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Dissertations / Theses on the topic 'Hématopoïèse'
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Tordjman, Rafaèle. "Interactions entre processus angiogéniques et hématopoïèse." Paris 7, 2000. http://www.theses.fr/2000PA077265.
Full textAbstract:
Le stroma médullaire participe à la régulation du devenir des cellules souches hématopoïétiques (CSH): la survie, l'autorenouvellement et l'engagement. Cette régulation est relayée par des protéines d'interaction cellulaire. Afin de caractériser ces protéines, nous avons développé une technique originale de piégeage de gènes qui codent pour des protéines transmembranaires ou sécrétées. Elle a été appliquée à la lignée stromale MS-5, capable de mimer les fonctions du stroma médullaire. Cette approche a permis d'identifier des gènes candidats: thrombospondine-l, entactine, neuropiline-l (Np-l). Ce travail a été particulièrement axé sur la Np-let ses ligands. La Np-1 est un récepteur qui participe au guidage axonal au cours de l'embryogenèse. Nous avons montré que la Np-l est exprimée à la surface des cellules du stroma médullaire et qu'elle est capable de lier deux ligands, la sémaphorine III et le VEGF (Vascular Endothelial Growth Factor). L'addition de VEGF sur les cellules stromales qui expriment la Np-l induit la synthèse de thrombopoïétine et de Flt3-Ligand, cytokines impliquées dans les étapes précoces de l'hématopoïèse. La Np-l pourrait ainsi relayer des actions entre cellules stromales et CSH. En recherchant la présence de ligands de la Np-1 dans les cellules hématopoïétiques, nous avons montré in vivo que les érythroblastes humains sont les seules cellules qui expriment à la fois le VEGF et un autre facteur angiogénique, le P1GF (Placenta Growth Factor). La sécrétion de ces deux protéines augmente au cours de la différenciation érythrocytaire. Les cellules endothéliales et les macrophages sont des cibles potentielles du VEGF et du PlGF érythrocytaires puisqu'ils expriment des récepteurs pour ces facteurs et sont au contact des érythroblastes dans la moelle. Le surnageant des érythroblastes est en effet capable de faire migrer les monocytes (précurseurs des macrophages) et les cellules endothéliales et d'induire une perméabilité vasculaire. Ces effets sont relayés par le VEGF et le PIGF. Ces deux facteurs sécrétés par les érythroblastes pourraient donc jouer un rôle: (i) dans la formation de l'îlot érythroblastique (unité de maturation des érythroblastes dans la moelle) par migration du macrophage vers les érythroblastes, (ii) dans les interactions entre cellules endothéliales et érythroblastes impliquées en particulier dans le passage des cellules érythroides vers la circulation. Le concept d'interaction entre processus hématopoïétiques et angiogénèse ouvre un champ de réflexion à la fois dans chacun de ces deux domaines mais également dans celui des hémopathies malignes.
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Makki, Rami. "Hématopoïèse et réponse immunitaire cellulaire chez Drosophila melanogaster." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/568/.
Full textAbstract:
La Drosophile possède un système immunitaire inné qui met en jeu deux types de réponse, une réponse humorale et une réponse cellulaire. Cette dernière fait appel aux cellules " sanguines " de la Drosophile appelées hémocytes. Les hémocytes sont formés au cours d'une vague embryonnaire et une vague larvaire d'hématopoïèse. Les mécanismes moléculaires contrôlant l'hématopoïèse embryonnaire sont bien décrits dans la littérature, alors que ceux contrôlant l'hématopoïèse larvaire sont peu connus. Au cours de ma thèse, je me suis intéressé aux mécanismes régulant l'hématopoïèse larvaire. (1) J'ai notamment participé à la caractérisation d'un sous ensemble de cellules jouant le rôle d'une " niche " hématopoïétique contrôlant la différenciation des hémocytes au cours de l'hématopoïèse larvaire (Krzemien et al. , 2007). (2) Je me suis également intéressé au rôle de la voie de signalisation JAK/STAT au cours de l'hématopoïèse larvaire. J'ai en particulier montré que Latran, une protéine présentant de l'homologie de séquence avec la famille des récepteurs aux cytokines de type I est nécessaire pour la réponse cellulaire au parasitisme et qu'elle agit comme un dominant négatif pouvant inhiber la voie de signalisation JAK/STAT. J'ai ainsi mis en évidence un nouveau mode de régulation de cette voie de signalisation. (3)Enfin, j'ai également initié des travaux visant à étudier le rôle de la voie de signalisation Toll/NFkappaB dans l'hématopoïèse larvaire. J'ai construit un mutant nul pour toll4, qui code pour un des récepteurs Toll, qui ne présente aucun défaut hématopoïétique laissant le rôle de la voie de signalisation Toll/NFkappaB dans l'hématopoïèse non élucidé<br>Drosophila possesses an innate immune system and the immune response is manifested in two main ways: the humoral and the cellular response. Hémocytes, the Drosophila "blood cells" are responsible of the cellular immune response. Haemocytes are formed during haematopoiesis that occurs in two separate phases: an embryonic and a larval one. The molecular mechanisms that control the embryonic haematopoiesis are well described in the literature, while the control of larval haematopoiesis remains largely unknown. During my PhD. I studied the molecular control of larval haematopoiesis. (1) I participated in the identification of a group of cells that plays the role of a haematopoietic "niche" controlling haemocytes differentiation. (2) I then studied the role of the JAK/STAT signalling pathway during larval haematopoiesis and I characterised a new type I cytokine receptor of Drosophila, called Latran. I showed that Latran is necessary for the cellular immune response to parasitisation and that it acts as a dominant negative to shut down the JAK/STAT signalling pathway. I have therefore identified a new type of regulation of this signalling pathway in vivo. (3) Eventually I initiated the study of the role of the Toll/NFkappaB signalling pathway in larval haematopoiesis by making and characterising a mutant of toll4, a gene coding for one of the Drosophila Toll receptors. But this mutant do not show any haematopoiesis defects. Further studies are consequently needed to describe the role of the Toll/NFkappaB pathway in larval haematopoiesis
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Reynaud, Damien. "Etude de la protéine SCL/TAL-1 au cours de l'hématopoi͏̈èse humaine : implication de ce facteur de transcription dans l'autorenouvellement des cellules souches hématopoi͏̈étiques humaines." Paris 5, 2004. http://www.theses.fr/2004PA05N031.
Full textAbstract:
La protéi͏̈ne SCL/TAL-1 est un facteur de transcription appartenant à la famille bHLH. Ce facteur est un régulateur clé de l'hématopoi͏̈èse. Lors de ce travail, nous avons étudié l'effet de l'expression ectopique de TAL-1 sur les potentialités hématopoi͏̈étiques des progéniteurs humains CD34+ issus de sang de cordon. Dans un premier temps, nous avons pu mettre en évidence diverses fonctions de TAL-1 sur les étapes initiales de la différenciation érythroi͏̈de générée "in vitro". Dans un second temps, nous démontrons que l'expressionde TAL-1 permet l'amplification des compartiments hématopoi͏̈étiques immatures détectés, "in vivo", lors d'expériences de transplantations xénogéniques, à long terme, chez des souris NOD-SCID. Dans ces conditions d' étude, nous avons en parallèle, analysé l' importance du domaine de liaison à l' ADN, pour les<br>SCL/TAL-1 protein belongs to the bHLH transcription factor family. This factor plays a key role in controlling the embryonic and adult hematopoiesis. In this work, we analysed the effect of enforced expression of TAL-1 on hematopoiectic potentials of human CD34+ umbilical cord blood progenitors. We show that TAL-1 is a positive regulator of human erythropoiesis, and part of this activity relies on its capacity to bind to DNA. In a second part, we show that enforced expression of TAL-1 amplifies immature human progenitors, revealed by long term xenogenic reconstitution into NOD-SCid mice. In these progenitors, the binding to DNA of TAL-1 is crucial, as shown by the expression of DNA binding mutated TAL-1 protein. Altogether, our results show a new role of bHLH TAL-1 protein in the regulation of the.
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Chou, David benson. "Stromales de moelle osseuse et hématopoïèse cours de l'inflammation." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077112.
Full textAbstract:
L’inflammation modifie l’hématopoïèse, souvent «m diminuant l'érythropoïèse et l’amélioration de la production myéloïde, Les mécanismes sous-jacents de ces changements et Ia façon dont le stroma de la moelle osseuse contribue à ce processus est un domaine de recherche actif. Dans cette étude, nous examinons ces questions dans le contexte de l'infection toxoplasma gondii murin. Nos données révèlent que T. Gondii infection provoque une cytopenie moelle osseuse avec le développement lymphoïde et érythroïde nettement diminué. La différenciation ancêtre primitif myeioerythroid ainsi que les étapes ultérieures de l'hématopoïèse sont affectés par le processus inflammatoire d'une manière indépendante des microbes commensaux. Il6, mais pas IFN gamma, TNF et IL1, est largement responsable pour le bloc en amont dans l'érythropoièse et myélopoïèse améliorée. En comparant la moelle osseuse avec la rate ont montré que la réponse hémaiopoïtique a été tirée par le micrœnvironnement local et chimères de moelle osseuse ont démomtré que les cellules radiorésistantes étaient la source pertinent de IL-6 in vivo. Enfin, isoler VCAM+CD1461o moelle osseuse fibroblastes stromales ex vivo ont montré qu' ils répondenet à l'infection en augmentant significattvement la production d'IL6. Ces données suggèrent que les cellules stromales de moelle osseuses réglementent les changements hématopoïétiques cours de l'inflammation par l'intermédiaire d'IL6<br>Inflammation alters hematopoiesis, often by decreasing erythropoiesis and-enhancing myeloid output. The mechanisms behind these changes and how the bone marrow stroma contributes to this process is an active area of research. In this study, we examine thèse questions in the setting of murlne Toxoplasma gondii infection. Our data reveal that T. Gondii infection causes bone marrow cytopenia with markedly decreased lymphoid and erythroid development. Both early myeloerythroid progenitor differentiation» as well as the Iater stagesof hematopoiesis are affected by the inflammatory process in a manner independent of commensal microbes. IL6, but not IFN gamma,TNF, and ILs, is largely responsible for the upstream block in erythropoiesis and enhanced myelopoiesis. Comparing the bone marrow wilth the spleen showed that the hematopoïetic response was driven by the local microenvironment and bone marrow chimeras demonstrated that radioresistant cells were the relevant source b of lL-6 in vivo. Finally, isolating VCAM+ CD146lo bone marrow stromal fibrobiasts ex vivo showed that they respond to infection by significantly inreasing IÏL6 production. These data suggest that bone marrow stromal cells regulate the hematopoietic changes during inflammation via IL-6
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Rouault-Pierre, Kevin. "Rôle des facteurs de transcription HIF (Hypoxia Inducible Factor) dans le maintien à long terme des cellules souches hématopoïétiques humaines chez la souris immunodéficiente." Thesis, Bordeaux 2, 2010. http://www.theses.fr/2010BOR21758/document.
Full textAbstract:
Le taux physiologique d’oxygène est finement régulé dans les tissus des mammifères, l’oxygénation diffère d’un tissu à l’autre, ainsi qu’au sein même de ces derniers, ce phénomène est en grande partie dû à l’architecture vasculaire. L’oxygène est un stimulus clef dans la destinée des cellules durant l’embryogenèse et la progression tumorale. Il est actuellement reconnu que les cellules souches se distribuent en suivant un gradient d’oxygène, où les faibles concentrations en oxygène (Hypoxie) favorisent la conservation d’un état indifférencié. Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) résident dans des niches osseuses où la disponibilité en oxygène est limitée voir nulle. Le modèle de l’hématopoïèse a été largement décrit au niveau cellulaire et moléculaire et est un des principaux modèles utilisé dans l’étude des mécanismes gouvernant le caractère souche d’une cellule. Des études récentes révèlent dans des modèles murins que les facteurs de transcriptions induits par l’hypoxie (HIF) affectent le comportement des cellules souches hématopoïétiques. Ici, nous étudions le rôle potentiel des facteurs HIF-1α et HIF-2α dans les CSH Humaines. Le knockdown des deux facteurs a été obtenu en combinant une stratégie de short-hairpin RNA et de vecteurs de transferts lentiviraux. La transduction de cellules de sang de cordon CD34-positive révèle que les deux knockdowns affectent à court terme la croissance des progéniteurs et CSH et à long terme leurs capacités de reconstitution dans des souris immuno-déficientes NOD/LtSz-scid IL2rgnull. Cependant, nous observons un effet plus délétère de HIF-2α sur le maintien des cellules souches en comparaison à HIF-1α<br>Physiological oxygen level is tightly regulated in mammalian tissues. Moreover, oxygenation differs from one tissue to the other, as well as within a single tissue, due to vasculature modeling. Oxygen levels have been shown to be a key stimulus of cell fate during embryogenesis and cancer progression. It is now widely admitted that stem cells fate followes oxygen gradients with low levels (hypoxia) promoting an undifferentiated state. Hematopoietic stem cells (HSC) reside in bone marrow niches in which oxygen availability is low, even absent. Hypoxia-inducible factors (HIF) are the main factors regulating the cell-response to oxygen variation. Studies on mouse models reveal that HIFs affect HSC activity. Here, we investigate the potential function of HIF-1α and HIF-2α within human HSCs. Knockdown of both factors was obtained by lentivirus-mediated short-hairpin RNA strategy. Transductions of CD34-positive cord blood cells reveal that HIF-2α knockdown affects myelo-erythroid differentiation. Both HIF-α are required for long-term reconstitution in immune-deficient NOD/LtSz-scid IL2rγnull mice, whereas a more pronounced deficiency was observed for HIF-2α. Overall, our data strongly suggest the existence of multiple but preponderant functions in human stem cell maintenance and differentiation
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Han, Zhong Chao. "Étude in vitro de la mégacaryocytopoi͏̈ése normale et pathologique : apport pour la compréhension de l'hématopoi͏̈èse humaine." Brest, 1988. http://www.theses.fr/1988BRES2003.
Full text
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Poglio, Sandrine. "Le tissu adipeux : un nouveau site hématopoïétique ?" Toulouse 3, 2009. http://www.theses.fr/2009TOU30259.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est un processus primordial qui permet de générer en continu les cellules matures du sang tout au long de la vie d'un individu. Chez l'homme adulte, comme chez les rongeurs, la moelle osseuse (MO) a jusqu'à présent été considérée comme le tissu hématopoïétique de référence. Le tissu adipeux (TA) présente de nombreuses similitudes avec la MO qui nous ont amenés à émettre l'hypothèse selon laquelle le TA pourrait être un tissu hématopoïétique. Pour étudier le potentiel hématopoïétique d'une population cellulaire, le modèle de référence in vivo est l'irradiation suivie de la greffe de cellules. Dans un premier temps, nous nous sommes assurés que dans le TA, l'irradiation provoque comme dans la MO, une altération du compartiment hématopoïétique. Dans un second temps, nous avons analysé et caractérisé le compartiment hématopoïétique immature du TA chez la souris, qui, de façon surprenante, contient une proportion importante de cellules dont le phénotype est identique à celui des cellules souches hématopoïétiques (CSH) de moelle osseuse. Les CSH-like du TA sont fonctionnelles et présentent deux particularités étonnantes: (1) les cellules matures qui en dérivent sont uniquement des mastocytes, et (2) ces CSH-like ne semblent pas avoir migré de la MO, ce qui suggère que le tissu adipeux pourrait générer lui-même ses propres cellules hématopoïétiques. Nos résultats permettent de proposer que le tissu adipeux ne soit plus uniquement un tissu de remplissage inerte, mais un tissu dynamique constituant une source de cellules hématopoïétiques immatures majeure<br>Hematopoiesis is a physiological process allowing the replacement of blood cells throughout life. In humans, as in rodents, bone marrow (BM) is considered as the standard hematopoietic tissue. Adipose tissue (AT) exhibits numerous similarities with BM what have led us to propose that AT could function as an hematopoietic tissue. To study the hematopoietic potential of cell population in mice, the standard model is irradiation followed by BM cell transplantation. First, we demonstrated that irradiation induces a decrease in hematopoietic population in AT as in BM. Secondly, we analyzed and characterized the immature hematopoietic compartment of mouse AT, which surprisingly contains a very important proportion of cells, with the same phenotype than BM derived HSC. These cells are functional and present 2 striking features: (1) In our conditions, they differentiate only into mast cells, (2) they do not seem to migrate from the BM, suggesting that AT may be able to generate these hematopoietic cells by itself. Our results demonstrate that AT is not only an inert tissue able to store and release energy, but a dynamic tissue that could be a major source of immature hematopoietic cells. The identification of such cells in human AT would be of interest in cell therapy
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Benmimoun, Billel. "Le contrôle micro-environmental de l'homéostasie du système sanguin de la larve de drosophile." Toulouse 3, 2014. http://thesesups.ups-tlse.fr/3439/.
Full textAbstract:
L'homéostasie du système sanguin est préservée grâce à une régulation très fine de la balance entre le maintien et la différenciation des cellules souches hématopoïétiques et de leurs descendances. Cet équilibre est régulé par une relation complexe de signaux intrinsèques (cellulaires autonomes) issus de la cellule elle-même et de signaux extrinsèques (cellulaires non-autonomes) issus des cellules voisines (microenvironnement) et de l'environnement (tels que les conditions nutritionnelles ou la présence de pathogènes). La dérégulation de l'équilibre du système hématopoïétique est à l'origine de nombreuses pathologies chez l'homme dont des leucémies. Au cours de ma thèse, je me suis attaché à décrypter et à comprendre dans quelle mesure et par quels mécanismes ces facteurs extrinsèques du microenvironnement et de l'environnement influencent le destin des précurseurs hématopoïétiques et l'homéostasie du système sanguin. Je me suis plus précisément concentré sur l'impact de la nutrition et la voie de signalisation Insuline/TOR ainsi que sur le rôle d'un microenvironnement spécialisé appelé " la niche hématopoïétique " dans le maintien indifférencié des progéniteurs sanguins de la larve de Drosophile. Différents aspects du développement des cellules sanguines sont conservés de la Drosophile aux mammifères aussi bien d'un point de vue ontogénique et fonctionnel que par l'implication de régulateurs transcriptionnels et voies de signalisations similaires. Plus particulièrement, l'organe hématopoïétique de la larve de Drosophile appelé " glande lymphatique ", qui contient à la fois des progéniteurs sanguins et leurs descendances, s'est illustré comme un excellent modèle pour décrypter les bases moléculaires et les mécanismes intra et extracellulaires qui contrôlent le destin des cellules hématopoïétiques et ainsi l'équilibre du système sanguin. Dans cet organe, les progéniteurs hématopoïétiques, appelés également prohémocytes, forment la Zone Médullaire et se différencient dans la Zone Corticale. La glande lymphatique présente également une troisième zone appelée Centre de Signalisation Postérieur (PSC) exprimant le facteur de transcription de type EBF/Collier et proposée comme niche hématopoïétique. Mon premier projet de thèse consistait à étudier l'impact de la nutrition et de la voie de signalisation Insuline/TOR dans le contrôle de l'homéostasie de la glande lymphatique. En effet, adapter le développement et l'homéostasie des tissus aux conditions nutritionnelles et au stress métabolique représente un enjeu majeur pour chaque organisme. Par des expériences de perte et de gain de fonction dirigées, nous avons montré que la voie de signalisation Insuline/TOR contrôle l'homéostasie de la glande lymphatique en agissant à la fois sur la croissance du PSC et de manière cellulaire autonome sur le destin des précurseurs hématopoïétiques. De plus, les expériences de carence nutritionnelle mettent en évidence un contrôle nutritionnel du devenir des progéniteurs sanguins. Ainsi, nous avons montré pour la première fois que la signalisation Insuline/TOR relie le maintien de l'homéostasie du système sanguin aux conditions nutritionnelles de la larve de Drosophile. Mon deuxième projet de thèse consistait à étudier le rôle du PSC (microenvironnement) proposé comme niche hématopoïétique dans le maintien de l'homéostasie de la glande lymphatique. En effet, les communications dynamiques entre les cellules souches et leurs microenvironnements jouent un rôle crucial dans le maintien de l'homéostasie des tissus. Par l'ablation génétique du PSC, nos résultats montrent clairement que le PSC n'est pas requis pour le maintien de l'état indifférencié des progéniteurs hématopoïétiques. De plus, l'inhibition ciblée du facteur de transcription Collier/EBF dans les progéniteurs hématopoïétiques est suffisante pour induire leur différenciation précoce. Ainsi, nos résultats suggèrent un nouveau modèle de régulation du système hématopoïétique de la larve de Drosophile ; indépendant du PSC mais qui fait appel à une fonction cellulaire autonome de Collier/EBF dans les progéniteurs sanguins<br>The homeostasis of the haematopoietic system is maintained through a very fine control of the balance between the maintenance and the differentiation of haematopoietic stem cells and their progeny. This balance is regulated by a complex relationship of intrinsic signals (cell autonomous factors) provided by the cell itself and extrinsic signals (non cell autonomous factors) arising from neighbouring cells (microenvironment) and environmental cues (e. G. Nutrition or infection by pathogen) The deregulation of blood system homeostasis causes many human diseases including leukaemia. During my PhD, I tried to decipher by which mechanisms these extrinsic signals impact on haematopoietic progenitor fate and blood system homeostasis. I focused on the impact of nutrition and the role of the Insulin/TOR signalling pathway as well as on the role of a specialized microenvironment called the haematopoietic niche on the maintenance of Drosophila larval blood progenitors. Different aspects of blood cell development are conserved from Drosophila to mammals including ontogenic and functional conservation as well as involvement of similar transcriptional regulators and signalling pathways. More particularly, the Drosophila larval haematopoietic organ called " lymph gland ", which contains both blood progenitors and their progeny, has emerged as an excellent model to decipher the molecular basis and the intra/extracellular mechanisms that control blood cell fate and blood system homeostasis. In this organ, hematopoietic progenitors, also called prohaemocytes form the Medullary Zone and differentiate in a peripheral area called the Cortical Zone. The lymph gland presents also a third cluster of cells, called the Posterior Signalling Centre (PSC), expressing the transcription factor EBF/Collier and proposed to act as a haematopoietic niche. My first project was to investigate the impact of nutrition and the role of the Insulin/TOR signalling pathway on the control of lymph gland homeostasis. In fact, adapting development and tissue homeostasis to nutritional conditions and metabolic stress is a major challenge for every organism. Using site-directed loss- and gain-of-function analysis, we demonstrated that Insulin/TOR signalling controls lymph gland homeostasis by acting both on PSC growth and cell-autonomously on blood cell progenitor fate. Moreover, starvation experiments highlighted the nutritional control of hematopoietic progenitor maintenance. Thereby, we showed for the first time that Insulin/TOR signalling pathway connects blood system homeostasis to the Drosophila larval nutritional conditions. In my second project, I reinvestigated the role of the PSC (microenvironment), which was proposed to act as hematopoietic niche required for prohemocyte maintenance. Indeed, the dynamic communication between stem cells and their microenvironment plays a crucial role in maintaining tissue homeostasis. In contrast with the prevailing model, our genetic ablation experiments clearly demonstrate that the PSC is not required for Drosophila haematopoietic progenitor maintenance. Moreover, the targeted inhibition of the transcription factor Collier/EBF in the progenitor population is sufficient to cause their precocious differentiation. Thereby, we propose a new model of Drosophila haematopoietic progenitor maintenance, which is independent of the PSC but relies on the cell-autonomous function of the transcription factor EBF/Collier in these cells
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Rezzoug, Francine. "Effet d'un immunomodulateur, le RU 41740 (Biostim®) sur la reconstitution hématopoiétique de souris immunodéprimées." Lyon 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LYO1T229.
Full text
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Parent-Massin, Dominique. "Intérêt des cultures de progéniteurs hématoroiétiques en toxicologie." Brest, 1995. http://www.theses.fr/1995BRES2003.
Full textAbstract:
L'exploration de la myelotoxicite au cours de l'evaluation toxicologique d'une molecule a court et moyen termes est actuellement relativement limitee. L'objet de ce travail a donc ete de mettre au point des tests d'evaluation in vitro de la toxicite de xenobiotiques sur des cultures de progeniteurs hematopoietiques et d'envisager leur utilisation dans differents domaines. Le document presente se divise en quatre parties: le premier expose la physiologie de l'hematopoiese, sa regulation et les pathologies hematologiques d'origine toxique. Le second chapitre resume les etapes grace auxquelles la mise au point d'un test fiable, reproductible, specifique et peu onereux a pu etre realisee. Ce test a ete mis au point sur des cellules d'origine humaine et sur des cellules de rat afin de pouvoir effectuer des comparaisons inter-especes. La troisieme partie presente, sous forme de publications internationales, les differents travaux realises a l'aide du test mis au point sur les progeniteurs granulo-monocytaires, pour evaluer la myelotoxicite de medicaments (1 publication), de pesticides (2 publications), d'additifs alimentaires (1 publication), de mycotoxines (2 publications). Pour certains de ces travaux, des cultures d'hepatocytes completent les etudes realises sur les progeniteurs hematopoietiques. Au cours de la periode pendant lquelle s'est deroulee cette partie du travail presente, l'avenement d'une nouvelle source de progeniteurs hematopoietiques d'origine humaine, le sang de cordon ombilical, dont l'utilisation ne pose pas de probleme ethique majeur, a permis d'elargir l'interet de ce test. En conclusion, dans le quatrieme chapitre, le role et la place de la myelotoxicite et de son evaluation in vitro dans le contexte actuel, plus particulierement en toxicite alimentaire, sont discutes
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Meunier, Caroline. "Clonage d'une nouvelle famille de protéines interagissant avec le récepteur de la TPO, Mpl." Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05S014.
Full textAbstract:
La thrombopoi͏̈étine (ou TPO) est la principale cytokine nécessaire à la différenciation et à la formation des plaquettes au cours de la mégacaryopoi͏̈èse. Son récepteur Mpl est capable, après liaison de la TPO, d'activer un grand nombre de voies de signalisation comme la voie Jak/STAT, PI-3kinase ou Ras/Mapk. Bien que de nombreuses études aient été menées pour étudier les protéines impliquées dans la formation des mégacaryocytes et la production des plaquettes, les mécanismes précis ne sont pas encore connus aujourd'hui. Pour cela, nous avons décidé de cloner de nouveaux partenaires de Mpl par la technique du double-hybride en levure. . .<br>Thrombopoi͏̈etin is the most important cytokine for megacaryocitic differenciation and platelets formation during megacaryopoi͏̈esis. It's receptor Mpl, is able to, after TPO binding, activate a lot of signalisation pathways like Jak/STAT pathway, PI-3kinase and Ras/MAPK. Although there's a lot of stusies on proteins implicated in megacaryocytes formation and platelets formation, precises mecanisms utilised during megecaryopoi͏̈esis are not yet known. . .
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Goardon, Nicolas. "Fonctions et modes d'action de TAL-1 dans l' hématopoïèse et la leucémogenèse T." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077024.
Full text
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Rolland, Laetitia. "De l'identification d'une population restreinte à la lignée T à l'analyse cellulaire et moléculaire de l'engagement vers la lignée T." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05A002.
Full textAbstract:
Nous avons isolé au sein de la rate de souris non manipulées une population restreinte à la lignée T de phénotype Lin- Thy1. 2+ CD25+ c-kitlo. Elle est générée in situ dans la rate à partir de progéniteurs multipotents et s'y accumule en présence de l'interleukine-7 et préférentiellement en absence de cellules T matures et/ou d'un thymus. Ainsi, la rate est un environnement favorable à l'engagement vers la lignée T. Cette population splénique semble constituer une réserve de précurseurs T, qui peuvent être mobilisés en cas d'immunodéficience. La mise au point d'une RT-PCR multiplex nous a permis d'étudier l'expression d'une quinzaine de gènes impliqués dans l'hématopoïèse au niveau unicellulaire au sein de plusieurs populations hématopoïetiques. Le niveau d'expression de certains gènes semble être déterminant pour l'engagement vers la lignée T. Nous souhaitons poursuivre cette analyse pour mettre en évidence les mécanismes moléculaires de l'engagement vers la lignée T<br>We have isolated a T-cell restricted population Lin- Thy1. 2+ CD25+ c-kitlo from the spleen of unmanipulated mice. It is generated in situ in the spleen from multipotent progenitors and accumulates there in the presence of interleukin-7 and preferentially in the absence of mature T cells and/or a thymus. Thus, the spleen is a favorable environment for T-cell commitment. This splenic population seems to be a stock of T-cell precursors that could be mobilized in case of immunodeficiency. The optimization of a RT-PCR multiplex allowed us to study the expression of 15 genes implicated in hematopoiesis at single cell level in several hematopoietic populations. The expression level of some genes seems to be determinant for T-cell commitment. We want to pursue this analysis to establish molecular mechanims of T-cell commitment
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Corre, Jill. "Précurseurs adipocytaires et adipocytes humains d’origine médullaire et sous-cutanée : rôle dans l’hématopoïèse." Toulouse 3, 2006. http://www.theses.fr/2006TOU30129.
Full textAbstract:
La régulation de l’hématopoïèse est sous la dépendance d’un microenvironnement stromal. Peu de travaux ont porté sur les adipocytes médullaires, qui représentent pourtant la population cellulaire non hématopoïétique la plus abondante de la moelle osseuse chez l’homme adulte normal. Longtemps considérés comme un simple élément de remplissage, les adipocytes médullaires semblent pourtant jouer un rôle dans l’hématopoïèse, essentiellement par le biais d’une sécrétion de protéines de matrice, de cytokines et de facteurs de croissance. Grâce à un système de co-culture de progéniteurs hématopoïétiques CD34+ ensemencées sur un stroma adhérent constitué d’adipocytes, nous montrons que les adipocytes médullaires, comme leurs précurseurs les cellules souches mésenchymateuses, sont capables de supporter la différenciation complète myéloïde et lymphoïde B. Ces résultats confirment que les adipocytes médullaires sont impliqués de manière active dans la régulation de l’hématopoïèse. Au cours de ces dernières années, le statut du tissu adipeux blanc sous-cutané a évolué : il n’est plus considéré comme un simple réservoir énergétique, mais comme un tissu sécrétoire impliqué dans les grandes régulations hormonales de l’organisme. Le tissu adipeux blanc, doué d’une grande plasticité, possède un compartiment de cellules souches de type mésenchymateux appelées ADSC, suscitant un intérêt considérable pour leur potentiel thérapeutique. Ces adipocytes non médullaires secrètent également des cytokines et des facteurs de croissance susceptibles de participer à l’hématopoïèse. Des travaux réalisés dans le laboratoire ont montré que l'injection de cellules dérivées des tissus adipeux permettait de reconstituer l'hématopoïèse de souris irradiées. Avec le même système de co-culture, nous démontrons ici la capacité de soutien hématopoïétique des adipocytes sous-cutanés et de leurs précurseurs, les ADSC. Ces données originales complètent la caractérisation des composants des tissus adipeux et soulèvent des hypothèses sur l'éventuelle contribution des dépôts adipeux à l'homéostasie hématopoïétique.
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Hérault, Olivier. "Etude fonctionnelle et phénotypique des effets de l'acide tout-trans rétinoi͏̈que sur les cellules CD34+ médullaires humaines." Tours, 1999. http://www.theses.fr/1999TOUR3312.
Full textAbstract:
Les rétinoi͏̈des sont bien connus en hématologie comme agents différenciants agissant à des niveaux assez matures de la cascade hématopoi͏̈étique. Ils forcent la différenciation in vitro de bon nombre de lignées cellulaires matures, et constituent le traitement de référence des leucémies aigue͏̈s promyélocytaires. A l'inverse, il existe très peu d'informations concernant les effets de ces rétinoi͏̈des à des stades plus immatures de l'hématopoi͏̈èse humaine adulte normale. L'objectif de cette thèse a donc été de caractériser les modifications phénotypiques et fonctionnelles des cellules CD34+ médullaires adultes, induites par des doses pharmacologiques d'acide tout-trans rétinoi͏̈que (ATRA), le plus actif des rétinoi͏̈des. Nous avons caractérisé la morphologie cellulaire, le phénotype membranaire, la capacité clonogénique, le cycle cellulaire et le taux d'apoptose des cellules CD34+ avant et après exposition à l'ATRA. La qualité de l'ATRA utilisé a été vérifié en étudiant ses effets sur une cible bien caractérisée, la lignée HL-60 et nous avons développé une méthode cytofluorométrique originale de mise en évidence de l'apoptose dans une sous-population cellulaire utilisant un seul laser.
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Paggetti, Jérôme. "Etude du rôle de l'histone acétyltransférase MOZ dans l'hématopoïèse et la leucémogenèse." Dijon, 2009. http://www.theses.fr/2009DIJOS014.
Full textAbstract:
Ma thèse a porté sur l'étude du rôle de l'histone acétyltransférase MOZ (monocytic leukaemia zinc finger protein) dans l'hématopoïèse et la leucémogenèse. Le gène MOZ est impliqué dans plusieurs translocations chromosomiques retrouvées dans des leucémies aiguës myéloïdes (LAM). Nous avons étudié l’interaction potentielle entre MOZ et MLL (mixed lineage leukemia), une histone méthyltransférase dont le gène est très fréquemment réarrangé dans les leucémies aiguës humaines. Nous avons montré que MOZ et MLL interagissent au sein d’un même complexe protéique et coopèrent afin d’activer la transcription de certains gènes HOX dans une population cellulaire humaine (CD34+) très enrichie en cellules souches hématopoïétiques (CSH). Les gènes HOX codent des facteurs de transcription indispensables à l’embryogenèse et à l’hématopoïèse (en particulier pour l’auto-renouvellement des CSH), et impliqués dans la leucémogenèse. Afin d’étudier précisément le rôle de MOZ dans l’hématopoïèse murine, nous avons généré des souris déficientes pour Moz uniquement dans les cellules hématopoïétiques. Ces souris sont viables mais présentent des anomalies de l’hématopoïèse en particulier au niveau des progéniteurs hématopoïétiques et des CSH. MOZ est donc impliquée dans la régulation de l’hématopoïèse murine post-natale. Concernant la leucémogenèse associée à MOZ, nous avons généré des poissons-zèbres transgéniques exprimant une protéine de fusion de MOZ humaine (MOZ-TIF2). Ces poissons développent une LAM démontrant ainsi le très grand pouvoir leucémogène de cette protéine chimérique. Ces poissons constituent le premier modèle de LAM chez le poisson-zèbre<br>My thesis concerns the study of the role of the histone acetyltransferase MOZ (monocytic leukaemia zinc finger protein) in haematopoiesis and leukaemogenesis. MOZ gene is implicated in several chromosomal translocations found in acute myeloid leukaemia (AML). We studied the potential interaction between MOZ and MLL (mixed lineage leukemia), a histone methyltransferase whose gene is frequently translocated in human acute leukaemia. We showed that MOZ and MLL interact within a same complex and cooperate to activate transcription of HOX genes in a human cell population (CD34+) very enriched in haematopoietic stem cells (HSCs). HOX genes encode transcription factors essential for embryogenesis and haematopoiesis (particularly in HSCs self-renewal), and are involved in leukaemogenesis. To study precisely the role of MOZ in murine haematopoiesis, we generated deficient mice for Moz only in haematopoietic cells. These mice are viable but display abnormalities in haematopoiesis, in particular regarding haematopoietic progenitors and HSCs. Hence, MOZ is implicated in the regulation of adult murine haematopoiesis. Regarding leukaemogenesis associated with MOZ, we generated transgenic zebrafishes expressing a human MOZ fusion protein (MOZ-TIF2). Some fishes develop an AML, thus demonstrating the important leukaemogenic power of this chimeric protein. These fishes represent the first model of AML in zebrafish
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Pereira, de Sousa Ana Patricia. "Regulation of early lymphoid development." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066246.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse se caractérise par une perte séquentielle de la multi-potence conduisant à la différenciation des cellules dans un lignage particulier. À chaque étape du développement, des gènes sont activés ou inactivés, conduisant à la perte définitive de potentiels de différenciations spécifiant ainsi les cellules dans une voie unique de différenciation. L'identification des stades intermédiaires est d'une grande importance pour la compréhension des mécanismes moléculaires impliqués durant l'hématopoïèse. Il existe deux organes majeurs de l'hématopoïèse : le foie fœtal où se différencie la majorité des cellules sanguines durant la vie embryonnaire et la moelle osseuse chez l'adulte. Nous complétons le concept de la restriction lymphoïde en incluant des signaux spécifiques issus de l'environnement du foie fœtal et de la moelle osseuse. Ils régulent et inhibent le développement des cellules T en dehors du thymus. Durant cette étude, nous avons démontré que les cellules restreintes au lignage lymphoïde passent par un stade intermédiaire, caractérisé par la perte d'expression du Flk2 associé à une perte du potentiel de différenciation dans la voie T. Nous avons mis en lumière des éléments du mécanisme moléculaire associés à la régulation de la transcription qui permet la restriction des cellules au lignage lymphoïde. Par ailleurs, la perte d'expression du Flk2 par le progéniteur lymphoïde commun (CLP) engendre une étape de restriction dans la voie de différenciation ce qui conduit à la répression de Notch1 et perte du potentiel T. En effet, le CLPFlk2- garde un potentiel de différenciation B et NK et co-exprime des gènes de la voie de différenciation B et NK tels que EBF1, Pax5 et Id2
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Su, Xinying. "Etude structurelle des translocations t(5;14)(q35;q32) des leucémies aiguës lymphoblastiques de type T." Paris 7, 2005. http://www.theses.fr/2005PA077122.
Full text
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Zaldumbide, Arnaud. "Implication du facteur de transcription Ets-2 dans les phénomènes anti-apoptiques et dans la maturation des cellules T." Nice, 2003. http://www.theses.fr/2003NICE4022.
Full textAbstract:
La famille des facteurs de transcription de la famille ETS comporte aujourd'hui plus de 30 membres qui sont impliqués dans de nombreux processus du développement dont l'hématopoi͏̈èse, l'angiogenese, et la vasculogenese. Outre leur rôle dans les mécanismes de prolifération et de différenciation cellulaire, de nombreuse études suggèrent que les membres de la famille ETS interviennent aussi dans la survie des cellules. Les facteurs ETS sont définis par la présence d'un domaine d'environs 85 acides aminés appelé domaine ETS qui est responsable de leur interaction avec l'ADN et de leur localisation nucléaire. Mes travaux principaux ont consisté en l'étude du facteur de transcription ETS2, un des membres de cette grande famille ETS, dans les phénomènes anti-apoptotiques et dans les phénomènes de maturation des cellules T. Durant mon travail de thèse, j'ai tout d'abord participé à la détermination de l'effet combiné de ETS2 et PU. 1, un autre membre de la famille ETS, sur le promoteur bclx. Nous avons ainsi montré que ces deux facteurs étaient capable d'avoir une activité synergique pour activer le promoteur bclx et que d'autre part l'expression exogène de ces deux facteurs dans des macrophages augmente la viabilité des cellules soumises à des privations de CSF-1. J'ai également pu caractériser l'implication du facteur ETS2 dans la maturation, la prolifération et la survie des cellules T, grâce à la construction de souris transgènique exprimant de manière spécifique dans le thymus le facteur ETS2 ou une forme dominante négative Dets2 (délèté du domaine transactivateur). En conclusion, le but de ce travail de thèse a été d'étudier le rôle essentiel du facteur de transcription ETS2 dans des phénomènes aussi variés que la différentiation, la maturation, la prolifération et la résistance à l'apoptose<br>The Ets family consists of a large number of transcription factors related by a conserved DNA binding domain. During my PhD, I focused on the Ets2 transcription factor and I tried to determinate its ability to transactivate the bcl-x promoter and its role in the proliferation, maturation and survival of mouse thymocytes. We previously showed that the Ets2 transcription factor is able to transactivate the bcl-x promoter (Sevilla 1998). On another hand, we established that depriving primary bone marrow-derived macrophages of colony stimulating factor 1 (CSF-1) induces programmed cell death by apoptosis. Furthermore, upon CSF-1 stimulation, we observed a clear up-regulation of the anti-apoptotic protein Bcl-XL in macrophages, up-regulation correlated with the expression of the two Ets transcription factors Ets2 and PU. 1. Transactivation studies using Ets2 and PU. 1 showed a synergistic effect of these two factors on the Bcl-x promoter. Moreover this synergistic effect, which requires the transactivation domain of both Ets2 and PU. 1, permits survival of macrophages. In the same time, I investigated the implication of Ets2 in T-cells maturation process on transgenic mice expressing Ets2 or a dominant negative form ∆ets2, specifically in the thymus. I showed that : (i) T cells from adult ets2 transgenic mice proliferate faster than their wild-type littermates upon or not apoptotic signals ; (ii) T cells from ets2 transgenic mice survive better than T-cells controls ; (iii) the maturation of young ∆ets2 transgenic mice seems to be affected at the DN(CD4-/CD8-) DP(CD4+/CD8+) transition
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Touche, Nadège. "Localisation sub-cellulaire des facteurs de transcription STAT5a et b et implication au cours de l'hématopoïèse maligne." Nancy 1, 2004. http://www.theses.fr/2004NAN11301.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcription STAT5a et STAT5b (Signal Transducer and Activator of Transcription) sont impliqués dans la régulation de la prolifération, de la différenciation et/ou de la résistance à l'apoptose, dans les cellules hématopoïétiques, via leur activation par un large panel de cytokines. En outre les protéines ST A T5 sont la cible de nombreuses tyrosines kinases oncogéniques associées à des désordres myéloprolifératifs. En particulier l'activation constitutive de la protéine ST AT5b a été mise en évidence dans la lignée érythroleucémique K562 et des études ont montré le rôle central joué par ST A T5 dans la leucémogenèse induite par la protéine de fusion BCR-ABL responsable de la genèse de la LMC. D'autre part on il existe une activation constitutive des facteurs ST A T5 dans une proportion de LAM allant jusqu'à 80%. Durant ce travail de thèse, nous avons entrepris une étude de la distribution sub-cellulaire des facteurs de transcription ST A T5a et b dans les cellules blastiques de 70 patients (majoritairement des LAM) par une méthode immunocytochimique. Nous avons mis en évidence l'existence d'une localisation nucléolaire des formes r3 tronquées en C-terminal des protéines ST A T5 restreinte aux LAM5 et aux LMC et retrouvée dans les cellules de la lignée K562. D'autre part nous avons montré que cette localisation n'était pas le fait d'une activation par l'oncoprotéine de fusion BCR-ABL, et qu'elle n'était pas affectée par une inhibition de la dégradation protéique dépendante du protéosome. Il s'agit, à notre connaissance, de la première description d'une localisation nucléolaire d'une protéine de la famille ST AT. Celle-ci étant restreinte aux LAM5 et aux LMC, on peut supposé qu'elle puisse prendre part au phénotype leucémique.
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Miller, Marion. "Caractérisation du rôle et du mode d'action de MLF au cours de l'hématopoïèse chez la drosophile." Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30282/document.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est le processus développemental qui permet la formation des cellules qui composent le sang. Au niveau moléculaire, de nombreux facteurs de transcription permettent une régulation fine de ce processus et la dérégulation de leur activité, en affectant la différenciation ou la prolifération des cellules sanguines, peut conduire à l'apparition d'hémopathies telles que les leucémies. De manière intéressante, de nombreux gènes contrôlant l'hématopoïèse sont conservés entre la Drosophile et l'homme. Ces dernières années, cet insecte a donc émergé en tant que modèle pour l'étude du développement normal et pathologique des cellules hématopoïétiques. En tirant profit de cette conservation, mon travail de thèse a visé à caractériser, chez la Drosophile, le rôle et le mode d'action des protéines de la famille " Myeloid Leukemia Factor " (MLF). En effet, bien que le membre fondateur de cette famille soit impliqué dans le développement de Leucémies Aigües Myéloïdes chez l'homme, ces protéines restent très peu caractérisés. Les travaux réalisés dans l'équipe montrent que MLF contrôle l'homéostasie du système sanguin de la Drosophile, et qu'un aspect conservé de la fonction des protéines MLF est de réguler l'activité de facteurs de transcription de type RUNX dont Lozenge (LZ). Dans ce contexte, j'ai cherché à déterminer plus précisément la fonction de MLF dans l'hématopoïèse et à comprendre comment MLF régule les facteurs RUNX. In vivo, j'ai montré que MLF contrôle non seulement le nombre de cellules sanguines RUNX+/LZ+ mais aussi leur différenciation en "cellules à cristaux". L'établissement par RNAseq du transcriptome de ces cellules en contexte sauvage ou mutant pour mlf m'a permis d'identifier de nouveaux marqueurs de ce lignage et de montrer que mlf régule l'expression de nombre d'entre eux. De plus j'ai mis en évidence que ces deux aspects de la fonction de mlf passent par la régulation de LZ. Ainsi, bien que lz soit nécessaire au développement des cellules à cristaux, une diminution de son expression s'accompagne d'une augmentation du nombre de ces cellules qui présentent alors des caractéristiques " hyper-différenciées " et une sur-activation de la voie de signalisation Notch. Ces données mettent en exergue l'importance de la régulation du niveau du facteur RUNX LZ par MLF au cours de l'hématopoïèse. D'autre part, en utilisant une lignée de cellules sanguines de Drosophile en culture (cellules Kc167), j'ai pu montrer que MLF régule post-traductionnellement le niveau de LZ et que MLF et LZ interagissent physiquement. Pour ouvrir de nouvelles pistes quant aux mécanismes moléculaires d'action de MLF, j'ai également cherché ses partenaires par spectrométrie de masse. J'ai ainsi identifié la protéine chaperonne DNAJ1/HSP40 et j'ai pu mettre en évidence que ce partenaire de MLF est aussi impliqué dans la régulation de l'activité et du niveau d'expression de LZ en culture cellulaire. J'ai ensuite généré un mutant de ce gène chez la Drosophile par CRISPR et j'ai pu montrer qu'il contrôle lui aussi le développement des cellules sanguines LZ+, probablement en interaction avec MLF. Mes résultats suggèrent donc que MLF pourrait faire partie d'un complexe chaperon impliqué dans le contrôle de l'activité de LZ et dans l'hématopoïèse<br>Haematopoiesis is the developmental process responsible for the formation of all blood cell types. At the molecular level, many transcription factors allow tight regulation of this process and deregulation of their activity, by affecting blood cell proliferation or differentiation, can lead to the appearance of various diseases including leukaemia. Interestingly, many genes implicated in haematopoiesis are conserved between Drosophila and human. Consequently, this insect has emerged as a potent model to study normal and pathological blood cell development. Taking advantage of this conservation, my thesis aimed at characterizing the role and mode of action of the "Myeloid Leukemia Factor" (MLF) family in Drosophila. Indeed, although the founding member of this family is involved in the development of Acute Myeloid Leukaemia in humans, this family remains poorly characterised. Previous work showed that MLF controls Drosophila blood cell homeostasis and that one conserved aspect of MLF function is to regulate the activity of RUNX transcription factor activity, including that of the Drosophila hematopoietic factor LOZENGE (LZ). Further to these results, I sought to determine more precisely MLF function in haematopoiesis and its molecular mechanism of action on RUNX factors. In vivo, I showed that mlf controls not only the number of LZ + blood cells but also their differentiation into "crystal cells. Notably, the establishment of wild type or mlf-/- LZ+ cells transcriptome by RNAseq allowed me to identify new markers for this lineage and revealed that mlf regulates the expression of a large number of them. Interestingly, I found that mlf controls both LZ+ cell number and their differentiation by regulating LZ level. Indeed, although lz is required for crystal cell development, a decrease in lz level is associated with increased LZ+ cell number and these cells exhibit "hyper-differentiated" phenotypes as well as Notch signalling pathway over-activation. These data underline the crucial role of RUNX level regulation by MLF for normal blood cell development. In parallel, using a Drosophila blood cell line (Kc167 cells), I showed that MLF physically interacts with LZ and post-translationally regulates its level. To open new leads concerning the molecular mode of action of MLF, I undertook a proteomic approach to identify its partners. Thereby, I found that the chaperon protein DNAJ1/HSP40 binds to MLF and I demonstrated that DNAJ1 is also implicated in the regulation of LZ level and activity in Kc cells. Using a CRISPR approach, I then generated a null dnaj1 allele in Drosophila and its phenotypic characterisation allowed me to show that DNAJ1 also controls the development of LZ+ blood cells, probably in interaction with MLF. All together, my results suggest that MLF could be part of a " chaperon " complex involved in controlling RUNX activity and haematopoiesis
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Belhocine, Mohamed. "Etude bioinformatique de l'épigénome au cours de la différenciation des lymphocytes T et des leucémies." Thesis, Aix-Marseille, 2016. http://www.theses.fr/2016AIXM4095.
Full textAbstract:
Des études récentes ont mis en évidence qu’au moins 70% du génome humain est transcrit et produit une myriade d’ARN non codants. Au début de ma thèse j’ai utilisé des données de RNA-Seq sens-spécifique pour identifier les transcrits divergents dans les tissus primaires de souris. J’ai utilisé aussi des données ChIP-Seq afin d’analyser leurs caractéristiques épigénétiques. Nous avons trouvé que la transcription divergente est associée de manière significative à des gènes liés à la régulation de la transcription et le développement.Dans un deuxième temps, je me suis intéressé à l'identification et la caractérisation des lncRNA chez l'homme. J’ai appliqué des approches statistiques pour quantifier leur expression et identifier ceux qui sont (dé)régulés dans un contexte normal ou leucémique Dans un troisième temps. Au cours de ma thèse, je me suis attaché à étudier le mécanisme moléculaire épigénomique ainsi qu'à développer un pipeline bioinformatique permettant d'identifier les gènes (codant ou non codant) associés à des profils H3K4me2/3 étendus. Ainsi, j’ai mis en évidences que ces profils étendus étaient directement dépendants d'un processus transcriptionelle impliquant des nouveaux mécanismes de régulation. Cette étude a donné aussi lieu à une publication dont je suis cosignataire en premier auteur. (Zacarias, Belhocine et al. Journal of Immunology 2015). Cette nouvelle approche devrait s'avérer très utile dans d'autres modèles développementaux et/ou pathologiques et peuvent être utilisé comme outil de prioritisation des candidats les plus relevant dans des approches plus globale<br>Recent studies indicate that at least 70% of the human genome is transcribed into a myriad of both coding and non-coding RNAs. at the beginning of my thesis I used RNA-Seq data to identify divergent transcripts in mouse primary tissues. I also used the ChIP-Seq data to analyze their epigenetic characteristics. The results demonstrated that divergent transcription was significantly associated with genes related to transcription regulation and development. In a second phase, I was interested in the LncRNAs identification and characterization during the development of human T lymphocytes and in T acute lymphoblastic leukemia (T-ALL). I applied statistical approaches to quantify their expression and identify those that are regulated in a normal or leukemic contextSubsequently, I determined the most appropriate approach to prioritize the functional role of LncRNAs. Indeed, I focused on studying the molecular epigenomic mechanism marking and developed a bioinformatics pipeline to identify genes (coding or non-coding) associated with the extended profiles of H3K4me2/3. Evidence generated through the pipeline demonstrated that these extended profiles were directly dependent on specific transcriptional process involving new regulatory mechanisms.In conclusion, this body of work has resulted in a more comprehensive approach to determining the true functional role of LncRNAs in both normal biological context and in human disease
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Augé, Benoît. "Régulation de l'hématopoïèse par les facteurs de transcription de type GATA et FOG chez la drosophile." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30303.
Full textAbstract:
La Drosophile produit des cellules sanguines aussi appelées hémocytes qui se rapprochent fonctionnellement des cellules de la lignée myéloïde des vertébrés. On en dénombre trois sortes : les plasmatocytes qui sont apparentées aux macrophages des vertébrés, les cellules à cristaux, qui participent à la coagulation, et les lamellocytes qui ne sont produits que suite à certains challenges immuns et qui participent à l'encapsulation de corps trop gros pour être phagocytés. Le choix de destin, la prolifération et la différenciation des cellules hématopoïétiques sont contrôlés par plusieurs familles de facteurs de transcription conservés de la Drosophile à l'Homme. En particulier, le gène serpent (srp), codant pour un facteur de transcription de type GATA, joue un rôle majeur à différentes étapes du développement des cellules sanguines embryonnaires et larvaires de la Drosophile. En effet, srp est non seulement requis pour la spécification et le maintien des progéniteurs sanguins (prohémocytes) mais il participe aussi à la différenciation des trois lignages hématopoïétiques. Cette diversité de fonction de Srp est notamment assurée par l'interaction avec d'autres partenaires dont le cofacteur de type FOG (Friend of GATA) U-shaped (Ush) qui participe au contrôle de la différenciation des plasmatocytes et des lamellocytes. Enfin un second facteur de transcription de type GATA, Pannier (Pnr), est quant à lui nécessaire à la différenciation et à la maturation des plasmatocytes. L'objectif de ma thèse est de mieux comprendre la fonction et le mode d'action de ces facteurs GATA et FOG dans le contrôle du développement des cellules sanguines larvaires, et en particulier des lamellocytes. Dans un premier temps, une analyse génétique m'a permis d'identifier des rôles spécifiques pour les deux complexes GATA/FOG, Srp/Ush et Pnr/Ush, dans le processus de formation des hémocytes larvaires circulants. Ainsi, mes résultats suggèrent que : 1) le complexe Srp/Ush réprime la prolifération et la différenciation des hémocytes circulants ; 2) Srp participe à la maturation des lamellocytes ; 3) le complexe Pnr/Ush contrôle le maintien de l'identité des plasmatocytes par répression de leur transdifférentiation en lamellocytes ; 4) le complexe Srp/Ush réprime l'expression de pnr, qui est nécessaire à la maturation des plasmatocytes. Il apparait donc que la combinatoire des trois facteurs Srp, Pnr et Ush régule différentes étapes du développement des cellules sanguines larvaires. Dans un second temps, j'ai cherché à mettre à jour les réseaux géniques contrôlés par ces facteurs. Pour cela, j'ai utilisé une lignée de cellules sanguines d'origine larvaire sur laquelle j'ai réalisé des expériences d'immunoprécipitation de chromatine (ChIP-Seq) contre Srp, Pnr et Ush ainsi que des analyses transcriptomiques (RNA-Seq) en condition normale ou de perte de fonction de ush. Mes analyses montrent notamment que Ush participe à l'activation de l'expression de marqueurs des plasmatocytes comme les gènes codant pour les composants de la matrice extracellulaire et à la répression de l'expression de marqueurs des lamellocytes comme les gènes codant pour les récepteurs de la matrice extracellulaire. Ces analyses montrent aussi que Ush régule l'expression de composants de différentes voies de signalisation impliquées dans la formation des lamellocytes tels que shaggy (voie Wnt), wts (voie Hippo) et pi3k21B (voie mTor). Le cofacteur Ush, au travers de ses interactions avec Srp et Pnr, apparait donc comme un acteur central dans la régulation du destin des plasmatocytes et des lamellocytes au cours de l'hématopoïèse chez la Drosophile. L'ensemble de ces résultats apportent une meilleure compréhension des réseaux géniques mis en œuvre lors de la formation des cellules sanguines et notamment du rôle joué par les facteurs GATA et du cofacteur FOG au cours du processus hématopoïétique<br>Drosophila produces blood cells or hemocytes, which are related to the myeloid lineage of vertebrates. There are three kinds of hemocytes: plasmatocytes are phagocytic cells akin to vertebrate macrophages; crystal cells are involved in the clotting process and lamellocytes are produced after immune challenges like wasp infestation in order to encapsulate objects too large to be phagocytized. Different families of transcription factor conserved from Drosophila to Human finely regulate blood cell fate, proliferation and differentiation. For instance, the GATA transcription factor Serpent (Srp), which plays a key role at different steps of embryonic and larval blood cell development in Drosophila. Indeed, srp is not only required for the specification and maintenance of blood cell progenitors (prohemocytes) but it is also involved in the differentiation of the three hemocyte lineages. This functional diversity is ensured in particular by the interaction with other partners such as the Friend of GATA (FOG) co-factor U-shaped (Ush), which is involved in the control of plasmatocytes differentiation into lamellocytes. Moreover, a second GATA factor, Pannier (Pnr) is necessary to plasmatocytes differentiation and maturation. The purpose of my work is to provide a better understanding of the function and mode of action of these two GATA proteins and of their FOG co-factor during Drosophila blood cell development and in particular for lamellocyte production. At first, a genetic analysis allowed us to identify specific role for each GATA / FOG complex in circulating larval hemocytes. Notably my results suggest that 1) the Srp / Ush complex represses hemocytes proliferation and differentiation; 2) Srp alone participates to lamellocytes maturation; 3) the Pnr / Ush complex maintains plasmatocytes identity by repressing their differentiation into lamellocytes; 4) the Srp / Ush complex represses Pnr expression, which is necessary for plasmatocytes maturation. These data indicate that the combinatorial interplay between Srp, Pnr and Ush participates in the fine-tuning of larval blood cell development. Second, I tried to decipher the gene networks regulated by these three factors. To do so, I used an ex vivo cellular model of larval hemocytes to identify Srp, Pnr and Ush direct target genes by chromatin immunoprecipitation (ChIP-Seq) experiments as well as Ush-regulated genes by transcriptomic analyses (RNAseq). My results revealed that Ush participates in the activation of plasmatocytes markers such as extracellular matrix (ECM) components whereas it represses the expression of lamellocytes markers such as ECM receptor. In addition, these analyses allowed us to identify components of different signalling pathway involved in lamellocytes formation that are directly regulated by Ush, including shaggy (Wnt pathway), wts (Hippo pathway) and pi3k21B (mTor pathway). Therefore, it appears that Ush, thanks to its interaction with Srp or Pnr, plays a central role in the regulation of plasmatocyte and lamellocyte fate. All together, these results shed new light on the genetic network involved in blood cell formation and on the role of the GATA / FOG complexes during haematopoiesis
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De, Luca Karelle. "CONTRIBUTION DES RÉCEPTEURS À DOMAINE DE MORT ET DES RÉCEPTEURS DE LA FAMILLE TOLL À L'HÉMATOPOÏÈSE HUMAINE." Phd thesis, Université Claude Bernard - Lyon I, 2006. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00140434.
Full textAbstract:
La voie de signalisation des récepteurs à domaine de mort (RDM) intervient dans l'hématopoïèse. En effet, l'invalidation de FADD, la molécule adaptatrice des RDM, dans le compartiment lymphocytaire murin résulte en une absence totale de lymphocytes B en périphérie. Nos travaux ont révélé que l'invalidation de la fonction FADD inhibe profondément la production de cellules hématopoïétiques humaines à la fois B et non-B. Ces données suggèrent une implication de FADD dans l'expansion des CSH et des progéniteurs hématopoïétiques humains. Outre les RDM, les récepteurs Toll (TLR), dévolus à la reconnaissance des pathogènes, sont également capables de recruter FADD. Ceci nous a conduit à nous intéresser au rôle des TLR dans l'hématopoïèse humaine. Nous avons montré que les CSH et les progéniteurs hématopoïétiques humains expriment des TLR fonctionnels (TLR1, 2, 3 et 6 notamment). Nos résultats démontrent que la stimulation des TLR sur les CSH et les progéniteurs hématopoïétiques humains est susceptible de remodeler le développement hématopoïétique en favorisant l'engagement myéloïde au détriment du développement lymphocytaire B. Ce processus pourrait contribuer au renforcement du bras de l'immunité innée au cours des infections microbiennes
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Zepponi, Vanessa. "Les progéniteurs multipotents exprimant Flt3 source des précurseurs T extra-thymiques." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00806094.
Full textAbstract:
Les cellules souches hématopoïétiques (CSH) de phénotype LSK (Ligneage-c-Kit+Sca1+) sont à l'origine de toutes les lignées sanguines. Leur maturation passe parla génération de progéniteurs multipotents (MPP), subdivisés grâce à l'expression deVCAM-1 et Flt3 (VCAM-1+Flt3-: MPP1, VCAM-1+Flt3+: MPP2 et VCAM-1-Flt3+:MPP3). Les MPP3 se différencient en progéniteur lymphoïde commun (CLP), sourcede la lignée B. Sa contribution à la génération de la lignée T reste controversée.La lignée T principale est issue d'un progéniteur de la MO qui a colonisé le thymus. Ilexiste aussi une lignée T extra-thymique, identifiés au sein de différents organes(l'intestin, la MO, le sang et la rate) dont la maturation se termine dans le thymus oul'intestin. Une des questions importantes est de savoir si ces 2 lignées sont issues de lamême source. Nous nous sommes intéressés à la lignée de pré-T extra-thymique (de larate) : Lin-Thy1.2+ CD25+Il7R��+. Ces derniers sont très abondants chez la sourisathymique (5-6 fois plus que chez la souris contrôle C57BL/6). Notre but a été dedéfinir la source de cette lignée parmi les progéniteurs de la MO. Suite aux transplantations des différents compartiments hématopoïétiques de la MO àdes receveurs athymiques irradiés, nous avons montré que les MPP3 (VCAM1-Flt3+)sont la population plus douée d'activité pré-T. Au contraire, les CLP génèrent deslymphocytes B matures (CD19+IgM+). Ces données sont confortées par l'étude del'expression de gènes lymphoïdes et myéloïdes qui indique l'engagement lymphoïdeprécoce d'une sous- population de MPP3. Les cellules progénitrices de la MO quicolonisent la rate (et le thymus) doivent circuler par le sang pour pouvoir coloniser cesorganes. La population de MPP majoritaire en circulation est les MPP3. De plus,l'analyse du profil d'expression des gènes des récepteurs aux chimiokines et d'autresgènes spécifique de la différentiation apporte de nouvelles informations sur le potentielT intrinsèque des progéniteurs de la MO.L'ensemble des données accumulées permettent de conclure que les MPP3 sont debons candidats pour la génération des pré-T extra-thymiques et que l'engagementlymphoïde commencé dans la MO se termine dans le sang grâce au maintien del'expression de Notch1.
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Giroux, Sébastien. "Analyse fonctionnelle de facteurs impliqués dans l’émergence des précurseurs hématopoïétiques de l’embryon de souris." Paris 11, 2006. http://www.theses.fr/2006PA112350.
Full text
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Aziz, Athar. "Rôle des facteurs de transcription bZip MafB et c-Maf dans le développement des macrophages : la différenciation macrophagique." Aix-Marseille 2, 2008. http://theses.univ-amu.fr.lama.univ-amu.fr/2008AIX22020.pdf.
Full textAbstract:
Nous montrons ici que l’expression des facteurs de transcription MafB et c-Maf restreint la prolifération des monocytes matures et des macrophages, avec pour conséquence de les conduire au stade terminal de différenciation. En absence de MafB ou de c-Maf, le développement des macrophages est normal. Toutefois, une absence combinée de MafB et de c-Maf (DKO) induit la prolifération des macrophages différenciés en réponse au M-CSF. Ce potentiel prolifératif n’est pas restreint aux seuls macrophages dérivés du foie foetal puisque les monocytes triés à partir de sang de souris reconstituées ou les macrophages tissulaires présentent également ce potentiel prolifératif en réponse au M-CSF. La prolifération de ces cellules différenciées est dépendante de Myc et Klf4 mais indépendante de p16 et p19. Enfin, les monocytes DKO triés peuvent être clonés et re-clonés avec une grande efficacité. Bien que les cellules DKO aient la possibilité de proliférer ex vivo, ils conservent leur qualité de macrophages matures et ne sont pas transformés. De plus, lorsqu’elles sont injectées dans des souris syngéniques, les cellules DKO sont détectées dans les tissus périphériques. L’ensemble de nos résultats suggère que MafB et c-Maf restreignent le potentiel prolifératif des monocytes matures, les rendant post-mitotiques. Nous décrivons donc un rôle nouveau pour MafB et c-Maf dans le contrôle du cylce cellulaire des monocytes matures<br>We have shown here that expression of MafB and c-Maf restricts the ability of mature monocytes and macrophages to proliferate and lead them to the terminal differentiated state. In absence of MafB or c-Maf macrophages terminal differentiation was unaffected; however, combined deficiency of both MafB and c-Maf led differentiated macrophages to proliferate upon M-CSF stimulation. In addition, this proliferation potential was not restricted to fetal liver derived macrophages as MafB/c-Maf double deficient (DKO) sorted monocytes from peripheral blood of reconstituted mice or tissue macrophages also had potential to proliferate on M-CSF stimulation. Proliferation of terminally differentiated cells was c-Myc and Klf4 dependent, but was independent of p16, and p19. Finally DKO sorted monocytes could be cloned and re-cloned with a high efficiency. Although DKO macrophages have proliferation potential ex vivo, they remain mature macrophages and untransformed. Furthermore, they could be detected in the peripheral tissue of intra venously syngenic mice. Taken together, our data suggest a novel role of MafB and c-Maf in terminal monocytic differentiation by keeping the macrophages out of cell cycle when mitogenic M-CSF stimulus of M-CSF is given
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Roques, Marion. "Etude de l'émergence hématopoïétique aortique dans l'embryon de souris : rôle de l'endogline." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066516.
Full textAbstract:
Les Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH) peuvent renouveler tous les types cellulaires du sang tout en s’autorenouvelant pour maintenir un contingent de CSH. Elles sont produites au cours de la vie embryonnaire, dans la région AGM pour Aorte-Gonades-mésonéphros. Elles émergent sous la forme de bourgeonnements hématopoïétiques étroitement liés à l’endothélium de l’aorte. Leur formation nécessite l’intervention de nombreux acteurs cellulaires et moléculaires. Parmi eux, la voie de signalisation TGFß/BMP joue un rôle important. Mon travail de Thèse a porté sur la phase d’émergence des CSH dans l’AGM. Afin de caractériser plus finement l’émergence des bourgeonnements aortiques d’un point de vue morphologique, j’ai mené une série d’observations au microscope électronique à balayage. Cette approche a permis de mettre en évidence une modification locale de l’endothelium. La comparaison entre le poulet et la souris a permis de révéler des différences dans la mise en place et la dynamique d’apparition des clusters. J’ai étudié l’expression de l’endogline (CD105), un récepteur accessoire de la voie TGFß/BMP, au moment de l’émergence hématopoïétique aortique et j’ai montré que cette molécule était exprimée dans l’endothélium et dans les bourgeonnements hématopoïétiques. Dans les cellules des bourgeonnements, l’intensité d’expression de CD105 est variable ce qui a permis de discriminer les progéniteurs clonogéniques engagés (CD105int) des cellules immatures (CD105high). Par ailleurs, j’ai débuté la mise au point de greffes d’organes hématopoïétiques murins sur la membrane chorio-allantoïdienne de poulet afin de comprendre les échanges cellulaires entre ces différents organes
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Louradour, Isabelle. "Réponse au parasitisme par des guêpes chez la drosophile : rôle de la voie de signalisation Toll/NFkB." Thesis, Toulouse 3, 2015. http://www.theses.fr/2015TOU30256/document.
Full textAbstract:
Dans tous les organismes animaux la réponse immunitaire est divisée en deux composantes : la réponse humorale, qui consiste en la production d'un grand nombre de molécules toxiques pour le pathogène, et la réponse cellulaire, qui met en jeu des cellules immunitaires produites lors de l'hématopoïèse. Chez les mammifères adultes, l'hématopoïèse se déroule dans la moelle osseuse, où un microenvironnement particulier appelé " niche hématopoïétique " contrôle l'auto-renouvèlement, la prolifération et la différenciation des Cellules Souches Hématopoïétiques (CSH) à l'origine de l'ensemble des cellules sanguines/immunitaires. Suite à une infection par un pathogène, l'homéostasie du système hématopoïétique est modifiée, afin de permettre la mise en place d'une réponse immunitaire cellulaire adaptée. Le rôle de la niche hématopoïétique dans le contrôle de l'hématopoïèse suite à une infection reste à ce jour mal connu. La drosophile est utilisée comme système modèle pour étudier in vivo l'hématopoïèse et la réponse immunitaire. L'hématopoïèse a lieu chez la drosophile au stade larvaire dans un organe spécialisé appelé Glande Lymphatique (GL). Au sein de cet organe, un petit groupe de cellules, le Centre de Signalisation Postérieur (PSC), contrôle l'équilibre entre progéniteurs hématopoïétiques et cellules immunitaires différenciées, et a donc un rôle équivalent à celui de la niche hématopoïétique des mammifères. Suite à un stress immun, tel que le parasitisme par des guêpes, une différenciation massive de cellules immunitaires spécifiques, les lamellocytes, a lieu dans la GL; puis la dispersion de la GL permet la libération des lamellocytes dans la circulation lymphatique. Lors du parasitisme, la guêpe pond un œuf dans le corps de la larve de drosophile. En absence de réponse immunitaire cellulaire, l'œuf de guêpe se développe au dépend de son hôte, entraînant sa mort. En formant une capsule autour de l'œuf de guêpe, les lamellocytes neutralisent son développement et permettent la survie de l'hôte. Au cours de ma thèse, je me suis intéressée à la réponse immunitaire cellulaire de la larve de drosophile au parasitisme par des guêpes. Je me suis plus particulièrement intéressée au rôle de la " niche hématopoïétique " dans cette réponse. Pour cela, j'ai initié une approche transcriptomique ayant pour but d'identifier les gènes spécifiquement exprimés dans le PSC en réponse au parasitisme. En parallèle, j'ai caractérisé le rôle de la voie de signalisation Toll/NF?B dans la GL lors de la réponse au parasitisme. La voie Toll/NF?B joue un rôle essentiel dans la réponse immunitaire humorale et son rôle dans la réponse immunitaire cellulaire reste à définir. Mes travaux indiquent que la voie Toll/NF?B est activée dans le PSC suite au parasitisme. Son activation est médiée par le facteur de transcription NF?B "Dorsal-related Immunity Factor" (Dif), qui est requis dans le PSC pour permettre la différenciation rapide et massive de lamellocytes et la dispersion des cellules de la GL. De plus, j'ai établi un réseau génique, impliquant les deux voies de signalisation Toll/NF?B et EGFR ainsi que les espèces réactives de l'oxygène (ROS) dans le contrôle de la réponse au parasitisme. Une augmentation du niveau de ROS dans le PSC et l'activation de la voie EGFR dans les cellules immunitaires ont été décrits comme nécessaires à l'encapsulation des œufs de guêpe après parasitisme. Mes données établissent qu'ils sont en plus requis respectivement dans les cellules du PSC et dans les progéniteurs hématopoïétiques pour permettre la dispersion de la GL après parasitisme. Basé sur la forte conservation des voies de signalisation et processus moléculaires contrôlant l'hématopoïèse entre les mammifères et la drosophile, mes résultats posent la question de la conservation du réseau génique établi chez la drosophile et du rôle de la voie NF?B dans la niche hématopoïétique des mammifères lors d'une réponse à une infection<br>In all organisms, the immune response is divided into two parts: the humoral response, which consists of producing a large number of molecules to combat the pathogen, and the cellular response, which relies on immune cells produced during hematopoiesis. In adult mammals, hematopoiesis occurs in the bone marrow, where a particular microenvironment called the "hematopoietic niche" controls self-renewal, proliferation and differentiation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs), which give rise to all blood cell types. Following a pathogenic infection, the hematopoietic system's homeostasis is modified in order to obtain an adapted cellular immune response. The role that the hematopoietic niche plays during an immune response remains unclear. Drosophila is used as a model system to study in vivo hematopoiesis and the immune response. In drosophila, hematopoiesis occurs at the larval stage in a specialized organ called the Lymph Gland (LG). Within this organ, a small group of cells termed the Posterior Signalling Center (PSC), controls the balance between hematopoietic progenitors and differentiated immune/blood cells, a role similar to the mammalian hematopoietic niche. Following an immune challenge, especially in response to wasp parasitism, a massive differentiation of specific immune cells called lamellocytes occurs in the LG. The LG subsequently disperses to release lamellocytes into the hemolymph. During parasitism, the wasp lays an egg in the drosophila larva. In the absence of a cellular immune response, the wasp egg will develop and kill its host. By forming a capsule around the wasp egg, lamellocytes impede the pathogen's development and permit the host's survival. During my PhD, I studied the drosophila larva cellular immune response to wasp parasitism. I focused my research on the role of the "hematopoietic niche". I therefore initiated a transcriptomic study, in order to identify genes expressed by the PSC in response to parasitism. In parallel, I characterized the role of the Toll/NF?B signalling pathway in the LG during parasitism. The Toll/NF?B pathway plays a key role in the humoral response both in drosophila and mammals; however its role in the cellular immune response remains unknown. My results indicate that the Toll/NF?B pathway is activated in the PSC following parasitism. Its activation is mediated by the NF?B transcription factor " Dorsal-related Immunity Factor " (Dif), which is required in the PSC for rapid lamellocyte production and LG dispersion. Furthermore, I established the existence of a genetic network comprising the Toll/NFkB and EGFR signalling pathways and Reactive Oxygen Species (ROS), in order to control the immune response to parasitism. An increase in ROS levels in the PSC and EGFR pathway activation in the immune cells, have been described as required for wasp egg encapsulation. My data suggest that the ROS and the EGFR pathway are also required for LG dispersion following wasp parasitism, in PSC cells and in hematopoietic progenitors, respectively. Based on the high conservation of signalling pathways and molecular processes controlling hematopoiesis, my results raise the question of whether such a network is conserved in the mammalian hematopoietic niche in response to pathogenic infections
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Morin-Poulard, Ismaël. "Caractérisation du rôle de la voie Slit/Robo dans le contrôle de la prolifération et de la cohésion des cellules de la "niche hématopoïétique" chez la Drosophile." Toulouse 3, 2014. http://thesesups.ups-tlse.fr/3079/.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est le processus qui conduit à la formation de l'ensemble des cellules sanguines à partir de cellules souches hématopoïétiques (CSHs). Chez les mammifères adultes, ce processus à lieu dans la moelle osseuse où un microenvironnement, appelé " niche hématopoïétique ", va contrôler l'autorenouvèlement, la prolifération et la différenciation des CSHs. La niche hématopoïétique, qui est composée de nombreux types cellulaires appelés cellules stromales, peut être subdivisée en une " niche endostéale ", composée majoritairement d'ostéoblastes, et une " niche vasculaire ", composée majoritairement de cellules endothéliales. Le concept de niche a été proposé dès 1978 mais les mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués restent largement inconnus. Récemment a été identifiée une " niche hématopoïétique " chez la Drosophile ouvrant la possibilité d'étudier les mécanismes de contrôle d'autorenouvèlement et maintien des CSHs in vivo grâce aux différents outils génétiques et moléculaires disponibles chez cet organisme modèle. L'hématopoïèse définitive chez la drosophile à lieu dans l'organe hématopoïétique larvaire appelé la glande lymphatique (GL). La GL est accolée au tube cardiaque qui est le système vasculaire. La " niche hématopoïétique ", appelé PSC (Centre Signalisateur Posterieur), contrôle la balance entre les progéniteurs hématopoïétiques et les cellules hématopoïétiques différenciées dans la GL. Lors de ma thèse, dans un premier temps j'ai contribué à la caractérisation du rôle de la voie de signalisation BMP/Dpp dans les PSC (Pennetier, Oyallon, Morin-Poulard et al. , 2013). Cette voie est requise pour définir le nombre de cellules du PSC en contrôlant leur prolifération via la régulation de l'expression du proto-oncogène d-Myc. Dans un deuxième temps, je me suis intéressé au rôle de la voie de signalisation Slit/Robo dans le PSC. J'ai montré que le ligand Slit est exprimé dans le tube cardiaque et les récepteurs Robos dans le PSC. L'inactivation de la voie Slit/Robo dans le PSC conduit à une prolifération accrue des cellules du PSC et à la perte de leur cohésion. Ce défaut conduit à un changement de l'homéostasie des cellules de la GL indiquant que la voie Slit/Robo joue un rôle clé dans l'établissement de la morphologie du PSC et dans sa fonction. Une analyse détaillée a permis d'établir les mécanismes moléculaires impliqués. Aussi la voie Slit/Robo contrôle le nombre de cellules du PSC en régulant l'activité de la voie BMP/Dpp dans le PSC et leur cohésion en modifiant l'activité de la petite GTPase Cdc42. Enfin, la signalisation Slit/Robo interfère avec la fonction de la DE-Cadhérine pour réguler à la fois la prolifération des cellules du PSC et leur cohésion. Mes travaux mettent en évidence pour la première fois l'existence d'une communication inter-organe entre le système vasculaire et le PSC pour contrôler la morphologie et la fonction du PSC. Ces observations faites chez la Drosophile posent la question de la conservation de cette communication entre les " niches endostéale et vasculaire " dans la moelle osseuse des mammifères<br>Hematopoiesis is the process that gives rise to every blood cells deriving from the hematopoietic stem cells (HSC). In mammals, this process occurs in the bone marrow where a microenvironment, called the "hematopoietic niche", controls the self-renewal, the proliferation and the differentiation of HSCs. The "hematopoietic niche" is composed of several types of stromal cells and it can be subdivided into an "endosteal niche", composed mostly of osteoblasts, and a "vascular niche", composed mostly of endothelial cells. Even if the concept of a niche has been proposed since 1978, the molecular and cellular mechanisms involved are poorly understood. Recently, a "hematopoietic niche" was discovered in Drosophila, and this system has turned out to be a good model to study in vivo the hematopoietic niche and the mechanisms that control self-renewal and maintenance of HSCs. Drosophila larval hematopoiesis occurs in a specialized organ called the lymph gland (LG). The LG is localized along the cardiac tube witch is the vascular system. The Drosophila "hematopoietic niche", termed PSC for Posterior Signaling Center, controls the balance between hematopoietic progenitors and differentiated hematopoietic cells of the LG. During my PhD, I initially contributed to define the function of the BMP/Dpp signaling pathway in PSC cells (Pennetier, Oyallon, Morin-Poulard et al. , 2013). This pathway controls the number of PSC cells by directing their proliferation via the regulation of the expression of the proto-oncogene d-Myc. Furthermore, I have studied the role of the Slit/Robo signaling pathway in the PSC. I have shown that the ligand Slit is expressed in the cardiac tube and that the three Robo receptors are expressed in the PSC. The inactivation of the Slit/Robo pathway in the PSC, leads to an increase in the number of proliferating PSC cells and a loss in their cohesion. This defect, in turn, brings about a change in the homeostasis of the LG cells indicating that the Slit/Robo signaling pathway plays a key role in establishing the morphology of the PSC and in its function. A detailed analyse has allow to identify the molecular mechanism implicated. Thus, the Slit/Robo pathway controls the proliferation of PSC cells regulating the BMP/Dpp pathway activity in PSC and its cohesion by modifying the activity of the small GTPase Cdc42. Finally, the Slit/Robo signalisation interferes with the function of the DE-Cadherin to regulate both the proliferation and loss of cohesion of PSC cells. My work shows for the first time the existence of an inter-organ communication between the vascular system and the PSC, affecting PSC's morphology and function. Those observations made in Drosophila ask the question of the conservation of this signalization between the "endosteal niche" and the "vascular niche" in the mammals' bone marrow
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Marchand, Valentine. "Inflammation et hématopoïèse – Rôles de la Calprotectine et de la protéine IGFBP2 (Insulin like Growth Factor Binding Protein 2)." Electronic Thesis or Diss., université Paris-Saclay, 2024. http://www.theses.fr/2024UPASL114.
Full textAbstract:
La réponse inflammatoire à une agression tissulaire infectieuse ou stérile met en jeu des cellules myéloïdes et des médiateurs solubles. Notre travail interroge les effets de deux médiateurs solubles de l’inflammation sur l’hématopoïèse. Le premier médiateur étudié est la calprotectine, un hétérodimère associant les alarmines S100A8 et S100A9 qui est une des protéines circulantes les plus abondantes lors d’une réponse inflammatoire sévère. Sa contribution au dérèglement de l’hématopoïèse normale et à son amplification dans le contexte d’une hémopathie maligne restait méconnue. Nous avons étudié les effets de la calprotectine sur la différenciation des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques CD34+ humaines normales et pathologiques (myélofibrose JAK2-V617F) en culture liquide. Nous avons comparé ses effets à ceux de l’interleukine 6 (IL6) qui est le prototype des cytokines pro-inflammatoires et étudié les interactions entre ces deux médiateurs. L’IL6 induit l’expression des gènes S100A8 et S100A9 dans les progéniteurs hématopoïétiques et la génération de monocytes sécrétants la calprotectine. Cette dernière inhibe la maturation des progéniteurs érythrocytaires et mégacaryocytaires (MEP) induite par l’érythropoïétine ou par JAK2-V617F en l’absence d’érythropoïétine. Dans le contexte JAK2-V617F, la calprotectine amplifie l’expression des gènes S100A8 et S100A9 dans les monocytes, générant une boucle toxique qui devrait contribuer à la sévérité de la réponse inflammatoire dans ce contexte. Une signature des effets de la calprotectine corrélée à la monocytose est détectable dans les MEP de la moelle de patients atteints d’une infection sévère ou d’hémopathie myéloïde. Ces résultats suggèrent que la calprotectine est un des médiateurs de l’anémie inflammatoire et que ses effets hématopoïétiques sont amplifiés dans le contexte d’une hémopathie maligne JAK2-V617F. Le second médiateur étudié est la protéine IGFBP2 (Insulin like Growth Factor Binding Protein 2). L’évolution des concepts en cancérologie, en particulier la découverte de clones de cellules porteuses de mutations oncogéniques dans les tissus sains, donne une place croissante à la réponse inflammatoire locale ou systémique dans l’émergence et la progression d’une affection maligne. L’analyse des cellules stromales mésenchymateuses médullaires de patients atteints de leucémie myélomonocytaire chronique (LMMC), une hémopathie myéloïde sévère, a révélé la dérégulation d’un certain nombre de gènes parmi lesquels IGFBP2. L’augmentation de l’expression de ce gène par les cellules malignes ou leur environnement a un impact pronostique négatif dans de nombreux cancers. Cette protéine module la biodisponibilité des facteurs de croissance IGF (Insulin-like Growth Factor). Elle exerce aussi des fonctions indépendantes des IGF. Nous avons associé l’excès d’IGFBP2 dans le plasma des patients atteints de LMMC à un pronostic péjoratif. Nous avons montré en culture liquide que cette protéine a un effet limité sur les cellules CD34+, mais favorise la génération de monocytes de phénotype TREM2 (triggering receptor expressed on myeloid cells – 2) susceptibles de générer des macrophages intra-tumoraux immuno-suppresseurs. L’analyse de souris génétiquement modifiées que nous avons générées au cours de la thèse permettra d’explorer l’impact de la forme soluble d’IGFBP2 sur l’hématopoïèse normale et pathologique in vivo. Nos travaux suggèrent que de fortes concentrations de calprotectine contribuent à l’induction d’une anémie au cours d’une réaction inflammatoire systémique sévère, tandis que la production excessive d’IGFBP2 par les cellules de la niche médullaire, possible conséquence d’une sénescence cellulaire accrue, pourrait contribuer à la sévérité de la LMMC par la génération de précurseurs de macrophages immunosuppresseurs exprimant TREM2<br>Inflammation generated by a sterile or infectious insult in a given tissue involves myeloid cells and soluble mediators. Our work interrogates the effects of two soluble mediators of inflammation on hematopoiesis. The first studied mediator is calprotectin, a heterodimeric protein associating S100A8 and S100A9 alarmins that is one of the most abundant circulating proteins in severe inflammatory reaction. The role of calprotectin in the deregulation of healthy hematopoiesis and its amplification in the context of a hematological malignancy remained unexplored. We studied the effects of calprotectin on the differentiation of healthy and pathological (JAK2- V617F myelofibrosis) human CD34+ hematopoietic stem and progenitor cells in liquid culture. We compared its effects to those of interleukin 6 (IL6), the prototype of pro-inflammatory cytokines, and studied the interactions between these two mediators. IL6 induces the expression of S100A8 and S100A9 genes in hematopoietic progenitors and the generation of calprotectin-secreting monocytes. Calprotectin inhibits the maturation of megakaryocyte-erythroid progenitors (MEPs) induced by erythropoietin or by JAK2-V617F in the absence of erythropoietin. In the JAK2-V617F context, calprotectin amplifies the expression of S100A8 and S100A9 genes in monocytes, generating a toxic loop that should contribute to the severity of the inflammatory response in this context. A signature of calprotectin effects correlated with monocytosis is detectable in the bone marrow MEPs of patients with severe infection or myeloid malignancy. These results suggest that calprotectin is one of the mediators of anemia of inflammation and that its hematopoietic effects are amplified in the context of a JAK2-V617F hematological malignancy. The second studied mediator is the protein IGFBP2 (Insulin like Growth Factor Binding protein 2). Evolving concepts in oncology, in particular the discovery of clones of cells carrying oncogenic mutations in healthy tissues, gives increasing importance to the local or systemic inflammatory response in the emergence and progression of a malignant disease. The analysis of medullary mesenchymal stromal cells from patients with chronic myelomonocytic leukemia (CMML), a severe myeloid malignancy, revealed the deregulation of a certain number of genes including IGFBP2. The increased expression of this gene by malignant cells or their environment has a negative prognostic impact in many cancers. This protein modulates the bioavailability of IGF (Insulin-like Growth Factor) growth factors. It also exerts functions independent of IGFs. We associated excess IGFBP2 in the plasma of CMML patients with a poor prognosis. We have shown in liquid culture that this protein has limited effect on CD34+ cells but promotes the generation of monocytes with TREM2 (triggering receptor expressed on myeloid cells – 2) phenotype capable of generating immunosuppressive intratumoral macrophages. The analysis of genetically modified mice that we generated during the thesis will allow us to explore the impact of the soluble form of IGFBP2 on healthy and pathological hematopoiesis in vivo. Our work suggests that high concentrations of calprotectin contribute to the induction of anemia during a severe systemic inflammatory reaction while overproduction of IGFBP2 by bone marrow niche cells, a possible consequence of increased cellular senescence, could contribute to the severity of CMML by generating immunosuppressive macrophage precursors expressing TREM2
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Pennetier, Delphine. "Caractérisation moléculaire et fonctionnelle de la niche hématopoïétique de Drosophila melanogaster." Toulouse 3, 2011. http://thesesups.ups-tlse.fr/1503/.
Full textAbstract:
La drosophile possède un système immunitaire inné qui fait intervenir deux types de réponses, une réponse humorale et une réponse cellulaire. Cette dernière met en jeu des cellules spécialisées appelées hémocytes ou cellules " sanguines ". Les hémocytes sont formés au cours de deux vagues d'hématopoïèse lors du développement, une vague embryonnaire et une vague larvaire. Les mécanismes moléculaires contrôlant l'hématopoïèse embryonnaire sont relativement bien connus, alors que ceux contrôlant l'hématopoïèse larvaire restent à ce jour très succints. Au cours de ma thèse, j'ai étudié les mécanismes moléculaires mis en jeu au cours de l'hématopoïèse larvaire qui a lieu dans un organe spécifique appelé la glande lymphatique. (1) J'ai participé à l'étude du rôle de la voie de signalisation JAK/STAT au cours de l'hématopoïèse larvaire, en caractérisant un nouveau gène appelé latran, qui agit comme un dominant négatif de la voie JAK/STAT. La fonction de latran est requise uniquement à la suite d'un challenge immun pour inactiver la voie JAK/STAT dans la glande lymphatique, mettant en évidence un nouveau mode de régulation pour cette voie de signalisation (Makki et al. , 2010 ; résultats partie I). (2) J'ai d'autre part entrepris une analyse globale de transcriptomes à partir d'ARNs isolés à partir de glandes lymphatiques disséquées dans divers contextes génétiques et physiologiques. J'ai pu identifier et caractériser de nouveaux gènes impliqués dans l'hématopoïèse larvaire (manuscript en préparation ; résultats partie II). (3) La comparaison des différents transcriptomes a suggéré un rôle de la voie Dpp/BMP dans le contrôle de l'hématopoïèse larvaire. Ceci m'a conduit à m'intéresser au rôle de cette voie de signalisation dans l'hématopoïèse larvaire. La " niche " est un microenvironnement qui contrôle la différenciation et l'autorenouvellement des cellules souches hématopoïétiques. Récemment, notre laboratoire a montré qu'il existait une niche hématopoïétique dans la glande lymphatique appelé Posterior Signaling Center (PSC). J'ai montré que chez la drosophile, la voie de signalisation Dpp jouait un rôle clé dans le contrôle de la taille de la niche via le contrôle de l'expression du protooncogène dmyc. L'activation localisée de la voie Dpp dans le PSC est sous le contrôle du facteur de transcription collier. En 2003, il avait été montré que la voie BMP contrôle la prolifération de la niche hématopoïétique chez la souris (Zhang et al. , 2003). Ainsi, de façon très intéressante, mes résultats mettent en évidence la possibilité d'une conservation de la Drosophile aux mammifères des cascades moléculaires contrôlant la prolifération des cellules de la niche hématopoïétique (manuscrit soumis ; résultats partie III). Une question posée suite à mes résultats est de définir l'implication de Myc, Ebf2, l'orthologue de Col et les voies de signalisation Wnt et BMP dans le contôle de la taille de la niche hématopoïétique chez les mammifères<br>The fruit fly Drosophila melanogaster owns an immune system which consists in two different responses: the response and the cellular response. The cellular response required specialized cell types called hemocytes or "blood" cells. Hemocytes are specified during hematopoiesis which takes place in two waves during Drosophila development. The first wave occurs in the embryo while the second takes place at larval stages in a specific organ called the lymph gland. Molecular mechanisms controlling embryonic hematopoiesis are well known whereas those involved at larval stages are not known. During my PhD, I studied molecular mechanisms occurring during larval hematopoiesis. (1) I participated to the study of the role of the JAK/STAT signaling pathway during larval hematopoiesis. We characterized a new gene, called latran, which acts as a negative regulator of the pathway. Latran is required after an immune challenge to inactivate the JAK/STAT pathway, reaviling a new way to regulate this pathway (Makki and al. , 2010). (2) Secondly, I performed a transcriptome analysisusing RNAs isolated from dissected lymph glands in genetics and physiologic contexts. I identified and characterized new genes involved in larval hematopoiesis (manuscript in preparation). (3) Comparison of the different transcriptomes suggested a role of the Dpp/BMP signaling pathway in larval hematopoiesis. The "niche" is a microenvironment which controls the differentiation and the self-renewal of hematopoietic stem cells. Recently, our group identified a hematopoietic niche in Drosophila lymph gland called the Posterior Signaling Center (PSC). My data indicate that the Dpp pathway plays a key role in the control of PSC size via the regulation of the protooncogene dmyc expression. The localized activation of the Dpp pathway in the PSC is under the control of the transcription factor Collier (manuscript submitted). In 2003, it was shown in mouse that BMP pathway controls the proliferation of osteoblasts, one major component of the hematopoietic niche. My results highlight the very interesting possibility of the conservation, between Drosophila and mammals, of molecular cascades that control cell proliferation in the hematopoietic domain. A very challenging issue relates to the control of osteoblast proliferation in the osteoblastic niche and the potential implication of myc and links between BMP, Ebf2 (ortholog of Collier and Wnt signalling pathways in this process
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Nakache, Sandrine. "La cellule souche hématopoi͏̈étique." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1995PA05P156.
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Renard, Nathalie. "Étude in vitro du rôle des lymphocytes T sur la lymphopoïèse B humaine." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO1T008.
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Guyot, Boris. "Contrôle de l'expression de l'adaptateur moléculaire MONA (Monocytic adaptor) dans le système hématopoïétique humain." Lyon 1, 2002. http://www.theses.fr/2002LYO10079.
Full textAbstract:
La différenciation d'une cellule pluripotente s'accompagne de l'expression d'un programme génétique spécifique qui donne à la cellule mature toutes les caractéristiques propres à son lignage. L'hématopoièse est le processus qui conduit à la différenciation d'au moins huit lignages différents à partir d'une seule cellule souche, elle constitue donc un modèle intéressant pour l'étude du contrôle de l'expression des gènes spécifiques de lignage. Mona (Monocytic adapter) est un adaptateur moléculaire spécifiquement exprimé dans le système hématopoiétique. Ce travail décrit l'étude des mécanismes transcriptionnels et post-transcriptionnels de contrôle de l'expression de Mona. Les transcrits de Mona exprimés dans les cellules T et myéloides (transcrits 1A) sont différents de ceux exprimés dans les cellules mégacaryocytaires et les plaquettes (transcrits 1B) au niveau de leur 5'UTR mais ils ont la même séquence codante. Les transcrits 1A et 1B sont synthétisés à partir de deux promoteurs distincts, nommés 1A et 1B, qui sont respectivement spécifiques des lignages T et myélo-monocytaire, et du lignage mégacaryocytaire. La caractérisation du promoteur 1A montre que son activité dépend principalement du facteur de transcription AML-1 (Acute Myeloid Leukemia-1). La caractérisation du promoteur 1B montre qu'il est caractéristique des promoteurs mégacaryocytaires connus, son activité dépend en effet de facteurs de transcription des familles GATA et ETS. L'expression de Mona dans le lignage mégacaryocytaire dépend également d'un mécanisme post-transcriptionnel. En effet, la traduction de Mona à partir des transcrits 1B est inhibée par deux trames de lecture ouverte dans la 5'UTR 1B. Nos résultats suggèrent que l'inhibition de la traduction de Mona pourrait être levée au cours de l'activation des plaquettes. Alternativement, une isoforme de Mona produite après épissage alternatif du transcrit 1B pourrait être stabilisée par l'activation des plaquettes.
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Bridoux, Lucie. "Effet de l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases-1 (TIMP-1) dans les cellules érythroïdes normales et cancéreuses humaines. Caractérisation du récepteur." Reims, 2009. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00001015.pdf.
Full textAbstract:
En dehors de son activité inhibitrice de MMPs, le TIMP-1 présente d'autres activités biologiques telles que des effets mitogéniques et anti-apoptotiques sur différentes lignées cellulaires. Nous avons montré que le TIMP-1 induit la survie des cellules érythroleucémiques humaines UT-7 en activant la voie JAK2/PI 3-kinase/Akt. Récemment, nous avons montré que le TIMP-1 se fixe à une pro-MMP-9 localisée à la membrane plasmique des cellules UT-7 et que l'expression membranaire de la pro-MMP-9 est nécessaire à l'effet anti-apoptotique du TIMP-1. Dans une première partie, nous montrons que CD44 permet l'ancrage de la pro-MMP-9 à la surface cellulaire et que cette protéine joue un rôle crucial dans l'effet anti-apoptotique du TIMP-1 puisque si l'on éteint l'expression de CD44, la pro-MMP-9 n'est plus localisée à la surface cellulaire et le TIMP-1 n'est plus capable d'induire la survie cellulaire. Dans la signalisation anti-apoptotique du TIMP-1, JAK2 est la première tyrosine kinase qui est phosphorylée suite à une stimulation par le TIMP-1. Dans une deuxième partie, nous avons étudié l'interaction entre CD44 et la tyrosine kinase JAK2. Nous montrons que CD44 est associée de manière constitutive à JAK2 et que cette interaction se fait via le domaine FERM de JAK2. D'autres kinases pourraient intervenir dans la signalisation anti-apoptotique du TIMP-1, parmi lesquelles les Src kinases. Dans une troisième partie, nous avons étudié l'implication de la Src kinase Lyn dans l'effet anti-apoptotique du TIMP-1. Nous montrons que la Src kinase Lyn joue un rôle crucial dans l'effet anti-apoptotique du TIMP-1 en amont de la PI 3-kinase<br>Besides its ability to inhibit MMP activity, TIMP-1 exhibits other biological functions such as mitogenic and anti-apoptotic effects on various cell lines. We showed that TIMP-1 induced UT-7 erythroid cell survival through activation of the JAK2/PI 3-kinase/Akt pathway. Recently, we showed that TIMP-1 specifically bound to pro-MMP-9 localized at the UT-7 plasmic membrane and that pro-MMP-9 membrane expression is crucial for TIMP-1 anti-apoptotic effect. In a first part, we showed that CD44 anchored pro-MMP-9 at the cell surface and that this protein played a crucial role in TIMP-1 anti-apoptotic effect since CD44 silencing abrogated pro-MMP-9 cell surface localisation and enabled TIMP-1-mediated cell survival. In TIMP-1 anti-apoptotic signalling pathway, JAK2 is the first tyrosin kinase phosphorylated following TIMP-1 stimulation. In a second part, we studied the interaction between CD44 and tyrosin kinase JAK2. We showed that CD44 is associated in a constitutive manner to JAK2 via the JAK2 FERM domain. Other kinases could be implicated in TIMP-1 anti-apoptotic pathway, among them the Src kinases. In a third part, we studied the implication of Lyn Src kinase in TIMP-1 effect. We showed that Lyn played a crucial role in TIMP-1 anti-apoptotic effect upstream the PI 3-kinase
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Anginot, Adrienne. "Interconnectivités entre le tissu hématopoïétique et le tissu osseux : implications dans l'homéostasie osseuse." Lyon, École normale supérieure (sciences), 2006. http://www.theses.fr/2006ENSL0365.
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Farace, Françoise. "Caractérisation de nouveaux antigènes de surface des cellules hématopoïétiques humaines à l'aide d'anticorps monoclonaux produits contre la lignée cellulaire leucémique K562." Paris 6, 1988. http://www.theses.fr/1988PA066232.
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James, Chloé. "Bases moléculaires des syndromes myéloprolifératifs non-LMC. Etude du compartiment des cellules souches hématopoïétiques." Bordeaux 2, 2008. http://www.theses.fr/2008BOR21543.
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Gauvrit, Sébastien. "Rôle de l'ARN interférence dans le contrôle épigénétique de la séparation veino-lymphatique et de l'hématopoïèse." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066297.
Full textAbstract:
L’ARN interférence est un mécanisme de régulation de l’expression des gènes, modulé par des ARN non-codants de 20 à 22 nucléotides affectant la régulation post-transcriptionnelle d’ARNm cibles avec lesquels ils s’apparient. La RNase Dicer est une enzyme centrale de la biosynthèse des siARNs et microARNs. Les souris dont le gène dicer est invalidé meurent très tôt pendant le développement, notamment à cause d'un défaut d’angiogenèse. Nous avons développé une lignée murine dont la délétion de dicer est conditionnelle (allèle floxé) par l’expression constitutive d’une recombinase sous le contrôle du promoteur du gène tie2. Nos résultats démontrent que l’invalidation de dicer dans les cellules qui expriment tie2 entraîne une mortalité embryonnaire suite à un œdème et des vaisseaux lymphatiques remplis de sang vers 14,5 jours de gestation (jdg). Ceci nous a amené à analyser le développement de l’hématopoïèse. Il a été démontré que les cellules hématopoïétiques notamment les mégacaryocytes interviennent lors de la séparation veino-lymphatique. Tie2 est exprimé de manière précoce au niveau des ilôts sanguins à la fois par les cellules endothéliales et par les cellules hématopoïétiques. L’analyse de l’hématopoïèse des embryons invalidés pour dicer a montré une atteinte drastique de la production des précurseurs hématopoïétiques au cours de l’hématopoïèse extra-embryonnaire à 8,5 jdg et au cours de l’hématopoïèse intra-embryonnaire à 10,5 jdg jusqu'au développement ultérieur, au niveau du foie foetal (10. 5-13. 5 jdg). Nos résultats démontrent donc le rôle crucial de l’ARN interférence lors de la séparation veino-lymphatique mais également lors de la mise en placede l’hématopoièse
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Chen, Aichun. "Regulation of lozenge transcription factor activity and blood cell development by MLF and its partner DnaJ-1." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30064/document.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est le processus de formation des cellules sanguines différenciées à partir de cellules souches hématopoïétiques. Ce processus est étroitement contrôlé par l'intégration de signaux de développementaux et homéostatiques pour assurer une production équilibrée des différents types de cellules sanguines. Au niveau moléculaire, la régulation de ce processus est médiée par un certain nombre de facteurs de transcription, en particulier par les membres de la famille RUNX. Ainsi, des mutations affectant les membres de cette famille peuvent entrainer une déréglementation du programme de différenciation hématopoïétique et causer des hémopathies, dont des leucémies. D'une manière intrigante, de nombreux régulateurs de la transcription et des voies de signalisation contrôlant le développement des cellules sanguines sont évolutivement conservés des humains à Drosophila melanogaster, qui est donc utilisée comme organisme modèle pour étudier les mécanismes sous-jacents à la spécification des lignages sanguins et au contrôle de l'homéostasie des cellules sanguines. Les membres de la famille Myeloid Leukemia Factor (MLF) ont été impliqués dans l'hématopoïèse et dans la transformation oncogénique des cellules sanguines, mais leur fonction et leur mécanisme d'action moléculaire restent insaisissables. Des travaux précédents chez la Drosophile ont montré que MLF stabilise le facteur de transcription de type RUNX Lozenge (LZ) et contrôle le nombre de cellules sanguines LZ+. Au cours de ma thèse, j'ai cherché à déchiffrer le mécanisme moléculaire d'action de MLF sur Lozenge dans les cellules sanguines. Par une approche protéomique puis par des expériences de co-immunoprécipitation dans les cellules de Drosophile Kc167, nous avons identifié le co-chaperon de type Hsp40 DnaJ-1, et son partenaire le chaperon Hsc70-4, comme deux partenaires de MLF. De façon importante, nous avons montré que l'inhibition de l'expression de DnaJ-1 ou de Hsc70-4 dans les cellules Kc167 induit une réduction du niveau de protéine Lozenge et une diminution de sa capacité à activer la transcription très semblable à celles observées suite à l'inhibition de l'expression de MLF. De plus, la sur-expression de mutants de DnaJ-1 incapables d'activer le chaperon Hsc70-4 entraîne aussi une réduction du niveau de Lozenge et de sa capacité de transactivation et des expériences de coimmunoprécipitation montrent que Lozenge interagit avec MLF, DnaJ-1 et Hsc70-4. Nos résultats suggèrent donc que MLF agit au sein d'un complexe chaperon composé de DnaJ-1 et Hsc70-4 pour contrôler le niveau de Lozenge. En utilisant différents mutants de MLF ou DnaJ-1, nous avons montré que MLF et DnaJ-1 interagissent ensemble et avec Lozenge via des domaines phylogénétiquement conservés. D'autre part, des expériences de GST " pull down " in vitro suggèrent que ces trois protéines peuvent interagir ensemble directement. Nous proposons donc que MLF et DnaJ-1 contrôlent le niveau de protéine Lozenge en interagissant avec elle et en favorisant son repliement et/ou sa solubilité via l'activité chaperon de Hsc70-4. En parallèle, nous avons étudié la fonction de DnaJ-1 in vivo dans le développement des cellules sanguines de la Drosophile. Nos résultats montrent que, comme mlf, la perte de dnaj-1 s'accompagne d'une augmentation de la taille et du nombre des cellules sanguines LZ+, ainsi que d'une hyperactivation de la voie de signalisation Notch dans ces cellules. Nos résultats suggèrent que des hauts niveaux de Lozenge sont nécessaires pour contrôler le nombre et la taille des cellules LZ+ et pour inhiber l'expression de Notch. Nous proposons que le complexe MLF/DnaJ-1 contrôle le développement du lignage LZ+ en régulant le niveau de protéine Lozenge, et ainsi le niveau d'activité de la voie Notch. En conclusion, nos résultats ont mis à jour un lien fonctionnel entre MLF, le co-chaperon de type Hsp40 DnaJ-1 et un facteur de transcription de type RUNX, qui pourrait être conservé dans d'autres espèces<br>Hematopoiesis is the process of formation of fully differentiated blood cells from hematopoietic stem cells (HSCs). This process is tightly controlled by the integration of developmental and homeostatic signals to ensure the generation of an appropriate number of each blood cell type. At the molecular level, the regulation of this developmental process is mediated by a number of transcription factors, especially by members of the RUNX family, and mutations affecting these factors are at the origin of numerous hemopathies, including leukemia. Intriguingly, many transcriptional regulators and signaling pathways controlling blood cell development are evolutionarily conserved from humans to Drosophila melanogaster. Hence, the fruit fly has become a potent and simplified model to study the mechanisms underlying the specification of blood cell lineages and the regulation of blood cell homeostasis. Members of the Myeloid Leukemia Factor (MLF) family have been implicated in hematopoiesis and in oncogenic blood cell transformation, but their function and molecular mechanism of action remain elusive. Previous work in Drosophila showed that MLF stabilizes the RUNX transcription factor Lozenge (LZ) and controls the number of LZ+ blood cells. During my PhD, I sought to further decipher the molecular mechanism of action of MLF on Lozenge during blood cell development. Using a proteomic approach in Drosophila Kc167 cells, we identified the Hsp40 co-chaperone family member DnaJ-1 and its chaperone partner Hsc70-4 as two partners of MLF. These interactions were confirmed by co-immunoprecipitations and in vitro pull-down assays. Importantly, we found that knocking down DnaJ-1 or Hsc70-4 expression in Kc167 cells caused a reduction in the level of Lozenge protein and a concomitant decrease in Lozenge transactivation activity, which were very similar to those caused by MLF knock-down. Similarly, over-expression of two DnaJ-1 mutants that are unable to stimulate the chaperone activity of Hsc70-4 also decreased Lozenge level and impaired its capacity to activate transcription. These results suggest that MLF could act within a chaperone complex composed of DnaJ-1 and Hsc70-4 to control Lozenge stability and activity. Along that line, we showed by co-immunoprecipitation that Lozenge interacts with MLF, DnaJ-1 and Hsc70-4, respectively. Using various truncated mutants of MLF or DnaJ-1, we showed that MLF and DnaJ-1 interact and together with Lozenge through their conserved MLF homology domain (MHD) and C-terminal region, respectively. Furthermore, in vitro GST pull-down assays suggested that the interactions between MLF, DnaJ-1 and Lozenge are direct. Thus, we propose that MLF and DnaJ-1 control Lozenge protein level by interacting with it and by promoting its folding and/or solubility via the Hsc70 chaperone machinery. In parallel, we assessed DnaJ-1 function in Drosophila blood cells in vivo using a null allele of dnaj-1 generated by CRISPR/Cas9 technique. We found that, like mlf, dnaj-1 mutation leads to an increase in the number and size of LZ+ blood cells, as well as to an over-activation of the Notch signaling pathway in these cells. Moreover, our data suggested that high levels of active Lozenge are required to control the number and size of LZ+ blood cells, and to down-regulate Notch expression. We propose that the MLF/DnaJ-1 complex controls LZ+ blood cell development in vivo by regulating Lozenge protein level/activity and thereby Notch pathway activation. In sum, our results establish a functional link between MLF, the Hsp40 co-chaperone DnaJ-1 and the RUNX transcription factor Lozenge, which could be conserved in other species
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Cuminetti, Vincent. "Etude de l'activité hématopoïétique du tissu adipeux chez la souris et l'homme." Thesis, Toulouse 3, 2017. http://www.theses.fr/2017TOU30154/document.
Full textAbstract:
Le tissu adipeux (TA) contient un grand nombre de leucocytes qui jouent un rôle fondamental dans la régulation de l'activité métabolique du TA. Chez l'individu sain, les leucocytes du TA ont un profil majoritairement anti-inflammatoire (macrophages M2, polynucléaires éosinophiles, lymphocytes T CD4 Th2 et T régulateurs). Chez le sujet obèse, on observe une modification des populations immunitaires vers un phénotype majoritairement pro-inflammatoire (macrophages M1, polynucléaires neutrophiles, lymphocytes T CD8 et T CD4 Th1). Cet état inflammatoire participe au développement du syndrome métabolique. Chez l'adulte, les leucocytes circulants sont principalement produits dans la moelle osseuse (MO) par des cellules souches hématopoïétiques (CSH). Notre équipe a montré qu'une partie des leucocytes du TA sont produits in situ grâce à la présence de CSH tissulaires spécifiques, dont l'activité hématopoïétique diffère selon le dépôt adipeux. Ce résultat suggère que les CSH du TA pourraient être contrôlées par leur niche, comme c'est le cas dans la MO. Considérant le rôle prépondérant des leucocytes dans la physiopathologie du TA et le rôle des CSH dans ce tissu, les objectifs de cette thèse ont été les suivants : 1) Caractériser le rôle de l'hématopoïèse du TA dans le développement des maladies métaboliques. 2) Caractériser d'un point de vue cellulaire et moléculaire la niche des CSH du TA et la régulation de leur activité par cet environnement. 3) Mettre en évidence et caractériser l'activité hématopoïétique du TA chez l'homme. Concernant le premier objectif, nos résultats montrent que dans un modèle de diabète induit par un régime riche en gras, les CSH du TA produisent des macrophages pro- inflammatoires ayant un rôle direct dans le développement des altérations de l'homéostasie glucidique. La greffe de CSH du TA issues d'une souris diabétique dans une souris maintenue sous régime standard induit le transfert de la pathologie. Inversement, la greffe de CSH de TA d'une souris saine dans une souris diabétique améliore le phénotype métabolique. Concernant le second objectif, nous montrons que les CSH du TA se localisent préférentiellement dans le cœur du TA sous-cutané, région principalement composée d'adipocytes beiges, alors que la périphérie, constituée d'adipocytes blancs uniloculaires héberge moins de CSH. L'activation ou l'inhibition des adipocytes beiges diminue la quantité de CSH au cœur du tissu, montrant qu'un déséquilibre du métabolisme des adipocytes beiges a un impact sur les CSH, suggérant que ces adipocytes pourraient alors faire partie d'une niche hématopoïétique. Les approches in vitro ne nous ont pas permis d'aller plus loin dans la caractérisation des acteurs cellulaires et/ou moléculaires de cette niche. Concernant le troisième objectif, nous montrons pour la première fois la présence de CSH dans le TA chez l'homme. La fonctionnalité de ces CSH a été testée in vitro et in vivo. En culture en milieu semi-solide, les CSH de TA humain sont capables de donner des clones myéloïdes, comme chez la souris. In vivo, chez des souris immuno-déficientes reconstituées avec des CSH de TA humain, on retrouve des cellules immunitaires humaines dans le tissu adipeux, ce qui démontre leur capacité à reconstituer une partie du système immunitaire de ce tissu. En conclusion, ce travail de thèse a permis de montrer que l'activité hématopoïétique du TA joue un rôle crucial dans le maintien de la balance énergétique. Les CSH du TA résideraient préférentiellement dans une niche localisée au cœur du tissu, composée d'adipocytes beiges. La caractérisation des signaux moléculaires présents dans les différentes zones du TA permettra de proposer de nouvelles hypothèses sur la régulation de l'activité des CSH du TA. Chez l'homme, notre travail a permis de mettre en évidence une hématopoïèse tissulaire endogène au tissu adipeux, renforçant ainsi l'importance physiopathologique de nos précédents résultats obtenus chez la souris<br>The adipose tissue (AT) contains a lot of leukocytes that play a fundamental role in the regulation of AT metabolic activity. In a physiological situation, AT-leukocytes mostly display an anti-inflammatory profile (M2 macrophages, eosinophils, CD4 Th2 T cells and regulatory T cells). Obesity induces a shift in AT immune cells towards a pro-inflammatory phenotype (M1 macrophages, neutrophils, CD8 and CD4 Th1 T cells). This inflammatory state contributes to the development of the metabolic syndrome. In adults, circulating leukocytes are mostly produced in the bone marrow (BM) by hematopoietic stem cells (HSC). A few years ago, we have shown AT harbors a specific resident HSC population that can renew innate immune cells and especially macrophages in the AT, via in situ differentiation. This endogenous hematopoietic activity differs according to the localization of the fat pad, suggesting that like BM-HSC, AT HSC might be controlled by their environment. Considering the important role of leukocytes in the AT physiopathology and the role of resident HSC in this tissue, the objectives of this work were the followings: 1) To characterize the role of the AT hematopoiesis in the onset of metabolic diseases. 2) To characterize the AT HSC niche from a cellular and a molecular point of view, and the regulation of their activity by this environment. 3) To demonstrate the presence of an endogenous AT-hematopoiesis in humans. First, by using transplantation of sorted AT-HSC and gain and loss of function studies we showed that some of the inflammatory AT-macrophages inducing metabolic disease originate from resident AT-HSC. Transplantation of AT-HSC sorted from high fat diet-fed (HFD) mice is sufficient to induce AT-macrophage accumulation, and to transfer metabolic disease in control mice. Conversely, the transplantation of control AT-HSC improves both AT-inflammation and glucose homeostasis in HFD mice. Second, we showed that AT-HSC are preferentially localized in the core of sub-cutaneous AT that contains beige adipocytes, instead of the periphery that mostly harbors unilocular white adipocytes. Activation or inhibition of beige adipocytes induces a loss of this preferential localization, suggesting that modifications of the subcutaneous AT core region metabolism impact HSC behavior. This suggests that beige adipocytes might be a part of a hematopoietic niche in the AT. However, we were unable to characterize the cellular and/or molecular constituants of this niche. Finally, we showed for the first time that as in mice, human AT contains resident HSC. In methylcellulose semi-solid medium, human AT-HSC are able to produce myeloid clones. In vivo, after transplantation of human AT-HSC in immunodeficient mice, human immune cells are observed in the AT. These results show that human AT exhibit a functional endogenous hematopoietic activity. Altogether, we show in this study that the AT hematopoietic activity plays a crucial role in the control of energy balance. Although AT HSC are localized preferentially at the vicinity of beige adipocytes, molecular signals controlling this population remain to be characterized. Finally, we demonstrate for the first time an endogenous hematopoiesis in human AT, highlighting the physiopathological importance of our previous results obtained in mice
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Moussalem, Douaa. "Functional characterization of alternative splice variants of the Drosophila GATA transcription factor serpent containing either one or two zinc finger domains." Thesis, Toulouse 3, 2020. http://www.theses.fr/2020TOU30138.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcription GATA jouent un rôle crucial dans divers processus de développement chez les animaux bilatéraux. Chez les mammifères, six facteurs GATA sont présents et ils jouent des rôles essentiels dans différents tissus tels que le sang, l'intestin, le foie et les gonades. Les protéines GATA possèdent deux domaines hautement conservés, les doigts de zinc N-terminal et C-terminal. Le doigt C-terminal reconnaît le motif consensus de liaison à l'ADN GATA, tandis que le doigt N-terminal stabilise la fixation aux séquences palindromiques d'ADN et permet leur interaction avec les cofacteurs de la famille Friend Of GATA (FOG). Les mutations des doigts de zinc GATA sont associées à un vaste éventail de maladies humaines dont la gravité dépend du gène GATA affecté et de la position de la mutation dans les doigts de zinc. De nombreuses études ont démontré le haut niveau de similarités moléculaires et fonctionnelles existant entre les mouches et les humains. La drosophile possède cinq facteurs GATA contenant un ou deux doigts de zinc, dont les séquences sont presque identiques à celles des doigts de zinc canoniques des vertébrés. Parmi eux, le facteur GATA de la drosophile Serpent (Srp) est requis pour la formation des cellules sanguines, de l'intestin et du corps gras ainsi que pendant l'ovogenèse. Dans tous ces tissus, deux isoformes de Srp sont générées par un événement d'épissage alternatif donnant naissance à des protéines contenant soit les deux doigts de zinc (N- et C-terminal, d'où le nom de cette isoforme : SrpNC) ou uniquement le doigt de zinc C-terminal (SrpC). Dans un travail précédent, notre équipe a montré que SrpC et SrpNC activent certains gènes cibles de manière similaire mais aussi elles en régulent d'autres différemment. En plus, l'interaction entre SrpNC et son cofacteur FOG, U-shaped, est responsable de certaines mais pas de toutes les activités distinctes de SrpC et SrpNC. Le but de cette étude est de fournir une investigation génétique approfondie des rôles fonctionnels différentiels possibles des isoformes Srp au cours du développement de la drosophile. En utilisant la technologie CRISPR/Cas9, nous avons généré deux lignées de mouches mutantes invalidées soit pour SrpC ou pour SrpNC. En outre, nous avons produit une troisième lignée de mouche mutante dans laquelle nous avons spécifiquement introduit dans le doigt de zinc N-terminal de Srp une mutation ponctuelle qui modifie son interaction avec U-shaped. L'analyse de ces mutants a révélé que les deux isoformes régulent d'une manière redondante la transcription d'un ensemble commun de gènes au cours du développement intestinal ainsi que de quelques gènes impliqués dans l'hématopoïèse précoce.[...]<br>GATA transcription factors play crucial roles in various developmental processes throughout bilaterian animals. In mammals, six GATA factors are present and they play essential functions in different tissues such as the blood, the gut, the liver and the gonads. GATA proteins have two highly conserved domains, the N-terminal and the C-terminal zinc fingers. The C-terminal finger recognizes GATA DNA-binding consensus motif, while the N-terminal finger stabilizes fixation to DNA palindromic sequences and allows their interaction with cofactors of the Friend Of GATA (FOG) family. GATA zinc finger mutations are associated to a vast panel of human diseases whose severity depends on the affected GATA gene and on the position of the mutation in the zinc fingers. Numerous studies have demonstrated the high level of molecular and functional similarities existing between flies and humans. Drosophila melanogaster has five GATA factors containing either one or two zinc fingers, whose sequences are almost identical to those of the canonical zinc fingers of vertebrates. Among them, the Drosophila GATA factor Serpent (Srp) is required for the formation of blood cells, gut and fat body as well as during oogenesis. In all these tissues, two isoforms of Srp are generated through an alternative splicing event giving rise to proteins containing either both zinc fingers (N- and C-terminal, hence the name of this isoform: SrpNC) or only the C-terminal zinc finger (SrpC). In a previous work, our team has shown that SrpC and SrpNC activate some genes in a similar manner but also they regulate others differently. Moreover, interaction between SrpNC and its cofactor FOG, U-shaped, is responsible for some but not all aspects of the distinct activities of SrpC and SrpNC. The purpose of this study is to provide a deep genetic investigation of possible differential functional roles of Srp isoforms during Drosophila development. Using CRISPR/Cas9 technology, we generated two mutant fly lines deleted either of SrpC or of SrpNC. In addition, we produced a third mutant fly line in which we specifically introduced into the N-terminal zinc finger of Srp a single point mutation that alters its interaction with U-shaped. Analysis of these mutants revealed that both isoforms regulate redundantly the transcription of a common set of genes during gut development as well as few genes involved during early hematopoiesis. Surprisingly, flies devoid of SrpNC (isoform containing two-zinc fingers as the mammalian GATA factors) are viable, showing that this isoform is dispensable for most of the developmental processes controlled by Srp. [...]
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Cabon, Lauriane. "Implication d'AIF dans la mort cellulaire et la physiologie mitochondriale : exemples dans la nécroptose intrinsèque et l'hématopoïèse." Thesis, Paris 6, 2014. http://www.theses.fr/2014PA066314/document.
Full textAbstract:
AIF fait partie des protéines mitochondriales inductrices de mort mais possède aussi un rôle vital nécessaire à la respiration cellulaire. Les recherches menées lors de cette thèse portent sur ces deux fonctions. D'une part, j'ai approfondi l'étude de la nécrose régulée induite par un agent alkylant de l'ADN. J'ai découvert l'importance de RIP1 dans cette voie de mort cellulaire et ainsi conduit à la définir comme nécroptose. J'ai aussi mis en évidence le rôle de BID, BH3-only de la famille BCL-2, dans la libération d'AIF des mitochondries. J'ai montré que les protéases calpaïnes clivaient BID permettant à sa forme tronquée de relocaliser aux mitochondries et d'y activer le facteur pro-apoptotique BAX. Cette étude contribue à replacer le rôle des BH3-only dans des voies de mort cellulaire au delà de l'apoptose. D'autre part, j'ai étudié le rôle d'AIF dans l'hématopoïèse grâce à un modèle murin invalidé pour AIF dans ce système. J'ai observé un blocage de différenciation thymique et le développement d'une pancytopénie sévère. J'ai démontré que cette dernière est associée à la perte des cellules souches hématopoïétiques dont j'ai testé les capacités ex vivo et in vivo. Pour comprendre les raisons de ce défaut, j'ai caractérisé les conséquences associées à la perte d'AIF : perte du complexe I de la chaine respiratoire, diminution d'activité de phosphorylation oxydative, diminution de la production d'ATP, augmentation des espèces réactives de l'oxygène. Cette deuxième étude démontre l'importance d'une phosphorylation oxydative fonctionnelle et de mitochondries saines pour une hématopoïèse normale et particulièrement pour le maintien des cellules souches hématopoïétiques<br>AIF is one of the cell death effectors released from mitochondria but it also possess a vital role by regulating the cellular respiration. Throughout this thesis work, I have focused my studies on these two functions. On one hand, I have performed a deeper characterization of the DNA alkylating agent induced regulated necrosis. I have identified RIP1 as a crucial determinant of this cell death pathway, hence linking it to necroptosis. I have also highlighted the role of BID, a BH3-only member of the BCL-2 family, in the mitochondrial release of AIF. I have shown that calpains proteases cleave BID into tBID which relocalize to mitochondria where it helps activating the pro-apoptotic factor BAX. This study contributes to reconsider the role of BH3-only proteins in cell death pathways beyond apoptosis. On the other hand, I have studied AIF role in hematopoiesis thanks to a mouse model with hematopoietic lineage-specific deletion of AIF. I have observed a block in T-cell development and the rapid development of severe pancytopenia. I have demonstrated that this pancytopenia is associated with the loss of hematopoietic stem cells whom capacities were tested both ex vivo and in vivo. In order to understand the underlying determinants of these defects, I have characterized the cellular consequences related to AIF deletion : loss of the respiratory chain complex I, decrease of the oxidative phosphorylation capacity, decreased levels of ATP, increased levels of reactive oxygen species. This second study reveals the importance of a proper oxidative phosphorylation system combined with healthy mitochondria for a normal hematopoiesis and hematopoietic stem cells maintenance
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Fardoun, Dina. "Hématopoïèse humaine : effets positifs des cellules NK stimulées à l'IL-2 et à l'IL-12 sur la croissance des progéniteurs myéloïdes." Rouen, 1994. http://www.theses.fr/1994ROUES019.
Full textAbstract:
Les cellules NK sont des grands lymphocytes granuleux. Le marqueur qui permet de les distinguer est le CD56. Ces cellules représentent 15% à 20% des cellules mononucléées du sang périphérique. L'absence de cellules NK affecte la croissance des progéniteurs myéloïdes. L'addition de facteurs de croissance (IL-3, GM-CSF) ou de cellules NK permet de restaurer la croissance antérieure des progéniteurs hématopoïétiques. Lorsque les cellules NK sont ajoutées en grand nombre, une diminution du nombre de colonies a été observée. Les cellules NK ont une activité double. Elles sont capables de stimuler la croissance des progéniteurs myéloïdes car elles secrètent des facteurs de croissance. Par un effet direct ou indirect, elles inhibent la croissance de ces mêmes progeniteurs. L'IL-12 a été décrite comme un facteur stimulant la croissance des cellules NK. L'IL-12 seule n'augmente pas le nombre de progéniteurs hématopoïétiques. Ajoutée à l'IL-3, elle stimule la prolifération des progéniteurs érythroïdes et myéloïdes. Cependant, elle ne rehausse pas les effets de l'IL-6 et du GM-CSF. L'activation des cellules NK par l'IL-12 n'augmente pas significativement le nombre de colonies en culture. Les cellules NK activées par l'IL-2 et l'IL-12 stimulent la croissance des progéniteurs myéloïdes et érythroïdes. Cette augmentation observée est due à une sécrétion d'IL-3 et de GM-CSF par les cellules NK. L'IL-3 est en partie responsable de ladite stimulation. L'IL-12 renforce l'action positive de l'IL-2 vis-à-vis des progéniteurs hématopoïétiques. L'IL-12 augmente l'activité cytolytique des cellules NK mais avec une efficacité moindre que l'IL-2
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Chevalier, Anne Sophie. "Utilisation thérapeutique du G-CSF et du GM-CSF en hématologie." Paris 5, 1993. http://www.theses.fr/1993PA05P248.
Full text
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Malerba, Ilaria. "Hematopoi͏̈èse et toxicologie : optimisation et développement des méthodes in vitro pour étudier les effets des toxiques sur l'hématopoi͏̈èse humaine et murine." Brest, 2004. http://www.theses.fr/2004BRES2027.
Full textAbstract:
Due à son " turn-over " rapide, le système hématopoi͏̈étique est une cible privilégiée pour la toxicité des xénobiotiques. Le but de ce travail a été l'optimisation des protocoles de tests in vitro d'étude en l'hématotoxicité et myélotoxicité, afin de les rendre plus fiables, reproductibles, et peu onéreux et, en même temps, de réduire l'utilisation des animaux de laboratoire. Les protocoles des tests clonogéniques in vitro ont d'abord été perfectionnés chez l'homme, transférés chez la souris et miniaturisés pour réduire les coûts. On a utilisé les cultures long-terme de moelle osseuse qui ont permis de mieux comprendre le rôle du microenvironnement. La caractérisation approfondie de la moelle osseuse humaine a permis d'aboutir à la définition de nouveaux end-points pour étudier l'hématotoxicité et deux nouvelles lignées cellulaires, dérivant de souris transgéniques, ont été utilisées comme modèle pertinent pour clarifier le rôle des cytokines dans les désordres lymphoprolifératifs<br>Due to its rapid turnover, the hemopoietic tissue is a sensitive target for xenobiotic toxicity. The aim of the work presented, was protocol optimisation of in vitro tests for hematotoxicity and myelotoxicity, in order to make them more reliable, reproductible and less costly, and to reduce the use of animals. In vitro clonogenic assays were first optimised using human models, then transferred to the murine model and miniaturised for cost reducing. Bone marrow long-term cultures were used to better understand the microenvironnment role. Moreover, human bone marrow characterisation gave rise to new end-points for evaluating hematotoxicity, such as telomerase activity. The study of in vitro model for hematopoietic system is still undergoing development. Two new cellular lines, from transgenic mouse lineage were employed as a useful model for clarifying cytokine role in lymphoproliferative disorders
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Lempereur, Aveline. "Etude de la voie TGFβ/BMP au cours de l'hématopoïèse embryonnaire aortique chez les vertébrés amniotes". Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066539.
Full textAbstract:
Le système hématopoïétique est composé de nombreux types cellulaires, tous générés à partir d’un seul type de cellule, la cellule souche hématopoïétique (CSH). Les premières CSH sont produites dans le sac vitellin, puis dans la région aortique. Ce dernier site hématopoïétique est particulièrement important, car c’est là que sont générées les CSH retrouvées chez l’adulte. Les CSH aortiques sont produites à partir de l’endothélium aortique ventral. Les cellules endothéliales (CE) subissent un changement phénotypique radical. Elles perdent leur morphologie et leurs marqueurs endothéliaux, pour acquérir une identité hématopoïétique, et émerger dans la lumière aortique sous forme de clusters hématopoïétiques. Au cours de ma thèse je me suis intéressée aux signaux régulant l’hématopoïèse aortique et la transition endothélio-hématopoïétique. Cela m’a conduit à étudier la voie TGFβ/BMP. L’étude systématique des différents acteurs de cette voie nous a permis de montrer que les Smads 1/5/8 sont activées dans les CE, mais pas dans les clusters hématopoïétiques. Notre hypothèse, basée sur le niveau d’expression des différents récepteurs de cette signalisation, est que les récepteurs Alk1/TgfβR2/Endogline sont responsables de cette activation des Smads, et que leur perte est nécessaire à la production de cellules hématopoïétiques à partir de CE<br>Hematopoietic system is composed of many cell types, all generated from one cell type, the hematopoietic stem cell (HSC). The firs HSC are produced in the yolk sac, then in the aortic region. The adult HSC are generated in this last hematopoietic site. Aortic HSC are produce from ventral aortic endothelium. The endothelial cells (ECs) undergo a radical modification of their phenotype. They loose theirs endothelial markers, acquire a hematopoietic identity, and emerge in the aortic lumen in the shape of clusters. During my PhD, I study the signaling pathways regulating hematopoiesis and the endothelium to hematopoietic transition. I focus on the TGFβ/BMP pathway. The systematic study of all this pathway actors shows that Smads 1/5/8 are activated in the ECs, but not in hematopoietic clusters. Our hypothesis, based on the level of expression of all TGFβ/BMP receptors, is that Alk1/TgfβR2/Endogline are responsive for the Smads activation, and their loss in necessary to the hematopoietic production in the aorta from ECs
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Le, Clech Mikaël. "Caractérisation d'un élément répresseur du gène TAL-1 dans le tissu hématopoi͏̈étique." Montpellier 2, 2004. http://www.theses.fr/2004MON20138.
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Ubeda, Jean-Michel. "Les cellules sanguines de drosophile : Etude transcriptionnelle et analyse génétique de leur réponse à une infection parasitaire." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2005. https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2005/UBEDA_Jean-Michel_2005.pdf.
Full textAbstract:
Les cellules sanguines de drosophile, appelées hémocytes, sont de trois types : les plasmatocytes sont les phagocytes professionnels, les cellules à cristaux sont impliquées dans les réactions de mélanisation, et les lamellocytes sont impliqués dans les réactions d’encapsulement des parasites. Dans un premier projet, nous avons analysé les activités transcriptionnelles des hémocytes de la drosophile, ainsi que suite à une infection bactérienne, par la technique des puces à ADN Affymetrix. Nous avons ainsi mis en évidence certains points importants du processus d’encapsulement. Un rôle signal des hémocytes, primordial pour le déclenchement de la réponse immunitaire, a été établi. Le transcriptôme des hémocytes est un outil qui servira de base aux études futures concernant les hémocytes de drosophile. Mon projet principal fut consacré au transactivateur Collier (Col) dans l’hématopoïèse larvaire de la drosophile. Col est l’unique orthologue de EBF, un facteur impliqué dans la différenciation des lymphocytes B chez les mammifères. Nous avons montré que Col est indispensable à la différenciation des lamellocytes. Col est exprimé chez l’embryon, dans les cellules qui vont former l’organe hématopoïétique. Au cours de la vie larvaire, col reste exprimé dans un centre signalisateur de l’hématopoïèse. Nous proposons que le facteur Col confère la compétence à répondre à un signal informatif émis par les plasmatocytes suite à l’infection parasitaire. Dans notre modèle, ces cellules émettent alors un signal S2 vers les prohémocytes pour déclencher la différenciation des lamellocytes. Nous avons ensuite identifié le gène CG14225 qui code une protéine transmembranaire homologue du récepteur gp130 des mammifères. Notre analyse fait de ce gène un bon candidat pour coder le récepteur de S2. J’ai développé deux approches pour générer un mutant nul pour CG14225. La lignée mutante nous permettra de conclure sur l’implication de ce gène dans les processus hématopoïétiques de la drosophile<br>Drosophila have three blood cells (or hemocytes) types: plasmatocytes are professional phagocytes, crystal cells are involved in melanization reactions that accompanies immune defenses, and lamellocytes ensure parasites encapsulation. In a first project, we studied the transcriptional profiling of activities of distinct hemocyte populations and from naïve or infected larvae, using Affymetryx microarray. One outcome was the gain of new insights into the lamellocyte encapsulation process. A second compelling observation is that, after an immune challenge, Drosophila hemocytes produce a signal molecule that is essential to induce the immune reactions. The establishment of the transcriptional profiling of Drosophila hemocytes represents a useful tool for future studies on hemocyte functions. In my main research project, I investigated the role of Collier (Col) in the Drosophila larval hematopoiesis. Col is the unique Drosophila orthologue of the mammalian transactivator EBF, an important factor for B cell differentiation. We showed the critical requirement for Col activity in lamellocytes’ specification. Col is first expressed during embryogenesis, in the progenitors of the hematopoïetic organ. During larval stages, col is expressed in this organ in a signalling centre for hemaotopoiesis. We suggest that Col give the capacity to relay an instructive signal emitted by plasmatocytes upon their encounter with a parasite. In our model, these cells synthesise a signal S2 that orients precursors towards the lamellocyte fate. We then identified the gene CG14225, which encodes a transmembrane protein homologous of the mammalian gp130 receptor. Our first analysis revealed that CG14225 is a good candidate to encode the receptor for S2. I have developed two different strategies to generate a loss-of-function mutation for CG14225. The null mutant will enable us to conclude about this gene‘s implication in the Drosophila hematopoietic processes