Dissertations / Theses on the topic 'Glomérule du rein'

Les plaquettes sanguines ont une resonsabilité établie en pathologie inflammatoire du glomérule rénal mais les mécanismes moléculaires en cause restent pour beaucoup à préciser. La mise en évidence de l'expression du CD154 par les plaquettes offre un nouveau moyen de comprendre comment celles-ci peuvent contribuer à l'inflammationglomérulaire, notamment à travers l'activation de la cellule mésangiale. Cette problématique est développée à travers une revue de synthèse et la présentation de données originales sur les interactions CD154 plaquettaire(CD40 mésangial dans le lupus érythémateux disséminé. Une stratégie thérapeutique potentielle de l'inflammation glomérulaire serait de bloquer localement le couple CD40/CD154. L'approche suivie est d'utiliser des cellules souches mésenchymateuses génétiquement modifiées pour exprimer un peptide bloquant le CD40 au niveau rénal. Cette approche nécessite le développement d'outils dont nous présentons la mise au point et le développement futur<br>Blood platelets are known to be key pathogenic mediators in the inflammatory mechanisms leading to kidney glomerulus injury. The recently described expression of CD154 on activated platelets open new perspectives to understand how platelets participate to glomerular inflammation, more specifically through the CD40-dependent activation of the mesangial cell. This question is debated through a review of the literature and a presentation of original data on the CD40-dependent activation of the mesangial cell by platelet-associated CD154 in systemic lupus erythematosus. A potential strategy to control inflammation in the kidney glomerulus could be the specific blocking of CD40 in the kidney. To this end we aim at using mesenchymal stem cells genetically modified to express a CD40 blocking peptide. This approach is a long-term one which needs the setting up of cell therapy new tools. We describe some of these tools and discuss their future development

Chez l’Homme, en réponse à une néphrectomie unilatérale (1/2Nx) ou subtotale (5/6Nx), le rein controlatéral assure la filtration du rein manquant ; une hypertrophie glomérulaire et tubulaire se développe, le poids et la taille du rein augmentent. Le nombre de néphrons étant fixé dès la naissance, des néphrons supplémentaires ne peuvent être formés et la surcharge de filtration entraine à long terme des lésions structurelles. Quelques études chez le fœtus suggèrent que la compensation rénale secondaire à la réduction néphronique peut débuter in utero. Les données expérimentales sont rares et concernent uniquement le modèle 1/2Nx en fin de néphrogénèse ou ex utero. Nous avons étudié les conséquences morphologiques, fonctionnelles et moléculaires de deux modèles de réduction néphronique (1/2Nx et 5/6Nx) chez le fœtus de brebis. Dans les deux modèles, la masse rénale et le nombre de glomérules augmentent, mais la réponse diffère. Chez les 5/6Nx, deux lobes sont formés de part et d’autre des sites d’incision conférant une morphologie rénale en forme de « papillon » et la compensation en nombre de néphrons est relativement plus importante. Dans la perspective d’améliorer la régénération rénale dans le modèle 5/6Nx, nous avons envisagé l’utilisation de cellules souches; les premiers résultats ont permis d’isoler et de caractériser les cellules souches ovines du liquide amniotique. En conclusion, notre étude a permis de mettre en évidence des capacités de compensation rénales insoupçonnées chez le fœtus, propre à la période de néphrogénèse ; d’autres travaux nous permettront de déterminer si elles peuvent être encore améliorées par l’apport exogène de cellules souches<br>In humans, in response to unilateral (1/2Nx) or subtotal (5/6Nx) nephrectomy, the contralateral kidney ensures filtration for the missing kidney; tubular and glomerular hypertrophy develop, the kidney weight and renal size increase. As glomerular number is determined at birth, no additional nephrons may be formed and the overload filtration results in structural lesions. Few studies in fetuses suggest that the renal response to renal mass reduction can begin in utero. Experimental data are rare and restricted for the 1/2Nx model only, performed at the end of nephrogenesis or ex utero. In our work, we studied the morphological, functional and molecular effects for both groups (1/2Nx and 5/6Nx) in the ovine fetus. In both models, the renal mass and glomerular number increased, but the response was strikingly different. In the 5/6Nx group, two lobes were formed at the incision sites of the kidney displaying a “butterfly-like” remodelling and glomerular number markedly increased. To improve renal regeneration in the 5/6Nx model, we studied the possibility of transplanting stem cells; in vitro, our first experiments have allowed to isolate and characterize ovine stem cells from amniotic fluid. In conclusion, our study highlighted unsuspected renal compensation capacity in the fetus during the period-specific nephrogenesis; additional work will enable us to determine if renal compensation can be further improved by an exogenous contribution of stem cells

Les recepteurs de la bradykinine (bk) sont definis en type b1 et b2. Au niveau renal, la bk provoque une augmentation du flux sanguin, de la diurese et de la natriurese. Des sites de liaison de type b2 ont ete decrits sur les tubes collecteurs. Malgre les effets de la bk sur l'hemodynamique renale, aucun site de la bk, susceptible d'expliquer ces effets, ne fut decrit avant 1989. L'objectif de ce travail fut d'identifier ce site a un recepteur glomerulaire de la bk. En utilisant differents modeles (regime desode, restriction hydrique, hypertension renovasculaire), nous avons observe des variations opposees de l'activite enzymatique responsable de la production de bk et du nombre de sites de liaison, ce qui suggere une regulation negative par l'agoniste. Nous avons ensuite precise une des localisations intraglomerulaires du site de la bk sur la cellule mesangiale. La bk par activation d'un recepteur b2, induit une augmentation de la production des prostaglandines e2 associee a la production transitoire d'inositols triphosphates. Nous avons devoile une population heterogene des sites recepteurs de la bk tant sur des preparations glomerulaires que mesangiales, intactes ou solubilisees par le n-octyl-b-d-glucopyranoside. En conclusion, ces travaux decrivent la premiere caracterisation d'un recepteur b2 de la bk sur les cellules mesangiales. Ce recepteur appartient a une population heterogene dont la repartition glomerulaire presente des variations physiopathologiques associees a celles de l'activite du systeme kallicreine-kinine et est localisee preferentiellement sur les cellules mesangiales

La physiopathologie du syndrome néphrotique idiopathique (INS) de l'enfant n'est pas connue mais différents travaux ont montré un facteur circulant dans le plasma de ces enfants capable d'induire une albuminurie, des anomalies immunologiques plus particulièrment des lymphocytes, des anomalies glomérulaires avec une diminution des héparanes sulfates (HS). Nous avons développé un modèle in vitro pour quantifier les glycosaminoglycanes (GAG) et les HS de cellules mésangiales et épithéliales glomérulaires humaines en culture avec du plasma de patients et nous avons utilisé ce modèle pour étudier la physiopathologie du INS. Les GAG et les HS sont diminués lorsque les cellules sont cultivées en présence de plasma d'enfants en poussée de leur maladie, en comparaison avec du plasma contrôle. Ces taux de HS se normalisent avec le plasma de ces mêmes enfants en rémission de leur maladie. Le fractionnement de plasma (séparation par chromatographie d'affinité et échangeuse d'ions) ne nous a pas permis de mieux caractériser le facteur plasmatique recherché. Nous avons ensuite utilisé ce modèle (1) pour montrer que les lymphocytes de patients pouvaient synthétiser un facteur capable d'induire un effet analogue au plasma, (2) pour mettre en évidence le rôle de l'AMP cyclique dans les mécanismes physiopathologiques de cette maladie, (3) pour montrer que la ciclosporine A induisait une augmentation de la synthèse des HS, pouvant expliquer en partie l'effet bénéfique de la ciclosporine A dans cette maladie. En conclusion, ce travail nous a permis de mettre au point un modèle in vitro permettant d'étudier la physiopathologie du INS. Nous avons montré que le plasma de patients ayant un INS induisait une diminution de la synthèse des HS, diminution qui pourrait favoriser l'albuminurie chez ces patients. Et nous avons pu utiliser ce modèle pour étudier le rôle des lymphocytes, du cAMP et l'effet bénéfique de la ciclosporine A.

La cyclosporine a (csa) est une drogue immunosuppressive potentiellement nephrotoxique car elle provoque une contraction prolongee des vaisseaux intrarenaux et des glomerules. Cet effet constricteur resulte principalement de l'augmentation de l'activite du systeme des endothelines (et) et, peut-etre, de l'inhibition de la voie intrarenale du monoxyde d'azote (no). Dans une premiere etape, les effets d'une perfusion d'acides amines sur l'hemodynamique renale ont ete etudies chez des patients transplantes renaux traites par la csa. L'induction, par les acides amines, d'une vasodilatation renale et d'une augmentation du debit de filtration glomerulaire demontre l'integrite de certains systemes vasodilatateurs renaux endogenes et de leur capacite a contrebalancer l'action constrictrice de la csa. A partir de cette observation, l'interaction entre les endothelines et la voie du monoxyde d'azote a ete etudiee, ex vivo, sur des glomerules isoles de reins de rats et des cellules mesangiales murines en culture. Ainsi: (1) des doses pharmacologiques d'et activent des recepteurs de type b des endothelines (et#b) et stimulent la production glomerulaire de gmp cyclique via l'activation de la voie du no ; (2) les cellules mesangiales ne participent pas a la production et-dependante de no car elles ne possedent pas de no synthase constitutive ; (3) l'administration in vivo de cyclosporine a a dose moderee stimule transitoirement la voie du monoxyde d'azote par un mecanisme qui depend de l'activation des recepteurs et#b ; (4) la voie renale du no demeure fonctionnelle au cours de l'administration de csa et participe, probablement, a la limitation des effets constricteurs de cette drogue

Le syndrome néphrotique à lésions glomérulaires minimes (SNLGM) est une glomérulopathie fréquente dont l’étiologie est inconnue. Afin d’isoler les gènes activés au cours des phases actives de la maladie, nous avons entrepris la construction et le criblage différentiel d’une banque d’ADN complémentaire réalisé à partir des cellules mononuclées du sang périphérique d’un patient. L’étude de certains des gènes ainsi isolés a permis l’identification d’une voie de signalisation recrutée dans les lymphocytes T des patients en poussée de SNLGM impliquant une nouvelle protéine adaptatrice que nous avons appelé Tc-mip (c-maf inducing protéin). Nous avons également mis en évidence une anomalie de maturation de certains ARN messagers dans les lymphocytes T des patients liée à un défaut d’expression des SR protéines SRp75 et SRp 40. Ces travaux permettent, grâce à la stratégie utilisée, une progression significative dans notre compréhension de l’immunopathologie du SNLGM<br>Minimal change nephrotic syndrome (MCNS) is a giomerulopathy of unknown origin. In order to identify gene involved in the disase, we performed a substractive cDNA library from peripheral blood mononuclear cells of MCNS patient. This strategy Iead us to identify a new signaling pathway in T lymphocyte from MCNS patient including a new cytosolic adaptor protein we named Tc-mip (c-maf inducing protein). We also identify abnomalities in mRNA maturation during MCNS relapse, related to a lack of expression of two SR proteins (SRp4O and SRp75) involved in mRNA splicing. This study highlight the immunopathogeny of MCNS

L'objectif de notre etude a ete de demontrer la presence de recepteurs de l'ocytocine (rot) dans le rein de rat et de comparer les localisations respectives des differentes sous types de recepteurs ot et vasopressine, par autoradiographie, grace a l'utilisation d'analogues tels que le 125i-d(ch2)5tyr(me)2, thr4, orn8, tyr(nh2)9 vt, et le 125i-linear avp antag, d'affinite elevee pour les rot et les recepteurs v1a. Des rot sont presents dans le cortex renal, a la fois chez l'adulte et chez le jeune ou leur nombre augmente au cours du developpement post-natal. Nous avons montre l'expression transitoire de rot dans la partie medullaire du rein en developpement. Afin de mettre en evidence l'aspect fonctionnel des recepteurs transitoires, nous avons enrichi les populations cellulaires exprimant le rot par separation sur gradient de percoll. L'analyse des variations du taux de calcium libre intracellulaire a l'aide du fura 2, montre que les cellules qui repondent a l'agoniste selectif thr4, gly7ot, se caracterisent d'une part morphologiquement et d'autre part fonctionnellement en fonction de la nature du signal calcique. Enfin, nous avons choisi d'etudier les consequences de la nephrectomie unilaterale sur le niveau d'expression des rot dans la medulla du rein contralateral. Dans ce systeme, la surexpression des rot est correlee avec une multiplication accrue des cellules suggerant une implication dans les evenements ayant trait a la croissance et (ou) la differenciation cellulaire

Lutter contre le développement de la fibrose rénale représente un enjeu majeur afin de limiter l'évolution vers l'insuffisance rénale. De plus en plus d'équipes de recherche cherchent à en comprendre les mécanismes afin d'ouvrir la voie à de nouvelles stratégies thérapeutiques. Dans ce contexte, mon travail de thèse s'est intéressé plus particulièrement au ciblage de l'inflammation chronique dans cette pathologie. Le récepteur B1 des kinines (B1R) est un récepteur à sept domaines transmembranaires impliqué dans la douleur et l'inflammation. Indétectable à l'état physiologique et induit lors de l'inflammation, l'efficacité de son blocage a été prouvée dans des modèles de pathologies inflammatoires chroniques ou dans le contrôle de la douleur neuropathique et inflammatoire. Cette thèse rapporte ici les premiers résultats prouvant le rôle du B1R dans la progression de la fibrose rénale. Grâce à l'utilisation d'un modèle accéléré de fibrose tubulo-interstitielle chez l'animal, le modèle d'obstruction urétérale unilatérale (OUU), nos travaux ont montré dans un premier temps que l'invalidation génétique du B1R et son blocage pharmacologique, avant ou après la mise en place des lésions, exercaient un effet anti-inflammatoire et anti-fibrosant dans ce modèle. Des études menées in vivo et in vitro nous ont permis de décrypter les mécanismes mis en jeu dans cet effet. En effet, nous montrons ici que le blocage du B1R dans l'OUU diminue l'expression de la cytokine pro-fibrosante CTGF ainsi que l'expression des chimiokines CCL2 et CCL7, connues pour être impliquées dans le recrutement des macrophages, et que cet effet est dû à une action directe sur les cellules rénales. Dans un second temps, nous avons confirmé ces résultats dans un modèle plus progressif de néphropathie, la glomérulonéphrite induite par le sérum néphrotoxique. Ainsi, tout comme dans l'OUU, le blocage du B1R dans ce modèle diminue la fibrose, l'inflammation, et l'expression des chimiokines CCL2 et CCL7. Ce modèle nous a également permis de montrer que le traitement retardé diminuait les lésions glomérulaires et tubulaires et améliorait la perte de la fonction rénale. Enfin, nous montrons pour la première fois que l'expression du B1R est induit chez l'Homme au cours de néphropathies associées à l'inflammation. En conclusion, cette thèse montre que le blocage du B1R permet de réduire de manière significative la progression de la fibrose rénale chez l'animal grâce à son rôle dans la modulation de l'inflammation<br>New molecules and agents to limit the development of renal fibrosis and slow down the progression towards end-stage renal disease are needed. In the past twenty years, many efforts have been made to understand the mechanisms of renal fibrosis with the final goal to develop new therapeutic strategies. In this context, my work has focused on the chronic inflammatory processes involved in this pathology. The kinin B1 receptor (B1R) is a seven transmembrane receptor involved in pain and inflammation. Hardly detectable during physiological states, the B1R is overexpressed during inflammation. The therapeutic potential of B1R blockade has been demonstrated in a variety of models associated with chronic inflammation and in the control of inflammatory or neuropathic pain. This thesis is the first report presenting data of the role of this receptor in the progression of renal fibrosis. Using the Unilateral Ureteral Obstruction (UUO) model, an accelerated experimental model of renal fibrosis, it was shown that genetic ablation or pharmacological blockade of the B1R, before or after the initiation of the pathology, was able to limit inflammation and the development of fibrosis. In vivo and in vitro mechanistic studies demonstrated that this effect involved direct inhibition of CTGF, CCL2 and CCL7 expression (three cytokines that promote fibrosis and macrophage recruitment) by renal cells. We then confirmed these results in a more progressive model of nephrotoxic serum induced nephritis. In this model delayed B1R blockade reduced also fibrosis, inflammation and CCL2 and CCL7 expression. In addition, delayed treatment with a B1R antagonist reduced glomerular and tubular lesions and improved renal function. Finally, we observed, for the first time, that the B1R is overexpressed in human renal biopsies of nephropathies associated with inflammation. In conclusion, this thesis shows that delayed B1R blockade is able to reduce significantly the progression of renal fibrosis in animals most probably by modulation of inflammation

Au cours des dernières années, l’étude des formes héréditaires de podocytopathies a permis d’identifier de nombreux gènes codant des protéines podocytaires, et de préciser la structure et le fonctionnement de la barrière de filtration glomérulaire. Par une analyse mutationnelle conduite sur une cohorte de 139 patients avec un syndrome néphrotique, nous avons identifié 9 nouvelles mutations du gène PLCE1. De façon inattendue dans une maladie autosomique récessive, nous avons observé une pénétrance incomplète dans 3 familles suggérant une oligogénie ou le rôle de gènes modificateurs et/ou de facteurs environnementaux, bien que le criblage de 19 gènes candidats n’ait pas permis d’identifier de variant causal. Par ailleurs, nous avons confirmé le rôle prépondérant du gène INF2 dans les podocytopathies autosomiques dominantes. Nous avons montré que la majorité des mutations se situe dans le domaine N-terminal de la protéine qui joue un rôle dans son autoinhibition en se liant à son domaine C-terminal, mais qui interagit également avec IQGAP1, autre protéine du podocyte et du cytosquelette. Enfin, du fait de l’interaction connue entre INF2, MAL et Cdc42, actrices essentielles de la myélinisation périphérique, nous avons émis l’hypothèse qu’INF2 pourrait être impliqué dans l’association particulière d’une podocytopathie avec la neuropathie de Charcot-Marie-Tooth. Nous avons criblé 16 familles et effectivement identifié une mutation chez 75% d’entre elles. Nous avons montré l’expression d’INF2 et de MAL dans le nerf périphérique, ainsi que leur colocalisation et interaction dans les cellules de Schwann, et observé une altération de l’interaction des mutants d’INF2 avec Cdc42<br>During the last decade, the identification of several podocyte genes in hereditary forms of podocytopathies has allowed to refine the glomerular filtration barrier structure and function. We conducted a mutational analysis on a worldwide cohort of 139 patients with nephrotic syndrome and identified 9 novel mutations of the PLCE1 gene encoding the phospholipase Cε1. Surprisingly in an autosomal recessive disease, we observed an incomplete penetrance in 3 pedigrees suggestive of oligogenic inheritance or genetic and/or environnemental modifiers, although the screening of 19 candidate genes failed to identify a causative variant. We confirmed the major role of INF2 encoding a diaphanous-related formin in autosomal dominant podocytopathies. We showed that most INF2 mutations are located in the N-terminal domain of the protein which is involved in its autoinhibition through the binding to its C-terminus, and also interacts with another podocyte and cytoskeletal component IQGAP1. Since INF2 interacts with MAL (Myelin And Lymphocyte protein) and the Rho GTPase Cdc42, essential players of the peripheral myelination process, we hypothesized that INF2 mutations could be involved in the intriguing association of a podocytopathy with the Charcot Marie Tooth peripheral neuropathy. We screened a cohort of 16 families with this neurorenal phenotype and identified mutations in 75% of them. We showed that INF2 is expressed in Schwann cells, where it colocalizes and interacts with MAL, and that mutations in INF2 alter INF2 interaction with Cdc42. This suggests that INF2 mutations could disturb the INF2-MAL-Cdc42 pathway and its role in myelin formation and maintenance

Le risque de contamination par l'uranium lié aux activités professionnelles, impose de mieux comprendre ses effets toxicologiques. L'objectif de ce travail est de décrire les mécanismes de l'interaction entre l'uranium et ses cibles rénales par l'utilisation, originale pour l'uranium, des modèles de cultures cellulaires. Deux modèles rénaux sont étudiés : d'une part le modèle tubulaire proximal (lignée LLC-PK1) et d'autre part, le modèle glomérulaire (glomérules isolés et cultures primaires de cellules mésangiales). Les conditions chimiques permettant la mise en évidence d'un effet cytotoxique de l'uranium(VI) sur les cellules LLC-PK1 ont été déterminées et révèlent que seules les solutions d'uranium(VI) préparées avec des concentrations en ligands citrates ou bicarbonates 10 fois supérieures à celle du métal sont solubles dans le milieu de culture. Les études de cytotoxicité montrent que l'uranium-bicarbonate induit une réponse cytotoxique dose-dépendante. La microscopie électronique montre, pour les complexes uranium-bicarbonate, que l'uranium précipite dans le cytoplasme. Aucune toxicité ni précipitation intracellulaire de l'uranium ne sont observées avec les complexes uranium-citrate. Les diagrammes théoriques de la spéciation chimique de l'uranium permettent de montrer que l'espèce responsable de la cytotoxicité de l'uranium est le complexe U02(CO3)2-. Les résultats permettent de proposer un nouveau modèle selon lequel la pénétration de l'uranium se ferait en deux phases : premièrement par attachement du complexe U02(CO3)2- aux protéines membranaires des cellules tubulaires proximales et deuxièmement un phénomène d'endocytose permettrait l'entrée de l'uranium dans le compartiment cytoplasmique. Le suivi des variations morphomètriques des structures glomérulaires permet de mettre en évidence une vasoréactivité glomérulaire induite par l'uranium pour des concentration sub-létales. L'effet protecteur d'un inhibiteur des canaux calciques membranaires démontre le rôle important joué par les mouvements calciques dans la contraction glomérulaire induite par l'uranium. Ces études mettent donc en évidence une atteinte glomérulaire de l'uranium pour des concentrations sub-létales<br>A best knowledge of uranium compounds toxic effects is essential due to of the risk of occupational internai contamination. The aim of this work is to describe, by the original use of cell culture models for uranium, the mechanisms of interactions between uranium and its renal targets. Two renal models are studied: in the one hand the tubular proximal one (LLC-PK 1 cells) and on the ether hand, the glomerular mode! (isolated glomeruli and primary culture of mesangial cells). The chemical conditions permitting the observation of uranium(VI) cytotoxicity on LLC-PK1 cells were determined. They show that merely solutions prepared with bicarbonate and citrate ligands concentrations 10 fold higher than the metal are soluble in the culture medium. Cytotoxicity experiments reveal that only uranium-bicarbonate complexes induce a dose-related cytotoxicity response. Electron microscopy studies conducted with uranium-bicarbonate solutions show that uranium precipitate in the intracellular compartment. Ln contrast, no toxicity and no intracellular intake are noticed with uranium-citrate complexes. Theoretical speciation diagrams let us to determine that the U02(CO3)2- complex is responsible for the uranium toxic effects. These results allow us to propose a new model whereby uranium intake by tubular proximal cells would take place in two stages: firstly by attachment of U02(CO3)2- complexes to the proteins of cell membrane and secondly by an endocytosis process. The monitoring of the variations of morphometric parameters of glomerular structures permit to put in evidence the uranium-induced vasoreactivity for sub-lethal concentrations. The protective effect of a calcium channels blocker demonstrate the main role played by calcium ions in the uranium­induced glomerular contraction. These studies show that uranium induces glomerular effects for sub-lethal concentrations

La secretion d'aldosterone et de corticosterone par les cellules glomerulees de la surrenale de rat est dependante de la concentration de calcium extracellulaire. Nous avons donc realise une etude des canaux calciques. Grace a la technique du patch-clamp, nous avons pu mettre en evidence trois composantes calciques resultant de l'activation de trois types de canaux calciques sensibles au voltage. Les proprietes de ces canaux etant tres similaires a celles des canaux calciques presents dans les neurones de poulet, nous avons appele ces courants t, n et l. La composante t est une composante transitoire bas-seuil tandis que les composantes n et l sont des composantes haut-seuil tandis que les composantes n et l sont des composantes haut-seuil qui sont respectivement transitoire et soutenue. Par ailleurs, nous avons identifie trois types de canaux de fond permeables au calcium que nous avons appeles b#1, b#2 et b#3. La probabilite d'ouverture du canal b#1 est maximale a 70 mv et diminue lorsque le potentiel augmente ou diminue. Les canaux b#2 et b#3 ne semblent pas tres sensbles au potentiel. Aucun de ces canaux de fond permeables au calcium n'est sensible aux dihydropyridines. Par la suite, nous avons etudie le controle exerce par le principale secretagogue des cellules glomerulees de rat, l'adrenocorticotropine, sur l'activite des canaux t et l. Nous avons pu montre que cette hormone inhibe la composante t selon un processus biphasique et augmente l'amplitude de la composante l. L'analyse des effets de l'edrenocorticotropine sur les potentiels d'action confirme les resultats obtenus lors de l'etude realisees sur les courants calciques