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Dissertations / Theses on the topic 'Hépatite virale B'
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Beauté, Denis. "À propos de 136 cas d'hépatites virales A, B ou non A non B." Bordeaux 2, 1988. http://www.theses.fr/1988BOR25390.
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2
Mittler-Magott, Sylvie. "L'hépatite virale B et l'odonto-stomatologie." Nantes, 1985. http://www.theses.fr/1985NANT1517.
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3
Minello, Anne. "Epidémiologie des hépatites chroniques virales B et C." Dijon, 2003. http://www.theses.fr/2003DIJOMU18.
Full textAbstract:
Une augmentation importante de l'incidence du cancer primitif du foie est observée en France depuis 20 ans. L'amélioration du pronostic des cirrhoses et la fréquence des hépatites B et C expliquent en partie cette augmentation. L'épidémiologie des hépatites étant mal connue en France, un registre recensant tous les cas d'AgHBs et/ou d'Ac anti-VHC diagnostiqués après janvier 1994 en Côte d'Or et janvier 1995 dans le Doubs a été créé. Les sources d'information sont les biologistes, les hépatogastroentérologues, infectiologues, internistes, et les anatomopathologistes. L'étude d'après une année de fonctionnement a objectivé des taux de détection annuels d'Ac anti-VHC de 26,4 ± 4,6 et d'AgHBs de 12,9 ± 2,6/100 000 habitants. Deux pics de taux spécifiques d'Ac anti-VHC (25-44 et 55-75 ans) et un seul d'AgHBS (15-44 ans) étaient objectivés. Cette étude a testé avec succès la faisabilité d'un tel registre. Les études sur les années 1994-1997 ont permis : 1) de confirmer que les résultats des séries hospitalières ne pouvaient être extrapolés à la population générale, 2) d'objectiver la place importante du médecin généraliste dans le diagnostic de l'hépatite C, 3) de constater que les patients sans facteur de risque identifié avaient des caractéristiques virologiques identiques aux patients contaminés par voie nosocomiale. Malgré une bonne efficacité du traitement, 16% des patients avec hépatie C n'ont bénéficié d'aucune prise en charge sur la période 1994-1999. L'étude des tendances évolutives des taux de détection de l'AgHBs a objectivé une diminution régulière de 1994 à 1999, excepté chez les patients ayant échappé à la vaccination. Ce registre des hépatites virales B et C est un système des surveillance permettant de connaître les modalités de prise en charge des malades, les tendances évolutives de ces épidémies, l'efficacité des mesures sanitaires prises. Il précisera la part des hépatites B et C dans l'augmentation d'incidence des cancers primitifs du foie.
4
Galtier, Noe͏̈lle. "Les nouveaux marqueurs de l'hépatite virale B." Montpellier 1, 1990. http://www.theses.fr/1990MON11193.
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5
Ducos, Jacques. "Production in vitro par les lymphocytes circulants d'anticorps spécifiques au cours des hépatites virales B et C." Montpellier 1, 1996. http://www.theses.fr/1996MON1T027.
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6
Henry, Nathalie. "Prévalence des hépatites virales a, b et c au sein du centre hospitalier de Villeneuve sur Lot." Bordeaux 2, 1996. http://www.theses.fr/1996BOR2M156.
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7
Sahajian, Frédéric. "Couverture vaccinale anti-hépatite B des personnels hospitaliers : enquête réalisée au centre Hospitalier Lyon-Sud." Lyon 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LYO1M150.
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8
Chabi, Nicodeme. "Relations gène-environnement des déterminants du métabolisme des monocarbones et associations avec la pathologie en Afrique de l'Ouest." Thesis, Nancy 1, 2009. http://www.theses.fr/2009NAN10023/document.
Full textAbstract:
Nous avons évalué les déterminants nutritionnels et génétiques du métabolisme de l’homocystéine en fonction des associations avec des pathologies prévalentes, en Afrique de l’Ouest. Nous avons montré qu’il existe une traduction phénotypique du polymorphisme MTHFR 677C>T sur l’homocystéinémie en rapport avec la prévalence de la carence en folates. Le statut en folates est associé avec la fréquence allélique MTHFR 677T, en comparant des populations de différents continents. Nous avons trouvé une association favorable de cet allèle avec l’hépatite virale B en Afrique. Nous avons remarqué également que le polymorphisme TCN 776C>G n’a pas d’influence sur l’homocystéinémie. Par contre la comparaison des populations migrantes et autochtones pour le polymorphisme TCN 776C>G fait ressortir une pression sélective par rapport au paludisme. De plus TCN776C>G est le seul déterminant génétique du métabolisme des monocarbones associé à la gravité de la maladie, en période d’accès palustre. L’association des déterminants de l’homocystéine avec les marqueurs clinico-biologiques du syndrome métabolique est surtout observée chez les femmes en Afrique et porte essentiellement sur les marqueurs du transport lipidique, dont ApoA et HDLIn this work we had analysed nutritional and genetics determinants involved in homocysteine metabolism according to geographical areas, environment-gene interactions and their association with the most prevalent diseases in West Africa, viral B hepatitis, malaria and metabolic syndrome linked to obesity. We had shown that MTHFR 677C>T polymorphism had a dramatic influence on homocysteinemia, in relation with folates deficit. Folates status was associated with MTHFR 677T allelic frecuency, when comparing populations worldwide. There was not migrational influence, when African populations were compared with those from North America. We had found an association between T allele and favourable evolution of viral B hepatitis in Africa. In the other hand, we observed no influence of TCN776C>G on homocysteinemia. When comparing TCN 776C>G polymorphism in migrant and autochthonous populations, our results suggested a selection pressure related to malaria. This polymorphism was associated with the severe form of malaria fever. Influence of homocysteine determinants on clinical and biological markers of metabolic syndrome in Africa was preferably observed in women, with a significant association with ApoA and HDL
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Lepère-Douard, Charlotte. "Analyse du mécanisme d’entrée du virus de l’hépatite B : identification d’un nouveau déterminant de l’infectivité." Rennes 1, 2009. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00498099.
Full textAbstract:
Le virus de l’hépatite B (VHB) est un agent pathogène humain, très contagieux, responsable de pathologies hépatiques telles que la cirrhose ou le carcinome hépatocellulaire. A l'heure actuelle, on estime que 2 milliards de personnes ont été infectées par ce virus dans le monde, parmi lesquelles on recense 350 millions de porteurs chroniques. Malgré l’existence d’un vaccin efficace, le nombre de personnes atteintes par la maladie reste élevé. Pour ces dernières, des traitements puissants existent consistant en l’utilisation d’interférons, efficaces dans 30 à 40% des cas, ou d’antiviraux dont l’inconvénient majeur est la sélection de virus résistants au traitement. Le mécanisme d'entrée du VHB dans les hépatocytes est encore inconnu. Dans ce contexte, l'objectif de ma thèse a été d'étudier ce mécanisme afin, notamment, de contribuer au développement de nouvelles thérapeutiques empêchant l'entrée virale. Une des approches utilisées pour étudier le processus d’entrée d’un virus consiste à étudier l’implication de ses protéines de surface dans ce phénomène. Ainsi, nous avons recherché la présence de motifs indispensables au processus d'infection dans ces protéines. Pour cela, nous y avons introduit des mutations puis nous avons analysé leur impact sur la capacité des virus à infecter des cellules saines. Cette stratégie nous a permis d’identifier, au sein de la grande protéine de surface du VHB, un nouveau déterminant de l’infectivité possiblement impliqué dans un processus de fusion permettant à l’enveloppe lipoprotéique virale de fusionner avec une membrane cellulaire afin qu’elle libère sa nucléocapside, contenant l’ADN viral, dans le cytoplasme de la cellule infectéeThe hepatitis B virus is an extremely contagious human pathogen responsible for severe hepatic diseases like cirrhosis or hepatocellular carcinoma. Even though infection can be prevented by immunization with an efficient vaccine, about 2 billion people have been infected worldwide, resulting in 350 million chronic carriers that are prone to develop liver diseases. Current treatments consist either in the use of interferon, which modulates antiviral defenses and controls infection in 30 to 40% of cases, or in the use of viral polymerase inhibitors that allow a stronger response to treatment but require long-term utilization and frequently lead to the outcome of resistant viruses. A better understanding of the virus life cycle, and particularly of the mechanism by which the virus enters the cell, could provide background for therapeutics that inhibit the early steps of infection. Then, the objective of my PhD work was to study the mechanism of HBV entry. One approach to decipher viral entry is to interfere with the function of envelope proteins. Therefore, we introduced mutations in HBV surface proteins to identify new motives necessary for viral infectivity. This strategy highlighted the role of a new infectivity determinant, in the HBV large envelope protein, which is probably implicated in a fusion process allowing the release of nucleocapsids into the cytosol of infected cells
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Gourion, Delphine. "Etude des différents vaccins recombinants dirigés contre l'hépatite B, disponibles en officine en 1996." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05P099.
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11
Delame, Lelièvre Pierre Emmanuel. "Nouvelles voies de développement des vaccins grâce à la biologie moléculaire : application à l'hépatite B." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P237.
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12
Marnata, Caroline. "Etude de l'entrée et de l'assemblage du virus de l'hépatite C et du virus simien GB-B : incidence sur la restriction d'hôte de ces hepacivirus." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077181.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatite C (VHC) est un important pathogène humain qui infecte plus de 50 millions de personnes à travers le monde et cause des hépatites majoritairement chroniques conduisant potentiellement à des cancers du foie. Le développement d'un petit modèle animal permettant l'étude du VHC serait précieux pour la mise au point d'un vaccin préventif et pour l'amélioration des traitements actuels. Tandis que le spectre d'hôte du VHC est limité à l'homme et au chimpanzé, le GBV-B, un autre hepacivirus hépatotrope, infecte les petits primates du Nouveau Monde (tamarins, marmousets). Le but de cette étude était de déterminer à quel niveau du cycle viral s'opérait la restriction d'hôte du VHC et du GBV-B afin de développer un petit modèle primate capable d'être infecté par le VHC. Nous avons montré que les glycoprotéines de surface du VHC permettaient une entrée efficace du virus dans des lignées hépatocytaires de tamarin et dans des cultures primaires d'hépatocytes de marmouset, démontrant que l'étape d'entrée du VHC n'était pas restrictive. Par ailleurs, nous avons montré qu'une souche du VHC hautement adaptée à la culture cellulaire était capable d'accomplir un cycle viral complet conduisant à une sécrétion modeste de particules infectieuses à partir d'hépatocytes de marmouset cultivés ex vivo. Ces résultats ouvrent la voie à la possibilité d'adapter le VHC in vivo chez les petits primates du Nouveau Monde afin de développer un modèle animal pertinent et accessible pour les recherches sur l'hépatite CHepatitis C virus (HCV) is an important human pathogen that infects more than 150 million persons worldwide and leads to chronic liver disease and liver cancer. A small experimental animal model would be invaluable for the development of a preventive vaccine and the improvement of current therapies. While HCV only infects humans and chimpanzees, GB virus B (GBV-B), a closely related hepacivirus, infects small New World primates (tamarins, marmosets). The aim of this study was to determine the viral life cycle step(s) involved in primate-species restriction of HCV and GBV-B in order to develop a small primate model of HCV infection. We found that HCV surface glycoproteins allowed efficient entry into tamarin hepatic cell lines and primary marmoset hepatocytes, demonstrating that virus cell entry was not restricted. Furthermore, we found that a highly cell culture adapted strain of HCV was able to achieve a complete viral cycle leading to a modest secretion of infectious virions in marmouset liver cells cultured ex vivo. These data suggest that further adaptation of HCV to this simian host may be possible, thus are promising toward the development of an accessible in vivo model system for hepatitis C
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Chieregato, Laurence. "Traitement de l'hépatite chronique non-A, non-B parl'interféron alpha 2b recombinant." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P028.
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14
Akif, Nora. "Etude des hépatites virales sériques B et C d'origine professionnelle répertoriées par la caisse nationale des assurances sociales (C. N. A. S. ) de 1986 à 2002." Alger, 2008. http://www.theses.fr/2008AMIED001.
Full textAbstract:
De 1986 à 2002, 216 cas d'hépatites virales professionnelles ont été enregistrés au niveau de la Caisse Nationale des Assurances Sociales de la wilaya d'Alger. Ce nombre ne met pas en évidence la réalité de ce risque lié à la sous déclaration. L'étude de ces cas nous a permis d'identifier de nombreuses insuffisances. Au plan médical, la surveillance est effectuée anarchiquement ce qui justifie la mise en place d'un protocole de suivi médical Au plan médico-légal, la réparation de ces maladies est marquée par un dysfonctionnement engendré par les insuffisances du Tb n°45 actuel ce qui nécessite sa mise à jour ainsi que la création du système complémentaire de réparation des maladies professionnelles. L’étude des conditions de travail a révélé des situations à risque dans les quatre services concernés. Afin de réduire le risque de transmission de ces maladies, l'application des mesures préventives recommandées s'impose. La mise à niveau de nos structures sanitaires, l’information et la formation doivent être un leitmotiv permanent dans nos programmes d’action.
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Gautier, Nicolas. "Contribution de la vaccination spécifique chez les patients atteints d'hépatite virale B chronique active : à propos d'un cas." Bordeaux 2, 1999. http://www.theses.fr/1999BOR2M164.
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Lepère, Douard Charlotte. "Analyse du mécanisme d'entrée du virus de l'hépatite B : Identification d'un nouveau déterminant de l'infectivité." Phd thesis, Université Rennes 1, 2009. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00498099.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatite B (VHB) est un agent pathogène humain, très contagieux, responsable de pathologies hépatiques telles que la cirrhose ou le carcinome hépatocellulaire. A l'heure actuelle, on estime que 2 milliards de personnes ont été infectées par ce virus dans le monde, parmi lesquelles on recense 350 millions de porteurs chroniques. Malgré l'existence d'un vaccin efficace, le nombre de personnes atteintes par la maladie reste élevé. Pour ces dernières, des traitements puissants existent consistant en l'utilisation d'interférons, efficaces dans 30 à 40% des cas, ou d'antiviraux dont l'inconvénient majeur est la sélection de virus résistants au traitement. Le mécanisme d'entrée du VHB dans les hépatocytes est encore inconnu. Dans ce contexte, l'objectif de ma thèse a été d'étudier ce mécanisme afin, notamment, de contribuer au développement de nouvelles thérapeutiques empêchant l'entrée virale. Une des approches utilisées pour étudier le processus d'entrée d'un virus consiste à étudier l'implication de ses protéines de surface dans ce phénomène. Ainsi, nous avons recherché la présence de motifs indispensables au processus d'infection dans ces protéines. Pour cela, nous y avons introduit des mutations puis nous avons analysé leur impact sur la capacité des virus à infecter des cellules saines. Cette stratégie nous a permis d'identifier, au sein de la grande protéine de surface du VHB, un nouveau déterminant de l'infectivité possiblement impliqué dans un processus de fusion permettant à l'enveloppe lipoprotéique virale de fusionner avec une membrane cellulaire afin qu'elle libère sa nucléocapside, contenant l'ADN viral, dans le cytoplasme de la cellule infectée.
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Ducroux, Aurélie. "Etudes des mécanismes contrôlant la réplication du virus de l'Hépatite B dans le contexte de l'infection : rôle de la protéine virale HBx et des protéines cellulaires PRMT1 et Spindlin1." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077179.
Full textAbstract:
Dans le noyau des hépatocytes, le génome viral est organisé sous la forme d'un mini-chromosome (ADNccc), associé à des histones et à des protéines non-histone. L'ADNccc est soumis à des modifications de la chromatine qui vont contrôler sa transcription. La protéine virale HBx, est essentielle à la réplication virale. HBx joue un rôle fondamental dans l'établissement d'une transcription active de l'ADNecc au cours de l'infection, cependant les mécanismes moléculaires mis en jeu restent encore à déterminer. Dans le but d'élucider les mécanismes impliqués dans l'activité transactivatrice d'HBx, nous avons isolé par purification par affinité ses partenaires nucléaires. Deux protéines issues de cette purification ont fait l'objet d'une étude fonctionnelle : PRMT1 et Spindlinl. Nous avons montré que PRMT1 exerce une inhibition sur la transcription virale via son activité méthyltransférase et qu'HBx est capable de contrecarrer cette activité. Nous avons montré par ChIP que Spindlinl est recrutée sur l'ADNecc au cours de l'infection ce qui corrèle avec une diminution des ARNm viraux. Nous avons mis en évidence par des expériences de « run-on » nucléaires que Spindlinl agit au niveau de la transcription du VHB. Enfin nous avons montré qu'HBx est capable de contrecarrer en partie cette répression en diminuant le recrutement de Spindlin1 sur l'ADNecc. Nous avons montré que Spindlinl réprime la transcription d'un autre virus à ADN, HSV1. Pour comprendre les mécanismes moléculaires mis en jeu par Spindlin1 dans la régulation de la transcription nous avons isolé les partenaires de Spindlin1In the nucleus of hepatocyte, the viral genome is organized into a mini-chromosome (cccDNA), associated with histones and non-histone proteins. The cccDNA is subject to epigenetic regulation that controls its transcription. The viral regulatory protein HBx is essential for viral replication. HBx plays a fondamental role in the establishment of an active transcription from the cccDNA during infection, however, the molecular mechanisms involved are still poorly understood. To elucidate the mechanisms involved in the transactivating activity of HBx, we isolated by affinity purification its nuclear partners. We focused on two partners: PRMT1 and Spindlin1. We have shown that PRMT1 exerts inhibition of HBV transcription via its methyltransferase activity and that HBx is able to counteract this activity. We have shown by ChIP that Spindlinl is recruited onto cccDNA during infection. This recruitment correlates with a decrease in viral mRNAs. We demonstrated by nuclear mn-on experiments that Spindlinl acts on HBV transcription. In addition, we showed that HBx is able to partially counteract this repression by decreasing Spindlin1 recruitment onto cccDNA. Importantly, we also showed that Spindlinl represses the transcription of another DNA virus (HSV-1), suggesting that it may be involved in a broader anti-viral response. Finally, in order to elucidate further the molecular mechanisms of viral transcriptional repression by Spindlinl and its functional interaction with HBx, we isolated Spindlinl partners by affinity purification
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Perie, Geneviève. "Contribution à l'étude de l'expression de l'antigène pré S1 sérique chez 181 patients." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05P026.
Full text
19
Gomez, Isabelle. "Les anticorps anti virus de l'hépatite C chez les hémophiles francais." Paris 5, 1990. http://www.theses.fr/1990PA05P189.
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Meyer, Jean-Luc. "Soixante ans de recherches sur l'étiologie des hépatites infectieuses (1920-1980) : considérations historiques & épistémologiques sur la notion d'agent viral." Paris 1, 1993. http://www.theses.fr/1993PA010606.
Full textAbstract:
Nous avons cherché à appréhender dans une perspective historique (1920-1980) et épistémologique, l'émergence progressive sur la "scène biomédicale" de deux « objets nouveaux » : les virus a et b des hépatites. Quatre étapes principales pouvaient être considérées comme les "temps forts" de l'identification de ces hépatites virales infectieuses durant cette période : 1- les moments de la différenciation des hépatites, épidémique a et sérique b; cette dernière, diversement appréciée durant les années 1945-60, apparaissait consécutive à l'inoculation de produits sanguins (dont le plasma et le facteur VIII concentré); 2- la mise en évidence d'un antigène sérique particulier, l'antigène 'Australie' et la possibilité ultérieure d'une vaccination contre le virus b; 3- la caractérisation biostructurale des virus a et b qui autorisera le développement de l'épidémiologie virale, et une meilleure compréhension des phénomènes immunogénétiques impliqués dans les maladies dues à ces virus, dont le cancer primaire du foie (virus b); 4- l'identification et le décryptage par génie génétique et moléculaire des informations génomiques virales: elle montrait l'importance jouée par les molécules de RNA dans les mécanismes de réplication et d'intégration du génome viral (virus b). De ces quatre étapes découlaient, non seulement une meilleure connaissance des agents, mais aussi et surtout, une appréhension conceptuelle, des perspectives et des possibilités d'actions renouvelées vis-à-vis de ces deux agents virauxIn a historical (1920-1980) and epistemological perspective, we attempted to ascertain the appearance of two new "objets", the a and b hepatitis viruses, on the "scene of biomedicine". Pour main phases could be considered as the "hight points" in the identification of infectious viral hepatitis during this period: the first, concerned the differentiation between epidemic a and serum b hepatitis; from 1945 to 1960, there were different ways of considering serum hepatitis which seen to occur after inoculation of blood products (including plasma and concentrated factor vii); - the second, saw the recongnition of a special serum antigen, the 'australia' antigen, and later the possibility of vaccination against the b virus; - the third, included the characterization of the biostructure of the a and b viruses and the consequent development of viral epidemiology and a better understanding of the immunoenetic phenomena involved in diseases caused by these viruses, including primary liver cancer (b virus);- the fourth, was the identification and deciphering of information in the viral genome through genetic and molecular engineering which demonstrated the importance of the role played by rna molecules in the mechanisms of viral genome replication and integration (b virus). These four phases resulted not only in a better understanding of viral agents, but also most importantly, in a conceptual apprehension of the perspectives and renewed actions which could be taken against those two viral agents
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Traoré, Aïcha Nina. "Mesure de l'incidence de l'hépatite virale B selon la séroconversion pour l'AC HBC, chez les donneurs de sang du Québec." Master's thesis, Université Laval, 2007. http://hdl.handle.net/20.500.11794/18875.
Full textAbstract:
Cette étude visait à évaluer le risque résiduel de l’hépatite virale B (HVB) en mesurant son incidence chez 112 242 donneurs de sang d’Héma-Québec, via la séroconversion pour l’anticorps dirigé contre le noyau (Ac HBc) au lieu de l’habituel antigène de surface (Ag HBs). Les donneurs ayant eu une séroconversion pour l’Ac HBc et dépistés positifs pour l’Ac HBs (anticorps dirigé contre l’Ag HBs) ont été définis comme cas incidents. D’avril 2003 à avril 2005, l’identification de 13 cas incidents pour l’Ac HBc et 3 pour l’Ag HBs a permis d’estimer des incidences respectives de 12,6 x 105 personnes-années-1 et 3,35 x 105 personnes-années-1, correspondant à des risques résiduels de 1/63 018 dons et de 1/237 731 dons. L’incidence de l’HVB via l’Ac HBc est différente de celle via l’Ag HBs. Notre étude suggère que l’Ac HBc ne semble pas un marqueur fiable d’une récente infection d’HVB.The goal of this study was to evaluate the residual risk of hepatitis B viral (HBV) by measuring its incidence among 112,242 blood donors at Hema-Quebec, via the seroconversion for the antibody directed against the core (anti-HBc) instead of the usual surface antigen (HBsAg). We considered as incident cases donors who had a seroconversion for the anti-HBc and who were screened positive for the anti-HBs (antibody directed against the HBsAg). From April 2003 to April 2005, the identification of 13 anti-HBc incident cases and 3 for HBsAg permitted us to estimate respective incidences of 12.6 x 105 person-years-1 and 3.35 x 105 person-years-1, which corresponded to residual risks of 1 in 63,018 donations and 1 in 237,731 donations. The HBV incidence via the anti-HBc seroconversion is different from the estimate via the HBsAg. Our study suggests that anti-HBc seroconversion may not be a reliable marker of recent hepatitis B infection.
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Le, Guerhier Franck. "Mécanismes de l'inhibition de la transcriptase inverse des hépadnavirus et de l'élimination virale induites par de nouveaux analogues de nucléosides et de nouvelles stratégies thérapeutiques, dans les modèles animaux de l'hépatite B." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO10137.
Full textAbstract:
Dans le cadre de la recherche de nouvelles thérapie de l'hépatite B chronique, nous avons étudiés les mécanismes de l'élimination du virus de l'hépatite B (VHB) en déterminant l'activité antivirale du β-L-Fd4C, un nouvel analogue lévogyre de cytidine, dans le modèle de l'hépatite B du canard (DHBV). Le β-L-Fd4C a inhibé l'activité de la transcriptase inverse virale par inhibition compétitive de l'incorporation du dCTP dans l'ADN virale et vraisemblablement par terminaisons de l'élongation de cet ADN. L'administration de β-L-Fd4C à des cultures primaires d'hépatocytes infectées a inhibé la synthèse de l'ADN virale. Enfin, un traitement de courte durée de l'hépatite aigue͏̈ par le β-L-Fd4C a inhibé la réplication virale et la diffusion du DHBV dans le foie des canetons infectés, sans toutefois aboutir à la clairance de l'ADC-CCC. Ces résultats prometteurs nous ont ensuite conduits à évaluer le β-L-Fd4C dans le modèle mammifère de l'hépatite chronique de la marmotte (WHV). Nous avons confirmé l'efficacité du β-L-Fd4C comme inhibiteur de la virémie et de la synthèse d'ADN virale intrahépatique. La persistance de l'ADN-CCC et la stabilité du nombre d'hépatocytes infectés ont néanmoins été notées. Une amélioration de l'histologie hépatique a aussi été observée lors d'un traitement de longue durée. Cependant, nous n'avons pas noté d'action préventive du β-L-Fd4C sur le développement du carcinome hépatocellulaire dans le cadre de nos protocoles. Enfin, une troisième étude nous a permis d'évaluer l'efficacité d'une nouvelle stratégie thérapeutique de l'hépatite B chronique associant un immunothérapie (vaccination par ADN nu codant pour la grande protéine d'enveloppe du DHBV) et un traitement par l'analogue d'adénine adefovir chez les grands canards chroniquement infectés. Nos résultats confirment l'efficacité de l'immunisation génétique contre le DHBV et indiquent une action plus prononcée de la combinaison thérapeutique sur la virémie et la synthèse d'ADN virale intrahépatique.
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Kabissa, Imed. "Résultat du traitement par la lamivudine chez trois groupes de patients atteints d'hépatite chronique virale B : non greffés, greffés hépatiques et greffés rénaux." Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR23065.
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Zhang, Qian. "Etude des corrélations entre les marqueurs de l'hôte et les marqueurs virologiques du virus de l'hépatite B en fonction de la réponse aux traitements par interféron." Paris 7, 2014. http://www.theses.fr/2014PA077006.
Full textAbstract:
Avec 350 millions de porteurs chroniques dans le monde, le virus de l'hépatite B (VHB) est un problème majeur de santé publique. L'évolution de l'infection peut conduire au développement d'une cirrhose et/ou d'un carcinome hépatocellulaire. L'ensemble de mes travaux de thèse a pour but d'étudier la corrélation entre la réponse au traitement, les marqueurs de l'hôte et ceux du virus chez des patients atteints d'hépatite chronique B (CHB). Dans un premier temps, nous avons étudié l'impact du polymorphisme rs12979860 de l'IFNL3 sur la réponse à l'IFN standard chez 97 patients atteints de CHB, AgHBe-positif. Aucune association n'a été observée entre le génotype de l'IFNL3 (rs12979860) et la réponse au traitement par IFN. Dans un deuxième temps, mes travaux ont porté sur la variabilité génomique de l'AgHBs chez les patients CHB, traités par IFN-pégylé plus Ténofovir. 12, 5% des patients traités (n=40) ont une perte de l'Ag HBs. L'analyse des quasi-espèces virales a montré qu'il y avait une variabilité génomique dans le gène S chez les non-répondeurs. Ces mutations sont localisées au niveau de la RHM et plus spécifiquement dans le déterminant « a ». L'analyse, in vitro, a montré que la présence des mutations dans le déterminant «a » est associée à une plus faible production de l'AgHBs mais à une réplication virale équivalente au virus sauvage. En conclusion, mes travaux de thèses ont permis de mieux comprendre le rôle de l'IFNL3 et de l'AgHBs, dans les mécanismes de réponse au traitement. Ces recherches ont pour but d'optimiser l'utilisation de ces marqueurs, dans la pratique, clinique afin d'améliorer la prise en charge des patients CHBHepatitis B virus (HBV) chronic infection remains a serious global public health problem with 350 million people infected. The major aim of my thesis is to study the association between the response to treatment of interferon (IFN) and host and virolgic markers in patients with chronic hepatitis B (CHB). In the first part of our work, we have assessed the impact of IFNL3 polymorphism (rs12979860) on response to IFN in 97 patients with HBeAg positive CHB. No significant relationship was observed between IFNL3 and response to IFN therapy. The second part of our work forked on indentifying the S gene variability of patients at baseline of Pegylated interferon (PegIFN) plus tenofoviron (TDF) combination therapy in order to determine the role of HBsAg variants on response to treatment. A SVR was observed in 22% of patients and HBsAg loss in 12% patients. N-SVR patients showed more variability along the S protein. The Accumulation of residue substitutions in and around the "a" determinant at baseline should be a sensitive predictor of response to combination of PegIFN and TDF therapy in CHB patients. In vitro analysis showed less HBsAg secretion in N-SVR group accompanying with similar viral replication to wild type HBV. In conclusion, my thesis work led to a better understanding of the role of IFNL3 and HBsAg in the mechanism of response to IFN treatment. These researches aimed to optimize the use of these markers to improve the clinical management of CHB patients
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Paboriboune, Phimpha. "Surveillance des hépatites virales B-C au Laos : de l'analyse de routine à la recherche de biomarqueurs par métabolomique." Thesis, Toulouse 3, 2018. http://www.theses.fr/2018TOU30300/document.
Full textAbstract:
Les travaux exposés dans cette thèse sont le reflet d'années d'efforts consacrées à la mise en place de diagnostics de qualités des hépatites virales au Laos au sein du Centre d'infectiologie Lao Christophe Mérieux (CILM), dont je suis aujourd'hui la directrice scientifique. En introduction, nous avons tenu à présenter les caractéristiques socio-économiques du Laos et ses défis sanitaires pour atteindre les Millennium Development Goals, qui guident les politiques publiques de pays en situation de développement. Nous avons jugé important de souligner ces points tout comme la présentation du CILM pour faire comprendre au lecteur le contexte de réalisation de ce travail. C'est grâce à une bio-banque riche de plus de 7,000 échantillons biologiques de patients infectés par les virus des hépatites virales B et C, que nous avons pu poser la question de recherche clé de cette thèse : Comment évoluent les hépatites virales chez les patients reçus depuis une dizaine d'années au CILM ? Cette question en a fait émerger une deuxième concernant la qualité du diagnostic dans les centres de soins à Vientiane. Ainsi, nous nous sommes intéressés aux kits de diagnostic rapide de l'hépatite B utilisés dans les structures de soins de Vientiane, comparés au standard utilisé dans notre laboratoire. Ces travaux, qui ont donné lieu à la publication de 2 articles (un troisième article a été soumis), jouent un rôle capital pour le pays, car ils donnent des axes d'intervention aux autorités de santé publique laotiennes pour combattre ce fléau. Nous avons choisi une présentation dichotomique des hépatites virales avec une partie dédiée aux hépatites B et une partie dédiée à l'hépatite C en raison de l'émergence d'une troisième question de recherche plus fondamentale. Il s'agit du risque de développement du cancer du foie chez les patients infectés, risque différent suivant que l'on est porteur d'une hépatite B ou d'une C. En effet, les outils diagnostiques pour déterminer la magnitude de ce risque sont peu ou pas accessibles pour les patients au Laos. [...]The work presented in this thesis reflects many years of effort to devoted the implementation of quality diagnostics of viral hepatitis in Laos at the Centre d'infectiologie Lao Christophe Mérieux (CILM), of which I am now the scientific director. In the introduction, we wanted to present the socio-economic characteristics of Laos and its health challenges in order to achieve the Millennium Development Goals (MDG), which guide public policies in developing countries. We felt it was important to highlight these points as well as the presentation of the CILM to help the readers to understand the context in which this work was carried out. It is thanks to a bio-bank with more than 7,000 biological samples from patients infected with viral hepatitis B and C viruses, that we were able to ask the key research question of this thesis: What is the evolution of patients infected by viral hepatitis B/C who have been follow the viral load at CILM for the past ten years or so? This question raised a second one concerning the quality of diagnosis in health centres in Vientiane. For example, we were interested in the rapid diagnostic kits for hepatitis B used in Vientiane's health facilities, compared to the standard used in our laboratory. This work, which has resulted in the publication of 2 articles (a third article has been submitted), plays a crucial role for the country, as it provides Laotian public health authorities with a focus for action to combat this scourge
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Gelu-Siméon, Moana. "Facteurs de progression et évolution des hépatopathies chroniques virales et alcooliques en Guadeloupe." Antilles-Guyane, 2015. http://www.theses.fr/2015AGUY0825.
Full textAbstract:
Les données de prévalence des hépatites virales B et C, disponibles en Guadeloupe, ont été évaluées à 3,1% pour l’AgHBs, 22,1% pour l’Ac anti-HBc et 0,8% pour les anti-VHC en 1992 et nécessitent d’être réactualisées. L’alcool demeure également une cause majeure de cirrhose et de cancer primitif du foie dans le monde et la première en Europe. La Guadeloupe n’échapppe pas aux conséquences néfastes de l’alcool mais il n’existe aucune donnée relative à cette problématique, notamment pour la maladie alcoolique du foie. De nombreux facteurs de progression des hépatopathies chroniques et leur impact sur la réponse au traitement anti-viral ont été mis en évidence mais ceux-ci n’ont jamais été étudiés dans une population caribéenne, de même que l’effet de toxiques environnementaux sur la progression de la fibrogénèse. Objectifs : Réactualiser les données épidémiologiques des hépatopathies virales chroniques et faire un état des lieux sur leur prise en Guadeloupe. Décrire les caractéristiques épidémiologiques et cliniques des hépatopathies alcooliques chroniques en Guadeloupe. Evaluer les facteurs de progression et d’évolution des hépatopathies virales et alcooliques chroniques en Guadeloupe. Faire un état des lieux sur l’évolution et la prise en charge du carcinome hépatocellulaire (CHC) en Guadeloupe. Matériels et méthodes : Nous avons mené une enquête de prévalence des hépatites virales B et C en population générale à partir des données d’un centre de santé situé en Guadeloupe, procédé à une évaluation prospective des cas d’hépatopathies chroniques virales et alcooliques à partir des centres référents ainsi qu’à une évaluation de la prise en charge des hépatopathies chroniques par les médecins généralistes et les spécialistes, et des facteurs de progression des hépatopathies spécifiques à la Guadeloupe. Enfin, nous avons évalué les causes et la prise en charge des nouveaux cas de CHC en Guadeloupe. Résultats : Les résultats de prévalence ont été évalués à 1,41 [95% IC : 1-2] pour l’Ag HBs et 0,55 [95% IC : 0,28-0,96] pour la sérologie VHC. Le taux de vaccination contre l’hépatite B était estimé à 42% chez les adultes. Les principaux modes de contamination retrouvés étaient la voie sexuelle (28,2%), le piercing (12,9%) et l’exposition intra-familliale pour le VHB (6,4à 14,1%); les antécédents chirurgicaux (en particulier chirurgie gynécologique) (50%) pour le VHC. Le profil virologique majoritaire des patients VHB était un portage inactif, AgHBe négatif (95,8%), de génotype A1 (67,3%), D (18,2%) ou E (14,5%) ; le génotype majoritaire du VHC était un génotype 1 (80%). Les médecins généralistes, interrogés sur leurs connaissances des hépatites virales, ont répondu de façon exacte dans plus de 55% des cas et étaient majoritairement favorables à la vaccination anti-virale B. Seuls 16,9% des patients VHB ont bénéficié d’un traitement antiviral compte tenu d’un portage inactif dans plus de 75% des cas. On a estimé à 16% la proportion de patients traités pour une infection virale C en Guadeloupe avec un taux de réponse à la bithérapie à 32% (en 2010). Parmi les facteurs de moins bonne réponse au traitement antiviral, on a retenu : l’étude du polymorphisme IL28B évalué chez 54 patients porteurs du VHC avec une fréquence élevée du génotype T/T (55,3%) chez les patients afro-caribéens. La co-infection HTLV1 chez des patients infectés par le VHC laisse supposer une moins bonne réponse au traitement antiviral chez ces patients. La consommation alcoolique est également un fléau dans notre région, essentiellement basée sur le rhum avec une médiane journalière d’alcool ingéré à 50 g/jour [20-380], tandis que le vin et la bière étaient rarement consommés seuls. L’imprégnation sanguine en toxiques organochlorés, en particulier en Chlordécone constitue également un factuer de risque de progression des hépatopathies chroniques. Parmi les patients porteurs de CHC, un diagnostic tardif est à l’origine d’une prise en charge palliative, par chimio-embolisation dans 10,8% des cas ou Nexavar dans 22,9% des cas. Enfin, la majorité de ces patients (59,4%) a été traitée de façon symptomatique. Une minorité (6,7%) a reçu un traitement curatif, par chirurgie ou transplantation hépatique. Conclusion : Malgré ses relations privilégiées avec la France métropolitaine, la Guadeloupe souffre d’un isolement géographique qui complique la prise en charge thérapeutique des patients porteurs d’hépatopathie chronique virale ou alcoolique. De plus, les spécificités de ce territoire tant géographiques que culturelles ne sont pas prises en compte dans l’application des politiques de santé. Une meilleure connaissance des données épidémiologiques et des facteurs de progression de la maladie hépatique permettra d’améliorer la prise en charge des patients porteurs d’hépatopathie chronique virale ou alcoolique dans cette régionPrevalence data for viral hepatitis B and C, available in Guadeloupe, were evaluted at 3. 1% for HBsAg, 22. 1% for anti-HBc Ab and 0. 8% for anti-HCV in 1992 and need to be updated. Alcohol also remains a major cause of cirrhosis and liver cancer in the world and the first in Europe. Guadeloupe is not spared by the harmful consequences of alcohol, but there is no data on this issue, especially for alcoholic liver disease. Many factors of progression of chronic liver diseases and their impact on the response to antiviral treatment were identified but these have never been studied in a Caribbean population, as well as environmental toxic effect on the progression of fibrogenesis. Objectives: Refresh epidemiology of chronic viral liver disease and describe their management in Guadeloupe. Describe the epidemiological and clinical characteristics of chronic alcoholic liver disease in Guadeloupe. Assess the factors of progression and evolution of viral liver diseases and chronic alcoholics in Guadeloupe. Describe the evolution and management of hepatocellular carcinoma (HCC) in Guadeloupe. Materials and Methods: We conducted a prevalence survey of viral hepatitis B and C in the general population using data from a health center in Guadeloupe, conducted a prospective evaluation of cases of viral and alcoholic chronic liver diseases from the referral centers as well as an assessment of the management of chronic liver disease by general practitioners and specialists, and factors of liver disease progression specific to Guadeloupe. Finally, we assessed the causes and the treatment of new cases of HCC in Guadeloupe. Results: The prevalence results were evaluated to 1. 41 [95% CI: 1-2] for HBsAg and 0. 55 [95% CI: 0. 28 to 0. 96] for the HCV serology. The rate of vaccination against hepatitis B was estimated at 42% in adults. The main modes of contamination found were sexual (28. 2%), piercing (12. 9%) and intra-familly exposure to HBV (6,4à 14. 1%); surgical history (especially gynecological surgery) (50%) for HCV. The main HBV virological profile was inactive carrier, HBeAg-negative (95. 8%), A1 genotype (67. 3%), D (18. 2%) or E (14. 5%); and genotype 1 for HCV (80%). Praticians questioned about their knowledge of viral hepatitis, responded accurately in 55% of cases and were largely in favor of anti-viral vaccination B. Only 16. 9% of patients were given HBV antiviral treatment as an inactive form in more than 75% of cases. It was estimated at 16% of patients treated for HCV infection in Guadeloupe, with a response rate to combination therapy at 32% (in 2010). Factors of poorer response to antiviral therapy were retained: the study of IL28B polymorphisms evaluated in 54 HCV patients with a high frequency of T / T genotype (55. 3%) among Afro-Caribbean patients. HTLV-1 co-infection in patients infected with HCV suggest a poorer response to antiviral therapy in these patients. Alcohol consumption is also a real problem in our region, mainly based on rum with a daily median of alcohol ingested 50 g / day [20-380], while wine and beer were rarely drunk alone. The blood impregnation organochlorine toxics, particularly Chlordecone is also a risk factor of progression of chronic liver disease. Among the patients with HCC, late diagnosis is the main reason of palliative care, for chemoembolization in 10. 8% of cases or Nexavar in 22. 9% of cases. Finally, the majority of these patients (59. 4%) was treated symptomatically. A minority (6. 7%) received a cure by surgery or liver transplantation. Conclusion: Despite its privileged relationship with mainland France, Guadeloupe suffers from geographical isolation which complicates the therapeutic management of patients with viral or alcoholic chronic liver disease. In addition, the specificities of this geographic and cultural territory are not taken into account in the implementation of health policies. A better understanding of epidemiology and progression of liver disease factors will improve the care of patients with viral or alcoholic chronic liver disease in this region
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Ramière, Christophe. "Interactions entre le métabolisme hépatique des sels biliaires et des lipoprotéines et les infections par les virus des hépatites B et C." Thesis, Lyon 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LYO10016.
Full textAbstract:
Les virus des hépatites B et C (VHB et VHC) entretiennent des liens étroits avec le métabolisme lipidique des hépatocytes. Ainsi, la réplication du VHB est dépendante de certains récepteurs nucléaires hépatiques, tels que HNF4α et PPARα, impliqués dans ce métabolisme. L’assemblage des particules virales du VHC dépend lui de la voie de synthèse des lipoprotéines de très faible densité (VLDL) et le virus circule dans le sang sous forme de lipo-viro-particules associé notamment à l’apolipoprotéine B, un composant essentiel des VLDL. Dans ce travail, nous avons d’abord étudié le rôle de FXRα, le récepteur nucléaire des sels biliaires, sur la réplication du VHB. Nous avons montré, in vitro, que les sels biliaires, via FXRα, activaient le promoteur de Core du VHB qui contrôle le niveau de réplication virale. Puis dans l’étude des liens entre les lipoprotéines et le VHC, nous avons montré que l’apoB présente sur certaines particules virales jouaient un rôle important dans l’infectiosité du virus in vitro, et que la protéine Cideb, présente en surface des gouttelettes lipidiques et impliquée dans l’assemblage des VLDL, était impliquée dans l’association du VHC avec l’apoB et influençait l’infectiosité des virions sécrétés. De plus nous avons mis en évidence l’existence de particules sub-virales chez les patients infectés, de nature lipoprotéique mais ne portant que les protéines d’enveloppes du VHC. Tous ces résultats renforcent l’idée d’une adaptation du VHB et du VHC au métabolisme lipidique hépatique. Les bénéfices éventuels qu’en retirent ces deux virus, ainsi que l’existence de possibles thérapeutiques anti-virales ciblant le métabolisme lipidique, restent à explorerHepatitis B and C viruses (HBV and HCV) infections are tightly linked with hepatic lipid metabolism. HBV replication depends on specific nuclear receptors, such as HNF4α and PPARα, both implicated in this metabolism. HCV assembly depends on the synthesis of Very-Low-Density Lipoproteins (VLDL), and the virus circulates in the blood as lipo-viral-particles associated in particular with apoB, an essential component of VLDL. In this study, we first studied the influence of FXRα, the nuclear receptor for bile acids, on HBV replication. We showed that, in vitro, bile acids, via FXRα, were able to activate the HBV Core promoter which controls the level of viral replication. Then, in the study of the interactions between HCV and lipoproteins, we demonstrated that apoB, which is associated with a proportion of viral particles, played an important role in HCV infectivity in vitro, and that Cideb, a protein involved in VLDL assembly, was implicated in the association between HCV and apoB and influenced the infectivity of secreted viral particles. Finally, we showed that, besides HCV infectious particles, sub-particles bearing only viral envelope glycoproteins circulated in the blood of infected patients. Interactions of HBV with the metabolism of bile acids, and of HCV with the metabolism of lipoproteins, are two examples of adaptation of a parasite to its host. The potential benefits from these interactions are still to be determined, as well as the possibility to develop anti-viral strategies targeting lipid metabolism
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Siegel, Martine. "Méthodes de diagnostic de l'hépatite B et intérêt de la recherche de l'ADN viral." Strasbourg 1, 1988. http://www.theses.fr/1988STR15038.
Full text
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Paez, Jimenez Adela. "Epidémiologie des hépatites virales aiguës B et C au Caire, Egypte." Paris 6, 2011. http://www.theses.fr/2011PA066543.
Full textAbstract:
L'Egypte est le pays où l’épidémie du VHC est la plus importante au monde, suite à la ré-utilisation d'aiguilles et de seringues insuffisamment stérilisées pendant les campagnes de traitement de la schistosomiase des années 70. Pour identifier les modes de transmission actuels du VHC et du VHB en Egypte urbaine, nous avons effectué une étude cas-témoins en recrutant des patients avec une infection à VHC récente dans deux hôpitaux desservant le Caire (2002 à 2007). Afin de documenter la l’importance relative de la transmission intrafamiliale du VHC, nous avons examiné les séquences génomiques des souches VHC provenant des échantillons de cas d'hépatite aiguë C et de membres de leur famille virémiques. La transmission du VHB était liée principalement à l'usage de drogues illicites injectables (UDI) (OR=3,4 ; IC95%=1,0-11,4), au rasage chez le barbier (OR=2,1 ; IC95%=1,1-3,9) et à l’accouchement (OR=3,7 ; IC95%=1,0-13,9). Les injections intraveineuses (OR=5,0 ; IC95%=1,2- 20,2) et les sutures (OR=4,2 ; IC95%=1,6-11,3) ont été la principale source d’infection ainsi que l'UDI (OR=7,9 ; IC95%=1,4-43,5). La transmission intrafamiliale du VHC a contribué à moins de 5% des nouveaux cas d'hépatite aiguë C. Ces résultats appellent à renforcer les politiques de prévention de la transmission iatrogénique du VHC et, pour la première fois, cette étude met en évidence, le rôle de drogues injectables comme mode de transmission du VHB et du VHC en Egypte urbaine. Ceci amène d’une part à recommander la vaccination contre le VHB des UDIs et d’autre part à envisager des programmes d'accès à du matériel d'injection stérile et aux traitements substitutifs de la dépendance.
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Tordjeman, Marc. "Analyse de l'antigénicité de la nucléocapside du virus de l'hépatite B à l'aide d'un antigène recombinant et de peptides synthétiques : application au diagnostic." Lyon 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LYO1T026.
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Malavialle, Philippe. "Infections virales en transplantation hépatique : à propos des 104 premiers greffés." Bordeaux 2, 1992. http://www.theses.fr/1992BOR23053.
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Huguet-Garmath, Corinne. "Les arthrites virales : revue de la littérature à propos d'une observation." Montpellier 1, 1991. http://www.theses.fr/1991MON11028.
Full text
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Lamrayah, Myriam. "Délivrance ciblée d’un agoniste de TLR2 par des nanoparticules d’acide polylactique et évaluation de l’efficacité thérapeutique contre les hépatites chroniques virales B." Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1347.
Full textAbstract:
Le virus de l’hépatite B est devenu un problème majeur de santé publique malgré l’existence d’un vaccin prophylactique efficace et des agents antiviraux améliorant le confort des patients. Près d’un million de personnes en meurt chaque année, des suites de complications (cirrhose, carcinome hépatocellulaire). Il est donc nécessaire de mettre au point des nouvelles stratégies antivirales pour élargir le spectre de traitements disponibles afin d’éradiquer ce virus. Les approches innovantes en traitements curatifs exploitent la combinaison de deux stratégies complémentaires, à savoir l’immunomodulation du système immunitaire pour que l’hôte contrôle plus efficacement l’infection et une action antivirale directe per se afin d’obtenir une clairance fonctionnelle. Malgré de nombreux essais, ces approches sont actuellement peu concluantes, suite à leur toxicité importante, notamment sur les organes non directement ciblés et une faible efficacité antivirale à long terme. L’utilisation d’outils nanotechnologiques, capables de véhiculer un actif tout en le protégeant permet de pallier ces effets par ciblage spécifique de l’organe d’intérêt, tel que le foie, et de prolonger leur action par relargage prolongé. Ce travail de thèse, nous a permis de développer une stratégie thérapeutique innovante à base de nanoparticules biodégradables d’acide polylactique (PLA) contenant un ligand de Toll-Like-Receptor (TLR), à savoir le Pam3CSK4, et fonctionnalisées par un peptide ciblant spécifiquement les hépatocytes, lieu d’accumulation du virus HBV. Nous avons ainsi pu : 1) caractériser précisément les mécanismes de vectorisation du ligand de TLR par étude physico-chimique et modélisation bio-informatique puis corréler l’efficacité de vectorisation à l’activation du récepteur (Lamrayah M et al, 2019), 2) étudier la biodistribution des candidats thérapeutiques par différentes techniques d’imagerie : non invasive en corps entier pour un suivi longitudinal (tomographie à fluorescence), ou ex vivo par immunofluorescence sur coupes d’organes pour montrer l’efficacité du ciblage hépatocytaire, 3) Valider l’efficacité antivirale des formulations par expérimentations in vitro sur des modèles cellulaires hépatocytaires, puis in vivo dans un modèle murin de souris infectées par AAV-HBV. L’ensemble de ces résultats nous ont ainsi conduits à proposer une nouvelle classe de traitements antiviraux utilisant des particules de PLA fonctionnalisées par un peptide de ciblageHepatitis B virus is considered as a global burden despite an efficient prophylactic vaccine and antiviral therapies improving patient’s lifetime. Almost one million people die per year worldwide, mostly from complications as cirrhosis or hepatocarcinoma. Thus, it is crucial to develop novel antiviral strategies to broaden the spectrum of available treatment in order to eradicate the virus. Innovative approaches to achieve complete HBV cure (defined by HBsAg clearance in addition with cccDNA elimination) exploit combination of immunomodulation and antiviral action. In this way, the host immune system, inhibited by the virus, is reactivated and thus, allows the organism to struggle autonomously after the direct antiviral action. Despite numerous trials, clinical development of such strategies has been trivial, largely due to systemic toxicity in healthy organs and weak prolonged antiviral effect. Drug delivery systems, such as nanotechnologies, are capable to overcome these side effects by specific delivery such as here the liver, by molecular protection and prolonged release. This thesis project allowed us to investigate a novel therapeutic strategy based on biodegradable polylactic acid (PLA) nanoparticles entrapping a Toll-Like-Receptor (TLR) ligand, named Pam3CSK4, and functionalized with a specific-hepatocyte peptide, which allow the targeting of liver cells of interest. We were able to: 1) precisely characterize the mechanism of TLR ligand vectorization by physico-chemical evaluation and molecular modeling, then correlated with TLR activation efficiency (Lamrayah et al, 2019), 2) study the biodistribution of therapeutic candidates by different imaging systems: non invasive in mouse whole body for a longitudinal follow-up (fluorescence molecular tomography), or by ex vivo experiments using immunofluorescence staining to show the hepatocyte targeting efficiency, 3) validate the antiviral efficiency of formulations in vitro using hepatocyte cell line models, and in vivo on a AAV-HBV infected murine model. This set of results led us to propose a novel class of antiviral treatments using PLA particles functionalized with a targeting peptide
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Sureau, Camille. "Production du virus de l'hépatite B par une lignée d'hépatoblastique humaine différenciée après transfection par le génome viral récircularise." Tours, 1988. http://www.theses.fr/1988TOUR3801.
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Pelletier, Pascale. "Porphyrie cutanée tardive et infection par les virus des hépatites B, C, G, et le virus VIH. Etude de 53 cas en Languedoc-Roussillon." Montpellier 1, 1999. http://www.theses.fr/1999MON11138.
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Habersetzer, François. "Approches immunothérapeutiques des hépatites virales B et C : étude in vivo et in vitro : traitement par interféron et obtention d'anticorps anti-enveloppe ayant des propriétés neutralisantes." Lyon 1, 1998. http://www.theses.fr/1998LYO1T157.
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Khawaja, Ghada. "Évaluation d’une nouvelle approche vaccinale basée sur l’électroporation in vivo d’ADN pour le traitement des hépatites B chroniques." Thesis, Lyon 1, 2012. http://www.theses.fr/2012LYO10045.
Full textAbstract:
Malgré l’existence d’un vaccin préventif efficace, l’infection chronique par le virus de l’hépatite B (HBV) demeure un problème majeur de santé publique. La persistance de l’infection par HBV étant clairement associée à des réponses immunitaires insuffisantes, l’immunothérapie par le vaccin à base d’ADN nu, visant à stimuler les réponses humorales et cellulaires, apparaît comme particulièrement pertinente pour la thérapie des hépatites B chroniques. Toutefois, l’efficacité thérapeutique d’une telle stratégie reste limitée chez l’homme, d’où la nécessité d’optimiser cette approche vaccinale pour une utilisation ultérieure en clinique. Ainsi, l’objectif général de ce travail de thèse était d’explorer, avec le modèle du DHBV (« Duck Hepatitis B Virus »), étroitement apparenté au HBV humain, si l’administration du vaccin à ADN par électroporation (EP) pouvait davantage améliorer son efficacité prophylactique et thérapeutique. Nous avons montré, dans un 1er temps chez des canards naïfs, que l’administration du vaccin à ADN par EP permet de potentialiser le pouvoir neutralisant et d’élargir le répertoire épitopique de la réponse humorale dirigée contre la protéine d’enveloppe du DHBV, même avec des doses d’ADN relativement faibles. Dans un 2ème temps, nous avons montré chez des animaux chroniquement infectés par le DHBV, que l’administration par EP du vaccin à ADN ciblant les protéines structurales du DHBV et le DuIFN-γ améliore considérablement l’efficacité thérapeutique du vaccin, notamment au regard de la séroconversion et de la clairance virale. Les résultats ainsi obtenus confirment l’intérêt majeur de cette approche vaccinale pour la thérapie des hépatites B chroniquesDespite the existence of an effective prophylactic vaccine, chronic hepatitis B virus (HBV) infection remains a major public health problem. Since persistence of HBV infection is mostly associated with insufficient immune responses, therefore DNA vaccination capable of activating both humoral and cellular immune responses appears as a pertinent strategy for chronic hepatitis B therapy. However, the efficacy of such therapeutic approach remains limited in humans. Improvement of DNA vaccine efficacy is therefore needed for future therapeutic applications in clinic. The main objective of this thesis was to investigate in the duck hepatitis B virus (DHBV) model, whether the protective and therapeutic efficacy of DNA vaccine can be enhanced using EP-based delivery system. Firstly, we showed in naïve ducks that EP-based delivery was able to improve the dose efficiency of DNA vaccine and to maintain a highly neutralizing, multi-specific B-cell response even with relatively low DNA doses, suggesting that it may be an effective approach for chronic hepatitis B therapy at clinically feasible DNA dose. Secondly, we showed in chronic DHBV-carriers that in vivo EP is able to dramatically enhance the therapeutic potency of DNA vaccine targeting hepadnaviral proteins. Indeed, this approach was able to consistently restore humoral immune response and to sustainably decrease and even clear viral infection. Thus, these data strongly support the use of this approach for chronic hepatitis B therapy in humans
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Mohamed, Sofiane. "Recherche de mutations induisant des résistances aux antiviraux chez des patients atteints du virus de l'immunodéficience humaine de type 1, du virus de l'hépatite B et de l'hépatite C." Thesis, Aix-Marseille, 2015. http://www.theses.fr/2015AIXM5000/document.
Full textAbstract:
Les tests de laboratoire basés sur des techniques de biologie moléculaire sont des outils inestimables pour le suivi des patients, en particulier dans le cadre de l’infectiologie. Dans ce contexte clinique, ils peuvent permettre d’établir un diagnostic, un pronostic ainsi que de déterminer la stratégie thérapeutique antivirale la plus adaptée. Les virus hautement variables tel que le virus de l’immunodéficience humaine (VIH), de l’hépatite B (VHB) et de l’hépatite C (VHC) sont présents sous forme de quasi-espèces au sein de leur environnement réplicatif. Lorsque des pressions de sélection s’exercent telle que l’administration d’un antiviral, une redistribution des variants majoritaires est fréquemment observée en variants mutés pour mieux s’adapter à cet environnement. Nos travaux ont permis, dans ce contexte, de valider l’impact clinique des mutations majoritaires mais aussi minoritaires grâce à la mise en œuvre de plusieurs techniques de séquençage (pyroséquençage, séquençage à haut débit et PCR en allèle spécifique). Nous avons également validé l’utilisation d’un logiciel simple, fiable et utilisable en routine par le clinicien pour l’interprétation clinique de la masse de données générées par le séquençage à haut débit. Enfin dans le contexte du test diagnostique, nous avons cliniquement validé sur une cohorte de patients infectés par le VHB, l’utilisation du papier buvard (Dried Blood Spot) comme support de prélèvement alternatif non invasif de diagnostic, en particulier pour les populations n’ayant pas accès aux structures classiques de soins et pour les pays en voie de développementMolecular biology based assays are invaluable tools for the patients follow-up. They can help to establish the prognosis, guide for the treatment decisions and assess the virological response to therapy. Highly variable viruses like Human Immunodeficiency Virus (HIV), Hepatitis B Virus (HBV) and Hepatitis C virus (HCV) which have a quasispecies distribution. Selection pressure on viral replicative environment such as an antiviral drug treatment, generally lead to a redistribution of the viral quasispecies with an increasing of the best adapted viral mutant. Our work allowed in this context to validate the clinical impact of majority but also minority mutations through the implementation of several sequencing techniques (pyrosequencing, high-throughput sequencing and allele-specific PCR). We also validated the use of a simple, reliable and routinely software solution by clinician for clinical interpretation of the mass of data generated by high-throughput sequencing. Finally, in the context of the diagnostic testing, we clinically validated in a cohort of patients infected with HBV, use the Dried Blood Spot technique as a supporting noninvasive diagnostic alternative sampling, especially for populations that have no access to conventional health structures and developing countries
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Watelet, Bénédicte. "Expression sous forme recombinante des antigènes c et e du virus de l'hépatite B : caractérisation et potentiel diagnostique." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO10232.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatite B (HBV) est la cause de nombreux décès chaque année malgré la disponibilité d'un vaccin efficace. Le développement de tests de dépistages plus sensibles et spécifiques reste un enjeu important dans le domaine du diagnostic. Ce travail de thèse, effectué au sein de la société bioMérieux, s'inscrit dans un projet d'optimisation des dosages de l'HBeAg, des anticorps anti-HBe et des anticorps anti-HBc détectés au cours de l'infection par l'HBV. Les antigènes HBe et HBc actuellement utilisés dans ces différents dosages sont des antigènes recombinants. Dans le cadre de l'optimisation de ces dosages, les antigènes HBc et HBe ont été exprimés dans différents systèmes d'expression hétérologues, leurs propriétés ont été caractérisées et leur potentiel diagnostique a été évalué. D'une part, l'HBcAg a été exprimé chez Escherichia coli et Pichia pastoris. La caractérisation de ces deux antigènes a mis en évidence des différences biochimiques (degré d'oxydation des cystéines, modification de l'extrémité N-terminale) et biophysiques (dimension et stabilité des particules d'HBcAg, association aux acides nucléiques). Grâce à la mise au point d'un nouveau format de dosage des anticorps anti-HBc, le potentiel diagnostique de ces deux antigènes a pu être évalué et a permis de corréler les différences biochimiques et biophysiques à des différences antigéniques. En effet, l'HBcAg produit chez Pichia pastoris qui apparaît plus stable, permet également de développer un test plus sensible et plus spécifique. D'autre part, l'HBeAg a été exprimé sous forme sécrétée par Pichia pastoris ainsi que des cellules Cos-7 et CHO. Les résultats obtenus démontrent que la séquence signal native de cet antigène n'est pas optimale et qu'elle peut être améliorée. Une caractérisation antigénique de ces HBeAg recombinants a été effectuée en utilisant des anticorps anti-HBc et anti-HBe polyclonaux humains ainsi que des anticorps monoclonaux murins. Cette étude démontre que l'HBeAg sécrété par Pichia pastoris possède une antigénicité HBe stricte, ce qui n'est pas le cas des autres HBeAg recombinants, et que cette antigénicité est étroitement liée à la concentration de l'antigène.
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Turlin, Bruno. "Hepatites chroniques actives virales non a non b et c : etude anatomo-pathologique de 71 cas ; correlations anatomo-cliniques et biologiques." Rennes 1, 1991. http://www.theses.fr/1991REN1M036.
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Boukadida, Célia. "Analyses structurales et fonctionnelles comparées de la protéine non structurale NS2 des hepacivirus : topologie transmembranaire, activité protéolytique et rôle dans la morphogenèse des particules virales." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077154.
Full textAbstract:
Environ 150 millions de personnes sont infectées par le virus de l'hépatite C (VHC) et présentent un risque de développer à terme un carcinome hépatocellulaire. Ce travail a eu pour objectif d'étudier le rôle de la protéine non structurale 2 (NS2) du VHC et, plus particulièrement, de déterminer si les caractéristiques structurales et fonctionnelles de NS2 du VHC sont conservées pour deux virus phylogénétiquement proches, le virus GB-B (GBV-B) et l'hepacivirus non primate (NPHV) qui infectent respectivement des petits primates et des chevaux. Nos études structurales ont révélé que, malgré une identité de séquence limitée, les protéines NS2 du VHC et du GBV-B possédaient des organisations topologiques similaires, avec trois segments transmembranaires dans leur région N-terminale et un domaine cytosolique C-terminal. Nous avons démontré que NS2 du GBV-B et du NPHV étaient des protéases à cystéine permettant le clivage de la jonction NS2/NS3 et que NS2 du GBV-B était une protéase dimérique possédant une triade catalytique composite, comme NS2 du VHC. Cependant, contrairement au VHC et au NPHV, la région transmembranaire de NS2 du GBV-B est indispensable à son activité protéolytique. Nous avons montré que le rôle de NS2 dans l'assemblage des particules virales est virus- et génotype-spécifique. De plus, des interactions spécifiques entre les domaines N- et C-terminaux de NS2 du VHC semblent critiques pour la morphogenèse des virions. Nous avons également entrepris de développer une méthodologie d'imagerie permettant le suivi dynamique de NS2 du VHC dans des cellules vivantes infectées afin de mieux comprendre les mécanismes d'action de cette protéine dans le cycle des hepacivirusHepatitis C virus (HCV) chronically infects approximately 150 million persons worldwide and is associated with cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The objective of this work was to gain insight into the role of HCV nonstructural protein 2 (NS2) in the viral life cycle. With this aim, we undertook to determine whether structural and functional features of NS2 were conserved between HCV and two phylogenetically related viruses, GB virus B (GBV-B) and the non-primate hepacivirus (NPHV) that infect small primates and horses, respectively. Our membrane association and structural analyses revealed that despite limited sequence similarity, HCV and GBV-B NS2 proteins share a similar topological organization, with three transmembrane segments located in their N-terminal region and a cytosolic C-terminal domain. We further demohstrated that GBV-B and NPHV NS2 are cysteine auto-proteases responsible for the cleavage at the NS2/NS3 junction and that GBV-B NS2 is a dimeric protease containing a composite catalytic triad, as previously shown for HCV NS2. However, unlike for HCV and NPHV NS2, the transmembrane region of GBV-B NS2 is required for its proteolytic activity. Chimeric and trans-complementation approaches revealed that the role of HCV NS2 in particle assembly is virus and genotype specific. Moreover, our data suggested that functional interactions between the N- and C-terminal subdomains of HCV NS2 are critically involved in virion morphogenesis. Finally, we developed a fluorescent microscopy approach to follow HCV NS2 trafficking in live infected cells in order to gain further insight into the mechanisms of action of this protein during HCV life cycle
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Eboumbou, Moukoko Else Carole. "Evaluation des effets de polymorphismes génétiques (TNF-alpha, IFN-gamma, IFN-gamma R1) et de coinfections virales (VHB, VHC) sur la fibrose de symmers." Paris 6, 2003. http://www.theses.fr/2003PA066106.
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Roingeard, Philippe. "Etude immunocytochimique et ultrastructurale des cellules hépatocytaires infectées par le virus de l'hépatite B (VHB) à partir de deux modèles : lignées continues d'hépatocarcinomes humains ; lignée d'hépatoblastome transfectée avec le génome viral." Tours, 1988. http://www.theses.fr/1988TOUR3802.
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Gerossier, Laetitia. "L’influence de HBx sur la réplication du virus de l’Hépatite B et les conséquences sur la cellule." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1196/document.
Full textAbstract:
L’infection par le virus de l’hépatite B (HBV) est problème majeur de santé publique mondial car, en dépit d’un vaccin efficace, les traitements curatifs actuels ne permettent pas l’élimination complète du virus. Comprendre les mécanismes de réplication du virus et son rôle dans la survenue du cancer hépatocellulaire (CHC) reste un enjeu majeur.Le rôle de la protéine HBx dans l’infection par HBV et l’oncogenèse viro-induite, reste mal connu, malgré un grand nombre de publications, car les fonctions décrites jusqu'alors sont limitées à des contextes d’études particuliers, souvent loin des conditions physiologiques.Mes travaux de thèse reposent sur l’utilisation de modèles d’études proches de la physiologie naturelle d’une infection par HBV, notamment des cellules primaires infectables in vitro. J’ai pu démontrer lors de mon étude que HBx est indispensable à la réplication de HBV, et qu’il agit essentiellement via son interaction avec DDB1 pour contrer la restriction du virus due au complexe SMC5/6, en induisant sa dégradation. Ce facteur de restriction permet de bloquer la transcription de l’ADN viral au niveau épigénétique. Ce nouveau rôle inattendu de SMC5/6 ouvre de nombreux axes de recherche, notamment sur les mécanismes de restriction des virus à ADN épisomal. SMC5/6 est connu pour son implication dans les voies de réparation de l’ADN : la dernière partie de ce manuscrit montre que sa dégradation dans les cellules infectées, altère ces mécanismes et sensibilise les cellules aux dommages à l’ADN, induits notamment par la radiothérapie. La présence de HBx dans les CHC pourrait ainsi s’avérer un atout pour le traitement du CHCHepatitis B virus (HBV) infection is a major health problem worldwide as (1) despite an effective preventive vaccine over 240 million individuals are chronically infected and (2) the actual viral suppressive treatments available do not eliminate viral DNA from cells. Thus, infected individuals are at a high risk of developing hepatocellular carcinoma (HCC) and understanding viral replication mechanisms and how it impacts on hepatocarcinogenesis is a major challenge.The role of the HBx protein, notably in viral replication and oncogenic processes, is the subject of many publications. However, many studies have often used non-physiological infection conditions. My thesis project has addressed these limitations by using cellular models, including primary human hepatocytes which can be infected by HBV, to investigate HBx’s role in these processes. I have shown that HBx is indispensable for HBV replication and that HBx associates with the infected cell’s DDB1/ E3 ubiquitin complex to target its Smc5/6 complex for degradation via the proteasome. These studies have identified that the Smc5/6 complex is a novel viral restriction factor that acts at an epigenetic level to block viral replication. This unexpected role of SMC5/6 has led to new research into the evolutionary conservation of restriction factors for episomal DNA viruses. As SMC5/6 is implicated in DNA Damage Repair (DDR), the last section of my thesis reports how SMC5/6 degradation in infected cells can sensitise cells to the cell killing effects of DNA damaging agents such as ionizing radiation and hydroxyurea. These results open-up possibilities for HCC treatment where HBx expression may be of therapeutic benefit
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Bréchot, Christian. "Étude des relations entre les infections par le virus de l'hépatite B et les cancers primitifs du foie : analyse de l'état de l'ADN viral dans les cellules infectées." Paris 7, 1985. http://www.theses.fr/1985PA077014.
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Kostrzak, Anna. "Les pseudo-particules virales du VHB, produites chez les plantes, comme vecteur d'un polyépitope du VIH-1 pour un vaccin oral bivalent contre le sida et l'hépatite B." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2009. http://www.theses.fr/2009VERS0042.
Full textAbstract:
Actuellement un des besoins vaccinaux les plus importants est de trouver un moyen d'immunisation efficace et économique contre l'hépatite B et d'autres maladies touchant les pays en voie de développement. Les plantes transgéniques pourraient être une source alternative simple, efficace et bon marché des composants du vaccin, ne nécessitant pas un personnel médical hautement qualifié pour l'administration. Nous avons obtenu les plantes transgéniques du tabac contenant la séquence codant le petit antigène de surface du VHB-SHBsAg. Le niveau d'expression de SHBsAG a été vérifié par le test immunoenzymatique ELISA, et la capacité de former des pseudo-particules virales (VLPs) a été confirmée indirectement par western blot et directement par microscopie électronique à transmission. Les plantes caractérisées par un haut niveau d'expression de la protéine SHBsAg ont été lyophilisées et le matériel vaccinal obtenu a été utilisé pour l'immunisation orale de souris "humanisées" dans le but d'étudier une réponse spécifique cellulaire par stimulation des lymphocytes T CD8+ et de déterminer le niveau des lymphocytes Treg dans les ganglions lymphatiques et la rate, ainsi que la réponse humorale par l'analyse du niveau des anticorps sécrétés IgA (S-IgA), des IgA et IgC dans le sérum. Les plantes de tabac non transgéniques et les plantes SHBsAg choisies ont été utilisées pour la retransformation avec les vecteurs modifiés pCAMBIA contenant les séquences codant les protéines de fusion PE-SHBsAg composées du polyépitope du VIH-1 et de SHBsAg. Les données obtenues élargissent la connaissance sur l'utilisation des pseudo-particules virales du VHB comme porteurs d'épitopes du VIH-1 exprimant les protéines polyépitope-SHBsAg chez les plantes, sur la retransformation des plantes, et sur l'immunisation orale par le matériel vaccinal d'origine végétaleCurrently one of the most important worldwide demands is to find a more efficacious, cost-effective and reliable method of mass immunization for hepatitis B and many other fatal diseases afflicting underdeveloped regions of the globe. Plants plants could potentially symplify, and thus lower, the cost of immunization and by obviating the need for needles and specialized medical staff. We obtained the transgenic tobacco plants expressing small hepatitis B antigen (SHBsAg). The production and structure of SHBsAg was measured by anti-SHBsAg ELISA, western blot and transmission electron microscopy. Transformants showing high SHBsAg expression were lyophilized and the immunogenicity of dried leaves containing SHBsAg was evaluated by measuring cellular and humoral responses. For the cellular response, we measured the activation of CD8 T cells and the presence of T regulatory cells (Tregs) in peripheral lymph nodes and spleen. The humoral response was evaluated by ELISA tests, measuring anti-SHBsAg IgGs in serum and anti-SHBsAg IgAs in faeces and serum. Non-transgenic tobacco plants and plants producing SHBsAg were used for genetic transformation with three different constructs containing an HIV polyepitope-SHBsAg fusion protein. These results brings new knowledge in the use of the Hepatitis B virus-like particles as carrier of an HIV-1 polyepitope in palnts, second genetic plant transformation and plant oral immunization
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Wang, Shishan. "Production, assembly and solid-state NMR analysis of various hepatitis B virus capsids." Thesis, Lyon, 2019. http://www.theses.fr/2019LYSE1146.
Full textAbstract:
L’hépatite B est une maladie du foie qui pose un problème majeur de santé publique. Il n’existe à ce jour aucun traitement permettant de guérir complètement de l’infection, et de nouvelles thérapies ont besoin d’être développées. Étant donné son rôle clé dans le cycle de vie du virus de l’hépatite B (VHB), la protéine core qui forme la capside virale est aujourd’hui l’une des cibles avec le plus grand potentiel thérapeutique. Nos recherches sont focalisées sur la caractérisation des capsides du VHB dans différents états conformationnels en utilisant des techniques de biochimie et de RMN du solide, afin de révéler leur conformation précise sous différentes conditions, incluant l’interaction des capsides avec des antiviraux, et la relation entre la conformation de la capside et la maturation du virus. Un système d’expression bactérienne ainsi qu’un système acellulaire de synthèse de protéine à base de germes de blé ont été établis au laboratoire pour produire les capsides, et des protocoles pour désassembler puis réassembler les capsides en présence de différents types d’ARN ont été implémentés. Des échantillons de capsides formées dans E. coli et réassemblées in vitro ont été analysés par RMN. Les différentes formes de capsides observées incluent les protéines tronquées Cp140 et Cp149, la protéine entière Cp183, phosphorylée P-Cp183, et enfin des mutants. Dans un premier temps, nous avons préparé des échantillons pour l’attribution séquentielle de la protéine core par RMN du solide. L’utilisation de la détection carbone en RMN requiert plusieurs dizaines de milligrammes d’échantillon, qui ont pu être produits en utilisant l’expressions bactérienne en milieu minimum contenant des isotopes marqués. Les attributions séquentielles ont été réalisées sur la protéine tronquée Cp149, qui donne des spectres très similaires à Cp183. Cet échantillon a également été utilisé pour identifier les différences conformationnelles entre les 4 monomères de la capside, qui sont provoquées par la symétrie icosaédrale T=4. Ensuite, l’objet principal de cette thèse a été l’investigation et la comparaison d’une large variété de capsides, dans leur forme autoassemblée dans les bactéries E. coli, ainsi que dans leur forme réassemblée. Pour le réassemblage de la protéine entière, qui requiert la présence d’acides nucléiques, nous avons testé différents types d’ARN y compris l’ARN viral prégénomique. Nous avons étudié différentes symétries (T=3 et T=4), ainsi que les états d’oxydation de la capside, et comparé les différences de conformation grâce aux perturbations de déplacements chimiques observées dans les spectres RMN. Nous avons pu identifier les acides aminés impliqués dans les changements conformationnels majeurs entre les différentes préparations. La RMN du solide en détection proton à 100 kHz a récemment émergé comme un outils important pour l’analyse de protéines produites en quantités moindres. Nous avons appliqué cette stratégie à l’analyse des capsides de Cp149 afin d’obtenir l’attribution des protons amides. La détection proton par RMN du solide peut être combinée avec succès à la synthèse des protéines en système acellulaire, qui donne de faibles rendements par rapport aux cultures en bactéries. Cette approche est particulièrement intéressante pour analyser la modulation de l’assemblage des capsides induite par la présence de drogues. Bien que nous ayons commencé à étudier l’impact de modulateurs d’assemblage par RMN en détection carbone sur des capsides formées dans E. coli et réassemblées (données préliminaires non montrées dans ce manuscrit), la détection proton ouvre la voie vers l’analyse de l’impact de ces modulateurs sur l’assemblage des protéines core directement à la sortie du ribosomeHepatitis B is a widely spread liver disease which causes a heavy burden for human health, with 257 millions of people affected by chronic infection and about 780,000 deaths per year. Yet, infected patients can not be completely cured by current treatments using notably nucleos(t)ide analogues and interferons. In order to achieve the goal of the World Health Assembly (WHA), who wishes to eliminate hepatitis B by 2030, new therapies need to be developed. Given its critical role for the Hepatitis B virus (HBV) life cycle, the core protein (Cp) is today one of the antiviral targets with the highest potential. Our research focuses on the characterization of HBV capsids in different conformational states using biochemistry and solid-state NMR, aiming at revealing their precise conformation under different conditions, including the interaction of capsids with antivirals, and the correlation between capsid conformation and viral maturation. For sample preparation, both a bacterial expression system and a wheat germ cell-free protein synthesis system have been established in the laboratory to produce HBV capsids, and protocols to disassemble and reassemble capsids with different nucleic acids have been implemented. Both capsids preformed in E. coli and capsids reassembled in vitro were addressed to NMR studies. Different capsids forms include the truncated versions Cp140 and Cp149, the full length protein Cp183, the phosphorylated P-Cp183 and mutant forms. First, we have prepared samples for the sequential assignment of the protein using solid-state NMR. The use of carbon-13 detection asks for several tens of milligrams of sample, which were produced using labeled isotopes and bacterial expression in minimal media. Sequential assignments were performed using the truncated capsid Cp149, which showed highly similar spectra to Cp183. This sample was also used to identify conformational differences between the four different monomers in the capsid, which are due to the T=4 icosahedral symmetry. Then, the main body of the thesis is the investigation and comparison of a variety of different capsid forms, including Cp183, P-Cp183, Cp149, Cp140, another truncated form resulting in mainly T=3 icosahedral assemblies, and Cp140 C61A and Cp183 F97L mutants. We investigated all samples in both the E. coli-produced and reassembled forms, which needs for the full-length protein the presence of nucleic acids, of which we tested several, including the viral pregenomic RNA. We investigated different symmetries, as well as oxidation states of the capsid, and compared the differences via chemical shift perturbations observed in NMR spectra. We reported in a site-specific manner the major conformational changes observed between the different preparations. Proton-detected solid-state NMR at 100 kHz has recently emerged as a tool for analyzing proteins with the need of less sample amount. We have applied this strategy to the analysis of the Cp149 capsids, in order to obtain sequential assignments of the amide proton resonances. For this, deuteration of the protein in bacteria was used as well, needing adaptation of sample preparation protocols. Proton detection can be successfully combined with cell-free protein synthesis, which gives low yields compared to bacterial expression. This approach is of potential interest to analyze capsid assembly modulation induced by the presence of drugs. While we have started in the framework of this thesis to analyze the capsid in presence of different capsid assembly modulators by carbon-13 detected NMR on E. coli and reassembled capsids (preliminary results not reported here), proton detection opens the way to an analysis of the impact of capsid modulation directly on the exit of the core proteins from the ribosome, on assembly. We showed that cell-free expression combined with proton-detection solid-state NMR can be used to analyze capsid chemical shifts, and thus in future work the conformational modulations
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Brichler, Ségolène. "Le virus de l'hépatite delta : implication du stress oxydant, de STAT-3 et de NF-kappaB dans la pathogénèse virale." Paris 5, 2011. http://www.theses.fr/2011PA05T002.
Full textAbstract:
Le virus de l'hépatite delta (VHD) est un satellite du virus de l’hépatite B (VHB). Il utilise les protéines d’enveloppe de ce dernier pour former ses particules virales. Le génome du VHD code deux protéines, p24 (ou petite protéine sHDAg) et p27 (ou grande protéine LHDAg), à partir d’une seule phase de lecture ouverte située sur l’antigénome, et ce, grâce à un mécanisme d’édition de l’ARN messager. P24 et p27 sont strictement identiques, exceptés pour les 19 acides aminés additionnels en C-terminal de p27, qui contiennent un site d'isoprénylation sur le résidu cystéine en position 211 (C211). Cette isoprénylation est critique pour l’adressage de la ribonucléoprotéine delta à la membrane du réticulum endoplasmique (RE), pour son interaction avec les protéines d'enveloppe du VHB et pour l’assemblage et la sécrétion des virions delta. Au cours de l’infection VHB/VHD, on observe en règle générale une inhibition de la réplication du VHB. Cependant, la maladie hépatique qui en résulte est beaucoup plus grave, avec une plus grande fréquence des formes fulminantes, et surtout une progression accélérée vers la cirrhose et le carcinome hépatocellulaire. Les mécanismes de cette aggravation ne sont pas élucidés, mais suggèrent une pathogenèse spécifique liée au VHD. Afin d’explorer ces questions, nous avons utilisé un modèle de transfection transitoire de cellules hépatocytaires Huh7, à l’aide de plasmides codant les protéines delta p24 et p27. Dans une première étude, nous montrons que p27, et p24 dans une moindre mesure, inhibent la réplication du VHB, en bloquant l’activation des enhancers 1 et 2 responsables du haut niveau de réplication du VHB et de la spécificité hépatocytaire de cette réplication. De plus, nous montrons que p27 est capable d’activer le promoteur du gène codant la protéine antivirale MxA inductible par les interférons de type I (IFNa/b) et de potentialiser l’effet des IFNa/b sur ce promoteur MxA. Dans une seconde étude, nous avons recherché des mécanismes de pathogenèse spécifique liés au VHD, responsables de l’aggravation de la maladie hépatique au cours de l’infection VHB/VHD. L’activation des voies du stress oxydant semble être un mécanisme électif dans la pathogénicité des virus des hépatites B et C (VHC). En effet, les protéines non structurales, NS5A notamment, et la capside du VHC, ainsi que la protéine HBx et les protéines d’enveloppe du VHB, sont capables d’induire un stress oxydant au sein de la cellule. De nombreux facteurs de transcription impliqués dans diverses voies de signalisation cellulaire sont ainsi activés. Parmi ceux-ci, on distingue STAT-3, considéré comme un véritable oncogène, et NF-kB, deux facteurs clefs de la régulation de la prolifération et de la mort cellulaire, dont l’activation a été retrouvée dans de nombreux types de cancers dont l’hépatocarcinome cellulaire. Nos résultats montrent que p27 induit de façon significative un stress du RE, ainsi qu’une augmentation de la synthèse de l’enzyme NADPH oxydase 4 (Nox4), impliqués dans la production en excès de radicaux oxygénés (ROS) dans la cellule et la phosphorylation sur sérine ou thréonine de nombreux facteurs de transcription. Nous montrons en effet dans notre modèle, une production de ROS significativement plus élevée dans les cellules exprimant p27, de même que la phosphorylation et la translocation nucléaire de STAT-3 et de NF-kB. Ces résultats sont confirmés par l’utilisation d’antioxydants et d’inhibiteurs calciques qui inhibent cette activation. De même, en utilisant un plasmide p27 où la C211 est mutée en Sérine, nous avons obtenu une diminution de 50% de l’activation de STAT-3 et de NF-kB confirmant le rôle de l’isoprénylation dans les effets observés. Ainsi, en conclusion, nos résultats constituent une première approche de la compréhension des mécanismes de la pathogenèse hépatique spécifique liée au VHDThe hepatitis delta virus (HDV) is a satellite of hepatitis B virus (HBV). HDV uses the HBV envelope proteins to form its viral particles. The HDV genome encodes two proteins, p24 (or small protein sHDAg) and p27 (or large protein LHDAg) from a single open reading frame located on the antigenome through an editing event occuring on the delta mRNA. P24 and p27 are identical, except for the 19 additional amino acids at p27 Cterminus, which contain an isoprenylation site on a cysteine residue at position 211 (C211). This isoprenylation is critical for addressing the delta ribonucleoprotein to the endoplasmic reticulum (ER) membrane, for interaction with HBV envelope proteins, assembly and secretion of delta virions. During HBV/HDV co-infection, an inhibition of HBV replication is generally observed. However, the resulting liver disease is much more severe, with a higher incidence of fulminant hepatitis, and an accelerated progression to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. The mechanisms are unclear, but suggest a specific HDV-related pathogenesis. To explore these questions, we used a transient transfection of Huh7 hepatocytes, using plasmids encoding the p24 and p27 delta proteins. In a first study, we show that p27, and p24 to a lesser extent, inhibit HBV replication by blocking the activation of enhancers 1 and 2, reponsible for the high level of HBV replication. Moreover, p27 can activate the interferon type I (IFNa/b)-inducible MxA promoter, and potentiate the effect of IFNa/b on MxA promoter. In a second study we investigated possible specific pathogenic mechanisms relaed to HDV. The activation of oxidative stress pathways appears to be an elective mechanism in hepatitis B and C (HCV) pathogenesis. Indeed HCV nonstructural NS5A and core proteins, and HBV HBx and envelope proteins, can induce oxidative stress within infected cells. Many transcription factors involved in various cellular signaling pathways are thus activated. Among these, STAT-3, considered as a true oncogene and NF-kB are two key factors regulating proliferation and cell death. Their activation has been found in many types of cancer, including hepatocellular carcinoma. Our results show that p27 induces a significant ER stress and an increased synthesis of the NADPH oxidase 4 (Nox4) enzyme, involved in the overproduction of reactive oxygen species (ROS) in the cell, and serine or threonine phosphorylation of many transcription factors. Indeed, in our model, ROS production is significantly higher in cells expressing p27, as well as phosphorylation and nuclear translocation of STAT-3 and NF-kB. These results are confirmed by the use of antioxidants and calcium inhibitors that strongly inhibit this activation. Similarly, using a p27 plasmid construct in which C211 is mutated to serine, we obtained a 50% decrease of STAT-3 and NF-kB activation, confirming the role of isoprenylation in the observed effects. In conclusion, our results constitute a first approach to understanding the mechanisms of HDV-related liver pathogenesis