Academic literature on the topic 'Lapin – Génétique moléculaire'

Le virus responsable de la maladie virale hemorragique du lapin (vhdv) causant une mortalite tres importante dans les populations de lapins domestiques et sauvages, est un membre de la famille des calicivirus dont le genome est constitue d'un arn simple brin de 8 kb. Pour ameliorer le diagnostic de vhd qui repose actuellement sur un test d'hemagglutination et un test elisa, nous avons mis au point une pcr (polymerase chain reaction) couplee a une transcription reverse (rt-pcr). En amplifiant plusieurs portions (1 portion dans la partie 5' et 3 en 3') du genome du vhdv, nous avons montre que cette methode permet de detecter de maniere efficace et rapide le virus dans des echantillons d'origines geographiques differentes (france, egypte). Les pcr effectuees sur differentes portions du genome sont capables de mettre en evidence de 3 a 12 copies d'adnc du vhdv et par comparaison avec l'elisa, la pcr se montre au moins 10 000 fois plus sensible. Pour etudier la variabilite du vhdv, nous avons utilise la pcr couplee au sequencage dans la partie 5' et 3' du genome et mis en evidence une grande conservation entre differents isolats (francais, allemand et egyptien) ; ainsi, au niveau de la sequence en acides amines l'homologie est de 95% en 5' a 98,7% dans la partie 3' de la capside. Pour connaitre les etapes precoces de l'infection par le vhdv, nous avons suivi par pcr la presence du virus au niveau de differents organes (foie, rate, poumon, rein, amygdale, nud lymphatique) apres une infection experimentale. La localisation primaire du virus se situe dans le foie et la rate, infectes des 18h apres inoculation du virus, alors que le vhdv n'est detecte dans les autres organes qu'a partir de 36h. Parallelement aux etudes precedentes, nous avons amplifie le gene codant pour la proteine de capside a l'aide d'une rt-pcr en une seule etape ou par pcr avec des amorces chevauchantes afin de mettre au point un vaccin. Le fragment obtenu a ete clone dans un vecteur copac avant de subir une recombinaison homologue avec une souche attenuee de la vaccine (nyvac), afin d'obtenir un recombinant vaccine-vhdv. L'etude de l'efficacite de ce vaccin recombinant chez le lapin montre qu'il assure une seroconversion et une protection contre l'epreuve virulente apres seulement une injection intradermique

Deux états d'autorenouvellement des cellules souches pluripotentes (PSCs) ont été définis, à savoir les états naïf et amorcé. De nombreuses différences existent entre ces deux états dont la plus marquante est la capacité unique des PSCs à l'état naïf, de coloniser l'embryon préimplantatoire et former des chimères. L'objectif de mon projet doctoral a été d'étudier la pluripotence chez le lapin. Dans ce cadre, j'ai d'abord entrepris de fabriquer et de caractériser des cellules souches pluripotentes induites (RbiPSCs), puis d'évaluer leur capacité à coloniser l'embryon et à former des chimères. Trois lignées de RbiPSCs dépendantes du FGF2 ont été obtenues par reprogrammation de fibroblastes de lapin. Leur caractérisation moléculaire et fonctionnelle a révélé des caractéristiques mixtes, naïves et amorcées. En revanche, sur le plan fonctionnel, elles sont incapables de coloniser l'embryon de lapin, une caractéristique de la pluripotence amorcée. La seconde partie de mon projet doctoral a consisté à reprogrammer des RbiPSCs vers l'état naïf. Dans ce but, j'ai surexprimé KLF2 et KLF4, deux gènes appartenant au réseau de pluripotence naïf, et utilisé les conditions de culture des PSCs de souris. Les cellules ainsi obtenues présentent un profil d'expression génique plus proche de celui de l'ICM de lapin, dû notamment à la réactivation de marqueurs spécifiques de la pluripotence naïve. Enfin, les cellules ainsi reprogrammées présentent une capacité accrue pour la colonisation de l'embryon préimplantatoire de lapin. Mes travaux constituent le premier exemple de reprogrammation de cellules souches pluripotentes vers l'état naïf chez le lapin. Les cellules ainsi produites ouvrent la voie à la fabrication de chimères somatiques et germinales
Pluripotent stem cells (PSCs) can self-renew at two distinct states, the naive and primed states. Many differences exist between these two states, the most striking is the unique ability of PSCs naïve to colonize the preimplantation embryo and form chimeras. The purpose of my doctoral project was to study pluripotency in rabbits. In this context, I initially manufactured and characterized induced pluripotent stem cells (RbiPSCs) and then evaluated their ability to colonize the embryo and form chimeras. Three RbiPSCs lines were obtained by rabbit fibroblasts reprogramming. Their molecular characterization revealed mixed characteristics, naïve and primed. However, functionally, they are unable to colonize the rabbit embryo, a feature of primed pluripotency. The second part of my doctoral project was to reprogram RbiPSCs to the naïve state. To this end, I have overexpressed Klf2 and Klf4, two genes belonging to the naïve pluripotency network and the mouse PSCs culture conditions. These new cell lines have a gene expression profile closer to that of the rabbit ICM, particularly due to the reactivation of specific markers of naïve pluripotency. Finally, the reverted cells have an increased capacity of colonization of the preimplantation embryo rabbit. My work represents the first example of pluripotent stem cells reprogramming toward the naive state in rabbits. The cells thus produced pave the way for the production of somatic and germline chimeras

Le caractère rex chez le lapin « autosomique récessif » se traduit par une fourrure très douce qui contient principalement du duvet et qui confère à la peau un avantage économique (marque déposée dont la fourrure est vendue sous la marque orylag®). Le gène rex a été identifié sur le chromosome 14, il s’agit du gène LIPH. Le séquençage de ce gène nous a permis de mettre en évidence une délétion d’un nucléotide dans l’exon 9 à l’état homozygote chez le lapin rex (1362delA) dont l’association entre la mutation et le phénotype rex s’est révélée totale. La comparaison par qPCR a permis de montrer que chez les lapins rex le niveau d’expression de LIPH est 3 fois inférieur à celui observé chez les lapins communs dès les stades fœtaux correspondant à l’apparition des différents types de follicules pileux sans entraîner de défaut de développement des follicules pileux. Ces résultats ont été confirmés par l’analyse de coupes de peau en hybridation in situ et en immunohistochimie. De plus, nous avons mis en évidence que l’IRS (Internal Root Sheath) des follicules pileux exprime très peu LIPH chez les lapins rex et orylag®. Nous avons également montré in vitro que l’activité enzymatique de la protéine mutée est fortement réduite d’un facteur 1,5 par rapport à la forme sauvage. Ces résultats contribuent d’une part à la caractérisation du métabolisme du follicule pileux dont le lapin représente un excellent modèle, et fournissent d’autre part des pistes de réflexion pour des espèces telles que l’Homme et des critères de sélection pour améliorer la fourrure des animaux orylag®
The rex rabbit trait “autosomal recessive” induces a plush-like fur essentially composed of awn hair with high economic value (the coat is orylag®). The rex gene was identified on the chromosome 14, this gene is LIPH. By sequencing this gene, a deletion of one nucleotide in exon 9 (1362delA) was identified in a homozygous state in the rex rabbits. The mutation was found in total association with the rex phenotype. We shown by qPCR that in rex rabbits skin the expression level of LIPH is 3 times less than that observed in the wild phenotype since the three critical fetal stages of hair genesis with no apparent interference on follicle development. These results were confirmed by in situ hybridization and immunochemistry analysis on skin cross-sections. We also bring evidence that LIPH is not much expressed in the IRS (Internal Root Sheath) of the hair follicles in the rex and orylag® rabbits. We have also shown that the mutant protein has a reduced activity of 1. 5 compared to the wild one. These results contribute to the characterization of the metabolism of the hair follicle for which rabbit is an excellent model. They draw lines of reflexion for developments in humans and for selection criteria to improve the fur quality of orylag® rabbits

Le gène CALC I code pour la calcitonine (CT) hormone du métabolisme phosphocalcique et pour un neuropeptide le PAGC (peptide alternatif du gène de la CT, CGRP « Calcitonin Gene-Related Peptide). Un deuxième gène CALC II code pour une isoforme du PAGC. La phylogénie de la CT est considérée comme inhabituelle chez les mammifères. Nous avons donc entrepris d'élucider les séquences de la CT et du PAGC de lapin. Nous avons grâce à des sondes spécifiques de la CT et du PAGC humain, isolé et séquencé les ADN complémentaires des ARN messagers codant pour ces peptides. Nous en avons déduit leur enchainement en acides aminés. Les séquences établies nous ont permis d'entreprendre une étude de l'évolution de ces deux peptides au niveau moléculaire. Ces deux molécules ont des modalités d'évolution très différentes. La vitesse d'évolution de la CT diffère selon les lignées à l'intérieur du groupe des mammifères. Par contre le PAGC est une horloge moléculaire par la constance de son taux de mutation. Ces résultats sont discutés dans le cadre des théories sélectionniste et neutraliste de l'évolution. Nous montrons que la CT est un bon modèle pour l'étude de l'évolution au niveau moléculaire. En conclusion, le gène CALC I constitue un outil de choix pour les études phylogéniques des mammifères et pour l'étude des mutations neutres.

La butyrylcholinesterase (bche) est une serine hydrolase tres voisine de l'acetycholinesterase (ache). Elle est presente uniquement chez les vertebres ou son role physiologique reste actuellement inconnu. Le travail effectue au cours de cette these a pour objet l'etude de la regulation du gene de la bche. Pour cela, deux approches ont ete utilisees, d'une part une etude comparative de l'expression de ce gene par rapport a celui de l'ache dans les tissus adultes (homme et lapin) et au cours du developpement embryonnaire chez le lapin, d'autre part la caracterisation des regions promotrices de ce gene chez l'homme et le lapin. La regulation des genes de l'ache et de la bche est differente. Cette difference se manifeste au niveau de la repartition tissulaire de leurs transcrits. Les regions 5' des genes de la bche chez l'homme et le lapin montrent egalement des sequences consensus pour des facteurs de transcription differents de ceux presents dans les genes de l'ache