Academic literature on the topic 'Infections à cardiovirus – Dissertations universitaires comme sujet'

Dans le but d'évaluer le risque de transmission de l'EMCV de l'animal, en particulier le porc, à l'homme, notamment lors de xénotransplantations, nous nous sommes intéressés aux facteurs susceptibles de favoriser ou de limiter cette transmission par l'étude de l'interaction du virus avec des cellules humaines. Des outils permettant la mise en évidence de la multiplication du virus aux différentes étapes de l'infection ont été développés. Notamment, pour le suivi de la synthèse des protéines, un virus recombinant exprimant l'EGFP a été créé. Celui-ci, était pathogène pour la souris, à l'instar du virus parental. L'EGFP a pu être détectée par autofluorescence in vitro dans les cellules infectées et in vivo sur des empreintes de cerveaux de souris. Le pouvoir infectieux de différentes souches virales sur des lignées et des cellules primaires humaines, reflétant le tropisme du virus chez l'animal, a été analysé. Les résultats montrent que l'infection des cellules dépend du type cellulaire et de la souche virale et que l'adsorption varie essentiellement en fonction des souches. Par comparaison des séquences de capside, des acides aminés jouant un rôle probable dans cette adsorption ont été mis en évidence. L'analyse des partenaires cellulaires impliqués dans l'attachement a permis de montrer que l'adsorption de la souche 1086C est dépendante des acides sialiques et que la lysine 231 de VP1 jouerait un rôle important dans cette liaison. Par ailleurs, l'adsorption de la souche B279/95 est indépendante des acides sialiques mais dépend des héparanes sulfates. Ceci suggère l'utilisation probable de co-récepteurs portant des héparanes sulfates ou des acides sialiques
In order to evaluate the transmission risk of EMCV, from animal, mainly pig, to human, especially during xenotransplantations, we were interested in factors likely to support or limit this transmission by studying the interaction of EMCV with human cells. Tools allowing the detection of the virus multiplication at the various stages of the infection were developed. In particular, for the follow-up of the proteins synthesis, a recombinant EMCV expressing EGFP was created. The recombinant virus was pathogenic for mouse like the parental virus. EGFP could be detected by autofluorescence in vitro in infected cells and in vivo on prints of mouse brains. The infectious power of various viral strains on human cell lines and primary cells, reflecting the tropism of the virus in animal, was analysed. The results indicated that the infection of the cells depends on the cellular type and the viral strain and that adsorption varies primarily according to the strains. By comparison of the sequences of capsid, amino acids playing a probable part in this adsorption were highlighted. The analysis of the cellular partners implied in the attachment made it possible to show that the adsorption of the strain 1086C is dependent on sialic acid and that lysine 231 of VP1 would play an important part in this connection. In addition, the adsorption of the B279/95 strain is independent of sialic acid but depends on heparanes sulfates. This suggests the probable use of co-receptors carrying heparane sulfates or sialic acids

@On appelle infections nosocomiales, les maladies infectieuses contractées au cours d'une hospitalisation qui n'étaient ni en incubation ni présentes à l'admission du patient. Elles peuvent être d'origine endogène ou exogène : le patients lui-même, le personnel, le matériel, les surfaces et l'environnement. Cette contamination peut résulter d'un manque d'efficacité des procédures de nettoyage-désinfection, déficience souvent attribuée à l'état dans lequel se trouve ces germes indésirables (biofilms). Pour réduire ces risques de contamination deux axes ont été abordés : d'une part les prédictions d'adhésion entre le support en acier inoxydable AISI 304 (constituant majeur du matériel en bloc opératoire) et quatre souches responsables d'infections nosocomiales (E. Coli, S. Aureus, P. Aeruginosa et E. Hirae) et d'autres parts, l'évaluation de l'efficacité ainsi que les conditions d'utilisation d'un nouveau désinfectant OXSILÒ 320N sur des cellules planctoniques et des biofilms. L'étude physicochimique a montré toute la complexité des interactions impliquées dans la phase initiale d'adhésion. Si en théorie, il est possible d'enrayer l'adhésion bactérienne à un support en modifiant ses caractéristiques de surface, notre étude montre qu'il est impossible de limiter l'adhésion simultanée des 4 souches bactériennes étudiées au support AISI 304. Face à une telle situation, il est donc impératif d'optimiser les procédures de nettoyage-désinfection. OXSILÒ320N possède une activité de spectre 4 selon la norme AFNOR NF T 72-150 sur des cellules planctoniques à la concentration de 3,13%. Par contre les biofilms sont plus résistants que leurs homologues planctoniques. Ceci serait dû à la présence de mécanismes de défense connus. Selon les recommandations d'utilisation de SODIFRA les conditions optimales pour obtenir un niveau "zéro" de contamination sont : 12,52% d'OXSILÒ320N et un temps de contact de 10 min évitant tout risque infectieux entre deux opérations de courtes ou de longues durées en blocs opératoires. Ces résultats ont mis en évidence la nécessité d'utiliser ce désinfectant à une concentration appropriée et de ne pas négliger les conséquences d'une utilisation en infradose même si celle-ci autorise selon les normes AFNOR une activité bactéricide
@Nosocomial infections are hospital acquired infections. They are not present or incubating when the patient is admitted to the hospital, and are either endogenous or exogenous. Endogenous ones are caused by organisms present in the patient own flora and exogenous infections are caused by organisms originating from medical devices, hospital staff, or environment. This contamination might be the result of a lack of efficiency in cleaning and disinfection procedures, those deficiencies being often attributed to the state in which these harmful microorganisms are found (biofilms). To reduce the risks of contamination, two parts have been developed in this thesis: at first, predictions of adhesion between stainless steel AISI 304 (major component of equipment in operating room) and four nosocomial strains (E. Coli, S. Aureus, P. Aeruginosa et E. Hirae), and in the second part, we determine, the efficient concentration of a new disinfectant OXSILÒ 320N in order to eliminate biofilms. Physico-schemical studies demonstrated the complexity of interactions involved in the initial phase of adhesion. We suggest that a change of the stainless steel surface properties could theoretically limit bacterial adhesion. However it was nearly impossible to limit adhesion between the four studied bacterial strains and the support AISI 304. It is then necessary to optimise preventive hygienic conditions. The bactericidal concentration of OXSILÒ 320N against planktonic cells, according to AFNOR Norm NF T 72-150, was 3,13%. Furthermore, biofilms were commonly more resistant than their planktonic counterparts due to the presence of known resistance mechanisms. According to the SODIFRA recommendations, the optimal conditions, required to avoid any contamination, were a concentration 12,52% and 10 min contact. These conditions can eliminate infection risks during short or long laps between two interventions in an operating room. These results revealed the necessity to use this disinfectant at appropriate concentration and but also the consequences of using it in infradose, although this concentration is considered as an efficient concentration by AFNOR Norm

Les lymphocytes TNK sont des lymphocytes T non conventionnels. Ils expriment un TCR avec une chaîne α invariante Vα14 et des marqueurs associés aux cellules NK. Ils reconnaissent la molécule de classe I non-classique CD1d qui présente des glycolipides endogènes et exogènes. Fonctionnellement, ils sont capables de sécréter rapidement de grandes quantités de cytokines comme l’IL-4 et l’IFNγ et possèdent des capacités immunostimulatrices et immunosuppressives. Les lymphocytes TNK sont impliqués dans les réponses anti-infectieuses et anti-tumorales. Ils jouent également un rôle protecteur dans plusieurs maladies autoimmunes. Le diabète de type 1 est une maladie autoimmune qui est associée à la destruction des cellules pancréatiques productrices d’insuline par des lymphocytes T autoréactifs. Plusieurs travaux ont rapporté un effet protecteur des lymphocytes TNK dans le diabète de type 1, dans le cadre de modèles polyclonaux ou d’un modèle monoclonal CD4. Dans la première partie de cette thèse, nous avons étudié l’influence des lymphocytes TNK dans le cadre d’un transfert monoclonal de lymphocytes T CD8 anti-îlots. Les lymphocytes TNK dans ce modèle ne sont pas capables d’inhiber la réaction autoimmune, mais au contraire ils aggravent la maladie en stimulant la réponse destructrice des lymphocytes T CD8 anti-îlots
Invariant natural killer T (iNKT) cells can prevent type 1 diabetes by impairing T cell responses to pancreatic β cells. As iNKT cells can also promote T cell responses to pathogens, and as viruses can trigger autoimmune diabetes, we investigated the effect of iNKT cells on virus-induced diabetes. Mice expressing the lymphochoriomeningitis virus (LCMV) nucleoprotein (NP) in their pancreatic β cells develop diabetes after LCMV infection. Here, we show that although iNKT cells promote systemic anti-LCMV CD8 T cell responses, theyn also completely abolish LCMV-induced diabetes. Locally in the pancreas, iNKT cells induced the production of large amount of antiviral cytokines inhibiting LCMV replication

Mycobacîerium abscessus est un pathogène émergent responsable d'infections respiratoires sévères chez les patients atteints de la mucoviscidose. Cette espèce est également responsable d'infections extra-pulmonaires, notamment en cas de transplantation, et se caractérise par une faible susceptibilité aux antibiotiques. Le génome de cette mycobactérie a été séquence et des puces à ADN ont été développées. Des études effectuées sur des variants naturels lisses et rugueux montrent que les isolats rugueux sont hypervirulents. Ces isolats ne produisent pas de glycopeptidolipides (GPL), un métabolite lipidique de surface. On peut donc se demander si l'absence de ce lipide est responsable de cette hypervirulence. La première partie de ma thèse a été de développer des outils génétiques adaptés à M. Abscessus. En utilisant le système dit de « recombineering », nous avons construit une souche mutante caractérisée par sa faible production des GPL (AmmpL4b). Afin de prouver le rôle de ce gène dans un phénotype donné, nous avons aussi adapté un système de complémentation à M. Abscessus en testant des plasmides réplicatifs et intégratifs ayant démontré leur efficacité chez d'autres espèces. Dans ce travail, nous avons montré que la production des GPL engendre des modifications de surface de la cellule comme la mobilité par glissement. La virulence des souches (sauvage, mutante et complémentée) a été évaluée in vitro dans des modèles cellulaires et in vivo dans des modèles murins. Ces tests de virulence montrent que ce n'est pas que l'absence des GPL qui est impliquée dans la virulence de M abscessus. Nous privilégions à l'heure actuelle l'hypothèse qu'un autre facteur intervient directement ou indirectement dans cette virulence. Dans le futur, la caractérisation de la virulence de cet organisme ouvra la voie au développement de nouvelles drogues ou vaccins contre ce pathogène émergent
Mycobacterium abscessus is a rapidly growing mycobacterial species that can be involved in pulmonary and disseminated infections in immunosuppressed or young cystic fibrosis patients. It is an emerging pathogen and has attracted recent attention due to the numerous cases of infection; furthermore, genomic tools have been developed for this species. Nevertheless, the study of this species has until now been limited to spontaneous variants. We have compared three different mutagenesis Systems : the ts-sacB, the phage, and the recombineering Systems, and show that there are important differences in their efficiency for the construction of allelic-exchange mutants. We show, using the mmpL4b gene of the glycopeptidolipid pathway as a target, that allelic-exchange mutants can be constructed with a reasonable efficiency ( 7%) using the recombineering System. Studies on this species were limited so far to natural spontaneous variants. These studies have nevertheless showed that the Rough variants of M abscessus which are characterized by a low production of glycopeptidolipids are hypervirulent in human and also in in vivo models. Interestingly, these highly virulent isolates strongly induce TNF-α secretion by macrophages. However, the mechanism of the higher virulence process is currently unknown. The mutant constructed in this study, which is low glycopeptidolipids producer, is unable to slide and it loss the ability to form biofilms. These confirm the role of glycopeptidolipids in the modification of cell surface. Using in vivo model the virulence of this mutant has been tested. This study shows that other factor is involved with the lack glycopeptidolipids in the virulence of M abscessus. The study of the mechanism of the virulence of M abscessus is a pre-requisite to develop new drugs or vaccine candidates against this emerging pathogen

Le rôle du système immunitaire, en particulier de l’immunité cellulaire T, est particulièrement important dans la défense contre les papillomavirus humains (HPV). L’incidence et la prévalence des pathologies induites par les HPV sont élevées chez les sujets immunodéprimés, qu’elles soient liées à des HPV cutanés ou muqueux, oncogènes ou non oncogènes. Dans ce travail, l’immunité T anti-HPV a été étudiée dans 2 modèles d’infection par HPV : 1. Des phénocopies d’épidermodysplasie verruciforme associées à l’infection par le VIH, à partir des caractéristiques cliniques, virologiques et immunologiques d’une série de patients. Le rôle du nadir de lymphocytes T CD4+, de l’intensité et de la durée du déficit immunitaire T CD4+ sur les lésions cliniques induites par les HPV cutanés du genre bêta mais aussi d’autres HPV muqueux associés a été montré. L’inefficacité du traitement antirétroviral sur les lésions induites par les HPV suggère l’absence de restauration de réponses T anti-HPV efficaces. 2. Des couples dont la femme a une néoplasie intraépithéliale vulvaire classique à HPV16 et dont le partenaire masculin est asymptomatique, suivis longitudinalement pendant 18 mois. Les réponses immunitaires T contre la protéine précoce E2 sont un marqueur de contrôle de la maladie liée à l’HPV, après traitement des lésions chez la femme et spontanément chez l’homme. La protéine E2 étant absente de la particule virale, la présence de réponses T anti-E2 chez les hommes est la preuve indirecte de leur infection avec réplication virale. Ces résultats renforcent l’idée qu’une vaccination prophylactique des hommes pourrait diminuer la diffusion des HPV génitaux dont ils sont le réservoir
T cell immunity is involved in the defense against human papillomaviruses (HPV). Incidence and prevalence of HPV-induced clinical lesions are high in immunocompromised patients and concern oncogenic and/or non oncogenic cutaneous and mucosal HPV. In this work, T-cell immunity against HPV was studied in 2 models of HPV infection: - Epidermodysplasia verruciformis-like eruptions in the setting of HIV infection: clinical, virological et immunologic features were studied in a series of patients. The nadir of CD4+ T lymphocytes, the intensity and the length of T CD4+ deficiency were related on the development of clinical lesions induced by both bêta HPV or alpha HPV. The inefficacy of antiretroviral therapy on HPV-induced clinical lesions suggests that anti-HPV T-cell responses were ineffective. - Couples with women presenting with HPV16-induced classic vulvar intraepithelial neoplasia and their healthy male partners, who were longitudinally followed for 18 months. Anti-E2 protein T-cell responses are a marker of efficient control of HPV infection, either after treatment in women, or spontaneously in men. Since E2 protein is absent from viral particles, the presence of anti-E2 T-cell responses in healthy male partners indirectly proves that they have been infected by replicative HPV16. These results provide a strong argument in favor of prophylactic HPV vaccination of young men to decrease the spread of mucosal HPV diseases

L'apoptose est un processus physiologique actif de mort cellulaire impliquant un programme génétiquement contrôlé d'autodestruction de la cellule. Deux voies effectrices de l'apoptose sont décrites, la voie des récepteurs membranaires de mort cellulaire se liant à un ligand et la voie mitochondriale impliquant le relarguage de molécules effectrices pro-apoptotiques. Ces deux voies activent en aval les caspases effectrices de l'apoptose. Un dysfonctionnement des mécanismes régulateurs de l'apoptose peut engendrer des pathologies. Nos travaux ont exploré un rôle possible de l'induction de l'apoptose et les mécanismes moléculaires impliqués, dans l'infection par le cytomégalovirus (CMV) et la GVHD aiguë (maladie du greffon contre l'hôte). Des protéines anti-apoptotiques du CMV humain sont connues, en revanche aucune protéine pro-apoptotique n'a été décrite. Dans un modèle cellulaire, in vitro, nous avons montré que, l'expression du récepteur viral de chimiokines US28, produit d'un gène du CMV, induisait une apoptose caspase dépendante de manière constitutive (indépendante d'un ligand), et indépendante de la voie mitochondriale et de celle des récepteurs de mort. Dans le contexte de la greffe de moelle osseuse, la GVHD correspond à une réponse allogénique par les lymphocytes T d'un donneur contre des cellules cibles épithéliales d'un receveur. Dans un modèle murin de GVHD aiguë, in vivo, nous avons montré une apoptose des cellules endothéliales précédant l'induction de l'apoptose des cellules épithéliales dans la muqueuse orale, dépendante de l'expression de FasL (ligand du récepteur de mort Pas) par les lymphocytes T activés du donneur, sans conditionnement préalable
Apoptosis is an active physiological process involving a genetically regulated cell suicide process. Two effector cytolytic pathways of apoptosis are involved: one is triggered by the engagement of cell-surface death receptors of the Fas/tumor necrosis factor receptor (TNFR) family, and the other is the mitochondrial pathway, which involves released of pro-apoptotic effectors. These two pathways trigger the effector caspases activation. A deregulation of apoptosis control mechanisms can provide some pathologies. We investigate a possible implication of apoptosis induction and the molecular mechanisms involved in the cytomegalovirus infection and in the acute graft versus host disease (GVHD). HCMV (human cytomegalovirus) encodes proteins with antiapoptotic properties but no proapoptotic protein is known. Here we show, in vitro, that the G protein coupled receptor (GPCR), US28 encoded by HCMV, constitutively induced a caspase-dependent apoptosis but independent of the mitochondrial pathway activation and of cellular TNF family death receptor activation. In the context of allogeneic bone marrow grafting, the GVHD corresponds to an allogeneic response of donor effector cells against recipient epithelial target cells. In a murine model of acute GVHD, in vivo, our results shown that endothelial cell death precedes the induction of epithelial cell death in the oral mucosa and that FasL expression by allogeneic actived lymphocytes T is required, in the absence of any conditioning treatment

Des analyses de CGH array menées chez des clones de N2a non infectés, sensibles ou résistants à la souche de prion 22L, ont révélé desmodifications chromosomiques mais aucune altération génomique récurrente associée au phénotype. L’analyse de l’expression de 29 gènes candidats a mis en évidence des profils transcriptionnels particuliers entre clones. L’analyse du transcriptome des cellules N2a5822L par biopuces a mis en évidence l’expression différentielle de gènes contrôlant l’efficacité de la transcription et la dynamique du cytosquelette. La mesure de l’expression de 38 gènes dans N2a5822L ainsi que dans trois autres clones sensibles et dans un clone résistant a montré une diversité de la réponse transcriptionnelle face à l’infection. L’étude de la PrPSc chez un patient atteint de MCJ et portant la mutation p. V180I a révélé l’absence de l’isoforme bi-glycosylée et serait révélatrice d’une conversion préférentielle des formes mono- et non-glycosylées mutées en formes pathologiques
CGH array analysis of uninfected N2a sublines, susceptible or resistant to 22L prion strain, revealed chromosomal imbalances but did not demonstrate any characteristic profile of genomic alterations linked to phenotype. Likewise, sublines phenotype did not depend on the expression of Prnp nor PrPC. Analysis expression of a set of 29 genes revealed distinct transcriptional profiles in the N2a sublines. Transcriptional analysis of N2a5822L cells using microarrays demonstrated differential expression of genes implicated in transcription efficiency and cytoplasmic dynamics. Expression levels of a set of 38 genes in N2a5822L, in three susceptible sublines and in a resistant subline revealed diversity in transcriptional response to prion infection. Finally, study of PrPSc in a CJD patient harbouring the p. V180I mutation revealed the absence of the diglycosylated isoform supporting the evidence of the conversion of mono- and un-glycosylated mutated forms into the pathogenic mutant PrPSc180I

Nous effectuons une étude de la diversité métabolique de divers isolais de E. Coli afin (i) d'établir un lien entre métabolisme et virulence et, (ii) de mieux comprendre la physiopathologie des infections urinaires (IU). Les activités enzymatiques spécifiques d'enzymes du métabolisme central sont mesurées à la phase exponentielle dans 4 milieux pour 5 souches. Une diversité intra espèce du métabolisme et des capacités d'adaptation est mise en évidence. Elle peut être rattachée au phénotype pathogène ou commensal et à la niche. E. Coli CFT073, uropathogène, favorise le métabolisme de l'acétate et les voies de biosynthèse dans l'urine. L'évaluation de l'homéostasie redox de 8 souches montre que la phase exponentielle, par rapport à la phase stationnaire de la croissance dans l'urine, est associée à un déséquilibre de l'homéostasie redox. Un stress systémique modifie la composition de l'urine, favorisant la croissance de E. Coli qui pourrait participer à la survenue d'IU en réanimation
We carry out a study of the metabolic diversity for some strains of E. Coli, in order to (i) point out a link between metabolism and virulence and, (ii) improve our understanding of urinary tract infections (UTI). The specific activity of some enzymes from the central metabolism was measured for 5 strains yielded in 4 mediums. We highlight a metabolic diversity, which could be linked to strain's habitats or pathovars. The uropathogenic strain, E. Coli CFT073, favours acetate metabolism and neoglucogenesis during growth in urine. The study of redox homeostasis for 8 E. Coli strains shows an unbalance during exponential phase by comparison with stationary phase. A systemic stress, such as a polytraumatism, is responsible for changes in urine composition, which could be a risk factor of UTI occurrence in unwell intensive care patients

Les interférons de type I, auxquels appartient l'IFN-ß, sont des molécules antivirales naturelles connues pour inhiber le réplication du VIH. Plusieurs étapes du cycle réplicatif du VIH sont affectées dans les cellules traitées par l'IFN : la pénétration des particules virales, la transcription inverse du génome ARN en ADN, la synthèse des protéines virales, l'encapsidation et le relarguage des virions matures. De plus, les virions relargués par des cellules traitées par les IFN sont 100 à 1000 fois moins infectieux. Toutefois, l'action des IFN semble limitée, notamment vis-à-vis du VIH, du fait d'une induction trop faible de leur expression dans les lymphocytes CD4+ infectés et les monocytes/macrophages, principales cellules cibles du virus. Les techniques de transfert de gènes pourraient palier cette déficience en conférant aux cellules cibles du VIH, par la synthèse constitutive d'IFN-ß, un état antiviral permanent. Cependant, compte tenu des risques liés à la transduction par des vecteurs viraux et des conditions de leur utilisation dans un organisme chroniquement infecté par le VIH et immunocompromis, ce type d'approche nécessite une évaluation préalable dans un modèle animal. Le macaque infecté par un isolat pathogène du SIVmac251 reproduit les événements physiopathologiques observés chez l'homme au cours de l'infection par le VIH et développe en 6 à 36 mois un SIDA en tous points comparable à la maladie humaine. L'objectif général de ce travail a été d'évaluer, à l'aide de ce modèle animal, la capacité d'une synthèse constitutive d'IFN-ß à protéger les lymphocytes périphériques d'une infection par le VIH. Pour cela, nous avons transduit des cellules mononucléées du sang périphérique (CMSP) de macaques sains au moyen d'un vecteur rétroviral dérivé du virus leucémogène murin de Moloney, permettant d'insérer ainsi dans l'ADN de l'hôte le gène de l'IFN-ß de macaque, placé sous le contôle du promoteur murin H2Kb. Ce système conduit à une expression constitutive mais faible du gène thérapeutique dans les cellules transduites. Nos résultats montrent que la transduction de 9 % des cellules suffit pour protéger les CMSP infectées in vitro par le SIVmac251. La réinjection des cellules exprimant de manière constitutive l'IFN-ß, à des macaques sains, ne s'accompagne pas d'effets secondaires majeurs. Cependant, la présence de ces cellules n'a pas pu prévenir d'une infection d'épreuve des macaques par le SIVmac251. En revanche, la charge virale plasmatique de ces animaux, au cours de la primo-infection, semble réduite par comparaison à celle des animaux témoins.

Les papillomavirus humains (HPV) sont de petits virus icosaédriques à ADN. Plus de 150 génotypes ont été identifiés et sont pour la plupart responsables de lésions hyperprolifératives bénignes cutanées ou muqueuses. L'infection par certains génotypes considérés à haut risque (HPV-HR) est associée à la transformation maligne comme les cancers anogénitaux (HPV16, 18) dans la population générale ou les carcinomes cutanés (HPV5, 8) dans le contexte d'une génodermatose autosomique récessive l'épidermodysplasie verruciforme (EV). Leur potentiel oncogène repose principalement sur l'activité des oncoprotéines E6 et E7. L'activité transformante des protéines E6 des HPV muqueux à haut risque met enjeu la dégradation du suppresseur de tumeur p53. En revanche, peu de données sont disponibles concernant les propriétés des protéines E6 des HPV cutanés oncogènes. 11 a été montré précédemment dans le laboratoire que l'oncoprotéine E6 de HPV5 (5E6) interagit avec la protéine SMAD3 de la voie de signalisation du TGF-beta. Cette cascade est impliquée dans de nombreux processus cellulaires tels que la prolifération, la différenciation, l'apoptose et est connue pour être dérégulée dans de nombreux cancers. L'objectif de cette thèse était de comprendre les mécanismes d'inhibition de la voie du TGF-beta par la protéine 5E6. Nous avons tout d'abord caractérisé le domaine minimal d'interaction de SMAD3 sur 5E6. Puis des études interactomiques ont mis en évidence le ciblage redondant de la voie du TGF-β par 5E6 en interagissant non seulement avec SMAD3 mais aussi avec deux régulateurs clés de la voie : SnoN et Arkadia. Une méthode de détection de complexe ternaire développée au laboratoire nous a conduit à montrer qu'en plus de la dégradation protéasome-dépendante du complexe SMAD3/SMAD4, 5E6 parvient à recycler la répression transcriptionnelle induite par SnoN au profit du virus. Nos résultats suggèrent que l'inhibition de cette voie, favorisant la prolifération cellulaire des kératinocytes en voie de différenciation, facilite le cycle viral et contribue au potentiel oncogène des HPV cutanés
Human papillomaviruses (HPVs) are non-enveloped DNA viruses of icosahedral symmetry. More than 150 HPVs genotypes have been described so far. Most of them cause benign skin or mucosal hyperproliferative lesions. Infections with certain genotypes of HPVs are associated with malignant transformation such as ano-genital cancer (HPV 16, 18) in the general population or cutaneous carcinoma (HPV 5, 8) in the context of the inherited disorder epidermodysplasia verruciformis (EV). These HPVs are considered as "high-risk" genotypes because of their tight association with cancer. Their oncogenic potential mainly relies on the activity of the two early viral oncoproteins, E6 and E7. The transforming activity of E6 protein of mucosal high-risk HPVs clearly implicates the tumor suppressor p53 degradation. In contrast, little is known on the functional properties of E6 oncoproteins from oncogenic cutaneous HPVs. Previous studies in the laboratory had shown the interaction between oncogenic HPV5 E6 (5E6) and the SMAD3 protein of the TGF-beta signalling pathway. This pathway is involved in many cellular events as control of cellular prolifération, differentiation, apoptosis and is known to be misregulated in numerous cancers. Our goal in this thesis was to dissect TGF-beta pathway rewired by E6 protein from oncogenic HPV 5. Combining deletion mutagenesis and linker scanning approaches we mapped on E6 N-terminal half the SMAD3 interacting area. Then, interactomic studies showed a redundant targeting of the TGF-beta by 5E6 that not only interact with SMAD3 but also with SnoN and Arkadia, two key regulators. To better understand the consequences of these interactions, we developed a ternary complex detection assay that leads us to show that besides proteosomal degradation of SMAD3/4 complexes, 5E6 also recycles SnoN-mediated repression to rewire the TGF-beta signaling pathway for viral benefit. Our results support the hypothesis that inhibition of this pathway, by eliciting cell proliferation in differenciating layers of epidermis, facilitates the viral cycle and accordingly, contributes to the oncogenic potential of E6 proteins from cutaneous HPVs