Dissertations / Theses on the topic 'Inferno 2'

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-30Bitstream added on 2014-06-13T21:06:02Z : No. of bitstreams: 1 hatakeyama_m_dr_sjc.pdf: 755363 bytes, checksum: 572c154cdca893a035a5408346a4fcd4 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
A queilite actínica (QA) é uma lesão multifocal que acomete o vermelhão do lábio com potencial de malignização para carcinoma epidermóide (CE). O receptor para o fator de crescimento epidermal (EGFR) é membro da família dos receptores tirosina quinase que participa da transformação e progressão da neoplasia maligna. O objetivo desta pesquisa foi verificar a expressão de HER-1 e HER-2 totais e fosforilados e possíveis correlações das expressões destas proteínas com lesões de QA e CE de lábio inferior por imunoistoquímica. Foram um estudo de 50 casos de QA, 50 casos de CE e 14 de Controle. Expressão das proteínas foi baseado num escore. Os dados obtidos foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis e como análise post-hoc o teste de Mann-Whitney com correção de Bonferroni e, correlação de Spearman. O nível de significância escolhido foi o valor convencional de 5%. A análise da comparação foi estatisticamente significativa na membrana do pHER-2, grupos Controle x QA e QA x CE; no citoplasma do HER-1, grupos Controle x QA, do pHER-1, grupos Controle x QA e Controle x CE, do pHER- 2, grupos Controle x QA e Controle x CE; no núcleo do pHER-1, grupos Controle x QA, do HER-2, Controle x QA e Controle x CE (p<0,05). O estudo da correlação foi estatisticamente significativa na membrana do HER-1 x pHER-2 no grupo QA, HER-1 x HER-2, HER-1 x pHER-1, HER-2 x pHER-1 no grupo CE; no citoplasma entre HER-1 x HER-2 no grupo QA, HER-1 x HER-2 no grupo CE; no núcleo entre HER-2 x pHER-1 no grupo Controle (p<0,05). Estes dados sugerem que a maior marcação no grupo Controle poderia ser decorrente da variedade de lesões benignas que compõem esse grupo e que poderiam apresentar proliferação aumentada. Localização nuclear poderia estar relacionada não apenas como iniciadores das cascatas intracelulares, mas também como fatores de transcrição...
Actinic cheilitis (AC) is a multifocal lesion that occurs in lip vermillion with potential of malignant transformation to epidermoid carcinoma (EC). Epidermal growth factor receptor (EGFR) is a member of tyrosine kinase family, involved in transformation and progression of malignant tumour. The aim of this study was to analyse the expression of total and phosphorylated HER-1 and HER-2 and correlate expression of these proteins with lesions of AC and CE in lower lip by immunohistochemistry. It was a study of 50 cases of AC, 50 of EC and 14 of Control. Proteins expressions were based on a score. Obtained datas were analysed by Kruskal-Wallis test and post-hoc analysis with Mann-Whitney test with Bonferroni correction and, Spearman correlation. The level of significance was 5%. The analysis of the comparison was statistically significant in membrane of pHER-2, group Control x AC and AC x EC; in cytoplasma of HER-1, Control x AC, pHER-1,Control x AC and Control x EC, pHER-2, Control x AC and Control x EC; in nucleus of pHER-1, Control x AC, HER-2, Control x AC and Control x EC (p<0,05). The study of the correlation was statistically significant in membrane of HER-1 x pHER-2 expression in AC, HER-1 x HER-2, HER-1 x pHER-1and HER-2 x pHER-1 in EC; in cytoplasma, HER-1 x HER-2 in AC, HER-1 x HER-2 in EC; in nucleus, HER-2 x pHER-1 in Control (p<0,05). Our findings suggested that a higher expression in Control group could be due to a composition of this group by a variety of benign lesions that could present increased proliferation. Nuclear localization could be related not only with the action of intracellular cascade beginners, but also to action as transcription factors. Phosphorylation of HER-1 and HER-2 by MAPK pathway can be independent of total level of proteins in AC and EC lip lesions, because phosphorylation might be increased indirectly by UV radiation in a ligand independent way... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante
Banca: Adriana Aigotti H. Brandão
Banca: Ana Lia Anbinder
Banca: Marília T. Martins
Banca: Fábio L. Forti
Resumo: A queilite actínica (QA) é uma lesão multifocal que acomete o vermelhão do lábio com potencial de malignização para carcinoma epidermóide (CE). O receptor para o fator de crescimento epidermal (EGFR) é membro da família dos receptores tirosina quinase que participa da transformação e progressão da neoplasia maligna. O objetivo desta pesquisa foi verificar a expressão de HER-1 e HER-2 totais e fosforilados e possíveis correlações das expressões destas proteínas com lesões de QA e CE de lábio inferior por imunoistoquímica. Foram um estudo de 50 casos de QA, 50 casos de CE e 14 de Controle. Expressão das proteínas foi baseado num escore. Os dados obtidos foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis e como análise post-hoc o teste de Mann-Whitney com correção de Bonferroni e, correlação de Spearman. O nível de significância escolhido foi o valor convencional de 5%. A análise da comparação foi estatisticamente significativa na membrana do pHER-2, grupos Controle x QA e QA x CE; no citoplasma do HER-1, grupos Controle x QA, do pHER-1, grupos Controle x QA e Controle x CE, do pHER- 2, grupos Controle x QA e Controle x CE; no núcleo do pHER-1, grupos Controle x QA, do HER-2, Controle x QA e Controle x CE (p<0,05). O estudo da correlação foi estatisticamente significativa na membrana do HER-1 x pHER-2 no grupo QA, HER-1 x HER-2, HER-1 x pHER-1, HER-2 x pHER-1 no grupo CE; no citoplasma entre HER-1 x HER-2 no grupo QA, HER-1 x HER-2 no grupo CE; no núcleo entre HER-2 x pHER-1 no grupo Controle (p<0,05). Estes dados sugerem que a maior marcação no grupo Controle poderia ser decorrente da variedade de lesões benignas que compõem esse grupo e que poderiam apresentar proliferação aumentada. Localização nuclear poderia estar relacionada não apenas como iniciadores das cascatas intracelulares, mas também como fatores de transcrição... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Actinic cheilitis (AC) is a multifocal lesion that occurs in lip vermillion with potential of malignant transformation to epidermoid carcinoma (EC). Epidermal growth factor receptor (EGFR) is a member of tyrosine kinase family, involved in transformation and progression of malignant tumour. The aim of this study was to analyse the expression of total and phosphorylated HER-1 and HER-2 and correlate expression of these proteins with lesions of AC and CE in lower lip by immunohistochemistry. It was a study of 50 cases of AC, 50 of EC and 14 of Control. Proteins expressions were based on a score. Obtained datas were analysed by Kruskal-Wallis test and post-hoc analysis with Mann-Whitney test with Bonferroni correction and, Spearman correlation. The level of significance was 5%. The analysis of the comparison was statistically significant in membrane of pHER-2, group Control x AC and AC x EC; in cytoplasma of HER-1, Control x AC, pHER-1,Control x AC and Control x EC, pHER-2, Control x AC and Control x EC; in nucleus of pHER-1, Control x AC, HER-2, Control x AC and Control x EC (p<0,05). The study of the correlation was statistically significant in membrane of HER-1 x pHER-2 expression in AC, HER-1 x HER-2, HER-1 x pHER-1and HER-2 x pHER-1 in EC; in cytoplasma, HER-1 x HER-2 in AC, HER-1 x HER-2 in EC; in nucleus, HER-2 x pHER-1 in Control (p<0,05). Our findings suggested that a higher expression in Control group could be due to a composition of this group by a variety of benign lesions that could present increased proliferation. Nuclear localization could be related not only with the action of intracellular cascade beginners, but also to action as transcription factors. Phosphorylation of HER-1 and HER-2 by MAPK pathway can be independent of total level of proteins in AC and EC lip lesions, because phosphorylation might be increased indirectly by UV radiation in a ligand independent way... (Complete abstract click electronic access below)
Doutor

A principal função dos linfócitos T CD4+ é fornecer apoio a outras células no sentido de gerar uma resposta imunitária eficiente. As interações entre as células T e B são essenciais para a produção de respostas humorais, sendo que foi recentemente demonstrado que as células T foliculares auxiliares (Tfh) desempenham um papel crucial neste processo. Caracteristicamente, expressam o fator de transcrição Bcl-6, o recetor de quimiocinas CXCR5 e o marcador de superfície PD-1. A expressão destes marcadores é única e fundamental para que estas células possam aceder ao folículo de células B, onde orientam as reações no centro germinativo (GC), levando à consequente mudança de isótipo, maturação da afinidade, produção de anticorpos de alta afinidade e células B de memória. Neste projeto, foram testadas duas hipóteses opostas no sentido de caracterizar fenotipicamente as células Tfh. Propomos investigar se estas são especializadas no fornecimento de auxílio do tipo Th1 ou Th2, que designamos de células hipotéticas "Tfh1" e "Tfh2" (Hipótese 1) ou se são uma subpopulação genérica que responde igualmente na presença de diferentes antigénios, células Tfh (Hipótese 2). Deste modo, murganhos C57BL/6J e Balb/c foram imunizados na almofada plantar da pata traseira, utilizando proteína Ovalbumin (OVA) combinada com diferentes tipos de adjuvantes: CpG ODNs isoladamente e em combinação com TiterMax® Gold (TMX), Sigma Adjuvant System (SAS) e Montanide ISA 720 VG, testados como adjuvantes tipo 1, e por sua vez Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) e Alum experimentados como adjuvantes do tipo 2. A técnica de ELISA permitiu determinar no soro dos murganhos o tipo de resposta gerada, através da medição de imunoglobulinas específicas para OVA (IgG2a para Th1, IgG1 e IgE total para Th2). CpG ODNs e IFA foram considerados como os adjuvantes mais apropriados para induzir respostas Th1 e Th2, respetivamente. Células T que reconhecem especificamente OVA foram colhidas de murganhos OT-II Rag-/- e DO11.10 Rag-/- e transferidas para murganhos congénicos. De seguida, procedeu-se à imunização tal como descrito acima. Os nódulos linfáticos drenantes foram recolhidos no pico da reação do centro germinativo (11 dias após imunização), assim como as células Tfh específicas para OVA (CD4+CD44+ CXCR5+PD-1+ Thy1.2+Vβ5+Vα2+/DO11.10+) e as células T auxiliares ativadas específicas para OVA (CD4+CD44+CXCR5-PD-1- Thy1.2+Vβ5+Vα2+/DO11.10+). A caracterização molecular destas populações de células T está a ser analisada através da sequenciação dos seus transcritos pela técnica de RNA-sequencing. Além disso, a expressão de marcadores de Th1 e Th2 em células Tfh foi analisada através de citometria de fluxo e Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa por Transcrição Reversa (RT-qPCR). Neste estudo, foi demonstrado que as células Tfh co-expressam Bcl-6 e T-bet e também produzem IFN-γ, quando sensibilizadas com OVA-CpG ODNs, características concordantes com os marcadores fenotípicos de uma célula Tfh e célula Th1. A expressão de Gata-3 (marcador Th2) só foi detetada sob estimulação IFA-OVA, embora em níveis mais baixos do que as determinadas para T-bet.
The major function of CD4+ T cells is to provide help to other lymphocytes to mount an efficient immune response. T and B cell interactions are essential for humoral responses and it was recently shown that T follicular helper (Tfh) cells play a crucial role in this process. They characteristically express the transcription factor Bcl-6, chemokine receptor CXCR5 and PD-1. These markers are unique as their expression is pivotal to acquire access to the B cell follicle and drive germinal centre (GC) reactions, leading to isotype switching, affinity maturation, and production of high affinity antibodies and memory B cells. In this project, two competing hypothesis investigating the phenotype of Tfh cells were tested. We propose to dissect whether Tfh cells are specialized in providing Th1 or Th2 help, which we call putative “Tfh1” and “Tfh2” cells (hypothesis 1), or if they are a more generic Th subset that responds equally in the presence of different antigens, which we designate as Tfh cells (hypothesis 2). Therefore, we immunized C57BL/6J and Balb/c mice in the footpad using Ovalbumin (OVA) protein combined with different adjuvant types: CpG ODNs only and combined with TiterMax® Gold (TMX), Sigma Adjuvant System (SAS) and Montanide ISA 720 VG, as type 1 adjuvant, and Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) and Alum as type 2 adjuvants. Using ELISA assays to determine the type of response generated by measuring serum immunoglobulins of distinct clones (OVA-specific IgG2a for Th1 and OVA-specific IgG1 and total IgE for Th2), we considered CpG ODNs and IFA as the most appropriate adjuvants to induce Th1 and Th2 responses, respectively. OVA-specific cells were transferred from OT-II Rag-/- and DO11.10 Rag-/- mice into congenic mice subsequent to immunization as described above. Draining LNs were collected at the peak of the GC reaction (day 11 post-immunization) and OVA-specific Tfh cells (CD4+ CD44+ CXCR5+PD-1+ Thy1.2+Vβ5+Vα2+/DO11.10+) and OVA-specific activated-Th cells (CD4+ CD44+ CXCR5-PD-1- Thy1.2+Vβ5+Vα2+/DO11.10+) were sorted. The molecular signature of these T cell populations is being analysed via RNA-Sequencing. Moreover, the expression of Th1 and Th2 markers on Tfh cells was investigated via flow cytometry and Reverse Transcription quantitative Polymerase Chain Reaction (RT-qPCR). In this study, it could be shown that Tfh cells of mice immunized with OVA-CpG ODNs co-expressed Bcl-6 and T-bet and also produced IFN-γ, both concordant features with the phenotypic markers of a Tfh cell and of a Th1 cell. As for the expression of Gata-3, it has only been detected in mice under IFA-OVA stimulation, even though at levels lower than the ones determined for T-bet.

A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) é uma doença grave que se caracteriza pela destruição ou pelo desaparecimento de reações imunitárias do organismo, que permitem o surgimento de infeções oportunistas que podem levar à morte. O agente etiológico responsável pela SIDA é o Vírus da Imunodeficiência Humana (VIH) e existem dois tipos: o tipo 1 (VIH-1) e o tipo 2 (VIH-2). Quando comparados, o VIH-2 tem uma taxa de transmissão menor e uma progressão da doença mais lenta, o que faz com que os indivíduos infetados tenham um melhor prognóstico. Um dos fatores importantes nesta resposta imunológica é a presença de anticorpos neutralizantes (nAbs) e a pouca capacidade do VIH-2 na evasão a esta resposta. Os nAbs têm a capacidade de inibir a entrada do vírus nas células, através da sua ligação a regiões específicas presentes nas glicoproteínas do invólucro viral. A região V3 do domínio C2V3C3 existente na glicoproteína de superfície do invólucro do VIH-2 é um dos alvos preferenciais dos nAbs. No entanto, desconhece-se ainda de que forma as regiões adjacentes, C2 e C3, contribuem para uma resposta neutralizante. Este estudo teve como objetivos caracterizar o impacto das regiões C2, V3 e C3 na resposta de anticorpos não neutralizantes e neutralizantes na infeção por VIH-2. Para isso, recorreu-se à produção de péptidos recombinantes correspondentes a cada uma das regiões referidas anteriormente através da transformação e crescimento de bactérias competentes E. coli TOP10 com plasmídios clonados com fragmentos de ADN das regiões C2, V3 e C3, respetivamente. Após a sua produção, os péptidos recombinantes foram purificados por Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) e utilizados como antigénios em imunoensaios (ELISA), para estudar a reatividade de cada um dos péptidos com um painel de soros positivos para VIH-2. Observou-se maior serorreatividade contra o péptido recombinante V3 (prV3), seguido do prC3 e do prC2. Foram feitas correlações entre os valores obtidos neste estudo e valores obtidos em estudo realizado anteriormente sobre a potência da neutralização dos anticorpos (IC50) presentes em alguns dos soros utilizados. Verificou-se que não havia associação entre a neutralização e a serorreatividade contra cada região, o que pode indicar que os anticorpos neutralizantes produzidos por indivíduos infetados pelo VIH-2 não são específicos para nenhuma das respetivas regiões. No entanto, o número elevado de casos de serorreatividade pode ser indicativo de que as 3 regiões em conjunto possam ser responsáveis pela indução de anticorpos neutralizantes específicos para o domínio C2V3C3, tal como já foi observado anteriormente.
Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is a severe disease characterized by destruction or disappearance of the immune reactions of the organism, wich enables the appearance of opportunistic infections that can lead to death. The etiological agent responsible for AIDS is the Human Immunodeficiency Virus (HIV) and there are two types: type 1 (HIV-1) and type (HIV-2). When compared, HIV-2 has a lower transmission rate and a slower progression of the disease, which causes the infected individuals to have a better prognosis. One of the important factors in this immune response is the presence of neutralizing antibodies (nAbs) and the limited capacity of HIV-2 to escape. The nAbs have the ability to inhibit viral entry into cells, through its binding to specific regions present in the viral envelope glycoproteins. The V3 region existing in C2V3C3 domain present on surface glycoprotein of HIV-2 envelope is the main target of nAbs. However, it is still unknown how the adjacent regions, C2 and C3, contribute to a neutralizing response. This study aimed to characterize the impact of the regions C2, V3 and C3 in non-neutralizing and neutralizing antibody response in infection by HIV-2. Therefore, recombinant peptides were produced corresponding to each of the regions mentioned above by transformation and growth of competent bacteria E. coli TOP10 with plasmids cloned with DNA fragments of the C2, V3 and C3 regions, respectively. After their production, the recombinant peptides were purified by Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC) and used as antigens in imunoassays (ELISA) to study the reactivity of each peptide with a panel of positive sera for HIV-2. It was observed a higher serorreactivity against recombinant peptide V3 (prV3), followed by prC3 and prC2. Correlations were made between the values obtained in this study and values obtained in a previous study about the potency of neutralizing antibodies (IC50) present in some of the used sera. It was found that there was no association between the neutralization and serorreactivity against each region, which may indicate that neutralizing antibodies produced by individuals infected with HIV-2 are not specific for any of the respective regions. However, the large number of cases of serorreactivity may be indicative that the three regions together may be responsible for the induction of neutralizing antibodies specific for C2V3C3 domain, as noted earlier.

A presente dissertação é composta por três capítulos descritivos da minha experiência profissionalizante em farmácia hospitalar e comunitária e do meu estudo de investigação. O primeiro capítulo relata o meu estágio em farmácia hospitalar que foi realizado no Hospital Sousa Martins, na Guarda. Com este capítulo pretendo descrever os conhecimentos que adquiri e as atividades em que colaborei durante o estágio, que me permitiram perceber quais as valências e funções desempenhadas pelos farmacêuticos no dia-a-dia de trabalho em hospital O segundo capítulo descreve o meu estágio em farmácia comunitária, realizado na Farmácia Taborda, no Fundão. Durante este período de estágio tive a oportunidade de conhecer melhor o papel do farmacêutico junto da comunidade e aperceber-me das funções e responsabilidades dos farmacêuticos na promoção da Saúde Pública e da racionalização do uso de medicamentos. O terceiro capítulo diz respeito à investigação realizada no âmbito do estudo da adesão de mães de crianças até dois anos de idade às medidas de prevenção da infeção congénita por Citomegalovírus (CMV). O Citomegalovírus é o principal agente de infeção congénita nos países desenvolvidos afetando atualmente cerca de 0,2%-2,2% de todos os recém-nascidos. Devido ao espectro das consequências associadas à infeção congénita por CMV, este tem-se tornado, atualmente, uma das maiores preocupações de Saúde Pública. Com estudos de várias opções de prevenção e tratamento da infeção congénita por CMV ainda a decorrer, a adoção de medidas de higiene parece ser, por enquanto, a única forma de prevenção da infeção citomegálica durante a gravidez. Com o objetivo de determinar a adesão das mulheres em idade fértil a essas medidas de higiene foi realizado um inquérito a 570 mães de crianças até 2 anos de idade questionando acerca da sua recetividade para a adoção das medidas propostas, sabendo que tais medidas poderiam prevenir possíveis malformações num futuro recém-nascido. Das medidas propostas a maioria das mulheres (61,5%) considerou que dificilmente deixaria de mudar as fraldas ao seu filho, mas certamente lavaria as mãos depois de mudar as fraldas (91,9%). 81,8% das mulheres inquiridas afirmaram que dificilmente deixariam de brincar com os seus filhos, mas 44,5% afirmou que certamente lavaria as mãos depois de manusear os brinquedos e 73,8% das inquiridas afirmou que deixaria de trocar colheres e escovas de dentes com a criança. Das medidas propostas a que se mostrou um perfil de respostas mais díspar foi a de deixar de dar beijos na boca e nariz dos seus filhos, com 38,7% das inquiridas a dizer que certamente o faria e 25,0% a afirmar que dificilmente praticaria esta medida de prevenção. Também no estudo da adesão às medidas de prevenção em mulheres cuja profissão exige contato direto com bebés e crianças em idade pré-escolar a adoção das medidas de higiene no local de trabalho foi bem aceite, com a maioria das mulheres a afirmar que certamente praticaria todas elas, com um perfil de adesão bastante semelhante às praticadas com os seus próprios filhos. Da análise dos resultados podemos concluir que se for explicado às futuras mães os riscos que correm a maioria delas está disposta a evitar o contacto com as secreções dos seus filhos, sendo a educação para a adoção destes comportamentos uma medida fácil de implementar e com resultados já comprovados em estudos internacionais, não só para prevenir a infeção congénita pelo CMV mas também para prevenir outras infeções transmissíveis pelo contacto com secreções.
This paper consists of three chapters which describe my internships in community and hospital pharmacy and my own research. The first chapter describes my internship in a hospital pharmacy that was performed in the Hospital Sousa Martins, in Guarda. In this chapter I would like to describe the knowledge I gained and the activities in which I participated during the internship, which allowed me to realize which functions are performed by pharmacists in a daily basis in a hospital. The second chapter describes my internship in a community pharmacy, held at Pharmacy Taborda, in Fundão. During this internship period I had the opportunity to learn more about the role of the pharmacist in the community and became conscious of the functions and responsibilities of pharmacists in public health promotion and rationalization of the use of medicines. The third chapter concerns the research carried out, to study how the mothers of children under two years of age comply with preventive measures of congenital Cytomegalovirus infection. Cytomegalovirus is the main agent of congenital infection in developed countries, affecting approximately 0,2%-2,2% of all newborns. Due to the spectrum of complications associated with congenital CMV infection, this has become one of the biggest concerns of public health. With studies of several options for prevention and treatment of congenital CMV infection still ongoing, the adoption of measures of hygiene seems to be, for now, the only way of preventing CMV infection during pregnancy. In order to determine how women in childbearing age follow these hygiene measures, a survey was conducted to 570 mothers of children up to 2 years of age. This survey seeks to understand how receptive they were about the adoption of the measures proposed, bearing in mind that such measures could prevent possible malformations in the newborn. Of the measures proposed, most women (61.5%) considered that they would hardly stop changing the diapers to their children, but surely would wash their hands after doing it (91.9%). 81,8% of the women surveyed stated that they wouldn't stop playing with their children, but 44,5% stated that they certainly would wash their hands after handling the toys. 73,8% of these women stated that they would stop using the same spoons and toothbrushes as their children. Of the proposed measures, one of the questions which had the most ambiguous and diverging answers, was the one which asks them if they would stop kissing their children on the mouth and nose. 38,7% of the surveyed women said that they certainly would. 25,0% stated that they would hardly practice this measure of prevention. Also in this study, as far as the women whose job requires direct contact with babies and pre-school children are concerned, the adoption of hygiene measures in the workplace was well accepted. Most women said that they would certainly follow them all, with results quite similar to those practiced with their own children. From the analysis of the results, we can conclude that if the risks of CMV congenital infection are explained to future mothers, most of them are willing to avoid contact with the secretions of their children And the education for the adoption of these measures, which not only prevents congenital infection by CMV, but also other infections transmitted by contact with secretions, is easy to implement, with results proven in international studies.

ANTECEDENTES: El diagnóstico precoz del carcinoma hepatocelular es la única opción para poder aplicar tratamientos radicales potencialmente curativos. Por este motivo es necesario desarrollar diferentes técnicas que permitan realizar el diagnóstico precoz.

HIPÓTESIS: La vascularización predominantemente arterial del CHC determina un patrón vascular específico caracterizado por intensa captación de contraste en fase arterial seguida de lavado de contraste en fase venosa. De acuerdo a unos criterios propuestos por la AASLD y basados en opinión de expertos, es posible realizar el diagnóstico concluyente de CHC sin necesidad de confirmación histológica si se objetiva este patrón vascular mediante técnicas de imagen dinámicas (RM, TC y eco con contraste (US-C)). En el caso de nódulos entre 1 y 2 cm se recomienda demostrar este patrón de forma coincidente en dos pruebas dinámicas.

OBJETIVOS: Determinar la capacidad diagnóstica de la RM de última generación y US con contrastes de segunda generación para el diagnóstico de lesiones con un tamaño < 2 cm en pacientes con cirrosis hepática, con especial énfasis en el diagnóstico diferencial con el colangiocarcinoma intrahepático. Asimismo, como segundo objetivo se evaluará el valor de la captación de contraste para determinar la respuesta tumoral tras la aplicación de tratamientos locorregionales.

METODOLOGÍA: Estudio observacional prospectivo en el que se incluirán pacientes cirróticos con función hepática conservada y sin historia previa de CHC en los que se detecta un nódulo único de 5-20 mm por ecografía de screening. Se realizará de forma basal una RM dinámica, US-C, determinación de marcadores tumorales y una biopsia, que se repetirá en caso de diagnóstico negativo. En caso de ausencia de malignidad, se realizará un seguimiento mediante US-C/3m y RM/6m; ante la detección de crecimiento o cambio de vascularización se realizará nueva biopsia. En la segunda parte del estudio se evaluará de forma retrospectiva la respuesta tumoral de una cohorte de pacientes afectos de CHC tratados mediante tratamientos locorregionales (ablación percutánea o quimioembolización) teniendo en cuenta criterios convencionales (medición de diámetros; criterios RECIST) o evaluando la extensión de necrosis reconocida como áreas sin captación de contraste.

RESULTADOS: El diagnóstico de CHC puede establecerse en nódulos <20 mm sin necesidad de una biopsia positiva si US-C y RM muestran de forma coincidente hipercaptación en fase arterial seguido de lavado en fase venosa. La presencia de lavado de contraste permite el diagnóstico diferencial con el colangiocarcinoma intrahepático (ICC). Los criterios RECIST evalúan erróneamente la eficacia de los tratamientos locorregionales e infraestiman los beneficios de los tratamientos locorregionales.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioLAP.pdf: 801979 bytes, checksum: bfcf5910a257b5978efceb008f0c1016 (MD5) Previous issue date: 2006-09-28
Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior
The unpredictable biologic behavior of the oral squamous cells carcinoma has determined extensive research on the evolution of such tumor. Due to the existing relation between the outer cell matrix and the tumor cells, the integrins have been used as markers in the predictive study of the cell behavior. This study aims to analyze immunohistochemically the expression of the integrin ?2?1, ?3?1, and ?5?1 connections for the collagen, the laminin and the fibronectin respectively in 15 cases of squamous cells carcinoma from the lower lip and 15 from the tongue, with different scores of malignance grading. A predominantly diffuse, cytoplasm and granular immunological marking was observed in the majority of the analyzed cases. According to the marking intensity, integrin ?2?1 appeared positive in 80% of the lip and in 93,3% of the tongue cases. The immunological reactivity of integrin ?3?1 was classified as positive in 60% of both the tongue and lip cases. For this integrin, 20% and 33.3% of the tongue and lip cases, respectively, were negative. In relation to integrin ?5?1 the intensity was classified as positive in 53,3% of the cases and strongly positive in 46,7% of those located in the lip. In the tongue carcinomas, the intensity was positive in 46,7% of the cases and strongly positive in 53,3%. The statistic analysis did not show any significant differences or correlation of expression between these integrins nor between the anatomical sites or between different scores of malignancy grading. The expressive immunological marking of the integrins, ?2?1, ?3?1, and ?5?1 in the studied cases of squamous cell carcinomas leads us to think of a great participation of these proteins in oral carcinogenesis; however, our results do not allow us to correlate its expression as an indicator of variations in the biological behavior of this neoplasia
A imprevisibilidade do comportamento biol?gico do carcinoma epiderm?ide oral vem justificando um grande n?mero de pesquisas utilizando biomarcadores que possam contribuir para um melhor entendimento do curso evolutivo dessa neoplasia. Por estarem envolvidas em rela??es entre as c?lulas tumorais e constituintes da matriz extracelular, as integrinas v?m sendo estudadas como poss?veis marcadores preditivos desse comportamento. Este estudo se prop?s a analisar, atrav?s do m?todo da imunohistoqu?mica, a express?o das integrinas ?2?1, ?3?1 e ?5?1, ligantes para o col?geno, laminina e fibronectina respectivamente, em 15 casos de carcinoma epiderm?ide de l?bio inferior e 15 de l?ngua, com diferentes escores de malignidade histol?gica. Observou-se uma imunomarca??o predominantemente difusa, citoplasm?tica e granular na maioria dos casos analisados. Quanto ? intensidade de marca??o, a integrina ?2?1 mostrou-se de forma positiva em 80% dos casos de l?bio e em 93,3% dos de l?ngua. A imunorreatividade da integrina ?3?1 foi classificada como positiva em 60% dos casos de l?bio e de l?ngua. Para esta integrina, 20% e 33,3% dos casos de l?bio e l?ngua, respectivamente, mostraram-se negativos. J? com rela??o ? integrina ?5?1a intensidade foi classificada como positiva em 53,3% dos casos e fortemente positiva em 46,7% daqueles localizados em l?bio. Nos carcinomas de l?ngua, a intensidade mostrou-se positiva em 46,7% dos casos e fortemente positiva em 53,3%. A an?lise estat?stica n?o demonstrou diferen?as nem correla??es significativas da express?o dessas integrinas nem entre os s?tios anat?micos, nem entre diferentes escores de grada??o histol?gica de malignidade. A expressiva imunomarca??o das integrinas ?2?1, ?3?1e ?5?1 nos casos de carcinomas epiderm?ides estudados nos leva a sugerir uma ampla participa??o dessas prote?nas na carcinog?nese oral; no entanto, nossos resultados n?o nos permitem correlacionar sua express?o como indicador de varia??es no comportamento biol?gico desta neoplasia

Orientadores: Francisco Carlos Groppo, Maria Cristina Volpato
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-20T01:18:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serpe_Luciano_M.pdf: 1055627 bytes, checksum: 5bd220cdbda1df9bd75a85c3d1bb9159 (MD5) Previous issue date: 2012
Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia anestésica da formulação de bupivacaína complexada com 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina, comparando-a com soluções comerciais de bupivacaína com e sem vasoconstritor, em dois modelos experimentais: bloqueio do nervo alveolar inferior (BNAI) e infiltração subcutânea em ferida cirúrgica (ISFC). Para o BNAI 30 ratos receberam, próximo ao forame mandibular, 0,2ml de uma das seguintes formulações: bupivacaína 0,5% (Bupi), bupivacaína 0,5% com epinefrina 1:200.000 (Bupi-Epi) e formulação de bupivacaína 0,5% complexada com 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina (Bupi-HP?CD). Os lados contralaterais (controle) receberam solução de NaCl 0,9% ou solução de 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina (HPßCD) sem anestésico local. Foram avaliadas latência, sucesso e duração da anestesia pulpar por meio da aplicação de estímulo elétrico ("pulp tester"). Para a ISFC, 30 animais receberam 0,1mL de cada uma das formulações anestésicas ou o respectivo controle na pata traseira direita, 24h após indução de hipernocicepção (ferida cirúrgica - incisão e sutura). A pata traseira esquerda também recebeu injeção, constituindo o controle sem hipernocicepção. A anestesia foi avaliada pela aplicação de força ao lado da ferida (analgesímetro de von Frey). Os resultados foram submetidos à ANOVA e aos testes de Tukey, Student-Newman-Keuls, Kruskal-Wallis, Log Rank e Qui-Quadrado (alfa = 5%). No BNAI não foram observada s diferenças na latência entre as formulações (p>0,05); Bupi apresentou menor duração de anestesia (p<0,05) que Bupi-Epi e Bupi-HPßCD, sem diferença entre estas (p>0,05). Bupi-Epi apresentou maior sucesso de anestesia que Bupi-HPßCD e esta, maior sucesso que Bupi (p<0,05). Para ISFC, nas patas sem hipernocicepção Bupi-Epi induziu maior duração de anestesia do que Bupi (p<0,05); Bupi-HPßCD não diferiu das demais (p>0,05); quanto ao sucesso, Bupi-Epi induziu maior sucesso que as demais soluções e Bupi-HPßCD, maior sucesso que Bupi (p<0,05). Nas patas com hipernocicepção Bupi-Epi induziu maior sucesso de anestesia do que as demais formulações (p<0,05), sem diferença entre estas (p>0,05). Não houve diferença entre as formulações quanto à duração da anestesia nas patas com hipernocicepção (p>0,05). Concluí-se que a complexação da bupivacaína em HP?CD aumentou a taxa de sucesso, mas não a duração da anestesia no BNAI e na ISFC na ausência de hipernocicepção, em relação à bupivacaína sem aditivos, não sendo eficaz em aumentar a eficácia da bupivacaína em tecido com hipernocicepção. A epinefrina aumentou a eficácia anestésica da bupivacaína, à exceção do modelo de ISFC com hipernocicepção, o qual diminuiu a eficácia de todas as soluções de bupivacaína estudadas
Abstract: The aim of the present study was to evaluate the anesthetic efficacy of 2-hydroxypropyl ß-cyclodextrin bupivacaine formulation, compared with commercial bupivacaine solutions, in two experimental models: inferior alveolar nerve block (IANB) and subcutaneous infiltration in surgical wound (SISW). For IANB, 30 rats received an injection of 0.2mL of one of the following formulations, near to the mandibular foramen: 0.5% bupivacaine (Bupi), 0.5% bupivacaine with 1:200.000 epinephrine (Bupi-Epi), and 0.5% bupivacaine in 2-hydroxypropyl-ß-cyclodextrin inclusion complex (Bupi-HPßCD). The contralateral sides (control) received 0.9% NaCl or anesthetic free 2-hydroxypropyl-ß-cyclodextrin (HPß CD) solution. The onset, success and duration of pulpal anesthesia were assessed by electrical stimulation ("pulp tester"). For SISW, 30 animals received 0.1 mL of each anesthetic formulation (both hind paws) or their respective control, 24 hours after hypernociception induction (surgical wound - incision and suture) in the right hind paw. The left hind paw also received the injection and was the control without hypernociception. Analgesia was evaluated by applying force lateral to the incision (von Frey aesthesiometer). Results were submitted to ANOVA and Tukey, Student-Newman-Keuls, Kruskal-Wallis, Log Rank and Chi-square tests (alfa = 5%). No differences were observed among the formulations concerning IANB onset (p>0.05); Bupi presented lower anesthesia duration (p<0.05) than Bupi-Epi and Bupi-HPßCD, with no difference between these two solutions (p>0.05). Bupi-Epi presented higher anesthesia success than Bupi-HP?CD, which showed higher success than Bupi (p<0.05). For SISW, Bupi-Epi showed higher anesthesia success than Bupi (p<0.05) in the non hypernociceptive paws; Bupi-HPßCD did not differ from the others (p>0.05). In this condition Bupi-Epi provided higher anesthesia success than the other formulations and Bupi-HPßCD presented higher anesthesia success than Bupi (p<0.05). In the hypernociceptive paws, Bupi-Epi promoted higher anesthesia success than the other formulations (p<0.05), with no difference between Bupi-HPß CD and Bupi (p<0.05). No difference among formulations were observed in relation to anesthesia duration in the hypernociceptive paws (p>0.05). In conclusion, the complexation of bupivacaine in HPßCD increased anesthesia success, but not duration in IANB and SISW without hypernociception in relation to bupivacaine; in the presence of hypernociception it did not improved bupivacaine efficacy. Epinephrine increased bupivacaine efficacy, except in SISW model with hypernociception, which decreased efficacy of all bupivacaine solutions studied
Mestrado
Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica
Mestre em Odontologia

Orientadores: Maria Cristina Volpato, Francisco Carlos Groppo
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-20T03:43:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_CleitonPitados_M.pdf: 1272357 bytes, checksum: b5a94ba2709ebb84ada56a34f5dfed12 (MD5) Previous issue date: 2012
Resumo: Este estudo avaliou comparativamente a eficácia anestésica (tempo de latência, duração e sucesso da anestesia) da ropivacaína 0,5% complexada com 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina (sistema de liberação controlada de medicamentos), ropivacaína 0,5% sem aditivos e ropivacaína 0,5% com epinefrina 1:200.000, em três modelos experimentais em ratos: bloqueio do nervo infraorbital (BNIO, anestesia de tecido mole), infiltração subcutânea em ferida cirúrgica (ISFC, anestesia pós-operatória em tecido inflamado) e em bloqueio do nervo alveolar inferior (BNAI, anestesia pulpar). O estudo foi caracterizado como cego, com formação aleatória dos grupos e aplicação das formulações. No BNIO, 24 ratos (8 por grupo) receberam 0,1mL das formulações anestésicas próximo ao forame infraorbital do lado direito e o respectivo controle (solução de NaCl 0,9% ou de 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina) do lado esquerdo. A avaliação da anestesia foi feita pelo pinçamento do lábio superior. Na ISFC, 60 ratos (12 por grupo) foram submetidos à avaliação da sensibilidade basal à força com o analgesímetro de von Frey, sendo em seguida submetidos à incisão e sutura na pata traseira direita. Após 24 horas os animais que apresentavam diminuição de pelo menos 20% na força necessária para retirar a pata, foram submetidos à injeção de 0,1mL de uma das formulações anestésicas ou dos controles ao lado da ferida cirúrgica, sendo então avaliados a cada 5min. No BNAI, após fixação de fios de cobre aos molares inferiores dos animais (15 por grupo), os mesmos foram submetidos à injeção de 0,2mL, próximo ao forame mandibular, das formulações anestésicas do lado direito e do respectivo controle do lado esquerdo. A anestesia pulpar foi avaliada com a aplicação de estímulo elétrico ("pulp tester") a cada 2min até obtenção da latência e a cada 5min até retorno da percepção ao estímulo elétrico. Os resultados foram submetidos aos testes de Log Rank, Kruskal-Wallis, Student-Newman-Keuls e Tukey ('alfa'=5%). Não houve diferença entre os grupos com relação à latência no BNAI (p>0,05). A ropivacaína com epinefrina proporcionou maior taxa de sucesso e duração da anestesia que as demais formulações em todos os modelos (p<0,05). Nos modelos BNIO e ISFC a ropivacaína complexada em 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina promoveu maior sucesso e duração da anestesia que a ropivacaína sem aditivos (p<0,05), não diferindo desta no BNAI (p>0,05). Conclui-se que a complexação com 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina aumenta a eficácia anestésica da ropivacaína em tecidos moles, na presença ou ausência de inflamação (BNIO e ISFC), podendo ser opção de uso para controle de dor cirúrgica pós-operatória. A epinefrina é mais potente em aumentar a eficácia anestésica em todos os modelos estudados, sendo o único aditivo eficaz para a anestesia pulpar
Abstract: This study evaluated the anesthetic efficacy (success, onset and duration of anesthesia) of 0.5% ropivacaine complexed with 2- hydroxypropil- ß-cyclodextrin (a controlled drug release system), plain 0.5% ropivacaine and 0.5% ropivacaine with 1:200,000 epinephrine in three experimental models: infraorbital nerve block (IONB, soft tissue anesthesia), subcutaneous infiltration in surgical wound (SISW, post surgical analgesia in inflamed tissue) and inferior alveolar nerve block (IANB, pulpal anesthesia). The study was blind and the groups and injections were randomized. For IONB 24 rats (8/group) received 0.1mL of the anesthetic formulations next to the right infraorbital foramen, the left side received the respective control formulation (NaCl 0.9% or 2- hydroxypropil- ß-cyclodextrin). Anesthesia was evaluated by upper lip pinching. For SISW 60 rats (12/group) were submitted to evaluation of baseline force sensation of the right hind paw (von Frey aesthesiometer) followed by incision and suture. After 24 hours the animals that presented at least 20% decrease in the force for paw withdrawal received an injection of 0.1mL of the anesthetic formulations or controls at the side of the surgical wound and were evaluated each 5min. For IANB, after fixation of copper wires to the mandibular molars, the animals (15/group) were submitted to an injection of 0.2mL of the anesthetic formulations next to right mandibular foramen; the respective control was injected in the left side. Pulpal anesthesia was assessed by electric stimulus (pulp tester) applied each 2min until onset of anesthesia was reached and each 5min until perception of electric stimulus. Data were submitted to Log Rank, Kruskal-Wallis, Student-Newman-Keuls and Tukey tests ('alpha'=5%). No differences in anesthesia onset were observed among groups (p>0.05). Ropivacaine with epinephrine provided higher success rate and duration of anesthesia than the other formulations in all studied models (p<0.05). Ropivacaine with 2- hydroxypropil- ß-cyclodextrin showed higher success rate and duration of anesthesia than plain ropivacaine in IONB and SISW models (p<0.05). No differences between these two formulations were found in the IANB study (p>0.05). In conclusion, 2- hydroxypropil- ß-cyclodextrin increases ropivacaine anesthetic efficacy in inflamed and non-inflamed soft tissues (IONB and SISW), and could be an option for postoperative surgical pain control. Epinephrine is more potent to improve the anesthetic efficacy in all studied models being the only effective additive for pulpal anesthesia
Mestrado
Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica
Mestre em Odontologia

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CyntiaCPC.pdf: 2470782 bytes, checksum: 4619c7ffcab85bffa54a732d30786d99 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24
Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico
Currently, bone morphogenetic proteins (BMPs) have effective participation in the growth of malignancies. Knowing that there are few studies involving BMPs and oral squamous cell carcinoma, this work constitutes an immunohistochemical study of BMP-2, BMPR IA and BMPR II in squamous cell carcinomas (SCC) of the lower lip relating to the clinical and pathological aspects of this lesion. The sample consisted of 40 cases of SCC of the lower lip, being 20 cases of SCC of the lower lip with regional metastasis and 20 cases without metastasis. We evaluated the intensity of expression (score 1 to mark absent / weak, score 2 for high ) and was found the percentage of labeled cells, where the score was 1 cases with 0 to 50% of positive cells, score 2 with 51 to 75% of positive cells, and score 3 more than 75% of positive cells. The sample comprised 72.5% of men with a mean age of 65.8 years, there was a predominance of stage II and 52.5% of the carcinomas were classified as low grade, being carcinoma with metastasis presenting most cases (70%) as carcinomas of high malignancy grade (p = 0.004). The largest number of cases of SCC of the lower lip that were in stages I / II (61, 9%) were classified as carcinomas of low grade malignancy and carcinomas in stages III / IV were classified as high-grade tumors (p = 0, 024). The BMP-2 showed strong intensity of immunostaining in 82.5%, BMPR-IA showed 55% of cases with an intensity of immunostaining absent / weak and BMPR-II showed 85% of cases with an intensity of immunostaining absent / weak. Only the protein BMPR-IA were significantly associated with all clinic-pathological parameters studied, metastasis (p <0.001), TNM (p <0.001) and histological grade of malignancy with (p = 0.028). The percentage of positive cells, all markers showed the highest number of cases with more than 75% of positive cells (score 3) and only BMPR-II showed statistical difference when related to the presence and absence of metastasis (p = 0.049 ). We conclude that there is disturbance in the BMP signaling pathway in EC-mediated lower lip and that high expression of BMP-2 associated with the expression of BMPR-IA and BMPR-II are associated with metastasis in carcinoma
Atualmente as prote?nas morfogen?ticas do osso (BMPs) t?m efetiva participa??o no crescimento de neoplasias malignas. Sabendo que s?o escassos os trabalhos envolvendo BMPs e o carcinoma epiderm?ide oral, este trabalho realizou um estudo imunoistoqu?mico da BMP-2, BMPR IA e BMPR II em carcinomas epiderm?ides (CE) de l?bio inferior relacionando com os aspectos clinico-patol?gicos desta les?o. A amostra constou de 40 casos de CE de l?bio inferior, sendo 20 casos de CE de l?bio inferior com met?stase linfonodal regional e 20 casos sem met?stase. A grada??o histol?gica de malignidade foi realizada no front invasivo da les?o. Foi avaliada a intensidade de express?o (escore 1 para marca??o ausente/ fraca e escore 2 para marca??o forte), bem como foi verificado a porcentagem de c?lulas positivas, onde o escore 1 era os casos com 0 a 50% das c?lulas positivas; escore 2 com 51 a 75% das c?lulas positivas; e escore 3 com mais de 75% das c?lulas positivas. A amostra foi composta por 72,5% de homens com a m?dia de idade de 65,8 anos, houve um predom?nio do est?gio II e 52,5% dos carcinomas foram classificados como de baixo grau, sendo os carcinomas com met?stase regional apresentando a maioria dos casos (70%) como carcinomas de alto grau de malignidade (p =0,004). O maior n?mero de casos de CE de l?bio inferior que estavam nos est?gios I/ II (61, 9%) foi classificado em carcinomas de baixo grau de malignidade e os carcinomas nos est?gios III/ IV foram classificados em alto grau de malignidade (p =0, 024). A BMP-2 apresentou intensidade da imunomarca??o forte em 82,5%, BMPR-IA observou-se 55% dos casos com intensidade de imunomarca??o ausente/ fraca e a BMPR-II revelou 85% dos casos com intensidade de imunomarca??o ausente/ fraca. Apenas a prote?na BMPR-IA apresentou associa??o estatisticamente significante com todos os par?metros clinico-patol?gicos estudados, met?stase (p<0,001), TNM (p<0,001) e grada??o histol?gica de malignidade com ( p=0,028). Quanto ? porcentagem de c?lulas positivas, todos os marcadores apresentaram o maior n?mero de casos com mais de 75% das c?lulas positivas (escore 3) e apenas a BMPR-II apresentou diferen?a estat?stica quando relacionada com a presen?a e aus?ncia de met?stase (p=0,049). Conclui-se que existe dist?rbio na via de sinaliza??o BMP-mediada no CE de l?bio inferior e que a alta express?o da BMP-2 associada com a express?o da BMPR-IA e BMPR-II est?o relacionadas com a met?stase neste carcinoma

El objetivo de este estudio fue determinar la influencia de la temperatura de lidocaína 2% con adrenalina 1: 80 000 sobre el dolor por inyección e inicio de acción. Se realizó un estudio ciego en 38 pacientes sometidos a dos aplicaciones de lidocaína 2% con adrenalina 1:80000 a temperatura 37°C y temperatura ambiente. Según Escala Visual Análoga se obtuvo para la administración de anestesia a temperatura 37°C valores de 6,63 ± 5,037 mm y para la administración a temperatura ambiental valores de 12,870 ± 12,001 mm (p<0,05). Según Escala de Respuesta Verbal se encontró que para la administración de anestesia a temperatura 37°C el 100% manifestó un dolor “menor a lo esperado”, mientras que en la administración a temperatura ambiente solo 61% manifestó “dolor menor delo esperado (p<0,05). En relación al tiempo de inicio de acción se encontró que la administración de anestesia a temperatura 37°C presento un valor de 201,66 ± 85,336 segundos mientras que para la administración a temperatura ambiente se presentó un valor de 286,66 ± 84,292 segundos (p<0,05). Con los resultados obtenidos en el presente estudio se puede concluir que la administración de anestésico local a 37°C produce menor intensidad de dolor y menor tiempo de inicio de acción en comparación a la administración de anestésico local a temperatura ambiente. Palabras clave: Anestesia local, Lidocaína, temperatura corporal, dimensión del dolor, acción farmacológica.
Tesis

Orientadores: José Flávio Affonso de Almeida, Maria Cristina Volpato
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-17T16:39:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Monteiro_MariaRachelFigueiredoPenalva_M.pdf: 1282276 bytes, checksum: b7401c79964f58abbced19c5c4e238eb (MD5) Previous issue date: 2011
Resumo: Processos inflamatórios com pulpite irreversível podem promover alterações que levam à hiperalgesia e alodínia, tornando mais difícil a obtenção de anestesia local efetiva. Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia anestésica de duas soluções e técnicas anestésicas em molares inferiores com pulpite irreversível, comparando a técnica infiltrativa vestibular mandibular com a solução de articaína 4% (grupo 1) com a técnica de bloqueio dos nervos alveolar inferior e lingual com o uso da lidocaína 2% (grupo 2), ambas associadas à epinefrina 1:100.000. Também foi avaliada a eficácia da técnica inicial mais uma complementação (técnica infiltrativa- articaína com técnica intraligamentar- articaína e, bloqueio- lidocaína com técnica infiltrativa- articaína) entre os grupos e comparadas às eficácias anestésicas da técnica inicial e técnica inicial mais uma complementação no mesmo grupo. Além disso, foi avaliada a relação entre o desempenho da articaína e a espessura da cortical óssea vestibular e a distância das raízes mesial e distal à mesma cortical, por meio de tomografia computadorizada ¿Cone Beam¿. Para tal, foram distribuídos 43 voluntários em 2 grupos experimentais 43 pacientes (28 do grupo 1; 15 do grupo 2) com molares inferiores diagnosticados com pulpite irreversível. Todos foram orientados a preencher escalas analógicas visuais (EAV) para demonstrar a intensidade de dor anteriormente ao tratamento (calibração), durante o exame de diagnóstico clínico (endofrost) e após 5 e 10 minutos da aplicação da anestesia. Foram considerados sucessos os casos tratados sem dor com a técnica inicial e com a técnica inicial mais complementação anestésica. Não foi observada diferença estatisticamente significante (p=0,0955) para a técnica inicial (articaína 4% sucesso de 39,7% e lidocaína 2% sucesso de 13,3%) nem para a técnica inicial mais uma complementação quando comparados os grupos (p=0,7448). No entanto, quando analisado o mesmo grupo, foi encontrada diferença estatisticamente significante para a técnica inicial mais complementação anestésica no grupo da lidocaína (p=0,0025). Em relação à análise tomográfica, não houve influência da espessura da cortical óssea vestibular e da distância entre as raízes mesial e distal até a mesma cortical óssea no desempenho da articaína (p>0,05). Concluiu-se que, a infiltração com articaína obteve desempenho semelhante ao bloqueio com lidocaína pela técnica inicial ou após complementação anestésica e que a espessura da cortical óssea e a distâncias das raízes à cortical óssea não tem relação direta com o sucesso ou insucesso da eficácia anestésica da articaína.
Abstract: Inflammatory process due to irreversible pulpits can cause hyperalgesia and allodynia that can difficult proper profound local anesthesia. The main goal of this study was to evaluate the anesthetic efficacy of two initial techniques and solutions in mandibular molars, one in mandibular infiltrations with 4% articaine (group 1) an alveolar nerve block with 2% lidocaine (group 2), both with 1:100.000 epinephrine. Likewise, evaluated the efficacy of the initial technique and one supplemental injection between groups and inside the same group (mandibular infiltration and intraligamentary infiltration both with articaine and alveolar nerve block with lidocaine and mandibular infiltration with articaine) and the relationship of success and failure of articaine with buccal cortical thicknesses and mesial and distal root distance to the same cortical (cone beam tomography). Data (43 volunteers), admitted with a clinical diagnostic of irreversible pulpits, were randomized into two experimental groups (28 from group 1 and 15 from group 2). All patients were instructed to assess their pain in a visual analogue scale (VAS) before treatment, after cold testing and 5 and 10 minutes after the injection. Success criteria were painless treatment with only an initial anesthesia or adding one supplemental injection. There was no statistic difference between group 1 (39.7%) and group 2 (13.3%) (p=0.0955) with the initial technique and with one supplemental injection when groups were compared (p=0.7448). However, there was statistical difference when analyzed inside the same group for lidocaine (p=0.0025). Yet, no statistical difference was observed in tomography evaluation between articaine efficacy and buccal cortical thickness in mesial and distal root or between articaine efficacy and mesial and distal root distance to the buccal cortical (p>0.05). It was concluded that articaine was similar to lidocaine effectiveness with the initial technique or with one supplemental injection and that the buccal cortical thickness and the mesial and distal root distance to the same cortical had no relationship to the success or failure of articaine efficacy.
Mestrado
Endodontia
Mestre em Clínica Odontológica

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A radiação ultravioleta natural tem sido identificada como o maior agente etiológico de lesões em pele e lábio. A ceratose actínica em lábio ou queilite actínica considerada, segundo a Organização Mundial de Saúde, como uma lesão prémaligna do câncer labial, apresenta-se, clinicamente, como o primeiro sinal de que danos foram causados ao lábio, muitas vezes irreparáveis, podendo evoluir, em sua grande maioria, para um carcinoma de células escamosas. A atuação da radiação ultravioleta no desenvolvimento de lesões malignas ocorre através da sua ação direta nas células levando ao dano em seu DNA permitindo que prossigam o ciclo mitótico com genes defeituosos. A relação desordenada entre proliferação e morte celular pode, muitas vezes, predizer a evolução e comportamento destas lesões, além de fornecer informações importantes da progressão tumoral. O objetivo deste trabalho foi avaliar através da técnica de imuno-histoquímica, a expressão de proteínas inibidoras e promotoras da apoptose e da proliferação celular como, p53, p53 mutado, Bcl-2, Ki-67 e caspase-3 em 20 casos de hiperplasias fibrosas inflamatórias, 20 de queilites actínicas, sendo quatro com displasia epitelial e 20 de carcinomas de células escamosas, todos localizados em lábio inferior. Os resultados mostraram que a identificação das proteínas p53 (DO-7) e p53 mutada (PAb-240) revelaram-se crescente com a progressão das lesões na região suprabasal com distribuição difusa, bem como a proteína Bcl-2. Observou-se diferença descritiva e quantitativa significante entre as proteínas p53 (DO-7) e p53 mutada (PAb-240) nos três grupos analisados, sendo que o anticorpo DO-7 revelou uma expressão mais elevada do que o PAb-240. A expressão da proteína Ki-67 mostrou-se elevada na região suprabasal de todos os grupos embora não tenha apresentado diferença significativa entre eles. Os casos de queilite com e sem displasia epitelial revelaram diferença significativa apenas para os marcadores p53 mutado (PAb-240) e para Bcl- 2. A expressão desses marcadores e do p53 (DO-7) revelaram-se mais elevada nos casos sem displasia epitelial. A expressão detectada neste estudo para esses marcadores em todas as lesões sugere que o desequilíbrio na regulação da apoptose e da proliferação celular ocorre numa fase inicial do desenvolvimento das lesões pré-malignas, inclusive nas lesões onde morfologicamente não é possível detectar nenhuma alteração ainda. Estes dados reforçam a importância do estudo de imunomarcadores envolvidos na carcinogênese bucal para avaliação do prognóstico de lesões pré-malignas e malignas e consequentemente a indicação de procedimentos terapêuticos e preventivos mais eficazes.
The natural ultraviolet radiation has been identified as the main aetiology of skin and lip injuries. Actinic keratosis in lip or actinic cheilitis, according to World Health Organization, as a premalignant lesion of the labial cancer, is presented, clinically, as the first signal that damages had been caused to the lip, most of the times, irreparable, being able to develop, in its great majority, in a squamous cell carcinoma. The action of the ultraviolet radiation in the development of malignant injuries occurs through its direct action in the cells leading to the damage in its DNA allowing that they continue the mitotic cycle with defective genes. The disordered relation between proliferation and cellular death can, mostly, predict the evolution and behavior of these injuries, besides supplying important information of the tumoral progression. The aim of this work was to evaluate, immunohistochemically, the inhibiting and proliferate expression of apoptosis and cellular proliferation proteins as, p53, mutate p53, Bcl-2, Ki-67 and caspase-3 in 20 cases of inflammatory fibrous hyperplasia, 20 of actinic cheilitis, being four with epithelium dysplasia and 20 of squamous cells carcinoma, all located in lower lip. The results had presented that the identification of proteins p53 (DO-7) and mutate p53 (PAb-240) had shown increasing with the progression of the injuries in the suprabasal region with diffuse distribution, as the Bcl-2 protein. Significant descriptive and quantitative difference were observed between proteins p53 (DO-7) and mutate p53 (PAb-240) in the three analyzed groups, showing that antibody DO-7 revealed a higher expression than the PAb-240. The antibody Ki-67 revealed high expression of the protein in the suprabasal region of all the groups although had not presented significant difference between them. The cases of cheilitis with and without epithelium dysplasia had disclosed a significant difference only for the markers mutate p53 (PAb-240) and Bcl-2. The xpression of these markers and p53 (DO-7) had shown higher in the cases without epithelium dysplasia. The expression detected in this study for these markers in all the lesions suggests that the loss of the regulation of apoptosis and the cellular proliferation also occurs in an initial phase of the development of the premalignant lesions included those where morphologically it is not possible to detect any alteration. These data show the importance of the immunomarkers study involved in bucal carcinogenesis for evaluation of the prognostic of premalignant and malignant lesions and the indication of more efficient therapeutical and preventive procedures.

Global abstract: The research presented in this thesis is in several parts. Firstly, the aim of systematic review was to systematically review available evidence on the efficacy of two local anaesthetic solutions lidocaine and articaine used for dental treatment in children. The findings from this review served as a basis for the next phase of the project, which was to address the deficiencies identified from the systematic review. This took the form of a Randomised Controlled Trial, the aim of which was to carry out an equivalence parallel prospective, randomised, controlled study, in order to evaluate and compare the anaesthetic efficacy of mandibular infiltration using 4% articaine (1:100,000 epinephrine) with mandibular nerve block using 2% lidocaine (1:80,000 epinephrine) in the extraction and restoration of mandibular primary molars. The translational intention was to be able to recommend the most effective and acceptable method of achieving anaesthesia for dental treatment of mandibular primary molars in children. In addition, a mixed method research strategy was implemented, in order to assess and explore the child’s experience associated with dental injection, and compare the two different techniques that were used (buccal infiltration and inferior dental nerve block). This comparison was in terms of children acceptance as well as parent satisfaction of their child’s dental treatment under local anaesthesia and their perception of the impact of this treatment on their child. Methods: Systematic review: A systematic search was conducted on Cochrane CENTRAL Register of Controlled Trials, MEDLINE (OVID; 1950 to June 2013), Cumulative Index to Nursing and Allied Health Literature (CINAHL; EBSCOhost; 1982 to June 2013), EMBASE (OVID; 1980 to June 2013), SCI-EXPANDED (ISI Web of Knowledge; 1900 to June 2013), key journals, and previous review bibliographies through June 2013. No restrictions were placed on years, language or publication status. Original research studies that compared articaine with lidocaine in children dental treatment were included and methodological quality assessment including assessment of risk of bias was carried out for each of the included studies. RCT: In total 98 children aged 5–9 years old were randomly assigned into two groups: one group (treatment group) received mandibular infiltration with 4% articaine with 1:100,000 epinephrine; the other group (control group) received an inferior alveolar nerve block with 2% lidocaine with 1:80,000 epinephrine. All local anaesthetic injections were given by a single operator, who had the role of assessing the presence/absence of pain as well as the child’s behaviour during the injection and treatment procedures (using W-BFRS, VAS and Frankl Behaviour Scale). Each child received one treatment for one tooth only. Qualitative sub-study: Concurrent mixed method data collection strategies were used. The qualitative and quantitative data were collected from the same participants as well as in the same timeframe. Thematic analysis was performed on the semi- structured interviews. Results: Systematic review: Electronic searching identified 520 publications. After the primary and secondary assessment process, only three studies were included in the final analysis. The RCTs included in this review investigated the efficacy of local anaesthetic solutions when given as a combination of both techniques, local infiltration as well as block anaesthesia. The data analyses showed superiority of articaine over that of lidocaine in terms of achieving anaesthetic success, although these results were not statistically significant. RCT: During the injection phase the absolute differences between the two anaesthetic techniques using W-BFRS VAS and behaviour scales was zero (no difference), 0.060 (95% CI -0.110 to 0.230) and -0.080 (95% CI -0.190 to 0.030) respectively. During the treatment phase, the absolute difference were -0.020 (95% CI -0.180 to 0.140), -0.040 (95% CI -0.220 to 0.150) and zero (no difference). The equivalence margin was set at ± 0.2 and all comparisons showed equivalence of the two treatments except for the comparison of VAS during injection and W-BFRS during treatment with the 95% confidence intervals exceeding the equivalence margin. Qualitative sub-study: A total of 42 (56%) participants in the qualitative part of the study, were in articaine group while 31 (41%) were in lidocaine group. Only two of the participants (3%) had received both local anaesthetics. Parent’s responses to the questionnaire reflected their opinion based on their observation of the dental treatment. Majority of the parents were happy about the treatment in general. The children’s responses were very positive as well. The questionnaire/interviews with the children, parents, along with the dentist’s comments, allowed the development of three major themes addressing the aims and purposes of the study. The three major themes emerged were: Firstly, “Experience of the anaesthetic procedures”. Second major theme “Ease vs difficulty of the dental treatment” and the third major theme was “Perception of the dentist approach during the treatment”. Conclusion: The quality of the included RCTs in the systematic review was generally inadequate. All the included studies had several limitations in reporting which indicated a need for a randomised clinical trial with standardised methodology to address these limitations. The findings of the systematic review indicated that, articaine and lidocaine presented similar efficacy when used as infiltration and blocks respectively for routine dental treatments. The effect of numbness of soft tissues was longer using articaine than lidocaine, and few adverse events were reported following the use of both solutions. The results from this review indicate that articaine injections can cause slightly more post injection pain in the area injected than lignocaine, the difference was not statistically significant. Overall, the results of the present RCT pointed out that it would be acceptable to carry out invasive dental treatment for mandibular molars with the administration of infiltration with buccal intrapapillary infiltration using 4% articaine instead of the traditional method of inferior dental block using lidocaine, which many children find difficult to cope with. Considering the findings from the survey, along with the results from the questionnaire/interview, it was established that, the reactions of the patients with both of the local anaesthetics were very similar. The interview findings added meaning and depth to the survey findings, in terms of explaining and clarifying the children’s responses and answers. Parents/children reported a high degree of satisfaction with the treatment outcomes. The satisfaction expressed by parents/children can have a positive impact on the children’s future dental treatment.

Compara el efecto anestésico de la administración de lidocaína 2% con epinefrina 1:80000 sin alcalinizar a velocidad lenta y alcalinizada a velocidad rápida en el bloqueo del nervio dentario inferior en molares deciduas. Participaron 30 pacientes odontopediátricos con necesidad de tratamientos pulpares en molares deciduas inferiores, a quienes se les administró en forma aleatoria lidocaína 2% con epinefrina 1:80000 sin alcalinizar a velocidad lenta y alcalinizada a velocidad rápida para el bloqueo del nervio dentario inferior de molares deciduas. Se evaluaron los periodos anestésicos (duración del efecto e inicio de acción) así como la intensidad del dolor durante la inyección. Se encontró que la administración del anestésico sin alcalinizar a velocidad lenta produjo un inicio de acción más corto (57,03 segundos vs.73,76 segundos) y una duración del efecto más prolongada (171.13 minutos vs. 146,06 minutos) en comparación a la administración del anestésico alcalinizado a velocidad rápida (p<0.05). En el grupo de la administración del anestésico alcalinizado a velocidad rápida se observó mayor porcentaje de pacientes sin dolor durante la inyección en comparación a la administración del anestésico sin alcalinizar a velocidad lenta, pero sin diferencia significativa (p>0.05). Se concluyó que la administración de lidocaína 2% con epinefrina 1:80000 sin alcalinizar a velocidad lenta produce un inicio de acción significativamente más corto y una duración de efecto significativamente más prolongada en comparación a la administración de lidocaína 2% con epinefrina 1:80000 alcalinizada a velocidad rápida, en el bloqueo del nervio dentario inferior en molares deciduas. No se encontró diferencias significativas entre los grupos con relación al dolor durante la inyección.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Superior de Ciências da Saúde Egas Moniz
Em 1986 foi descoberto e isolado outro agente causador de SIDA, o HIV-2. Este vírus apresenta características distintas, como uma menor carga vírica, uma fase assintomática mais longa, menor progressão para doença, menor taxa de transmissão heterossexual e vertical e distribuição geográfica mais restrita, em relação ao HIV-1. A infeção por HIV-2 é descrita regularmente nos continentes africano, europeu, americano e asiático. Portugal é o país europeu com maior prevalência desta infeção. A colonização e migração africana, portuguesa e francesa contribuíram para a disseminação do HIV-2 pelo mundo. A elevada prevalência da infeção por HIV-2 na África Ocidental nos anos oitenta deve-se provavelmente à guerra da independência (1963-1974), que por sua vez também facilitou a disseminação desta infeção. Nos países onde existem ambos os tipos de HIV em circulação, como na África Ocidental, é frequente a identificação de infeção dupla por HIV-1 e HIV-2. Nos últimos vinte anos observa-se um aumento da prevalência da infeção por HIV-1 e um decréscimo da prevalência da infeção por HIV-2 nesta região de África. Apesar da restrição geográfica a locais de fraco acesso a terapêutica antirretrovírica, já se conhece a maioria das possíveis mutações associadas a resistência e os antirretrovíricos eficazes na infeção por HIV-2.

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2019
A infeção a Citomegalovírus (CMV) é globalmente muito prevalente no mundo. No caso dos recém-nascidos, o vírus pode ser transmitido no período pós-natal, principalmente através do leite materno, mas também da transfusão de produtos sanguíneos ou por contacto direto, nomeadamente no contexto de cuidados de saúde. Embora nos recém-nascidos de termo constitua geralmente uma infeção assintomática ou auto-limitada, também se pode manifestar como doença grave nos recém-nascidos prematuros, com sintomas sepsis-like, hepatite, ou pneumonite, e alterações laboratoriais como trombocitopénia, colestase e subida da PCR. O diagnóstico pode ser feito através de Real Time Polimerase Chain Reaction (rtPCR) de uma amostra de urina, saliva ou sangue, após exclusão de infeção congénita. Não está preconizada a instituição de terapêutica antiviral na maioria dos casos, por se tratar habitualmente de uma infeção autolimitada. Contudo, em alguns casos selecionados em que se verifique doença grave, o uso de ganciclovir tem vindo a ser relatado, embora mais estudos sejam necessários para determinar a sua eficácia e segurança nestes casos. Apesar de não estar associada a surdez neurossensorial ou alterações importantes no neurodesenvolvimento, estudos indicam que crianças que foram alvo desta infeção apresentam piores scores cognitivos e motores comparativamente a crianças não infetadas, embora dentro dos parâmetros da normalidade. Deste modo, a prevenção da transmissão do CMV através do tratamento do leite materno assume um papel de grande relevância. São reportados dois casos de recém-nascidos prematuros que foram expostos ao CMV no período pós-natal, apresentando manifestações como trombocitopénia, hepatoesplenomegália e colestase, mas com gravidades diferentes, influenciando a abordagem clínica.
Citomegalovirus (CMV) infection is extremely common worldwide. In newborns, the virus can be transmitted postnatally through breast milk, blood transfusion or through direct contact, namely transmitted by healthcare professionals. Despite being mostly asymptomatic and self-limited in term infants, it can present as a severe infection in premature neonates, with sepsis-like symptoms, hepatitis or pneumonitis, and also laboratorial abnormalities such as thrombocytopenia, cholestasis and elevated CRP. Diagnosis can be obtained by Real Time Polimerase Chain Reaction (rtPCR) of a saliva, urine or blood sample, after excluding congenital infection. Antiviral treatment is not indicated in most cases, since these are often self-limited infections. However, ganciclovir use has been reported in selected infants with severe disease, although its efficacy and safety need further testing. In spite of the absence of association to neurosensorial hearing loss or impactful neurodevelopment abnormalities, it has been shown that infants with early postnatal CMV infection scored significantly lower than unaffected children on formal cognitive and motor assessments, but still within normal range. Therefore, prevention of the virus transmission becomes increasingly relevant, with different interventions to render breast milk non-infectious being studied. We report two cases of premature neonates who developed CMV infection postnatally, presenting thrombocytopenia, hepatosplenomegaly and cholestasis, but with different disease severity, influencing the clinical approach.

Dissertação para obtenção do grau de Mestre no Instituto Universitário Egas Moniz
O VIH-2 foi identificado em 1986, como o segundo agente causador de SIDA, sendo endémico na África Ocidental. No entanto, casos de infeção por VIH-2 estão também presentes em países europeus, como em Portugal onde a taxa de infeção é de 3,3%. O objetivo deste trabalho foi analisar e descrever a evolução da resistência transmitida e adquirida aos antirretrovirais, utilizados no tratamento da infeção por VIH-2, entre 1996 e 2019, em Portugal. A população analisada incluiu 2083 indivíduos infetados por VIH-2, dos quais 302 eram indivíduos não-tratados e 228 eram tratados com antirretrovirais na altura da realização do teste de resistência, não se conhecendo história de tratamento para 1553 indivíduos. Os indivíduos não-tratados eram maioritariamente mulheres (59,3%) com uma mediana da idade à data do teste de resistência de 51 anos, enquanto que os indivíduos tratados eram na sua maioria homens (53,1%) com uma mediana da idade de 49 anos à data do teste de resistência. Em ambos os grupos, verificou-se que a maioria dos indivíduos era originária do continente africano, principalmente da Guiné-Bissau (23,5% nos não-tratados e 23,2% nos tratados). No que respeita ao grupo de infeção, observou-se que todos os casos pertenciam ao grupo A do VIH-2. Relativamente à TDR (Resistência Transmitida aos Antirretrovirais) verificou-se uma prevalência global igual a 4,0% e a ADR (Resistência Adquirida aos Antirretrovirais) apresentou uma prevalência global de 67,1%. Entre 2007 e 2019 a TDR apresentou um aumento ao longo do tempo (4,8% a 5,3%), o que se verificou-se também para os NRTI (4,8% a 5,3%). A ADR aumentou também entre 2007 (64,7%) e 2019 (83,3%), sobretudo no caso dos NRTI (64,7% a 83,3%), mas também para os PI (35,3% a 50,0%). Globalmente verificou-se que a TDR e a ADR aumentaram ao longo do tempo (2007-2019).
The HIV-2 was identified as the second agent of AIDS, in 1986, and it is endemic to West Africa. Cases of this infection are also present in European countries, such as Portugal where the rate of infection is 3,3%. The aim of this study was to analyze and describe the trends of transmitted and acquired drug resistance to the antiretrovirals used in the treatment of the HIV-2 infection, between 1996 and 2019, in Portugal. The population analyzed included 2083 individuals infected with HIV-2. Of these 302 were drug naïve and 228 were treated with antiretrovirals at the time of the resistance test. The history of treatment is unknown for 1553 individuals who integrate this population. The drug naïve individuals were in their majority women (59,3%) and had a median age at the time of the resistance test of 51 years, while the treated individuals were mainly man (53,1%) and had a median age of 49 years at the time of the resistance test. In both groups we observed that most individuals were from Africa, mainly Guiné-Bissau (23,5% in drug naïve and 23,2% in treated individuals). In regard to the group of infection we concluded that all cases corresponded to group A of HIV-2. Regarding TDR (Transmitted Drug Resistance) we observed a global prevalence of 4,0% and ADR (Acquired Drug Resistance) showed a global prevalence of 67,1%. Between 2007 and 2019, TDR showed an increase over time, as observed for the resistance to NRTI. The ADR also increased between 2007 and 2019, as well as the resistance to NRTI and to PI. Globally we determined that TDR and ADR increased over time (2007-2019).

Introdução: Em dezembro de 2019, foi identificado um novo coronavírus na China. Este foi denominado SARS-CoV-2 e a doença associada designou-se COVID-19. Atualmente já são reconhecidos fatores de risco para o desenvolvimento de uma forma mais grave desta doença. No entanto, a gravidade desta não está apenas associada à infeção viral em si, mas também está relacionada com a resposta imunitária do hospedeiro ao SARS-CoV- 2. Neste contexto, o sistema HLA tem um papel fundamental na regulação da resposta imune. Estão descritos diversos polimorfismos nos genes HLA associados a infeções virais, incluindo SARS-CoV-2. Objetivos: Caracterizar uma população de Viseu com registo prévio de infeção por SARS-CoV-2 e genotipar os seus alelos HLA, para eventualmente identificar variantes genéticas de HLA associadas à infeção. Materiais e Métodos: Estudo de investigação laboratorial com aplicação de um questionário e colheita de uma amostra biológica de saliva. Os participantes foram alunos e pacientes da Clínica Dentária Universitária da UCP e pacientes da JS Clínica Médica Lda., em Viseu. As amostras foram processadas para determinar a carga viral e identificar alterações nos genes HLA, de modo a relacionar estes polimorfismos com o grau de desenvolvimento de COVID-19. Resultados: As frequências dos diferentes alelos HLA-A e HLA-B foram analisadas e comparadas entre populações. Os alelos HLA-A*02, HLA-B*44 e HLA-B*51 são os mais frequentes em Viseu e a nível nacional. A caracterização dos indivíduos previamente infetados com SARS-CoV-2 corrobora a diversidade de manifestações clínicas associadas. Foram identificados polimorfismos presentes nos genes HLA-A e HLA-B destes indivíduos. Conclusão: Sabendo a grande influência do sistema HLA nas infeções virais, é imperioso incentivar pesquisas a nível populacional dos alelos HLA de suscetibilidade e de proteção face ao SARS-CoV-2 para que se consiga melhorar a atuação contra a propagação desta pandemia.
Introduction: In December 2019, a new coronavirus was identified in China. It was named SARS-CoV-2 and the associated disease COVID-19. Currently, risk factors for the development of a more severe form of this disease are already recognized. However, the severity is not only associated with the viral infection itself but is also related with the host's immune response to SARS-CoV-2. In this context, the HLA system plays a key role in the immune response’s regulation. Several polymorphisms in HLA genes associated with viral infections, including SARS-CoV-2, have been described. Aims: To characterize a population from Viseu with a previous record of SARS-CoV-2 infection and to genotype its HLA alleles, to eventually identify HLA genetic variants associated with SARS-CoV-2 infection. Materials and Methods: Laboratory research study with questionnaire application and collection of a biological saliva sample. The participants were students and patients from the UCP University Dental Clinic and patients from JS Clínica Médica Lda., in Viseu. The samples were processed to determine viral load and identify changes in HLA genes, to relate these polymorphisms with the COVID-19 severity. Results: The frequencies of the different HLA-A and HLA-B alleles were analyzed and compared between populations. The alleles HLA-A*02, HLA-B*44 and HLA-B*51 are the most frequent in Viseu and in Portugal. The characterization of individuals previously infected with SARS-CoV-2 corroborates the diversity of associated clinical manifestations. Polymorphisms present in HLA-A and HLA-B genes from these individuals were identified. Conclusion: Knowing the wide influence of the HLA system on viral infections, it is imperative to encourage population-level research on HLA susceptibility and protection alleles against SARS-CoV-2 to improve the performance against the spread of this pandemic.

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2019
Atualmente, o vírus da imunodeficiência humana (HIV) continua a ser um problema de saúde pública que, apesar de constantes avanços terapêuticos, ainda afeta muitos indivíduos devido às comorbilidades associadas. Uma das comorbilidades que beneficiou com as novas terapêuticas foi o AIDS dementia complex (ADC, demência associado à SIDA) que passou a existir numa forma menos grave, designada por minor cognitive motor disorder (MCMD). No entanto, esta síndrome continua a afetar física, psicológica e socialmente muitos indivíduos infetados. As maiores dificuldades em compreender as comorbilidades em que ocorre degeneração neuronal associada ao HIV prendem-se com o pouco conhecimento existente em relação ao modo como o vírus entra no parênquima cerebral e como infeta as células do Sistema Nervoso Central (SNC). Os principais alvos do vírus no SNC parecem ser os macrófagos perivasculares e as células de micróglia, seguido dos astrócitos, não se conhecendo ainda com muito detalhe os mecanismos implicados na sua infeção. Alguns estudos indicam também que estas células podem ser consideradas reservatórios virais por permitirem a integração do genoma viral no genoma celular e, em estadios mais avançados da infeção, permitirem a propagação da mesma dentro do SNC. Com a realização deste projeto pretendíamos esclarecer quais seriam as melhores condições para que ocorresse a propagação do vírus nas principais células-alvo do SNC, bem como perceber se estas poderiam funcionar como reservatórios virais. Para isso, fomos verificar como se processava a disseminação da infeção das células do sangue (linfócitos T CD4+ e macrófagos) para as células do SNC (micróglia e astrócitos), tendo esta ocorrido quando as co-culturas permitiram um contato célula-célula mas também quando existia uma barreira física a separar as células-dadoras das células-alvo. No entanto, não ocorreu disseminação da infeção quando as células do SNC foram infetadas em cis pela estirpe HIV-1UCFL1032. Nas culturas em que não detetámos replicação viral, averiguámos se teria ocorrido integração do genoma viral para compreender se estaríamos perante reservatórios virais, tendo apenas ocorrido em células de micróglia, mas não em astrócitos.
The human immunodeficiency virus (HIV) remains a public health problem that despite constant therapeutic advances, still affects many individuals due to associated comorbidities. One of the comorbidities that benefited from the new therapies was AIDS dementia complex (ADC), that became less severe in a form called minor cognitive motor disorder (MCMD). However, this syndrome continues to affect many infected individuals either socially, physically or psychologically. The greatest difficulty in understanding HIV-associated neuronal degeneration is due to the lack of knowledge about how the virus enters the brain parenchyma and how it infects central nervous system (CNS) cells. The main targets in the CNS appear to be perivascular macrophages and microglia cells, followed by astrocytes, but the mechanisms involved in its infection are not yet fully known. Some studies also indicate that these cells can be considered viral reservoirs because they allow the integration of the viral genome into the cellular genome and, in later stages of infection, allow its spread within the CNS. Our main goal was to clarify what would be the best conditions for the virus to spread into CNS cells, as well as to understand if they could function as viral reservoirs. To this end, we looked at how the spread of blood cell infection (CD4 + T lymphocytes and macrophages) to the CNS cells (microglia and astrocytes) was processed. It occurred when the co-culture allowed cell-to-cell contact and when there was a physical barrier separating donor cells from target cells. However, infection did not spread when CNS cells were cis-infected by the HIV-1UCFL1032 strain. In cultures where we did not detect viral replication, we investigated whether viral genome integration would have occurred to understand if we were facing viral reservoirs. We obtained positive results for microglia cells but not for astrocytes.
iMed.ULisboa, Host Pathogen Interaction Unit, Dep. de Microbiologia e Imunologia da FFULisboa; Hospital das Forças Armadas; Farmácia de Tercena

A literatura científica, apresenta resultados pertinentes relativamente ao contexto das vivencias da infecciosidade dos enfermeiros, mas é escassa em pormenores particularmente vividos e expressos de forma storytelling. Objetivo: Desocultar as realidades vividas por enfermeiros infetados por SARS COV-2, durante a pandemia 2020 em Portugal, segundo a sua perceção pessoal, através de relatos na primeira pessoa. Metodologia: Estudo transversal, exploratório, de natureza qualitativa, utilizada a conceção Fenomenológica e da Teoria Fundamentada nos Dados (TFD), a partir da análise de conteúdo aos dados emergentes da entrevista aplicada, via on-line, a 33 enfermeiros, infetados e confinados por SARS-COV-2. A amostra, apresenta-se maioritariamente do sexo feminino (68,8%), e no escalão etário (34,4%) entre os 21-30 anos e apresentam como local de trabalho predominante, a área intra-hospitalar (71,9%). Resultados: Da análise das componentes discursivas em cada Entrevista (E), emergiu uma Árvore categorial (AC) que gerou 4 gerações de categorias, expressas da seguinte forma: 1ª categoria global: “Viver a contaminação por SARS-COV-2 em enfermeiros durante a pandemia 2020 em Portugal (1.)”, que insere quatro categorias de 1ª geração: “Contexto de Infeção (1.1), “Mudanças de vida (1.2)”, “Que concelhos aprendi (1.3)” e “Aprender com os experts (1.4)”. Da 1ª categoria de 1ª geração “Contexto de Infeção (1.1), emergem 5 categorias de 2ª geração: “Foco de Contaminação (1.1.1)”, “Meandros de Vida (1.1.2)”, “Sinais e Sintomas (1.1.3)”, “Confinar: casa ou hospital? (1.1.4)” e “E agora? Sentimentos e Emoções (1.1.5)”. A subcategoria “Meandros de Vida (1.1.2)”, explicam a forma de contaminação, através de 4 categorias de 3ª geração: “Trabalho (1.1.2.1)”, “Comunidade (1.1.2.2)”, Casa/Família (1.1.2.3)”, “Não sei (1.1.2.4)”. Relativamente à subcategoria “Sinais e Sintomas (1.1.3)”, emergem 4 categorias de 3ª geração: “Sistema Neurológico (1.1.3.1)”, “Sistema Termorregulador (1.1.3.2)”, “Sistema Respiratório (1.1.3.3)” e “Assintomático (1.1.3.4)”. Da categoria de 2ª geração “E agora? Sentimentos e Emoções (1.1.5)” emergem 6 categorias de 3ª geração “Medo (1.1.5.1)”; “Surpresa (1.1.5.2)”, “Angústia (1.1.5.3)”; “Tristeza (1.1.5.4)”; “Fúria (1.1.5.5)” e “Indefensão (1.1.5.6)”. A 2ª categoria de 1ª geração “Mudanças na vida (1.2)”, dá origem a 2 categorias de 2ª geração: “Dificuldades/Perturbações (1.2.1) e “Estratégias Adaptativas (1.2.2)”. Da subcategoria “Dificuldades/Perturbações (1.2.1), emergem 7 categorias de 3ª geração: “Emocional (1.2.1.1)”, “Pessoal (1.2.1.2)”, “Familiar (1.2.1.3)”, “Social (1.2.1.4)”, “Profissional (1.2.1.5)”, “Financeiro (1.2.2.6)”, “Bem na vida (1.2.1.7)”. Relativamente à subcategoria “Estratégias Adaptativas (1.2.2)”, emergem 3 categorias de 3ª geração: “Pessoais (1.2.2.1)”, “Família/Amigos (1.2.2.2)” e “Tudo Bem (1.2.2.3)”. Da subcategoria “Pessoais (1.2.2.1)”, emergem 4 categorias de 4ª geração, “Biológico (1.2.2.1.1)”, “Psicológico (1.2.2.1.2)”, “Social (1.2.2.1.3)” e “Espiritual (1.2.2.1.4)”. A 3ª categoria de 1º geração “Que conselhos aprendi (1.3)”, faz emergir 2 categorias de 2ª geração: “Normas e Informações (1.3.1)” e “Empowerment (1.3.2)”. Desta última emergem 2 categorias de 3ª geração, “Biológico (1.3.2.1)” e “Psicossocial (1.3.2.2)”. Por último, apresenta-se a 4ª categoria de 1ª geração “Aprender com os experts (1.4)”, donde emergem 2 categorias de 2ª geração, “Consequências de Sentimentos Perturbadores (1.4.1)” e “Impacto pós cura. E depois da dita cura? (1.4.2)”. Da subcategoria “Consequências de Sentimentos Perturbadores (1.4.1)”, emergem 3 categorias de 3ª geração: “Angústia (1.4.1.1)”, “Medo (1.4.1.2)” e “A caminho da resiliência (1.4.1.3)”. Relativamente à última categoria de 2ª geração “Impacto pós cura. E depois da dita cura? (1.4.2)”, emergem 8 categorias de 3ª geração: “Afinal ainda não… (1.4.2.1)”, “O que é feito da minha atenção e memória? (1.4.2.2)”, “Problema em estudo (1.4.2.3)”, “O Cansaço (1.4.2.4)”, “Cefaleias (1.4.2.5)”, “Distúrbios sensoriais (1.4.2.6)”, “Inesperadamente a Polimedicação (1.4.2.7)” e “Efeito devastador (1.4.2.8). Conclusões: As categorias de 1ª Geração “Que conselhos aprendi? (1.3)” e “Aprender com os experts (1.4)”, trazem ao universo da profissionalidade da enfermagem, um manancial de conhecimento, que a literatura ainda não contempla.
The scientific literature presents relevant results in relation to the context of nurses' infectiousness experiences, but it is scarce in details that are particularly experienced and expressed in a storytelling way. Objective: To unveil the realities experienced by nurses infected with SARS COV-2, during the 2020 pandemic in Portugal, according to their personal perception, through first-person reports. Methodology: Cross-sectional, exploratory, qualitative study, using the Phenomenological and Grounded Theory conception, from content analysis to data emerging from the applied interview, via online, to 33 nurses, infected and confined by SARSCOV-2. The sample is mostly female (68.8%), and in the age group (34.4%) between 21-30 years old and presents the intra-hospital area as the predominant workplace (71.9 %). Results: From the analysis of the discursive components in each Interview, a Category Tree emerged that generated 4 generations of categories, expressed as follows: 1st global category: “Living with SARS-COV-2 contamination in nurses during the pandemic 2020 in Portugal (1.) ", which inserts four categories of 1st generation:" Infection context (1.1), "Life changes (1.2)", "What councils I learned (1.3)" and "Learning from experts (1.4)”. From the 1st category of 1st generation "Context of Infection (1.1), 5 categories of 2nd generation emerge:" Focus of Contamination (1.1.1) "," Meanders of Life (1.1.2) "," Signs and Symptoms (1.1.3)”, “Confine: home or hospital? (1.1.4)” and “What now? Feelings and Emotions (1.1.5)”. The subcategory “Meanders of Life (1.1.2)”, explain the form of contamination, through 4 categories of 3rd generation: “Work (1.1.2.1)”, “Community (1.1.2.2)”, Home / Family (1.1 .2.3)”, “I don't know (1.1.2.4)”. Regarding the subcategory “Signs and Symptoms (1.1.3)”, 4 categories of 3rd generation emerge: “Neurological System (1.1.3.1)”, “Thermoregulatory System (1.1.3.2)”, “Respiratory System (1.1.3.3)” and “Asymptomatic (1.1.3.4)”. From the 2nd generation category “And now? Feelings and Emotions (1.1.5)” emerge 6 3rd generation categories “Fear (1.1.5.1)”; “Surprise (1.1.5.2)”, “Anguish (1.1.5.3)”; “Sadness (1.1.5.4)”; “Fury (1.1.5.5)” and “Defensiveness (1.1.5.6)”. The 2nd category of 1st generation "Changes in life (1.2)", gives rise to 2 categories of 2nd generation: "Difficulties / Disturbances (1.2.1) and" Adaptive Strategies (1.2.2) ". From the subcategory “Difficulties / Disturbances (1.2.1), 7 categories of 3rd generation emerge: “Emotional (1.2.1.1)”, “Personal (1.2.1.2)”, “Family (1.2.1.3)”, “Social (1.2 .1.4”, “Professional (1.2.1.5)”, “Financial (1.2.2.6)”, “Well in life (1.2.1.7)”. Regarding the subcategory “Adaptive Strategies (1.2.2)”, 3 categories of 3rd generation emerge: “Personal (1.2.2.1)”, “Family / Friends (1.2.2.2)” and “okay (1.2.2.3)”. From the “Personal (1.2.2.1)” subcategory, 4 4th generation categories, “Biological (1.2.2.1.1)”, “Psychological (1.2.2.1.2)”, “Social (1.2.2.1.3)” and “Spiritual (1.2.2.1.4)”. The 3rd category of 1st generation “What advice have I learned (1.3)”, gives rise to 2 categories of 2nd generation: “Norms and Information (1.3.1)” and “Empowerment (1.3.2)”. From the latter two categories of 3rd generation emerge, “Biological (1.3.2.1)” and “Psycho-social (1.3.2.2)”. Finally, we present the 4th category of 1st generation “Learning from experts (1.4)”, from which 2 categories of 2nd generation emerge, “Consequences of Disturbing Feelings (1.4.1)” and “Impact after cure. And after the said cure? (1.4.2)”. From the subcategory “Consequences of Disturbing Feelings (1.4.1)”, 3 3rd generation categories emerge: “Anguish (1.4.1.1)”, “Fear (1.4.1.2)” and “On the way to resilience (1.4.1.3)”. Regarding the last category of 2nd generation “Impact after curing. And after the said cure? (1.4.2)”, 8 categories of 3rd generation emerge: “After all, not yet… (1.4.2.1)”, “What is done with my attention and memory? (1.4.2.2) "," Problem under study (1.4.2.3) "," Tiredness (1.4.2.4) "," Headache (1.4.2.5) "," Sensory disorders (1.4.2.6) "," Unexpectedly a Polymedication (1.4.2.7)” and “Devastating effect (1.4.2.8). Conclusions: The 1st Generation categories “What advice did I learn? (1.3)” and “Learning from experts (1.4)”, bring to the universe of nursing professionalism, a wealth of knowledge, which the literature does not yet contemplate.

Dissertação de Mestrado em Biologia Celular e Molecular apresentada à Faculdade de Ciências e Tecnologia
Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is caused by two types of virus: HIV-1 orHIV-2. Much less attention has been given to HIV-2 infection because this epidemic ismostly confined to West Africa and some non-African countries, as is the case ofPortugal. HIV-2 infection is characterized by a slow rate of CD4+ T cell loss and low levelsof viral RNA in plasma, which clinically translates into a much longer asymptomaticphase and a slower progression rate AIDS, in comparison with infection by HIV-1. Recentstudies have shown that follicular helper T cells (Tfh) represent largest main cellreservoir of HIV-1. These cells play a key role in the formation of the germinal centers insecondary lymphoid tissues, as well as in the subsequent selection, survival anddifferentiation of B cells with the ability to produce high-affinity antibodies. There arecurrently no data on Tfh in HIV-2 infection. The main objective of this study was toevaluate whether HIV-2 is able to infect Tfh. For this purpose, tonsils discarded duringroutine tonsillectomy were used as a source of secondary lymphoid tissue, and an invitro assay of infection of purified cells was optimized. Different CD4 T cell subsets wereinfected with primary isolates of HIV-2 and HIV-1, using different co-receptors (CXCR4or CCR5). For the first time, we showed that HIV-2 is able to infect Tfh, although the Tfhlevels of proviral DNA were lower than those found upon HIV-1 infection performed inparallel. Moreover, Tfh were able to support viral replication, with an increase in totalproviral DNA levels occurring 48 hours after stimulation of the infected cells and withevidence of non-defective viruses in the culture supernatants. Together, these resultscontribute to a better understanding of HIV-2 infection, revealing new insights into theability of the virus to infect Tfh cells with new targets being identified for viral replicationcontrol.
A Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (SIDA) é provocada por dois tipos de vírus:HIV-1 ou HIV-2. Tem sido dada muito menos atenção à infeção por HIV-2 por estaepidemia estar confinada maioritariamente à África Ocidental e a alguns países nãoAfricanos, como é o caso de Portugal. A infeção pelo HIV-2 caracteriza-se por um ritmolento de perda de células T CD4 e baixos níveis de ARN viral no plasma. Clinicamentetraduz-se numa longa fase assintomática e numa progressão mais lenta para odesenvolvimento de SIDA, relativamente à infeção por HIV-1. Estudos recentes têmvindo a demonstrar que as células T foliculares auxiliares (Tfh) representam um dosmaiores reservatórios de HIV-1. Estas células têm um papel fundamental na formaçãodos centros germinativos dos tecidos linfoides secundários, bem como na subsequenteseleção, sobrevivência, diferenciação de células B em células capazes de produziranticorpos de alta afinidade. Este trabalho teve como principal objetivo avaliar acapacidade do HIV-2 para infetar as Tfh. Para isto, foi usado tecido linfoide de amígdalasretiradas por indicação clínica e otimizado um protocolo de infeção in vitro de célulaspurificadas. Diferentes populações celulares de células T CD4 foram infetadas comisolados primários de HIV-2 e HIV-1, usando diferentes co-recetores (CXCR4 ou CCR5).Demonstrámos pela primeira vez que as Tfh são infetáveis pelo HIV-2, ainda que osníveis de DNA proviral total tenham sido inferiores aos obtidos nas infeções pelo HIV-1efetuadas em paralelo. Mostrámos ainda que estas células são capazes de suportar areplicação viral, tendo-se verificado um aumento dos níveis de DNA proviral total, 48horas após estimulação das células infetadas e comprovado a existência de vírus nãodefetivos nos sobrenadantes das culturas. Em conclusão, estes resultados contribuempara o melhor entendimento da infeção por HIV-2, revelando novos conhecimentossobre a capacidade do vírus infetar as células Tfh, tendo sido identificado novos alvospara o controle da replicação viral.

Dissertação de mestrado em Genética Molecular
As patologias vasculares são a principal causa de mortalidade e morbilidade na Diabetes mellitus tipo 2. Uma vez que um endotélio vascular íntegro é fundamental para a homeostasia, eventos isquémicos são frequentes nos indivíduos com Diabetes mellitus tipo 2. Na isquemia arterial, a exposição do conteúdo da placa de ateroma leva à activação das plaquetas por intermédio das glicoproteínas existentes na superfície das mesmas. O objectivo principal deste estudo é verificar se a presença de polimorfismos nas glicoproteínas plaquetárias poderão estar associados com o aparecimento de isquemia arterial do membro inferior nos indivíduos com DM tipo 2. Para isso, estudou-se por PCRRFLP os SNPs HPA-2 e KOZAK na GPIbα, o PlA1/A2 na GPIIIa, e um VNTR na GPIbα. Verificou-se que existem diferenças estatisticamente significativas para o polimorfismo VNTR entre o grupo controlo e o grupo com DM tipo 2. O polimorfismo KOZAK parece estar associado ao aparecimento de isquemia arterial do membro inferior em indivíduos com DM tipo 2. Estes resultados sugerem que o polimorfismo KOZAK poderá contribuir para um aumento da probabilidade de desenvolver isquemia arterial do membro inferior em indivíduos com DM tipo 2. Os nossos resultados também evidenciam a importância do estudo dos polimorfismos plaquetários uma vez que podem contribuir para estabelecer um perfil genético de risco em indivíduos com DM tipo 2.
Vascular diseases are the most important cause of mortality and morbidity in patients with type 2 diabetes mellitus. Once a functional endothelium is important for homeostasis, ischaemic events are frequent in patients with type 2 diabetes mellitus. In arterial ischaemia, an exposition to contents of aterome plaque leads to platelet activation by glycoproteins that exist in platelets. The main goal of this study is to search if the presence of platelet glycoproteins polymorphisms are associated with arterial ischaemia of lower limbs in type 2 diabetes mellitus patients. It was analyze the HPA-2 and KOZAK SNPs in GPIbα, the PlA1/A2 SNP in GPIIIa and a VNTR in GPIbα, by PCR-RFLP. There were statistically significant differences for VNTR polymorphism between control group and type 2 diabetes mellitus group. It seems that the KOZAK polymorphism is associated with the presence of arterial ischaemia of lower limbs in type 2 diabetes mellitus patients. These results suggest that KOZAK polymorphism could contribute for an increased probability of developing arterial ischaemia of lower limbs in type 2 diabetes mellitus patients. Our results also show the importance of the study of polymorphisms in platelets since it could establish a genetic risk profile in patients with type 2 diabetes mellitus.
Centro de Investigação em Tecnologias da Saúde - Projecto (AL/12/2006/CESPU)