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Dissertations / Theses on the topic 'Glutamate déshydrogénase'
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Andrès, Christian. "La glutamate déshydrogenase dans les atrophies olivo-ponto-cérébelleuses." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 1987. http://www.theses.fr/1987STR1M011.
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Chalot, Michel. "Assimilation de l'ammonium par les ectomycorhizes d'épicéa (picea excelsa) et par quelques symbiotes fongiques (hebeloma cylindrosporum et laccaria laccata)." Nancy 1, 1992. http://www.theses.fr/1992NAN10056.
Full textAbstract:
Le rôle essentiel de la glutamate déshydrogénase et de la glutamine synthétase dans l'assimilation de l'ammonium par les ectomycorhizes d'épicéa ont été démontré par l'utilisation de l'isotope 15 de l'azote. L'importance du marquage dans les fonctions amide et amine de la glutamine et dans la fonction amine du glutamate en présence ou en absence de méthionine sulfoximine, inhibiteur de la GS, démontre l'intervention de la séquence gdh/gs. La synthèse d'alanine est aussi une voie importante de mobilisation de l'azote exogène dans les ectomycorhizes d'épicéa. L'importance de ces deux enzymes a été confirmée chez les champignons basidiomycètes ectomycorhiziens par l'utilisation d'un mutant déficient en GDH à NADP d'hebeloma cylindrosporum. Les caractéristiques physico-chimiques ainsi que les propriétés fonctionnelles de la GS et de la GDH à NADP ont été étudiées chez laccaria laccata, chez lequel elles ont été purifiées à homogénéité électrophorétiques. L'ensemble de ces résultats accordent un rôle prépondérant à la séquence GDH/GS chez les mycorhizes et leurs symbiotes fongiques
3
Delaunay, Stéphane. "Étude et modification du métabolisme central de Corynebacterium glutamicum, productrice de glutamate." Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 1999. http://www.theses.fr/1999INPL061N.
Full textAbstract:
L'objectif général de ce travail est l'étude du métabolisme central et plus particulièrement des voies anaplérotiques chez corynebacterium glutamicum lors de la fermentation glutamique. Au cours du procédé utilisé, l'excrétion du glutamate chez C. Glutamicum 2262 est induite par une élévation de la température du milieu de culture de 33°C à 39°C. Ce traitement, en provoquant une orientation du métabolisme vers l'excrétion de glutamate au détriment de la croissance, permet la production de 85 g/l de glutamate en 24 h. Afin d'acquérir le maximum de connaissances concernant deux enzymes anaplérotiques, la phosphoénolpyruvate carboxylase (PEPc) et la pyruvate carboxylase (Pc), une étude de leur régulation in vitro ainsi qu'une modification de leur activité au cours de la fermentation glutamique ont été réalisées. Les mesures in vitro ont montré que le glutamate est un inhibiteur de l'activité PEPc et, grâce à la mise au point d'une nouvelle méthode de dosage de l'activité Pc, qu'il n'a aucune action sur cette dernière activité enzymatique. Afin de préciser le rôle de ces deux enzymes au cours de la fermentation glutamique, l'activité PEPc a été amplifiée par modification génétique de la souche de C. Glutamicum utilisée alors que l'activité Pc a pu être éliminée par la limitation du milieu de culture en biotine. Les résultats obtenus suggèrent que la Pc est l'enzyme anaplérotique majoritaire pendant la phase de production de glutamate. La PEPc ne pourrait intervenir que pendant les toutes premières heures suivant l'induction de l'excrétion du glutamate.
4
Hamelin, Maud. "Modification du protéome mitochondrial au cours du vieillissement chez le rat : identification de cibles." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077143.
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5
Tirado, Torres Juan Luis. "Contribution à l'étude des activités glutamine synthétase et glutamate déshydrogénase comme marqueurs du métabolisme azoté chez la feuille de soja." Montpellier 2, 1987. http://www.theses.fr/1987MON20109.
Full textAbstract:
Le comportement des activites enzymatiques a l'egard de la nutrition azotee (mineral et/ou atmospherique) est etudie au cours du developpement d'une feuille donnee ainsi qu'a chaque etage foliaire a des stades differents
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Hardin-Pouzet, Hélène. "Interactions neurones sérotoninergiques - astrocytes dans l'hippocampe de rat : conséquences sur le métabolisme astrocytaire du glutamate." Lyon 1, 1994. http://www.theses.fr/1994LYO1T133.
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Brun, Annick. "Contribution à l'étude de la glutamine synthétase et de la glutamate déshydrogénase à NADP chez le champignon ectomycorhizien laccaria laccata : purification, propriétés physico-chimiques et localisation dans les ectomycorhizes de Douglas." Nancy 1, 1992. http://www.theses.fr/1992NAN10169.
Full textAbstract:
La glutamine synthétase (gs) et la glutamate déshydrogénase à nadp (gdh a nadp) sont deux enzymes clés de l'assimilation de l'ammonium. Ces deux enzymes ont été purifiées à homogénéité électrophorétique chez le champignon ectomycorhizien laccaria laccata. , selon un protocole simple utilisant trois étapes chromatographiques. A l'issue de ce protocole, la gs a été purifiée 31 fois avec un rendement de 23%, alors que la gdh a nadp a été purifiée 688 fois avec un rendement de 62%. Les constantes d'affinité des enzymes pour leurs substrats ont été mesurées et les propriétés structurales étudiées. La gs est une protéine octamérique de masse moléculaire de 380 kda, composée de sous-unités identiques de 42 kda. La gdh a nadp est un hexamère de 298 kda dont les sous-unités identiques ont une masse de 47 kda. Le séquençage de quelques polypeptides montre la forte homologie entre la gs de l. Laccata et la gs de plantes supérieures, entre le gdh de l. Laccata et la gdh de champignons ascomycètes. Les tests immunologiques ont révélé que les anticorps produits contre ces deux enzymes sont très spécifiques et ont permis de localiser ces deux enzymes dans le mycelium végétatif de l. Laccata ou en association symbiotique avec les racines de douglas. La technique de marquage a l'or colloïdal révèle que ces deux enzymes sont reparties uniformément dans les différents tissus de la mycorhize et qu'elles sont toutes deux localisées dans le cytosol des cellules fongiques
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Lorillou, Sophie. "Contribution à l'étude de la régulation de la glutamate déshydrogénase à NADP chez le basidiomycète ectomycorhizien Laccaria bicolor S238N." Nancy 1, 1995. http://www.theses.fr/1995NAN10370.
Full textAbstract:
Le transfert du mycélium végétatif de Laccaria bicolor S238N d'un milieu contenant NH4+ (25 mm) sur un milieu contenant NO3- (25 mM) ou sur un milieu prive d'azote provoque une stimulation de l'activité spécifique de la GDH à NADP. La quantification du polypeptide GDH à l'aide d'immunsérum anti-GDH à NADP par la technique des empreintes immun électrophorétiques a démontré que les variations observées dans l'activité spécifique de l'enzyme correspondaient à des différences de concentration du biocatalyseur. L'immunprécipitation d'extraits protéiques provenant de mycélium marqué in vivo en présence de 35Sméthionine met en évidence une synthèse de novo de la GDH à NADP en présence de NO3- ou en absence d'azote. Afin d'étudier les mécanismes moléculaires impliqués dans la biosynthèse de la GDH à NADP, un ADNc pleine longueur correspondant à la GDH à NADP a été isolé chez Laccaria bicolor. L’analyse de la séquence peptidique déduite de la séquence nucléotidique révèle la présence d'acides aminés conservés, impliqués dans la structure et la fonction de l'enzyme. La comparaison avec les séquences en acides aminés de GDH à NADP isolées à partir de d'autres champignons ascomycètes montre une conservation importante de l'enzyme chez les champignons supérieurs. L’ADNc a servi de sonde moléculaire pour étudier l'expression du gène GDH à NADP dans le mycélium de Laccaria bicolor cultivé sur différentes sources d'azote. Lorsque le mycélium est transféré d'un milieu contenant NH4+ (25 mM), sur un milieu contenant NO3- (25 mm) ou sur un milieu privé d'azote, l'accumulation des ARNm de la GDH à NADP est stimulée de 4 fois. La source azotée régulé la GDH à NADP au niveau post-transcriptionnel et/ou transcriptionel
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Boulahya-Brihmouche, Kenza Amel. "Importance de l'enveloppe cellulaire dans la régulation de la production de glutamate par Corynebacterium glutamicum 2262 au cours d'un procédé thermo-induit." Thesis, Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2010. http://www.theses.fr/2010INPL063N/document.
Full textAbstract:
Lors de ce travail, une étude comparative entre trois souches de C. glutamicum a été réalisée. Celles-ci sont C. glutamicum 2262, une souche surproductrice de glutamate suite à l’élévation de température du milieu de culture de 33 à 39°C, C. glutamicum 2262 NP un variant incapable d’excréter du glutamate dans ces mêmes conditions et C. glutamicum 2262 ∆pks13 un mutant dépourvu de bicouche mycolique externe. Un modèle métabolique original reprenant les différentes modifications physiologiques aboutissant à l’excrétion du glutamate au cours du procédé thermo-induit a été établi. La bicouche mycolique joue un rôle primordial puisque son absence affecte sévèrement la production du glutamate. Dans un premier temps, l’élévation de température serait ressentie au niveau de cette bicouche. Ce ressenti, visualisé par l’accumulation de protéines caractéristiques d’un stress thermique, est nécessaire pour que la bactérie soit en capacité de surproduire le glutamate. Par la suite, la production de glutamate est régulée au niveau de l’α-cétoglutarate déshydrogénase (ODH) grâce à la phosphoprotéine OdhI. Suite au changement de température, celle-ci est déphosphorylée ce qui lui permet d’interagir avec ODH et de provoquer l’inhibition de cette dernière. Ceci se traduit par la redirection sur flux carboné vers la synthèse du glutamate. Aucun de ces évènements n’est observé chez C. glutamicum 2262 ∆pks13. Par ailleurs, l’élévation de température induit une modification de la composition de l’enveloppe cellulaire qui semble intervenir dans le processus physiologique aboutissant à l’excrétion du glutamate puisque très peu de changements sont observés chez C. glutamicum 2262 NP<br>During this work, a comparative study between three strains of Corynebacterium glutamicum was carried out. These strains were C. glutamicum 2262 which overproduces glutamate after an increase in the culture temperature from 33 to 39°C, C. glutamicum 2262 NP which is unable to produce glutamate in the same culture conditions and C. glutamicum 2262 ∆pks13 devoid of outer corynomycolic acid bilayer. An original metabolic model describing the successive physiological modifications responsible for the glutamate excretion during the temperature-triggered process was established. The presence of the corynomycolic acid bilayer appeared to be necessary since its lack affected dramatically the glutamate production. The temperature increase would be first sensed at the level of the external corynomycolic acid layer. This sensing was visualised through the accumulation of thermal stress proteins. In C. glutamicum 2262 ∆pks13, the synthesis of these proteins was not induced. The glutamate production is regulated at the oxoglutarate dehydrogenase (ODH) level by the phosphoprotein OdhI. A consequence of the temperature increase was the dephosphorylation of this regulatory protein and its interaction with ODH, provoking its inhibition. The carbon flux was then reoriented toward the glutamate synthesis. In C. glutamicum 2262 ∆pks13, no dephosphorylation of OdhI and no change in the ODH activity were not determined. The thermal stress also induced a change in the composition of the corynomycolic acid layer which was correlated with the ability of C. glutamicum 2262 to overproduce glutamate. In C. glutamicum 2262 NP, the composition of the corynomycolic acid layer remained unchanged
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Fontaine, Jean-Xavier. "L'enzyme glutamate déshydrogénase et l'efficacité d'utilisation de l' azote : analyses génétiques et physiologiques chez le blé et Arabidopsis." Amiens, 2008. http://www.theses.fr/2008AMIE0103.
Full textAbstract:
Dans le contexte actuel, les économies d’énergie et la limitation de la pollution due à la fertilisation azotée sont les principaux axes de recherche permettant d’aboutir à une agriculture raisonnée. Il est donc essentiel de mieux comprendre les bases génétiques régulant l’efficacité d’utilisation de l’azote (NUE) et les mécanismes physiologiques liés à sa remobilisation. Nous nous sommes donc intéressés au rôle de la glutamate déshydrogénase (GDH) durant le remplissage du grain de blé. Pour mieux comprendre le rôle de cette enzyme sur la physiologie de la plante entière, nous avons utilisé l’espèce modèle Arabidopsis thaliana dont le génome est entièrement séquencé. Chez le blé des régions chromosomiques (QTL) impliquées dans des mécanismes physiologiques liés au rendement et à la qualité du grain sont co-localisées à l’activité de la GDH. Chez la plante modèle, l’utilisation de mutants, démontre qu’il existe une régulation de l’expression de la GDH au sein des organes et entre organes. L’analyse du génome d’Arabidopsis a révélé la présence d’un troisième gène GDH. Les analyses montrent que ce gène est exprimé au niveau des racines. Les mutants semblent également présenter une modification de leur teneur en amidon. La GDH semble exprimée lors de phases critiques du développement et lors de perturbations au sein de la culture. Chez le blé, l’expression de la GDH est liée à la remobilisation de l’azote et au processus de remplissage du grain. Chez la plante modèle, la régulation de l’expression de la GDH semble liée au contrôle du statut carbone/azote de la plante entière. Sa position stratégique au sein des cellules compagnes de phloème renforce cette hypothèse.
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Wagner, Françoise. "Activités glutamate déshydrogénase et nitrate réductase du champignon ectomycorhizien Hebeloma cylindrosporum : étude de la variabilité génétique et production de mutants." Lyon 1, 1988. http://www.theses.fr/1988LYO19015.
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Sene, Ndiaga. "Implication du métabolisme azoté dans la relation plante-insecte : étude des fluctuations des enzymes glutamine synthétase (GS) et glutamate déshydrogénase (GDH) chez le couple Solanum tuberosum-Myzus persicae." Amiens, 2009. http://www.theses.fr/2009AMIE0119.
Full textAbstract:
Myzus persicae l’un des ravageurs des cultures de pomme de terre, s’alimente exclusivement aux dépens du compartiment phloémien des végétaux. Le phloème est la voie principale pour la translocation à distance des photoassimilats et sa sève est riche en sucres et particulièrement en saccharose. La sève élaborée est composée aussi de nombreux acides aminés libres dont les concentrations relatives sont fortement déséquilibrées avec en particulier une faible proportion d’acides aminés essentiels. Nous avons, dans un premier temps, montré une augmentation des activités enzymatiques de la Glutamine synthétase (GS) et de la Glutamate déshydrogénase (GDH) au cours du développement qui est confirmée par des westerns-blots et des études immunohistochimiques montrant une présence quasi exclusive des protéines GS1 et GDH dans les cellules compagnes de phloème. A la suite de l’étude du statut de ces enzymes à l’échelle de la plante et au cours du développement, nous avons montré un réel effet de l’infestation par Myzus persicae sur la GS et la GDH qui sont deux des enzymes clés impliquées probablement dans la synthèse des acides aminés et dans le contrôle de la réorientation fine des métabolismes carboné et azoté. L’induction de ces enzymes est uniquement locale comparée aux changements observés des métabolites qui sont affectés aussi bien au niveau locale que systémique. L’ensemble des changements induits par les pucerons laisse penser qu’ils sont capables de modifier la composition nutritionnelle du phloème à leur profit en vue d’une augmentation qualitative et quantitative en acides aminés. Nos observations montrent également qu’une altération du métabolisme azoté, induite par transgénèse ou mutagenèse, a un effet net sur le comportement alimentaire des aphides étudiés<br>Myzus persicae which is one of the potato cultures devastators, feeds exclusively on plants phloem compartment. The phloem is the main route for the long-distance transport of photoassimilates and its sap is rich in sugars, particularly, in sucrose. The elaborated phloem sap is also composed of numerous free amino acids, and the relative concentrations of those are strongly unbalanced, which concerns, in particular, a small proportion of essential amino acids. At first, we have shown an increase in the enzymatic activities of the glutamine synthetase (GS) and the glutamate dehydrogenase (GDH) during the plant development, which has been confirmed by the western-blots and immunohistochemical study. The latter has shown the almost exclusive presence of the GS1 and GDH proteins in phloem companion cells. A study of these enzymes status on the scale of the plant and during plant development has shown a real effect of M. Persicae infection on the GS and GDH, which are two key enzymes probably involved in amino acids synthesis and in the control of fine reorientation of carbon and nitrogenous metabolisms. The induction of these enzymes appears only on the local level as compared to the observed changes of metabolites which are affected on both local and systematic levels. All changes inducted by the aphids suggest that the aphids are able to modify the nutritional composition of phloem in order to gain in qualitative and quantitive increase in amino acids. Our observations have also shown that the change in nitrogenous metabolism, inducted by transgenesis or mutagenesis, has a clear effect on the alimentary habits of the studied aphids
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González, Luz Estela de Bashan. "Ammonium metabolism coupled with indole-3-acetic acid in the microalgae Chlorella vulgaris when co-immobilized in alginate beads with the microalgae growth-promoting bacterium Azospirillum brasilense." Doctoral thesis, Université Laval, 2006. http://hdl.handle.net/20.500.11794/18340.
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Chen, Ri-Dong. "Recherches sur l'origine de l'acide α-cétoglutarique associé à l'assimilation de l'azote chez les végétaux supérieurs : étude de l'isocitrate déshydrogénase à NADP". Paris 11, 1989. http://www.theses.fr/1989PA112174.
Full textAbstract:
Malgré le rôle fondamental de l'acide α-cétoglutarique dans la biosynthèse des acides aminés, le système enzymatique et le territoire cellulaire responsables de sa synthèse en vue de la production de l'acide glutamique et des composés qui en dérivent, n'ont jamais été identifiés. Pour contribuer à combler ces lacunes, cette thèse se focalise sur l'isocitrate déshydrogénase à NADP (EC 1. 1. 1. 42), une des enzymes qui catalyse l'oxydation de l'isiocitrate en α-cétoglutarate chez les végétaux supérieurs. Les formes multiples de l'enzyme ont été identifiées; elles sont localisées dans le cytosol et les chloroplastes. L'enzyme cytosolique de Pisum sativum cv finale a été purifiée à homogénéité à partir des racines et des feuilles. Il est démontré que l'IDH à NADP cytosolique est une enzyme organe-spécifique. Par approches immunochimiques, il est fortement suggéré que les isoenzymes cytosoliques des cormophytes ont été conservées au cours de l'évolution. Une isoenzyme spécifique des chloroplastes a été mise en évidence chez le Pois; elle possède des propriétés différentes de l'isoenzyme cytosolique. Il apparaît qu'au cours de l'évolution l'importance relative de l'isoenzyme chloroplastique décroît au profit de la forme cytosolique. Le criblage d'une banque d'ADN complémentaire de Sorgho dans le vecteur d'expression λgtl à l'aide d'anticorps polyclonaux a permis d'isoler une ADNc pour cette enzyme. Grâce à cette sonde, la taille de l'ARNm de l'IDH à NADP a été estimée à 1. 7 kb par la technique de Northern. Les résultats obtenus dans ce travail suggèrent que l'isiocitrate déshydrogénase à NADP pourrait jouer un rôle essentiel dans la production d'α-cétoglutarate lequel pourrait éventuellement être utilisé dans les chloroplastes pour la biosynthèse du glutamate<br>2-oxoglutarate provides the carbon skeleton implicated in the biosynthesis of glutamate. In spite of its fundamental function, the subcellular site of its production has never been thoroughly addressed. This thesis is focused on the NADP-isocitrate dehydrogenase (NADP-IDH) (E. C. 1. 1. 1. 42), one of the enzymes catalyzing the oxidation of isocitrate to 2-oxoglutarate in higher plants. The enzyme has been found to exist as multiple forms, which are localized both in the cytosol and chloroplasts. The cytosolic enzyme of Pisum sativum cv Finale has been purified to homogeneity from roots and green leaves; it constitutes an organ specific enzyme. The immunological properties of the enzyme extracted from various Cormophytes have been compared and it is concluded that the cytosolic NADP-IDH is a highly conserved protein. An NADP-IDH isoenzyme specific to chloroplasts has been identified in pea. The purified enzyme exhibits physicochemical and kinetic properties different from those of its cytosolic counterpart. Extended to other higher plants this result shows that in the course of evolution the importance of the chloroplastic enzyme decreases versus the cytosolic enzyme. Using the antibodies raised against the cytosolic enzyme to screen a cDNA library from Sorghum leaf poly (A +) mRNA in the expression vector λgtll, we have isolated a cDNA clone for this enzyme. The size of the mRNA was estimated to be 1. 7 kb. These results suggest that the cytosolic NADP-IDH could take an important role in providing the 2-oxoglutarate used for glutamate biosynthesis in chloroplasts
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Tanous, Catherine. "Caractérisation du plasmide et du gène codant la glutamate déshydrogénase chez Lactococcus lactis et leurs rôles dans la conversion des acides aminés en composés d'arôme." Paris 11, 2005. http://www.theses.fr/2005PA112100.
Full textAbstract:
Le catabolisme des acides aminés (AAs) par les bactéries lactiques (BL) est un processus majeur pour la formation d'arôme dans les fromages. Ce catabolisme est généralement limité par la faible production d'a-cétoglutarate (a-KG) nécessaire à sa première étape. Une meilleure connaissance des voies enzymatiques produisant ce facteur pourrait permettre la sélection de souches aromatiques. Après avoir exploré les voies de production d'a-KG chez L. Lactis, nous nous sommes focalisés sur la glutamate déshydrogènase (GDH), qui catalyse la désamination du glutamate en a-KG. Nous avons : 1/recherché l'activité GDH dans plusieurs souches de L. Lactis, 2/ isolé et caractérisé le gène gdh d'une souche GDH positive, 3/ étudié l'impact de cette activité sur la conversion des AAs en utilisant un mutant négatif et une souche sur exprimant le gène. Enfin, ce gène étant localisé sur un plasmide, nous avons séquencé ce plasmide, et étudié l'impact de son transfert dans une souche GDH négative, sur le catabolisme des AAs. Chez L. Lactis, un seul gène codant une GDH de classe I, est responsable de l'activité GDH détectée exclusivement dans des souches non laitières. Ce gène, localisé dans un transposon " vestige " Tn3, contenant également des gènes fonctionnels de résistance au cadmium, est porté par un plasmide de 68 kb (pGdh442) qui peut être naturellement transféré à d'autres souches de L. Lactis en utilisant le cadmium comme marqueur de sélection. L'impact positif de l'activité GDH sur l'intensité du catabolisme des AAs, et la capacité des souches à dégrader les AAs après le transfert du pGdh442, apportent de nouvelles perspectives pour construire des souches aromatiques naturelles<br>Amino acid (AA) catabolism by lactic acid bacteria (LAB) is a major process for flavour formation in cheese. Generally, the catabolism is limited by a low production of a-ketoglutarate (a-KG), which is essential for its first step. A better knowledge of the a-KG formation pathways and the of the LAB diversity could lead to the selection of flavour-producing strains. From different a-KG production pathways explored in L. Lactis, we focused on the glutamate dehydrogenase (GDH) pathway that catalyses glutamate deamination to a-KG : 1/ we searched for GDH activities in many L. Lactis strains isolated from different environments, 2/ we isolated and characterized gdh gene in GDH positive strain, 3/ we evaluated the impact of this activity on AA catabolism by using a negative mutant and a gdh overexpressing strain. Finally, since this gene was carried by a plasmid, we sequenced this plasmid and evaluated the impact of its transfer in GDH negative strains on AA catabolism. Only one gene encoding GDH of the family I, is responsible for GDH activity detected in non-dairy L. Lactis strains. This gene is part of a remnant transposon also containing functional genes encoding cadmium resistance and is located on a large plasmid of 68 kb (pGdh442). This plasmid can be naturally transferred to other L. Lactis strains by using cadmium resistance as selectable marker. The facts that the level of GDH activity is directly related to the level of AA catabolism and that the strains in which pGdh442 was transferred are capable of degrading AA, provide new prospects to construct natural strains with various and enhanced aromatic properties
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Garnier-Petit, Agathe. "Purification et caractérisation de la glutamate déshydrogénase à NAD chez le basidiomycète ectomycorhizien Laccaria bicolor : régulation de son activité chez le champignon en culture pure et dans deux associations ectomycorhiziennes." Nancy 1, 1998. http://www.theses.fr/1998NAN10312.
Full textAbstract:
La GDH à NAD du champignon ectomycorhizien Laccaria bicolor a été purifiée à homogénéité électrophorétique. Le protocole de purification comporte trois étapes simples, une précipitation au sulfate d'ammonium, une chromatographie échangeuse d'anions et une filtration moléculaire. La GDH à NAD a été purifiée 410 fois avec un rendement de 40%. La masse moléculaire de l'enzyme native est de 470 kDa, celle des sous-unités de 116 kDa suggérant que la GDH à NAD est un tétramère. L’enzyme est spécifique pour le NAD(H). Les pH optimums sont de 7,4 et de 8,8 pour les réactions d'amination et de désamination respectivement. L’addition de sulfate d'ammonium permet une bonne stabilité de l'activité enzymatique. La GDH à NAD est stimulée par le calcium, le magnésium, fortement inhibée par le cuivre et légèrement par les nucléotides AMP, ADP et ATP. Les constantes d'affinité pour le NAD, NADH, α-cétoglutarate et l'ammonium sont de 282 µM, 89 µM, 1,35 mM et 37 mM respectivement. Le rôle physiologique de la GDH à NAD a été étudié chez Laccaria bicolor cultive sur différentes sources azotées. Une régulation différente des deux GDHS est mise en évidence sur milieu nitrate et ammonium, conséquence de leur fonction métabolique distincte. La GDH à NAD et la GS ont un rôle assimilateur tandis que la GDH à NAD possède une fonction déprédative. La source et la concentration en azote régule fortement la GS et la GDH à NAD. Ces enzymes sont réprimées par les fortes teneurs en azote, en relation avec la teneur en ammonium intracellulaire. La GDH à NAD est nettement moins influencée par le statut azoté cellulaire. L’effet des sources carbonées sur les activités GDH à NAD et GDH à NADP caractérise une simulation de ces deux enzymes sur un milieu contenant du succinate et du fumarate. La GDH à NAD est plus fortement stimulée. Ceci suggère un contrôle de ces enzymes par le circuit carboné. L’étude de l’expression de la GDH à NAD dans deux ectomycorhizes montre une répression de l’isoforme fongique tandis que l’isoforme racinaire est conservée. Dans les ectomycorhizes de Douglas / Laccaria bicolor, la GDH à NADP fongique est active tandis que dans l’association Eucalyptus globulus / Laccaria bicolor, elle est réprimée.
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Putra, Deddi Prima. "Étude du métabolisme azote des champignons ectomycorhiziens (Cenococcum geophilum, Scleroderma verrucosum) et des mycorhizes d'eucalyptus : optimisation et application des techniques de dosage des molécules anioniques et cationiques par électrophorèse capillaire." Nancy 1, 1996. http://www.theses.fr/1996NAN10129.
Full textAbstract:
Le métabolisme azoté a été étudié chez deux champignons ectomycorhiziens : l'ascomycète Cenococcum geophilum et le basidiomycète Scleroderma verrucosum ainsi que chez les ectomycorhizes constituées par S. Verrucosum et Eucalyptus diversicolor. Chez C. Geophilum, la méthionine sulfoximine (MSX) inhibe fortement l'activité de la glutamine synthétase (GS) et de la glutamate déshydrogénase à NADP (GDH à NADP). L'albizzine inhibe l'accumulation du glutamate ce qui indique une implication de la glutamate synthase (GOGAT). C. Geophilum assimile donc l'azote par la voie GDH à NADP et le cycle GS/GOGAT. S. Verrucosum utilise bien l'azote nitrique et la nitrate réductase est réprimé par l'ammonium. Les dosages enzymatiques montrent que le champignon assimile l'azote via le cycle GS/GOGAT et l'activité de la GDH à NADP est faible. Chez S. Verrucosum associé à E. Diversicolor, le 14C-glutamate est rapidement métabolisé en glutamine par la GS. Cependant, l'accumulation de l'aspartate et de l'alanine marque au 14C est importante, même en présence de MSX, indiquant la grande efficacité des aminotransférases de la plante-hôte pour fournir des acides aminés. Les champignons étudiés appartiennent par conséquent à deux groupes: l'un représenté par C. Geophilum qui possède la GDH à NADP et le cycle GS/GOGAT et l'autre représenté par S. Verrucosum qui ne possède que le cycle GS/GOGAT. L’utilisation de l'électrophorèse capillaire a permis la séparation des acides organiques, en particulier ceux du cycle de Krebs et la détermination de l'ammonium, du nitrate, d'acides aminés particuliers (desmosine, isodesmosine), ainsi que de nombreux autres anions et cations inorganiques
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Celliere, Géraldine. "Multi-scale modeling of hepatic drug toxicity and its consequences on ammonia detoxification." Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC100.
Full textAbstract:
La détoxification de l'ammoniaque est une fonction clé du foie. Récemment, il a été montré que les réactions communément admises dans ce processus étaient insuffisantes pour comprendre toutes les données expérimentales. Nous avons donc développé des explications possibles sous forme de modèles compartimentaux. Grâce à des procédures statistiques, les modèles ont été évalués et comparés. Il est apparu que l'enzyme glutamate déshydrogénase a une importance capitale dans la détoxification de l'ammoniaque. Lorsque l'on modélise des tissues, le choix de la représentation de l'espace peut influencer les prédictions des modèles. Pour améliorer les modèles 1D actuels, nous avons développé un modèle mufti-échelles du métabolisme hépatique. Le modèle représente chaque cellule individuellement, le métabolisme intracellulaire, et le flux sanguin dans les vaisseaux. L'impact de la représentation de la microarchitecture du foie a été étudiée et des recommandations ont pu être formulées. Dans une 3eme partie, la toxicité du paracétamol sur le foie a été explorée. Est-il possible de prédire l'étendue d'une lésion hépatique in vivo due au paracétamol, grâce à un modèle et des données in vitro ? Nous avons utilisé une combinaison de modèles pharmacocinétiques et pharmacodynamiques, qui inclus les aspects suivants : profil d'exposition au paracétamol, différence d'activités des enzymes in vitro et in vivo, et inhomogénéités spatiales. Avec ces extensions, la prédiction de la toxicité du paracétamol in vitro a été significativement améliorée<br>Ammonia removal is a key liver function. Recently, the consensus reaction scheme involved in hepatic ammonia detoxification has been shown to be insufficient to completely understand ammonia removal. In order to uncover the mechanisms at play, we have developed a series of competing explanations formulated as compartment ODE-based mathematical models. Using statistical procedures, the models have been evaluated and compared. The results suggest that the enzyme glutamate dehydrogenase is a crucial element of ammonia detoxification after acute liver damage. When modeling tissues, the choice of the geometry representation can influence quantitative model predictions. To improve the current 1D models, we have developed a multi-scale model of hepatic metabolism. The model represents each individual hepatocyte, the intracellular metabolism and the blood flow within the blood vessel network. The impact of the precise tissue micro-architecture representation on model predictions has been assessed and recommendations could be drawn concerning its importance. In a third part, the early phase of liver damage is investigated. We address the question whether it is possible to predict the extent of in vivo tissue damage following a paracetamol overdose, via a model and in vitro data. To do so, we have used a combination of pharmacokinetic and pharmacodynamic modeling including the following aspects: (i) the precise drug exposure profile, (ii) the metabolic activity differences between the in vitro and the in vivo situation, and (iii) spatial inhomogeneities within the liver. With these extensions, the prediction of in vivo paracetamol toxicity could be significantly improved