Academic literature on the topic 'Hormones peptidiques – Biosynthèse'

L'amidation est une des etapes du processus de maturation post-traductionnelle des hormones polypeptidiques. Elle est catalysee par la peptidylglycine -amidating monooxygenase (pam) qui reconnait des propeptides presentant une glycine carboxyterminale pour former un peptide carboxyamide biologiquement actif. Dans la premiere partie de cette these, nous avons caracterise une activite pam dans une tumeur pancreatique humaine secretant du vip, et dans une lignee d'insulinome de rat (rin-5f). Les 2 activites enzymatiques presentent des proprietes biochimiques analogues, mais different par leurs parametres cinetiques et leur poids moleculaire. Dans la deuxieme partie, nous montrons: i) que l'expression des arnm de la pam dans le pancreas de rat presente des variations au cours du developpement du pancreas avec des taux eleves au 18eme jour de gestation et un taux maximal a la naissance; ii) que dans le pancreas de rat in vitro, parmi les effecteurs testes (triiodothyronine, corticosterone, progesterone, glucose) aucun ne fait varier l'expression des arn de la pam. Cependant, la triiodothyronine a un effet negatif a la fois sur l'immunoreactivite et sur l'expression des arn de la trh et nous conduit a proposer certaines hypotheses

Le present travail est consacre au developpement, en collaboration avec les laboratoires fournier, de sondes non-peptidiques originales tritiees et/ou photoactivables dans le cadre de l'etude cartographique du recepteur at#1 de l'angiotensine 2, plus particulierement de l'analyse topographique de son interaction avec les ligands peptidiques et non-peptidiques. La strategie suivie pour leur conception est: 1) synthese et etude des proprietes de liaison de 2 non-peptides trities: (#3h)lf7-0156 et (#3h)lf8-0129 qui ont de plus permis d'evaluer l'incidence de mutations du recepteur sur la reconnaissance des non-peptides, 2) synthese des 2 derives photoactivables non-radioactifs, susceptibles de marquer des zones distinctes du recepteur, demonstration de la superiorite de l'un des 2, lf13-0023, a marquer irreversiblement les sites recepteurs, 3) synthese de la sonde photoactivable tritiee (#3h)lf13-0023, demonstration de son aptitude a photomarquer le recepteur at#1 recombinant exprime dans les cellules cho, avec un rendement eleve (10%). Sont proposees des etapes de purification partielle des complexes covalents non-peptide/recepteur qui permettront leur fragmentation et la comparaison des profils de fragmentation avec ceux obtenus avec des sondes peptidiques ; la perspective est d'obtenir des informations directes en faveur ou a l'encontre de points d'interaction communs du recepteur avec les 2 types de ligands. Il est prevu d'integrer les donnees biochimiques et de mutagenese dirigee dans l'elaboration de modeles d'interaction des ligands peptidiques et non-peptidiques avec le recepteur at#1

La synthèse des stéroïdes-sulfates est catalysée par une hydroxystéroïde sulfotransférase (HST) qui transfère le radical sulfate du 3'-phosphoadénosine 5'-phosphosulfate (PAPS) sur les stéroïdes non conjugués. Nous avons tout d'abord établi par immunohistochimie la distribution de l'HST dans le système nerveux central (SNC) de la grenouille. Grâce à la technique de pulse-chase, nous avons démontré que le cerveau de grenouille est capable, en présence de paps marqué au 35s, de convertir la prégnènolone ( 5p) et la déhydroépiandrostérone (DHEA) respectivement en sulfates de 5P(delta5PS) et de DHEA (DHEAS). Des dosages radioimmunologiques réalisés sur des extraits tissulaires ont mis en évidence des taux élevés de DHEAS dans le SNC, suggérant la synthèse des neurostéroïdes-sulfates in vivo chez les amphibiens. L'aire préoptique antérieure et le noyau magnocellulaire dorsal, contenant des neurones à HST, sont riches en NPY, lequel est impliqué, comme la delta5PS et la DHEAS, dans le contrôle de l'anxiété et de la prise alimentaire. Une étude par double marquage en microscopie confocale à balayage laser a révélé que des fibres NPY ergiques passent au voisinage des corps cellulaires HST-positifs. Nous avons montré, par la technique de pulse-chase, que le NPY réduit de façon dose-dépendante la biosynthèse de delta5PS et de DHEAS dans l'hypothalamus. Par la suite, nous avons localisé par hybridation in situ les ARNm codant les récepteurs Y1 et Y5 dans l'aire préoptique antérieure et le noyau magnocellulaire dorsal. Par ailleurs, l'effet du NPY sur la formation de delta5PS et de DHEAS est mimé par des agonistes des récepteurs Y1 et bloqué par un antagoniste des récepteurs Y1. L'ensemble de ces travaux constitue la première cartographie de l'HST dans le SNC des vertébrés et révèle l'existence d'une synthèse de neurostéroïdes-sulfates chez les amphibiens. Nos résultats démontrent également que le NPY inhibe l'activité de l'HST dans le SNC des vertébrés en agissant sur ses récepteurs Y1.

Ce travail de thèse a consisté à synthétiser des peptides à visée antidiabétiques, à déterminer leur structure tridimensionnelle et à étudier leur activité biologique lors de tests biologiques in vitro et in vivo. Les peptides étudiés dérivent soit des chaînes A et B isolées de l’insuline humaine soit de peptides décrits dans la littérature comme ayant une activité biologique. L’effet pharmacologique des peptides a été testé sur des modèles cellulaires et sur un modèle animal. Les études structurales réalisées par RMN, DC et dynamique moléculaire ont permis de proposer un modèle tridimensionnel pour deux de ces peptides. Une approche séquentielle impliquant la reconstruction du pont disulfure à partir du dérivé dithiol a été suivie lors de simulations de l’ordre de la microseconde. Enfin, une méthode générale d’étude de l’impacte de pont disulfure intramoléculaire dans le repliement des peptides a été mise au point par dynamique moléculaire en présence de solvant implicite « GB »
This work of thesis consisted in synthesizing antidiabetic peptides with aiming, determining their three-dimensional structure and studying their biological activity during in vitro and in vivo biological essay. Studied peptides derive either from chains A and B isolated from human peptide insulin or described in the literature like having a biological activity. The pharmacological effect of peptides was tested on cellular models and an animal model. The structural studies carried out by NMR, CD and molecular dynamics made it possible to propose a three-dimensional model for two of these peptides. A sequential approach implying the rebuilding of the disulphide bridge starting from derived the sulfhydryl was followed during simulations of about a microsecond. Lastly, a general method of impact study intramolecular disulphide bridge in the folding of peptides was developed by molecular dynamics in the presence of implicit solvent "GB"