Dissertations / Theses on the topic 'Hormone ovarienne'

Le but de l'étude a été de rechercher les mécanismes physiologiques de l'action inhibitrice de la lactation sur la reproduction en utilisant les brebis "Préalpes du sud" comme modèle expérimental que la durée de l'anoestrus postpartum dépend essentiellement des facteurs nerveux centraux qui contrôlent la sécrétion pulsatile de lh. L'allaitement retarde le rétablissement de cette sécrétion pulsatile par un mécanisme qui semble impliquer les opiaces endogènes déchargés au moment des tétées. Les faibles différences observées dans la durée de l'anoestrus postpartum et de lactation résultent en partie de l'influence modulatrice et régulatrice du complexe utéroovarien.

Chez la vache le développement des techniques d’induction d’ovulations multiples et de production d’embryons est limité par la variabilité inter-individuelle de la réponse ovarienne au traitement de superovulation. Chez la femme, l’Hormone anti-Müllérienne (AMH) est le meilleur marqueur endocrinien de la réponse folliculaire au traitement de stimulation ovarienne. Les objectifs de mon travail étaient d’étudier l’AMH comme marqueur endocrinien de la réponse ovarienne à un traitement gonadotrope chez la vache et d’étudier la régulation de la production d’AMH par les cellules de granulosa. Nos résultats montrent que les concentrations plasmatiques d’AMH sont prédictives de la réponse ovulatoire à un traitement gonadotrope. Au cours du cycle, les concentrations d’AMH ont un profil en 2 temps : elles diminuent entre les chaleurs et J5 à J8, puis augmentent jusqu’aux chaleurs suivantes. Pour prédire efficacement la réponse ovulatoire, les concentrations d’AMH doivent être mesurées aux chaleurs ou après J12 du cycle. L’étude de la régulation de la production in vitro d’AMH par les cellules de granulosa montre que BMP stimule tandis que FSH inhibe la production d’AMH
In the cow, the development of multiple ovulation and embryo transfer technologies is limited by the variability between animals in ovarian responses to superovulatory treatments. In the women, the anti-Mullerian Hormone (AMH) is the best marker of follicular response to a stimulatory treatment. The objectives of my work were to study AMH as an endocrine marker of the ovulatory response to a stimulatory treatment in the cow and to study the regulation of AMH production by granulosa cells. Our results show that plasma AMH concentrations can predict the ovulatory responses to a stimulatory treatment. During the estrous cycle, AMH concentrations have a dynamic profile in 2 steps: AMH concentrations decrease between estrus and D5 to D8 and then they increase until the next estrus. To predict in optimal conditions, AMH has to be measured at the estrus time or after D12 of the estrous cycle. In vitro, the study about regulation of AMH production by granulosa cells indicates that BMP enhances whereas FSH decreases AMH production

La chimiothérapie induit une baisse de la fertilité en exerçant une toxicité directe sur les ovaires entrainant une diminution du stock ovocytaire. Couramment utilisé dans le traitement du cancer du sein, le cyclophosphamide (Cy) est une des drogues reconnue comme la plus gonadotoxique. Récemment, il a été proposé que le Cy provoquait une déplétion folliculaire par une entrée en croissance massive des follicules au repos. L’Hormone Anti-Müllérienne (AMH) étant un des facteurs régulant la sortie des follicules primordiaux de la réserve ovarienne, nous avons émis l’hypothèse que cette hormone pourrait limiter la gonadotoxicité du Cy. Nous avons montré qu’un traitement par AMH recombinante chez des souris pubères traitées par Cy, permettait effectivement de limiter la déplétion folliculaire. Sur le plan fondamental, nous avons mis en évidence que l’autophagie pouvait être un des mécanismes impliqués dans l’inhibition du recrutement folliculaire exercée par l’AMH. Enfin, la méthode de référence consistant à évaluer la réserve ovarienne chez la souris étant particulièrement longue et fastidieuse, nous avons développé une technique de comptage folliculaire automatisé en utilisant des méthodes d’intelligence artificielle, et plus particulièrement une approche de « deep learning»
Chemotherapy induces infertility by exerting a direct toxicity on the ovaries, resulting in a depletion of the follicular stockpile. Cyclophosphamide (Cy), widely used for breast cancer, is recognized as one of the most gonadotoxic agent. Recently, it has been proposed that Cy gives rise to follicular depletion by a massive growth of resting follicles which are then destroyed. Since Anti-Müllerian Hormone (AMH) is one of the factors regulating primordial follicles activation, we hypothesized that this hormone might limited Cy-induced gonadotoxicity. We have shown in pubertal mice that recombinant AMH injections are able to preserve primordial follicle loss Cy-induced and might improve fertility outcome after treatment. In addition, we provide evidence that autophagy could be one of the mechanisms involved in the inhibition of follicular recruitment by AMH. At least, nowadays, the “gold standard” method of evaluating ovarian reserve in mouse is a process particularly time-consuming and tedious. We developed a new methodology of automatic primordial follicles detection and counting within mouse ovaries, using modern artificial intelligence methods, especially deep learning approach

Deux méthodes de superovulation, administration de eFSH et immunisation anti-inhibine, ont été étudiées chez la ponette Welsh. Avec eFSH, la production d'embryons est limitée par des non-réponses (23%) et par la formation de follicules lutéinisés ou anovulatoires. Une posologie de eFSH de 3,45 mg par jour en 3 injections IV a été calculée comme équivalente aux quantités produites chez des juments ovariectomisées. Comparée à cette dose, la dose de 1,72 mg induit de moindres perturbations endocrines (seul le pic ovulatoire de LH est supprimé) et permet d'obtenir plus d'ovulations (2,9 vs 1,9) et d'embryons (1,1 vs 0). La LH résiduelle, présente dans la préparation injectée, est impliquée dans les effets indésirables observés, mais la suppression du pic de LH n'a pas de conséquences défavorables. L'administration d'anticorps équins anti-inhibine induit une augmentation modérée de la FSH et de la LH plasmatiques, associée à une stimulation ovarienne chez 35 à 50% des femelles. Toutefois, au cours du cycle post-traitement, le nombre d'embryons est augmenté (1 vs 0,65) mais pas le nombre d'ovulations, ce qui suggère une amélioration de la qualité des embryons
Two methods of superovulation, administration of eFSH and anti-inhibin immunization were studied in Welsh pony mares. With eFSH, embryo production is limited by non-responses (23%) and by induction of luteinized and anovulatory follicles. The posology of eFSH of 3,45 mg per day in 3 IV injections was determined to be equivalent to ancounts produced in ovariectomized mares. Compared to this dose, the of 1,72 mg induces less endocrine alterations (only the ovulatory LH peak is suppressed) and gives more ovulations (2,9 vs 1,9) and embryos (1,1 vs 0). The residual LH in the injected preparation is involved in undesirable observed effects but the suppression of the LH peak has no deleterious consequence. Administration of equine antibodies against inhibin induces a moderate increase in plasmatic FSH and LH, associated with ovarian stimulation in 35 to 50% of mares. However, during the post-treatment cycle, the number of embryos increased (1 vs 0,65) but not the number of ovulations, which suggests an improvement in embryos quality

La differenciation morphologique et fonctionnelle de l'ovaire, les niveaux plasmatiques de fsh et lh et leur controle, leur relation avec la prolificite chez l'adulte ont ete compares chez des agnelles prolifiques et non prolifiques

In order to analyze the consequences of the absence of growth hormone receptor (GHR) and GH binding protein (GHBP) on female reproductive function, we used a mouse model in which the GHR/BP gene has been disrupted by homologous recombination. The major effect on reproductive function seen in GHR/BP-KO as compared to wild type animals is a dramatic decrease of the litter size, this defect being due to a reduction of ovulation rate. The number of follicles per ovary is markedly reduced, although all categories of follicles are represented. The ovulatory response to exogenous gonadotropin treatment is also three-fold reduced in GHR/BP-KO as compared to the wild-type ovaries. These results establish that the reduced rate of ovulation is essentially due to an ovarian defect rather than a deficiency in pituitary gonadotropins. In antral follicles, LH and IGF-I receptor levels are not changed. Interestingly, the rate of atresia is increased in GHR/BP KO preantral but not antral follicles in comparison to wild-type follicles. IGF-I treatment using micropumps is not able to rescue either fertility or ovarian responsiveness to exogenous gonadotropins, suggesting that the effect of GH is independent of IGF-I. In conclusion, these results indicate that the reduction of litter size in GHR/BP KO mice is a consequence of an alteration of the basal growth of follicles, and that GH affects follicular growth, independent of IGF-I. The corpus luteum (CL) plays a central role, in the maintenance of pregnancy, mainly by secreting progesterone. Null mutation of the PRL receptor (R) gene in mouse leads to female sterility due to a failure of embryo implantation which is the consequence, for a large part, to decrease of LH receptor expression in the CL and consequently loss of the enzymatic cascades necessary to produce adequate levels of progesterone. In the present investigation, we attempted to treat PRLR-/- females with hCG, and showed a clear de novo expression of LHR mRNA in the corpora lutea of these mice. Binding analysis showed similar levels of LH binding activity in corpora lutea of wild type and hCG-treated PRLR-/- mice, confirming that the LHR in hCG treated PRLR-/- animals was functional. The expression of LHR was accompanied with increased expression of steroidogenic enzymes involved in progesterone synthesis. Despite these positive effects, no embryo implantation was observed, due to high expression of 20D-hydroxysteroid dehydrogenase, which catabolizes progesterone. To better appreciate the molecular mechanisms underlying maintenance of the corpus luteum, a series of mRNA expression profiling experiments was performed on isolated corpora lutea of PRLR-/- and hCG-treated PRLR-/- mice at d 2. 5 of pregnancy. This approach revealed several novel candidate genes with potentially pivotal roles in ovarian function, among them, p27, VE-cadherin, Pten and sFRP-4, a member of the WNT/frizzled family. In conclusion, this study showed the differential role of PRL and LH in corpus luteum function and identified new targets of these hormones in luteal cells
Chez les mammifères, la folliculogenèse ovarienne est un phénomène complexe continu, marqué par la succession de différentes étapes du développement du follicule, depuis le moment où il sort de la réserve ovarienne jusqu'à sa rupture au moment de l'ovulation ou à son involution par atrésie. Malgré l'accumulation de données physiologiques, le déterminisme du développement folliculaire reste encore imparfaitement compris, notamment, la balance entre la croissance et l'atrésie et la sélection d'un ou plusieurs follicules dominants. Nous avons étudié la folliculogenèse ovarienne dans un modèle de souris invalidée pour le gène codant pour le récepteur de l'hormone de croissance et la protéine de liaison de la GH (GHBP). Le phénotype marquant de ces souris est la réduction de la taille des portées des femelles. L'étude de la fertilité des femelles GHR/BP -/- nous a permis de démontrer que ces animaux, dont la taille des portées est réduite, ne présentent pas d'anomalies d'implantation ou de développement embryonnaire, mais ont un taux d'ovulation réduit. La structure de leurs ovaires est normale, contenant l'ensemble des différentes classes de follicules ovariens, bien que leurs nombres soient réduits. Le taux d'ovulation faible, mais continu dans le temps, parait être lié à une anomalie survenant au cours du développement du follicule pré-antral, et persiste lors de la superovulation. En effet, nous avons mis en évidence que le nombre de follicules sains antraux et préovulatoires étaient diminués chez ces souris par rapport à celui des souris sauvages tandis que le nombre de follicules atrétiques était augmenté. Nous avons démontré que cette anomalie était directement liée à l'absence du récepteur de la GH, et non à un défaut d'action de l'IGF-I. En effet, nous avons établi que la production de l'IGF-I était intrinsèque à l'ovaire et suffisante pour lui permettre d'exercer son action. De plus, le traitement de ces souris par les micropompes d'IGF-I n'a pas permis une correction du phénotype. La GH elle-même semble donc être un co-facteur important impliqué dans la croissance folliculaire, en particulier dans la survie des follicules antraux. Le pic de LH pré-ovulatoire entraine l'ovulation et ensuite un programme de différenciation terminale du follicule ovulé en corps jaune à travers un processus nommé lutéinisaiton. Ces cellules en cours de lutéinisation doivent sortir du cycle cellulaire et exprimer de nouvelles molécules qui vont alors permettre aux cellules lutéales de survivre dans un environnement hormonal différent. Le corps jaune va ainsi jouer un rôle central dans la régulation du cycle et le maintien de la gestation. La prolactine (PRL) joue un rôle crucial dans le maintien de la fonction lutéale et de la gestation chez les rongeurs en activant son récepteur (R) transmembranaire. Notre équipe a réalisé l'invalidation du gène du récepteur de la PRL par la technique de recombinaison homologue ciblée. Le phénotype résultant de l'invalidation du gène codant pour ce récepteur a montré que les femelles RPRL-/- ovulaient, mais n'étaient pas gestantes. Nos études ont permis de montrer que le processus de lutéinisation débute mais que le corps jaune involue rapidement et ne permet pas le maintien de la gestation car les cellules lutéales entrent en apoptose massivement et la vascularisation ne se met pas en place. Ces anomalies sont associées à une diminution de l'expression du récepteur de la LH et ainsi de la cascade enzymatique permettant la steroïdogenèse. A l'inverse, la 20a-hydroxysteroïde déshydrogénase est activée en l'absence de PRL, aboutissant à la dégradation de la progestérone synthétisée. Nous nous sommes ensuite concentrés sur la recherche des gènes régulés par la prolactine afin de pouvoir mieux cerner la ou les cibles moléculaires de cette hormone sur le corps jaune. Afin de tenter de restaurer l'expression du RLH dans les souris RPRL -/-, nous avons traité précocement après l'ovulation ces souris par de l'hCG. Nous avons observé un maintien de la structure du corps jaune jusqu'au 5e"" jour de gestation bien que l'implantation n'ait pas lieu, du fait de la persistance de l'activité 20a-hydroxysteroïde déshydrogénase. L'analyse par hybridation in situ de l'expression de l'ARNm du RLH et l'étude fonctionnelle de RLH par liaison à l'hormone marquée ont montré une réexpression du RLH chez les souris traitées. Enfin, par la technique de macroarrays sur les corps jaunes de souris RPRL+/+, PRLR-/- et PRLR-/- traitées à l'hCG, nous avons identifié des gènes cibles de la PRL et de la LH, parmi lesquels la VE-cadhérine, p27, PTEN, ainsi que sFRP-4, acteur de la voie WNT/frizzled. Enfin, afin de mieux comprendre l'implication de la PRL sur la régulation du RLH, nous avons croisé cette lignée avec la lignée de souris surexprimant la sous unité P de l'hCG. Ces modèles devraient permettre d'étudier les interactions entre ces deux hormones, le rôle de la PRL dans l'expression du RLH. Ce travail a donc permis ainsi de mettre en évidence le rôle de l'hormone de croissance et de la prolactine dans la folliculogenèse ovarienne et le contrôle de la fonction lutéale chez les rongeurs

Le bon déroulement de la folliculogenèse ovarienne basale, est une étape clé qui conditionne la fertilité des femelles à l'âge adulte. Pourtant, les mécanismes moléculaires contrôlant ce processus sont encore mal connus et les études d'expression limitées par la difficulté d'obtention du matériel biologique. Les données actuelles proviennent essentiellement d'études réalisées chez les rongeurs (espèces poly-ovulantes). L'objectif de ce travail est de décrire, pour les deux compartiments folliculaires (ovocytes et cellules de granulosa), les spécificités d'expression et les gènes impliqués dans le dialogue moléculaire entre ces compartiments ainsi qu'aux différents stades de développement folliculaire basal " in vivo " chez une espèce mono-ovulante : la brebis. Nous avons développé, dans un premier temps, une méthode d'analyse du transcriptome pour les stades précoces qui combine microdissection à capture laser, amplification des ARN et microarrays. Puis, nous avons présenté, par la technique RNA-seq, et pour la première fois, un répertoire de 15349 gènes décrivant le profil d'expression de ces gènes dans chaque compartiment folliculaire et en fonction de leur stage de développement. L'analyse statistique révèle une différence d'expression entre compartiments folliculaires (5130 gènes) ainsi qu'une dynamique d'expression au cours du développement (3015 gènes). Nous avons également identifié 161 et 55 gènes présentant une expression préférentiellement enrichie dans l'ovocyte et dans les cellules de granulosa, respectivement. L'analyse fonctionnelle " in silico " combinée avec les données d'expression mettent en évidence des voies de signalisation (IGF1, VEGF, FGF, NOTCH) susceptibles d'être impliquées dans le dialogue moléculaire entre les deux compartiments folliculaires. Enfin, dans nos conditions expérimentales, nous montrons d'importantes variations d'expression au cours du développement folliculaire basal, lors de la transition du follicule primaire en secondaire chez la brebis. La cinétique d'expression de gènes impliqués dans des voies de signalisation tels que BMP et WNT a été précisément décrite. Un jeu de 25 gènes a été sélectionné en tant que biomarqueurs expressionnels des différentes classes folliculaires. Il pourra être utilisé pour évaluer la croissance folliculaire basale
Correct achievement of early ovarian folliculogenesis is a crucial step which determines female fertility in adulthood. However, molecular mechanisms controlling this development are not well characterized. Furthermore, gene expression studies are restricted by the difficulty to collect biological material. Moreover, available data are mainly derived from rodent models (poly-ovulating species). In this project, we intended to describe, in both follicular compartments (oocytes and granulosa cells), the specificity of expression, to point out genes involved in molecular dialog and during early follicular development in sheep species (mono-ovulating species). First, we developed a transcriptome methodology to study early folliculogenesis that combined laser capture microdissection, RNA amplification and microarrays. Then, we described for the first time, the gene expression profile of 15349 genes for each follicular compartment during early follicular development using RNA-seq technology. Statistical analysis underlined differential expression between compartments (5120 genes) and during development (3015 genes). We identified 161 and 55 genes with a preferentially enriched expression in oocytes and granulosa cells respectively. "In silico" fonctional analysis combined with gene expression data underlined signaling pathways as IGF1, VEGF, FGF,and NOTCH that may be involved in molecular dialog between the two follicular compartments. Last, in our experimental conditions we showed important gene expression changes occurred during primary to secondary follicular transition in sheep. The expression profiles of genes involved in pathways as BMP and WNT were precisely described. A set of 25 genes was selected as follicular class biomarkers that may be used to evaluate early follicular growth

La FSH est une glycoprotéine, composée d'un hétérodimère d'une sous-unité α, et d'une sous-unité FSHβ pécifique. Elle circule dans le sérum sous une vingtaine de formes différentes appelées isoformes. Les dosages les plus utilisés, depuis la fin des années 1960, sont les dosages immunologiques avec des anticorps monoclonaux. Le but de ce travail a été de mettre au point un système de mesure de l'activité biologique de la FSH in vitro ou CHOFSHR. Une lignée de cellules CHO a été transfectée par le récepteur humain de la FSH et un gène rapporteur luciférase. L'activité biologique de la FSH est proportionnelle à la production d'unités lumineuses. Ce bioessai, homologue d'espèce a été utilisé, initialement en physiologie, lors du cycle menstruel ovarien, pour apprécier la variation de la FSH biologique lors du cycle. Il existe, tout au long du cycle, une très bonne corrélation entre les taux de FSH immunologique et FSH biologique, avec une élévation de l'activité biologique en fin de phase lutéale. Le bioessai CHOFSHR a ensuite été utilisé lors de deux situations pathologiques : les adénomes gonadotropes et les insuffisances ovariennes prématurées. Il n'a pas été mis en évidence d'augmentation de l'activité biologique de la FSH dans un cas exceptionnel d'adénome gonadotrope. En cas d'insuffisance ovarienne prématurée, le spectre des taux de FSH biologique est très large. Des études complémentaires sur le type d'isoformes de la FSH secrété et leurs rôles respectifs sont nécessaires pour mieux appréhender la physiologie du cycle menstruel et les futurs traitements par gonadotrophines.

Le mecanisme de regulation par la photoperiode du cycle annuel de reproduction a ete etudie chez la brebis. Le debut et l'arret de l'activite sexuelle correspondent a deux phases d'un rythme endogene de reproduction. Ces deux phases se caracterisent par un passage obligatoire dans la condition physiologique opposee. La perception des jours longs de printemps synchronise ce rythme endogene et determine, en particulier, le debut de la saison sexuelle. Les jours courts (et decroissants) prolongent cette activite jusqu'a ce que la phase d'arret obligatoire soit atteinte. La duree de secretion de la melatonine reflete en permanence la duree de l'obscurite, meme quand les animaux sont insensibles a la photoperiode ambiante

De nombreuses études expérimentales ou épidémiologiques suggèrent un rôle psycho- et neuro- protecteur des estrogènes que les résultats de certains essais cliniques ne confirment p as. L'objectif de cette thèse est d'étudier le rôle des estrogènes dans la dépression et le fonctionnement cognitif chez les femmes âgées en examinant les taux d'estrogènes sériques, l'exposition aux estrogènes au cours de la vie et l'impact des traitements hormonaux (TH) ou des récepteurs aux estrogènes. Les données sont issues de deux études longitudinales : le Melbourne Women's Midlife Health Project qui porte sur 438 Australiennes récemment postménopausées suivies 13 ans et l'étude des 3 Cités/ESPRIT qui inclut 5644 Françaises plus âgées suivies 7 ans. Des modèles statistiques multivariés montrent que des facteurs hormonaux endogènes et exogènes présents à une période tardive de la vie reproductive (autour de la ménopause) peuvent diminuer le risque de dépression et qu'une diminution des taux d'estradiol sérique augmente ce risque. L'arrêt du TH ou la prise de TH "non-naturel" augmentent le risque de dépression tardive. Certains polymorp hismes des récepteurs aux estrogènes sont associés au risque de dépression et peuvent interagir avec le TH pour modifier le risque de dépression ou de décès. Une durée plus longue d'exposition aux estrogènes au cours de la vie ou un taux d'estradiol sérique élevé en fin de ménopause sont associés à de meilleures performances cognitives qui peuvent aussi varier avec certaines caractéristiques du TH. Le TH réduit aussi le risque de démence chez les femmes portant l'allèle ε4 de l'apolipoprotéine E. Ce travail suggère que la modulation des niveaux d'estrogènes pourrait avoir des applications thérapeutiques dans le traitement de la dépression ou des troubles cognitifs. Il montre que certains groupes de femmes ont une susceptibilité génétique accrue aux variations hormonales ou aux effets du TH suggérant l'existence de sous-types hormono-sensibles
Experimental evidence suggests that estrogen can have psycho- and neuro-protective effects; however this has not been consistently supported by certain clinical trials and epidemiological studies. This thesis aimed to provide a detailed investigation of the role of estrogen in later-life depression and cognitive functioning by examining serum estrogen levels, estrogen exposure across the lifetime, characteristics of hormone treatment (HT) and the role of estrogen receptor polymorphisms. Data was obtained from two longitudinal population-based studies, the 13-year Melbourne Women's Midlife Health Project of 438 middle-aged postmenopausal women in Australia, and the seven-year Three City/ESPRIT study of 5644 older French women. Multivariate adjusted regression models showed that endogenous and exogenous hormonal characteristics late in the reproductive life can decrease the risk of late-life depression and a decline in serum estradiol levels incr eased the risk for recently postmenopausal women. Discontinuing HT increased the risk of depression for older women, as did certain "non-natural" forms of HT. Estrogen receptor polymorphisms were associated with late-life depression and can interact with HT to modify the risk of depression and mortality. Endogenous reproductive factors linked to higher lifetime estrogen exposure and high levels of estradiol in the early postmenopause were associated with better performance on certain cognitive tasks. Cognitive function also varied according to the characteristics of HT and HT reduced the risk of dementia in genetically susceptible women carrying the apolioprotein ε4 allele. This work brings some important new findings to this field of research, suggesting that the modulation of estrogen levels may be used as a possible therapeutic tool to reduce neuropsychiatric disorders and that certain subgroups of women may be genetically more susceptible to hormone modifications or to the effects of HT

Nous avons abordé le rôle des hormones ovariennes dans les étapes initiales de la cancérogenèse mammaire humaine en mesurant, par immunohistochimie, le niveau d'expression de certaines protéines associées à l'action des estrogènes (récepteur des estrogènes (RE) ß, REßcx et Récepteur du Mannose 6 phosphate et de l'IGFII) et de la progestérone (Acide gras synthase = AGS et Récepteur de la progestérone = RP). Les lésions précancéreuses mammaires et les carcinomes in situ ont été comparés au tissu normal adjacent, sur du matériel fixé et inclus en paraffine. L'espression de ces marqueurs a été quantifiée par Analyseur d'images. La variation précoce de certaines de ces protéines (REβ, REβcx, RP, AGS) suggère un rôle précoce des hormones ovariennes en cancérogenèse mammaire. Le déséquilibre de la balance des REs (α et ß), faciliterait la prolifération cellulaire sous l'effet des estrogènes. L'augmentation d'expression du RP favoriserait l'effet de la progestérone. L'AGS, considéré comme un proto-oncogène métabolique, est augmenté précocement de façon indépendante. D'autre part, 30 à 40% des cancers du sein invasifs REα positifs, développent une résistance au tamoxifène. Dans une étude pilote rétrospective, nous avons trouvé qu'une faible expression du REß était le meilleur facteur prédictif de la résistance au tamoxifène. Ce résultat a été confirmé par la suite par d'autres études, mais de grandes études prospectives devront être entreprises avant d'utiliser le REß en pratique courante. Ces résultats peuvent aider à la compréhension des étapes initiales de la cancérogenèse mammaire hormonale et éventuellement à la prévention et au traitement des cancers du sein.

Les nucléotides cycliques sont des seconds messagers intracellulaires possédant une grande importance dans la signalisation cellulaire du follicule ovarien. Les niveaux intracellulaires en nucléotides cycliques tel que l'adénosine monophosphate cyclique (AMPc) dépendent de leur synthèse, assurée par l'adenylyl-cyclase (AC) ainsi que leur dégradation par les phosphodiéstérases (PDE). Ces dernières appartiennent à la superfamille des métalophosphohydrolases, elles hydrolysent le groupement phosphate en 3' des nucléotides cycliques pour produire un nucléotide 5' phosphate. Dans les cellules ovariennes, plusieurs familles de PDE ont été identifiées, agissant comme modulateurs des taux intracellulaires de nucléotides cycliques. Dans le présent projet, nous nous attarderons à étudier la signalisation cellulaire chez les cellules ovariennes impliquant l'AMPc. La régulation de ses concentrations intracellulaires affecte plusieurs processus physiologiques. Le projet s'intéresse particulièrement à une famille d'enzyme de dégradation de l'AMPc, la phosphodiestérase8A (PDE8A). Nous voulons donc valider la présence fonctionnelle de la famille de PDE8A dans les cellules ovariennes ainsi que la mitochondrie afin de comprendre l'implication de cette enzyme dans la physiologie cellulaire en s'attardant à la stéroïdogenèse, étant donné que les mitochondries sont un organite cellulaire essentiel pour la stéroïdogenèse parce qu'elles représentent le site de synthèses de plusieurs hormones stéroïdiennes. En effet, des récents travaux ont montré la famille PDE8 comme un régulateur de la stéroïdogenèse dans les cellules de Leydig. Dans cette étude, nous avons montré que le transcrit de PDE8A ainsi que sa protéine étaient exprimés dans les cellules de la granulosa, les cellules du cumulus et l'ovocyte chez le porc. Ainsi, la protéine PDE8a a été détectée par western blot dans des mitochondries isolées à partir des cellules de granulosa et des complexe ovocyte-cumulus (COC). Une co-localisation entre le signal immunoréactive de la PDE8A et le marquage réalisé par mitotracker a été observée dans les cellules de granulosa et des mitochondries isolées. De plus, la présence fonctionnelle de la PDE8 mesurée en tant qu'activité AMPc-PDE sensible au PF-04957325 a été détectée dans des cellules de la granulosa et des mitochondries isolées supportant la présence fonctionnelle de la PDE8A dans les mitochondries isolées. De ce fait, cette observation soutient encore la localisation fonctionnelle mitochondriale de la PDE8A. Une association entre la mitochondrie et la PDE8A a aussi été démontrée par immunomicroscopie électronique qui a confirmé l'ancrage de la protéine sur la membrane mitochondriale externe. Pour évaluer l'implication de la mitochondrie dans la stéroïdogenèse, l'effet de PDE8A sur la production de progestérone a été mesuré dans les complexes ovocyte-cumulus en utilisant le PF-04957325 comme un inhibiteur spécifique de PDE8. Lorsque les COC sont cultivés sans FSH, un niveau basal de progestérone est mesuré. Par contre en présence de FSH une augmentation significative de sécrétion de progestérone est observée. En utilisant un inhibiteur spécifique de la PDE8 (PF-04957325) avec la FSH nous avons obtenu une augmentation encore plus importante de la sécrétion de progestérone. Ces résultats démontrent la présence fonctionnelle de PDE8A dans les cellules de la granulosa et les complexes ovocyte-cumulus. Puisque les mitochondries sont l'une des localisations de PDE8A, l'effet de l'inhibiteur spécifique de PDE8 sur la sécrétion de progestérone soutient la contribution mitochondriale de PDE8 dans la stéroïdogenèse.

Les anomalies congénitales induites par la délétion du gène du récepteur de la sérotonine 5-HT2B conduisent au développement d’une cardiomyopathie dilatée chez les souris mâles adultes. Les souris femelles knock-out (KO) pour le récepteur 5-HT2B étant moins affectées que les mâles KO, concernant le phénotype cardiaque, nous avons évalué le pouvoir cardioprotecteur des hormones ovariennes. Nous avons montré que l’ovariectomie à la puberté, entraîne une accélération de l'hypertrophie développementale mais indépendamment du récepteur 5-HT2B. Par conséquent les hormones ovariennes ne protègent pas les femelles KO pour le récepteur 5-HT2B de la cardiomyopathie dilatée. En absence d'altération fonctionnelle cardiaque apparente, les femelles KO ont été utilisées pour l'étude des fonctions vasculaires du récepteur 5-HT2B. L'induction d'une hypertension artérielle, par inhibition chronique des Nitric Oxide Synthases (NOSs), a permis la mise en évidence du caractère multi-phasique de ce modèle d'hypertension. Alors que les femelles sauvages développent deux phases d'hypertension, les femelles KO ne développent qu'une seule phase, suggérant que le récepteur 5-HT2B est impliqué dans le développement de l'une de ces phases. Les femelles KO sont plus sensibles à court terme, mais, paradoxalement, moins sensibles à long terme que les femelles sauvages vis-à-vis de l’hypertension par inhibition des NOSs. La protection à long terme confirme le rôle majeur du récepteur 5-HT2B dans l’étiologie de l’hypertension artérielle chronique. L'hypersensibilité à court terme des femelles KO est reliée à un défaut de compliance artérielle spécifique de l'inhibition des NOSs et à la réduction de 30% de l’activité basale des NOSs endothéliales au niveau de l’aorte. En conclusion, le récepteur 5-HT2B participe au contrôle de la pression artérielle notamment en modulant le tonus vasculaire de base et en participant, indépendamment, à l’étiologie de l’hypertension artérielle chronique
5-HT2B receptor knockout (KO) mice display congenital cardiac defects leading to dilated cardiomyopathy in adult KO males. Because 5-HT2B-KO females exhibit a less severe cardiac phenotype than KO males, we investigated the potential cardioprotective role of ovarian hormones in 5-HT2B-KO females. Bilateral ovariectomy, at puberty, induced an accelerated developmental cardiac hypertrophy but independently of the 5-HT2B receptor. Consequently, ovarian hormones are not the cause of gender difference in KO mice. Taking advantage of apparent normal cardiac function in KO females, we investigated the vascular function of the 5-HT2B receptor in vivo. Using, the chronic NOS (Nitric Oxide Synthase) inhibition induced-hypertension model, we describe for the first time, two independent phases of hypertension in wild type mice. Surprisingly, KO females display only one phase, indicating that the 5-HT2B receptor is necessary for one of the two phases of NOS-inhibition-induced hypertension. Moreover, KO females exhibit an hypersensitivity to NOS inhibition in the first phase of hypertension compare to wild type females but, paradoxically, they are protected from the second phase of hypertension. This protection confirms the major role of the 5-HT2B receptor in etiology of hypertension. Finally, we have shown that hypersensitivity to short term NOS inhibition is specifically associated to a decrease of vascular compliance and to a 30% reduction of basal endothelial NOS activity in aorta of KO females compare to wild type. We conclude that the 5-HT2B receptor is involved in blood pressure regulation by controlling basal vascular tonus, trough NOS activation, and independently participates to the development of long-term hypertension

L’utilisation des protocoles de stimulation ovarienne utilisant l’antagoniste de la GnRH ou l’agoniste de la GnRH pour bloquer un pic précoce de LH, sont maintenant une pratique courante en fécondation in vitro. Cependant, ces protocoles peuvent avoir des effets profonds sur la physiologie des cellules de granulosa. Ce travail montre que les deux protocoles utilisés ont des impacts différents sur les voies de signalisation dans les cellules de granulosa humaine. En effet, on observe en présence de l’agoniste de la GnRH, une désensibilision de la voie de la protéine kinase C (PKC), voie de signalisation de la GnRH. Cet effet peut rendre compte de la différence observée entre les deux protocoles dans la production d’oestradiol sécrétée par les cellules de granulosa. De plus, nous observons que certains facteurs comme les Bone Morphogenetic Protein (BMPs) n’ont pas le même niveau d’expression dans les cellules de granulosa entre les deux protocoles. Au sein d’un même protocole, ces facteurs peuvent avoir également un rôle différent sur la physiologie des cellules de granulosa selon la présence ou nom d’une pathologie de la folliculogenèse telle que le syndrome des ovaires polykystiques (SOPK). L’augmentation de l’expression de BMP-6 et du récepteur BMPR-IA dans les cellules de granulosa des femmes SOPK peut expliquer le blocage au stade des follicules préantraux et les troubles de la stéroïdogenèse observés chez ces femmes. Chez les femmes SOPK, les BMP induisent une résistance à la FSH, en terme de production d’estradiol, des cellules de granulosa. L’ensemble de nos résultats montre, d’une part, que les protocoles de stimulation ovarienne influent fortement sur la physiologie des cellules de granulosa et d’autre part, que l’étude dans certaines pathologies, des perturbations observées dans l’expression ou les effets de facteurs comme les BMPs constitue une approche du rôle de ces facteurs dans la physiologie ovarienne
Ovarian stimulation protocols using the GnRH antagonist or GnRH agonist to block the LH surge are now a common practice in fertilization in vitro technique. However, these protocols had profound effects on the physiology of the granulosa cells. This work shows that both protocols have different impacts on the signaling pathways in human granulosa cells. Indeed, in the presence of GnRH agonist, protein kinase C (PKC) pathway, main way by which GnRH acts, is desensitized. This effect may account for the observed difference between two protocols in the production of estradiol by the granulosa cells. Moreover, we observe that certain factors such as Bone Morphogenetic Protein (BMP) don’t have the same level of expression in granulosa cells between the two protocols. Also, within a single protocol, these factors can also have a different role on the physiology of the granulosa cells by presence of some folliculogenesis pathology such as polycystic ovary syndrome (PCOS). The increased expression of BMP-6 and BMPR-IA receptor in granulosa cells of PCOS women may explain the blockage at the stage of preantral follicles and disorders of steroidogenesis observed in these women. In PCOS women, BMPs induce resistance to FSH in granulosa cells in terms of estradiol production. All of our results shows, first, that the ovarian stimulation strongly influence the physiology of the granulosa cells and secondly, study some factors such as BMPs could be help us to understand more about the ovarian pathology

L’accumulation de triglycérides (TG) dans les hépatocytes est caractéristique de la stéatose hépatique non-alcoolique (SHNA). Cette dernière se produit dans diverses conditions dont le facteur commun est le métabolisme anormal des lipides. Le processus conduisant à l'accumulation des lipides dans le foie n’a pas encore été totalement élucidé. Toutefois, des lipides s'accumulent dans le foie lorsque les mécanismes qui favorisent leur exportation (oxydation et sécrétion) sont insuffisants par rapport aux mécanismes qui favorisent leur importation ou leur biosynthèse. De nos jours il est admis que la carence en œstrogènes est associée au développement de la stéatose hépatique. Bien que les résultats des études récentes révèlent l'implication des hormones ovariennes dans l'accumulation de lipides dans le foie, les mécanismes qui sous-tendent ce phénomène doivent encore être étudiés. En conséquence, les trois études présentées dans cette thèse ont été menées sur des rates ovariectomizées (Ovx), comme modèle animal de femmes post-ménopausées, pour étudier les effets du retrait des œstrogènes sur le métabolisme des lipides dans le foie, en considérant l'entraînement physique comme étant un élément positif pouvant contrecarrer ces effets. Il a été démontré que l'entraînement physique peut réduire l'accumulation de graisses dans le foie chez les rates Ovx. Dans la première étude, nous avons montré que chez les rates Ovx nourries à la diète riche en lipides (HF), les contenus de TG hépatiques étaient élevées (P < 0.01) comparativement aux rates Sham, 5 semaines après la chirurgie. Le changement de la diète HF par la diète standard (SD) chez les rates Sham a diminué l’accumulation de lipides dans le foie. Toutefois, chez les rates Ovx, 8 semaines après le changement de la HF par la SD le niveau de TG dans le foie était maintenu aussi élevé que chez les rates nourries continuellement avec la diète HF. Lorsque les TG hépatiques mesurés à la 13e semaine ont été comparés aux valeurs correspondant au retrait initial de la diète HF effectué à la 5e semaine, les niveaux de TG hépatiques chez les animaux Ovx ont été maintenus, indépendamment du changement du régime alimentaire; tandis que chez les rats Sham le passage à la SD a réduit (P < 0.05) les TG dans le foie. Les mêmes comparaisons avec la concentration des TG plasmatiques ont révélé une relation inverse. Ces résultats suggèrent que la résorption des lipides au foie est contrée par l'absence des œstrogènes. Dans cette continuité, nous avons utilisé une approche physiologique dans notre seconde étude pour investiguer la façon dont la carence en œstrogènes entraîne l’accumulation de graisses dans le foie, en nous focalisant sur la voie de l'exportation des lipides du foie. Les résultats de cette étude ont révélé que le retrait des œstrogènes a entraîné une augmentation (P < 0.01) de l’accumulation de lipides dans le foie en concomitance avec la baisse (P < 0.01) de production de VLDL-TG et une réduction l'ARNm et de la teneur en protéines microsomales de transfert des triglycérides (MTP). Tous ces effets ont été corrigés par la supplémentation en œstrogènes chez les rates Ovx. En outre, l'entraînement physique chez les rates Ovx a entraîné une réduction (P < 0.01) de l’accumulation de lipides dans le foie ainsi qu’une diminution (P < 0.01) de production de VLDL-TG accompagnée de celle de l'expression des gènes MTP et DGAT-2 (diacylglycérol acyltransférase-2). Des études récentes suggèrent que le peptide natriurétique auriculaire (ANP) devrait être au centre des intérêts des recherches sur les métabolismes énergétiques et lipidiques. Le ANP est relâché dans le plasma par les cellules cardiaques lorsque stimulée par l’oxytocine et exerce ses fonctions en se liant à son récepteur, le guanylyl cyclase-A (GC-A). En conséquence, dans la troisième étude, nous avons étudié les effets du blocage du système ocytocine-peptide natriurétique auriculaire (OT-ANP) en utilisant un antagoniste de l’ocytocine (OTA), sur l'expression des gènes guanylyl cyclase-A et certains marqueurs de l’inflammation dans le foie de rates Ovx. Nous avons observé une diminution (P < 0.05) de l’ARNm de la GC-A chez les rates Ovx et Sham sédentaires traitées avec l’OTA, tandis qu’une augmentation (P < 0.05) de l'expression de l’ARNm de la protéine C-réactive (CRP) hépatique a été notée chez ces animaux. L’exercice physique n'a apporté aucun changement sur l'expression hépatique de ces gènes que ce soit chez les rates Ovx ou Sham traitées avec l’OTA. En résumé, pour expliquer l’observation selon laquelle l’accumulation et la résorption de lipides dans le foie dépendent des mécanismes associés à des niveaux d’œstrogènes, nos résultats suggèrent que la diminution de production de VLDL-TG induite par une déficience en œstrogènes, pourrait être un des mecanismes responsables de l’accumulation de lipides dans le foie. L’exercice physique quant à lui diminue l'infiltration de lipides dans le foie ainsi que la production de VLDL-TG indépendamment des niveaux d'œstrogènes. En outre, l'expression des récepteurs de l’ANP a diminué par l'OTA chez les rates Ovx et Sham suggérant une action indirecte de l’ocytocine (OT) au niveau du foie indépendamment de la présence ou non des estrogènes. L’axe ocytocine-peptide natriurétique auriculaire, dans des conditions physiologiques normales, protègerait le foie contre l'inflammation à travers la modulation de l’expression de la GC-A.
Excessive accumulation of triglycerides (TGs) in hepatocytes is the characteristic of non-alcoholic hepatic steatosis (NAHS). NAHS occurs in various conditions in which abnormal fat metabolism is a common factor. The primary processes leading to lipid accumulation in the liver are not well understood. However, lipid in the form of TG accumulates within liver cells when mechanisms that promote their removal (by oxidation or secretion) cannot keep pace with mechanisms that promote lipid import or biosynthesis. Today, it is well accepted that estrogen deficiency is associated with the development of a state of hepatic steatosis. Although recent findings indicated the implication of ovarian hormones in liver lipid accumulation, mechanisms underlying this phenomenon need to be further investigated. Therefore, the three studies presented in this thesis have been conducted in ovariectomized (Ovx) rats, as animal model of post-menopausal women, to investigate the effects of estrogen withdrawal on liver fat metabolism and considering the effects of exercise training as a positive counteractive factor. It has been shown that exercise training can reduce liver fat accumulation in Ovx rats. In the first study, we showed that in high fat (HF) fed animals, liver TG content was higher (P < 0.01) in Ovx compared to Sham rats as soon as 5-week after the surgery. Switching from the HF to a standard (SD) diet resulted in a decrease in liver fat accumulation in Sham animals. However, 8 weeks after the diet switch, liver fat accumulation was as high in Ovx rats as those maintained on the HF diet. When liver TG content measured at week 13 was compared to initial pre-switching values (week 5), liver TG levels in Ovx animals were maintained at the same level independently of the diet switch, while in Sham rats switching to a SD diet reduced liver TG accumulation (P < 0.05). The same comparisons with plasma TG levels revealed an opposite relationship. These results may be taken as evidence that indeed liver fat resorption is hampered in the absence of estrogens. To go one step further, we used a physiological approach in our second study to investigate how estrogen deficiency affects liver fat accumulation putting an emphasis on the pathway of lipid exportation from the liver. Results of this study showed that estrogen withdrawal resulted in higher (P < 0.01) liver fat accumulation concomitantly with lower (P < 0.01) very low density lipoprotein-triglyceride (VLDL-TG) production and lower mRNA and protein content of hepatic microsomal triglyceride transfer protein (MTP). All of these effects in Ovx rats were corrected with estrogen supplementation. Moreover, exercise training in Ovx rats reduced (P < 0.01) liver fat accumulation and further reduced (P < 0.01) hepatic VLDL-TG production along with gene expression of MTP and diacylglycerol acyltransferase-2 (DGAT-2). A recent growing body of literature suggests that atrial natriuretic peptide (ANP) hormone should be the interest of new investigations in the field of energy and lipid metabolism. ANP is released from the heart into plasma by oxytocin (OT) stimulation and exerts its biological action by binding to its receptor, guanylyl cyclase-A (GC-A: ANP receptor). Therefore, in the third study, we investigated the effects of blocking the oxytocin-atrial natriuretic peptide (OT-ANP) system, using an OT antagonist (OTA), on the gene expression of hepatic guanylyl cyclase-A and some inflammatory markers in the liver of Ovx rats. Hepatic GC-A mRNAs were decreased (P < 0.05) in Ovx and Sham OTA-treated rats in the sedentary state, contrary to hepatic C-reactive protein (CRP) mRNA expression that increased in these animals (P < 0.05). Exercise training had no effect on hepatic expression of these genes in both Sham and Ovx rats receiving OTA. Overall, our results point to the interpretation that hepatic fat accumulation and resorption are dependent on mechanisms associated with a normal estrogenic status; indicating that a decrease in VLDL-TG production might be a contributing factor responsible for the hepatic fat accumulation induced by estrogen deficiency. Exercise training lowers liver fat accretion and VLDL-TG production independently of the estrogen levels. Moreover, hepatic expression of ANP receptors is decreased by OTA in both Sham and Ovx rats suggesting an indirect action of the OT system on the liver independently of the estrogenic status of the animal. Oxytocin-atrial natriuretic peptide axis may contribute to the protection of hepatic tissue under normal physiological conditions such as reducing inflammatory markers within the hepatocytes by exerting its role through guanylyl cyclase-A expression.