Dissertations / Theses on the topic 'Hermes antigen'

A highly sensitive capture sandwich antibody assay was developed for the detection of Herpes Simplex Virus alkaline nuclease in cerebrospinal fluid. Chemiluminescence, using Isoluminol labelled antibody and p-Iodophenol enhanced Horse-Radish Peroxidase catalysed Luminol, was compared with Horse-Radish Peroxidase colorimetric detection in the assay. Luminol was superior to Isoluminol based chemiluminescence, but this was no more sensitive than colorimetric detection. In vitro the final optimised colorimetric assay had a sensitivity of 20 plaque forming units of Herpes Simplex Virus. A method for dissociation of immune complexed alkaline nuclease, using Hydrochloric acid as a chaotropic agent, was optimised for use with the assay. The assay was applied to 12 cerebrospinal fluid samples from 9 cases of Herpes Simplex Virus Encephalitis. All cases conformed to accepted criteria for the diagnosis of the disease in the absence of brain biopsy. All the tested samples were positive for alkaline nuclease, which was present in either free or immune complexed form or both. The earliest positive sample was day 1 of the clinical illness, and samples were positive up to day 56, which was the longest interval from onset of symptoms to lumbar puncture in these patients. Free alkaline nuclease was present in the early stages of the disease, being replaced by immune complexed alkaline nuclease after day 13, a time when locally synthesised anti-HSV1 IgG was also detected. A total of 35 control patients were also studied. Five out of 6 patients with suspected Herpes Simplex Virus Encephalitis or myelitis, and one case of definite herpes myelitis were positive. Two of the remaining 28 cases were positive: both of these were patients with Subacute Sclerosing Panencephalitis. No demyelinating, inflammatory, other infectious or non-neurological disorders were positive by the assay.

The present study was designed to determine major histocompatibility complex (MHC) expression in the rat CNS following a viral infection. Male Wistar rats were anesthetized with ether and the right cornea was repeatedly scratched with a 23.5 gage needle. A 30 microliter drop of Herpes Simplex Virus Type 1 (HSV1) (PFU 33,000/mL) was placed on the scarified cornea. Animals were sacrificed 3, 6, 8, 10, 12, and 30 days following infection. Following decapitation, the brains were removed and placed in Zamboni fixative for immersion fixation. Monoclonal antibodies against rat MHC class I/class II antigens and HSV1 as well as polyclonal glial fibrillary acidic protein (GFAP) were used in both single and double staining procedures. Neurons staining positively for HSV1 were observed in the ipsilateral principal sensory nucleus of the fifth nerve. Fifth nerve axons were also positive. Additional infected areas included midline brainstem structures, hypothalamus, thalamus, cerebellum and diffuse cortical regions. Infection became increasingly pronounced through day 10. Two animals who recovered from the viral encephalitis were sacrificed on days 12 and 30; they demonstrated much less positive HSV1 staining. In the infected animals, serial sections revealed both class I and class II positive staining of non-neuronal cells in brain areas which were also positive for HSV1. Endothelial cells and cells with microglia-like morphology were positively stained for class I and expression increased through day 10. The class II positive cells had the morphology of leukocytes and microglia-like cells with increased expression occurring through days 8 and 10 throughout the brain. In serial sections, dense areas of class II positive microglia-like cells were located in the same areas as HSV1 positive clusters. MHC expression in the day 12 animal was quite pronounced with decreasing levels observed at 30 days. Tissue doubly stained for class II and GFAP demonstrated no overlap among positively stained cells suggesting that astrocytes were not expressing MHC glycoproteins. Astrocytes did, however, show morphological changes consistent with an acute CNS infection. Microglia are an endogenous component of the CNS which may be phagocytotic, but the full range of functions which microglia possess is still unclear. The results of the present study indicate that MHC expression occurs in the CNS as early as 6 days following viral infection with increased expression through day 10. Continued high levels of class II expression at 12 days, following substantial active virus clearing, strongly suggest ongoing immune system activity which appears to be present at least as long as 30 days post-infection. Peripherally, MHC expression is involved in the induction of an immune response, suggesting that the rat brain is capable of mounting an immune response to viral infection. Microglia expressing class II antigens may possess the ability to present antigen to T cells and thereby initiate an immune response within the CNS. The present study suggests that MHC antigens may play an active role in viral clearance from the CNS.<br>Medicine, Faculty of<br>Graduate

Les furocoumarines bifonctionnelles, telles que le 8-MOP, sont utilisées en photochimiothérapie de certaines dermatoses comme le psoriasis ; il a été démontré que leur utilisation prolongée risquait de leur conférer un pouvoir cancérigène. En revanche, il a été prouvé que les furocoumarines monofonctionnelles, telles que le 3-CPs, ne comportaient pas ce risque. Ceci a conduit à la recherche de nouveaux dérivés de psoralènes qui soient cytotoxiques et moins génotoxiques. Deux nouveaux dérivés, les pyridopsoralènes de nature monofonctionnelle, le (3,4-c) pyridopsoralène ou PI, et le 7-methyl (3,4-c) pyridopsoralène ou PII, ont été étudiés dans des cellules simiennes et des fibroblastes de sujets atteints de Xeroderma pigmentosum (XP). Les résultats obtenus montrent que les deux pyridopsoralènes sont plus cytotoxiques que le 8-MOP dans toutes les cellules animales utilisées. Les lésions induites par ces deux pyridopsoralènes PI et PII semblent être moins bien réparées que celles causées par le 8-MOP. Le PI et le PII semblent être moins efficaces que le 8-MOP sur la survie du virus HSV-1 traité lui-même. Ceci est probablement dû à une efficacité de réparation différente pour le génome viral par rapport au génome cellulaire. Nos résultats montrent un effet antiprolifératif de ces composés qui semblent être prometteurs pour l'utilisation en PUVA-thérapie. 2- L'identification des agents clastogènes comporte un double intérêt : D'une part, pour comprendre les mécanismes d'action du 12-0-tétradeca­ noylphorbol-13-acétate (TPA) en tant qu'agent induisant des dommages dans le DNA, d'autre part, il peut être intéressant de connaître sa relation avec certaines maladies inflammatoires chroniques accompagnées de cassures chromosomiques. Il en est ainsi pour des maladies du collagène, le Lupus érythémateux et la Sclérodermie. La production du radical superoxide O2 par les cellules inflammatoires peut entraîner un processus de peroxydation des lipides membranaires qui, à son tour, est générateur d'O2 actif. Ceci pourrait mener à un processus autocatalytique caractéristique de ces maladies inflammatoires chroniques. Le matériel clastogène induit par le TPA est un bon système d'étude in vitro pour la compréhension de l'apparition d'un matériel clastogène dans le sérum de ces malades. Ainsi qu'il l'est montré dans le présent travail, le FC est mutagène et il pourrait jouer un rôle dans la promotion tumorale et dans la cancérogénèse. Il pourrait être un lien entre l'inflammation chronique et le cancer. Le TPA, en raison de son action sur la membrane cellulaire, agit d'abord sur une cible qui n’est pas le DNA mais qui produirait le FC, ainsi qu’il l'est montré dans le présent travail, dans les lymphocytes humains et les cellules de hamster chinois V79. Le FC peut créer également des dommages dans ces deux types cellulaires<br>The fact that use of bifunctional furocoumarins such as 8-methoxypso­ralen (8-MOP) leads to a certain carcinogenic risk, and monofunctional furocoumarins proposed for PUVA therapy, such as 3-carbethoxypso­ralen (3-CPs) show only a weak activity in therapeutic trials, the photobiologic properties of two new monofunctional psoralens (3-4-c) pyridopsoralen or PI, 7-methyl(3-4-c) pyridopsoralen or PII, have been investigated in cultured of green monkey kidney cells (CV-1) and human skin fibroblasts from normal and XP donors. PI and PII are shown to be more photocytotoxic than the 8-MOP on the different cells. The monoadditions photoinduced by PI or PII appear to be less repairable than the lesions photoinduced by 8-MOP. However, 8-MOP was found to be more active than PI or PII on the survival of treated Herpes simplex virus (HSV-1), probably due to a different efficiency of cell mediated repair of lesion induced in the viral genome. The strong antiproliferative activity observed for the new pyridopsoralens make them promising compounds in view of their possible use in PUVA therapy of psoriasis. The identification of the clastogenic agents is not only of interest as a mechanism of TPA-induced DNA damage, but may also be of importance with respect to certain human diseases in which chronic inflammatory processes are accompanied by chromosome damage: collagen diseases, such as Lupus erythematosus and progressive systemic sclerosis. Production of active oxygen by inflammatory cells may initiate the process of membrane lipid peroxidation during which again active oxygen is produced. This could lead to the autocatalytic, self-sustaining process, characteristic of these chronic inflammatory conditions. The TPA-induced clastogenic material is a good in vitro system for the study of the clastogenic material present in the serum of these patients. Since CF is mutagenic, as shown by the present study, it could play a role in tumor promotion and carcinogenesis. It might be the link between chronic inflammation and cancer. CF is not only the mediator between the events at the membrane and the genome of the stimulated cell, but communicated also DA damaging activity to ether cells, as shown in the present study in V79 cells and human lymphocytes

The herpes simplex virus (HSV) immunomodulatory protein, ICP47, conceals infected cells from CD8+ T cells by inhibiting the presentation of peptides on MHC class I. The mechanism by which ICP47 exerts this function is by binding to the transporter associated with antigen processing (TAP) protein, blocking peptide transport and loading onto MHC I molecules in the ER. The earliest studies of ICP47 supported by biochemical and in vitro observations noted marked species specificity with human but not mouse TAP being inhibited by this protein. However, later work demonstrated that ICP47 can contribute to HSV neurovirulence in mice. The discordance between biochemical and in vivo data leaves our understanding of ICP47 and its role in evading CD8+ T cells incomplete. Data from our laboratory suggested that ICP47 is likely to be expressed during the establishment and maintenance of HSV-1 latency, however, its exact function during these stages of infection is unknown. Therefore, in this study, we sought to re-visit the discrepancies discussed above and investigate the role of ICP47 during HSV-1 infection. We utilised different strains of HSV and mice, as well as an alternate infection model and unique methods to quantify the effect of ICP47 on levels of antigen presentation. In our mouse model, where HSV is confined to the peripheral nervous system, deletion of ICP47 from HSV-1 KOS did not alter lesion development, virus load, spread or reactivation. Likewise, latency was unaffected by ICP47 deficiency as determined using a sensitive Cre-marking mouse model. Further observations from the Cre-marking mouse model revealed that unlike the ICP47 promoter inserted in an ectopic locus, native promoters did not induce additional neuronal marking by Cre beyond lytic infection. We evaluated the reasons behind the difference in marking using newly generated recombinant viruses. Subsequent flank infection of ROSA26R mice with these viruses showed that the local genomic context is also important for regulation of gene expression. By contrast to our in vivo pathogenesis data, we were able to show that ICP47 does inhibit antigen presentation significantly on HSV-infected mouse cells using in vitro antigen presentation assays. However, in mouse cells, antigen presentation was ablated by 44%, compared to an 85% reduction in human cells. As CD8+ T cells have been shown to recognize very few peptide-MHC I complexes on the surface of target cells, it is important to consider the efficiency at which ICP47 inhibits human and mouse TAP. Therefore, we used mass spectrometry to identify and quantify MHC I bound peptides derived from HSV-1 during viral infection. We found that more peptide sequences were presented on mouse cells infected with ICP47 null virus compared to those infected with wild-type virus. We quantified the presentation of 14 of these peptides and the contribution of ICP47 to this process in human and mouse cells. We found that ICP47 almost entirely blocks human TAP-mediated peptide presentation, though the degree of inhibition was somewhat peptide-specific. Conversely, the effect of ICP47 on mouse TAP was far less profound, resulting in only up to five-fold reduction in MHC-peptide abundance. In conclusion, this study shows that despite significant inhibition of antigen presentation in mouse cells, ICP47 may not be an effective immune modulator in mice and suggests a need for re-evaluation of suitable mouse models.

L’autophagie est une voie hautement conservée de dégradation lysosomale des constituants cellulaires qui est essentiel à l’homéostasie cellulaire et contribue à l’apprêtement et à la présentation des antigènes. Les rôles relativement récents de l'autophagie dans l'immunité innée et acquise sous-tendent de nouveaux paradigmes immunologiques pouvant faciliter le développement de nouvelles thérapies où la dérégulation de l’autophagie est associée à des maladies auto-immunes. Cependant, l'étude in vivo de la réponse autophagique est difficile en raison du nombre limité de méthodes d'analyse pouvant fournir une définition dynamique des protéines clés impliquées dans cette voie. En conséquence, nous avons développé un programme de recherche en protéomique intégrée afin d’identifier et de quantifier les proteines associées à l'autophagie et de déterminer les mécanismes moléculaires régissant les fonctions de l’autophagosome dans la présentation antigénique en utilisant une approche de biologie des systèmes. Pour étudier comment l'autophagie et la présentation antigénique sont activement régulés dans les macrophages, nous avons d'abord procédé à une étude protéomique à grande échelle sous différentes conditions connues pour stimuler l'autophagie, tels l’activation par les cytokines et l’infection virale. La cytokine tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) est l'une des principales cytokines pro-inflammatoires qui intervient dans les réactions locales et systémiques afin de développer une réponse immune adaptative. La protéomique quantitative d'extraits membranaires de macrophages contrôles et stimulés avec le TNF-alpha a révélé que l'activation des macrophages a entrainé la dégradation de protéines mitochondriales et des changements d’abondance de plusieurs protéines impliquées dans le trafic vésiculaire et la réponse immunitaire. Nous avons constaté que la dégradation des protéines mitochondriales était sous le contrôle de la voie ATG5, et était spécifique au TNF-alpha. En outre, l’utilisation d’un nouveau système de présentation antigènique, nous a permi de constater que l'induction de la mitophagie par le TNF-alpha a entrainée l’apprêtement et la présentation d’antigènes mitochondriaux par des molécules du CMH de classe I, contribuant ainsi la variation du répertoire immunopeptidomique à la surface cellulaire. Ces résultats mettent en évidence un rôle insoupçonné du TNF-alpha dans la mitophagie et permet une meilleure compréhension des mécanismes responsables de la présentation d’auto-antigènes par les molécules du CMH de classe I. Une interaction complexe existe également entre infection virale et l'autophagie. Récemment, notre laboratoire a fourni une première preuve suggérant que la macroautophagie peut contribuer à la présentation de protéines virales par les molécules du CMH de classe I lors de l’infection virale par l'herpès simplex virus de type 1 (HSV-1). Le virus HSV1 fait parti des virus humains les plus complexes et les plus répandues. Bien que la composition des particules virales a été étudiée précédemment, on connaît moins bien l'expression de l'ensemble du protéome viral lors de l’infection des cellules hôtes. Afin de caractériser les changements dynamiques de l’expression des protéines virales lors de l’infection, nous avons analysé par LC-MS/MS le protéome du HSV1 dans les macrophages infectés. Ces analyses nous ont permis d’identifier un total de 67 protéines virales structurales et non structurales (82% du protéome HSV1) en utilisant le spectromètre de masse LTQ-Orbitrap. Nous avons également identifié 90 nouveaux sites de phosphorylation et de dix nouveaux sites d’ubiquitylation sur différentes protéines virales. Suite à l’ubiquitylation, les protéines virales peuvent se localiser au noyau ou participer à des événements de fusion avec la membrane nucléaire, suggérant ainsi que cette modification pourrait influer le trafic vésiculaire des protéines virales. Le traitement avec des inhibiteurs de la réplication de l'ADN induit des changements sur l'abondance et la modification des protéines virales, mettant en évidence l'interdépendance des protéines virales au cours du cycle de vie du virus. Compte tenu de l'importance de la dynamique d'expression, de l’ubiquitylation et la phosphorylation sur la fonction des proteines virales, ces résultats ouvriront la voie vers de nouvelles études sur la biologie des virus de l'herpès. Fait intéressant, l'infection HSV1 dans les macrophages déclenche une nouvelle forme d'autophagie qui diffère remarquablement de la macroautophagie. Ce processus, appelé autophagie associée à l’enveloppe nucléaire (nuclear envelope derived autophagy, NEDA), conduit à la formation de vésicules membranaires contenant 4 couches lipidiques provenant de l'enveloppe nucléaire où on retrouve une grande proportion de certaines protéines virales, telle la glycoprotéine B. Les mécanismes régissant NEDA et leur importance lors de l’infection virale sont encore méconnus. En utilisant un essai de présentation antigénique, nous avons pu montrer que la voie NEDA est indépendante d’ATG5 et participe à l’apprêtement et la présentation d’antigènes viraux par le CMH de classe I. Pour comprendre l'implication de NEDA dans la présentation des antigènes, il est essentiel de caractériser le protéome des autophagosomes isolés à partir de macrophages infectés par HSV1. Aussi, nous avons développé une nouvelle approche de fractionnement basé sur l’isolation de lysosomes chargés de billes de latex, nous permettant ainsi d’obtenir des extraits cellulaires enrichis en autophagosomes. Le transfert des antigènes HSV1 dans les autophagosomes a été determine par protéomique quantitative. Les protéines provenant de l’enveloppe nucléaire ont été préférentiellement transférées dans les autophagosome lors de l'infection des macrophages par le HSV1. Les analyses protéomiques d’autophagosomes impliquant NEDA ou la macroautophagie ont permis de decouvrir des mécanismes jouant un rôle clé dans l’immunodominance de la glycoprotéine B lors de l'infection HSV1. Ces analyses ont également révélées que diverses voies autophagiques peuvent être induites pour favoriser la capture sélective de protéines virales, façonnant de façon dynamique la nature de la réponse immunitaire lors d'une infection. En conclusion, l'application des méthodes de protéomique quantitative a joué un rôle clé dans l'identification et la quantification des protéines ayant des rôles importants dans la régulation de l'autophagie chez les macrophages, et nous a permis d'identifier les changements qui se produisent lors de la formation des autophagosomes lors de maladies inflammatoires ou d’infection virale. En outre, notre approche de biologie des systèmes, qui combine la protéomique quantitative basée sur la spectrométrie de masse avec des essais fonctionnels tels la présentation antigénique, nous a permis d’acquérir de nouvelles connaissances sur les mécanismes moléculaires régissant les fonctions de l'autophagie lors de la présentation antigénique. Une meilleure compréhension de ces mécanismes permettra de réduire les effets nuisibles de l'immunodominance suite à l'infection virale ou lors du développement du cancer en mettant en place une réponse immunitaire appropriée.<br>Autophagy is a highly conserved lysosomal-mediated protein degradation pathway that plays a crucial role in maintaining cellular homeostasis and contributes to antigen processing and presentation. The emerging roles of autophagy in both innate and adaptive immunity underpin novel immunological paradigms that may provide opportunities for the development of new therapies where impaired autophagy is associated with autoimmune diseases. However, the in vivo study of autophagic response is challenging in view of the limited number of analytical approaches that can provide a dynamic definition of the key proteins involved in this pathway. Accordingly, we developed an integrated proteomics research program to unravel the molecular machines associated with autophagy and to decipher the fine details of the molecular mechanisms governing the functions of the autophagosome in antigen presentation using a systems biology approach. To study how autophagy and antigen presentation are actively modulated in macrophages, we first conducted comprehensive, global proteomics studies under different conditions known to stimulate autophagy. Autophagy is modulated by cytokines as well as by viral infection in various ways. TNF-alpha is one of the major proinflammatory cytokines that mediate local and systemic responses and direct the development of adaptive immunity. Label-free quantitative proteomics analysis of membrane extracts from TNF-alpha activated and resting macrophages revealed that TNF-alpha activation led to the downregulation of mitochondrial proteins and the differential regulation of several proteins involved in vesicle trafficking and immune response. Importantly, we found that the downregulation of mitochondria proteins occurred through Atg5-dependent mitophagy, and was specific to TNF-alpha. Furthermore, using a novel antigen presentation system, we observed that the induction of mitophagy by TNF-alpha enabled the processing and presentation of mitochondrial antigens at the cell surface by MHC class I molecules, suggesting that TNF-alpha induced mitophagy contributes to the modification of the MHC class I peptide repertoire. These findings highlight an unsuspected role of TNF-alpha in mitophagy and expanded our understanding of the mechanisms responsible for MHC class I presentation of self-antigens. A complex interplay also exists between viral infection and autophagy. Recently, our lab provided the first evidence that macroautophagy can contribute to the presentation of viral proteins on MHC class I molecules during Herpes Simplex Virus type 1 (HSV1) infection. HSV1 are among the most complex and widespread human viruses. While the composition of viral particles has been studied, less is known about the expression of the whole viral proteome in infected cells. To comprehensively characterize the system, we analyzed the proteome of the prototypical HSV1 in infected macrophages by LC-MS/MS. We achieved a very high level of protein coverage and identified a total of 67 structural and non-structural viral proteins (82% of the HSV1 proteome) using LC-MS/MS on a LTQ-Orbitrap instrument. We also obtained a comprehensive map of 90 novel phosphorylation sites and ten novel ubiquitylation sites on different viral proteins. Interestingly all ubiquitylated proteins could either localize to the nucleus or participate in membrane fusion events, suggesting that ubiquitylation of viral proteins might affect their trafficking. Treatment with inhibitors of DNA replication induced changes of both viral protein abundance and modifications, highlighting the interdependence of viral proteins during the life cycle of the virus. Given the importance of expression dynamics, ubiquitylation and phosphorylation for protein function, these findings will serve as important tools for future studies on herpes virus biology. Interestingly, HSV1 infection in macrophages triggers a novel form of autophagy which remarkably differs in many ways from macroautophagy. This process, referred to as nuclear envelope-derived autophagy (NEDA), leads to the formation of 4-membrane layered vesicles originating from the nuclear envelope where some viral protein such as glycoprotein B are highly enriched. To which extent this process differs from macroautophagy and participates in the pathogenesis of HSV infection is still largely unknown. Using a novel antigen presentation assay we could show that NEDA is an Atg5-independent pathway that participates in the capture of viral proteins, and their processing and presentation on MHC class I molecules. To understand the involvement of NEDA in antigen presentation it is crucial to characterize the autophagosomal proteome in HSV1 infected macrophages. We developed a novel isolation method based on the loading of the lysosomal compartment with latex beads, a unique tool to obtain very pure cell extracts, upon autophagy induction. The transfer of HSV1 antigens into autophagosomes was monitored using quantitative proteomics. Nuclear enveloped-derived proteins were preferentially transferred to the autophagosome during HSV1 infection. Detailed proteomics characterization of autophagosomes formed during NEDA and macroautophagy led to the discovery of mechanisms that play a key role in glycoprotein B immunodominance during HSV1 infection. These analyses also revealed that various autophagic pathways can be induced to promote the capture of selective sets of viral proteins, thus actively shaping the nature of the immune response during infection. In conclusion, the application of quantitative proteomics methods played a key role in identifying and quantifying important regulators of autophagy in macrophages and allowed us to identify changes occurring during the remodeling of autophagosomes in response to disease and inflammatory conditions such as viral infections. Furthermore, our systems biology approach that combined mass spectrometry-based quantitative proteomics with functional screens such as antigen presentation assays revealed novel biological insights on the molecular mechanisms governing the functions of autophagy in antigen presentation. Harnessing the contribution of autophagy in antigen presentation has the potential to minimize the deleterious effects of immunodominance in viral infection and cancer by shaping an appropriate immune response.

Le contrôle immunitaire des infections virales est effectué, en grande partie, par les lymphocytes T CD8+ cytotoxiques. Pour y parvenir, les lymphocytes T CD8+ doivent être en mesure de reconnaître les cellules infectées et de les éliminer. Cette reconnaissance des cellules infectées s’effectue par l’interaction du récepteur T (TCR) des lymphocytes T CD8+ et des peptides viraux associés au complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe I à la surface des cellules hôtes. Cette interaction constitue l’élément déclencheur permettant l’élimination de la cellule infectée. On comprend donc toute l’importance des mécanismes cellulaires menant à la génération des peptides antigéniques à partir des protéines virales produites au cours d’une infection. La vision traditionnelle de cet apprêtement protéique menant à la présentation d’antigènes par les molécules du CMH propose deux voies cataboliques distinctes. En effet, il est largement admis que les antigènes endogènes sont apprêtés par la voie dite ‘‘classique’’ de présentation antigénique par les CMH de classe I. Cette voie implique la dégradation des antigènes intracellulaires par le protéasome dans le cytoplasme, le transport des peptides résultant de cette dégradation à l’intérieur du réticulum endoplasmique, leur chargement sur les molécules du CMH de classe I et finalement le transport des complexes peptide-CMH à la surface de la cellule où ils pourront activer les lymphocytes T CD8+. Dans la seconde voie impliquant des antigènes exogènes, le dogme veut que ceux-ci soient apprêtés par les protéases du compartiment endovacuolaire. Les peptides ainsi générés sont directement chargés sur les molécules de CMH de classe II à l’intérieur de ce compartiment. Par la suite, des mécanismes de recyclage vésiculaire assurent le transport des complexes peptide-CMH de classe II à la surface de la cellule afin de stimuler les lymphocytes T CD4+. Cependant, cette stricte ségrégation des voies d’apprêtement antigénique a été durement éprouvée par la capacité des cellules présentatrices d’antigènes à effectuer l’apprêtement d’antigènes exogènes et permettre leur présentation sur des molécules de CMH de classe I. De plus, l’identification récente de peptides d’origine intracellulaire associés à des molécules de CMH de classe II a clairement indiqué la présence d’interactions entre les deux voies d’apprêtement antigénique permettant de transgresser le dogme préalablement établi. L’objectif du travail présenté ici était de caractériser les voies d’apprêtement antigénique menant à la présentation d’antigènes viraux par les molécules du CMH de classe I lors d’une infection par le virus de l’Herpès simplex de type I (HSV-1). Dans les résultats rapportés ici, nous décrivons une nouvelle voie d’apprêtement antigénique résultant de la formation d’autophagosomes dans les cellules infectées. Cette nouvelle voie permet le transfert d’antigènes viraux vers un compartiment vacuolaire dégradatif dans la phase tardive de l’infection par le virus HSV-1. Cette mise en branle d’une seconde voie d’apprêtement antigénique permet d’augmenter le niveau de présentation de la glycoprotéine B (gB) virale utilisée comme modèle dans cette étude. De plus, nos résultats décrivent la formation d’une nouvelle forme d’autophagosomes dérivés de l’enveloppe nucléaire en réponse à l’infection par le virus HSV-1. Ces nouveaux autophagosomes permettent le transfert d’antigènes viraux vers un compartiment vacuolaire lytique, action également assurée par les autophagosomes dits classiques. Dans la deuxième partie du travail présenté ici, nous utilisons l’infection par le virus HSV-1 et la production de la gB qui en résulte pour étudier le trafic membranaire permettant le transfert de la gB vers un compartiment vacuolaire dégradatif. Nos résultats mettent en valeur l’importance du réticulum endoplasmique, et des compartiments autophagiques qui en dérivent, dans ces mécanismes de transfert antigénique permettant d’amplifier la présentation antigénique de la protéine virale gB sur des CMH de classe I via une voie vacuolaire. L’ensemble de nos résultats démontrent également une étroite collaboration entre la voie classique de présentation antigénique par les CMH de classe I et la voie vacuolaire soulignant, encore une fois, la présence d’interaction entre les deux voies.<br>Immune control of viral infections is mainly carried out by cytotoxic CD8+ T lymphocytes. To achieve this, CD8+ T lymphocytes must be able to recognize infected cells and eliminate them. This recognition of infected cells occurs by the interaction of the T cell receptor (TCR) of CD8+ T lymphocytes and viral peptides associated with major histocompatibility complex (MHC) class I on the surface of host cells. This interaction is the key element triggering the elimination of infected cells. This emphasizes the major role of cellular mechanisms leading to the generation of antigenic peptides from viral proteins. The traditional view of antigen presentation by MHC molecules proposes two segregated pathways. Indeed, it is widely accepted that endogenous antigens are processed by the ''classical'' MHC class I presentation pathway. This pathway involves the degradation of intracellular antigens by the proteasome complex in the cytoplasm of the cell, the resulting peptides are then translocated in the endoplasmic reticulum where they are loaded on MHC class I molecules, and finally peptide-MHC complex are exported at the cell surface to activate CD8+ T lymphocytes. In contrast, exogenous antigens internalized by endocytosis or phagocytosis are processed by hydrolases in the lytic endovacuolar compartment and the resulting peptides are loaded on MHC class II molecules. Thereafter, vesicle recycling mechanisms transport the peptide-MHC class II complex on the cell surface where they can stimulate CD4+ T lymphocytes. However, the strict segregation of these two pathways has been revisited to account for the ability of antigen presenting cells to present exogenous antigens on MHC class I molecules by a process called cross-presentation. Moreover, the recent finding that intracellular peptides might also be presented by MHC class II molecules clearly emphasized the presence of interactions between these two antigen processing pathways that transgress the previously established dogma. The objective of the work presented here was to characterize the antigen processing pathways leading to antigen MHC class I presentation during herpes simplex type I (HSV-1) infection. In the results reported here, we describe a new antigen processing pathway resulting from the formation of autophagosomes in HSV-1 infected cells. This new pathway allows the transfer of viral antigens in a lytic vacuolar compartment during the late phase of infection. The development and activation of this second pathway of antigen processing leads to an increased MHC class I presentation of the viral glycoprotein B (gB) used as a model in this study. Moreover, our results describe the establishment of a new form of autophagosomes derived from the nuclear envelope in response to HSV-1 infection. This new form of autophagosomes also contributes to viral antigen transfer to lytic vacuolar compartment in parallel to the action of classical autophagy. Our results also show a close collaboration between the classical MHC class I presentation pathway and vacuolar pathway induced by the formation of autophagosomes, still reinforcing the idea that these two pathways interact together to ensure optimal antigens processing during viral infection. In the second part of the work presented here, we use HSV-1 infection and the resulting viral glycoprotein B to study membrane trafficking allowing the transfer of gB to degradative vacuolar compartments. Our results highlight the role of the endoplasmic reticulum in antigen transfer mechanisms that induce an amplified MHC class I presentation of the viral glycoprotein B.