Dissertations / Theses on the topic 'Inibidores Fosfodiesterase'

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química.<br>Made available in DSpace on 2012-10-22T13:44:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 226668.pdf: 1683482 bytes, checksum: 12704cd1628963a7b0b1ab2bf83cc3c0 (MD5)<br>O diéster 8-dimetilaminonaftil-1-metil fosfato (DANMEP) foi estudado como um modelo de catálise enzimática do tipo ácida geral intramolecular com a transferência do grupo fosforila, a partir da ruptura de uma ligação O-P, facilitada por um grupo +NH vizinho. As reações de hidrólise do DANMEP são consistentes com um mecanismo do tipo SN2(P), tanto na faixa de HCl>1 M, quanto na região de pH ácido. Na região de pH entre 1 e 7, o DANMEP se hidrolisa numa velocidade constante, com um fator catalítico de 2,56×106 a 60°C. Este efeito está associado à reação da forma íon dipolar do DANMEP, onde o grupo dimetilamônio (pKa2 = 7,06±0,06) atua como catalisador ácido geral. Na presença de HCl entre 1 e 12 M, há um efeito catalítico significativo, mostrando um valor de pKa1= -1,93±0,12 a 60ºC, que indica que a forma ácida do DANMEP é a espécie reativa nessa região de elevada acidez. Na reação entre a hidroxilamina e o DANMEP, a constante de velocidade é cerca de 70 vezes maior que a reação de hidrólise. Os cálculos realizados para investigação da geometria do DANMEP foram realizados com a combinação dos modelos implícito e explícito mostrando um diéster altamente estável. A comparação entre as estruturas do DANMEP e seu derivado monoéster (MANEP), otimizadas na presença de 15 moléculas de água, indicam que para o MANEP, o grupo fosforila tem uma estrutura de maior planaridade, o que deve favorecer uma reatividade maior desse éster se comparado ao DANMEP. Foi constatada a existência de um estado de transição, onde a quebra da ligação do grupo abandonador está consideravelmente adiantada e há um pequeno grau de formação de ligação (através do ataque de um óxido de amônio), numa configuração pentavalente. Este resultado é consistente com os dados cinéticos, os parâmetros termodinâmicos e os cálculos ab initio de orbitais moleculares, todos os quais se corroboram mutuamente.

CARVALHO, Raphael Farias de. Efeitos cistométricos da castração hormonal e administração diária de tadalafila em camundongos com hiperatividade detrusora induzida pela deficiência crônica de óxido nítrico. 2015. 49 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015.<br>Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-15T13:32:43Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_rfcarvalho.pdf: 1061042 bytes, checksum: 5eba89dfef511fec69ce8e8878c6f79e (MD5)<br>Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-15T13:50:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_rfcarvalho.pdf: 1061042 bytes, checksum: 5eba89dfef511fec69ce8e8878c6f79e (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-03-15T13:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_rfcarvalho.pdf: 1061042 bytes, checksum: 5eba89dfef511fec69ce8e8878c6f79e (MD5) Previous issue date: 2015<br>Lower Urinary Tract Symptoms (LUTS) represents one of the most commonly complaints in male. Several voiding disorders can be involved in the pathogenesis of LUTS. Hipogonadism is a common and underdiagnosed disease in the aging male, usually presenting simultaneously with LUTS. The objective of this study was to evaluate the cystometric effects of chronic tadalafil administration in castrated mice with nitric oxide cronic deficiency. The results of tadalafil administration were compared in castrated mice (hypogonadics) and after testosterone replacement (eugonadics). A total of 42 mice were randomized to six groups. Group 1 (L-NAME): L-name (60mg/kg), which is an oxide-nitric sintethase inhibitor, was administrated in drinking water. Group 2 (DTAD): L-name (60mg/kg) + diluent of tadalafil (mannitol and xantane gum). Group 3 (TAD): L-name + daily tadalafil (4mg/kg). Group 4 (ORQ): L-name + orchiectomy. Group 5(ORQ+TAD): L-name + orchiectomy + tadalafil. Group 6 (TEST): L-name + ORQ + TAD + testosterone undecanoate SC single dose (100mg/kg). During cystometry after thirty days, five parameters were measured: number of non-voiding contractions before first micturition (NVC) and micturition frequency (FM). Threshold pressure (TP) and basal pressure (BP) were expressed as mmHg, volume threshold (VT) was expressed as mL. Statistical analysis were held with GraphPad Prism®, using analysis of variance (ANOVA) and Tukey’s tests. Normality distribution was held with Kolmogorov-smirnov test. Level of significance was 5% (P<0.05). Mean and standard desviation (SD) were analysed. TAD (1.28±1.89), ORQ(0.16±0.40), and TEST (1.14±1.21) Groups had lower number of NVC compared to L-name (5.42±4.11) Group; ORQ + TAD(1,5±1,64) and ORQ had similar NVC (F=4,24, p=0,0042). Frequency of micturition: TAD (1.12±0.38) and ORQ (0.60±0.23) Groups had lower FM compared to L-name Group (2.27±0.68); ORQ + TAD (0.75±0.28) and ORQ (0.60±0.23) had similar FM; TEST Group (2,74±0,56) had higher FM compared to ORQ, TAD e ORQ + TAD Groups (F=28,82, p<0,0001). Threshold pressure: TAD (27.57±7.41) and ORQ (27±5.51) Groups had lower TP compared to L-name (41.43±10.86); ORQ + TAD (32.17±7.27) and ORQ (27±5.51) had similar TP; TEST (42.14±6.09) had higher TP compared to ORQ (27±5.51) and TAD (27.57±7.41) Groups (F=5,78, p=0,0006). Basal pressure: TAD (18.71±3.94) and ORQ (13±10.94) Groups had lower BP compared to L-name (31.14±4.56); ORQ(13±10.94) and ORQ+TAD (19.83±3.25) had similar BP; TEST(28±5.83) had higher BP compared to ORQ (F=5,72, p=0,0006). There were no statistical diferences in volume threshold between groups. There were no diferences between DTAD and L-name in any parameter. In conclusion, Tadalafil and castration were equally effective reducing detrusor overactivity and relaxing urethra in mice with nitric oxide chronic deficiency. Co-treatment of testosterone with tadalafil to castrated rats improves frequency of micturition, basal pressure and threshold pressure when compared to castration alone, suggesting an androgen-dependent alternative pathway in smooth muscle contraction e relaxation.<br>Sintomas do trato urinário inferior (STUI) representam uma das queixas mais comuns em homens. Diferentes distúrbios da micção podem resultar em STUI. Hipogonadismo é uma doença comum e subdiagnosticada no idoso, podendo estar associado a STUI. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração crônica da Tadalafila em camundongos hipogonádicos com deficiência crônica de óxido nítrico através de estudo cistométrico in vivo. Para tanto, foi comparado a resposta da Tadalafila em animais castrados (hipogonádicos) e após reposição de testosterona (normogonádicos). Um total de quarenta e dois camundongos foram randomizados em seis grupos. Grupo 1(L-NAME): L-NAME (60mg/kg), que é um inibidor da síntese da óxido-nítrico sintase, foi administrado em água de beber. Grupo 2 (DTAD): L-NAME (60mg/kg) + diluente da Tadalafila (goma xantana e manitol). Grupo 3 (TAD): L-NAME (60mg/kg) + Tadalafila diário (4mg/kg). Grupo 4 (ORQ): L-NAME (60mg/kg) + orquiectomia. Grupo 5 (ORQ + TAD): L-NAME (60mg/kg) + orquiectomia + Tadalafila (4mg/kg). Grupo 6 (TEST): L-NAME (60mg/kg) + orquiectomia + Tadalafila (4mg/kg) + Undecilato de Testosterona SC (100mg/kg) em dose única. Após trinta dias, todos os animais foram submetidos a cistometria. Foram avaliados o número de contrações não-miccionais antes da primeira micção (NVC) e a frequência de micção (FM). Limiar de pressão (LP) e pressão basal (PB) foram medidos em mmHg, limiar de volume (LV) em ml. A avaliação estatística foi realizada com o software GraphPad Prism®, utilizando análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey. A distribuição de normalidade foi avaliada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. Nível de significância utilizado foi de 5% (p<0,05). A média e o desvio-padrão (DP) foram mensurados. Os Grupos TAD (1.28±1.89), ORQ (0.16±0.40) e TEST (1.14±1.21) tiveram menor número de NVC comparados ao Grupo L-NAME (5.42±4.11); o Grupo ORQ + TAD (1.5±1.64) e ORQ (0.16±0.40) foram semelhantes neste parâmetro (F=4.24, p=0,0042). Com relação à frequência miccional, os Grupos TAD (1.12±0.38) e ORQ (0.60±0.23) tiveram menores médias que o Grupo L-NAME (2.27±0.68); os Grupos ORQ + TAD (0.75±0.28) e ORQ (0.60±0.23) tiveram FM semelhantes; o Grupo TEST (2.74±0.56) teve FM superior aos Grupos ORQ, TAD e ORQ + TAD (F=28.82, p<0.0001). Ao avaliar limiar de pressão, os Grupos TAD (27.57±7.41) e ORQ (27±5.51) tiveram médias inferiores ao Grupo L-NAME (41.43±10.86); ORQ + TAD (32.17±7.27) e ORQ (27±5.51) foram semelhantes entre si; o Grupo TEST (42.14±6.09) teve LP superior a ORQ (27±5.51) e TAD (F=5.78, p=0.0006). No que se refere à pressão basal, os Grupos TAD (18.71±3.94) e ORQ (13±10.94) tiveram médias inferiores ao L-NAME (31.14±4.56); ORQ(13±10.94) e ORQ+TAD (19.83±3.25) foram similares entre si; o Grupo TEST(28±5.83) teve média da PB superior ao ORQ (F=5,72, p=0,0006). Não houve diferença estatística entre os grupos com relação ao limiar de volume. Os Grupos DTAD e L-NAME foram semelhantes em todos os parâmetros. Em conclusão, a Tadalafila e a castração foram igualmente efetivos em reduzir a hiperatividade detrusora e relaxar a uretra em camundongos com deficiência crônica de óxido nítrico. A administração de testosterona e Tadalafila de forma combinada para camundongos castrados com deficiência crônica de óxido nítrico aumenta a frequência de micção, pressão basal e limiar de pressão em relação à castração isolada, sugerindo uma via alternativa andrógeno-dependente relacionada com contração e relaxamento do músculo liso.

Submitted by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2017-09-11T22:42:48Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Verano Costa Dutra.pdf: 548347 bytes, checksum: 3a4e3ddfb5152b9213a1eb142433fb30 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2017-09-12T11:44:18Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Verano Costa Dutra.pdf: 548347 bytes, checksum: 3a4e3ddfb5152b9213a1eb142433fb30 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2017-09-12T11:44:18Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Verano Costa Dutra.pdf: 548347 bytes, checksum: 3a4e3ddfb5152b9213a1eb142433fb30 (MD5) Previous issue date: 2017-09-11<br>Introdução: O uso irracional de medicamentos faz parte do processo de medicalização da sociedade, que traz mais danos que benefícios. Nesse contexto, o comércio eletrônico de medicamentos apresenta os riscos adicionais da ausência de orientação de um profissional da saúde e a oferta de medicamentos ilegais. Medicamentos com alto apelo publicitário, como os inibidores da fosfodiesterase 5 (IPDE5), podem representar casos extremos deste problema de saúde contemporâneo. Objetivo: Analisar os sites de venda de IPDE5 em língua portuguesa. Método: Estudo transversal descritivo sobre os anúncios dos medicamentos Viagra® (citrato de sildenafil), Cialis® (tadalafila), Levitra® (vardernafila) (medicamentos legais); e Pramil (citrato de sildenafil) e Eroxil (tadalafila) (medicamentos ilegais). A seleção dos sites foi feita através da ferramenta de busca Google® . Foram coletadas informações gerais sobre os sites e também sua adequação à RDC 44/2009. Resultados: Foram encontrados 497 anúncios, sendo 310 para medicamentos legais e 187 para medicamentos ilegais. Para ambos os tipos, a maioria dos anúncios foi hospedado em sites estrangeiros, e não foi possível identificar a localização do vendedor. Uma minoria dos sites, tanto legais quanto ilegais, apresentava informações sobre indicação, contra-indicação e posologia. As diferenças encontradas na distribuição de todas as variáveis de caracterização dos sites legais ou ilegais não apresentaram significância estatística. Em relação aos apelos publicitários, exceto pela palavra “Segurança”, todas as demais palavras analisadas foram mais frequentes nos anúncios de medicamentos ilegais. Ambos os tipos de sites apresentavam baixa adesão às recomendações da RDC 44/2009. Conclusão: Este estudo demonstra que a adesão à regulação da venda de medicamentos pela Internet no Brasil encontra-se em fase incipiente, sendo que esta investigação, anterior à RDC 44/2009, identificou poucas diferenças entre sites de medicamentos legais e ilegais. Assim, para além do estabelecimento do marco regulatório, intervenções mais gerais no âmbito da Saúde Pública são importantes e necessárias.

Submitted by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2018-01-10T14:29:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Verano Costa Dutra.pdf: 542166 bytes, checksum: 1c6806c7536a60bb4697dca11753ab6a (MD5)<br>Approved for entry into archive by Ana Lúcia Torres (bfmhuap@gmail.com) on 2018-01-10T14:29:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Verano Costa Dutra.pdf: 542166 bytes, checksum: 1c6806c7536a60bb4697dca11753ab6a (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-01-10T14:29:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Verano Costa Dutra.pdf: 542166 bytes, checksum: 1c6806c7536a60bb4697dca11753ab6a (MD5) Previous issue date: 2010<br>Faculdade Pitágoras de Guarapari<br>Introdução: O uso irracional de medicamentos faz parte do processo de medicalização da sociedade, que traz mais danos que benefícios. Nesse contexto, o comércio eletrônico de medicamentos apresenta os riscos adicionais da ausência de orientação de um profissional da saúde e a oferta de medicamentos ilegais. Medicamentos com alto apelo publicitário, como os inibidores da fosfodiesterase 5 (IPDE5), podem representar casos extremos deste problema de saúde contemporâneo. Objetivo: Analisar os sites de venda de IPDE5 em língua portuguesa. Método: Estudo transversal descritivo sobre os anúncios dos medicamentos Viagra® (citrato de sildenafil), Cialis® (tadalafila), Levitra® (vardernafila) (medicamentos legais); e Pramil (citrato de sildenafil) e Eroxil (tadalafila) (medicamentos ilegais). A seleção dos sites foi feita através da ferramenta de busca Google®. Foram coletadas informações gerais sobre os sites e também sua adequação à RDC 44/2009. Resultados: Foram encontrados 497 anúncios, sendo 310 para medicamentos legais e 187 para medicamentos ilegais. Para ambos os tipos, a maioria dos anúncios foi hospedado em sites estrangeiros, e não foi possível identificar a localização do vendedor. Uma minoria dos sites, tanto legais quanto ilegais, apresentava informações sobre indicação, contra-indicação e posologia. As diferenças encontradas na distribuição de todas as variáveis de caracterização dos sites legais ou ilegais não apresentaram significância estatística. Em relação aos apelos publicitários, exceto pela palavra “Segurança”, todas as demais palavras analisadas foram mais frequentes nos anúncios de medicamentos ilegais. Ambos os tipos de sites apresentavam baixa adesão às recomendações da RDC 44/2009. Conclusão: Este estudo demonstra que a adesão à regulação da venda de medicamentos pela Internet no Brasil encontra-se em fase incipiente, sendo que esta investigação, anterior à RDC 44/2009, identificou poucas diferenças entre sites de medicamentos legais e ilegais. Assim, para além do estabelecimento do marco regulatório, intervenções mais gerais no âmbito da Saúde Pública são importantes e necessárias<br>Introduction: The irrational drug use is part of the process of medicalization of the society, which brings more harm than benefits. In this context, the e-commerce of medications has the additional risks of the absence of orientation from a healthcare professional and the offer of illegal medications. Drugs with high marketing appeal, such as the phosphodiesterasis 5 inhibitors (PD5I), may represent extreme cases of this contemporary healthcare problem. Objective: To analyze sites of e-commerce of PD5I in Portuguese language. Method: Descriptive cross-sectional study on the advertisements of the drugs Viagra® (sildenafil citrate), Cialis® (tadalafil), Levitra® (vardernafil) (legal drugs); and Pramil (sildenafil citrate) and Eroxil (tadalafil) (illegal drugs). The site selection was performed by the use of the search engine Google®. General information about the sites as well as its compliance to the RDC 44/2009 was collected. Results: A number of 497 advertisements were found, being 310 for legal and 187 for illegal drugs. For both types, the majority of advertisements were hosted on foreign sites, and it was not possible to identify the vendor location. A minority of sites, both legal and illegal, showed information on indication, counter-indication and way of use. The differences found in the distribution of all legal or illegal site features variables had no statistical significance. Regarding the marketing appeal, except for the word “Security”, all other analyzed words were more frequent on illegal drug sites. Both types of sites showed low compliance to the RDC 44/2009 recommendations. Conclusion: This study shows that the compliance to the ecommerce regulation of medications in Brazil is at its early stages, since this investigation, prior to the RDC 44/2009, showed few differences between legal and illegal drug sites. So, beyond the establishment of the regulation benchmark, more general interventions in the Public Health field are important and needed.

MORENO, Samuel Luz. Análise do efeito de inibidores de fosfodiesterase do tipo 5 em parâmetros urodinâmicos de camundongos utilizando modelo experimental de hiperatividade detrusora. 2014. 41 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014.<br>Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T12:15:14Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_slmoreno.pdf: 1098685 bytes, checksum: dab3fb4df0c9a34ed0d45e0c502b9e37 (MD5)<br>Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-06-20T12:15:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_slmoreno.pdf: 1098685 bytes, checksum: dab3fb4df0c9a34ed0d45e0c502b9e37 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2014-06-20T12:15:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_slmoreno.pdf: 1098685 bytes, checksum: dab3fb4df0c9a34ed0d45e0c502b9e37 (MD5) Previous issue date: 2014<br>Erectile dysfunction and Lower Urinary Tract Symptoms (LUTS) secondary to Benign Prostate Hyperplasia (BPH) are two conditions with high prevalence in men, especially in older age groups. After demonstration of similar pathophysiological mechanisms, several randomized controlled trials showed improvement in urinary symptoms with the use of Phosphodyesterase 5 Inhibitors (PDE5-I). We studied Cystometric parameters of mice in an experimental model of detrusor overactivity secondary to chronic depletion of NO by administration of Nω-nitro-L-arginine methil esther hidrocrolide (L –NAME) in animals treated with Sildenafil, Tadalafil and Vardenafil. Thirty-five mice were divided into 5 groups of 6 animals and one group of 5 (DTAD - Tadalafil diluent). All animals were treated for a period of 4 weeks. The groups received standard food and water, and one group received no further treatment (control). The other groups were treated with L-NAME alone, L- NAME + Sildenafil, L- NAME + Vardenafil, L -NAME + Tadalafil and L-NAME + DTAD. After treatment, the animals were anesthetized and cystometry was performed. The analysis of variance was used for evaluation of results. The group treated with sildenafil had fewer NVCs ( 2.16 ± 1.60 ) and lower BP ( 21.64 ± 4.63 ) , TP ( 22.56 ± 5.37 ) and MF ( 1.23 ± 0.26 ) compared to L -NAME . The group treated with Vardenafil also showed fewer NVCs (2.66 ± 2.06) and lower BP (21.87 ± 5.86) and MF (1.24 ± 0.30) compared to L -NAME. The group treated with Tadalafil had less NVCs (3.16 ± 1.47) and lower BP (20.61 ± 5.50), TP (25.45 ± 8.84) and MF (1.14 ± 0.31) relative to the L- NAME. The DTAD solution (xanthan gum and mannitol), used to optimize the dilution of Tadalafil, had only one parameter with significant difference compared to L –NAME, the MF (1.28 ± 0.16). There was no significant difference between Sildenafil, Tadalafil and Vardenafil groups in any parameter evaluated. The PDE5-Is were effective in protecting animal bladder from deleterious effects caused by chronic depletion of NO by administration of L -NAME. There was no superiority of any drug tested against another.<br>A disfunção erétil e os sintomas miccionais por hiperplasia prostática benigna (HPB) são duas condições com elevada prevalência no homem, principalmente nas faixas etárias mais elevadas. A partir da demonstração de mecanismos fisiopatológicos semelhantes, diversos ensaios clínicos randomizados demonstraram a melhora dos sintomas miccionais com a utilização dos inibidores da fosfodiesterase do tipo 5 (IPDE5). Nesse estudo, avaliamos parâmetros cistométricos de camundongos em modelo experimental de hiperatividade detrusora secundária a depleção crônica de NO pela administração de Nω-nitro-L-arginina metil ester hidrocrolido (L-NAME) em animais tratados com Sildenafil, Vardenafil e Tadalafil. Foram utilizados 35 camundongos, divididos em 5 grupos de 6 animais e um grupo com 5 (diluente do Tadalafil- DTAD). Todos os animais foram submetidos a tratamento pelo período de 4 semanas. Os grupos receberam água e ração padrão, sendo que um grupo não recebeu tratamento adicional (Controle). Os outros grupos receberam tratamento com L-NAME isolado, L-NAME + Sildenafil, L-NAME + Vardenafil, L-NAME + Tadalafil e L-NAME + DTAD. Após o tratamento, os animais foram anestesiados e submetidos a cistometria. Para a avaliação dos resultados, utilizamos a análise da variância. O grupo tratado com Sildenafil teve menor número de Non-Voiding Contractions (NVCs) (2,16±1,60) e menores Pressão Basal (PB) (21,64±4,63), Pressão de Limiar (PL) (22,56±5,37) e Frequência de Micção (FM) (1,23±0,26) comparado ao L-NAME. O grupo tratado com Vardenafil também apresentou menor número de NVCs (2,66±2,06) e menores PB (21,87±5,86) e FM (1,24±0,30) comparado ao L-NAME. O grupo tratado com Tadalafil apresentou menos NVCs (3,16±1,47) e menores PB (20,61±5,50), PL (25,45±8,84) e FM (1,14±0,31) em relação ao L-NAME. A solução DTAD (goma xantana e manitol), utilizada para otimizar a diluição do Tadalafil, teve como único parâmetro com diferença significante em relação ao L-NAME a FM (1,28±0,16). Não houve diferença significante entre os grupos Sildenafil, Vardenafil e Tadalafil em nenhum parâmetro avaliado. Os IPDE5 foram eficazes em proteger os animais da ação deletéria vesical decorrente da depleção crônica de NO pela administração de L-NAME. Não houve superioridade de uma droga testada em relação a outra.

Objetivo: Avaliar os efeitos da tadalafila, um inibidor da fosfodiesterase tipo 5, nos valores teciduais renais de malondialdeído (produto da lipoperoxidação celular), nos níveis séricos de uréia e creatinina e na histologia renal em suínos submetidos à isquemia-reperfusão renal em rim único. Material e métodos: Doze suínos Large-White foram submetidos à uninefrectomia seguida por isquemia-reperfusão renal contralateral e separados aleatoriamente em dois grupos com ou sem tratamento com tadalafila 20 mg via oral. Foram analisados os resultados de lipoeroxidação, histologia e função renal. Resultados: Os valores teciduais de Malondialdeído (MDA) foram significativamente superiores no grupo não tratado com tadalafila (p<0,05), quando comparados ao grupo de animais tratados com o fármaco. Houve diferença estatística nos estudos histológicos, tendo ocorrido mais vacuolização e infiltrado polimorfonuclear intersticial no grupo não tratado com tadalafila. Não houve diferença significativa nas dosagens séricas de uréia e creatinina. Conclusão: Nosso estudo sugere, pela primeira vez na literatura, que a tadalafila tem um efeito protetor na isquemia e reperfusão renal em suínos, como evidenciado pelos resultados da lipoperoxidação e pelos estudos histológicos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química<br>Made available in DSpace on 2012-10-24T05:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 251887.pdf: 13161331 bytes, checksum: eb63c1fdaf2e945f50046b9e69c1177f (MD5)<br>As ribonucleases constituem enzimas que quebram o RNA eficientemente, mas sua forma de atuação ainda não é de consenso entre os pesquisadores. Neste trabalho estudou-se a reação de hidrólise do diéster de fosfato, BMIPP. Foi obtido um perfil de pH em forma de sino, indicando uma catálise bifuncional pela espécie reativa zwiteriônica. Sugere-se que o efeito catalítico observado para BMIPP (106) deve-se a uma catálise intramolecular básica do imidazol desprotonado sobre a água, simultânea a uma catálise intramolecular ácida do imidazol protonado, assistindo o grupo de saída. O efeito isotópico obtido e os parâmetros de ativação são consistentes com o mecanismo proposto. O diéster BMIPP forma como produtos o monóester correspondente (Me-IMPP) e o fenol (IMP) e, posteriormente, a hidrólise do monoéster Me-IMPP leva a um segundo equivalente do IMP. Através dos estudos de ESI-MS (MS) foi possível detectar todos os produtos da reação do BMIPP. Cálculos computacionais também foram realizados, e para a estrutura otimizada do estado de transição da reação do BMIPP com H2O, observou-se que a distância entre o oxigênio fenólico e o hidrogênio do imidazol protonado é característico de ligação de hidrogênio (1,7 Å), favorecendo uma catálise ácida intramolecular. Apesar do impedimento conformacional dos grupos metilas, BMIPP se mostrou um eficiente modelo bifuncional da ribonuclease.

CARVALHO, Marcos Fiuza de. Análise do efeito de inibidores de fosfodiesterase do tipo 5 e agonistas beta adrenergicos em parametros urodinamicos de camundongos utilizando modelo experimental de hiperatividade detrusora. 2015. 51 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015.<br>Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T15:41:19Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_mfcarvalho.pdf: 1241642 bytes, checksum: 64103057c08598098ba4fe542a194bf8 (MD5)<br>Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T16:09:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_mfcarvalho.pdf: 1241642 bytes, checksum: 64103057c08598098ba4fe542a194bf8 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-03-07T16:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_mfcarvalho.pdf: 1241642 bytes, checksum: 64103057c08598098ba4fe542a194bf8 (MD5) Previous issue date: 2015<br>Pharmacological treatment of detrusor overactivity (DO) has been classically done with antimuscarinics. Recently new pharmacological agents or association of drugs have been used to treat DO. One of them are the beta3 agonists. Beta 3 agonists increase intracellular cyclic adenosine monophosphate (cAMP) through adenylyl cyclase pathway. cAMP induces detrusor smooth muscle (DSM) relaxation. Phosphodiesterase type 5 inhibitors (PDE-5i) like tadalafil also cause DSM relaxation through nitric oxide/cyclic guanosine monophosphate (NO/cGMP) pathway. Besides the above mechanisms it has been hypothetized that association of beta 3 agonists with PDEi may cause more pronounced DSM relaxation. As a consequence, the principal aim of this in vivo experimental study was to evaluate the impact of association of PDE-5i (tadalafil) and beta3 agonist (BRL 37344) on DO. Thirty mice were randomized into five groups: Control (n=6); L-Ng-Nitroarginine methyl ester hydrochloride (L-NAME) (n=6); L-NAME /tadalafil (n=6); L-NAME / BRL 37344 (n=6); L-NAME/ tadalafil / BRL 37344 (n=6). L-NAME was used to experimentally cause DO on mice by NO deprivation. All animals were submitted to urodynamic studies and the following parameters were evaluated: non-voiding contractions (NVC); frequency of micturition cycles (FM). It was considered as detrusor overactivity the increase in the number of NVC and FM. Comparisons between five groups of treatment were made by analysis of variance (ANOVA) associated with Tukey test. L-NAME Group (4.33 ±2.58) increased the number of NVC compared to Control Group (1,50±0,55). L-NAME/Tadalafil (2.00±1.10), L-NAME/BRL 37344 (1,50±1,52) and L-NAME/Tadalafil/BRL37344 (2,00±1,26 ) Groups decreased number of NVC compared to L-NAME Group (p<0.05). However, co-administration of Tadalafil/BRL 37344 was not more effective than administration of Tadalafil or BRL 37344 alone (Figure 1). L-NAME Group (2,18±0,68) increased the number of FM compared to Control Group (0,69±0,56). L-NAME/Tadalafil (0,97±0,71), L-NAME/BRL 37344 (0,92±0,38) and L-NAME/Tadalafil/BRL 37344 (1,05±0,44) Groups decreased number of FM compared to L-NAME Group (p<0,05). However, co-administration of Tadalafil/BRL 37344 was not more effective than administration of Tadalafil or BRL 37344 alone. Both Tadalafil and BRL 37344 improved DO. Nonetheless, association of tadalafil and BRL 37344 has not an additive effect on DO.<br>Tratamento farmacológico da hiperatividade detrusora (HD) tem sido classicamente feito com antimuscarínicos. Recentemente novos agentes farmacológicos ou associação de drogas tem sido usados para tratar HD. Um deles são os beta3 agonistas. Beta3 agonistas aumentam a adenosina monofosfato cíclica intracelular (AMPc) através da via da adenilato ciclase. AMPc induz o relaxamento do músculo liso detrusor (MLD). Inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (iPDE-5) como a tadalafila também causam relaxamento do MLD através da via do óxido nítrico/guanosina monofosfato cíclico (NO/GMPc). Além dos mecanismos acima tem-se feito a hipótese que a associação dos beta 3 agonistas com iPDE pode causar relaxamento pronunciado do MLD. Como consequência, o principal objetivo deste estudo experimental in vivo foi avaliar o impacto da associação dos iPDE (tadalafila) e beta 3 agonista (BRL 37344) na HD. Trinta camundongos foram randomizados em cinco grupos: Controle (n=6); L-Ng-Nitroarginine methyl ester hidroclorido (L-NAME) (n=6); L-NAME/Tadalafila (n=6); L-NAME/BRL 37344 (n=6); L-NAME/Tadalafila/BRL 37344 (n=6). L-NAME foi usado para causar experimentalmente HD nos camundongos pela depleção de NO. Todos animais foram submetidos a estudos urodinâmicos e os seguintes parâmetros foram avaliados: non-voiding contractions (NVC); frequência de micção (FM). Foi considerada como hiperatividade detrusora o aumento no número de NVC e FM. Comparações entre os cinco grupos de tratamento foram feitos pela análise de variância (ANOVA) associados com o teste de Tukey. O Grupo L-NAME (4,33 ±2,58) aumentou o número de NVC comparado ao Grupo Controle (1,50 ±0,55). Os Grupos L-NAME/Tadalafila (2.00±1.10), L-NAME/BRL 37344 (1,50±1,52) e L-NAME/Tadalafila/BRL37344 (2,00±1,26 ) diminuiram o número de NVC comparado com o Grupo L-NAME (p<0,05). Porém a co-administração de Tadalafila/BRL 37344 não foi mais efetiva que a administração de Tadalafila ou BRL 37344 sozinhos. O Grupo L-NAME (2,80 ± 0,68) aumentou o número de FM comparada ao Grupo Controle (0,69 ±0,56). Os Grupos L-NAME/Tadalafila(0,97±0,71), L-NAME/BRL 37344(0,92 ±0,38) e L-NAME/Tadalafila/BRL 37344 (1,05 ±0,44) diminuiram o número de FM comparado com o Grupo L-NAME (p<0,05). Porém a co-administração da Tadalafila/ BRL 37344 não foi mais efetiva que a administração de Tadalafila e BRL 37344 sozinhos. Ambos Tadalafila e BRL 37344 melhoraram a HD. Porém, a associação de Tadalafila e BRL 37344 não teve efeito aditivo na hiperatividade detrusora.

REGADAS, R. P. Efeito da associação da tadalafila com a tansulosina no trato urinário inferior de ratos e de humanos. 2012. 73 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012.<br>Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-24T15:34:48Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_rpregadas.pdf: 1365090 bytes, checksum: 6485e4a8c68645d8acbc95a7b3e5c8a5 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-24T15:34:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_rpregadas.pdf: 1365090 bytes, checksum: 6485e4a8c68645d8acbc95a7b3e5c8a5 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-08-24T15:34:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_rpregadas.pdf: 1365090 bytes, checksum: 6485e4a8c68645d8acbc95a7b3e5c8a5 (MD5) Previous issue date: 2012-05-02<br>Recently, it has been observed an association between BPH and ED. It was reported that patients with ED treated with inhibitory phosphodiesterase type 5 (IPDE5) improves erection and LUTS. The pathophysiology of lower urinary tract symptoms (LUTS) is not completely known, so it is necessary that clinical and experimental studies are made to clarify the mechanisms involved in its origin. However, despite the knowledge that there is improvement in LUTS, it is not known whether IPDE5 works during storage, emptying, or both. It is not yet known if the association IPDE5 with alpha blocker is better than its use alone or whether this association is safe. The aim of this study was to evaluate the safety of the combination of tamsulosin with daily tadalafil as well as its effect on lower urinary tract in human and rats by urodynamic study. Methods: it was an experimental study using rats with chronic bladder outlet obstruction induced by L-NAME and a randomized clinical trial, double-blind, placebo-controlled study. In the experimental study, the animals were divided into 05 groups. Group 1: six rats were treated without medication; Group 2: six rats were treated with L- NAME (60 mg/Kg/dia); Group 3: six rats were treated with L- NAME and tansulosin (1mg/kg); Group 4: seven rats were treated with L- NAME and tadalafil (5mg/kg); grupo 5: six rats were treated with L- NAME, tadalafil and Tansulosina. After thirty days of oral treatment, the animals underwent urodynamic study. The urodynamic variables were evaluated. In the filling phase: non-void contractions (NVC), volume threshold (VT), pressure threshold (TP) and in the voiding phase: peak pressure (PP), micturition frequency (FM), basal pressure (PB) and residual volume. In the clinical study, it was performed a randomized clinical trial, double-blind, placebo-controlled study during the period October 2010 to September 2011. All patients had LUTS associated with BPH and were evaluated with International Prostate Symptom Score (I-PSS) and urodynamic study at baseline and 30 days after treatment. Patients were separated into two groups: Group 1 (20 patients) - daily tadalafil 5mg and placebo and Group 2 (20 patients) tamsulosin 0.4 mg and tamsulosin 0.4 mg. Results: it was found that the animals in group 2 showed a significant increase in the frequency of detrusor contraction (p <0.05), frequency micturition cycles (p <0.05) and residual volume (p <0.01) when compared to group 1. Animals in group 3 showed a significant reduction of non-voiding contractions, when compared to group 2. The group 4 animals showed significant reduction in frequency of micturition cycles (p <0.05) and residual volume (p <0.05) compared to group 2. Animals in group 5 showed a significant reduction in non-voiding contractions (p <0.05), frequency of micturition cycles (p <0.05) and residual volume (p <0.01) compared to group 2. In the clinical study, the age of patients (p=0.19) and the average volume of the prostate (P=0.28) were similar. The association of tamsulosin with tadalafil 5mg was more effective in improving the total score of the I-PSS and voiding sub-score. But comparing the groups there is no difference between the storage sub-score, Quality of Life, maximum flow and detrusor pressure at maximum flow. There were no major side effect Conclusion: The combination of tamsulosin and tadalafil daily is safe and better than the isolated use of tamsulosin to treat patients with lower urinary tract symptoms associated with benign prostatic hyperplasia and rats with chronic bladder outlet obstruction.<br>Recentemente, foi observado que pacientes com DE tratados com inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (IPDE5) melhoram não somente a ereção, mas também os sintomas do trato urinário inferior (STUI). A fisiopatologia dos STUI é desconhecida e há um número crescente de estudos que objetiva compreender suas bases fisiopatológicas. Entretanto, a despeito do conhecimento que existe sobre a melhora dos STUI, não se sabe se IPDE-5 atua durante o armazenamento, esvaziamento ou ambos. Não se tem conhecimento se a associação do IPDE-5 com alfabloqueador é melhor que o uso isolado e se esta associação é segura. O objetivo deste estudo foi avaliar a segurança da associação da tansulosina com tadalafila tomados diariamente, bem como seu efeito no trato urinário inferior de humanos e de ratos por meio de estudo urodinâmico Metodo: foi realizado um estudo experimental utilizando ratos com obstrução infra-vesical crônica, induzida por L-NAME e um estudo clínico randomizado, duplo-cego e placebo-controlado durante o período de outubro de 2010 a janeiro de 2012. No estudo experimental, os animais foram distribuídos em 05 grupos; Grupo 1: seis ratos foram tratados sem medicação; Grupo 2: seis ratos foram tratados com L- NAME, na dose oral de 60 mg/Kg/dia; Grupo 3: seis ratos foram tratados com L- NAME e tansulosina (1mg/kg); Grupo 4: sete ratos foram tratados com L- NAME e tadalafila (5mg/kg); Grupo 5: seis ratos foram tratados com L- NAME, tadalafila e tansulosina. Após trinta dias de tratamento, os animais foram submetidos a estudo urodinâmico. As seguintes variáveis urodinâmicos foram avaliadas. Na fase de enchimento: freqüência de contrações não-miccionais (hiperatividade detrusora), limiar de volume (LV), limiar de pressão (LP) e na fase miccional: pressão de pico (PP), freqüência dos ciclos de micção por minuto (FM), pressão basal (PB) e volume residual. No estudo clínico, os pacientes foram distribuídos em dois grupos: Grupo 1 (20 pacientes) receberam dose diária de tansulosina 0,4mg e placebo e Grupo 2 (20 pacientes) receberam tansulosina 0,4mg e tadalafila 5mg, durante 30 dias. Foram avaliados com aplicação do International Prostate Score Symptom (IPSS) e com estudo urodinâmico antes e após o tratamento. Resultado: No estudo experimental, verificou-se que os animais do grupo 2 apresentaram aumento significativo das contrações não-micionais do detrusor (p < 0,05), na frequência de micção (p < 0,05) e no volume residual (p < 0,01), quando comparados ao grupo 1. Os animais do grupo 3 apresentaram redução significativa das contrações não miccionais, quando comparado ao grupo 2. Os animais do grupo 4 apresentaram redução significativa da freqüência de ciclos miccionais (p < 0,05) e do volume residual (p < 0,05), quando comparado ao grupo 2. Os animais do grupo 5 apresentaram redução significante das contrações não-miccionais (p < 0,05), da freqüência de ciclos miccionais (p < 0,05) e do volume residual (p < 0,01), quando comparado ao grupo 2. No estudo clínico, observou-se significativa melhora do IPSS e da qualidade de vida quando comparado com o Grupo 1 e da pressão detrusora no fluxo máximo no Grupo 1 quando comparado ao início do tratamento (p<0,001). Houve melhora significante das hiperatividades detrusoras e do fluxo máximo nos Grupos 1 e 2 quando comparado ao início do tratamento, porém não houve diferença quando feito comparação entre os grupos após o tratamento. Não foi observado nenhum efeito colateral importante Conclusão: a terapia combinada diária foi bem tolerada com pequena incidência de efeitos colaterais. Mostrou -se, tanto no estudo clínico quanto no experimental, melhor que o uso isolado de tansulosina para o tratamento dos sintomas do trato urinário inferior.

Muitos pesquisadores têm procurado alternativas farmacológicas para diminuir a necrose em retalhos cutâneos isquêmicos. Nesta linha, tem ganho espaço a investigação dos inibidores da fosfodiesterase 5. Com uso difundido no tratamento da disfunção erétil, suas características farmacológicas e perfil de segurança permitem acreditar que possam ser usados também para este fim, de modo que testamos as drogas sildenafil e tadalafil. Esta última apresenta maior seletividade pela enzima fosfodiesterase 5 em relação a sildenafil, alterando o perfil de efeitos adversos, e tem como diferenciação uma maior meia vida. Neste trabalho foram operados 45 ratos Wistar submetidos a procedimento cirúrgico de retalho cutâneo dorsal medindo 10 x 2 cm, de base cefálica, conforme proposto por McFarlane, e divididos em 3 grupos de 15 que receberam os tratamentos por gavagem (administração por sondagem intra-gástrica). Para os ratos do grupo A foi administrado sildenafil 10 mg/kg/dose diluído em água destilada, formando 1 ml de solução, 12/12h; no grupo B foi administrado tadalafil 10 mg/kg/dose – solução de 1 ml - 1x dia, seguido por 1 ml de água destilada 12h após; no grupo C (grupo controle) foi administrado água destilada 1 ml 12/12h. Todos receberam doses administradas por gavage (intra-gástrico) com duração de 7 dias, após o que os animais foram sacrificados em câmara de CO2 e as peças submetidas a análise. Resultados: No momento da retirada das peças, sob medição direta na linha média, o percentual médio de necrose foi 41,8% (0-95,9%), sendo no grupo A 42,3% (23,2-68,1%), no grupo B 39,5% (0-56,1%) e no grupo C 43,5% (0-95,9%) (p=0,861); Na medição da linha média por anátomo-patologia, a necrose percentual média foi 44,6% (0-76%), sendo no grupo A 50,4% (29,3-76,3%), no grupo B 36,1% (0-64,8%) e no grupo C 47,3% (0-64,7%) (p=0,06). Os resultados foram então avaliados pela medição do percentual de área necrótica sobre área total das peças em imagens digitalizadas. O percentual de necrose médio foi 40,4% (0-69%), no grupo A 40,4% (22-69%), no grupo B 43,4% (0-54%) e no grupo C 46,5% (0-65%) (p=0,10). Os resultados não demonstraram diferença consistente entre os grupos. Conclusão: Não ficou evidenciado efeito dos fármacos sildenafil e tadalafil em diminuir a necrose cutânea no modelo proposto.<br>Several authors have been looking for a way of how to lessen cutaneous flap necrosis. Phosphodiesterase 5 inhibitors, currently marked for treatment of erectile disfunction, are a group of drugs with pharmacologic characteristics and profile of safety that makes it an alternative for that. Sildenafil and tadalafil were tested in this study. The last one has more specificity for phosphodiesterase 5, what gives a different profile of adverse effects, and does have a longer mid-life. For this propose, 45 Wistar rat were used and a McFarlane cephalic based flap was designed on the dorsum of the rat (10 x 2 cm). Rats were divided into 3 groups of 15 each one. Group A received sildenafil 10 mg/kg/dose 12/12h; group B received tadalafil 10 mg/kg/dose at morning and 1 ml of water at night (12 hours after); group C (control group) received water 1 ml 12/12 h. Drug administration was made by gavage (intra gastric), during 7 days long. After that, rats were sacrificed in a CO2 cam and flaps were taken for posterior analysis. Results: When flaps were taken, results of midline necrosis percent under direct view were: mean 41.8% (0-95.9), group A 42.3% (23.2-68.1%), group B 39.5% (0-56.1%), group C 43.5% (0-95.9%) (p=0.861); In anatomo-pathologic results, the mean percent necrosis was 44.6% (0-76%), and on group A 50.4% (29.3-76.3%), group B 36.1% (0-64.8%), group C 47.3% (0-64.7%) (p=0.06). Digital images of the flaps were analyzed by the ratio necrotic area/total area. Mean necrotic percent was 40.4% (0-69%), and on group A 40.4% (22-69%), on group B 43.4% (0-54%), on group C 46.5% (0-65%) (p=0.10). Results didn’t show consistent difference between groups. Conclusion: The use of sildenafil or tadalafil was not effective for treatment of ischemic flap on this model of research.

LINHARES, B.L Avaliação in vitro do efeito relaxante de inibidores de fosfodiesterases e agonista beta-adrenérgico em bexiga de camundongos utilizando modelo experimental de hiperatividade detrusora. 2016. 65 f. Dissertação (Mestrado Ciências Médico-Cirúrgicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará. Fortaleza, 2016.<br>Submitted by Luciene Oliveira (luciene@ufc.br) on 2017-06-27T16:31:56Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_bll.pdf: 2116968 bytes, checksum: 14aeab4af294ec57b668adf85753c334 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-28T11:40:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_bll.pdf: 2116968 bytes, checksum: 14aeab4af294ec57b668adf85753c334 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2017-06-28T11:40:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_bll.pdf: 2116968 bytes, checksum: 14aeab4af294ec57b668adf85753c334 (MD5) Previous issue date: 2016-10-20<br>Overactivity bladder syndrome has classically been treated with antimuscarinics. However, frequent adverse systemic effects have led to the search for new therapeutic options. β3- adrenoceptor (β3-AR) agonists relax the detrusor smooth muscle (DSM) by the adenylyl cyclase pathway, increasing cyclic adenosine monophosphate (cAMP). Rolipram, a selective type 4 phosphodiesterase inhibitor (IPDE4), elevates intracelular cAMP levels by supressing hydrolysis. Phosphodiesterase type 5 inhibitors (IPDE5), such as tadalafil, relax DSM by the nitric oxide/cyclic guanosine monophosphate pathway (NO/cGMP). It has been hypothesized that the inhibition of phophodiesterases could potentiate the relaxing effect of β3-AR agonists. The main objective of this study is to evaluate in vitro the effects of the combination of a β3-AR agonist with two different phosphodiesterase inhibitors (IPDE4 and IPDE5) in a experimental model of detrusor overactivity. The experiments were performed on bladder strips of mice and divided in two phases. The following drugs were used: BRL 37344 (β3-AR agonist), tadalafil (IPDE5) and rolipram (IPDE4). In the first phase, after potassium-induced contraction, strips isolated from naive mice were exposed to increasing concentrations of each study drug. In another series of experiments, prior to contraction, strips were incubated with either tadalafil or rolipram and then increasing concentrations of BRL 37344 were added. In the second phase, the same protocol was performed with animals treated with L-NAME for 30 days. Chronic L-NAME administration leads to detrusor overactivity by NO deprivation. Cumulative concentration-response curves were constructed. In the first phase, preincubation with tadalafil increased the relaxing response of BRL 37344 in two concentrations. Pretreatment with rolipram had no effect on the relaxation obtained with BRL 37344. In LNAME- treated mice, rolipram showed the best relaxation when compared to the other drugs. In these animals, rolipram increased the relaxing response of BRL 37344 in almost all concentrations, but no synergistic effect with tadalafil was observed. Phosphodiesterase inhibitors associated with the already proven effective β3-AR agonists may represent a new approach for patients with storage symptons. In our experimental model, the relaxing effect of the β3-AR agonist was potentiated by IPDE4 but not by IPDE5, suggesting cAMP plays an important role in DSM relaxation. Keywords: Detrusor smooth muscle. β3-adrenoceptor agonist. Phosphodiesterase inhibitors.<br>Tratamento da hiperatividade detrusora (HD) tem sido classicamente feito com antimuscarínicos. No entanto, seus frequentes efeitos adversos têm levado à procura por novas opções terapêuticas. Agonistas adrenérgicos beta-3 seletivos relaxam o músculo liso detrusor (MLD) através da via da adenilato ciclase, aumentando a adenosina monofosfato cíclica intracelular (AMPc). O rolipram, inibidor específico da fosfodiesterase tipo 4 (IPDE4), aumenta os níveis de AMPc, inibindo sua hidrólise. Inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (IPDE5), como a tadalafila, relaxam o MLD através da via do óxido nítrico/guanosina monofosfato cíclico (NO/GMPc). Tem-se sugerido que o uso combinado dessas drogas pode levar a uma potencialização do efeito relaxante. O principal objetivo deste estudo é avaliar in vitro os efeitos da associação de um agonista adrenérgico beta-3 seletivo com dois diferentes inibidores de fosfodiesterases (IPDE4 e IPDE5) em um modelo experimental de hiperatividade detrusora. Os experimentos foram divididos em duas fases e realizados em banho de órgãos com fragmentos de bexiga de camundongos. As substâncias utilizadas foram o BRL 37344 (agonista adrenérgico beta-3 seletivo), tadalafila (IPDE5) e rolipram (IPDE4). Na primeira fase, os tecidos de animais sem tratamento prévio eram submetidos à exposição de concentrações crescentes de cada uma das drogas estudadas após contração com KCL. Foram também realizados experimentos em que os tecidos eram pré-incubados com tadalafila ou rolipram para posterior adição do beta-3 adrenérgico. Em uma segunda fase, foi realizado o mesmo protocolo experimental com animais tratados com L-NAME por 30 dias. L-NAME foi usado para causar experimentalmente HD nos camundongos pela depleção de NO. Foram construídas curvas concentração-resposta para cada um dos experimentos. Na primeira fase, a pré-incubação com tadalafila aumentou o efeito relaxante do BRL 37344 apenas em duas concentrações (p < 0,05). A pré-incubação com rolipram não aumentou o efeito relaxante do BRL 37344. Nos animais tratados com L-NAME, o rolipram apresentou o maior efeito relaxante quando comparadas as drogas isoladamente. Neste grupo de animais, o rolipram aumentou o efeito relaxante do BRL 37344 em praticamente todas as concentrações, enquanto não foi observado efeito aditivo com a tadalafila. Os inibidores das fosfodiesterases, associados aos já comprovadamente eficazes beta-3 agonistas, podem representar uma nova abordagem dos pacientes com sintomas de armazenamento. No modelo deste estudo, o IPDE4 potencializou o efeito relaxante do agonista adrenérgico beta-3 seletivo, o que não foi observado com o IPDE5, sugerindo um importante papel da via do AMPc no relaxamento do detrusor de camundongos.

Made available in DSpace on 2015-05-27T13:34:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 747.pdf: 10524070 bytes, checksum: 63a709d300bc2d5346c2615523f68418 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010<br>Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil<br>O inibidor de fosfodiesterase-5 (PDE5), Sildenafil, é uma nova abordagem de tratamento oral para a hipertensão pulmonar. O esquema terapêutico envolve administração de doses elevadas diariamente e, até o momento, se desconhece a ação O inibidor de fosfodiesterase-5 (PDE5), Sildenafil, é uma nova abordagem de tratamento oral para a hipertensão pulmonar. O esquema terapêutico envolve a administração de doses elevadas diariamente e, até o momento, se desconhece a ação desta droga sobre células germinativas. Uma vez que as células de Leydig e células peritubulares apresentam a PDE5, este estudo foi conduzido para investigar os efeitos do tratamento crônico com Sildenafil sobre as células de Leydig e espermatozóides de camundongos. Após o ensaio experimental, células de Leydig e espermatozóides foram analisados por procedimentos morfológicos, imunocitoquímicos e moleculares, e a testosterona no soro foi avaliada por radioimunoensaio. Inúmeras alterações foram observadas após o tratamento. As células de Leydig apresentaram modificações ultra-estruturais, tais como REL vesicular, grandes vacúolos distribuídos no citoplasma, gotículas de lipídio claras, mitocôndrias dilatadas e círculos concêntricos de REL com vesículas na periferia, que são características típicas de células secretoras de esteróides ativadas. Os espermatozóides apresentaram mitocôndrias vacuolizadas. Um aumento na expressão da StAR, P450scc, testosterona, GCs, PKA e PKGI foi detectado nas células de Leydig. As sintases de óxido nítrico não foram detectadas nas células de Leydig pela técnica de western blot. Nos espermatozóides, a imunocitoquímica revelou uma diminuição na expressão da GCs e PKA, mas nenhuma alteração na marcação foi observada para a PKG. Nenhuma mudança significativa foi observada nos parâmetros de motilidade, viabilidade, integridade de acrossoma e DNA de espermatozóides. Adicionalmente, os níveis de testosterona no soro tornaram-se aumentados após quatro semanas de tratamento. Os resultados do presente estudo são consistentes com a hipótese de que a acumulação de GMPc, pela inibição da PDE5, e a ativação de suas vias dependentes estariam envolvidas na estimulação da biossíntese de androgênio e mudanças espermáticas. E testosterona no soro tornaram-se aumentados após quatro semanas de tratamento. Os resultados do presente estudo são consistentes com a hipótese de que a acumulação de GMPc, pela inibição da PDE5, e a ativação de suas vias dependentes estariam envolvidas na estimulação da biossíntese de androgênio e mudanças espermáticas

TEIXEIRA, Gisele Façanha Diógenes. Efeito do carbonato de lodenafil na consolidação de fraturas da diáfise femoral de ratos tratados com haste intramedular. 2010. 70 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010.<br>Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-20T12:44:45Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_gfdteixeira.pdf: 1210408 bytes, checksum: 37facb2cee28b948ae143eb93b2c510b (MD5)<br>Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-20T12:45:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_gfdteixeira.pdf: 1210408 bytes, checksum: 37facb2cee28b948ae143eb93b2c510b (MD5)<br>Made available in DSpace on 2014-02-20T12:45:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_gfdteixeira.pdf: 1210408 bytes, checksum: 37facb2cee28b948ae143eb93b2c510b (MD5) Previous issue date: 2010<br>The study was to investigate the effects of Lodenafil Carbonate in the process of bone healing in femurs of rats with reduced Kirshner´s wire. The vascular factors are extremely important for the formation of callus. Lodenafil Carbonate cause vasodilatory effects, belongs to the group of selective phosphodiesterase type 5(PDE5) inhibitors, that enzyme inhibits cyclic guanosine monophosphate (GMPc) and relaxation of smooth muscles and are used to treat erectile dysfunction. It used 36 male rats, adult male rats, with the average weight of 300g. All animals underwent surgery in which fractures to the femoral shaft with a blunt guillotine. The animals were divided into 2 groups: lodenafil group, wich received oral doses of carbonate lodenafil (10mg/kg) and the control group. The animals were sacrificed at 7, 14 and 28 days postoperatively. There were two deaths, two false paths of the wire and three animals was not established fracture. Were performed radiographic studies with film mammography to analyze the optical density and area of callus, measured in mm ² and histological study, using samples stained with picrosirius red under microscope light polarization, to quantify formation of collagen type I and type III in the cortical region near the fracture and callus. The density of type I collagen in the cortical region of the femur near the fracture observed in group lodenafil was significantly lower than that observed in the control group at 28 days of bone (** P = 0.0028). The results are not consistent enough to say that this drug has an effect on bone healing. It was found that the carbonate lodenafil not influence the process of bone healing in femurs of rats with reduced wire Kirshner.<br>O objetivo do estudo foi verificar os efeitos do carbonato de lodenafil no processo de consolidação óssea nos fêmures de ratos reduzidos com fio de Kirshner. Os fatores vasculares são extremamente importantes para a formação do calo ósseo. O carbonato de lodenafil causa efeitos vasodilatadores, pertence ao grupo dos inibidores da fosfodiesterase seletiva para o tipo 5 (PDE5), enzima que hidrolisa monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). O GMPc induz o relaxamento da musculatura lisa, sendo utilizado no tratamento da disfunção erétil. Foram utilizados 36 ratos machos, adultos, da linhagem Wistar, com o peso médio de 300g. Todos os animais foram submetidos a cirurgia em que era realizada a fratura da diáfise femoral com uma guilhotina romba. Os animais foram divididos em 2 grupos: o grupo lodenafil, que recebeu, via oral, doses diárias de carbonato de lodenafil (10mg/kg) e o grupo controle. Os animais foram sacrificados com 7, 14 e 28 dias de pós-operatório. Houve duas mortes, dois falsos trajetos do fio e em três animais não foi estabelecida a fratura. Foram realizados estudo radiográfico com filme de mamógrafo para analisar a densidade óptica e área do calo ósseo, medida em mm² e estudo histológico, utilizando amostras coradas com picrosirius red sob a luz poralizada do microscópio, para quantificar a formação de colágeno tipo I e tipo III na região cortical próxima a fratura e no calo ósseo. A densidade de colágeno tipo I na região cortical do fêmur próximo à fratura verificada no grupo lodenafil foi significantemente menor que a observada no grupo controle com 28 dias de consolidação óssea (**P = 0,0028). Os resultados encontrados não são consistentes o suficiente para afirmar que este fármaco exerce algum efeito na consolidação óssea. Verificou-se que o Carbonato de lodenafil não influenciou no processo de consolidação óssea nos fêmures de ratos reduzidos com fio de Kirshner.

Os pacientes que usam lítio (Li) para tratamento do transtorno bipolar freqüentemente apresentam poliúria e deficiência de concentração urinária, sintomas do Diabetes Insipidus nefrogênico (DIN). Animais tratados com Li apresentam baixos níveis de produção de adenosina monofosfato cíclico (AMPc) em resposta ao hormônio antidiurético (HAD). O Sildenafil (Sil), um inibidor da fosfodiesterase 5 (PDE5), eleva os níveis intracelulares de guanosina monofosfato cíclico (GMPc), levando a inserção de aquaporina 2 (AQP2) na membrana plasmática das células do ducto coletor. Portanto, inibidores de PDE podem promover a inserção de AQP2 na membrana plasmática mesmo sem a ativação do receptor de HAD, indicando a participação de uma via alternativa mediada pelo GMPc. Nós investigamos o efeito do Sil na expressão renal das proteínas de membrana AQP2, UT-A1, NKCC2, NHE3, P-ENaC em ratos com DIN induzido pelo Li. Ratos Wistar foram divididos nos seguintes grupos: grupo controle, recebendo dieta alimentar normal durante quatro semanas; grupo Li, recebendo dieta alimentar normal com 40 mmol Li por quilo de dieta durante quatro semanas; grupo Li + Sil, recebendo dieta alimentar normal com 40 mmol Li por quilo de dieta durante quatro semanas e 200 mg por quilo de dieta de Sil a partir da segunda semana; grupo Sil, recebendo dieta alimentar normal durante a primeira semana e a partir da segunda semana recebendo dieta normal com 200 mg de Sil por quilo de dieta. Os animais do grupo Li desenvolveram poliúria, diminuição da osmolalidade urinária e diminuição da expressão da AQP2. No grupo Li+Sil, o Sil foi capaz de reverter parcialmente a poliúria, diminuir o clearance de água livre, aumentar a osmolalidade urinária e aumentar a expressão da AQP2. A expressão de UTA1 foi completamente normalizada com o tratamento com Sil. A expressão das proteínas NKCC2 e NHE3 apresentaram-se aumentadas no grupo tratado com Li, e o Sil não foi capaz de reverter tal alteração. Além disso, o tratamento com Sil reverteu completamente o aumento da resistência vascular renal. Assim, concluímos que o tratamento com Sil em ratos com DIN melhora a poliúria, aumenta a smolalidade urinária e diminui o clearance de água livre pelo aumento da expressão de AQP2 e UT-A1. O tratamento com Sil pode ser benéfico para pacientes que sofrem com DIN induzida pelo Li.<br>Patients taking lithium to treat bipolar disorder often present polyuria and urinary concentrating defect. In addition, lithium-treated animals present lower cyclic adenosine monophosphate production in response to vasopressin. Sildenafil (Sil), a phosphodiesterase 5 (PDE5) inhibitor, elevates intracellular cyclic guanosine monophosphate (cGMP) levels, leading to plasma membrane accumulation of aquaporin 2 (AQP2). Therefore, PDE inhibitors might induce AQP2 membrane insertion even without vasopressin receptor activation by activating a parallel cGMP-mediated signal transduction pathway. We investigated the effect of sildenafil on renal expression of AQP2, UT-A1, sodium/hydrogen exchanger (NHE3), type 1 bumetanide-sensitive Na-K-2Cl cotransporter (NKCC2), and the epithelial sodium channel alpha subunit (P-ENaC). Wistar rats received lithium (40 mmol/kg food) or not for 4 weeks (Li or control), some rats also receiving sildenafil (200 mg/kg food) in weeks 2-4, with or without lithium (Li+Sil or Sil). In Li+Sil rats, urine output was markedly lower, as was water free clearance, whereas urine osmolality was higher. Semiquantitative immunoblotting revealed the following: AQP2 expression was partially normalized; UT-A1 expression was completely normalized; expression of NKCC2 and NHE3 was significantly higher in Li rats (although not significantly different between Li+Sil rats and Li rats); and P-ENaC protein expression was unaltered in all groups. Sildenafil treatment completely reversed the lithium-induced increase in renal vascular resistance. In conclusion, sildenafil treatment of lithium-induced nephrogenic diabetes insipidus (NDI) improves polyuria, increases urinary osmolality, and decreases free water clearance via upregulation of renal AQP2 and UT-A1. Sildenafil treatment could be beneficial in patients with lithium-induced NDI.

Introdução e objetivos: A ejaculação precoce é uma forma de disfunção sexual presente em 25,8% dos homens brasileiros. O objetivo do presente estudo é avaliar se a associação de tadalafila, um inibidor da fosfodiesterase-5 e fluoxetina, um inibidor da recaptação da serotonina em uma apresentação de liberação lenta, ambos tomados uma vez por semana, pode prolongar o tempo de latência da ejaculação em homens com ejaculação precoce. Pacientes e Métodos: Sessenta pacientes com ejaculação precoce e sem disfunção erétil foram avaliados. A idade média foi 45,5 anos de idade (desvio padrão +/- 9,6). O tempo médio de ejaculação antes do início do tratamento era 51,3 segundos (desvio padrão +/- 23 segundos) e não foi estatisticamente significativo entre os grupos (p=0,805). Foram distribuídos de forma aleatória e duplo-cega em 4 grupos, conforme a medicação recebida: (1) fluoxetina 90 mg e placebo, (2) tadalafila 20 mg e fluoxetina 90 mg, (3) tadalafila 20 mg e placebo, e (4) placebo com placebo. Antes de iniciar qualquer medicamento, os pacientes anotaram o tempo de latência para ejaculação com um mesmo cronômetro uma vez por semana, durante 3 semanas. À partir do início do uso dos medicamentos, os pacientes cronometraram o tempo em nove ocasiões, uma vez por semana. Foi usado fluoxetina 90 mg ou placebo semanalmente e tadalafila 20 mg ou placebo em um intervalo de até 36 horas da presumida relação sexual com parceira heterossexual regular. Os pacientes foram prospectivamente seguidos a cada 3 semanas durante 12 semanas. Resultados: A comparação dos grupos com análise de variância (ANOVA) unidirecional demonstrou diferença estatisticamente significativa no tempo de ejaculação após tratamento (p<0,001). O maior aumento em relação ao tempo basal foi observado no grupo que associou tadalafila 20 mg com fluoxetina 90 mg semanalmente (p<0,001). Reações adversas foram observadas, tendo sido toleradas e equivalentes entre os grupos usando princípio ativo. Conclusão: Tadalafila 20 mg utilizada em um período de 36 horas de atividade sexual associado com fluoxetina 90 mg de liberação lenta usada semanalmente, significativamente aumentou o tempo de latência de ejaculação em homens com ejaculação precoce, quando comparados com cada droga usada isoladamente, beneficiando esses pacientes sem a necessidade do uso diário de medicamentos.<br>Introduction and Objectives: Premature ejaculation is a sexual disorder present in 25.8% of brazilian men. The aim of the present study is to evaluate if the association of tadalafil, a phosphodiesterase-5 inhibitor and fluoxetine, a selective serotonin reuptake inhibitor in a slow release presentation, both taken once a week, can prolong the intravaginal ejaculatory latency time (IELT) in men with premature ejaculation. Methods: Sixty patients with premature ejaculation and no erectile dysfunction were enrolled in the protocol. Mean age was 45.5 years (range 24 - 64 years, standard deviation +/- 9.6). They were randomly assigned in a double-blind manner into 4 groups to use the medications: (1) fluoxetine 90 mg and placebo, (2) tadalafil 20 mg and fluoxetine 90 mg, (3) tadalafil 20 mg and placebo, and (4) two different placebo capsules. Before starting any medication, each individual timed the IELT with a given stopwatch in 3 different days, and likewise weekly during the treatment period. Mean IELT before starting treatment was 51.3 seconds (sd: +/- 23 seconds), and was not different between groups (p=0.805). They took fluoxetine 90 mg or placebo once a week, and tadalafil 20 mg or placebo in a 36-hour frame of intended sexual intercourse with a regular heterosexual partner. Patients were prospectively followed every 3 weeks during a 12-week interval. Results: Comparison between groups with oneway ANOVA demonstrated a statistically significant difference in post-treatment IELT (p<0.001). The greatest increase in time from baseline IELT was observed in patients in the tadalafil plus fluoxetine group (p<0.001). Side effects were observed and tolerated, being equivalent in groups using active drugs. Conclusion: Tadalafil 20 mg taken in a 36-hour window for sexual intercourse associated with fluoxetine 90 mg in a slow release form taken weekly, significantly increased the intravaginal ejaculatory latency time from baseline in men with premature ejaculation, when compared to either drug taken solely, benefiting patients without the need to be medicated on a daily basis.

Submitted by Carlos Alberto Arcaro Filho (carlos_arcaro@hotmail.com) on 2018-07-13T23:08:25Z No. of bitstreams: 1 Tese Final - Carlos Alberto Arcaro Filho.pdf: 7378512 bytes, checksum: cb295c066a7be41be3508e2daf64d24f (MD5)<br>Approved for entry into archive by Maria Irani Coito null (irani@fcfar.unesp.br) on 2018-07-16T13:17:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 arcarofilho_ca_dr_arafcf_int.pdf: 7378512 bytes, checksum: cb295c066a7be41be3508e2daf64d24f (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-07-16T13:17:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arcarofilho_ca_dr_arafcf_int.pdf: 7378512 bytes, checksum: cb295c066a7be41be3508e2daf64d24f (MD5) Previous issue date: 2018-04-27<br>Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)<br>Considerando os avanços no conhecimento acerca dos mecanismos que controlam o metabolismo de proteínas na musculatura esquelética que permitiram a busca por novas opções para o tratamento das atrofias musculares, o presente estudo teve como objetivo a compreensão do potencial antiproteolítico de inibidores de fosfodiesterase, PDE (pentoxifilina, inibidor não-seletivo de PDE; rolipram, inibidor seletivo de PDE4) em músculos esqueléticos de ratos submetidos à atrofia muscular devido à insuficiência insulínica (diabetes mellitus experimental), com ênfase na elucidação da participação de componentes da sinalização do AMP cíclico (AMPc) nesta resposta. Ratos normais e diabéticos (60 mg/kg de estreptozotocina, administração intravenosa) foram tratados com salina (NS e DS) ou com 2 mg/kg de rolipram (NROL e DROL), ou com 25 mg/kg de pentoxifilina (NPTX e DPTX) durante 3 dias, por via intraperitoneal. Após três dias de tratamento, músculos soleus e extensor digitorum longus (EDL) foram removidos, pesados, congelados e processados para diversas análises: (i) conteúdo de AMPc (ensaio imunoenzimático); (ii) atividades das proteases proteassoma, calpaínas e caspase-3 (uso de substratos específicos fluorigênicos); (iii) níveis proteicos e/ou níveis de fosforilação de componentes das vias proteolíticas, efetores intracelulares sinalizatórios e fatores de transcrição (Western blotting); (iv) determinação dos níveis séricos de insulina e citocinas pró-inflamatórias. Foram realizados experimentos ex-vivo, para verificar a ação direta dos fármacos no controle da proteólise muscular e ativação de efetores intracelulares, via incubações dos músculos na presença de rolipram ou de agonistas de EPAC (Exchange protein directly activated by cAMP) e de PKA (proteína quinase dependente de AMPc), proteínas efetoras ativadas pelo AMPc. Também foram realizados experimentos no Laboratório do Prof. Dr. Marco Sandri, no Venetian Institute of Molecular Medicine, Padova, Itália, para a avaliação do papel de PDE4D no controle do processo autofágico-lisossomal em músculos esqueléticos de camundongos jejuados. Os tratamentos de animais diabéticos com rolipram (DROL) ou com pentoxifilina (DPTX) promoveram uma redução nas atividades do proteassoma e calpaínas em soleus e EDL, bem como nos níveis de componentes-chave do sistema proteolítico ubiquitina-proteassoma (MuRF-1, atrogin-1, conjugados poliubiquitinados), e aumento nos níveis de calpastatina (inibidor das calpaínas). Interesante ressaltar que o grupo DROL apresentou redução na atividade e níveis proteicos de caspase-3, em ambos os músculos, enquanto que o grupo DPTX apenas em músculos EDL. Contribuindo com a redução observada na atividade de caspase-3, houve uma redução nos níveis de Bax (proteína pró-apoptótica) e aumento nos níveis de Bcl-2 (proteína anti-apoptótica) em ambos os músculos de animais DROL. Animais diabéticos tratados com salina (DS) apresentaram aumento nas atividades das três proteases, bem como nos níveis de componentes participantes destes processos proteolíticos. Animais normais e diabéticos tratados com salina (NS e DS) apresentaram níveis de AMPc basais e semelhantes entre si, tanto em soleus quanto em EDL, enquanto que os tratamentos de ratos normais e diabéticos com pentoxifilina (NPTX e DPTX) ou rolipram (NROL e DROL) promoveram aumentos de AMPc, em ambos os músculos. Um dos mecanismos que podem estar envolvidos na inibição da proteólise muscular após aumentos nas concentrações de AMPc envolve a proteína EPAC, responsável por integrar a sinalização do AMPc e a sinalização insulínica via ativação da quinase AKT. Animais diabéticos tratados com pentoxifilina ou com rolipram apresentaram aumento nos níveis proteicos de EPAC 1 e na fosforilação de AKT, quando comparados ao grupo DS. Observamos também um aumento na fosforilação inibitória de fatores de transcrição FoxO 1 e 3a em ambos os músculos de animais DROL. Podemos sugerir que parte das ações de rolipram que culminaram em ativação de AKT e inibição de FoxO na musculatura esquelética possam estar associadas aos aumentos observados nos níveis circulantes de insulina em animais DROL. Investigamos, apenas nos animais tratados com rolipram, a possibilidade de participação da proteína PKA no controle da proteólise muscular. Em animais DROL houve ativação da PKA, verificada tanto pelo aumento na fosforilação de substratos de PKA, bem como do fator de transcrição CREB, em soleus e EDL. Vale destacar que animais DS apresentaram níveis reduzidos de p-CREB e de substratos fosforilados por PKA em soleus e EDL. Animais diabéticos tratados com os inibidores de PDE apresentaram uma diminuição de citocinas pró-inflamatórias séricas (TNF-, PTX e ROL; IL-1, ROL) e aumento nos níveis de insulina sérica (ROL) em relação aos animais DS. Nos estudos ex vivo, as incubações de músculos soleus e EDL com rolipram levaram a uma redução da proteólise total, bem como aumento na fosforilação de substratos de PKA e de AKT. Músculos soleus e EDL incubados com agonistas de EPAC apresentaram aumento na fosforilação de AKT, enquanto que a incubação com agonista de PKA promoveu aumento na fosforilação dos substratos de PKA (em ambos os músculos) e aumento na fosforilação de AKT (apenas em EDL), quando comparados aos músculos incubados na ausência do fármaco. Nos estudos para compreensão do papel de PDE4D no controle do processo autofágico-lisossomal, observou-se que o silenciamento gênico da PDE4D em músculos tibialis anterior promoveu uma preservação da massa muscular e da área da fibra em animais jejuados, quando comparados ao músculo controle. Músculos flexor digitorium brevis, silenciados para PDE4D, apresentaram diminuição na expressão de proteínas-chave do processo autofágico-lisossomal, tais como LC3 e p62. Estes resultados evidenciam os mecanismos que podem estar envolvidos na ação direta de inibidores de PDE no controle do metabolismo proteico muscular esquelético, via ativação de duas vias dependentes de AMPc: (i) a via PKA/CREB, que pode participar do controle da transcrição de Bcl-2 e calpastatina, bem como na inativação direta de caspases, inibindo assim os processos proteolíticos dependentes de caspase-3 e calpaínas, (ii) a via EPAC/AKT, via fosforilação e inibição de FoxO 1 e 3A, regulando a expressão dos atrogenes (MuRF-1 e atrogin-1) e promovendo uma diminuição na atividade do sistema ubiquitina-proteassoma. Além disso, o tratamento com inibidores de PDE diminuem o processo inflamatório e aumentam os níveis circulantes de insulina, ações que podem contribuir para os efeitos antiproteolíticos. Evidências iniciais também sugerem que PDE4D participa no controle do sistema autofágico-lisossomal na musculatura esquelética. Todos estes resultados indicam que PDE participam no controle de processos proteolíticos, portanto inibidores de PDE emergem como uma opção interessante na ativação da sinalização do AMPc na musculatura esquelética, com vistas à utilização futura no tratamento de quadros de perda de massa muscular durante situações de atrofia.<br>Considering the advances in the knowledge of the mechanisms controlling the protein metabolism in skeletal muscles that allowed the discover of new options for the treatment of muscle atrophies, the present study aimed to understand the antiproteolytic potential of phosphodiesterase (PDE) inhibitors (pentoxifylline, a non-selective PDE inhibitor; rolipram, a selective PDE 4 inhibitor), in skeletal muscles of rats submitted to muscle atrophy due to insulin insufficiency (experimental diabetes mellitus), with emphasis on the elucidation of the participation of cyclic AMP (cAMP) signaling components. Normal and diabetic rats (60 mg/kg streptozotocin, intravenous administration) were treated intraperitoneally with saline (NS and DS) or with 2 mg/kg rolipram (NROL and DROL) or with 25 mg/kg pentoxifylline (NPTX and DPTX) for 3 days. After three days of treatments, soleus and extensor digitorum longus (EDL) muscles were removed, weighed, frozen and processed for several analyzes: (i) cAMP content; (ii) activities of proteasome, calpain and caspase-3 (use of specific fluorigenic substrates); (iii) protein levels and/or phosphorylation levels of components of proteolytic pathways, intracellular signaling effectors and transcription factors (Western blotting); (iv) determination of serum insulin and proinflammatory cytokines levels. Ex vivo experiments were performed to verify the direct action of the drugs in the control of muscle proteolysis and activation of intracellular effectors, via muscle incubations in the presence of rolipram or agonists of EPAC (Exchange protein directly activated by cAMP) and PKA (cAMP-dependent protein kinase), intracellular effectors activated by cAMP. Experiments were also carried out in the Laboratory of Prof. Dr. Marco Sandri at the Venetian Institute of Molecular Medicine, Padova, Italy, for the evaluation of the role of PDE4D in controlling the autophagic-lysosomal process in skeletal muscles of starved mice. Treatments of diabetic animals with rolipram (DROL) or pentoxifylline (DPTX) promoted a reduction in the activities of proteasome and calpain in soleus and EDL, as well as reduced the levels of key components of the ubiquitin-proteasome system (MuRF-1, atrogin-1, polyubiquitinated conjugates), and increased the levels of calpastatin (calpain inhibitor). Interestingly, DROL rats showed a reduction in the activity and in the protein levels of caspase-3 in both muscles, whereas DPTX rat had reductions only in EDL muscles. Contributing to the reduction in caspase-3 activity, it was observed a reduction in the content of Bax (pro-apoptotic protein) and an increase of Bcl-2 (anti-apoptotic protein) in both muscles of DROL rats. Diabetic animals treated with saline (DS) showed an increase in the activities of the three proteases, as well as increases in the levels of components belonging to these proteolytic processes. Normal and diabetic animals treated with saline (NS and DS) had basal and similar levels of cAMP in both soleus and EDL, whereas the treatments of normal and diabetic rats with pentoxifylline (NPTX and DPTX) or with rolipram (NROL and DROL) promoted increases in cAMP in both muscles. One of the mechanisms that may be involved in the muscle proteolysis inhibition after increases in cAMP involves the EPAC protein, responsible for integrating the cAMP and the insulin signaling pathways via AKT activation. Diabetic animals treated with pentoxifylline or with rolipram showed an increase in the protein levels of EPAC 1 and in the phosphorylation of AKT, when compared with the DS group. We also observed an increase in the phosphorylation (inhibitory) of FoxO 1 and 3a in both muscles of DROL rats. It can be suggested that part of the rolipram actions causing AKT activation and FoxO inhibition in skeletal muscles may be associated with the increases in the circulating levels of insulin observed in DROL animals. It was investigated, only in animals treated with rolipram, the possible involvement of PKA in the control of muscle proteolysis. DROL rats had activation of PKA, verified both by the increase in the phosphorylation of PKA substrates, as well as in the phophorylation of the transcription factor CREB, in soleus and EDL. DS rats had decreased levels of p-CREB and of the PKA substrates, in soleus and EDL. Diabetic animals treated with PDE inhibitors showed a decrease in serum proinflammatory cytokines (TNF-, PTX and ROL; IL-1, ROL) when compared with DS. In ex vivo studies, incubations of soleus and EDL with rolipram caused a reduction of the total proteolysis as well as an increase in the phosphorylation of PKA substrates and and of AKT. Soleus and EDL muscles incubated with EPAC agonist showed increased in the AKT phosphorylation, whereas incubation with PKA agonist promoted an increase in the phosphorylation of PKA substrates (in both muscles) and and increase in the AKT phosphorylation (EDL), when compared with muscles incubated in the absence of the drugs. In studies to understand the role of PDE4D in the control of the autophagic-lysosomal process, it was observed that the PDE4D gene silencing in anterior tibialis muscles caused a preservation of the muscle mass and fiber area in fasted animals when compared with control muscle. Flexor digitorium brevis muscles, silenced for PDE4D, showed a decreased expression of key proteins of the autophagic-lysosomal process, such as LC3 and p62. These results suggested the mechanisms that may be involved in the direct action of PDE inhibitors in the control of skeletal muscle protein metabolism, through activation of two cAMP-dependent pathways: (i) the PKA/CREB pathway, which may participate in transcriptional control of Bcl-2 and calpastatin, as well as causing direct inactivation of caspases, thus inhibiting the proteolytic processes dependent on caspase-3 and calpains, (ii) the EPAC/AKT pathway, via phosphorylation and inhibition of FoxO 1 and 3a factors, regulating the expression of atrogenes (MuRF-1 and atrogin-1) and promoting a decrease in activity of ubiquitin-proteasome system. Treatments with PDE inhibitors also decreased the inflammatory process and increased the circulating linsulin levels, which may be contributing to the antiproteolytic responses. Initial evidence also suggests that PDE4D participates in the control of the autophagy-lysosomal system in skeletal muscles. All these results indicate that PDE participate in the control of proteolytic processes, therefore PDE inhibitors emerge as an interesting option to activate the cAMP signaling in the skeletal muscles, which may be used in the future in treatments muscle mass loss during atrophy situations.<br>FAPESP: Processo 2013/18861-2<br>FAPESP: Processo 2014/12202-0<br>FAPESP: Processo 2017/02348-5

Orientador: Edson Antunes<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade ce Ciencias Medicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-13T10:46:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pena_ClesioBorges_M.pdf: 779579 bytes, checksum: aeca20777087c88ff1ca05b3acc4316c (MD5) Previous issue date: 2009<br>Resumo: A ereção peniana envolve a interação da estimulação neural do músculo liso do corpo cavernoso bem como liberação neuro-humoral de fatores contráteis e relaxantes do endotélio. A cascata de sinalização óxido nítrico (NO)/(GMPc) é o evento mais importante e efetivo no mecanismo de ereção peniana. Nesta última década, diversos inibidores de fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) foram desenvolvidos e aprovados para o tratamento da disfunção erétil. Estes fármacos atuam inibindo a ação da PDE5 sobre o GMPc, que modula respostas fisiológicas em vários tecidos, como o relaxamento do músculo liso do corpo cavernoso. Dentre os inibidores de PDE5, são atualmente comercializados o sildenafil, tadalafil, vardenafil e o carbonato de lodenafil, sendo este último sintetizado no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram: 1. Avaliar a eficácia do carbonato de lodenafil na função erétil de ratos, usando a técnica de pressão intracavernosa (ICP); 2. Avaliar o possível sinergismo entre o treinamento físico e o inibidor de PDE5 carbonato de lodenafil; e 3. Avaliar o efeito do carbonato de lodenafil, isoladamente, ou em associação com o treinamento físico na ICP de ratos submetidos (ou não) ao tratamento crônico com L-NAME. Ratos Wistar machos foram anestesiados com uretana (1,2 g/ Kg) por via intraperitonial. A seguir foi realizada uma traqueostomia para facilitar a respiração do animal, e a artéria carótida foi canulada para o monitoramento contínuo da pressão arterial média (MAP). Uma cânula provida de agulha foi inserida no corpo cavernoso esquerdo para registro da ICP, usando-se transdutores de pressão. A cavidade abdominal foi aberta expondo o nervo cavernoso esquerdo, localizado na região dorso-lateral da próstata. Um eletrodo bipolar de platina conectado a um estimulador foi posicionado sobre o nervo cavernoso. Estimulações elétricas do nervo cavernoso (pulso de 1 ms, 45 s, 6 V) a diferentes freqüências (2, 4, 6, 8 e 10 Hz) foram aplicadas. As alterações de pressão foram registradas em sistema PowerLab de aquisição de dados. A administração da droga foi realizada pela veia jugular. O treinamento físico teve duração de oito semanas, em sessões de uma hora por dia, cinco dias por semana. O grupo que recebeu L-NAME fez um treinamento físico preventivo de quatro semanas, e no início da quinta semana o L-NAME passou a ser administrado na dose aproximada de 10 mg/rato/dia, durante 4 semanas. Observamos que o treinamento físico em animais normotensos não alterou a pressão arterial média nem a pressão intracavernosa. O tratamento crônico com L-NAME aumentou a pressão arterial média nos animais sedentários. No entanto, este aumento foi atenuado nos animais submetidos ao treinamento físico. O L-NAME aboliu a resposta erétil (valores de ICP) nos animais sedentários. O treinamento físico não foi capaz de prevenir ou atenuar a queda da pressão intracavernosa induzida pelo L-NAME. O carbonato de lodenafil se mostrou eficaz em promover aumento da pressão intracavernosa tanto em animais sedentários bem como em treinados, no entanto, não houve sinergismo entre o treinamento físico e o carbonato de lodenafil. Adicionalmente, a associação entre treinamento físico e carbonato de lodenafil não foi eficaz em restaurar os valores de ICP em animais tratados com L-NAME.<br>Abstract: Penile erection involves an interaction between neural stimulation of the corpus cavernosum smooth muscle and neurohumoral contractile and relaxing factors released from the endothelium. The nitric oxide (NO)/cGMP pathway is the most important and effective mechanism of penile erection. In the last decade, phosphodiesterase 5 (PDE5) inhibitors were developed and approved for treating erectile dysfunction. These compounds inhibit the PDE5, which deactivates the cGMP, responsible by several physiological responses in many tissues, such as the relaxation of the corpus cavernosum smooth muscle. To date, 4 PDE5 inhibitors are commercially available, sildenafil, tadalafil, vardenafil and lodenafil carbonate, the last one being synthesized in Brazil. The aim of this work was: 1) to evaluate the efficacy of lodenafil carbonate in rat erectile function, measured by the intracavernous pressure (ICP); 2) to evaluate whether the erectile responses of lodenafil carbonate are potentiated in exercised rats; and 3) to evaluate the effects of lodenafil carbonate, only, or associated to physical exercise in the ICP, in rats submitted (or not) to chronic treatment with L-NAME. Male Wistar rats were anesthetized with urethane (1.2 g/Kg, i.p.). It was performed a tracheotomy to allow the animal to breath, and the carotid artery was cannulated to continuously measure the mean arterial pressure (MAP). A needle coupled to a cannula was inserted in the left corpus cavernosum to measure ICP. The abdominal cavity was open and the cavernous nerve was exposed. A platinum bipolar electrode was placed on the cavernous nerve and connected to an electric stimulator. Electrical field stimulation of the cavernous nerve (pulses of 1 ms, 45 s, 6 V) under different frequencies (2, 4, 6, 8 e 10 Hz) were applied. Changes in the MAP and ICP were registered in a Powerlab¿ data acquisition system. Drugs were administered via jugular vein. The physical training program consisted in 60 min/day of running, 5 days/week and lasted eight weeks. In the group exercised which received L-NAME (10 mg/rat/day), LNAME administration started after the fourth week of training, during 4 weeks further. We observed that the physical training did not alter MAP and ICP in normotensive rats. Chronic L-NAME administration increased the MAP in sedentary rats. However, this increase was attenuated in trained rats. L-NAME administration blunted the increase in the ICP in sedentary rats and exercise was not able to prevent or attenuate this decrease in the ICP induced by L-NAME. Lodenafil carbonate was efficient in promote an increase in the ICP in both sedentary and trained animal. However, there was no synergism between lodenafil carbonate and exercise in producing increase in the ICP. Additionally, association between exercise and lodenafil carbonate was not able to restore the ICP in L-NAMEtreated animal.<br>Mestrado<br>Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-10T06:11:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorenzetti_Raquel_D.pdf: 2089930 bytes, checksum: f6ed8b98e678ffdfc6051c645efc8b4b (MD5) Previous issue date: 2007<br>Resumo: No presente trabalho foi padronizado um novo método para a dosagem da atividade de fosfodiesterase in vitro, por HPLC-MS/MS. Este novo método conseguiu apresentar exatidão, precisão, sensibilidade e rapidez nas análises; monitorando os nucleotídeos (AMP, GMP, AMPc e GMPc). O desenvolvimento de novos fármacos derivados de um protótipo aponta para a obtenção de moléculas com um melhor perfil farmacocinético ou uma melhor relação estrutura-atividade. Atualmente o sildenafil é considerado o principal fármaco para o tratamento de disfunção erétil. Neste trabalho, avaliaram-se novos compostos denominados análogos de sildenafil (carbonato de lodenafil, dímero uréia e dímero uretana). Os análogos foram analisados quanto à atividade em PDE5 e agregação plaquetária humana, in vitro. Foi determinada a estabilidade destes compostos, em meio ácido e plasma humano, in vitro, além de seus possíveis metabólitos em microssomas e hepatócitos de rato in vitro, e os seus parâmetros farmacocinéticos via intravenosa e oral, em cão, in vivo. Os resultados mostraram que os análogos de sildenafil inibem a atividade de PDE e não inibem a agregação plaquetária do mesmo modo que o sildenafil in vitro, no entanto potencializam a ação do doador de NO (SNP). Os análogos de sildenafil foram estáveis em meio ácido e em plasma humano. No ensaio de metabolização, os dímeros uréia e uretana não foram metabolizados, entretanto o carbonato de lodenafil foi metabolizado principalmente em lodenafil, in vitro. O carbonato de lodenafil é rapidamente biotransformado em lodenafil, após administração v.i. e v.o. em cão. Concluiu-se que este trabalho apresenta um novo método de dosagem de PDEs e uma nova perspectiva terapêutica para a disfunção erétil, representada pelo carbonato de lodenafil, o qual inibe concentração-dependente a atividade de PDE5<br>Abstract: In the present work a new method for the dosage of the activity of phosphodiesterase was standardized in vitro, for HPLC-MS/MS. This new method obtained to present exactness, precision, sensitivity, and rapidity in the analyses; monitoring the nucleotides (AMP, GMP, cAMP and cGMP). The development of new drug derived from an archetype points with respect to the molecule attainment with one better pharmacokinetic profile or one better relation structure-activity. Currently the sildenafil is considered the main drug for the treatment of erectile dysfunction. In this work, we evaluate new analogous called composites of sildenafil (carbonate of lodenafil, dimer urea and dimer uretana). The analogous ones had been analyzed how much the activity in PDE5 and platelet aggregation human being, in vitro. The stability of these composites was determined, in human acid way and plasma, in vitro, beyond its possible metabolites in microsomes and hepatocytes of rat in vitro, and its pharmacokinetic profile after intravenous and oral, in dog, in vivo. The results had shown that the analogous of sildenafil inhibit the activity of PDE and they do not inhibit the platelet aggregation in a similar way that the sildenafil in vitro, however potencializam the action of the giver of NO (SNP). The analogous ones of sildenafil are presented steady in human acid way and plasma. In the metabolization assay, metabolization of dimer urea and dimer uretana was not observed, however the lodenafil carbonate was metabolizado mainly in lodenafil, in vitro. The lodenafil carbonate quickly is biotransformation in lodenafil, after administration v.i. and v.o. in dog. We conclude that this work presents a new method for analyze activity of PDEs and a new therapeutically perspective for the erectile dysfunction, represented for lodenafil carbonate, which inhibits concentration-dependent the activity of PDE5<br>Doutorado<br>Doutor em Farmacologia

Orientador: Heitor Moreno Junior<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-22T03:24:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_RodrigoCardoso_D.pdf: 1300897 bytes, checksum: 316736a36c07e5e655cecc5c8f664bdd (MD5) Previous issue date: 2013<br>Resumo: Introdução: A disfunção diastólica do ventrículo esquerdo (DDVE) e a hipertrofia ventricular são consideradas marcadores frequentes para lesão cardíaca e fatores de risco de progressão para insuficiência cardíaca congestiva (ICC), especialmente em pacientes com hipertensão arterial resistente (HAR). A redução dos níveis pressóricos arteriais pode melhorar a disfunção diastólica do ventrículo esquerdo e os sintomas de insuficiência cardíaca. Entretanto, frequentemente esta redução não é atingida nos pacientes com HAR. Inibidores da fosfodiesterase 5 (PDE5) apresentam efeitos vasodilatadores discretos e, recentemente, se demonstrou que a administração de sildenafil a ratos hipertensos melhorou a disfunção diastólica do ventrículo esquerdo, através de ação direta sobre os miócitos cardíacos, evidenciando a presença de PDE5 neste tecido. Objetivo: Avaliar se o uso de um inibidor de PDE5 de longa duração (tadalafil) melhora a DDVE em pacientes com HAR de maneira independente de outros mecanismos secundários. Casuística e Métodos: Realizou-se um estudo intervencionista, cego, controlado por placebo, cruzado de uma via, incluindo 19 pacientes com HAR e DDVE. Inicialmente, receberam por via oral uma dose diária de placebo por 14 dias, com realização de medidas da pressão arterial de consultório e MAPA, avaliação da função endotelial (técnica de FMD), ecocardiograma e medidas de concentrações sanguíneas de BNP-32, GMPc e nitrito, antes e após o período de administração. Posteriormente, repetimos o mesmo procedimento, mas substituindo o placebo por tadalafil 20mg por dia. Ao final, as variáveis obtidas foram comparadas antes e após os usos de tadalafil e placebo, utilizando-se o método t de student pareado, com ?<0,05. Resultados: os pacientes apresentaram melhora da DDVE, demonstrada pela velocidade da onda E de 67,8±18,3cm/s para 77,8±16,0cm/s (p=0,025); relação E/A de 0,9±0,3 para 1,08±0,3 (p=0,01); tempo de desaceleração da onda E de 234,1±46,0ms para 194,4±43,3ms (p<0,01); tempo de relaxamento isovolumétrico de 128,7±17,6ms para 96,8±26,9ms (p<0,01); velocidade de onda E' lateral de 7,7±2,1cm/s para 8,8±2,8cm/s (p=0,025); velocidade de onda S' septal de 6,3±1,4cm/s para 7,7±1,7cm/s (p<0,01) e velocidade de onda S' lateral de 7,5±2,3cm/s para 8,3±2,2cm/s (p=0,014) (todas as variáveis expressas como em média e desvio-padrão). Houve, também, redução nos níveis de BNP-32 de 143±33,3 para 119,3±31,3 pg/mL e aumento no GMPc de 62,4±32,2 para 112,6±75,3pmol/mL. A concentração de nitrito foi semelhante com o uso de placebo e tadalafil. Em relação às medidas de pressão arterial, independentemente do método, também apresentam valores semelhantes antes e após o uso do fármaco, assim como a função endotelial. Os pacientes sob ação do placebo, não mostraram alterações em nenhuma das variáveis avaliadas. Conclusões: Os resultados sugerem que o uso de tadalafil melhora o relaxamento do ventrículo esquerdo em pacientes com HAR, independente da pressão arterial e da função endotelial, podendo constituir um importante tratamento adjunto em pacientes hipertensos sintomáticos com DDVE<br>Abstract: Introduction: Left ventricular hypertrophy and diastolic dysfunction (LVDD) remain frequent markers of cardiac damage and risk of progression to symptomatic heart failure (HF), especially in resistant hypertension (RHTN). Lowering BP may improve diastolic function and relieve HF symptoms; however, very often this target is not achieved in RHTN subjects. PDE-5 inhibitors have mild systemic vasodilatory effects, and recently, we demonstrated that administration of sildenafil in hypertensive rats improves LVDD, acting in cardiac myocytes with PDE5 expression in this tissue. Objective: To analyze if a long-acting PDE-5 inhibitor (tadalafil) may be clinically useful for improving LVDD in RHTN patients. Methods: We developed a single- blinded, placebo-controlled, one-way crossover, interventional study that enrolled 19 patients with RHTN and LVDD. At first, subjects were given a placebo daily oral dosage, for 2 weeks and they were submitted to blood pressure measurements (both ABPM and office), endothelial function (FMD) assessment, echocardiographic study and plasmatic BNP-32, cGMP and nitrite levels, before and after this 2-week period. Next, subjects were submitted to the same protocol receiving tadalafil (20 mg) orally instead of placebo. Variables were compared before and after placebo and tadalafil administration, using the paired student's t-test. The level of significance (?) accepted was less than 0.05. Results: Patients had an improvement in LVDD represented by changes in E-wave peak velocity from 67.8±18.3cm/s to 77.8±16.0cm/s (p=0.025), E/A ration from 0.9±0.3 to 1.08±0.3 (p=0.01), E wave deceleration time from 234.1±46.0ms to 194.4±43.3ms (p<0.001), isovolumic relaxation time from 128.7±17.6ms to 96.8±26.9ms (p<0.001), lateral E' wave velocity from 7.7±2.1cm/s to 8.8±2.8cm/s (p=0.025), septal S' wave velocity from 6.3±1.4cm/s to 7.7±1.7cm/s (p<0.01) and lateral S' wave velocity from 7.5±2.3cm/s to 8.3±2.2cm/s (p=0.014) (Values are expressed as mean ± standard deviation). We also noticed a decrease in BNP-32 levels from 143±33.3 to 119.3±31.3 pg/mL and an increase in cGMP levels from 62.4±32.2 to 112.6±75.3pmol/mL. No significant differences were detected in office and ABPM measurements, in endothelial function and nitrite levels. Conclusion: The current findings suggest that tadalafil enhances LV relaxation in resistant hypertensive patients and, despite its mild antihypertensive effect, may serve as an important adjunct to treat symptomatic hypertensive patients with evident LVDD<br>Doutorado<br>Farmacologia<br>Doutor em Farmacologia

A necessidade de buscar novos tratamento para a Insuficiência Cardíaca (IC) crônica levanta o questionamento da eficácia e segurança de drogas que não foram adequadamente testadas ou que ainda não tiveram sua eficácia aceita pela comunidade científica. O sildenafil é um vasodilatador com potencial eficácia na redução da pressão sistólica da artéria pulmonar (PSAP), mas com pequenos estudos e sem demonstração de impacto em desfechos duros. Os diuréticos de alça são utilizados rotineiramente em pacientes com IC sem sinais de congestão e tal prática não está recomendada nas diretrizes terapêuticas, desconhecemos sua eficácia e segurança neste cenário. No intuito de elucidar estas questões, foram desenvolvidos I) revisão sistemática com metanálise para estudo uso de sildenafil. II) revisão sistemática com metanálise para estudo uso de diurético de alça, III) Delineamento e execução em andamento de ensaio clínico randomizado multicêntrico testando a retirada de diurético de alça. I e II) Métodos e resultados: Ambas revisões sistemáticas foram realizadas no Pubmed, Embase e Cochrane, e termos relacionados à insuficiência cardíaca crônica diurético de alça e sildenafil foram utilizados, respectivamente. Após avaliação de texto completo, apenas estudos em humanos foram incluídos na metanálise. A droga sildenafil foi avaliada em 9 estudos randomizados contra placebo e demonstrou redução de hospitalização (RR 0.29, 95% C.I 0.11 to 0.78) e melhora progressiva em parâmetros funcionais e hemodinâmicos O uso de diurético de alça foi testado em 7 ensaios clínicos e não mostrou significância em piora da função renal, distúrbio eletrolítico e mudança de peso. III) Métodos e resultados: Em um estudo duplo-cego randomizado, de não inferioridade, multicêntrico compara-se o a segurança e tolerabilidade da retirada de furosemida de pacientes com IC crônica e estável com disfunção ventricular. Com início da coleta em setembro de 2015, até o momento 96 pacientes foram randomizados. Conclusão: Quanto ao sildenafil, já temos evidências que apontam para um efeito benéfico e progressivo na melhora da capacidade funcional, perfil hemodinâmico e redução de hospitalização em pacientes com IC com disfunção ventricular e pressão da artéria pulmonar elevada A recomendação para uso de diurético de alça em pacientes estáveis com IC permanece uma incógnita e o ensaio clínico em andamento nos trará uma resposta de importante impacto clínico na tomada de decisão para manutenção do uso de diurético.<br>The challenges and promises of new treatments for chronic heart failure (CHF) raises the question of the efficacy and safety of drugs that have not been properly tested or that have not yet had their efficacy accepted by the scientific community. Sildenafil is a vasodilator with potential efficacy in reducing pulmonary artery systolic pressure (PSAP), but with small studies and no demonstration of impact on hard outcomes. Routinely, Loop diuretics are used in patients with HF without signs of congestion and such practice is not recommended in the therapeutic guidelines, we do not know its efficacy and safety in this scenario. In order to elucidate these questions, I) systematic review with meta-analysis were developed to study the use of sildenafil. II) systematic review with meta-analysis to study the use of loop diuretics, III) Design and execution in progress of a multicenter randomized clinical trial testing for loop diuretic withdrawal. I and II) Methods and results: Both systematic reviews were performed in PubMed, Embase and Cochrane, and terms related to chronic diuretic heart failure of the loop and sildenafil were used, respectively. After full-text evaluation, only human studies were included in the meta-analysis. The drug sildenafil was evaluated in 9 randomized placebo-controlled studies and demonstrated a reduction in hospitalization (RR 0.29, 95% CI 0.11 to 0.78) and progressive improvement in functional and hemodynamic parameters. The use of a loop diuretic was tested in 7 clinical trials and did not show significant deterioration in renal function, electrolyte disturbance and weight change. III. METHODS AND RESULTS: In a double-blind randomized, non-inferiority, multicenter study, the safety and tolerability of furosemide withdrawal from patients with chronic and stable HF with ventricular dysfunction were compared. Randomization started at September 2015, to the moment 96 patients were randomized. CONCLUSION: Regarding sildenafil, we already have evidence of a beneficial and time-related effect on the improvement of functional capacity, hemodynamic profile and reduction of hospitalization in patients with HF with ventricular dysfunction and elevated pulmonary artery pressure. The recommendation for the use of a loop diuretic in stable patients with HF remains an unknown and the ongoing clinical trial will provide us with an important clinical impact response in the decision making to maintain the use of diuretics.

Introdução: A hipertensão arterial sistêmica (HA) pode estar associada à diminuição na produção e liberação do óxido nítrico derivado do endotélio (NO). O uso do sildenafil leva ao aumento de monofosfato de guanosina cíclica (GMPc), um importante mediador de NO. Contudo, pouco se sabe sobre os efeitos da inibição da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) na monitorização da pressão arterial 24-h (MAPA), pressão arterial durante exercício, noraepinefrina (Nor) e capacidade ao exercício, principalmente após transplante de coração (TX). Métodos: Nós estudamos 22 pacientes pós TX, os quais foram randomizados, tomando dose única de sildenafil (50mg) ou placebo (50mg), aproximadamente uma hora antes de iniciar o protocolo. No dia 1, os pacientes realizaram avaliação clínica, teste cardiopulmonar de caminhada de seis minutos (TES) seguido de teste de esforço cardiopulmonar (TE), Após o término dos testes em esteira, foi colocado o MAPA. Determinamos em repouso (rep), último minuto do TES (6) e pico do TE (Ex): FC (bpm) PAS e PAD (mmHg), VO2(ml/kg/min), Slope VE/VCO2, tempo de exercício (TE, min), distância (TES, Km) e Nor (pg/ml). No dia 2 o protocolo foi repetido, realizando-se o cross-over. Dezessete pacientes apresentavam HA. Resultados: (Pl e Sil respectivamente), Sil reduziu (p<0.05): PAS-rep(138±7 vs 122±18); PAD-rep(83±12 vs 78±12); PAS-6(156± 20 vs 137± 22); PAD-6(82±13 vs 77±14); PAS-Ex(155± 27vs 124±36); PAD-Ex(79±16 vs 66± 16); PAS 24-h(121±10 vs 114±9), PAD 24-h(80±6 vs 76±5), PAS vigília(122±11 vs 115±9), PAD vigília(81± 6 vs 76±5) e PAS noturna(119±12 vs 112±10), PAD noturna(78±7 vs 73±8); e aumentou Nor-repouso(483±165 vs 622±211). Sil não alterou rep, 6 e EX: FC, VO2 e Slope. Conclusão: O ciclo NO-cGMP parece desempenhar papel importante no controle da pressão arterial em TX. Sendo que, a inibição da PDE5 parece apresentar efeitos benéficos no controle da hipertensão arterial em TX, podendo ser utilizada concomitantemente a terapia anti-hipertensiva usual.<br>Background: Systemic hypertension (SH) can be associated with a decrease in endothelium-dependent nitric oxide (NO). Sildenafil determines increment in cyclic guanosine monophosphate (cGMP) that a mediator of NO. However, little is known about the effects of PDE5 inhibition on 24-hour ambulatory (ABP) and exercise blood pressure, noreprinephrine (Nor) and exercise capacity, specially after heart transplantation (HT). Methods: We studied 22 HT pts that on the 1st day underwent a cardiopulmonary (CP) self-controlled treadmill 6walk test(6) and, after, an ECG monitored CP treadmill maximal exercise test(Ex) within 60 and 90 min after oral Sildenafil (Sil,50mg) or placebo(Pl) given at random, and ABP. We determined at basal position(b), last min of 6 and the peak Ex the HR(bpm), SBP and DBP (mmHg), VO2(ml/kg/min), Slope VE/VCO2, exercise time(ET, min), distance(D, Km) and Nor(pg/ml). Also, after CP tests 24-h SBP and DBP were monitored. It was repeated on the 2nd day when the cross-over was done. Seventeen pts had SH. Results: (Pl and Sil respectively), Sil reduced (p<0.05): b- SBP(138±7 vs 122±18); b-DBP(83±12 vs 78±12); 6-SBP(156± 20 vs 137± 22); 6-DBP(82±13 vs 77±14); Ex-SBP(155± 27vs 124±36); Ex-DBP(79±16 vs 66± 16); 24-h SBP(121±10 vs 114±9) and DBP(80±6 vs 76±5), daytime SBP(122±11 vs 115±9) and DBP(81± 6 vs 76±5) and nighttime SBP(119±12 vs 112±10) and DBP(78±7 vs 73±8); and increase b-Nor(483±165 vs 622±211). Sil did not change in b, 6 and EX; HR, Nor, VO2 and Slope. Conclusion: NO-cGMP pathway seems to play a role in blood pressure control in HT. The PDE5 inhibition could have potential beneficial effects on hypertensive HT in addition to antihypertensive therapy.

Orientador: Gilberto De Nucci<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-22T19:42:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SantosFilho_HiltonOliveirados_D.pdf: 1622141 bytes, checksum: 5f817cf4a04ee643bdf7e261e5861691 (MD5) Previous issue date: 2013<br>Resumo: Carbonato de Lodenafila é um novo tipo de inibidor de fosfodiesterase 5 (PDE5) utilizado no tratamento da disfunção erétil. O presente estudo foi realizado para avaliar a segurança, tolerabilidade e farmacocinética do carbonato de lodenafila após a administração de doses orais únicas ascendentes (de 1 a 100 mg) a voluntários saudáveis do sexo masculino (n = 33). O estudo foi um estudo clínico fase I, aberto, de escalonamento de dose, utilizando a administração de doses orais únicas de carbonato de lodenafila. Carbonato de Lodenafila foi administrado sequencialmente escalonado em doses únicas de 1 mg a 100 mg com um período sem uso do medicamento (washout) de pelo menos 1 semana, entre cada dose. A progressão para a próxima dose foi permitida se após a avaliação dos exames clínicos, laboratoriais e Monitorização Ambulatorial da Pressão Arterial (MAPA), não demonstrassem alterações e eventos adversos sem relevância clínica. As amostras de sangue foram coletadas na pré-dose e em intervalos determinados e 24 horas após a administração. As amostras de plasma para a mensuração de carbonato lodenafila e lodenafila foram analisadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa. Não foram observados eventos adversos graves, e nenhum dos voluntários abandonou o estudo devido à intolerância. As medições do MAPA, exames clínicos e laboratoriais e ECG não revelaram alterações significativas mesmo em doses mais elevadas. Carbonato Lodenafila não foi detectado em qualquer amostra, indicando que ele atua como um pró-droga. Os parâmetros farmacocinéticos médios de lodenafila para tmax e t1 / 2 foram 1,6 (± 0,4) horas e 3,3 (± 1,1) horas, respectivamente. Este estudo demonstrou que o carbonato de lodenafila é bem tolerado e apresentou um bom perfil de segurança em voluntários saudáveis do sexo masculino<br>Abstract: Lodenafil carbonate is a new phosphodiesterase type 5 (PDE5) inhibitor used in treatment of erectile dysfunction. The present study was conducted to evaluate the safety, tolerability, and pharmacokinetics of lodenafil carbonate after administering ascending (1 to 100 mg) single oral doses to healthy male volunteers (n=33). The study was an open-label, dose-escalation, phase I clinical trial involving the administration of single oral doses of lodenafil carbonate. Lodenafil carbonate was administered sequentially, escalating in single doses of 1 mg to 100 mg with a washout period of at least 1 week between each dose. The progression to the next dose was allowed after clinical and laboratory exams, Ambulatory Monitoring of Arterial Pressure (AMAP) without relevant clinical modifications and adverse events without clinical relevancy. Blood samples were collected at pre-dose, determined intervals and 24h postdosing. Plasma samples for measurement of lodenafil carbonate and lodenafil were analyzed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry. No serious adverse events were observed, and none of the subjects discontinued the study due to intolerance. The AMAP measurements, clinical and laboratory exams and ECG revealed no significant changes even at higher doses. Lodenafil carbonate was not detected in any samples, indicating that it acts as a pro-drug. The mean lodenafil pharmacokinetic parameters for tmax and t1/2 were 1.6 (±0.4) hr and 3.3 (±1.1) hr, respectively. This study demonstrated that lodenafil carbonate was well tolerated and showed a good safety profile in healthy male volunteers<br>Doutorado<br>Clinica Medica<br>Doutor em Clínica Médica

Introdução: Vários são os fatores que alteram a atividade sexual de homens e mulheres. Com o envelhecimento observa-se aumento das queixas de desejo hipoativo feminino e de disfunção erétil. Visto que o homem e sua parceira constituem um sistema dinâmico, antes do advento dos inibidores da fosfodiesterase eles se adaptavam às condições disfuncionais do casal. A eficácia aliada a poucos efeitos colaterais e à facilidade de administração da sildenafila e, posteriormente, da vardenafila e tadalafila, revolucionou o tratamento da disfunção erétil. Por outro lado, até a presente data, a terapêutica medicamentosa com testosterona para o desejo sexual hipoativo de mulheres, ainda gera controvérsias. Objetivo: Avaliar o uso de androgênio, utilizado para tratamento das queixas de desejo sexual hipoativo em mulheres, comparando dois períodos, ou seja, pré e após o aparecimento iPDE 5. Os efeitos colaterais e as divergências em relação a este tratamento também serão analisados. Método: Foram selecionados estudos em inglês, português e espanhol, publicados entre 1988 e os dias atuais, ou seja, na década pré-advento dos inibidores da fosfodiesterase 5 e após. A busca dos artigos foi feita em periódicos indexados nas bases Lilacs, Cochrane, Embase e Medline/PubMed, utilizando-se os seguintes descritores e suas combinações: sexualidade (sexuality), desejo sexual hipoativo em mulheres (female hypoactive sexual desire disorder), testosterona (testosterone), terapia androgênica em mulheres (androgen therapy in women). Discussão: Embora haja evidência sobre a efetividade do tratamento com testosterona para desejo hipoativo em mulheres, este uso ainda gera muitas controvérsias. Resultados: O número de estudos randomizados sobre uso de testosterona para tratamento de DSH feminino aumentou de 10%, comparando o período compreendido entre 1988 e 1998, para 90% entre 1999 e 2012. Todos os estudos randomizados analisados demonstraram benefícios sobre a resposta sexual, melhorando a libido, a excitação e/ou o orgasmo. Porém, como tiveram seguimento por um período máximo de 24 semanas, os riscos dessa administração não foram esclarecidos. Conclusão: A partir de 1988, ou seja, após a liberação comercial dos inibidores da fosfodiesterase do tipo 5, para tratamento da disfunção erétil, houve um aumento significativo do número de pesquisas com a finalidade de avaliar o uso de testosterona em mulheres com desejo hipoativo. Porém, ainda são necessários estudos de longo prazo para que os riscos e os benefícios, desta administração, sejam esclarecidos<br>Introduction: There are several factors that alter the sexual activity of both men and women. With age, an increase in complaints about hypoactive feminine desire and erectile dysfunction can be observed. Since the man and his partner constitute a dynamic system, before the advent of phosphodiesterase inhibitors, they would adapt to the dysfunctional conditions of the couple. The efficacy with few collateral effects and the easy administration of sildenafil and later, vardenafil and tadalafil, has revolutionized the treatment of erectile dysfunction. On the other hand, until now, the drug therapy with testosterone for hypoactive sexual desire of women still generates controversies. Objective: Assess the use of androgen, used for treating complaints of hypoactive sexual desire in women, comparing two periods, that is, before and after the emergence of iPDE 5. Side effects and divergences regarding this treatment are also analyzed. Method: Studies in English, Portuguese and Spanish were selected, published between 1988 and the present, that is, in the decade before the advent of phosphodieterase 5 inhibitors and after this fact. The search for papers was made in indexed journals on Lilacs, Cochrane, Embase and Medline/PubMed data bases, using the following descriptors and their combinations: sexuality, female hypoactive sexual desire disorder, testosterone or androgen therapy in women. Discussion: Although there is evidence on the effectiveness of treatment with testosterone for hypoactive desire in women, this use still generates many controversies. Results: The number of randomized studies on the use of testosterone for the treatment of female HSD has increased 10%, comparing the period between 1988 and 1998, to 90% between 1999 and 2012. All randomized studies analyzed showed benefits on the sexual response, improving libido, excitation and/or orgasm. However, since they were followed for a maximum of 24 weeks, the risks of this dosage were not clarified. Conclusion: From 1988, that is, after the commercial release of phosphodiesterase type 5 inhibitors, for the treatment of erectile dysfunction, there was a significant increase in the number of papers with the purpose of evaluating the use of testosterone in women with hypoactive desire. However, there is the need of long-term studies in order to clarify the risks and benefits of this use

Orientador: Heitor Moreno Junior<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-06T19:55:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_SilviaElainedeSousaFerreiraCarvalhode_D.pdf: 6801672 bytes, checksum: d5d157af717b53ac33305c8ec554a2d0 (MD5) Previous issue date: 2005<br>Resumo: O óxido nítrico (NO) é um mediador biológico multifuncional que serve como molécula chave em muitos processos fisiopatológicos, sintetizado nas células endoteliais em resposta a estímulos fisiológicos ou patológicos. Sua síntese se dá a partir da clivagem do terminal nitrogênio-guanidina do aminoácido L-arginina, em uma reação catalizada pela enzima óxido nítrico sintase (NOS). Há três isoformas de NOS: a NOS endotelial (eNOS), a NOS neuronal (nNOS) e a NOS induzível (iNOS). A eNOS e a nNOS são isoformas expressas constitutivamente nas células endoteliais vasculares e nas células neuronais, respectivamente; e a iNOS que a forma induzível, expressa em células inflamatórias após a indução por citocinas e outros mediadores inflamatórios. Após sua síntese o NO se difunde para as células do músculo liso vascular ativando a enzima guanilato ciclase solúvel (GCs), que converte guanosina-tri-fostato (GTP) em guanosina-3¿,5¿-monofosfato cíclica (GMPc), um segundo mensageiro para seus diversos efeitos biológicos, dentre os quais o relaxamento da musculatura lisa vascular. A síntese de NO pode ser inibida por vários compostos análogos à L-arginina, como L-NMMA, L-NAA, L-NAME e L-NIO de forma dose-dependente. A inibição crônica da síntese de óxido nítrico pela administração crônica de L-NAME é um modelo complexo e bem estabelecido de hipertensão arterial e miocardiopatia hipertensiva. É caracterizado por elevação da pressão arterial (PA) de forma severa, redução na freqüência cardíaca, no fluxo coronário e débito cardíaco (DC), aumento da resistência vascular periférica total (RVPT), diminuição do relaxamento vascular e alterações na contratilidade cardíaca, hipertrofia cardíaca, aumento do tamanho cardiomiócito, remodelamento miocárdico e microvascular com fibrose perivascular, sendo que o índice peso cardíaco/peso corporal e peso ventricular esquerdo/peso corporal estão usualmente aumentados. As fosfodiesterases são enzimas que degradam os nucleotídeos cíclicos GMPc e AMPc nas suas formas inativas. São conhecidas 11 famílias de enzimas (PDE1 ¿ PDE11) que diferem com relação ao padrão distribuição, especificidade de substrato, regulação pelas PKs e proteínas ligantes. Estão envolvidas em diversos processos fisiológicos e patológicos, tais como ereção peniana, asma, hipertensão pulmonar, aterosclerose, insuficiência cardíaca e diabetes. Consequentemente, os inibidores seletivos de PDE são interessantes e promissores alvos farmacológicos. Os inibidores das PDEs inpedem a degradação do AMPc, GMPc, elevando seus níveis intracelulares. Esses inibidores mimetizam as estruturas do AMPc e GMPc, mas não são degradados. Sildenafil é um inibidor seletivo da PDE5 induzindo o e relaxamento do músculo vascular liso e têm sido utilizados com sucesso no tratamento da disfunção erétil. A base racional para este projeto é a hipótese de que o sildenafil, por inibir de forma seletiva a PDE5 e conseqüentemente aumentar a disponibilidade de GMPc, possa ter efeitos cardiovasculares benéficos na inibição crônica da síntese de NO que reduz os níveis de GMPc no músculo cardíaco e vascular. Para isso foram estudados 4 grupos experimentais divididos aleatoriamente em: CONTROLE, L-NAME, SILDENAFIL e SILDENAFIL + L-NAME, durante 8 semanas de tratamento. Analisamos as alterações hemodinâmicas através das medidas da pressão arterial média, débito cardíaco, freqüência cardíaca e resistência vascular. As análises histológicas foram feitas através de técnicas morfométricas para determinação do diâmetro de miócito, lesões miocárdicas e espessura da camada média vascular e análises imunohistológicas. Nossos resultados demonstraram que a administração crônica de sildenafil altera os padrões hemodinâmicos e histolólgicos do modelo de miocardiopatia hipertensiva induzida pela inibição da síntese de NO por L-NAME. A inibição da PDE5 restaurou parcialmente os padrões hemodinâmicos, avaliados através da PA, DC e RVPT, além de protege parcialmente o miocárdio e músculo vascular liso contra as lesões e remodelamento cardiovascular característicos deste modelo experimental. A biodisponibilidade de GMPc, nos animais do grupo L-NAME + sildenafil, foi totalmente restaurada após 8 semanas de tratamento e a expressão das enzimas PDE3 e PDE5 estavam modificadas no músculo vascular liso e nos discos intercalares dos miócitos. Dessa forma, concluimos que o sildenafil, através da inibição da PDE5, aumentando a biodisponibilidade do GMPc, resulta em um efeito cardioprotetor e antiproliferativo contra as alterações cardiovasculares descritas no modelo de miocardiopatia hipertensiva induzida pela inibição crônica da síntese de NO em ratos Wistar<br>Abstract: Many of the physiological responses to nitric oxide (NO) are mediated by cyclic 5'-guanosine monophosphate (cGMP), the intracellular levels of which are regulated by phosphodiesterase type 5 (PDE5). In situations of reduced NO formation, the inhibition of PDE5 by selective inhibitors such as sildenafil could be beneficial in restoring physiological functions by enhancing the intracellular levels of cGMP. In this study, we evaluated the effects of sildenafil on the hemodynamic and histological alterations induced by the chronic treatment of rats with Nw¿nitro-L¿arginine¿methyl ester (L-NAME). After 8 weeks of concomitant treatment with sildenafil and L-NAME, arterial blood pressure was significantly lower (P<0.05) than in L-NAME treated rats. The fall in blood pressure was associated with a slight reduction in the total peripheral vascular resistance (P<0.05). Sildenafil partially restored the decrease in cardiac output seen in L-NAME-treated rats. Morphologically, sildenafil reduced the total area of the myocardial lesions and attenuated the cardiomyocyte and vascular smooth muscle remodeling seen with L-NAME. These results show that sildenafil reversed the deleterious hemodynamic and morphological alterations associated with L-NAME-induced hypertension. This beneficial effect was probably mediated by an increase in cardiac and vascular cGMP levels as reflected in circulating plasma cGMP levels<br>Doutorado<br>Doutor em Farmacologia

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior<br>O objetivo do estudo foi verificar os efeitos do carbonato de lodenafil no processo de consolidaÃÃo Ãssea nos fÃmures de ratos reduzidos com fio de Kirshner. Os fatores vasculares sÃo extremamente importantes para a formaÃÃo do calo Ãsseo. O carbonato de lodenafil causa efeitos vasodilatadores, pertence ao grupo dos inibidores da fosfodiesterase seletiva para o tipo 5 (PDE5), enzima que hidrolisa monofosfato de guanosina cÃclico (GMPc). O GMPc induz o relaxamento da musculatura lisa, sendo utilizado no tratamento da disfunÃÃo erÃtil. Foram utilizados 36 ratos machos, adultos, da linhagem Wistar, com o peso mÃdio de 300g. Todos os animais foram submetidos a cirurgia em que era realizada a fratura da diÃfise femoral com uma guilhotina romba. Os animais foram divididos em 2 grupos: o grupo lodenafil, que recebeu, via oral, doses diÃrias de carbonato de lodenafil (10mg/kg) e o grupo controle. Os animais foram sacrificados com 7, 14 e 28 dias de pÃs-operatÃrio. Houve duas mortes, dois falsos trajetos do fio e em trÃs animais nÃo foi estabelecida a fratura. Foram realizados estudo radiogrÃfico com filme de mamÃgrafo para analisar a densidade Ãptica e Ãrea do calo Ãsseo, medida em mm e estudo histolÃgico, utilizando amostras coradas com picrosirius red sob a luz poralizada do microscÃpio, para quantificar a formaÃÃo de colÃgeno tipo I e tipo III na regiÃo cortical prÃxima a fratura e no calo Ãsseo. A densidade de colÃgeno tipo I na regiÃo cortical do fÃmur prÃximo à fratura verificada no grupo lodenafil foi significantemente menor que a observada no grupo controle com 28 dias de consolidaÃÃo Ãssea (**P = 0,0028). Os resultados encontrados nÃo sÃo consistentes o suficiente para afirmar que este fÃrmaco exerce algum efeito na consolidaÃÃo Ãssea. Verificou-se que o Carbonato de lodenafil nÃo influenciou no processo de consolidaÃÃo Ãssea nos fÃmures de ratos reduzidos com fio de Kirshner.<br>The study was to investigate the effects of Lodenafil Carbonate in the process of bone healing in femurs of rats with reduced KirshnerÂs wire. The vascular factors are extremely important for the formation of callus. Lodenafil Carbonate cause vasodilatory effects, belongs to the group of selective phosphodiesterase type 5(PDE5) inhibitors, that enzyme inhibits cyclic guanosine monophosphate (GMPc) and relaxation of smooth muscles and are used to treat erectile dysfunction. It used 36 male rats, adult male rats, with the average weight of 300g. All animals underwent surgery in which fractures to the femoral shaft with a blunt guillotine. The animals were divided into 2 groups: lodenafil group, wich received oral doses of carbonate lodenafil (10mg/kg) and the control group. The animals were sacrificed at 7, 14 and 28 days postoperatively. There were two deaths, two false paths of the wire and three animals was not established fracture. Were performed radiographic studies with film mammography to analyze the optical density and area of callus, measured in mm  and histological study, using samples stained with picrosirius red under microscope light polarization, to quantify formation of collagen type I and type III in the cortical region near the fracture and callus. The density of type I collagen in the cortical region of the femur near the fracture observed in group lodenafil was significantly lower than that observed in the control group at 28 days of bone (** P = 0.0028). The results are not consistent enough to say that this drug has an effect on bone healing. It was found that the carbonate lodenafil not influence the process of bone healing in femurs of rats with reduced wire Kirshner.

INTRODUÇÃO: A hipertensão arterial pulmonar associada a cardiopatias congênitas (HAP-CCg) é um tipo específico de doença vascular pulmonar com várias complicações. Os pacientes com HAP-CCg avançada são considerados inoperáveis e podem apresentar hipoxemia crônica e eritrocitose secundária devido ao desvio de sangue da direita para a esquerda através das comunicações cardíacas. O presente estudo teve como objetivo analisar a resposta a dois inibidores de fosfodiesterase 5 (iPDE 5), a saber, sildenafila e tadalafila, administrados por seis meses. Os fármacos haviam sido previamente aprovados para uso na HAP em geral. No entanto, a literatura é escassa no que diz respeito à sua utilização especificamente na HAP-CCg. Propusemo-nos a investigar potenciais efeitos destes fármacos além de suas ações como vasodilatadores. MÉTODOS: Foram incluídos 31 pacientes com HAP-CCg avançada (idade entre 10 e 54 anos). A maioria apresentava redução na saturação sistêmica de oxigênio, com hematócrito elevado. A sildenafila e a tadalafila foram administradas por via oral (respectivamente, 20 mg três vezes ao dia e dose única diária de 40 mg). A capacidade física foi avaliada pela distância percorrida em 6 minutos (teste de caminhada de 6 minutos, protocolo American Thoracic Society). A qualidade de vida relacionada à saúde foi avaliada utilizando-se o questionário genérico SF-36. Níveis circulantes de marcadores de disfunção microvascular foram analisados por ensaios imunoenzimáticos. Todas as medidas foram realizadas na condição basal, e aos três e seis meses de tratamento com iPDE 5. Utilizando casuística ampliada com análise de dados tanto de forma retrospectiva como prospectiva, investigamos variáveis com possível valor prognóstico. RESULTADOS: Os tratamentos com ambos os fármacos foram associados à melhora da capacidade física (classe funcional e distância percorrida em 6 minutos, p < 0,05), hematócrito e nível de hemoglobina (p < 0,05), e qualidade de vida relacionada à saúde (componentes físico e mental, p < 0,05). Comparados ao grupo controle, na condição basal, os pacientes apresentaram níveis plasmáticos elevados de beta-tromboglobulina (beta-TG, p=0,002), selectina P (p=0,018), ativador do plasminogênio tipo tecidual (t-PA, p=0,005) e do antígeno do fator de von Willebrand (VWF:Ag, p=0,005); a trombomodulina mostrou-se significantemente reduzida (TM, p < 0,001). A administração de tadalafila foi seguida de melhora no nível de beta-TG (p=0,004), t-PA (p=0,003) e TM (p=0,046), enquanto a selectina P modificou-se apenas com a sildenafila (p=0,034). O VWF:Ag mostrou-se com melhora significante, porém transitória, no grupo tratado com sildenafila (p=0,019). Usando casuística ampliada que incluiu pacientes de estudos anteriores de nosso grupo (coorte estendida de 75 indivíduos), analisamos dados coletados no início do seguimento para todos eles, assim como outros relacionados ao tratamento. Uma série de variáveis clínicas e laboratoriais foram testadas quanto à sua possível correlação com a sobrevida livre de evento (seguimento de nove anos). Nesta parte do estudo, os pacientes receberam não apenas iPDE 5 como tratamento para HAP. Alguns deles receberam antagonistas dos receptores de endotelina isoladamente, enquanto outros receberam estes medicamentos (bosentana, ambrisentana) em combinação com iPDE 5. Após realização de análises univariada, bivariada e multivariada foi possível a identificação de quatro preditores de prognóstico desfavorável: 1, menor tempo de exposição a fármacos específicos para HAP (p < 0,001); 2, classe funcional avançada na admissão (p=0,010); 3, função sistólica ventricular direita deprimida (p=0,010); e 4, níveis circulantes elevados de VWF:Ag (p=0,013). Menor tempo de exposição aos medicamentos específicos para HAP foi caracterizado como preditor independente de desfechos. CONCLUSÕES E COMENTÁRIOS: Com base nestas observações, concluímos que os iPDE 5 são importantes no manejo da HAP-CCg avançada. Os efeitos foram observados não apenas na capacidade física e na qualidade de vida, mas também em marcadores biológicos de disfunção microvascular, potencialmente relacionados à progressão e/ou complicações da doença. Além disso, as observações em longo prazo sugeriram que maior tempo de exposição aos fármacos para HAP (incluindo iPDE 5) foi benéfico, enfatizando a necessidade de instituição precoce das terapias. O fato de o estudo ter sido realizado apenas com fármacos de administração oral torna os resultados relevantes no que diz respeito a regiões onde o acesso a tratamentos específicos para HAP é limitado a tais modalidades<br>INTRODUCTION: Pulmonary arterial hypertension associated with congenital heart disease (CHD-PAH) is a particular form of pulmonary vascular disease with a number of complications. Patients with advanced CHD-PAH are deemed inoperable, and may present with chronic hypoxemia and secondary erythrocytosis due to right-to-left shunting across the cardiac communications. The present study was aimed at analyzing the response to 2 phosphodiesterase type 5 inhibitors (PDE5is), namely sildenafil and tadalafil, which were administered for 6 months. The drugs had been previously approved for management of PAH in general. However, there has been scarce literature on their use in the specific setting of CHD-PAH. We wished to investigate potential effects beyond their actions as vasodilators. METHODS: Thirty-one patients with advanced CHD-PAH were enrolled (age 10 to 54 years). Most of them had systemic oxygen desaturation with elevated hematocrit. Sildenafil and tadalafil were administered orally (respectively, 20 mg t.i.d and single daily dose of 40 mg). The physical capacity was assessed by registering the 6-minute walked distance (6-minute walk test, American Thoracic Society protocol). Health-related quality of life was assessed using the SF-36 generic questionnaire. Circulating levels of microvascular dysfunction markers were analyzed by enzyme-linked immunoassays. All measurements were performed at baseline, 3 months and 6 months of PDE5i administration. Using a larger patient population with retrospective as well as prospective data analysis, we looked for potential predictors of prognosis. RESULTS: Both therapies were associated with improvement of the physical capacity (functional class and 6-minute walked distance, p < 0.05), hematocrit and hemoglobin level (p < 0.05), and health-related quality of life (physical and mental components, p < 0.05). Compared to controls, patients had elevated baseline plasma levels of beta-thromboglobulin (beta-TG, p=0.002), P-selectin (p=0.018), tissue-type plasminogen activator (t-PA, p=0.005) and von Willebrand factor antigen (VWF:Ag, p=0.005), while thrombomodulin was importantly reduced (TM, p < 0.001). Tadalafil administration was followed by improvement of beta-TG (p=0.004), t-PA (p=0.003) and TM level (p=0.046), while P-selectin was improved by sildenafil only (p=0.034). VWF:Ag improved significantly, but only transiently in the sildenafil group (p=0.019). Using an extended population which included additional patients from previous studies of ours (the extended cohort consisted of 75 individuals), we analyzed data collected at the beginning of follow-up for all subjects, and treatment-related data as well. A number of clinical and laboratory parameters were tested for their possible correlation with event-free survival (9-year survival analysis). In this part of the study, patients were on monotherapy or combination therapy with PDE5is (sildenafil or tadalafil) and endothelin receptor antagonists (bosentan or ambrisentan). Univariate, bivariate and multivariate analyses were used to identify four predictors of a more worrisome prognosis: 1, a shorter time of exposure to specific PAH therapies (p < 0.001); 2, an advanced functional class at entry (p=0.010); 3, a depressed right ventricular systolic function (p=0.010); and 4, high circulating levels of VWF:Ag (p=0.013). A shorter exposure to PAH therapies was characterized as an independent predictor of poor outcome. CONCLUSIONS AND COMMENTS: Our observations point towards beneficial effects of PDE5is in advanced CHD-PAH. Importantly, the observed effects were not only on the physical capacity, and quality of life, but also biological markers of microvascular injury potentially related to disease progression and/or complications. Furthermore, long-term patient observation showed that a longer exposure to PAH drugs (including PDE5is) was beneficial, thus emphasizing the need for early initiation of therapies. Because only oral drugs were used, results may be relevant for countries and regions with limited access to PAH-specific medications

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo1570_1.pdf: 9880371 bytes, checksum: b842827e429be6c38053b097640e9773 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009<br>Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico<br>O Vardenafil é um potente vasodilatador, com uso no tratamento de pacientes com disfunção erétil. Seu mecanismo de ação baseia-se na inibição seletiva da fosfodiesterase-5 (PDE5), específica para o monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). As fosfodiesterases são enzimas capazes de regular os níveis de AMPc e GMPc por hidrólise, sua função tem sido indicada como alvo para novos agentes terapêuticos, que atuem através da inibição de suas isoenzimas. O tratamento crônico com Vardenafil tem sido utilizado com sucesso em casos de hipertensão pulmonar, onde a progressão da doença pode levar a uma falência do ventrículo direito e conseqüente morte do paciente. Apesar de ser uma droga utilizada em altas doses por períodos longos, pouco se conhece sobre seu efeito em outros sistemas, uma vez que os nucleotídeos cíclicos cGMP e cAMP têm diferentes efeitos de acordo com o tipo celular, e suas funções ovarianas não estão bem descritas. Pela falta de esclarecimentos sobre a atividade da Vardenafil em outras células, faz-se necessário estudar o mecanismo de ação desta droga sobre a ovogênese de pacientes submetidas à terapia oral com o Vardenafil, uma vez que a PDE5 já foi caracterizada em folículos e oócitos (SASSEVILLE et al, 2005). Camundongos foram tratados com o inibidor de fosfodiesterase Vardenafil, que aumenta os níveis intracelulares do cGMP, e seus ovários utilizados para avaliação dos efeitos dessa droga. O presente estudo demonstra que o tratamento com o inibidor de fosfodiesterase 5 altera a morfologia das células luteais, sugerindo que induzir níveis altos de cGMP pode afetar essas células

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-04-20T12:07:56Z No. of bitstreams: 1 Fernando Leonel da Silva.pdf: 2355971 bytes, checksum: a7fa512ae0e00441a67dad424547a342 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-04-20T12:07:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernando Leonel da Silva.pdf: 2355971 bytes, checksum: a7fa512ae0e00441a67dad424547a342 (MD5) Previous issue date: 2017-08-07<br>PDE inhibitors have been used for the treatment of erectile dysfunction, but their therapeutic potential is still unknown and little explored, among them Tadalafil, its daily use has been investigated in clinical trials and demonstrated to be a therapy capable of inhibiting inflammatory chains, the analysis of the heat applied directly to the testis has provided new information on the triggering mechanisms of inflammation and possible heat damage to tissues. The objective of this study was to evaluate the effect of tadalafil on the recovery of the testicular parenchyma of male Wistar rats, submitted to testicular thermal stress, for which 54 Wistar rats were used. Randomly distributed in 3 groups, where the control group suffered thermal insult and treated with intraperitoneal saline and the group treated with tadalafil at a daily intraperitoneal dose of 0.9 mg / kg-1 and 1.8 mg / kg-1. These animals were submitted to the same experimental condition, submitted to euthanasia procedures and perfused intraperitoneally. Oxidative stress of liver and spleen, cytokines IL-6 and TNF-α of splenic acid, plasma testosterone levels and histopathological analysis of the testis were measured. Body or testicular weight was not influenced by the administration of tadalafil, but was effective in reducing plasma testosterone levels on all evaluated days, also responsible for inhibiting the formation of NO in the liver and spleen. Low-dose Tadalafil exerted an anti-inflammatory effect on the levels of TNF-α (decreasing) and IL-6 (increase) in the splenic parenchyma during the experimental period. Tadalafil delayed the thermal stress lesions in the 7-day group with the two doses applied, and 15 days with a dose of 0.9 m / kg post-stress in the testicular parenchyma of rats, evidenced on histopathological analysis.<br>Drogas inibidoras das PDE's tem sido utilizada para tratamento da disfunção erétil, porém seu potencial terapeutico ainda é desconhecido e pouco explorado, dentre elas o Tadalafil, seu uso diário foi investigado em ensaios clínicos e demonstrado ser uma terapia capaz de inibir cadeias inflamatórias, a análise do calor aplicado diretamente sobre o testículo tem fornecido novas informações sobre os mecanismos desencadeadores da inflamação e dos possíveis danos do calor aos tecidos. O objetido deste estudo foi avaliar o efeito do tadalafil na recuperação do parênquima testicular de ratos Wistar machos, submetidos ao estresse térmico testicular, para tal foram utilizados 54 ratos, Wistar. Distribuídos aleatoriamente em 3 grupos, onde grupo controle sofreu injúria térmica e tratado com solução salina intraperitoneal e os grupo tratados com tadalafil em dose diária intraperitoneal de 0.9 mg/kg-1 e 1.8 mg/kg-1. Estes animais foram submetidos a mesma condição experimental, esubmetidos aos procedimentos de eutanásia e perfundidos intraperiotenalmente. Foram dosados estresse oxidativo de Fígado e Baço, A citocinas IL-6 e TNF-α de técido esplênico, níveis de testosterona plasmático e analise histopatológica dos testículos. O peso corporal ou testicular não foi influenciado pela administração de tadalafil, no entando foi eficaz na redução nos níveis de testosterona plasmático em todos os dias avaliados, responsável também por inibir formação de NO no fíagado e baço. O Tadalafil em doses baixas exerceu efeito anti-inflamatório sobre os níveis de TNF-α (diminuindo) e IL-6 (aumento) no parênquima esplênico durente o período experimental. O Tadalafil retardou as lesões provocadas pelo estresse térmico no grupo de 7 dias com as duas doses aplicadas, e 15 dias com dose de 0.9 m/kg pós-estresse no parênquima testicular de ratos, evidenciadas sobre análise histopatológica. Sendo Efizaz e promissor fármaco, principalmente em lesões agudas, necessitando de mais estudos para comprovação e melhor compreensão.

Orientador: Amanda Martins Baviera<br>Banca: Luis Carlos Carvalho Navegantes<br>Banca: Marcelo Tadeu Marin<br>Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti<br>Banca: Julio Cesar Batista Ferreira<br>Resumo: Considerando os avanços no conhecimento acerca dos mecanismos que controlam o metabolismo de proteínas na musculatura esquelética que permitiram a busca por novas opções para o tratamento das atrofias musculares, o presente estudo teve como objetivo a compreensão do potencial antiproteolítico de inibidores de fosfodiesterase, PDE (pentoxifilina, inibidor não-seletivo de PDE; rolipram, inibidor seletivo de PDE4) em músculos esqueléticos de ratos submetidos à atrofia muscular devido à insuficiência insulínica (diabetes mellitus experimental), com ênfase na elucidação da participação de componentes da sinalização do AMP cíclico (AMPc) nesta resposta. Ratos normais e diabéticos (60 mg/kg de estreptozotocina, administração intravenosa) foram tratados com salina (NS e DS) ou com 2 mg/kg de rolipram (NROL e DROL), ou com 25 mg/kg de pentoxifilina (NPTX e DPTX) durante 3 dias, por via intraperitoneal. Após três dias de tratamento, músculos soleus e extensor digitorum longus (EDL) foram removidos, pesados, congelados e processados para diversas análises: (i) conteúdo de AMPc (ensaio imunoenzimático); (ii) atividades das proteases proteassoma, calpaínas e caspase-3 (uso de substratos específicos fluorigênicos); (iii) níveis proteicos e/ou níveis de fosforilação de componentes das vias proteolíticas, efetores intracelulares sinalizatórios e fatores de transcrição (Western blotting); (iv) determinação dos níveis séricos de insulina e citocinas pró-inflamatórias. Foram realizados experime... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abstract: Considering the advances in the knowledge of the mechanisms controlling the protein metabolism in skeletal muscles that allowed the discover of new options for the treatment of muscle atrophies, the present study aimed to understand the antiproteolytic potential of phosphodiesterase (PDE) inhibitors (pentoxifylline, a non-selective PDE inhibitor; rolipram, a selective PDE 4 inhibitor), in skeletal muscles of rats submitted to muscle atrophy due to insulin insufficiency (experimental diabetes mellitus), with emphasis on the elucidation of the participation of cyclic AMP (cAMP) signaling components. Normal and diabetic rats (60 mg/kg streptozotocin, intravenous administration) were treated intraperitoneally with saline (NS and DS) or with 2 mg/kg rolipram (NROL and DROL) or with 25 mg/kg pentoxifylline (NPTX and DPTX) for 3 days. After three days of treatments, soleus and extensor digitorum longus (EDL) muscles were removed, weighed, frozen and processed for several analyzes: (i) cAMP content; (ii) activities of proteasome, calpain and caspase-3 (use of specific fluorigenic substrates); (iii) protein levels and/or phosphorylation levels of components of proteolytic pathways, intracellular signaling effectors and transcription factors (Western blotting); (iv) determination of serum insulin and proinflammatory cytokines levels. Ex vivo experiments were performed to verify the direct action of the drugs in the control of muscle proteolysis and activation of intracellular effectors, via muscle incubations in the presence of rolipram or agonists of EPAC (Exchange protein directly activated by cAMP) and PKA (cAMP-dependent protein kinase), intracellular effectors activated by cAMP. Experiments were also carried out in the Laboratory of Prof. Dr. Marco Sandri at the... (Complete abstract click electronic access below)<br>Doutor

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-14T12:01:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Fabiana corrigida.pdf: 10988390 bytes, checksum: 0f7ed97ccd1c58e803213e43db1e6a2c (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-07-14T12:01:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese_Fabiana corrigida.pdf: 10988390 bytes, checksum: 0f7ed97ccd1c58e803213e43db1e6a2c (MD5) Previous issue date: 2015-07-29<br>FACEPE<br>O Sildenafil é um inibidor potente e seletivo da fosfodiesterase-5 (PDE5). Este fármaco foi aprovado para uso terapêutico na disfunção erétil e, atualmente, vem sendo usado também no tratamento da hipertensão pulmonar. Embora mantenha um excelente nível de segurança e perfil de tolerabilidade, poucos estudos avaliaram os possíveis efeitos colaterais do tratamento crônico com Sildenafil sobre o sistema reprodutor masculino, especialmente na próstata visando o relaxamento da uretra e alívio dos Sintomas do Trato Urinário Inferior (STUI). Desta forma, avaliamos o efeito do tratamento, em camundongos C57Bl/6, através de análise morfológica, ultraestrutural e expressão molecular de guanilato ciclase solúvel-sGC, Óxido nítrico sintase endotelial-eNOS, Antígeno prostático específico-PSA e Fator de crescimento transformador beta-TGF- no tecido prostático. Foi-se observado que o tratamento com Sildenafil não induz danos evidentes na próstata. Além disso, tem sido demonstrado que Sildenafil tem eficácia terapêutica em doenças inflamatórias crônicas, podendo apresentar uma eficácia terapêutica potencial em diferentes doenças. Entre elas, uma atenção especial tem sido dada para as patologias relacionadas ao trato urogenital masculino, como a Hiperplasia Prostática Benigna (HPB), Câncer de próstata e Prostatites. A inflamação tem sido considerada como um fator etiológio da HPB e STUI. Assim, foi proposto um modelo de lesão prostática com injeção intrauretral de LPS (1mg/ml), em camundongos machos Swiss e C57Bl/6, desenvolvido durante 3, 7, 10 e 14 dias. A análise dos resultados mostrou que a indução intrauretral com lipopolisacarideo-LPS atua como importante agente da HPB, além de promover o aumento de fatores de crescimento (FGF-7 e FGF- β), α-actina e citocinas pró-inflamatórias (IL-1, IL-6, IL-17), tanto no estroma como no epitélio. Uma vez que o Sildenafil tem potencial anti-inflamatório, este estudo se propôs a analisar a ação do Sildenafil em um modelo de lesão prostática experimental, induzido por injeção intrauretral de LPS em camundongos C57BL/6. O tratamento com Sildenafil (25mg/kg) dos animais com prostatite apresentaram redução significativa de -actina, COX-2, NFK- B, IL-6, IL-17 e FGF-7. Por não induzir danos na próstata , o Sildenafil, por não induzir a longo prazo danos evidentes na próstata pode representar uma estratégia farmacológica para o tratamento de doenças inflamatórias crônicas do trato urogenital.<br>Sildenafil is a potent and selective inhibitor of phosphodiesterase-5 (PDE5). This drug has been approved for therapeutic use in erectile dysfunction and currently has been also used to treat pulmonary hypertension. While maintaining an excellent level of safety and tolerability profile, few studies have evaluated the possible side effects of chronic treatment with Sildenafil on the male reproductive system, especially in prostate aimed at relaxing the urethra and relief of symptoms of Lower Urinary Tract (LUTS). Therefore, we assessed the treatment effect in C57Bl/6 mice, using morphological analysis, ultrastructural and molecular expression of soluble guanylate cyclase-sGC, endothelial nitric oxide synthase, eNOS, prostate-specific antigen PSA and transforming growth factor beta TGF- in prostate tissue. It is observed that the treatment with sildenafil does not induce apparent damage to the prostate. Furthermore, Sildenafil has been shown to have therapeutic efficacy in chronic inflammatory diseases, which have a potential therapeutic efficacy in various diseases. Among them, special attention has been given to the pathologies related to the male urogenital tract, such as Benign Prostatic Hyperplasia (BPH), prostate cancer and Prostatitis. Inflammation has been considered as a factor etiológio of BPH and LUTS. Thus, it has been proposed a prostatic intraurethral injection injury model of LPS (1mg/ml) in male Swiss mice and C57Bl /6 developed for 3, 7, 10 and 14 days. The results showed that the intraurethral induction with lipopolysaccharide-LPS acts as an important agent of HPB, and to promote the increase of growth factors (FGF-7 and FGF- ), -actin and proinflammatory cytokines (IL- 1, IL-6, IL-17), both in the stroma and the epithelium. Since Sildenafil has potential anti-inflammatory, this study aimed to analyze the action of Sildenafil in an experimental prostate injury model induced by intraurethral injection of LPS in C57Bl/6 mice. Treatment with sildenafil (25 mg/kg) of animals with prostatitis showed a significant reduction of -actin, COX-2 NFK-kB, IL-6, IL-17 and FGF-7. By not induce damage to the prostate, Sildenafil, not to induce long term damage evident in the prostate may represent a pharmacologic strategy for the treatment of chronic inflammatory diseases of the urogenital tract.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2016<br>Made available in DSpace on 2016-09-20T04:35:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339610.pdf: 4003739 bytes, checksum: a192021f6824d8bfcd779a50d110a212 (MD5) Previous issue date: 2016<br>Avaliar se o uso do inibidor da fosfodiesterase tipo 5, citrato de sildenafil, em mulheres com pré-eclampsia melhora os resultados perinatais e hemodinâmicos. Método: Mulheres com pré-eclampsia, com idade gestacional entre 24 a 33 semanas, foram randomizadas em dois grupos. O primeiro recebeu citrato de sildenafil 50mg de 8 em 8 horas via oral e o segundo grupo placebo. Os desfechos avaliados foram o tempo entre a randomização e o parto, dopplervelocimetria materno-fetal, os eventos adversos maternos e os resultados neonatais. Os dados foram avaliados pela intenção de tratar. Resultados: Das 100 mulheres, 50 foram alocadas para cada grupo. O grupo que recebeu sildenafil teve uma média de 4,01 dias a mais de prolongamento da gravidez (sildenafil 14,40 IC12,50-16,59 e placebo 10,39 IC8,35-12,32, p=0,008). Houve uma significativa redução do índice de pulsatividade das artérias uterinas e umbilicais (22,5% e 18,5%, respectivamente, p<0.001) com o sildenafil, bem como um melhor controle da pressão arterial (PAM reduziu de 116,4±5,1mmHg para 100,3±5,6mmHg, p<0,05). Não houve diferença nos resultados perinatais (morbidade e mortalidade) com o uso do sildenafil. Não houve diferenças nos efeitos adversos entre o sildenafil e o placebo. Conclusão: O citrato de sildenafil foi bem tolerado, aumentou o tempo de gravidez, melhorou o controle da pressão arterial e do fluxo sanguíneo materno-fetal. Contudo, não foi possível determinar a melhora dos resultados perinatais. <br><br>Abstract : To evaluate if therapy with sildenafil citrate in women with preeclampsia improves hemodynamic status and perinatal outcomes. Material and methods: 100 singleton pregnancies diagnosed with preeclampsia between 24 and 33 weeks were randomized into two groups. The first group was allocated to oral sildenafil citrate 50 mg every 8 hours and the second group to placebo. Study outcomes included the time elapsed between randomization and delivery, changes in resistance indices of uterine, umbilical and middle cerebral arteries by Doppler velocimetry, maternal and neonatal outcomes adverse events. Data analysis was based on intention to treat. Results: 50 patients were randomized to each group. Time between randomization and delivery was on average 4 days longer for the group treated with sildenafil (sildenafil: 14.4 days, 95% CI 12.5-16.6 days vs. placebo: 10.4 days, 95% CI 8.4-12.3 days, p = 0,008). Regarding Doppler velocimetry, treatment with sildenafil was associated with a significant reduction in the pulsatility index of uterine and umbilical arteries (22.5% and 18,5%, respectively, P < 0.001). Maternal blood pressure control was also better with sildenafil (the mean arterial blood pressure decreased from 116.4 ±5.1 mmHg to 100.3 ± 5.6 mmHg, P < 0.05). There was no difference in perinatal morbidity and mortality and was also no difference in the rate of adverse effects between the two groups. Conclusion: Therapy with sildenafil citrate for women with preeclampsia was associated with pregnancy prolongation of approximately 4 days compared to placebo. Patients receiving sildenafil also experienced improved blood pressure control as well as decreased resistance to blood flow in the uteroplacental and fetal circulations. However, no difference in perinatal outcome was noted in this study.

Os pacientes que usam lítio (Li) para tratamento do transtorno bipolar frequentemente apresentam poliúria e deficiência de concentração urinária, sintomas do Diabetes Insipidus Nefrogênico (DIN). Animais tratados com Li apresentam baixos níveis de produção de adenosina monofosfato cíclico (AMPc) em resposta ao hormônio antidiurético (HAD). O Sildenafil (Sil), um inibidor da fosfodiesterase 5 (PDE5), eleva os níveis intracelulares de guanosina monofosfato cíclico (GMPc), levando a inserção de aquaporina 2 (AQP2) na membrana plasmática das células do ducto coletor. Portanto, inibidores de PDE podem promover a inserção de AQP2 na membrana plasmática mesmo sem a ativação do receptor de HAD, indicando a participação de uma via alternativa mediada pelo GMPc. Nós investigamos as vias de ação do Sil no tratamento da DIN induzida pelo Li. Ratos Wistar foram divididos nos seguintes grupos: grupo controle, recebendo dieta alimentar normal durante quatro semanas; grupo Li, recebendo dieta alimentar normal com 40 mmol Li por quilo de dieta durante quatro semanas; grupo Li + Sil, recebendo dieta alimentar normal com 40 mmol Li por quilo de dieta durante quatro semanas e 200 mg por quilo de dieta de Sil a partir da segunda semana; grupo Sil, recebendo dieta alimentar normal durante a primeira semana e a partir da segunda semana recebendo dieta normal com 200 mg de Sil por quilo de dieta. Os animais do grupo Li desenvolveram poliúria, diminuição da osmolalidade urinária e diminuição da expressão da AQP2 tanto na fração citoplasmática como de membrana celular e o Sil reverteu essas alterações. Demonstramos ainda que a concentração de GMPc intracelular estava aumentada nos túbulos papilares tratados com Sil. Observamos que a provável via de fosforilação da AQP2 induzida pelo GMPc é pela PKA. Além disso, o tratamento com Sil aumenta a expressão de pCreb, fator de transcrição para ativação do gene da AQP2. Observamos ainda que o Li diminui a expressão de eNOS e o tratamento com Sil normaliza essa diminuição. Assim, concluímos que o tratamento com Sil em ratos com DIN melhora a poliúria aumentando a produção e a inserção de AQP2. O tratamento com Sil pode ser benéfico para pacientes que sofrem com DIN induzido pelo Li<br>Patients taking lithium to treat bipolar disorder often present polyuria and urinary concentrating defect. In addition, lithium-treated animals present lower cyclic adenosine monophosphate production in response to vasopressin. Sildenafil (Sil), a phosphodiesterase 5 (PDE5) inhibitor, elevates intracellular cyclic guanosine monophosphate (cGMP) levels, leading to plasma membrane accumulation of aquaporin 2 (AQP2). Therefore, PDE inhibitors might induce AQP2 membrane insertion even without vasopressin receptor activation by activating a parallel cGMP-mediated signal transduction pathway. We investigated Sil pathways of action in rats with lithium-induced nephrogenic Diabetes Insipidus (NDI). Wistar rats received lithium (40 mmol/kg food) or not for 4 weeks (Li or control), some rats also receiving sildenafil (200 mg/kg food) in weeks 2-4, with or without lithium (Li+Sil orSil). Animals in Li group developed polyuria, decreased urinary osmolality and decreased expression of AQP2 in both the cytoplasmic fraction and the cell membrane and Sil reversed these changes. We also demonstrated that intracellular cGMP concentration was increased in papillary tubules treated with Sil. We found that PKA may be involved in the pathway of cGMP induced AQP2 phosphorylation. In addition, Sil treatment increases Creb phosphorylation. Creb phosphorylation, acts as AQP2 gene transcription factor. We also observed that Li decreases eNOS expression and treatment with Sil normalizes this alteration. We conclude that Sil treatment improves polyuria by increasing production and insertion of AQP2. Sil treatment may be beneficial to patients suffering from induced DIN Li

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao DAniella Ramos Martins.pdf: 914272 bytes, checksum: 038f97a7fcd95721aab346f4a3bd0587 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28<br>The inhibition of phosphodiesterases (PDEs) increases intracellular levels of cyclic nucleotides 3 ': 5'-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) and 3 ': 5'-cyclic guanosine monophosphate (cGMP), which has many physiological and biochemical effects, especially in cardiovascular system. The objective of this study was to analyze the pharmacological effects of a new compound derived from pyrazole, LQFM 021, which was indicated by molecular modeling studies as a possible inhibitor of PDE-3. For this purpose, aortas were isolated of rats and mounted in organ baths for isometric tension recording of the relaxing effect of LQFM 021, in preparations pre-contracted with phenylephrine. We analyzed the involvement of the vascular endothelium, soluble guanylate cyclase (sGC) and adenylate cyclase (AC), the role of K+ channels and Ca2+, besides the contribution of Ca2+ uptake by the sarcoplasmic reticulum. As a result, was demonstrated that the LQFM 021 induces vascular relaxation (Emax: 54.9 ± 6.0%), being this relaxation potentiated by endothelium (Emax: 88.1 ± 2.1%). The inhibition of AC with MDL-12.330A (10 &#956;M) or of the sGC with ODQ (1 &#956;M) reduced the relaxation of 88.1 ± 2.1%, to 48.35 ± 3.01% and 19.95 ± 2.32%, respectively. The pre-contraction with KCl 45 mM or treatment of preparations with TEA (5 mM), reduced almost completely the relaxing effect of the compound. Inhibition of Ca2+ / ATPase reticular with CPA (10 mM) reduced the relaxation stimulated by 021 LQFM approximately 66.5%. Concentration-response curve contractile induced by phenylephrine (0.1 nM to 1 &#956;M) or by CaCl2 (0-3 mM, zero-calcium + phenylephrine) were reduced by pretreatment of preparations with LQFM 021 (EC50). In conclusion, this study showed that the new synthetic derivative of pyrazole LQFM 021 is a potential inhibitor of PDE-3 and has vasorelaxant activity. The endothelium potentiates the relaxation stimulated by the compound. The route of sGC and AC are involved in the mechanism of action of LQFM 021. Was also evidenced by participation from sarcoplasmatic reticulum, well as the flow of K+ and Ca2+ through the cell membrane.<br>A inibição das fosfodiesterases (PDEs) aumenta os níveis intracelulares de nucleotídeos cíclicos 3' : 5'-monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) e 3' : 5'-monofosfato cíclico de guanosina (GMPc), os quais tem muitos efeitos fisiológicos e bioquímicos, sobretudo no sistema cardiovascular. O objetivo deste estudo foi analisar os efeitos farmacológicos de um novo composto derivado do pirazol, LQFM 021, o qual foi apontado por estudos de modelagem molecular como possível inibidor de PDE-3. Para tanto, artérias aortas de ratos foram isoladas e montadas em banhos de órgão para registro da tensão isométrica do efeito relaxante do LQFM 021, em preparações pré-contraídas com fenilefrina. Foi analisada a participação do endotélio vascular, da guanilato ciclase solúvel (GCs) e da adenilato ciclase (AC), o papel dos canais de K+ e de Ca2+, além da contribuição da captação de Ca2+ pelo retículo sarcoplasmático. Como resultado, foi demonstrado que o LQFM 021 induz relaxamento vascular (Emax: 54.9 ± 6.0%), sendo este relaxamento potencializado pelo endotélio (Emax:88.1 ± 2.1%). A inibição da AC com MDL-12.330A (10 &#956;M) ou da GCs com ODQ (1 &#956;M), reduziram o relaxamento de 88,1 ± 2,1%, para 48,35 ± 3,01% e 19,95 ± 2,32%, respectivamente. A pré-contração com KCl 45 mM ou o tratamento das preparações com TEA (5 mM), reduziram quase que por completo o efeito relaxante do composto. A inibição da Ca2+/ATPase reticular com CPA (10 &#956;M), reduziu o relaxamento estimulado pelo LQFM 021 em aproximadamente 66,5%. Curva concentração-resposta contrátil induzida pela fenilefrina (0,1 nM a 1 &#956;M) ou pelo CaCl2 (0 a 3 mM, em meio zero-cálcio + fenilefrina) foram reduzidas pelo pré-tratamento das preparações com LQFM 021 (EC50). Em conclusão, este estudo mostrou que o novo derivado sintético de pirazol LQFM 021 é um possível inibidor de PDE-3 e possui atividade vasorelaxante. O endotélio participa e potencializa o relaxamento estimulado pelo composto. A via da GCs e AC estão envolvidas no mecanismo de ação do LQFM 021. Também foi evidenciada a participação do retículo sarcoplasmático, bem como o fluxo de K+ e de Ca2+ através da membrana celular.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-01-18T13:52:56Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO HICLA MOREIRA.pdf: 1214693 bytes, checksum: c19232269889cb62e41e1263d8a9832a (MD5) DISSERTAÇÃO HICLA MOREIRA.pdf: 1214693 bytes, checksum: c19232269889cb62e41e1263d8a9832a (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-01-18T13:52:56Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO HICLA MOREIRA.pdf: 1214693 bytes, checksum: c19232269889cb62e41e1263d8a9832a (MD5) DISSERTAÇÃO HICLA MOREIRA.pdf: 1214693 bytes, checksum: c19232269889cb62e41e1263d8a9832a (MD5) Previous issue date: 2015-08-31<br>O envelhecimento prejudica a função endotelial, o que pode ser considerado um marco do desenvolvimento de doenças cardiovasculares em idosos. O cilostazol, um inibidor seletivo da fosfodiesterase 3 (PDE-3), tem efeitos antiplaquetário, antitrombótico e vasodilatador. No presente estudo foi analisado se o tratamento com cilostazol melhora a função vascular (mecanismos contráteis e relaxamento) de ratos idosos e os possíveis mecanismos envolvidos. Ratos Wistar machos com 18 meses de idade foram tratados com cilostazol durante 8 semanas com uma dose de 100 mg/kg/dia administrado por gavagem. Ratos não tratados receberam apenas veículo. A pressão arterial média e a frequência cardíaca foram medidas nos ratos acordados. Artérias mesentéricas de resistência (AMR) foram utilizadas para avaliar o relaxamento à acetilcolina, ao nitroprussiato de sódio (NPS), à forskolina e ao isoproterenol, e a contração induzida pela noradrenalina, enquanto o relaxamento à forskolina e ao isoproterenol permaneceu inalterado em ambos os grupos, o relaxamento à acetilcolina e ao NPS foi potencializado em AMR de ratos tratados com cilostazol. Nessas artérias, a vasoconstrição à noradrenalina foi semelhante nos dois grupos. A incubação com L-NAME ou ODQ aboliu a resposta vasodilatadora à acetilcolina em AMR de ambos os grupos. Entretanto, na presença de L-NAME e indometacina, o relaxamento à acetilcolina foi semelhante nos dois grupos. O bloqueio de canais para K+ ativados por Ca2+ (KCa) (apamina + TRAM-34) reduziu o relaxamento induzido pela acetilcolina em AMR de ratos tratados com cilostazol, mas não em ratos não tratados. Em resumo, os resultados sugerem que o cilostazol normaliza a função endotelial em ratos idosos por um mecanismo dependente de GMPc, envolvendo provavelmente um aumento da liberação de •NO e subsequente ativação de canais KCa no músculo liso vascular. Embora mais estudos sejam necessários, estes resultados indicam um possível uso de cilostazol como uma alternativa para a prevenção/ tratamento de desordens vasculares induzidas pelo envelhecimento.<br>Aging impairs endothelial function, which may be considered a hallmark of the development of cardiovascular diseases in elderly. Cilostazol, a selective inhibitor of phosphodiesterase 3 (PDE-3), has antiplatelet, antithrombotic and peripheral vasodilator effects. In the current study, we analyzed whether cilostazol could affect vascular function (contractile and relaxation mechanisms) of old rats and possible mechanism involved. 18-month-old male Wistar rats were treated with Cilostazol during 8 weeks at the dose of 100 mg.kg-1 by gavage. The untreated rats received vehicle alone. Mean arterial pressure and heart rate were measured in conscious rats. Mesenteric resistance arteries were used to evaluate the relaxation to acetylcholine, sodium nitroprusside, forskolin, and isoproterenol and noradrenaline-induced contraction, while relaxation to forskolin and isoproterenol remained unmodified by cilostazol, relaxation to acetylcholine and to SNP was increased in MRA from cilostazol-treated than untreated rats. In these arteries, vasoconstriction produced by noradrenaline was similar in both groups. The incubation with L-NAME or ODQ abolished the vasodilator response to acetylcholine in MRA from both cilostazol-treated and untreated rats. However, in presence of L-NAME and indomethacin, relaxation to acetylcholine was similar in both groups. The blockade of calcium-activated K+-channel (KCa) (TRAM-34 plus apamin) attenuated acetylcholine-induced relaxation in MRA from cilostazol-treated rats, but in untreated rats. In short, results suggests that cilostazol reverses endothelial function in aged rats by a cGMP-dependent mechanism, involving probably an increase in •NO and subsequent activation of the KCa channel in vascular smooth muscle. Although further study is needed, these results indicate a possible use of cilostazol as an alternative for the prevention/ treatment of vascular disorders induced by aging.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico<br>CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior<br>Reactive oxygen species (ROS) and nitrogen (RNS) promote tissue destruction in inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. However, agents that activate ROS production by NADPH oxidase reduce inflammation in experimental models. Considering the controversial participation of via NO-cGMP in nociception, inhibitors of phosphodiesterase-5 have controversial role in models of pain. In this study, it was investigated the effect of phytol, an activating of NADPH oxidase, and tadalafil, a phosphodiesterase-5 inhibitor, in models of zymosan-induced arthritis (ZyA) and Zy-induced peritonitis as well as osteoarthritis by anterior cruciate ligament transection (ACLT) and acetic acid writhing. In ZyA, rats and mice received 1 mg and 100 Âg zymosan intra-articular (i.art.), respectively. In peritonitis or writhing, mice received 100 Âg of Zy or acetic acid intraperitoneal (i.p.), respectively. In osteoarthritis, rats underwent ACLT. Rats received phytol subcutaneous (s.c) 30 min â 8 d before ZyA or tadalafil orally (p.o.) 2 h after Zy. Other rats received SIN-1 (i.art.), ODQ (i.art.) or naloxone (i.p.) 1.5 â 2 h after Zy. Mice received phytol s.c. 1 â 24 h before Zy i.art.. Other mice received phytol i.art. 1 h before or 1.5 h after Zy. In peritonitis or writhing, phytol s.c. was injected 30 min â 24 h before Zy or acetic acid, respectively. In osteoarthritis, it was done one s.c. phytol administration 5 d before and 35 d after ACLT or tadalafil p.o. from 4 â 7 d after ACLT. Control groups received Zy i.art. or i.p. or acetic acid or were submitted to ACLT. The hypernociception was assessed by articular incapacitation test recorded as paw elevation time - PET. Cell influx (CI) was quantified in joint lavage after 6 h or 7 d of ZyA and in peritoneal lavage after 4 h of peritonitis. NO, IL-1, TNF-&#945;, IL-10 and CINC-1 were measured in acute articular supernatant in rats while cartilage glycosaminoglycans (GAGs) were quantified after 7 d of ZyA in rats. Results were expressed as mean  SEM, submitted to ANOVA and Tukey test or to Studentâs t test (P <0.05). In writhing, data were expressed as median and submitted to the Kruskal-Wallis test (P<0.05). In ZyA, systemic (s.c.) and prophylactic administration of phytol decreased acute CI, independent of dose and time of administration, in mice. Local (i.art.) prophylactic or therapy injection of phytol decreased significantly CI in mice submitted to ZyA. Similar to the acute phase, phytol reduced significantly chronic CI. In ZyA in rats, phytol decreased acute and chronic CI as well as PET. As to GAGs, there was significant increase by phytol, reaching a level similar to naive animals. In peritonitis or writhing, phytol decreased CI or number of writhing, respectively, regardless of administration time. In osteoarthritis, phytol decreased significantly PET on days 1, 7, 9 and 11 as well as the peak between 4th and 7th d after ACLT. NO, IL-1, TNF-&#945; and IL-10 were reduced in ZyA too. As tadalafil, there was decreased acute IC and PET, in a dose-dependent, in ZyA in rats. ODQ, administered prior tadalafil, reversed tadalafil effect about CI and PET in ZyA, that didnât happen with a prior injection of naloxone. Tadalafil reduced TNF-&#945; and IL-10 in ZyA and PET in osteoarthritis. The results show that phytol promotes anti-inflammatory and antinociceptive effects species, stimulus, tissue and route of administration independent. These actions are associate with the local release of NO and cytokines. In parallel, tadalafil has similar anti-inflammatory and antinociceptive effects associated with the lock on the local release of TNF. These findings suggest that activators of NADPH oxidase, possibly from compounds in the diet, modify the natural history of inflammatory arthropathy. The antinociceptive effect of phosphodiesterase-5 inhibitors should be explored, since these compounds are progressive indication in inflammatory diseases that occur with vascular damage and hypoxia.<br>EspÃcies reativas de oxigÃnio (EROs) e nitrogÃnio (ERNs) promovem destruiÃÃo tecidual em doenÃas inflamatÃrias, como artrite reumatoide. Entretanto, agentes ativadores de NADPH oxidase, produtores de EROs, reduzem o processo inflamatÃrio em modelos experimentais. Considerando-se a participaÃÃo controversa da via NO-GMPc na nocicepÃÃo, inibidores de 5-fosfodiesterase tÃm papel contraditÃrio em modelos de dor. Nesse trabalho, investigou-se o efeito do fitol, um ativador de NADPH oxidase, e tadalafil, um inibidor de 5-fosfodiesterase, em modelos de artrite induzida por zymosan (AZy) e peritonite induzida por Zy, bem como em osteoartrite por transecÃÃo do ligamento cruzado anterior (TLCA) e contorÃÃo abdominal por Ãcido acÃtico. Na AZy, ratos e camundongos receberam 1 mg e 100 Âg de Zy intra-articular (i.art.), respectivamente. Na peritonite ou contorÃÃo, camundongos receberam 100 Âg de Zy ou Ãcido acÃtico intraperitoneal (i.p.), respectivamente. Na osteoartrite, ratos foram submetidos à TLCA. Ratos receberam fitol subcutÃneo (s.c.) 30 min â 8 d antes da AZy ou tadalafil via oral (v.o.) 2 h apÃs Zy. Outros ratos receberam SIN-1 (i.art.), ODQ (i.art.) ou naloxona (i.p.) 1,5 â 2 h apÃs Zy. Camundongos receberam fitol s.c. 1 â 24 h antes do Zy i.art.. Outros camundongos receberam fitol i.art. 1 h antes ou 1,5 h apÃs Zy. Na peritonite ou contorÃÃo, fitol s.c. foi injetado 30 min â 24 h antes do Zy ou Ãcido acÃtico, respectivamente. Na osteoartrite, foi feita a administraÃÃo de fitol s.c. 5 d antes e 35 d depois da TLCA ou de tadalafil v.o do 4 â 7 d apÃs TLCA. Grupos controles receberam Zy i.art. ou i.p. ou Ãcido acÃtico ou foram submetidos à TLCA. A hipernocicepÃÃo foi avaliada pelo teste de incapacitaÃÃo articular, registrada como tempo de suspensÃo da pata â TSP. O influxo celular (IC) foi quantificado no lavado articular, apÃs 6 h ou 7 d da AZy e, no lavado peritoneal, apÃs 4 h da peritonite. NO, IL-1, TNF-&#945;, IL-10 e CINC-1 foram medidos no sobrenadante articular agudo em ratos, enquanto os glicosaminoglicanos (GAGs) da cartilagem foram quantificados apÃs 7 d da AZy em ratos. Resultados foram expressos como mÃdia  e.p.m., submetidos à ANOVA e teste de Tukey ou ao teste t de Student (P<0,05). Na contorÃÃo, dados foram expressos em mediana e submetidos ao teste de Kruskal-Wallis (P<0,05). Na AZy, a administraÃÃo sistÃmica (s.c.) e profilÃtica de fitol diminuiu IC agudo, independente da dose e tempo de administraÃÃo, em camundongos. A injeÃÃo local (i.art.) profilÃtica ou terapÃutica de fitol diminuiu de forma significativa IC em camundongos submetidos à AZy. Semelhante à fase aguda, fitol reduziu significativamente IC crÃnico. Na AZy em ratos, fitol diminuiu IC agudo e crÃnico, bem como TSP. Quanto aos GAGs, houve aumento significativo pelo fitol, atingindo nÃvel semelhante ao dos animais naive. Na peritonite ou contorÃÃo, fitol reduziu IC ou nÃmero de contorÃÃes, respectivamente, independente do tempo de administraÃÃo. Na osteoartrite, fitol reduziu significativamente TSP nos dias 1, 7, 9 e 11, bem como no pico entre 4 e 7 d apÃs TLCA. NO, IL-1, TNF-&#945; e IL-10 tambÃm foram reduzidos na AZy. Quanto ao tadalafil, houve diminuiÃÃo do IC agudo e TSP, de forma dose-dependente, na AZy em ratos. ODQ, administrado previamente ao tadalafil, reverteu o efeito do tadalafil sobre IC e TSP na AZy, o que nÃo ocorreu com a injeÃÃo prÃvia de naloxona. Tadalafil reduziu TNF-&#945; e IL-10 na AZy e o TSP na osteoartrite. Os resultados mostram que fitol promove efeitos antiinflamatÃrios e antinociceptivos independente da espÃcie, estÃmulo, tecido e via de administraÃÃo. Essas aÃÃes se associam à reduÃÃo na liberaÃÃo local de NO e citocinas. Paralelamente, tadalafil tem efeito antiinflamatÃrio e antinociceptivo similar, associado ao bloqueio na liberaÃÃo local de TNF. Esses achados sugerem que ativadores de NADPH oxidase, possivelmente a partir de compostos da dieta, modifiquem a histÃria natural de artropatias inflamatÃrias. O efeito antinociceptivo de inibidores de 5-fosfodiesterase deve ser explorado, uma vez que esses compostos encontram progressiva indicaÃÃo em patologias inflamatÃrias que cursam com dano vascular e hipÃxia.

LEITE, Ana Caroline Rocha de Melo. Efeitos antiinflamatórios e antinociceptivos do fitol, um ativador de NADPH oxidase, e tadalafil, um inibidor de 5-fosfodiesterase, em modelos experimentais. Fortaleza, CE, 119 f. Tese (Doutorado) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Fortaleza, 2010.<br>Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-05T13:21:05Z No. of bitstreams: 1 2010_tese_acrmleite.pdf: 1394350 bytes, checksum: 3e38574f74cf12a0cefe12cf1c1e4a60 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-07T16:56:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_tese_acrmleite.pdf: 1394350 bytes, checksum: 3e38574f74cf12a0cefe12cf1c1e4a60 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2011-10-07T16:56:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_tese_acrmleite.pdf: 1394350 bytes, checksum: 3e38574f74cf12a0cefe12cf1c1e4a60 (MD5) Previous issue date: 2010<br>Reactive oxygen species (ROS) and nitrogen (RNS) promote tissue destruction in inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. However, agents that activate ROS production by NADPH oxidase reduce inflammation in experimental models. Considering the controversial participation of via NO-cGMP in nociception, inhibitors of phosphodiesterase-5 have controversial role in models of pain. In this study, it was investigated the effect of phytol, an activating of NADPH oxidase, and tadalafil, a phosphodiesterase-5 inhibitor, in models of zymosan-induced arthritis (ZyA) and Zy-induced peritonitis as well as osteoarthritis by anterior cruciate ligament transection (ACLT) and acetic acid writhing. In ZyA, rats and mice received 1 mg and 100 µg zymosan intra-articular (i.art.), respectively. In peritonitis or writhing, mice received 100 µg of Zy or acetic acid intraperitoneal (i.p.), respectively. In osteoarthritis, rats underwent ACLT. Rats received phytol subcutaneous (s.c) 30 min – 8 d before ZyA or tadalafil orally (p.o.) 2 h after Zy. Other rats received SIN-1 (i.art.), ODQ (i.art.) or naloxone (i.p.) 1.5 – 2 h after Zy. Mice received phytol s.c. 1 – 24 h before Zy i.art.. Other mice received phytol i.art. 1 h before or 1.5 h after Zy. In peritonitis or writhing, phytol s.c. was injected 30 min – 24 h before Zy or acetic acid, respectively. In osteoarthritis, it was done one s.c. phytol administration 5 d before and 35 d after ACLT or tadalafil p.o. from 4 – 7 d after ACLT. Control groups received Zy i.art. or i.p. or acetic acid or were submitted to ACLT. The hypernociception was assessed by articular incapacitation test recorded as paw elevation time - PET. Cell influx (CI) was quantified in joint lavage after 6 h or 7 d of ZyA and in peritoneal lavage after 4 h of peritonitis. NO, IL-1, TNF-α, IL-10 and CINC-1 were measured in acute articular supernatant in rats while cartilage glycosaminoglycans (GAGs) were quantified after 7 d of ZyA in rats. Results were expressed as mean ± SEM, submitted to ANOVA and Tukey test or to Student’s t test (P <0.05). In writhing, data were expressed as median and submitted to the Kruskal-Wallis test (P<0.05). In ZyA, systemic (s.c.) and prophylactic administration of phytol decreased acute CI, independent of dose and time of administration, in mice. Local (i.art.) prophylactic or therapy injection of phytol decreased significantly CI in mice submitted to ZyA. Similar to the acute phase, phytol reduced significantly chronic CI. In ZyA in rats, phytol decreased acute and chronic CI as well as PET. As to GAGs, there was significant increase by phytol, reaching a level similar to naive animals. In peritonitis or writhing, phytol decreased CI or number of writhing, respectively, regardless of administration time. In osteoarthritis, phytol decreased significantly PET on days 1, 7, 9 and 11 as well as the peak between 4th and 7th d after ACLT. NO, IL-1, TNF-α and IL-10 were reduced in ZyA too. As tadalafil, there was decreased acute IC and PET, in a dose-dependent, in ZyA in rats. ODQ, administered prior tadalafil, reversed tadalafil effect about CI and PET in ZyA, that didn’t happen with a prior injection of naloxone. Tadalafil reduced TNF-α and IL-10 in ZyA and PET in osteoarthritis. The results show that phytol promotes anti-inflammatory and antinociceptive effects species, stimulus, tissue and route of administration independent. These actions are associate with the local release of NO and cytokines. In parallel, tadalafil has similar anti-inflammatory and antinociceptive effects associated with the lock on the local release of TNF. These findings suggest that activators of NADPH oxidase, possibly from compounds in the diet, modify the natural history of inflammatory arthropathy. The antinociceptive effect of phosphodiesterase-5 inhibitors should be explored, since these compounds are progressive indication in inflammatory diseases that occur with vascular damage and hypoxia.<br>Espécies reativas de oxigênio (EROs) e nitrogênio (ERNs) promovem destruição tecidual em doenças inflamatórias, como artrite reumatoide. Entretanto, agentes ativadores de NADPH oxidase, produtores de EROs, reduzem o processo inflamatório em modelos experimentais. Considerando-se a participação controversa da via NO-GMPc na nocicepção, inibidores de 5-fosfodiesterase têm papel contraditório em modelos de dor. Nesse trabalho, investigou-se o efeito do fitol, um ativador de NADPH oxidase, e tadalafil, um inibidor de 5-fosfodiesterase, em modelos de artrite induzida por zymosan (AZy) e peritonite induzida por Zy, bem como em osteoartrite por transecção do ligamento cruzado anterior (TLCA) e contorção abdominal por ácido acético. Na AZy, ratos e camundongos receberam 1 mg e 100 µg de Zy intra-articular (i.art.), respectivamente. Na peritonite ou contorção, camundongos receberam 100 µg de Zy ou ácido acético intraperitoneal (i.p.), respectivamente. Na osteoartrite, ratos foram submetidos à TLCA. Ratos receberam fitol subcutâneo (s.c.) 30 min – 8 d antes da AZy ou tadalafil via oral (v.o.) 2 h após Zy. Outros ratos receberam SIN-1 (i.art.), ODQ (i.art.) ou naloxona (i.p.) 1,5 – 2 h após Zy. Camundongos receberam fitol s.c. 1 – 24 h antes do Zy i.art.. Outros camundongos receberam fitol i.art. 1 h antes ou 1,5 h após Zy. Na peritonite ou contorção, fitol s.c. foi injetado 30 min – 24 h antes do Zy ou ácido acético, respectivamente. Na osteoartrite, foi feita a administração de fitol s.c. 5 d antes e 35 d depois da TLCA ou de tadalafil v.o do 4 – 7 d após TLCA. Grupos controles receberam Zy i.art. ou i.p. ou ácido acético ou foram submetidos à TLCA. A hipernocicepção foi avaliada pelo teste de incapacitação articular, registrada como tempo de suspensão da pata – TSP. O influxo celular (IC) foi quantificado no lavado articular, após 6 h ou 7 d da AZy e, no lavado peritoneal, após 4 h da peritonite. NO, IL-1, TNF-α, IL-10 e CINC-1 foram medidos no sobrenadante articular agudo em ratos, enquanto os glicosaminoglicanos (GAGs) da cartilagem foram quantificados após 7 d da AZy em ratos. Resultados foram expressos como média ± e.p.m., submetidos à ANOVA e teste de Tukey ou ao teste t de Student (P<0,05). Na contorção, dados foram expressos em mediana e submetidos ao teste de Kruskal-Wallis (P<0,05). Na AZy, a administração sistêmica (s.c.) e profilática de fitol diminuiu IC agudo, independente da dose e tempo de administração, em camundongos. A injeção local (i.art.) profilática ou terapêutica de fitol diminuiu de forma significativa IC em camundongos submetidos à AZy. Semelhante à fase aguda, fitol reduziu significativamente IC crônico. Na AZy em ratos, fitol diminuiu IC agudo e crônico, bem como TSP. Quanto aos GAGs, houve aumento significativo pelo fitol, atingindo nível semelhante ao dos animais naive. Na peritonite ou contorção, fitol reduziu IC ou número de contorções, respectivamente, independente do tempo de administração. Na osteoartrite, fitol reduziu significativamente TSP nos dias 1, 7, 9 e 11, bem como no pico entre 4º e 7º d após TLCA. NO, IL-1, TNF-α e IL-10 também foram reduzidos na AZy. Quanto ao tadalafil, houve diminuição do IC agudo e TSP, de forma dose-dependente, na AZy em ratos. ODQ, administrado previamente ao tadalafil, reverteu o efeito do tadalafil sobre IC e TSP na AZy, o que não ocorreu com a injeção prévia de naloxona. Tadalafil reduziu TNF-α e IL-10 na AZy e o TSP na osteoartrite. Os resultados mostram que fitol promove efeitos antiinflamatórios e antinociceptivos independente da espécie, estímulo, tecido e via de administração. Essas ações se associam à redução na liberação local de NO e citocinas. Paralelamente, tadalafil tem efeito antiinflamatório e antinociceptivo similar, associado ao bloqueio na liberação local de TNF. Esses achados sugerem que ativadores de NADPH oxidase, possivelmente a partir de compostos da dieta, modifiquem a história natural de artropatias inflamatórias. O efeito antinociceptivo de inibidores de 5-fosfodiesterase deve ser explorado, uma vez que esses compostos encontram progressiva indicação em patologias inflamatórias que cursam com dano vascular e hipóxia.

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas<br>Made available in DSpace on 2018-08-10T04:12:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_CamilaBononide_M.pdf: 1751160 bytes, checksum: 34725ba06e7511a0cd3632322e61fd59 (MD5) Previous issue date: 2006<br>Resumo: A anemia falciforme é um distúrbio genético causado por uma mutação de ponto (Ácido Glutâmico-Valina) que produz uma hemoglobina S. Esta, quando desoxigenada, polimeriza causando deformação dos eritrócitos que se agregam às paredes da micro circulação culminando em crises vaso-oclusivas. Existem algumas moléculas de adesão que colaboram no bloqueio da circulação aderindo eritrócitos, células brancas e plaquetas à parede dos túbulos sanguíneos. A hidroxiuréia (HU) vem sendo utilizada no tratamento da doença devido à sua habilidade em aumentar a produção de hemoglobina fetal (HbF). No entanto, nem todos os pacientes respondem positivamente ao tratamento com HU. Estudos mostram que a HU quando degradada, produz óxido nítrico (NO), o qual ativa a enzima guanilato ciclase solúvel (GCs). Esta, por sua vez, transforma GTP em GMPc que atua como segundo mensageiro ativando provavelmente a transcrição do gene ?-globina aumentando assim, a concentração de HbF e melhorando o quadro clínico dos pacientes com essa doença. Por isso, o NO tornou-se fonte de grandes estudos, uma vez que é um importante vasodilatador. O objetivo desse trabalho foi elucidar qual família de fosfodiesterase (PDE) atua na degradação do GMPc das células de linhagem eritróide e se as drogas inibidoras dessas PDEs seriam capazes de aumentar a produção de ?-globina e conseqüentemente HbF em células eritróides de cultura. Para isso foram realizadas culturas de células K562 tratadas com diferentes drogas inibidoras de PDE (vinpocetina, sildenafil, dipiridamol e zaprinast) e com estimulador de guanilato ciclase, BAY41-2272. Observamos que os níveis de GMPc aumentaram principalmente nas células tratadas com 10µg/ml de dipiridamol e em alguns pontos de coletas com 10 e 50µM de vinpocetina. O mesmo não foi observado nas células tratadas com sildenafil e zaprinast. No entanto, todas as células tratadas com as diferentes concentrações de BAY41-2272 apresentaram aumento na concentração de GMPc. Com relação à expressão gênica relativa de ?-globina, observamos que as drogas dipiridamol, vinpocetina, sildenafil e zaprinast não foram capazes de provocar um aumento da expressão. Diferentemente, BAY41-2272 estimulou um aumento da expressão de ?-globina nas células K562 tratadas com 60 e 300nM após 48 horas de cultura. Além disso, estudamos a expressão das PDEs 1, 5 e 9 em células hematopoéticas e diferentes tecidos. Observamos que PDE9 é significativamente mais expressa em células K562, reticulócitos e neutrófilos. Além disso, observamos também que a expressão dessa PDE é significativamente maior nos reticulócitos e neutrófilos de paciente com anemia falciforme. Já naqueles que se encontravam sob terapia com HU, a expressão da PDE9 nos reticulócitos reverteu aos níveis do controle diferentemente dos neutrófilos, cuja expressão de PDE9 não se alterou entre os pacientes com ou sem terapia com HU. A expressão da PDE9 em outros tecidos (T98G, cólon, ovário, mama, fígado, pele, baço, testículo, útero e linfonodo) é significativamente menor do que nestas células hematopoéticas. Assim sendo, como aumento nos níveis celulares de GMPc pode ser importante tanto para a produção de HbF em células eritróides como para inibir a adesão de leucócitos, bloquear a ação da PDE9 pode representar uma nova estratégica célula-especifica para o tratamento da anemia falciforme<br>Abstract: Sickle cell disease (SCD) is a systemic disease with a multifaceted pathophysiology; the polymerisation of the sickle haemoglobin molecule (HbS), when deoxygenated, has many consequences that include haemolysis, inflammation, dysregulated nitric oxide (NO) homeostasis and oxidative abnormalities. Agents, such as hydroxyurea (HU), that increase levels of fetal hemoglobin (HbF), with consequent inhibition of HbS polymerization, and that may counteract other aspects of the disease's pathophysiology characterize important therapies for the disorder. Whilst HU therapy successfully augments HbF levels in many patients, not all patients respond to treatment. Studies demonstrate that HU, when degraded, produces nitric oxide (NO), in turn activating the enzyme, soluble guanylate cyclase (GC) in erythroid lineage cells. GC converts GTP to cGMP, which acts as a second messenger for NO, possibly activating the transcription of the ?-globin gene and, consequently, increasing the concentration of HbF. Due to evidence that NO bioavailability may be decreased in SCD individuals, recent research into SCD has focused on the role of NO in the disease, particularly since this gas is an important vasodilator. The objective of this study was to investigate which family(ies) of phosphodiesterases (PDE) may mediate the degradation of cGMP in erythroid lineage cells and whether drugs that inhibit these PDEs are capable of augmenting the production of ?-globin and, consequently, HbF in erythroid cells in culture. For this, cultures of K562 erythroleukemic cells were treated with different PDE inhibitors; vinpocetine, sildenafil citrate, dipyridamole and zaprinast. In addition, cultures were also treated with the guanylate cyclase stimulator, BAY41-2272. Increased levels of cGMP were observed principally in cells treated with 10µg/ml dipyridamole and at some time-points in the presence of 10 and 50µM vinpocetine. No changes in cGMP levels were observed in cells treated with sildenafil nor with zaprinast. However, cells treated with BAY 41-2272 demonstrated augmented cGMP levels at all concentrations used. With regard to relative ?-globin gene expression, dipyridamole, vinpocetine, sildenafil and zaprinast did not increase ?-globin gene expression; in contrast, BAY 41-2272 (60 and 300nM) stimulated increased ?-globin expression after 48h of culture. The gene expressions of PDEs 1, 5 and 9 were also studied in different hematopoietic cell types and other tissues. PDE9 is expressed, at significantly higher levels, in K562 cells (erythroleukemic cells), reticulocytes and neutrophils than in numerous other cell types tested (T98G, colon, mammary, ovary, testicle, liver, skin, spleen, uterus, limphonode). Furthermore, the expression of this PDE was even higher in the reticulocytes and neutrophils of patients with SCD. In patients on HU therapy, the expression of PDE9 in reticulocytes was reversed back to levels similar to those seen in controls. In contrast, PDE9 expression in neutrophils was similar in patients on or of HU therapy. Thus, since the increase in intracellular levels of cGMP may be important for the production of HbF in erythroid cells and also to inhibit leukocyte adhesion, the inhibition of the action of PDE9 may represent a novel drug target for cell-specific treatment of SCD<br>Mestrado<br>Ciencias Basicas<br>Mestre em Clinica Medica

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico<br>Ethanol consumption during gestation is a serious public health problem. During development, the nervous system is particularly susceptible to the toxic effects of ethanol and, in fact, ethanol exposure during perinatal development produces a range of neurobehavioral deficits, among which hyperactivity is one of the most frequently observed. There is evidence that reduced neuronal plasticity could be associated with hiperactivity. PDE inhibitors are drugs that prevent the breakdown of intracellular second-messengers such as cAMP and cGMP, maintaining the activation of protein kinases and of the CREB transcription factor, leading to the expression of plasticity-related genes. In this study we test whether Vinpocetine or Rolipram (PDE inhibitors) treatment can improve or revert hyperactivity in Swiss exposed to alcohol during the third trimester equivalent of human gestation. To that end, two experiments were carried out: In the first one, from postnatal day (PN) 2 to PN8, litters either received ethanol (5g/Kg i.p., 25% in saline solution) or an equivalent volume of saline solution every other day. On PN30, 4 h before the open field test (which lasted for 10 min) animals received Vinpocetine (10mg/Kg or 20mg/Kg diluted in DMSO i.p.) or dimethylsulfoxide (DMSO i.p.). In the second experiment animals were treated almost as before receiving Rolipram (0.5mg/Kg diluted in DMSO i.p.), instead of Vinpocetine, or DMSO i.p. After the tests, animals were sacrificed and frontal cerebral cortices and hippocampuses were dissected and collected for the analysis of cAMP levels. Behavioral results showed that only the Vinpocetine treatment (20mg/Kg) reversed the ethanol-elicited hyperactivity, a result that was not observed for the Rolipram treatment. In this way, the dosage of cAMP levels was done only for the animals that received received Vinpocetine (20mg/Kg). Ethanol neonatal exposure significantly reduced cAMP levels both in the cortex and in the hippocampus. Vinpocentine treatment increased cAMP levels in the cortex and restored it in the hippocampus. Our results suggest that the amelioration of the ethanolinduced hyperactivity by Vinpocetine is linked to an increased neuronal plasticity induced by this drug.<br>O consumo de etanol durante a gestação é um grave problema de saúde pública. Durante o desenvolvimento, o sistema nervoso é especialmente susceptível aos efeitos tóxicos do etanol e a exposição ao etanol durante este período pode gerar um amplo espectro de distúrbios neurocomportamentais, sendo o mais frequente, a hiperatividade. Recentemente, estudos têm sugerido que distúrbios na plasticidade neuronal podem estar relacionados com a hiperatividade. Os inibidores de PDE são drogas que agem impedindo a degradação de segundos mensageiros celulares como AMPc e GMPc, mantendo a ativação de proteínas quinases e de fatores de transcrição como o CREB, levando a expressão de genes relacionados à plasticidade. Neste trabalho, avaliamos através do teste de campo aberto se a administração de Vinpocetina ou Rolipram (inibidores de PDE) seria capaz de amenizar ou reverter a hiperatividade de camundongos Suíços expostos ao etanol no período correspondente ao terceiro trimestre de gestação humana. Para tanto, foram realizadas duas etapas: na primeira etapa, durante o período neonatal, os animais receberam injeções intraperitoneais de etanol (5g/Kg em solução salina a 25%, no 2, 4, 6 e 8 dias de vida pós-natal - PN2 a PN8) ou de salina, e 4 horas antes do teste comportamental no campo aberto (10 min), em PN30, receberam Vinpocetina (10mg/Kg ou 20mg/Kg diluídas em DMSO ip) ou somente DMSO ip. Na segunda etapa, os animais foram expostos ao etanol ou à salina no período neonatal nas mesmas condições da primeira etapa e no dia do teste comportamental receberam Rolipram (0,5mg/Kg diluídas em DMSO ip ou somente DMSO ip). Posteriormente aos testes, foram coletados o córtex cerebral frontal e o hipocampo dos animais para avaliação dos níveis de AMPc. Os resultados comportamentais indicam que somente o tratamento com Vinpocetina (20mg/Kg) reverteu a hiperatividade de camundongos expostos ao etanol, resultado que não foi observado com o tratamento com Rolipram. Desta forma, a dosagem dos níveis de AMPc foi realizada apenas nos animais que receberam injeção de Vinpocetina (20mg/Kg). A exposição neonatal ao etanol reduziu significativamente os níveis de AMPc no córtex e no hipocampo. O tratamento com Vinpocetina gerou um aumento nos níveis de AMPc no córtex e restaurou estes níveis no hipocampo. Nossos resultados sugerem que a reversão da hiperatividade pelo tratamento com Vinpocetina pode estar associada ao aumento da plasticidade neural induzida por esta droga.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-07-13T17:12:13Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese completa final.pdf: 16433373 bytes, checksum: 4fb5e2d57332bcee63dcfd63d64a9b42 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-07-13T17:12:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese completa final.pdf: 16433373 bytes, checksum: 4fb5e2d57332bcee63dcfd63d64a9b42 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19<br>O Sildenafil (Viagra®) é um inibidor potente e seletivo da fosfodiesterase-5 (PDE5), enzima responsável pela hidrólise do monofosfato de guanosina cíclico (GMPc). Tem sido demonstrado que Sildenafil tem potencial eficácia em desordens patológicas de carater neuroinflamatório e neurodegenrativo no sistema nervoso central (SNC). A inflamação cerebral é mediada/modulada por citocinas pró-inflamatórias e pelo NO e exerce um papel central em numerosas patologias do cérebro, incluindo a esclerose múltipla (EM). A EM é uma doença inflamatória crônica, com início típico durante os anos produtivos (entre 20 e 50 anos), caracterizada por desmielinização das células nervosas, que leva à severa deficiência psicomotora. Recentemente foi demonstrado que a administração de Sildenafil promoveu a inativação das células microgliais e astrocitária, reduziu os fenômenos inflamatórios e danos causados à mielina em modelo de EM. No entanto, o mecanismo de ação desse fármaco ainda é desconhecido. Desta forma, o presente estudo investigou os efeitos do Sildenafil sobre os mecanismos regulatórios do processso na neuroinflamação em modelo de desmielinização induzido por Cuprizona. Os resultados demonstraram que Sildenafil 25 mg/kg reduziu a expressão das citocinas inflamatórias IL-1β e TNF-α e aumentou a expressão da citocina antiinflamatória IL-10. Em adição, o tratamento com Sildenafil reduziu a expressão de de GFAP (gliose), NFκB (fator de transcrição nuclear para citocinas), AMPK inativo (proteina reguladora de metabolismo) e iNOS (sintase de óxido nítrico induzível) e aumentou o IKBα (proteína inibitória NFκB). Os efeitos do sildenafil sobre a remielinização foi observado através de imagens por ressonância magnética, que demonstrou recuperação de tecido neuronal degenerado (corpo caloso). Além disso, o tratamento aumentou a expressão de MMP-9,MCP-1/CCR-2, contribuindo possivelmente para a troca de fenótipo microglial, que favorece a limpeza de debris mielínicos. Em paralelo, a integridade da mielina foi demonstrada através do aumento da marcação para oligodendrócitos maduros (GST-pi), proteína básica da mielina (MBP) e organização de lamelas mielínicas. Em camundongos knockout iNOS-/-, Sildenafil reduziu os níveis de IL-1β, Iba-1, IFN-γ e não alterou a expressão de GFAP, TNF-α e COX-2. Sildenafil elevou os níveis GST-pi e melhorou a estrutura da mielina.Os efeitos do Sildenafil sobre as células astrocitárias demonstrou que o tratamento preventivo e terapêutico foram eficiente em reduzir a gliose astrocitária induzido por LPS. Além disso, os tratamentos com sildenafil promoveu diminuição das ondas de cálcio e do estresse fibras de actina. Diante disso, o presente estudo propõe que o mecanismo de ação envolve a via AMPK–eNOS-IKβα–NFκB, bem como ação de MMP-9 e MCP-1/ CCR-2 no processo de remielinização. O presente estudo abre novas possibilidades de investigação para o tratamento de doenças neurodegenerativas, tais como a esclerose múltipla<br>Sildenafil (Viagra) is a potent and selective inhibitor of phosphodiesterase type 5 (PDE5), the enzyme responsible for the hydrolysis of cyclic guanosine monophosphate (cGMP). It has been shown that sildenafil has potential efficacy in pathological disorders and neuroinflammatory character neurodegenrativo the central nervous system (CNS). Cerebral inflammation is mediated / modulated by pro-inflammatory cytokines and NO by and plays a central role in numerous pathologies of the brain including multiple sclerosis (MS). MS is a chronic inflammatory disease with typical onset during the productive years (20 to 50), characterized by demyelination of the nerve cells, which leads to severe psychomotor impairment. It has recently been shown that sildenafil promoted inactivation of microglial cells and astrocytes, reduced inflammatory phenomena and damage to myelin in MS model. However, the mechanism of action of this drug is still unknown. Thus, the present study investigated the effects of Sildenafil on the regulatory mechanisms in the processso in neuroinflammation model of demyelination induced cuprizone. The results showed that Sildenafil 25 mg / kg reduced the expression of inflammatory cytokines IL-1β and TNF-α expression and increased anti-inflammatory cytokine IL-10. In addition, treatment with sildenafil reduced expression of GFAP (glial), NFκB (nuclear transcription factor cytokines), inactive AMPK (regulating protein metabolism) and iNOS (nitric oxide synthase) and increased IKBα (protein NFκB inhibitory). The effects of sildenafil on remyelination was observed by magnetic resonance imaging, which showed recovery of degenerated neuronal tissue (corpus callosum). Furthermore, the treatment increased the expression of MMP-9, MCP-1 / CCR-2, possibly contributing to the exchange of microglial phenotype, which favors the cleaning of myelin debris. In parallel, the integrity of the myelin has been demonstrated by increasing the marking to mature oligodendrocytes (GST-pi), myelin basic protein (MBP) and myelin lamellae organization. In knockout mice iNOS - / - Sildenafil reduced IL-1β levels, Iba-1, IFN-γ and did not alter the expression of GFAP, TNF-α and COX-2. Sildenafil raised the GST-pi levels and improved the structure of mielina.Os effects of sildenafil on astrocytic cells demonstrated that the preventive and therapeutic treatment were effective in reducing astrocytic gliosis induced by LPS. In addition, treatment with sildenafil promoted reduction of calcium waves and actin stress fibers. Thus, the present study suggests that the mechanism of action involves the AMPK-eNOS-IKβα-NFκB and MMP-9 activity and MCP-1 / CCR-2 in the remyelination process. This study opens new possibilities for research into the treatment of neurodegenerative diseases such as multiple sclerosis

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2014.<br>Made available in DSpace on 2015-02-05T20:35:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330195.pdf: 1831812 bytes, checksum: f6a68fbb57eacf59ff3ac3dff0a9e6d9 (MD5) Previous issue date: 2014<br>Abstract : Introdução: Nas últimas décadas, descobriu-se que o adipócito era capaz de secretar adipocinas e citocinas com funções autócrinas, parácrinas e sistêmicas, que influenciavam de maneira importante, todo o metabolismo dos organismos vivos. Dentre os fatores associados aos distúrbios da biologia do adipócito, podemos destacar o estresse oxidativo, intimamente relacionado à formação dos produtos finais de glicação avançada (AGEs). Esparsos trabalhos na literatura têm procurado elucidar o papel da via do óxido nítrico (NO.) na fisiologia do tecido adiposo. Essa via, por meio do aumento das concentrações de guanosina 3'5' monofosfato cíclico (GMPc), promove efeitos positivos na biologia do adipócito, e consequentemente maior equilíbrio no balanço energético e metabolismo sistêmicos. Outra maneira de incrementar as concentrações de GMPc é por meio da administração de inibidores da fosfodiesterase 5, medicamentos que no futuro talvez sejam úteis nos distúrbios do tecido adiposo, como a obesidade, e suas consequências. Objetivos: Identificar o impacto de uma dieta hipercalórica e hiperlipídica (dieta de cafeteria) sobre a variação do peso corporal, a ingestão alimentar, a resistência à ação da insulina, as concentrações séricas de adiponectina, bem como nas concentrações de fator de necrose tumoral a (TNFa), interleucina 6 (IL-6), NO. e AGEs no tecido adiposo visceral. Analisar o efeito do tadalafil na intensidade da resistência à insulina, nas concentrações séricas de adiponectina, assim como nas concentrações de TNFa, IL-6 e AGEs no tecido adiposo visceral. Métodos: Estudo analítico experimental controlado e com intervenção, envolvendo um total de 72 ratos machos Wistar, distribuídos em 06 subgrupos de 12 animais: subgrupo ração salina ? SGRS, recebeu ração e solução salina; subgrupo ração tadalafil - SGRT, recebeu ração e tadalafil; subgrupo ração magro - SGRM, recebeu ração e solução salina; subgrupo cafeteria salina - SGCS, recebeu dieta de cafeteria e solução salina; subgrupo cafeteria tadalafil - SGCT, recebeu dieta de cafeteria e tadalafil e subgrupo cafeteria magro - SGCM, recebeu dieta de cafeteria e solução salina. O estudo teve a duração de 10 semanas, e o peso dos animais e a ingestão alimentar foram registrados semanalmente. Foram mensuradas as concentrações séricas de insulina e adiponectina, bem como as concentrações de TNFa, IL-6, nitrito (metabólito do NO.) e compostos de Maillard (equivalente aos AGEs) no tecido adiposo, sendo que todo o material foi coletado no momento do sacrifício dos animais. Na análise estatística foram empregados os testes ANOVA one way com correção de Tukey,ANOVA two way e teste t pareado. Resultados: Foi observado um aumento significativo do peso corporal ao longo do estudo em todos os subgrupos. A média de peso final aos 60 dias foi superior nos animais alimentados com dieta de cafeteria. A ingestão alimentar em gramas foi maior nos animais alimentados com ração. Os animais alimentados com dieta de cafeteria apresentavam uma maior expansão do tecido adiposo. As médias do modelo de avaliação da homeostase para resistência à insulina (HOMA-IR) entre os subgrupos no final do acompanhamento não foram diferentes. A proporção da adiponectina sérica em relação ao tecido adiposo total foi maior nos animais que receberam dieta balanceada, e as concentrações de IL-6 foram maiores nos animais que receberam dieta de cafeteria. A concentração de nitrito foi maior nos animais submetidos à dieta balanceada. As concentrações médias de compostos de Maillard foram maiores nos animais submetidos à dieta de cafeteria e nos animais de maior peso. Nos animais submetidos à dieta de cafeteria e tadalafil a concentração de compostos de Maillard foi menor. Conclusão: A dieta de cafeteria por 60 dias, apesar de mais sacietógena, levou a uma média de peso ponderal e tecido adiposo visceral superiores nos animais a ela submetidos sem, no entanto, induzir a um aumento expressivo da resistência à ação da insulina. Apesar da expansão do tecido adiposo total, a dieta de cafeteria não foi capaz de aumentar proporcionalmente as concentrações de adiponectina, sugerindo a interferência de outros fatores na fisiologia desta adipocina. O aumento das concentrações de IL-6, no tecido adiposo visceral dos animais alimentados com dieta de cafeteria, indica um provável incremento no processo inflamatório local. A diminuição dos níveis de nitrito no tecido adiposo dos animais submetidos à dieta de cafeteria sugere um prejuízo à via do óxido nítrico, enquanto o aumento das concentrações de compostos de Maillard, e, por consequência de AGEs, uma intensificação do processo oxidativo. Outro fator relacionado aos compostos de Maillard foi o peso, já que os animais de menor peso apresentavam também uma concentração menor destes compostos. O uso do tadalafil não foi eficaz na redução da resistência à insulina, no aumento das concentrações séricas de adiponectina e na diminuição das concentrações de citocinas inflamatórias no tecido adiposo. No entanto, o tadalafil mostrou-se capaz de reduzir a concentração de AGEs no tecido adiposo de animais submetidos à dieta de cafeteria, sugerindo um possível efeito favorável sobre o estresse oxidativo.<br><br>Abstract : Introduction: In recent decades, new discoveries demonstrated that the adipocytes were capable of secreting adipokines and cytokines with autocrine, paracrine and systemic functions, which influenced in important ways throughout the metabolism of living organisms. Among the factors associated with adipocyte biology disorders we can highlight oxidative stress, closely related to the advanced glycation end products (AGEs) formation. Few studies have sought to elucidate the role of nitric oxide (NO.) in the adipose tissue physiology. This pathway increases the titles of guanosine 3'5' cyclic monophosphate (cGMP), ultimately bringing positive effects on adipocyte biology, and consequently greater balance in energy control and systemic metabolism. Another way to increase cGMP levels is through the administration of phosphodiesterase-5 (PDE5) inhibitors, drugs that may be useful in the future in adipose tissue disorders, such as obesity and its consequences. Objectives: To identify the impact of a hypercaloric and hyperlipidic diet (cafeteria diet) on body weight variation, food intake, insulin resistance, serum adiponectin levels and visceral adipose tissue levels of tumor necrosis factor a (TNFa), interleukin 6 (IL-6), NO., and AGEs. To analyze the consequences of the administration of tadalafil in the intensity of insulin resistance, serum adiponectin levels, as well as visceral adipose tissue levels of TNFa, IL-6, and AGEs. Methods: Analytical controlled experimental intervention study involving a total of 72 male Wistar rats, divided into 06 subgroups of 12 animals: chow-saline subgroup (CSG) received chow and saline; chow-tadalafil subgroup (CTG) received chow and tadalafil; chow lean subgroup (CLG) received chow and saline; cafeteria diet-saline subgroup (CafSG) received cafeteria diet and saline; cafeteria diet-tadalafil subgroup (CafTG) received cafeteria diet and tadalafil; and cafeteria diet-saline lean subgroup (CafLG) received cafeteria diet and saline. The study lasted 10 weeks and weight gain and food intake were recorded weekly. Insulin and adiponectin levels were detected in serum. The concentrations of TNFa, IL-6, nitrite (NO. metabolite) and Maillard compounds (AGEs equivalent) were detected in adipose tissue. All the samples for testing were collected at the time of animals' sacrifice. In statistical analysis, one-way ANOVA test with Tukey correction, two-way ANOVA, and paired t test were applied. Results: A significant increase of body weight throughout the study was observed in all subgroups. The mean final weight at 60 days was higher in animals fedcafeteria diet. Food intake in grams was higher in animals fed with chow at many times of the study. Animals fed the cafeteria diet had greater expansion of epididymal and retroperitoneal adipose tissue. The mean homeostasis model assessment for insulin resistance (HOMA -IR) between subgroups at the end of follow-up was not different. The serum adiponectin levels in relation to total adipose tissue were higher in animals fed a balanced diet, and the IL-6 levels were higher in animals fed cafeteria diet. The nitrite concentration was higher in animals subjected to balanced diet. Mean levels of Maillard compounds were higher in animals subjected to the cafeteria diet, and in the animals with the highest weight. In animals submitted to the cafeteria diet and tadalafil, concentration of Maillard compounds was lower. Conclusion: Cafeteria diet for 60 days, although more satiating, led to a higher mean total weight and visceral adipose tissue in animals that were submitted to it, without, however, resulting in a significant increase in insulin resistance. Despite the total adipose tissue expansion, cafeteria diet was not able to proportionally increase adiponectin levels, suggesting the influence of other factors in this adipokine production. Increased levels of visceral adipose tissue IL-6 of animals fed cafeteria diet indicate a probable increase in the local inflammatory process. The decreased adipose tissue nitrite levels of animals subjected to the cafeteria diet suggest injury to the nitric oxide pathway, while increased Maillard compounds levels, and consequently of AGEs, an intensification of the oxidative process. Another factor related to Maillard compounds was the weight of the animals, as leaner animals showed lower concentration of these compounds. The use of tadalafil was not effective in reducing insulin resistance, increasing adiponectin levels, and decreasing inflammatory cytokines in adipose tissue. However tadalafil was capable of reducing AGEs levels in the adipose tissue of animals fed cafeteria diet, suggesting a possible favorable effect on oxidative stress.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T18:16:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação completa final 2.pdf: 2784660 bytes, checksum: 15ae7aeb47a5c6076dc1ce82e7adefad (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2015-03-13T18:16:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação completa final 2.pdf: 2784660 bytes, checksum: 15ae7aeb47a5c6076dc1ce82e7adefad (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-02-10<br>CNPQ; FACEPE<br>O Sildenafil (Viagra®) promove acúmulo de monofosfato de guanosina cíclico (GMPc) através da inibição seletiva da fosfodiesterase-5 (PDE5). Embora esse medicamento mantenha um excelente nível de segurança e perfil de tolerabilidade, apenas disfunção erétil e, mais recentemente, hipertensão pulmonar são doenças tratadas atualmente com Sildenafil. Astrócitos e micróglia são células do SNC que exercem um papel importante em numerosas patologias do cérebro, incluindo a Esclerose Múltipla (EM). A EM é uma doença inflamatória crônica, caracterizada por desmielinização das células nervosas, que leva a severa deficiência psicomotora. Tem sido reportado que o acúmulo intracelular de GMPc modula a reação microglial e astrocitária e protege oligodendrócitos diferenciados (formadores da mielina), reduzindo danos causados à mielinização. Portanto, o presente estudo investigou os efeitos do Sildenafil em modelo de EM induzido pela ingesta de Cuprizona. Cinco camundongos C57BL/6 selvagens e cinco iNOS-/-, machos, com 7-10 semanas de idade, foram usados por grupo. Os grupos receberam, durante quatro semanas: 1) Cuprizona 0,2% misturada na ração, 2) Cuprizona na ração e Sildenafil 3, 25 ou 50 mg/Kg na água de beber (os iNOS-/- receberam apenas a dose de 25 mg/Kg), ou 3) Os controles receberam água e ração puras. Após os tratamentos, os cerebelos foram processados de acordo com a rotina para microscopia eletrônica de transmissão, western blotting, imunohistoquímica (parafina), imunofluorescência (congelação) ou coloração Luxol Fast Blue. Os resultados demonstraram que, nos animais selvagens, Cuprizona induziu temores, limitações motoras e alterações posturais nos animais, aumentou os níveis das proteínas GFAP e Iba-1, indicando gliose reativa e ativação microglial e aumentou COX-2, indicando um ambiente pró-inflamatório no cerebelo; além disso, provocou redução da espessura da mielina e da intensidade de mielinização e promoveu alterações ultraestruturais na bainha de mielina e nos axônios do cerebelo. Sildenafil protegeu significativamente o microambiente neural dos animais tratados com Cuprizona, apresentando efeito dose-dependente, cuja dose mais efetiva foi a de 25 mg/Kg. O tratamento com Sildenafil diminuiu os tremores e limitações motoras induzidos pela Cuprizona, manteve a expressão basal de GFAP e Iba-1, diminuiu fortemente a expressão de COX-2 e das citocinas pró-inflamatórias (IFN-γ, TNF-α, , IL-1β e IL-2), impediu a desmielinização e protegeu ultraestruturalmente a organização mielínica e axonal. Nos animais iNOS-/-, os efeitos clínicos induzidos pela Cuprizona foram semelhantes aos vistos nos animais selvagens e Sildenafil diminuiu esses efeitos. Cuprizona aumentou a expressão de GFAP, Iba-1 e IFN-γ. Nesses animais, entretanto, Sildenafil aumentou a marcação para GFAP, indicando que não teve efeito protetor nos astrócitos, na ausência do NO produzido pela iNOS. Por outro lado, diminuiu a expressão de Iba-1 e IFN-γ, indicando efeito anti-inflamatório e inativação da micróglia estimulada pela Cuprizona. Os animais iNOS-/- controle (sem nenhum tratamento) apresentaram alterações degenerativas na mielina, que foram agravadas pela Cuprizona. Sildenafil diminuiu a intensidade dessas alterações, embora não tenha resolvido-as completamente. Portanto, o aumento dos níveis de GMPc, pela inibição da PDE5, provavelmente agiu como antiinflamatório e agente protetor de astrócitos, micróglia e oligodendrócitos, diminuindo os danos ao tecido neural. Interessantemente, a via de ação do Sildenafil foi tipo celular-dependente, ou seja, foi independente do NO produzido pela iNOS em micróglia e oligodendrócitos e dependente em astrócitos. Portanto, após ensaios clínicos, o Sildenafil pode ser um medicamento compatível com a administração oral para a população com EM e outras doenças neurodegenerativas, promovendo efeitos benéficos adicionais aos tratamentos atuais. Esclarecer o mecanismo de ação do Sildenafil nas células neurais será alvo de estudos futuros do nosso grupo.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-09-06T16:39:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Nubia Nascimento.pdf: 1296891 bytes, checksum: 1fb7f4ddd43a4591eeb9f1b8e95bb14f (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-09-06T16:39:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Nubia Nascimento.pdf: 1296891 bytes, checksum: 1fb7f4ddd43a4591eeb9f1b8e95bb14f (MD5) Previous issue date: 2018-05-28<br>O cilostazol é um inibidor seletivo da fosfodiesterase III que atua como antiagregante plaquetário e vasodilatador. Faz parte do tratamento clínico da doença aterosclerótica carotídea extracraniana,apresentando benefícios para o adequado fluxo sanguíneo local.Devido à suacaracterística lipofílica,é um excelente fármaco para o estudo do desenvolvimento de sistemas de liberação modificada, que objetivam melhorar a disponibilidade biológica. A aplicação de tecnologias em formulações, como nanosuspensões, caracteriza uma estratégia atrativa para melhorar a ação de compostos pouco solúveis em água como o Cilostazol. Este trabalho avalioua ação do Cilostazolnanoencapsulado na túnica média da artéria carótida esquerda e no perfil lipídico de ratos Wistar. Os animais foram divididos em 4 grupos, que receberam soluções de nanocápsulas contendo cilostazol, nanocápsulas sem cilostazol, solução de propilenoglicol e cilostazol pesado.Foi observada diferença entre a espessura da carótida em micrômetros, entre os grupos que receberam o cilostazolnanoencapsulado e o grupo que recebeu a solução de propilenoglicol [70.22(9.2±47-81)IC95% 62-72] (P 0,019), sendo a maior espessura observada no grupo que recebeu o cilostazolnanoencapsulado. Não houve diferença em relação à celularidade em números absolutos, entre os grupos. Em relação ao perfil lipídico, o grupo que recebeu propilenogicol apresentou valores maiores de HDL comparativamente ao grupo que recebeu a solução de cilostazolnanoencapsulado [56.85(10.5±37.7-83.7)IC95% 52.56-61.38] (P0,01). O nível de triglicerídeos em mg/dL foi maior no grupo que recebeu o cilostazolpesado em relação ao grupo que recebeu a solução de nanocápsulas [116,92(56.37±45-266)IC95% 74.15-132.33] (P0,01). O cilostazol pesado apresentou melhores resultados em relação ao perfil lipídico. A apresentação do cilostazolnanoecapsulado não demonstrou ser adequada para o tratamento da doença carotídea extracraniana devido ao fato de aumentar o perfil lipídico dos animais estudados. A estrutura da nanocápsula, por conter lipídios em seu interior, piorou o perfil lipídico. Os achados laboratoriais foram condizentes com os achados histopatológicos.<br>Cilostazol is a selective inhibitor of phosphodiesterase III that acts as a platelet antiaggregant and vasodilator. It is part of the clinical treatment of extracranial atherosclerotic carotid disease, presenting benefits for adequate local blood flow. Due to its lipophilic characteristics, it is an excellent drug for the study of the development of modified release systems, which aim to improve biological availability. The application of technologies in formulations, such as nanosuspensions, characterizes an attractive strategy to improve the action of compounds little soluble in water like Cilostazol. This study evaluated the effect of nanoencapsulated Cilostazol on the left carotid artery layers and in the lipid profile of Wistar rats. The animals were divided into 4 groups, which received solutions of nanocapsules containing cilostazol, nanocapsules without cilostazol, solution of propylene glycol and heavy cilostazol. Differences were observed between carotid thickness in micrometers between groups receiving nanoencapsulated cilostazol and the group receiving the propylene glycol solution (70.22 (9.2 ± 47-81) 95% CI 62-72) (P <0.019), with the highest thickness observed in the group receiving nanoencapsulated cilostazol. There was no difference in cellularity in absolute numbers between the groups. Regarding the lipid profile, the group receiving propylene glycol had higher values of HDL in mg/dL, compared to the group that received the nanoencapsulated cilostazol solution [56.85 (10.5 ± 37.7-83.7) 95% CI 52.56-61.38] (P 0.01). The level of triglycerides in mg/dL was higher in the group that received the heavy cilostazol compared to the group that received the nanocapsule solution [116 (56.37 ± 45-116.92) CI95% 74.15-132.33] (P 0.01). The heavy cilostazol presented better results in relation to the lipid profile. The presentation of nanoecapsulated cilostazol has not been shown to be adequate for the treatment of extracranial carotid disease due to the fact that it increases the lipid profile of the animals studied. The structure of the nanocapsule, as it contained lipids, worsened the lipid profile. Laboratory findings were consistent with histopathological findings.

Trabalho Final de Mestrado Integrado, Ciências Farmacêuticas, Universidade de Lisboa, Faculdade de Farmácia, 2016<br>A presente monografia consiste numa revisão bibliográfica acerca o efeito dos inibidores da fosfodiasterase 5 (PDE5i) na fertilidade masculina, isto é, da forma como o sildenafil, o vardenafil, o tadalafil e o avanafil interferem nos parâmetros do esperma humano, nomeadamente, no número de espermatozóides, no volume de ejaculado, na motilidade dos espermatozóides, na sua viabilidade, entre outros. Os PDE5i orais são fármacos utilizados no tratamento da disfunção erétil (DE), que devido ao seu perfil de segurança e eficácia se tornaram na terapêutica de primeira linha desta patologia. A sua estrutura química é semelhante ao segundo mensageiro celular guanosina-3’-5’-monofosfato cíclico (GMPc), e por isso, uma vez administrados irão ligar-se competitivamente às fosfodiesterases 5 (PDE5), presentes em vários tecidos do organismo, particularmente nas células musculares lisas dos corpos cavernosos. Aquando da ligação entre estes há inibição da hidrólise do GMPc, aumentando a sua concentração nas células do músculo liso, que resulta na diminuição do cálcio intracelular impossibilitando a formação do complexo cálcio-calmudolina (Ca-Cam), consequentemente, sucede-se o relaxamento do músculo liso promovendo a ereção do pénis. O uso destes PDE5i ainda causa algumas opiniões controversas no seio da comunidade científica, aquando da sua toma por homens com problemas de fertilidade, podendo tal ser comprovado através dos estudos in vivo e in vitro apresentados. Esta monografia tem como finalidade evidenciar os efeitos benéficos e nocivos dos PDE5i na fertilidade masculina.<br>This monograph is a bibliographic revision about the effects of phosphodiesterase inhibitors type 5 (PDE5i) on male fertility that is how sildenafil, vardenafil, tadalafil and avanafil interfere with the parameters of human sperm, namely, the spermatozoa numbers and its motility and viability and the total ejaculate volume, among others. The oral PDE5i are medicines which are used in the treatment of erectile dysfunction. This is a first-line therapy for this pathology due to its safety profile and treatment efficiency. Its chemical structure is similar to the intracellular second messenger 3',5'-cyclic guanosine monophosphate (cGMP) and so once administered they will competitively connect with the phosphodiesterase type 5(PDE5) which is presented in multiple organism tissues particularly on the smooth muscular cells of the corpus cavernosum. When this connection occurs there is an inhibition of hydrolysis of GMPc, increasing its concentration on smooth muscle cells. Additionally, there is a decreasing in intracellular calcium, disabling the formation of calcium calmodulin complex (Ca-Cam). Thereafter the relaxation of the smooth muscle leads to the penis erection. The use of these medicines for male fertility also cause some controversial opinions within the scientific community and this could be explained by studies in vivo and in vitro. This monograph presents the contrast between the benefits and the adverse effects of PDE5i in the male fertility.

Trabalho Final do Mestrado Integrado em Medicina apresentado à Faculdade de Medicina<br>COPD is nowadays the world’s 4th cause of death with a prevision that in 2020 it becames the 3rd. In Portugal the estimated prevalence is 14,2%, leading to 8000 annual deaths. It is an important public health issue that requires a lot of health resources. COPD is characterized by a progressive and irreversible airflow limitation, with a combination of lung destruction and small airways obstruction. Inflammation is one of the major mechanisms that induce the disease and tobacco is the major and preventable cause. The main goal of the treatment is to maintain the disease stable, preventing exacerbations. There are a lot of drugs approved (ICS, LABA, LAMA, SABA, SAMA), including the PDE inhibitors, selective (Roflumilast) and non-selective (Theophylline). PDE’s hydrolyse intracellular cyclic nucleotides (cAMP and cGMP), into inactive 5′ monophosphates and they are found in a variety of inflammatory and structural cells. PDE’s inhibitors allow the elevation of cAMP and cGMP which lead to a variety of cellular effects including airway smooth muscle relaxation and inhibition of cellular inflammation. PDE4 inhibitors act by increasing intracelular concentrations of cAMP, associated with anti-inflammatory effects acting over various cells involved in COPD. The main goal of this study is to review the use of this type of drugs, their efficacy and safety, based only in clinical trials, obtained with a search in the PUBMED database. The data suggest that non-selective inhibitors (theophylline) are only used in a small group of patients (not a first-line option), and Roflumilast only shows efficacy and appears to be a reasonable treatment option to patients with very severe COPD, with frequent exacerbations and presence of chronic bronchitis, added to ICS + LABA or LAMA. It is not used alone in the stable disease and until now, the benefits in the quality of life remains undetermined. The safety profile is overall good, but the emesis and weight loss often leads to the discontinuation of the treatment. Safety and efficacy improvements should be attempted in new drug developments.<br>A DPOC é atualmente a 4ª causa de morte mundial, estimando-se que em 2020 possa ser a 3ª causa. Em Portugal tem uma prevalência de 14,2%, levando a cerca de 8000 mortes anuais. A DPOC é caracterizada por uma limitação progressiva e irreversível do fluxo aéreo, combinando a destruição do parênquima pulmonar, com a obstrução das vias aéreas, nomeadamente as de menor dimensão, sendo a inflamação um dos seus principais mecanismos e o tabaco a principal causa passível de prevenção. Com o tratamento pretende-se manter a doença estável, prevenindo as exacerbações. Estão aprovados diversos fármacos (ICS, LABA, LAMA, SABA, SAMA), onde se incluem os inibidores da PDE, seletivos (Roflumilast) e não seletivos (Teofilina). As PDE’s promovem a hidrólise dos nucleótidos cíclicos (cGMP e cAMP), nos seus 5-monofosfatos inativos, sendo encontradas em diversas células estruturais e inflamatórias. A sua inibição permite uma elevação das concentrações de cAMP e cGMP, com diversos efeitos, nomeadamente no relaxamento do músculo liso das vias aéreas e inibição da inflamação celular. Os inibidores da PDE4 atuam aumentando as concentrações intracelulares de cAMP, com efeitos anti-inflamatórios em diversas células envolvidas na DPOC. O principal objetivo deste trabalho foi rever o papel deste tipo de fármacos no tratamento da DPOC, com ênfase na sua eficácia e segurança, tendo apenas por base ensaios clínicos obtidos através de uma pesquisa na PUBMED. Os inibidores não seletivos (Teofilina) não são a primeira opção para o tratamento e relativamente ao Roflumilast, apenas mostrou ser vantajoso no tratamento de doentes com DPOC muito severa, com exacerbações frequentes e com bronquite crónica, associado ao ICS + LABA ou LAMA, não mostrando benefícios claros na melhoria da qualidade de vida. A segurança do medicamento é globalmente boa, com alguns efeitos adversos frequentes, alguns deles responsáveis pela descontinuação do tratamento (emese e perda de peso), pelo que a investigação se deverá centrar na melhoria do perfil de segurança desta classe.

Trabalho final de mestrado integrado em Medicina, área científica de Urologia, apresentado á Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra<br>Tanto a hiperplasia benigna da próstata como a disfunção eréctil são patologias com elevada prevalência em homens com mais de 60 anos de idade, existindo evidência epidemiológica de que possam partilhar uma fisiopatologia comum. Foram assim formuladas quatro teorias que podem explicar esta relação: a teoria da Rho-cinase; a do síndrome metabólico e da hiperactividade autonómica; a da via do óxido nítrico e a da aterosclerose pélvica. Tendo sido demonstrado o efeito regulador dos inibidores da 5-fosfodiesterase no tónus muscular da próstata, vários estudos foram realizados no sentido de verificar o efeito destes fármacos na hiperplasia benigna da próstata. Assim, este artigo tem por objectivo elaborar uma revisão da informação que se encontra publicada acerca da utilização de inibidores da 5-fosfodiesterase no tratamento da hiperplasia benigna da próstata, de modo a entender o fundamento da utilização deste fármaco e a sua eficácia na sintomatologia desta patologia. Em todos os estudos analisados, os inibidores da 5-fosfodiesterase demonstraram serem eficazes na melhoria dos sintomas e serem bem tolerados, tanto em monoterapia como em combinação com bloqueadores α. O tratamento combinado demonstrou ainda ser mais eficaz do que a utilização isolada de cada um dos fármacos. Para além da melhoria sintomática, verificou-se um efeito anti-proliferativo e inibidor da trans-diferenciação de fibroblastos num estudo pré-clínico. No entanto, são necessários estudos clínicos de larga escala e com distribuição aleatória para determinar a segurança a longo prazo, a eficácia e a relação custo-eficácia da utilização dos inibidores da 5-fosfodiesterase no tratamento sintomático da hiperplasia benigna da próstata.<br>Benign prostatic hyperplasia and erectile dysfunction are both pathologies with high prevalence in men over 60 years of age. Epidemiologic evidence suggests they can share physiopathology in common. Four theories have been formulated to explain this relationship: the Rho-kinase theory; the theory of the Metabolic Syndrome and Autonomic Hyperactivity; the Nitric Oxide Pathway theory and the Pelvic Atherosclerosis theory. Phosphodiesterases-5 inhibitors have a regulatory effect on the prostatic muscular tonus and numerous studies have already been conducted to verify their effects on benign prostatic hyperplasia. Therefore, this article aims at producing a review of the information published on the use of these drugs, in order to justify their use and efficacy on the symptomatology of this pathology. Studies analyzed have demonstrated the efficacy of the drugs in the improvement of the symptoms, and their tolerance levels in monotherapy and in their association with α-blockers. The combined treatment showed more efficacy than that of the separate use of each drug. Beside the symptomatic improvement, the antiproliferative and inhibitory effects of trans-differenciation of fibroblasts have already been demonstrated in a preclinical study. However, more randomized and large-scale clinical studies are necessary to ascertain the long term safety, efficacy and cost-effectiveness relationship of the phosphodiesterases-5, in the symptomatic treatment of benign prostatic hyperplasia

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2015<br>A DSE é uma condição conhecida pelo Homem desde sempre. Vários tratamentos foram tentados ao longo dos tempos mas foi nas últimas décadas a que se assistiu a grandes avanços neste campo, muito também devido ao desenvolvimento de técnicas mais rigorosas de diagnóstico. As descobertas da via do NO/GMPc e dos Inibidores da PDE-5 foram um dos impulsionadores desse avanço. Ainda hoje, estes fármacos são prescritos como terapêutica de 1ª linha na grande maioria das situações de DSE, com um perfil de efectividade e segurança relativamente bem estudados e suportados. Atendendo às suas características, é possível escolher um inibidor que dure mais ou menos tempo ou que tenha menos efeitos secundários do que outro. Quando esta classe farmacológica não é tolerada, ou não é a opção terapêutica correcta para um caso específico, existem outras modalidades à disposição, tais como injecções intracavernosas, dispositivos de vácuo e tratamento cirúrgico com ou sem colocação de próteses penianas. Em qualquer um dos casos, é possível afirmar que, actualmente, a DSE é vista como uma condição para a qual existem várias opções terapêuticas, não devendo ser alvo do desinteresse médico.

Dissertação de mest., Ciências Farmacêuticas, Faculdade de Ciências e Tecnologia, Univ. do Algarve, 2011<br>A disfunção eréctil (DE) é uma patologia que tem vindo a evidenciar-se cada vez mais na nossa sociedade. O aumento da esperança média de vida é uma das grandes causas para que esta disfunção sexual se torne num problema de saúde pública. No entanto, existem outros factores de risco, sendo preponderante que recaia sobre este tema alguma atenção. O objectivo desta dissertação é elucidar o efeito dos inibidores da fosfodiesterase 5 (PDE5) na fertilidade masculina. É feita uma abordagem à fisiologia do sistema reprodutor masculino, para que se possa perceber melhor o seu papel na fertilidade masculina. Além disso, é também importante saber quais as terapêuticas alternativas que um paciente com DE tem disponíveis e, ainda, a razão pela qual a farmacoterapia oral é a que revela maior adesão. A revisão bibliográfica apresentada permite estabelecer uma relação entre os diferentes mecanismos de acção e a influência que os inibidores da PDE5 têm sobre cada um desses mecanismos. São interpretados alguns estudos in vivo e in vitro de modo a perceber qual o efeito dos inibidores da PDE5 nos parâmetros do esperma e na sua capacidade de fertilização. Apesar dos resultados serem controversos, foram demonstrados alguns efeitos positivos na motilidade dos espermatozóides. Deste modo, com a ajuda dos inibidores da PDE5, poderá haver melhoria dos resultados relacionados com a fertilidade.