Academic literature on the topic 'Granulocytes neutrophiles – Dissertations universitaires'

L'objet de ce travail était d' étudier le rôle de la cathepsine G lors de l'interaction entre les polynucléaires neutrophiles et les plaquettes chez l'homme. Les résultats obtenus sont décrits dans ce mémoire en trois parties. Le premier chapitre est consacré à l'étude de l'interaction entre ces deux cellules. Nous avons montré qu'il existe une interaction entre les polynucléaires neutrophiles et les plaquettes humaines, qu'elle s'effectue à travers la dégranulation des neutrophiles et que cette interaction est secondaire à la libération d'une protéase et non à travers l'activation d'autres médiateurs inflammatoires. Nous avons montré que de la cathepsine G est présente dans les surnageants des neutrophiles activés, et qu'il existe une corrélation entre les concentrations de cette protéase dans les surnageants et l'activation plaquettaire induite par ces mêmes surnageants. La cathepsine G purifiée à partir des neutrophiles humains est capable d'activer les plaquettes humaines (agrégation et libération de sérotonine) entre 50 et 200 nM. Finalement, nous avons testé l'activité et la spécificité de certaines antiprotéases vis-à-vis de la cathepsine G. Ainsi, le Z-Gly-Leu-Phe-CH2 C1, inhibiteur décrit comme spécifique de la cathepsine G, et l'alpha-1-antitrypsine et l'alpha-1-antichymotrypsine, les antiprotéases les plus importantes chez l'homme, inhibent totalement l'activité de la cathepsine G vis-à-vis des plaquettes. Dans le deuxième chapitres est décrite la capacité de l'égline C à inhiber l'activité plaquettaire induite par la cathepsine G. En effet, l'égline C inhibe complètement l'activité de la cathepsine G sur les plaquettes aussi bien dans le modèle des plaquettes isolées ‘entre 0,2 et 2 ug/ml), que dans le modèle de coopération neutrophiles-plaquettes (entre 0,8 et 20 ug/ml). De même, une inhibition similaire a été montré dans le modèle enzymatique (entre 0,2 et 2 ug/ml). Nous avons aussi montré que la cathepsine G était capable d'activer dans les plaquettes la production des métabolites de l'acide arachidonique. Finalement , nous avons montré que l'élastase, protéase stockée dans les mêmes granules des neutrophiles que la cathepsine G, était incapable d'activer les plaquettes par elle même. Enfin, la troisième partie du mémoire a été consacrée à l'étude de l'influence d'un glycosaminoglycane polysulfaté, l'héparine, présent dans l'organisme et utilisé fréquemment en clinique, sur l'inhibition de la cathepsine G. Une fraction de ce glycosaminoglycane, le CY 216, a été aussi étudié. Les deux types d'héparine sont capables d'inhiber l'activité de la cathepsine G (enzymatique et biologique vis-à-vis des plaquettes) à des concentrations similaires pour les deux modèles (entre 10 et 100 mU/ml pour l'héparine, et entre 10 et 50 mU/ml pour le CY 216). Cette inhibition est reversé par le sylphate de protamine dans le cas de l'héparine , ce qui montre une union électrostatique entre elle et la cathepsine G. Dans le système de coopération l'héparine inhibe l'activation plaquettaire (entre 30 et 300 mu/ml) sans bloquer la dégranulation des neutrophiles. Ces résultats ont été confirmés par une étude de microscopie. Deux phénomènes intéressants ont été observés dans notre travail : le premier est le décalage des concentrations d'antiprotéases nécessaires pour inhiber la cathepsine G dans le modèle de coopération cellulaire et le modèle des plaquettes isolées ; le deuxième est que nous n'arrivons jamais à inhiber l'activation enzymatique de la cathepsine G au delà de 60% pour l'héparine et au delà de 30% pour CY 216. Ces deux phénomènes sont discutés dans ce mémoire. Ces résultats pourraient avoir une importance physiopathologique et thérapeutique dans certains domaines.

La production de formes réactives de l'oxygène (explosion oxydative) par les polynucléaires neutrophiles (PN) stimulés joue un rôle majeur dans la défense de l'organisme contre différents agents pathogènes essentiellement bactériens et fungiques. Cette production est soumise à une régulation fine et précise notamment par les cytokines. Dans la première partie de ce travail, nous avons étudié, par cytométrie en flux, l'effet des cytokines proinflammatoires sur l'explosion oxydative des PN dans le sang total. Nous avons ainsi montré qu'aucune des cytokines étudiées (IL-1a, IL-1ß, TNFa, IL-6, IL-8, GM-CSF) ne déclenche isolément l'explosion oxydative des PN. Par contre, le prétraitement des PN par le TNF, l'IL-8 ou le GM-CSF suivie de l'addiction d'un formyl peptide dérivé des protéines bactériennes, conduit à l'apparition d'une sous-population de PN produisant d'importantes quantités de peroxyde d'hydrogène (H2O2). Cette sous-population se caractérise par une augmentation de la liaison des formyl peptides à la surface des PN. Une augmentation de la liaison de formyl peptides à la surface des PN. Une dysrégulation des interactions entre cytokines et PN peut contribuer à l'établissement de lésions entre cytokines et PN peut contribuer à l'établissement de lésions tissulaires sévères lors de certaines situations pathologiques. Dans la deuxième partie de ce travail, nous avons étudié l'activité fonctionnelle des PN au cours de l'infection par VIH, une augmentation des taux plasmiques de certaines cytokines ayant été rapportée chez les patients infectés par le VIH. Cette étude a montré une hyperactivation des polynucléaires dans le sang circulant des patients infectés par le VIH caractérisée par une augmentation de l'expression de la molécule d'adhérence CD 11b, une diminution de l'expression de la L-sélectine (CD62L), une augmentation de la polymérisation de l'actine et une augmentation de la production spontanée d'H2O2. Cet état d'activation pourrait contribuer à l'agression oxydante du système immunitaire et intervenir dans la pathogénie de certaines vascularités leucocytoclasiques rapportées chez les patients infectés par le VIH. De plus, après amorçage par le TNF ou l'IL-8, l'explosion oxydative des polynucléaires en réponse aux formyl-peptides est diminuée. Cette diminution est corrélée avec l'augmentation des taux plasmiques des cytokines suggérant de ce fait un phénomène de désensibilisation. Ces deux dernières anomalies observées après stimulation par les formyl-peptides sont corrélées avec la diminution du taux de cellules CD4+ et pourraient intervenir dans la pathogénie de certaines infections bactériennes et fungiques au cours de l'infection par le VIH.

Le bacille de la peste, Yersinia pestis, a une vie parasitaire au cours de laquelle il oscille le plus souvent d’un hôte mammifère à l’autre par l’intermédiaire des puces, et plus rarement par voie aéroportée. Comme tel, Yersinia pestis doit rapidement ressentir et répondre aux variations brutales de son environnement afin se maintenir dans la nature. C’est pourquoi, nous avons étudié le rôle des systèmes de régulation à deux composants dans la peste compte tenu que ces systèmes sont connus pour avoir un rôle clef dans l’adaptation des bactéries aux changements environnementaux. En plus du système PhoP-PhoQ dont l’importance chez le mammifère et la puce a été précédemment révélée, nous avons découvert que quatre systèmes sont requis pour le cycle de la peste. Plus particulièrement, l'un d'entre eux permet une colonisation optimale du tube digestif de la puce alors que les 3 autres systèmes sont impliqués dans la production de biofilm, un processus indispensable à une transmission optimale du bacille par les puces. Nous avons aussi découvert que le système OmpR-EnvZ est l’unique système, en plus du système PhoP-PhoQ, requis pour la production de la peste bubonique, septicémique et pulmonaire. Nos travaux, menés in vitro, ex-vivo et in vivo suggèrent que le rôle du système OmpR-EnvZ serait de protéger la bactérie contre les effecteurs toxiques sécrétés par les polynucléaires neutrophiles dans les tissus et, ceci tout au long du processus infectieux
Plague bacillus, Yersinia pestis has a parasitic lifestyle in which it is mainly transmitted between mammilian hosts through the bite of infected fleas, and in rare cases through infected droplets. Thus, Yersinia pestis must rapidly sense and respond to wide and brutal changes of its environment in order to survive. We aimed at decipher the role of two component regulatory systems in plague, as they are known to be key players in bacterial adaptation to the environment. In addition to the already described PhoP-PhoQ system, we found out that four systems are required for plague cycle. We showed that one of these systems is important for an optimal colonization of the flea's digestive tract, while the three others are required for biofilm production, an essential step in the bacillus transmission by the fleas. We also found out that OmpR-EnvZ, in addition to PhoP-PhoQ, is the only one to be important to produce bubonic, septicemic and pulmonary plague. Our in vitro, ex-vivo and in vivo works suggest that the OmpR-EnvZ system would be to protect bacterial against toxic effectors that are produced by polymorphonuclear leukocytes all along the infectious process

L’hépatite alcoolique (HA) est une maladie complexe de mauvais pronostic. L’arsenal thérapeutique se limite souvent au traitement par corticoïde. Cependant, 40% des patients ne répondent pas au traitement et la transplantation hépatique est la dernière issue pour leur survie. L’HA est caractérisé par une importante infiltration de polynucléaires neutrophiles (PNN), et paradoxalement l’infection de ces patients est fréquente et liée à la mortalité. D’autre part, notre groupe a démontré un important défaut de régénération hépatique caractérisé par une diminution de la prolifération des hépatocytes dans l’HA. Le but de notre étude était de déterminer les mécanismes cellulaires à l’origine du défaut de régénération hépatique dans l’HA, d’explorer les mécanismes physiopathologiques impliqués dans l’interaction du PNN et de l’hépatocyte, et d’évaluer la capacité migratoire des PNN circulants au cours de l’HA.Notre étude a mis en évidence la voie Hippo/YAP comme étant profondément altérée dans l’HA. L’activation de l’effecteur YAP était anormalement induite dans les hépatocytes de patients HA. Cette activation hépatocytaire induisait une dédifférenciation et une perte de fonctionnalité des hépatocytes. L’inhibition de YAP par la dobutamine dans des hépatocytes primaires isolés de patients HA était capable de limiter le processus de dédifférenciation. Ces données suggèrent que cibler YAP représente une stratégie thérapeutique innovante pour la prise en charge de l’HA. Nos travaux ont aussi permis d’identifier la voie NOD1 comme acteur principal dans l’interaction PNN/hépatocytes par le biais de l’expression de molécules d’adhésion. Nos résultats suggèrent cette voie comme cible thérapeutique pour limiter les lésions hépatiques induite par le PNN. De plus, au cours de l’HA, une dérégulation de la voie IL33/sST2 était impliquée dans la migration des PNN. Nous avons démontré une diminution de la capacité migratoire des PNN circulant au cours de l’HA. Le traitement des PNN par l’IL33 était capable de compenser ce défaut migratoire, ce qui représente outil intéressant pour prévenir les risques infectieux dans l’HA
Alcoholic hepatitis (AH) is a complex disease associated to a poor prognosis. The therapeutic arsenal is limited to corticosteroid treatment. However, 40% of patients do not respond to the treatment and liver transplantation represents the last option for their survival. AH is characterized by a large infiltration of polymorphonuclear neutrophils (PMN), and paradoxically the infection of these patients is a frequent event related to mortality. On the other hand, our group has demonstrated in AH an important defect of hepatic regeneration characterized by a decrease in hepatocytes proliferation, and the formation of ductular reaction. The aim of our study was to determine the cellular mechanisms causing the defect of liver regeneration in AH, to explore the pathophysiological mechanisms involved in the interaction of the PMN and hepatocytes, and to evaluate the migratory capacity of the PMN.Our work has highlighted the Hippo/YAP pathway as profoundly altered during AH. The effector YAP was aberrantly activated in AH hepatocytes. This led to the dedifferentiation and the loss of function of hepatocytes. The treatment of AH-isolated hepatocytes by the YAP inhibitor, dobutamine, limited the dedifferentiation process. Targeting YAP appears as an innovative strategy for AH management. Our work also identified the NOD1 pathway as a major actor in the PNN/hepatocyte interaction through expression of adhesion molecules. Our results suggest that NOD1 is an interesting target to limit PMN-induced liver injury. In addition, during AH, deregulation of the IL33 / sST2 pathway was involved in PNN migration. We have demonstrated a decrease in the migratory capacity of circulating PMNs. The treatment of PMN by IL33 was able to compensate for this migratory defect, which represents an interesting tool to prevent infectious risks during AH

Le sepsis est une réaction inflammatoire aigüe de l'hôte en réponse à une infection (bactérie, virus, champignon ou parasite) aboutissant très souvent à des dysfonctionnements d'un ou plusieurs organes. Parmi les plus fréquents, on retrouve les troubles respiratoires avec l'ALI (acute lung injury) et le syndrome de détresse respiratoire aiguë (SDRA). Le sepsis reste de nos jours un problème dévastateur chez les patients gravement malades puisque malgré les traitements modernes, les taux de mortalité restent élevés, même dans les pays industrialisés. Les neutrophiles sont les premières cellules circulantes recrutées au niveau des sites d'infection. Ils disposent, en effet, de tout un arsenal pour lutter contre les pathogènes envahissant l'organisme : la phagocytose, les espèces réactives de l'oxygène, et des sérine protéases (l'élastase, la cathepsine G et la protéinase 3). Bien que jouant un rôle protecteur dans la défense de l'hôte, les neutrophiles et leurs sérine protéases sont paradoxalement impliqués dans les lésions tissulaires au cours de certaines pathologies inflammatoires tels que le sepsis, le SDRA et l'ALI. Il a d'ailleurs été montré que les neutrophiles sont les principales cellules immunitaires infiltrant les poumons au cours de l'ALI et du SDRA. Le passage des neutrophiles vers les poumons fait intervenir les intégrines leucocytaires CD11/CD18. C'est l'interaction de ces intégrines avec la molécule d'adhérence ICAM-1 des cellules endothéliales qui va initier la migration des neutrophiles à travers l'endothélium vasculaire. L'endothélium est un élément clé dans la régulation de la réaction inflammatoire puisqu'il constitue la barrière entre le torrent circulatoire et les tissus. Lors de pathologies septiques, l'endothélium est dans un état d'activation anormal et prolongé qui aboutit à une inflammation systémique. Les médiateurs pro-inflammatoires, tel que le TNF-α, vont activer la cellule endothéliale et induire l'expression de nombreux gènes, y compris les molécules d'adhérence E-sélectine, ICAM-1 et VCAM-1, qui permettent l'infiltration leucocytaire au cours de sepsis. Endocan est un protéoglycane spécifique de la cellule endothéliale dont l'expression est régulée positivement par les cytokines pro-inflammatoires du sepsis (TNF-α et IL-1) et par le lipopolysacharide (LPS) constituant la paroi des bactéries à gram négatif. Endocan est un protéoglycane de 50 kDa de type dermatane sulfate dont l'expression est préférentiellement pulmonaire et rénale. Endocan est une molécule circulante détecté dans le sang. Chez des patients atteints de sepsis, les taux sériques d'endocan sont augmentés et corrèlent au mauvais pronostic de la maladie. II a été montré in vitro qu'endocan est capable de se fixer aux leucocytes via l'intégrine CD11a/CD18 (LFA-1) et inhibe ainsi l'interaction LFA-1/ICAM-1. Le rôle central des neutrophiles et de l'endothélium au cours du sepsis, et les données connues sur endocan nous ont amené a étudié le rôle d'endocan dans la pathogenèse du sepsis et tout particulièrement l'interaction qui pouvait exister entre endocan et les neutrophiles. Les travaux de thèse ont permis de mettre en évidence que des neutrophiles activés sécrètent des sérines protéases impliquées dans la dégradation protéolytique d'endocan. Nous avons identifié l'élastase comme responsable du clivage séquentiel d'endocan en fragments peptidiques de 15, 12 et 10 kDa, et la cathepsine G comme responsable du clivage d'endocan en un fragment unique de 14 kDa, nommé p14. Par immunoprécipitation, nous avons mis en évidence la co-existence d'endocan et de p14 in vivo, dans le sérum de patients atteints de sepsis ou de sepsis sévère. Les analyses par spectrométrie de masse dévoilent que p14 est un fragment protéique d'endocan dont l'extrémité N-terminale est intacte. Trois sites potentiels de clivage en C-terminal ont été identifiés, et aboutissent à un p14 qui conserve la région riche en cystéine d'endocan. La présence des 18 cystéines, qui sont impliquées dans la formation de ponts disulfures, peut expliquer la résistance de p14 aux activités protéasiques. Nous avons montré que la fixation d'endocan aux leucocytes via l'intégrine LFA-1 est médiée par la chaîne protéique et non glycanique d'endocan, et que cette fixation peut être levée par p14. Grâce à un modèle in vitro en transwell, nous avons montré qu'endocan est capable d'inhiber la migration transendothéliale, LFA-1 dépendante, de leucocytes. Cette inhibition n'est pas observée avec le mutant d'endocan dépourvu de son glycane. L'ensemble de nos résultats suggèrent qu'au cours du sepsis, endocan est clivé en p14 par la cathepsine G sécrétée par les neutrophiles activés. En se fixant au LFA-1, p14 empêche la fixation d'endocan aux leucocytes et empêche ainsi endocan de moduler le recrutement leucocytaire. Tout comme endocan humain, endocan murin est détecté dans le sérum et est clivé par la cathepsine G neutrophile murine en un fragment de 14 kDa. Grâce à un modèle de choc endotoxinique chez la souris 129Sv, nous avons mis en évidence une corrélation entre les taux sériques d'endocan murin et l'évolution du choc endotoxinique qui est surveillé grâce au calcul d'un score clinique de gravité. En effet, lorsque le score clinique de gravité est à son maximum à T24h, les taux d'endocan chutent. Lorsque l'état clinique de la souris s'améliore à partir de T5j, on observe une augmentation du taux d'endocan qui retrouve sa valeur de base à T7j. L'ensemble de nos résultats laissent penser que les interactions endocan-cathepsine G peuvent participer, au cours du sepsis, à la réaction inflammatoire de l'hôte et conduire aux troubles respiratoires lors de l'ALI ou du SDRA. Le fragment de dégradation d'endocan p14, pourrait être envisagé comme une signature moléculaire de l'activité cathepsine G et pourrait potentiellement être un marqueur d'évaluation de l'activation des neutrophiles au cours du sepsis

Le paf-acéther (paf) est un médiateur proinflammatoire dérivé du métabolisme des lipides constitutifs des membranes cellulaires, synthétisé et libéré par de nombreux types cellulaires. Nous avons étudié : 1) l'effet du sérum humain activé par le paf sur l'activation du basophile et 2) l'effet du paf sur la fonction mucociliaire. Le paf par lui-même, ainsi que le lysopaf n'induisent pas l'activation du basophile humain. Cependant le sérum humain activé par le paf, et non par le lysopaf, est capable d'induire une activation du basophile humain. Cet effet est supprimé par l'antagoniste du récepteur du paf le WEB 2086 lorsque ce dernier est mis en présence du sérum avant son activation par le paf. Par contre, le WEB 2086 reste sans effet sur l'action du sérum activé sur les basophiles. Le sérum en présence d'EGTA-Mg²+, inactivateur de la voie classique du complément, est activé par le paf et induit une diminution des BT+, la déplétion du facteur B par chauffage pendant 30 min à 56° C du sérum activé rend celui-ci inactif sur les basophiles. En absence de Ca²+, l'incubation du sérum activé avec les leucocytes est également sans effet sur les basophiles. Le paf ainsi que son métabolite/précurseur le lysopaf inhibent in vitro la fréquence des battements ciliaires (FBC) de la trachée de cobaye. Cet effet est plus marqué avec le paf C16. Le kétotifène et l'antagoniste du récepteur du paf le WEB 2086 protègent contre l'activité inhibitrice du paf sur la FBC. Dans des conditions pathologiques, la libération de paf dans les voies aériennes peut contribuer aux dommages et aux altérations de la fonction mucociliaire et par conséquent participer à long terme à la pathogenèse de la maladie pulmonaire.

Dans cette thèse, nous avons étudié le rôle ambivalent des microorganismes dans la pathologie de l'asthme allergique. Nous avons ainsi montré le rôle protecteur des probiotiques, bactéries non pathogènes dont la signalisation utilise la molécule MyD88, dans un modèle d'inflammation allergique induit par l'ovalbumine. Cette protection se caractérise par une diminution de l'hyperreactivité bronchique, de l'infiltration des eosinophiles et de la production de cytokines de type Th2 (IL-4, IL-5, IL-13) dans les poumons. Quant aux mécanismes responsables de cette protection, nous avons montré qu'elle était associée à une réduction des cytokines pro-inflammatoires (IL-17 et TNF-α) et à une augmentation des cellules T régulatrices CD4*CD25*FoxP3*. Cette protection est transférable par les cellules T CD4* et est dépendante de l'IL-10. Dans une étude indépendante, nous avons démontré l'implication des basophiles dans l'asthme allergique à la fois après transfert adoptif et après déplétion. Nous avons également testé la réponse des basophiles murins à différents agomstes TLR et identifié une molécule qui était capable d'activer cette cellule. Ainsi, nous avons démontré que l'ARN synthétique double brin, le poly(A:U), qui est décrit comme un ligand TLR3/TLR7, induit une production d'IL-4, d'IL-6, d'IL-13 et d'histamine par les basophiles in vitro. Cette stimulation dépend du senseur viral RIG-I et de l'adaptateur moléculaire CARDIF. Nous avons enfin démontré la pertinence de ces observations puisque Pactivation des basoplulcs in vivo par le poly(A:U) exacerbe tous les paramètres de l'asthme expérimental allergique. Nous suggérons que nos résultats sur le poly(A:U), considéré comme mimant l'effet d'un virus, pourraient constituer une approche du mécanisme responsable de l'aggravation de la pathologie bien connue chez les patients asthmatiques durant une infection virale
We have shown here that non-pathogenic microorganisms such as probiotics can protect mice from experimental allergic asthma. We have observed that oral administration of the preparation containing lactobacillus, bifidobacterium and spretococcus prevents from allergic asthma induced by ovalbumin as shown by the decreased broncho-hyperactivity, the eosmophilia in the bronchoalveolar liquid (BAL) and the production of Th2 type cytokines (IL-4, IL-5, IL-13) and chemokines (eotaxin) in the lungs. Probiotic administration also decreased the level of pro-inflammatory cytokines IL-6, IL-17 and TNFα in sera and increased the frequency of CD4+CD25+FoxP3+T cells in the spleen. In addition, we have shown that the asthma protection was MyD88- and IL-10-dependent. We have also analyzed the potential role and activation of basophils in experimental allergic asthma. We have demonstrated by adoptive transfer and by depletion of these cells the role of basophils in this model. We have further characterized the double-stranded RNA poly(A:U) as a potent agonist of purified murine basophils since it induced a strong IL-4, IL-6, IL-13 and histamine production in vitro. Poly(A:U). Which is described as TLR3/TLR7 ligand, activated basophils through the RIG-I/CARDIF pathway. The relevance of this stimulation has been illustrated in the model of allergic asthma, since poly(A:U)-activated basophils exacerbated asthma responses by increasing TH2 cytokine and chemokine production in lungs as well as eosinophilia in the BAL. We suggest that this mechanism may account for the aggravating effect of respiratory viral infections well known in asthma patients

Les maladies cardiovasculaires, conséquence de l’athérosclérose, sont la première cause de morbi-mortalité dans le monde et voient leur incidence et sévérité augmenter avec l’expansion de leurs principaux facteurs de risque, tels que l’âge, l’obésité et le diabète. La sténose valvulaire aortique, valvulopathie la plus fréquemment rencontrée dans les pays occidentaux essentiellement chez le sujet vieillissant, partage de fortes similitudes avec l’athérosclérose vasculaire. En effet, les plaques athéroscléreuses et les lésions valvulaires sont le siège de processus d’inflammation, d’angiogenèse, de fibrose et de calcification. Les macrophages, issus de la différenciation tissulaire des monocytes infiltrés, jouent un rôle clé dans l’apparition des lésions athéroscléreuses vasculaires et leur devenir. Leur rôle dans l’état inflammatoire des lésions est aujourd’hui bien établi avec de récentes publications qui font état des propriétés plastiques des macrophages, selon leur microenvironnement. Deux principaux sous types de macrophages ont été décrits dans les plaques athéroscléreuses, les macrophages M1 dit « classiques » et M2 dits « alternatifs ». Leur rôle respectif dans la thrombogénécité, la protéolyse et l’angiogenèse, processus impliqués dans l’instabilité de la plaque, ont été moins étudiés. En revanche, les macrophages sont peu décrits dans la valve, à l’inverse des cellules interstitielles de valves (VIC), qui sont cruciales pour le maintien de l’homéostasie et la fonction valvulaire et sont impliquées dans la fibrose et la rigidité des feuillets valvulaires. Mon travail de thèse a pour objectif d’étudier les rôles des macrophages M1/M2 dans les pathologies vasculaires et valvulaires chez l’homme. Nous nous sommes focalisés sur leurs rôles dans l’instabilité de la plaque athéroscléreuse (processus de coagulation et de remodelage vasculaire) et dans la fibrose valvulaire ainsi que sur leur modulation phénotypique par d’autres types cellulaires présents dans les lésions, les polynucléaires neutrophiles dans la plaque ou les VIC dans la valve.Nos résultats suggèrent que les macrophages M1 et M2 pourraient moduler différemment des processus physiopathologiques majeurs de l'athérosclérose. Par ailleurs, les macrophages M1 de patients diabétiques présentent un phénotype délétère qui pourrait expliquer la plus grande vulnérabilité des plaques d’athérosclérose observée chez ces sujets. Concernant la pathologie valvulaire, après avoir caractérisé par analyse histologique les M1/M2 dans les valves aortiques humaines, nous avons montré que les macrophages M1 sont impliqués dans la progression de la fibrose via la modulation de leur répertoire sécrétoire par les VIC.Cette thèse apporte de nouveaux indices sur les processus physiopathologiques impliqués dans les maladies vasculaires et valvulaires. Elle met l’accent sur le rôle délétère des macrophages M1 chez les sujets diabétiques en pathologie vasculaire et identifie également une fonction jusque-là méconnue des M1 dans la progression de la fibrose, associée au « cross-talk » avec les VIC. Il conviendra par la suite d’identifier les mécanismes moléculaires sous-jacents à ces intéractions, ce qui devrait permettre d’envisager de nouvelles voies thérapeutiques visant à moduler l’effet de ce sous-type cellulaire dans ces pathologies
Cardiovascular disease, as a result of atherosclerosis, are the main cause of morbidity and mortality in the world and see their incidence and severity increase with the expansion of their major risk factors, such as age, obesity and diabetes. Aortic valve stenosis, valve disease most frequently encountered in Western countries mainly in the old subject, shares strong similarities with vascular atherosclerosis. Indeed, atherosclerotic plaques and valvular lesions are the site of inflammation, angiogenesis, fibrosis and calcification processes. Macrophages, from monocytes infiltrated tissue differentiation, play a key role in the development of vascular atherosclerotic lesions and their future. Their role in the inflammatory state of the lesions is now well established with recent publications that report on plastic properties of macrophages, according to their microenvironment. Two major subtypes of macrophages have been described in the atherosclerotic plaques, classically (M1) or alternatively (M2) activated macrophages. Their respective role in thrombogenicity, proteolysis and angiogenesis processes involved in plaque instability, have been less studied. In contrast, macrophages are not disclosed in the valve, compared to the valvular interstitial cells (VIC), which are crucial for the maintenance of homeostasis and the valvular function and are involved in the fibrosis and rigidity of the valvular leaflets. My thesis aims to study the roles of macrophages M1/M2 in vascular and valvular pathologies in humans. We focused on their roles in the instability of atherosclerotic plaque (haemostatic or clotting process and vascular remodeling) and valvular fibrosis and their phenotypic modulation by other cell types present in the lesions, neutrophils (PNN) in the plaque or VIC in the valve.Our results suggest that the M1 and M2 macrophages may differently modulate major pathophysiological processes of atherosclerosis. In addition, M1 macrophages from diabetic patients have a deleterious phenotype that could explain the increased vulnerability of atherosclerotic plaques observed in these subjects. About valvular pathology, after characterized histologically M1/M2 in human aortic valves, we have shown that the M1 macrophages are involved in the progression of fibrosis through the modulation of their secretory repertoire by VIC.This work provides new clues about the pathophysiological processes involved in vascular and valvular diseases. It focuses on the deleterious role of M1 macrophages in diabetic subjects in vascular pathology and also identifies an unknown function of M1 in the progression of fibrosis associated with "cross-talk" with VIC. It will be necessary later to identify the molecular mechanisms underlying these interactions, which is expected to consider new therapeutic approaches to modulate the effect of this cell subtype in these diseases

Dans le travail portant sur l'immunorégulation de la réponse immunitaire dans le modèle expérimental d'asthme, nous avons montré que les basophiles étaient activés par des ARN double brin poly (A:U) et que cette stimulation exacerbait les réponses d'asthme. Nous avons ensuite étudié la modulation de l'asthme en utilisant des agonistes de la voie TLR/IL1R. Les résultats obtenus ont montré que le R848 , agoniste de TLR7 qui induit les réponses immunitaires antivirales de type Th1, et l'IL-33 qui favorise les réponses Th2, activaient les cellules NKT dont la production rapide et modulée des cytokines pourraient avoir un effet modulateur dans l'asthme. Nous avons montré que les cellules NKT avaient une fonction régulatrice sur le développement et l'activité des cellules Th17. Enfin, nous avons décrit les effets protecteurs et suppresseurs induits par le R848 dans le modèle d'asthme et montré que ces effets suppresseurs étaient dépendants des cellules T régulatrices et du TGF-β
In our experimental work focusing on the immunoregulation response in a model of asthma, we showed firstly that the basophils were activated by double-stranded RNA poly(A:U) and that this stimulation exacerbated asthmatic responses in vivo. We then investigated the modulation of asthmatic responses using natural and synthetic ligands of TLR/il1r signaling pathway. The results showed that R848, a synthetic TLR7 agonist which promotes Th1 antiviral responses, and IL-33, which is known to favor Th2 responses, activated NKT cells whose rapid and modulated production of cytokines suggested that these cells might have a modulatory effect in asthma. We demonstrated that NKT cells have a regulatory function on development and activity of newly identified Th17 cells. Finally we described the protective and suppressive effects by R848 in the model of asthma and showed that suppression effects were dependent on regulatory T cells and the TGF-β

Hormis leurs actions sur les cellules hématopoïétiques médullaires, les colony-stimulating factors (C S F) jouent un rôle important dans les réponses immunitaires et inflammatoires. Dans ce travail, nous avons étudié la production du granulocyte-C S F (G-CSF) et du granulocyte-macrophage-CSF (GM-CSF) par les cellules inflammatoires/immunitaires et parenchymateuses pulmonaires, dans des situations physiologiques et pathologiques. Après avoir mis au point une méthode de dosage biologique spécifique du G-CSF, nous avons montré que les macrophages alvéolaires humains normaux produisent des quantités importantes de ce facteur en réponse à l'endotoxine in vitro. De plus, les cellules alvéolaires recueillies par lavage, provenant de sujets ayant une pneumopathie bactérienne secrètent spontanément du G-CSF en quantité notable, vraisemblablement du fait de leur exposition à l'endotoxine in vivo. Ces données suggèrent que ce facteur joue un rôle dans la régulation du nombre et de la fonction des polynucléaires neutrophiles dans le poumon au cours de processus infectieux. D'autre part, nous avons exploré le rôle du GM-CSF dans la distribution et l'état de différenciation de cellules essentielles à l'initiation des réponses immunitaires : les cellules dendritiques (CD) et les cellules de Langerhans (CL). A l'aide de techniques d'immunohistochimie et d'hybridation in situ, nous avons montré que le GM-CSF est produit par l'épithélium bronchiolaire normal, qui représente le seul site où l'on retrouve des CL. Dans les situations pathologiques qui s'accompagnent de l'accumulation d'un nombre important de CL dans le poumon (hyperplasie épithéliale alvéolaire, cancers bronchopulmonaires et histiocytose X pulmonaire), nous avons retrouvé une corrélation étroite entre la production de GM-CSF au sein de ces lésions et la présence ainsi que le nombre de CL infiltrant ces sites. L'ensemble de ces résultats suggère fortement que la synthèse locale de GM-CSF par certaines cellules pulmonaires normales ou pathologiques joue un rôle important dans la distribution et la différenciation des CD/CL dans le poumon humain.