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Dissertations / Theses on the topic 'Invasivité extracellulaire in vitro'
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Driffort, Virginie. "Rôle du canal sodique NaV1.5 et de la sous-unité auxiliaire β4 dans l’invasivité des cellules cancéreuses mammaires in vitro et in vivo." Thesis, Tours, 2014. http://www.theses.fr/2014TOUR3310.
Full textAbstract:
L’expression anormale du canal sodique Nav1.5 dans le cancer du sein est corrélée au développement métastatique et à une mortalité augmentée. Le canal Nav1.5 est localisé dans les invadopodes des cellules cancéreuses mammaires humaines MDA-MB-231 et augmente leur activité protéolytique par une modulation allostérique de l’échangeur NHE-1 et l’activation de protéases acides. In vivo, dans un modèle de xénogreffe sur souris NMRI nude, l’expression de Nav1.5 potentialise la colonisation des poumons par les cellules cancéreuses mammaires humaines. Cette colonisation métastatique est inhibée par un traitement à la ranolazine, un inhibiteur pharmacologique des canaux Nav1.5. La sous-unité β4, auxiliaire des canaux Nav, voit son expression diminuer au cours de la progression cancéreuse, ce qui est associé in vitro à une augmentation de l’invasivité cellulaire. Cette augmentation d’invasivité semble indépendante du canal Nav1.5 et pourrait être associée à une transition des cellules vers un phénotype amiboïde. En conclusion, l’expression de Nav1.5 et la perte d’expression de β4 semblent jouer des rôles complémentaires dans l’invasivité des cellules cancéreusesThe abnormal expression of sodium channel Nav1.5 in breast cancer is correlated with metastatic development and an increased mortality. The Nav1.5 channel is located in invadopodia in human breast cancer cells MDA-MB-231, where it increases proteolytic activity by allosteric modulation of exchanger NHE-1 and activation of acidic proteases. In vivo, in a xenograft model in nude NMRI mice, the expression of Nav1.5 potentiates lung colonization by human breast cancer cells. Metastatic colonization is inhibited by treatment with ranolazine, a pharmacological inhibitor of Nav1.5. The β4 subunit, an auxiliary subunit of Nav channels, is expressed at low levels or lost when tumors are more aggressive, and its suppression in vitro increases celI invasiveness. This increase seems to be independent of Nav1.5 and could be associated with the transition of cells to an amoeboid phenotype. In conclusion, Nav1.5 expression and the loss of β4 expression seem to play complementary roles in the invasiveness of cancer cells
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Galiacy, Stéphane. "Remaniements de la matrice extracellulaire et protéases de la matrice extracellulaire dans la réparation épithéliale alvéolaire pulmonaire in vitro." Paris 12, 2003. http://www.theses.fr/2003PA120002.
Full textAbstract:
Le poumon, de part sa situation privilégiée à l'interface entre l'individu et l'environnement, est continuellement agressé. Les mécanismes de réparation tissulaire y sont donc particulièrement importants. Notre hypothèse est que la phase capitale de ré-épithélialisation par les pneumocytes de type II, au cours de la réparation pulmonaire, dépend étroitement des remaniements matriciels assurés par les protéases de la matrice extracellulaire, métalloprotéases et sérine-protéases. Nous avons montré que la dégradation du collagène de type I par les collagénases, et l'induction de la fibronectine et de PAl-1 par le KGF favorisaient la fermeture de blessures mécaniques de l'épithélium alvéolaire pulmonaire in vitro, en augmentant les capacités de migration des cellules en bordure de la blessure. L'ensemble de ces travaux mettent en évidence la place fondamentale occupée par les remaniements matriciels et les protéases matricielles lors des processus de réparation épithéliale pulmonaireDue to its interface position between the body and the environment, the lung is permanently agressed. Thus, repair process are essential part of lung homeostasis. Our hypothesis is that re-epithelialization by type II pneumocytes is a crucial phase of lung repair, which depend on extracellular matrix remodelling proceedings by extracellular matrix proteases, i. E. Metallo and serine proteases. We demonstrated that proteolytic cleavage of type I collagen by collagenaes, and induction of fibronectin and PAI-l by KGF, enhanced wound closure of lung alveolar epithelial in vitro, by increasing cell motility functions. Altogether, these works demonstrated the crucial functions of extracellular matrix rentodelling and extracellular matrix proteaees during proceedings of lung epithelial repair
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Raiss, Zineb. "Effet du PH extracellulaire sur la glycolyse et la gluconéogenèse in vitro." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1990. http://www.theses.fr/1990GRE18006.
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Maillard, Elisa Pinget Michel Krafft Marie-Pierre. "Les perfluorocarbures, un nouvel outil pour la conservation des îlots pancréatiques in vitro." Strasbourg : Université Louis Pasteur, 2008. http://eprints-scd-ulp.u-strasbg.fr:8080/00000998.
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Maillard, Elisa. "Les perfluorocarbures, un nouvel outil pour la conservation des îlots pancréatiques in vitro." Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008), 2007. https://publication-theses.unistra.fr/restreint/theses_doctorat/2007/MAILLARD_Elisa_2007.pdf.
Full textAbstract:
La transplantation d'îlots pancréatiques est une thérapie proposée aux diabétiques de type 1 afin de restaurer une sécrétion physiologique d'insuline. Cette thérapie se heurte à une perte importante d’îlots en culture due à l’hypoxie. Des émulsions de perfluorocarbures (PFCs) ont été testées dans cette étude afin d’apporter l’oxygène nécessaire aux îlots. Les émulsions de PFCs provoquent un décollement des lignées de cellules β à l'origine de la formation de pseudo-îlots et ainsi qu’une absence d’adhésion des îlots pancréatiques de rat au support. Cet effet s'accompagne d'une diminution de l'hypoxie cellulaire, responsable, sur les îlots contrôles, d'une fibrose interstitielle irréversible. De plus, les émulsions de PFCs sont capables de préserver in vitro la fonctionnalité des îlots jusqu'à 5 jours après isolement. Ces données suggèrent que les émulsions de PFCs pourraient être un nouvel outil permettant de préserver les îlots pancréatiques in vitro mais offrant également de grandes potentialités quant à leur utilisation in vivo lors de la transplantation d'îlots libres ou d'îlots encapsulésIslet transplantation proved a viable route to insulin independence for type 1 diabetic subjects. However, hypoxia enhances an important loss of pancreatic islets in culture. Perfluorocarbons (PFCs) serve also as oxygen "reservoirs" for harvested organs in pancreas organ transplantation. The aim of this work was to study effect of PFCs emulsions on β cells lines and on pancreatic islets in vitro. PFCs emulsion was not toxic but decreased cellular adhesion and enhanced cells detachment which triggered to pseudo-islets formation. Validation of PFCs emulsions on rat pancreatic islets also showed an anti-adhesive effect. Moreover, PFCs emulsions protected islets from an irreversible interstitial fibrosis in islets control linked to hypoxia. Consequently, PFCs emulsions preserved islets functionality for at least 5 days in vitro. Taken together, these data suggest that PFCs emulsions could be a new tool to preserve islets in vitro and would be very useful regarding islets transplantation
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Praillet, Christel. "Modulation des glycosaminoglycannes in vitro et in vivo par l'interféron-gamma." Lyon 1, 1996. http://www.theses.fr/1996LYO1T119.
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Fawzi-Grancher, Shalaw Muller Sylvaine. "Influence des facteurs biochimiques et mécaniques in vitro sur la prolifération cellulaire et la synthèse matricielle de fibroblastes application en ingénierie tissulaire /." Vandoeuvre-les-Nancy : INPL, 2006. http://www.scd.inpl-nancy.fr/theses/2006_FAWZI_GRANCHER_S.pdf.
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Louis, Huguette. "Détection de l'activation des CML vasculaires : implications dans la différenciation : approches dans les modèles animaux et in vitro : double détection immunologique/hybridation in situ froide." Bordeaux 2, 1998. http://www.theses.fr/1998BOR28605.
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Verhulsel, Marine. "Reproduction in vitro d'un intestin sur puce microfluidique." Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066738/document.
Full textAbstract:
L’épithélium intestinal est composé d’une monocouche de cellules épithéliales qui recouvrent à la fois les villi qui projettent dans le lumen et les cryptes invaginées dans le tissu conjonctif sous-jacent. Les cellules souches intestinales prolifèrent dans les cryptes et se différencient en 5 types de cellules différenciées incluant les entérocytes, les cellules de Paneth, les cellules caliciformes, les cellules entéroendocrines et les cellules Tuft. La plupart de ces cellules différenciées migrent vers le pôle apical du villus où elles meurent par apoptose exception faite des cellules de Paneth qui sont présentes uniquement dans les cryptes. Les cellules épithéliales adhèrent à la membrane basale qui sépare l’épithélium du stroma principalement constitué de collagène I et de fibroblastes. L’épithélium intestinal est renouvelé chaque semaine. Plusieurs voies de signalisation biochimiques qui gouvernent l’homéostasie intestinale ont été isolées en utilisant des modèles murins. En complément des études menées in vivo, des systèmes in vitro ont été développés de répondre à des questions difficiles à étudier in vivo, on peut notamment citer les organoides. Malgré leur indiscutable intérêt, les organoides ne reproduisent pas certaines caractéristiques majeures de l’intestin, à savoir que le nombre de total de cellules ne reste pas constant, qu’ils ne forment pas spontanément des villi et que le stroma est absent de ces modèles. Présentement, uniquement deux microsystèmes ont tenté de pallier l’absence de villi de ces modèles en reproduisant des caractéristiques dynamique (i.e le mouvement péristaltique) ou architecturale (i.e la topographie des villi) de l’intestin dans le but d’induire la formation des villi. Cependant, dans ces deux systèmes, les cellules ne reposent pas sur un substrat physiologique et sont directement ensemencées sur un support élastomérique. Quand bien même la surface de ces substrats est traitée avec des molécules constitutives de la matrice extracellulaire (ECM), ils ne reproduisent pas la micro-architecture (e.g sa structure microfibrillaire et la possibilité d’être remodelée par les cellules ensemencées) et les propriétés mécaniques spécifiques de l’ECM intestinale. Il est ainsi fort probable que ces systèmes induisent des phénotypes différents de ceux comprenant un substrat physiologique. Pour éviter ces phénomènes, nous avons développé un système innovant qui reproduit à la fois la composition et la topographie de la matrice intestinale. Le collagène I, en tant que principal composant des matrices extracellulaires, des mammifères a naturellement été choisi comme substrat cellulaire. La composition ainsi que les propriétés rhéologiques du collagène commercial ont été comparées au collagène extrait de queue de rat dans le laboratoire. Les techniques de lithographies ont été adaptées pour microstructurer les hydrogels en collagène en une sinusoïde tridimensionnelle de 400µm de période et 400µm d’amplitude en accord avec les dimensions anatomiques des intestins de souris. Les cellules épithéliales de lignées Caco2 qui sont considérées comme un modèle de cellules intestinales ont été ensemencées à la surface de la structure et ont colonisé les micro-structures en formant une monocouche cellulaire. L’utilisation du collagène I permet l’inclusion de fibroblastes primaires dans la matrice où ils évoluent in vivo. Les forces de tension développées par la monocouche épithéliale à la surface de la matrice mais également par les fibroblastes dans l’hydrogel affaissent les structures. Plus la concentration en collagène des gels est importante moins les structures sont déformées. Cependant, pour des concentrations supérieures à 6mg/mL, les fibroblastes présentent des difficultés pour s’étaler et proliférer dans la matrice probablement dues à une diffusion réduite des nutriments dans de telles matrices mais également à une réduction de la taille du maillage fibrillaire qui empêche l’étalement des cellulesThe epithelium of the small intestine is composed of a single layer of epithelial cells lining the villi that project into the lumen of the gut, and the crypts that descend into the underlying connective tissue. Dividing stem cells are contained within the crypts and give rise to five types of specialized epithelial cells including enterocytes, Goblet cells, Paneth cells, enteroendocrine cells and Tuft cells. Most of those cells travel upwards from the crypt towards the villus tip where they shed into the lumen except for Paneth cells that remain confined into the crypt. The basement membrane underlines the basal surface of epithelium and separates it from the stroma mostly composed of collagen I and fibroblasts. The whole intestinal epithelium is renewed every week. Many biochemical pathways that control intestinal homeostasis are discovered using mouse models. In contrast, in vitro models systems, such as organoids, provide a mean to investigate questions hard to be addressed in vivo. Despite their obvious interest, organoids do not fully recapitulate intestinal features: the total number of cells does not remain constant, villi-like structures are missing as well as cells and matrix constitutive of the stroma. Only two microfabricated devices have been developed to overcome this absence of villi by replicating dynamic (i.e the peristaltic motion) or structural feature (i.e the topography of the villus) of the intestine in order to induce the formation of villi. However they both do not provide the cells a physiological substrate as cells are directly seeded on an elastomeric synthetic scaffold. Even though those substrates are coated with ECM molecules, as they miss the micro-architecture specific of ECM (e.g. fibrillar structure and capacity to be remodeled by cells) as well as their mechanical properties; they might induce a different phenotype to the cells than if they were seeded on/in an ECM-like hydrogel. To address this lack, we developed an innovative device that recapitulates both the composition and topography of the intestinal lining. We chose collagen I as the constituent of our substrate since collagen I is the most abundant protein in mammals and the main constituent of all ECM in the body. We first characterized the composition and the rheological properties of commercial rat tail collagen I hydrogel and compared it to the one we extracted from rat tails. To reproduce the 3D structure of the intestine, we microstructured collagen I scaffolds as 3D sinusoids with 400µm period and 400µm height that respect the anatomic dimensions of mice intestine by adapting methods from soft lithography field. Epithelial cells from Caco2 cell line which are considered as an intestinal model were first seeded on the surface of the scaffold and successfully colonized the structure as a monolayer. Primary fibroblasts were embedded in collagen scaffolds were they actually belong in vivo. The force exterted by the epithelial monolayer at the surface of the scaffold but also by the fibroblasts inside the gels flattened the structures. The higher the concentration of collagen was the less the structures were deformed. However, for collagen concentrations higher than 6mg/mL, the fibroblasts experienced difficulties to spread and proliferate in the matrix probably related to a reduced diffusion of nutrients in such matrix or to the reduced mesh size of the fibrillar network that prevent cell spreading. Two main approaches were investigated to stiffen the collagen scaffold while maintaining a porosity suitable for fibroblasts spreading and proliferation. One consisted in the addition of a stiffer biocompatible polymer to generate a hybrid semi-interpenetrating network hydrogel with improved mechanical properties. The other resided in the addition of a cross-linker that covalently bonded the fibrils constitutive of the collagen network
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Bourahla-Fodil, Ilham. "Biosynthèse des macromolécules de la matrice extracellulaire par des fibroblastes cutanés en fonction du vieillissement in vitro. Modulation par le récepteur de l' élastine laminine." Paris 6, 1998. http://www.theses.fr/1998PA066041.
Full textAbstract:
La matrice extracellulaire (mec) comporte un grand nombre de macromolécules. Leur biosynthèse suit un programme qui varie selon les tissus conjonctifs, évolue avec l'âge et avec les pathologies comme l'athéro-artériosclérose ou l'arthrose. Ce programme définit le phénotype des cellules différenciées. Cette régulation est en partie génétiquement déterminée et dépend aussi de l'interaction entre les cellules et la mec. Ces interactions sont médiées par des récepteurs, intégrines et autres. La question posée au début de ce travail a été de savoir si le récepteur d'élastine-laminine intervient dans la régulation de la biosynthèse de certaines macromolécules et dans la modulation au cours du vieillissement. Nous avons pour cela utilise le modèle de vieillissement en culture de Hayflick, des fibroblastes de peau humaine en culture monocouche aux 5ème, 10 ème et 15ème passages. Les fibroblastes ont été incubes en présence d'agoniste (-élastine), d'antagoniste (mélibiose) du récepteur ou de l'association des deux et leurs effets sur la biosynthèse de la fibronectine, des collagènes et des protéoglycannes ont été comparés au témoin cultivé sans effecteurs. Nous avons constaté une augmentation de la biosynthèse des protéines totales, de la fibronectine et des glycosaminoglycannes au cours des passages. Nous avons également noté une diminution de la teneur en hyaluronane avec le nombre de passages. Le melibiose a permis d'inhiber cette baisse attribuée a une dégradation post-synthétique de l'hyaluronane au cours du vieillissement cellulaire in vitro. Le melibiose a également permis de compenser l'augmentation age dépendante de la biosynthèse de la fibronectine. Ces effecteurs n'ont provoque aucune modification mesurable de la biosynthèse des collagènes majeurs des fibroblastes. Par contre, en présence de melibiose, nous avons enregistré une augmentation de la néosynthèse des glycoconjugues. Contrairement aux hypothèses en cours quant au fonctionnement de ce récepteur, l'association de l'agoniste et de l'antagoniste a provoque des modifications des biosynthèses, opposées à celles obtenues en présence de l'un ou de l'autre des effecteurs utilise seul. Ceci est en contradiction avec l'hypothèse selon laquelle la -élastine et le disaccharide réagissent de façon compétitive vis-à-vis du récepteur. D'autre part nous avons montré que le lactose, un -galactoside et le melibiose, un -galactoside reconnaissent tous les deux la sous-unité 67 kda du récepteur, ce qui ne correspond pas à sa classification en galectine.
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Chanut-Delalande, Hélène. "Rôle du collagène V dans l'élaboration d'une matrice extracellulaire : approche in vitro par production de la molécule recombinante et in vivo par transgénèse chez la souris." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO10194.
Full textAbstract:
Le rôle crucial du collagène V, pourtant faiblement représenté dans les tissus, dans l'élaboration d'une matrice extracellulaire nous a conduit à l'étudier plus précisément par une double approche recombinante et transgénique. Ce collagène est un collagène fibrillaire existant sous différentes isoformes, une majoritaire hétérotrimérique [ α1(V)]2 α2(V) et plusieurs autres formes mineures dont l'homotrimère [ α1(V)]3. La production recombinante de molécules et des chaînes indépendantes constituant ce collagène dans les tissus et étudier l'assemblage, la maturation et la fonction de différentes isoformes. De fait, nous avons montré : (1) par expression simple ou concomitante des chaînes α1(V) et α2(V) dans les cellules 293 que, à l'inverse de la situation in vivo, la formation de l'homotrimère [ α1(V)]3 est toujours favorisé quel que soit le niveau d'expression de chacune des chaînes, (2) que la maturation en C-terminal des chaînes pro α1(V) et pro α2(V) peut être assurée par la BMP-1, enfin, (3) alors que l'hétérotrimérique [ α1(V)]2 α2(V)régule le diamètre des fibres, comme nous l'avons aussi observé pour les cellules ostéoblastiques MC3T3-E1, l'homotrimère est lui localisé à la surface des fibres et pourrait servir de protéine de liaison. Nous avons examiné, au niveau moléculaire et tissulaire, l'impact d'une délétion ciblée sur la chaîne α2(V) sur des souris crées précédemment. Dans la peau, le collagène V est principalement présent sous forme d'homotrimère, la chaîne α2(V) mutée n'étant pas incorporée dans les molécules. Les altérations de fibrillogenèse qui en découlent et l'engagement des fibroblastes du derme dans un processus apoptotique pourraient expliquer le phénotype observé dans la peau de ces souris. Des souris surexprimant les chaînes α1(V) humaines ont été produites. Une analyse préliminaire a d'ores et déjà montré la présence des chaînes α1(V) exogènes dans l'os.
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Autillo-Touati, Amapola. "Etude in vitro de la morphogenèse et de la polarité neuronale : analyse en miscroscopie électronique à transmission et à balayage." Aix-Marseille 2, 1992. http://www.theses.fr/1992AIX21901.
Full text
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Dumortier, Jérôme. "Interactions épithélio-mésenchymateuses au cours du développement des tumeurs malignes digestives : étude expérimentale in vivo et in vitro." Lyon 1, 2000. http://www.theses.fr/2000LYO1T152.
Full text
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Perche, Olivier. "Hormones steroides, matrice extracellulaire : facteurs intervenant dans la differenciationdes cellules epitheliales d'oviducte de caille : etudes in vivo et in vitro." Paris 6, 1989. http://www.theses.fr/1989PA066395.
Full textAbstract:
Les hormones steroides controlent la multiplication et la differenciation des cellules cibles. L'oviducte des oiseaux repond rapidement aux stimulations par les strogenes et la progesterone. Notre travail s'est focalise sur l'etude de la differenciation terminale des cellules epitheliales d'oviducte de caille. Lors du developpement de l'oviducte toutes les cellules sont dans le meme contexte hormonal mais, pourtant, a partir de cellules toutes identiques, on observe l'apparition de trois types cellulaires distincts (cellules ciliees, a mucus et glandulaires). Nous avons cherche a connaitre la capacite des cellules a se differencier en un type cellulaire particulier en realisant, in vivo, des traitements hormonaux particuliers. Nous avons pu modifier le developpement de l'oviducte et constater que la differenciation des cellules de l'epithelium n'est pas predeterminee. Par contre, certaines cellules epitheliales pourraient etre typiquement a l'origine des glandes. D'autres facteurs que les hormones interviennent dans la differenciation des cellules epitheliales, notamment les proteines de la matrice extracellulaire (mec). Au cours d'une stimulation strogenique entrainant l'invagination des cellules pour former les glandes tubulaires, la lame basale s'epaissit et sa reactivite vis-a-vis d'anticorps anti-laminine est modifiee. De plus, apres une hyperstimulation par la progesterone, des fibres de collagene de type i sont anormalement localisees entre les cellules epitheliales. Des hybridations in situ ont montre que ce collagene est synthetise par les fibroblastes du stroma et qu'ils traversent la lame basale. Pour comprendre le role de la mec dans la differenciation des cellules, nous avons developpe un modele de culture cellulaire. Il est apparu que le gel de collagene est le support le plus interessant et permet la differenciation de cellules ciliees et a mucus. Le support semble etre plus impo
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Robert, Joe͏̈lle. "Influence de divers constituants de la matrice extracellulaire sur le comportement de cellules dermiques d'embryon de poulet cultivées in vitro." Grenoble 1, 1988. http://www.theses.fr/1988GRE10110.
Full text
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Angoulvant, Denis. "Thérapie cellulaire myocardique : travaux expérimentaux in vitro et in vivo utilisant les cellules souches mesenchymateuses." Lyon 1, 2008. http://www.theses.fr/2008LYO10010.
Full textAbstract:
Les cellules souches mésenchymateuses (CSM) issues de la moelle osseuse ou du sang de cordon ombilical font l’objet de nombreux travaux en thérapie cellulaire myocardique. Elles sont capables de se transdifferencier in vitro et in vivo en cardiomyocytes, elles peuvent être transfectées pour hyperexprimer des gènes d’intérêt et présentent un profil immunitaire associé à une suppression des phénomènes de rejet allogénique in vitro. Leur effet bénéfique sur la structure et la fonction contractile du myocarde a été démontré en post infarctus dans des études expérimentales et dans des essais cliniques de phase II. Cet effet n’est pas majoritairement lié à la régénération de cardiomyocytes mais passe plutôt par des effets indirects favorisant la néoangiogenèse, la stabilisation de la matrice extra cellulaire, et la protection contre l’apoptose. Ces effets sont lié à des mécanismes paracrines mettant en jeux des facteurs de croissances contenus dans le surnageant des CSMMesenchymal stem cells (MSC) expanded from the bone marrow or the umbilical cord blood have been extensively used for cardiac cell therapy experiments. MSC can transdifferentiate in vitro and in vivo in cardiomyocytes, they can be transfected to increase the expression of genes of interest, and they possess the immune property to avoid in vitro allogeneic rejection. Pre clinical studies and phase II trials have shown their ability to protect myocardial structure and enhance contractile function after myocardial infarction. This effect is not related to extensive cardiomyocytes regeneration but to rather indirect effects including enhanced angiogenesis, stabilization of the extracellular matrix and protection against apoptosis. These effects are triggered by paracrine mechanisms involving growth factors present in MSC supernatant
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Héraud, Sandrine. "Adaptation de méthodes biophysiques et biomécaniques pour l'exploration des peaux reconstruites in vitro." Thesis, Lyon 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LYO10307.
Full textAbstract:
On entend par substitut dermo-épidermique un épiderme reconstruit à la surface d'un derme équivalent composé de fibroblastes cultivés classiquement dans un biomatériau support, souvent à base de collagène poreux ou sous forme de gel. Ce support possède ses propres propriétés biomécaniques, influant sur la réponse biomécanique globale des peaux reconstruites, nous nous sommes donc intéressés à un modèle de peau reconstruite sans support, dans lequel le derme équivalent est « auto-assemblé » par les fibroblastes néosynthétisant leur propre matrice extracellulaire (MEC). Notre premier objectif a été d'optimiser et de caractériser ce modèle auto-assemblé en termes de structure, de reproductibilité et de fonctionnalité. Notre second objectif a été d'adapter aux peaux reconstruites in vitro (PR) des outils traditionnellement utilisés pour des études in vivo, pour explorer leurs propriétés biophysiques et biomécaniques. Ces outils permettent une exploration morphologique à des résolutions différentes avec l'échographie, la tomographie à cohérence optique (OCT) et la microscopie confocale à balayage et une exploration fonctionnelle des propriétés biomécaniques des PR par cutométrie. Ces données biophysiques ont ensuite été analysées par rapport aux résultats en histologie, immunohistologie et microscopie électronique à transmission. La cinétique de culture du modèle auto-assemblé sur un temps prolongé a montré la grande stabilité de l'épiderme et le remodelage continuel de la MEC avec notamment l'augmentation des fibres de collagène et d'élastine. Au temps de culture de référence sélectionné, correspondant à l'obtention de la différenciation terminale de l'épiderme, nous avons démontré la reproductibilité des épaisseurs de l'épiderme et du derme en histologie et en OCT, de la maturité de l'épiderme et de la jonction dermo-épidermique et de l'expression dermique de l'élastine colocalisée avec la fibrilline. Sur le plan fonctionnel, nous avons démontré la fonction barrière de l'épiderme via l'imperméabilité du stratum corneum et des jonctions serréesA skin equivalent consist of a epidermis reconstructed on the top of a dermis equivalent classically composed of fibroblasts cultured into a biomaterial scaffold which is often a collagen gel or sponge. This scaffold hold its own mechanical properties, influencing the global skin equivalent biomechanical response, so we choose to develop a scaffold-free skin equivalent (SFSE), based on the ability of fibroblasts to synthezise their own extracellular matrix. Our first objective was to optimize and characterize the structure, the reproducibility and functionality of this scaffold-free model. Our second goal was to adapt biophysical and biomechanical tools classically used for in vivo evaluation to in vitro skin equivalents. Their morphology was explored with different resolutions using echography, optical coherence tomography (OCT) and laser scanning microscopy whereas biomechanical functionality was evaluate by a suction test, the cutometry. This biophysical data were compared to more classical histological, immununohistological and transmission electronic microscopy results. The long-term culture of the scaffold-free model showed the good stability of epidermis and the continuous remodelling of MEC with notably an increase of collagen and elastin fibers. We selected a reference culture time, corresponding to the complete terminal differentiation of epidermis. At this culture time, we showed the epidermis and dermis thickness reproducibity in histology and OCT, the constant epidermis and dermo-epidermal junction maturity and the dermal expression of elastin, colocalized with fibrillin. The barrier function of epidermis was also demonstrated via stratum corneum and tight junctions impermeability
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Leblond, Valérie. "Capacités d'adhérence et de remaniement de la matrice extracellulaire des cellules immunocompétentes infectées in vitro par le virus de l'immunodéficience humaine." Paris 5, 2001. http://www.theses.fr/1997PA05S012.
Full textAbstract:
Les processus d'interactions des cellules avec des composants de la matrice extracellulaire (mec) et des membranes basales (MBS), ou avec d'autres cellules, jouent un rôle crucial dans la dynamique des cellules immunocompétentes. Le potentiel cellulaire de remaniement du microenvironnement matriciel est également déterminant dans ce contexte. Le but de ce travail a été d'étudier l'expression de molécules impliquées dans les processus d'adhérence et de migration des lymphocytes et leur modulation au cours de leur infection in vitro par le virus de l'immunodéficience humaine (VIH). Les 1 intégrines sont impliquées dans les interactions de la cellule avec les constituants des MBS et de la MEC. La quantification immunocytometrique des sous-unités cd29, cd49a, b, c, d, e, et f démontre que leur expression, à la surface des sous-populations lymphocytaires cd4 + et cd4 -, est maintenue au cours de l'infection par le VIH, quel que soit le virus étudié (vih-1/lai, vih-1/ba-l, vih-1/das, vih-1/thi, vih-2/rod), même au moment du pic d'expression virale, et jusqu'à la déplétion quasi-totale des lymphocytes auxiliaires, elle-même corrélée avec la réplication virale. Par ailleurs, lors de la phase ascendante du pic de réplication virale, les capacités de liaison de la fibronectine et du collagène de type iv à la surface des lymphocytes t cd4 + purifies, évaluées à l'aide d'un test en phase fluide, sont inchangées. La gélatinase b a pour substrat préférentiel le collagène de type iv, composant majeur des MBS. L'infection des lymphocytes totaux par le VIH n'entraine pas de modulation reproductible du profil de sécrétion de la gélatinase b, étudié par zymographie. En revanche, au moment de la phase ascendante de l'expansion virale, les lymphocytes t cd4 + purifies présentent une augmentation nette et reproductible de la quantité de gélatinase b secrétée. Cette augmentation du potentiel de dégradation de la MEC des cellules cd4 + infectées est corrélée avec l'intensité de la réplication virale. Ces données suggèrent l'existence d'un rôle inhibiteur des lymphocytes cd8 + vis-à-vis du potentiel migratoire des lymphocytes cd4 + lorsque ces deux sous-populations cellulaires sont en contact. Au total, il semble donc qu'au cours de l'infection par le VIH les lymphocytes t maintiennent leurs capacités d'adhérence et d'interaction avec la mec et les MBS, via les 1 intégrines, jusqu'à la mort cellulaire induite par le virus et que la population lymphocytaire cd4 + présente un potentiel migratoire augmente. Ceci suggère que les lymphocytes t cd4 + infectes, circulant continuellement au sein de l'organisme, pourraient quitter la circulation sanguine plus facilement et se localiser dans les organes lymphoïdes et les tissus cibles. Ils seraient alors susceptibles d'infecter les cellules présentes localement et/ou de relarger des produits des gènes viraux, qui pourraient participer au développement de lésions tissulaires, en coopération avec les cytokines de l'inflammation. Ces mécanismes pourraient donc intervenir non seulement dans les phénomènes de dissémination virale, mais également dans l'induction de certains syndromes tissu-spécifiques associes à l'infection par le VIH.
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ROUGIER, JEAN-PHILIPPE. "Effets des dialysats et des cytokines sur le renouvellement de la matrice extracellulaire par les cellules mesotheliales peritoneales humaines : etude in vitro." Paris 6, 1997. http://www.theses.fr/1997PA066717.
Full textAbstract:
Au cours de la dialyse peritoneale, les cellules mesotheliales peritoneales sont directement exposees aux solutes de dialyse hyperosmolaires et aux cytokines liberees au cours des infections peritoneales. Dans ces conditions, la balance entre leurs capacites de synthese et de degradation de la matrice extracellulaire (mec), qui sont importantes, peut etre considerablement modifiee et aboutir a l'accumulation de matrice et donc a la perte des capacites de filtration du peritoine. Notre etude a porte plus particulierement sur les metalloproteases et les activateurs du plasminogene, et leurs inhibiteurs parce qu'ils interviennent non seulement dans les processus de remodelage de la mec mais aussi dans les phenomenes de migration cellulaire et de differenciation. Tres peu d'etudes sont disponibles sur les proteases synthetisees par les cellules mesotheliales peritoneales et leur regulation par les liquides de dialyse et par le tgf, cytokine pro-fibrogene par excellence, qui joue un role majeur au cours des processus de reparation tissulaire et de fibrose. Dans une lignee differenciee que nous avons etablie et dans des cultures primaires de cellules mesotheliales peritoneales, nous avons montre que l'hyperosmolalite, equivalente a celle des solutes de dialyse peritoneale, inhibe considerablement l'expression et l'activite de la mmp9, alors qu'elle stimule celles du tpa, principal activateur du plasminogene produit par les cellules mesotheliales, grace a la presence d'un element de reponse a l'hyperosmolalite localise dans le promoteur du gene du tpa. Par contre, le tgf1 stimule l'expression et l'activite du pai-1 par un effet sur la transcription du gene, et de facon surprenante stimule egalement l'activite et l'expression de la mmp9 dans les cultures en phase exponentielle de croissance et dans les cultures exposees a l'hyperosmolalite. Ces resultats suggerent que le tgf1 libere au cours des infections peritoneales favorisent la fibrose en permettant la degradation du collagene de type iv et son remplacement par des collagenes interstitiels, et que l'hyperosmolalite pourrait favoriser l'accumulation de collagenes de type iv et une desorganisation de la membrane basale peritoneale. Enfin, nous avons montre que les cellules mesotheliales peritoneales humaines produisent les proteines sp-a et sp-d identiques a celles du surfactant alveolaire et leurs arnm specifiques. L'etude de la regulation des proteines sp-a et sp-d dans le peritoine au cours de la dialyse peritoneale pourrait ouvrir des perspectives therapeutiques interessantes.
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Fleury, Christophe. "Etude des collagènes (types I et IV) chez le mollusque gastéropode Haliotis tuberculata et analyse de leur expression lors du processus de réparation de la coquille : activité biologique in vitro d’une protéine collagénique recombinante (fibroblastes humains)." Caen, 2006. http://www.theses.fr/2006CAEN2079.
Full textAbstract:
La caractérisation de molécules collagéniques chez l’ormeau H. Tuberculata est la première étape permettant d’appréhender le rôle de ces molécules dans divers processus cellulaires et physiologiques, tel que la biominéralisation. Deux ARNm codants des chaînes α apparentées à 2 sous familles collagèniques ont été sous clonées. Le premier transcrit code une protéine de 1777 acides aminés apparentée aux collagènes non fibrillaires. Le domaine C-terminal présente une identité de 69% avec une chaîne α(IV) humaine. Un second ADNc séquencé partiellement code une protéine dont le domaine C-terminal présente entre 34 et 37% d’identité avec divers collagènes fibrillaires. L’étude du niveau d’expression de ces transcrits au sein de plusieurs tissus révèle une distribution ubiquiste. L’ARNm codant la chaîne α1(I) est fortement exprimé dans le manteau tandis que celui codant la chaîne α1(IV) est présent en majorité dans les hémocytes circulants et le manteau qui sont impliqués dans la formation de la coquille. Une augmentation du rapport transcriptionnel α1(IV)/α1(I) d’un facteur 5 est observée pour le bord de manteau 4 jours après une lésion coquillière suggérant un rôle de cellules synthétisant le collagène de type IV dans le processus de réparation. L’identité de séquence de 69% entre le domaine C-terminal de la chaîne α1(IV) d’H. Tuberculata et ses homologues de vertébrés a conduit à produire, purifier et tester l’activité biologique d’une protéine recombinante correspondant à cette région (NC1FL) sur des cellules humaines in vitro. Cette molécule active la prolifération (69% par rapport au contrôle) et la synthèse de collagène (facteur 2 par rapport aux témoins) des fibroblastesSequencing the various molluscan collagen genes is an essential prerequisite to decipher their cellular and physiological function in many processes such as biomineralization in the mollusc Haliotis tuberculata. Two abalone cDNA encoding collagen α chains have been sequenced. The first one, named α1(IV), is composed of 5000 base pairs coding for a 1777 amino acids protein whose C-terminal domain shares 69% identity with human and murine α3(IV) chains. The second cDNA, called α1(I), was partially sequenced but its C-terminal domain shares 34 to 37% identity with invertebrate and vertebrate fibrillar collagens. Although the expression profile of these transcripts revealed they are both ubiquitous, α1(I) is predominantly expressed in the mantle while α1(IV) is mainly found in the mantle and haemocytes, both of which are important for biomineralization. In addition, a 5-fold increase in transcriptional ratio α1(IV)/α1(I) was observed in mantle edge 4 days after experimental lesion. This result suggests that cells synthesizing type IV collagen could be implicated in shell regeneration process. The close identity between α1(IV) C-terminal domain and the vertebrate homolog led us to produce, purify and test in vitro the biological effects of a recombinant protein corresponding to this region on human cells. This molecule increased fibroblastic proliferation by 69% and doubled collagen synthesis
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Andjilani, Maoulana. "Modulation de la chimiosensibilité des cellules tumorales par la matrice extracellulaire : étude in vitro de la potentialisation par la laminine de l'apoptose induite par le cisplatine dans les cellules germinales tumorales du testicule humain." Lyon 1, 2005. http://www.theses.fr/2005LYO10196.
Full textAbstract:
Le but de ce travail est de caractériser in vitro le rôle de la matrice extracellulaire dans la sensibilité des tumeurs des cellules germinales du testicule humain à l'apoptose induite par le cisplatine. Nous avons montré que les cellules NCCIT cultivées sur laminine devenaient au moins 2 fois plus sensibles à l'apoptose induite par cisplatine. L'étude des mécanismes moléculaires incriminés a démontré que la liaison spécifique de la laminine avec son récepteur, l'intégrine α6 permet au cisplatine d'induire l'activation des caspases -3 et -6 et d'AIF. Nos résultats soulignent le rôle prépondérant du microenvironnement dans le phénotype de sensibilité des cellules de TCGT au cisplatine. La compréhension des interactions entre la signalisation par les intégrines et le processus apoptotique induit par le cisplatine ouvre de nouvelles perspectives dans la lutte contre les cancers résistants à la chimiothérapie classique
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Fawzi-Grancher, Shalaw. "Influence des facteurs biochimiques et mécaniques in vitro sur la prolifération cellulaire et la synthèse matricielle de fibroblastes : application en Ingénierie tissulaire." Thesis, Vandoeuvre-les-Nancy, INPL, 2006. http://www.theses.fr/2006INPL040N/document.
Full textAbstract:
La cicatrisation de ligaments est un processus complexe qui consiste en la prolifération et la migration cellulaire, ainsi que la synthèse de la matrice extracellulaire. Ce phénomène est influencé par des facteurs biochimiques et/ou environnementaux. Les propriétés spécifiques des cellules ligamentaires permettrent de répondre aux facteurs de croissance et aux contraintes mécaniques. Le but de nos travaux a été de définir les conditions de reconstruction in vitro d’un tissu ligamentaire. Nous avons tenu compte d’une part des paramètres biochimiques, d’autre part des paramètres mécaniques afin d’étudier l’ensemble des facteurs agissant sur la synthèse d’un nouveau tissu. Dans un premier temps, nous avons montré l’influence des facteurs de croissance, tels que le PDGF-AB et le TGF-b1 sur la prolifération et sur la synthèse de composants de la matrice extracellulaire (collagènes des types I et III). Il semble que ces deux facteurs de croissance aient une action, mais il n’agissent pas sur le même mode du point de vue temporel et mécanistique. Dans un deuxième temps, nous avons étudié l’effet de la contrainte mécanique spécifique du ligament, l’étirement. Nous avons montré que l’action des contraintes mécaniques est essentielle pour la différentiation des cellules cibles et leur évolution en cellules ligamentaires, en promouvant la synthèse de molécules spécifiques, telles que la ténascine, et les collagènes. Cependant, bien que ces résultats, restent insuffisants pour la reconstruction d’un bio tissu, ils nous ont néanmoins permis de définir les protocoles à suivre pour la suite de ces projets d’ingénierie tissulaireThe process of ligament healing is complex, which consists of the proliferation and the cellular migration, as well as the synthesis of the extra cellular matrix. This process is influenced by the biochemical and/or environmental factors. The specific properties of the ligament cell permit their responses to growth factors and to mechanical stress. The aim of our work was to define the conditions of in vitro reconstruction of ligament tissue. We take into account the biochemical, as well as the mechanical parameters in order to study the factors acting on the synthesis of a new tissue. Firstly, we investigated the influence of the growth factors such as PDGF-AB and TGF-b1 on the cell proliferation and the matrix synthesis (collagens types I and III) respectively. It seems that these two growth factors act on the different mode on the temporal and mechanistic aspects. Secondly, we studied the effect of the specific mechanical stress the stretching on the ligament. It was showed that the action of the mechanical stretching was essential for the differentiation of the target cells and their evolution in the ligament cell, by promoting the synthesis of the specific molecules, such as tenascin, and collagens. Although these results remain insufficient for the reconstruction of neotissue, they allowed us to define the protocols to be followed for the projects of tissue engineering
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Ghazi, Kamelia. "Etude et modulation du microenvironnement des purinorécepteurs de mort P2X7 par des formulations lipidiques et biopolymères afin de réguler les mécanismes de prolifération et de dégénérescence cellulaire sur des modèles dermatologiques : cicatrisation et mélanome." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P655/document.
Full textAbstract:
Le purinorécepteur P2X7 joue un rôle majeur dans les phénomènes de dégénérescences (Alzheimer, DMLA) et mort cellulaires. Récemment des études ont montré que l’activation basale de ce récepteur est indispensable dans le processus de cicatrisation et de prolifération cellulaire. Nous avons essayé de mieux comprendre le paradoxe de cette activation du récepteur P2X7 qui oriente vers la prolifération et même les métastases tumorales, mais aussi vers les mécanismes de dégénérescence cellulaire. L'influence du microenvironnement (Lipides, matrice extracellulaire, oxygène) apparait essentielle pour comprendre ces différents effets. Notre premier objectif a été d’étudier l’impact de la modulation du microenvironnement du récepteur P2X7 par des composants de la matrice extracellulaire. Ainsi, sur un modèle de cicatrisation cutanée, nous avons mis en évidence l’impact de la taille des fragments du hyaluronate de sodium (composant prédominant dans la matrice extracellulaire). Nos résultats ont montré que l’activation du récepteur P2X7 dépend du poids moléculaire du hyaluronate de sodium. Notre deuxième objectif a été de moduler le microenvironnement lipidique du récepteur P2X7. Nous avons sélectionné une huile riche en acides gras insaturés et avons ainsi étudié son effet sur l’activation du récepteur P2X7. Sur nos modèles de cicatrisation, nous avons mis en évidence qu’une modulation du microenvironnement lipidique du récepteur P2X7 influence son activation. D’autre part la modulation du microenvironnement lipidique sur des cellules tumorale de mélanome active les voies de dégénérescence ouvrant la perspective de nouvelles stratégies thérapeutiquesThe purinoceptor P2X7 plays a role in cytotoxic degenerative processus (Alzheimer, AMD) and cell death. Recent studies have shown that basal activation of this receptor is essential in the healing process and cell proliferation. We tried to understand the paradox that activation of P2X7 receptor that directs to the same proliferation and tumor metastasis, but also to the mechanisms of cell degeneration. The influence of the microenvironment (lipids, extracellular matrix, oxygen) appears essential to understand these effects. Our first objective was to study the impact of the modulation of P2X7 receptor microenvironment by extracellular matrix components. On cell monolayer model of wound healing we have highlighted the impact hyaluronan molecular weight (predominant component in the extracellular matrix). Our results showed that activation of P2X7 receptor is dependent on hyaluronan molecular weight. Our second objective was to modulate lipid microenvironment P2X7 receptor. We selected an oil rich in unsaturated fatty acids and thus have studied its effect on the activation of P2X7 receptor. In our models of healing and melanoma cell, we have demonstrated that modulation of lipid microenvironment affects P2X7 activation
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Rouget, Martine. "Régulation de la morphogénèse neuronale par des facteurs épigénétique : role des astrocytes et des molécules de la matrice extracellulaire. Etude ultrastructurale sur un modèle in vitro." Aix-Marseille 2, 1993. http://www.theses.fr/1993AIX22019.
Full textAbstract:
Nous travaillons en collaboration avec l'equipe de a. Prochiantz sur l'influence de facteurs environnementaux sur la morphogenese de neurones du systeme nerveux central. Des neurones striataux ont ete co-cultives en milieu defini avec des astrocytes mesencephaliques ou striataux. En presence d'astrocytes mesencephaliques, ces neurones developpent uniquement des axones, alors que leur croissance dendritique et leur maturation sont favorisees lorsqu'ils sont co-cultives avec des astrocytes striataux. Des contacts synaptiques entre des fibres afferentes provenant de neurones dopaminergiques mesencephaliques et les neurones striataux sont observes uniquement dans les co-cultures neurones/glies homologues. Des neurones mesencephaliques ont ete cultives en milieu conditionne soit par des astrocytes mesencephaliques soit par des astrocytes striataux. Le milieu conditionne par les astrocytes mesencephaliques induit a la fois les croissances axonale et dendritique, tandis que le milieu conditionne par les astrocytes striataux ne permet que la croissance axonale, la longueur neuritique totale demeurant la meme. Des facteurs astrocytaires provenant de regions differentes pourraient reguler la mise en place de la polarite neuronale, probablement en modifiant l'adhesion des cellules a leur substrat de culture. Les mecanismes d'elongation sont differents pour les axones et les dendrites, et dependraient des proprietes adhesives de l'environnement. Des neurones mesencephaliques ont ete mis en culture en milieu defini additionne de laminine, fibronectine, entactine, proteoglycannes ou glycosaminoglycannes. Il existe une etroite correlation entre l'adhesion des cellules au support, l'etalement des corps cellulaires et l'etablissement de la polarite neuronale. Lorsque l'adhesion au substrat de culture est forte, les corps cellulaires sont etales et la croissance dendritique est autorisee. Par contre, en conditions de faible adhesion, seule la croissance axonale est possible. La maturation serait un phenomene independant de l'adhesion cellulaire. Certaines de ces molecules (les glycosaminoglycannes), peuvent etre internalisees par les neurones grace a un mecanisme d'endocytose classique. Selon le modele propose par a. Prochiantz, axones et dendrites utilisent des strategies differentes pour croitre, les axones progressant par bonds et les dendrites s'allongeant par adhesion continue a leur substrat. Ces modes de progression peuvent etre expliques notamment par la viscosite de leur cytoplasme, dependant du degre de polymerisation des differents elements de leur cytosquelette. Nous l'avons verifie en faisant varier l'adhesion cellulaire et en utilisant des drogues modifiant la polymerisation des elements du cytosquelette
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Simon, Thomas. "Traitement anti-angiogénique par le bevacizumab des tumeurs gliales malignes : étude in vitro dans une matrice tridimensionnelle." Rouen, 2014. http://www.theses.fr/2014ROUES032.
Full textAbstract:
Les glioblastomes (gliomes de grade IV) font partie des tumeurs solides les plus invasives et les plus agressives. Le bevacizumab, anticorps monoclonal humanisé dirigé contre le facteur pro-angiogénique vascular and endothelial growth factor-A (VEGF-A), est utilisé dans le traitement de ces tumeurs. Malgré une réponse initiale associée à l’effet anti-angiogénique du traitement, des études récentes ont rapporté des récurrences de la tumeur chez des patients atteints de glioblastome et traités avec le bevacizumab. Plusieurs hypothèses existent d’ores et déjà pour expliquer ce phénomène de résistance. Ces propositions sont majoritairement basées sur une réponse à l’effet anti-angiogénique du bevacizumab. Lors de notre étude, nous avons envisagé un effet direct du bevacizumab sur les cellules de glioblastome. Suite à un traitement avec le bevacizumab, nous avons ainsi observé des modifications dans les profils d’expression de composants de l’axe VEGF/VEGF-R et dans la réponse au VEGF-A des cellules de glioblastome. En parallèle, nous avons également rapporté que le bevacizumab pouvait agir directement sur les cellules de glioblastome en activant des voies de signalisation intracellulaires associées à la survie. Le bevacizumab induit également une augmentation de la prolifération et de l’invasion des cellules de glioblastome dans un hydrogel d’acide hyaluronique (AH). L’ensemble des données obtenues confirment l’existence d’un effet direct et paradoxal du bevacizumab sur les cellules de glioblastome. Cet effet serait caractérisé par une augmentation de l’agressivité des cellules tumorales liée à des changements dans la signalisation dépendante du VEGF-A. L’identification de médiateurs impliqués dans cet effet direct du bevacizumab et des mécanismes intracellulaires associés pourrait aider au développement de thérapies multi-cibles utilisables dans le traitement des glioblastomesGlioblastomas (grade IV gliomas) are one of the most invasive and aggressive solid tumors. Bevacizumab, a humanized monoclonal antibody directed against the pro-angiogenic factor Vascular and Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A), is used in the treatment of glioblastomas. Although most patients respond initially to this treatment, studies have shown that glioblastomas eventually recur. Several non-mutually exclusive theories based on the anti-angiogenic effect of bevacizumab have been proposed to explain these mechanisms of resistance. In this report, we studied whether bevacizumab can act directly on malignant glioblastoma cells. We observe changes in the expression profiles of components of the VEGF/VEGF-R pathway and in the response to a VEGF-A stimulus following bevacizumab treatment. In addition, we show that bevacizumab itself acts on glioblastoma cells by activating intracellular survival signaling pathways. Bevacizumab also enhances proliferation and invasiveness of glioblastoma cells in Hyaluronic Acid (HA) hydrogel. We propose that the paradoxical effect of bevacizumab on glioblastoma cells could be due to changes in the VEGF-A-dependent autocrine loop as well as in the intracellular survival pathways, leading to the enhancement of tumor aggressiveness. Identification of mediators involved in the direct effect of bevacizumab on glioblastoma cells and the resulting downstream signaling pathways will help to develop multi-targeted therapies useful in the treatment of glioblastomas
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Latire, Thomas. "Effets des composants de la matrice organique issue de la coquille de trois mollusques bivalves (Pecten maximus, Mytilus edulis et Crassostrea gigas) sur le métabolisme de fibroblastes dermiques humains, in vitro. Applications potentielles dans le domaine de la dermo-cosmétique." Caen, 2013. http://www.theses.fr/2013CAEN2008.
Full textAbstract:
Les coquilles des mollusques sont constituées à plus de 95% de CaCO3 et de moins de 5% d’une matrice organique composée en partie de protéines, de glycoprotéines et de polysaccharides. Au cours de cette thèse, nous nous sommes intéressés aux activités biologiques potentielles des composants de cette matrice issues de la coquille de trois mollusques bivalves exploités : Pecten maximus, Mytilus edulis et Crassostrea gigas sur des fibroblastes dermiques humains en culture primaire. Nous avons démontré que les composants matriciels des coquilles présentent des effets différents sur le métabolisme global des fibroblastes. De plus, les extraits coquilliers issus de P. Maximus stimulent l’expression et la synthèse du collagène de type I et de type III, ainsi que des GAGs. Cette augmentation de l’expression du collagène de type I par les extraits coquilliers est induite, en partie, par le recrutement de facteurs transactivateurs (Sp1, Sp3 et hc-krox) sur la région promotrice -112/-61 pb de COL1A1. Au contraire, les extraits coquilliers issus de M. Edulis et C. Gigas favorisent la voie catabolique en diminuant la synthèse de collagène de type I, et en augmentant la synthèse de MMP-1. Enfin, la réalisation de tests de blessure in vitro a permis de mettre en évidence que les extraits coquilliers de P. Maximus et M. Edulis ne présentent que peu d’effets sur la migration cellulaire. Ainsi, nos recherches ont permis de démontrer que la matrice organique issue de la coquille des trois mollusques bivalves, et particulièrement celle provenant de P. Maximus, présente des activités biologiques intéressantes pour des applications dans le domaine de la dermo-cosmétiqueMollusc shells are composed of more than 95% of calcium carbonate and less than 5% of an organic matrix consisting partly of proteins, glycoproteins and polysaccharides. Previous studies have enabled to highlight biological activities of the shell matrice from bivalve molluscs such as Pinctada maxima or Patinopecten yessoensis on skin, especially on the expression of ECM components by fibroblasts. In this thesis, we were interested in the potential biological activities of shell matrix components from three reared bivalve molluscs: Pecten maximus, Mytilus edulis and Crassostrea gigas on human dermal fibroblasts in primary culture. As a first step, we have demonstrated that shell matrix components had different effects on the global metabolism of fibroblasts. We have shown that the shell matrix components from Pecten maximus stimulate the synthesis of types I and III collagens, as well as sulfated GAGs. This increased expression of type I collagen is mediated, in part, by the recruitment of transactivating factors (Sp1, Sp3 and hc-Krox) on the -112/-61 bp COL1A1 promoter region. On the contrary, shell extracts from Mytilus edulis and Crassostrea gigas promote catabolic pathway by decreasing the synthesis of type I collagen, and increasing the synthesis of MMP-1. Finally, additional work enabled to highlight that shell extracts from Pecten maximus and Mytilus edulis have only little effect on cell migration during wound repair process in vitro. Thus, our research has highlighted that the shell organic matrix from three bivalve molluscs, especially from Pecten maximus, has biological activities that may be interesting for dermo-cosmetic applications
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Chokr, Ali. "Evaluation par des études in vitro et in vivo de l'implication des biofilms dans la virulence des staphylocoques à coagulase négative." Littoral, 2006. http://www.theses.fr/2006DUNK0143.
Full textAbstract:
Les staphylocoques à coagulase négative (SCN) sont parmi les germes le plus isolés des infections associées aux implants médicaux. L'aptitude des SCN à former des biofilms (B) semble jouer un rôle essentiel dans leur virulence. Le PIA (P) est l'un des polymères le mieux caractérisé des constituants des biofilms. Sa biosynthèse est encodée par l'opéron icaADBC (I). Après avoir constitué un souchier représentatif d'isolats cliniques et commensaux de SCN, nous avons étudié in vitro le lien existant entre les trois paramètres B, I et P. Seulement, un tiers des SCN sont B+. Les S. Epidermidis commensaux, et contrairement à ceux d'origine clinique, sont P- et l'opéron ica est 2,5 fois moins fréquemment présent dans leurs génomes. Nous avons remarqué que certaines souches B+ mais P-, alors que d'autres P+ mais B-. L'étude de la structure chimique des constituants de la fraction déprotéinisée du biofilm a confirmé ces résultats. Nous avons ensuite évalué in vivo l'implication de B, I et P dans la virulence de certains SCN dans un modèle animal d'infection. La souche de référence RP62A du type (B+, I+, P+), et contrairement à la TM300 du type négatif (B-, I-, P-), maintient une infection dans ce modèle. Les isolats cliniques de S. Epidermidis du type (B+, I+, P+) maintiennent également une infection. Curieusement, certains S. Epidermidis cliniques et commensaux du type négatif sont capables de développer une infection. Dans ce modèle, l'aptitude à former du biofilm pourrait être indispensable pour la virulence de certaines souches. Cependant pour d'autres, cette aptitude n'est pas suffisante et impliquerait d'autre(s) facteur(s) de virulence qui restent à déterminerCoagulase-negative staphylococci (CoNS) are among the most pathogens isolated in prosthetic device-related infections. Their ability to form biofilms (B) is believed to make them more resistant to antibiotic treatments and immune host defence system. Amongst the most clearly characterized components of staphylococcal biofilm is the PIA (P) which is synthesized by the icaADBC operon (I). PIA seemed to be essential for biofilm formation. We assessed in vitro the link between these three parameters (B, I, P) in clinical and commensal CoNS isolates. Only the third of clinical and commensal strains forms biofilm in vitro. Commensal strains of S. Epidermidis were P- and they are 2. 5 times less I+. Some strains were B+ but P- while others were P+ But B-. Structural analyses show that the biofilm of certain strains contains PIA and teichoïc acid (TA), while that of others contains only TA. Using an animal model we carried out the involvement of B, I and P parameters in the ability of CoNS to maintain an infection in vivo. We have shown that the model strain, S. Epidermidis RP62A known as (B+, I+, P+) was able maintain an infection in vivo whereas, the other model strain, S. Carnosus TM300 known as (B-, I-, P-) was not. Examined with other clinical S. Epidermidis, the type (B+, I+, P+) confers the ability to maintain an infection in vivo. Surprisingly some clinical and commensal isolates having the negative profile were also able to maintain an infection in vivo. Depending on the strains, and more than the presence of ica locus and in vitro-biofilm formation ability, S. Epidermidis probably needs an other potential virulent factor(s) to be able to maintain an infection in vivo
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Vailhe, Bruno. "Réorganisation in vitro des cellules endothéliales sur matrice de fibrine en un réseau de pseudo-capillaires." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1997. http://www.theses.fr/1997GRE10235.
Full textAbstract:
Le but de ce travail etait double : 1) mettre au point un modele d'angiogenese in vitro reproductible, rapide et quantifiable ; 2) caracteriser a l'aide de ce modele des facteurs impliques dans l'angiogenese. Nous avons etabli le modele sur matrice de fibrine. Nous avons analyse le role de la concentration du gel de fibrine (un des parametres determinant la malleabilite) dans l'induction de l'angiogenese. Les conditions de culture qui permettent d'obtenir un reseau de pseudo-capillaires sont les suivantes : 1,5. 10#5 cellules/ml ensemencees sur fibrine (0,5 mg/ml), dans un milieu contenant 2% en serum. Ces conditions permettent d'observer la reorganisation des cellules en un reseau de pseudo-capillaires entre 24 et 48 heures de culture. A l'aide de ce modele, nous montrons que les cellules degradent la matrice au cours de la reorganisation en pseudo-capillaires, et que la degradation est correlee dans le temps aux changements morphologiques des cellules. Ce remodelage par la fibrinolyse conditionne la formation des pseudo-capillaires puisque les anti-fibrinolytiques inhibent totalement leur formation. L'expression de tous les composants du systeme activateurs du plasminogene/plasmine est augmentee. L'integrine v3 est localisee dans des points de contact lorsque la cellule commence a adherer sur fibrine, puis devient diffuse lorsque le pseudo-capillaire est forme. Nous montrons que l'expression membranaire de l'v3 diminue au cours de la formation du capillaire. Nous mettons egalement en evidence que les cellules secretent du tgf-1 au cours du processus. Le role eventuel de cette cytokine reste a mettre en evidence. La morphogenese dans ce modele est sous controle d'au moins quatre facteurs : les facteurs mecaniques, les proteases, les integrines et les cytokines. Ce systeme peut etre utilise : -d'une part pour etudier comment ces facteurs interagissent lors de la morphogenese capillaire ; -d'autre part pour tester des regulateurs de l'angiogenese.
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Villars, Franck. "Etude in vitro du rôle des cellules endothéliales humaines dans la différenciation ostéoblastique : modèle de coopération cellulaire." Bordeaux 2, 2000. http://www.theses.fr/2000BOR28765.
Full text
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Steidl, Esther. "Mise au point d’une plateforme de tests in vitro pour l’évaluation du potentiel proconvulsivant de façon précoce au cours du développement de médicaments." Thesis, Aix-Marseille, 2019. http://www.theses.fr/2019AIXM0050.
Full textAbstract:
L’objectif des travaux de recherche présentés ici était la mise au point d’une plateforme de tests pour identifier le potentiel proconvulsivant de composés de façon précoce au cours de leur développement. Ces tests ont été réalisés in vitro à partir de tranches d’hippocampes enregistrées à l’aide de multi-electrode arrays (MEA). La technique du MEA est particulièrement adaptée pour ce type d’investigations car elle permet d’évaluer l’effet de composés sur une large partie d’un réseau neuronal natif. De plus, cette technique permet de réaliser des tests à moyen débit et à partir de faibles quantités de composé.Tout d’abord, l’évaluation de composés de référence a permis de déterminer les paramètres d’intérêt, qui sont modifiés par des composés proconvulsivants. Les composés proconvulsivants testés ont causé une augmentation de l’aire des potentiels d’action de population et l’apparition de potentiels d’action additionnels, déclenché des décharges épileptiformes et/ou augmenté la fréquence de décharge des neurones de la région CA1. Les conditions expérimentales des tests réalisés ont ensuite été modifiées pour augmenter leur sensibilité et permettre la détection de proconvulsivants faibles. Cette plateforme de 3 tests complémentaires a été nommée NS-PC set. Pour valider la plateforme NS-PC set, 15 composés fournis par des sociétés pharmaceutiques partenaires, incluant des contrôles positifs et négatifs, ont été testés à l’aveugle. Un nouveau type de test plus rapide et abordable appelé NS-PC screen a ensuite été mis au point, sur la base d’enregistrement de décharges épileptiformes induites par la 4-aminopyridine dans des tranches d’hippocampeThe goal of the present work was to develop a platform of tests that could predict the proconvulsive potential of compounds in development as early as possible during preclinical phases. These tests were carried out in vitro from hippocampal slices recorded with multi-electrode arrays (MEAs). The MEA technology is particularly adapted because it allows to investigate compounds’ effect on a wide area of a native neural network, including all the complexity and organization of the different cell types. In addition, rapidity and low compound consumption of the MEA-based assays make them suitable for early stages of development.First, the evaluation of reference proconvulsive/seizurogenic compounds allowed to determine the parameters that should be monitored to detect proconvulsive properties. It appeared that reference compounds triggered one or several of the following effects: increase of the population spikes area and repetition of spikes, triggering of epileptiform discharges and/or increase of the CA1 neurons firing. The experimental conditions of the assays were then modified to increase their sensitivity and thus detect even weak proconvulsive compounds. This platform of 3 complementary assays was termed NS-PC set.15 compounds, including positive and negative controls, were provided by partner pharmaceutical companies to be tested under blind conditions on NS-PC set. A new faster and cheaper assay, termed NS-PC screen, was also designed based on the recording of 4-aminopyridine-induced epileptiform discharges in hippocampal slices
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Charvet, Igor. "Développement des neurones dopaminergiques et environnement matriciel : analyse in vivo et in vitro du rôle des protéoglycannes dans la mise en place des voies mésostriatales chez le rat." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE10117.
Full textAbstract:
Une des strategies therapeutiques appliquee a la maladie de parkinson serait de compenser la perte des afferences dopaminergiques (da) du striatum par un bourgeonnement axonal des neurones da restants. Pour cela, il est indispensable d'identifier les facteurs matriciels impliques dans la croissance des neurites da. Le but du travail a ete d'analyser le role des proteoglycannes (pg) dans le developpement des voies da mesostriatales du rat. Les analyses immunohistochimiques ont montre une correlation spatio-temporelle entre des pg a chondroitine et keratane sulfate (pgcs et pgks), et le pattern d'innervation da du striatum. Des approches experimentales ont alors ete realisees in vivo et in vitro pour determiner l'effet : 1- d'une lesion des voies mesostriatales sur l'expression des pg. 2- de l'inhibition (par la tunicamycine) de la synthese des pg sur le developpement de l'innervation da du striatum. 3- des substrats de cs et ks (a diverses concentrations) sur des cultures de neurones da. La lesion des voies mesostriatales a entraine une sous-expression des pgcs (et non des pgks), ce qui a confirme la relation etroite entre voies da et expression des pgcs. Par ailleurs, les zones depourvues de pgcs presentaient systematiquement une plus forte reactivite astrocytaire (astrogliose). Les astroglioses pouvant favoriser la regeneration neuronale, il est possible qu'elles facilitent la repousse neuritique en modulant l'expression des pgcs. Apres injection de tunicamycine, aucune modification visible du systeme da n'a ete observee, ceci malgre l'efficacite des traitements. Cependant, l'analyse in vitro a demontre que les cs et ks exercent un effet negatif dose-dependant sur l'adhesion et la croissance des neurones da. Ces nouvelles connaissances des relations entre neurones da et environnement matriciel devraient permettre d'optimiser les nouvelles therapeutiques appliquees a la maladie de parkinson et aux autres syndromes neurodegeneratifs.
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Miollis, Frédérick de. "Développement d’un système de culture in vitro 3D et microfluidique pour étudier les interactions tumeur-stroma et la résistance aux drogues de l’adénocarcinome du pancréas." Thesis, Lille, 2021. http://www.theses.fr/2021LILUI015.
Full textAbstract:
Le cancer du pancréas est l’un des cancers les plus mortels avec un pronostic extrêmement sombre. En 2020, le taux de survie à 5 ans reste très faible (de 3 à 9 % seulement) et la médiane de survie est de moins de 6 mois. Malgré des progrès dans la prise en charge des patients, les thérapies actuelles n’ont pas l’efficacité espérée. Ceci est dû à la forte chimiorésistance observée dans ce cancer. Le facteur clé de cette résistance est le microenvironnement tumoral complexe composé majoritairement de stroma et d’une matrice extracellulaire dense limitant l’accès des thérapies à la tumeur. Les limitations des modèles d’études actuels, notamment en termes de pertinence physiologique, sont un frein important dans la compréhension de cette chimiorésistance. En réponse à cette problématique, les chercheurs se tournent vers de nouvelles approches en développant de nouveaux modèles d’études alternatifs à ceux déjà disponibles (in vitro et in vivo).Les objectifs de ce travail ont été : (i) de développer un dispositif de culture in vitro 3D microfluidique permettant de reproduire le microenvironnement tumoral sur les plans biologique et mécanique, ainsi que de modéliser les écoulements et transports de masse présents dans une tumeur pancréatique, et (ii) d’aborder les changements morphologiques de la co-culture par l’étude de marqueurs épithélio-mésenchymateux et d’étudier l’impact de la chimiothérapie FOLFIRINOX dans ce modèle.Dans un premier temps nous avons montré numériquement et expérimentalement la faisabilité d’un tel modèle in vitro. La matrice extracellulaire choisie est une association de collagène I et d’acide hyaluronique créant une structure rigide proche des conditions in vivo. Elle permet le maintien de la culture à long terme en ne se dégradant pas ou peu sous l’effet de la perfusion ainsi que l’activation des cellules stellaires pancréatiques. La vitesse de perfusion choisie permet quant à elle d’appliquer un flux interstitiel équivalent à celui observé dans le microenvironnement in vivo, induisant une pression hydrostatique et une contrainte de cisaillement sur les cellules.Nous avons ensuite mis en évidence l’apport biologique de cette modélisation en montrant une chimiorésistance accrue au protocole FOLFIRINOX des cellules tumorales à la fois en mono- et en co-culture dans le dispositif microfluidique. Nous montrons également la mise en place d’un processus ayant des caractéristiques de la transition épithélio-mésenchymateuse et d’une possible promotion d’un phénotype dédifférencié des cellules tumorales par les cellules stellaires pancréatiques activées.En conclusion, nous présentons dans cette thèse un modèle d’étude microfluidique original permettant de modéliser une tumeur (co-culture de cellules épithéliales et mésenchymateuses) et d’étudier la cinétique d’une chimiothérapie multidrogues complexe. Ce dispositif devrait à l’avenir nous permettre d’étudier plus en profondeur les mécanismes de chimiorésistance et les interactions tumeur-stroma dans le cancer du pancréasPancreatic cancer is one of the deadliest cancers with an extremely poor prognosis. In 2020, the 5-year survival rate remains very low (only 3 to 9%) and the median is less than 6 months. Despite significant progress in the patient care, current therapies do not have the expected effectiveness. This is due to the strong chemoresistance observed in this cancer. The key factor of this resistance is the complex tumor microenvironment mainly composed of stroma and a dense extracellular matrix limiting the access of therapies to the tumor. The current models’ limitations, particularly in terms of physiological relevance, are a major obstacle in understanding this chemoresistance. In response to this issue, researchers are turning to different approaches by developing brand new models that are alternatives to those already available (in vitro and in vivo).The objectives of this work were: (i) to develop an in vitro 3D microfluidic culture device allowing to reproduce the tumor microenvironment both biologically and mechanically, as well as to model the flows and mass transport present in a pancreatic tumor, and (ii) to approach the morphological changes of the co-culture by studying epithelio-mesenchymal markers and to study the impact of FOLFIRINOX chemotherapy in this model.First, we have shown numerically and experimentally the feasibility of such an in vitro model. The chosen extracellular matrix is a combination of collagen I and hyaluronic acid creating a rigid structure close to in vivo conditions. It allows long-term culture maintenance under the effect of the perfusion as well as the activation of pancreatic stellate cells. The chosen perfusion rate allows to apply an interstitial flow in the model equivalent to the one observed in the in vivo microenvironment, inducing hydrostatic pressure and shear stress on the cancerous cells.Then, we demonstrated the biological contribution of this model by showing an increased chemoresistance to the FOLFIRINOX protocol of tumor cells both in mono- and in co-culture in the microfluidic device. We also show the establishment of a process presenting characteristics of epithelial-mesenchymal transition and a possible promotion of a dedifferentiated phenotype of tumor cells by activated pancreatic stellate cells.In conclusion, we present in this thesis an original microfluidic model allowing to mimic a tumor (co-culture of epithelial and mesenchymal cells) and to study the kinetics of a complex multidrug chemotherapy. In the future, the device should allow us to further study the mechanisms of drug resistance and tumor-stroma interactions in pancreatic cancer
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Namy, Patrick. "Régulation mécanique de l'angiogenèse in vitro : analyse par un modèle aux dérivées partielles des interactions cellules-substrat." Phd thesis, Université Joseph Fourier (Grenoble), 2004. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00007601.
Full textAbstract:
Le développement de capillaires sanguins à partir d'un réseau pré-existant, l'angiogenèse, joue un rôle fondamental dans de nombreux contextes physiopathologiques, tels la cicatrisation des tissus ou le développement d'une tumeur solide. Dans cette thèse, nous nous sommes intéressés à la régulation de ce phénomène par les facteurs mécaniques (rigidité, viscosité, traction cellulaire). Dans un dialogue permanent entre l'expérimentation et la modélisation, nous avons développé un modèle théorique biomécanique minimal des premières étapes de l'angiogenèse in vitro, où l'angiogenèse est supposée issue d'une instabilité mécanique entre les forces actives de traction cellulaire et la résistance passive viscoélastique de la matrice extracellulaire. Notre modèle consiste en un système d'équations aux dérivées partielles non-linéaires couplées, résolu par la méthode des éléments finis. Nous avons mené des analyses de stabilité linéaire et non-linéaire de l'état d'équilibre homogène pour déterminer les points de bifurcation du système correspondant à une instabilité de Turing. Nous avons ensuite effectué une étude approfondie de l'influence des différents paramètres sur la formation du réseau. Les résultats des simulations numériques sont comparés avec succès aux résultats expérimentaux, obtenus par notre équipe ou extraits de la littérature. Dans une seconde partie de nos travaux, nous avons étudié des voies de régulation possibles, par les effets mécaniques, de la dégradation de la matrice extracellulaire. Nous avons alors montré que la régulation mécanique de la dégradation pouvait être un processus clé de l'angiogenèse in vitro.
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Bunel, Valérian. "Recherche de nouvelles substances naturelles d'intérêt dans la prévention de la fibrose rénale d'origine médicamenteuse." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 2014. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/209222.
Full textAbstract:
Les reins sont les organes cibles de nombreuses molécules toxiques. Les cellules épithéliales du tubule proximal rénal sont particulièrement vulnérables vis-à-vis de xénobiotiques utilisés comme médicaments ou non. Ces agressions peuvent être corrélées à une augmentation du stress oxydatif et induire la mort cellulaire. Elles peuvent également mener à la perte des caractéristiques phénotypiques des cellules épithéliales, initiant leur dédifférenciation en cellules mésenchymateuses et éventuellement en fibroblastes, principaux responsables de la fibrose rénale.Les stratégies de protection – notamment implémentées en clinique lors de l'administration de médicaments néphrotoxiques – reposant sur une approche pharmacologique restent rares.
A partir de données de médecines traditionnelles, nous avons sélectionné une série de plantes considérées utiles pour le traitement ou la prévention de troubles associés aux maladies rénales :Angelicae sinensis radix, Eleutherococci radix, Ginseng radix, Schisandrae chinensis fructus et Silybi mariani fructus.
A l'aide d'un modèle in vitro reposant sur l'emploi de la lignée cellulaire HK-2, nous avons examiné si ces produits pouvaient apporter une protection efficace vis-à-vis de 3 xénobiotiques néphrotoxiques :les acides aristolochiques, le cisplatine et la ciclosporine. Cinq phénomènes impliqués dans la néphrotoxicité et couramment retrouvés lors du développement de la fibrose rénale ont été investigués :(i) la mortalité cellulaire et l'apoptose ;(ii) la génération de stress oxydatif ;(iii) la modulation des capacités de régénération ;(iv) la production de matrice extracellulaire ;et (v) l'activation de la voie de signalisation de la β-caténine.
Parmi les 5 plantes étudiées sur ce modèle, celle présentant l'activité la plus intéressante vis-à-vis de l'un des 3 toxiques a été investiguée plus en détails afin d'identifier le(s) composé(s) responsable(s) de sa bioactivité. Les résultats ont indiqué que l'extrait méthanolique d'Angelica sinensis était le plus efficace pour réduire la néphrotoxicité induite par le cisplatine. Ces principes actifs – l'acide férulique, le Z-ligustilide et le E-ligustilide – ont été testés selon la même méthodologie.
L'acide férulique a été le plus efficace pour améliorer la survie cellulaire et diminuer l'apoptose induite par le cisplatine. Il a également permis de réduire la production de matrice extracellulaire, de stimuler les capacités de régénération de cellules saines et d'inhiber partiellement la voie de signalisation de la β-caténine. Il n'a toutefois pas été capable de limiter la génération de stress oxydatif induite par le traitement au cisplatine.
L'acide férulique semble être un candidat prometteur pour protéger les tubules rénaux vis-à-vis du cisplatine et pourrait contribuer à limiter l'initiation et le développement de la fibrose rénale.
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The kidneys are targets of numerous toxic compounds. Proximal tubular epithelia cells are particularly vulnerable to xenobiotics used as drugs or not. These injuries can be associated with an increased oxidative stress and can trigger cell death. They can also lead to the loss of phenotypic characteristics of epithelial cells and initiate their dedifferentiation in mesenchymal cells, eventually evolving in fibroblasts, major actors responsible for renal fibrosis.
Protective strategies – including those implemented in clinical practice during the administration of nephrotoxic drugs – relying on a pharmacological approach remain seldom.
By means of data issuing from traditional medicines, we selected a series of herbs potentially useful for the treatment or prevention of troubles associated with kidney diseases: Angelicae sinensis radix, Eleutherococci radix, Ginseng radix, Schisandrae chinensis fructus and Silybi mariani fructus.
Using an in vitro model based on HK-2 cell line, we examined if these herbal products could bring an effective protection towards 3 nephrotoxic drugs: aristolochic acids, cisplatin and ciclosporin. Five phenomena involved in nephrotoxicity and regularly occurring during the progression of renal fibrosis were investigated: (i) cell death and apoptosis; (ii) oxidative stress generation; (iii) modulation of regeneration capacities; (iv) extracellular matrix production; and (v) β-catenin pathway activation.
Among the 5 herbs that were studied, the one presenting the most interesting effects towards one of the 3 toxicants has been investigated in details in order to identify the compound(s) responsible for its bioactivity. Results indicated that the crude methanolic extract of Angelica sinensis was the most potent for reducing cisplatin-induced nephrotoxicity. Its active principles – ferulic acid, Z-ligustilide and E-ligustilide – were tested according to the same methods.
Ferulic acid was the most potent compound for improving cell survival and for alleviating cisplatine-induced apoptosis. It also allowed to restrain the extracellular matrix production, enhanced the regeneration capacities of healthy cells and partially inhibited the activation of the β-catenin pathway. It was however ineffective in preventing the generation of oxidative stress induced during cisplatin treatment.
Ferulic acid appears as a promising candidate for protecting renal tubules against cisplatin's nephrotoxicity and could contribute to limit the onset and progression of renal fibrosis.
Doctorat en Sciences biomédicales et pharmaceutiques
info:eu-repo/semantics/nonPublished
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XIA, Rong. "ETUDE DES EFFETS DE LA STIMULATION ELECTRIQUE A HAUTE FREQUENCE DANS UN MODELE CELLULAIRE IN VITRO." Phd thesis, 2005. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00009865.
Full textAbstract:
Un dispositif de stimulation électrique in vitro sur des lignées cellulaires a été optimisé afin de nous permettre d'étudier les mécanismes cellulaires et moléculaires de la SHF. Deux lignées cellulaires (GH3 et PC12) ont été analysées au niveau transcriptomique, protéomique et de la sécrétion hormonale et de neurotransmetteurs.Nous avons comparé les niveaux de sécrétion de PRL des GH3 traitées par SHF, SBF ou par la dopamine; ainsi que les niveaux des catécholamines (DA, AD et NA) des PC12 traitées par SHF, SBF ou par la 6-OHDA. La synthèse protéique des cellules stimulées a été analysée par les techniques d'incorporation de 35S méthionine et de SELDI-TOF-MS. Enfin nous avons recherché les modifications d'expression génique des cellules stimulées en utilisant la technique des microarray à base d'oligonucléotides longs sur nylon et détection radioactive.Les premières expériences montrent une diminution significative de la quantité de prolactine à un niveau comparable à celui obtenu avec l'inhibiteur conventionnel, la dopamine. De la même façon, la production de catécholamines dans le milieu est inhibée. Les données transcriptomiques montrent l'existence des profils d'expression caractéristique de la neurostimulation à haute fréquence, avec environ 100 gènes discriminants impliqués dans la synthèse protéique, la signalisation calcique, l'énergétique cellulaire pour les principaux. Nous avons confirmé l'impact de la neurostimulation sur la synthèse protéique en SELDI-TOF comme en incorporation de méthionine. Un mécanisme original de SHF peut donc être proposé, impliquant la neutralisation de la synthèse protéique dans l'inactivation réactionnelle des structures neuronale