Dissertations / Theses on the topic 'Herpèsvirus humain 6'

L’herpèsvirus humain de type 6B (HHV-6B) infecte près de 100% des humains et établit une latence pour le reste de la vie de l’hôte. L’épidémiologie d’HHV-6A est moins connue. Ces deux virus sont capables d’intégrer leur génome dans les télomères des chromosomes humains. Lorsque cette intégration a lieu dans une cellule germinale et qu’il y a fécondation, ceci mène à un individu portant une copie du génome viral dans chacune des cellules de son corps. Cette condition, appelée inherited chromosomally-integrated HHV-6 (iciHHV-6), résulte en une transmission du génome viral intégré à 50% des descendants et est retrouvée chez environ 1% des humains. Malgré cette importante fréquence dans la population, l’intégration de HHV-6, de même que son infection et son effet sur ses cellules hôtes, demeurent peu caractérisés. Dans ce travail, nous avons étudié l’effet de l’infection d’HHV-6A et HHV-6B sur la réponse de dommages à l’ADN (DDR). Nous avons observé une forte réponse DDR localisée dans les compartiments de la réplication virale (RC), colocalisant avec une grande quantité d’ADN télomérique d’origine virale. De plus, les niveaux des ARNm des gènes TRF1, TRF2 et TPP1, membres du complexe shelterin protégeant les télomères, étaient surexprimés dans les cellules infectées. Cette augmentation se traduit par une surexpression de la protéine TRF2, recrutée aux séquences télomériques virales dans les RC. Finalement, nous avons étudié l’effet de BRACO-19, un inhibiteur de la télomérase, sur l’intégration d’HHV-6A et sa persistance. En utilisant un essai d’intégration récemment mis au point dans notre laboratoire, nous avons démontré que l’inhibition de la télomérase menait à une diminution significative de la fréquence de cellules porteuses d’intégration. Ce travail apporte de nouvelles connaissances sur l’infection de HHV-6 et sur son mécanisme d’intégration potentiel, de même que la première observation d’une possible participation des protéines du complexe shelterin dans l’infection de HHV-6.
Human herpesviruse 6B (HHV-6B) is a very prevalent virus that infect nearly 100% of humans and establish a life-long latency. Much less is known regarding HHV-6A epidemiology. Both viruses can integrate their genome into the telomeres of human chromosomes. When this integration occurs in a germinal cell, it can lead to an individual carrying one copy of the viral genome in every cell of its body. This condition, called inherited chromosomally-integrated HHV-6 (iciHHV-6), will then be transmitted to 50% of offspring and is found in approximately 1% of individuals across the world. Despite being so frequent, much remains to be studied on HHV-6 infection and integration processes. In this work, we studied the effects of viral infection on DNA damage response (DDR) signaling. We observed a DDR located in viral replication compartments (RC), together with a large amount of telomeric sequences that we confirmed to be of viral origin. In addition, mRNAs coding for TRF1, TRF2 and TPP1, members of the shelterin complex protecting telomeres, were upregulated during infection. Consequently, TRF2 protein was overexpressed and relocated to viral telomeric sequences in RC. Lastly, we’ve examined the effects of BRACO-19, a compound that affects telomerase activity, on HHV-6 integration and persistence. Using an integration assay recently developed in our laboratory, we could demonstrate that in the presence of the telomerase inhibitor, the frequency of cells containing integrated HHV-6 was significantly reduced. This work brings new knowledge regarding HHV-6 infection and its potential integration mechanism, as well as the first observation of a possible participation of the shelterin complex proteins during HHV-6 infection.

L’herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus ubiquitaire qui existe sous deux types A et B. Ce virus est capable de s’intégrer dans la région télomérique avec une prévalence de 1% à l’échelle mondiale. Les conséquences de cette intégration demeurent inconnues. Mais, la réactivation de l’HHV-6 a été associée au syndrome d’hypersensibilité médicamenteuse « DRESS ». La détection et le suivi de la réactivation des herpèsvirus chez des patients atteints de DRESS ont été étudiés à l’aide d’une technique de PCR quantitative appliquée sur la salive. L’interprétation des résultats peut être différente selon le virus analysé. Dans le but de savoir si l’HHV-6 peut se réactiver à partir d’un virus intégré et être ainsi à l’origine des manifestations du DRESS, une lignée lymphocytaire B établie à partir d’un patient portant le CIHHV-6 a été traitée par 4 molécules incriminées dans le DRESS. Deux transcrits d’HHV-6 ont été détectés de manière aléatoire et indépendante du traitement. La protéine p41, n’a pas été détectée, montrant que ces molécules n’entraînent pas de réactivation à partir du virus intégré et n’utilisent pas ce mécanisme pour entraîner le DRESS. L’étude d’une large cohorte de 414 patients atteints de pathologies hématologiques ou néphrologiques a révélé une prévalence de 2% de CIHHV-6 (5/249 hématologie ; 0/165 néphrologie). Le chromosome 17 a été la cible d’intégration du HHV6 chez 3 patients. La localisation de l’intégration s’est révélée être en région juxtaposée à celle subtélomérique détectée par FISH, quel que soit le chromosome concerné. Une perte dans la région subtélomérique ainsi qu’une amplification des télomères du chromosome porteur ont été détectées de manière récurrente. Un dysfonctionnement télomérique et une instabilité chromosomique ont été mis en évidence. Nous avons rapporté que deux de nos lignées portant du CIHHV-6 utilisent vraisemblablement les deux voies connues pour maintenir les télomères : l’expression de la télomérase et aussi un profil d’ALT
Human herpesvirus type 6 (HHV-6) is a ubiquitous virus that exists as 2 types A and B. This virus is able to integrate in human chromosome telomeres, with globally 1% of prevalence; the impact of this integration is not yet known. HHV-6 reactivation was associated to the Drug hypersensitivity syndrome or DRESS. We show that detection and monitoring of human herpesvirus reactivation in DRESS patients are possible via quantitative PCR technic applied on saliva. The interpretation of results can be different according to the type of analyzed virus. With the purpose of knowing if the HHV-6 can be reactivated from an integrated virus and so be the cause of DRESS symptoms, a B cell line, established from a patient who has the CIHHV-6, was treated by four molecules incriminated in the DRESS. Two HHV-6 transcripts were detected randomly and independently of treatment. The protein p41 was not detected, which shows that these molecules do not cause any reactivation since the integrated virus and do not use this mechanism to cause the DRESS. The study of a wide cohort of 414 patients with hematological and nephrological diseases revealed a prevalence of 2% of CIHHV-6 (5/249 hematology; 0/165 nephrology). 3 patients had the integration into the chromosome 17. The site of integration using a double labeling viral probe/subtelomeric probe was found to be more precisely in subtelomeric region, regardless of the chromosome in question. The effect of the integration of HHV-6 on the cell was studied by FISH technics. We have detected repeatedly a loss in the subtelomeric region and a telomeres amplification in chromosome which carrying the CIHHV-6. A telomeric dysfunction and chromosomal instability have been demonstrated. We reported that two of our lines carrying the CIHHV-6 likely use the two known ways to maintain telomeres: the telomerase expression and a profile of ALT

L’herpèsvirus humain 6 (HHV-6) est un pathogène opportuniste dont l’infection et/ou la réactivation sont associées avec des maladies telles la roséole, des désordres du système nerveux central, et des complications suite à la transplantation d’organes. Le séquençage du génome viral a révélé l’existence de deux types de HHV-6 (A et B), se distinguant par des séquences dissemblables dans des régions spécifiques et des propriétés biologiques différentes. Nos travaux portent sur la caractérisation de la protéine précoce-immédiate (IE) 2 de HHV-6A. Son expression précoce suite à l’infection et sa capacité de transactivation suggèrent qu’elle représente une protéine clé dans l’établissement d’une infection productive, grâce à son contrôle de la cascade d’expression des gènes viraux. De plus, le transcrit codant pour IE2 se situe dans la région la plus variable entre HHV-6A et -6B, suggérant que la biologie de cette protéine pourrait contribuer à expliquer les différences cliniques entre les deux types viraux. Afin de déterminer les protéines cellulaires recrutées par IE2 durant l’établissement de l’infection, nous avons criblé une librairie de cellules T à la recherche de partenaires d’interaction. Nous avons isolé la protéine Ubc9, enzyme jouant un rôle dans la voie de conjugaison de SUMO. Cette interaction a une importance fonctionnelle pour IE2, puisqu’Ubc9 réprime significativement l’activation de promoteurs par la protéine virale. Les domaines essentiels à la fonctionnalité d’IE2 n’avaient jamais été caractérisés. Nous avons démontré que les domaines N- et C-terminaux sont tous deux requis pour une transactivation optimale, et que la délétion de la queue C-terminale d’IE2 modifie significativement la transactivation et la localisation intranucléaire de la protéine. Nous avons également établi que la région R3 du promoteur précoce-immédiat de HHV-6A est positivement régulée par IE2. Globalement, ces travaux nous procurent une vision plus précise du rôle de la protéine IE2 dans l’initiation de l’infection par HHV-6.
Human herpesvirus 6 (HHV-6) is an opportunistic pathogen whose infection or reactivation are associated with diseases such as roseola, central nervous system disorders and organ transplant anomalies. Sequencing of the viral genome has exposed the existence of two HHV-6 variants (A and B), with diverging sequences in specific regions, and different biological characteristics. Our work focused on the characterization of HHV-6A immediate-early IE2 protein. Its prompt expression following infection and its transactivating ability suggest that IE2 constitutes a key protein for the establishment of a productive infection, owing to its control over the viral gene expression cascade. Moreover, the IE2 coding transcript is located in the most variable region between HHV-6A and -6B, suggesting that the biology of this protein could help explain the clinical differences between the two viral variants. In order to identify cellular proteins recruited by IE2 during the establishment of infection, we have screened a T-cell library for interaction partners. We have isolated Ubiquitin conjugating enzyme 9 (Ubc9), a protein involved in the small ubiquitin-related modifier (SUMO) conjugation pathway. This interaction has a functional relevance for IE2, with Ubc9 significantly repressing promoter activation by the viral protein. Protein domains essential for IE2 function had never been characterized. We have determined that the N- and C-terminal domains are both required for optimal transactivation, and that the deletion of the C-terminal tail of IE2 significantly alters transactivation and the intranuclear localization of the protein. Moreover, we have determined that the R3 domain of the immediate-early HHV-6A promoter represents an IE2 responsive element. Overall, this work provides a more precise image of the role of IE2 during the initiation of HHV-6 infection and a better comprehension of the biology of this complex virus.

L'Herpesvirus Humain de type 6 (HHV6), membre de la famille des Herpesviridae, est responsable d'infections persistantes, associant des phases de latence entrecoupées de périodes de réactivations. Il peut être responsable de complications infectieuses graves chez les sujets immunodéprimés, notamment après allogreffe de cellules souches hématopoïétiques. La multiplication virale est classiquement mesurée par la quantification de la charge virale ADN in vitro après infection de cellules cibles ou in vivo chez les patients infectés. Au suivi de la réplication peut s'ajouter la détection des ARN messagers viraux, qui constituent un marqueur biologique complémentaire potentiel de multiplication virale productive. L'objectif principal du travail de thèse a été de développer des méthodes performantes de quantification de deux types de transcrits de l'HHV6 par RT-PCR en temps réel: le transcrit du gène U90, exprimé précocement après le début du cycle et celui du gène U100, exprimé à une phase plus tardive. La reproductibilité, la répétabilité et la sensibilité de ces deux RT-PCR ont été validées sur des témoins positifs de culture virale et des standards ARN et ADN. L'intérêt de leur utilisation in vitro a été évalué au cours de cinétiques d'infection de cellules MT4 par la souche HHV6-B HST. Les résultats montrent une bonne corrélation entre la charge virale ADN et celles des deux transcrits. Le transcrit U100 est exprimé plus abondamment que le transcrit U90. Une première étude menée chez 34 patients au cours des 6 premiers mois post-greffe de CSH confirme ces observations. La quantification de ces deux ARNm viraux constitue un moyen performant de mesure de la transcription virale in vitro ainsi que chez des patients infectés
Human Herpesvirus 6 (HHV6), a member of the Herpesviridae family, is responsible for persistent infections, with latency stages and reactivations episodes. Active infection may be associated with serious diseases in immunosuppressed patients, particularly in the months following hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). DNA viral load is commonly used to measure viral replication in vitro in infected target cells or in vivo in peripheral blood of infected patients. The detection of viral mRNA may help to complete active multiplication measurement. The objective of our work was to develop real time RT-PCR to quantify two HHV6 transcripts: U90 mRNA, produced at the early step of viral cycle, and U100, transcribed at the late step. The good results of the methods were assessed by intra-assay, inter-assay variability and lower detection limit tests measured on infected cells and DNA and RNA standards. Kinetics of MT4 cell infections by the HHV6-B strain HST showed a good correlation between DNA viral load and quantification of U90 and U100 mRNA. The U100 transcript was always expressed at higher level than U90. Our observations were further confirmed in vivo in samples obtained in the first 6 months following allograft of 34 HSC transplanted patients. The quantification of U90 and U100 mRNA is thus an effective way to investigate viral transcription both in vitro and in vivo

L'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus très répandu qui reste dans l'organisme sous une forme latente après la primo-infection. Cette latence virale est entrecoupée d'épisodes de réactivation, s'accompagnant d'une production de nombreuses particules infectieuses. La réactivation semble anodine chez le sujet sain, mais peut être très grave dans différents contextes d'immunodépression, notamment après transplantation, A l'heure actuelle, les mécanismes permettant le maintien de la latence ou à l'inverse ceux entraînant la réactivation sont inconnus. L'objectif de ce travail de thèse était double. Dans un premier temps, des outils moléculaires permettant la détection de la multiplication d'HHV-6 ont été développés. Pour cela une technique de quantification par PCR en temps réel a été mise au point. De même la détection des ARNm du virus associés à sa réplication par une RT-PCR a été réalisée. Afin de tester ces outils de détection dans un contexte de réactivation, elles ont été appliquées à des prélèvements sanguins de patients transplantés. Les deux méthodes se sont alors révélées efficace pour mettre en évidence la réactivation d'HHV-6. Puis dans un deuxième temps, l'effet de l'expression du facteur de transcription NF-κB sur la transcription des gènes très précoces du virus a été recherché. Pour cela, un super-répresseur de NF-κB (IκBαMut) a été transfecté dans des cellules favorables à la croissance virale. En inhibant la voie canique de signalisation de NF-κB, une diminution de la réplication du virus, mise en évidence par une baisse de la transcription des ARNm viraux à l'aide d'une technique de RT-PCR quantitative et par une réduction du nombre de cellules en immunofluorescence, a été observée. Un rôle important du facteur de transcription NF-κB dans la multiplication du virus HHV-6 a ainsi été démontré
Human herpesvirus 6 (HHV-6) is a widespread virus that remains for life in a latent state after primary infection. But HHV-6 may reactivate, producing many infectious particles. This reactivation seems harmless in healthy subject, but can be very serious in various contexts of immunosuppression, such as organ transplant recipients. Actually, the mechanisms allowing the maintenance of latency or contrary those involving the reactivation are unknown. The objective of this work was double. In the fist time, molecular methods to detect HHV-6 multiplication were developed: a real time quantitative PCR method and a RT-PCR assay allowing the detection of viral mRNAs associated with HHV-6 replication were carried out. In order to test these detection techniques in a context of reactivation, they were applied to blood samples from transplanted patients. The two methods were proved to be effective to highlight the reactivation of HHV-6. Then in the second time, the effect of NF-κB transcription factor on immediate early genes transcription of HHV-6 was investigated. For this purpose, a NF-κB super-repressor (IκBαMut) was transfected in cells permissive to HHV-6 growth. By inhibiting the canonical pathway of NF-κB induction, a reduction in the replication of the virus, demonstrated by a decrease in viral mRNA transcription using a quantitative RT-PCR method and by a reduction in the number of infected cells using an immunofluorescence assay, was observed. Thus an important role for NF-κB transcription factor in the multiplication of virus HHV-6 was shown

L’herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) infecte les enfants en bas âge et sa prévalence est estimée à près de 95% dans la population mondiale. Ce virus se distingue des autres membres de la famille des herperviridae par sa capacité à s’intégrer aux chromosomes cellulaires. On estime qu’environ 1% de la population mondiale serait porteuse d’une copie du génome du HHV-6 par cellule (52, 73, 100, 119, 131). Le mécanisme de cette intégration est toujours inconnu. Nous pensons que la protéine U94 du HHV-6 joue un rôle important dans l'intégration chromosomique du génome viral. Elle serait nécessaire à l'éxécution d'une recombinaison homologue entre les séquences télomériques cellulaires et virales (motif TTAGGG). U94 a une homologie de séquence de 24% avec la protéine Rep68 responsable de l'intégration du génome de l’adeno-associated virus 2 (AAV-2) au chromosome 19 (123). Pour ce faire, quatre activités intrinsèques à la protéine Rep68 lui sont nécessaires : la liaison à l'ADN simple et double brin, l'ATPase, l'hélicase et l'endonucléase (54, 97). Le but de ce projet de recherche était de caractériser les activitités biochimiques de la protéine U94. Tout d’abord, nous avons démontré que la protéine U94A est localisée au noyau en accord avec les résultats obtenus par le laboratoire du Dr. Mori (87). Pour réaliser nos études, nous avons exprimé et purifié U94 chez E. coli en fusion avec la protéine maltose-binding protein (MPB). Nos résultats démontrent que les protéines MBP-U94A et MBP-U94B sont capables de lier préférentiellement l'ADN simple brin avec un motif CCCTAA (complément du motif télomérique TTAGGG). L’essai de liaison sur le Proteon™ XPR36 démontre également que la protéine MBP-U94B lie un ADN double brin ayant le motif télomérique cellulaire. Nos résultats nous ont amenés à vérifier si l'ARN de la télomérase, qui contient un motif CCCTAA, pouvait aussi être lié par les protéines MBP-U94A et MBP-U94B. Les résultats obtenus indiquent que MBP-U94 ne lie pas l'ARN, ni la séquence équivalente en ADN ce qui suggère que la liaison de U94 requiert plus d’une répétition du motif CCCTAA. En se basant sur des études de mutagenèse réalisées sur la protéine Rep68 (128, 129), nous avons générés des mutants U94A et U94B. Les résultats démontrent que la mutation K395A affecte négativement la capacité de liaison à l’ADN de U94. Les essais d'ATPase indiquent que MBP-U94A et MBP-U94B hydrolysent l'ATP en ADP et AMP en présence d'un ADN simple brin ou d’un ADN double brin. Divers mutants des activités d’ATPase/Hélicase et d’endonucléase présumées furent générés et devront être caractérisés. Ces résultats suggèrent que U94 possède les activités biochimiques nécessaires à l'intégration du génome viral aux chromosomes cellulaires.
Human herpesvirus 6 infects young children with an estimated prevalence of 95% in the world population. It differs from the other members of the herperviridae family by its capacity to integrate cell's chromosomes. It is estimated that approximately 1% of the world population carries a copy of the HHV-6 genome per cell (52, 73, 100, 119, 131). The chromosomal integration mechanisms used by HHV-6 are currently unknown. Our hypothesis is that the HHV-6 U94 protein plays an important role in chromosomal integration that we suspect occur through homologous recombination between cellular and viral telomeric sequences (TTAGGG). The U94 gene product shares 24% sequence homology with Rep68, a responsible for the genomic integration of adeno-associated virus 2 (AAV-2) (123). To promote integration, Rep68 relies on four intrinsic activities: binding to single and double stranded DNA, ATPase activity, helicase and endonuclease (54, 97). The goal of this research project is to characterize the biochemical properties of U94 and determine whether it posseses activities similar to Rep68. First, we confirmed the results of Dr. Mori's laboratory by showing that U94 is localized in the nucleus (87). Next, to conduct our studies, we’ve expressed and purified maltose-binding-U94 recombinant proteins (MBP-U94) in E. coli. Our results suggest that MBP-U94A and MBP-U94B preferentially bind single-strandred DNA containing the CCCTAA motif (complement to the TTAGGG telomeric motif). Surface plasmon resonance (SPR) experiments also indicate that MBP-U94B binds double-stranded DNA containing telomeric motifs. Since the telomerease RNA component TERC contains the CCCTAA motif, we investigated whether MBP-U94 could bind a single-stranded RNA molecule containing the CCCTAA motif. SPR analysis clearly indicates that MBP-U94 does not bind such RNA nor a single-stranded DNA molecule having a single CCCTAA motif, suggesting that more than one motif is required for proper binding. Based on published work on Rep68 (128, 129), we generated specific U94 mutants. Our results indicate that the K395A mutation greatly diminishes U94 binding to DNA pointing out the importance of this residue. ATPase assays were also performed and indicate that both MBP-U94A and MBP-U94B possess the ability to hydrolyze ATP into ADP and AMP when incubated in the presence of DNA. Several other mutants targeting the helicase and endonuclease activities were generated and will be tested in the near future. Altogether these results suggest that U94 has biological properties that are consistent with a role for this protein in the process of chromosomal integration of the HHV-6 genome into the host chromosomes.

Les infections virales représentent une complication majeure des allogreffes de cellules souches hématopoïétiques (CSH) et sont associées à des mortalité/morbidité élevées. Nous avons conduit une étude prospective visant à évaluer l'impact de l'utilisation d'un greffon de sang placentaire (SP) sur la survenue de réactivation à HHV-6 et de quatre autres virus opportunistes ainsi que sur les cinétiques de reconstitution immune (RI), pendant les 6 premiers post-greffe, en comparant des patients recevant soit une greffe de SP soit une greffe de CSH périphériques (CSP) d'un donneur non apparenté. L'étude a confirmé une association significative entre HHV-6 et greffe de SP et entre EBV et greffe de CSP. L'analyse de la RI montre des différences significatives entre les deux groupes, en particulier pour les lymphocytes B et les monocytes qui reconstituent plus rapidement et avec des taux plus élevés après greffe de SP. Une deuxième étude comparant les mêmes paramètres à distance de l'allogreffe a montré que les infections à HHV-6 durent longtemps après greffes de SP et que la RI diffère en fonction de la source de greffon. L'ensemble de ces données ne permet pas, pour le moment, d'expliquer le lien particulier entre HHV-6 et SP. Enfin, afin de caractériser l'impact d'une infection à HHV-6 sur des cellules jouant un rôle majeur dans la réponse antivirale, nous avons conduit des essais d'infection in vitro de cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs). Ces données montrent l'absence de permissivité des pDCs à l'infection par HHV-6. L'HHV-6 induit la sécrétion d'interféron de type I par les pDCs sans influencer l'expression des molécules HLA de classe I et II ou de co-stimulation
Viral infections are well-known complications after allogeneic stem cell transplantation (allo-SCT) and are responsible for morbidity and mortality in patients. To better define the impact of UCB as stem cell source we conducted a prospective study comparing the frequencies of HHV6 and four other opportunistic viruses during the first six months post-graft as well as the kinetic of immune reconstitution in adults receiving either UCB allo-SCT or unrelated PBSC allo-SCT. We prospectively confirm a specific relationship between HHV6 and UCB allo-SCT and between EBV and PBSC allo-SCT. The data of the immune reconstitution showed significant differences between the both groups and particularly for the B lymphocytes and monocytes subsets which reconstituted faster and with higher count in the UCB group that however. A second study comparing the same parameters in long-term UCB survivors, shows long-lasting HHV-6 reactivation and highlight differences in the kinetic of immune reconstitution, according to the type of graft. However, our results don't explain the link between HHV-6 and UCB, which so far remains to be elucidated. Finally, to evaluate the impact of HHV-6 infection on cells professionally involved in antiviral defense of the organism, the plasmacytoid dendritic cells (pDCs), we performed in vitro experiments consisting on HHV-6 infection of human peripheral pDCs. The HHV-6 induce secretion of type I interferons by pDCs without influencing significantly the expression of the co-stimulation molecules or the class I and II HLA molecules

Le virus Herpès humain de type 6B (HHV-6B) est un virus qui infecte environ 95% de la population mondiale et qui est relativement bénin chez les personnes immunocompétentes mais dont les réactivations sont potentiellement graves chez les immunodéprimés. HHV-6B est l’agent étiologique de la roséole de l’enfant ou exanthème subit. Comme tout virus herpétique, HHV-6B a développé diverses stratégies lui permettant de moduler le système immunitaire à son avantage afin de persister au sein de son hôte. La caractérisation de nouveaux mécanismes d’évitement utilisés par HHV-6B ou l’identification de cibles immunodominantes permettraient de mettre en place de nouvelles stratégies afin de combattre l’infection. Au cours de nos recherches, nous avons identifié que la protéine de tégument U54 d’HHV-6B inhibe la synthèse d’interleukine-2 (IL-2). Nous avons déterminé la voie de signalisation de la calcineurine (CaN) / NFAT comme étant le facteur antagonisé par U54 et caractérisé le mécanisme aboutissant à cette inhibition. De plus, en nous basant sur ces résultats, nous avons testé l’impact d’une abrogation de la voie CaN/NFAT par U54 sur la progression de cellules de cancer du sein. Nous avons démontré que l’expression d’U54 provoque une baisse significative de la proliferation de cellules de cancer du sein MCF-7. Ces résultats ont fait germer l’idée du ciblage de cellules de cancer du sein exprimant la protéine U54 couplé à un protocole d’immunothérapie adoptive anti-cancéreuse. Enfin, l’immunothérapie adoptive antivirale est également un sujet d’étude qui a été abordé. Nous avons identifié des épitopes de la protéine IE1 d’HHV-6B présentés dans le contexte de trois des allèles les plus communs dans la population caucasienne : HLA-A*02, HLA-A*03 et HLA-B*07. Ceci nous a permit de perpétrer une expansion clonale de lymphocytes T cytotoxiques (CTL) capables de lyser des cellules infectées qui pourraient servir à contrôler d’éventuelles réactivations virales chez des patients immunodéprimés. De manière générale, nos travaux permettent d’étendre les connaissances sur les mécanismes utilisés par HHV-6B pour contourner le système immunitaire de l’hôte mais également d’identifier des cibles permettant de développer un éventuel protocole d’immunothérapie adoptive.

L'herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus à ADN présentant 2 types A et B. Au cours ce travail, nous nous sommes intéressés à l'implication de l'HHV-6B dans la lymphomogenèse du lymphome de Hodgkin (LH). Nous avons détecté l'ADN viral dans les adénopathies de 35,1% des patients atteints de LH dont 91,7% étaient de type B avec une distribution de la charge virale de 100 à 864 640 copies virales/mg d'ADN. Nous avons ensuite étudié le caractère oncogénique du gène viral DR7, mis en évidence une grande conservation de ce gène dans cette pathologie. Secondairement, nous avons démontré que la protéine DR7 du type B avait la capacité de se lier à la protéine p53. Enfin, nous avons travaillé sur l'aspect d'activation constitutive de NFkB décrite dans le LH. Nous avons trouvé que l'HHV-6B induisait une augmentation de la transcription des sous-unités p50 et p65 constituant le complexe NFkB ainsi qu'une augmentation de l'activité de NFkB et ce par l'action d'au moins 2 protéines virales, DR7 et U3. En conclusion, nous avons mis en évidence une implication de l'HHV-6B dans la lymphomogenèse du LH par au moins deux mécanismes : (1) l'inhibition de la p53 et (2) la sur-activation de NFkB induisant une dérégulation du cycle cellulaire pouvant aboutir à une prolifération anarchique des cellules
HHV-6 is a DNA virus for which 2 types are known A and B. The aim of this work was to determine the implication of HHV-6B in the HL development. First, we detected viral DNA sequences in biopsies of 35. 1% of HL patients with 91. 7% of B type and a viral load range from 100 to 864,640 viral copies/mg of DNA. Secondly, we described a high conservation of the DR7 viral oncogene in these infected patients. We also described an interaction between DR7B and p53 proteins. Finally, we focused on NFkB constitutive activation associated with HL. We demonstrated that HHV-6B was able to increase p50 and p65 NFkB subunits transcriptions and to induce NFkB complex transactivation by at the action of at least two viral proteins : DR7 and U3. In this study, we described a probable HHV-6B implication in the HL development by at least two strategies : (1) p53 inhibition and (2) NFkB transactivation, which are both likely to induce cell cycle deregulation and then cell proliferation without any controls

Le nombre de greffe de sang placentaire chez les adultes n’a cessé d’augmenter ces dernières années, exposant les patients à un risque théoriquement accru d’infections. Au cours d’une étude rétrospective, nous avons comparé l’incidence des infections virales à CMV, EBV et HHV-6 après allogreffe de cellules souches hématopoïétiques provenant soit d’un donneur non apparenté soit d’un sang de cordon. Une augmentation très significative de la fréquence et de l’intensité des infections HHV6 a été observée chez les sujets receveurs d’un greffon placentaire. Pour expliquer cet accroissement, nous avons ensuite déterminé la composition cellulaire et l’expression du CD46 (récepteur membranaire ubiquitaire de l’HHV-6) au sein de plusieurs types de greffons. Ces données, obtenues par analyse multiparamétrique en cytométrie de flux, montrent notamment un déficit quantitatif très significatif en cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDCs, cellules impliquées de manière professionnelle dans la défense antivirale de l’organisme par production d’interféron de type 1) et une moindre expression du CD46 sur les cellules dans les greffons placentaires. Finalement, pour préciser les effets éventuels du virus sur les fonctions cellulaires, nous avons effectué des essais préliminaires d’infection in vitro de pDCs triées à partir du sang périphérique de donneur sains. Ces premières données montrent une modulation de l’expression du CD80 et du CD86 sur les pDCs et une stimulation importante de la sécrétion d’IFN alpha par ces dernières. L’influence significative de l’origine placentaire du greffon sur la réactivation HHV-6 après allogreffe reste pour le moment inexpliquée
Cord blood (CB) is increasingly used as an alternative source of graft in adults with hematologic malignancies, predisposing patients to a theoretical increased risk of infections. In a retrospective study, we compared the incidence of CMV, EBV and HHV-6 viral infections after allogeneic transplantation using stem cells issued from either unrelated donor or cord blood (CB). A very significant increase in the frequency and intensity of HHV6 infections was observed in patients receiving CB grafts. To explain this phenomenon, we then determined the cellular composition and the CD46 (ubiquitous HHV-6 membrane cell receptor) expression in several types of blood and graft sources. These data, obtained by multi-parametric flow cytometry analyses, showed a very significant deficiency in plasmacytoid dendritic cells (pDCs, cells professionally involved in antiviral defense of the organism through production of type 1 interferon) and lower CD46 cells expression in CB grafts. Finally, to clarify the possible effects of the virus on cell functions, we performed preliminary in vitro experiments consisting on HHV-6 infection of sorted human peripheral pDCs issued from healthy donors. These early data showed a modulation of CD80 and CD86 expressions on pDCs associated with a significant stimulation of type 1 IFN-alpha secretion by these cells. So far, the significant influence of cord blood graft source on HHV-6 reactivation after allogeneic transplantation remains to be elucidated

L’herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) est un virus lymphotrope, présentant deux variants A et B. Le variant B est associé au syndrome d’hypersensibilité médicamenteuse ou DRESS (drug rash with eosinophilia and systemic symptoms), et est également étudié pour son implication dans le lymphome de Hodgkin (LH). Le DRESS est une maladie rare, qui apparaît en réponse à une prise médicamenteuse, se manifestant par une fièvre élevée, une éosinophilie et une éruption cutanée importante et qui peut s’accompagner d’une atteinte viscérale. La réplication in vitro de l’HHV-6 a été quantifiée en présence de molécules causales du DRESS. Une stimulation de la réplication virale en présence de valproate de sodium, carbamazépine et amoxicilline a été mise en évidence, suggérant que la réactivation de l’HHV-6 est un événement précoce dans le déroulement du DRESS. De plus, l’étude des données virologiques de patients atteints de DRESS a permis de confirmer que la réactivation de l’HHV-6 est un phénomène fréquent dans cette maladie. Afin de préciser le rôle de l’HHV-6 dans le LH, l’action de l’oncoprotéine virale DR7 sur le comportement cellulaire a été étudiée. Des dérégulations similaires à celles décrites dans les cellules de Reed-Sternberg, caractéristiques du LH, ont été observées dans des cellules B surexprimant DR7. Ces dérégulations aboutissent à une prolifération et une résistance à la mort cellulaire accrue, ainsi qu’à une modulation de l’expression de marqueurs spécifiques. Ces travaux ont permis de montrer que la réactivation de l’HHV-6 est un événement précoce et causal dans le DRESS, et d’argumenter en faveur d’un rôle pathogénique de l’HHV-6 dans la lymphomagenèse du LH
Human herpesvirus 6 (HHV-6) is a lymphotropic virus which exists as two variants named A and B. B variant is associated with drug hypersensitivity syndrome or DRESS (drug rash with eosinophilia and systemic symptoms), and is studied for its implication in Hodgkin’s lymphoma (HL). DRESS is a rare, drug-induced reaction, characterized by high fever, eosinophilia, cutaneous eruption and potential visceral involvement. HHV-6 replication in vitro was quantified in presence of drugs responsible for DRESS. A stimulation of viral replication by sodium valproate, carbamazepine and amoxicillin was shown, suggesting that HHV-6 reactivation is an early event in the time course of DRESS. Moreover, virological data from DRESS patients allow us to observe that HHV-6 reactivation is a frequent event in DRESS. The role of HHV-6 in HL was studied through viral oncoprotein DR7 action on cellular functions. B cells overexpressing DR7 exhibited deregulations similar to those reported for Reed-Sternberg cells, which are characteristic cells of HL. Increased proliferation and cell death resistance, and modulation of specific markers were observed. This work showed that HHV-6 reactivation is an early and causative event in DRESS, and results concerning DR7 argue in favour of a pathogenic role of HHV-6 in HL

L’herpèsvirus humain de type 6 (HHV-6) au caractère lymphotropique présente deux variants A et B, ce dernier étant associé au lymphome de Hodgkin (LH). Toutefois, cette association est controversée dans la littérature car elle est présente dans de rares cas et absente dans la cellule caractéristique du LH : la cellule de Reed-Sternberg (RS). Lors du premier objectif de notre travail de thèse, la PCR quantitative a démontre�� l��existence et a quantifié le virus HHV-6 au sein d’une cohorte de patients atteints de LH; ceci de façon concomitante ou non au virus d’Epstein et Barr (EBV) connu pour être associé à cette pathologie. Par la suite, l’anticorps anti-DR7B de l’HHV-6 produit par nos soins a permis de connaître la localisation cellulaire du virus HHV-6 et ainsi de détecter sa présence en grande quantité dans la cellule RS pour 73,7% des patients atteints de LH seulement positifs pour l’HHV-6. En outre, un double marquage chez les patients de la cohorte positifs pour les deux herpèsvirus a démontré la colocalisation, notamment au niveau de la cellule RS, des oncoprotéines DR7B du virus HHV-6 et LMP1 du virus EBV signifiant une probable interaction virale. Enfin, un système de transfection stable permettant de moduler l’expression de DR7B au sein de cellules B matures proches des cellules RS a été réalisé. Il a permis d’observer l’induction, en présence de DR7B, de la surexpression tant au niveau transcriptionnel que traductionnel, comme au sein des cellules RS du LH, de Id2 qui est un inhibiteur de E2A, facteur de transcription impliqué dans la reprogrammation phénotypique des cellules RS
There are two variants, A and B, of human lymphotropic herpesvirus type 6 (HHV-6). The B variant is associated with Hodgkin’s lymphoma (HL). However this association is contreversial in the literature because it only exists in rare cases and not in Reed-Sternberg cells (RS), the characteristic cells of HL. In the first part of our study quantitative PCR demonstrated the existence of HHV-6 alone or concommitantly with Epstein-Barr virus, known to be associated with HL, in a cohort of HL patients. We then used an anti-HHV-6 DR7B antibody produced in our laboratory to determine the cellular localization of HHV-6 and to detect its presence in large quantities in RS cells from 73. 7% of HL patients positive only for HHV-6. Furthermore, double labeling studies in patients from the cohort positive for both herpesviruses demonstrated the colocalization, notably in RS cells, of DR7B from HHV-6 and LMP1 from EBV oncoproteins, indicating a probable viral interaction. Finally, a stable transfection system was realised to adjust DR7B expression in mature B cells which are close to RS cells. In the presence of DR7B, a transcriptionnal and translational expression of Id2, an inhibitor of E2A wich is a transcription factor implicated in phenotypical reprogramming of RS cells, similar to RS cells in HL, was observed

L'herpèsvirus humain (HHV) 6 est un betaherpèsvirus largement répandu, associé à plusieurs maladies neuroinflammatoires, telles que des encéphalites ou la sclérose en plaques (SEP). Cependant, les mécanismes impliqués dans la neuropathologie induite par les deux espèces d'HHV-6, HHV-6A et HHV-B, sont peu connus. De plus, l'absence de modèle d'infection chez le petit animal a ralenti l'étude de la pathogénèse virale. Dans ce contexte, nous avons développé un modèle d'infection par HHV-6 chez des souris transgéniques, qui expriment la protéine CD46 humaine, identifiée comme récepteur cellulaire pour HHV-6. Nous avons pu démontrer une persistance de l'ADN viral d'HHV-6A, mais pas d'HHV-6B, dans le cerveau de souris transgéniques pendant plusieurs mois. De plus nos résultats montrent qu'HHV-6A induit la sécrétion de chimiokines pro-inflammatoires par les cellules neurales murines et provoque l'infiltration de cellules immunitaires dans le cerveau de souris infectées. Enfin, HHV-6A, mais pas HHV-6B, pourrait induire des réponses cellulaires chez les cellules murines via le récepteur de l'immunité innée TLR9 (toll-like receptor 9). En collaboration avec une équipe de Grenoble, nous avons ensuite montré que l'infection par HHV-6A induit l'expression de rétrovirus endogènes humains (HERV) dans des cellules mononuclées et des lignées neurales humaines. Ces HERV, en particulier leurs protéines d'enveloppe qui présentent des propriétés pro-inflammatoires, sont associés à diverses maladies autoimmunes dont la SEP. HHV-6A pourrait donc participer au développement de pathologies inflammatoires via l'induction de ces HERV. L'ensemble de ces travaux supporte ainsi l'existence d'un lien entre l'infection par HHV-6A et la neuroinflammation, et apporte de nouvelles pistes quant aux mécanismes potentiellement impliqués.

Le virus adéno-associé (AAV) est un virus à ADN monobrin, défectif et endémique dans la population humaine. L'infection à AAV a longtemps été considérée comme non pathogénique. Cependant, il y a quelques années, nous avons identifié pour la première fois des insertions clonales récurrentes d'AAV2 impliquées dans la pathogenèse du carcinome hépatocellulaire humain (CHC) développé sur un foie normal. Ces insertions virales clonales ciblent des oncogènes et entraînent leur surexpression. À ce jour, peu de travaux ont étudié l'infection à AAV de type sauvage dans le foie humain. Dans ce travail, nous avons étudié l'histoire naturelle de l'infection virale dans les tissus hépatiques et ses conséquences sur le développement de tumeurs dans une vaste cohorte de patients (n = 1464). La présence de l'AAV est observée chez 21% des patients, plus fréquemment dans la contrepartie non-tumorale (18%) que dans la tumeur (8%) et significativement enrichie chez les femmes, les patients jeunes et non cirrhotiques. Deux sous-types d’AAV ont été identifiés dans le foie, l’AAV2 classique et un génotype hybride AAV2-AAV3-AAV13, avec une fréquence égale dans notre cohorte. Nous avons détecté la présence de formes épisomales d'AAV dans 27% des tissus non tumoraux positifs pour l'AAV, associée de manière significative à l'expression de l'ARN viral et à la co-infection par des virus auxiliaires, suggérant une infection active en cours. Nous avons identifié le virus de l'herpès humain de type 6 (HHV6) comme étant le virus auxiliaire naturel de l'AAV dans le foie. En revanche, l'ADN de l'adénovirus n'a été détecté que chez 0,5% des patients et aucune association avec l'AAV n'a été constatée. Nous avons confirmé la sélection positive des insertions d'AAV clonales au cours du développement du CHC chez les patients sans cirrhose dans 2% des tumeurs ciblant CCNA2, CCNE1, TERT, TNFSF10, KMT2B et INHBE / GLI1. De plus, les altérations de CCNA2 et de CCNE1 dues à des insertions virales d'AAV et de VHB ou à des réarrangements structurels ont défini une nouvelle sous-classe de CHC (CCN-HCC) et un nouveau mécanisme de développement du CHC sur le foie normal, améliorant nos connaissances sur l'hépatocarcinogénèse sur le foie non cirrhotique. Les CCN-HCC présentent également des caractéristiques moléculaires particulières qui pourraient être ciblées par un traitement spécifique
Adeno-associated virus (AAV) is a defective mono-stranded DNA virus, endemic in human population. AAV infection has long been considered as non-pathogenic, however few years ago we reported for the first time recurrent clonal AAV2 insertion in the pathogenesis of human hepatocellular carcinoma (HCC) developed on normal liver. These clonal viral insertions target cancer driver genes leading to their overexpression. To date, little is known about wild type AAV infection in human liver. In this work we investigated the natural history of the viral infection in the liver tissues and the consequences in tumor development in a large cohort of patients (n=1464). The presence of AAV was observed in 21% of patients, more frequently in the non-tumor counterpart (18%) than in tumor (8%) and significantly enriched in young, female and non-cirrhotic patients. Two AAV subtypes were identified in the liver, the classical AAV2 and a hybrid AAV2-AAV3-AAV13 genotypes, with an equal frequency in our cohort. We detected the presence of episomal AAV forms in 27% of AAV positive non-tumor tissues significantly associated with viral RNA expression and co-infection with helper viruses suggesting an ongoing active infection. We identified human herpes virus type 6 (HHV6) as the natural AAV helper virus in the liver. In contrast, adenovirus DNA was detected in only 0.5% of patients and no association with AAV was found. We confirmed the positive selection of clonal AAV insertions during HCC development in patients without cirrhosis in 2% of tumors targeting CCNA2, CCNE1, TERT, TNFSF10, KMT2B and INHBE/GLI1. Moreover, the alterations in CCNA2 and CCNE1 due to viral insertions of AAV and HBV or structural rearrangements defined a new subclass of HCCs (CCN-HCC) and a novel mechanism of HCC development on normal liver improving our knowledge on hepatocarcinogenesis on non-cirrhotic liver. CCN-HCCs display also peculiar molecular features that could be targeted by specific treatment

Le sixième herpèsvirus humain ou HHV-6 appartient à la sous-famille des bêtaherpèsvirus, tout comme le cytomégalovirus humain (CMV), et peut être à l’origine d’infections graves nécessitant une chimiothérapie antivirale par ganciclovir (GCV), foscarnet (PFA) ou cidofovir (CDV). Nous nous sommes intéressés ici à la résistance du HHV-6 aux antiviraux. La quantification de la charge virale par PCR en temps réel a été utilisée pour suivre la cinétique de réplication de la souche HST sur lignée lymphocytaire MT4, et pour développer une nouvelle méthode d’étude de la sensibilité du HHV-6 aux antiviraux. La charge virale suit une phase exponentielle puis stationnaire, l’ADN persistant dans la culture cellulaire longtemps après la fin de l’infection lytique. Une quantification précoce pendant la réplication active est possible et nécessaire à une bonne interprétation des résultats de l’antivirogramme. Comparée à la cytométrie en flux, la PCR en temps réel permet de réduire le temps de lecture et est plus économe en cellules et en virus. Cette méthode a été utilisée pour tester de nouvelles molécules antivirales et pour caractériser de nouvelles souches. En particulier, parmi plusieurs médicaments utilisés dans le traitement de l’épilepsie dont l’étiologie du HHV-6 est discutée, la lamotrigine a montré une certaine activité anti-HHV-6, sur la souche HST comme sur d’autres souches virales. D’autre part, la culture in vitro des souches HST sauvage ou GCVR1 (dérivée d’HST, résistante au GCV), en présence de concentrations croissantes de PFA, a conduit à la sélection de deux nouvelles souches, 8 et 15 fois plus résistantes au PFA qu’HST. De nouvelles mutations ont été mises en évidence dans le gène U38 codant l’ADN polymérase, qui est l’enzyme cible des antiviraux : T435R , H507Y et C525S localisées dans le domaine conservé dC, et F292S en dehors des domaines conservés, détectée dans une souche qui n’a pu être isolée. Les mutations T435R et C525S sont en outre aux positions homologues respectivement des mutations N495K et S585A du gène UL54 codant l’ADN polymérase du CMV et associées à une résistance du CMV au PFA. Dans un test fonctionnel permettant de mesurer l’activité enzymatique de l’ADN polymérase du HHV-6, la présence des quatre mutations nouvellement décrites, seules ou en association, diminue significativement l’effet inhibiteur du PFA sur l’enzyme. Une troisième souche sélectionnée à partir d’HST en concentrations croissantes de CDV, s’est montrée 118 fois plus résistante à cet antiviral que la souche sauvage, et une seule mutation a été détectée dans l’ADN polymérase, R798I, localisée dans le domaine VII. Comme dans le cas de GCVR1, une résistance croisée au CDV et GCV a été observée. Enfin, pour mieux appréhender les interactions des antiviraux avec leur cible et comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la résistance, la structure tridimensionnelle de l’ADN polymérase du HHV-6 a été modélisée. Deux modèles « ouvert » (enzyme seule) et « fermé » (enzyme en mode de polymérisation) ont été élaborés à partir des structures connues des ADN polymérases de l’herpèsvirus simplex 1 (HSV-1) et du bactériophage RB69. Dans les deux modèles, les acides aminés modifiés dans les souches mutantes sont situés dans les différents domaines structuraux de l’enzyme, et éloignés du site actif. L’implication de chaque mutation dans la résistance aux antiviraux pourrait alors s’expliquer, non pas par une modification du site actif lui-même, mais par une modification conformationnelle de l’enzyme limitant l’accès ou la fixation de l’antiviral. Ces résultats sont une première étape dans l’interprétation de mutations décrites dans l’ADN polymérase associées à une résistance du HHV-6 aux antiviraux et dans la compréhension des mécanismes moléculaires sous-jacents.

Les infections virales en particulier celles dues aux virus de la famille des Herpesviridae pendant la période d’aplasie et de lymphopénie à la suite d’une greffe de cellules souches hématopoïétiques (GCSH) peuvent occasionner des complications très graves, souvent associées à une morbidité et mortalité élevées. Les recommandations cliniques actuelles préconisent l’utilisation des antiviraux pour la prévention de certaines de ces infections. L’efficacité du famciclovir et de l’acyclovir contre les virus de l’herpès simplex (HSV), le virus varicella-zoster (VZV) et l’herpésvirus humain de type 6 (HHV-6) est bien reconnue, cependant il nous manque des données quant à leur effet contre le virus Epstein-Barr (EBV) et le cytomégalovirus (CMV) dans la population pédiatrique. L’objectif principal de ce projet de maitrise a été de mesurer l’incidence de l’infection aux virus HSV, VZV, EBV, CMV et HHV-6 et de mesurer l’association entre l’utilisation de la prophylaxie antivirale (acyclovir et famciclovir) et l’infection (virémie asymptomatique et maladie) avec le CMV et l’EBV dans une cohorte pédiatrique de GCSH allogéniques. Les données d'une cohorte de sujets ayant subis pour la première fois une GCSH enrôlés dans quatre centres de greffes pédiatriques au Canada entre juillet 2013 et mars 2017 (Étude TREASuRE) ont été utilisées. Le recrutement a été effectué au : CHU Sainte-Justine (Montréal) (n=86), British Columbia Children’s Hospital (Vancouver) (n=31), Winnipeg Children's Hospital and CancerCare Manitoba (n=28) et Alberta Children’s Hospital (n=11). Le suivi des patients avait débuté 1 mois avant la greffe et avait duré 13 mois. L’âge médian des patients au recrutement était de 6,3 ans. Les courbes de Kaplan-Meier ont permis d’estimer l'incidence cumulée des infections CMV et EBV avec intervalle de confiance (IC) à 95% à 100 jours post-greffe en fonction de la prophylaxie antivirale (acyclovir ou famciclovir). Les modèles multivariés de régression de Cox à risques proportionnels ont permis de mesurer l'association entre la prise d’antiviraux (acyclovir ou famciclovir) et le développement de ces infections. L’étude a inclus 156 sujets âgés de 0 à 21 ans. Les incidences cumulées de la virémie des virus de HSV, VZV, EBV, CMV et HHV-6 à 100 jours de suivi ont été respectivement de 2.5% (IC 95% : 0.8–7.6), 0.8% (IC 95% : 0.1–6.1), 34.5% (IC 95% : 27.6–42.6), 19.9% (IC 95% : 14.5-27.1) et 3.4% (IC 95% : 1.2–9.1). Les incidences cumulées pour CMV et EBV n’ont pas montré de différence statistiquement significative entre les groupes ayant reçu la prophylaxie antivirale (acyclovir ou famciclovir) et ceux qui ne l’ont pas reçu. Les analyses de Cox n’ont montré aucun effet significatif des antiviraux sur le CMV avec un HR ajusté de 0.55 (IC 95% : 0.24–1.26) pour l’acyclovir et de 0.82 (IC 95% : 0.30–2.29) pour le famciclovir. Il en était de même pour l’EBV avec un HR ajusté de 1.41 (IC 95% : 0.63–3.14) pour l’acyclovir et de 0.79 (IC 95% : 0.36–1.72) pour le famciclovir. Notre étude n’a montré aucune preuve d’effet de la prophylaxie antivirale avec le famciclovir et l’acyclovir contre l’EBV et le CMV. Très peu de cas de HSV et de VZV ont été diagnostiqués dans cette cohorte ce qui est conforme avec l’idée selon laquelle l’acyclovir et le famciclovir sont efficaces pour ces virus.
Viral infections, especially those involving members of the Herpesviridae during the period of aplasia and lymphopenia following allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), cause very serious complications, often associated with high morbidity and mortality. Current clinical guidelines recommend prophylactic use of antivirals, which has proven to be effective against certain viruses. The efficacy of famciclovir and acyclovir against herpes simplex viruses (HSV), varicella zoster virus (VZV) and human herpesvirus type 6 (HHV-6) is well-recognized, however, we lack data on their effects against Epstein-Barr virus (EBV) and cytomegalovirus (CMV) in the pediatric population. The main objective of this master's project was to measure the incidence of herpes virus infection, specifically by HSV, VZV, EBV, CMV and HHV-6, and to measure the association between the use of antiviral prophylaxis (acyclovir and famciclovir) and infection (including both asymptomatic viremia and disease) by CMV and EBV in a pediatric cohort of allogeneic HSCT. We used data from the TREASuRE cohort, which includes patients enrolled for a first allogeneic HSCT in four pediatric centers in Canada between July 2013 and March 2017. Recruitment was carried out at: CHU Sainte-Justine (Montreal) (n = 86), British Columbia Children's Hospital (Vancouver) (n = 31), Winnipeg Children's Hospital and CancerCare Manitoba (n = 28) and Alberta Children's Hospital (n = 11). Patient follow-up began 1 month before transplant and lasted 13 months. Median patient age at recruitment was 6.3 years. Kaplan-Meier curves were used to estimate the cumulative incidence of CMV and EBV infections with 95% confidence interval (CI) at 100 days post-transplant according to antiviral prophylaxis (acyclovir or famciclovir). Multivariate proportional hazards Cox regression models were used to measure the association between antiviral use (acyclovir or famciclovir) and the detection of these infections. The study included 156 subjects aged 0 to 21 years. The cumulative incidences of viremia due to HSV, VZV, EBV, CMV and HHV-6 at day 100 of follow-up were respectively 2.5% (CI 95%: 0.8–7.6), 0.8% (CI 95%: 0.1-6.1), 34.5% (CI 95%: 27.6-42.6), 19.9% (CI 95%: 14.5-27.1) and 3.4% (95% CI: 1.2-9.1). The cumulative incidences for CMV and EBV did not show a statistically significant difference between the groups who received antiviral prophylaxis (acyclovir or famciclovir) and those who did not. Cox analyses showed no significant effect of antivirals on CMV with an adjusted HR of 0.55 (95% CI: 0.24–1.26) for acyclovir and 0.82 (95% CI: 0.30–2.29) for famciclovir. The same was true for EBV with an adjusted HR of 1.41 (95% CI: 0.63–3.14) for acyclovir and 0.79 (95% CI: 0.36–1.72) for famciclovir. Our study showed no evidence of an effect with use of famciclovir or acyclovir prophylaxis on EBV and CMV infections. Very few cases of HSV and VZV infections were diagnosed in this cohort, which is consistent with the idea that acyclovir and famciclovir are effective against the latter viruses.