Academic literature on the topic 'Hormones peptidiques – Récepteurs'

Des facteurs seriques sont responsables de la diminution d'expression des recepteurs vip a la surface des cellules humaines igr39 derivees d'un melanome. Les recepteurs igf sont, comme le recepteur vip, surexprimes lorsque les cellules igr39 sont cultivees en absence de serum de veau ftal. Les proteines de liaison des igfs (les igfbps) secretees par les cellules sont elles aussi quantitativement alterees en fonction des conditions de culture. D'autre part, nous montrons que la deglycosylation partielle du recepteur vip par la pngase f en conditions natives conduit a la suppression d'une chaine oligosaccharidique, ce qui ne modifie ni la dynamique d'internalisation et d'expression du recepteur, ni les parametres de liaison du vip, et ne constitue pas un signal suffisant pour induire la degradation du recepteur. En revanche, la desialylation du recepteur vip par la neuraminidase conduit a la diminution de son affinite pour le ligand et de sa capacite a activer l'adenylate cyclase en reponse au vip. La mesure du temps de reapparition de recepteurs vip entierement glycosyles apres leur deglycosylation partielle nous a permis d'obtenir une approximation du temps de biosynthese de ce recepteur sur les cellules igr39: la moitie des recepteurs sont completement glycosyles en 9 a 12 heures

L'hormone de mélano-concentration (MCH) a été isolée initialement chez les poissons téléostéens sous la forme d'un peptide de 17 acides aminés. Chez les mammifères c'est un puissant neuropeptide orexigénique produit par des neurones hypothalamiques régulant la prise alimentaire. En 1999 et 2001, deux récepteurs de la MCH furent découverts, MCH-R1 et -R2, ils sont couplés aux protéines G et exprimés dans le cerveau. Le but de cette thèse était d'identifier les sites de liaison ou les récepteurs pour la MCH dans différentes lignées cellulaires et tissus. Pour cela, des radioligands stables et efficaces (125I-[Phe13, Tyr19]-MCH, 125I-[DPhe13, Tyr19]-MCH et [125I]-MCH) ont été développés et utilisés. De nombreuses lignées et tissus ont été testés dont 5 lignées de neuroblastome humain et 2 lignées murines, des melanocytes primaires humains, des neurones embryonnaires hypothalamiques de rat, des coupes de cerveau de rat et des membranes de cerveau de porc. 125I-[Phe13, Tyr19]-MCH et 125I-[DPhe13, Tyr19]-MCH ont mis en évidence des sites de liaison dans le mélanome murin mais se sont révélés inadéquats pour trouver le MCH-R1 ou -R2. Nous avons alors effectué avec [125I]-MCH une étude de structure-activité du MCH-R1 avec 12 analogues de la MCH, l'étude fonctionnelle utilisant le FLIPR. Pour 9 analogues il y a eu une bonne corrélation entre les IC50s et les EC50s. Nous avons aussi testé par RT-PCR des lignées pour l'expression des MCH-R et nous en avons trouvé une exprimant le MCH-R1 et produisant de surcroit la MCH:<br>Melanin-concentrating hormone (MCH), initially isolated from teleost fish as a 17-amino acid peptide, is a potent orexigenic neuropeptide in mammals where it is produced by hypothalamic neurons and participates in the regulation of food intake. In 1999 and 2001, two receptor subtypes for MCH were discovered, MCH-R1 and -R2. They are coupled to G-proteins and are mainly expressed in the brain. The purpose of this thesis was to identify MCH binding sites or receptors in various cell lines and tissues. To this end, stable and potent MCH radioligands were developed and applied: 125I-[Phe13, Tyr19]-MCH, 125I-[DPhe13, Tyr19]-MCH, and [125I]-MCH. Many cell lines and tissues were screened, amongst which 5 human neuroblastoma cell lines, 2 murine neuroblastoma cell lines, human primary melanocytes, mouse brain tumour, rat embryonic hypothalamic cells, rat brain cryostat sections and porcine brain membranes. Even though 125I-[Phe13, Tyr19]-MCH and 125I-[DPhe13, Tyr19]-MCH revealed specific binding sites in mouse melanoma cells, they were not suitable to find MCH-R1 or -R2. We therefore used [125I]-MCH to perform a MCH-R1 structure-activity study with 12 MCH analogues, which was extended to a functional study using the FLIPR assay. For 9 analogues, there was a good correlation between IC50s and EC50s. We also screened different cell lines for MCH-R expression by RT-PCR and identified a promising MCH-R1-expressing cell line, which also produces MCH: Kelly human neuroblastoma cells. MCH binding sites could be visualised on 2-D gels following crosslinking with MCH radioligand. In conclusion,these studies demonstrated that MCH receptor subtypes expressed on different cell lines display different ligand recognition profiles and hence require different types of radioligand for binding analysis. The human Kelly cell line appears to be an interesting model for analysis of novel MCH ligands as it endogenously expresses MCH-R

La caracterisation moleculaire du recepteur vip dans de nombreux systemes revele une grande variabilite dans les masses moleculaires apparentes. Cette hererogeneite moleculaire peut resulter soit de differences dans la longueur de la chaine peptidique, soit de differences dans la glycosylation. Pour discriminer entre ces deux hypotheses, nous avons entrepris l'etude de la structure de la partie oligosaccharidique du recepteur vip provenant de diverses especes (homme, rat et porc) et tissus (melanome, foie, jejunum et pancreas). Les masses moleculaires apparentes des complexes vip-recepteur controles s'echelonnent de 51,8 kda (foie de rat) a 71,2 kda (pancreas humain), la variation etant de 19,4 kda. Apres traitement par la pngase f, endoglycosidase qui clive la totalite des chaines oligosaccharidiques, la difference n'est plus que de 3,5 kda; les masses moleculaires se situent toutes dans la zone des 40 a 44 kda. Ceci indique que les recepteurs vip provenant de sources diverses ont des corps peptidiques de taille similaire et portent des quantites variables de sucres variant de 11,4 a 28,9 kda. En plus de l'heterogeneite moleculaire, il existe une heterogeneite dans la nature des residus glucidiques portes par les chaines glycanniques de ces differents recepteurs. Ces derniers ont une sensibilite variable a la neuraminidase et l'endo-b-galactosidase; aucun des recepteurs n'est sensible a l'a-mannosidase et l'endoglycosidase h. En outre, le recepteur vip d'origine humaine porte au moins trois chaines oligosaccharidiques par molecule de recepteur, exclusivement n-liees, tri-ou tetraantennees, majoritairement sialylees et parfois fucosylees

La neurotensine (NT) est un peptide de 13 acides aminés présent tant au niveau central que périphérique. La NT agit à la fois comme un neurotransmetteur, une neurohormone ou un facteur trophique. A ce jour, trois récepteurs de la NT ont été identifiés chez les mammifères et nommés NTR1, NTR2 et NTR3. Chez les vertébrés, la stéroi͏̈dogenèse surrénalienne est soumise à un contrôle multifactoriel qui met en jeu des facteurs humoraux, nerveux et paracrines. La présence de NT a été rapportée dans les cellules chromaffines et des fibres nerveuses de la glande surrénale chez diverses espèces de vertébrés, suggérant que la NT pourrait être un facteur neuroendocrinien de régulation de la stéroi͏̈dogenèse surrénalienne. Les objectifs de notre travail étaient donc i) de rechercher la présence de la NT dans la surrénale chez la grenouille verte Rana esculenta et l'homme, ii) de déterminer les effets potentiels de la NT sur la stéroi͏̈dogenèse surrénalienne et iii) de caractériser le récepteur impliqué dans les effets corticotropes du peptide. Nos résultats démontrent que la NT, localisée dans des fibres nerveuses parcourant la glande surrénale de la grenouille, stimule la sécrétion de corticostérone et d'aldostérone par l'intermédiaire de deux récepteurs qui s'apparentent aux NTR1 et NTR2 décrits chez les mammifères. Nous avons également démontré que la [DTyr11]NT stimule l'activité sécrétrice des cellules corticosurrénaliennes via l'activation d'un récepteur différent de ceux de la NT. Enfin, certains fragments issus de la NT comme la NT1-11 augmentent la production de corticostérone et d'aldostérone par le biais d'un quatrième type de récepteur. Chez l'homme, la NT1-11 inhibe la sécrétion basale de cortisol par des cellules corticosurrénaliennes via l'activation d'un récepteur capable de lier également la NT. Ces données suggèrent pour la première fois l'existence de deux sous-types de récepteurs de la NT, différents des NTR1 et NTR2 de mammifères, exprimés au niveau surrénalien<br>Neurotensin (NT) is a tridecapeptide which acts as a neurotransmitter and/or a neuromodulator in the central nervous system and displays a wide spectrum of biological effects. NT is also abundant in the periphery where it is thought to function as a neurohormone. In mammals, the effects of NT are mediated by three types of receptors i. E. NTR1, NTR2 and NTR3. In vertebrates, the secretory activity of adrenocortical cells is under multifactorial control. Beside the humoral regulation there is clear evidence that various factors released by nerve endings, chromaffin cells or endothelial cells can also participate in the regulation of the activity of adrenocortical cells. The presence of NT has been reported in chromaffin cells and nerve fibers located in the adrenal gland of various vertebrate species, suggesting that NT could act as a neuroendocrine factor involved in the regulation of steroidogenesis. The aim of the present study was therefore three-fold i) to examine the presence of NT in the frog (Rana esculenta) and human adrenal gland, ii) to determine the potential effects of NT on adrenal steroidogenesis in both species, and iii) to characterize the receptor(s) involved in the corticotropic effect of the peptide. Our results demonstrate that NT, located in nerve fibers innervating the adrenal gland of amphibians, may stimulate corticosteroid secretion through two receptors which exhibit similarities with mammalian NTR1 and NTR2. We have also shown that [DTyr11]NT increases corticosteroid secretion through interaction with a third type of receptor which is not activated by NT. Finally, the N-terminal NT fragments are able to stimulate corticosterone and aldosterone secretion though activation of a fourth type of receptor. In human, NT1-11 inhibits cortisol secretion via a receptor which also binds NT. These data suggest for the first time the occurrence of two additionnal NT receptor subtypes, besides mammalian NTR1 and NTR2, in the adrenal cortex

Ce travail est consacre a la synthese et a l'etude pharmacologique d'analogues peptidiques et pseudopeptidiques de la bombesine. Une etude sur les relations structure-activite de la bombesine (bn) a ete developpee. Dans un premier temps, nous avons synthetise des analogues modifies au niveau du nonapeptide c-terminal par substitution d'aminoacides et introduction de liaisons pseudopeptidiques. L'introduction de liaisons hydroxyamides au niveau de la partie c-terminale a conduit a de puissants antagonistes sur la secretion d'amylase pancreatique induite par la bombesine et sur la proliferation cellulaire des fibroblastes swiss 3t3 de souris. Dans un deuxieme temps, nous avons synthetise des analogues cycliques et dimerises de la bombesine. La derniere partie de ce travail a ete la synthese d'analogues de la bombesine etendue du cote c-terminal par un residu glycine. Certains de ces analogues sont de puissants agonistes sur la proliferation cellulaire des fibroblastes swiss 3t3 de souris. Ces composes devraient nous permettre de savoir s'il existe des recepteurs specifiques de ces formes glycine etendue et si ces recepteurs sont impliques dans la proliferation cellulaire des fibroblastes swiss 3t3 de souris

Afin de permettre une meilleure compréhension du contrôle (neuro)endocrine de la reproduction des mollusques bivalves, des récepteurs couplés aux protéines G et des (neuro)peptides ont été recherchés chez Crassostrea gigas. Plusieurs variants transcriptionnels issus d'un gène unique codant les récepteurs Cg-GnRH-R, Cg-GnRH-RII et Cg-GnRH-RIII orthologues des récepteurs de type GnRH ont été caractérisés. La structure de ces récepteurs indique que Cg-GnRH-R d'une part et Cg-GnRH-RII/Cg-GnRH-RIII d'autre part constituent deux sous-types de récepteurs en terme de liaison du ligand. L'étude de l'expression de ces transcrits montre une régulation tissulaire spécifique de l'épissage alternatif de l'ARN pré-messager. Les transcrits codant Cg-GnRH-R s'expriment spécifiquement dans la gonade et ceux codant Cg-GnRH-RII et Cg-GnRH-RIII sont observés dans les tissus reproducteurs et non reproducteurs. Ainsi, le ligand lié par Cg-GnRH-R serait spécifiquement impliqué dans la régulation de la gamétogenèse et celui lié par Cg-GnRH-RII ou Cg-GnRH-RIII contrôlerait des fonctions reproductrices et non reproductrices. Dans la gonade, l'expression des différents ARNm est plus forte chez le mâle que la femelle et ce, à tous les stades de la gamétogenèse. Les mécanismes de contrôle de la reproduction entre mâles et femelles feraient donc intervenir des modalités distinctes notamment par l'expression différentielle de cette famille de récepteurs. Bien que la parenté évolutive de ces récepteurs avec les récepteurs de type GnRH ne signifie pas que leurs ligands soient de la GnRH, il est intéressant de constater que par immunohistochimie un peptide apparenté à la GnRH a été détecté chez C. Gigas.

Le present travail est consacre au developpement, en collaboration avec les laboratoires fournier, de sondes non-peptidiques originales tritiees et/ou photoactivables dans le cadre de l'etude cartographique du recepteur at#1 de l'angiotensine 2, plus particulierement de l'analyse topographique de son interaction avec les ligands peptidiques et non-peptidiques. La strategie suivie pour leur conception est: 1) synthese et etude des proprietes de liaison de 2 non-peptides trities: (#3h)lf7-0156 et (#3h)lf8-0129 qui ont de plus permis d'evaluer l'incidence de mutations du recepteur sur la reconnaissance des non-peptides, 2) synthese des 2 derives photoactivables non-radioactifs, susceptibles de marquer des zones distinctes du recepteur, demonstration de la superiorite de l'un des 2, lf13-0023, a marquer irreversiblement les sites recepteurs, 3) synthese de la sonde photoactivable tritiee (#3h)lf13-0023, demonstration de son aptitude a photomarquer le recepteur at#1 recombinant exprime dans les cellules cho, avec un rendement eleve (10%). Sont proposees des etapes de purification partielle des complexes covalents non-peptide/recepteur qui permettront leur fragmentation et la comparaison des profils de fragmentation avec ceux obtenus avec des sondes peptidiques ; la perspective est d'obtenir des informations directes en faveur ou a l'encontre de points d'interaction communs du recepteur avec les 2 types de ligands. Il est prevu d'integrer les donnees biochimiques et de mutagenese dirigee dans l'elaboration de modeles d'interaction des ligands peptidiques et non-peptidiques avec le recepteur at#1