Academic literature on the topic 'Herpèsvirus humain 6'

L’herpèsvirus humain de type 6B (HHV-6B) infecte près de 100% des humains et établit une latence pour le reste de la vie de l’hôte. L’épidémiologie d’HHV-6A est moins connue. Ces deux virus sont capables d’intégrer leur génome dans les télomères des chromosomes humains. Lorsque cette intégration a lieu dans une cellule germinale et qu’il y a fécondation, ceci mène à un individu portant une copie du génome viral dans chacune des cellules de son corps. Cette condition, appelée inherited chromosomally-integrated HHV-6 (iciHHV-6), résulte en une transmission du génome viral intégré à 50% des descendants et est retrouvée chez environ 1% des humains. Malgré cette importante fréquence dans la population, l’intégration de HHV-6, de même que son infection et son effet sur ses cellules hôtes, demeurent peu caractérisés. Dans ce travail, nous avons étudié l’effet de l’infection d’HHV-6A et HHV-6B sur la réponse de dommages à l’ADN (DDR). Nous avons observé une forte réponse DDR localisée dans les compartiments de la réplication virale (RC), colocalisant avec une grande quantité d’ADN télomérique d’origine virale. De plus, les niveaux des ARNm des gènes TRF1, TRF2 et TPP1, membres du complexe shelterin protégeant les télomères, étaient surexprimés dans les cellules infectées. Cette augmentation se traduit par une surexpression de la protéine TRF2, recrutée aux séquences télomériques virales dans les RC. Finalement, nous avons étudié l’effet de BRACO-19, un inhibiteur de la télomérase, sur l’intégration d’HHV-6A et sa persistance. En utilisant un essai d’intégration récemment mis au point dans notre laboratoire, nous avons démontré que l’inhibition de la télomérase menait à une diminution significative de la fréquence de cellules porteuses d’intégration. Ce travail apporte de nouvelles connaissances sur l’infection de HHV-6 et sur son mécanisme d’intégration potentiel, de même que la première observation d’une possible participation des protéines du complexe shelterin dans l’infection de HHV-6.
Human herpesviruse 6B (HHV-6B) is a very prevalent virus that infect nearly 100% of humans and establish a life-long latency. Much less is known regarding HHV-6A epidemiology. Both viruses can integrate their genome into the telomeres of human chromosomes. When this integration occurs in a germinal cell, it can lead to an individual carrying one copy of the viral genome in every cell of its body. This condition, called inherited chromosomally-integrated HHV-6 (iciHHV-6), will then be transmitted to 50% of offspring and is found in approximately 1% of individuals across the world. Despite being so frequent, much remains to be studied on HHV-6 infection and integration processes. In this work, we studied the effects of viral infection on DNA damage response (DDR) signaling. We observed a DDR located in viral replication compartments (RC), together with a large amount of telomeric sequences that we confirmed to be of viral origin. In addition, mRNAs coding for TRF1, TRF2 and TPP1, members of the shelterin complex protecting telomeres, were upregulated during infection. Consequently, TRF2 protein was overexpressed and relocated to viral telomeric sequences in RC. Lastly, we’ve examined the effects of BRACO-19, a compound that affects telomerase activity, on HHV-6 integration and persistence. Using an integration assay recently developed in our laboratory, we could demonstrate that in the presence of the telomerase inhibitor, the frequency of cells containing integrated HHV-6 was significantly reduced. This work brings new knowledge regarding HHV-6 infection and its potential integration mechanism, as well as the first observation of a possible participation of the shelterin complex proteins during HHV-6 infection.

L’herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus ubiquitaire qui existe sous deux types A et B. Ce virus est capable de s’intégrer dans la région télomérique avec une prévalence de 1% à l’échelle mondiale. Les conséquences de cette intégration demeurent inconnues. Mais, la réactivation de l’HHV-6 a été associée au syndrome d’hypersensibilité médicamenteuse « DRESS ». La détection et le suivi de la réactivation des herpèsvirus chez des patients atteints de DRESS ont été étudiés à l’aide d’une technique de PCR quantitative appliquée sur la salive. L’interprétation des résultats peut être différente selon le virus analysé. Dans le but de savoir si l’HHV-6 peut se réactiver à partir d’un virus intégré et être ainsi à l’origine des manifestations du DRESS, une lignée lymphocytaire B établie à partir d’un patient portant le CIHHV-6 a été traitée par 4 molécules incriminées dans le DRESS. Deux transcrits d’HHV-6 ont été détectés de manière aléatoire et indépendante du traitement. La protéine p41, n’a pas été détectée, montrant que ces molécules n’entraînent pas de réactivation à partir du virus intégré et n’utilisent pas ce mécanisme pour entraîner le DRESS. L’étude d’une large cohorte de 414 patients atteints de pathologies hématologiques ou néphrologiques a révélé une prévalence de 2% de CIHHV-6 (5/249 hématologie ; 0/165 néphrologie). Le chromosome 17 a été la cible d’intégration du HHV6 chez 3 patients. La localisation de l’intégration s’est révélée être en région juxtaposée à celle subtélomérique détectée par FISH, quel que soit le chromosome concerné. Une perte dans la région subtélomérique ainsi qu’une amplification des télomères du chromosome porteur ont été détectées de manière récurrente. Un dysfonctionnement télomérique et une instabilité chromosomique ont été mis en évidence. Nous avons rapporté que deux de nos lignées portant du CIHHV-6 utilisent vraisemblablement les deux voies connues pour maintenir les télomères : l’expression de la télomérase et aussi un profil d’ALT
Human herpesvirus type 6 (HHV-6) is a ubiquitous virus that exists as 2 types A and B. This virus is able to integrate in human chromosome telomeres, with globally 1% of prevalence; the impact of this integration is not yet known. HHV-6 reactivation was associated to the Drug hypersensitivity syndrome or DRESS. We show that detection and monitoring of human herpesvirus reactivation in DRESS patients are possible via quantitative PCR technic applied on saliva. The interpretation of results can be different according to the type of analyzed virus. With the purpose of knowing if the HHV-6 can be reactivated from an integrated virus and so be the cause of DRESS symptoms, a B cell line, established from a patient who has the CIHHV-6, was treated by four molecules incriminated in the DRESS. Two HHV-6 transcripts were detected randomly and independently of treatment. The protein p41 was not detected, which shows that these molecules do not cause any reactivation since the integrated virus and do not use this mechanism to cause the DRESS. The study of a wide cohort of 414 patients with hematological and nephrological diseases revealed a prevalence of 2% of CIHHV-6 (5/249 hematology; 0/165 nephrology). 3 patients had the integration into the chromosome 17. The site of integration using a double labeling viral probe/subtelomeric probe was found to be more precisely in subtelomeric region, regardless of the chromosome in question. The effect of the integration of HHV-6 on the cell was studied by FISH technics. We have detected repeatedly a loss in the subtelomeric region and a telomeres amplification in chromosome which carrying the CIHHV-6. A telomeric dysfunction and chromosomal instability have been demonstrated. We reported that two of our lines carrying the CIHHV-6 likely use the two known ways to maintain telomeres: the telomerase expression and a profile of ALT

L’herpèsvirus humain 6 (HHV-6) est un pathogène opportuniste dont l’infection et/ou la réactivation sont associées avec des maladies telles la roséole, des désordres du système nerveux central, et des complications suite à la transplantation d’organes. Le séquençage du génome viral a révélé l’existence de deux types de HHV-6 (A et B), se distinguant par des séquences dissemblables dans des régions spécifiques et des propriétés biologiques différentes. Nos travaux portent sur la caractérisation de la protéine précoce-immédiate (IE) 2 de HHV-6A. Son expression précoce suite à l’infection et sa capacité de transactivation suggèrent qu’elle représente une protéine clé dans l’établissement d’une infection productive, grâce à son contrôle de la cascade d’expression des gènes viraux. De plus, le transcrit codant pour IE2 se situe dans la région la plus variable entre HHV-6A et -6B, suggérant que la biologie de cette protéine pourrait contribuer à expliquer les différences cliniques entre les deux types viraux. Afin de déterminer les protéines cellulaires recrutées par IE2 durant l’établissement de l’infection, nous avons criblé une librairie de cellules T à la recherche de partenaires d’interaction. Nous avons isolé la protéine Ubc9, enzyme jouant un rôle dans la voie de conjugaison de SUMO. Cette interaction a une importance fonctionnelle pour IE2, puisqu’Ubc9 réprime significativement l’activation de promoteurs par la protéine virale. Les domaines essentiels à la fonctionnalité d’IE2 n’avaient jamais été caractérisés. Nous avons démontré que les domaines N- et C-terminaux sont tous deux requis pour une transactivation optimale, et que la délétion de la queue C-terminale d’IE2 modifie significativement la transactivation et la localisation intranucléaire de la protéine. Nous avons également établi que la région R3 du promoteur précoce-immédiat de HHV-6A est positivement régulée par IE2. Globalement, ces travaux nous procurent une vision plus précise du rôle de la protéine IE2 dans l’initiation de l’infection par HHV-6.
Human herpesvirus 6 (HHV-6) is an opportunistic pathogen whose infection or reactivation are associated with diseases such as roseola, central nervous system disorders and organ transplant anomalies. Sequencing of the viral genome has exposed the existence of two HHV-6 variants (A and B), with diverging sequences in specific regions, and different biological characteristics. Our work focused on the characterization of HHV-6A immediate-early IE2 protein. Its prompt expression following infection and its transactivating ability suggest that IE2 constitutes a key protein for the establishment of a productive infection, owing to its control over the viral gene expression cascade. Moreover, the IE2 coding transcript is located in the most variable region between HHV-6A and -6B, suggesting that the biology of this protein could help explain the clinical differences between the two viral variants. In order to identify cellular proteins recruited by IE2 during the establishment of infection, we have screened a T-cell library for interaction partners. We have isolated Ubiquitin conjugating enzyme 9 (Ubc9), a protein involved in the small ubiquitin-related modifier (SUMO) conjugation pathway. This interaction has a functional relevance for IE2, with Ubc9 significantly repressing promoter activation by the viral protein. Protein domains essential for IE2 function had never been characterized. We have determined that the N- and C-terminal domains are both required for optimal transactivation, and that the deletion of the C-terminal tail of IE2 significantly alters transactivation and the intranuclear localization of the protein. Moreover, we have determined that the R3 domain of the immediate-early HHV-6A promoter represents an IE2 responsive element. Overall, this work provides a more precise image of the role of IE2 during the initiation of HHV-6 infection and a better comprehension of the biology of this complex virus.

L'Herpesvirus Humain de type 6 (HHV6), membre de la famille des Herpesviridae, est responsable d'infections persistantes, associant des phases de latence entrecoupées de périodes de réactivations. Il peut être responsable de complications infectieuses graves chez les sujets immunodéprimés, notamment après allogreffe de cellules souches hématopoïétiques. La multiplication virale est classiquement mesurée par la quantification de la charge virale ADN in vitro après infection de cellules cibles ou in vivo chez les patients infectés. Au suivi de la réplication peut s'ajouter la détection des ARN messagers viraux, qui constituent un marqueur biologique complémentaire potentiel de multiplication virale productive. L'objectif principal du travail de thèse a été de développer des méthodes performantes de quantification de deux types de transcrits de l'HHV6 par RT-PCR en temps réel: le transcrit du gène U90, exprimé précocement après le début du cycle et celui du gène U100, exprimé à une phase plus tardive. La reproductibilité, la répétabilité et la sensibilité de ces deux RT-PCR ont été validées sur des témoins positifs de culture virale et des standards ARN et ADN. L'intérêt de leur utilisation in vitro a été évalué au cours de cinétiques d'infection de cellules MT4 par la souche HHV6-B HST. Les résultats montrent une bonne corrélation entre la charge virale ADN et celles des deux transcrits. Le transcrit U100 est exprimé plus abondamment que le transcrit U90. Une première étude menée chez 34 patients au cours des 6 premiers mois post-greffe de CSH confirme ces observations. La quantification de ces deux ARNm viraux constitue un moyen performant de mesure de la transcription virale in vitro ainsi que chez des patients infectés
Human Herpesvirus 6 (HHV6), a member of the Herpesviridae family, is responsible for persistent infections, with latency stages and reactivations episodes. Active infection may be associated with serious diseases in immunosuppressed patients, particularly in the months following hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). DNA viral load is commonly used to measure viral replication in vitro in infected target cells or in vivo in peripheral blood of infected patients. The detection of viral mRNA may help to complete active multiplication measurement. The objective of our work was to develop real time RT-PCR to quantify two HHV6 transcripts: U90 mRNA, produced at the early step of viral cycle, and U100, transcribed at the late step. The good results of the methods were assessed by intra-assay, inter-assay variability and lower detection limit tests measured on infected cells and DNA and RNA standards. Kinetics of MT4 cell infections by the HHV6-B strain HST showed a good correlation between DNA viral load and quantification of U90 and U100 mRNA. The U100 transcript was always expressed at higher level than U90. Our observations were further confirmed in vivo in samples obtained in the first 6 months following allograft of 34 HSC transplanted patients. The quantification of U90 and U100 mRNA is thus an effective way to investigate viral transcription both in vitro and in vivo

L'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus très répandu qui reste dans l'organisme sous une forme latente après la primo-infection. Cette latence virale est entrecoupée d'épisodes de réactivation, s'accompagnant d'une production de nombreuses particules infectieuses. La réactivation semble anodine chez le sujet sain, mais peut être très grave dans différents contextes d'immunodépression, notamment après transplantation, A l'heure actuelle, les mécanismes permettant le maintien de la latence ou à l'inverse ceux entraînant la réactivation sont inconnus. L'objectif de ce travail de thèse était double. Dans un premier temps, des outils moléculaires permettant la détection de la multiplication d'HHV-6 ont été développés. Pour cela une technique de quantification par PCR en temps réel a été mise au point. De même la détection des ARNm du virus associés à sa réplication par une RT-PCR a été réalisée. Afin de tester ces outils de détection dans un contexte de réactivation, elles ont été appliquées à des prélèvements sanguins de patients transplantés. Les deux méthodes se sont alors révélées efficace pour mettre en évidence la réactivation d'HHV-6. Puis dans un deuxième temps, l'effet de l'expression du facteur de transcription NF-κB sur la transcription des gènes très précoces du virus a été recherché. Pour cela, un super-répresseur de NF-κB (IκBαMut) a été transfecté dans des cellules favorables à la croissance virale. En inhibant la voie canique de signalisation de NF-κB, une diminution de la réplication du virus, mise en évidence par une baisse de la transcription des ARNm viraux à l'aide d'une technique de RT-PCR quantitative et par une réduction du nombre de cellules en immunofluorescence, a été observée. Un rôle important du facteur de transcription NF-κB dans la multiplication du virus HHV-6 a ainsi été démontré
Human herpesvirus 6 (HHV-6) is a widespread virus that remains for life in a latent state after primary infection. But HHV-6 may reactivate, producing many infectious particles. This reactivation seems harmless in healthy subject, but can be very serious in various contexts of immunosuppression, such as organ transplant recipients. Actually, the mechanisms allowing the maintenance of latency or contrary those involving the reactivation are unknown. The objective of this work was double. In the fist time, molecular methods to detect HHV-6 multiplication were developed: a real time quantitative PCR method and a RT-PCR assay allowing the detection of viral mRNAs associated with HHV-6 replication were carried out. In order to test these detection techniques in a context of reactivation, they were applied to blood samples from transplanted patients. The two methods were proved to be effective to highlight the reactivation of HHV-6. Then in the second time, the effect of NF-κB transcription factor on immediate early genes transcription of HHV-6 was investigated. For this purpose, a NF-κB super-repressor (IκBαMut) was transfected in cells permissive to HHV-6 growth. By inhibiting the canonical pathway of NF-κB induction, a reduction in the replication of the virus, demonstrated by a decrease in viral mRNA transcription using a quantitative RT-PCR method and by a reduction in the number of infected cells using an immunofluorescence assay, was observed. Thus an important role for NF-κB transcription factor in the multiplication of virus HHV-6 was shown

L’herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) infecte les enfants en bas âge et sa prévalence est estimée à près de 95% dans la population mondiale. Ce virus se distingue des autres membres de la famille des herperviridae par sa capacité à s’intégrer aux chromosomes cellulaires. On estime qu’environ 1% de la population mondiale serait porteuse d’une copie du génome du HHV-6 par cellule (52, 73, 100, 119, 131). Le mécanisme de cette intégration est toujours inconnu. Nous pensons que la protéine U94 du HHV-6 joue un rôle important dans l'intégration chromosomique du génome viral. Elle serait nécessaire à l'éxécution d'une recombinaison homologue entre les séquences télomériques cellulaires et virales (motif TTAGGG). U94 a une homologie de séquence de 24% avec la protéine Rep68 responsable de l'intégration du génome de l’adeno-associated virus 2 (AAV-2) au chromosome 19 (123). Pour ce faire, quatre activités intrinsèques à la protéine Rep68 lui sont nécessaires : la liaison à l'ADN simple et double brin, l'ATPase, l'hélicase et l'endonucléase (54, 97). Le but de ce projet de recherche était de caractériser les activitités biochimiques de la protéine U94. Tout d’abord, nous avons démontré que la protéine U94A est localisée au noyau en accord avec les résultats obtenus par le laboratoire du Dr. Mori (87). Pour réaliser nos études, nous avons exprimé et purifié U94 chez E. coli en fusion avec la protéine maltose-binding protein (MPB). Nos résultats démontrent que les protéines MBP-U94A et MBP-U94B sont capables de lier préférentiellement l'ADN simple brin avec un motif CCCTAA (complément du motif télomérique TTAGGG). L’essai de liaison sur le Proteon™ XPR36 démontre également que la protéine MBP-U94B lie un ADN double brin ayant le motif télomérique cellulaire. Nos résultats nous ont amenés à vérifier si l'ARN de la télomérase, qui contient un motif CCCTAA, pouvait aussi être lié par les protéines MBP-U94A et MBP-U94B. Les résultats obtenus indiquent que MBP-U94 ne lie pas l'ARN, ni la séquence équivalente en ADN ce qui suggère que la liaison de U94 requiert plus d’une répétition du motif CCCTAA. En se basant sur des études de mutagenèse réalisées sur la protéine Rep68 (128, 129), nous avons générés des mutants U94A et U94B. Les résultats démontrent que la mutation K395A affecte négativement la capacité de liaison à l’ADN de U94. Les essais d'ATPase indiquent que MBP-U94A et MBP-U94B hydrolysent l'ATP en ADP et AMP en présence d'un ADN simple brin ou d’un ADN double brin. Divers mutants des activités d’ATPase/Hélicase et d’endonucléase présumées furent générés et devront être caractérisés. Ces résultats suggèrent que U94 possède les activités biochimiques nécessaires à l'intégration du génome viral aux chromosomes cellulaires.
Human herpesvirus 6 infects young children with an estimated prevalence of 95% in the world population. It differs from the other members of the herperviridae family by its capacity to integrate cell's chromosomes. It is estimated that approximately 1% of the world population carries a copy of the HHV-6 genome per cell (52, 73, 100, 119, 131). The chromosomal integration mechanisms used by HHV-6 are currently unknown. Our hypothesis is that the HHV-6 U94 protein plays an important role in chromosomal integration that we suspect occur through homologous recombination between cellular and viral telomeric sequences (TTAGGG). The U94 gene product shares 24% sequence homology with Rep68, a responsible for the genomic integration of adeno-associated virus 2 (AAV-2) (123). To promote integration, Rep68 relies on four intrinsic activities: binding to single and double stranded DNA, ATPase activity, helicase and endonuclease (54, 97). The goal of this research project is to characterize the biochemical properties of U94 and determine whether it posseses activities similar to Rep68. First, we confirmed the results of Dr. Mori's laboratory by showing that U94 is localized in the nucleus (87). Next, to conduct our studies, we’ve expressed and purified maltose-binding-U94 recombinant proteins (MBP-U94) in E. coli. Our results suggest that MBP-U94A and MBP-U94B preferentially bind single-strandred DNA containing the CCCTAA motif (complement to the TTAGGG telomeric motif). Surface plasmon resonance (SPR) experiments also indicate that MBP-U94B binds double-stranded DNA containing telomeric motifs. Since the telomerease RNA component TERC contains the CCCTAA motif, we investigated whether MBP-U94 could bind a single-stranded RNA molecule containing the CCCTAA motif. SPR analysis clearly indicates that MBP-U94 does not bind such RNA nor a single-stranded DNA molecule having a single CCCTAA motif, suggesting that more than one motif is required for proper binding. Based on published work on Rep68 (128, 129), we generated specific U94 mutants. Our results indicate that the K395A mutation greatly diminishes U94 binding to DNA pointing out the importance of this residue. ATPase assays were also performed and indicate that both MBP-U94A and MBP-U94B possess the ability to hydrolyze ATP into ADP and AMP when incubated in the presence of DNA. Several other mutants targeting the helicase and endonuclease activities were generated and will be tested in the near future. Altogether these results suggest that U94 has biological properties that are consistent with a role for this protein in the process of chromosomal integration of the HHV-6 genome into the host chromosomes.

Les infections virales représentent une complication majeure des allogreffes de cellules souches hématopoïétiques (CSH) et sont associées à des mortalité/morbidité élevées. Nous avons conduit une étude prospective visant à évaluer l'impact de l'utilisation d'un greffon de sang placentaire (SP) sur la survenue de réactivation à HHV-6 et de quatre autres virus opportunistes ainsi que sur les cinétiques de reconstitution immune (RI), pendant les 6 premiers post-greffe, en comparant des patients recevant soit une greffe de SP soit une greffe de CSH périphériques (CSP) d'un donneur non apparenté. L'étude a confirmé une association significative entre HHV-6 et greffe de SP et entre EBV et greffe de CSP. L'analyse de la RI montre des différences significatives entre les deux groupes, en particulier pour les lymphocytes B et les monocytes qui reconstituent plus rapidement et avec des taux plus élevés après greffe de SP. Une deuxième étude comparant les mêmes paramètres à distance de l'allogreffe a montré que les infections à HHV-6 durent longtemps après greffes de SP et que la RI diffère en fonction de la source de greffon. L'ensemble de ces données ne permet pas, pour le moment, d'expliquer le lien particulier entre HHV-6 et SP. Enfin, afin de caractériser l'impact d'une infection à HHV-6 sur des cellules jouant un rôle majeur dans la réponse antivirale, nous avons conduit des essais d'infection in vitro de cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs). Ces données montrent l'absence de permissivité des pDCs à l'infection par HHV-6. L'HHV-6 induit la sécrétion d'interféron de type I par les pDCs sans influencer l'expression des molécules HLA de classe I et II ou de co-stimulation
Viral infections are well-known complications after allogeneic stem cell transplantation (allo-SCT) and are responsible for morbidity and mortality in patients. To better define the impact of UCB as stem cell source we conducted a prospective study comparing the frequencies of HHV6 and four other opportunistic viruses during the first six months post-graft as well as the kinetic of immune reconstitution in adults receiving either UCB allo-SCT or unrelated PBSC allo-SCT. We prospectively confirm a specific relationship between HHV6 and UCB allo-SCT and between EBV and PBSC allo-SCT. The data of the immune reconstitution showed significant differences between the both groups and particularly for the B lymphocytes and monocytes subsets which reconstituted faster and with higher count in the UCB group that however. A second study comparing the same parameters in long-term UCB survivors, shows long-lasting HHV-6 reactivation and highlight differences in the kinetic of immune reconstitution, according to the type of graft. However, our results don't explain the link between HHV-6 and UCB, which so far remains to be elucidated. Finally, to evaluate the impact of HHV-6 infection on cells professionally involved in antiviral defense of the organism, the plasmacytoid dendritic cells (pDCs), we performed in vitro experiments consisting on HHV-6 infection of human peripheral pDCs. The HHV-6 induce secretion of type I interferons by pDCs without influencing significantly the expression of the co-stimulation molecules or the class I and II HLA molecules

Le virus Herpès humain de type 6B (HHV-6B) est un virus qui infecte environ 95% de la population mondiale et qui est relativement bénin chez les personnes immunocompétentes mais dont les réactivations sont potentiellement graves chez les immunodéprimés. HHV-6B est l’agent étiologique de la roséole de l’enfant ou exanthème subit. Comme tout virus herpétique, HHV-6B a développé diverses stratégies lui permettant de moduler le système immunitaire à son avantage afin de persister au sein de son hôte. La caractérisation de nouveaux mécanismes d’évitement utilisés par HHV-6B ou l’identification de cibles immunodominantes permettraient de mettre en place de nouvelles stratégies afin de combattre l’infection. Au cours de nos recherches, nous avons identifié que la protéine de tégument U54 d’HHV-6B inhibe la synthèse d’interleukine-2 (IL-2). Nous avons déterminé la voie de signalisation de la calcineurine (CaN) / NFAT comme étant le facteur antagonisé par U54 et caractérisé le mécanisme aboutissant à cette inhibition. De plus, en nous basant sur ces résultats, nous avons testé l’impact d’une abrogation de la voie CaN/NFAT par U54 sur la progression de cellules de cancer du sein. Nous avons démontré que l’expression d’U54 provoque une baisse significative de la proliferation de cellules de cancer du sein MCF-7. Ces résultats ont fait germer l’idée du ciblage de cellules de cancer du sein exprimant la protéine U54 couplé à un protocole d’immunothérapie adoptive anti-cancéreuse. Enfin, l’immunothérapie adoptive antivirale est également un sujet d’étude qui a été abordé. Nous avons identifié des épitopes de la protéine IE1 d’HHV-6B présentés dans le contexte de trois des allèles les plus communs dans la population caucasienne : HLA-A*02, HLA-A*03 et HLA-B*07. Ceci nous a permit de perpétrer une expansion clonale de lymphocytes T cytotoxiques (CTL) capables de lyser des cellules infectées qui pourraient servir à contrôler d’éventuelles réactivations virales chez des patients immunodéprimés. De manière générale, nos travaux permettent d’étendre les connaissances sur les mécanismes utilisés par HHV-6B pour contourner le système immunitaire de l’hôte mais également d’identifier des cibles permettant de développer un éventuel protocole d’immunothérapie adoptive.

L'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus à ADN présentant 2 types A et B. Au cours ce travail, nous nous sommes intéressés à l'implication de l'HHV-6B dans la lymphomogenèse du lymphome de Hodgkin (LH). Nous avons détecté l'ADN viral dans les adénopathies de 35,1% des patients atteints de LH dont 91,7% étaient de type B avec une distribution de la charge virale de 100 à 864 640 copies virales/mg d'ADN. Nous avons ensuite étudié le caractère oncogénique du gène viral DR7, mis en évidence une grande conservation de ce gène dans cette pathologie. Secondairement, nous avons démontré que la protéine DR7 du type B avait la capacité de se lier à la protéine p53. Enfin, nous avons travaillé sur l'aspect d'activation constitutive de NFkB décrite dans le LH. Nous avons trouvé que l'HHV-6B induisait une augmentation de la transcription des sous-unités p50 et p65 constituant le complexe NFkB ainsi qu'une augmentation de l'activité de NFkB et ce par l'action d'au moins 2 protéines virales, DR7 et U3. En conclusion, nous avons mis en évidence une implication de l'HHV-6B dans la lymphomogenèse du LH par au moins deux mécanismes : (1) l'inhibition de la p53 et (2) la sur-activation de NFkB induisant une dérégulation du cycle cellulaire pouvant aboutir à une prolifération anarchique des cellules
HHV-6 is a DNA virus for which 2 types are known A and B. The aim of this work was to determine the implication of HHV-6B in the HL development. First, we detected viral DNA sequences in biopsies of 35. 1% of HL patients with 91. 7% of B type and a viral load range from 100 to 864,640 viral copies/mg of DNA. Secondly, we described a high conservation of the DR7 viral oncogene in these infected patients. We also described an interaction between DR7B and p53 proteins. Finally, we focused on NFkB constitutive activation associated with HL. We demonstrated that HHV-6B was able to increase p50 and p65 NFkB subunits transcriptions and to induce NFkB complex transactivation by at the action of at least two viral proteins : DR7 and U3. In this study, we described a probable HHV-6B implication in the HL development by at least two strategies : (1) p53 inhibition and (2) NFkB transactivation, which are both likely to induce cell cycle deregulation and then cell proliferation without any controls