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Dissertations / Theses on the topic 'Indirect ELISA'
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Paiva, Philipp Ricardo Scaciotte de Oliveira. "Avaliação clínica, sorológica e parasitológica de serpentes naturalmente infectadas com Cryptosporidium serpentis." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-11112013-104748/.
Full textAbstract:
A infecção por Cryptosporidium serpentis é uma das enfermidades mais importantes em répteis e se caracteriza por infecção crônica, clínica ou subclínica, e presença de gastrite hipertrófica severa, regurgitação, perda de peso progressiva, mortalidade eventual e eliminação contínua e intermitente de oocistos em fezes. O objetivo deste estudo foi padronizar um teste imunoenzimático (ELISA) indireto para detecção de anticorpos contra C. serpentis, e acompanhar a evolução clínica, parasitológica e da resposta imune humoral em serpentes naturalmente infectadas com C. serpentis. Foram utilizadas 21 serpentes naturalmente infectadas com C. serpentis e alojadas no Instituto Butantan, São Paulo, Brasil. As análises clínica e parasitológica foram realizadas em 21 serpentes por meio do registro diário dos sinais clínicos apresentados e pesquisa mensal da eliminação fecal de oocistos, em lâminas coradas pela técnica de Kinyoun. A avaliação sorológica foi realizada mensalmente utilizando o ELISA indireto para pesquisa de anticorpos anti-C. serpentis, pelo período de 12 meses em 8 animais, 8 meses em 3 animais e 6 meses em 1 animal. O ELISA indireto foi padronizado em bloco com utilização de antígeno produzido a partir de oocistos de C. serpentis, IgY de galinha anti-gamaglobulinas de serpentes e conjugado contendo IgG de coelho anti-IgY de galinha ligada à peroxidase. Os sintomas clínicos observados foram regurgitação, inapetência alimentar e perda de peso progressiva. A análise parasitológica revelou eliminação de quantidade variável de oocistos, de forma intermitente, em todas as serpentes, com positividade de 92% (116/126). O ELISA indireto apresentou positividade em 42,9% (54/126) das amostras. Foi observada resposta imune humoral na maioria dos animais, no entanto, com presença título flutuante de anticorpos e alternância de resultados positivos e negativos, em um mesmo animal.Infection by Cryptosporidium serpentis is one of the most important diseases in reptiles, and is characterized by chronic infection, clinical or subclinical, and the presence of severe hypertrophic gastritis, food regurgitation, progressive weight loss, mortality, and intermittent and continuous shedding of oocysts in feces. The objective of this study was to standardize an indirect enzyme immunoassay (ELISA) to detect antibodies against C. serpentis, and evaluate the clinical, parasitological and humoral immune response in snakes naturally infected with C. serpentis. Twenty one snakes naturally infected with C. serpentis and housed at the Instituto Butantan, São Paulo, Brazil, were used for accomplish clinical and parasitological analyzes of C. serpentis infection, through the daily record of clinical signs and monthly survey of fecal shedding of oocysts using Kinyoun staining technique. The serological evaluation was performed monthly using the indirect ELISA for the detection of anti-C. serpentis antibodies, for a period of 12 months in eight animals, eight months in three animals, and six months in one animal. The indirect ELISA was standardized on the basis of block titration using antigen produced from oocysts of C. serpentis, chicken IgY anti-snake gamaglobulins and a conjugate containing rabbit IgG anti-chicken IgY linked to peroxidase. Clinical symptoms consisted in food regurgitation, inappetence, and progressive weight loss. The parasitological analysis revealed intermittent fecal shedding of variable number of oocysts in all snakes, with positivity in 92% (116/126) of the samples. The indirect ELISA was positive in 42.9% (54/126) of the samples. Humoral immune response was observed in most animals, however, fluctuating antibodies levels with rotation of positive and negative results were observed in some snakes.
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Broglia, Alessandro. "Development of an indirect ELISA for the diagnosis of ovine dicrocoeliosis." [S.l.] : [s.n.], 2006. http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&doc_number=015565523&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA.
Full text
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Sonoda, Marcia Cristina. "Leishmaniose visceral canina: aspectos clínico-epidemiológicos de casos atendidos no período de 1997 a 2007, no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo." Universidade de São Paulo, 2007. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10136/tde-12122007-171752/.
Full textAbstract:
A leishmaniose é uma enfermidade zoonótica causada por protozoário pleomórfico do gênero Leishmania. Face a magnitude de alastramentro da doença, em especial no Brasil, foi realizado levantamento retrospectivo de casos de leishmaniose visceral canina diagnosticados (1997-2007) nos Serviços de Dermatologia e de Clínica Médica de cães e gatos do HOVET/USP. A amostragem compôs-se de 36 casos caninos, naturalmente infectados por Leishmania sp. O diagnóstico fora estabelecido pela caracterização propiciada pelos dados anamnésticos, de exames físico e dermatológico, complementados por exames hematológicos, bioquímicos e imagéticos, afora sorologia (ELISA e/ou RIFI), histopatologia de pele e/ou pela evidencialização do protozoário em exames parasitológicos de biópsia aspirativa de linfonodos e/ou medula óssea e pela técnica de imunoistoquímica. Os objetivos foram: evidenciar os aspectos clínico-dermatológicos de animais com diagnóstico estabelecido; caracterizar epidemiologicamente os casos, enfocando aspectos de aloctonia ou de autoctonia. Afora o de avaliar a aplicação da técnica de imunoistoquímica de pele visando o diagnóstico etiológico, comparando e relacionando-a aos exames complementares. Pôde-se concluir que: todos os casos foram alóctones; não houve predisposição por um determinado sexo; a faixa etária (52,8%) foi aquela dos 13 a 48 meses de vida, com maior acometimento de cães de raças definidas (Poodles e Labradores). Quanto aos municípios de origem: Ilha Bela e Ubatuba, um caso de cada, são considerados como silencioso não receptivo não vulnerável; Campinas, Campo Limpo Paulista, Holambra, São Roque, Sorocaba e Uberaba (um caso de cada) como silenciosos não receptivos vulneráveis. Os demais 28 cães do Estado de São Paulo originaram-se de municípios com transmissão: canina e humana (Araçatuba - três, Bauru - um), canina (Cotia - cinco, Embu - quatro) ou sob investigação (São Paulo - 11, Mogi das Cruzes - um). Já Portugal (um) e Minas Gerais (Belo Horizonte - dois) são locais caracterizados como de transmissão canina e humana. Pôde-se evidenciar deslocamentos breves ou longos, a 14 municípios paulistas (Araçatuba, Birigui, Caraguatatuba, Cotia, Eldorado, Embu e Embu Guaçu, Guarujá, Ilha Bela, Itapecerica da Serra, Peruíbe, Presidente Prudente, São Roque e São Paulo Capital) e cinco Estados (Maranhão, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro e Santa Catarina). De acordo com a classificação sintomatológica 50% eram oligossintomáticos, 47,2% sintomáticos e 2,8% assintomáticos. As alterações cutâneas se localizavam principalmente em região cefálica, membros e região abdominal, incluíam-se: rarefação pilosa e/ou alopecia (45,7%), escamas (40%), ulcerações (37,1%) e crostas (37,1%), sendo o prurido associado em 63,9% dos casos. Os achados clínicos mais freqüentes foram: linfoadenomegalia (74%), pirexia (44,4%), disorexia (40,7%), emagrecimento (29,7%), hepato (29,7%) e esplenomegalia (25,6%). As alterações laboratoriais foram: hiperproteinemia (56,5%), hipoalbuminemia (52,1%), anemia e trombocitopenia (34,8% cada). Correlacionando a técnica de imunoistoquímica com os exames de ELISA e RIFI, observou-se que a RIFI (100%) foi mais representativa dos casos positivos, em seguida ao exame de ELISA (87,5%) e ao de imunoistoquímica (37,5%). A técnica de imunoistoquímica, empregada em cortes histológicos de 12 (33%) permitiu evidenciar a presença do agente em sete (58,3%): dois (33,3%) oligossintomáticos e cinco (83,3%) sintomáticos. Desta forma, permite-se caracterizá-la como metodologia de inegável valia, superando os resultados positivos da histopatologia (30,8%).Leishmaniasis is a worldwide chronic zoonotic disease caused by pleimorphic protozoa of the genus Leishmania. The spread of the disease in Brazil lead to this retrospective survey of canine visceral leishmaniasis diagnosed (1997-2007) at the Service of Dermatology and Medical Clinics of the Small Animal Hospital-USP. We evaluated the records of 36 dogs naturally infected with Leishmania sp. Diagnosis included disease characterization during anamnesis, physical and dermatologic examination, hematology, biochemistry, imaging, serology (ELISA or RIFI), skin histopathology and/or agent isolation from aspiration biopsy samples of lymph nodes and/or bone marrow, and immunohistochemistry. In addition to epidemiologic characterization, we aimed to determine clinical and dermatologic aspects of canine leishmaniasis, and to compare diagnostic efficacy of skin immunohistochemistry, ELISA and RIFI. All cases were allochtonous without gender predilection, 52.8% were 13 to 48 months old; mostly Poodles (20.8%) and Labradors (20.8%). Regarding origin: Ilha Bela and Ubatuba (one case each) are classified as silent, non-receptive and not vulnerable; Campinas, Campo Limpo Paulista, Holambra, São Roque, Sorocaba and Uberaba (one case each) are classified as vulnerable. The remaining 28 cases from the State of São Paulo were located in cities with reported canine-human transmission (Araçatuba - three, Bauru - one), intra-canine transmission (Cotia - five, Embu - four) or cities under investigation (São Paulo - 11, Mogi das Cruzes - one). Portugal (one) and Minas Gerais (Belo Horizonte - two) reported canine-human transmission. Prior to the leishmaniasis development dogs remained for short or long periods in 14 cities in the State of São Paulo: Araçatuba, Birigui, Caraguatatuba, Cotia, Eldorado, Embu e Embu Guaçu, Guarujá, Ilha Bela, Itapecerica da Serra, Peruíbe, Presidente Prudente, São Roque and São Paulo Capital) and five other Brazilian States (Maranhão, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro and Santa Catarina. Most animals were oligosymptomatic (50%), 47.2% symptomatic and 2.8% asymptomatic. The majority of lesions was on the head, limbs and abdominal region, and included: hair loss and/or alopecia (45.7%), scales (40%), ulcers (37.1%), and crusts (37.1%), with 63,9% associated pruritus. The most common clinical findings were: lymph node enlargement (74%), pyrexia (44,4%), disorexia (40.7%), weight loss (29.7%) , liver (29.7%) and spleen (25.6%) enlargement. Most frequent alterations in laboratory exams were: hyperproteinemia (56.5%), hypoalbuminemia (52.1%), anemia, and thrombocytopenia (34.8% both). RIFI was more representative (100%) in positive cases, followed by ELISA (87.5%) and immunohistochemistry (37.5%). Immunohistochemistry was used in histology samples of 12 (33%) cases and allowed us to detect the agent in seven (58.3%) cases: two (33.3%) oligosymptomatic and five (83.3%) symptomatic. Thus, immunohistochemistry is a useful method, and more effective than histopathology (30.8%).
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Costa, Rebeka Cristine de Bastos. "Estudo epidemiológico da coinfecção por toxoplasma gondii e pelo vírus da imunodeficiência felina em gatos domésticos (felis catus) em Goiânia, Goiás." Universidade Federal de Goiás, 2015. http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/5115.
Full textAbstract:
Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-14T16:38:41Z
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Toxoplasmosis is a zoonotic disease in which mammals and birds can join the cycle as intermediate hosts, and felids as definitive hosts. Felis catus is recognized as the main responsible for the environmental contamination by Toxoplasma gondii oocysts. Serological diagnosis reveals little about the elimination of oocysts of T. gondii into the environment, principally by F. catus, which plays an important role in Public Health. There are few data on the frequency of feline toxoplasmosis in the State of Goiás. Therefore, the aim of this research was to evaluate the frequency of toxoplasmosis infection in domestic cats and their potential role in its transmission through the oocyst elimination into the environment and the respective factors associated with the infection. For this, we collected 102 blood samples and 98 fecal samples from 102 cats from Goiânia, State of Goiás. The animals were divided into groups according to age, gender and free access to the street or not. Indirect hemagglutination test was performed to determine the level of anti-T. gondii and indirect ELISA for the detection of infection by feline immunodeficiency virus (FIV). For search and detection of T. gondii oocysts elimination in the feces of cats we performed a centrifugal-flotation with Sheather's solution, subsequently we extracted DNA and used conventional PCR. The results showed that 18.63% (19/102) of the cats were positive for T. gondii, with titers ranging from 1:32 to 1: 8.192, while none of the fecal samples were positive in the PCR. The frequency of positive animals for FIV was 55.91% (52/93), and 18.28% (17/93) presented coinfection. By multivariate logistic regression we found the associated factors were the same for both infections, but one did not interfere with another. The factors associated with infection by T. gondii and feline immunodeficiency virus were free life and age under six months, since the sex was not statistically related to any of the illnesses.
A toxoplasmose é uma zoonose na qual, mamíferos e aves podem participar do seu ciclo como hospedeiros intermediários e os felídeos como hospedeiros definitivos. O Felis catus é reconhecido como o principal responsável pela contaminação ambiental por oocistos de Toxoplasma gondii. O diagnóstico sorológico pouco revela sobre a eliminação de tal fase no ambiente, o que representa o real impacto daquela espécie na Saúde Pública frente à toxoplasmose. São escassos os dados da frequência da toxoplasmose felina no Estado de Goiás. Assim sendo, objetivou-se com esta pesquisa avaliar a frequência da infecção da toxoplasmose em gatos domésticos e o seu potencial papel na sua transmissão, através da eliminação de oocistos no ambiente e dos respectivos fatores associados à infecção. Para isto, foram coletadas 102 amostras de sangue e 98 amostras fecais, de 102 gatos provenientes de Goiânia-Goiás. Os animais foram divididos em grupos de acordo com a faixa etária, gênero e livre acesso à rua ou não. Foi realizada a hemaglutinção indireta para a determinação do nível de anticorpos anti-T. gondii e o ELISA indireto para a detecção da infecção pelo vírus da imunodeficiência felina (FIV). Para a pesquisa e detecção da eliminação de oocistos de T. gondii nas fezes dos gatos foi feita a centrifugo-flutuação em solução de Sheather, posterior extração de DNA e realização da PCR convencional. Os resultados revelaram que 18,63% (19/102) dos gatos foram positivos para o T. gondii, com títulos variando entre 1:32 a 1:8.192, sendo que nenhuma das amostras fecais foi positiva na PCR. A frequência de positivos para o FIV foi de 55,91% (52/93), com coinfecção de 18,28% (17/93). Com a regressão logística multivariada verificou-se que os fatores associados foram os mesmos para as duas infecções, porém uma não interferiu diretamente na outra. Os fatores associados para a infecção pelo T. gondii e pelo vírus da imunodeficiência felina foram a vida livre e a idade igual ou superior a seis meses, já o gênero não apresentou relação estatística com nenhuma das enfermidades.
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Silva, Fabio Jorge Moreira da. "Rela??o entre infesta??o natural por Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) e n?veis de anticorpos da classe IgG para os agentes da Tristeza Parasit?ria Bovina e Borrelia sp. em bezerros." Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 2008. https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/tede/755.
Full textAbstract:
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2008- Joao Ricardo Carreira Alves.pdf: 5100916 bytes, checksum: c0a353c763d3ea209bd91de14e9fe1e9 (MD5)
Previous issue date: 2008-02-28Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico
This study was conducted with the objective to contribute with the agreement of the relation calves x ticks x hemoparasites in the sector of milk cows of the Farm of the Institute of Zootecnia (FAIZ) of the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Seventeen female calves with age between 15 days old and 14 months old, between july of 2006 and june of 2007. These animals were subdivided in three ages bands: up to 2 months, between 3- 6 months and above of 7 months, in accordance with the handling of the property. Was realized ticks`s counting, collection of blood and hematological examination of all the animals in interval of 14 days. The exams were carrying through in laboratories of Parasites Diseases, Clinical Pathology of UFRRJ and the Serological of Embrapa Beef Cattle. Throughout 12 months, it can be verified the constant presence of larvaes, nymphs and females of tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The frequency of positive animals for the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), for the agents of the Tick-borne Disease (Babesia bigemina, B. bovis and Anaplasma marginale) and Borrelia sp., was verified that in all ages bands exist positive serological animal. The frequency and antibody levels, as much for B. bigemina as for B. bovis, evaluated through the indirect ELISA, had been high. This fact associated with the absence of infection symptoms suggests a situation of immunization of the animals and an area of enzootically stable. None trend of seasonal distribution of infections for B. bigemina, B. bovis, A. marginale and Borrelia sp. was observed.
Este estudo foi conduzido com o objetivo de contribuir para o entendimento das rela??es bezerros x carrapatos x hemoparasitos no setor de bovinocultura de leite da Fazenda do Instituto de Zootecnia (FAIZ) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Foram utilizadas 17 bezerras com idade entre 15 dias e 14 meses, entre julho de 2006 a junho de 2007. Estes animais foram subdivididos em tr?s faixas et?rias: at? 2 meses, de 3-6 meses e acima de 7 meses, de acordo com o manejo zoot?cnico da propriedade. Procedeu-se contagem de carrapatos, coleta de sangue e exames hematol?gicos de todos animais em intervalo de 14 dias. Os exames foram realizados nos Laborat?rios de Doen?as Parasit?rias, de Patologia Cl?nica da UFRRJ e de Sorologia da Embrapa Gado de Corte. Ao longo de 12 meses, podese verificar a presen?a constante de larvas, ninfas e f?meas de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Em rela??o a freq??ncia de positividade pelo ensaio de imunoadsors?o enzim?tica (ELISA) indireto, para os agentes da Tristeza Parasit?ria Bovina (Babesia bigemina, B. bovis e Anaplasma marginale) e Borrelia sp., verificou-se que em todas as faixas et?rias haviam animais sorologicamente positivos. A freq??ncia e os n?veis de anticorpos, tanto para B. bigemina como para B. bovis, avaliados atrav?s do ELISA indireto, foram altos. Este fato associado ? aus?ncia de sintomas de infec??o sugere uma situa??o de pr?-imuniza??o dos animais e uma ?rea de estabilidade enzo?tica. N?o foi observada qualquer tend?ncia de distribui??o sazonal de infec??es por B. bigemina, B. bovis, Anaplasma marginale e Borrelia sp.
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Brown, Judith K., Bonnie T. Poulos, Heather S. Costa, and Merritt R. Nelson. "Detection of Lettuce Infectious Yellow Virus (LIYV) in Greenhouse and Field Inoculated Plots Using an Indirect Enzyme-linked Immunosorbent Assay (Indirect ELISA)." College of Agriculture, University of Arizona (Tucson, AZ), 1989. http://hdl.handle.net/10150/214278.
Full textAbstract:
Lettuce infectious yellows virus (LIYV), a recently recognized plant virus, causes dramatic yellowing symptoms and severe diseases in a wide range of vegetable crops in Arizona, adjacent southwestern states and Mexico. Until now, the only available diagnostic method was a time-consuming bioassay that used the insect vector to transmit the virus, with subsequent manipulation of indicator plants. A rapid, sensitive diagnostic technique (termed an indirect enzyme-linked immunoassay, called indirect ELISA) system was developed to detect lettuce infectious yellows virus (LIYV) in infected plant material. A virus specific antibody was made to viral capsid protein which was purified by polyacrylamide gel electrophoresis. The indirect ELISA system was optimized and used to detect viral antigen in greenhouse-inoculated melons. The system was subsequently adapted to detect LIYV in symptomatic and asymptomatic weed and cultivated plant species collected from infected fields near Yuma and in central Arizona. The indirect ELISA system described here allows for the detection of approximately 100 ng of virus per well. The LIYV was detectable in symptomatic (but not in asymptomatic) leaves of melon plants infected with the virus. In contrast, the virus could be detected in both symptomatic and symptomless cheeseweed plants collected in the field. The optical density readings for infected weed species were generally lower than those for cultivated species, such as melons, lettuce, and spinach, suggesting that there is less virus in the weed hosts tested than in infected, cultivated hosts.
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Kapik, Rene Howard. "Changes in abscisic acid concentration during zygotic embryogenisis in loblolly pine (Pinus taeda) as determined by indirect ELISA." Diss., Georgia Institute of Technology, 1994. http://hdl.handle.net/1853/5796.
Full text
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Götze, Marcelo Mendes. "Avaliação de um ELISA competitivo para detecção de anticorpos contra Babesia bovis." Universidade Federal de Pelotas, 2010. http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/123456789/1283.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2010-03-18Bovine babesiosis caused by Babesia bovis and Babesia bigemina, is the most important disease transmitted by Rhipicephalus (Boophilus) microplus in tropical and subtropical areas in South America. Definitive diagnosis can be made by detecting infected erythrocytes in blood smears. However, the parasitemia in peripheral blood is often too low for this method to be used for diagnostic purposes. For this reason, several serological tests, including complement fixation, indirect hemagglutination and indirect immunofluorescence (IIF) have been used to detect antibodies in infected cattle. Although these tests allow the detection of persistently infected animals, they have limitations in specificity and/or sensitivity. The IIF has been the most sensitive, but cross-reactivity between species, subjective interpretation, and low production has limited its usefulness. The enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) have found wide application in the diagnosis of infectious diseases. The cELISA format (competitive) can provide an additional level of specificity, because the antibody is directed to a single epitope, specific for the organism to be detected. For these reasons, this study aimed to evaluate the sensitivity and specificity of cELISA compared to IIF and nested PCR (nPCR) for diagnosis babesiosis caused by B. bovis. Therefore, blood samples were collected from cattle in Brazil and Argentina, and processed for the diagnosis of B. bovis. The nPCR was used as the gold standard to validate the cELISA and the IIF as a comparative test. The cELISA for the diagnosis of B. bovis presented is easily processed with high levels of sensitivity and specificity. It is easily performed in a high number of samples, making it useful in cases of outbreaks of bovine babesiosis.
A babesiose bovina, causada por Babesia bovis e Babesia bigemina, é a doença mais importante transmitida por carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus em áreas tropicais e subtropicais da América do Sul. O diagnóstico definitivo pode ser feito através da detecção de eritrócitos infectados em esfregaços sanguineos, porém a parasitemia em sangue periférico é frequentemente muito baixa para que esse método seja utilizado de forma confiável para fins de diagnóstico. Por esse motivo, vários testes sorológicos, incluindo a fixação de complemento, hemaglutinação indireta e imunofluorescência indireta (IIF) têm sido usados para detectar anticorpos em bovinos infectados. Embora estes testes permitam a detecção de animais persistentemente infectados, eles têm limitações na especificidade e/ou sensibilidade. O IIF tem sido o mais sensível, mas a reatividade cruzada entre as espécies, interpretação subjetiva, e baixa produção tem limitado a sua utilidade. Os ELISA têm encontrado ampla aplicação no diagnóstico de doenças infecciosas. O formato cELISA (competitivo) pode fornecer um nível adicional de especificidade, pois o anticorpo é dirigido para um epitopo único específico para o organismo a ser detectado. Por estas razões, este estudo teve como objetivo avaliar a sensibilidade e especificidade do cELISA comparado com IIF e nested PCR (nPCR) para diagnóstico de babesiose causada por B. bovis. Para tanto, amostras de sangue bovino foram coletadas no Brasil e na Argentina e processadas para o diagnóstico de B. bovis. Utilizou-se o nPCR como teste padrão para a validação do cELISA, e a IIF como teste comparativo. O cELISA para diagnóstico de B. bovis apresentou-se de fácil processamento, com altos níveis sensibilidade e especificidade, além da rapidez no processamento de amostras em larga escala, sendo de grande utilidade para casos de surtos de babesiose bovina
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Moser, Christian. "Detection of antibodies against classical swine fever virus in swine sera by indirect ELISA using recombinant envelope glycoprotein E2 /." [S.l.] : [s.n.], 1995. http://www.ub.unibe.ch/content/bibliotheken_sammlungen/sondersammlungen/dissen_bestellformular/index_ger.html.
Full text
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Laporta, Gabriel Zorello. "Ecologia de Culex quinquefasciatus e de Culex nigripalpus no Parque Ecológico do Tietê, São Paulo, Brasil." Universidade de São Paulo, 2007. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/6/6132/tde-05122007-175235/.
Full textAbstract:
Introdução - Culex quinquefasciatus é um mosquito sinantrópico que causa incômodo à população humana e é relacionado com a transmissão de nematóides ou arbovírus em áreas endêmicas, respectivamente, do litoral brasileiro e da América Central ou do Norte. Culex nigripalpus é um mosquito hemi-sinantrópico que possui a capacidade de se dispersar para as áreas antrópicas e transmitir Saint Louis Virus e Equine Encephalitis Virus, respectivamente, na América do Norte e Venezuela. Objetivo - Caracterizar o hábito alimentar de Culex nigripalpus e a densidade, a sobrevivência e o hábito alimentar de Culex quinquefasciatus no Parque Ecológico do Tietê (PET), São Paulo. Métodos - O PET é uma Área de Preservação Ambiental com animais residentes ou migratórios. As amostras de mosquitos adultos foram coletadas, mensalmente, em quatro áreas no PET, durante um ano e por meio de aspirador à bateria. O método de ELISA indireto foi empregado para a identificação do hospedeiro que é fonte alimentar ao mosquito. A densidade da população de Cx. quinquefasciatus foi estimada pelo método de marcação, soltura e recaptura na vegetação da margem de um canal no PET. Amostras de fêmeas de Cx. quinquefasciatus desse local foram dissecadas ou acompanhadas em laboratório para estimativa da taxa de sobrevivência. Resultados A proporção de repastos sangüíneos de Cx. quinquefasciatus e de Cx. nigripalpus foi, respectivamente, 6,5 e 8,3% em humanos, 18,8 e 27,7% em cães, 7,4 e 2,3% em galinhas, 2,8 e 9,0% em ratos, 3,2 e 8,3% em múltiplos hospedeiros e 67,7 e 60,9% em hospedeiros não identificados. Human Blood Index para Cx. quinquefasciatus e Cx. nigripalpus foi, respectivamente, 0,20 e 0,17. Feeding Index entre os hospedeiros homem/cão, homem/galinha e homem/rato foi, respectivamente, 0,35, 0,63 e 2,65 para Cx. quinquefasciatus e 0,30, 2,56 e 1,05 para Cx. nigripalpus. A distribuição de repastos sangüíneos teve associação significante estatisticamente com as fêmeas de Cx. nigripalpus em estádio de Sella 2 coletadas em todas as áreas do PET. A densidade de Cx. quinquefasciatus para uma área de 2.520 m2 foi 7.262±1.537. A proporção de paridas, a duração do ciclo gonotrófico e a taxa de sobrevivência foram, respectivamente, igual a 0,48, 4,75 (CL 95% = 4,3-5,2) e 0,86, estimados para a população de Cx. quinquefasciatus. Conclusões Cães e galinhas foram hospedeiros importantes para Cx. quinquefasciatus, enquanto que cães foram hospedeiros importantes para Cx. nigripalpus. O repasto sangüíneo é mais bem detectado pelo ELISA indireto em fêmeas no estádio de Sella 2. A sobrevivência e a densidade de Cx. quinquefasciatus indicam que essa espécie é epidemiologicamente relevante na área do PET como espécies vetora ou peste urbana. Essa espécie deve ser objetivo do programa de controle de vetores no município de São Paulo.Introduction - Culex quinquefasciatus has high synanthropy, infest human dwellings and is vector of nematoids and arbovirus from endemic areas, respectively, in Brazilian coast and in Central or North America. Culex nigripalpus has average synanthropy and can disperse through the anthropic environment carrying Saint Louis Virus and Equine Encephalitis Virus, respectively, in North America and Venezuela. Objective - To characterize host-feeding habit of Culex nigripalpus and density, survival and host-feeding habit of Culex quinquefasciatus in the Parque Ecológico do Tietê (PET), São Paulo. Methods - The PET is an Area of Environmental Protection with resident or migratory animals. The samples of adult mosquitoes were collected, monthly, in four areas in the PET, during one year and by means of a backpack battery aspirator. An indirect ELISA technique was used for the identification of the host that is an alimentary source for the mosquito species. The density of Cx. quinquefasciatus population was estimated using the Mark, Release and Recapture method on the vegetation of the edge of a canal in the PET. Samples of females of Cx. quinquefasciatus from this place were dissected or followed in laboratory for estimating the survival rate. Results Cx. quinquefasciatus and Cx. nigripalpus fed on human 6.5 and 8.3%, dog 18.8 and 27.7%, chicken 7.4 and 2.3%, rat 2.8 and 9.0%, multiple hosts 3.2 and 8.2% and unidentified hosts 67.9 and 60.9%, respectively. The unweighted human blood index (HBI) values were 0.20 for Cx. quinquefasciatus and 0.17 for Cx. nigripalpus populations. The feeding index values between the hosts human/dog, human/chicken and human/rat were, respectively, 0.35, 0.63 and 2.65 for Cx. quinquefasciatus and 0.30, 2.56 and 1.05 for Cx. nigripalpus. The distributions of blood-meals had statistically significant association on Sella 2 stage of the Cx. nigripalpus collected in all areas at the PET. The density of Cx. quinquefasciatus for an area of 2,520 m2 was 7,262±1,537. The proportion of parous, gonotrophic cycle length and survival rate were, respectively, equal to 0.48, 4.75 (CL 95% = 4.3-5.2) and 0.86, for Cx. quinquefasciatus population. Conclusions Dogs and chickens are important hosts for Cx. quinquefasciatus, whereas dog is an important host for Cx. nigripalpus. The host-blood of females in Sella 2 stage increases sensibility of the indirect ELISA assay. The survivorship and the density of Cx. quinquefasciatus indicate that these species are epidemiologically relevant in the PET area as either a pest or vector species. Those species should be a goal of the vector control program of Sao Paulo municipality.
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PADUA, Elisa Domingues. "Pesquisa de imunoglobulinas anti-Leishmania spp. e avalia??o cl?nica de gatos residentes em ?reas end?micas do Rio de Janeiro." Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 2017. https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/2431.
Full textAbstract:
Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2018-09-12T17:52:35Z
No. of bitstreams: 1
2017 - Elisa Domingues Padua.pdf: 1950908 bytes, checksum: d9644f85d3b5935e0ad3f149d04d4f4b (MD5)Made available in DSpace on 2018-09-12T17:52:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017 - Elisa Domingues Padua.pdf: 1950908 bytes, checksum: d9644f85d3b5935e0ad3f149d04d4f4b (MD5) Previous issue date: 2017-07-25
Despite some reports of the occurrence of Leishmaniasis in felines, the literature is scarce with regard to its research on populations of cats from areas endemic to the disease. In this way, the present study aimed to investigate the possibility of infection in cats by means of a rapid qualitative test of the antibody test in Serop?dica and Itagua?, metropolitan region of Rio de Janeiro, an endemic area for tegumentary and visceral canine leishmaniasis Anti-Leishmania chagasi by indirect immunoenzymatic assay (ELISA) and indirect immunofluorescence (RIFI). For this purpose, blood samples were collected and the serum of 255 cats was sent to the Escola Nacional de Sa?de P?blica (FIOCRUZ). In this population of cats five animals (1.9%, 5/255) were reactive to the rapid test (TR DPP?), 44 (17.3%) had anti-Leishmania spp. Identified by the RIFI. The main clinical signs observed in the seropositive animals were ocular secretion (16/44 - 36%), nasal secretion (16/44 - 36%), weight loss (7/44 - 15.9%), alopecia (6/44 - 13 , 6%) and ulcerated skin lesions (5/44 - 11.3%), in addition to hepatosplenomegaly (2/44 - 4.5%), lymphadenomegaly (5/44 - 11.3%), corneal opacity 2/44 - 4.5%) and gingivitis (2/44 - 4.5%). It was not possible to establish a standardization for the ELISA. Detection of anti-Leishmania spp. in felines, calls attention to this species that must be further investigated in relation to its power as a source of infection in relation to the parasite.
Apesar de alguns relatos da ocorr?ncia de Leishmaniose em felinos, a literatura ? escassa no que diz respeito ? sua pesquisa em popula??es de gatos de ?reas end?micas para a doen?a. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo pesquisar, em Serop?dica e Itagua?, regi?o metropolitana do Rio de Janeiro, ?rea end?mica para Leishmaniose tegumentar e visceral canina, a possibilidade de infec??o em gatos, por meio de teste r?pido qualitativo, da pesquisa de anticorpos anti-Leishmania chagasi pelas t?cnicas de ensaio imunoenzim?tico indireto (ELISA) e rea??o de imunofluoresc?ncia indireta (RIFI). Para tanto, foram colhidas amostras de sangue e soro de 255 gatos, os quais foram encaminhados ? Escola Nacional de Sa?de P?blica (FIOCRUZ). Nessa popula??o, cinco gatos (1,9%, 5/255) foram reagentes ao teste r?pido (TR DPP?), 44 (17,3%) apresentaram anticorpos anti-Leishmania spp. identificados pela RIFI. Os principais sinais cl?nicos observados nos animais soropositivos foram secre??o ocular (16/44 ? 36%), secre??o nasal (16/44 ? 36%), emagrecimento (7/44 ? 15,9%), alopecia (6/44 ? 13,6%) e les?o ulcerada na pele (5/44 ? 11,3%), al?m de hepatoesplenomegalia (2/44 ? 4,5%), linfadenomegalia (5/44 ? 11,3%), opacidade de c?rnea (2/44 ? 4,5%) e gengivite (2/44 ? 4,5%). N?o foi poss?vel estabelecer uma padroniza??o para o ELISA. A detec??o de anticorpos anti-Leishmania spp. em felinos chama a aten??o para essa esp?cie que deve ser mais investigada em rela??o ao seu poder como fonte de infec??o em rela??o ao parasito.
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Sene, Moisés Guedes de [UNESP]. "Avaliação do teste ELISA durante o tratamento de pacientes com paracoccidioidomicose: comparação com a imunofluorescência indireta e a micro-imunodifusão dupla em gel de ágar." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2001. http://hdl.handle.net/11449/95917.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2001Bitstream added on 2014-06-13T19:57:02Z : No. of bitstreams: 1
sene_mg_me_botfm.pdf: 956728 bytes, checksum: fe9e35a9180c7ad377bc30cbf9974ccd (MD5)A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, que acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino. A doença tem como principais manifestações clínicas a forma aguda/subaguda e a forma crônica. Métodos sorológicos têm considerável valor na Pbmicose e diferentes testes têm sido utilizados no diagnóstico e monitoramento da resposta do paciente ao tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a IFI, a ID e o ELISA antes e após introdução do tratamento de pacientes com a forma aguda/subaguda e a forma crônica da Pbmicose. Para cada teste, os seguintes parâmetros foram avaliados: sensibilidade (SE), especificidade (EP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e eficiência (EF). No período pré-tratamento a IFI teve SE=92,3%, VPP= 87,5%, VPN= 92% e EF=88,6%. A ID teve SE=94,93%, VPP=97,4%, VPN=95% e EF=96,2%. Para o ELISA, SE=100%, VPP=95%, VPN=100% e EF=97,4%. No grupo de doadores de sangue, a EP da IFI, da ID e do ELISA foram, respectivamente, de 93,3%, 100% e 100%. Em soros de pacientes com outras micoses sistêmicas (histoplasmose, criptococose, actinomicose, aspergilose e adiaspiromicose), as EP para os testes foram de 60%, 90% e 80%, respectivamente. Durante o tratamento, maior correlação foi obtida entre a ID e o ELISA (r= 0,61591, p<0,05), obtendo-se baixas correlações com a IFI. O tempo necessário para negativar o ELISA (Md= 20,0 meses) foi maior do que a ID (Md= 13,5 meses). O ELISA se negativou em geral nove meses após a ID, o que sugere que este teste passe a ser um referencial para suspensão do tratamento de manutenção. Devido à sua elevada sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e eficiência, o ELISA deve ser incluído na rotina sorológica de pacientes com Pbmicose.
Pararaccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiodes brasiliensis, which often affects rural workers, usually male adults. The overt disease is manifested by two clinical forms, acute/subacute and chronic forms. Serological methods are of considerable value in Pbmycosis, and various tests has been utilized in the diagnostic and monitoring the patient's response to treatment. The aim of this study was to evaluated the reliability of the double immunodiffusion test (ID), indirect immunofluorescence (IIF) and immunoenzymatic assay (ELISA) in the pre-treatment and during the period of treatment of patients with acute/subacute and chronic forms of Pbmycosis. For each test the following parameters were evaluated: Sensitivity (SE), Specificity (SP), Positive and Negative Predictive Values (PPV and NPV) and Efficiency (EF). In the pre-treatment period these values for IFI were SE=92.3%, PPV=87.5%, NPV=92% and EF=88.6%. For ID: SE=94.9%, PPV=97.4%, NPV=95% EF=96.2%. For ELISA: SE=100%, PPV=95%, NPV=100% and EF=97.4%. In the group of blood donors, for IFI, ID and ELISA the ES were, respectively, 93.3%, 100% and 100%. In patients with other deep mycosis (histoplasmosis, cryptococcosis, actinomycosis, aspergillosis and adiaspiromycosis) the ES for these tests were respectively 60%, 90% and 80%. During the period of treatment, the highest correlation was observed between ID and ELISA (r= 0,61591, p<0,05), and the lowest correlations with IFI. The time elapsed to negative the ELISA was larger (Md=20 months) than for ID (Md= 13,5 meses). In overall, the ELISA negativated nine months after ID. This result suggests that the ELISA may be a referential test to monitoring the time for interruption of the treatment in Pbmycosis. Moreover, owing to its high values of SE, SP, PPV, NPV and EF, ELISA should be included in the serological routine for patients with Pbmycosis.
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Denac, Helena. "An indirect ELISA for the detection of antibodies against porcine reproductive and respiratory syndrome virus using recombinant nucleocapsid protein as antigen /." [S.l.] : [s.n.], 1996. http://www.ub.unibe.ch/content/bibliotheken_sammlungen/sondersammlungen/dissen_bestellformular/index_ger.html.
Full text
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Sene, Moisés Guedes de. "Avaliação do teste ELISA durante o tratamento de pacientes com paracoccidioidomicose : comparação com a imunofluorescência indireta e a micro-imunodifusão dupla em gel de ágar /." Botucatu : [s.n.], 2001. http://hdl.handle.net/11449/95917.
Full textAbstract:
Orientador: Júlio DefaveriResumo: A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis, que acomete principalmente trabalhadores rurais do sexo masculino. A doença tem como principais manifestações clínicas a forma aguda/subaguda e a forma crônica. Métodos sorológicos têm considerável valor na Pbmicose e diferentes testes têm sido utilizados no diagnóstico e monitoramento da resposta do paciente ao tratamento. O objetivo deste estudo foi avaliar a IFI, a ID e o ELISA antes e após introdução do tratamento de pacientes com a forma aguda/subaguda e a forma crônica da Pbmicose. Para cada teste, os seguintes parâmetros foram avaliados: sensibilidade (SE), especificidade (EP), valor preditivo positivo (VPP), valor preditivo negativo (VPN) e eficiência (EF). No período pré-tratamento a IFI teve SE=92,3%, VPP= 87,5%, VPN= 92% e EF=88,6%. A ID teve SE=94,93%, VPP=97,4%, VPN=95% e EF=96,2%. Para o ELISA, SE=100%, VPP=95%, VPN=100% e EF=97,4%. No grupo de doadores de sangue, a EP da IFI, da ID e do ELISA foram, respectivamente, de 93,3%, 100% e 100%. Em soros de pacientes com outras micoses sistêmicas (histoplasmose, criptococose, actinomicose, aspergilose e adiaspiromicose), as EP para os testes foram de 60%, 90% e 80%, respectivamente. Durante o tratamento, maior correlação foi obtida entre a ID e o ELISA (r= 0,61591, p<0,05), obtendo-se baixas correlações com a IFI. O tempo necessário para negativar o ELISA (Md= 20,0 meses) foi maior do que a ID (Md= 13,5 meses). O ELISA se negativou em geral nove meses após a ID, o que sugere que este teste passe a ser um referencial para suspensão do tratamento de manutenção. Devido à sua elevada sensibilidade, especificidade, VPP, VPN e eficiência, o ELISA deve ser incluído na rotina sorológica de pacientes com Pbmicose.
Abstract: Pararaccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioiodes brasiliensis, which often affects rural workers, usually male adults. The overt disease is manifested by two clinical forms, acute/subacute and chronic forms. Serological methods are of considerable value in Pbmycosis, and various tests has been utilized in the diagnostic and monitoring the patient's response to treatment. The aim of this study was to evaluated the reliability of the double immunodiffusion test (ID), indirect immunofluorescence (IIF) and immunoenzymatic assay (ELISA) in the pre-treatment and during the period of treatment of patients with acute/subacute and chronic forms of Pbmycosis. For each test the following parameters were evaluated: Sensitivity (SE), Specificity (SP), Positive and Negative Predictive Values (PPV and NPV) and Efficiency (EF). In the pre-treatment period these values for IFI were SE=92.3%, PPV=87.5%, NPV=92% and EF=88.6%. For ID: SE=94.9%, PPV=97.4%, NPV=95% EF=96.2%. For ELISA: SE=100%, PPV=95%, NPV=100% and EF=97.4%. In the group of blood donors, for IFI, ID and ELISA the ES were, respectively, 93.3%, 100% and 100%. In patients with other deep mycosis (histoplasmosis, cryptococcosis, actinomycosis, aspergillosis and adiaspiromycosis) the ES for these tests were respectively 60%, 90% and 80%. During the period of treatment, the highest correlation was observed between ID and ELISA (r= 0,61591, p<0,05), and the lowest correlations with IFI. The time elapsed to negative the ELISA was larger (Md=20 months) than for ID (Md= 13,5 meses). In overall, the ELISA negativated nine months after ID. This result suggests that the ELISA may be a referential test to monitoring the time for interruption of the treatment in Pbmycosis. Moreover, owing to its high values of SE, SP, PPV, NPV and EF, ELISA should be included in the serological routine for patients with Pbmycosis.
Mestre
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GUIMARÃES, Marcelo Sales. "Diagnóstico sorológico e avaliação da ocorrência da transmissão vertical de Neospora caninum nos rebanhos bovinos Curraleiro e Pantaneiro." Universidade Federal de Goiás, 2011. http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tde/864.
Full textAbstract:
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Dissertacao Marcelo Sales Guimaraes.pdf: 3899079 bytes, checksum: 38f856923d6a5606a0da0a5054c4e8f9 (MD5)
Previous issue date: 2011-02-24Bovine neosporosis is a parasitic disease of cosmopolitan distribution, caused by the obligatory intracellular cyst forming protozoan Neospora caninum (Phylum Apicomplexa, family Sarcocystidae). It has a strong association with bovine abortion, being N. caninum protozoan considered the most important for this species. The main route of transmission is vertical, determining the endemic-type neosporosis in cattle. Brazilian local breeds as Curraleiro and Pantaneiro present hardiness and resistance to adverse conditions, e.g. poor nutrition and microbiological challenges, as predominant characteristics. The conservation program of such breeds has encouraged studies aiming at a greater knowledge of these animals peculiarities. The purpose of this study was to assess the seroprevalence of these breeds for N. caninum and the occurrence of vertical transmission in herds, evaluating the importance of bovine neosporosis for these herds. Five farms in the state of Goiás and one in the state of Mato Grosso do Sul, with Curraleiro and Pantaneiro herds, respectively, were observed. Blood was collected from females at reproductive age and their offspring before colostrum intake, if possible. If it was not possible, blood was periodically collected from the offspring (five collections) until about ten months of age. A total of 358 animals was examined, 249 (198 females and 51 calves) Curraleiros and 109 (62 females and 47 calves) Pantaneiros. Seropositivity to N. caninum was evaluated by using the indirect immunofluorescence (cutoff ≥ 1:200) and ELISA (HerdChek® IDEXX Laboratories) (cutoff S/P ≥ 0.50). The total incidence of seropositives was 47,49% (170/358), 51% (127/249) Curraleiro and 39,45% (43/109) Pantaneiro. One hundred percent of the farms observed presented seropositive animals. The highest titer was 1:25600. The overall vertical transmission rate observed in herds was 51% (95%, CI 37%-64%), being 48% (95%, CI 30%-66%) in Curraleiro and 54% (95%, CI 35%-73%) in Pantaneiro. There was no statistically significant association between breed or titer of the cows and the occurrence of vertical transmission (OR 0,79; CI 0,27-2,34 95%). A low-moderate agreement was found between the two diagnostic techniques used (κ = 0.34). Thus, N. caninum is present in Curraleiro and Pantaneiro cattle breeds, with significant rates of seropositivity and vertical transmission. Although widely distributed, N. caninum does not seem to cause problems in Curraleiro and Pantaneiro herds, as abortion problems are rare and females have good fertility, within the constraints of the breed.
A neosporose bovina é uma enfermidade parasitária causada pelo protozoário intracelular obrigatório Neospora caninum (filo Apicomplexa, família Sarcocystidae), formador de cistos. Enfermidade de distribuição cosmopolita, a neosporose apresenta forte associação com o abortamento bovino, sendo N. caninum considerado o protozoário mais importante para essa espécie. A principal rota de transmissão é a vertical determinando a neosporose do tipo endêmica nos rebanhos. Raças locais brasileiras como o gado Curraleiro e Pantaneiro apresentam como características preponderantes a rusticidade e resistência às condições adversas tais como carência nutricional e desafios microbiológicos. O programa de conservação destas raças incentivou estudos que visam o maior conhecimento das particularidades destes animais. A proposta deste trabalho foi avaliar a soropositividade destas raças para N. caninum e a ocorrência de transmissão vertical nos rebanhos, permitindo determinar a importância da neosporose bovina nestes rebanhos. Cinco propriedades criadoras de Curraleiro (estado de Goiás) e uma criadora de Pantaneiro (estado de Mato Grosso do Sul) foram acompanhadas. Foi colhido sangue das fêmeas em idade reprodutiva e de suas crias antes da ingestão do colostro, quando possível. Quando não, foi colhido sangue das crias periodicamente (cinco colheitas) até em torno dos dez meses de idade. Um total de 358 animais foi analisado, sendo 249 (198 fêmeas e 51 bezerros) Curraleiros e 109 (62 fêmeas e 47 bezerros) Pantaneiros. Avaliou-se a soropositividade para N. caninum por meio das técnicas de imunofluorescência indireta (ponto de corte ≥ 1:200) e ELISA indireto (HerdChek® IDEXX Laboratories) (ponto de corte S/P ≥ 0,50). A ocorrência total de soropositivos foi 47,49% (170/358), com 51% (127/249) do gado Curraleiro e 39,45% (43/109) do gado Pantaneiro soropositivo. Cem por cento das propriedades acompanhadas apresentaram animais positivos. O maior título encontrado foi de 1:25600. A taxa de transmissão vertical geral observada nos rebanhos foi de 51% (95%, IC 37%-64%), sendo de 48% (95%, IC 30%-66%) no gado Curraleiro e de 54% (95%, IC 35%-73%) no Pantaneiro. Não houve associação estatisticamente significativa entre título ou raça das mães e ocorrência de transmissão vertical (OR 0,79; IC 0,27-2,34 95%). Uma concordância moderada-baixa foi verificada entre as duas técnicas de diagnóstico utilizadas (κ = 0,34). Assim, N. caninum está presente nos rebanhos bovinos das raças Curraleiro e Pantaneiro, com consideráveis taxas de soropositividade e transmissão vertical. Embora amplamente distribuído, N. caninum parece não representar problema nos rebanhos Curraleiro e Pantaneiro, visto que problemas de abortamento são raros e as fêmeas apresentam boa fertilidade, dentro das limitações das raças.
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Dunkelberg, Elisa Verfasser], Matthias [Akademischer Betreuer] Finkbeiner, and Liselotte [Akademischer Betreuer] [Schebek. "A case-study approach to quantifying indirect land-use change due to expanding biofuels feedstock cultivation / Elisa Dunkelberg. Gutachter: Matthias Finkbeiner ; Liselotte Schebek. Betreuer: Matthias Finkbeiner." Berlin : Technische Universität Berlin, 2014. http://d-nb.info/1065669518/34.
Full text
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Dunkelberg, Elisa [Verfasser], Matthias Akademischer Betreuer] Finkbeiner, and Liselotte [Akademischer Betreuer] [Schebek. "A case-study approach to quantifying indirect land-use change due to expanding biofuels feedstock cultivation / Elisa Dunkelberg. Gutachter: Matthias Finkbeiner ; Liselotte Schebek. Betreuer: Matthias Finkbeiner." Berlin : Technische Universität Berlin, 2014. http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:83-opus4-48618.
Full text
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Spriggs, AC, and FD Dakora. "Assessing the suitability of antibiotic resistance markers and the indirect ELISA technique for studying the competitive ability of selected Cyclopia Vent. rhizobia under glasshouse and field conditions in South Africa." BMC Microbiology, 2009. http://encore.tut.ac.za/iii/cpro/DigitalItemViewPage.external?sp=1001665.
Full textAbstract:
Abstract
Background: Symbiotic N2 fixation in legumes is constrained by many factors, including the paucity of suitable
soil rhizobia To maximise growth of legume species therefore often requires the application of effective rhizobia
as inoculants. But where native strains out-compete introduced rhizobia for nodule formation, it is important that
the competitiveness of selected strains is tested in the field and glasshouse prior to their recommendation as
commercial inoculants. However the methodology for strain identification inside nodules has often proved
difficult and thus limited this field of research. In this study, the suitability of the antibiotic resistance technique
(both intrinsic low-resistance fingerprinting and high-resistance marking) and the serological indirect ELISA
method were assessed for their ability to detect selected Cyclopia rhizobia under glasshouse and field conditions.
The four rhizobial strains that were used, namely PPRICI3, UCT40a, UCT44b and UCT61a, were isolated from
wild Cyclopia species growing in the Western Cape fynbos of South Africa.
Results: The test strains formed two distinct groups with regard to their intrinsic resistance to the antibiotics
streptomycin sulphate and spectinomycin dihydrochloride pentahydrate, making it impossible to use intrinsic
antibiotic resistance to distinguish strains from within the same intrinsic resistance group. The use of strains
marked with double antibiotic resistance was also investigated. A number of these strains lost their antibiotic
marker tags after one plant passage; and some also lost their competitive ability. The indirect ELISA technique
provided a more satisfactory method of identifying selected Cyclopia strains under both field and glasshouse
conditions. The primary antibodies raised against strains UCT40a, UCT61a and UCT44b gave absorbance
readings that were unambiguously negative (0.30 OD405), while those of strain PPRICI3 were ambiguous (0.50
OD405) with many false positive readings (1.0 A405). The indirect ELISA method showed a high level of analytical
sensitivity in glasshouse experiments and there were no cross-reactions between the four test strains. The
method was also suitable for detecting three of the four test strains in competition studies under field conditions,
and can also be used to identify some strains under field conditions.
Conclusion: The antibiotic marker method was found unsuitable for identifying Cyclopia rhizobia in competition
experiments in both glasshouse and field conditions. However, the indirect ELISA technique was found suitable
for identifying these strains in glasshouse studies. The method was also appropriate for identifying strains UCT40a,
UCT44b and UCT61a, but not strain PPRICI3, in field competition studies.
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George, Maryan. "Adrenaline releases level on skin-to skin touches." Thesis, Högskolan i Skövde, Institutionen för hälsovetenskaper, 2020. http://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:his:diva-19090.
Full textAbstract:
Human pleasant touches promote feelings of security, supportiveness, and wellbeing. Conversely, human unpleasant touches promote the body for either “fight or flight” or “short term acute stress” during emergencies, feeling of stress or danger. The promoted stress response is released from the hypothalamus by the sympathetic nerve system further to the spinal cord to reach the signals to the adrenal medulla, where stress hormones adrenaline is released. Adrenaline, which is characterized by a mimic sympathetic nerve system, interacts with α and β receptors on different organs. The aim for this study was to investigate whether the stroker (partner/stranger) touch effects on adrenaline hormone releases. The null hypothesis for this study entails a significant adrenaline reduction in partners’ touches compared with strangers’ touches. Indirect competitive ELISA method was used, and concentration data of a total of sixteen participants was obtained. Whitney-U test was carried out to compare group differences within stroker (stranger/partner) touches and adrenaline releasing level. In addition, correlation in adrenaline with noradrenaline and oxytocin hormones was obtained using Spearman’s correlation test. The significant p-value 0.05 was conducted. The result of this study showed no differences between stroker (partner/stranger) associated with adrenaline hormone release. Correlation between partner maximum (max) concentration data for both oxytocin and adrenaline had significant differences. However, max variables for adrenaline and noradrenaline within stroker did not show significant differences. The conclusion of this study is that the gentle touch stimulus used in this study was not enough to detect stress hormone in adrenaline.
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PIETRI, MICHEL. "Evaluation d'une technique elisa pour la mise en evidence d'anticorps antinucleaires : etude comparative avec la technique d'immunofluorescence indirecte en relation avec les donnees cliniques." Aix-Marseille 2, 1994. http://www.theses.fr/1994AIX20908.
Full text
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Alves, Fabiana. "Padronização de um ELISA indireto para o diagnóstico da imunodeficiência felina a vírus." Universidade Federal de Minas Gerais, 2010. http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8EHKP4.
Full textAbstract:
Feline immunodeficiency virus (FIV) is a lentivirus that infects felids. FIV infection leads to a chronic disease and immunodeficiency. Clinical diagnosis is not reliable, which makes laboratory diagnosis necessary. The aim of this study was to establish and standardize an indirect ELISA for diagnosis of FIV, using a capsid protein p24 recombinant antigen (r-p24). Additionally, the occurrence of FIV infection in the Belo Horizonte metropolitan area was studied using PCR and immunochromatography SNAP Combo Plus. Conflicting results between both tests were confirmed by Western blot using the r-p24. Serum samples from 150 cats were used: 78 from asymptomatic cats belonging to private owners and from shelters of Belo Horizonte metropolitan area, Minas Gerais, and additional 72 samples donated by Veterinary Clinic Department of Universidade de São Paulo (USP), SP, previously tested by SNAP Combo Plus and PCR. For the of amplification 244 base pars (bp) fragment of the FIV gag gene the oligonucleotide primers were designed. The r-p24 (3.14 g/cm = 0.095 g/animal) was used for the Western blot. The indirect ELISA was standardized using 2.5 ng/ml of r-p24, 1:320 serum dilution and conjugate diluted 1:7500 (anti-feline IgG peroxidase). The r-p24 ELISA showed a 97% sensitivity and 93% specificity when compared to the gold test SNAP Combo Plus, with a Kappa index of 0.83. For the FIV occurrence study in Belo Horizonte, three animals (3.85%) were positive, showing that infected asymptomatic cats can disseminate the virus. Our results indicate that r-p24 ELISA is a sensitive, specific, and simple technique for FIV routine diagnosis and research.O Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) é um lentivírus que infecta os membros da família Felidae. A infecção causada pelo FIV leva a uma doença crônica e à imunodeficiência. O diagnóstico baseado apenas nos sinais clínicos não é confiável, o que torna necessário o diagnóstico laboratorial. O objetivo do presente trabalho foi estabelecer e padronizar uma prova de ELISA indireto, utilizando-se o antígeno recombinante da proteína de capsídeo p24, a r-p24, baseado na sequência genômica do FIV-B. Adicionalmente, uma avaliação da ocorrência da infecção na região metropolitana de Belo Horizonte foi realizada, utilizando-se as técnicas de PCR e imunocromatografia SNAP Combo Plus. Os resultados conflitantes quando comparado aos dois testes, foram confirmados a partir do Western blot utilizando-se a r-p24. Foram utilizadas 150 amostras de soro durante o experimento: 78 de gatos assintomáticos de proprietários particulares e de abrigos da região metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais, e outras 72 amostras doadas pelo Departamento de Clínica Veterinária da Universidade de São Paulo (USP), SP, previamente testadas pelo SNAP Combo Plus e por PCR. Para a PCR foram utilizados oligonucleotídeos iniciadores para amplificação de um fragmento de 244 pares de bases (pb) dentro da região correspondente ao gene gag do FIV. Para a técnica de Western blot foi utilizado o antígeno recombinante da proteína de capsídeo, a r-p24 (3,14 g/cm = 0,095 g/animal). O ELISA indireto foi padronizado utilizando-se 2,5 ng/ml da r-p24, soro na diluição de 1:320 e conjugado (peroxidadse anti-felino IgG) na diluição de 1:7500. O r-p24 ELISA apresentou uma sensibilidade de 97% e uma especificidade de 93%, quando comparado ao teste ouro SNAP Combo Plus, com índice Kappa igual a 0,83. A partir da análise da ocorrência do FIV em Belo Horizonte, três animais (3,85%) foram positivos para o FIV, demonstrando que animais assintomáticos infectados são potenciais transmissores do vírus. Baseado nos dados obtidos da estabilização e padronização do teste, conclui-se que o r-p24 ELISA é uma técnica sensível, específica e prática para o diagnóstico de rotina e ou pesquisa da infecção pelo FIV.
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Parra, Andréa Cristina. "Investigação diagnóstica de doença concomitante babesiose e anaplasmose em rebanho eqüino, por técnicas de Nested PCR e c - ELISA ou ELISA indireto." Universidade de São Paulo, 2009. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10136/tde-10022011-152248/.
Full textAbstract:
Em função da proximidade cada vez maior entre o cavalo e o homem, é de extrema importância ter conhecimentos das doenças que acometem os equinos, que por ventura, podem acometer seres humanos. Dentre muitas doenças, pode-se citar duas, que promovem grandes perdas econômicas aos rebanhos eqüinos, tanto no tratamento desses rebanhos, como com a morte dos mesmos, dificultando a importação e exportação de animais: a babesiose e a erliquiose (anaplasmose), que podem estar ou não associadas, acometendo um animal, concomitantemente. A presente pesquisa teve como objetivo investigar e diagnosticar doença concomitante babesiose (por Babesia equi ou Theileria equi) e Erliquiose (por Erliquia equi ou Anaplasma phagocytophilum), no estado de São Paulo, em rebanhos eqüinos, utilizando as técnicas de Nested PCR (Nested polymerase chain reaction reação em cadeia pela polimerase para diagnóstico de T. equi e A. phagocytophilum) e c-ELISA (competitive enzyme-linked immunosorbent assay para diagnóstico de T. equi) ou ELISA indireto (para diagnóstico de A. phagocytophilum) e comparar os resultados obtidos nas diferentes técnicas em 250 amostras de eqüino (sangue total e soro). Como resultado, obteve-se 38,4%, 46% e 36% de positividade, respectivamente, nos testes de pesquisa de hematozoário, c-ELISA e Nested PCR para Theileria equi e 0%, 3% e 0% de positividade, respectivamente, nos testes de pesquisa de hemoparasita, ELISA indireto e Nested PCR para Anaplasma phagocytophilum, não sendo observada a co-infecção de Babesiose e Anaplasmose no rebanho estudoDue to the increasing proximity between horse and man, it is of extreme importance to understand the diseases that affect horses which by chance may affect humans. Among many diseases, babesiosis and ehrlichiosis (anaplasmosis) promote high economic losses to horses herds in consequence of costs of treatment and also death, making it difficult to import and export animals: They can or not be linked affecting an animal at the same time. This study aimed to investigate and diagnose concomitant babesiosis (Babesia equi and Theileria equi) and ehrlichiosis (for ehrlichia equipment or Anaplasma phagocytophilum) in equine herds of the state of Sao Paulo, using the techniques of Nested PCR (Nested polymerase chain reaction for the diagnosis of T. equi and A. phagocytophilum) and c-ELISA (competitive enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of T. equi) or ELISA (for diagnosis of A. phagocytophilum). Also to compare results obtained in these different techniques in 250 samples of horse (whole blood and serum). Results showed 38.4%, 46% and 36% positivity, respectively, in tests for the detection of Theileria equi through hematozoan, c-ELISA and Nested PCR and 0%, 3% and 0% positivity, respectively, in tests for the detection of Anaplasma phagocytophilum through blood parasites, indirect ELISA and Nested PCR. It was not observed co-infection Babesiosis and anaplasmosis in the herd study
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Benoit-Cattin, Thierry. "Sérodiagnostic des infections à "Bartonella" : comparaison d'une technique ELISA à une technique commerciale d'immuno fluorescence indirecte." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05P093.
Full text
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Franca, Silvia de Araujo. "Elisa indireto com proteinas recombinantes para diagnóstico da infecção por Brucella ovis em carneiros." Universidade Federal de Minas Gerais, 2014. http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9SGH6T.
Full textAbstract:
Brucella ovis is a major cause of epididymitis in sexually mature rams, resulting in subfertility, infertility, and economic losses for the sheep industry worldwide. The aim of this study was to develop an indirect ELISA (iELISA) using recombinant proteins, namely rBoP59 or rBP26, as antigens for serological diagnosis of B. ovis infection. rBoP59 and rBP26 were purified by affinity chromatography and antigenicity of these was tested by Western blot and iELISA. The tests of repeatability and reproducibility were performed with 500 ng and 1 g of BoP59r or BP26r per well, testing serum from negative and positive rams in AGID, bacteriology and PCR from urine samples, being performed 10 separate repetitions. BoP59r did not discriminate negative from positive, but BP26r was effective in distinguishing positive from negative ram serum samples. The ELISAi with BP26r using sera from rams experimentally infected with B. ovis had the highest performance with serum dilution of 1:20, with 100% sensitivity, 90.2% specificity, positive predictive value (PPV) of 93.2%, negative predictive value (NPV) of 100%, and accuracy of 1.0. For serum samples that had been positive by AGID, best results were obtained from the serum dilution at 1:40, the sensitivity was 85.7%, specificity 85.4%, PPV of 75%, VPN of 92.1% and accuracy was 0.9029. And the results indicate that BP26r is a good serological marker for B. ovis infection in sheep.Brucella ovis é uma das principais causas de epididimite em carneiros sexualmente maduros, resultando em subfertilidade e infertilidade e consequentes perdas econômicas para a ovinocultura, mundialmente. Contudo, não existe uma técnica para diagnóstico sorológico que apresente boa sensibilidade e especificidade. O objetivo deste estudo foi desenvolver um teste de ELISA indireto (ELISAi) utilizando como antígeno proteínas recombinantes, BoP59r ou BP26r, para diagnóstico sorológico da infecção por B. ovis. A antigenicidade de BoP59r e BP26r, produzidas em E. coli e purificadas por cromatografia de afinidade, foi testadas por Western blot e ELISAi. Os testes de repetibilidade e reprodutibilidade do ELISAi foram realizados usando 500 ng e 1 µg de BoP59r e de BP26r por poço, com soros de um carneiro negativo e de um carneiro positivo à IDGA, isolamento bacteriano e PCR de urina, concomitantemente, sendo realizadas 10 repetições independentes. A BoP59r não discriminou ovino negativo de positivo, já a BP26r foi eficiente em diferenciar ovinos negativos de positivos. O ELISAi usando BP26r e soros de carneiros experimentalmente infectados por B. ovis, apresentou os melhores índices na diluição de soro de 1:20, com 100% de sensibilidade, 90,2% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) igual a 93,2%, valor preditivo negativo (VPN) igual a 100% e acurácia de 1,0. Em amostras de ovinos positivos somente à IDGA, os melhores resultados foram obtidos na diluição do soro em 1:40, com sensibilidade de 85,7%, especificidade de 85,4%, VPP igual 75%, VPN igual 92,1% e a acurácia foi de 0,9029. Os resultados indicam que a BP26r é um bom marcador sorológico da infecção por B. ovis em ovinos
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Nassar, Alessandra Figueiredo de Castro. "Desenvolvimento de ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto na detecção de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis em ovinos (Ovis aries, Linnaeus, 1758)." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10136/tde-29082012-140320/.
Full textAbstract:
A linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosas, de ocorrência mundial, que acomete caprinos e ovinos, caracterizada pela formação de abscessos em gânglios linfáticos superficiais, e alguns casos órgãos e linfonodos internos. É uma enfermidade causada pelo Corynebacterium pseudotuberculosis, responsável por grandes perdas econômicas na caprinocultura e ovinocultura. O presente trabalho teve por objetivo desenvolver um teste sorológico sensível e específico para detectar anticorpos anti-C. pseudotuberculosis em ovinos. Os animais foram classificados em dois grupos, com sintomatologia aparente para linfadenite caseosa (n=103) colhidos a campo, onde foram coletados amostras de soro e punção de linfonodos aumentados; e animais sem sintomatologia aparente (n=50) dos quais as amostras de soro e fragmentos de pulmão e linfonodo mediastínico foram colhidos em frigorífico. Em ambas as amostras a confirmação da presença e ausência da doença foi realizada através das provas de cultivo microbiológico e PCR, considerados nesse estudo como padrão para classificação dos animais. O resultado do cultivo microbiológico dos animais com sintomatologia aparente foi 53,5% (55/103) identificadas como C. pseudotuberculosis através de provas bioquímicas, e com a utilização da PCR, 46,5% (48/103) das amostras foram positivas para C. pseudotuberculosis. Com relação aos animais sem sintomatologia aparente, todas as amostras foram negativas no cultivo microbiológico e PCR (0/50). Na padronização do ELISA indireto foram utilizados 42 soros positivos e 43 soros negativos confirmados no cultivo microbiológico e PCR para linfadenite caseosa. A média de absorbância foi 1,88 com desvio padrão de 0,43, para as amostras positivas e, para as amostras negativas a média de 0,71 e desvio padrão 0,18. Dessa forma foram consideradas positivas, as amostras que apresentaram na reação de ELISA valor da DO> 1,1 e negativas de <1,1. A análise gráfica empregada no presente trabalho, curva ROC, permitiu encontrar o valor do ponto de corte associado à combinação dos parâmetros de sensibilidade e especificidade, assim, a acurácia do teste pôde descriminar indivíduos doentes de não doentes. A utilização de técnicas sorológicas no diagnóstico da linfadenite caseosa permitirá o controle epidemiológico da doença, porém não substitui o cultivo microbiológico, técnica considerada padrão ouro, e pode ser utilizada como teste de triagem ou mesmo na comercialização de animais, visto que a doença muitas vezes é de caráter inaparente, o que inviabiliza o diagnóstico clínico e microbiológico.Caseous lymphadenitis is an infectious disease of worldwide occurrence that affects sheep and goats, characterized by the formation of abscesses in superficial lymph nodes, and sometimes internal organs and lymph nodes. It is caused by Corynebacterium pseudotuberculosis, responsible for great economic losses in goat and sheepproduction. This study aimed to develop a sensitive and specific serological test to detect anti- C. pseudotuberculosis in sheep. The animals were divided into two groups, the first one encompassing the ones with apparent caseous lymphadenitis symptoms (n = 103), where serum samples and puncture of enlarged lymph nodes were collected, and the second one with animals with no apparent symptoms (n = 50) of which samples (lung fragments, serum and and mediastinal lymph nodes) were inspected and harvested in the slaughterhouse. In both groups the presence and absence of the disease was carried through the evidence of microbiological culture and PCR, considered as the standard for the groups classification. Microbiological culture results of animals with apparent symptoms was 53.5% (55/103) identified as C. pseudotuberculosis by biochemical tests, and allied to PCR, 46.5% (48/103) of the samples were positive for C. pseudotuberculosis. Regarding animals without apparent symptoms, all samples were negative in microbiological culture and PCR (0/50). For the standardization of indirect ELISA we used 42 positive sera and 43 negative sera confirmed by microbiological culture and PCR for caseous lymphadenitis. The mean absorbance was 1.88 with standard deviation of 0.43 for the positive samples, and for negative samples the average was 0.71 and standard deviation 0.18. Thus we considered as positive, the samples with DO value > 1.1 and negative <1.1. The graphical analysis employed in this study, ROC curve, allowed us to find the cutoff value allied to the association of sensitivity and specificity parameters, thus the test accuracy was able to discriminate sick from not sick individuals. The use of serological techniques for the diagnosis of caseous lymphadenitis will allow the epidemiological control of the disease, but does not replace the microbiological culture, considered as the gold standard technique, and can be used as a screening test or animals trade, since the disease condition often is unapparent, which derails the clinical diagnosis and microbiological.
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Virgens, Carlos Jose Santos. "Desenvolvimento de ensaio de elisa indireto para detecção especifica de Igg anti-toxocara em cães." Universidade Federal da Bahia, 2015. http://repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/20367.
Full textAbstract:
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CONS NAC DE DESENVOLVIMENTO CIENTIFICO E TECNOLOGICO - Programa TWAS/CNPq
Diversos são os parasitos intestinais capazes de acometer cães e gatos, e destacam-se aqueles capazes de causar impacto na saúde pública por tratar-se de zoonoses. Dentre eles, o Toxocara canis e o Toxocara cati, agentes causadores das toxocaríases canina e felina respectivamente que são responsáveis pelas síndromes larva migrans visceral e ocular do homem. Os animais domésticos integram o ciclo evolutivo como hospedeiros definitivos criando focos de transmissão em ambientes comuns ao lazer humano. As infecções podem produzir uma gama de sinais clínicos que variam desde um quadro subclínico até a morte do animal. O propósito do presente estudo foi desenvolver um método de ensaio imunoenzimático de ELISA indireto com especificidade ótima para o diagnóstico de toxocaríase em cães, determinada pela absorção de imunoglobulinas que reagem cruzadamente com antígenos associados a outras parasitoses. Foram selecionados 140 cães em condições de risco de infecção para determinação da soroprevalência de toxocaríase através do ensaio imunoenzimático indireto (ELISA). Os resultados do ELISA foram comparados à frequência parasitária obtida por exames coprológicos pela técnica de Willes-Molay e Sedimentação espontânea. Para realização do ELISA indireto, padronizou-se o teste com antígeno excretório-secretório de T. canis, produzido a partir de larvas dos parasitos. Durante o desenvolvimento do método ELISA, foi incluída uma etapa em que amostras de soro foram absorvidas em antígenos de Ascaris lumbricoides, Trichuris sp., Ancylostoma caninum e Dipylidium caninum para minimizar a reatividade cruzada e aumentar a especificidade do teste. A análise parasitológica evidenciou 70,7% de amostras fecais positivas, distribuídas como infecções individuais por Trichuris sp em 28,57%, Ancilostomídeos em 9,29%, T. canis em 1,43%, Cystoisospora em 0,7%, além de infecções mistas. As condições ideais para realização da sorologia foram padronizadas, absorvendo as amostras com 4 mg/ml de antígeno somático dos demais parasitos, sensibilização com 3 µg/mL de Antígeno excretório/secretório de T. canis, diluições dos soros e anticorpo secundário em 1:1000 e 1:2000 respectivamente. A soroprevalência foi determinada em 61,4% (86/140), utilizando o ponto de corte de 0,275. A sensibilidade do teste ELISA foi determinada em 100% e a especificidade em 94,44%. Evidenciou-se, portanto, uma baixa positividade do exame parasitológico contrapondo-se à alta soropositividade de detecção de animais com toxocaríase. Assim, o ELISA desenvolvido no presente estudo contribui para atender ao necessário desenvolvimento de novos testes diagnósticos específicos, capazes de diagnosticar principalmente os animais em estágios subclínicos, devido ao impacto que podem acarretar à saúde pública. Concluímos que os exames sorológicos devem ser empregados para complementar o diagnóstico parasitário canino e principalmente auxiliar na elaboração de medidas profiláticas.
There are several intestinal parasites able to affect dogs and cats, and stand out from those capable of causing public health impact because it is of zoonoses. Among them, T. canis and T. cati, causative agents of canine and feline toxocariases respectively, are responsible for the larva migrans syndromes visceral and ocular of humans. Domestic animals are part of the life cycle as definitive hosts becoming transmission focuses for the common human leisure environments. Infections can produce a range of clinical signs ranging from subclinical conditions to the death of the animal. The purpose of this study was to develop an ELISA immunoenzymatic assay method with good specificity for the diagnosis of toxocariasis in dogs, determined by the absorption of immunoglobulins which cross-react with antigens associated with other parasites. One hundred and forty dogs were selected in places with infection risk conditions to determine the seroprevalence of toxocariasis by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The ELISA results were compared to parasitic frequency obtained by stool tests by Willes-Molay technique and spontaneous sedimentation. To perform the ELISA, standardization was performed by using excretory-secretory products of T. canis larvae as antigen. During the development of the ELISA, a step was included, in which serum samples were adsorbed with somatic antigens of Ascaris lumbricoides, Trichuris sp., Dipylidium caninum, Ancylostoma caninum to minimize cross-reactivity and increase the specificity of the test. The parasitological analysis resulted in 70.7% positive fecal samples, distributed as individual infections by Trichuris sp in 28.57%, Hookworms in 9.29%, T. canis in 1.43%, Cystoisospora 0.7%, and mixed infections (30, 7%). The optimum ELISA conditions were standardized as absorbing samples with 4 mg / mL of somatic antigen of other parasites; sensitizing wells with 3 µg/mL of Ag-E/S Toxocara and diluting sera and secondary antibody at 1: 1,000 and 1: 2,000 respectively. The seroprevalence was determined in 61.4% (86/140), using a cutoff value of 0.275. The sensitivity of the ELISA was of 100% and specificity of 94.44%. The different results between ELISA and parasitological tests obtained in the present study reflects the need for development of new specific tests able to diagnose mainly animals at subclinical stages due to the impact that may lead to public health. Therefore, the ELISA test that was developed in this work contributes as an useful method to complement the diagnosis of canine worm infections, so that to primarily assist in developing preventive measures.
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Moraes, Jader Rogerio Cappi. "Imunocromatografia, imunofluorescência indireta, ELISA e exame parasitológico "pós morten" no diagnóstico da leishmaniose visceral canina." Universidade Federal de Minas Gerais, 2006. http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8BZDJV.
Full textAbstract:
Validation of an immunoassay in serum from dogs in Brazil, in endemic regions, is its adoption by clinical professionals and the public service the control of canine visceral leishmaniasis. This study compared the results of the techniques of IFAT, ELISA, immunoassay and stool examination post-mortem samples not subjected to hemolysis, and hemolytic blood samples on filter paper soaked. To conduct the research was used in 30 serum samples from Belo Horizonte - MG, they all confirmed pair serum screening did not undergo the process of hemolysis. The immunoassay evaluated showed sensitivity and specificity for serodiagnosis of canine visceral leishmaniasis that enable its adoption in Brazil and could be used instead of IFA, serum samples without hemolysis by not showing statistically significant differencesA validação de um teste imunocromatográfico rápido em soro de cães no Brasil, em regiões consideradas endêmicas, será sua adoção pelos profissionais da clínica e do serviço público do controle da leishmaniose visceral canina. Nesta pesquisa comparou-se os resultados das técnicas de RIFI, ELISA, teste imunocromatográfico e exame parasitológico pós-mortem em amostras não submetidas à hemólise, hemolisadas e amostra de sangue embebidas em papel filtro. Para execução da pesquisa utilizou-se de 30 amostras de soros proveniente de Belo Horizonte MG, todas elas confirmadas par exame de soro não submetidas ao processo de hemólise. O teste imunocromatográfico avaliado apresentou valores de sensibilidade e especificidade para o diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral canina que permitem a sua adoção no Brasil, podendo ser utilizado em substituição a RIFI, em amostras de soro sem homólise, por não apresentar diferenças estatísticas significativas.
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Brum, Clarice Brinck. "Desenvolvimento de um ELISA indireto com antígenos recombinantes para detecção de anticorpos contra Mycoplasma hyopneumoniae." Universidade Federal de Pelotas, 2011. http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/123456789/1288.
Full textAbstract:
Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2011-03-31Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of swine enzootic pneumonia (EP), one of the most important respiratory diseases which affect swine worldwide. This disease is characterized by retarded development, especially in animals in the growing and finishing phase, causing significant economic losses in the herd. The presumptive diagnostic is based on clinical signs and lesions, however, laboratory tests are needed for a conclusive diagnosis of disease. Although the culture of the agent is considered the gold standard, it is not used routinely because of the slow growth of the bacterium and interference by other mycoplasmas. Therefore, there is a need for development of more sensitive and specific diagnostic methods for this disease. This study aimed the standardization and validation of an ELISA for detection of antibodies against M. hyopneumoniae. For this, six recombinant proteins of M. hyopneumoniae considered species-specific (P46, P95, P97 like, P102AB, Lppt and hypothetical protein 987) were evaluated. They were used as antigen for coating ELISA plates. Each of these proteins was confronted with three sets of pig serum. The sensitivity and specificity obtained for each protein were respectively: P95, 74.3% e 97.6%; P46, 53.7% e 97.6%; Lppt, 28.4% e 97.2%; 987, 27.1% e 96.1%; P102AB, 65.5% e 97.6%; P97 like, 72.6% e 97.2%. Using the set cut-off point, we calculated the positive predictive value, which ranged from 17.4% (for prevalence of 10%) to 99.4% (for prevalence of 90%), and negative predictive value which ranged from 34.5% to 99.5% depending on the prevalence of disease in a given area. These data show that the proteins P95, P46, P97 and P102AB like are potential targets to be use in diagnostic tests to detect antibodies against M. hyopneumoniae.
O Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da Pneumonia Enzoótica Suína (PES), uma das principais doenças respiratórias que acomete suínos no mundo. Esta doença é caracterizada por retardo no desenvolvimento, principalmente em animais em fase de crescimento e terminação, ocasionando perdas econômicas significativas no rebanho. O diagnóstico presuntivo é baseado em sinais clínicos e na presença de lesões, no entanto, testes laboratoriais são necessários para o diagnóstico conclusivo da doença. Embora o cultivo do agente seja considerado o padrão ouro, o mesmo não é usado como rotina, devido ao crescimento extremamente lento deste agente e a interferência por outros micoplasmas. Desta forma, há a necessidade do desenvolvimento de métodos de diagnósticos mais sensíveis e específicos para esta doença. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um ELISA indireto para a detecção de anticorpos contra M. hyopneumoniae. Para isso, foram testadas individualmente seis proteínas recombinantes de M. hyopneumoniae expressas em E. coli, consideradas espécie-específica (P46, P95, P97 like, P102AB, Lppt e proteína hipotética 987), utilizadas como antígeno na sensibilização de placas de ELISA. Cada uma destas proteínas foi confrontada com 3 categorias de soros de suínos. A sensibilidade e especificidade obtida para cada uma das proteínas foram respectivamente as seguintes: P95, 74,3% e 97,6%; P46, 53,7% e 97,6%; Lppt, 28,4% e 97,2%; 987, 27,1% e 96,1%; P102AB, 65,5% e 97,6%; P97 like, 72,6% e 97,2%. Usando o ponto de corte definido, foi calculado o valor preditivo positivo que variou de 17,4% (para prevalências de 10%) a 99,4% (para prevalências de 90%), e o valor preditivo negativo que variou de 34,5% a 99,5% dependendo da prevalência da doença em uma determinada área. Estes dados mostram que proteínas como a P95, P46, P102AB e P97 like são potenciais alvos para uso em testes de diagnóstico para detecção de anticorpos contra M. hyopneumoniae.
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Hoyos, Sifuentes Luis Antonio. "Evaluación del exámen hematológico y la técnica indirecta de ELISA en el diagnóstico clínico-laboratorial de Ehrlichiosis canina." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2005. https://hdl.handle.net/20.500.12672/717.
Full textAbstract:
La Ehrlichiosis canina es una enfermedad causada por diversos microorganismos rickettsiales, principalmente Ehrlichia canis. Está reportada alrededor del mundo como una enfermedad zoonótica y en el Perú fue detectada en 1982. El diagnóstico clínico se basa en la detección de signos, tales como depresión, fiebre, anorexia, mucosas pálidas, pérdida de peso, linfadenopatía, hifema y eritema. En el laboratorio clínico, la hematología, bioquímica sanguínea, uroanálisis y pruebas serológicas son de gran utilidad en el diagnóstico definitivo. En el presente estudio se determinó el grado de concordancia entre el examen hematológico y la técnica indirecta de ELISA, ya que la relación entre ambas pruebas es desconocida en nuestro medio. 97 perros fueron obtenidos provenientes del Laboratorio de Patología Clínica en la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Se encontró un 84.67 ± 10.98% de grado de concordancia. Asimismo, se determinó que la trombocitopenia, leucopenia, anemia y el antecedente de garrapatas fueron estadísticamente significativos (P es menor que 0.05) en relación a la presencia de la enfermedad. El porcentaje de Ehrlichiosis canina en perros cruzados y de raza Pastor Alemán fue mayor en relación a las demás razas. Los perros de raza nórdica (Siberiano y Samoyedo) presentaron significancia estadística a padecer cuadros hemorrágicos por esta enfermedad. Finalmente, se encontró una concordancia alta entre ambas pruebas, estos resultados evidencian que en nuestro país la hematología es de gran importancia en el diagnóstico de la Ehrlichiosis canina, quedando la serología como prueba de apoyo en casos confusos.--- Canine Ehrlichiosis is a disease caused by different rickettsial microorganisms, principally by Ehrlichia canis. It has been reported around the world like a zoonotic disease and in our country was detected in 1982. The clinic diagnosis is based in detection of signs like depression, fever, anorexia, pallor of mucous membranes, lost of weight, lymphadenophaty, hiphema and erythema. In Clinical Laboratory, the hematology, sanguineous biochemistry, urine-analysis and serologic tests are usefulness in definitive diagnosis. The present study determinated the concordance grade between the hematology test and indirect ELISA assay, because la relationship between both tests is unknown in our country. 97 dogs were obtained from the Clinical Pathology Laboratory in Veterinary Medicine Faculty of San Marcos National University. We are found 84.67 ± 10.98% of concordance grade. Likewise, was determinated that thrombocytopenia, leukopenia, anemia and tick contact antecedent were significant (P is less than 0.05) in relation with evidence of disease. The percent of cross-breed dogs and German Shepherd dogs (GSDs) with Canine Ehrlichiosis was higher than other breeds. The hemorrhage signs were statistic significance only in Nordic races (Siberian Husky and Samoyedo). Finally, we found a high concordance grade between both tests, this results reveal that hematology in our country is very important in the Canine Ehrlichiosis diagnostic and serology is a support test in confuse cases.
Tesis
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Pinedo, Reyes Karen Milagros. "Frecuencia de Toxoplasma gondii y Neospora caninum en vicuñas en la provincia de Yauli - Junín y concordancia entre las técnicas de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y ELISA indirecta." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2012. https://hdl.handle.net/20.500.12672/12122.
Full textAbstract:
Estima la frecuencia de anticuerpos contra toxoplasma gondii y Neospora caninum en vicuñas de la provincia de Yauli–Junín, así como también determinar el grado de concordancia entre las pruebas de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y ELISA indirecta. Se colectaron 79 muestras de sangre de vicuñas, obtenidas durante un “Chaku”, técnica ancestral de arreo que permite la captura de animales vivos para la esquila, realizado en el distrito de Paccha provincia de Yauli, ubicado en el departamento de Junín. Las muestras fueron trasladadas al laboratorio de Microbiología y Parasitología Sección Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM, para su posterior análisis. El diagnóstico para ambas enfermedades se realizó utilizando las pruebas de ELISA indirecta e IFI, en cada caso. La frecuencia hallada para Toxoplasma gondii fue de 5.06 y 3.08% por las pruebas de ELISA indirecta y la de IFI respectivamente; no encontrándose reacción seropositiva para Neospora caninum con las dos pruebas usadas. Con relación al grado de asociación, entre las dos pruebas usadas en el diagnóstico de Toxoplasma gondii se encontró un valor de kappa de 0.85, lo cual significa que la concordancia ofrecida por ambas pruebas es muy buena.Tesis
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Martins, Marilda Ferreira. "Comparação entre testes IDGA (p26) e ELISA indireto (rgp 90) no diagnóstico da anemia infecciosa eqüina." Universidade Federal de Minas Gerais, 2004. http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8C5FXN.
Full textAbstract:
The ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) using recombinant rgp90 (Reis, 1997) and classical test AGID (Agar Gel Immunodiffusion) p26 were compared in order to validate the ELISA for use in the diagnosis of EIA. We collected 1007 serum samples from horses in different regions of Minas Gerais in a total of 32 municipalities and 156 properties. The results of the ELISA based on areas of serological interpretation. Sera which had optical density (OD) smaller than 0.220 were considered negative and those who showed OD equal to or greater than 0.220 indeterminate (to .263) and positive ( 0.264). The AGID test detected 95 positive sera (9.4%) while the ELISA 128 (12.7%). Sensitivity comparison of the two tests was 97.81% and specificity of 96.16%. Ten animals in the negative and indeterminate AGID / ELISA positive were traced to a second collection (three of them with suggestive signs of EIA) and tested by ELISA, AGID, and DOT BLOT CELISA. An animal became positive in AGID (CELISA, DOT p26 and gp90 positive) and in the first examination was detected by ELISA. The ELISA showed 90 rgp be sensitive, specific and rapid and can be used as screening tests and surveys enable state officialsO teste ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), utilizando o antígeno recombinante rgp90 (Reis, 1997), e o teste clássico IDGA (Imunodifusão em Gel de Agar) p26 foram comparados com o objetivo de validar o ELISA para uso no diagnostico da AIE. Foram coletadas 1007 amostras de soros de eqüídeos de diversas regiões de Minas Gerais perfazendo um total de 32 municípios e 156 propriedades. Os resultados do teste ELISA basearam-se em áreas de interpretação sorológica. Os soros que apresentaram densidade ótica (DO) menores que 0,220 foram considerados negativos e os que apresentaram DO iguais ou maiores que 0,220 indeterminados (até 0,263) e positivos (0,264). O IDGA detectou 95 soros positivos (9,4%) enquanto que o ELISA 128 (12,7%). A sensibilidade comparada dos dois testes foi de 97,81% e especificidade de 96,16%. Dez animais negativos no IDGA e indeterminados/positivos no ELISA foram localizados para uma segunda coleta (três deles com sinais compatíveis de AIE) e testados pelo ELISA, IDGA, CELISA e DOT BLOT. Um animal tornou-se positivo no IDGA (CELISA, DOT p26 e gp90 positivos) e já no primeiro exame era detectado pelo ELISA. O ELISA rgp 90 mostrou ser sensível, específico e rápido podendo ser utilizado como teste de triagem e viabilizar os levantamentos oficiais do estado
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TELES, José Andreey Almeida. "Desenvolvimento e avaliação de um teste ELISA indireto para o diagnóstico sorológico do mormo em equídeos." Universidade Federal Rural de Pernambuco, 2012. http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/4636.
Full textAbstract:
Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-08T14:30:49Z
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Jose Andreey Almeida Teles.pdf: 1056555 bytes, checksum: 1cd9d8325b9ce830ca450c9fea318bad (MD5)Made available in DSpace on 2016-06-08T14:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Andreey Almeida Teles.pdf: 1056555 bytes, checksum: 1cd9d8325b9ce830ca450c9fea318bad (MD5) Previous issue date: 2012-02-13
Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq
Glanders is an infectious-contagious disease of acute or chronic character which principally affects horses, causing enormous losses in the productive chain of this animal. To control the disease, the Ministry of Agriculture, Husbandry and Supply instituted mandatory sanitation measures in the entire national territory which include an official diagnosis through the complement fixation (CF) test, maleinization and sacrifice of the animals that are positive. Nowadays the kits used for the diagnosis of the disease are imported, making their routine application difficult and more expensive. The objective of this study was to standardize an indirect ELISA test, using the proteic extract of Burkholderia mallei isolated from a carrier horse in the state of Pernambuco. The samples were cultivated in 10% blood agar and incubated for 48h at 37ºC; later, one of the isolated colonies was characterized phenotypically and genotypically and immediately cultivated in brain heart infusion (BHI) for enrichment; then it was peaked (repicada) for the Dor-set Henley medium which was incubated at 37ºC under 60rpm for eight weeks. To standardize the test the Protein G Peroxidase Sigma Conjugate was used in the dilution of 1:90.000, with serums diluted in 1:100 and the antigen in 1:400. Sixty serums were used as negative controls, tested before the CF to determine the cutting point which was 0.042nm. After establishing the standardization, 300 samples were tested, of which 99% (297) were in agreement with the results obtained in the CF. At the end, of assay presented 100% sensibility and 98.2% specificity, with predictive (preditivo) positive and negative values of 97.7% and 100% respectively. The Kappa concordance test was 0.98 and the intra and interplac repeatability were 8.8% and 10.3% respectively. From the results obtained, it is possible to affirm that the indirect ELISA test can be used as an efficient diagnosis tool. However, more essays must be carried out to consolidate the reliability of this test.
O mormo é uma enfermidade infecto-contagiosa de caráter agudo ou crônico que acomete principalmente os equídeos, causando enormes prejuízos na cadeia produtiva do cavalo. Para controlar a enfermidade, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento instituiu medidas sanitárias obrigatórias em todo território nacional que incluem o diagnóstico oficial pela fixação do complemento (FC), maleinização e sacrifício dos animais positivos. Os kits atuais utilizados no diagnóstico da doença são importados, dificultando e encarecendo sua aplicação na rotina. Objetivou-se com este estudo padronizar um teste de ELISA indireto utilizando o extrato protéico de Burkholderia mallei isolada a partir de equídeo portador no estado de Pernambuco. As amostras foram cultivadas em ágar sangue 10%, incubada por 48h a 37ºC; posteriormente caracterizou-se fenotípica e genotipicamente uma das colônias isoladas, e em seguida a cultivou em BHI para enriquecimento; logo após, esta foi repicada para o meio Dor-set Henley o qual foi incubado a 37ºC sob 60rpm por oito semanas. Para padronização do teste utilizouse o conjugado Proteína G Peroxidase Sigma na diluição de 1:90.000, com soros diluídos em 1:100 e o antígeno em 1:400. Utilizou-se 60 soros como controle negativo testados frente à FC para determinação do ponto de corte o qual ficou em 0,042nm. Feitas as padronizações, foram testadas 300 amostras, onde 99% (297) foram concordantes com os resultados obtidos na FC. Ao final, o ensaio apresentou 100% de sensibilidade e 98,2% de especificidade, com valores preditivo positivo e negativo de 97,7% e 100% respectivamente. O teste de concordância kappa foi 0,98 e a repetibilidade intra e interplaca ficaram em 8,8% e 10,3% respectivamente. Diante dos resultados obtidos durante os ensaios, atesta-se que o teste de ELISA indireto pode ser utilizado como uma ferramenta de diagnóstico eficiente. Entretanto, mais ensaios devem ser realizados visando consolidar a confiabilidade do referido teste.
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Mogollón, Almidón Miguel Vicente. "Estandarización y evaluación de un ELISA indirecto para la detección de anticuerpos IgG anti Toxoplasma gondii en población peruana." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2016. https://hdl.handle.net/20.500.12672/5378.
Full textAbstract:
Estandariza y evalúa una prueba ELISA casera para la detección de anticuerpos IgG anti T. gondii en población peruana. Se sometió a evaluación mediante un estuche referencial de ELISA mexicano, un total de 178 sueros de personas de Perú, los cuales fueron catalogados como positivos o negativos a la presencia de anticuerpos IgG anti T. gondii. Para la determinación del punto de corte del ELISA casero se emplearon curvas ROC y se determinaron los parámetros diagnósticos de la técnica; así como la correlación inter e intra ensayo.Tesis
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Costa, Marisa da. "Détection des Brucella par immunofluorescence indirecte, ELISA par immunocapture et amplification en chaîne par polymérase : application au diagnostic des brucelloses animales." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO10001.
Full textAbstract:
Trois methodes permettant d'ameliorer le diagnostic direct des brucelloses animales a partir d'echantillons biologiques ont ete developpees: la technique d'amplification en chaine par polymerase (pcr), l'immunofluorescence indirecte (ifi) et l'elisa par immunocapture. L'utilisation des genes arn16s, bcsp31, dnaj, dnak, groel et htra comme cibles de la pcr a permis la detection de l'ensemble des especes et biovars du genre brucella ; aucune difference n'a ete retrouvee apres simple et double amplification, analyse de restriction des fragments amplifies et hybridation avec des sondes internes specifiques. Parmi les 98 microorganismes etudies, seuls ochrobactrum anthropi et phyllobacterium spp. , bacteries genetiquement proches des brucella, ont montre des similitudes sur certains de ces genes. L'etude realisee pour la detection des genes arn16s et bcsp31 dans des echantillons biologiques a montre une bonne specificite mais sa sensibilite s'est montree inferieure a celle de la bacteriologie classique. Les echantillons paucibacteriens ont ete les plus difficilement detectes ; leur inactivation prealable par la chaleur et les techniques d'extraction ont influence grandement cette sensibilite. La technique ifi realisee au moyen de serums polyclonaux anti-brucella, s'est averee moins sensible et moins specifique que la bacteriologie classique. La technique elisa par immunocapture au moyen d'anticorps monoclonaux et polyclonaux anti-lipopolyoside lisse (lps-s) a, quant a elle, montre une excellente specificite mais une sensibilite globale inferieure a celle de la bacteriologie classique. Des reactions positives avec les deux types d'anticorps utilises ont ete retrouvees avec les souches de yersinia enterocolitica o:9, dont le lps-s possede des epitopes communs avec celui des brucella. La bacteriologie classique reste donc la technique de reference en matiere de diagnostic direct des brucelloses animales. La pcr et l'elisa par immunocapture permettraient neanmoins, au prix d'ameliorations techniques, d'accelerer le diagnostic de la brucellose
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Zanette, Maurício Franco [UNESP]. "Comparação entre os métodos de ELISA, imunofluorescência indireta e imunocromatografia para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2006. http://hdl.handle.net/11449/92183.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2006-10-04Bitstream added on 2014-06-13T18:53:46Z : No. of bitstreams: 1
zanette_mf_me_araca.pdf: 477117 bytes, checksum: 33b9b6dcc94d610c9edaafc75071b1a8 (MD5)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A importância do diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil reside no fato de que, dentre as estratégias de controle da doença indicadas pela Fundação Nacional de Saúde, encontra-se a eliminação do cão doméstico sorologicamente positivo. Desta forma, torna-se necessário o conhecimento da sensibilidade e da especificidade das provas sorológicas utilizadas para a correta identificação destes animais. Para avaliar o desempenho dos métodos sorológicos no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, foram determinadas e comparadas as características dos métodos de ELISA, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e imunocromatografia, adotando-se como padrão o método parasitológico. Para tanto, foram utilizados 50 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral e 45 cães sadios provenientes de área não endêmica para a doença. A RIFI revelou sensibilidade de 98% e especificidade de 91,1%, além de ótima concordância com o método parasitológico (Kappa = 0,893). Os métodos de ELISA e de imunocromatografia apresentaram boa concordância com o método parasitológico (coeficientes Kappa de 0,788 e 0,769, respectivamente) e valores de sensibilidade de 94% e 86% e especificidade de 84,4% e 91,1%, respectivamente. Com relação à ocorrência de reações cruzadas com leishmaniose visceral, das 14 amostras de soro positivas para doença de Chagas, nove (64,3%) foram consideradas positivas pela técnica de ELISA e seis (42,9%) pela RIFI, não se observando resultados positivos por imunocromatografia. Das 13 amostras de soros de animais portadores de erliquiose, uma (7,7%) apresentou resultado positivo por meio dos métodos de ELISA e de imunocromatografia.
The importance of canine visceral leishmaniasis diagnosis in Brazil is based on the fact that, according to the Ministry of Health, a seropositive dog must be culled. Thus, itþs important to know the sensitivity and specificity values of the methods employed for the diagnosis of the disease. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of canine leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA, indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunochromatographic test using the parasitological test as the gold standard. For this purposal, the study was carried out with a group of 50 naturally infected dogs from an endemic area and 45 healthy dogs from a non endemic area for visceral leishmaniasis. The IFAT was 98% sensitive and 91,1% specific, and showed a very good concordance with the parasitiological test (k = 0,893). The ELISA showed a sensitivity of 94% and specificity of 84,4% and when kappa index was analysed, a good concordance was obseved (k = 0,788). The immunochromatographic test was 86% sensisitive and 91,1% specific and showed a good concordance with the parasitiological test (k = 0,769). About the occurrence of cross reaction with visceral leishmaniasis, nine (64,3%) out of 14 positive samples for Chagas disease were positive by ELISA and six (42,9%) out of 14 were positive by IFAT, while the immunocromatographic test didn t yield any positive result. One (7,7%), out of 13 positive samples for ehrlichiosis, was positive by ELISA and immunocromatografic test. Five (83,3%) out of six positive samples for ehrlichiosis and babesiosis were positive by ELISA and three (50%) by immunocromatography, while IFAT didnþt yield any positive result. Five (50%) out of 10 positive samples for toxoplasmosis were positive by IFAT and one (10%) by immunocromatography.
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Silva, Ketherson Rodrigues [UNESP]. "Desenvolvimento e aplicação do Elisa indireto com a nucleoproteína recombinante (NPR) do vírus da doença de Newcastle." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2015. http://hdl.handle.net/11449/128147.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2015-06-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:23Z : No. of bitstreams: 1
000848339.pdf: 757255 bytes, checksum: 9dcc3acba66df8e1de6d584184ea3dc8 (MD5)O vírus da doença de Newcastle (VDN) provoca uma das doenças infecciosas mais importantes para as aves domésticas, devido aos elevados impactos negativos para a saúde aviária e a interposição de barreiras comerciais para a indústria avícola. Isso requer a constante evolução de técnicas cada vez mais eficazes de diagnóstico para esse vírus. Neste contexto, a nucleoproteína (NP) de VDN é um dos componentes antigênicos ideais para uso no imunodiagnóstico, porque é mais conservada e tem uma elevada imunogenicidade, de modo que NP pode melhorar o desempenho de sorodiagnóstico do VDN. Assim, este estudo teve como objetivo determinar os perfis de produção de anticorpos (Acs) anti-VDN dos isótipos IgA, IgM e IgG, usando NP recombinante (NPr) do VDN como um antígeno alvo. Amostras de soro e de lágrima foram colhidas de plantéis comerciais de aves de postura e também de aves SPF infectadas experimentalmente com a estirpe vacinal LaSota do VDN. O método de ELISA indireto, usando a NPr do VDN como antígeno de revestimento, foi padronizado e utilizado de forma bem sucedida para a detecção de Acs de galinha anti-VDN dos isótipos IgG e IgM em amostras de soro, e de ambos os isotipos mais IgA para amostras de secreção lacrimal. Ainda, este método de ELISA com NPr foi capaz de diferenciar amostras positivas das negativas para o VDN de soro e de lágrima, e nas aves submetidas à infecção experimental com a estirpe vacinal LaSota, a soroconversão foi detectada mais precocemente para os anticorpos do isótipo IgA (lágrima) e IgM (lágrima e soro), que alcançaram uma concentração máxima no sétimo dia após a infecção (pi), enquanto que os níveis de anticorpos IgG anti-VDN começaram a ser detectados mais tardiamente e atingiram um pico aos 14 dias pi. Além disso, a aplicação do ELISA em amostras de soro e de lágrima colhidas a partir de plantéis comerciais de galinhas de postura, para detecção de dois...
Newcastle disease virus (NDV) causes one of the most important infectious diseases for chickens, due to the high negative impacts for health and the demands of trade barriers to poultry industry. This requires the constant development of increasingly more effective diagnostic techniques. In this context, the nucleoprotein (NP) of VDN is one of the ideal antigenic components for immunodiagnostics, because it is more conserved and has a high immunogenicity, so that NP may improve the performance of serodiagnosis of NDV. Thus, this study aimed to determine the production profiles of anti-NDV antibodies of IgA, IgM and IgG isotypes, using recombinant NP (rNP) of VDN as a target antigen. Serum and tear samples were collected from commercial poultry flocks, and from SPF birds experimentally infected with the LaSota vaccine strain of NDV. The indirect ELISA method using the NPr VDN as coating antigen was standardized and used for the detection of anti-NDV chicken antibody isotypes IgG, IgM in serum samples and antibodies of both isotypes added of IgA isotype for lacrimal secretion samples. This ELISA method with NPr was effectively able to differentiate NDV-positive and NDV-negative serum and tear samples, and in the birds subjected to a experimental infection with vaccine strain, the seroconversion was detected earlier for the antibodies of the IgA (tear) and IgM (tear and serum) isotypes, which have reached maximum concentration on the 7th day post-infection (pi), while the IgG anti-NDV antibody levels began to be detected later and peaked at 14 days pi. Moreover, the application of ELISA in serum and lachrymal samples collected from commercial layer chickens,with the detection of two (IgG and IgM for serum samples) or three isotypes (IgG, IgM and IgA for lachrymal samples) of anti-NDV antibodies, resulted in the highest detection frequencies than each antibody isotype was individually detected. By comparing the results of serum samples for ...
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Silva, Ketherson Rodrigues. "Desenvolvimento e aplicação do Elisa indireto com a nucleoproteína recombinante (NPR) do vírus da doença de Newcastle /." Jaboticabal, 2015. http://hdl.handle.net/11449/128147.
Full textAbstract:
Orientador: Helio José MontassierBanca: Ricardo Luiz Moro de Sousa
Banca: Antonio Carlos Paulillo
Banca: Ricardo de Albuquerque
Banca: Adolorata Aparecida Bianco Carvalho
Resumo: O vírus da doença de Newcastle (VDN) provoca uma das doenças infecciosas mais importantes para as aves domésticas, devido aos elevados impactos negativos para a saúde aviária e a interposição de barreiras comerciais para a indústria avícola. Isso requer a constante evolução de técnicas cada vez mais eficazes de diagnóstico para esse vírus. Neste contexto, a nucleoproteína (NP) de VDN é um dos componentes antigênicos ideais para uso no imunodiagnóstico, porque é mais conservada e tem uma elevada imunogenicidade, de modo que NP pode melhorar o desempenho de sorodiagnóstico do VDN. Assim, este estudo teve como objetivo determinar os perfis de produção de anticorpos (Acs) anti-VDN dos isótipos IgA, IgM e IgG, usando NP recombinante (NPr) do VDN como um antígeno alvo. Amostras de soro e de lágrima foram colhidas de plantéis comerciais de aves de postura e também de aves SPF infectadas experimentalmente com a estirpe vacinal LaSota do VDN. O método de ELISA indireto, usando a NPr do VDN como antígeno de revestimento, foi padronizado e utilizado de forma bem sucedida para a detecção de Acs de galinha anti-VDN dos isótipos IgG e IgM em amostras de soro, e de ambos os isotipos mais IgA para amostras de secreção lacrimal. Ainda, este método de ELISA com NPr foi capaz de diferenciar amostras positivas das negativas para o VDN de soro e de lágrima, e nas aves submetidas à infecção experimental com a estirpe vacinal LaSota, a soroconversão foi detectada mais precocemente para os anticorpos do isótipo IgA (lágrima) e IgM (lágrima e soro), que alcançaram uma concentração máxima no sétimo dia após a infecção (pi), enquanto que os níveis de anticorpos IgG anti-VDN começaram a ser detectados mais tardiamente e atingiram um pico aos 14 dias pi. Além disso, a aplicação do ELISA em amostras de soro e de lágrima colhidas a partir de plantéis comerciais de galinhas de postura, para detecção de dois...
Abstract: Newcastle disease virus (NDV) causes one of the most important infectious diseases for chickens, due to the high negative impacts for health and the demands of trade barriers to poultry industry. This requires the constant development of increasingly more effective diagnostic techniques. In this context, the nucleoprotein (NP) of VDN is one of the ideal antigenic components for immunodiagnostics, because it is more conserved and has a high immunogenicity, so that NP may improve the performance of serodiagnosis of NDV. Thus, this study aimed to determine the production profiles of anti-NDV antibodies of IgA, IgM and IgG isotypes, using recombinant NP (rNP) of VDN as a target antigen. Serum and tear samples were collected from commercial poultry flocks, and from SPF birds experimentally infected with the LaSota vaccine strain of NDV. The indirect ELISA method using the NPr VDN as coating antigen was standardized and used for the detection of anti-NDV chicken antibody isotypes IgG, IgM in serum samples and antibodies of both isotypes added of IgA isotype for lacrimal secretion samples. This ELISA method with NPr was effectively able to differentiate NDV-positive and NDV-negative serum and tear samples, and in the birds subjected to a experimental infection with vaccine strain, the seroconversion was detected earlier for the antibodies of the IgA (tear) and IgM (tear and serum) isotypes, which have reached maximum concentration on the 7th day post-infection (pi), while the IgG anti-NDV antibody levels began to be detected later and peaked at 14 days pi. Moreover, the application of ELISA in serum and lachrymal samples collected from commercial layer chickens,with the detection of two (IgG and IgM for serum samples) or three isotypes (IgG, IgM and IgA for lachrymal samples) of anti-NDV antibodies, resulted in the highest detection frequencies than each antibody isotype was individually detected. By comparing the results of serum samples for ...
Doutor
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Zanette, Maurício Franco. "Comparação entre os métodos de ELISA, imunofluorescência indireta e imunocromatografia para o diagnóstico da leishmaniose visceral canina /." Araçatuba : [s.n.], 2006. http://hdl.handle.net/11449/92183.
Full textAbstract:
Orientador: Mary Marcondes FeitosaBanca: Márcia Dalastra Laurenti
Banca: Aparecido Antonio Camacho
Resumo: A importância do diagnóstico da leishmaniose visceral canina no Brasil reside no fato de que, dentre as estratégias de controle da doença indicadas pela Fundação Nacional de Saúde, encontra-se a eliminação do cão doméstico sorologicamente positivo. Desta forma, torna-se necessário o conhecimento da sensibilidade e da especificidade das provas sorológicas utilizadas para a correta identificação destes animais. Para avaliar o desempenho dos métodos sorológicos no diagnóstico da leishmaniose visceral canina, foram determinadas e comparadas as características dos métodos de ELISA, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e imunocromatografia, adotando-se como padrão o método parasitológico. Para tanto, foram utilizados 50 cães naturalmente acometidos por leishmaniose visceral e 45 cães sadios provenientes de área não endêmica para a doença. A RIFI revelou sensibilidade de 98% e especificidade de 91,1%, além de ótima concordância com o método parasitológico (Kappa = 0,893). Os métodos de ELISA e de imunocromatografia apresentaram boa concordância com o método parasitológico (coeficientes Kappa de 0,788 e 0,769, respectivamente) e valores de sensibilidade de 94% e 86% e especificidade de 84,4% e 91,1%, respectivamente. Com relação à ocorrência de reações cruzadas com leishmaniose visceral, das 14 amostras de soro positivas para doença de Chagas, nove (64,3%) foram consideradas positivas pela técnica de ELISA e seis (42,9%) pela RIFI, não se observando resultados positivos por imunocromatografia. Das 13 amostras de soros de animais portadores de erliquiose, uma (7,7%) apresentou resultado positivo por meio dos métodos de ELISA e de imunocromatografia.
Abstract: The importance of canine visceral leishmaniasis diagnosis in Brazil is based on the fact that, according to the Ministry of Health, a seropositive dog must be culled. Thus, itþs important to know the sensitivity and specificity values of the methods employed for the diagnosis of the disease. To evaluate the performance of the available sorological tests for the diagnosis of canine leishmaniasis it was determined and compared the sensitivity and specificity of ELISA, indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunochromatographic test using the parasitological test as the gold standard. For this purposal, the study was carried out with a group of 50 naturally infected dogs from an endemic area and 45 healthy dogs from a non endemic area for visceral leishmaniasis. The IFAT was 98% sensitive and 91,1% specific, and showed a very good concordance with the parasitiological test (k = 0,893). The ELISA showed a sensitivity of 94% and specificity of 84,4% and when kappa index was analysed, a good concordance was obseved (k = 0,788). The immunochromatographic test was 86% sensisitive and 91,1% specific and showed a good concordance with the parasitiological test (k = 0,769). About the occurrence of cross reaction with visceral leishmaniasis, nine (64,3%) out of 14 positive samples for Chagas disease were positive by ELISA and six (42,9%) out of 14 were positive by IFAT, while the immunocromatographic test didnt yield any positive result. One (7,7%), out of 13 positive samples for ehrlichiosis, was positive by ELISA and immunocromatografic test. Five (83,3%) out of six positive samples for ehrlichiosis and babesiosis were positive by ELISA and three (50%) by immunocromatography, while IFAT didnþt yield any positive result. Five (50%) out of 10 positive samples for toxoplasmosis were positive by IFAT and one (10%) by immunocromatography.
Mestre
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Oliveira, Daniela Duarte de. "ELISA indireto para detecção de Ig G anti-vírus da doença de newcastle em soro de codorna." Universidade Federal de Minas Gerais, 2004. http://hdl.handle.net/1843/BUDB-8BSFKH.
Full textAbstract:
Two indirect ELISA's one containing secundary antibody against quail lgG and the other one conjugated anti-chicken lgG, were developed and compared for the detection of quail (Coturnix cortunix japonica) lgG specific to Newcastle disease virus (NDV). For the production of secindary antibody (mice lgG anti-quail lgG), purification methods of quail lgG were evaluated using 30 quail serum and egg yolk samples confirmed by electrophoresis. Only lgG purified from serum due to its higher purity were inoculated in to mice in oil emulsion containing 50ug protein/dose for the production of secondary antibody. Thirty positive quail serum against NDV and 30 negative serum previously tested by the haemaglunation inhibition test (HI) were used in the block standardization of ELISA. The NDV, positive and negative serum, secondary antibody and conjugates (goat anti-mouse lgG and rabbit anti-chicken lgG conjugated with alkaline phosphatase were diluted serially to standardized the indirect ELISA to detect quail lgG against NDV and indirect ELISA to detect quail lgG against NDV using anti-chicken conjugated. The absorbance values from both ELISA were evaluated in a TG-ROC spreadsheet and the cut-off points were determined to each ELISA. Based on the results it was observed a total correlation between ELISA an IH test, used as gold test. Both Elisa were efficient on positive and negative serum identification, presenting highest values of sensibility and specificity (100%) without false-positive and false-negative results. These results indicate the use of indirect ELISA to Newcastle disease as an excellent test to detect antibody in quail serum and your use in a laboratory routine.Foram desenvolvidos e comparados dois ELISAs para detecção de IgG de codorna (Coturnix coturnix japônica) contra o vírus da doença de Newcastle (VDN). Um deles utilizando anticorpo secundário de camundongo anti-IgG de codorna e o outro, conjugado anti-IgG de galinha. Para a produção de anticorpo secundário (IgG de camundongo anti-IgG de codorna), métodos de purificação de IgG de codorna foram avaliados utilizando 30 amostras de soros e gemas de ovos de codornas, confirmados posteriormente por eletroforese. Apenas a IgG purificada de soro, por sua maior pureza, foi inoculada nos camundongos, em emulsão oleosa contendo 50 µg de proteína/dose, para a produção do anticorpo secundário. Trinta soros de codorna positivos contra o vírus da doença de Newcastle e 30 soros negativos, triados previamente pelo teste de inibição da hemaglutinação (IH) foram utilizados na titulação em bloco dos ELISAs. O VDN, soro positivo anti-VDN e negativo, anticorpo secundário e conjugados (IgG cabra anti-IgG de camundongo e IgG de coelho anti-IgG de galinha conjugados com fosfatase alcalina) foram submetidos a diluições seriadas para padronizar o ELISA indireto para detecção de IgG de codorna contra VDN e o ELISA indireto para detecção de IgG de codorna contra VDN utilizando conjugado anti-galinha. Os valores de absorbância obtidos pelos ELISAs foram submetidos a planilha TG-ROC e calculados os pontos de corte de cada um. Na análise dos dados, observou-se total correlação entre os testes de ELISA e IH, usada como técnica de referência. Os dois ELISAs foram eficientes na identificação de soros positivos e negativos, apresentando valores máximos de sensibilidade e especificidade (igual a um, 100%), sem resultados falso-positivos e falso-negativos. Estes resultados indicam o uso do ELISA indireto para a doença de Newcastle como técnica de triagem de soros de codorna na rotina laboratorial.
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Matas, Sandro Luiz de Andrade [UNIFESP]. "Reação de imunofluorescência indireta e reação imunoenzimática no diagnóstico da neuroesquistossomose mansônica." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 1998. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/10011.
Full textAbstract:
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Publico-1314b.pdf: 1824367 bytes, checksum: 58636206749c6250ea31e3d8ce055272 (MD5)A neuroesquistossomose é uma das manifestações ectópicas da esquistossomose. Das cinco principais espécies que causam doença no homem, apenas a espécie Schistosoma mansoni está presente no Brasil. E uma estimativa atual da prevalência desta parasitose em nosso meio gira é de 9 a 10%. Portanto, a manifestação neurológica da esquistossomose, apesar de pouco comum, em nosso meio assume relevada importância principalmente por ser muito incapacitante e por atingir uma população jovem. Apesar destes argumentos, a neuroesquistossomose é geralmente diagnosticada tardiamente. O diagnóstico é feito por exclusão de outras doenças e por suposição, quando há esquistossomose associado a alteração neurológica característica que esta espécie determina. Estes procedimentos podem induzir erro além de retardar o diagnóstico, principalmente em regiões endêmicas. Portanto, este trabalho prospectivo visou determinar o valor das reações de imunofluorescência indireta e reação imunoenzimática no líquido cefalorraquiano para o diagnóstico da neuroesquistossomose. Após apreciação e aprovação do protocolo de investigação pela Comissão de Ética Médica do Hospital São Paulo / Universidade Federal de São Paulo, foram coletadas amostras de líquido cefalorraquiano de pacientes de 4 grupos distintos: Grupo I: pacientes com diagnóstico clínico de neuroesquistossomose, com protoparasitológico positivo para Schistosoma mansoni; líquido cefalorraquiano sem bloqueio do espaço subaracnoideo, mostrando processo inflamatório linfomonocitário predominante; excelente resposta clínica à terapêutica com praziquantel e decadron, com recuperação completa ou com discretas seqüelas. Grupo II: pacientes com esquistossomose mansônica diagnostica por exame protoparasitológico positivo para Schistosoma mansoni, sem queixa neurológica e com o exame neurológico normal. Grupo III: pacientes com neurocisticercose diagnosticada por reações imunobiológicas no líquido cefalorraquiano ou exame neurorradiológico compatível, sem esquistossomose. Grupo IV: pacientes do ambulatório geral da neurologia, com doenças neurológicas variadas, que realizaram exame de líquido cefalorraquiano como parte da investigação neurológica. Estes pacientes não apresentavam esquistossomose nem cisticercose, comprovados por reações imunobiológicas e por exames radiológicos. As amostras de LCR foram submetidas às reações de imunofluorescência indireta, usando conjugados anti-IgG e anti-IgM, frente a preparados parafinados e congelados de antígenos de verme adulto macho e ovos maduros viáveis de Schistosoma mansoni. As amostras também foram submetidas ao exame imunoenzimático, utilizando conjugado anti-IgG, em antígenos solúveis de vermes adultos de Schistosoma mansoni. A análise dos resultados mostrou que reação mais indicada para o diagnóstico da neuroesquistossomose é a reação de imunofluorescência em corte parafinado de verme adulto de Schistosoma mansoni, usando como conjugado fluoresceínico o anti-IgM humano porque, das reações com alta especificidade (90,8%), é a que tem maior valor preditivo positivo (88,2%). A reação de imunofluorescência indireta em corte parafinado não detecta anticorpos anti-Schistosoma mansoni no líquido cefalorraquiano de pacientes esquistossomóticos sem comprometimento neurológico. A reação de imunofluorescência indireta em cortes congelados de antígenos, com conjugado anti-imunoglobulina humana G, pode ser positiva em pacientes com esquistossomose sem neuroesquistossomose. Nas amostras de LCR de pacientes com neurocisticercose, ocorreram reações inespecíficas independentemente do antígeno utilizado, especialmente na reação imunoenzimática, que chegou a ter 1/3 das amostras positivas neste grupo.
TEDE
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Moreno, Obando Diego Andres. "Estandarización de pruebas de ELISA indirecto IgM e IgG4 anti Fasciola hepatica y su evaluación en una comunidad andina peruana." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2017. https://hdl.handle.net/20.500.12672/7478.
Full textAbstract:
Publicación a texto completo no autorizada por el autorEstandariza dos pruebas de ELISA indirecto para la detección de anticuerpos IgM e IgG4 anti Fasciola hepatica y aplica las pruebas en sueros de pobladores de la comunidad andina de Pamparomás, Ancash. Desarrolla un estudio observacional, descriptivo y transversal. Las principales medidas de resultados son anticuerpos contra F. hepatica detectados mediante las pruebas de ELISA IgM e IgG4 anti F. hepatica. Encuentra que las condiciones de reacción de la prueba de ELISA IgM fueron concentración de antígeno excretado-secretado (E/S) de F. hepatica 5 µg/100 µL y dilución del suero 1/10, dilución del conjugado anti IgM 1/500. Las condiciones de reacción de la prueba de ELISA IgG4 anti F. hepatica fueron concentración de antígeno E/S de F. hepatica 2,5 µg/100 µL, dilución del suero 1/200, dilución del conjugado anti IgG4 biotinilado 1/2 000 y conjugado estreptavidina-peroxidasa 1/1 000. La prueba de ELISA IgG4 anti F. hepatica determinó una frecuencia de 14,5% (16/110) de reactividad en sueros humanos. La sensibilidad y especificidad para la prueba de ELISA IgG4 anti F. hepatica fue de 100% y 93,1%. Los valores de sensibilidad y especificidad de la prueba de ELISA IgM anti F. hepatica resultaron no concluyentes. Determina que la prueba de ELISA IgG4 anti F. hepatica es útil como prueba de tamizaje para el diagnóstico de la fasciolosis en pobladores infectados de zonas endémicas.
Tesis
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CASSEB, Alexandre do Rosário. "Soroprevalência de anticorpos e padronização do teste ELISA sanduíche indireto para 19 tipos de arbovírus em herbívoros domésticos." Universidade Federal do Pará, 2010. http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/4760.
Full textAbstract:
Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-07T14:29:00Z
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Tese_SoroprevalenciaAnticorposPadronizacao.pdf: 3573316 bytes, checksum: 1b20297b8e5ddccfe8d90375218bbf05 (MD5)Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-12T15:01:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Tese_SoroprevalenciaAnticorposPadronizacao.pdf: 3573316 bytes, checksum: 1b20297b8e5ddccfe8d90375218bbf05 (MD5)
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A região Amazônica brasileira mantém a maior variedade de arbovírus e o estado do Pará corresponde a 26% desse território, o presente trabalho teve como objetivo determinar a prevalência e a distribuição de anticorpos detectados por inibição de hemaglutinação (IH) para 19 arbovírus em herbívoros domésticos no estado do Pará e padronizar testes de ELISA sanduíche indireto em equinos, bovinos, bubalinos e ovinos. Em todas as espécies de animais estudadas e em todo estado do Pará ocorreu detecção de anticorpos para todos os arbovírus analisados dentre os quais os SLEV, ILHV, EEEV, MAGV e WEEV apresentaram maior prevalência de anticorpos IH, sendo o SLEV o mais prevalente. Na detecção de anticorpos para diferentes famílias de arbovírus o MAGV foi o mais prevalente da família Bunyaviridae em todas as espécies, o SLEV foi o mais prevalente da família Flaviviridae em todas as espécies, na família Togaviridae o EEEV foi mais prevalente em equinos. Ao analisar a prevalência de anticorpos IH por espécie animal foi observado que os equinos não apresentaram diferença significativa em relação aos bubalinos, porém, apresentaram diferença significativa maior em comparação aos bovinos e ovinos, não havendo diferença significativa entre as espécies de ruminantes. O uso de ELISA IgG sanduíche indireto apresentou grande frequência de reações sorológicas cruzadas entre as famílias de arbovírus estudadas.
The brazilian Amazon region maintains the largest variety of arboviruses and the state of Pará is responsible for 26% of this territory, so the major goal of this work was to determine the prevalence and distribution of HI antibodies to 19 domestic arbovirus in domestic herbivores in the state of Pará and to standardize an indirect sandwich IgG ELISA test to serum samples of equines, cattle, buffaloes and sheep. In all species studied and throughout the State of Pará a large prevalence of HI antibodies to all arbovirus analyzed was observed and SLEV, ILHV, EEEV, MAGV and WEEV, showed higher prevalence, where the SLEV was the most prevalent. Regarding the virus families HI antibodies to MAGV was the most prevalent Bunyaviridae in all species, the most prevalent Flaviviridae was SLEV in all species and in the family Togaviridae the EEEV was more prevalent in horses. In order to analyze the prevalence of HI antibodies by animal species was observed that horses did not show significant differences compared to buffaloes, however, showed significant difference compared to cattle and sheep; there was not observed significant difference between the ruminant species. Using sandwich indirect IgG ELISA a large number of crossed reactions were found. This enzymatic test can be used to detect IgG antibodies among families of arboviruses studied.
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Almeida, Ariani Cristina da Silva. "Desenvolvimento do ELISA indireto com uso de proteína recombinante e estudo soroepidemiológico para infecção pelo coronavírus felino (FCoV)." Botucatu, 2017. http://hdl.handle.net/11449/148656.
Full textAbstract:
Orientador: João Pessoa Araújo JuniorBanca: Taís Fukuta da Cruz
Banca: Luciane Alarcão Dias Melicio
Banca: Angelo José Magro
Banca: Marcelo de Souza Zanutto
Resumo: O Coronavírus felino (FCoV), ao infectar gatos domésticos (Felis catus), exibe uma patogenicidade bimodal, produzindo desde infecções entéricas subclínicas até a peritonite infecciosa felina (PIF), que é fatal para os gatos que a desenvolvem. A PIF é considerada uma das mais importantes doenças infecciosas dos felinos. O diagnóstico da pif não-efusiva (seca) é desafiador para ser estabelecido com o animal em vida, e o da pif efusiva (úmida) pode ser estabelecido através da associação de achados clínicos e resultados de exames laboratoriais. Técnicas sorológicas não fornecem um diagnóstico conclusivo, mas são ferramentas úteis e podem ser importantes no auxílio do manejo. O presente estudo teve como objetivos desenvolver um teste de ELISA indireto com uso do antígeno recombinante N (proteína de nucleocapsídeo) do FCoV, e também realizar um estudo soroepidemiológico para infecção pelo FCoV em gatos domésticos domiciliados da cidade de Botucatu, SP. Para o ELISA indireto o antígeno foi produzido através de clonagem e expressão em bactéria. Testes de concentração do antígeno e diluição dos soros foram realizados. Cento e cinquenta e uma amostras foram testadas. O ponto de corte foi determinado através do cálculo da média aritmética da A450 de 53 amostras negativas (testadas pelo kit ImmunoComb FCoV (FIP) - teste referência do estudo), mais 4 desvios padrão. Para o estudo soroepidemiológico, foram testadas as mesmas 151 amostras, agora pelo kit ImmunoComb FCoV (FIP) para det... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: The feline coronavirus (FCoV) infect domestic cats (Felis catus) with a bimodal pathogenicity, producing from enteric subclinical infections to the fatal feline infectious peritonitis (PIF). FIP is considered one of the most important infectious diseases of felids. The diagnosis of FIP non-effusive is challenging for living animals and that of FIP effusive can be established through the association of clinical findings and results of laboratory tests. Although serological techniques do not provide conclusive diagnostics, they are useful tools and may important in helping the management. The present study aimed to develop an indirect ELISA test with the use of a nucleocapsid (N) recombinant protein of FCoV as antigen and to perform a seroepidemiological study for infection with FCoV in domiciled domestic cats from Botucatu, SP. For the indirect ELISA, the antigen was produced by cloning and vector expression using bacteria. Tests of antigen concentration and serum dilution were performed. One hundred and fifty-one samples (n=151) were tested and the cut-off determined by calculating the average at A450 from 53 negative samples (as tested by ImmunoComb FCoV (FIP) kit - the reference test for the study) and four standard deviation. For the seroepidemiological study, 151 samples were tested ImmunoComb FCoV (FIP) for detection of IgG anti-FCoV antibodies. The analyzed risk factors were age, breed, sex, reproductive condition, outdoor access, creation mode (solitary or grouped). The relative ELISA sensitivity was 85,57%, the relative specificity was 94,44% and the relative accuracy was 88,74%. In the seroepidemiological study the seropositivity was 64,24% (97/151) by the ImmunoComb FCoV (FIP) kit. There was no statistical significance among breed (p=1,000), sex (p=0,0818) and solitary or grouped animals (p=0,8325). Age (p=0,0157), reproductive condition (p=0,0074) and outdoor access... (Complete abstract click electronic access below)
Doutor
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Meza, Cerda María Ignacia. "Desarrollo de un Elisa indirecto con antígeno LPS-R de Brucella abortus cepa RB51, para el diagnóstico serológico de brucelosis canina." Tesis, Universidad de Chile, 2011. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/134172.
Full textAbstract:
Memoria para optar al Título Profesional de Médico VeterinarioEl diagnóstico definitivo y específico de la brucelosis en caninos, causada por Brucella canis (B. canis), se realiza mediante el aislamiento de la bacteria desde muestras patológicas o fluidos. Sin embargo, como la enfermedad se caracteriza por presentar periodos abacterémicos, un cultivo negativo no excluye la posibilidad de infección. Debido a que se utiliza ampliamente la detección de anticuerpos frente a la infección y que tanto B. ovis y B. canis comparten componentes antigénicos con la cepa vacuna Brucella abortus RB51 (B. abortus CRB51), ésta podría ser usada como antígeno en el diagnóstico serológico de la enfermedad. En el presente estudio, se describe un enzimoinmunoensayo indirecto (ELISA-I) para el serodiagnóstico de brucelosis canina utilizando un extracto altamente purificado de lipopolisacárido rugoso (LPS-R) de Brucella abortus CRB51, cuyos resultados fueron comparados con la técnica contrainmunoelectroforesis (CIEF) que utiliza un antígeno extraído de una cepa rugosa de B. ovis, con diferentes componentes, incluyendo al LPS-R. En este estudio se incluyeron 156 sueros de perro, muestras para diagnóstico de brucelosis canina mediante CIEF, que fueron recibidas en el laboratorio de Microbiología de FAVET. El análisis de los resultados indicó asociación estadística entre ambas pruebas (p>0,05) para el diagnóstico de brucelosis canina. Además, ambas pruebas obtuvieron un alto índice de concordancia (K= 0,961). Estos resultados hacen del ELISA-I propuesto una prueba promisoria al utilizar un antígeno más purificado y entregar resultados cuantitativos
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SILVA, Cecilia Maria de Souza Leão e. "Avaliação da reação em cadeia de polimerase (PCR) e elisa indireto como método de diagnóstico da Burkholderia mallei (Mormo)." Universidade Federal Rural de Pernambuco, 2014. http://www.tede2.ufrpe.br:8080/tede2/handle/tede2/5041.
Full textAbstract:
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-07-19T14:08:54Z
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Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5)Made available in DSpace on 2016-07-19T14:08:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cecilia Maria de Souza Leao e Silva.pdf: 1235721 bytes, checksum: fa10ebf32171212966df2a23383f5075 (MD5) Previous issue date: 2014-02-21
Glanders is a highly contagious disease caused by Burkholderia mallei solipeds, a Gram - negative bacterium, not motility and aerobic coccobacillus, primarily infecting horses, donkeys and mules, though humans are considered accidental hosts . The Burkholderia mallei is listed in the list of the World Organisation for Animal Health (OIE) as an important public health disease, and due to its high potential for infection is referred to as a bioterrorism agent. According to the OIE comprises the serological diagnosis, allergy testing and bacterial isolation, and complement fixation, the official test to be performed for trade of animals. This method of diagnosis is recommended in Brazil by Normative Instruction Nº 24 Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply by its high sensitivity and specificity. Serological qPCR showed 76 (16.7%) positivity and a sensitivity of 24.7% and a specificity of 89 % when compared to the gold standard western blotting used. The results show that the use of the qPCR may be used as a complementary technique to other methods for rapid and accurate identification of Burkholderia mallei. About statistical results showed that the ELISAi showed the highest sensitivity (35.5%) and specificity (97.6 %) when compared to western blotting. The results show the importance of preparation and use of antigens that are produced with local strains, resulting in higher sensitivity and specificity of the test.
O Mormo constitui-se em uma doença altamente contagiosa dos solípedes causada pela Burkholderia mallei, uma bactéria Gram-negativa, não móvel e cocobacilo aeróbio, infectando primariamente cavalos, burros e mulas, entretanto humanos são considerados hospedeiros acidentais. A Burkholderia mallei está relacionada na lista de doenças da Organização Mundial para a Saúde Animal (OIE) como doença de importância de saúde pública, e devido ao seu alto potencial de infecção é referenciada como agente de bioterrorismo. De acordo com a OIE o diagnóstico compreende o teste sorológico, alérgico e o isolamento bacteriano, sendo a fixação do complemento, o teste oficial a ser realizado para trânsito de animais. Este método de diagnóstico está preconizado no Brasil pela Instrução Normativa Nº 24 do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento por apresentar alta sensibilidade e especificidade. A qPCR sorológica apresentou 76 (16,7%) positividade e uma sensibilidade de 24,7% e especifidade de 89% quando comparado ao western blotting padrão ouro utilizado.. Os resultados mostram que a utilização da qPCR pode ser utilizada como técnica complementar de outras metodologias para identificação rápida e precisa da Burkholderia mallei. Em relação aos testes sorológicos, os resultados estatísticos mostraram que o ELISAi apresentou a maior sensibilidade (35,5%) e especificidade (97,6%) quando comparado ao western blotting. Os resultados mostram a necessidade da preparação e utilização de antígenos que sejam produzidos com cepas locais, determinando maior sensibilidade e especificidade ao teste.
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Saadi, Siu Karina Teresa. "Validación de un Elisa indirecto con antígeno citosólico de Brucella abortus RB51, para la detección de anticuerpos contra Brucella ovis en ovinos." Tesis, Universidad de Chile, 2014. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/136326.
Full textAbstract:
Memoria para optar al Título Profesional de Médico VeterinarioEn el presente estudio se describe el desarrollo y validación de un Ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA-I) para el diagnóstico serológico de la infección por Brucella ovis (B. ovis) en ovinos, utilizando proteínas citosólicas de Brucella abortus RB51 (B. abortus RB51) como antígeno. Se probaron dos tipos de placas de poliestireno, NUNC 69620 y NUNC Maxisorp, dos tampones de sensibilización de diferente pH con dos alternativas de conjugado, el anticuerpo monoclonal anti IgG-caprino/ovino (Sigma A9452) y la proteína G (Sigma P81170). Las concentraciones óptimas de antígeno citosólico, sueros y conjugados fueron determinadas mediante titulación del tipo checkerboard. Para la validación del ensayo se utilizaron 55 sueros de ovinos considerados como infectados/expuestos, positivos a examen clínico, a un ELISA-I comercial, a la fijación del complemento (FC) y a la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y 338 sueros de ovinos no infectados, provenientes de un rebaño ovino libre de infección, negativos a la prueba de FC. El punto de corte diagnóstico fue determinado a través del método de las características del tipo receptor-operador (ROC). El ELISA-I desarrollado con anticuerpo monoclonal como conjugado mostró mejores valores de sensibilidad (90,9%) y especificidad (95,9%). Estos resultados, a pesar de ser significativos, son deficientes para ser considerados de utilidad diagnóstica y lograr un adecuado control de la infección en rebaños ovinos. La baja sensibilidad obtenida al utilizar proteínas citosólicas como antígeno estaría relacionada con la escasa exposición al antígeno y la corta memoria inmunológica que generarían este tipo de proteínas en un animal infectado.
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Broult, Julien. "La sérologie du virus Epstein-Barr : comparaison du test enzygnost anti-EBV IgG/IgM avec l'immunofluorescence indirecte." Bordeaux 2, 1993. http://www.theses.fr/1993BOR23097.
Full text
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Ruz, Oñate Daniela Alejandra. "Evolución de anticuerpos contra el lipopolisacárido rugoso y proteínas citosólicas de Brucella abortus Cepa RB51 en perras infectadas con Brucella canis, detectados por Elisa indirecto." Tesis, Universidad de Chile, 2011. http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/131445.
Full textAbstract:
Memoria para optar al Título Profesional de Médico VeterinarioEn el presente trabajo se describe la evolución de anticuerpos caninos contra Brucella canis, de dos perras inoculadas experimentalmente, mediante un ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA-I) usando como antígenos el lipopolisacárido rugoso (LPS-R) y proteínas citosólicas de Brucella abortus Cepa RB51. El objetivo fue discriminar el momento en que se hacen detectables los anticuerpos para cada ELISA-I y describir la evolución de éstos en el tiempo. Se utilizaron sueros de dos perras infectadas con B. canis, A y B, con un total de 20 y 16 muestras de sueros seriados, respectivamente. Para ambos ELISA-I se usaron líneas de corte obtenidas por metodología “Receiver-Operator Characteristic” (ROC), que determinaron la positividad o negatividad a la prueba. Ambos ELISA-I fueron capaces de detectar anticuerpos tempranamente y fue posible constatar su permanencia en el tiempo. La detección de anticuerpos mediante ELISA-I, tanto con antígeno de proteínas citosólicas como con antígeno LPS-R de B. abortus Cepa RB51, se mantuvo detectable, al menos, hasta la semana 38 post infección
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Brito, Fabiano de Almeida. "Avaliação diagnóstica dos métodos Elisa e quimiluminescência como testes de triagem alternativos à imunofluorescência indireta para a detecção de anticorpos antinucleares." Universidade Federal de Minas Gerais, 2012. http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8YVREM.
Full textAbstract:
Detection of antinuclear antibodies (ANA) plays an important role in the diagnosis of autoimmune rheumatic diseases(ARD). Different methods such as indirect immunofluorescence on HEp-2 cells (HEp-2 IIF), ELISA and chemiluminescence can be used for ANA testing, although HEp-2 IIF is considered the gold standard. The goal of this study was to evaluate the diagnostic accuracy of three commercially available ELISA kits and one chemiluminescente kit for ANA detection,with different principles andantigenic composition, and to verify the possibility of using them as an alternative to the IIF method, considering the clinical diagnostic accuracy as the standard.We evaluated 143 patients with established diagnosis of ARD (group 1), 166 patients with infectious diseases and other rheumatic diseases (group 2), 89 patients with suspicion of ARD (group 3) and 134 healthy subjects (group 4). The sensitivity of the tests, given in group1 was 87.4% for IIF and 62.9% to 90.0% for the other kits. The specificity of the tests, given in group 2, was 72.3% for IIF and 45.2% to 90.4% for other kits. The agreement with the IIF test ranged from regular to moderate. Areas under the ROC curve of the tests were not significantly different from the IIF. The frequency of positive results of IIF HEp-2 in group 4 was 13.5%, compared with frequencies of 6.0% to 36.0% for the other tests, and a 1:160 dilution was defined as "abnormal title". In group 3, the sensitivity and specificity of IIF was 92.0% and 57.8%, while the other tests ranged between 76.0% and 100% and 26.6% and 89.1%, respectively. Some ELISA kits have comparable or superior diagnostic sensitivity to HEp-2 IIF and could be used as an alternative methodfor ANA screening. Positive samples should be submitted to IIF for confirmation of results, determination of the title and the fluorescence pattern. Due to differences in sensitivity between the kits, it is essential that a careful clinical validation is performed prior to their introduction into the diagnostic routine.A detecção de anticorpos antinucleares (FAN) desempenha um papel importante no diagnóstico das doenças reumáticas autoimunes (DRAI). Diferentes métodos como imunofluorescência indireta em células HEp-2 (IFI HEp-2), ELISA e quimiluminescência podem ser utilizados para a pesquisa do FAN, embora a IFI HEp-2 seja considerada atécnica padrão ouro. O presente estudo tem como objetivo comparar o desempenho diagnóstico da IFI HEp-2 com o de três kits ELISA e um kit de quimiluminescência, com princípios e composição antigênica diferentes, considerando-se a clínica como padrão de acurácia diagnóstica. Foram avaliados 143 pacientes com diagnóstico de DRAIestabelecida (grupo 1), 166 pacientes portadores de doenças infecciosas e outras doenças reumáticas (grupo 2), 89 indivíduos com suspeita não confirmada de DRAI (grupo 3) e 134 indivíduos saudáveis (grupo 4). A sensibilidade dos testes, determinada no grupo 1, foi de 87,4% para a IFI, e de 62,9% a 90,0% para os demais kits. A especificidade dos testes, determinada no grupo 2, foi de 72,3% para a IFI, e de 45,2% a 90,4% para os demais kits. A concordância dos testes com a IFI variou de regular a moderada. As áreas sob a curva ROC dos testes não foram significativamente diferentes da IFI. A freqüência de resultados positivos da IFI HEp-2 no grupo 4 foi de 13,5%, comparada a freqüências de 6,0% a 36,0% para os outros testes, sendo a diluição de 1:160 definida como o título anormal. No grupo 3, a sensibilidade e aespecificidade da IFI foi de 92,0% e 57,8%, enquanto a dos demais testes variou entre 76,0% e 100% e 26,6% e 89,1%, respectivamente. Alguns kits ELISA apresentam sensibilidade diagnóstica comparável ou superior à IFI HEp-2, podendo ser utilizados como métodos alternativos para a triagem do FAN. Amostras positivas devem ser submetidas à IFI para confirmação do resultado e determinação do título e do padrãode fluorescência. Devido a diferenças de sensibilidade entre os kits, é fundamental que uma validação clínica cuidadosa seja realizada antes da sua introdução na rotina diagnóstica.
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ARAÚJO, Jackeline Gomes da Silva. "Produção secretória da proteína recombinante do Capsídeo de Circovírus Suíno 2 em Pichia pastoris e sua aplicação como antígeno." Universidade Federal de Pernambuco, 2014. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/12678.
Full textAbstract:
Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-18T13:46:49Z
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O Circovírus Suíno (CVS) é um vírus de DNA fita simples, que pertence à família Circoviridae, com genoma de 1,7kilobases. Apresenta dois tipos principais, o CVS1 e o CVS2. O CVS1 não é patogênico, enquanto que o CVS2 está associado a um conjunto de doenças como a Síndrome Multissistêmica do Definhamento de Suínos (SMDS). Estes tipos virais possuem a proteína Rep, essencial para replicação e a proteína Cap, formadora do capsídeo. A pCap possui epítopos imunoreativos e imunodominantes e tem sido utilizada como um antígeno tanto para o diagnóstico, quanto para aplicação vacinal, contra infecções causadas pelo CVS2. Pichia pastoris é uma levedura metilotrófica que utiliza metanol como única fonte de carbono e tem sido utilizada para expressar genes heterólogos por apresentar vantagens como, a realização de modificações pós-traducionais e sua fácil manipulação. Objetivou-se nesse estudo expressar o gene Cap códon-otimizado do CVS2 para expressar em Pichia pastoris, visando a produção secretória da pCap e sua aplicação como antígeno recombinante em imunoensaios. Para tanto, a construção pPICZαA/CVS2Capo obtida após clonagem gênica foi inserida no genoma da levedura por eletroporação e o sistema foi induzido com metanol, sob o controle do promotor AOX1, por 72h. Os clones expressos positivamente foram identificados em Colony blot e Dot blot, após a reação dos clones com anticorpo-antiHis. A rCap foi detectada com massa molecular de ~39 kDa em sobrenadante da P. pastoris por SDS-PAGE e Western blot. Neste último, a detecção foi feita pelo reconhecimento da rCap por anticorpos anti-CVS2 de soros de animais com histórico de SMDS. A rCap testada em ELISA indireto contra soros de animais sabidamente negativos e positivos, previamente determinados pela imunoperoxidase (IP), mostrou alta eficiência discriminatória com alta razão positivo/negativo de 597. Após análise preliminar de parâmetros concordantes e discordantes, entre o IP e ELISA, observou-se uma alta concordância entre eles. Os resultados representam a efetiva produção da rCap pela via secretória de P. pastoris, com sugestiva preservação dos epítopos imunoreativos na mesma. Isto demonstra a viabilidade do sistema eucarioto de expressão utilizado e o potencial uso da rCap para detecção de anticorpos anti-CVS2 como ferramenta auxiliar no diagnóstico de doenças causadas pelo CVS2 como a SMDS.