Academic literature on the topic 'Immunomicroscopie electronique'

Des anticorps monoclonaux diriges contre l'hemocyanine du scorpion androctonus australis ont ete prepares dans le but de localiser les epitopes de l'hemocyanine. La methode de localisation des epitopes utilisee dans ce travail est l'immunomicroscopie electronique. Cette methode consiste a marquer l'antigene, ici l'hemocyanine, par un anticorps monoclonal et a purifier les immuncomplexes solubles. La position de l'epitope est alors appreciee sur le contour de la molecule par une observation directe au microscope electronique. Cet examen peut etre complete par une observation directe d'images par analyse de correspondance. L'architecture et les diverses projections de l'edifice antigenique etant bien connues, un modele en accord avec l'ensemble des donnees structurales disponibles a ete utilise pour l'interpretation des micrographies. Sept anticorps monoclonaux ont ainsi ete etudies. La methode a permis a plusieurs reprises de circonscrire directement un epitope dans une region d'un domaine de sous-unite contenant un nombre reduit de residus d'acides amines. Elle a egalement permis de montrer le non-recouvrement de plusieurs epitopes. Enfin, des flexibilites segmentaire et rotationnelle des bras fab des immunoglobulines g ont ete mises en evidence

Les techniques d'analyse d'images et de reconstruction tridimensionnelle de particules isolees observees au microscope electronique moleculaire, sont presentees dans une premiere partie. La digitalisation des images d'immunomicroscopie electronique, l'alignement par autocorrelation et correlation croisee des images d'antigenes marques par des anticorps monoclonaux, l'analyse des correspondances et la classification automatique y sont decrits en detail. Dans une deuxieme partie, les resultats experimentaux sont presentes: (i) la cartographie de treize epitopes a la surface de la sous-unite aa6 de l'hemocyanine du scorpion (androctonus australis), revelant la presence de 4 zones immunogenes distinctes; (ii) la reconstruction tridimensionnelle de l'hemocyanine native; (iii) la localisation intramoleculaire des proteases sequestrees par l'alpha 2-macroglobuline. Bien que presentant plus de difficultes techniques, la localisation directe des epitopes par reconstruction tridimensionnelle d'un immuncomplexe semble realisable

Durant ce memoire, l'etude structurale de sites proteiques a ete abordee par deux approches basees sur l'utilisation de la microscopie electronique. La premiere de ces approches concerne la localisation d'epitopes du recepteur nicotinique de l'acetylcholine de part et d'autre de la membrane plasmique. Une methode combinant les dosages de type elisa et l'immunomicroscopie electronique a ete developpee a partir de fragments de membranes de torpedo marmorata. Nous avons montre que la liaison d'anticorps diriges contre un epitope extracellulaire s'effectue avec une stchiometrie proche de l'unite. La liaison de ces anticorps aux membranes est visualisable par microscopie electronique, dans les conditions de concentration definies par elisa. D'autre part, la liaison d'anticorps diriges contre un epitope intracellulaire a ete quantifiee et visualisee apres permeabilisation des vesicules en presence d'ions zinc et de sucrose. Le protocole ainsi developpe est generalisable a d'autres proteines membranaires, a condition que des anticorps sequentiels de forte affinite et de specificite connue soient disponibles. Dans une seconde partie, nous avons caracterise les differentes etapes menant a la localisation de sites proteiques au moyen d'une sonde de petite taille, dense aux electrons, constituee d'un ensemble de onze atomes d'or. La toxine du cholera a ete utilisee comme systeme modele en raison de la presence d'un seul pont disulfure au niveau duquel la sonde peut etre couplee, et de la possibilite d'obtention de cristaux bidimensionnels adaptes aux methodes d'analyse d'images. La position de la sonde au sein de la proteine a ete determinee par analyse d'images de specimens colores negativement. Une etude en cryomicroscopie electronique est en cours. L'objectif est d'utiliser cette sonde pour etudier la structure de sites pharmacologiques et immunologiques du recepteur de l'acetylcholine, en couplant la sonde a des marqueurs specifiques tels qu'une alpha-toxine ou des fragments fab