Dissertations / Theses on the topic 'Immunotransfet'

Les autoanticorps seriques de classe g, dits anti-keratines, qui marquent en immunofluorescence indirecte (ifi) la couche cornee de l'epithelium sophagien de rat et de l'epiderme humain sont, de par leur specificite pour la polyarthrite rhumatoide (pr) et leur association a ses formes les plus severes et/ou actives, d'un grand interet diagnostique et pronostique. La determination en ifi du profil isotypique g de ces autoanticorps anti-stratum corneum (asc) montre que 58% des serums presentent des igg#1 isolees ou associees a des igg#4. La predominance des igg#1 suggere la nature proteique du(des) antigene(s) reconnu(s). La caracterisation moleculaire des antigenes epitheliaux humains et murins reconnus par les asc a ete realisee, apres divers types d'electrophoreses, par immunotransfert d'extraits tissulaires en tampons de faibles forces ioniques avec des serums rhumatoides et des serums temoins. Dans un extrait epidermique humain, les serums rhumatoides reconnaissent specifiquement une proteine de 37-40 kd et de pi variant de 5,8 a 7,2. Plusieurs caracteristiques antigeniques et biochimiques et cet antigene ont permis son identification a un variant acide de la filaggrine, elle-meme reconnue specifiquement par les serums rhumatoides. Dans un extrait d'epithelium sophagien de rat, les asc definissent trois proteines a, b et c. Les proteines a (210 kd) et b (120-90 kd) ont des pi variant de 5,8 a 8,5. La proteine c a des pi repartis entre 4,5 et 7,2 tandis que sa masse molaire apparente decroit de 130 a 60 kd. Leurs proprietes antigeniques et biochimiques differencient ces trois proteines des cytokeratines epitheliales sophagiennes. Elles sont probablement apparentees a la (pro)filaggrine. Les performances diagnostiques d'un test par immunotransfert a partir des antigenes sophagiens murins sont respectivement comparables ou superieures a celles de l'ifi selon qu'est consideree la reactivite a l'encontre des proteines a ou b ou celle a l'encontre de la proteine c. Cet immunotransfert apparait donc adapte au diagnostic de la pr

Des anticorps anti-CE (AECA) ont été identifiés dans un large éventail de maladies auto-immunes et/ou inflammatoires systémiques, en particulier dans la sclérodermie systémique (ScS), dans l’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) idiopathique (HTAPi) et dans les vascularites systémiques, notamment dans l’artérite à cellules géantes (maladie de Horton). Ces anticorps peuvent jouer un rôle pathogène en activant les CE et en entrainant leur apoptose en particulier au cours de la ScS. Dans la première partie de ce travail, nous nous sommes intéressés aux cibles des AECA. A l’aide d’une technique d’immunoblot en 2 dimensions utilisant des extraits protéiques totaux de CE de veine ombilicale humaine normale (HUVEC) suivie d’une analyse en spectrométrie de masse, nous avons étudié et identifié les cibles des AECA naturels contenus dans des préparations d’IgG humaines normales, les immunoglobulines intraveineuses (IVIg). De façon intéressante, très peu de ces antigènes avaient été précédemment rapportés comme étant des cibles des IgG auto-réactives naturelles et/ou contenues dans les IVIg. Dans un second temps, nous avons étudié les profils de réactivité des IgG sériques de patients ayant une ScS avec ou sans HTAP, une HTAPi ou une maladie de Horton et nous avons pu identifier des cibles antigéniques des AECA spécifiques de chacune de ces maladies. Parmi les cibles antigéniques les plus pertinentes identifiées dans chaque pathologie on trouve: la phosphoglycérate mutase 1 et la vimentine dans la ScS, les peroxyredoxines 1 et 2 dans la ScS avec HTAP, la profiline-1 dans l’HTAPi et la lamine A/C et la vinculine dans la maladie de Horton. Dans une deuxième partie de ce travail, nous avons étudié les protéomes de différents types de CE afin de déterminer si l’origine des CE influence leur reconnaissance par les AECA. Nous avons utilisé la technique «2-Dimensional Differential In Gel Electrophoresis» (2D-DIGE) pour comparer les protéomes de 4 donneurs caucasiens différents d’HUVEC et de cellules de microcirculation de peau (HMVEC-D) et de poumon (HMVEC-P) et nous avons trouvé des différences importantes d’expression des protéines entre les HUVEC et les CE de microcirculation. Dix-sept et 114 protéines avaient une expression différente d’un rapport d’au moins 1,5 entre les HUVEC et les HMVEC-P et entre les HUVEC et les HMVEC-D, respectivement. Un grand nombre de ces protéines était impliqué dans la prolifération et la survie des CE. En se servant du logiciel «Ingenuity» et des réseaux d’interaction de protéines qu’il a générés à partir des protéines différemment exprimées entre les HUVEC et les HMVEC-D, nous avons trouvé que 57% de ces protéines ont la capacité d’interagir avec l’acide rétinoïque et/ou avec le Transforming growth factor-beta, ce qui suggère une réponse différente de ces 2 types de CE en présence de chacune de ces molécules. Puis, en utilisant une technique d’immunoblot quantitatif en une dimension nous avons trouvé que les profils de réactivité des IgG sériques de patients atteints de ScS diffèrent selon le type de CE utilisé, HUVEC ou HMVEC-D. Au total, nous avons identifié des nouvelles cibles antigéniques des AECA dans la ScS, l’HTAPi et la maladie de Horton, la plupart d’entre elles étant impliquée dans le cycle et la survie cellulaires. Nous avons de plus démontré que les protéomes des CE de macrocirculation et de microcirculation diffèrent significativement et influencent la fonction et la reconnaissance immune des CE<br>The endothelium is composed of a thin layer of cells that lines the interior surface of blood vessels, thus forming an interface between circulating blood in the lumen and the rest of the vessel wall. These cells, named endothelial cells (EC), line the entire circulatory system, from the heart to the smallest capillaries. EC differ, depending on the vessel type where they are located. Anti-EC antibodies (AECA) were identified in a large panel of systemic auto-immune and/or inflammatory diseases, particularly in systemic lupus erythematosus, anti-phospholipid syndrome, systemic sclerosis (SSc), idiopathic pulmonary arterial hypertension (iPAH) and systemic vasculitis. These antibodies are able to activate EC and induce apoptosis, particularly in SSc. In the first part of this work, we were interested in the identification of target antigens of AECA in vascular inflammatory or autoimmune diseases. Using a 2-dimensional immunoblotting technique on total protein extracts of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) followed by mass spectrometry, we identified target antigens of AECA in normal human polyclonal IgG preparations, intravenous immunoglobulins (IVIg). Interestingly, very few of these antigens had previously been reported as targets of normal human self-reactive IgG and or detected in IVIg preparations. In addition, we investigated the reactivity profiles of serum IgG of patients with SSc with or without PAH, with iPAH or with giant cell arteritis (GCA) and we were able to identify specific target antigens of AECA in each of these conditions. Thus, we identified phosphoglycerate mutase 1 and vimentin in patients with SSc, peroxyredoxins 1 and 2 in SSc patients with PAH, profilin-1 in patients with iPAH and lamin A/C and vinculin in patients with GCA. In the second part of this work, we studied the proteomes of different types of EC to determine if the EC type can influence the recognition of these cells by AECA. We used the “2 Dimensional-Differential In Gel Electrophoresis” (2D-DIGE) to compare proteomes of 4 different caucasian donors HUVEC, pulmonary human microvascular EC (HMVEC-P) and dermal human microvascular EC (HMVEC-D) and found important differences between HUVEC and microvascular EC. Seventeen and 114 proteins showed at least a 1. 5 fold change expression between HUVEC and HMVEC-P and between HUVEC and HMVEC-D, respectively. A number of these proteins were involved in the proliferation and survival of EC. “Ingenuity” analysis showed that 57% of the 114 proteins differentially expressed between HUVEC and HMVEC-D were involved in susceptibility to retinoic acid and/or transforming growth factor-beta, which suggests that these 2 types of EC respond in a different manner in the presence of each of these molecules. Then, using a one-dimensional immunoblotting technique on HUVEC and HMVEC-D protein extracts, we found that reactivity profiles of serum IgG of patients with SSc differ between HUVEC and HMVEC-D. Overall, we were able to identify new target antigens of AECA in patients with SSc, iPAH or GCA. Most of these target antigens are involved in cell cycle and survival. However, the pathogenic role of these AECA needs further investigations. In addition, we have observed important differences between proteomes of macrovascular and microvascular EC and provided evidence that these differences influence EC function and immune recognition

La présence de Leishmania infantum et Toxoplasma gondii en Provence Alpes Côte d’Azur (PACA) est connue depuis plus d’un siècle. Depuis, leur distribution évolue, l'environnement change, les populations touchées se déplacent, et de nouveaux outils techniques et statistiques permettent de mieux les saisir. Une réactualisation de nos connaissances paraissait donc nécessaire. Nous avons d’abord mené une revue de la littérature sur les leishmanioses viscérales. Ensuite, nous avons montré que la leishmaniose muqueuse à L. infantum est marquée par un probable sous-diagnostic, un caractère peu invasif localement et un risque de viscéralisation significatif. Puis une étude éco-épidémiologique a montré que les deux foyers de leishmaniose en PACA impliquaient des biotopes différents, avec une transmission en zone urbanisée dans le foyer marseillais. Enfin, une étude entomologique a confirmé cette transmission urbaine.Nous avons ensuite étudié la toxoplasmose congénitale. D’abord, nous avons essayé d'améliorer les performances techniques du dépistage en montrant l’intérêt pour le diagnostic moléculaire anténatal d’une extraction optimisée de l’ADN parasitaire sur liquide amniotique en utilisant NucliSENS easyMAG plutôt qu’une extraction manuelle utilisant QIAamp DNA minikit. Nous avons également montré l’apport pour le diagnostic néonatal de la toxoplasmose congénitale des IgM ciblant des antigènes de haut poids moléculaire lors de la comparaison des sera des mères et des enfants par Western Blot. Enfin, nous avons rapporté l’évolution sur 16 ans de 127 patients traités pour toxoplasmose congénitale et montré que 19% des enfants présentaient une choriorétinite au cours du suivi<br>The epidemiology of Leishmania infantum and Toxoplasma gondii in the Mediterranean basin has been studied for more than a century. Yet, our understanding of these diseases must be updated because ongoing environmental modifications impact their distribution, because affected population change, and because new technical and statistical tools have become available. We first reviewed scientific literature about visceral leishmaniasis. Then, we conducted a clinical study about autochtonous mucosal leishmaniasis due to L. infantum: we showed that this disease was characterized by underrecognition, low local invasiveness, and risk of visceral spreading. Afterwards, an eco-epidemiological study showed that foci of leishmanisis involved different biotopes in South-Eastern France: we specifically highlighted a urban transmission in the Marseille focus. Finally, an entomological survey confirmed this urban transmission and addressed cocirculation with phleboviruses.Then, we studied congenital toxoplasmosis. We contributed to improve technical performances of current screening strategy: we first showed that an optimized extraction of Toxoplasma DNA from amniotic fluid using NucliSENS easyMAG proved superior to manual extraction using QIAamp DNA minikit. Then, we found that comparison of mother and child antibodies that target high-molecular-mass Toxoplasma gondii antigens by immunoblotting improves neonatal diagnosis. Finally, we reported the 16-year long evolution of 127 children congenitally infected with T. gondii and showed that despite early treatment 19% of children finally developed chorioretinitis