observé que la DNA-PK phosphoryle C/EBP?. La DNA-PK est une kinase qui répare les bris d'ADN double brin en participant au processus de jonction des extrémités non-homologues. Ainsi, nous avons étudié la modulation de la réponse inflammatoire intestinale par la DNA-PK, en s'attardant plus particulièrement à deux familles de facteurs de transcription, soit NF-?B et les C/EBPs. Par l'utilisation d'un inhibiteur sélectif de la DNA-PK, le IC60211, la phosphorylation in vitro de la région N-terminale de C/EBP? par la DNA-PK a d'abord été confirmé. Puisque la DNA-PK est activée par les bris d'ADN double brin, la doxorubicine, un agent génotoxique, a été utilisé pour la suite du projet. Nous avons montré que la doxorubicine engendre une hausse de la capacité de liaison à l'ADN de NF-?B induite par l'IL-1? et que les complexes formés comprenaient surtout la sousunité p65. Ceci s'accompagne d'une hausse des niveaux nucléaires de p65 ainsi que d'une baisse d'expression de l'inhibiteur cytoplasmique de NF-?B, I?B?. Par contre, par l'utilisation de l'inhibiteur sélectif de la DNA-PK, le NU7026, nos résultats suggèrent que ces effets sont DNA-PK indépendants. En effet, un rétablissement de la capacité de liaison à l'ADN de NF-?B n'est pas observé lors d'une préincubation avec cet inhibiteur avant de traiter à la doxorubicine puis à l'IL-1?. En ce qui concerne les C/EBPs, nos résultats démontrent que la doxorubicine diminue l'activité transcriptionnelle de l'isoforme C/EBP? sur le promoteur du gène haptoglobine. Alors qu'un traitement à l'IL-1? induit une augmentation de la liaison des C/EBPs à HaptoA, nos résultats montrent qu'un pré-traitement à la doxorubicine empêche cette induction. De plus, les niveaux protéiques de C/EBP? et C/EBP? induits par l'IL-1? sont abaissés par la doxorubicine. Également, les niveaux d'ARNm de C/EBP? induits par l'IL-1 p et de deux de ses gènes cibles inflammatoires, l'haptoglobine et lipocalin2, sont diminués par un prétraitement à la doxorubicine. Par l'utilisation du NU7026, nous démontrons un rétablissement partiel de la capacité de liaison à l'ADN de C/EB13? et de C/EBP? qui était réduite par un traitement à la doxorubicine, à des niveaux comparables à la condition sans traitement et à la condition IL-1?, respectivement. Cependant, cet inhibiteur permet le rétablissement des niveaux de protéine et d'ARNm de C/EBP? (induits par l'IL-1?) qui étaient réprimés par un prétraitement à la doxorubicine mais non des niveaux protéiques de C/EBP?. Nos résultats suggèrent que la DNA-PK régule, au moins partiellement, la transcription de l'isoforme C/EBP? ainsi que son activité transcriptionnelle sur le promoteur de l'haptoglobine. Par contre, nos résultats suggèrent aussi que la DNA-PK module la capacité de liaison à l'ADN de C/EBP? et que l'effondrement des niveaux protéiques de C/EBP? par la doxorubicine est DNA-PK indépendant. [Symboles non conformes]
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Busuttil, Valère. "Etude du rôle du facteur de transcription NF-KB dans la régulation de la balance entre survie et apoptose cellulaires." Nice, 2001. http://www.theses.fr/2001NICE5674.
Full textAbstract:
L'activation de NF-kB permet aux cellules de mettre en place rapidement une réponse adaptée, sous la forme d'expression génique, face à des situations physiologiques. NF-kB joue un rôle crucial dans la réponse immune et inflammatoire, la survie. NF-kB est séquestré dans le cytoplasme par une protéine inhibitrice de la famille IkB. En réponse à divers stimuli, l'inhibiteur IkB est phosphorylé sur deux sérines N-ter par le complexe kinase IKK, le ciblant pour une dégradation in situ par le protéasome. NF-kB libéré entre dans le noyau et active de nombreux gènes. Une voie alternative libérant NF-kB et mettant en jeu la phosphorylation sur tyrosine sans dégradation de l'inhibiteur a été montrée au laboratoire. J'ai participé à la caractérisation de la phosphorylation d'IkB-a sur la tyrosine 42. Les kinases Lck et ZAP70 sont des éléments clés dans la voie d'activation de NF-kB dépendante de la phosphorylation d'IkB-a sur tyrosine. De plus, l'H2O2, qui active les kinases Lck et ZAP70, est un puissant activateur de NF-kB après phosphorylation sur tyrosine d'IkB-a. Mes principaux travaux ont consisté en l'étude du rôle de NF-kB dans la régulation de la vie et de la mort cellulaires. Nous avons montré que le PMA bloque l'apoptose induite par Fas via l'activation de NF-kB. Nous avons observé que le PMA induisait l'expression de différents gènes anti-apoptotiques dépendants de NF-kB. De plus, en absence d'activation de NF-kB, le PMA devient un composé apoptotique et active les caspases 8 et 9 ainsi que la caspase 3. Enfin, j'ai participé à l'étude de l'activation de NF-kB suite à la production de dommages à l'ADN induits par des poisons de topoisomérases. Nous avons mis en évidence la participation du complexe IKK et observé l'expression de différents gènes impliqués dans la balance entre survie et mort cellulaires. En conclusion, le but de ce travail a été d'étudier la survie cellulaire sous le contrôle du facteur de transcription NF-kB et les gènes responsables de cet effetThe transcription factor NF-kB regulates a wide set of genes involved in the establishment of many cellular processes that control cell activation and survival. NF-kB is maintained inactive by inhibitory subunit of the IkB family such as IkB-α. IkB- α interacts with NF-kB masking nuclear localization signals on the transcription factor. The release of transcriptionally competent NF-kB dimers is achieved after serine phosphorylation-induced degradation of IkB- α molecules. In my thesis works, I firstly participated in the characterization of IkB- α phosphorylation on Tyrosine 42. We have shown that the p56Lck and ZAP-70 tyrosine kinases are key components in this new signaling pathway that leads to phosphotyrosine-dependent NF-kB activation. We also show that H2O2 which stimulates p56Lck and ZAP-70 in T cells is an activator of NF-kB through tyrosine phospholylation of IkB- α. My principal research focuses on the regulation of cell life and death by NF-kB. We have shown that the tumor promoter PMA prevents Fas-induced apoptosis vua activation of NF-kB. In an RNAse Protection Assay, we observe that PMA induced the NF-kB-dependent expression of several anti-apoptotic genes. Moreover, we demonstrate that in the absence of NF-kB activation, PMA becomes a strong inducer of apoptosis through stimulation of the upstream caspases 8 and9 as well as of the effector caspases 3. Finally, I have participated in the study of the signaling pathway that leads to NF-kB activation after induction of DNA damage by topoisomerase poisons. This allowed me to study the participation of IkB Kinase complex in this pathway and the signals that come out from the nucleus to stimulate this complex. As a follow up to this project, I am investigating the effect of NF-kB on cell survival via the expression of survival genes. In conclusion, this work confirms and extends previous data demonstrating that NF-kB plays an important role in the modulation of apoptosis
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Mercié, Patrick. "Etude de l'activation du NF-kB et de l'induction de l'apoptose dans les cellules endothéliales vasculaires : effet de l'homocystéine." Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28768.
Full text
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LI, XIAOYAN. "Purification et clonage du facteur de transcription nf-y." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1992. http://www.theses.fr/1992STR13017.
Full textAbstract:
Nf-y est une proteine critique pour l'expression des genes eucariotiques. Nous avons purifie les sous-unites a et b de cette proteine; et en utilisant les techniques de microsequences et de pcr, nous avons clone les adnc correspondants. Nf-ya et nf-yb presentent des reghions d'homologie avec les facteurs de transcription hap2 et hap3 de la levure. Cependant, a l'oppose de ces proteines, les deux sous-unites murines sont necessaires et suffisantes pour la fixation sur une sequence caat (et l'activation transcriptionnelle). Les genes correspondant ne sont pas lies au niveau du genome. Nf-ya est situe sur le chromosome 6 chez l'homme et sur le chromosome 12 chez la souris; nf-yb est localise sur les chromosomes 12 et 10 respectivement. L'organisation genomique de ces genes permet de mieux comprendre l'organisation fonctionnelle des proteines. Nous avons egalement mis en evidence l'existence d'isoformes resultant d'epissage alternatif du a la specificite cellulaire. Ces variations n'influencent pas la liaison a l'adn ou les interactions entre sous-unites; car la region alternative est situee dans le domaine d'activation riche en glutamine. Nous avons egalement essaye de cloner nf-y a partir de differentes especes afin de poursuivre son histoire evolutive; et par comparaison des sequences conservees, d'identifier les domaines probablement importants
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Sors, Aurore. "Implication du facteur de transcription NF-kB dans la résistance à l'apoptose des cellules de lymphomes T cutanés épidermotropes : modulation pharmacologique." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077164.
Full textAbstract:
Les cellules de lymphomes T cutanés épidermotropes (LTC) sont résistantes à Papoptose induite par les agents chitniothérapiques. Afin d'élucider les mécanismes moléculaires de cette résstance, nous avons focalisé notre recherche sur l'implication du facteur de transcription NF-kB dans ce processus NF-kB p50/p65 se trouve normalementà l'état basai sous forme inactive dans le cytoplasme, séquestré par la protéine IkB. En réponse à de nombreux stimuli, le complexe IKK, composé d'IKKl, IKK2 et NEMO, est activé et phosphoryle IkB, induisant sa polyubiquitination et sa dégradation par le protéasome. NF-kB ainsi libéré transloque au noyau pour réguler la transcription de gènes impliqués notamment dans la régulation de la réponse apoptolique. Nous avons démontré que les lignées de LTC et les lymphocytes tumoraux de patients présentent une activation constitutive de NF-kB. Impliquée dans la résistance à l'apoptose de ces cellules. Nous avons montré que des inhibiteurs du protéasome, tel que le bortezomib, aiisi que des molécules pharmacologiques qui bloquent très spécifiquement Tactivation du complexe IKK (inhibiteur d'IKK2 (AS602868) et peptides inhibiteurs de NEMO) inhibent la translocation nucléaire constitutive de NF-kB et induisent l'apoptose des cellules de LTC. L'AS602868 potentialise en outre la réponse apoptotique de drogues chimiothérapiques telle que VP16. Ces résultats permettent d'ouvrir de nouvelles perspectives de thérapie dans les LTC par l'utilisation d'inhibiteurs de la voie NF-kBTumor cells from cutaneous T cell lymphoma (CTCL) are resistant to apoptosis induced by chemotherapeutic agents. In order to elucidate the molecule mechanisms of this resistance, we investigated the involvement of the NF-kB transcription factor in this process. Under normal conditions, p50/p65 NF kB is sequestered in an inactive stateby the IkB molecule in the cytoplasm. In response to a variety of stimuli, the complex IKK, composed of IKKI IKK2 and NEMO, is activated and phosphorylates IkB molecule, triggering the irubiquitination and degradation by the proteasome. NF-kB translocate; to the nucleus to regulate expression of target genes involved inapoptosis control. We demonstratedthat NF-kB is constitutively activated in CTCL cel lines and in tumor cells from CTCL patients and plays a key role in their survival and chemoresistance. We showed that inhibitors of the proteasome, such as bortezomib, and specific pharmacological inhibitors of the IKK complex (IKK2 inhibitor (AS602868) and inhibitory peptides of NEMO) down regulate the constitutive nuclear translocation of NF-kB and induce apotent apoptotic response in CTCL cells. Moreover, AS602868 potentiates the apoptotic effects of chemotherapeutic drugs such as VP16. These results indicate that pharmacologie inhibition of the NF-kB pathway may be an interesting, innovating approach for the treatment of CTCL
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Ettou, Sandrine. "Régulation épigénétique de l'expression de FAS au cours de l'évolution des syndromes Myélodysplasiques en Leucémie aigue myéloblastique : implication de NF -kB." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077138.
Full textAbstract:
Les syndromes myélodysplasiques (SMD) sont des maladies clonales de la cellule souche hématopoïétique. Ils évoluent du stade de SMD de faible risque (SMD-FR) caractérisé par une apoptose excessive liée à une expression anormalement élevée du récepteur à domaine de mort Pas, vers le stade de SMD de haut risque (SMD-HR) ou de leucémie aiguë secondaire (LAMII) caractérisé par une expression diminuée de Pas. Ce travail de thèse a permis de montrer une régulation épigénétique de l'expression du gène PAS au cours de l'évolution des SMD en LAMII et l'implication du facteur de transcription NF-KB. Nous avons montré que la surexpression de Pas dans les SMD est corrélée à une déméthylation de l'ADN. Au stade leucémique, l'ADN est méthylé comme dans les cellules normales et la chromatine se trouve dans un état condensé avec un enrichissement des marques de répression transcriptionnelle. Le traitement par la 5-azacytidine, un agent déméthylant, permet une réexpression de Pas, associée à une déméthylation de l'ADN et un enrichissement des marques d'activation transcriptionnelle. Cette réexpression est corrélée avec la réponse clinique au traitement. Nous avons observé une sensibilité des blastes à l'apoptose dépendante de Pas induite par une stimulation des cellules par un anticorps agoniste de Pas, le CH11. De plus, l'absence de Pas à la surface des blastes au diagnostic est un facteur prédictif favorable de la réponse au traitement. Enfin, nous avons également mis en évidence, dans les cellules myéloïdes, une régulation transcriptionnelle de PAS par NF-KB, dont le recrutement semble être dépendant de l'accessibilité de la chromatineMyelodysplasic syndromes are heterogeneous diseases of hematopoietic stem cell. Low-risk MDS (LR-MDS) characterized by an excessive apoptosis and high Pas expression, evolve to high-risk MDS (HR-MDS) and acute myeloid leukemia (AML) characterized by a low Pas expression. This study shows an epigenetic regulation of PAS during disease evolution and the implication of NF-KB. We demonstrated that Pas overexpression is correlated with a DNA demethylation. As controls, PAS promoter in AML is methylated and enriched in repressive chromatin marks. Treatment with azacitidine induces Pas reactivation associated with DNA demethylation and open chromatin state. Increased Pas expression is correlated with the response to treatment. We observed also a sensitivity of blasts to Fas-dependent apoptosis after stimulation with CHU, an agonist to Fas. Moreover, low fas expression on progenitor cells at diagnostic, is associated with a berter response to azacitidine. In myeloid cells, Fas is transcriptionally regulated by NF-KB, which recruitment depends on chromatin accessibility
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Ben, Abdallah Mariem. "Manipulation NF-kB dépendante de la prolifération et de la mort cellulaire des macrophages par la levure Cryptococcus neoformans." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066617.
Full textAbstract:
Le facteur de transcription NF-B contrôle l’expression d’un grand nombre de gènes cibles impliqués dans la réponse immunitaire, dans l’inflammation, mais aussi dans le contrôle de la prolifération et de la mort cellulaire. Cryptococcus neoformans est une levure ubiquitaire encapsulée responsable de méningo-encéphalite grave principalement chez les individus immunodéprimés. Les macrophages jouent un rôle central dans la physiopathologie de la cryptococcose. De nombreux progrès ont été réalisés dans l’étude des facteurs de virulence de cette levure, mais la réponse des cellules macrophagiques elles-mêmes à l’infection par la levure entière est moins bien explorée. Mon travail met en évidence de nouvelles stratégies adoptées par C. Neoformans pour échapper à la réponse de ces cellules. Dans les macrophages, l’infection par C. Neoformans conduit à l’activation du facteur de transcription NF-κB à la fois par les voies classique et alternative. Cette infection provoque en outre une diminution de la viabilité des macrophages qui reflète à la fois une forte réduction de la prolifération cellulaire et une induction de l’apoptose. L’effet sur la prolifération cellulaire résulte de la modification de l’expression de plusieurs régulateurs du cycle cellulaire ce qui entraîne une perturbation de la division cellulaire et une aneuploïdie, phénomène décrit pour la première fois pour un pathogène fongique. Par ailleurs, l’apoptose induite par C. Neoformans passe par les voies intrinsèque et extrinsèque de mort cellulaire. De façon intéressante, l’inhibition de la prolifération d’une part et l’induction d’apoptose d’autre part impliquent un rôle précis et différent des deux voies d’activation de NF-B dans les macrophages. Ces données contribuent à la compréhension des stratégies mises en place par C. Neoformans pour échapper au système immunitaire et ouvrent de nouvelles voies de recherche à visée thérapeutique pour lutter contre ce pathogène
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Latreche-Carton, Céline. "Rôle oncogénique des fragments de p65/RelA Nf-kB générés par l'activité de RIPK3." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S048/document.
Full textAbstract:
L'utilisation d'un agent déméthylant induit la réexpression de la protéine RIP3, une sérine-thréonine kinase, dans un modèle leucémique murin exprimant BCR-ABL humain. La réexpression de RIP3 conduit rapidement les cellules vers la nécroptose. Le mutant délété du domaine kinase est de façon surprenante plus "apoptogène" et induit le clivage de p65/RelA sur le résidu d'acide aspartique D361 par la caspase 6. Pour déterminer l'impact de ce clivage, nous avons construit un mutant non clivable p65/RelA D361E, ainsi que des plasmides exprimant chacun des fragments p65/RelA 1-361 ou p65/RelA 362-549, ou un plasmide exprimant simultanément p65/RelA 1-361 + p65/RelA 362-549. Ces différents plasmides codant pour les différentes formes de la protéine p65/RelA sont incorporés par transfection dans les cellules leucémiques ou de mélanome pour lesquels le gène RIP3 est respectivement méthylé ou exprimé. In vivo, nous mettons en évidence une différence de tumorigénicité entre les deux modèles. Elle est accrue par la présence de p65/RelA D361E par rapport à celle de p65/RelA WT et de p65/RelA 1-361 + p65/RelA 362-549 dans le modèle leucémique. Elle est au contraire faible dans le modèle du mélanome pour lequel la surexpression des fragments p65/RelA 1-361 +362-549 induit la tumorigenèse la plus forte. L'agressivité du mutant non clivable in vivo n'est pas corrélée à l'activité de NF-kB mesurée in vitro. Les fragments comme le mutant p65/RelA D361E induisent des profils d'expression différents dans le modèle murin de leucémie avec la modulation notable d'expression génique de la famille d'inhibiteurs de protéases à cystéine Stefins, ainsi que le transporteur de bicarbonate de sodium SLC4A5 qui joue un rôle majeur dans la régulation du pH intracellulaire. Le mutant p65/RelA D361E induit une expression importante du transporteur de bicarbonate de sodium SLC4A5 dans le modèle leucémique responsable de l'augmentation du pH intracellulaire qui participe au développement tumoral. Par contre, ce sont les deux fragments p65/RelA 1-361 + p65/RelA 362-549 qui induisent simultanément une expression plus forte de la molécule d'immunoéchappement PDL1, vraisemblablement par un mécanisme post-traductionnel. L'étude de la "souchitude" des modèles montre une différence d'activité du mutant p65/RelA D361E selon le modèle. On observe une augmentation de l'activité ALDH dans le modèle leucémique et une diminution de la formation de sphères dans le modèle de mélanome. En conclusion, ces résultats indiquent que les fragments issus du clivage de p65/RelA par l'activité de RIP3 indépendante de la kinase possèdent un rôle différent de celui de la forme sauvage sur la souchitude des cellules cancéreuses, et qu'elle dépend du modèle étudié. Ils confirment que le mutant non clivable possède la plus forte activité tumorigénique. Ils laissent également supposer que les fragments Nter et Cter puissent avoir une activité dans des cellules tumorales possédant une protéine RIP3 fonctionnelle et active, probablement par des mécanismes inflammatoires ou autres qui doivent être caractérisésThe receptor-interacting protein kinase 3 (RIPK3) can induce necroptosis, apoptosis, or cell proliferation, and is silenced in several hematological malignancies. We previously reported that RIPK3 activity independent of its kinase domain induces p65/RelA caspase-mediated cleavage resulting in N-terminal 1-362 and C-terminal 362-549 fragments. We show here that a non-cleavable p65/RelA D361E mutant expressed in DA1-3b leukemia cells decrease mouse survival and that coexpressed p65/RelA fragments increase tumoriginicty of B16/F1 melanoma cells that did not correlated with in vitro measured Nf-kB activity. Fragments and p65/RelA fragments display different expression profiles in DA1-3b leukemic cells, with the notable modulation of gene expression of the Stefin cysteine protease inhibitor family and of SLC4A5, a Na+-coupled HCO−3 transporter. DA1-3b cells expressing p65/RelA D361E mutant showed more basic intracellular pH. p65/RelA fragments induced ovexpression of PD-L1 immunoescape molecule in DA1-3b cells. Markers of stemness were also affected: p65/RelA D361E induced increased ALDH activity in DA1-3b cells and fragments expression resulted in increased melanoma sphere formation in B16/F1 cells. Thus, far from being neutral, p65/RelA cleavage initiated by kinase independent activity of RIPK3 induced a pleiotropic range of effects in vitro and in vivo in cancer cells, that may vary across tumor types
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Livolsi, Antonia. "Caractérisation d'un mécanisme d'activation alternatif du facteur de transcription NF-kB utilisant la phosphorylation sur tyrosine de la sous-unité inhibitrice IkB-α." Nice, 2001. http://www.theses.fr/2001NICE5613.
Full textAbstract:
Le facteur de transcription NF-kB est impliqué dans la régulation de nombreux gènes essentiels aux réponses immune, inflammatoire, proliférative et apoptique. NF-kB est retenu inactif dans le cytosol par interaction avec une protéine inhibitrice IkB. En réponse au stimulus, IkB est phosphorylé sur deux sérines N-terminales puis dégradé par le protéasome, libérant NF-kB vers le noyau. Nous avons montré l’existence, dans les lymphocytes T, d’un mécanisme alternatif d’activation de NF-kB utilisant la phosphorylation sur tyrosine d’IkB-α pour induire la dissociation des complexes NF-kB/IkB. Les PTK Lck et ZAP-70 sont impliquées dans la phosphorylation sur les tyrosines 42 et 305 d’IkB-α et l’activation de NF-kB en réponse au percanadate (inhibiteur de PTP). Contrairement à la phosphorylation sur sérine d’IkB-α, celle sur tyrosine n’entraîne pas la dégradation de l’inhibiteur. L’interaction d’IkB-α phosphorylé avec une (des) protéine (s) à domaine SH2 participerait à la dissociation des complexes NF-kB/ IkB-α. Nous avons montré que la réoxygénation ou la stimulation par H2O2 des cellules Jurkat induit la phosphorylation sur tyrosine d’IkB-α. Cette réaction a été aussi observée dans des conditions d’ischémie/reperfusion du foie et du cœur ou d’irradiation X d’astrocytes, suggérant que les ROIs sont impliqués dans ce nouveau mécanisme d’activation de NF-kB. La stimulation des récepteurs de surface comme le TNF-R1 dans les macrophages de moelle osseuse ou le NGF-R dans les neurones induit également la voie pTyr-dépendante. En conclusion, nous avons contribué à la caractérisation des mécanismes moléculaires qui contrôlent l’activité du facteur NF-kB, dont la dérégulation est associée à de nombreuses pathologies (inflammation chronique, cancers, maladies neurodégénératives). La compréhension de ces mécanismes permettra à terme de concevoir des inhibiteurs spécifiques pour améliorer le traitement de ces maladiesNF-kB transcription factor is involved in the regulation of several genes essential for immune, inflammatory, proliferative and apoptic responses. NF-kB is sequestered in the cytosol by the inhibitory subunit IkB. Following simulation, IKB is phosphorylated on two N-terminal serines then degraded by the 26S proteasome, allowing NF-kB nuclear translocation. In this work, we revealed an alternative mechanism of NF-kB activation in T lymphocytes, using tyrosine phosphorylation of IkB-α induce association of NF-kB/IkB complexes. We showed that Lck t and ZAP-70 tyrosine kinases are involved in the phosphorylation of tyrosines 42 and 305 of IkB-α and NF-kB activation by pervanadate (an inhibitor of tyrosine phosphatases). By contrast to serine phosphorylation, tyrosine phosphorylation of IkB-α does not lead to its degradation. Interaction of phosphorylated IkB-α with SH2 domain-containing proteins may participate to the dissociation of NF-kB/ IkB-α complexes. We showed that reoxygenation or H2O2 stimulation of Jurkat cells induce tyrosine phosphorylation of IkB-α. This reaction is also observed in the case of ischemia/reperfusion of the liver and the heart or X-rays irradiation of astrocytes, suggesting that ROIs are involved in this new pathway of NF-kB activation. Engagement of surface receptors such as TNF-R1 in bone marrow macrophages or NGF-R in neurons also induces the pTyr-dependent pathways. In conclusion, we contributed to the characterization of the molecular mechanisms that control NF-kB activity, whose dysregulation is associated to diverse pathologies (chronic inflammation, cancers, and neurodegenerative diseases). Understanding these mechanisms will allow in fine to design specific inhibitors to improve the treatment of these diseases
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Sunami, Yoshiaki. "Molecular analysis of the non-canonical NF-kappaB pathway." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2006. http://www.theses.fr/2006STR13177.
Full textAbstract:
On a montré ici que les voies canonique/non-canonique de NF-B ne sont pas indépendantes et qu’un rôle principal de la voie canonique est l’activation des acteurs de la voie non-canonique. La traduction est requise et la stimulation par LPS régule positivement un éventuel intermédiaire dans la signalisation par LPS/CD40 qui supporte l'activation de la voie non-canonique. De plus, la voie non-canonique est constitutivement activée dans les cellules de HL, impliquant la phosphorylation persistante de p100. L'activation transitoire et constitutive de la voie non-canonique implique l'incorporation de p100 et p52 dans un complexe « megadalton ». TAP a permis d’identifier des partenaires interagissant avec p100. EDD (une molécule identifiée) induit le processing de p100 par co-expression. La formation du complexe de TRAF3 (autre facteur identifié) avec p100 est médiée par NIK et requiert son activité kinase. L'expression de NIK favorise le recrutement de TRAF3/p100 au signalosome p100It is shown here that the canonical/non-canonical NF-B pathways are not independent and a master regulatory role of the canonical pathway is to upregulate activators of the non-canonical pathway. The data further implicate a translation requirement and that LPS stimulation upregulates a potential intermediate in LPS/CD40 signaling which supports activation of the non-canonical pathway. Further, the non-canonical pathway is constitutively activated in HL cells, involving persistent p100 phosphorylation. It was found that transient and constitutive activation of the non-canonical pathway involves incorporation of p100 and p52 into a megadalton complex. TAP was employed to identify novel p100 interacting partners. EDD (an identified molecule) induces processing of p100 upon co-expression. The complex formation of TRAF3 (another p100 interactor) with p100 is mediated by NIK and requires its kinase activity. The expression of NIK promotes recruitment of TRAF3/p100 to the p100 signalosome
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Gautheron, Jérémie Francis Alexis. "Les processus d’ubiquitination dans la voie de signalisation NF-kB et leurs dérèglements en pathologie." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T052.
Full textAbstract:
La voie de signalisation NF-kB joue un rôle essentiel dans l’inflammation, la réponse immunitaire et la protection contre l’apoptose. Son activation est contrôlée par la kinase IKK, composée de deux sous-unités catalytiques (IKK1/IKK2) et d’une sous-unité régulatrice, NEMO. Il a été montré que des processus d’ubiquitination complexes encore mal compris régulent l’activité d’IKK et impliquent notamment NEMO. Dans ce travail nous avons essayé de mieux définir le rôle de l’ubiquitination de NEMO dans le processus d’activation d’IKK et comment il est contrôlé par l’E3 ligase TRAF6. Une analyse moléculaire de mutations de NEMO causant la maladie génétique Incontinentia Pigmenti (IP) a été entreprise. Elle a permis de définir les domaines d’interaction entre NEMO et TRAF6, de progresser dans la compréhension des défauts caractérisant IP et, en exploitant les données concernant l’interface NEMO/TRAF6, de proposer une nouvelle stratégie pour agir sur le processus d’activation de NF-kBThe NF-kB signaling pathway plays a key role in inflammation, immune response and protection against apoptosis. Its activity is controled by IKK, a kinase complex which is composed of two catalytic subunits (IKK1/IKK2) and one regulatory subunit (NEMO). It has been reported that intricate ubiquitination processes, still poorly defined, regulate the activity of IKK and involve NEMO. During this work, we have tried to define in more details the role of NEMO ubiquitination in the activation process of IKK and how it is controled by the E3 ubiquitin ligase TRAF6. A molecular analysis of NEMO mutations causing the genetic disease Incontinentia Pigmenti (IP) has been carried out. This has allowed us to identify the interaction domains between NEMO and TRAF6, to get insights into the defects causing IP and, exploiting the data concerning the NEMO/TRAF6 interface, to propose a new strategy to modulate the NF-kB activation process
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Puschmann, Andreas J. "Characterisation of the functional role of the inducible transcription factor nuclear factor kappa-B (NF-kB) [NF-kappa-B] in isolated rat parietal cells." [S.l.] : [s.n.], 2003. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=968918727.
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Kumar, Sunny. "Signatures moléculaires neuronales et effets de withanolides inhibiteurs de NF-kB chez des modèles de souris de la SLA et de démence fronto-temporale." Doctoral thesis, Université Laval, 2021. http://hdl.handle.net/20.500.11794/69127.
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Zhang, Ke. "Un microRNA dérivé de la séquence TAR du VIH-1 augmente l'expression des gènes viraux en activant le facteur de transcription cellulaire NF-kB." Thesis, Montpellier 1, 2013. http://www.theses.fr/2013MON13504.
Full textAbstract:
L'ARN d'interférence (ARNi) est un mécanisme de régulation du gène qui permet un ciblage spécifique d'ARNmessager (ARNm) par reconnaissance de séquence. Les effecteurs de l'ARNi sont de petites molécules d'ARN non codants (siARN, microARN et piARN). Evoluant dans le contexte de l'ARNi, les virus de différentes familles ont adopté des stratégies afin utiliser l'ARNipour leur propre bénéfice. Le principal objectif de ma thèse a été d'étudier la fonction de l' ARNmiRTAR, un miARN viral dérivé de l'extrémité 3 'de l'ARN VIH-1 TAR dans la réplication du VIH-1. Nous avons constaté que miRTAR réguleà la fois l'activité basale et la transactivation induite par Tat du promoteur du VIH-1. L'effet de miRTAR ne nécessite pas de sa liaison à l'ARN TAR. miRTAR agit en augmentant l'activité de NF-kB, un facteur important pour la transcription du promoteur du VIH-1. En effet, la mutation des sites NF-kB, mais pas des sites Sp1 dans le LTR, abroge l'amélioration miRTARmédiée par la transcription. De plus, l'inhibition de l'expression de NF-kBpardes siARNspécifiquesdes les sous-unités p50 et p65, entraîne une perte d'activité dumiRTAR. Bien que nous n'avons pas pu identifier le(s) gène(s) cellulaire(s) ciblé par miRTAR, sa surexpression conduit à l'activation de la voie NF-kB. Mutation de l'extrémité 3 'du VIH-1 dans les résultats TAR réduction spectaculaire de la réplication virale Tat sans affecter médiée par la transcription, en raison de la perte de production de miRTARsauvage. Enfin, la surexpression de miRTARrestaure la réplication de ce virus contenant une mutation au niveau de la séquence TAR. En conclusion, nos résultats démontrent clairement que lemiRTARencodé par le VIH-1 joue un rôle clé dans la réplication du virus. Sur la base de ces résultats, nous proposons le modèle suivant pour la fonction de miRTAR. La transcription du LTR du VIH-1 conduit à la production de courts ARN dénommés TAR contenant une structure en épingle à cheveux. TAR est « processé » pour générer le miARN miRTAR. L'ARN miRTAR est ensuite chargé dans le complexe RISC et régule l'expression de plusieurs gènes cellulaires impliqués dans la régulation négative de NF-kB. miRTARmédiée par l'activation de NF-kB résultats dans la régulation de gènes viraux et par conséquent augmente la production de virus. L'ensemble de nos résultats montrent que le VIH-1 utilise la voie de l'ARNiinterférence pour optimiser l'environnement intracellulaire requis pour une réplication optimaleRNA interference (RNAi) is a gene regulatory mechanism that offers a sequence specific targeting of mRNA. Evolving in the context of RNAi, viruses of different families adopted strategies to use RNAi for their benefit. The main objective of my thesis was to understand the function of miRTAR, a viral miRNA derived from 3' end of the HIV-1 TAR RNA, in HIV-1 replication. We found that miRTAR regulates both basal and Tat-mediated transactivation of HIV-1 promoter. The effect of miRTAR does not require its binding to TAR RNA. miRTAR acts by inducing NF-κB transcription factor important for the LTR activity. Indeed, mutation of NF-κB sites but not Sp1 sites within the LTR abrogate miRTAR-mediated enhancement of transcription from the LTR. Additionally, Inhibition of NF-κB using specific siRNA directed against p50 and p65 subunits results in loss of miRTAR activity. Although, we were unable to identify the cellular gene(s) targeted by miRTAR, its overexpression lead to the activation of NF-κB pathway. Mutation of the 3' end of HIV-1 TAR results in dramatic reduction of viral replication without affecting Tat-mediated transcription. Importantly, overexpression of miRTAR rescued the replication of miRTAR HIV-1 mutant virus.In conclusion, our results strongly demonstrate that the HIV-1 encoded miRTAR plays a key role in virus replication. On the basis of these findings, we propose the following model for the function of miRTAR. Transcription of the HIV-1 LTR leads to production of short, TAR containing, RNA hairpin sequences. TAR is processed to generate miRNA, miRTAR. miRTAR is then loaded into the RISC complex and regulates the expression of several cellular genes involved in the negative regulation of NF-κB. miRTAR-mediated activation of NF-κB results in up regulation of viral genes and consequently enhances virus production. Taken together, our results demonstrate that HIV-1 uses RNAi pathway to optimize the intracellular environment for optimal replication
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Cammarata-Mouchtouris, Alexandre. "Régulation des voies NF-KB au cours de la réponse immunitaire innée." Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ118.
Full textAbstract:
Le système immunitaire inné est un mécanisme de défense commun à tous les métazoaires. Son activation peut être délétère lorsqu'elle est incontrôlée. L'étude des mécanismes qui sous-tendent cet équilibre entre l'activation ou non de la réponse immunitaire innée est à la base de mes travaux de thèse. La similarité entre les voies moléculaires - comme la voie NF-KB - relayant la réponse immunitaire innée chez les insectes et les mammifères fait de la drosophile un excellent modèle pour explorer la réponse immune. Après une stimulation immunitaire, l'arrêt des voies moléculaires de l'immunité est nécessaire pour éviter le développement de maladies auto-immunes ou du cancer. Mon premier projet s'est attaché à comprendre un mode de régulation original dépendant du temps, dans une des voies NF-KB de la drosophile. Mon deuxième projet··concerne l'activation de la réponse immunitaire. Une· protéine nucléaire contrôle l'implication de machinerie épigénétique dans le contrôle de l'expression d'une des voies NF-KB de la drosophile. Le tout permet de mieux saisir la dynamique de régulation de la réponse innéeThe innate immune system is a defense mechanism common to all metazoans. lts activation can be deleterious when it is uncontrolled. The study of the mechanisms underlying this balance between the activation or not of the innate immune response is the basis of my thesis work. The similarity of the molecular pathways - such as the NF-KB pathway - relaying the innate immune response in insects and mammals makes Drosophila an excellent model for exploring the immune response.After immune stimulation, stopping the molecular pathways of immunity is necessary to prevent the development of autoimmune diseases or cancer. My first project focused on understanding a time-dependent mode of regulation in one of Drosophila's NF-KB pathways. My second project concerns the activation of the immune response. A nuclear protein contrai the involvement of epigenetic machinery in controlling the expression of one of Drosophila's NF-KB pathways. Ali this makes it possible to better grasp the dynamics of regulation of the innate response
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Duvoix, Annelyse. "Régulation transcriptionnelle de la glutathion S-transférase P1-1 via AP-1 et NF-kB dans les cellules leucémiques humaines@ : effet inhibiteur des agents chimiopréventifs d'origine naturelle." Nancy 1, 2003. http://docnum.univ-lorraine.fr/public/SCD_T_2003_0248_DUVOIX.pdf.
Full textAbstract:
La glutathion S-Transférase Pl-1 (GSTP1-1), impliquée dans la conjugaison de composés électrophiles au glutathion, la cancérogénèse et le développement de résistances aux anticancéreux, reste peu étudiée dans 16' cas des leucémies humaines en ce qui concerne l'expression du gène ainsi que des voies de transduction du signal impliquées. Dans une étude précédente, notre équipe a montré l'importance du site AP-l en tant que régulateur du promoteur minimal de la GSTP1-l. Pour ce travail, nous montrons dans un premier temps que des inducteurs typiques d'AP-l comme l'ester de phorbol TPA ou les mét1!. Ux lourds n'induisent pas l'expression de l'ARNm de la GSTPl-l dans la lignée leucémique K562. Par contre, nous confirmons l'importance de c-Jun, c-Fos et de la voie de signalisation menant à l'induction de AP-l dans la régulation de l'expression de la GSTPl-l. La plupart des gènes régulés par AP-l étant aussi régulés par NF-KB, nous avons décidé de vérifier le rôle de ce facteur dans la régulation de la GSTPl-l dont l'ARNm est inductible au TNFa. Grâce à un outil informatique, nous avons pu découvrir la présence d'un site NF-KB qui fixe les sous-unités p50 et p65 de NF-KB en réponse à un traitement au TNFa. Des expériences de co-transfections nous ont permis de compléter nos études en prouvant que la voie de signalisation NF-KB est bien impliquée dans la régulation de la GSTP1-1. Finalement, nous avons démontré l'efficacité d'agents chimiopréventifs, grâce à l'utilisation de la curcumine dont nous démontrons ici la capacité d'inhiber l'expression de la GSTPl-l en bloquant la fixation d' AP-l et de NF-KB tout en induisant l'apoptose dans les cellules leucémiques K562. Nous avons élargi nos résultats vers à l'utilisation d'autres agents chimiopréventifs dont la capsaicine et l'émodine. En résumé, nos résultats montrent que la GSTPl-l est régulée par les facteurs de transcription AP-l et NF-KB et inhibée par des agents chimiopréventifs qui présentent un intérêt potentiel pour de nouvelles thérapies anti-cancéreuses.
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Granet, Corinne. "Mécanismes d'adaptation de cellules ostéoblastiques Ros17/2. 8 aux variations des contraintes mécaniques dans des modèles de micro-gravité simulée et de déformation du support de culture : implication des facteurs de transcription : AP-1, Egr-1, NF-kB." Saint-Etienne, 2000. http://www.theses.fr/2000STET006T.
Full text
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Shi, Tao. "La withaferin A inhibe la transcription du VIH-1 via le facteur de transcription NF-κB." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2016. http://hdl.handle.net/11143/8333.
Full textAbstract:
L’infection par le VIH-1 est un problème majeur de la santé publique qui touche plus de 35 millions de personnes à l’échelle mondiale. La réplication du VIH-1 est déclenchée par l’activation du promoteur LTR, qui contient deux sites de liaison pour le facteur de transcription NF-κB. Ces sites de liaison sont hautement conservés dans le génome du VIH-1, illustrant ainsi l’importance de NF-κB dans l’activité transcriptionelle des gènes du VIH-1 et la production de nouvelles particules virales. La withaferin A (WA) est une substance bioactive extraite de la plante Withania somnifera, qui possède des propriétés pharmacologiques non négligeables dans la régulation de la réponse immunitaire. Des études récentes ont démontré que le potentiel anti-inflammatoire de la WA est dû principalement à l’inhibition de la voie de NF-κB. Le but de ce projet est de déterminer l’effet de la WA sur la réplication du VIH-1 dans les cellules T, qui sont les cibles principales du virus. Des essais de transfections transitoires de cellules T Jurkat E6.1 avec des plasmides contenant le promoteur du VIH-1 ayant différentes constructions de NF-κB, ont démontré que la WA peut réduire l’activité du promoteur d’une manière dépendante de NF-κB. Quant à la production de particules virales, des essais d’infection avec des virus pseudotypés démontrent que la WA diminue la production virale jusqu’à 90% dans des cellules T stimulées avec PMA/PHA et TNF-α, tandis que les mutants ayant des sites de liaison défective pour NF-κB ne sont pas affectés. Des essais de retardement sur gel ainsi que des immunobuvardages de type Western ont montré que la WA altère l’habilité de NF-κB à transloquer dans le noyau, ce qui se traduit par l’inhibition de la synthèse de l’IκB-α, protéine inhibitrice de NF-κB, phénomène sous contrôle étroite de ce facteur de transcription. Ces résultats suggèrent que la WA pourrait permettre une diminution de la réplication virale d’une manière dépendante de NF-κB et ainsi empêcher la propagation du virus aux cellules T chez les individus infectés.
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Filipe, Josina. "Rôle de la proteine NRP/Optineurine dans l'activation de NF-kB induite par Tax1 et dans la réponse antivirale médiée par IRF3." Paris 7, 2009. http://www.theses.fr/2009PA077239.
Full textAbstract:
L'objectif de ce travail a été de réaliser une étude fonctionnelle de la protéine NRP (NEMO-related protein). NRP est une protéine homologue à NEMO, l'élément essentiel de la voie de signalisation NF-KB qui joue un rôle important au niveau des systèmes immunitaire et inflammatoire et des mécanismes antiapoptotiques. Dans un premier travail, réalisé en collaboration, nous avons montré que NRP était un interactant de la protéine Tax du virus HTLV-1. L'activation de NF-KB par Tax est nécessaire à la survie des cellules infectées par HTLV-1 et nous avons montré qu'elle est potentialisée par NRP qui agit en synergie avec un autre interactant de Tax, TAX1BP1. Dans un deuxième travail, nous avons montré que NRP était impliqué dans la réponse innée antivirale médiée par IRF3. IRF3 est requis pour la synthèse de ITFN-β, une cytokine permettant l'expression de protéines antivirales. De plus, nous avons montré que NRP interagissait avec IRF3 et était un effecteur des mécanismes transcriptionnels dépendant d'IRFS et était requis pour la protection virale médiée par l'IFN-β. L'activation d'IRFS nécessite sa phosphorylation par TBK1. Nos résultats ont montré que NRP interagissait constitutivement avec TBK1 et était un substrat de cette kinase. Par ailleurs, nos résultats indiquent que la kinase mitotique PLK1 phosphoryle aussi NRP, ce qui interfère avec sa phosphorylation activatrice par TBK1 et régule négativement l'expression de l'IFN-|3. Notre étude devrait permettre une meilleure connaissance des mécanismes conduisant à l'activation de NF-KB et d'IRFS et pourrait conduire à l'élaboration de nouveaux agents thérapeutiquesThis work focuses on the functional study of the NEMO-related protein (NRP). NRP is a protein with homology to NEMO, an essential component of the NF-KB signalling pathway, which is implicated in the immune response, inflammation and cell survival. Firstly, in a collaborative work, we identified NRP as a binding partner of the HTLV-1 Tax protein. Tax-mediated NF-KB activation is a critical process for the survival of HTLV-1 infected cells and in fact, we found that NRP enhances Tax-dependent NF-KB activation, through the synergistic interaction with another Tax binding protein, TAX1BP1. Secondly, we showed that NRP is implicated in the activation mechanism of IRF3, a transcription factor required for IFN-β expression, which is an essential cytokine of the antiviral innate immune response. We demonstrated that NRP interacts with IRF3 and is required for its efficient activation, subsequent IFN-(3 expression and viral protection. IRF3 is activated through a series of events, which include its phosphorylation by the kinase TBK1. Furthermore, we demonstrated that NRP is itself a substrate and a binding partner of TBK1. Interestingly, we also found that the mitotic kinase PLK1 is able to phosphorylate NRP and to impair TBK1-mediated phosphorylation of NRP and IRF3, as well as IFN-(3 expression. Thus, we can suggest that this novel function of NRP might have the peculiarity of being negatively regulated by PLK1. The study of NRP, presented in this work, further contributes to the understanding of the mechanisms involved in NF-KB and IRF3 activation and might lead to the development of new therapeutic strategies
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Ishii, Tetsu. "Molecular mechanism of activation of transcription factor NF-kB by the mutants of the interferon-inducible protein kinase PKR." Thesis, McGill University, 2001. http://digitool.Library.McGill.CA:80/R/?func=dbin-jump-full&object_id=33782.
Full textAbstract:
The i&barbelow;nterf&barbelow;eron&barbelow; (IFN) inducible d&barbelow;ouble s&barbelow;tranded (ds) RNA activated protein kinase PKR inhibits protein synthesis by phosphorylating the alpha-subunit of the eukaryotic translation initiation factor 2 (eIF-2alpha). The introduction of dominant negative mutants of PKR leads to cell transformation and tumor formation in nude mice, and is thought to be due to the deregulation of general protein synthesis. In addition to translational control, PKR has been implicated in several signaling pathways leading to gene transcription. For example, a link between PKR and NF-kappaB activation was first detected when PKR knockout mouse embryonic fibroblasts were deficient in NF-kappaB DNA binding upon dsRNA mediated activation. Recently, PKR has been shown to induce IkappaB kinase (IKK) activity resulting in the induction of NF-kappaB mediated gene transcription. The mechanism of activation of IKK by PKR has been suggested to be independent of PKR's catalytic capacity and may be due to a protein-protein interaction between PKR and IKK. The effects of dominant negative mutants of PKR (PKRDelta6/PKRLS4/PKRLS9) on the activation of NF-kappaB was examined in NIH3T3 cells. (Abstract shortened by UMI.)
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Barnabei, Laura. "New genetic predisposition to early-onset autoimmunity in human : implication of the NF-κB pathway Heterozygous RELA mutations cause early-onset systemic lupus erythematosus by hijacking the NFkB pathway towards transcriptional activation of type-I Interferon promoter." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2019. http://www.theses.fr/2019USPCB049.
Full textAbstract:
Le lupus érythémateux systémique (LES) est une maladie auto-immune et inflammatoire caractérisée par une production excessive d'auto-anticorps et de cytokines pro-inflammatoires, notamment l'interféron de type 1. Afin d'identifier de nouveaux facteurs génétiques associés au LES, un whole exome sequencing (WES) nous a permis d'identifier deux mutations différentes du gène RELA chez 3 patients LES ayant débuté à l'âge adulte ou pédiatrique. RELA code la protéine p65 qui est une sous-unité du facteur de transcription NF-κB. Les mutations retrouvées H86N et R329X de RELA conduisent à l'activation constitutive de la voie NF-κB dans lymphocytes des patients, illustrée par une localisation nucléaire spontanée. Ces trois patients présentent également une expression élevée des gènes stimulés par l'interféron (ISG). En parallèle, la co-expression, dans une lignée cellulaire immortalisée, de la forme sauvage et mutante de RELA et d'un gène rapporteur (Luciferin) sous le contrôle d'un promoteur IFN-I, a confirmé l'implication des mutants de RELA dans la production de l'interféron de type I. De plus, une mutation de novo du gène RELB a été identifié chez un patient présentant un syndrome poly-autoimmun de type IPEX. De même que pour les mutants RELA, le mutant RELB conduit à une relocalisation nucléaire de RELB/p62 à l'état basal entrainant une activité spontanée de la voie NF-κB. De plus, la forme mutée de RELB est associée à une augmentation de la production d'IFN de type I. L'ensemble de ces nouvelles données démontre le rôle essentiel de RELA et RELB dans la régulation de la voie de l'interféron de type 1 dans les maladies auto-immunesWe have identified 2 different heterozygous mutations of RELA (a missense mutation H86N, and a non-sense R329X), coding the p65 protein, one of the transcription factors of the canonical NFκB pathway, in 3 patients presenting with adult or pediatric onset of Systemic Lupus Erythematous (SLE). The nuclear factor-kappa B (NFκB) transcription factor plays a critical role in diverse cellular processes associated with proliferation, cell death, development, as well as innate and adaptive immune responses. NFκB is normally sequestered in the cytoplasm by a family of inhibiteins kntory proown IκBs. The signal pathways leading to the nuclear accumulation of NFκB, which can be activated by a wide variety of stimuli, have been extensively studied in the past two decades. After its translocation to the nucleus, NFκB must be actively regulated to execute its function as a transcription factor. NFκB has long been considered as a target for new anti-inflammatory drugs. However, data from genetic studies in mice suggest that NFκB could be a complex therapeutic target in inflammatory diseases as it regulates proinflammatory cytokine production, but also leukocyte recruitment, or cell survival. By confocal microscopy analysis combined to molecular analysis in vitro, we showed that these mutations lead to the expression of mutant RelA and spontaneous activation of the NFκB pathway in non-stimulated patients' T cells suggesting a role of RELA mutants in the control of the adaptive immunity. Moreover, we found that patients mutated for RELA displayed a high Interferon Stimulated Genes (ISGs) expression in total Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) as well as in activated T cells and immortalized B cells by Epstein Barr Virus (B-EBV), indicating a lymphocyte-intrinsic dysregulation of the Interferon type I (IFN-I) production. By expression of the mutants into cell lines we observed that the co-expression of the RELA wild type and mutant forms were required to activate the IFNb promoter. These results suggest that the mutant RELA is hijacking the WT RELA towards the interferon promoter, leading to an unregulated production of type-I IFN which is therefore the initial event of the SLE onset in these patients. Upregulation of the type I IFN as well as type II IFN has also been found in a patient with IPEX-like syndrome, where no mutation on FOXP3 has been identified. We identified a de novo mutation in RELB, the transcriptional factor of the non-canonical NF-kB pathway, localized in the transactivation domain of the gene, important for its transcriptional activity. First functional assays show that the mutation acts like a gain of function. Gain of function mutations of RELB has been associated with non-Hodgkin lymphomas, rather than autoimmunity. Moreover, the RNA sequencing performed on the cells of the patient shows a cross-link between canonical and non-canonical NF-kB pathway. In conclusion, the aim of this thesis was to describe the role of the NFkB pathway in autoimmune diseases and the crosstalk between this important pathway and type I and II IFN
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Devidal, Audrey. "Mécanismes et fonctions du ciblage centrométrique de NF-E2p18/MafK, sous-unité du facteur transcriptionnel érythroide NF-E2." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077133.
Full text
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Pradeau, Karine. "Réactivation de l'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) : outils de détection et mécanismes moléculaires." Limoges, 2005. http://www.theses.fr/2005LIMO0027.
Full textAbstract:
L'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus très répandu qui reste dans l'organisme sous une forme latente après la primo-infection. Cette latence virale est entrecoupée d'épisodes de réactivation, s'accompagnant d'une production de nombreuses particules infectieuses. La réactivation semble anodine chez le sujet sain, mais peut être très grave dans différents contextes d'immunodépression, notamment après transplantation, A l'heure actuelle, les mécanismes permettant le maintien de la latence ou à l'inverse ceux entraînant la réactivation sont inconnus. L'objectif de ce travail de thèse était double. Dans un premier temps, des outils moléculaires permettant la détection de la multiplication d'HHV-6 ont été développés. Pour cela une technique de quantification par PCR en temps réel a été mise au point. De même la détection des ARNm du virus associés à sa réplication par une RT-PCR a été réalisée. Afin de tester ces outils de détection dans un contexte de réactivation, elles ont été appliquées à des prélèvements sanguins de patients transplantés. Les deux méthodes se sont alors révélées efficace pour mettre en évidence la réactivation d'HHV-6. Puis dans un deuxième temps, l'effet de l'expression du facteur de transcription NF-κB sur la transcription des gènes très précoces du virus a été recherché. Pour cela, un super-répresseur de NF-κB (IκBαMut) a été transfecté dans des cellules favorables à la croissance virale. En inhibant la voie canique de signalisation de NF-κB, une diminution de la réplication du virus, mise en évidence par une baisse de la transcription des ARNm viraux à l'aide d'une technique de RT-PCR quantitative et par une réduction du nombre de cellules en immunofluorescence, a été observée. Un rôle important du facteur de transcription NF-κB dans la multiplication du virus HHV-6 a ainsi été démontréHuman herpesvirus 6 (HHV-6) is a widespread virus that remains for life in a latent state after primary infection. But HHV-6 may reactivate, producing many infectious particles. This reactivation seems harmless in healthy subject, but can be very serious in various contexts of immunosuppression, such as organ transplant recipients. Actually, the mechanisms allowing the maintenance of latency or contrary those involving the reactivation are unknown. The objective of this work was double. In the fist time, molecular methods to detect HHV-6 multiplication were developed: a real time quantitative PCR method and a RT-PCR assay allowing the detection of viral mRNAs associated with HHV-6 replication were carried out. In order to test these detection techniques in a context of reactivation, they were applied to blood samples from transplanted patients. The two methods were proved to be effective to highlight the reactivation of HHV-6. Then in the second time, the effect of NF-κB transcription factor on immediate early genes transcription of HHV-6 was investigated. For this purpose, a NF-κB super-repressor (IκBαMut) was transfected in cells permissive to HHV-6 growth. By inhibiting the canonical pathway of NF-κB induction, a reduction in the replication of the virus, demonstrated by a decrease in viral mRNA transcription using a quantitative RT-PCR method and by a reduction in the number of infected cells using an immunofluorescence assay, was observed. Thus an important role for NF-κB transcription factor in the multiplication of virus HHV-6 was shown
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Ennen, Marie. "Mise en évidence d'une relation entre la protéine Damaged DNA-Binding 2 et le facteur de transcription NF-kB : conséquences sur les capacités migratrices et invasives des tumeurs mammaires." Phd thesis, Université de Lorraine, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00878985.
Full textAbstract:
La protéine Damaged DNA-Binding 2 (DDB2) est connue pour son rôle dans la réparation de l'ADN lésé par les UV. Cependant, le laboratoire a montré que cette protéine est surexprimée naturellement dans les cellules tumorales mammaires non métastatiques et active leur prolifération, en favorisant leur entrée en phase de transition G1/S du cycle cellulaire. Il a été montré que cette nouvelle activité biologique de DDB2 dépend de sa capacité à intervenir dans la transcription de gènes cibles, comme celui codant l'enzyme anti-oxydante, la superoxyde dismutase à manganèse (SOD Mn). Sur la base que DDB2 est peu ou pas exprimée dans les cellules tumorales mammaires métastatiques, ce travail a consisté à étudier le rôle de cette protéine dans les capacités invasives de ces cellules. Dans un 1er temps, nous avons montré que les cellules tumorales mammaires hautement métastatiques (MDA-MB231 et SKBR3), lorsqu'elles surexpriment DDB2 après introduction de son gène, ont des capacités migratrices et invasives in vitro, ainsi que des propriétés in vivo à développer des métastases pulmonaires, fortement réduites, en association avec une diminution importante de l'expression de la métalloprotéase matricielle 9 (MMP-9). De même, lors d'une analyse rétrospective sur 92 échantillons cliniques provenant de patientes, une corrélation inverse entre l'expression de DDB2 et le haut grade (SBR>ou =3) des tumeurs mammaires est observée. Dans un 2ème temps, nous avons identifié le mécanisme moléculaire par lequel DDB2 agit négativement sur les capacités invasives des cellules tumorales mammaires. Nous avons montré que DDB2 intervient positivement sur l'expression du gène codant I kappa B alpha (IkBa), en se fixant sur une séquence d'ADN localisée dans la région proximale du promoteur, qui entraîne en conséquence une forte diminution de l'activité du facteur de transcription NF-kB. Ce dernier est connu pour son rôle dans les capacités invasives et migratrices des cellules tumorales mammaires métastatiques, en régulant de nombreux gènes cibles comme celui codant la MMP-9. Nous avons montré, que l?inhibition de l'expression d'IkBa, par ARN interférence restaure en partie les propriétés invasives des cellules tumorales mammaires métastatiques surexprimant DDB2, en association avec une réexpression de MMP-9. Dans un 3ème temps, nous avons également montré dans les cellules tumorales mammaires métastatiques, que l?expression constitutivement élevée de la SOD Mn, en l'absence de DDB2, dépend de l'activité conjointe des facteurs de transcription NF-kB et Sp1, révélant ainsi un autre mécanisme moléculaire impliqué dans les propriétés invasives de ces cellules. L'ensemble de ce travail contribue ainsi à mieux comprendre comment les cellules tumorales mammaires progressent vers un statut invasif et renforce également l'idée que DDB2 présente un intérêt clinique potentiel, comme marqueur prédictif de la progression métastatique des tumeurs mammaires. Enfin, la relation entre la DDB2, NF-kB et la SOD Mn représente une voie intéressante pour le développement de nouvelles thérapies anticancéreuses.
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Kanjo, Ghaidaa. "Influence de Toxoplasma Gondii dans la régulation d'UHRF1 via la voie NF-KB." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ068/document.
Full textAbstract:
T. gondii interfère avec l'activation des voies de signalisation de NF-kB des cellules hôtes. Ainsi, lors de l’infection par T. gondii, 85% des gènes dépendant de NF-kB sont up-régulés. Un autre facteur de transcription dont l’expression est modulée par le parasite est UHRF1 (Ubiquitin-like,containing PHD and RING finger domains, 1). UHRF1, en se fixant sur le promoteur du gène de la cycline b, induit une répression épigénétique de ce dernier conduisant à un arrêt du cycle cellulaire des cellules infectées en phase G2 et à un arrêt de la prolifération parasitaire. L’analyse in silico du promoteur du gène uhrf1 a montré qu’il possédait 9 sites de fixation de NF-kB. Effectivement nous avons démontré que NF-kB interagit avec le promoteur du gène uhrf1 lors d’une infection par T. gondii. L’expression d’UHRF1 serait donc modulée par NF-kB dans les cellules infectées par T. gondii. Or NF-kB a une régulation différentielle en fonction de la nature de la souche infectante. Là encore, nous avons pu observer une régulation différentielle d’UHRF1 selon la nature de la souche infectante, pouvant être dues à la régulation souche dépendante de NF-kB. La détermination du rôle précis de l’activation d’UHRF1 dans les cellules infectées et l’identification du ou des facteurs parasitaires responsables pourraient permettre de mieux comprendre les mécanismes de persistance intracellulaire du parasite et de découvrir de nouveaux points d’impact thérapeutiquesT.gondii interferes with the activation of NF-kB signaling pathways. Thus, upon infection by T.gondii, 85% of genes NF-kB-dependent are up-regulated. Another transcription factor whose expression is modulated by the parasite is UHRF1 (Ubiquitin-like, Containing PHD and RINGfinger domains, 1). UHRF1, bind to the gene promoter of cyclin b and induces epigenetic repression of this gene leading to cell cycle arrest in G2 phase of infected cells and stop the proliferation in both infected cells and parasite. In silico analysis of the uhrf1 gene promoter has been shown to possess 9 binding sites of NF-kB. Our study showed that NF-kB actually interacts with the promoter of gene uhrf1 during infection with T. gondii. This suggests that the expression of UHRF1 is modulated by NF-kB in T. gondii-infected cells. In addition we observed differential regulation of UHRF1 depending on the nature of the infecting strain. These variations may also be due to already well-known differential regulation of NF-kB by different strains of T.gondii. Determining the precise role of UHRF1 activation in infected cells and the identification of the parasitic factor responsible of this activation would allow to a better understanding of the mechanisms of intracellular persistence of the parasite and allow to unravel new therapeutic trails
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Tadlaoui, Hbibi Ali. "Détection de facteurs de transcription actifs dans le cancer colorectal et inhibition spécifique de leur activité par des oligonucléotides leurres : applications à STAT3 et NF-kB." Paris 13, 2008. http://www.theses.fr/2008PA132023.
Full textAbstract:
Le rôle important des facteurs de transcription tels que STAT3 et NF-kB dans les processus biologiques, ainsi que leur implication dans l’oncogenèse, justifient les nombreuses études consacrées à ces facteurs. Inhiber leurs activités semble présenter un grand intérêt thérapeutique. Dans un premier temps, nous avons montré que STAT3 est activé dans le cancer du côlon et qu’il est associé à des facteurs histopronostiques. Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés à l’inhibition de facteurs de transcription STAT3 et NF-kB par des oligonucléotides leurres (ODN) comportant les séquences consensus de ces facteurs. Les ODN leurres induisent la mort d’une lignée cellulaire de cancer du côlon dont la croissance est sous la dépendance de STAT3 et NF-kB. Cependant, l’ODN anti-STAT3 peut interagir avec STAT1 et bloquer l’action de l’IFN. Ainsi, il est intéressant d’inhiber des facteurs de transcription dans les cellules tumorales mais les questions de spécificité ne sont pas résoluesThe important role of transcription factors such as STAT3 and Nf-kB in biological processes, and their involvement in oncogenesis, justifies the numerous studies on these factors. To inhibit and control their activities appears to be promising therapeutic approach. Firstly, we have shown that STAT3 is constitutively activated in colon cancer and is associated with histopronostics features. In secondly, we inhibited the transcription factors STAT3 and NF-kB in cancer cell lines, we using decoy oligonucleotide containing the consensus target ssequences of these two factors. The decoy oligonucleotides induce the death of a cell line of colon cancer (SW480), however, the decoy ODN of STAT3 was found to interact with STAT1 and prevent IFNy action. Thus, it's of interest to inhibit transcription factors in tumor cells but specific issues are not resolved
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Zemirli, Naïma. "Le rôle de l’ubiquitination et des endomembranes dans l’activation du facteur de transcription NF-κB." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T068/document.
Full textAbstract:
Le facteur de transcription NF-κB régule l’expression d’une pléthore de gènes impliqués dans divers processus physiologiques notamment la prolifération et la survie cellulaires, l’inflammation ainsi que les réponses immunes. Il intervient également dans de nombreux processus pathologiques à l’exemple de certains cancers et maladies auto-immunes.L’activation de NF-κB suite à l’engagement de différents immunorécepteurs requiert la mise en place de larges signalosomes formés suite au recrutement de différents adaptateurs au niveau des immunorécepteurs engagés. Ces adaptateurs subissent des ubiquitinations non-dégradatives nécessaires pour la transduction du signal. Nous avons démontré dans un précédent travail que ces protéines ubiquitinylées s’accumulent au niveau de la membrane du réticulum endoplasmique (RE) via la protéine réticulaire Métadhérine (MTDH). De plus, nos résultats suggèrent que l’ubiquitination est un prérequis nécessaire à l’adressage de ces protéines au RE. Afin d’évaluer la contribution des E3 ubiquitine ligases en charge de relayer NF-κB au niveau des organites, nous avons effectué le crible d’une banque de siRNAs dirigés contre les 46 E3 ligases transmembranaires en utilisant comme modèle la signalisation du TNF récepteur. Ce crible nous a permis d’identifier l’E3 ligase RNF121 comme régulateur positif de NF-κB. Bien que le mécanisme d’action de RNF121 ne soit pas complètement élucidé, nos données suggèrent qu’il agirait au niveau de la régulation de l’inhibiteur de NF-κB « IκBα ».Durant la deuxième partie de cette thèse, je me suis intéressée à la dynamique mitochondriale. Les mitochondries sont des organites dynamiques, dont la forme est maintenue grâce à une balance entre deux processus antagonistes appelés : fission et fusion. Il a été rapporté qu’en présence de certains stress modérés, les mitochondries hyperfusent, ce processus est appelé SIMH (Stress-Induced Mitochondrial Hyperfusion). Nous avons pu démontrer que la SIMH s’accompagne de l’activation de la voie canonique du facteur de transcription NF-κB via l’E3 ubiquitine ligase mitochondriale MULAN. Nos résultats suggèrent que durant le SIMH, MULAN forme un complexe avec TRAF2 et module son ubiquitination. Ces résultats suggèrent que la mitochondrie, de part sa dynamique, convertie un signal de stress en un signal de survie via l’activation de NF-κB. Pris dans leur ensemble, nos résultats illustrent la complexité de la régulation de NF-κB par ubiquitination et attribuent aux organites un nouveau rôle dans la transduction de la signalisationThe transcription factor NF-κB regulates the expression of several genes implicated in various physiological processes such as cell proliferation and survival, inflammation and immune responses. Dysregulation of its activation is involved in diverse pathologies such as cancer and auto-immune diseases. Following the engagement of immunoreceptors, NF-κB signaling requires a large signalosome assembly containing different adaptor proteins. These adaptors undergo poly-ubiquitinylation in a non-degradative manner, which is essential for signal transduction. We demonstrated in previous work that these ubiquitinylated proteins accumulate at the surface of the endoplasmic reticulum (ER) via a reticular protein called “Methaderin” (MTDH). Furthermore, our results suggest that ubiquitinylation is a necessary prerequisite for protein addressing to the ER. To evaluate the contribution of E3 ubiquitin ligases in this process we performed a screen of a siRNA bank, targeting the 46 human transmembrane E3 ligases, using the TNF receptor signaling as a model. This screen enabled the identification of RNF121, a Golgi E3 ligase, as a positive regulator of NF-κB. Although the mechanism by witch RNF121 acts is not yet elucidated, our data suggest that it acts on the regulation of NF-κB inhibitor (IκBα). In the second part of this thesis, we investigated mitochondrial dynamics. Mitochondria are dynamic organelles; their shape is maintained due to a balance between two antagonist processes called: fusion and fission. It is known that moderate stress triggers mitochondrial hyperfusion, this process is called: SIMH (Stress-Induced Mitochondrial Hyperfusion). During this thesis, we demonstrated that SIMH is accompanied by NF-κB activation through the mitochondrial E3 ubiquitin ligase MULAN. Our results suggest that during SIMH, MULAN forms a complex with the protein TRAF2 and modulates its ubiquitinylation to allow NF-κB signaling transduction. This work shows that, through their dynamics, mitochondria convert stress signals into a prosurvival response via NF-κB activation.In summary, our results illustrate the complexity of the ubiquitin-dependant regulation of NF-κB and attribute a new role in signaling transduction to the organelles
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Lepsch, Lucília Brochado. "Toxicidade causada pela cocaína in vitro: participação da via dopaminérgica e do fator de transcrição NF-kB." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-03102008-135744/.
Full textAbstract:
A cocaína é uma droga amplamente utilizada, e seu abuso está associado a inúmeros problemas de ordem física, psiquiátrica e social. Anormalidades em recém-nascidos têm sido reportadas devido aos efeitos tóxicos da cocaína durante o desenvolvimento fetal. O mecanismo pelo qual a cocaína causa danos neurológicos é muito complexo e envolve interações da droga com diversos sistemas de neurotransmissão, como o aumento dos níveis extracelulares de dopamina e radicais livres e a modulação de fatores de transcrição. Neste estudo investigamos a toxicidade causada pela cocaína em culturas primárias de estriado e mesencéfalo e cultura de linhagem de células dopaminérgicas (PC 12). Observamos que a exposição à cocaína causou morte destas células. Na cultura primária de mesencéfalo, a morte celular foi revertida pelo prétratamento com superóxido dismutase (SOD). A exposição à cocaína também induziu a inibição do prolongamento dos neuritos nessas culturas primárias. Já na cultura de células PC 12, a cocaína ativou os fatores de transcrição NF-kB e CREB (após 6 horas), que regulam a transcrição de genes envolvidos na morte celular. O GBR 12909 (inibidor da recaptação de dopamina), a lidocaína (anestésico local) e a dopamina não ativaram o NF-kB de maneira semelhante à cocaína, porém, a diminuição da atividade do NF-kB após pré-tratamento das células com SCH 23390, antagonista do receptor D1, sugere que a ativação do NF-kB pela cocaína ocorre, pelo menos parcialmente, via ativação de receptores D1. O NF-kB parece exercer um papel protetor nas células PC 12, pois sua inibição com PDTC e Salicilato de Sódio aumentou a indução de morte celular pela cocaína. O aumento do RNAm do BDNF, também pode estar relacionado à proteção exercida por este fator de transcrição. A diminuição do Bcl-2, o aumento da atividade da caspase 3 e o aumento da caspase 3 clivada sugerem a participação da via de apoptose na morte celular induzida pela cocaína. A compreensão dos mecanismos de morte celular regulados pela cocaína no cérebro futuramente contribuirá para o desenvolvimento de novas terapias para dependentes, a qual poderá ajudar na interrupção do desencadeamento dos processos degenerativos.Cocaine is a drug deeply used and its abuse is associated with physical, psychiatric and social problems. Abnormalities in newly born have been demonstrated due to the toxics effects of cocaine during fetal development. The mechanism by which cocaine causes neurological damages is very complex and involves interactions of the drug with several neurotransmitter systems, such as the increase of extracellular levels of dopamine and free radicals, and modulation of transcription factors. In this study we investigated the cocaine toxicity in striatum and mesencephalic primary cultures, and dopaminergic cells (PC 12). We observed that cocaine exposure causes death to these cells. In the mesencephalic primary culture, the cellular death was blunted by superoxide dismutase (SOD) pretreatment. Cocaine exposure also induced inhibition of neurite lengthening in these primary cultures. In PC 12 cells, cocaine activated the transcription factors NFkB and CREB (after 6 hours), which regulate genes involved in cellular death. GBR 12909, an inhibitor of dopamine reuptake; lidocaine, a local anesthetic; and dopamine did not activate NFkB as cocaine did, however, the attenuation of NFkB activity after the pretreatment of the cells with SCH 23390, a D1 receptor antagonist, suggests that the activation of NFkB by cocaine is, at least partially, due to activation of D1 receptors. NFkB seems to have a protective role in these cells, because its inhibition with PDTC and Sodium Salicilate increased cellular death caused by cocaine. The increase in BDNF RNAm, can also be related to the protective role of this transcription factor. The decrease in Bcl-2, the increase in caspase 3 activity, and the increase in caspase 3 cleavage suggest that apoptose participates in the development of cocaineinduced cell death. The understanding of the mechanisms by which cocaine induces cell death in the brain will contribute to the development of new therapies for drug abusers, which can help the interruption of the progress of degenerative processes.
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Accaoui-Perrin, Marie-José. "Rôle et régulation de la gamma-glutamyltransferase humaine au cours du stress oxydant : implication des facteurs de transcription NF-kB et AP-1." Nancy 1, 2001. http://www.theses.fr/2001NAN12003.
Full textAbstract:
Thèse de biologie structurale moléculaire et cellulaire. Le stress oxydant se définit comme une surproduction d'espèces réactives de l'oxygène (ERG) provoquée par un dysfonctionnement des mécanismes de régulation et de défense antioxydants, ou par un afflux xénoblotiques entraînant une «explosion» du métabolisme oxydant ou encore par une inflammation. Il résulte une perturbation du fonctionnement Bonnal d'une cellule. Les ERG produites lors de ce stress peuvent modifier l'activité de certains facteurs de transcription. A travers le catabolisme du GSH, la GGT approvisionne la cellule essentiellement en cystéine et permet à celle-ci de lutter contre le stress oxydant. Chez l'homme, cette enzyme appartient à une famille multigénique et montre une expression de tissus spécifique. Les mécanismes de la régulation de la GGT humaine au cours du stress oxydant et le rôle de la GGT lors de ce phénomène sont peu connus. [. . . ] Cette étude démontre que la GGT humaine est régulée par le stress oxydant en fonction du type cellulaire, et joue en même temps un rôle évident dans le genèse des ERO. De plus, ces phénomènes influencent l'activation des facteurs de transcription AP-1 et NF-KB.
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Carpenter, Oliver L. "Ultraviolet Light-Induced Regulation of Transcription and Translation, COX-2 Expression and Noncanonical NF-κB Activation." Ohio University / OhioLINK, 2013. http://rave.ohiolink.edu/etdc/view?acc_num=ohiou1382624015.
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Naudeau, Loreleï. "Identification des mécanismes du facteur de transcription NFAT5 impliqués dans la migration des carcinomes mammaires." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077019.
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Le cancer du sein est la première cause de mortalité par cancer chez la femme dans le monde. Cette mortalité est majoritairement due à la capacité des cellules tumorales du site primaire à disséminer et à envahir d'autres organes: c'est le processus métastatique. Il est nécessaire de comprendre les mécanismes de motilité cellulaire à la base du processus métastatique, pour bloquer cette progression fatale. La famille de facteurs de transcription NFAT, qui inclut le membre pro-migratoire NFAT5, régule la motilité des carcinomes mammaires. L'objectif de mon travail a été d'initier l'identification des mécanismes encore inconnus impliqués dans la migration NFAT5. J'ai identifié le rôle clé de NFAT5 dans la production de TGFb1 et de ROS, qui coopèrent pour moduler la migration cellulaire NFAT5-dépendante dans les carcinomes mammaires. Pour augmenter la production de ROS, NFATS potentialise l'expression de 2 gènes centraux de la réponse oxydante, NCF2 et ATF3, qui sont indispensables à la migration NFAT5-dépendante. De plus, j'ai révélé une coopération entre NFAT5 et la famille NF-kB, importante pour la régulation de la motilité cellulaire. J'ai validé l'existence d'une interaction protéique entre la sous-unité p65 et NFAT5 ainsi que le rôle de la voie NF-kB dans la migration des carcinomes mammaires induite par NFAT5. Ces résultats suggèrent que l'expression de TGFb1, NCF2 et ATF3 serait modulée par un complexe hétérodimérique NFAT5-NF-kB. La suite de mon projet va consister à étendre ces résultats majeurs in vivo dans un modèle murin et dans des tumeurs de patientes. Cette étude ouvre la voie à l'identification de possibles nouveaux marqueurs pronostiques et/ou diagnostiquesBreast cancer is a leading cause of cancer death in women worldwide. In most cases, lethality is caused by the ability of cancer cells originating from the primary tumor to colonize distant organs in a process called metastasis. Understanding the molecular mechanisms underlying the migration and invasion properties of cancer cells is crucial to block this fatal breast cancer progression. The NFAT family of transcription factors, in particular the pro-migratory factor NFAT5, is capable of regulating breast carcinoma motility. The aim of my research was to initiate the identification of previously unknown mechanisms involved in NFAT5 migration. In this way, I demonstrate that NFATS plays a key rote in both the production and the function of TGFb1 and ROS, which cooperate to modulate the NFAT5-dependent migration in triple negative breast carcinoma. To increase ROS production, I show that NFAT5 positively regulates target genes involved in the oxidative response, NCF2 and ATF3, which are central for NFAT5-dependent migration. Our study also reveals a partnership between NFAT5 and the NF-KB transcription factor family that is important in cancer cells motility. I demonstrate a physical interaction between NFAT5 and the p65 subunit, and the critical function of the NF-kB pathway in NFAT5 migration. Taken together, these data strongly suggest that NCF2, ATF3 and TGFb1 might be co-regulated by an NFAT5-NF-kB heterodimeric complex. Future studies will involve extending these significant findings in vivo using murine models and primary patient tumor samples. Our work paves the way for the identification of new potential prognostic and/or diagnostic biomarkers
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Calao, Miriam. "Role of IkB kinase (IKK) complex post-translational modifications in NF-kB signaling and therapeutic applications for the treatment of HIV-1 infection." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2009. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/210318.
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Les facteurs de transcription de la famille Rel/NF-κB régulent l’expression d’un grand nombre de gènes impliqués dans les réponses immunitaires et inflammatoires ainsi que dans la régulation de la prolifération et de la survie cellulaire. Le caractère transitoire de l’activation de NF-κB est donc crucial pour poterger les cellules de l’autoxicité due à une trop forte expression des gènes cibles de ce facteur de transcription. Dans le cadre de notre thèse de doctorat, nous avons étudié les mécanismes moléculaires régulant la cinétique d’activation de NF-κB, en accordant une attention toute particulière au complexe kinase IKK, qui semble être le regulateur clef de l’activation de NF-κB. Nos résultats suggèrent que p300 pourrait réguler la durée d’activation des IKKs d’une part par acétylation directe, et d’autre part, indépendamment de son activité HAT, en stabilisant les IKKs et donc en prolongeant leur demie-vie et par conséquent leur activation.Certains virus utilisent la voie de signalisation NF-κB afin de promouvoir leur propre réplication. C’est le cas du virus HIV-1 (Human Immunodeficiency Virus type 1), qui contient dans son promoteur deux sites de liaison pour NF-κB. Notre laboratoire a précédemment montré que l’utilisation du TNFα en combinaison avec la TSA, active l’expression virale de manière synergique. L’administration combinée d’un activateur du facteur NF-κB et d’un inhibiteur de désacétylases pourrait, en présence d’une thérapie anti-HIV-1 efficace, être envisagée dans le but d’éliminer les cellules réservoirs infectées de manière latente. L’utilisation thérapeutique du TNFα ou de la TSA étant inenvisageable en raison de leur toxicité, nous avons étudié l’effet d’autres substances ayant un plus grand potentiel thérapeutique et nous avons apporté une preuve de principe du potentiel thérapeutique de la coadministration de plusieurs activateurs viraux (inhibiteurs de HDACs[HDACIs]+inducteurs de la voie NF-κB) pour réduire le pool des réservoirs cellulaires infectés de manière latente.
Doctorat en Sciences
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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Quivy, Vincent. "Etude des mécanismes moléculaires de sortie hors de la latence du virus HIV-1: activation transcriptionnelle par des inhibiteurs de désacétylases en synergie avec le facteur de transcription NF-kB." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2002. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/211394.
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Lecine, Patrick. "Contrôle transcriptionnel du gène CD25/IL-2R(alpha) humain : mécanisme biphasique impliquant les familles de facteurs de transcription Rel/NF-kB, SRF, Stat et Ets." Aix-Marseille 2, 1996. http://www.theses.fr/1996AIX22083.
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La chaine alpha du recepteur a l'il-2 est principalement exprimee a la surface des lymphocytes t actives. Cette expression est regulee au niveau transcriptionnel par 2 regions positives, nommees prri et prrii, situees a 65 et 250 pb en 5' du point majeur d'initiation de la transcription. Cependant, ces regions ne sont pas suffisantes pour expliquer la specificite d'expression de ce gene. Afin d'identifier de nouvelles regions de regulation, nous avons sequence 8520 pb de l'extremite non codante du gene il-2ralpha. Nous avons ainsi pu mettre en evidence par des tests fonctionnels 2 nouvelles regions de regulation positive, prriii et prriv. Prriii est responsable de l'inductibilite de ce gene en reponse a l'il-2. Prriii pourrait etre implique dans la regulation de l'expression de l'il-2ralpha en reponse a une stimulation via la molecule cd28
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Hatchi, Emeline. "Caractérisation des processus d'ubiquitination régulant le facteur de transcription NF-kappaB au cours de l’activation lymphocytaire Rôle de l’E3 ligase TRIM13 et de la déubiquitinase USP34." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T040/document.
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Le facteur de transcription NF-KB joue un rôle essentiel dans le développement, l’homéostasie, la survie du système immunitaire, mais également dans la propagation de certains lymphomes. L’activation optimale de NF-ΚB en réponse à l’engagement de nombreux immunorécepteurs repose sur la mise en place de larges signalosomes dans lesquels des adaptateurs spécifiques sont recrutés et poly-Ubiquitinylés de façon non-Dégradative. En réponse à des cytokines pro-Inflammatoires ou à l’activation des récepteurs antigéniques, ces adaptateurs ubiquitinylés s’accumulent sur la face cytoplasmique du réticulum endoplasmique (RE) via la protéine du RE metadherine (MTDH) qui assure la propagation du signal NF-KB. Toutefois, la nature des E3 ligases en charge de relayer NF-KB au niveau des organites intracellulaires reste méconnue. C’est pourquoi j’ai réalisé le crible par bioluminescence d’une librairie de siRNA dirigée contre les 46 E3 ubiquitine ligases humaines pourvues d’un domaine transmembranaire qui les ancrent au niveau de différents compartiments cellulaires afin d’étudier leur impact sur l’activation de NF-KB en réponse à une stimulation antigénique dans un modèle de lymphocytes T immortalisés Jurkat. Nous avons identifié la protéine du RE TRIM13 comme un régulateur positif de la signalisation NF-ΚB. Nos données suggèrent un modèle dans lequel TRIM13 régule l’activation de NF-KB en modulant indépendamment l’activation de deux membres clés de la famille NF-KB au cours de l’activation lymphocytaire, RelA (p65) et c-Rel.Lors de cette thèse, j’ai également participé au crible d’une librairie de siRNA ciblant les 96 déubiquitinases (DUBs) codées par le génome humain afin d’identifier celles en charge de ramener les cellules vers leur état basal. Ceci a permis la caractérisation de la protéase spécifique de l’ubiquitine USP34 (Ubiquitin specific protease 34). La réduction des niveaux endogènes de USP34 potentialise l’activation de NF-KB en réponse à l’engagement du récepteur antigénique T ou du récepteur au TNFa et la liaison de NF-KB à l’ADN est accrue. Collectivement, ces résultats suggèrent que USP34 est un nouvel acteur impliqué dans la régulation négative de NF-KB.Ces résultats illustrent l’importance des processus d’ubiquitination réversibles dans la régulation de la signalisation NF-ΚB et introduisent les cribles génétiques comme un outil efficace pour l’identification de régulateurs de processus biologiques diversThe transcription factor NF-KappaB plays a critical role in the development, homeostasis, the survival of the immune system, but also in the propagation of certain lymphomas. The optimal activation of NF-KappaB in response to the engagement of many immunoreceptors rely on the implementation of large signalosomes where specific adaptors are recruited and poly-Ubiquitinylated in a non-Degradative manner. In response to proinflammatory cytokines or activation of antigen receptors, these Ubiquitinylated adaptors accumulate on the cytoplasmic leaflet of the endoplasmic reticulum (ER) via the ER protein metadherin (MTDH) providing NF-KappaB signal propagation . However, the nature of the E3 ligases responsible for relaying NF-KappaB in intracellular organelles remains unknown. This is why I made the screen ingby bioluminescence of a library of siRNAs targeting the 46 human ubiquitin E3 ligases provided with a transmembrane domain that anchor them at different cellular compartments to study their impact on the NF-KappaB activation in response to antigenic stimulation in immortalized T lymphocytes Jurkat. We identified the ER-Protein TRIM13 as a positive regulator of NF-KappaB signaling. Our data suggest a model in which TRIM13 regulates the activation of NF-KappaB activation by modulating independently two key members of the NF-KappaB family during lymphocyte activation, RelA (p65) and c-Rel. In this thesis, I also participated in the screening of a library of siRNAs targeting the 98 deubiquitinases (DUBs) encoded by the human genome to identify those in charge of the reset of the system to basal state. This screen allowed the characterization of the ubiquitin-Specific protease USP34 (ubiquitin specific protease 34). The reduction of endogenous levels of USP34 potentiates the activation of NF-KappaB in response to engagement of the antigen receptor or T receptor antagonists and enhances NF-KappaB DNA binding. Collectively, these results suggest that USP34 is a new player involved in the negative regulation of NF-KappaB. These results illustrate the importance of reversible ubiquitination process in the regulation of the NF-KappaB signaling and introduce genetic screens as an effective tool to identify regulators of diverse biological processes
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Duhéron, Vincent. "Hair and epidermal renewal by the receptor activator of NF-kappaB." Strasbourg, 2009. http://www.theses.fr/2009STRA6154.
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Thoma, Martine. "Role of IkappaB/NF-kappaB signalling pathways in the immune response of the mosquito Anopheles gambiae." Strasbourg, 2009. https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2009/THOMA_Martine_2009.pdf.
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IMBERT, VERONIQUE. "L'activation des lymphocytes t : de la membrane au noyau, un reseau complexe d'interactions fonctionnelles entre les tyrosine kinases et les tyrosine phosphatases. un nouveau mecanisme de regulation du facteur de transcription nf-kb." Nice, 1996. http://www.theses.fr/1996NICE4956.
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Dans les cellules eucaryotes, la phosphorylation des proteines sur tyrosine est l'un des principaux mecanismes de la transmission des signaux regulant l'activation, la proliferation et la differenciation cellulaires. Le niveau de phosphorylation sur tyrosine est le resultat d'un equilibre entre les activites des proteines tyrosine kinases (ptk) et des proteines tyrosine phosphatases (ptp). Nous avons etudie l'importance de ces reactions dans la regulation du signal d'activation des lymphocytes t. Nous avons montre que le peroxyde de vanadate (pervanadate), un puissant inhibiteur de ptp, induit l'activation des cellules de la lignee leucemique t humaine jurkat. Le pervanadate provoque une augmentation de la phosphorylation sur tyrosine des proteines cellulaires due a l'activation sequentielle des tyrosine kinases lck/fyn et zap-70. Ces evenements de phosphorylation ont pour consequences une augmentation de la concentration intracellulaire en calcium correspondant a un influx, l'activation de facteurs de transcription (nf-kb et ap-1), l'apparition de marqueurs de surface (cd69 et cd25) et la production d'interleukine 2. Ces resultats montrent que les ptp exercent globalement un controle negatif sur l'activation des lymphocytes t. Grace a des mutants de la lignee jurkat deficients pour cd45, la ptp majoritaire des lymphocytes t, nous avons observe que cd45 pouvait reguler negativement l'activite enzymatique de lck et fyn, mettant ainsi en evidence un double role regulateur de cd45 sur ces kinases. L'ensemble de ces travaux montre qu'il existe un reseau complexe d'interactions fonctionnelles et sequentielles entre ptk et ptp, regulant la transduction du signal d'activation des lymphocytes t. De plus, les ptk associees au recepteur t exercent des fonctions distinctes, zap-70 etant plus particulierement impliquee dans le controle des flux calciques. L'activation du facteur de transcription nf-kb par le pervanadate suggere un role de la phosphorylation sur tyrosine dans la regulation de ce facteur, crucial pour le controle de l'expression de nombreux genes au cours des reponses immune et inflammatoire. A l'etat inactif, nf-kb est sequestre dans le cytoplasme par un inhibiteur ikb-. Le modele classique d'activation de nf-kb passe par la phosphorylation sur serine d'ikb- et la degradation de cet inhibiteur par le proteasome. Nous avons demontre l'existence d'un nouveau mecanisme d'activation de nf-kb qui utilise la phosphorylation sur tyorisine d'ikb- afin d'induire la dissociation des complexes ikb/nf-kb. Un des effecteurs physiologiques de cette reaction est la reoxygenation des tissus apres hypoxie, impliquant la participation des radicaux libres oxygenes. Les reactions de phosphorylation sur tyrosine sont donc impliquees a plusieurs niveaux dans les voies de transduction des signaux d'activation des lymphocytes t
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Bourgarel-Rey, Véronique. "Microtubules et transduction du signal : étude des effets des agents anti-microtubules sur la régulation de l'oncogène c-myc." Aix-Marseille 2, 2000. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/PHA_2000_1538.pdf.
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Chéreau, Fanny. "ABIN-2, un nouvel activateur de NF-kappaB en réponse aux agents génotoxiques : implication de la poly-ubiquitination." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077004.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcription NF-kappaB sont régulés au travers de différentes voies de signalisation, qui convergent cependant toutes vers un complexe IKK composé de deux sous-unités kinases IKKalpha et IKKbeta ainsi que d'une sous-unité régulatrice NEMO. Bien que les fonctions de chacune des sous-unités aient été étudiées, le rôle spécifique de la kinase IKKalpha ainsi que les mécanismes impliqués dans sa régulation restent encore mal élucidés. En particulier, ses partenaires d'interaction sont peu connus. ABIN-2 a été identifié par l'équipe comme partenaire d'IKKalpha par une approche de protéomique et mon travail de thèse a consisté à caractériser le rôle d'ABIN-2 dans la régulation de NF-kappaB médiée par IKKalpha. J'ai montré qu'ABIN-2 est nécessaire à l'activation de NF-kappaB induite en réponse à des agents génotoxiques ainsi qu'en réponse à des inductions longues au TNFalpha, via l'activation de la kinase IKKalpha. J'ai aussi étudié deux domaines structuraux d'ABIN-2 appelés UBAN et ZF et montré par l'étude de mutations ponctuelles de ces domaines qu'ils sont essentiels pour l'activation de NF-kappaB médiée par IKKalpha. Par ailleurs, j'ai montré que ces domaines sont essentiels à la reconnaissance de chaînes poly-ubiquitinées en K63 et linéaires par ABIN-2 ainsi que pour la poly-ubiquitination non dégradative en K63 d'ABIN-2. A la lumière de nos résultats, nous proposons un modèle selon lequel à la fois la poly-ubiquitination d'ABIN-2 et sa capacité de reconnaissance de partenaires poly-ubiquitinés seraient nécessaires pour l'activation d'IKKalpha et de NF-kappaBNF-kappaB transcription factors are regulated through different pathways but they all converge at the level of thé IKK complex, which is composed of two catalytic subunits IKKalpha and IKKbeta and a regulatory subunit NEMO. Even though the function of each subunit has been studied, the specific role of IKKalpha and its regulation remain poorly elucidated. In particular, the IKKalpha -interacting proteins involved in the regulation of its activity are poorly characterized. In our group, ABIN-2 has been identified as an interacting partner of IKKalpha by a proteomic approach and my Ph. D. Research project aimed to characterize the specific role of ABIN-2 in the regulation of IKKalpha -mediated NF-kappaB activation. I demonstrated that ABIN-2 is required for NF-kappaB activation as a late response to TNFalpha and genotoxic stress stimulation, through the activation of IKKalpha. In addition, we studied two structural domains of ABIN-2, named UBAN and ZF and showed by mutational analysis that these domains are essential for optimal NF-kappaB activation mediated by IKKalpha. Moreover, I showed that these domains are necessary for ABIN-2 to recognize K63-linked and linear poly-ubiquitin chains as well as for nondegradative K63-linked poly-ubiquitination of ABIN-2 itself. These results suggest that ABIN-2 poly-ubiquitination altogether with ABIN-2 binding to poly-ubiquitinated partners are necessary to activate IKKalpha and subsequently NF-kappaB
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ENGLARO, WALTER. "Role des map kinases et du facteur de transcription nf-kappa b dans la regulation de la melanogenese." Nice, 1998. http://www.theses.fr/1998NICE5169.
Full textAbstract:
Les melanocytes sont des cellules epidermiques, derivees de la crete neurale, dont la fonction principale est la synthese de pigments, les melanines. La pigmentation est un caractere genetiquement defini. Neanmoins, en reponse a des stimuli physiologiques tels que le rayonnement ultraviolet de la lumiere solaire ou l'msh, la production de pigments par les melanocytes peut etre augmentee. Le travail presente dans cette these a porte sur l'etude de voies de signalisation intracellulaires impliquees dans la regulation de la synthese des melanines ou melanogenese. La melanogenese s'effectue dans des organites cellulaires specialises appelees melanosomes qui contiennent les enzymes catalysant les etapes importantes de cette synthese. Il s'agit de la tyrosinase, la trp-1 ( tyrosinase related protein-1 ) et la trp-2. Parmi celles-ci, la tyrosinase s'avere etre l'enzyme cle de la melanogenese puisqu'elle catalyse l'etape initiale et limitante de cette synthese, l'hydroxylation de la tyrosine en l-dopa. Dans un premier temps, nous avons etudie l'implication de la voie de signalisation des map kinases erk1 et 2 dans la regulation de la melanogenese. Nous avons montre que cette voie est activee en reponse aux agents melanogeniques qui augmentent les taux intracellulaires d'ampc (msh, forskoline, ibmx). Cependant, l'activation de ces kinases n'est pas necessaire a la stimulation de la melanogenese. En effet, l'inhibition de cette voie n'empeche pas les effets melanogeniques de l'msh et de la forskoline et induit la differenciation melanocytaire caracterisee par l'apparition de dendrites et l'augmentation d'expression de la tyrosinase. La voie des mapk erk1 et 2 jouerait donc un role moderateur dans la synthese de melanines. Ensuite, nous avons analyse l'effet inhibiteur du tnf sur la melanogenese. Cette cytokine, produite par les keratinocytes apres exposition aux uv, induit une inhibition d'expression de la tyrosinase au niveau transcriptionnel. Cette inhibition ne reflete pas un effet apoptotique du tnf sur les cellules de melanomes b16. Nous avons demontre que son action est dependante de l'activation du facteur de transcription nfb. Enfin, une etude realisee sur des keratinocytes humains normaux nous a permis de montrer une activation des mapk erk1 et 2, jnk et p38 ainsi que des facteurs de transcription tcf/elk1 et ap-1 en reponse aux uv-a et b. Ces resultats mettent en evidence l'activation de mecanismes transcriptionnels par lesquels les uv pourraient stimuler l'expression et la secretion, par les keratinocytes, de certains facteurs qui sont des regulateurs importants de la melanogenese (msh, cytokines, facteurs de croissance). L'ensemble de ces donnees met donc en avant l'importance des voies de signalisation des mapk et du facteur de transcription nfb dans la regulation de la melanogenese photo-induite.