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Dissertations / Theses on the topic 'Facteurs de transcription – Dissertations universitaires'
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Touche, Nadège. "Localisation sub-cellulaire des facteurs de transcription STAT5a et b et implication au cours de l'hématopoïèse maligne." Nancy 1, 2004. http://www.theses.fr/2004NAN11301.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcription STAT5a et STAT5b (Signal Transducer and Activator of Transcription) sont impliqués dans la régulation de la prolifération, de la différenciation et/ou de la résistance à l'apoptose, dans les cellules hématopoïétiques, via leur activation par un large panel de cytokines. En outre les protéines ST A T5 sont la cible de nombreuses tyrosines kinases oncogéniques associées à des désordres myéloprolifératifs. En particulier l'activation constitutive de la protéine ST AT5b a été mise en évidence dans la lignée érythroleucémique K562 et des études ont montré le rôle central joué par ST A T5 dans la leucémogenèse induite par la protéine de fusion BCR-ABL responsable de la genèse de la LMC. D'autre part on il existe une activation constitutive des facteurs ST A T5 dans une proportion de LAM allant jusqu'à 80%. Durant ce travail de thèse, nous avons entrepris une étude de la distribution sub-cellulaire des facteurs de transcription ST A T5a et b dans les cellules blastiques de 70 patients (majoritairement des LAM) par une méthode immunocytochimique. Nous avons mis en évidence l'existence d'une localisation nucléolaire des formes r3 tronquées en C-terminal des protéines ST A T5 restreinte aux LAM5 et aux LMC et retrouvée dans les cellules de la lignée K562. D'autre part nous avons montré que cette localisation n'était pas le fait d'une activation par l'oncoprotéine de fusion BCR-ABL, et qu'elle n'était pas affectée par une inhibition de la dégradation protéique dépendante du protéosome. Il s'agit, à notre connaissance, de la première description d'une localisation nucléolaire d'une protéine de la famille ST AT. Celle-ci étant restreinte aux LAM5 et aux LMC, on peut supposé qu'elle puisse prendre part au phénotype leucémique.
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Mastrogiannaki, Maria. "Rôle des facteurs de transcription HIF (Hypoxia Inducible Factors) hépatiques et intestinales dans la régulation de l'homéostasie du fer." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T008.
Full textAbstract:
L’hepcidine est une hormone hépatique qui joue un rôle central dans la régulation de l’homéostasie du fer. Son expression diminue en réponse à la déficience en fer et l’hypoxie, conditions où l’absorption intestinale du fer est augmentée. Les facteurs HIF (Hypoxia Inducible Factors), HIF-1 et HIF-2, sont de facteurs de transcription régulés par le fer et l’hypoxie et sont les régulateurs centraux de l’homéostasie de l’oxygène chez les mammifères. Durant ma thèse, j’ai produit des modèles murins invalidés pour HIF dans le foie ou l’intestin afin d’explorer dans des conditions physiopathologiques le lien entre la signalisation HIF et i) la régulation de l’expression hépatique de l’hepcidine et ii) la régulation de l’absorption intestinale du fer. J’ai montré que, HIF-2 dans le foie n’est pas nécessaire à la répression de l’hépcidine par la déficience en fer ou l’hypoxie. En revanche, j’ai mis en évidence le rôle crucial joué par ce facteur qui, stabilisé en conditions physiopathologiques, peut induire indirectement la repression de l’hepcidine via la production de l’erythropoietine (EPO. Au niveau de l’intestin, j’ai montré que HIF-2, et non HIF-1, contrôle l’absorption intéstinale du fer en régulant l’expression de protéines DMT1 (Divalent Metal Transporter 1) et DCYTB (Duodenal cytochrome b) qui permettent le transport du fer dans les entérocytes. J’ai finalement montré que HIF-2 est impliqué dans la régulation de l’hyperabsorption du fer dans un modèle de souris génétiquement modifiées qui présentent des symptômes d’hémochromatose héréditaire (HH). HH est une maladie génétique caractérisée par un faible taux d’hepcidine et une accumulation excessive de fer dans le foie et d’autres organes. Ainsi, ces résultats suggèrent un rôle prédominant de HIF-2 dans la régulation physiopathologique de l’absorption intestinale du fer et ouvre la perspective de nouveaux traitements thérapeutiques de l’anémie et des maladies reliées à une surcharge en ferHepcidin, a liver expressed hormone, is the central regulator of iron homeostasis and is decreased in response to hypoxia and iron deficiency. In contrast, intestinal iron absorption is upregulated during these conditions. Hypoxia Inducible Factors, HIF-1 and HIF-2, are ironand hypoxia-regulated transcription factors, and the central regulators of mammalian oxygen homeostasis. During my thesis, I generated intestinal-specific and liver-specific HIF knockout mouse models in order to investigate in physiopathological conditions the links between HIF signaling and i) the regulation of hepatic hepcidin expression, and ii) the regulation of intestinal iron absorption. I demonstrated that HIF-2 is dispensable for the regulation of hepcidin in conditions of iron deficiency or hypoxia. However, I showed that HIF-2, upon stabilized in physiopathological conditions, induces hepcidin repression, indirectly through increased Erythropoietin (EPO) production and the regulation of erythropoiesis. In the intestine, I showed that HIF-2, but not HIF-1, controls iron absorption by regulating the expression of DMT1 (Divalent Metal Transporter-1) and DCYTB (Duodenal cytochrome b) proteins which import iron in the enterocytes. Finally, I demonstrated that HIF-2 is involved in the regulation of iron hyper-absorption in a genetic mouse model of hereditary hemochromatosis (HH). HH is a genetic disorder characterized by abnormally low hepcidin expression and excessive iron accumulation in the liver and parenchyma. These findings suggest a prominent role of HIF-2 in the physiopathological regulation of intestinal iron absorption and may provide new therapeutical perspectives for the treatment of anemias and iron overload-associated disorders
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De, Paoli Fédérica. "Rôle des facteurs de transcription NOR1 et TLE1 dans les macrophages alternatifs humains." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S006/document.
Full textAbstract:
L’athérosclérose est une maladie inflammatoire chronique de la paroi vasculaire à évolution lente et silencieuse dont les principaux facteurs de risque sont les dyslipidémies, l’obésité, le diabète et le tabagisme. Les macrophages jouent un rôle crucial dans le développement et la progression de cette maladie. Ils sont issus de la différentiation des monocytes et ils ne constituent pas une population homogène. On peut reconnaître au moins deux sous-populations: les macrophages pro-inflammatoire M1 et les macrophages alternatifs ou M2 qui montrent des propriétés anti-inflammatoires. Les fonctions des macrophages sont régulées par des facteurs de transcription. Mon laboratoire d’accueil a réalisé une analyse transcriptomique sur les facteurs de transcription régulés dans les macrophages alternatifs et parmi les plus induits dans les M2 il y a NOR1 (Neuron-derived Orphan Receptor 1) et TLE1 (Transducin Like Enhancer of Split 1). Pour cette raison nous les avons choisis pour en étudier le rôle dans les macrophages alternatifs humains. Etude de l’expression et rôle de NOR1 dans les macrophages alternatifsNOR1 fait partie de la famille NR4A3 ensemble à deux autres membres, Nurr1 et Nur77 : les trois sont exprimés dans les macrophages au sein de la lésion d’athérosclérose humaine. Cependant l’expression et le rôle de NOR1 dans les macrophages alternatifs n’a pas encore été étudié. En utilisant le model en vitro des macrophages primaires alternatifs humains polarisée en présence de l’IL-4, nous avons démontré que l’expression de NOR1 est induite dans les macrophages M2 chez l’homme, tandis que cette régulation n’est pas vérifiée chez la souris. D’ailleurs l’expression de NOR1 est plus importante dans les zones de la lésion atherosclerotique humaine enrichies par les macrophages CD68+MR+ . En utilisant l’approche de diminution de l’expression de NOR1 par un siRNA spécifique, nous démontrons que l’expression de certaines marqueurs de la polarisation alternative tels que Mannose Receptor (MR), Interleukin-1 receptor antagonist (IL1Ra), CD200 receptor (CD200R), coagulation factor XIII A1 polypeptide (F13A1), interleukin 10 (IL10) and the Peroxisome Proliferator-Activated Receptor (PPARg) sont diminués. De plus, l’expression et l’activité de la matrix metallopeptidase 9 (MMP9) sont induites suite au silencing de NOR1, cette régulation est confirmé par l’approche de surexpression de NOR1 par infection adenovirale. Ces données identifient NOR1 parmi les facteurs de transcription induits dans les macrophages alternatifs humains et permettent de mettre en évidence comme NOR1 soit capable de modifier le phénotype alternatif des macrophages.Etude de l’expression et fonctions potentielles de TLE1 dans les macrophages alternatifsTLE1, appartenant à la grande famille appelée chez la Drosophile avec le nome de Groucho, est connu pour être un répresseur incapable de se fixer directement à l’ADN et que par conséquence agit par interaction avec des autres facteurs de transcription. Aucune donnée n’est disponible quant à l’expression ou aux fonctions de TLE1 dans les macrophages. Nos résultats montrent que TLE1 est parmi les facteurs de transcription les plus exprimés dans les macrophages alternatifs humains. Cette régulation est aussi observée dans les macrophages de souris. Nous avons aussi montré que TLE1 est fortement exprimé dans les zones enrichies en macrophages M2 au sein de la plaque athérosclérotique humaine ainsi que dans les macrophages à phénotype mixte qui infiltrent le tissu adipeux (ATM). Nous avons caractérisé l’expression génique de TLE1 dans les patients obèses avec ou sans diabète et nous montrons que l’expression de TLE1 varie selon le statut métabolique du donneurAtherosclerosis is an inflammatory disease in which macrophages play a crucial role. Macrophages are derived from the differentiation of circulating monocytes and they are not an homogenous population. We can distinguish at least two types of macrophages: The pro-inflammatory M1 macrophages and the alternative anti-inflammatory macrophages M2. Functions of macrophages are controlled by transcriptional factors. My laboratory has realised a transcriptomic analysis of transcriptional factors differently regulated among RM and M2 macrophages. Among the most regulated transcriptional factors there is NOR1 (Neuron-derived Orphan Receptor 1) and TLE1 (Transducin Like Enhancer of Split 1). According to these data, we have chose these two transcriptional factors in order to determine their role in human alternative macrophages. The neuron-derived orphan receptor 1 (NOR1) is induced upon human alternative macrophage polarization and stimulates the expression of markers of the M2 phenotypeThe neuron-derived orphan receptor 1 (NOR1), together with Nur77 and Nurr1, is a member of the NR4A orphan nuclear receptor family expressed in human atherosclerotic lesion macrophages. However, the expression and the functions of NOR1 in human alternative macrophages have not been studied yet. Using an in vitro model of IL-4 polarized primary human alternative macrophages we demonstrate that NOR1 expression increased in alternative M2 macrophages in humans but not in mice. Moreover NOR1 expression is also most abundant in CD68+MR+ alternative macrophage-enriched areas of human atherosclerotic plaques in vivo. Silencing NOR1 expression in human alternative macrophages decreases the expression of a panel of M2 markers such as the Mannose Receptor (MR), Interleukin-1 receptor antagonist (IL1Ra), CD200 receptor (CD200R), coagulation factor XIII A1 polypeptide (F13A1), interleukin 10 (IL10) and the Peroxisome Proliferator-Activated Receptor (PPARg). Moreover, expression and enzymatic activity of MMP9 are induced by NOR1 silencing in M2 macrophages, a regulation confirmed in NOR1 gain of function experiments. These data identify NOR1 among the transcription factors induced during alternative differentiation of human macrophages and demonstrate that NOR1 modifies the alternative macrophage phenotype. Study of TLE1 expression and potential functions in human alternative macrophagesTLE1 is a member of the Groucho family and it is mainly described as a transciptional co-repressor. Although lacking in DNA binding activity of their own, this protein is recruited to gene promoters through interaction with other factors. No data are available regarding the expression or role of TLE1 in macrophages. Our results show that TLE1 is among the highest expressed transcriptional factors in human alternative macrophages. This regulation is verified also in murine macrophages. Histological analysis showed that TLE1 expression in human carotid atherosclerotic lesions in vivo co-localizes with the macrophage marker CD68 and the alternative maker MR. Q-PCR analysis of macrophage-enriched areas isolated by LCM showed that the mRNA levels of TLE1 are higher in zones of alternative CD68+MR+ macrophages compared to zones enriched in CD68+MR- macrophages. Moreover we have shown that TLE1 expression is higher in adipose tissue macrophages (ATM) compared to resting macrophages isolated from blood of the same patients. Finally we have characterised the mRNA expression of TLE1 in obese patients affected or not by diabetes and we have shown that TLE1 expression is influenced by the metabolic state of the patients
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Lahoute, Charlotte. "SRF, un facteur de transcription crucial dans la physiologie des muscles squelettiques : Contribution au vieillissement et à l'hypertrophie." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T009.
Full textAbstract:
Afin de déterminer le rôle de SRF dans la physiologie du muscle adulte, nous avons créé un modèle murin d'invalidation inductible de SRF dans les muscles squelettiques. Après induction de la perte de SRF, les muscles mutants présentent des altérations similaires à celles observées lors du vieillissement musculaire. L'expression de SRF diminuant de façon drastique avec le temps dans des muscles contrôles, cette perte de SRF avec l'âge pourrait contribuer au processus naturel du vieillissement. Afin d'évaluer le rôle de SRF dans l'hypertrophie, j'ai soumis les muscles de souris contrôles et mutantes à une surcharge et montré que seuls les muscles contrôles présentent une réponse hypertrophique. Ce défaut d'hypertrophie dans les muscles mutants est due à une altération de la prolifération et de la fusion des cellules satellites, SRF contrôlant de façon paracrine l'expression de IL6 et IL4. Nos résultats montrent que SRF est impliqué dans le maintien et l'hypertrophie musculaireTo investigate SRF function in adult skeletal muscle physiology, we developed a myofiber-specific and tamoxifen-inducibie SRF Knockout mice model. After induction of SRF loss, mutant muscles exhibits similar alterations to those observed during muscle aging. We also observed an important age-associated decrease in SRF expression in control muscles. Thus SRF loss with age could contribute to the natural muscle aging process. To assess the role of SRF during hypertrophy, I submitted muscles of mutant and control mice to an overload-induced hypertrophy and showed that only controls muscles show a hypertrophic response. The lack of hypertrophy in mutant muscles is due to an impairment of satellite cells proliferation and fusion. In fact, SRF enhance hypertrophy through the control of IL6 and IL4 expression in a paracrine fashion. Our results show that SRF is involved in skeletal muscle maintenance and hypertrophy
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Boutant, Marie. "Fonction et régulation du facteur de transcription COUP-TFII dans les cellules β du pancréas." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T047.
Full textAbstract:
La plasticité du pancréas endocrine est essentielle pour répondre de façon adaptée à une demande accrue en insuline et maintenir un contrôle optimal de l’homéostasie glucidique. L’invalidation génique de COUP-TFII dans les cellules ß pancréatiques à l’état hétérozygote chez la souris adulte conduit à une intolérance au glucose suite à une diminution de la sécrétion d’insuline en réponse au glucose. De plus, l’expression transcriptionnelle de COUP-TFII est inhibée par l’insuline. Au cours de cette thèse, l’étude des souris homozygotes et de la lignée cellulaire INS-1 832/13 nous a permis de mettre en évidence que COUP-TFII participe au maintien du nombre de cellules ! au cours de la période post-natale en activant la voie de signalisation Wnt/ß-caténine/TCF7L2 en réponse au GLP-1. Nous avons aussi mis en évidence une région du promoteur COUP-TFII activée par liaison d’HNF4 !MODY1 en réponse à de faibles concentrations de glucose. La diminution de COUP-TFII en réponse à de fortes concentrations de glucose implique la diminution d’HNF4" dont l’expression génique est sous le contrôle de la voie de signalisation de FOXO1, facteur réprimé par l’insuline. Enfin, nous avons établi une corrélation entre le polymorphisme rs3743462-C situé dans les régions régulatrices amont du gène COUP-TFII et des paramètres glucidiques liés à la sensibilité à l’insuline chez l’homme. Dans la cellule ß, ce variant lie COUP-TFII avec une plus grande affinité et est associé à une diminution de l’expression basale de COUP-TFII conduisant à une plus forte répression par le glucose. L’ensemble de ces données suggèrent que COUP-TFII participe in vivo à l’homéostasie glucidique de la souris et de l’hommeThe development and maintenance of functional pancreatic β cell mass are essentials for an appropriate response to changes in blood glucose levels. Pancreatic β cell knockout of the COUP-TFII (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor II) gene, in adult heterozygous mice, led to glucose intolerance due to an impaired glucose-stimulated insulin secretion. We also reported that COUP-TFII expression is repressed by insulin. During this PhD, using COUP-TFII homozygous knockout mice and the 832/13 INS-1 β cells, our results suggested that COUP-TFII can provide sufficient stimulation of the Wnt/β-catenin/TCF7L2 dependent transcription signaling pathway in response to GLP-1 to allow development of an appropriate β cell mass during the postnatal period. We also identified a DNA region of the promoter that down-regulates COUP-TFII expression by attenuating the activating effect of HNF4 !MODY1 in response to high glucose concentrations through FoxO1 signaling, a major downstream target of the insulin signaling pathway. Finally, individuals from the prospective DESIR cohort carrying the minor C-allele at rs3743462 which is located in these conserved upstream regulatory regions, displayed lower basal levels of circulating insulin and a lower insulin resistance index. In β cells, this polymorphism is associated with a decreased of basal level of COUP-TFII gene activation and an increased repression to high glucose concentrations. We showed that COUP-TFII binds the rs3743462-C oligonucleotide with higher affinity suggesting a possible autorepression of its expression. In conclusion, COUPTFII could be a key regulator of in vivo glucose homeostasis in mice and in human
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Bidon, Baptiste. "Mediator and NER factors in transcription initiation." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ093/document.
Full textAbstract:
La synthèse d’ARN messagers résulte d’une cascade d’évènements temporellement et spatialement orchestrée. Au moment de l’initiation de la transcription, divers facteurs tels que les facteurs généraux de transcription, le complexe Médiateur, des co-activateurs, des facteurs de remodelage de la chromatine ainsi que l’ARN polymérase II sont recrutés au niveau de la région promotrice du gène. Certains facteurs de la voie NER de réparation de l’ADN sont également recrutés. En utilisant des cellules de patients porteurs de mutations dans les gènes MED12 (sous-unité du Médiateur) ou XPC (facteur initiant la voie NER), nous avons pu étudier le rôle de ces protéines dans la transcription. Les patients MED12 sont notamment caractérisés par une lourde déficience intellectuelle et des malformations congénitales. Nous avons montré que MED12 est impliqué dans le contrôle de certains gènes de réponse immédiate comme JUN, qui contribue notamment au développent et à la plasticité cérébrale. L’expression de ce dernier est affectée par les mutations de MED12, mais différemment en fonction de la position de la mutation, apportant une possible indication sur l’origine des variations phénotypiques observées chez les patients. En parallèle, les patients XPC se caractérisent par une forte photosensibilité. Nous avons montré que la protéine XPC, en collaboration avec le facteur E2F1, est impliquée dans le recrutement de l’histone acetyl-transférase GCN5 au niveau du promoteur d’un certain nombre de gènes. Cette dernière permet notamment l’a modification de l’environnement chromatinien, en coopération avec le facteur général de transcription TFIIH et participe ainsi à l’initiation de la transcription. En plus d’approfondir la compréhension des mécanismes régissant la transcription, ces résultats ont permis de mieux comprendre l’étiologie des maladies associées aux mutationsThe synthesis of messenger RNA is a highly regulated process. During transcription initiation, a large number of proteins are recruited to gene promoter, including the RNA polymerase II, general transcription factors, co-activators, chromatin remodellers and the Mediator complex. Some DNA repair factors from the NER pathway are also recruited. Using cells derived from patients bearing mutations in either MED12 gene or XPC gene, we studied the roles of such proteins in transcription. MED12 patients are mostly characterised by intellectual disability and developmental delay. We showed that MED12 is implicated in the transcription regulation of immediate early genes like JUN, known for its role in neurological development and neuronal plasticity. JUN expression is markedly altered by MED12 mutations. We also showed that the position of the mutation influences this alteration, bringing possible explanation for inter-patients symptom variability. Meanwhile, XPC patients are mostly characterized by photosensitivity. We showed that XPC protein, which engages one of the NER pathways, is implicated in chromatin post-translational modification. Together with E2F1, it helps the recruitment of GCN5 acetyl-transferase to promoter of a certain set of genes. On the promoter, GCN5 notably cooperates with TFIIH to modify the chromatin environment during transcription initiation. In addition to help the comprehension of the transcription mechanisms, these results bring knew insight into the aetiology of mutations associated diseases
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Chantôme, Aurélie. "Régulation de la NO synthase inductible dans des cellules épithéliales mammaires murines par des récepteurs à domaine TIR." Dijon, 2004. http://www.theses.fr/2004DIJOMU03.
Full textAbstract:
Les cellules EMT-6J produisent 3 fois plus de NO que les cellules EMT-6H en réponse à l'IL-1β ou aux LPS, effet corrélé avec l'activation de NF-kB. La dégradation des lkB, le transport nucléo-cytoplasmique de NF-kB ainsi que son activité de liaison à l'ADN sont similaires dans les 2 clones. En revanche, la phosphorylation des résidus sérines de p65 est observée dans les cellules EMT-6J et non dans les cellules EMT-6H. Cette phosphorylation est inhibée par un inhibiteur de l'activité CKII. La déplétion en CKII diminue l'activité transcriptionnelle de NF-kB ainsi que la transcription du gène NOSII dans les cellules EMT-6J pour revenir au niveau observé dans les cellules EMT-6H traitées dans les même conditions. Ces résultats démontrent que la phosphorylation de p65 médiée par la CKII potentialise l'activité du facteur in vivo. Cette modification post-traductionnelle de p65 permet d'augmenter la transcription du gène NOSII dans les cellules tumorales stimulées par de l'IL-1β ou des LPS.
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Laurent, Benoît. "Fonctions et modes d'action du facteur de transcription Gfi-1B au cours de l'érythropoïese normale et pathologique." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T029.
Full textAbstract:
L'érythropoïèse, processus de formation des érythrocytes à partir de cellules souches hématopoïétiques, requiert l'activation d'un programme transcriptionnel spécifique. Le facteur de transcription répresseur Gfi-1B est essentiel au bon déroulement de l'érythropoïèse puisque les souris invalidées pour ce gène meurent in utero par absence totale d'hématies. L'objectif de mes recherches doctorales était de caractériser les fonctions et les modes d'action du facteur de transcription Gfi-1B au cours de l'érythropoïèse adulte. Mes résultats montrent : l/ que l'expression de Gfi-1B augmente dans les stades initiaux et reste élevée jusqu'aux stades terminaux de la différenciation érythroïde adulte humaine. La diminution du recrutement des co-répresseurs de Gfi-1B au niveau de son propre promoteur permet le maintien de son activité transcriptionnelle au cours de la différenciation érythroïde. Il que la protéine HMGB2 est indispensable à l'érythropoïèse en contrôlant le niveau d'expression de Gfi-1B. 3/ que Gfi-lB est indispensable à l'érythropoïèse au niveau des progéniteurs bipotents érythro-mégacaryocytaires en régulant la signalisation TGF-(3 via le contrôle de l'expression du récepteur de type III du TGF-P, un gène cible de Gfi-1B. 4/ que la répression transcriptionnelle par le complexe LSDl/CoREST/HDAC nécessite la méthylation d une isoforme de Gfî-lB. De manière intéressante, une diminution d'expression de Gfi-1B et de son isoforme ont été mis en évidence chez la plupart des patients myelodysplasiquesErythropoiesis, process of erythrocytes production from hematopoietic stem cells, involves the activation of a specific transcriptional program. The transcriptional represser Gfi-1B is essential for erythropoiesis as mice knocked-out for this gene die in utero because of an absence of red cells. The aim of my doctoral researches was to study and characterize functions and actions of the transcription factor Gfi-1B during adult erythropoiesis. My results have shown: II that Gfi-1B expression increases strongly during erythroid differentiation and stays high till terminal stages. Decrease of Gfi-1B co-repressor recruitment on its own promoter allows its transcriptional activity throughout erythroid differentiation. 2/ that HMGB2 protein is necessary for erythropoiesis by controlling Gfi-1B expression 3/ that Gfi-1B is necessary at the bipotent erythro-megakaryocytic progenitor stage by regulating TGF-P signalling via the control of the expression of TGF-P receptor type III, a Gfi-1B target gene. 4/ that transcriptional repression by the LSDl/CoREST/HDAC complex involves the methylation of a Gfi-1B isoform. Interestingly, a decrease hi the Gfi-1B expression and its isoform was shown in most of the erythroid progenitors from myelodysplasic patients
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Coumailleau, Pascal. "I - clonage et expression d'un gene de la famille hsp90 au cours du developpement chez l'amphibien urodele pleurodeles waltlIi - signification de l'interaction entre la proteine hsp90 et deux facteurs de transcription a motif helice-boucle-helice(hlh)." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S029.
Full textAbstract:
Cette these a porte sur l'etude du role de certains membres de la famille des proteines de stress de 90kda (hsc90 ou hsp90) exprimes dans les conditions physiologiques. Cette analyse a ete realisee dans un premier temps in vivo par le clonage et l'etude de l'expression d'un gene hsc90 (strictement constitutif) au cours de l'ovogenese et de l'embryogenese chez l'amphibien pleurodeles waltl. Ces resultats nous ont permis d'analyser la distribution du messager hsc90 au cours de ces deux etapes-cles du developpement. La fabrication d'un anticorps dirige specifiquement contre hsc90 nous a permis de determiner la localisation cellulaire et tissulaire de cette proteine. Le role de cette proteine a ete ensuite envisagee au cours de l'ovogenese en inhibant la fonction de la proteine par microinjection d'anticorps. Une deuxieme approche, cette fois in vitro, nous a permis d'aborder le role de la proteine hsp90 exprimee dans un systeme acellulaire lors de son interaction avec des facteurs de transcription de la famille hlh (helix-loop-helix), facteurs pour la plupart impliques dans les processus de l'embryogenese. Le premier facteur etudie est le recepteur de la dioxine (dr) appele ainsi en raison de sa forte affinite notamment pour la dioxine, une substance xenobiotique et hautement cancerigene. Les resultats permettent de delimiter clairement un domaine sur le recepteur responsable a la fois de l'affinite pour la dioxine et de la proteine hsp90. Nos resultats suggerent fortement des proprietes de chaperon pour hsp90. La proteine sim (single minded protein) est un autre facteur de transcription a motif bhlh dont les etudes recentes suggerent des fonctions importantes dans la neurogenese. Nos resultats permettent de mettre en evidence que sim est une autre proteine cible d'hsp90 et que cette derniere pourrait reguler la fonction du facteur sim.
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Allègre-Cultot, Jennifer. "Analyse de la régulation du facteur de transcription E2F1 par cIAP1." Thesis, Bourgogne Franche-Comté, 2017. http://www.theses.fr/2017UBFCI013/document.
Full textAbstract:
CIAP1 (cellular Inhibitor of Apoptosis 1) possède une activité E3-ubiquitine ligase et présente des propriétés oncogéniques. Récemment, notre équipe a montré que cIAP1 pouvait réguler l’activité du facteur de transcription E2F1. L’objectif de mon travail de thèse était d’approfondir les mécanismes de cette régulation et d’évaluer l’importance de la coopération cIAP1-E2F1 dans l’activité oncogénique de cIAP1. J’ai démontré une interaction d’E2F1 avec la poche hydrophobe du domaine BIR3 de cIAP1. J’ai par ailleurs démontré l’importance de la première hélice α de ce domaine pour l’interaction de cIAP1 avec E2F1 et avec les autres protéines partenaires de cIAP1 capables de lier la poche hydrophobe du domaine BIR3. De plus, j’ai participé au travail montrant pour la première fois une régulation d’E2F1 par une ubiquitinylation non dégradative. cIAP1 permet la conjugaison de chaînes d’ubiquitines de type K63 sur les lysines 161 et 164 d’E2F1. Cette modification post-traductionnelle est indispensable à la stabilisation de la protéine lors d’un stress génotoxique et elle permet le recrutement du facteur de transcription sur les promoteurs des gènes cibles. Enfin, l’analyse des propriétés oncogéniques de cIAP1 n’ont pas permis, à ce jour, d’évaluer l’importance de la coopération cIAP1-E2F1. Cependant, nous avons montré l’importance du domaine BIR1 pour les propriétés oncogéniques de cIAP1 (domaine nécessaire à l’interaction de cIAP1 avec l’adaptateur moléculaire TRAF2)The cellular inhibitor of Apoptosis 1 (cIAP1) behaves as an E3 ubiquitin ligase and has oncogenic properties. Previously, our team has shown that cIAP1 can regulate the E2F1 transcription factor activity. My research project has been focused on deepening our current knowledge on this interaction. Firstly, we characterized the E2F1-cIAP1 interaction, then we analyzed the regulation of E2F1 by cIAP1 and finally assessed the importance of the cIAP1-E2F1 interaction for the oncogenic properties of cIAP1. I have demonstrated a interaction of E2F1 with the hydrophobic pocket of the BIR3 domain of cIAP1. Moreover, I highlighted that the alpha 1 helix of the BIR3 domain is mandatory for the stability of this pocket. Moreover, we discovered an ubiquitination on lysine 161 and 164 of E2F1 by cIAP1. This ubiquitination is essential for the stability and transcriptional activity of E2F1. Finally, it appears that the cIAP1 BIR1 domain that is required for the interaction with TRAF2 is involved in its oncogenic properties
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Mazuy, Claire. "Etude de l’interaction entre le récepteur nucléaire FXR et le facteur de transcription FOXA2 dans le foie." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S055/document.
Full textAbstract:
Le foie est un organe clef dans la régulation du métabolisme énergétique de l’organisme. La superfamille des récepteurs nucléaires y joue un rôle primordial de senseur de l’environnement métabolique. Parmi ces récepteurs nucléaires, le récepteur des acides biliaires FXR participe aux mécanismes de régulation de l’activité du foie à travers son action sur les métabolismes des acides biliaires, des glucides et des lipides. FXR est devenu ainsi une cible thérapeutique potentielle dans le traitement de nombreuses maladies impliquant un désordre métabolique comme les cholestases, le diabète de type 2 ou la stéatohépatite non-alcoolique. Malgré des résultats prometteurs dans le traitement de la stéatohépatite non-alcoolique, le traitement de patients avec un agoniste de FXR, le INT747, semble augmenter la concentration plasmatique du LDL-Cholestérol et diminue la concentration du HDL-Cholestérol suggérant un risque accru de développement d’athérosclérose. Ces effets sur le profil lipidique sont le frein majeur du développement clinique de ses agonistes. Les mécanismes moléculaires impliqués dans la régulation par FXR de nombreuses voies comme le métabolisme des lipides et du cholestérol sont peu explorés et peu compris. Compte-tenu de ces informations, il est d’autant plus intéressant d’approfondir les connaissances de ces mécanismes et d’identifier des facteurs ou de nouveaux partenaires capables de moduler l’activité transcriptionnelle de FXR plus spécifiquement dans le cadre du contrôle du métabolisme des lipides et du cholestérol. L’un des facteurs de transcription connu comme régulateur majeur de ces voies métaboliques dans le foie est le facteur de transcription de la famille forkhead FOXA2. Ce facteur de transcription, dont l’activité est dépendante des conditions physiologiques, est activé par le glucagon et inhibé par l’insuline. De plus, c’est également un régulateur du métabolisme des acides biliaires, du cholestérol et des lipides.L’objectif de cette thèse a été d’étudier l’interaction entre les voies de signalisation de FXR et de FOXA2 dans différentes lignées cellulaires d’hépatocytes humains ou murins et dans le foie. Nous avons établi que FOXA2 et FXR sont colocalisés sur la chromatine des cellules HepG2 et dans le foie de souris à proximité de gènes impliqués dans la régulation du métabolisme des lipides et du cholestérol. Ces zones de cofixation de FXR et de FOXA2 présentent très peu de motifs de fixation de FOXA2 suggérant l’implication d’autres motifs de fixation non connus ou un mécanisme de type « tethering ». Nous avons montré que la fixation de FOXA2 à ces zones de cofixation avec FXR est augmentée par l’activation de FXR par son agoniste, le GW4064, évoquant une potentielle interaction entre ces deux facteurs. Nous avons démontré que ces deux facteurs interagissaient physiquement et que FOXA2 est un répresseur de l’activité transcriptionnelle de FXR à travers l’utilisation de différentes approches et modèles cellulaires. Finalement, dans les hépatocytes primaires de souris, FOXA2 est impliqué dans la répression de l’activité transcriptionnelle de FXR par le glucagon sur le gène Shp.L’ensemble de ce travail met en évidence pour la première fois la répression de l’activité de FXR par le facteur de transcription caractéristique du jeûne FOXA2 à travers un mécanisme moléculaire suggérant une transrépression de type «tethering». Ces résultats présentent un mécanisme inédit par lequel l’activité de FXR peut être modulée par le statut nutritionnel de façon gène-spécifiqueThe liver is a key regulator of whole-body energy metabolism. The nuclear receptor super-family plays a leading role in the metabolic sensing of the liver. Among the nuclear receptors, the bile acid nuclear receptor FXR contribute to the modulation of liver activity in particular through the regulation of bile acid, lipids and glucose homeostasis. Consequently, FXR became a potential therapeutic target for many diseases implicated metabolic disorder such as cholestasis, type 2 diabete or Non-Alcoholic Steatohepatitis (NASH). Despite promising results especially on NASH, patient treatment with FXR agonist the INT747 seems to increase LDL-Cholesterol plasma concentrations together with a decreased concentration of HDL-Cholesterol suggesting a higher risk to develop atherosclerosis. These effects on plasma lipid profile are the major break against the development of agonists in clinics. Giving the poor understanding and knowledge of the molecular mechanisms which govern FXR regulation of activity on various signaling pathways, it is of major interest to find new partners and regulators of FXR and especially on lipid and cholesterol homeostasis. One of the transcription factor known to be active in the control of these signaling pathways in the liver is the forkhead box transcription factor FOXA2. This transcription factor whose activity is dependent of physiological conditions is activated by glucagon and inhibited by insulin. In addition, this factor is known to regulate bile acid, cholesterol and lipid metabolism, functions very close from FXR activities in the liver.The objective of this PhD was to study the interaction between FXR and FOXA2 signaling pathways in different hepatic cells lines from human or mouse origin and in the liver. We established that FOXA2 and FXR are colocalised in HepG2 cells and liver chromatin near genes implicated in the lipid and cholesterol metabolism. These FXR/FOXA2 cobinding zones present few consensus FOXA2 response elements suggesting the implication of non consensus binding motifs or a “tethering” mechanism. We show that FOXA2 binding to FXR/FOXA2 cobinding zones is increased when FXR is activated and/or more present in the chromatin evoking a potential interaction between these two factors. We demonstrate that FXR and FOXA2 interact physically and that FOXA2 is a repressor of FXR transcriptional activity using different approaches and cellular models. Finally, we show that FOXA2 is implicated in glucagon-induced repression of FXR transcriptional activity on Shp gene.To conclude, our results show for the first time that the fasting key regulator of lipid and cholesterol homeostasis FOXA2 is a repressor of FXR transcriptional activity through a plausible mechanism involving “tethering” process. This work gives a novel mechanism by which FXR activity can be modified by nutritional status in a gene-specific manner
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Duployez, Nicolas. "Etude des altérations génomiques acquises dans les leucémies aiguës myéloïdes impliquant le core binding factor." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S037/document.
Full textAbstract:
Les gènes RUNX1 et CBFB codent pour les sous-unités du core binding factor (CBF), facteur de transcription hétérodimérique essentiel de l’hématopoïèse définitive. La dérégulation du CBF est l'une des anomalies les plus fréquemment rencontrées dans les hémopathies malignes. Puisque la perturbation seule du CBF est insuffisante au développement d’une leucémie aiguë myéloïde (LAM), les LAM impliquant le CBF sont considérées comme des modèles de leucémogénèse multi-étapes, nécessitant la coopération d’anomalies génétiques additionnelles.Dans ce travail, nous nous sommes intéressés aux LAM de type CBF, caractérisées soit par une t(8;21)/fusion RUNX1-RUNX1T1 soit par une inv(16)/fusion CBFB-MYH11, ainsi qu’aux LAM avec mutations germinales de RUNX1 (définissant la thrombopénie familiale avec prédisposition aux leucémies aiguës ou FPD/AML). Afin d’identifier des anomalies additionnelles, nous avons étudié les prélèvements de patients atteints de LAM CBF inclus dans les essais français ELAM02 (0-18 ans) et CBF2006 (18-60 ans) par séquençage à haut débit (n=215) et single nucleotide polymorphism-array (n=198). Les échantillons de 25 individus atteints de FPD/AML (issus de 15 familles), diagnostiqués entre 2005 et 2014, ont également été séquencés au stade thrombopénique et au moment de la transformation en leucémie aiguë.Dans les LAM CBF, les mutations activatrices des voies tyrosines kinases (TK) sont les événements les plus fré-quents quel que soit le sous-type de LAM CBF [t(8;21) ou inv(16)], comme cela a déjà été rapporté dans d’autres études. En revanche, les mutations affectant les gènes du remodelage chromatinien ou du complexe de la cohésine sont identifiées à des fréquences élevées (41% et 18% respectivement) dans les LAM avec t(8;21) tandis qu’elles sont pratiquement absentes dans les LAM avec inv(16). Dans les LAM avec t(8;21), la coexistence de ces mutations avec les mutations de type TK est associée à un pronostic défavorable suggérant une synergie entre ces événements. D'autres événements fréquemment retrouvés incluent les mutations de ZBTB7A et DHX15 dans les LAM avec t(8;21) (20% et 6% respectivement) et les délétions/mutations de FOXP1 dans les LAM avec inv(16) (7%). Enfin, nous avons décrit la perturbation de CCDC26 comme une possible lésion associée à une signalisation aberrante des TK dans les LAM CBF (4,5% des cas).Dans les FPD/AML, l'analyse mutationnelle a révélé l'acquisition d'un deuxième événement impliquant RUNX1 chez tous les patients ayant développé une LAM. Ce deuxième événement correspondait soit à une mutation somatique du second allèle de RUNX1 soit à la duplication de la mutation germinale de RUNX1 (par perte d'hétérozygotie sans anomalie du nombre de copies ou trisomie 21 acquise). En pratique clinique, cela suggère que la présence de deux mutations différentes de RUNX1 ou d'une seule mutation avec un ratio allélique supérieur à 50% chez un patient atteinte de LAM doit alerter sur la possibilité d’un syndrome FPD/AML sous-jacentRUNX1 and CBFB encode subunits of the core binding factor (CBF), a heterodimeric transcription factor required for the establishment of definitive hematopoiesis. Deregulation of the CBF is one of the most frequent aberrations in hematological malignancies. Since CBF disruption alone is insufficient to induce acute myeloid leukemia (AML) on its own, AML with CBF involvement is considered as a model of multistep leukemogenesis requiring additional genetic aberrations.Here, we focused on acute myeloid leukemia (AML) with t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1 fusion and AML with inv(16)/CBFB-MYH11 fusion, reported together as CBF AML, as well as AML with germline RUNX1 mutation (defining the familial platelet disorder with propensity to develop leukemia or FPD/AML).In order to explore additional genomic aberrations, we performed comprehensive genetic profiling in CBF AML patients enrolled in the French trials ELAM02 (0-18 years) and CBF2006 (18-60 years) using both high-throughput sequencing (n=215) and single nucleotide polymorphism-array (n=198). In addition, we sequenced samples from 25 individuals with FPD/AML (15 pedigrees) diagnosed between 2005 and 2014 at thrombocyto-penic stage and during leukemic progression.In CBF AML, mutations in genes activating tyrosine kinase (TK) signaling were frequent in both subtypes as previously described by others. By contrast, we found mutations in genes encoding chromatin modifiers or members of the cohesin complex with high frequencies in t(8;21) AML (41% and 18% respectively) while they were nearly absent in inv(16) AML. Interestingly, such mutations were associated with a poor prognosis in patients with TK mutations suggesting synergic cooperation between these events. Other events included ZBTB7A and DHX15 mutations in t(8;21) AML (20% and 6% respectively) and FOXP1 deletions or truncating mutations in inv(16) AML (7%). Finally, we described CCDC26 disruption as a possible new lesion associated with aberrant TK signaling in this particular subtype of leukemia (4.5% of CBF AML).In FPD/AML, mutational analysis revealed the acquisition of a second event involving RUNX1 in all patients with AML including somatic mutation of the second allele or duplication of the germline RUNX1 mutation through copy-neutral loss of heterozygosity and trisomy 21. In clinical practice, we suggest that the occurrence of two different RUNX1 mutations or a single RUNX1 mutation with a variant allele frequency higher than 50% in a patient with AML should alert about the possibility of FPD/AML
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Perilhou, Anaïs. "Le facteur de transcription COUP-TFII, un nouvel acteur dans le contrôle de l'homéostasie glucidique dans le foie et le pancréas." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T028.
Full textAbstract:
La régulation de l'homéostasie glucidique est notamment contrôlée au niveau génique. Nous avions montré que la délétion de COUP-TFII (Chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor II) dans les cellules insuliniques chez la souris entraîne un défaut de sécrétion d'insuline. Ce travail montre que 1) l'expression de COUP-TFII est contrôlée négativement par le glucose et l'insuline dans les cellules bêta du pancréas et les hépatocytes in vivo et in vitro via la signalisation des facteurs ChREBP et Foxo-1; 2) COUP-TFII inhibe la transcription, le contenu et la sécrétion d'insuline et Festérifïcation des acides gras dans la lignée de cellules bêta INS-1 832/13; 3) il existe une activation réciproque entre l'expression des gènes COUP-TFII et HNF-4α (MODY-1) dans les cellules bêta. Ces résultats permettent de proposer COUP-TFII comme une acteur majeur dans le contrôle de l'homéostasie glucidique à jeun, et donc potentiellement dans des pathologies comme le diabète de type 2Metabolic pathways concerned in the regulation of glucose homeostasis in liver and pancreas are precisely controlled at gene level. We showed that COUP-TFII (Chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor II) deletion from pancreatic beta cells in heterozygous mice led to abnormal insulin secretion. This work reveals that 1) COUP-TFII expression is negatively controlled by glucose and insulin in pancreatic beta cells and hepatocytes, in vivo and in vitro, via ChREBP and Foxo-1 signaling; 2) COUP-TFII inhibates insulin genes transcription, as well as insulin content and insulin secretion in beta 832/13 ENS-1 cell line, and decreases the fatty acid esterification capacity in these cells; 3) COUP-TFII and HNF-4alpha (MODY-1) activate one another their expression in pancreatic beta cells. These results conduct and argue to propose an important contribution of COUP-TFII hi the control of glucose homeostasis in the fasted state, and potentially in pathologies as type 2 diabetes
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Auvray, Céline. "Fonction des homéoprotéines HOXC4 et HOXB4 dans l'expansion des cellules souches hématopoïétiques humaines et étude de leurs cibles moléculaires." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077101.
Full textAbstract:
L'obtention d'un nombre élevé de cellules souches hématopoïétiques (CSH) est une étape importante pour la mise en œuvre des greffes de moelle osseuse ou de protocoles de thérapie cellulaire dans des hémopathies ou des tumeurs solides. L'équipe avait établi un modèle d'expansion des CSH humaines par co-culture avec des cellules stromales sécrétant l'homéoprotéine HOXB4. Mon travail de thèse a consisté à améliorer ce modèle par l'utilisation de HOXC4, homéoprotéine codée par un paralogue du gène HoxB4. J'ai montré que la transduction passive de HOXC4 permet, de façon comparable à HOXB4, d' amplifier les progéniteurs matures (CFC), immatures (LTC-IC) et les cellules capables de reconstituer de l'hématopoïese in vivo chez les souris immunodéficientes (SRC). Afin d'analyser les cibles moléculaires précoces de ces deux homéoprotéines durant l'expansion des CSH, nous avons effectué une analyse comparative des transcriptomes de cellules CD34+ brièvement exposées ou non à l'action des protéines HOXB4 ou HOXC4. Nous avons montré que les gènes régulés par ces deux facteurs sont similaires, corroborant nos précédents résultats. Ces gènes sont, pour la plupart, impliqués dans des fonctions cellulaires majeures telles que la synthèse protéique, la maturation des ARN, le cycle cellulaire et la réplication de l'ADN. La poursuite de ce projet consiste en l'analyse de certains de ces gènes, en particulier, le gène WDR50 dont l'orthologue, Wicked, chez la drosophile a pour rôle de maintenir l'état souche des cellules germinales. Chez l'homme, des études fonctionnelles dans des cellules leucémiques, dans les CSH et lors de la différenciation des cellules CD34+ sont en coursIn the aim to improve amplification of immature cells without modifying their capacity of multi-lineage differentiation, the laboratory developed, initially, an original method to expand human hematopoietic stem cells (HSC) in co-culture with mouse stromal cells line that constitutively produce the human HOXB4 homeoprotein. In order to improve this expansion, I analyzed the effect of HOXC4, a paralog of HOXB4 on thé same expansion model. In this study, we have shown that our approach consisting in transferring HOXC4 proteins into HSCs allows the expansion, in the same range than HOXB4, of all hematopoietic populations : mainly mature (CFC) and immature (LTC-IC) progenitors and cells able to reconstitute in vivo hematopoiesis on immunodeficient mice (SRC). The molecular mechanisms and the target genes in particular by which HOXB4 or HOXC4 act, are not clearly established. In that aim, comparative transcriptomic analysis of CD34+ cells exposed or not to HOXB4 or HOXC4 was performed. The results, first, highlight similar molecular mechanisms for both homeoproteins. These proteins induce the same trancriptomic profile and modify a set of genes involved in major cellular function such as protein synthesis, ARN processing, cell cycle and DNA replication. Second, we also identified genes previously described in stem cell expansion or maintenance in several tissues and species. Among them, we started to study WDR50 in human hematopoietic cells whose ortholog in Drosophila maintains germinal stem cells in the stem fate. In human, functional studies in leukemia cells, in HSCs and during the differentiation of CD34+cells are in progress
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Singh, Amita. "Involvement of TFIIH in NER factors mediated chromatin remodeling." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ108/document.
Full textAbstract:
La transcription fidèle d’un gène lors de son activation nécessite l’assemblage d’un ensemble de protéines autour du promoteur. Parmi ces protéines, le complexe TFIIH joue un rôle central et important au travers de ses sous-unités enzymatiques. Des mutations dans les sous-unités XPB, XPD et p8/TTD-A de TFIIH conduisent à trois maladies autosomiques récessives distinctes : xeroderma pigmentosum (XP), parfois associés avec le syndrome de Cockayne (XP/CS) et la trichothiodystrophie (TTD). En étudiant différentes mutations dans ces trois sous unités de TFIIH, nous avons montré que chaque mutation analysée conduit à une dérégulation transcriptionnelle spécifique du gène RARβ2, gène cible des RAR. L’intégrité architecturale et enzymatique de TFIIH conditionne le bon recrutement du complexe TFIIH et également des facteurs de réparation par excision de nucléotides (NER). TFIIH muté perturbe leur recrutement et par conséquence compromet le remodelage de la chromatine médiée par les facteurs NER tels que les modifications post-traductionnelles (PTMs) des histones, l’induction des cassures de l’ADN, la déméthylation de l’ADN et les boucles de chromatine. Par conséquence, en plus de ses activités enzymatiques, TFIIH forme une plate-forme afin de recruter les facteurs NER et orchestres les fonctions connexes de la transcription. Cette pénétrance variable parmi les mutants donne lieu à un gradient de phénotype observé chez les patients TTD, XP ou XP/CSFidelity in transcription of the gene requires assembly of set of proteins around the promoter,upon gene activation. The TFIIH complex is central among these proteins and plays a key role through its enzymatic subunits. Mutations in TFIIH subunits XPB, XPD and p8/TTD-A leads to three distinct autosomal recessive disorders: xeroderma pigmentosum (XP), sometimes associated with Cockayne’s syndrome (XP/CS) and trichothiodystrophy (TTD). By studying the different mutation in these three subunits of TFIIH from mentioned genetic disease models, we have shown that each mutation analyzed led to a specific transcriptional dysregulation of theRAR-target gene RAR 2. The architectural and enzymatic integrity of TFIIH condition the appropriate recruitment of TFIIH complex and further the arrival of the Nucleotide ExcisionRepair (NER) factors. By disturbing their recruitment, mutated TFIIH consequently compromised the chromatin remodeling mediated by NER factors such as histones posttranslational modifications (PTMs), DNA breaks induction, DNA demethylation and genelooping. Hence it can be concluded that in addition to its enzymatic activities, TFIIH provide a platform to recruit the NER factors and orchestrates the related functions in transcription. Such varying penetrance among mutants gives rise to a phenotype gradient as observed in TTD, XPor XP/CS patients
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Ziani, Salim. "Etude du complexe de réparation par excision de nucléotides." Thesis, Strasbourg, 2014. http://www.theses.fr/2014STRAJ125/document.
Full textAbstract:
Mon travail de thèse s’est axé sur deux projets, le premier a porté sur l’étude fonctionnelle de la sous unité TTDA de TFIIH, un facteur général de transcription impliqué dans la réparation NER, afin d’identifier de nouveaux partenaires de la sous unité TTDA nous avons réalisé un crible double hybride et ainsi sélectionné ZBTB38, une protéine impliqué dans la répression de gènes portant des methylations CpG, nous avons confirmé son interaction avec TTDA, et son implication dans la réparation NER. La deuxième partie a porté sur l’étude du recrutement des facteurs NER sur la chromatine en absence de lésions de l’ADN. En utilisant le système rapporteur LacO/LacR nous avons observé que l’immobilisation de l’un des facteurs NER sur la chromatine non endommagée permet l’assemblage du PInC de façon séquentielle et ordonnée. Nous avons aussi révélé que TTDA, connue pour être impliquée dans la trichothiodystrophie, joue un rôle clé dans la complétion du PInCDuring my thesis I worked on two projects, the first one was focused on the functional study of TTDA subunit of TFIIH, which is a general transcription factor involved in NER, we made a double hybrid screening to identify new interactants of TTDA subunit, and we could select ZBTB38, which is known to be implicated in methyl dependant gene repression; we confirmed its interaction with TTDA and its involvement in NER. The second project was entiteled Molecular Insights into the formation of the nucleotide excision repair complex revealed on undamaged chromatin. we analyzed the formation of the PInC independently of DNA damage by using the LacO-LacR system. We observed a sequential and ordered self-assembly of the PInC operating upon immobilization of individual NER factors on undamaged chromatin and mimicking that functioning on a bona fide NER substrate. We also revealed that the recruitment of TTDA, involved in Trichothiodystrophy disorder, was key in the completion of the PInC
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Berlin, Irina. "Role of BRN2 transcription factor in proliferation and migration of the melanocyte lineage and implication of β-catenin and Dicer in the response of melanocytes to UV irradiation." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T046.
Full textAbstract:
Les mélanocytes protègent lʼorganisme contre les effets délétères des rayonnements UV, en synthétisant de la mélanine. Leur transformation maligne entraine le développement de mélanomes, cancers particulièrement agressifs et résistants aux traitements. De nombreuses protéines, telles que BRN2, β-caténine et Dicer, impliquées dans divers processus cellulaires, sont dérégulées dans le mélanome. Cette thèse est consacrée à lʼimportance du statut de phosphorylation de BRN2 pour la prolifération et la migration du lignage mélanocytaire et à lʼimplication de BRN2, β-caténine et Dicer dans la réponse des mélanocytes à lʼexposition aux rayonnements UV. Premièrement, nous avons montré que les formes non phosphorylées (BRN2AA) et phosphorylées (BRN2TS) de BRN2 conduisent à une régulation différente de la prolifération et de la migration des mélanocytes. De plus, nous avons étudié la liaison et la transactivation de BNRN2AA et BRN2TS à MITF et PAX3, deux cibles de BRN2 impliquées dans la mise en place et la transformation du lignage mélanocytaire. La transcription de MITF est réprimée de façon similaire par les deux formes de BRN2, cependant, la transcription de PAX3 est induite par BRN2TS mais réprimée par BRN2AA. La migration et la prolifération des mélanocytes sont donc contrôlées par le statut de phosphorylation de BRN2 via PAX3 et par la quantité totale de BRN2 via MITF. Deuxièmement, nous avons évalué la possible régulation de BRN2 suite à une stimulation UV des mélanocytes. Nous avons démontré que l'expression de BRN2 est régulée au niveau transcriptionnel mais aussi au niveau du transcrit après irradiation UV. Par ailleurs, nous avons montré que BRN2 contrôle la transcription de Dicer et que BRN2 et Dicer créent une boucle de rétroaction positive qui régule l'expression des deux gènes. Troisièmement, nous nous sommes intéressés à lʼimportance de β-caténine dans la régulation de lʼexpression de Dicer lors de la réponse des mélanocytes à lʼexposition aux rayons UV. Nous avons montré que lʼexposition des mélanocytes aux rayons UV conduit à (i) lʼinhibition de lʼexpression de Dicer associé (ii) à la stabilisation et lʼaccumulation de β-caténine dans le noyau et (iii) lʼinduction de la pigmentation due à la répression de Dicer. Tous ces événements représenteraient dʼimportants processus de melanogenèse suite à une exposition aux rayonnements UVMelanocytes protect the organism against the deleterious effects of UV rays by synthesizing melanin. The malignant transformation of these cells leads to melanoma, a particularly aggressive cancer refractory to treatment. Several proteins, such as BRN2, β-catenin and Dicer, involved in various cellular processes, were shown to be misregulated in melanoma. This PhD thesis is focused on the importance of BRN2 phosphorylation status on the proliferation and migration of the melanocyte lineage and on the implication of BRN2, β-catenin and Dicer in the response of melanocytes to UV-exposure. First, we showed that the non-phosphorylable (BRN2AA) and phosphorylable (BRN2TS) form of BRN2 leads to differential control of proliferation and migration of melanocyte lineage. Furthermore, we investigated the binding and transactivation of BRN2AA and BRN2TS on MITF and PAX3, two targets of BRN2 involved in the establishment and transformation of the melanocyte lineage. Both BRN2 forms similarly repress MITF transcription, whereas PAX3 transcription is induced by BRN2TS but repressed by BRN2AA. Altogether, melanocyte migration and proliferation are controlled by the BRN2 phosphorylation status through PAX3 and by the total BRN2 level through MITF. Second, we evaluated the possibility of BRN2 regulation following UV-stimulation of melanocytes. We brought evidence that BRN2 expression is regulated at transcriptional and transcript level following UVB irradiation. Furthermore, we showed that BRN2 controls Dicer transcription and that BRN2 and Dicer create a feedback loop that regulates both the expression of the BRN2 and Dicer genes. Third, we considered the importance of β-catenin on the regulation of Dicer expression in the response of melanocytes to UV exposure. We showed that the exposure of melanocytes to UV light leads to (i) the inhibition of Dicer expression associated with (ii) β-catenin stabilization and accumulation into the nucleus, and (iii) induction of pigmentation as aresult of Dicer repression. Altogether these events may represent important melanogenesis processes after UV light induction
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Degerny, Cindy. "Sumoylation et régulation de l'activité de transcription ERM." Lille 1, 2007. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2007/50376-2007-69.pdf.
Full textAbstract:
ERM est un facteur de transcription de la famille ETS appartenant au groupe PEA3. Ce groupe se compose de trois protéines impliquées dans la tumorigènese mammaire, principalement dans le processus mètastatique. Ces protéines sont des activateurs transcriptionnels dont le niveau d'activation dépend de différentes modifications post-traductionnelles. La sumoylation est une modification post-traductionnelle qui joue un rôle clé dans la régulation de l'activité de certains facteurs de transcription. Elle consiste en la conjugaison d'une protéine SUMO sur la lysine d'une séquence consensus [psi]KXE ([psi] résidu hydrophobe) par l'enzyme de conjugaison Ubc9 et une SUMO-ligase. Nous avons montré qu'ERM, qui interagit avec Ubc9 et possède cinq sites consensus de sumoylation, est effectivement conjuguée à SUMO et que cette modification est très nettement impliquée dans l'inhibition de son activité transcriptionnelle. Cette inhibition est liée à la sumoylation de trois sites présents dans un domaine préalablement défini comme réprimant l'activité du domaine transactivateur N-terminal d'ERM. Toutefois, la sumoylation des deux sites extérieurs à ce domaine répresseur est aussi impliquée dans la régulation négative de l'activité d'ERM. Chaque site de sumoylation semble ainsi pouvoir correspondre à un module inhibiteur. Finalement, nous avons établi que la sumoylation d'ERM est dépendante de la SUMO-ligase PIAS1 sans toutefois exclure le rôle d'autres protéines de la famille PIAS dans ce processus. Ces travaux ouvrent maintenant la voie de l'étude des mécanismes d'inhibition mis en jeu par SUMO et des interconnexions entre les diverses modifications post-traductionnelles d'ERM.
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Grandjean-Laquerriere, Alexia. "Mécanismes de régulation de la production de cytokines pro-inflammatoires (TNF-α,IL-6,IL-)8 et IL-18 et anti-inflammatoire (IL-10) : modèle du kératinocyte humain irradié par des UVB/Alexia Grandjean." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP202.
Full textAbstract:
Les kératinocytes participent à la défense immunitaire de l'organisme en synthétisant de nombreuses cytokines. Nous avons étudié au cours de ce travail les mécanismes de régulation de la synthèse de cytokines pro-inflammatoires (TNF-a, IL-6, IL-8 et IL-18) et anti-inflammatoire (IL-10) dans des cultures de kératinocytes irradiés par un rayonnement UVB. Nous avons observé une augmentation dose-dépendante de l'expression des cytokines en fonction de la dose d'UVB appliquée. Nous avons ensuite cherché à définir l'implication des facteurs de transcription NF-kB et AP-1 dans la régulation de la synthèse de cytokines en utilisant la curcumine et le PDTC. En présence de curcumine, nous observons une inhibition de l'activation du facteur NF-kB et de la synthèse des cytokines inflammatoires. A l'opposé, l'expression de l'IL-10 est augmentée. En revanche, l'activation du facteur AP-1 n'est pas affectée par la curcumine. En présence de PDTC, nous observons une inhibition de l'activation du facteur NF-kB ainsi qu'une augmentation de l'activation du facteur AP-1 ; ainsi qu'une inhibition de l'expression du TNF-a et de l'IL-6 et une activation de l'IL-8 et de l'IL-10. Ces résultats suggèrent une régulation du TNF-a et de l'IL-6 NF-kB dépendante, et de l'IL-8 NF-kB et AP-1 dépendante. Puis nous avons étudié la voie de la PKA. Pour cela nous avons traité des kératinocytes irradiés avec: 1) dbAMPc, PGE2 et toxine cholérique (agents qui augmentent l'AMPc intracellulaire) et, 2) H89 et PKAi (inhibiteurs spécifiques). Nous observons, en présence des analogues de l'AMPc, une inhibition de l'expression du TNF-a et de l'IL-18 ainsi qu'une augmentation de l'IL-6 et de l'IL-10. Le traitement par les inhibiteurs de la PKA a pour conséquence une inhibition de la synthèse des quatre cytokines étudiées. Ces résultats montrent que la régulation des cytokines produites lors de l'irradiation des kératinocytes fait intervenir des voies de signalisation différentes selon la cytokine étudiée.
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Lesage, Kevin. "Caractérisation fonctionnelle et implication du facteur de transcription TgAP2X-5 dans la régulation des gènes de virulence chez Toxoplasma gondii." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S044.
Full textAbstract:
Toxoplasma gondii est un eucaryote unicellulaire appartenant au phylum des Apicomplexes. Ce parasite intracellulaire obligatoire est la cause d’une pathologie sévère pour les fœtus des femmes enceintes primo-infectées ainsi que pour les personnes immunodéprimées. Son cycle de vie est complexe et comporte plusieurs étapes de prolifération et différenciation. Le stade tachyzoïte est responsable de la phase aigüe de la maladie chez les humains. Le tachyzoïte exprime des facteurs d'invasion et de virulence cruciaux pour sa survie et le détournement de la cellule hôte. L'expression de ces facteurs de virulence est hautement régulée pour permettre leur adressage correct dans des organites spécifiques appelés rhoptries et micronèmes. Cependant, peu d'informations sont connues sur les acteurs contrôlant l'expression de ces gènes de virulence. Les ApiAP2 appartiennent à une famille conservée de facteur de transcription (FT) et jouent un rôle important dans la régulation de la transcription des gènes chez les parasites apicomplexes. Des études menées au laboratoire ont révélés la capacité du FT TgAP2XI-5 à se fixer sur des promoteurs de gènes transcriptionnellement actifs durant les phases S/M du cycle cellulaire. Ce moment correspond au pic d’expression les gènes de rhoptrie et de micronème. Cependant, l'expression de TgAP2XI-5 est constitutive durant le cycle cellulaire chez le tachyzoïte. Dans le but de comprendre comment sa fonction dépendante du cycle cellulaire est régulée, nous avons identifié des potentiels partenaires d'interactions dont TgAP2X-5, un autre FT ApiAP2 dont l’expression est régulée durant les phases S/M du cycle. L'utilisation d'un système d'expression inductible ainsi que des expériences de séquençage des ARN nous ont permis de démontrer que la perte d'expression de TgAP2X-5 induit une diminution du nombre de transcrits codant pour les protéines de rhoptrie et de micronème. Alors que la perte d'expression de TgAP2X-5 n'influence pas de manière significative l'invasion et la croissance du parasite, nous observons une perte totale de virulence de la souche parasitaire in vivo. Pour mieux comprendre les mécanismes moléculaires mis en jeu, nous nous sommes demandés si la fixation de TgAP2XI-5 sur ces promoteurs cible est conservée en absence de TgAP2X-5. Par des expériences de ChIP-chip, nous avons montrés que l'absence de TgAP2X-5 conduit à une incapacité de fixation de TgAP2XI-5 sur des promoteurs de gènes de rhoptrie. L'ajout d'une copie du gène TgAP2X-5 sous son propre promoteur dans la souche mutante est capable de restaurer l'expression des protéines de rhoptrie préalablement affectée. Toutes ces expériences montrent pour la première fois une coopération des FT APiAP2 dans la régulation des gènes chez les ApicomplexesToxoplasma gondii is a unicellular eukaryote belonging to the Apicomplexa phylum. It is an obligate intracellular parasite of critical importance to primarily infected pregnant women and immunosuppressed patient. Its life cycle is complex, with multiple proliferation and differentiation steps, of which tachyzoite proliferation is the most relevant to pathogenesis in humans. Tachyzoites express invasion and virulence factors that are crucial for their survival and the manipulation of host cell functions. Expression of these virulence factors is tightly regulated permitting their correct targeting in specific organelles named rhoptry and microneme. However, little is known about the factors controlling the expression of genes encoding the virulence factors. ApiAP2 are a family of conserved transcription factors (TF) that play an important role in regulating gene expression in apicomplexan parasites. Previous studies had revealed the ability of one of these TFs, TgAP2XI-5, to bind to transcriptionally active promoters of genes expressed during the S/M phase such as rhoptry and micronemes genes. However, expression of TgAP2XI-5 is constitutive during the tachyzoite cell cycle. To better understand how its function is regulated, we identified proteins interacting with TgAP2XI-5 including a cell cycle regulated ApiAP2 TF, TgAP2X-5. Using an inducible knock-down strategy and RNA-Seq, we demonstrate that the level of expression of number of rhoptry and microneme transcripts is affected by the disruption of TgAP2X-5 expression. While TgAP2X-5 disruption has mild effect on parasite growth and invasion, it leads to the strain avirulence in mice. To better understand the molecular mechanisms at stake, we investigated the binding of TgAP2XI-5 at promoters in the TgAP2X-5 mutant in a genome-wide assay. We show that disruption of TgAP2X-5 expression leads to defects in TgAP2XI-5 binding to multiple rhoptry gene promoters. Complementation of the TgAP2X-5 mutant restores the expression of rhoptry proteins previously affected. This is the first evidence of a cooperative action of ApiAP2 TF in Apicomplexa
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Cluzeau, Céline. "Etude des voies Edar/NF-қB et Wnt/β-caténine dans les dysplasies ectodermiques et le développement des annexes épidermiques." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T050.
Full textAbstract:
La dysplasie ectodermique hypohidrotique (ou HED) est la plus fréquente des dysplasies ectodermiques, caractérisée par une absence des dents, poils et glandes sudoripares. Les gènes EDA, EDAR et EDARADD sont responsables de la plupart des cas d'HED. Le ligand EDA utilise son récepteur EDAR et la protéine adaptatrice EDARADD pour activer le facteur de transcription NF-қB. Afin d'identifier de nouveaux gènes responsables d'HED, j'ai caractérisé génétiquement nos patients. Dans un premier temps, nous avons identifié de nouvelles mutations dans les trois gènes. Nous avons montré Pallélisme de formes dominante et récessive au locus EDARADD. J'ai ensuite identifié des mutations dans le nouveau gène WNT10A, associées à des cas plus atypiques d'HED. J'ai enfin localisé une nouvelle région sur le chromosome 14 dans une famille avec une HED dominante. Parallèlement, j'ai poursuivi la caractérisation moléculaire de la voie EDA/EDAR/NF-қB, en étudiant le rôle du complexe TRAF6/TAB2/TAK1 dans cette voie. J'ai étudié l'interaction les voies EDA/EDAR/NF-қB et Wnt/p-caténine pour comprendre leur rôle dans la différenciation des annexes épidermiques. J'ai démontré que la voie EDA/EDAR inhibe la voie Wnt/β-caténine via la kinase HIPK2, dont le gène est une nouvelle cible de NF-қBHypohidrotic ectodermal dysplasia (or HED) is the most frequent form of ectodermal dysplasia, and is characterized by absence of teeth, hair and sweat glands. EDA, EDAR and EDARADD genes are responsible for most cases of HED. The ligand EDA binds to its receptor EDAR and uses the adaptor protein EDARADD to activate the transcription factor NF-қB. In order to identify new genes responsible for HED, I characterized genetically our patients. We first identified new mutations in the three already known genes. We showed that both dominant and recessive forms of HED are allelic to EDARADD locus. I then identified mutations in the WNT10A gene, recently implicated in atypical forms of HED. I finally localized a novel region on chromosome 14 in a family affected with a dominant form of HED. At the same time, I pursued the molecular characterization of EDA/EDAR/NF-қB signalling, by studying the involvement of TRAF6/TAB2/TAK1 complex in this pathway. I studied the interaction between EDA/EDAR/NF-қB and Wnt/β-catenin signalling pathways to understand their role in ectodermal appendages differentiation. I demonstrated that EDA/EDAR signalling inhibit Wnt/β-catenin pathway via the HIPK2 kinase, whose gene is a new target of NF-қB
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Moreau, Marie. "La ß-caténine et le NF-Kß coopèrent pour réguler le système uPA/uPAR dans des cellules tumorale." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077113.
Full textAbstract:
La voie Wnt/ß-caténine est impliquée dans de nombreux événements comprenant l'adhésion, la migration, et la différenciation cellulaires. L'activateur du plasminogène de type urokinase (uPA) et son récepteur uPAR ont été décrits comme des gènes cibles de la voie Wnt/ß-caténine dans des cellules de cancer du colon. En utilisant deux lignées tumorales mammaires, MCF-7 et MDA-MB-231 et une lignée tumorale de colon, SW480, nous avons observé que l'inhibition de l'expression de la ß-caténine augmente l'expression d'uPA, d'uPAR et de l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène PAI-1 ainsi que l'invasivité des cellules tumorales. La stabilisation de la ß-caténine par un traitement au chlorure de lithium (LiCl), inhibiteur de la glycogène synthase kinase-3beta (GSK-3ß) ou la co-transfection de vecteurs d'expression ß-caténine/Tcf-4 conduit à la diminution de l'expression des transcrits uPA, uPAR et PAI-1 dans les trois lignées. Le traitement des cellules transfectées par des siRNA ß-caténine avec un inhibiteur de la translocation nucléaire du nuclear factor-kappaB (NF-KB), le SN50, réduit significativement l'augmentation de l'expression des transcrits uPA, uPAR et PAI-1 et de l'invasivité cellulaire. De plus, nous avons observé une translocation nucléaire du NF-KB dans les cellules transfectées par un siRNA ß-caténine. Dans cette étude nous montrons un nouveau mécanisme de régulation du système uPA/uPAR par la ß-caténine, en coopération avec NF-KB, dans des cellules de cancer du sein et du colon. La ß-caténine peut exercer des effets inattendus dans les cellules tumorales et des stratégies thérapeutiques d'inhibition de son expression doivent être envisagées avec précautionThe Wnt/ß-catenin signaling influences many cellular processes including cell adhesion, growth and differentiation. Urokinase plasminogen activator (uPA) and urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) have been reported as target genes of Wnt/ß-catenin signaling in colon cancer cells, since their expression is directly regulated through ß-catenin, binding to the T-cell factor binding element (TBE) motifs present in their promoters. Using three cancer cell models (MCF-7, MDA-MB-231 and SW480, breast and colon cancer cell lines, respectively) we demonstrated that silencing of ß-catenin increased uPA, uPAR and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) expression and the invasive potential of cancer cells. In addition, p-catenin stabilization and accumulation by lithium chloride (LiCl) treatment, an inhibitor of glycogen synthase kinase-3ß (GSK-3ß) or by ß-catenin/Tcf-4 expression vectors transfection led to a decrease in uPA, uPAR and PAI-1 mRNA expression in the studied cancer models. Moreover, the treatment of P-catenin siRNA transfected cells with a specific inhibitor of nuclear factor-kappaB (NF-KB) translocation, SN50, significantly reduced enhancement of uPA, uPAR and PAI-1 expression and cancer cell invasion. Furthermore, ß-catenin siRNA treated cells exhibited NF-KB nuclear translocation. In this study we present evidence of a novel cross-talk between ß-catenin and uPA/uPAR System through NF-KB cooperation in breast and colon cancer cells. Our results strengthen the emerging view that ß-catenin exerts different effects on tumor cells and that the therapeutic strategy of its inhibition could involve more complex mechanisms than originally anticipated
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Fraisse, Ingrid. "Etude de la régulation du gène vrille, impliqué dans la croissance et la prolifération chez Drosophila melanogaster." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077182.
Full textAbstract:
Le gène vrille (vri) de Drosophila melanogaster a été isolé au laboratoire et est homologue de gènes impliqués dans des processus de croissance, de prolifération et d'apoptose. Il code un facteur de transcription de type bZIP réprimant les gènes Cycle et cryptochrome dans le cycle circadien. L'altération de son homologue humain, E4BP4/NF-IL3, esta l'origine de leucémies. L'expression du gène vri est dynamique au court du développement et l'on ne sait pas à quelles voies de signalisation ce facteur de transcription appartient. Afin de comprendre précisément son rôle dans des phénomènes indispensables au développement tels que la croissance ou l'apoptose nous avons choisi de rechercher des cibles de la protéine VRI ainsi que des régulateurs du gène codant ce facteur. L'approche bioinformatique a permis de mettre en évidence des cibles parmi lesquelles on retrouve vri lui-même. Le facteur de la sous-famille des PAR-bZIP, PDP1, pourrait être un régulateur de vri. PDP1 est un transactivateur de gènes myogéniques et est impliqué dans la régulation de la croissance larvaire. Il joue également un rôle antagoniste à celui de VRI dans le cycle circadien. La réalisation d'outils moléculaires et génétiques nous ont permis de confirmer in vivo ces résultats. Il semble que VRI et PDP1 pourraient agir de concert pour réguler la croissance des tissus pendant le développement embryonnaire et larvaire. D'autre part, aucune étude n'a été réalisée concernant le rôle de PDP1 dans la formation des tissus adultes. Les outils génétiques réalisés au cours de ma thèse, m'ont permis de supposer un rôle de PDP1 dans la différentiation des tissus musculaires et alaires de l'adulteThe Drosoplhila melanogaster vrille (vri) gene solated in the lab is homologuous of genes involved in growth, proliferation or apoptosis. It encoded a bZIP transcription factor repressing the Cycle and cryptochrome key genes of the circadian clock. The alteration of its human homolog, E4BP4/NF-IL3, is responsible of leukaemia The vri gene pattern is dynamic during the development but we don't know in which pathway vri implicated. To understand its role in the very important process during the development like growth or apoptosis, we choose the look for the VRI targets and regulators. By bioinformatics approaches we find that vri could be its own target. The PAR-bZIP factor, PDP1 should be a vri regulator. PDP1 is a transactivator of myogenic gènes et is involved in regulation of larval growth. It play a VRI antagonistic role in the circadian clock. Molecular and genetic tools, allow us to confirm these results in vivo. It seems that VRI and PDP1 may act together to regulate the tissue growth during the embryogenesis and larval development. Furthermore, any studies were made about PDP1 role in adult tissues formation. The genetic tools made during my thesis, let me suppose a role of PDP1 in the muscular and wing differentiation adult tissues
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Schnekenburger, Michael. "Régulation de l'expression de la glutathion S-transférase P1-1 au cours de la différencification de la lignée leucémique humaine K562." Reims, 2004. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00000075.pdf.
Full textAbstract:
La @glutathion S-transférase (GST) P1-1 est une enzyme associée à la carcinogenèse et au développement de résistance aux médicaments anticancéreux. Notre hypothèse de travail repose sur le fait que la différenciation cellulaire peut-être une approche thérapeutique dans le traitement des leucémies. Notre objectif est de savoir si l'expression du gène codant pour la GSTP1-1 est modulée au cours de la différenciation. Nos résultats montrent que l'expression de la GSTP1-1 est augmentée par des inducteurs de la différenciation érythroi͏̈de (anthracyclines, hémine) de la leucémie humaine K562, alors qu'elle est diminuée par le TPA qui induit la voie mégacaryocytaire dans ces cellules. L'induction de différenciation par le butyrate vers ces voies myéloi͏̈des s'accompagne d'une diminution de l'expression de l'ARNm de GSTP1-1. L'étude de la séquence promotrice du gène de la GSTP1-1 nous a permis de découvrir deux séquences GATA. La caractérisation des sites met en évidence un complexe résultant de l'interaction entre le site situé à -1208 et le facteur de transcription GATA-1, impliqué dans les processus de différenciation hématopoi͏̈étique. Avec les anthracyclines (aclarubicine et doxorubicine), le TPA et le butyrate, l'intensité de ce complexe est corrélée à l'expression de l'ARNm de GSTP1-1 et à la voie de différenciation induite. Dans le cas de l'hémine, c'est une stabilisation de l'ARNm de GSTP1-1 qui est à l'origine de l'accumulation d'ARNm observée. En conclusion, nous montrons que la GSTP1-1 est régulée au cours de la différenciation érythroi͏̈de et mégacaryocytaire de cellules leucémiques avec la participation probable de GATA-1@Glutathione S-transferase (GST) P1-1 is an enzyme implicated in carcinogenesis and closely associated with the development of resistance to anti-cancer drugs. Our working hypothesis is based on the fact that the cellular differentiation can be used as a therapeutic approach in the treatment of leukaemias. We wanted to know if the GSTP1-1 expression is modulated during erythroid and megakaryocytic differentiation. Results show that its expression is increased during aclarubicine (acla), doxorubicin (dox) and hemin-induced erythroid differentiation of the human K562 cells (a pluripotent chronic myelogenous leukaemia). In contrast, GSTP1-1 expression is down-regulated during phorbol ester TPA-induced megakaryocytic differentiation of these cells. Moreover, time- and concentration-dependent activation of both erythroid and megakaryocytic differentiation pathways by butyric acid progressively inhibited GSTP1-1 expression. An analysis of the GSTP1-1 promoter sequence enabled us to discover two GATA sequences. By electrophoretic mobility shift assay, we determine the specificity of a GATA-1 binding on the site located at -1208. GATA-1 is known to be implicated in the process of hematopoietic differentiation and we show that GATA-1 promoter binding activity is correlated with the GSTP1-1 mRNA expression depending on the differentiation pathway induced by acla, dox, TPA and butyrate. A post-transcriptional stabilization of mRNA is involved in GSTP1-1 increase during hemin-induced erythroid differentiation. In conclusion, these results demonstrate the implication of GATA-1 transcription factor in differentiation-specific variations of GSTP1-1 expression
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Saudemont, Alexandra. "Origine évolutive des plans d'organisation chez les bilatériens : étude du déterminisme génétique de la subdivision du mésoderme chez l'annelide platynereis dumerilii." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077209.
Full textAbstract:
Notre vision de la phylogénie des métazoaires a été profondément modifiée depuis une dizaine d'années : les espèces modèles actuelles en biologie du développement constituent un échantillonnage très imparfait des animaux, avec un manque notable de modèles chez les Lophotrochozoaires. Or un bon échantillonnage des espèces est crucial pour traiter toute question évolutive, telle que l'origine des plans d'organisation. Une façon d'aborder cette question est de s'intéresser aux aspects du développement animal dont résultent les plans d'organisation, comme par exemple la subdivision du mésoderme en territoires distincts à l'origine des différents organes issus de ce feuillet embryonnaire. Cette thèse présente l'étude du déterminisme génétique de la subdivision du mésoderme chez un modèle Lophotrochozoaire, l'annélide polychète Platynereis dumerilii. Chez la drosophile, les gènes du complexe NK sont connus pour leur implication dans la subdivision du mésoderme, tandis que chez les vertébrés, la situation est moins claire. Une analyse phylogénétique systématique de cette famille de facteur de transcription à homéodomaine a permis de montrer que sa diversification a eu lieu avant la séparation des lignées des Cnidaires et des Bilatériens. L'étude de ces gènes chez un annélide suggère que leurs fonctions étaient diverses et nombreuses chez le dernier ancêtre commun des Bilatériens, Urbilateria. Ils auraient été impliqués non seulement dans la subdivision du mésoderme, mais aussi, pour certains, dans l'ontogenèse du système nerveux ou le développement du pharynx. Ces résultats soutiennent l'idée d'un ancêtre Urbilateria plus complexe qu'on ne l'imaginait traditionnellementOur vision of metazoan phylogeny was deeply modified since ten years: the current model species in developmental biology constitute a very imperfect sampling of animals, with a notable lack of models within Lophotrochozoans. However, a good sampling of the species is crucial to deal with any evolutionary question, such as the origin of body plans. A way of tackling this question is to study the aspects of the animal development from which body plans result, such as for example mesoderm subdivision in distinct territories that will give rise to the various mesodermal organs. This thesis presents the study of the genetic determinism of mesoderm subdivision in a Lophotrochozoan model, the polychaete annelid Platynereis dumerilii. In Drosophila, the NK complex genes are known for their implication in mesoderm subdivision, while the situation is less clear in the vertebrates. A systematic phylogenetic analysis of this family of homeodomain transcription factors showed that its diversification took place before the separation of the lines of Cnidarians and Bilaterians. The study of these genes in an annelid suggests that their functions were various and numerous in the last common ancestor of Bilaterians, Urbilateria. They would have been implied not only in mesoderm subdivision, but also, for some, in the ontogenesis of the nervous System or pharynx development. These results support the idea of an Urbilateria ancestor more complex than it traditionally was imagined
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Garçon, Loïc. "Mécanismes physiologiques de l'érythropoïèse : de STAT5 à Gfi-1B." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077245.
Full textAbstract:
L'érythropoïèse est un processus finement régulé dont la phase terminale est essentiellement sous la dépendance de l'érythropoïétine (EPO). Cette hormone, en activant son récepteur spécifique à la surface des érythroblastes, active de nombreuses voies de signalisation intracellulaire impliquées dans la prolifération, la survie et la différenciation érythroïde. Nous avons observé que l'activation de la voie STAT5 ou encore que la présence de Bel-XL, molécule anti-apoptotique activée par STAT5 au cours de l'érythropoïèse, sont nécessaires et suffisantes pour induire une différenciation érythroïde en l'absence d'EPO. Parallèlement, nous avons identifié par analyse comparative de banques d'expression un facteur de transcription, GfMB, dont l'expression prédomine dans le lignage érythroïde. Nous avons montré par modulation de son expression dans des lignées leucémiques et dans les cellules primaires humaines que GfMB jouait un rôle crucial dans l'induction de la différenciation érythroïde terminaleRegulation of erythropoiesis is totally dependent on erythropoietin (EPO). After binding to its receptor, EPO activates many transduction pathways implicated in cell prolifération, survival and differentiation. We observed that either expression of a constitutively active form of STAT5 or overexpression of its anti-apoptotic target Bel-XL were sufficient for induction of erythroid differentiation in human primary cells. In parallel, using a comparative analysis of cDNA libraries, we identified the transcription factor Gfi-1B as preferentially expressed in erythroid cells. We observed that a knock-down of Gfi-1B delayed the terminal differentiation of K562 and primary cells. In contrast, forced expression of Gfi-1B in UT7 and K562 cells led to induction of erythroid differentiation. We concluded that Gfi-1B played a critical role in terminal differentiation of human erythroid progenitor cells
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Bontemps, Yannick. "Clonage moléculaire et caractérisation du gène humain codant l'Uridine diphospho-glucose deshydrogènase (UGDH)." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMM206.
Full textAbstract:
L' @Uridine diphospho-glucose (UGDH) régule l'expression des glycosaminoglycannes en fournissant l'UDP-glucuronate nécessaire à leur synthèse. Nous avons cloné l'ADN complémentaire de ce gène chez l'homme par RT-PCR, montré que ce gène était exprimé de façon ubiquitaire et que son expression pouvait être modulée par le TGF-b ou l'hypoxie. Ensuite, nous avons cloné les 11 introns présents sur l'ADN génomique et déterminé le site d'initiation de la transcription. Enfin, le clonage de la partie 5'-flanquante au site d'initiation de la transcription a été cloné. Les études de transfection transitoires dans différents types cellulaires ont permis de mettre en évidence la fonctionnalité du promoteur ainsi que certaines régions régulatrices responsables du taux de transcription en réponse aux stimuli étudiés. Les études de retard sur gel, couplées aux études réalisées en présence de WP631 (inhibiteur de Sp1) tendent à prouver que le facteur de transcription Sp1 est un régulateur universel de L'UGDH@UDP-glucose dehydrogenase (UGDH) is a unique pathway enzyme, which furnishes in vertebrates the UDP-glucuronic acid. Using a reverse-transcription-polymerase chain reaction approach, human ant murin UGDH was cloned from fibroblasts mRNA. The gene is expressed in all murin tissue studied and in all cell culture too. Using long and accurate PCR approach, we have cloned the human UGDH. The gene contains 12 exons and spans over 26 kb. Primer extension analysis identified the transcription start site 165 bases upstream from the translation initiation site. Next, we have cloned and characterized the promoter. The minimal promoter contains a functional inverted TATA box. TGF-b or hypoxia regulates the expression of UGDH. The core promoter contained numerous GC-rich sequences for binding of Sp1 transcription factor. Gel shift assay and bisantrhracyclin (an anti-Sp1 compound) indicate that Sp1 sequences of UGDH core promoter are responsible for regulation of UGDH activity
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Gautheron, Jérémie Francis Alexis. "Les processus d’ubiquitination dans la voie de signalisation NF-kB et leurs dérèglements en pathologie." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T052.
Full textAbstract:
La voie de signalisation NF-kB joue un rôle essentiel dans l’inflammation, la réponse immunitaire et la protection contre l’apoptose. Son activation est contrôlée par la kinase IKK, composée de deux sous-unités catalytiques (IKK1/IKK2) et d’une sous-unité régulatrice, NEMO. Il a été montré que des processus d’ubiquitination complexes encore mal compris régulent l’activité d’IKK et impliquent notamment NEMO. Dans ce travail nous avons essayé de mieux définir le rôle de l’ubiquitination de NEMO dans le processus d’activation d’IKK et comment il est contrôlé par l’E3 ligase TRAF6. Une analyse moléculaire de mutations de NEMO causant la maladie génétique Incontinentia Pigmenti (IP) a été entreprise. Elle a permis de définir les domaines d’interaction entre NEMO et TRAF6, de progresser dans la compréhension des défauts caractérisant IP et, en exploitant les données concernant l’interface NEMO/TRAF6, de proposer une nouvelle stratégie pour agir sur le processus d’activation de NF-kBThe NF-kB signaling pathway plays a key role in inflammation, immune response and protection against apoptosis. Its activity is controled by IKK, a kinase complex which is composed of two catalytic subunits (IKK1/IKK2) and one regulatory subunit (NEMO). It has been reported that intricate ubiquitination processes, still poorly defined, regulate the activity of IKK and involve NEMO. During this work, we have tried to define in more details the role of NEMO ubiquitination in the activation process of IKK and how it is controled by the E3 ubiquitin ligase TRAF6. A molecular analysis of NEMO mutations causing the genetic disease Incontinentia Pigmenti (IP) has been carried out. This has allowed us to identify the interaction domains between NEMO and TRAF6, to get insights into the defects causing IP and, exploiting the data concerning the NEMO/TRAF6 interface, to propose a new strategy to modulate the NF-kB activation process
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Rougerie, Pablo. "Caractérisation fonctionnelle de FINROD, un nouvel inhibiteur atypique des Rho GTPases dans l’activation et la migration des lymphocytes T." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T031.
Full textAbstract:
Au cours de leur vie, les lymphocytes T subissent plusieurs changements phénotypiques importants: migration vers et à travers les organes lymphoïdes secondaires et passage d’un état quiescent à un état activé. La migration et l’activation sont régulées en partie par l’activité des Rho GTPases, une famille de protéines impliquées dans la régulation de très nombreux processus biologiques. Nous avons identifié le produit du gène c6orf32 comme un partenaire des Rho GTPases. Cette protéine n’est que peu décrite dans la littérature et ne présente aucun motif consensus. Par ailleurs, elle n’avait fait l’objet d’aucune étude dans le système immunitaire. Nous avons montré que cette protéine agissait en tant qu’inhibiteur des voies de signalisation contrôlées par la Rho GTPase RhoA. Le niveau d’expression de c6orf32 affecte la capacité des cellules à répondre à un signal migratoire (activation de CCR7) ou activateur (engagement du TCR). L’ampleur des réponses n’est pas affectée, mais la taille de la sous-population répondeuse varie. Cette protéine contribue donc à fixer le seuil de sensibilité des cellules aux stimuli. Nous avons montré que l’expression du gène c6orf32 était contrôlée par les facteurs de transcription FoxOs, dont l’activité est réprimée au moment de l’activation lymphocytaire. La présence du produit de c6orf32 est donc associée à un phénotype quiescent. Des approches biochimiques nous ont permis de montrer que la protéine codée par c6orf32 se fixait directement et diminuait la quantité de RhoA en conformation active présent dans les cellules. C’est pourquoi nous avons baptisé cette protéine, FINROD (FoxOs-Induced RhoA Down-Modulator)In the course of their lifes, T cells undergo many phenotypic changes. They adopt a migratory behavior to and through secondary lymphoid organs, and switch upon infection from a resting to an activated state. Migration and activation are partly regulated by Rho GTPases. They form a family of proteins whose activity is crucial in the modulation of many biological processes. We have identified the c6orf32 gene product as a partner of Rho GTPases in human lymphocytes. This protein is barely described in the literature and does not display any consensus motifs. We have shown that this protein is an inhibitor of RhoA. The expression level of c6orf32 accordingly modulates the ability of T cells to respond to migratory cues (chemokines) or activation signals (TCR triggering). The magnitude of individual cellular responses is not affected; however, the protein participates in setting the threshold of response of RhoA-dependent pathways. Furthermore, we have shown that the c6orf32 gene was controlled by FoxOs transcription factors, whose activities are repressed after T lymphocytes activation. Therefore, the c6orf32-encoded protein is associated with a resting phenotype. Biochemical studies led us to discover that this protein directly binds to RhoA and subsequently diminishes the amount of active RhoA in cells. Thus, we decided to name it FINROD (FoxOs-induced RhoA Down-modulator)
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Latreche-Carton, Céline. "Rôle oncogénique des fragments de p65/RelA Nf-kB générés par l'activité de RIPK3." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S048/document.
Full textAbstract:
L'utilisation d'un agent déméthylant induit la réexpression de la protéine RIP3, une sérine-thréonine kinase, dans un modèle leucémique murin exprimant BCR-ABL humain. La réexpression de RIP3 conduit rapidement les cellules vers la nécroptose. Le mutant délété du domaine kinase est de façon surprenante plus "apoptogène" et induit le clivage de p65/RelA sur le résidu d'acide aspartique D361 par la caspase 6. Pour déterminer l'impact de ce clivage, nous avons construit un mutant non clivable p65/RelA D361E, ainsi que des plasmides exprimant chacun des fragments p65/RelA 1-361 ou p65/RelA 362-549, ou un plasmide exprimant simultanément p65/RelA 1-361 + p65/RelA 362-549. Ces différents plasmides codant pour les différentes formes de la protéine p65/RelA sont incorporés par transfection dans les cellules leucémiques ou de mélanome pour lesquels le gène RIP3 est respectivement méthylé ou exprimé. In vivo, nous mettons en évidence une différence de tumorigénicité entre les deux modèles. Elle est accrue par la présence de p65/RelA D361E par rapport à celle de p65/RelA WT et de p65/RelA 1-361 + p65/RelA 362-549 dans le modèle leucémique. Elle est au contraire faible dans le modèle du mélanome pour lequel la surexpression des fragments p65/RelA 1-361 +362-549 induit la tumorigenèse la plus forte. L'agressivité du mutant non clivable in vivo n'est pas corrélée à l'activité de NF-kB mesurée in vitro. Les fragments comme le mutant p65/RelA D361E induisent des profils d'expression différents dans le modèle murin de leucémie avec la modulation notable d'expression génique de la famille d'inhibiteurs de protéases à cystéine Stefins, ainsi que le transporteur de bicarbonate de sodium SLC4A5 qui joue un rôle majeur dans la régulation du pH intracellulaire. Le mutant p65/RelA D361E induit une expression importante du transporteur de bicarbonate de sodium SLC4A5 dans le modèle leucémique responsable de l'augmentation du pH intracellulaire qui participe au développement tumoral. Par contre, ce sont les deux fragments p65/RelA 1-361 + p65/RelA 362-549 qui induisent simultanément une expression plus forte de la molécule d'immunoéchappement PDL1, vraisemblablement par un mécanisme post-traductionnel. L'étude de la "souchitude" des modèles montre une différence d'activité du mutant p65/RelA D361E selon le modèle. On observe une augmentation de l'activité ALDH dans le modèle leucémique et une diminution de la formation de sphères dans le modèle de mélanome. En conclusion, ces résultats indiquent que les fragments issus du clivage de p65/RelA par l'activité de RIP3 indépendante de la kinase possèdent un rôle différent de celui de la forme sauvage sur la souchitude des cellules cancéreuses, et qu'elle dépend du modèle étudié. Ils confirment que le mutant non clivable possède la plus forte activité tumorigénique. Ils laissent également supposer que les fragments Nter et Cter puissent avoir une activité dans des cellules tumorales possédant une protéine RIP3 fonctionnelle et active, probablement par des mécanismes inflammatoires ou autres qui doivent être caractérisésThe receptor-interacting protein kinase 3 (RIPK3) can induce necroptosis, apoptosis, or cell proliferation, and is silenced in several hematological malignancies. We previously reported that RIPK3 activity independent of its kinase domain induces p65/RelA caspase-mediated cleavage resulting in N-terminal 1-362 and C-terminal 362-549 fragments. We show here that a non-cleavable p65/RelA D361E mutant expressed in DA1-3b leukemia cells decrease mouse survival and that coexpressed p65/RelA fragments increase tumoriginicty of B16/F1 melanoma cells that did not correlated with in vitro measured Nf-kB activity. Fragments and p65/RelA fragments display different expression profiles in DA1-3b leukemic cells, with the notable modulation of gene expression of the Stefin cysteine protease inhibitor family and of SLC4A5, a Na+-coupled HCO−3 transporter. DA1-3b cells expressing p65/RelA D361E mutant showed more basic intracellular pH. p65/RelA fragments induced ovexpression of PD-L1 immunoescape molecule in DA1-3b cells. Markers of stemness were also affected: p65/RelA D361E induced increased ALDH activity in DA1-3b cells and fragments expression resulted in increased melanoma sphere formation in B16/F1 cells. Thus, far from being neutral, p65/RelA cleavage initiated by kinase independent activity of RIPK3 induced a pleiotropic range of effects in vitro and in vivo in cancer cells, that may vary across tumor types
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Gasparian, Sona. "Régulation de l'expression du gène T-bet pendant la différenciation des cellules th1 chez l'homme." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077213.
Full textAbstract:
Les sous-populations fonctionnellement distinctes de cellules T CD4+ sont essentielles pour orchestrer la réponse immune contre différents types de pathogènes. Les cellules Th1 (T helper type 1) sont impliquées dans le développement des réponses immunitaires cellulaires et protègent l'organisme contre des pathogènes intracellulaires. Par ailleurs les réponses Thl incontrôlées sont associées aux maladies inflammatoires chroniques et aux maladies auto-immunes. De ce fait, il est nécessaire de bien comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans le processus de différenciation des cellules Th1. Le facteur de transcription T-bet est spécifiquement exprimé par les cellules Th1 et joue un rôle important dans la différenciation de ces cellules. Il est impliqué dans le remodelage de la chromatine et dans l'expression du gène codant pour l'IFN-γ, spécifique des cellules Th1. L'objectif de ce projet est d'identifier les mécanismes impliqués dans la régulation de l'expression du gène T-bet pendant le développement des cellules Th1 humaines. Nous avons analysé les modifications de la structure de la chromatine au niveau du locus du gène T-bet dans ces cellules ce qui nous a permis d'identifier quatre sites hypersensibles à la DNase I (HS). Ces sites sont localisés dans les régions CNS. De plus, la chromatine associée aux sites HS est hyperacétylée au niveau de l'histone H3 dans les cellules Th1. L'ensemble de ces données indique que ces quatre régions peuvent être impliquées dans la régulation du gène T-bet chez l'homme. La stimulation du TCR induit une forte expression du gène T-bet et nous avons démontré que les protéines de la famille NF-AT sont impliquées dans ce processusFunctional distinct subsets of CD4+ T cells are essential to orchestrate efficient immune responses against different types of pathogens. T helper type 1 (Thl) cells promote cell-mediated immunity and are necessary to clear the organism from intracellular pathogens but are associated with autoimmune and chronic inflammatory diseases. This indicates that the development of Thl cells must be tightly controlled. The transcription factor T-bet is specifically expressed by Thl cells and plays an important role in the differentiation of this subset. T-bet is implicated in chromatin remodeling and control of Thl-specific expression of the IFN-f gene. The goal of this project is to identify the mechanisms that regulate T-bet expression during human Thl cell development. The analysis of changes of the chromatin structure at the T-bet locus in Thl cells allowed us to identify four DNAsel hypersensitive sites (HS). We found that the position of the HS identified in our experiments corresponds to the position of the CNS identified « in silico ». In addition, we found that chromatin associated with HS is hyperacetylated on histone H3 in Thl cells. Taken together, these data indicate that these four regions are implicated in the regulation of the human T-bet gene. We found that triggering of the T cell receptor (TCR) alone is sufficient to induce strong expression of T-bet. We demonstrated that NF-AT family members are implicated in this process
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Orsini, Marion. "Inhibition de l’érythropoïèse par la voie TNFα/sphingomyélinase/céramide : rôle du réseau de régulation microARN/facteurs de transcription et impact sur l’autophagie." Thesis, Université de Lorraine, 2017. http://www.theses.fr/2017LORR0225/document.
Full textAbstract:
L’anémie est un symptôme fréquent chez les patients atteints de cancer. La libération de la cytokine pro-inflammatoire TNFα, un inhibiteur connu de l’érythropoïèse, en est l’une des causes. L’érythropoïèse est un processus nécessitant l’arrêt de la prolifération et l’autophagie. Les résultats précédents ont montré que le TNFα inhibe l’expression des marqueurs érythroïdes et module l’expression de facteurs de transcription (FT) hématopoïétiques. Notre objectif est d’étudier l’implication de la voie TNFα/sphingomyélinase (SMase)/céramide dans l’inhibition de l’érythropoïèse en utilisant des cellules souches hématopoïétiques CD34+ induites à se différencier par l’érythropoïétine recombinante (Epo). Par l’utilisation de céramides exogènes, de SMase bactérienne et d’inhibiteurs de SMases, nous montrons l’implication de la voie SMase/céramide dans l’inhibition de l’expression des marqueurs érythroïdes mais également dans l’induction de la différenciation myéloïde avec une augmentation de l’expression du CD11b. Cet effet sur la différenciation est corrélé à la modulation du réseau FT/miR impliquant GATA-1, GATA-2 et PU.1 et les miR-144, 451, 155, 146a et 223. De plus, l’analyse par microscopie électronique à transmission, l’absence de formation de punctae GFP-LC3 et l’accumulation de SQSTM1/p62 montrent que le TNFα et les céramides inhibent l’autophagie induite par l’Epo. L’analyse des protéines impliquées dans la régulation de l’autophagie montre que le TNFα et les céramides activent mTOR. Son implication est confirmée par l’utilisation de rapamycine et l’inhibition de ULK1 et Atg13. De plus, le TNFα et les céramides inhibent l’expression de bécline 1 et de la formation du complexe Atg5-Atg12. Ces résultats démontrent que la voie TNFα/SMase/céramide joue un rôle dans l’homéostasie hématopoïétique par l’inhibition de l’érythropoïèse au profit de la myélopoïèse, en impactant les réseaux de régulation FT/miR et le processus d’autophagieAnemia is a common symptom in cancer patients. It can be caused by the release of pro-inflammatory cytokines such as TNFα, a known inhibitor of erythropoiesis. Erythropoiesis involves proliferation arrest and autophagy. Our previous studies showed that TNFα inhibits the expression of erythroid markers as well as hematopoietic transcription factors (TF) expression. The aim is to study the involvement of TNFα/sphingomyelinase (SMase)/ceramide pathway in erythropoiesis inhibition using recombinant erythropoietin (Epo)-induced CD34+ hematopoietic stem cells. Using exogenous ceramides, a bacterial SMase and sphingomyelinase inhibitors, we show the involvement of SMase/ceramide pathway in the inhibition of erythroid markers as well as the induction of myeloid differentiation as shown by the increase in CD11b expression. This effect is correlated to the modulation of the TF/miR network involving GATA-1, GATA-2 and PU.1 as well as miR-144, 451, 155, 146a and 223. We show that TNFα and ceramides inhibit Epo-induced autophagy through transmission electron microscopy analysis, the absence of GFP-LC3 punctae formation and SQSTM1/p62 accumulation. Analysis of proteins involved in autophagy regulation showed that TNFα and ceramides activate mTOR, which is confirmed using rapamycin as well as the inhibition of ULK1 and Atg13. Moreover, TNFα and ceramides inhibit Beclin 1 expression and Atg5-Atg12 complex formation. These results demonstrate the role of TNFα/SMase/ceramide pathway in hematopoietic homeostasis through an erythropoiesis-myelopoiesis switch resulting from perturbation of TF/miR network and autophagy
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Essabbani, Abdellatif. "La clusterine : un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T025.
Full textAbstract:
La clusterine: un nouveau régulateur de la voie NF-қB et de la mort cellulaire Plusieurs fonctions physiologiques ont été attribuées à la clusterine (CLU), dont le rôle important au cours de l'inflammation et de la tumorogenèse. Nous avons montré que CLU interagit avec Iқb-α phosphorylé et diminue la translocation de p50/p65. Nous avons aussi généré un ensemble de constructions " flaggées " pour les différentes isoformes de CLU. Les résultats de cette étude montrent que la régulation de la voie NF-қB pourrait être restreinte à des séquences particulières de CLU. Nous avons développé une nouvelle approche de ciblage de CLU par la technique d' « exon skipping » qui permet d'induire préférentiellement la forme nucléaire épissée du gène très mal caractérisée. Nous avons montré que la surexpression de cette forme par cette stratégie induit la mort cellulaireClusterin: a new regulator of NF-kappaB pathway and cell death Clusterin is a multifunctional protein that plays numerous roles in mammalian cells. By mean of transcriptomic analysis, we previously demonstrated that lower expression of clu both in tissues and cultured fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis patients compared to osteoarthritic patients. We showed that CLU interacts with phospho-IkB-a and decreases the translocation of p50/p65 to the nucleus. To specify the interaction sites of CLU with its partners and to study the CLU isoforms roles, we generated several molecular constructs coding for various CLU regions of interest and test their role on NF-қB pathway and CLU subcellular localization. We have also developed a new approach of "exon skipping" in order to induce preferential expression of the nuclear spliced form of the gene. This strategy will allow a good understanding of nuclear forme poorly characterized
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Poitevin, Stéphane. "Activation des monocytes par le collagéne de type I : libération de cytokines de gélatinase B et d'urokinase. Implication de protéine kinases et de NF-kB." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM205.
Full textAbstract:
Les processus inflammatoires impliquent la transmigration des monocytes à travers l'endothélium jusqu'aux tissus conjonctifs composés majoritairement de collagène de type I. L'étude de l'interaction monocytes/collagène de type I montre une augmentation de la production d'ions O2- mesurée par la technique de réduction du NBT, de la sécrétion de TNF-a, d'IL-1b, d'IL-6 (ELISA), de gélatinase B et d'urokinase déterminée par zymographies. La sécrétion de ces 2 protéinases est stimulée de façon autocrine par le TNF-a et l'IL-1b. L'intégrine axb2, impliquée dans l'interaction monocytes/collagène, stimule une voie de signalisation p60Src/PI-3 kinase/p38 MAP Kinase mise en évidence par l'utilisation d'inhibiteurs et par immunoprécipitations et immunodétections. Enfin, l'utilisation d'inhibiteurs (PDTC, NAC, curcumin) et des expériences de retard sur gel montrent que NF-kB est activé et est responsable de l'expression de TNF-a, d'IL-1b, d'IL-6, de gélatinase B et d'urokinaseInflammatory processes involve the transmigration of peripheral blood monocytes through the endothelium into connective tissue, which is mainly composed of type I collagen fibers. Our results show an activation of monocytes during interaction with type I collagen: O2- production measured by NBT and cytochrome c reduction is enhanced, cytokines secretion (TNF-a, IL-1b, IL-6), gelatinase B and urokinase production are upregulated. TNF-a and IL-1b stimulate gelatinase B and urokinase production by an autocrine mechanism as determined by neutralizing antibodies. Monocytes interact with type I collagen through axb2 integrin which activate a signalling pathway involving p60Src, PI-3 kinase and p38 MAP Kinase as determined by specific inhibitors, immunoprecipitation and western-blot. Finally, NF-kB inhibitors (PDTC, curcumin, NAC) incubations and gel shift experiments demonstrate NF-kB activation which participate to TNF-a, IL-1b, IL-6, gelatinase B and urokinase expression
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Benko, Sabina. "Altérations génomiques à grande distance d'éléments non-codants conservés et dérégulation d'expression tissu-spécifique au locus SOX9." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T039.
Full textAbstract:
SOX9, gène majeur du développement, est localisé au sein d'un désert génique représentant son domaine de régulation. Les mutations du gène SOX9 résultent en un syndrome polymalformatif la dysplasie campomelique (PC). Les endophénotypes de la PC dans leurs formes isolés - séquence de Pierre Robin (SPRi) et anomalies de différentiation sexuelle (DSDi) — peuvent survenir suite à des altérations (translocations, délétions, mutations ponctuelles) des régions non-codantes au locus SOX9. Des études in vitro et in vivo indiquent que ces altérations, localisées a grande distance par rapport à SOX9 (>l,2Mb/SPR; >500kb/DSD), concernent les éléments conservés au cours de l'évolution ayant une fonction régulatrice d'expression tissu et stade spécifique. Les altérations identifiées chez les patients SPRi ou ADSi affecteraient l'expression tissu spécifique respectivement dans le mésenchyme mandibulaire ou les gonades pendant que les autres domaines d'expression de SOX9 resteraient intactsSQX9 is a major developmental gene mapping to a vast gene desert that encompasses its regulatory domain. The SOX9 gene coding equence mutations result in campomelic dysplaisa (CD), a complex polymalformative syndrome. We showed that alterations of non-coding sequences (translocations, deletions or point mutations) at the SOX9 locus result in isolated CD endophenotypes namely Pierre Robin sequence (iPRS) and disorders of sex developpement (iDSD). Both in vitro and in vivo studies indicate that those alterations, located at great distance with respect to SOX9 coding sequences (>1,2Mb/iPRS; >500kb/iDSD), comprise regions conserved throughout the evolution that function as regulatory elements driving tissue specific gene expression of SOX9. We suggest that alterations identified in iPRS and iDSD patients represent a tissue specific loss of SOX9 expression in the mandibular mesenchyme or the developing gonad respectively, while other territories of normal SOX9 expression remain intact
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Prost, Stéphane. "Caractérisation de la voie de signalisation PPAR-y/STATS 5 dans l'hématopoïèse normale et pathologique." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077073.
Full textAbstract:
Les cytopénies et pancytopénies régulièrement observées chez les individus infectés par les virus de l'immunodéficience humaine ou simienne suggèrent une atteinte centrale de l'hématopoïèse qui pourrait prendre part au déficit immunologique qui caractérise ces pathologies. Dans le modèle de l'infection expérimentale du macaque par le SIVmac251 nous montrons que l'atteinte clonogénique des progéniteurs CD34+, qui survient dès la primo-infection, est corrélée à une diminution des ARNm STAT5A et STATB. Ce défaut clonogénique des CSHs est complètement levé par une expression forcée de STAT5B. Nous montrons que la protéine virale Nef (HIV ou SIV) reproduit ex vivo l'atteinte clonogénique des cellules CD34+, que sa présence est nécessaire à l'altération de la clonogénicité des progéniteurs hématopoïétique in vivo et que cette action de la protéine Nef est dépendante du récepteur d'activation et de prolifération des peroxysomes gamma (PPAR-y). Ce travail apporte un nouvel éclairage sur le rôle primordial de la protéine Nef dans la pathologie des infections par le VIH ou le SIV et révèle un nouveau mécanisme de régulation de l'hématopoïèse précoce impliquant la voie de signalisation PPAR-y/STATS. Il ouvre des perspectives majeures sur l'utilisation thérapeutique de ligands de PPAR-y (antagonistes et agonistes) dans le cadre d'infections par le VIH ou le SIV mais également dans le domaine des hémopathies impliquant une dérégulation de STAT5. En ce sens, nous avons évalué le potentiel thérapeutique de l'activation de la voie de signalisation PPAR-y/STAT5 sur les CSLs associées à la maladie résiduelle de la LMCInfection by HIV and SIV immunodeficiency virus induce multiple hematopoietic defects in Primates that reflect central hematopoietic disorders, which contribute to immunodeficiency in infected individuals. Here we show that CD34+ progenitor cells lost their clonogenic potential upon SIV infection, in parallel with down-regulation of STAT5A and STAT5B expression. This defect was entirely rescued by forced expression of STAT5B. We demonstrate that HIV/SIV Nef recapitulates SIV action on CD34+ progenitors ex vivo and is required for SIV action on hematopoietic progenitors in vivo. We further demonstrate that Nef activity strictly depends on thé presence of the peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPAR-y). Our findings extend the crucial role of Nef in HIV/SIV pathogenicity. They further reveal the pivotal role of PPAR-y/STAT5 pathway in regulating early hematopoiesis. They provide an avenue for exploration of the therapeutic benefits of PPAR-y antagonists in AIDS patients, and also of PPAR-y agonists in hematopoietic disorders. In this context, we particulary focused on therapeutic potential of PPAR-y/STAT5 pathway in Bcr/Abl leukemic stem cells
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Ignatyeva, Maria. "Identification et caractérisation de HIRIP3 comme nouveau chaperon d'histone H2A." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ028.
Full textAbstract:
Le génome des cellules eucaryotes est empaqueté dans la chromatine, dont l’établissement et la maintenance nécessitent des processus d’assemblage et de remodelage. Ce travail de thèse a été consacré à la caractérisation de deux facteurs de la machinerie d’assemblage de la chromatine. Le premier facteur étudié dans ce travail était HIRIP3, un homologue mammifère de la levure H2A.Z chaperon Chz1. Nous voulions vérifier si HIRIP3 est une chaperon d'histone par elle-même. Pour commencer, nous avons décrit l'interaction de HIRIP3 avec les histones in vivo. Ensuite, nous avons étudié la spécificité structurale de cette interaction in vitro. Nous avons caractérisé HIRIP3 comme une nouvelle chaperon d'histone H2A qui utilise le motif CHZ pour sa fonction. La deuxième partie de ce travail a été axée sur le complexe de remodelage de la chromatine SRCAP. Nous avons cherché à décoder son réseau d'interaction et à décrire ses sous-complexes. Nous avons reconstitué le complexe de base YL1, SRCAP, TIP49A, TIP49B et H2A.Z / H2B en utilisant le système d'expression chez baculovirus. Notre protocole nous a permis de purifier un complexe de base adapté aux futures études structurelles par microscopie cryo-électroniqueThe genome of eukaryotic cells is packaged into chromatin, which establishment and maintenance require mechanisms of assembly and remodelling. This thesis work was dedicated to the characterization of two factors of chromatin assembly machinery. The first factor studied in this work was HIRIP3, a mammalian homologue of yeast H2A.Z chaperone Chz1. We aimed to test whether HIRIP3 is a histone chaperone by itself. At first, we established HIRIP3 interaction with histones in vivo. After then, we studied the structural specificity of this interaction in vitro. We have characterized HIRIP3 as a novel H2A histone chaperone that utilizes the CHZ motif for its function. The second part of this work was focused on SRCAP chromatin remodelling complex. We aimed to decipher its interaction network and to describe its sub-complexes. We have reconstituted YL1, SRCAP, TIP49A, TIP49B and H2A.Z/H2B core complex using baculovirus expression system. Our protocol allowed us to purify core complex suitable for future structural studies by cryo-electron microscopy
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Courtine, Emilie. "Importance de la sous-unité cRel de NF-κB dans la réponse anti-infectieuse : Approche translationnelle." Paris 5, 2010. http://www.theses.fr/2010PA05T049.
Full textAbstract:
Le facteur transcriptionnel NF-κB est un élément central dans la mise en place et le développement de la réponse anti-infectieuse. NF-κB est actif sous forme de dimères composés à partir de cinq sous-unités différentes. Parmi celles-ci, les sous-unités p65 et p50 sont reconnues comme essentielles à la réponse antiinfectieuse. A l’inverse, la place de la sous-unité cRel dans la réponse antimicrobienne reste discutée. L’objectif de ce travail de thèse était d’investiguer le rôle de la sous-unité cRel dans la réponse à l’infection bactérienne et d’étudier les conséquences des variabilités génétiques affectant l’activité de NF-κB. Ex vivo, les conséquences de l’absence de cRel ont été étudiées sur le transcriptome de cellules MEFs provenant d’animaux rel knock-out (rel-/-) et stimulées par du LPS. Nous démontrons ainsi que l’absence de cRel conduit à un défaut important de la réponse immunitaire en affectant principalement la réponse inflammatoire et en favorisant l’apoptose, deux mécanismes majeurs de la réponse de l’hôte lors des infections sévères. In vivo, dans un modèle murin de péritonite, nous montrons que, malgré une clairance bactérienne normale, les souris rel-/- ont une réponse pro inflammatoire précoce altérée, une déplétion des cellules dendritiques spléniques et une surmortalité comparativement aux souris « wild type ». Une analyse transcriptomique a également été réalisée pour expliquer cette surmortalité. Enfin dans une approche translationnelle, nous montrons chez des patients en choc septique qu’un variant génétique qui conduit à une suractivation de NF-κB est associée à une plus grande sévérité clinique, et à une surmortalité, confirmant l’importance majeure d’une réponse immune contrôlée. En conclusion, nous confirmons l’importance de NF-κB dans la réponse antiinfectieuse en soulignant le rôle, jusqu’à présent sous-évalué, de la sous-unité cRelThe transcriptional factor NF-κB is a key element of the anti infectious response. NF-κB active form is made of dimers composed by five distinct subunits. Among those, p65 and p50 subunits are recognized to be essential in immune response. In contrast, the role of cRel subunit in anti-microbial response is still unclear. The aim of this research project was to investigate the place of cRel in immune response to infection and to study consequences of genetic variability affecting NF-κB activity. Ex vivo, consequences of absence of cRel were examined in a microarray study realized on MEFs from rel knock out (rel-/-) mice and stimulated by LPS. Here, we demonstrate that absence of cRel leads to an important defect in immune response affecting mainly inflammatory response and apoptosis, two major features of host response during severe infections. In vivo, in a murin model of peritonitis, we show that, despite a normal bacterial clearance, rel-/- mice have an altered early pro-inflammatory response and a late over mortality as compared to wild type mice. Genome wide analysis was also realized at D1 after CLP and revealed major changes in gene expression profiles between wt and rel-/- mice. Finally, in a translational approach, we show, in patients with septic shock, that a genetic variant leading to an NF-κB over activation is associated with an higher clinical severity, confirming the major importance of a controlled immune response. In conclusion, by a multiple approach, we show for the first time that the cRel subunit is a major element of the NF-κB transcriptional factor during severe infections
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Polak, Katarzyna. "Role of the Eos and Helios transcription factors in regulatory T cell biology." Thesis, Strasbourg, 2015. http://www.theses.fr/2015STRAJ011/document.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcription Eos et Helios ont été décrits comme étant des modulateurs des fonctions des cellules T régulatrices (Treg). Nos résultats suggèrent qu’Eos et Helios ne sont pas nécessaires, ni pour la différenciation, ni pour les principales fonctions des cellules Treg CD4+. Cependant, les cellules Helios-/- présentent une meilleure activité suppressive et à un profil transcriptomique de cellules Treg activées. Pour tester si Eos et Helios coopèrent pour réguler les fonctions des cellules Treg, nous avons analysé les souris doubles mutantes. Nos découvertes indiquent que la perte combinée d’Eos et d’Helios n’a pas d’effet sur la biologie des cellules Treg. De plus, nous avons montré qu’Eos et Helios sont induits dans les cellules Treg CD8+. Néanmoins, seule la perte d’Helios ou celle combinée d’Eos et d’Helios affectent leur différenciation. Tous ces résultats suggèrent donc qu’Eos et Helios ne sont pas requis pour réguler les fonctions essentielles des cellules TregThe transcription factors Eos and Helios have been described as modulators of regulatory T cell (Treg) functions. Our results suggest that they are not necessary for the differentiation and essential functions of CD4+ Treg cells. However, Helios-/- cells present a superior suppressive activity and a transcriptional profile of activated Treg cells. To test if Eos and Helios can cooperate to regulate Treg cell functions, we then analyzed double null mice. Our findings indicate that loss of both Eos and Helios has no effect on Treg cell biology during homeostasis. In addition, we showed that Eos and Helios are induced in CD8+ Treg cells. However, only loss of Helios, or both Helios and Eos, affect their differentiation. Altogether, these results suggest that Eos and Helios are not required regulate essential CD4+ Treg cell functions, but the absence of Helios may have an impact on their level of activation. Finally, Helios and Eos may play role of in the CD8+ Treg cell compartment
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Bardot, Paul Louis Bernard. "Analyse de la composition et de la fonction de la machinerie basale de transcription au cours du développement et de la différenciation." Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ034.
Full textAbstract:
TFIID et SAGA sont deux complexes importants pour la transcription, contenant la sous-unité TAF10. Nous avons analysé leur composition dans l’embryon murin et différents contextes cellulaires par immuno-précipitation et spectrométrie de masse. Les sous unités des complexes TFIID et SAGA ont été détectées en proportion différente selon le type cellulaire. Par filtration sur gel, des sous-complexes de TFIID ont aussi été détectés. En absence de TAF10, l’assemblage de TFIID et SAGA est fortement affecté mais la formation des somites n’est pas initialement affecté ni l’expression globale des gènes. L’analyse des niveaux d’ARN totaux et naissants dans les cellules ES murines suggèrent que TFIID et SAGA sont requis globalement pour l’initiation de la transcription, mais que la diminution de la synthèse des ARNm est compenséeTFIID and SAGA are two multi-subunit complexes which play important roles in transcription and that contain the TAF10 subunit. By immunoprecipitation followed by mass spectrometry, we analyzed the composition of TFIID and SAGA complexes in the embryo as well as in different cellular contexts. TFIID and SAGA complexes subunits were detected in different proportions depending on the cellular context. By gel filtration, we also detected distinct TFIID sub-complexes. In the absence of TAF10, TFIID and SAGA assembly is severely impaired but neither early somitogenesis nor global gene expression is affected. Steady-state and newly transcribed mRNA analyses in mES cells suggest that TFIID and SAGA are generally required for transcription initiation. However, the decrease of mRNA synthesis is compensated
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Maurer, Gaëtan. "Analyse du rôle du facteur de transcription Ikaros dans le développement des lymphocytes TH17." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ115.
Full textAbstract:
Les cellules T auxiliaires TH17 sont caractérisées par l’expression de la cytokine IL-17A, ainsi que le facteur de transcription RORɣt. Elles sont connues pour jouer un rôle clé dans la pathogenèse de la sclérose en plaques. Ces cellules existent sous deux formes : les cellules régulatrices, immunomodulatrices, et les cellules pathogènes qui sont critiques pour l'inflammation. Il est donc important de comprendre le mécanisme qui sous-tend la différenciation des cellules TCD4+ naïves en ces deux types cellulaires. J'ai trouvé que le facteur de transcription Ikaros est un répresseur indirect de la transcription des gènes pathogéniques (Il3, Csf2, Ifng, Stat4…) dans les cellules TCD4+ naïves murines, cultivées pour induire une polarisation vers le phénotype TH17 régulateur. De plus, en absence d’Ikaros et en conditions de culture régulatrice, l’ajout d’IL-6 seul augmente l’expression de GM-CSF, facteur clé dans l’induction des maladies auto-immunes, suggérant un rôle d’Ikaros dans la régulation de cette voie. En conclusion, nos résultats suggèrent que Ikaros est nécessaire pour polariser correctement les cellules TCD4+ naïves dans le programme TH17TH17 cells are characterized by the expression of the cytokine IL-17A, as well as the transcription factor RORɣt. They are known to play key role in the pathogenesis of the multiple sclerosis. These cells exist in two forms: the regulating cells, immunomodulatory, and the pathogenic cells which are critical for the inflammation. Thus it is important to understand the mechanism which underlies the differentiation of naïve CD4+ T cells in these two cellular types. I found that the transcription factor Ikaros is an indirect repressor of the transcription of pathogenic genes (Il3, Csf2, Ifng, Stat4…) in naïve CD4+ T cells, cultured to induce a polarization toward regulatory TH17 cells. Moreover, in absence of Ikaros and in regulatory condition of culture, adding IL-6 alone increases the expression of GM-CSF, key factor to induce auto-immune diseases, suggesting a role of Ikaros in this pathway. In conclusion, our results suggest that Ikaros is necessary to polarize correctly naïve CD4+ T cells in TH17 cells
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Brichler, Ségolène. "Le virus de l'hépatite delta : implication du stress oxydant, de STAT-3 et de NF-kappaB dans la pathogénèse virale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T002.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatite delta (VHD) est un satellite du virus de l’hépatite B (VHB). Il utilise les protéines d’enveloppe de ce dernier pour former ses particules virales. Le génome du VHD code deux protéines, p24 (ou petite protéine sHDAg) et p27 (ou grande protéine LHDAg), à partir d’une seule phase de lecture ouverte située sur l’antigénome, et ce, grâce à un mécanisme d’édition de l’ARN messager. P24 et p27 sont strictement identiques, exceptés pour les 19 acides aminés additionnels en C-terminal de p27, qui contiennent un site d'isoprénylation sur le résidu cystéine en position 211 (C211). Cette isoprénylation est critique pour l’adressage de la ribonucléoprotéine delta à la membrane du réticulum endoplasmique (RE), pour son interaction avec les protéines d'enveloppe du VHB et pour l’assemblage et la sécrétion des virions delta. Au cours de l’infection VHB/VHD, on observe en règle générale une inhibition de la réplication du VHB. Cependant, la maladie hépatique qui en résulte est beaucoup plus grave, avec une plus grande fréquence des formes fulminantes, et surtout une progression accélérée vers la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire. Les mécanismes de cette aggravation ne sont pas élucidés, mais suggèrent une pathogenèse spécifique liée au VHD. Afin d’explorer ces questions, nous avons utilisé un modèle de transfection transitoire de cellules hépatocytaires Huh7, à l’aide de plasmides codant les protéines delta p24 et p27. Dans une première étude, nous montrons que p27, et p24 dans une moindre mesure, inhibent la réplication du VHB, en bloquant l’activation des enhancers 1 et 2 responsables du haut niveau de réplication du VHB et de la spécificité hépatocytaire de cette réplication. De plus, nous montrons que p27 est capable d’activer le promoteur du gène codant la protéine antivirale MxA inductible par les interférons de type I (IFNa/b) et de potentialiser l’effet des IFNa/b sur ce promoteur MxA. Dans une seconde étude, nous avons recherché des mécanismes de pathogenèse spécifique liés au VHD, responsables de l’aggravation de la maladie hépatique au cours de l’infection VHB/VHD. L’activation des voies du stress oxydant semble être un mécanisme électif dans la pathogénicité des virus des hépatites B et C (VHC). En effet, les protéines non structurales, NS5A notamment, et la capside du VHC, ainsi que la protéine HBx et les protéines d’enveloppe du VHB, sont capables d’induire un stress oxydant au sein de la cellule. De nombreux facteurs de transcription impliqués dans diverses voies de signalisation cellulaire sont ainsi activés. Parmi ceux-ci, on distingue STAT-3, considéré comme un véritable oncogène, et NF-kB, deux facteurs clefs de la régulation de la prolifération et de la mort cellulaire, dont l’activation a été retrouvée dans de nombreux types de cancers dont l’hépatocarcinome cellulaire. Nos résultats montrent que p27 induit de façon significative un stress du RE, ainsi qu’une augmentation de la synthèse de l’enzyme NADPH oxydase 4 (Nox4), impliqués dans la production en excès de radicaux oxygénés (ROS) dans la cellule et la phosphorylation sur sérine ou thréonine de nombreux facteurs de transcription. Nous montrons en effet dans notre modèle, une production de ROS significativement plus élevée dans les cellules exprimant p27, de même que la phosphorylation et la translocation nucléaire de STAT-3 et de NF-kB. Ces résultats sont confirmés par l’utilisation d’antioxydants et d’inhibiteurs calciques qui inhibent cette activation. De même, en utilisant un plasmide p27 où la C211 est mutée en Sérine, nous avons obtenu une diminution de 50% de l’activation de STAT-3 et de NF-kB confirmant le rôle de l’isoprénylation dans les effets observés. Ainsi, en conclusion, nos résultats constituent une première approche de la compréhension des mécanismes de la pathogenèse hépatique spécifique liée au VHDThe hepatitis delta virus (HDV) is a satellite of hepatitis B virus (HBV). HDV uses the HBV envelope proteins to form its viral particles. The HDV genome encodes two proteins, p24 (or small protein sHDAg) and p27 (or large protein LHDAg) from a single open reading frame located on the antigenome through an editing event occuring on the delta mRNA. P24 and p27 are identical, except for the 19 additional amino acids at p27 Cterminus, which contain an isoprenylation site on a cysteine residue at position 211 (C211). This isoprenylation is critical for addressing the delta ribonucleoprotein to the endoplasmic reticulum (ER) membrane, for interaction with HBV envelope proteins, assembly and secretion of delta virions. During HBV/HDV co-infection, an inhibition of HBV replication is generally observed. However, the resulting liver disease is much more severe, with a higher incidence of fulminant hepatitis, and an accelerated progression to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The mechanisms are unclear, but suggest a specific HDV-related pathogenesis. To explore these questions, we used a transient transfection of Huh7 hepatocytes, using plasmids encoding the p24 and p27 delta proteins. In a first study, we show that p27, and p24 to a lesser extent, inhibit HBV replication by blocking the activation of enhancers 1 and 2, reponsible for the high level of HBV replication. Moreover, p27 can activate the interferon type I (IFNa/b)-inducible MxA promoter, and potentiate the effect of IFNa/b on MxA promoter. In a second study we investigated possible specific pathogenic mechanisms relaed to HDV. The activation of oxidative stress pathways appears to be an elective mechanism in hepatitis B and C (HCV) pathogenesis. Indeed HCV nonstructural NS5A and core proteins, and HBV HBx and envelope proteins, can induce oxidative stress within infected cells. Many transcription factors involved in various cellular signaling pathways are thus activated. Among these, STAT-3, considered as a true oncogene and NF-kB are two key factors regulating proliferation and cell death. Their activation has been found in many types of cancer, including hepatocellular carcinoma. Our results show that p27 induces a significant ER stress and an increased synthesis of the NADPH oxidase 4 (Nox4) enzyme, involved in the overproduction of reactive oxygen species (ROS) in the cell, and serine or threonine phosphorylation of many transcription factors. Indeed, in our model, ROS production is significantly higher in cells expressing p27, as well as phosphorylation and nuclear translocation of STAT-3 and NF-kB. These results are confirmed by the use of antioxidants and calcium inhibitors that strongly inhibit this activation. Similarly, using a p27 plasmid construct in which C211 is mutated to serine, we obtained a 50% decrease of STAT-3 and NF-kB activation, confirming the role of isoprenylation in the observed effects. In conclusion, our results constitute a first approach to understanding the mechanisms of HDV-related liver pathogenesis
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Nugues, Anne-Lucie. "Altération du ripoptosome dans la leucémie aiguë myéloïde." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01018661.
Full textAbstract:
Les protéines receptor-interacting protein kinase 1 (RIP1) et RIP3 ont été identifiées comme intervenant dans la régulation de la mort cellulaire apoptotique ou nécroptotique mais également dans la survie cellulaire. Ces deux protéines possèdent un domaine sérine/thréonine kinase, un domaine d'interaction spécifique RHIM (RIP homotypic interacting motif) et diffèrent dans leur domaine C-terminal car seule RIP1 possède un domaine de mort. Ces protéines font partie d'un ensemble de protéines régulatrices nommé ripoptosome. Des études ont montré une altération du ripoptosome dans les leucémies lymphoïdes chroniques (LLC) et les leucémies aigües lymphoïdes (LAL). Nous nous sommes intéressés aux leucémies aigües myéloïdes (LAM). L'analyse de l'expression des protéines RIP1 et RIP3 a été réalisée dans des blastes triées CD34+ de patients atteints de LAM ou dans des cellules CD34+ de donneurs sains en Q-RT-PCR. Les premières analyses montrent que RIP3 est significativement sous-exprimée chez les patients atteints de LAM en comparaison avec les cellules CD34+ issues de donneurs sains. Aucune différence n'a été mise en évidence pour l'expression de RIP1 dans les deux types de cellules CD34+. Afin de comprendre l'implication de l'extinction de RIP3 dans les LAM, nous avons étudié sa réexpression dans une lignée cellulaire leucémique murine (DA1-3b) où RIP3 n'est pas exprimée par métylation de son promoteur, au moyen d'un système d'expression conditionnelle (LacSwith II, IPTG). Après 10h d'induction de l'expression, on constate que la protéine RIP3 sauvage (RIP3-WT) induit une apoptose dans les cellules DA1-3b. Afin de déterminer l'implication des domaines de RIP3, nous avons utilisé une protéine mutante kinase Dead (RIP3-KD, activité kinase abolie) et une protéine mutante dans la séquence d'interaction spécifique avec RIP1 (RIP3-RHIM). L'analyse de la mortalité cellulaire en cytométrie en flux et en microscopie électronique montre que les protéines RIP3-WT et -KD induisent toutes les deux la mort apoptotique des cellules DA1-3b respectivement de 15% et de 50% après 10h d'expression. On constate donc que la protéine RIP3-KD induit une mort plus importante et plus précoce que la protéine sauvage. La protéine RIP3 mutée dans son domaine RHIM ne peut plus induire de mort cellulaire. Il semble donc que le domaine kinase de RIP3 jouerait un rôle régulateur dans la mort cellulaire induite par RIP3. L'utilisation du modèle de leucémie murine DA1-3b a permis de réaliser un étude in vivo de l'expression conditionnelle de RIP3-WT et -KD. Seule l'expression de RIP3-KD est capable de prolonger significativement la survie des souris.De plus, il a été démontré que RIP3 pouvait également induire la nécroptose dans les cellules lorsque l'apoptose ne peut aboutir, notament lorsque les caspases sont inhibées à l'aide d'un inhibiteur de pan-caspases le Z-VAD-FMK. Le traitement des cellules exprimant RIP3-WT par 50µM de Z-VAD-FMK induit une plus forte mortalité (45%) des cellules tandis que dans les cellules exprimant RIP3-KD, l'inhibiteur des caspases inhibe complètement le processus apoptotique et permet la survie des cellules (10%). Une étude en microscopie électronique a permis de déterminer que la présence de Z-VAD-FMK induit un switch de l'apoptose vers la nécroptose. Il semble donc que le domaine de kinase possède un rôle important dans la signalisation de la nécroptose car la protéine RIP3-KD n'est plus capable d'initier le switch entre l'apoptose et la nécroptose. Quelques données préliminaires semblent indiquer que les calpaïnes ainsi que la caspase 12 pourraient également être impliquées dans la balance apoptose/nécroptose. [...]
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Strub, Thomas. "Mode d'action du facteur de transcription MITF dans la physiopathologie des cellules de mélanome humain." Thesis, Strasbourg, 2012. http://www.theses.fr/2012STRAJ104.
Full textAbstract:
MITF (MIcrophthalmia-associated Transcription Factor) contrôle de multiples aspects de la physiopathologie du lignage mélanocytaire. Par des techniques de génomique haut débit (ChIP-seq, RNA-seq), nous avons montré que MITF active un ensemble de gènes impliqués dans la réplication et la réparation de l’ADN ainsi que la mitose pour stimuler la prolifération des cellules de mélanome, et réprime des gènes contrôlant leur caractère invasif. Pour étudier le mécanisme d’action de MITF, son interactome a été déterminé par spectrométrie de masse mettant en évidence de nombreux partenaires à activité co-activateur ou co-répresseur (bcaténine, complexes de remodelage de la chromatine BRG1 et NURF) ainsi que des facteurs intervenant dans le cycle de l’ubiquitination et de déubuquitination (HERC2 et USP11). Une caractérisation fonctionnelle de HERC2 et USP11 suggère qu’ils agissent comme des cofacteurs transcriptionnels de MITF essentiels pour la prolifération des cellules de mélanomeMITF (MIcrophthalmia-associated Transcription Factor) controls multiple aspects of the physiopathology of the melanocyte lineage. Using high throughput genomics techniques (ChIP-seq, RNA-seq), we show that MITF activates a set of genes involved in DNA replication and repair as well as mitosis to promote melanoma cell proliferation, while repressing genes involved in promoting their invasion. To better understand how MITF acts both as a transcriptional activator and repressor, we characterized the MITF interactome by tandem immuno-affinity purification and mass-spectrometry. A complex set of partners with coactivatoror co-repressor properties were identified (b-catenin, the BRG1 and NURF chromatin remodeling complexes) as well as novel factors with ubiquitin E3 ligase (HERC2) and ubiquitin-specific protease (USP11) activities. Functional characterization of HERC2 and USP11 suggests that they act as transcriptional cofactors for MITF essential for melanoma cell proliferation
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Corvaisier, Matthieu. "Implication des co-activateurs transcriptionnels YAP/TAZ dans la régulation entre la croissance et la dormance tumorale des cellules du cancer colorectal : mécanismes moléculaires et perspectives thérapeutiques." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S028/document.
Full textAbstract:
Le cancer colorectal est la première pathologie cancéreuse de la sphère digestive, tant en terme de fréquence que de mortalité par an. Chaque année, 41 000 nouveaux cas sont diagnostiqués et 17 000 décès sont dus à ce cancer en France. Deux paramètres cliniques expliquent la mortalité de ce cancer; d'une part le fait qu'un patient sur deux est diagnostiqué au stade métastatique ou va présenter des lésions métastatiques durant l'histoire de sa pathologie, d'autre part le fait que les patients après traitement vont fréquemment présenter une récidive de leur pathologie. L'utilisation de régimes de chimiothérapies avant et après résection métastatique améliore la survie sans récidive à court terme, mais à 2 ans post chirurgie l'avantage apporté est perdu. Ainsi, la compréhension des mécanismes d'échappement à la chimiothérapie et régissant la croissance tumorale est d'intérêt pour tenter de limiter la récidive tumorale. L'objectif de ce travail de thèse a consisté en l'analyse de sous-populations obtenues sous pression de chimiothérapie au 5-Fluorouracile (5FU) dérivées de la lignée cancéreuse colique HT29, ainsi que les mécanismes moléculaires associés. Notre clone le plus chimiorésistant isolé, le modèle cellulaire 5F31, quitte le compartiment prolifératif sous traitement à fortes doses de 5FU, ceci étant associé à une perturbation de la voie de signalisation de la Src kinase c-Yes et de son partenaire, le co-activateur transcriptionnel YAP. Sous traitement, les cellules chimiorésistantes entrent en quiescence, le complexe protéique entre c-Yes et YAP est perdu et la quantité totale et nucléaire de YAP diminue de manière significative (Igoudjil, Touil, Corvaisier et al. 2014 Clinical Cancer Research). Dès lors, la suite des travaux a consisté en l'étude du rôle potentiel de YAP sur la balance quiescence/prolifération sous 5FU. L'inhibition pharmacologique ou l'inhibition transitoire de l'expression de YAP et de son paralogue, la protéine TAZ, dans plusieurs lignées cancéreuses coliques induit l'augmentation de la fraction de cellules quiescentes, associée au ralentissement significatif de la croissance tumorale. A l'inverse, la surexpression d'une forme constitutivement active de YAP demeurant nucléaire sous 5FU maintient les cellules 5F31 en prolifération et sensibilise les cellules à la chimiothérapie. Au niveau des effecteurs protéiques, l'induction de quiescence (par traitement à la chimiothérapie ou inhibition de YAP/TAZ) est associée à la perte d'expression de la Cycline E1 et du facteur de transcription c-Myc. A l'inverse, la surexpression du dominant constitutivement actif de YAP dans les cellules 5F31 conduit à l'expression soutenue de la Cycline E1 sous 5FU, expression nécessitant l'activation du facteur de transcription CREB. L'inhibition de la Cycline E1 permet d'induire la quiescence cellulaire, proposant cette protéine comme l'un des effecteurs des protéines YAP/TAZ dans la régulation entre la quiescence et la prolifération cellulaire (Corvaisier et al, Oncotarget, 2016). En conclusion, nos données montrent l'importance du rôle des protéines YAP/TAZ dans le maintien des cellules en prolifération via l'expression notamment de la Cycline E1. Nos résultats sur cohorte de patients atteints de métastases hépatiques de cancers colorectaux montrent que l'expression des co-activateurs YAP/TAZ est liée à un index prolifératif plus important, confortant nos données sur le rôle de ces protéines dans la croissance tumorale. De plus, l'expression élevée de YAP et TAZ est associée en analyses multivariées à une récidive plus précoce et à une survie globale plus faible. Ainsi, l'étude de l'expression et du niveau d'activation de ces acteurs serait un marqueur pronostic intéressant dans l'anticipation de la récidive métastatique ; ainsi que des cibles thérapeutiques intéressantes pour tenter de limiter la rechute tumoraleColorectal cancer is the most frequent and lethal cancerous pathology from the digestive system. Each year in France, 41 000 new cases are diagnosed and 17 000 patients die due to this pathology. This high mortality is mainly due to the rate of patients with liver metastatic lesions and the early relapse of those metastases after treatment. The use of chemotherapy prior to surgery induces a decrease of early relapse, however 2 years after resection this advantage is lost. Thus, understanding the mechanisms underlying escape to treatment is required to try to delay or prevent tumor recurrence.The aim of this doctoral work was to analyze clonal chemoresistant subpopulations derived from the colorectal cancer cell line HT29 after chronic exposure to 5-Fluorouracil (5FU) and molecular mechanisms associated with chemoresistance. The most chemoresistant clonal subpopulation, 5F31, stops its proliferation after treatment with high dose of 5FU, this behavior being associated with the modulation of the c-Yes/YAP axis. After treatment, 5F31 cells enter quiescence, interaction between c-Yes and YAP is lost and total and nuclear YAP protein expression reduces significantly (Igoudjil, Touil, Corvaisier et al. 2014, Clinical Cancer Research). The next step was to study functions of YAP protein in this chemotherapy- induced quiescence.Pharmacological or transient inhibition of YAP and its homolog TAZ, induces quiescence and reduces cellular growth in several colorectal cancer cell lines. On the other hand, overexpression of a constitutively active form of YAP in 5F31 cells forces cells to remain proliferative under 5FU treatment, enhancing 5F31 cell chemosensitivity to 5FU.Regarding proteic effectors, quiescence (either induced by 5FU or YAP/TAZ inhibition) is associated with loss of expression of the transcription factor c-Myc and Cyclin E1. In 5F31 cells expressing the active mutant form of YAP, Cyclin E1 expression is sustained after 5FU treatment through the activation of the transcription factor CREB. Cyclin E1 inhibition is sufficient to induce quiescence, therefore introducing this protein as one of the final effectors of YAP/TAZ co-activators in the regulation of the proliferation/quiescence switch in colorectal cancer cells (Corvaisier et al. 2016, Oncotarget).To conclude, our work reveals the importance of YAP/TAZ proteins for the maintenance of colorectal cancer cells proliferation through Cyclin E1 expression. Our work on liver metastases from patients with colorectal cancer shows that high expression of YAP/TAZ is connected to a higher proliferative index in metastatic lesions. Moreover, high YAP/TAZ expression is associated with shorter patient progression-free survival and shorter overall survival. Studying the expression and level of YAP/TAZ activation could be an interesting prognosis marker to anticipate metastatic relapse and potent druggable target to delay tumoral recurrence
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Saad, Chadi. "Caractérisation des erreurs de séquençage non aléatoires : application aux mosaïques et tumeurs hétérogènes." Thesis, Lille 2, 2018. http://www.theses.fr/2018LIL2S014/document.
Full textAbstract:
L'arrivée des technologies de séquençage d’ADN à haut-débit a représenté une révolution dans le domaine de la génomique personnalisée, en raison de leur résolution et leur faible coût. Toutefois, ces nouvelles technologies présentent un taux d’erreur élevé, qui varie entre 0,1% et 1% pour les séquenceurs de seconde génération. Cette valeur est problématique dans le cadre de la recherche de variants de faible ratio allélique, comme ce qui est observé dans le cas des tumeurs hétérogènes. En effet, un tel taux d’erreur peut mener à des milliers de faux positifs. Chaque région de l’ADN étudié doit donc être séquencée plusieurs fois, et les variants sont alors filtrés en fonction de critères basés sur leur profondeur. Malgré ces filtres, le nombre d’artefacts reste important, montrant la limite des approches conventionnelles et indiquant que certains artefacts de séquençage ne sont pas aléatoires.Dans le cadre de cette thèse, nous avons développé un algorithme exact de recherche des motifs d’ADN dégénérés sur-représentés en amont des erreurs de séquençage non aléatoires et donc potentiellement liés à leur apparition. Cet algorithme a été mis en oeuvre dans un logiciel appelé DiNAMO, qui a été testé sur des données de séquençage issues des technologies IonTorrent et Illumina.Les résultats expérimentaux ont mis en évidence plusieurs motifs, spécifiques à chacune de ces deux technologies. Nous avons ensuite montré que la prise en compte de ces motifs dans l’analyse, réduisait considérablement le taux de faux positifs. DiNAMO peut donc être utilisé en aval de chaque analyse, comme un filtre supplémentaire permettant d’améliorer l’identification des variants, en particulier des variants à faible ratio alléliqueThe advent of Next Generation DNA Sequencing technologies has revolutionized the field of personalized genomics through their resolution and low cost. However, these new technologies are associated with a relatively high error rate, which varies between 0.1% and 1% for second-generation sequencers. This value is problematic when searching for low allelic ratio variants, as observed in the case of heterogeneous tumors. Indeed, such error rate can lead to thousands of false positives. Each region of the studied DNA must therefore be sequenced several times, and the variants are then filtered according to criteria based on their depth. Despite these filters, the number of errors remains significant, showing the limit of conventional approaches and indicating that some sequencing errors are not random.In the context of this thesis, we have developed an exact algorithm for over-represented degenerate DNA motifs discovery on the upstream of non-random sequencing errors and thus potentially linked to their appearance. This algorithm was implemented in a software called DiNAMO, which was tested on sequencing data from IonTorrent and Illumina technologies.The experimental results revealed several motifs, specific to each of these two technologies. We then showed that taking these motifs into account in the analysis reduced significantly the false-positive rate. DiNAMO can therefore be used downstream of each analysis, as an additional filter to improve the identification of variants, especially, variants with low allelic ratio
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Mastio, Jérôme. "Analyse du rôle du facteur de transcription Ikaros dans le développement des cellules dendritiques plasmacytoïdes." Thesis, Strasbourg, 2013. http://www.theses.fr/2013STRAJ076.
Full textAbstract:
Le développement et la fonction des cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs) doivent être finement régulés afin d’éviter le développement de maladies auto-immunes ou de leucémies. Il a été montré récemment qu’une fraction des leucémies humaines dérivées des pDCs possède des mutations de type perte de fonction dans le locus IKZF1 qui code pour le facteur de transcription Ikaros. Ainsi l’étude de la fonction d’Ikaros dans les pDCs pourrait aider à comprendre son possible rôle de gène suppresseur de tumeur. Les souris hypomorphiques pour Ikaros (IkL/L) ne possèdent pas de pDCs matures dans la rate et les ganglions lymphatiques mais accumulent des pDCs immatures dans la moelle osseuse (MO). De manièreintéressante, les pDCs de MO IkL/L montrent une activation ectopique de la voie Notch. Nous avons trouvé qu’un inhibiteur de gamma-secrétase (GSI), qui inhibe la voie Notch, permet de restaurer la différenciation de pDCs fonctionnelles dans les cultures de cellules de MO. Les principaux progéniteurs dendritiques affectés par le GSI sont le progéniteur myéloïde commun (CMP) et le progéniteur des macrophages et des cellules dendritiques (MDP). Comme le GSI inhibe la voie Notch, nous avons aussi inactivé RBPJ, le facteur de transcription situé en aval des récepteurs Notch. Contre toute attente, l’inactivation de RBPJ ne récapitule pas les effets observés avec le GSI. De plus, les cellules IkL/L déficientes pour RBPJ continuent de répondre au GSI, ce qui suggère que le GSI possède d’autres cibles en plus de la voie Notch dans ce système. Nos données montrent ainsi qu’Ikaros est requis pour la différenciation terminale des pDCs et qu’il agit en partie en bloquant une voie GSI dépendante Notch indépendanteThe development and function of plasmacytoid dendritic cells (pDCs) must be tightly regulated to prevent autoimmune disease or leukemia. It was recently discovered that a fraction of human pDC-derived neoplasms exhibit loss of function mutations of the IKZF1 locus, which encodes the Ikaros transcription factor. Deciphering the function of Ikaros in pDCs could thus help understand its probable tumor suppressor function. Mice hypomorphic for Ikaros (IkL/L) are devoid of mature pDCs in the spleen and lymph nodes but accumulate immature pDCs in the bone marrow (BM). Interestingly IkL/L BM pDCs exhibit an ectopic activation of the Notch pathway. We found that a gamma secretase inhibitor (GSI), which inhibits Notch signalling,rescues the differentiation of functional pDCs in BM cultures. The main dendritic cell progenitors affected by GSI are the common myeloid progenitors (CMP) and the macrophage and dendritic cell progenitors (MDP). As GSI inhibits the activation of the Notch pathway, we also inactivated RBPJ, the transcriptional effector of the Notch pathway. Surprisingly, RBPJ inactivation did not recapitulate the effect of GSI. Moreover, RBPJdeficient IkL/L cells still respond to GSI, demonstrating that GSI targets additional events besides Notch in this system. Our data thus show that Ikaros is required for terminal differentiation of pDCs, and acts in part by blocking a Notch independent GSI-sensitive pathway
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Kalakech, Hussein. "Conditionnement ischémique à distance : Rôles du facteur de transcription induit par l’hypoxie-1α et de l’apolipoprotéine A1." Thesis, Angers, 2014. http://www.theses.fr/2014ANGE0040.
Full textAbstract:
La restauration rapide du flux sanguin est essentielle pour limiter l’étendue de l’infarctus myocardique mais elle est à l’origine de lésions irréversibles. Le préconditionnement ischémique à distance (RIPC) qui désigne l’application non invasive de brèves séquences d’ischémie/reperfusion au niveau d’un organe à distance du cœur peut prévenir la survenue de ces lésions de reperfusion. De nombreuses études suggèrent une implication de facteurs de transcription et de facteurs humoraux dans la cardioprotection induite par le RIPC, mais leurs identités restent inconnues. Dans la première partie du travail, nous avons donc étudié le rôle potentiel du facteur de transcription induit par l’hypoxie (HIF-1α) dans la phase précoce du RIPC. Nous avons ainsi démontré, en utilisant deux modèles expérimentaux : les souris transgéniques déficientes en HIF-1α et les rats traités par un inhibiteur pharmacologique de HIF-1α, que HIF-1α n’est pas indispensable pour cette phase du RIPC. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons essayé d’identifier, de façon directe cette fois, le ou les facteurs humoraux responsables de l’effet protecteur du RIPC. En se basant sur les résultats des études protéomiques démontrant une augmentation des concentrations plasmatiques d’apolipoprotéine A1 (Apo A1) suite au RIPC, nous avons alors cherché à mettre en évidence si cette protéine pourrait être un facteur circulant du RIPC. L’Apo A1, injectée directement avant la réalisation de l’infarctus chez le rat, était capable de reproduire l’effet cardioprotecteur et d’activer les mêmes voies de signalisation du RIPC. L’Apo A1 pourrait donc être un facteur humoral du RIPCAlthough early restoration of blood flow to the ischemic heart is essential to reduce the extent of myocardial infarction, reperfusion per se may cause irreversible tissue injury. Remote ischemic preconditioning (RIPC), the phenomenon whereby brief episodes of I/R are applied in distant tissues or organs, can protect the myocardium against reperfusion injuries. Several studies suggest that transcription factors and humoral mediators may be involved in RIPC mechanisms ; however the actual identity of these factors remains unknown. Therefore, in the first part of the study, we aimed to identify the role of hypoxia inducible factor (HIF-1α) in the acute phase of RIPC. We have thus demonstrated, using two animal models: partially HIF-1α-deficient mice and rats pretreated with a pharmacological inhibitor of HIF-1α, that HIF-1α is not crucial for this phase of RIPC. In the second part of the study, we have used a more direct approach and attempted to identify one or more humoral mediators of RIPC. Based on the results of proteomic studies showing an increase in plasmatic apolipoprotein A1 (Apo A1) levels following RIPC, we thus sought to determine if Apo A1 may constitute a blood-borne factor involved in RIPC’s protective effects. Our findings indicated that Apo A1 injected before myocardial infarction in rats acutely protected the heart, recapitulating RIPC-induced cardioprotection and that Apo A1 share some common signaling pathways with RIPC. Apo A1 may then be a humoral mediator of RIPC
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Nair, Asmaa. "Expression ectopique du gène homéotique Cdx2 dans les pathologies du système digestif." Thesis, Strasbourg, 2018. http://www.theses.fr/2018STRAJ003/document.
Full textAbstract:
Le facteur de transcription homéotique CDX2 est spécifiquement exprimé dans l’épithélium intestinal où il maintient l’identité, contrôle l’homéostasie et exerce une fonction suppresseur de tumeurs. Chez l’homme, une expression ectopique (hors de l’intestin) de CDX2 peut survenir, dans les métaplasies intestinales d’organes digestifs, considérées comme pré-cancéreuses. Ce travail de thèse visait à étudier les conséquences physiopathologiques de l’expression ectopique de CDX2. Nous avons développé et validé un modèle murin d’induction conditionnelle de CDX2 dans plusieurs organes digestifs. Nos résultats montrent que cette expression est dépendante du contexte cellulaire, et induit des métaplasies intestinales seulement dans l’estomac et le pancréas. Ces métaplasies n’évoluent pas spontanément en cancer. Cependant, CDX2 sensibilise ces lésions métaplasiques à l’apparition de tumeurs intestinales dans l’estomac placé dans un contexte où le gène Apc est muté. Globalement, ces résultats montrent que CDX2 est essentiel au développement de métaplasies intestinales mais n’exercerait pas de fonction oncogénique en situation ectopiqueThe intestine-specific homeotic transcription factor CDX2 is required throughout life for intestinal homeostasis, the maintenance of intestinal identity and has tumor suppressor activity. In Human, ectopic expression of the gene Cdx2 is observed in several digestive organs as in intestinal metaplasia which is considered as pre-cancerous lesion. This work aimed to investigate the pathophysiological consequences and molecular mechanisms of ectopic expression of CDX2. We created and validated a conditional murine model of CDX2 induction in several digestive organs. Ectopic CDX2 causes intestinal metaplasias only in the stomach and the pancreas which do not spontaneously evolve to cancer, depending on cellular context. However, CDX2 promotes intestinal carcinogenesis in complete intestinal metaplasia of the stomach. Collectively, these results show that CDX2 is essential for the development of intestinal metaplasia but has no oncogenic function in ectopic situation
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Balbinot, Camille. "Fonction et mode d'action du gène homéotique intestinal Cdx2 dans les cancers de l'intestin." Thesis, Strasbourg, 2017. http://www.theses.fr/2017STRAJ006/document.
Full textAbstract:
Chez l’adulte, le facteur de transcription homéotique Cdx2 est spécifiquement exprimé dans l’intestin dont il maintient l’identité et contrôle l’homéostasie. Des études récentes menées chez l’homme ont identifié des formes de cancer colorectal de mauvais pronostic dans lesquelles l’expression de Cdx2 est très fortement réduite. Ce travail de thèse visait à étudier les conséquences physiopathologiques de la perte de fonction de Cdx2 dans l’intestin adulte. A partir d’un modèle murin d’invalidation conditionnelle et mosaïque de Cdx2, nos résultats montrent que la perte de Cdx2 conduit au développement de lésions caecales de type gastrique qui n’évoluent pas spontanément en cancer. Ces lésions créent cependant un microenvironnement inflammatoire qui favorise la transformation maligne de cellules épithéliales voisines intactes pour Cdx2 et prédisposées à la tumorigénèse. Globalement, ces résultats montrent que Cdx2 exerce une fonction suppresseur de tumeurs « cellule non-autonome » dans l’intestinThe intestine-specific transcription factor Cdx2 is required throughout life for intestinal homeostasis and for the maintenance of intestinal identity. Several recent studies showed that Cdx2 expression is dramatically reduced in some human colon cancers of poor prognosis. This work aimed to investigate the pathophysiological consequences of the loss of Cdx2 in the adult gut. Conditional mosaic ablation of Cdx2 in mice causes gastric-type metaplasia in the cecum which do not spontaneously evolve to cancer. However, these lesions strongly modify the inflammatory microenvironment which facilitates the malignant transformation of adjacent Cdx2-intact and cancer-prone epithelial cells. Collectively, these results unravel a novel and original function of Cdx2, namely its non-cell autonomous tumor suppressor activity in the gut