Dissertations / Theses on the topic 'Gastrine – Récepteurs'

Le cancer colorectal est l'un des cancers les plus fréquents en Europe. Le faible taux de survie (35% à 5 ans) et l'efficacité limitée des traitements actuels pour les tumeurs en stade avancé justifient la recherche de nouvelles approches diagnostiques et thérapeutiques. L'une de ces approches fait appel à la mise en évidence d'une véritable composante endocrine de ces tumeurs. La caractérisation des différents acteurs hormonaux présents dans les tumeurs. Nous a donc paru une étape importante. Dans une première partie, nous avons caractérisé l'expression des récepteurs de la somatostatine hsst1-5. La somatostatine est une neurohormone de distribution ubiquitaire qui possède un potentiel antitumoral par inhibition de la sécrétion hormonale, inhibition des voies de transduction de facteurs mitogènes, induction de l'apoptose. L'étude de l'expression de ces récepteurs hsst1-5 s'est tout d'abord placée sur un plan qualitatif par RT-PCR; nous avons ensuite étudié leur localisation par hybridation in situ dans le tissu colique normal et tumoral ; enfin, nous avons quantifié l'expression de ces récepteurs par RT-PCR quantitative à l'aide du système TaqmanTM. Nous avons montré que les cinq sous-types de récepteurs de la somatostatine pouvaient être exprimés dans le tissu colique normal et pathologique. Nous avons montré que hsst5 est surexprimé dans les cellules tumorales, et plus particulièrement dans certaines tumeurs en stade avancé; à l'inverse, le sous-type hsst1 possède une localisation préférentielle dans la lamina propria et le stroma tumoral ; les sous-types hsst2 et hsst3 sont faiblement exprimés dans l'ensemble des types cellulaires de la muqueuse et des tumeurs ; et hsst4 est faiblement exprimé avec le même profil de distribution que hsst1. Une étude portant sur 11 lignées cellulaires nous a permis de confirmer ce profil d'expression observé dans les tumeurs. Ainsi, dans la lignée tumorale colique HT29-D4 nous avons retrouvé de forts taux d'ARNm de hsst5, et nous avons confirmé l'existence de ce récepteur par des tests de déplacement à l’aide d'analogues plus ou moins sélectifs de ce sous-type. Dans l'optique d'une thérapeutique fondée sur l'utilisation des analogues de la somatostatine, nous montrons que la RT-PCR quantitative par le système Taqman™ permet de réaliser l'étape cruciale de caractérisation du statut en récepteur de ces tumeurs. Dans une deuxième partie, de nombreux travaux ayant montré la capacité de la gastrine, et plus particulièrement de la gastrine non amidée à stimuler la croissance colique, nous nous sommes intéressés à l'expression de la gastrine et de ses récepteurs, CCKB (isoformes courte et longue) et CCK-C (présentant une affinité préférentielle pour la gastrine non amidée). Par RT-PCR, nous avons retrouvé les transcripts de la gastrine dans 86% des tumeurs. Pour ces tumeurs exprimant la gastrine, 100% d'entre elles expriment le récepteur CCK-C, alors que l'isoforme longue du récepteur CCK-B (isoforme fonctionnelle) n'a été détectée que dans 16,5% de ces tumeurs. La troisième partie de ce travail a eu pour but de caractériser l'expression la peptidylglycine α-amidating monooxygénase (PAM) qui est l'enzyme de maturation de très nombreuses hormones (gastrine, GRP, cholecystokinine. . . ) suspectées d'intervenir dans la progression tumorale colique. Par hybridation in situ et Nothern Blot, nous avons montré que les ARNm de la PAM sont surexprimés dans l'ensemble des tissus tumoraux étudiés ainsi que dans le tissu pré-néoplasique aux abords de la tumeur, alors qu'ils ne sont pas ou peu exprimés dans les cellules épithéliales normales. Nous montrons de plus dans cette étude que dans la muqueuse colique normale, les ARNm de la PAM sont exprimés préférentiellement dans les couches musculaires, la submuqueuse et dans les cellules endocrines de la couche muqueuse. Nos résultats confirment que les adénocarcinomes coliques co-expriment de nombreuses hormones et leurs récepteurs, renforçant ainsi l'idée que la carcinogenèse colique est modulée par des interactions hormonales très complexes. De par la sur-expression du récepteur de la somatostatine hsst5, l'expression des récepteurs de la gastrine, ou la sur-expression de la PAM, nos résultats suggèrent que l'utilisation d'analogues de la somatostatine de haute affinité pour hsst5, l'utilisation d'antagonistes de la gastrine, ou l'utilisation d'inhibiteurs de la PAM pourraient être trois approches thérapeutiques potentiellement intéressantes dans le traitement des cancers colorectaux.

Le récepteur CCK2 est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) possédant deux ligands naturels, la cholécystokinine et la gastrine, retrouvées au niveau du système nerveux central et du système gastro-intestinal. Le récepteur CCK2 est impliqué dans de nombreux processus physiologiques et physiopathologiques dont les cancers. La présence membranaire des RCPG est hautement régulée notamment par le mécanisme d'internalisation après timulation par un agoniste. Les beta-arrestines initient l'internalisation de nombreux RCPG et sont également capables d'agir comme des protéines d'échafaudage permettant aux récepteurs d'émettre un signal indépendamment des protéines G. De plus, des ligands dits " biaisés " sont capables d'activer sélectivement les voies de transductions du signal dépendantes des protéines G ou dépendantes des beta-arrestines. Les mécanismes de l'internalisation du récepteur CCK2 n'étaient pas connus et nos objectifs ont été, dans un premier temps, de caractériser ces mécanismes, puis de montrer que des ligands synthétiques du RCCK2 possèdent une activité " biaisée " et enfin de caractériser la conformation du récepteur CCK2 recrutant les beta-arrestines. Dans ce travail, nous rapportons que l'internalisation du récepteur CCK2 est un phénomène faisant intervenir les beta-arrestines, la clathrine et la dynamine. Nous localisons la zone d'interaction des beta-arrestines sur le récepteur CCK2, en identifiant un groupe de sérinethréonine située dans la partie distale de l'extrémité C-terminale du récepteur. Cependant, l'utilisation de mutants du récepteur présentant un recrutement beta-arrestines défectueux ou de cellules invalidées pour les deux beta-arrestines montre que le récepteur CCK2 est toujours capable de s'internaliser, suggérant la présence d'un mécanisme alternatif. Nous identifions des ligands synthétiques du récepteur CCK2 avec une activité " biaisée " capables d'activer des voies de transduction dépendantes des protéines G mais ne recrutant pas les beta-arrestines. De plus, un ligand, le GV150,013X n'est pas capable d'inhiber le recrutement des beta-arrestines induit par la CCK alors qu'il inhibe la production d'inositol phosphate de façon compétitive. La mutation d'acides aminés suffit pour diminuer le recrutement des beta-arrestines au RCCK2 sans altérer sa capacité à activer la PLC. Ces résultats sont les premiers à montrer l'existence d'une conformation moléculaire d'un RCPG recrutant les beta-arrestines distincte de celle activant la voie dépendante de la protéine G. Les résultats de cette étude apportent des informations quant à la régulation pharmacologique de l'internalisation du récepteur CCK2 et supportent le concept de sélectivité fonctionnelle des RCPG<br>The CCK2 receptor (CCK2R) is a G-protein coupled receptor (GPCR) and binds to two different natural ligands, cholecystokinin and gastrin, which are mostly localized in the gastro-intestinal tract and the central nervous system. The CCK2 receptor is involved in various physiological and pathological processes including cancers. The localization of GPCR at the cell membrane is highly regulated notably by internalization of the receptors following agonist stimulation. The -arrestins initiate internalization of many GPCR and act as scaffolding proteins leading GPCR to trigger G-protein independent signal transduction. Recently, biased ligands have been discovered that selectively activates either G-protein or -arrestins mediated signaling pathways. The mechanisms of CCK2R internalization were not known and the purpose of our study was first to characterize these mechanisms and then to show that synthetic ligands of CCK2R may have a biased activity towards -arrestins recruitment. Finally, we aimed at characterizing a conformational state of the CCK2R recruiting -arrestins distinct from the state activating G-proteins. The CCK2 receptor (CCK2R) is a G-protein coupled receptor (GPCR) and binds to two different natural ligands, cholecystokinin and gastrin, which are mostly localized in the gastro-intestinal tract and the central nervous system. The CCK2 receptor is involved in various physiological and pathological processes including cancers. The localization of GPCR at the cell membrane is highly regulated notably by internalization of the receptors following agonist stimulation. The -arrestins initiate internalization of many GPCR and act as scaffolding proteins leading GPCR to trigger G-protein independent signal transduction. Recently, biased ligands have been discovered that selectively activates either G-protein or -arrestins mediated signaling pathways. The mechanisms of CCK2R internalization were not known and the purpose of our study was first to characterize these mechanisms and then to show that synthetic ligands of CCK2R may have a biased activity towards -arrestins recruitment. Finally, we aimed at characterizing a conformational state of the CCK2R recruiting -arrestins distinct from the state activating G-proteins. In this work, we report that internalization of CCK2R is a process involving both beta-arrestine1 and 2 as well as clathrin and dynamin. We characterized the binding site of -arrestin on CCK2R, by identifying a cluster of serine/threonine in the distal part of the receptor C-terminus. However, CCK2R mutants lacking this region or receptors expressed in cells deleted of both -arrestins still displayed strong internalization of receptors suggesting the existence of an alternative mechanism that does not require -arrestins. We also identified synthetic ligands of CCK2R that display biased activity, by activating G-protein mediated signaling pathways without recruiting -arrestins. Furthermore, a CCK2R ligand, GV150,013X was not able to inhibit CCK-induced -arrestins recruitment whereas it acts as a potent competitive antagonist on CCK-induced inositol phosphates production. Else, the mutation of specific single amino acid into the binding site of CCK2R was sufficient to significantly reduce -arrestins recruitment without altering CCK-induced G-protein mediated signaling pathways. To our knowledge, these results show for the first time, that a GPCR conformational state recruiting b-arrestins is different from a state activating G-proteins. This study brings new insights into the pharmacological regulation of CCK2R internalization and strongly supports the concept of "functional selectivity"

Le récepteur de la cholécystokinine/gastrine (RCCK2) est (sur)exprimé dans de nombreux cancers et tumeurs endocrines. Par modélisation moléculaire, nous avons designé et modifié de nouveaux dérivés de la cholécystokinine ciblant ce récepteur. Ces dérivés ont été couplés à deux nouveaux chélateurs permettant de réaliser plusieurs modalités d'imagerie. Les évaluations in vitro et chez l'animal de ces radioligands peptidiques marqués à l'111indium ont révélé une meilleure fixation tumorale et une diminution significative de la fixation rénale comparé à un radioligand CCK de référence couplé au CHX-A''-DTPA. Les résultats supérieurs obtenus avec ces radioligands valident notre approche de drug design ainsi que l'intérêt des nouveaux chélateurs et indiquent que ces radiopharmaceutiques sont très prometteurs pour une utilisation en radiothérapie interne vectorisée<br>The cholecystokinin/gastrin receptor (RCCK2) is (over)expressed in various cancers and endocrine tumors. Via molecular modelling, we have designed and modified new cholecystokinin targeting RCCK2 derivatives. These derivatives were coupled to new multi-modality imaging chelators. In vitro and animal evaluations of these peptidic 111In-radioligands showed a better tumoral targeting and a significant renal fixation decrease compared to the CCK reference radioligand coupled to CHX-A''-DTPA. The results obtained with our radioligands validate the drug design concept and show that these radiopharmaceuticals seem to be promising for internal radiotherapy

La cholecystokinine et la gastrine sont impliques dans les processus secretoires et proliferatifs des cellules acineuses pancreatiques. La gastrine stimule la proliferation des cellules acineuses tumorales pancreatiques de rat (ar4-2j) exprimant les deux recepteurs cck (rccka/rcckb). Les mecanismes intra-cellulaires impliques dans le controle de la proliferation cellulaire sont mal definis. Nous avons etudies dans les cellules ar4-2j le role relatif des rccka et rcckb dans la mobilisation du ca#2#+#i et la secretion d'amylase stimulees par la cck et la gastrine. Les antagonistes des recepteurs cck, nous ont permis de montrer que la cck via rccka et rcckb et la gastrine via rcckb mobilisent le ca#2#+#i et stimulent la secretion d'amylase. A l'aide du pd135158 nous montrons l'existence de sites haute affinite gastrine egalement impliques dans la secretion d'amylase. La pancreatite aigue est une auto-digestion du pancreas induite par l'activation in-situ des enzymes pancreatiques au cours de laquelle les leucocytes stimules secretent des interleukines.

Le récepteur de la cholécystokinine/gastrine (RCCK2) représente une cible prometteuse pour des applications en médecine nucléaire, que ce soit en diagnostic ou en radiothérapie de certains cancers neuro-endocriniens. En effet, les cancers médullaires de la thyroïde et les cancers du poumon à petites cellules surexpriment le RCCK2 alors que ce récepteur n'est pas présent dans le tissu sain correspondant. L'objectif de nos travaux est d'élaborer de nouveaux analogues de la cholecystokinine (CCK) pour le diagnostic précoce des pathologies cancéreuses citées ci-dessus. La conception de ces agents de diagnostic repose sur la base d'une courte séquence peptidique, ligand fort du récepteur d'intérêt, liée à un motif chélatant d'un radioélément. Deux radioéléments sont utilisés dans le cadre de cette étude : l'indium 111 et le technétium 99m, radioisotopes classiquement utilisés en médecine nucléaire. Différents analogues pour lesquels nous faisons varier séquence peptidique et structure du motif chélatant ont été préparés afin d'accéder à de nouveaux agents de diagnostic plus stables et efficaces. La synthèse de ces nouveaux composés, la détermination de leurs affinités pour le RCCK2, leur radiomarquage, la scintigraphie et la biodistribution sur des souris " nude " portant des xénogreffes de tumeurs NIH-3T3-RCCK2E151A ont été effectués. Les composés technétiés n'ont pas permis la visualisation tumorale malgré une affinité de l'ordre du nanomolaire. Deux composés marqués à l'indium ont permis une bonne visualisation de la tumeur et présentent des propriétés intéressantes pour une application en thérapeutique<br>The cholecystokinin (CCK)/gastrin receptor (CCK2R) represents a potential target for the diagnosis and internal radiotherapy of neuroendocrine tumors. The CCK2R is overexpressed in 90% of the medullary thyroid cancer (MTC) and 60% in the small cell lung cancer (SCLC) , while it's not or poorly expressed in the corresponding healthy tissues. The aim of this study was to study new radioligands of the CCK2R with optimized properties to target the CCK2R. For this purpose a short peptidic sequence with a high selectivity of CCK2R is conjugated with a chelator of radionuclides. In order to obtain new agents of diegnosis and radiotherapeutics potentially more stable and more efficient we synthesized different analogues with various peptidic sequence CCK, structure of chelator and radionuclides. Synthesis and characterization of these compounds are studies. The stability and affinity of these CCK derivatives were studied in vitro. Then, the radiolabelling with technetium 99m or indium 111 of these compounds have been and evaluated in vivo (scintigrphy and biodistribution) on nude mice bearing a NIH-3T3 tumors expressing a constitutively active mutant of the CCK2R. The technetium compounds have a good affinity in vitro (nanomolar order) for the CCK2R, however in vivo the tumors are not visualized. Two indium compounds have a high potential since they have a good affinity (nanomolar order) for CCK2R and the tumors are visualized. The study of these compounds must be-continued for their therapeutics applications

Le by-pass gastrique Roux-en-Y (BPG) est une chirurgie de l'obésité qui induit des améliorations spectaculaires de l'homéostasie glucidique indépendamment de la perte de poids. Un mécanisme proposé pour expliquer ces améliorations est une augmentation de la production intestinale de glucose (PIG) qui induit des effets bénéfiques sur l'organisme (satiété, amélioration de la sensibilité hépatique à l'insuline). Cette augmentation de la PIG, retrouvée chez la souris ayant subi un BPG simplifié, est également responsable des effets bénéfiques des régimes enrichis en protéines via l'inhibition des récepteurs mu-opioïdes (RMO) par les peptides. Nous avons donc testé l'hypothèse selon laquelle les effets bénéfiques du BPG dépendraient d'une inhibition des RMO par les protéines alimentaires et nous avons également testé le rôle causal de la PIG dans ces améliorations métaboliques. Pour cela, nous avons réalisé un by-pass duodéno-jéjunal (BDJ), ie un BPG sans restriction gastrique, chez des souris sauvages (WT), des souris invalidées pour le gène du RMO (MOR-/-) et des souris dépourvues de PIG (I-G6pc-/-). Chez les souris obèses, Le BDJ induit une forte perte de poids (–30%), en partie expliquée par une malabsorption lipidique, ainsi qu'une amélioration des paramètres glucidiques dépendante de cette perte de poids. Au contraire, chez la souris de poids normal, le BDJ n'induit ni perte de poids ni malabsorption mais améliore la tolérance au glucose. Les effets sont les mêmes chez les souris WT, MOR-/- et I-G6pc-/- ce qui montre que les récepteurs mu-opioïdes et la PIG ne semblent pas avoir de rôle causal dans les améliorations du métabolisme énergétique et glucidique après BDJ<br>Roux-en-Y gastric bypass procedure (GBP) is an obesity surgery that induces dramatic glucose homeostasis improvements independently of weight loss. A proposed mechanism to explain these glucose homeostasis improvements is an increase in intestinal glucose production (IGP) that induces beneficial effects on metabolism (satiety, improved liver insulin sensitivity). This increase in IGP is found in mice that have undergone a simplified GBP and is also responsible for the beneficial effects of protein-enriched diets through the inhibition of mu-opioid receptors (MOR) by alimentary peptides. We therefore hypothesized that the beneficial effects of GBP could depend on MOR inhibition by dietary proteins and we also tested the causal role of IGP in these metabolic improvements. For this purpose, we performed a duodenal-jejunal bypass surgery (DJB), ie GBP without gastric restriction, in wild-type mice (WT), in mice lacking MOR gene (MOR-/-) and in mice lacking IGP (IG6pc-/-). In obese mice, DJB induced a rapid and substantial weight loss (-30%), partly explained by fat malabsorption, and weight loss-dependent improvements of glucose homeostasis. In contrast, in the non-obese mice, DJB did not induce weight loss nor malabsorption but improved glucose tolerance. Effects were similar in WT, MOR-/- and I-G6pc-/- mice showing that mu-opioid receptors and IGP did not appear to have a causal role in glucose and energy metabolism improvements after DJB

Les cancers gastro-intestinaux, en particulier les cancers colorectaux (CCR) et les cancers gastriques (CG), sont des pathologies agressives avec des taux de mortalité élevés dans le monde. Ces cancers sont caractérisés par la dérégulation de voies de signalisation cellulaire telles que les voies Wnt, Notch et Hippo qui jouent un rôle très important dans la tumorigenèse gastro-intestinale. L’activité des différents facteurs de transcription impliqués dans ces voies de signalisation nucléaire est contrôlée par de nombreux corégulateurs transcriptionnels. Ces travaux de thèse ont porté sur deux corégulateurs transcriptionnels initialement identifiés comme des partenaires des récepteurs nucléaires, à savoir RIP140 et LCoR. L’objectif a été d’explorer l’expression de ces deux facteurs de transcription dans les cancers gastro-intestinaux ainsi que leur rôle dans les cancers gastriques principalement au travers du dialogue avec la voie de signalisation Hippo. L’analyse par immunohistochimie de l'expression de RIP140 et LCoR dans les cancers colorectaux et gastriques a montré que les niveaux d’expression de ces deux corégulateurs transcriptionnels sont fortement corrélés. Dans les CCRs, leur expression tend à diminuer dans le tissu tumoral par rapport au tissu normal adjacent, alors que dans les CGs, les niveaux d’expression de RIP140 et LCoR sont significativement plus élevés dans la tumeur que dans l’épithélium sain. Des corrélations significatives ont été observées avec les paramètres clinicopathologiques des patients (stade TNM et différenciation tumorale) ainsi qu’avec d’autres protéines clés impliquées dans la progression et l'invasion tumorale (incluant E-cadhérine et Cox-2). L'analyse de la survie a montré que les patients atteints de CCR avec des tumeurs LCoRlow/RIP140high ont une durée de survie plus longue. Dans le CG, l'expression élevée de RIP140 ou de LCoR a été identifiée comme un marqueur de mauvais pronostic suggérant un rôle clé de ces deux gènes dans cette malignité.Pour mieux cerner le rôle de RIP140 dans le CG, nous avons utilisé les lignées cellulaires MKN45 et MKN74 de cancer de l’estomac humain avec une surexpression ectopique du gène RIP140 ou au contraire avec une diminution de son expression. Nos résultats ont montré que l'expression de RIP140 est associée à un effet anti-prolifératif à travers une régulation positive de l'expression du gène p21WAF1/CIP1. Nous avons également démontré que RIP140 réduit la migration des cellules MKN45 et MKN74 et augmente l'expression du gène E-cadhérine au niveau transcriptionnel. D’une manière intéressante, nos résultats suggèrent aussi que RIP140 régule la voie de signalisation Hippo à travers l’activation de TEAD.Dans l'ensemble, ces résultats suggèrent que les gènes RIP140 et LCoR participent à la régulation de la tumorigenèse gastro-intestinale et que leurs niveaux d'expression ont une valeur pronostique dans ces cancers et pourraient servir de nouveaux biomarqueurs dans la caractérisation moléculaire de ces tumeurs<br>Gastrointestinal cancers, particularly colorectal cancer (CRC) and gastric cancer (GC), are aggressive pathologies with a high mortality rate worldwide. These cancers are characterized by the deregulation of cellular signaling pathways such as the Wnt, Notch and Hippo pathways which play a very important role in gastrointestinal tumorigenesis. Moreover, it’s well established that the activity of the transcriptionnel factors involved in these nuclear signaling pathways is controlled by many transcriptionnel coregulators. This work focused on two transcriptional coregulators initially identified as partners of nuclear receptors, namely RIP140 and LCoR. The objective was to explore the expression of these two transcription factors in gastrointestinal cancers and their role in gastric cancers mainly through the dialogue with the Hippo signaling pathway.Immunohistochemical analysis of RIP140 and LCoR expression in colorectal and gastric cancers showed that the expression levels of these two transcriptional regulators are strongly correlated. In CRCs, their expression tends to decrease in tumor tissue compared to adjacent normal tissue, whereas in GCs, RIP140 and LCoR expression levels are significantly higher in the tumor as compared to normal stomach. Significant correlations were observed with clinicopathological parameters (TNM stage and tumor differentiation) as well as the expression levels of key proteins involved in tumor progression and invasion (E-cadherin and Cox-2). Survival analysis showed that CRC patients with LCoRlow/RIP140high tumors have a significant prolonged OS and DFS. In GC, high RIP140 or LCoR expression was identified as an independent marker of poor prognosis suggesting a key role in this malignancy.Further, we investigated the role of RIP140 in gastric cancer cell lines using human epithelial GC cell lines overexpressing or not RIP140. In both MKN45 and MKN74 cells we showed that RIP140 exerted an anti-proliferative effect through the induction of p21WAF1/CIP1 gene expression. We also demonstrated that RIP140 reduced GC cell migration and increased E-cadherin expression at the transcriptional level. Interestingly, our results also suggest that RIP140 regulates the Hippo signaling pathway through TEAD activation.In conclusion, our findings suggest that RIP140 and LCoR genes contribute to the regulation of gastrointestinal cancers and that their expression levels have a prognostic value in these pathologies. Moreover, both RIP140 and LCoR transcriptional coregulaters could serve as novel biomarkers in the molecular characterization of colorectal and gastric cancers

Dans une étude préliminaire nous avons montré l’importance de l’intervalle séparant l’immunisation de l’application du stress dans les perturbations des fonctions du système immunitaire, comportementale et gastrique chez la souris. Nos résultats ont montré que l’immunité humorale augmente après l’application du stress, alors que l’immunité cellulaire diminue considérablement chez les animaux stressés. Sur le plan comportemental, le stress a tendance à diminuer l’activité locomotrice et exploratoire des animaux dans les deux tests utilisés (test de la chambre claire/obscure et le test de l’escalier). Nos résultats ont montré aussi que le stress augmente de façon importante les lésions de la muqueuse gastrique chez la souris. Dans le but d’approfondir ce travail, nous avons entrepris une étude expérimentale comparative utilisant deux modèles de stress (stress social et physique). Cette étude fournit quelques exemples des perturbations engendrées par ces deux modèles de stress appliqué à court terme et à long terme sur le comportement général, l’immunité cellulaire et sur les réponses gastriques et endocriniennes. Nos résultats ont montré que les deux types de stress ont tendance à diminuer le nombre des lymphocytes auxiliaires TCD4 et à augmenter celui des cellules NK circulants. Par ailleurs, ces perturbations ne concernent pas les cellules T CD8 chez les animaux exposés aux deux types de stress. Concernant la réponse gastrique, nos résultats ont montré que l’inflammation de la muqueuse gastrique est beaucoup plus importante chez les animaux exposés au stress physique comparé aux animaux isolés. Concernant le comportement, nous avons noté que l’activité exploratoire, diminue après l’application des deux modèles de stress étudiés. Le dosage des catécholamines plasmatiques a été réalisé par HPLC alors que celui de la corticostérone plasmatique a été plutôt évalué par la technique RIA. Nous avons constaté ainsi que le stress physique augmente considérablement le taux de la corticostérone et celui des catécholamines (adrénaline et noradrénaline) par rapport aux animaux exposés au stress social. Dans un deuxième temps, nous nous sommes intéressés plus particulièrement à l’étude du rôle et de l’implication des systèmes opioïdergiques et benzodiazépiniques dans les différentes perturbations immunitaires engendrées par les stress. Ces résultats mettent l’accent sur l’implication des récepteurs opioïdes et benzodiazépiniques dans les effets immunosuppresseurs engendrés par le stress expérimental chez la souris. Dans cette deuxième partie du travail et dans un premier temps, nous avons étudié les propriétés pharmacologiques de différents produits d’origine animale et végétale tels que : Atropa Belladonna L. , Gelsemium sempervirens L. , Poumon histamine vis-à-vis des réponses comportementales, immunitaires at gastriques induites par le stress expérimental. Les résultats ont montré que A. Belladonna aurait plutôt un profil pharmacologique de type anxiolytique à 9 CH, G. Sempervirens posséderait plutôt des propriétés immunoprotectrices et gastroprotectrices, particulièrement aux doses 5 CH et 15 CH. Ces effets sont associés probablement à leur profil neurotropique, anxiolytique-like. Cependant P. Histamine a montré un effet pharmacologique plutôt actif sur le système immunitaire à toutes les doses. Ces effets de P. Histamine sont probablement associés à sa principale activité pharmacologique sur le système immunitaire, avec un effet secondaire de type neurotropique. Dans un deuxième temps, nous avons étudié les propriétés pharmacologiques de G. Sempervirens, du P. Histamine et de l’Histaminium vis-à-vis des altérations de l’immunité cellulaire (TCD4, TCD8 et NK), induites par les stress expérimental. Nos résultats ont montré que la dose 9 CH des trois produits, s’oppose aux effets immunosuppresseurs du stress uniquement vis-à-vis de la régulation de la réponse des cellules NK<br>The main objective of our study was to investigate the importance interval separating the immunization of the application of stress in disturbances on immune, behavioral and gastric functions of mice. Our results showed that the hormonal immunity was increased after the application of stress, however, the cellular immunity was considerably decreased in the stressed animals. The stress showed tendency to decrease the locomotor and explorator activity of animals in two used tests : lignht. Dark box test and the straicase test. The results also indicated that the stress significantly increased the gastric mucous lesions. In order to extend our research we have conducted a comparative and experimental study using two models of stress, social and physical stress. These experiments provide some examples of disturbances generated by these two models of stress. The two models were applied at short and long term on general behavior, cellular immunity and hormonal responses. Our results showed that the two types of stress have tendancy to decrease the number of TCD4 and to increase the circulating cells NK. On the othre hand, these disturbances didn't affect the number of T CD8 cells. Concerning the gastric response, our results showed that the inflammation of the gastric mucous is more important in animals exposed to the physical stress in comparison with the isolated animals. Concerning the behaviour, we noted that the explorer activity decreased after the application of the two stress models. The dosage of plasma catecholamines was determined using HPLC and the plasmatic corticosterone level was detected by RIA technique. We noted that the apllied physical stress considerably increased the rate of the corticosterone and also of one of the catecholamines (adrenaline and noradrenaline) compared with those animals exposed to the social stress. In our study we were also interested in investigating the role and the implication of opioïdergic and benzodiazepiniques systems on the different immunities disturbances generated by stress. Our results put more emphasis on the implication of opioids and benzodiazepines receptors on the immunosuppressor effect of the experimental stress in mice. In the second part of the work, we studied the pharmacological properties of the different plants and animal compounds such as Atropa Belladonna L. , Gelsemium sempervirens L. , Poumon histamine and Histaminium to induce behavioral, immune and gastric reponses. The results showed that A. Belladona L. Has a pharmacological profile of anxiolytic type to 9 CH, whereas G. Sempervirens L. Possesses immunoprotective and gastroprotective properties, particulary to doses 5 CH and 15 CH. These effects are probably associated with neurotropic, anxiolytic-like effects. P. Histamine resulted in a pharmacological active effect on immune system in all tested doses. These effects of P. Histamine are probably associated with its pharmacological properties on immune system with a secondary effect on neurotropic type. In the second step, we studied the pharmacological properties of G. Sempervirens L. , P. Histamine and Histaminium on stress induced alterations in TCD4, TCD8 and NK cells. The results showed that only 9 CH of all three products, reversed stress-induced response of NK cells

L'étude bibliographique concerne les connaissances actuelles sur la vitamine B12, sur les accepteurs de cobalamines, sur la sécrétion du suc gastrique et du liquide amniotique, dans les conditions physiologiques et en cas de mucoviscidose. L'étude expérimentale a porté sur les accepteurs insaturés de la cobalamine, contenus dans le suc gastrique et le liquide amniotique, chez les sujets atteints de mucoviscidose et les sujets témoins. En cas de mucovisidose, une hypersécrétion du facteur intrinsèque gastrique a été observée, sans aucune modification significative des propriétés physicochimiques de cette glycoprotéine vis à vis de l'estimation de la masse moléculaire apparente et du point isoélectrique moyen. Dans le liquide amniotique, la majorité de la capacité latente de fixation totale de la vitamine B12 est due à la présence de l'Haptocorrine. Nous avons suivi par dosage radioisotopique et gel filtration, l'évolution des différents accepteurs de la cobalamine dans le liquide amniotique. L'utilisation de la gel filtration et de l'isoélectrofocalisation sur colonne a montré d'une part, que l'Haptocorrine est toujours présente sous forme d'une molécule non dégradée, et elle s'apparente beaucoup plus à l'Haptocorrine d'origine granulocytaire qu'à l'Haptocorrine digestive, et d'autre part, que la microhétérogénéité de la transcobalamine II et du facteur intrinsèque a été mise en évidence pour la première fois. Enfin, nous avons étudié les accepteurs de la vitamine B12 dans le liquide amniotique de fœtus atteint de mucoviscidose et de fœtus témoins. Les résultats ainsi obtenus, pourraient permettre d'envisager une application possible au diagnostique anténatal de la mucoviscidose

Les cancers du sein chez les femmes et de la prostate chez les hommes sont les cancers les plus répandus au Canada. Un diagnostic précoce et un suivi de la thérapie bien adapté au type de cancer représentent des facteurs importants pour le traitement de ces maladies. La tomographie d'émission par positrons (TEP) permet de visualiser la distribution spatiale et temporelle de molécules radiomarquées. Le développement de nouveaux traceurs spécifiques à certains récepteurs surexprimés dans différents types de cancer permettrait d'améliorer le diagnostic à l'aide de l'imagerie TEP. La bombésine se lie à 3 types de récepteurs humains, dont le récepteur à relâche de gastrine (GRPR). Il est surexprimé dans 65% des cas de carcinomes canalaires in situ et 63% des tumeurs prostatiques. Le GRPR pourrait également être utilisé comme marqueur du caractère malin dans ces cas de cancer. Notre hypothèse est que les ligands radiomarqués ciblant le GRPR permettraient un meilleur diagnostic à partir de l'imagerie TEP et contribuerait au développement d'une médecine personnalisée. Le premier objectif de cette étude vise à évaluer les effets du radiométal utilisé pour marquer les molécules sur les propriétés physicochimiques des traceurs ciblant les GRPR. Un peptide modèle, le NOTA-PEG-BBN(6-14), a été marqué au [indice supérieur 64] Cu et au [indice supérieur 68] Ga. Ces études ont démontré que l'isotope utilisé pour le marquage influence l'affinité du peptide pour le GRPR et conséquemment son accumulation spécifique. Le deuxième objectif consiste à évaluer et comparer différents monomères et homodimères dérivés de la bombésine afin d'étudier le rôle de la valence du ligand sur la captation et la rétention tumorale ainsi que d'évaluer l'effet de la longueur de l'espaceur entre les deux ligands des homodimères de la bombésine sur la captation/rétention tumorale. Ainsi, le NOTA-PEGBBN(6-14) et deux homodimères ont été comparés in vitro et in vivo . Les composés homodimériques présentent une accumulation non-spécifique accrue au niveau des poumons, de la rate, du foie et des reins. De plus, le NOTA-dimère 2 possédant un plus long espaceur présente une accumulation spécifique augmentée au niveau du pancréas, un organe riche en GRPR, et une rétention supérieure au niveau des cellules tumorales prostatiques PC3 tant in vitro qu' in vivo chez les souris Balb/c nues xénogreffées.

Les acides biliaires (ABs) sont des molécules produites dans le foie, stockées dans la vésicule biliaire, sécrétées dans l’intestin et retournant au foie via le cycle entéro-hépatique. Une fraction des ABs échappe à la recaptation par le foie et passe dans la circulation systémique par laquelle ils atteignent les organes périphériques dont le pancréas. Outre leur fonction de faciliter l’absorption intestinale des lipides, les ABs sont des molécules de signalisation qui agissent via les récepteurs aux ABs, exprimés dans les tissu clés de la régulation du métabolisme, et dont la modulation par les ABs contribue à réguler l’homéostasie énergétique. Ainsi des variations dans la composition du pool d’ABs peuvent déterminer la modulation du métabolisme via leurs récepteurs.Le récepteur aux ABs Farnesoid-X-receptor (FXR) est impliqué dans la régulation du métabolisme glucidique, lipidique et des ABs par son action dans le foie, l’intestin, les tissus adipeux et le pancréas. La souris déficiente pour FXR dans le corps entier présente une intolérance au glucose et une insulino-résistance dans le foie et dans les tissus périphériques, alors que dans un contexte d’obésité la déficience de FXR améliore ces paramètres. De plus, FXR est exprimé dans la cellule bêta-pancréatique (bcell) où il régule la synthèse et la sécrétion d'insuline, mais les mécanismes moléculaires n’ont pas été complètement élucidés. Pour comprendre 1) la contribution de FXR bcell dans le phénotype métabolique de la souris FXRKO-total, et 2) les mécanismes moléculaires de la régulation de l’insuline par FXR dans la bcell, j’ai développé un modèle murin invalidé pour FXR spécifiquement dans la bcell par la stratégie Cre-LoxP. Le développement du modèle a mis en évidence des phénomènes de recombinaison non-spécifiques et j’ai mis au point une stratégie de génotypage permettant de pallier à cette problématique. J’ai testé différents contextes métaboliques permettant de mettre en évidence le phénotype de la souris FXRKObcell (régime standard et riche en graisses, conditions de jeûne et re-nourriture, variation circadienne). Par rapport au contrôle, la souris FXRKO-bcell développe une intolérance au glucose et présente des insulinémies plus basses, défauts majorés par un régime riche en graisses. L’analyse transcriptomique globale des îlots a permis d’identifier un ensemble de microRNA fortement dérégulés par l’invalidation de FXR bcell qui pourraient expliquer les dysfonctions de sécrétion d’insuline.Outre la modulation de l’activité des récepteurs, des effets métaboliques peuvent être obtenus en modulant la composition du pool de leurs ligands, les ABs. Ainsi, des perturbations métaboliques (comme l’insulino-résistance et le diabète de type 2, l’obésité) sont associées à des variations qualitative et/ou quantitative du pool d’ABs. De plus, des variations du pool d’ABs accompagnent les améliorations métaboliques qui suivent la pratique chirurgicale de Roux-en-Y Gastric Bypass (RYGB) avant la perte de poids, ce que suggère que les ABs puissent être parmi les acteurs des effets métaboliques bénéfiques indépendants de la perte de poids. Pour étudier cette hypothèse, des modèles précliniques de RYGB ont été développés. Au cours de ma thèse j’ai comparé le pool d’ABs pre et post RYGB entre trois espèces (rat, cochon et Homme ; coll. Pr. F. Pattou et Dr. E. Osto) avec l’objectif d’évaluer quel modèle préclinique est le plus approprié pour ces études en termes de caractéristiques du pool d’ABs. La deuxième étude concerne la recherche des causes et mécanismes sous-jacents à l’augmentation des concentrations en ABs circulants induits par le RYGB. Dans le modèle de minipig (coll. Pr. F. Pattou), l’analyse de la composition des pool d’ABs circulants et d’expression génique dans le foie avant et après RYGB, a permis de montrer que des changements de la fonction hépatique sont - au moins en partie - responsables de l’augmentation dans le pool d’AB qui suit le RYGB<br>Bile acids (BAs) are molecules produced in the liver, stored in the gallbladder, secreted into the intestine and returning to the liver via the enterohepatic circulation. A fraction of BAs escapes the reuptake by the liver and enters the systemic circulation, by which they reach the peripheral organs including the pancreas. Besides their function in facilitating the intestinal absorption of lipids, BAs are signaling molecules that act through receptors for BAs, which are expressed in the key tissues for metabolic regulation, and whose modulation by BAs contribute to regulate energy homeostasis. Thus, variations in the composition of the BAs pool determine the modulation of metabolism via their receptors. The BA-receptor Farnesoid-X receptor (FXR) is involved in the regulation of glucose, lipid and BA metabolism by its action in the liver, intestine, adipose tissue and pancreas. Whole body FXR deficient mice are glucose intolerant and insulin resistant in liver and peripheral tissues, whereas in a context of obesity, FXR deficiency rather improves these parameters. Furthermore, FXR is expressed in the pancreatic beta cell (bcell), where it regulates the synthesis and the secretion of insulin, but the molecular mechanisms have not been fully elucidated yet. To understand 1) the contribution of FXR bcell in the metabolic phenotype of the total FXRKO-mouse, and 2) the molecular mechanisms of the regulation of insulin production by FXR in the bcell, I developed a mouse model invalidated for FXR specifically in the bcell by the Cre-loxP strategy. The development of the model showed nonspecific recombination phenomena, and I developed a genotyping strategy to overcome this problem. To highlight the phenotype of the FXRKObcell mouse I tested various metabolic contexts (standard and high fat diet, fasting and refeeding conditions, circadian variations). Compared to control, FXRKO-bcell mice developed glucose intolerance and has lower insulinémia, defects increased by a high fat diet. The global transcriptomic analysis in the islets identified a set of microRNA strongly deregulated by invalidating FXR in the bcell, which could explain the dysfunctions in insulin secretion. Besides the modulation of the activity of the receptors, metabolic effects can be obtained by varying the composition of the pool of their ligands BAs. Thus, metabolic perturbations (such as insulin resistance and type 2 diabetes, obesity) are associated with qualitative and/or quantitative variations in the BA pool. In addition, variations of the BAs pool are associated to the metabolic improvement that precedes the weight loss after the surgical practice of Roux-en-Y Gastric Bypass (RYGB), which suggests that the BAs can be among the actors of the ‘weight loss-indipendent’ beneficial metabolic effects of RYGB. To investigate this hypothesis, some preclinical models of RYGB have been developed. During my thesis I compared the pool of BAs pre and post RYGB among three species (rat, pig and human; Coll. Prof. F. Pattou and Dr. E.Osto) with the aim of assessing which preclinical model is most suitable for these studies in terms of characteristics of the BAs pool. In a second study, I focused on the causes and mechanisms underlying the increased concentrations of circulating BAs induced by RYGB. In the model of minipig (coll. Pr. F. Pattou), the analysis of the plasma BA pool composition and the hepatic gene expression before and after RYGB, allowed to show that changes in the hepatic function are - at least in part - responsible for the increase of the BA pool following RYGB