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Dissertations / Theses on the topic 'Lentivirus – Dissertations universitaires comme sujet'
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Castillon, Nicolas. "Culture tridimensionnelle de cellules épithéliales respiratoires humaines : applications à la thérapie génique et cellulaire." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM207.
Full textAbstract:
@Nous avons pu mettre en évidence que des cellules épithéliales respiratoires humaines cultivées sous forme de sphéroi͏̈des pouvaient mimer, à long terme, la structure et la fonctionnalité d'un épithélium respiratoire de surface. Nous avons étudié la capacité de ces structures 3-D à recoloniser un épithélium respiratoire dénudé. Par utilisation d'un vecteur lentiviral, codant la protéine GFP, nous avons également étudier la capacité de ces sphéroi͏̈des polarisés et différenciés à être transduits. Notre étude a pu montrer que ces structures 3-D pouvaient régénérer un épithélium respiratoire pseudostratifié et pouvaient être transduites par un vecteur lentiviral avec une expression à long terme de la protéine GFP et un maintien de la fonctionnalité épithéliale (fréquence ciliaire, sécrétion de chlore). Ces sphéroi͏̈des pourraient ainsi être un outil potentiel de thérapie génique et cellulaire dans la régénération d'un épithélium respiratoire mucoviscidosique@We have shown that human airway epithelial cells cultured as 3-D spheroid could mimic for a long term an airway surface epithelium structure and functionality. We analyzed the potential capacity of these 3-D structures to regenerate an airway epithelium and to be transduced using a pseudotyped lentiviral vector encoding GFP. Our results demonstrate that the spheroids can regenerate a well-differentiated human airway epithelium and can be efficiently transduced by a pseudotyped lentiviral vector with a sustained and long-term expression of the GFP, without any alteration of the spheroid structure and functionality (ciliary beating frequency and CFTR Cl- channel activity). The spheroids could be proposed as a potential tool for gene and cell therapy in order to repopulate a denuded airway epithelium in cystic fibrosis
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Colomb, Charlotte. "Sélection et expansion des cellules souches hématopoietiques pour la thérapie genique de la beta-thalassemie." Paris 7, 2013. http://www.theses.fr/2013PA077086.
Full textAbstract:
Les cytopénies et pancytopénies régulièrement observées chez les individus infectés par les virus de l'immunodéficience humaine ou simienne suggèrent une atteinte centrale de l'hématopoïèse qui pourrait prendre part au déficit immunologique qui caractérise ces pathologies. Dans le modèle de l'infection expérimentale du macaque par le SIVmac251 nous montrons que l'atteinte clonogénique des progéniteurs CD34+, qui survient dès la primo-infection, est corrélée à une diminution des ARNm STAT5A et STATB. Ce défaut clonogénique des CSHs est complètement levé par une expression forcée de STAT5B. Nous montrons que la protéine virale Nef (HIV ou SIV) reproduit ex vivo l'atteinte clonogénique des cellules CD34+, que sa présence est nécessaire à l'altération de la clonogénicité des progéniteurs hématopoïétique in vivo et que cette action de la protéine Nef est dépendante du récepteur d'activation et de prolifération des peroxysomes gamma (PPAR-y). Ce travail apporte un nouvel éclairage sur le rôle primordial de la protéine Nef dans la pathologie des infections par le VIH ou le SIV et révèle un nouveau mécanisme de régulation de l'hématopoïèse précoce impliquant la voie de signalisation PPAR-y/STATS. Il ouvre des perspectives majeures sur l'utilisation thérapeutique de ligands de PPAR-y (antagonistes et agonistes) dans le cadre d'infections par le VIH ou le SIV mais également dans le domaine des hémopathies impliquant une dérégulation de STAT5. En ce sens, nous avons évalué le potentiel thérapeutique de l'activation de la voie de signalisation PPAR-y/STAT5 sur les CSLs associées à la maladie résiduelle de la LMCGene therapy by transplantation of vector-transduced hematopoietic stem cells will constitute an ideal therapeutic solution for patients affected by genetic blood diseases with no compatible sibling donor. This method was used successfully during recent clinical trials for gene therapy. However, problems persist and must be resolved: 1) the sub-optimal efficacy of gene transfer and the low number of injected modified cells ; 2) the need, in the absence of selective advantage of the transplanted cells, of proceeding to myeloablative conditioning and the risks connected to the aplasia ; 3) The unpredictable genomic targets of the vectors and the associated leukemic risks. With the aim of contributing to the improvement of gene therapy protocols for the çlinic, we developed Systems of in vitro and in vivo selection of hematopoietic cells transduced by lentiviral vector and tested the effects of molecules and combinations of cytokines on hematopoietic cell growth in vitro. The existence, in several gene therapy trials, of clones within which the therapeutic vector was localized within the HMGA2 oncogene drove us to study the effect of this gene on the process of hematopoietic reconstitution after transplantation
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Schmitt, Françoise. "Thérapie génique in vivo des hépatopathies héréditaires cirrhogènes par des lentivirus recombinants à immunogénicité atténuée et dans une approche chirurgicale : application à la maladie de Wilson." Nantes, 2014. http://archive.bu.univ-nantes.fr/pollux/show.action?id=77773582-ec24-46c0-8d49-bf6003ab59a4.
Full textAbstract:
La maladie de Wilson (MW) est une hépatopathie héréditaire régénérative causée par des mutations du gène ATP7B, qui code pour un transporteur hépatocytaire du cuivre. Elle induit une accumulation toxique de cuivre dans le foie et le cerveau, responsable d’une cirrhose précoce et de troubles neuropsychiatriques. Les traitements actuels sont lourds et une transplantation hépatique peut être nécessaire, laissant la place à des alternatives thérapeutiques innovantes, dont la thérapie génique (TG). Nous avons tout d'abord validé plusieurs marqueurs sériques diagnostiques de la MW et de suivi de l'hépatite aiguë, et adapté l'analyse morphométrique numérisée de la fibrose hépatique au rat LEC, modèle animal de la MW. Nous avons ensuite développé une technique d'injection chirurgicale du vecteur lentiviral (VL) en foie isolé en hyperpression, en avons prouvé l'efficacité sur la restauration de la transduction chez des rats pré-immunisés contre la protéine d'enveloppe du VL et l'avons appliquée à la TG du foie fibrotique. Enfin, nous avons créé un VL codant pour le cDNA du gène ATP7B, sous contrôle d'un promoteur foie-spécifique et contenant des séquences-cibles du miR142-3p, contrant la survenue d’une immunité spécifique. Injecté à des rats LEC, il a permis de restaurer à long terme une activité enzymatique de l'ATP7B en quantité suffisante pour induire une expression phénotypique, mais n'a pas empêché l'évolution vers la fibrose hépatique. Ces travaux ont démontré l'applicabilité de la TG in vivo par VL dans la MW, tout en confirmant la nécessité d'un taux de transduction initial très élevé pour obtenir une efficacité thérapeutique suffisante et prévenir toute fibrose hépatiqueWilson's disease (WD) is a hereditary liver disease due to mutations in the ATP7B gene, which encodes for a copper transporter in the liver. It leads to a toxic accumulation of copper in the liver and the brain, responsible for early cirrhosis and neuropsychiatric disorders. Current medications are burdensome and may imply liver transplantation, which is in favor of alternative therapeutic strategies, such as gene therapy (GT). In this work we have first validated different biological markers for WD diagnosis and acute liver disease progression, as well as the use of computerized morphometric analysis of liver fibrosis in the LEC rat, an animal model for WD. We have then developed a surgical approach for the injection of the lentiviral vector (LV) into an isolated liver in hyperpressure. Its use allowed a restoration of the transduction efficacy after LV injection in rats pre-immunized against the LV envelop protein, and we have addressed its potential for GT in a fibrotic liver. We have then injected in young LEC rats a LV encoding for the cDNA of the ATP7B gene, under control of a liver-specific promoter and containing target sequences of the miR142-3p, to prevent the development of a specific immune response. It allowed a long-term restoration of the ATP7B enzymatic activity, but did not prevent the occurrence of liver fibrosis. Thus, we have demonstrated that in vivo lentiviral GT could be applied to WD, but that a very high initial hepatocytes transduction level was mandatory to achieve a therapeutic efficiency and to prevent the development of liver failure
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Doenaga, Diana. "Mécanismes moléculaires de l'action de Grb14 sur la différenciation, le métabolisme adipocytaire et la prolifération cellulaire." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T027.
Full textAbstract:
Actuellement, l'obésité et le diabète de type 2 sont des pathologies en pleine expansion dans les pays développés. Ces deux maladies sont liées à l'insulinorésistance, phénomène qui se caractérise par la perte d'efficacité de l'action de l'insuline. Le sujet de mon étude, Grb14, est un adaptateur moléculaire de la famille Grb7 qui s'exprime spécifiquement dans les tissus cibles de l'insuline. C'est un inhibiteur de la signalisation insulinique qui se fixe sur l'IR et bloque son activité tyrosine kinase. Mon travail de thèse a consisté à déterminer l'influence de Grb14 sur le fonctionnement des cellules adipocytaires, ainsi qu'à étudier les déterminants moléculaires des interactions protéiques de Grb14 au sein de la signalisation insulinique. J'ai mis en évidence un nouveau rôle de Grb14 : son influence inhibitrice sur la sécrétion de la leptine. De nouvelles hypothèses ont été soulevées afin de comprendre quel est le lien entre Grb14 et la sensibilité à l'insuline, mais aussi afin de déterminer si Grb14 pourrait être impliqué dans le cancer. Ainsi, mes résultats ont montré que Grb14 est une protéine qui est impliquée dans de multiples événements cellulairesCurrently, obesity and type 2 diabetes are pathologies in full expansion in the developed countries. These two diseases are linked to insulinoresistance, phenomenon which is characterized by the loss of effectiveness of insulin action. The subject of my study, Grb14, is a molecular adapter of the Grb7 family which is expressed specifically in insulin sensitive tissues. It is an inhibitor of insulin signaling which interacts with the IR and blocks its tyrosin kinase activity. My work consisted in determining the influence of Grb14 on adipocytes function, and studying the molecular determinants of Grb14 molecular interactions in insulin signaling. I highlighted a new role of Grb14: its inhibiting influence on the secretion of leptin. New assumptions were raised in order to understand the link between Grb14 and insulin sensitivity, but also in order to determine if Grb14 could be implicated in cancer. Thus, my results showed that Grb14 is a protein which is involved in multiple cellular events
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Begriche, Karima. "Désordres métaboliques induits par un déficit partiel en leptine : influence du régime alimentaire et prévention." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077197.
Full textAbstract:
La leptine, une adipokine sécrétée par le tissu adipeux blanc, joue un rôle majeur dans la régulation de la prise alimentaire et des dépenses énergétiques. Les individus, ou les animaux totalement dépourvus de leptine souffrent d'une obésité morbide, d'un diabète de type 2 et d'une stéatose hépatique massive. Chez l'homme, le déficit total en leptine est très rare. En revanche le déficit partiel en leptine (DPL) est plus répandu et pourrait prédisposer au développement d'un surpoids et d'une obésité. Les souris ob/+, partiellement déficientes en leptine, constituent un bon modèle de prédisposition génétique au développement d'un surpoids et de troubles métaboliques. Dans une première partie de ma thèse, nous avons recherché si les altérations métaboliques induites par le DPL sont aggravées par une alimentation hypercalorique (HC). Nos résultats montrent que dans un contexte nutritionnel d'excès calorique, le DPL aggrave l'augmentation de l'adiposité corporelle, l'intolérance au glucose (associée à une légère résistance à l'insuline), et favorise une hypertriglycéridémie à l'état nourri et le développement d'une stéatohépatite modérée. Dans une deuxième partie de ma thèse, nous avons recherché à déterminer si un traitement supplétif en leptine, ou une administration d'acide β-aminoisobutyrique (BAIBA, un catabolite de la thymine), pouvaient ou non prévenir l'apparition des anomalies métaboliques chez les souris ob/+ nourries par le régime HC. Nos résultats indiquent que le traitement supplétif en leptine, ou l'administration de BAIBA sont susceptibles de prévenir totalement ou partiellement les troubles métaboliques chez les souris ob/+ nourries par le régime HCLeptin , an adipokine mainly expressed in adipose tissue, plays a central role in the control of food intake and energy expenditure. Total leptin deficiency due to missense leptin (ob) gene mutation leads to morbid obesity, type 2 diabetes and massive steatosis in ob/ob mice or in men. Although total leptin deficiency is extremely rare in humans, a larger number of individuels could have low levels of leptin as the consequence of a heterozygous mutation within the ob gene (partial leptin deficiency, PLD). PLD mice (ob/+ mice) could be an experimental model to study genetic predisposition to overweight and metabolic abnormalities. In the first part of my thesis, by feeding ob/+ mice with an hypercaloric diet (HC diet), we try to show how a calorie excess can dramatically increase body fat mass and promote associated metabolic disorders. Our results clearly demonstrated that a PLD under HC feeding promotes obesity, glucose intolerance (associated with a mild insulin résistance), post-absorptive hypertriglyceridemia and steatohepatitis. In the second part of my thesis, we try to determine if a leptin supplementation or whether a β- aminoisobutyric acid (BAIBA, a catabolite of thymine) administration could prevent or not most of the disorders in ob/+ mice fed the HC diet. Our results showed that leptin supplementation and BAIBA administration were susceptible to prevent totally or partially most of the metabolic disorders in ob/+ mice fed the HC diet
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Muzard, Julien. "Glycoprotéine VI plaquettaire : développement d'un fragment d'anticorps recombinant anti-thrombotique et d'un peptido-mimétique." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077174.
Full textAbstract:
La glycoprotéine VI (GPVT), récepteur d'activation précoce des plaquettes par les collagènes, joue un rôle clé dans la thrombose artérielle, processus pathologique commun aux maladies cardiovasculaires. L'inhibition des interactions GPVI-collagène pourrait être une approche efficace pour le développement de nouvelles molécules antithrombotiques. Pour y parvenir, deux stratégies ont été envisagées lors de cette étude : 1) bloquer GPVI par un fragment d'anticorps recombinant, et 2) utiliser un mime peptidique soluble, compétiteur de GPVI. Voie 1 : A partir de l'hybridome 9O12. 2 sécréteur d'une IgG monoclonale, un fragment d'anticorps recombinant scFv a été conçu et exprimé par voie recombinante. Il conserve les caractéristiques de liaison de l'IgG parentale anti-GPVI (haute affinité et neutralisation de l'interaction GPVI-collagène). Ce scFv recombinant purifié inhibe l'agrégation plaquettaire induite par le collagène in vitro dans des conditions mimant le flux artériel. Le scFv humanisé que nous avons ensuite obtenu dans ce travail peut servir de module de base pour le développement d'un Fab humanisé. Voie 2 : Des mimes peptidiques solubles de GPVI ont été identifiés après criblage d'une banque de dodécapeptides vis-à-vis de l'IgG 9O12. 2. L'un d'entre eux a été synthétisé sous forme de peptide contraint. Il se lie au collagène (KD=10"8M) et entre en compétition avec la GPVI recombinante pour la liaison au collagène. La détection d'une accumulation de collagène (fibrose) a été observée in vivo. Cette propriété le rend particulièrement attractif pour le développement d'une méthode d'imagerie isotopique non invasive permettant le diagnostic et le suivi de la fibroseGlycoprotein VI (GPVI), the major receptor for platelet activation by collagens, plays an important role in arterial thrombosis, a pathologic process common to cardiovascular diseases. Inhibition of GPVI-collagen interaction could represent an attractive strategy to develop antithrombotic molecules. Two approaches were evaluated in this study : 1) Blocking GPVI with a recombinant antibody fragment, and 2) Using a soluble peptidomimetick witch compete with GPVI for binding to collagen. Strategy 1 : Starting from 9O12. 2 hybridoma secreting a monoclonal IgG, a recombinant single chain antibody fragment was design and expressed as a recombinant protein in the periplasm of bacteria. It retains the binding proprietes of the parental IgG (high affinity, neutralisation of GPVI-collagen interaction). Purified scFv is able to inhibit platelet aggregation induced by collagen in vitro in conditions which mimick the arterial flow. The humanized scFv were next obtained an it can be use as a starting block to design a recombinant therapeutic humanized Fab fragment. Strategy 2 : After screening of a random dodecapeptide library expressed at the bacterial surface with the neutralizing antibody IgG 9O12. 2, solubles peptidomimeticks of human GPVI were identified. One of them were synthetized as constrained peptide. It binds to collagen, compete with GPVI for binding to collagen (KD=10"8M). Fibrosis (collagen accumulation) was detected in vivo using radiolabelled peptide. This capacity to bind to collagen is used to develop an non invasive isotopic imagery method for the diagnostic and the evolution of fibrosis
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Bidet, Philippe. "Caractérisation génétique d'un sous-groupe hautement virulent de Escherichia coli responsable de pathologies extra-intestinales." Paris 5, 2007. http://www.theses.fr/2007PA05T020.
Full textAbstract:
La caractérisation par DNA-array du sous-groupe hautement virulent de E. Coli responsable de pathologies invasives, défini par le ribotype B2i et le « Séquence-Type » 29 (EcMLST), nous a permis de mettre au point une PCR de détection spécifique. En combinant le sérotypage au MLST nous avons pu distinguer, au sein de ce sous-groupe, trois « séquence-O-types » associés, chez les enfants de moins de 3 mois, aux urosepsis (STc29°2), aux méningites (STc29018) ou à ces deux syndromes (STc29°45). La souche S88, représentative du clone STc29 émergeant en France, a été séquencée dans le cadre du projet Coliscope. Nous avons montré que deux attributs de cette souche, un nouvel antigène O et un plasmide ColV proche de ceux des souches pathogènes aviaires, sont indispensables pour sa virulence dans un modèle animal de méningite. La compréhension de l'origine de ce clone sera facilitée grâce aux outils moléculaires que nous avons développésUsing DNA-array method, we developed a PCR able to detect the highly virulent E. Coli subgroup characterized by ribotype B2i and Sequence-Type 29 (EcMLST). Combining MLST and serotyping, we were able to distinguish among E. Coli strains belonging to this subgroup and causing invasive diseases in infants, three «sequence-O-types» associated with urosepsis (STc2902), meningitis (STc29018) or both syndromes (STc29O4S). Strain S88, representative of the STC29045 emerging clone in France has been sequenced in the Coliscope project. We found that two different traits of this strain, a new O antigen and a ColV plasmid close to those of avian pathogenic strains, are essential for its virulence in a neonatal meningitis rat model. Unraveling the origin of this clone will be aided by the molecular tools we have developed
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Fourmond, Vincent. "Etudes électrochimiques de chaînes de transferts d'électrons photosynthétiques : ou Vers une photoproduction biomimétique d'hydrogène." Paris 7, 2007. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00361224.
Full textAbstract:
Pour assurer l'avenir énergétique de l'humanité, il est vital de se tourner vers d'autres ressources que les combustibles fossiles. La photosynthèse est un système efficace élaboré sur des centaines de millions d'années pour convertir l'énergie lumineuse en énergie chimique. Certaines algues sont capables de produire de l'hydrogène à partir d'eau en utilisant des chaînes photosynthétiques pour alimenter des enzymes, les hydrogénases, qui catalysent la formation d'hydrogène gazeux. Cette thèse s'inscrit dans un projet d'étudier et de comprendre ces systèmes pour être en mesure d'imiter leurs fonctions avec des systèmes artificiels. Au cours de cette thèse, des chaînes de transferts d'électrons impliquant des protéines photosynthétiques (photosystème I) et leurs partenaires ont été étudiées ex-vivo dans des cellules électrochimiques par voltamétrie cyclique. L'activité catalytique des photosystèmes sous éclairement permet d'obtenir une transfert linéaire d'électrons depuis l'électrode jusqu'à un accepteur final. Une méthode fondée sur les mesures de courants photocatalytiques a été mise au point et utilisée pour explorer les interactions de différent partenaires de la chaîne photosynthétique. Il a été montré qu'il est possible de choisir la réaction de la chaîne à étudier par cette méthode en adaptant les concentrations des différents partenaires. Cette méthode a été appliquée avec succès à l'étude des partenaires directs du photosystème I et à l'élucidation de certains aspects du fonctionnement de la ferrédoxine:NADPH oxydoréductase. Ces résultats s'annoncent prometteurs pour l'étude des hydrogénases par la même techniqueTo secure the energetic future of humanity, it is of crucial importance to find alternatives to fossil fuels. Optimized in hundreds of million years of evolution photosynthesis is a very efficient System to convert light into Chemical energy. Some algae are able to produce molecular hydrogen from water using photosynthetic electron-transfer chains to feed reducing power to enzymes called hydrogenases that catalyse the reduction of protons. The present work is part of a long term project to fully characterize and understand these Systems in order to mimick their functions with artificial Systems. During this thesis, electron-transfer chains involving photosynthetic enzymes (photosystem I) were studied ex-vivo in an electrochemical cell by means of cyclic voltammetry. The catalytic activity of the photosystem upon illumination is the origin of a linear electron transfer from the electrode to the final accepter. A method based on the measure of photocatalytic currents was designed and applied to the study of the interactions of the different partners of the photosynthetic chain. It was shown that it is possible to choose the reaction to be studied by chosing the concentration of the different partners. This method was used with success for the study of the direct partners photosystem I (cytochrome c6, ferredoxin) and also for the exploration of some aspects of the function of ferredoxin:NADPH oxydoreductase. This work sets a solid basis for the study of photoreduction of hydrogenases
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Cochard, Fabien. "Utilisation d'indoles 2-substitués pour la préparation de nouveaux dérivés spiranniques de l'indole et de 1,2,3,4-tétrahydro(thia)carbazoles. Approche multicomposant." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP204.
Full textAbstract:
Dans une première partie, dans le cadre d'une étude préliminaire sur la préparation de thia-b-carbolines, des réactions d'aza-Wittig suivies d'une électrocyclisation, ont été réalisées à partir de l'iminophosphorane de la tryptamine, pour obtenir des tétrahydro-b-carbolines fonctionnalisées. Ces réactions donnent, dans certains cas, des composés originaux qui peuvent se révéler actifs sur le plan biologique. Dans une deuxième partie, une méthode permettant d'accéder à des dérivés contraints spiranniques de tryptophanes b-substitués, a été développée. Cette synthèse de spiro[pyrrolidinon-3,3'-indoles], basée sur une condensation trimoléculaire suivie d'une réaction domino, a été appliquée à des indoles substitués en position 2 ainsi qu'à l'oxindole. Cette approche multicomposant a été étendue à la préparation "one pot" de tétrahydrocarbazoles polyfonctionnalisés, à partir d'indoles substitués en position 2, via une réaction pseudo-tétramoléculaire. Les tétrahydrocarbazoles synthétisés ont été modifiés par des réactions de cyclisation intramoléculaire pour aboutir à de nouveaux hétérocycles@In a first part, in the aim to prepare thia-b-carbolines, we realized the synthesis of functionnalized tetrahydro-b-carbolines by aza-Wittig reaction, followed by electrocyclisation. In some cases, these reactions give original compounds, wich may be biollogically active. In a second part, a synthesis access to b-substituted tryptophans has been developped. This spiro[pyrrolidinon-3,3'-indoles]synthesis, based on a trimolecular condensation (indole/aldehyde/Meldrum's acid) followed by a domino-reaction (acylazide formation-Curtius rearrangement-intramolecular spirocyclization), has been applied to 2-substituted indoles and also oxindole. This multicomponent approach has been extended to the one pot preparation of polyfunctionnalized tetrahydrocarbazoles, from 2-substituted indoles, by a pseudotetramolecular reaction (y-4CR). The synthesized tetrahydrocarbazoles have been modified by intramolecular cyclisation to obtain new complex heterocycles
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Scandiuzzi, Lisa. "Study of the role of mast cells in an experimental model of glomerulonephritis." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T045.
Full textAbstract:
Nous avons étudié le rôle des mastocytes dans un modèle expérimental de glomérulonéphrite. Les souris W/Wv, déficientes en mastocytes, présentent une aggravation de la maladie par rapport aux souris contrôles avec une fonction rénale diminuée associé à une augmentation de l'infiltration leucocytaire et du dépôt glomérulaire. Ces dépôts sont enrichis en fibrine et collagène dans la souris W/Wv. D'autre part, MCP-4, la chymase spécifique des mastocytes, a été étudiée comme un médiateur protecteur potentiel. Compare aux souris sauvages celles déficientes en MCP-4-/- montrent une maladie rénale moins sévère avec moins d'infiltration leucocytaire, moins de cytokines inflammatoires et d'angiotensine. Nos résultats montrent le rôle complexe des mastocytes. Alors que leur action globale semble être protectrice, certains de leurs médiateurs seraient pro-inflammatoiresWe studied the role of mast cells (MC) in anti-GBM-induced glomerulonephritis. MC-deficient W/Wv mice showed aggravated disease over +/+ mice associated with deteriorated renal function, macrophage infiltration and glomerular deposits. Deposits in W/Wv mice were enriched in fibrin and collagen due in part to defective urinary tPA/uPA activity. MC-specific MCP-4 chymase was examined as a candidate protective mediator. MCP-4-/- mice showed improved renal function with less prominent leukocyte infiltration and lower levels of pro-inflammatory cytokines and angiotensin. Our data reveal a complex role of MCs. While their global action is protective some of their mediators are pro-inflammatory. The final outcome in a given disease may critically depend on a given pathophysiological context
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Le, Meur Muriel. "Mise au point sur la sismothérapie dans les années 1990 et étude portant sur 30 dossiers." Nantes, 1995. http://www.theses.fr/1995NANT219M.
Full text
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Abou-Haila, Aïda. "Etude de la regionalisation structurale, metabolique et fonctionnelle de l'epididyme de souris." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S009.
Full textAbstract:
L'épididyme de souris apparaît, sur le plan morphologique, métabolique et fonctionnel constitué de deux entités distinctes, la partie proximale à vocation essentiellement sécrétrice, et subdivisée en 5 segments bien individualisés, les parties médiane et distale à vocation essentiellement absorbante. La régionalisation du canal apparaît progressivement au cours de la différenciation post-natale. La structure et le métabolisme de l'épididyme sont principalement placés sous le contrôle des androgènes circulants. L'influence hormonale s'exerce de manière spécifique sur chacune des deux entités du canal.
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Batawila, Komlan. "Diversité, écologie et propriétés antifongiques des Combretaceae du Togo." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMP201.
Full textAbstract:
Ce travail illustre la valorisation des Combretaceae à potentialités thérapeutiques au Togo. L'étude phytoécologique a permis de montrer que les espèces de Combretaceae sont diversement réparties dans les zones écologiques du Togo. Elles se développent dans les conditions écologiques précises et sont liées à des groupements végétaux relativement bien définis. Les espèces appartenant aux genres Anogeissus, Combretum et Terminalia sont les plus répandues. L'étude antifongique a montré que les extraits hydro-éthanoliques de ces Combretaceae inhibent à des degrés divers la croissance in vitro de 21 souches fongiques pathogènes. Les extraits des plantes appartenant aux genres Anogeissus, Pteleopsis et Terminalia se sont montrés les plus actifs. L'analyse phytochimique sommaire a révélé la présence des tanins, des flavonoïdes et des saponines qui pourraient être responsables des activités antifongiques. Ces résultats justifient l'utilisation traditionnelle de la plupart de ces Combretaceae dans le traitement des dermatoses et de certaines candidoses@This work illustrates the valuation of Combretaceae with therapeutic potentialities in Togo. The phytoecological study show that the species of Combretaceae are variously distributed in the ecological zones of Togo. They growth in identified ecological conditions and are associated to relatively well defined plant groups. Species belonging to Anogeissus, Combretum and Terminalia genus are most widespread. In vitro antifungal investigation show that hydroethanolic extracts of Combretaceae were inhibit in different degrees the growth of tweenty one pathogenic fongic. The extracts of Anogeissus, Pteleopsis and Terminalia plant species showed good antifungal effects. Phytochemical screening shows that the extracts of these plants contained tannins, flavonoids and saponins which might be responsible for their activity
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Bigot, Armelle. "Contribution à la compréhension des mécanismes moléculaires impliqués dans la multiplication intracellulaire de Listeria monocytogenes." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077209.
Full textAbstract:
L. Monocytogenes est une bactérie à Gram positif ubiquiste qui présente la capacité d'infecter l'homme et de nombreux mammifères. Les facteurs de virulence de cette bactérie sont majoritairement des protéines sécrétées ou associées à la paroi qui participent au cycle de multiplication intracellulaire et à la dissémination dans les organes. Dans l'environnement, cette bactérie est généralement mobile du fait de l'expression de flagelles péritriches. Le corps basai du flagelle constitue un appareil de sécrétion permettant l'export des protéines flagellaires. Nous avons étudié le rôle des gènes fliF et flil, codant des protéines du corps basai, dans la biogenèse du flagelle. In vitro, à 30°C, l'absence de flagelle réduit l'entrée dans les cellules eucaryotes. Cependant, l'inactivation de ces gènes a un impact modéré in vivo dans le modèle murin. Dans un second temps, nous avons étudié le gène rnhB de L monocytogenes. Une délétion de rnhB réduit de manière importante la virulence de la bactérie in vivo. De plus, la sur-expression de rnhB est délétère et modifie l'expression de nombreux gènes impliqués entre autres dans le métabolisme et l'acquisition des acides aminés. Ces résultats suggèrent un rôle régulateur pléïotrope de rnhB lors de l'infection. Enfin, nous avons entrepris l'étude de systèmes ABC de transports des acides aminés et des oligopeptides. Nos premiers résultats indiquent que dans les modèles cellulaires d'infection in vitro, ces systèmes de transports ne jouent pas un rôle majeur dans la multiplication intracytosolique. Cependant, les études in vivo révèlent un rôle important de certains d'entre eux au cours de l'infection de l'hôteL. Monocytogenes is an ubiquist Gram positive bacteria which is able to infect human and numerous mammal species. The virulence factors of this bacteria are mainly secreted or cell wall-associated proteins which participate to the intracellular replication cycle and to the dissemination in the organs of the host. In the environment, bacterial mobility is mediated by a peritrichous flagellation. The basal body of the flagella is a secretion apparatus which allows export of flagellar protein. We studied the role of fliF and flil, two genes encoding basal body protein, in the flagellum biogenesis. In vitro, at 30°C, the lack of flagella impairs adhesion and subsequently entry inside the eukaryotic cells. However, the deletion of these genes only have a moderate impact in the mouse model of infection. Secondly, we studied the rnhB gene of L monocytogenes. An rnhB deletion impairs significantly bacterial virulence in the mouse. However, virulence factor expression does not seem to be impaired. Strikingly, when rnhB is over-expressed, bacterial virulence is also impaired and expression of numerous genes, mainly implied in metabolism or amino-acid acquisition, is modified. These results suggest a pleotropic regulatory role of rnhB during infection. Finally, we undertook the study of ABC transporter Systems involved in amino acids and oligopeptides uptake. Amino acid acquisition belongs to metabolic pathways which are regulated during intracellular life. Our first results indicate that in vitro these Systems do not play an important role in intracellular multiplication. However in vivo studies show that some of them are important during infection of the host
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Cohen-Solal, Martine. "Cytokines monocytaires et resorption au cours des pertes osseuses." Paris 5, 1994. http://www.theses.fr/1994PA05S008.
Full textAbstract:
La perte osseuse qui caracterise l'osteoporose est un facteur determinant de la fragilite osseuse. L'hyperresorption contribue a la perte osseuse par l'augmentation du nombre et de l'activite des osteoclastes. Des etudes experimentales suggerent que les cytokines jouent un role dans la regulation locale de la differenciation osteoclastique. Le but de ce travail est de preciser le role des cytokines de la resorption dans diverses situations cliniques. Grace a une nouvelle methode histomorphometrique, nous avons montre que la resorption osseuse est un phenomene majeur de la perte osseuse de patientes osteoporotiques, et que le nombre de cellules osteoclastiques est lie a l'importance de la resorption dans l'osteoporose commune. Afin d'en etudier les determinants, les modifications de production de cytokines par les monocytes circulants de femmes menopausees ont ete etudiees. L'activite de resorption osseuse in vitro de surnageant de culture de monocytes est augmentee chez des femmes menopausees, est liee a l'augmentation des taux d'il1, d'il6 et de tnf et peut etre inhibee par l'addition d'inhibiteurs. Chez des femmes plus agees non osteoporotiques, la production des 3 cytokines par des monocytes circulants en culture etait correlee a celle des monocytes medullaires prelevee au femur. Le nombre de cellules osteoclast-like (ocl) obtenu a la fin de culture des monocytes medullaires etait positivement correle au nombre d'osteoclastes presents sur les biopsies osseuses du col femoral, indiquant ainsi que la differenciation osteoclastique observee in vitro refletait l'activite osteoclastique in vivo. Enfin, nous avons etudie des patients atteints de syndrome d'hyper ige, syndrome rare d'immuno-deficience lors duquel survient des fractures. L'hyperresorption osseuse induite in vitro par les surnageants monocytaires est inhibee par l'indomethacine et s'associe a un defaut de production d'ifn.
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Renault, Éric. "Dynamique reactionnelle de l'etat excite triplet et des especes radicalaires de l'antitumoral pazelliptine en milieu aqueux et vis a vis des acides nucleiques : une etude par photolyse laser et radiolyse pulsee." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S001.
Full textAbstract:
L'activite de la drogue antitumorale pazelliptine (pze) ne semble pas etre due seulement a son intercalation dans l'adn, mais necessiterait une activation metabolique conduisant a la formation d'especes radicalaires. Une partie de ce travail porte sur l'etude de la dynamique reactionnelle de telles especes en solution et vis-a-vis de l'adn. Experimentalement, les radicaux de la pze sont generes par les methodes de radiolyse pulsee ou de photolyse-laser en utilisant la possibilite d'une photoionisation a deux photons de la drogue. Ces deux etudes complementaires ont permis de caracteriser par des mesures de spectroscopie d'absorption transitoire, la reactivite des radicaux de la pze dans ces differents etats de protonation et de proposer un mecanisme d'action de la drogue vis-a-vis de l'adn impliquant ses especes radicalaires et les especes activees de l'oxygene. Par ailleurs, nous avons montre que la pze est un photosensibilisateur de la degradation de l'adn en mesurant les coupures simple et double brin. L'investigation des mecanismes moleculaires responsables de ce processus nous a conduit a caracteriser les proprietes photophysiques et photochimiques de l'etat triplet de la pze en solution et complexee aux acides nucleiques. Les resultats nous ont permis de proposer un mode d'action de la drogue par l'intermediaire d'une oxydation de l'adn obtenue par un transfert de charge a partir de l'etat triplet de pze.
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Dossou, Yovo Omer Placide. "Recherche de gènes modificateurs de l'expression clinique de la drepanocytose." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077186.
Full textAbstract:
L'expression clinique de la drépanocytose est très variable et est modulée par des facteurs environnementaux et génétiques liés au locus α et/ou β globine. Cependant, d'autres facteurs génétiques modulateurs non liés aux loci globine sont mis en cause. Nous avons recherché l'existence d'une corrélation entre les polymorphismes de gènes candidats tels que : MBL2, RANTES, VCAM-1 et ET-1, et l'apparition des deux principales complications à savoir les crises vaso occlusives et les infections dans 2 populations : i) la population générale béninoise (adultes et enfants), ii) une cohorte d'enfants drépanocytaires homozygotes SS. Nous montrons : a) une sur-représentation du variant p. G57E du gène MBL2 à l'état hétérozygote chez les adultes non drépanocytaires versus les nouveaux nés contrôles (fréquence allélique, 30. 2% contre 25%, respectivement, p=0. 01). Ceci corrobore l'hypothèse d'un avantage sélectif conféré par ce variant en association avec un taux plasmatique abaissé de la protéine MBL ; b) un effet protecteur du variant g. Ln1. 1T>C de l'intron 1 du gène RANTES contre la susceptibilité aux infections chez les enfants SS. Il s'agit de la première étude mettant en évidence une association entre un variant de ce gène, codant pour une chimiokine pro inflammatoire et une atténuation d'une des complications de la drépanocytose. La mise en évidence de RANTES comme gène modulateur, contribue à améliorer la compréhension de la variabilité de l'expression clinique de la maladie. L'identification des patients susceptibles de développer des complications infectieuses permettrait de leur faire bénéficier d'une prise en charge préventive plus adaptée et plus cibléeClinical expression of sickle cell disease is quite variable. Interplay of both environmental and genetic factors, linked and unlinked to the globin loci (α and β clusters), indeed contribute to such variability. We focus our attention on the potential contribution of genetic modifiers unlinked to the two globin loci viz MBL2, RANTES, VCAM-1 and ET-1 to two major complications of sickle cell disease namely vaso occlusive crisis and susceptibility to severe infections in two population groups; an unselected benin general population and a clinically followed cohort of sickle cell children. We demonstrated a) an over representation of low MBL2 expressor p. G57E allele at heterozygote state in non sickle cell adults as compared to new born controls (30,2% versus 25% p=0. 01) suggesting a selective advantage ; b) protection against susceptibility to infections in sickle cell children by the variant g. Lnl. 1T>C allele of RANTES, highlighting, for the first time, an association between a pro inflammatory cytokine polymorphism and attenuation of one of the major complication of sickle cell disease. This surrogate marker may find clinical application in targeting susceptible patients eligible for efficacious anti infectious measures
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Huet, Eric. "Contrôle des cascades protéolytiques (système plasminogène/plasmine et métalloprotéinases matricielles) impliquées dans la progression tumorale : stimulation par les peptides d'élastine et inhibition par l'acide oléique." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMM206.
Full textAbstract:
Nous nous sommes intéressés au contrôle des cascades protéolytiques impliquées dans la progression tumorale (système plasminogène/plasmine et métallo-protéinases matricielles). Nous avons pu ainsi montrer que les peptides d'élastine augmentent à la fois la sécrétion et l'activation des cascades protéolytiques par des cellules BZR et HT-1080 en culture. Cette augmentation entraîne une stimulation des capacités de ces cellules à envahir un gel de Matrigel ou une matrice de collagène de type I. Nous avons pu également mettre en évidence une accélération du processus d'angiogenèse par des HUVECs incubées en présence de peptides d'élastine. Ce phénomène est corrélé avec une augmentation de l'expression de la MT1-MMP et de l'activation de la MMP-2. Le contrôle des cascades protéolytiques apparaît comme une cible thérapeutique importante dans le traitement des cancers. Nous avons pu ainsi montrer que l'acide oléique inhibait à la fois l'activation et l'activité des cascades protéolytiquesWe here investigated the control of the proteolytic cascades implicated in tumoral progression (plasminogen/plasmin system and matrix metalloproteinases). Thus, we showed that elastin peptides stimulated proteolytic cascades by both BZR and HT-1080 cells. This stimulation enhanced the invasive capacity of cells toward Matrigel or type I collagen matrix. We could also evidenced the acceleration of angiogenesis when HUVECs were incubated with elastin peptides. This effect was correlated with an enhancement of MT1-MMP secretion and MMP-2 activation. The control of the proteolytic cascades appeared to be important for cancer treatment. Long chain unsaturated fatty acids as oleic acid were found to inhibit both proteolytic cascades activation and activity
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Berber, Hatice. "Synthèse de trifluorométhylpyrimidines à potentialité antivirale, antibactérienne ou antiparasitaire." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP203.
Full textAbstract:
Diverses trifluorométhylpyrimidines à visée thérapeutique ont été synthétisées à partir de précurseurs fluorés de type énaminocétone et b-cétonitrile. La cyclisation s'effectue en présence d'amidines telles que la O-méthylisourée, l'acétamidine ou la guanidine. Des pyrimidones ont permis d'accéder à des analogues fluorés de nucléosides par couplage base-sucre de Vorbrüggen. Une autre application vers des analogues de sulfapyrimidines antibactériennes a été initiée à partir d'une 2-méthylpyrimidine. Une cyclisation nouvelle d'éthers d'énol issus de b-cétonitriles fluorés avec la guanidine a été décriteVarious trifluoromethylpyrimidines were obtained from precursors such as enaminoketone and b-ketonitrile. The cyclocondensation occurs with amidines such as O-methylisourea, acetamidine or guanidine. Some cyclic and acyclic nucleoside analogues were also prepared from pyrimidones according to the Vorbrüggen's procedure. An other application towards fluorinated analogues of antibacterial sulfapyrimidines was initiated starting from 2-methylpyrimidine. A novel type of cyclisation between enol ether of fluorinated b-ketonitrile and guanidine was described
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Morre, Jacqueline. "La calmoduline au cours de la spermatogenese et de la maturation epidymaire." Paris 5, 1986. http://www.theses.fr/1986PA05S002.
Full textAbstract:
Mise en evidence de calmoduline dans le spermatozoide ejacule. Taux intracellulaire et localisation au cours des differentes etapes de differenciation morphologique. Dosage specifique et techniques immunocytochimiques utilisables en microscopie electronique
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Coutelis, Jean-Baptiste. "Vesicular traffic in axis specification during Drosophila melanogaster oogenisis : a study of rab6 gene function in organization of the egg-chamber and in oskar mRNA localization." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077208.
Full textAbstract:
Les axes embryonnaires de la mouche drosophila melanogaster sont définis avant la fécondation par la localisation asymétrique des déterminants moléculaires dans l'ovocyte. Durant l'ovogenèse, un ensemble de processus complexes mène à cette polarisation de l'ovocyte. Dans de nombreux systèmes multi- et unicellulaires, le transport ordonné et dirigé de membranes et de protéines assiste et contribue à l'établissement de la polarité. Le sujet de mon travail de thèse fut l'étude du rôle de rab6, un membre de la famille des gtpase monomériques, dans l'organisation du follicule ovarien et la localisation des déterminants moléculaires dans l'ovocyte. L'analyse de mutant amorphe de rab6 a révélé que la protéine est requise pour l'organisation même du follicule ovarien et le maintien des membranes cytoplasmiques individualisant les cellules nourricières le composant. L'examen de la distribution de marqueurs du transport vésiculaire a montré que l'exocytose est fortement affectée dans ces follicules ovariens mutants pour rab6, expliquant vraisemblablement les phénotypes observés. De plus, j'ai observé que rab6 était requis pour l'organisation du cytosquelette de microtubules et pour la localisation de l'arnm oskar au pôle postérieur de l'ovocyte. Enfin, j'ai montré que, in vivo, rab6 et bicaudal-d, une protéine connue chez la drosophile pour son rôle dans la localisation d'arnm, sont présents dans un même complexe moléculaire pendant l'ovogenèse. L'analyse génétique de combinaisons de mutants pour ces gènes étaye cette relation entre rab6 et bicaudal-d et indique que ces protéines coopèrent à la localisation de l'arnm oskar. Finalement, je propose que pendant l'ovogenèse de la drosophile, les fonctions de rab6 dans la régulation du transport vésiculaire servent doublement. Premièrement et d'une faÇon générale, rab6 est nécessaire à la croissance et à l'organisation du follicule ovarien. Ensuite et plus spécifiquement, rab6 assiste dans l'ovocyte la polarisation du cytosquelette de microtubule et la lÇcalisation de l'arnm oskar. Ces résultats soulignent l'importance du transport vésiculaire pour l'établissement de la polarité et la localisation des déterminants pendant l'ovogenèse de la drosophileDrosophila melanogaster body axes are defined by precise localization and restriction of molecular determinants in the oocyte. Polarization of the oocyte during oogenesis is critical for this process. The directed traffic of membranes and proteins is a crucial component of polarity establishment in various cell types and organisms. During my phd work, i investigated the role of the small monomeric gtpase rab6 in organization of the egg-chamber and asymmetric localization of the body axis determinants during oogenesis. I found that absence of rab6 function causes egg-chamber disorganization and loss of nurse cell plasma membranes. I also observed that exocytosis is affected in rab6 null egg-chambers, providing an explanation for the observed phenotypes. Rab6 is also required for polarization of the oocyte microtubule cytoskeleton and localization of oskar mrna at the oocyte posterior pole. Furthermore, i showed that, in vivo, rab6 is found in a complex with bicaudal-d, known for its role in mrna localization in drosophila. Genetic analysis reveals that, in the oocyte, rab6 and bicaudal-d cooperate in oskar mrna localization. As a conclusion, i propose that during drosophila oogenesis, rab6-dependent membrane trafficking is doubly required, first for general organization and growth of the egg- chamber, and second, more specifically, for polarization of the microtubule cytoskeleton and localization of oskar mrna. These findings highlight the central role of vesicular trafficking in establishment of polarity and determinant localization in drosophila
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Chauvier, David. "Camptothécine versus homocamptothécine : approche moleculaire et cellulaire. Induction de l'apoptose et modulation de la résistance multiple." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP206.
Full textAbstract:
La spectrofluorimètrie a permis de suivre l'hydrolyse de l'homocamptothécine (hCPT), en absence et présence de topoisomérase I (top1) et/ou ADN. La stabilisation du complexe de clivage par hCPT impliquerait un système de complémentarité stérique de son cycle E avec un site du complexe ADN-top1, plutôt qu'une réaction d'ouverture du cycle E comme pour les camptothécines (CPTs). HCPT/CPT ont été détectées dans le cytoplasme des cellules MCF7 et HT29 par microspectrofluorimètrie confocale laser en excitation bi-photonique. L'induction de l'apoptose par hCPT dans les cellules HT29 implique la dissipation du Djm, acidification du cytosol, production d'espèces réactives de l'oxygène, libération du cytochrome C, activation de la caspase-3, régulation transcriptionelle, une production de novo de céramide. Enfin, hCPT/CPT sont des substrats de MRP1 mais pas de Pgp. Utilisées à des concentrations sub-toxiques en association avec la daunorubicine (DNR), hCPT/CPT potentialisent la cytotoxicité de la DNR en inhibant l'activité d'efflux de MRP1, restaurant l'accumulation nucléaire de DNR dans des lignées K562 et MCF7 résistantes aux anthracyclinesHomocamptothecin (hCPT), a topoisomerase I (top1) inhibitor, combines higher cytotoxicity and lactone stability in aqueous buffer than camptothecin (hCPT). Spectrofluorometry has allowed the real-time investigation of its hydrolysis kinetic in absence and presence of top1 and/or ADN. The stabilisation of the cleavable complex by hCPT implies steric contacts of the b-hydroxylactone ring with the DNA-top1 complex, rather than opening of the lactone ring, as observed for CPTs. HCPT/CPT have been detected in the cytoplasm of MCF7 and HT29 cancer cells by 2-photon laser confocal microspectrofluorometry,. The induction of apoptosis by hCPT is mediated in HT29 cells by DYm disruption, cytosolic acidification, reactive oxygen species, cytochrome C release, caspase-3 activation, gene expression, de novo synthesis of ceramide. HCPT/CPT have been identified to be substrates of MRP1 but not Pgp proteins. Sub-toxic doses of hCPT/CPT potentiated daunorubicin (DNR) cytotoxicity by inhibition of MRP1 activity, in correlation with increase of the nuclear accumulation of DNR in anthracyclins-resistant K562 and MCF7 cells
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Hollender, Patrick. "Capacités migratoires et activité métalloprotéase de cellules impliquées dans le développement tumoral métastasiant et la réponse immune : cas des cellules leucémiques et des cellules dendritiques dérivées de monocytes." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMP207.
Full textAbstract:
Tout d'abord, nous avons montré que la différenciation granulocytaire de cellules myéloi͏̈des HL-60 et NB4 par l'ATRA et l'ACLA augmente leurs propriétés migratoires. L'ATRA induit une stimulation de l'uPA alors que l'ACLA stimule l'expression de la MMP-9. Ainsi, la MMP-9 et l'uPA facilitent la migration des cellules différenciées et, l'utilisation d'inhibiteurs de protéase au cours de processus de différenciation pourrait constituer un bénéfice clinique dans le traitement de " l'ATRA syndrôme ". Ensuite, nous avons étudié le profil migratoire de cellules dendritiques immatures et matures, dérivées de monocytes humains, et qualifiées de cellules professionnelles de la présentation de l'antigène. Nous avons pu démontrer l'importance de la forme membranaire active de la MMP-9 sur les capacités migratoires élevées des cellules dendritiques matures. Nous avons aussi montré que l'impact de certaines chimiokines (MIP-3b) sur la migration pourrait s'expliquer par le fait que ces chimiokines augmentent la production de la forme active de la MMP-9 et l'ensemble de ces résultats constitue une base de données utile à une exploitation clinique de ce type cellulaire.
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Caillet-Saguy, Célia. "Etude de l'interaction de l'hémophore HasAsm avec ses partenaires : l'hème et le récepteur spécifique de membrane externe HasR." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077185.
Full textAbstract:
L'hémophore HasA, sécrété dans le milieu extracellulaire par S. Marcescens, est un transporteur d'hème, qui extrait Thème des hémoprotéines de l'hôte et le délivre à un récepteur de membrane externe spécifique HasR. Le fer de Thème de holoHasA est ferrique et présente une coordination originale histidine 32/tyrosine 75. Un troisième résidu du site de fixation de Thème, H83, forme une liaison hydrogène forte avec Y75, augmentant son caractère tyrosinate et stabilisant la coordination fer-Y75. Les holoprotéines sauvage et mutées au niveau de ces trois résidus ont été caractérisées par spectroscopies UV, RMN, rR et RPE. Les noyaux du squelette et les Cb de holoHasA ont été attribués au moyen d'expériences RMN 15N et 13C en détection directe. Des résonances des ligands axiaux ont été détectées. Nous avons montré que HasA présente un équilibre thermique haut spin/bas spin associé à la modulation de la force de la liaison de coordination fer de Thème-ligand axial Y75, elle-même modulée par la force de la liaison hydrogène Y75-H83. Chez le mutant Y75A, H83 devient un ligand alternatif. Chez le mutant H83A, on observe une série d'équilibres dépendant du pH entre des espèces de coordination variable et pour lesquelles Y75 n'est plus ligand. L'espèce pentacoordonnée détectée à pH physiologique, avec H32 pour unique ligand, pourrait représenter un intermédiaire possible du mécanisme de transfert de Thème au récepteur HasR. Le processus de transfert de Thème de HasA à HasR a été étudié par des expériences RMN HSQC TROSY CRINEPT sur les complexes apoHasA-HasR et holoHasA-HasR en micelles de détergent et a permis d'identifier les régions de HasA impliquées dans l'interactionThe extracellular hemophore HasA from S. Marcescens is a heme carrier protein that extracts heme from host hemoproteins and shuttles it to a specific outer membrane receptor HasR. In HasA, heme iron is ferric and has an original coordination with a Histidine 32/Tyrosine 75 axial ligands pair. A third residue of the binding pocket, H83, forms a tight hydrogen bond with Y75, increasing the tyrosinate character of Y75 and stabilizing the Y75-heme iron coordination. Wild-type and mutated holoproteins, H32A, Y75A and H83A, were characterized by UV, NMR, rR and EPR spectroscopies. Using 13C/15N-direct detection NMR experiments, optimized for paramagnetic proteins, it has been possible to assign backbone nuclei and Cb of holoHasA. Resonances of the axial ligands have been detected by 1D NMR experiments. We have shown that HasA presents a thermal high spin/low spin equilibrium related to the modulation of the strength of the heme iron-Y75 axial ligand coordination bond which is modulated by the Y75-H83 H-bond. In the Y75A mutant, H83 becomes an alternatif ligand. In the H83A mutant, removal of H83 causes detachment of the Y75 ligand, thus giving rise to a series of pH dependent equilibria among species with different axial ligation. The five coordinated species detected at physiological pH, with H32 as axial ligand, may represent a possible intermediate of the heme transfer mechanism to the membrane receptor HasR. The heme release process from HasA to HasR were investigated by CRINEPT-TROSY HSQC NMR experiments on apoHasA-HasR and holoHasA-HasR complexes in DPC micelles allowing the mapping of the regions of HasA involved in the HasA-HasR interaction
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Pineau, Jean-Claude. "Interpretation biometrique de donnees objectives concernant les sportifs : l'avenir des performances envisage dans un concept general d'evolution." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S002.
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Lefevre, Fabrice. "Relations entre matrice extracellulaire et metabolisme nucléolaire dans les fibroblastes en culture." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMM202.
Full text
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Drouet, Ludovic. "Mise au point d'un modèle expérimental d'étude des intéractions entre le sang circulant et la paroi vasculaire." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S018.
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Bertholon, Jean-François. "Modelisation des regulations biologiques : application au controle de la ventilation." Paris 5, 1989. http://www.theses.fr/1989PA05S001.
Full textAbstract:
Après un bref historique nous faisons le point sur ce qui est généralement admis de l'organisation et du fonctionnement du système de contrôle de la ventilation et sur sa modélisation dans le cadre biocybernétique qui domine la modélisation des régulations physiologiques depuis 35 ans. Une revue des travaux expérimentaux générés par ce modèle montre des discrodances nombreuses entre les résultats obtenus. Nos propres expériences de stimulation statique et dynamique eu système par l'hypercapnie et l'hypoxie sont présentées et nous concluons à l'existence, jusque là méconnue, d'une sensibilité différentielle et d'une bimodalité de fonctionnement pour les centres de commande de la ventilation. Nous rassemblons, ensuite, des informations sur l'évolution, le développement et l'adaptabilité des sysrèmes de régulation physiologique et présentons des méthodes matnématiques adaptées à l'étude des systèmes complexes et faisant appel au développement récent de la tliéorie des systèmes dynamiques et de la topologie différentielle (théorie des catastrophes). Une synthèse de nos travaux expérimentaux et des données de la littérature concernant le contrôle ventilatoire nous permet d'en proposer un modèle qualitatif et de faire l'hypothèse d'une rythmogénèse ventilatoire prenant sa source dans la Formation Réticulée bulbo-pontique et inséparable des autres adaptations végétatives neuro-humorales.
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Thieriot-Prevost, Geneviève. "Etude d'un effet stimulant du sérum sur l'incorporation de thymidine dans le lymphocyte humain: "l'activite thymidine du sérum" : Son application à la physiologie et à la pathologie humaines pré et post-natales." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S007.
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Houdiard, Soizic. "Rôle des ERKs dans la régulation de l'hématopoièse murine : étude de l'isoforme ERK1." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077089.
Full textAbstract:
L'hématopoïèse est un processus hautement régulé, initié au niveau des cellules souches hématopoïétiques (CSHs) et dont la régulation est assurée à travers une hiérarchie cellulaire. Ceci implique un mécanisme de régulation dynamique des fonctions des CSHs et de leur descendance. Les ERKS sont des acteurs clés de la régulation de la prolifération et de la différenciation dans de nombreux types cellulaires, suggérant un rôle important dans l'hématopoïèse qui n'a pas encore été étudié in vivo. L'étude des souris ERK1 ̄/ ̄ a mis en évidence une splénomégalie, caractérisée par une accumulation de progéniteurs érythroïdes et une augmentation du nombre d'érythroblastes immatures. L'activation de la voie de signalisation BMP4 permet la mise en place d'une érythropoïèse splénique et le développement de BFU-Es de stress. Dans les souris ERK1 ̄/ ̄ nous avons observé une forte augmentation du nombre de BFU-E de stress et de l'ARNm codant pour BMP4. Notre étude nous a donc permis de démontrer que ERK1 régule l'érythropoïèse splénique par son action sur l'expression de BMP4. De plus, l'étude de l'hématopoïèse médullaire a montré une augmentation du nombre de CSHs ainsi qu'un défaut de différenciation granulo-macrophagique dans les souris ERK1 ̄/ ̄. Des radiographies ont permis d'observer une augmentation de la densité osseuse dans des souris ERK1 ̄/ ̄, suggérant une ostéopétrose. Les mécanismes mis en jeu seront caractérisés par des expériences de transplantation de CSHs, par l'analyse de la différenciation monocytaire et mégacaryocytaire et par l'étude de l'ostéogénèseHematopoiesis is a highly regulated process, initiated by hematopoietic stem cells (HSCs), which implies a dynamic regulation of the functions of HSC and its descent. The ERKs kinases are keys regulators of proliferation and differentiation of different cells types. Their role could be important in hematopoiesis and have not been studied in vivo yet. We have examined the role of ERK1 in adult hematopoiesis in ERK1 ̄/ ̄ mice. Loss of ERK1 resulted in an enhanced splenic erythropoiesis, characterized by an accumulation of erythroid progenitors and an enhanced number of immature erythroblasts in the spleen. Splenic stress erythropoiesis response has been shown to require BMP4-dependent signalling in vivo and to rely on the expansion of stress BFU-Es. A great expansion of stress BFU-Es and an increased level of BMP4 mRNA were found in ERK1 ̄/ ̄ spleens, suggesting that ERK1 controls a BMP4-dependent step, regulating thé steady state of splenic erythropoiesis. Study of medullar hematopoiesis had also show an enhanced numbers of HSCs and a defect in granulo-macrophagic differentiation in ERK1 ̄/ ̄ mice. X-Rays analysis of wild-type and ERK1 ̄/ ̄ mice allowed us to observe an enhanced bone density in ERK1 KO mice. So, loss of ERK1 induces osteopetrosis. Mechanisms involved will be caracterised by HSCs transplantation experiments, analysis of monocyte and megacaryocyte differentiation and by study of osteogenesis
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Courtois, Matthieu. "Application de forces au moyen d'un gradient de champ magnétique sur un système biomimétrique du mouvement généré par la polymérisation de l'actine." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077167.
Full textAbstract:
Dans cette thèse, nous avons étudié la migration cellulaire comme un phénomène généré en partie grâce à l'action de la protéine actine. Cette protéine a la propriété de s'assembler en filaments qui contribuent à l'architecture et à la reptation cellulaire. En plus d'être indispensable au mouvement cellulaire, la polymérisation de l'actine génère des forces capables de propulser des corps comme la bactérie Listeria monocytogenes. Pour sonder les propriétés mécaniques et dynamiques de la polymérisation de l'actine, nous avons développé un montage basé sur les pinces magnétiques. Celui-ci est fondé sur la génération de forces, grâce à un gradient de champ magnétique, sur un système biomimétique inspiré de Listeria. Une comète d'actine croît à partir dune bille, contenant du métal, à la surface de laquelle un activateur de la polymérisation de l'actine est adsorbé. En utilisant un programme permettant de contrôler la position de la bille en temps réel, il est possible d'appliquer une force voulue pouvant aller jusqu'à la dizaine de nanonewtons. Nous pouvons ainsi sonder l'effet des protéines qui interagissent avec l'actine et qui modifient sa dynamique de polymérisation ainsi que la structure de son gel. Nous sommes capables de mesurer les relations entre la force appliquée, la vitesse de déplacement de la bille et le module d'élasticité de la comète pour déterminer par quels mécanismes précis la polymérisation de l'actine produit des forcesIn this thesis, we study the dynamics of the protein actin, which generates in part the phenomenon of cellular migration. Actin assembles into filaments that contribute to cellular architecture and cell crawling behavior. In addition to its role in cell movement, actin polymerization generates forces which are capable of propelling bodies such as the bacterium Listeria monocytogenes. In order to study the mechanical and dynamic properties of actin polymerization, we developed a magnetic tweezer experimental set-up. Force is applied via a magnetic field gradient on a biomimetic System inspired by Listeria. An actin cornet grows from a metal-containing bead, which is coated with an actin polymerization activator. By using a program which permits us to control the bead position in real time, we apply a precise force which can reach 10 nanonewtons. Using this setup, we study the effect of proteins that interact with actin and modify polymerization dynamics and actin gel structure. We measure the relation between the applied force and the bead's displacement velocity, as well as the tail elastic modulus in order to determine how actin polymerization produces force
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Essayagh, Sanah. "Interactions entre endothélium vasculaire et microparticules d'apoptose ou d'activation cellulaire : étude des conséquences fonctionnelles et des mécanismes impliqués." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077173.
Full textAbstract:
Les microparticules (MPs) sont des fragments membranaires émis par les cellules activées ou apoptotiques, dont le rôle dans les communications inter-cellulaires est reconnu. Au cours des pathologies vasculaires, et spécialement dans les situations de thrombose ou les états pro-thrombotiques, le nombre de MPs augmente dans le sang. Leur origine cellulaire varie selon le contexte pathologique et les MPs ne sont pas seulement des marqueurs de l'activation ou de la souffrance cellulaire, mais sont également des acteurs physiopathologiques. Nous nous sommes intéressés à leurs effets sur les fonctions endothéliales et, parmi celles-ci : activité pro-coagulante membranaire, libération de facteur Willebrand et expression de molécule d'adhésion, adhésion plaquettaire et leucocytaire, formation d'un thrombus en système en flux. Nous avons mis en évidence le rôle des radicaux oxygénés (ROS) comme médiateurs de certains effets des MPs de monocytes. L'étude de l'effet des MPs sur la production de ROS et les signaux cellulaires en aval ont permis de montrer que l'inhibition de cette voie métabolique réduit signifïcativement le développement d'un phénotype endothélial prothrombotique en partie sous le contrôle de la voie p38/MAPK. Un résultat original de ce travail est le recrutement ROS-dépendant des plaquettes à Pendothélium activé par les MPs de monocytes. Nous avons aussi montré que les MPs issues de cellules musculaires lisses induisaient une dysfonction endothéliale en modifiant la biodisponibilité du NO. Enfin, nous avons comparé l'effet de MPs de monocytes, plaquettes et cellules musculaires lisses sur l'expression de protéines membranaires et la génération de RQSMicroparticles (MPs) are small membrane vesicles shed by ectocytosis from activated or apoptotic cells. Their involevement in trans-cellular communication is now established. During vasculopathies, especially thrombotic events, their number increases in the systemic circulation and their cellular origin depends on pathology. MPs are physiopathological mediators and may change the endothelial phenotype. We investigated the effects of MPs interaction on prothrombotic activity, Weibel-Palade bodies secretion, cell adhesion molecules expression and blood cell recruitment. We show that reactive oxygen species (ROS) are second messengers for monocyte derived MP (M-MPs) effects. M-MPs induced ROS induce transient platelet recruitement at the endothelial surface and TF-dependant activity via the p38/MAPK pathway. MPs derived from apoptotic smooth muscle cells induce endothelial dysfunction by reducing NO bioavailibility. This effect also involve ROS generation and is dependant on the adhesion of microparticles to the endothelial cells mediated by beta-3 integrin. Besides, we compared endothelial effects of MPs derived from monocytes, platelets and smooth muscle cells on cell adhesion molecule expression and ROS generation
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Val, Stéphanie. "Réponses de l'épithélium respiratoire à des particules atmosphériques de tailles et origines différentes : mécanismes moléculaires et cellulaires mis en jeu." Paris 7, 2011. http://www.theses.fr/2011PA077126.
Full textAbstract:
L'exposition aux particules atmosphériques (PM) induit une inflammation de l'appareil respiratoire et est suspectée d'exacerber les pathologies respiratoires chroniques obstructives qui présentent une hypersécrétion de mucus. Le but de cette étude a été (1) d'identifier les caractéristiques physico-chimiques des PM impliquées dans leurs effets biologiques en étudiant les fractions ultrafines (UF), fines (F) et grossières (G) de cinq aérosols différents (2 français et 3 africains) et (2) d'approfondir les mécanismes d'induction de mucines par les PM sur des cellules épithéliales bronchiques humaines in vitro. Quels que soient les aérosols considérés, ce sont les PM UF et F les plus réactives sur un panel de biomarqueurs dont la majorité est sensible au stress oxydant. Ces effets sont particulièrement associés à la présence de composés organiques sur les PM. D'autre part, nous avons démontré que des PM₂,₅ induisent l'expression et la production de MUC5AC une des mucines bronchiques, non seulement in vitro mais également in vivo chez la souris après instillation intratrachéale. L'induction de MUC5AC résulte de l'activation du récepteur à l'EGF provoquée par PAREG, ligand de l'EGFR dont la sécrétion est induite par les PM et qui a donc un effet autocrine. Ces recherches ont montré la réactivité biologique supérieure des fractions les plus fines de l'aérosol ce qui va dans le sens des orientations réglementaires visant à limiter les émissions des PM₂,₅. De plus, elles ont mis en évidence pour la première fois les mécanismes d'induction des mucines par les PM, les impliquant dans l'aggravation de pathologies respiratoires obstructivesAtmospheric particle (PM) exposure induces airway inflammation and is suspected to exacerbate chronic obstructive respiratory diseases that exhibit mucus overproduction. The aim of this study was (1) to identify physico-chemical characteristics of PM implicated in biological effects using ultrafine (UF), fine (F) and coarse (C) fractions of five different aerosols (2 French and 3 African) and (2) to deepen the mechanisms of mucin induction by PM on human bronchial epithelial cells in vitro. Whatever the aerosol, UF and F PM are the more reactive on a panel of biomarkers that are mostly sensitive to oxidative stress. These effects are associated to organic components of PM. Moreover, we demonstrated that PM. ₂,₅ induce expression and production of MUC5AC, a bronchial mucin, in in vitro conditions as well as in vivo in intratracheally instilled mice. MUC5AC induction results on EGF receptor activation by AREG, an EGFR ligand whose release is induced by PM demonstrating an autocrine effect. This work showed that finest fractions of PM have a high reactivity, which is in accordance with the new regulations limiting PM₂,₅ emissions. Furthermore, we demonstrated for the first time MUC5AC mechanisms of induction by PM, suggesting their implication in respiratory obstructive disease aggravation
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Nazeyrollas, Pierre. "Effet cardio-protecteur de l'amifostine vis-à-vis de la cardio-toxicité induite par la doxorubicine chez le rat. Evaluation sur cultures cellulaires, coeur isolé et in vivo." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMM205.
Full textAbstract:
Dans ce travail, nous avons d'abord rappelé les données concernant l'action et la cardio-toxicité de la doxorubicine et la pharmacologie de l'amifostine (WR 2721). Cet aminothiol protège sélectivement sélective les tissus sains vis à vis de la toxicité des agents alkylants et des rayonnements ionisants grâce à son activité anti-radicalaire. Nous avons étudié l'amifostine sur des cultures de cardiomyocytes de rats nouveau-nés, des cœurs de rat isolés, perfusés à pression constante et le rat in vivo. Nous avons démontré une activité cardio-protectrice de l'amifostine vis a vis de la cardio-toxicité induite par la doxorubicine sur ces différents modèles. L'effet cardio-protecteur nécessite d'être évalué sur des durées de traitement par anthracyclines plus longues et comparé au dexrazoxane. Nos résultats ouvrent cependant des perspectives thérapeutiques importantes l'utilisation des anthracyclines est fortement limitée par leur cardio-toxicitéIn the first part of our study, we review the data regarding doxorubicin cardiotoxicity and amifostine(WR 2721). Amifostine is an aminothiol compound with free radical scavenging properties and has demonstrated a protective effect of normal tissue submitted to alkylating agents and radiations. We have demonstrated a cardioprotective efficacy of amifostine against doxorubicin-induced cardiotoxicity in culture of neonate-rats cardiomyocytes, isolated rat hearts with constant pressure perfusion, and rats in vivo. The cardioprotective effect should now be evaluated during longer lasting doxorubicin treatments and should be compared to dexrazoxane's. However, our results give hints to important therapeutic perspectives, since cardiotoxicity is the main factor limiting anthracyclin prescription
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Deshayes, Caroline. "Biosynthèse et export des glycopeptidolipides à la surface des mycobactéries." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077211.
Full textAbstract:
La paroi des mycobactéries est très riche en lipides jouant un rôle essentiel dans leur pathogénicité. Les glycopeptidolipides (GPL) sont les glycolipides majoritaires à la surface de certaines espèces non-tuberculeuses telles que M. Avium, pathogène opportuniste. Ces métabolites jouent un rôle dans l'interaction bactéries-cellules et possèdent de nombreuses activités biologiques comme notamment l'induction de TNF-a par des macrophages murins. Bien que M. Smegmatis ne synthétise que principalement des GPL diglycosylés, elle produit des GPL triglycosylés en condition de carence en carbone. Nous avons montré que la glycosyltransférase Gtf3 était responsable de la synthèse de ces GPL triglycosylés dont la production engendre des modifications de surface. Par analyse comparative, nous avons montré que tous les gènes impliqués dans la biosynthèse des GPL étaient présents et conservés chez M. Abscessus et M. Chelonae, deux pathogènes humains et mis en évidence la duplication de l'acétyltransférase. Ces protéines ont évolué spécifiquement et sont capables de transférer un groupement acetyl de façon séquentielle. Nous avons également montré que la protéine membranaire Gap était nécessaire au transport des GPL à la surface des mycobactéries. Les protéines MmpS et MmpL, spécifiques des mycobactéries, sont quant à elles, impliquées dans la quantité de GPL produits. Notre hypothèse est que ces protéines faciliteraient leur biosynthèse en formant un complexe membranaire avec les enzymes responsables de la synthèse. Cette étude a permis de mieux comprendre les mécanismes de biosynthèse et d'export des métabolites lipidiques produits par les mycobactériesMycobacterial cell wall is rich in lipids, which play an essential role in pathogenicity. Glycopeptidolipids (GPLs) are major glycolipids at the surface of non-tuberculous mycobacteria like the opportunistic species M. Avium. These metabolites are implicated in bacteria-cells interaction and possess various biological activities like the TNF-a induction by murine macrophages. Althought M. Smegmatis synthesizes diglycosylated GPLs in majority, some triglycosylated ones are produced in carbone starvation. We have shown that Gtf3 is a glycosyltransferase involved in triglycosylated GPLs biosynthesis. Production of these GPLs is implicated in modifications of cell surface properties. By comparative analyses, we have shown that all genes necessary for GPLs production are present and conserved in M. Abscessus et M. Chelonae, two human pathogens, and that the acetyltransferase is duplicated. These proteins have evolved specifically and are able to transfer one acetyl group sequentially. During this thesis, we have also demonstrated that Gap, an integral membrane protein, is necessary for GPLs export to cell surface. MmpS and MmpL proteins, specific to mycobacteria, are facilitators of GPLs biosynthesis and are necessary to achieve a high level of GPL production. In our model, they act as scaffold of a membrane complex interacting with GPL biosynthesis enzymes. This study leads to a better understanding of the mechanisms of biosynthesis and export of lipid metabolites in mycobacteria
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Coutanceau, Emmanuelle. "Fonctions immunomodulatrices de la mycolactone, principal facteur de virulence de Mycobacterium ulcerans." Paris 7, 2006. http://www.theses.fr/2006PA077214.
Full textAbstract:
Mycobacterium ulcérons (Mu) engendre l'ulcère de Buruli, une maladie caractérisée par des lésions cutanées. Le facteur de virulence de Mu est une toxine lipidique, la mycolactone. Lors de ces travaux, nous avons étudié les réponses immunitaires développées au cours de l'infection par Mu, et tenté de préciser la contribution de la mycolactone dans leur mise en place. L'étude des réponses humorales et cellulaires développées en réponse à l'infection par Mu dans un modèle murin a mis à jour rimmunodorninance de Hsp65, et nous avons testé refficacité d'un vaccin ADN exprimant cet antigène. Nous avons observé que dans les phases précoces de l'infection, Mu était intemalisé par les cellules phagocytaires, résultat surprenant car Mu était considéré jusqu'alors comme strictement extracellulaire. Les macrophages infectés par Mu avaient un profil d'expression de cytokines et de chémokines altéré par rapport à ceux infectés avec un mutant déficient pour la synthèse de toxine, suggérant que la mycolactone agirait en modulant le système immunitaire de l'hôte. Concernant l'impact de la mycolactone sur les cellules immunes, nous avons montré que la toxine bloquait la production de TNF-α par les macrophages in vitro. Sur les cellules dendritiques, elle exerçait une action cytotoxique, inhibait la maturation et réduisait les capacités d'initiation de la réponse Ivmphocytaire. In vivo, la mycolactone était transportée dans des organes lymphoïties profonds, où elle bloquait la prolifération lymphocytaire. Nos résultats démontrent donc que la mycolactone est une molécule immunosuppressive, dont le mode d'action semble distinct de celui d'immunosuppresseurs connus comme FK506Mycobacterium ulcerans (Mu) is the causative agent of Buruli ulcer, a skin disease destroying both cutaneous and sub-cutaneous tissues. The pathology is linked to bacterial production of mycolactone, a lipophilic toxin. During my PhD thesis, the immune responses developed by host during infection by Mu, and the mycolactone contribution to these processes were studied. Firstly, the humoral and cellular responses developed in a mouse model of infection by Mu were characterized. These studies revealed Hsp65 immunogenicity and we tested the efficiency of a DNA vaccine encoding this antigen. Phagocytic cells internalized Mu during the primary stages of infection. This was a surprising result because Mu bas always been described as strictly extracellular. In addition, macrophages infected by Mu had a different expression profile for cytokines and chemokines compared to cells infected with a mycolactone deficient mutant. These observations led us to suggest that endogenous production of mycolactone may modulate the host immune response. Then, mycolactone impact on immune cells was characterized. Mycolactone blocked TNF-α production by macrophages in vitro. Furthermore, its immunosuppressive effect was also observed in dendritic cells, in which it causes cytotoxic effects, inhibition of maturation and inhibition of lymphocyte priming. In vivo, our preliminary pharmacological study shows that mycolactone is transported to lymphoid organs, where it acts by blocking lymphocyte proliferation. In conclusion, these results demonstrate that mycolactone is a novel immunosuppressive molecule, with a mode of action distinct from other well-known immunosuppressors such asFK506
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Wackenaer-Descleves, Estelle. "Les β-lactamases chromosomiques des Raoultella spp : support pour la résistance aux antibiotiques et outils de diagnostic étiologique." Paris 5, 2008. http://www.theses.fr/2008PA05T037.
Full textAbstract:
Les espèces de Raoultella (anciennement Klebsiella). R. Planticola (Rp), R. Ornithinolytica (Ro) et R. Terrigena (Rt) sont difficilement différentiables phénotypiquement des espèces de Klebsiella en routine. Après avoir (i) clone les p-Iactamases des Raoultella (PLA, ORN et TER), (ii) déterminé le niveau d'identité entre elles (94% entre PLA et ORN et 78 % avec TER) et avec les autres p-lactamases de la classe A (70% avec TEM-1, 68% avec SHV-1 et 38% avec KOXY) et (iii) démontré des différences notables entre les activités enzymatiques de PLA et de TER tant entre elles qu'avec TEM-1, la place du gène bla pour l'identification de Rp et Ro a été évaluée sur une large collection d'isolats en comparaison aux gènes rpoB et ADNr 16S. Cette approche diagnostique a permis de découvrir que 70% des isolats Ro sont négatifs pour le test sur lequel a été fondé l'espèce Ro à savoir l'ornithine décarboxylase et que le gène bla via son analyse par RFLP permet de distinguer Ro de Rp sans ambiguïtéThe three species of Raouliellu (formerly Klebsiella). R. Planticola (Rp), R. Ornithinolytica (Ro) and R. Terrigena (Rt) cannot be distinguished from the species of Klebsiella spp. By the tests used in the routine by microbiological laboratories. After having (i) cloned the p-lactamases of the 3 Raoultella species (PLA, ORN and TER), (ii) evaluated the percentage of identity between each other (94% between PLA and ORN, and 78% with TER) and with other class A P-lactamases (70% with TEM-1, 68% with SHV-1 and 38% with KOXY), and (iii) studied the p-lactamase activity of PLA and TER, the reliability of the bla gene for Rp and Ro identification was determined in comparison with that of the 16S rDNA and rpoB genes in 35 Raoultella spp. Isolates. This study allowed us to discover that 70% of the isolates identified as Ro were negative for the ornithine decarboxylase test, meaning negative for the biochemical character on which Ro definition was based, and to develop a new test, bla RFLP. To unambiguously identify Ro and Rp
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Baruthio, Frédérique. "Identification et caractérisation des protéines associées aux microdomaines membranaires et potentiellement impliquées dans la progression mélanome." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077181.
Full textAbstract:
La peau humaine se compose de l’épiderme et du derme. Dans l’épiderme, les mélanocytes transfèrent la mélanine aux kératinocytes, protégeant ainsi la peau des effets néfastes des rayons ultraviolets. Au cours de leur transformation en cellules de mélanome, les mélanocytes expriment des facteurs de croissance ou récepteurs d'adhésion qui leur permettent d'interagir avec les fibroblastes et les cellules endothéliales. Ces interactions favorisent la dissémination des cellules tumorales et la formation de métastases. A ce jour aucune thérapie ne s'est avérée efficace pour le traitement du mélanome. Des données de la littérature indiquent que les radeaux lipidiques, microdomaines membranaires riches en lipides et protéines, jouent un rôle important dans la signalisation cellulaire. Nous avons émis l'hypothèse que l'association de certaines protéines aux radeaux lipidiques pourrait jouer un rôle crucial dans la progression du mélanome. Nous donc avons étudié par protéomique le contenu des radeaux lipidiques de lignées cellulaires de mélanome issues de tumeurs à différents stades de la progression et effectué une analyse comparative. Nous avons constaté que 46 protéines étaient exprimées de manière différentielle dans les microdomaines de lignées métastatiques par rapport à des lignées peu ou pas invasives. Nous avons démontré que la Lactadhérine se trouve uniquement dans les microdomaines des cellules métastatiques. La caractérisation de cette protéine nous a permis de montrer qu'une forme tronquée de la protéine était impliquée dans le développement du mélanome primaire chez la souris, ce qui fait de ce variant une cible thérapeutique potentielle pour le traitement du mélanomeHuman skin is composed of the epidermis and the dermis separated by a basement membrane. In the basal layer of the epidermis, melanocytes deliver melanin to keratinocytes, thereby protecting the skin from the deleterious effects of ultraviolet light. During their malignant transformation into melanoma cells, melanocytes physically dissociate from keratinocytes and express new growth factors or adhesion receptors, allowing them to interact with cell partners like fibroblasts and endothelial cells. Such interactions promote malignant cells dissemination and metastases formation in distant organs. Up to date, no therapy was successfully used for melanoma treatment. The idea is to assess molecular changes occurring in melanoma cells in order to develop new therapeutic targets. Data in the literature support the role of lipid rafts, specialized membrane microdomains enriched in particular lipids and proteins, in the modulation of important signaling events. We raised the hypothesis that the association of specific proteins with lipid rafts might be relevant to melanoma progression. We investigated by proteomics the lipid raft content of human melanoma cell lines derived from tumors at different stages of the disease and performed a differential analysis. We showed that 46 proteins were up- or down- regulated in lipid rafts of metastatic melanoma cells compared to non-invasive cells. For instance, Lactadherin was found to partition only in microdomains of the metastatic cells. Our characterization of this glycoprotein suggests that a Lactadherin splice form is implicated in primary tumor development and would thus constitute a promising molecular target for melanoma treatment
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Roisman, Gabriel. "Rôle des peptides pro-inflammatoires et des peptidases dans l'inflammation des voies aériennes : application dans l'asthme et la rhinite allergique." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05CD08.
Full textAbstract:
Nous avons examiné certains aspects des relations complexes existant entre l'inflammation, les effets des neuropeptides et des kinines et l'expression de l'endopeptidase neutre (NEP) et de l'enzyme de conversion d'angiotensine (ACE) dans les voies aériennes des sujets asthmatiques et des sujets atteints d'une rhinite allergique. Nos résultats montrent que la substance P (SP) exogène induit une obstruction nasale dont l'intensité est similaire chez les sujets ayant une rhinite allergique et chez les sujets sains non rhinitiques. La NEP module la réponse nasale à la substance SP d'une façon similaire chez les sujets sains et les sujets rhinitiques, en dehors de la période allergénique. L'ACE n'intervient pas dans la régulation des effets de la SP au niveau de la muqueuse nasale chez les sujets sains. En revanche, l'ACE module cette réponse chez les sujets ayant une rhinite allergique. La réponse des sujets asthmatiques vis-à-vis de la bradykinine (BK) était liée à l'inflammation bronchique à éosinophiles. La perception de l'obstruction bronchique chez les asthmatiques non traités par corticostéroïdes était différente selon que cette obstruction bronchique est induite par un agoniste cholinergique ou qu'elle est provoquée par la BK, un peptide pro-inflammatoire. La perception de l'obstruction bronchique induite par cet agoniste était influencée par l'importance de l'inflammation à éosinophiles et par l'intensité des anomalies de l'épithélium bronchique. En présence d'un traitement par corticostéroïdes, la perception de l'obstruction bronchique était normale qu'elle soit induite par la métacholine ou par la BK. Nous avons décrit la distribution de la NEP et de l'ACE dans la muqueuse bronchique chez l'homme. La distribution de la NEP dans la muqueuse bronchique des sujets asthmatiques a été similaire à celle des sujets normaux. L'expression de l'ACE par l'épithélium bronchique était réduite chez les asthmatiques non traités par corticostéroïdes. L'activité de la NEP dans la muqueuse bronchique était augmentée chez les sujets asthmatiques non traités par corticostéroïdes. L'activité de l'ACE dans la muqueuse bronchique était similaire entre les sujets asthmatiques et les sujets de contrôle. L'activité de l'ACE était négativement corrélée à l'importance de la fibrose sous-épithéliale chez les asthmatiques non traités par corticostéroïdes. Chez les sujets asthmatiques traités par corticostéroïdes, l'activité de la NEP et celle de l'ACE ont été négativement corrélée à l'importance de l'infiltrat d'éosinophiles dans la lamina propria et l'activité de la NEP a été positivement corrélée à la dose de BK provoquant une chute de 15% du VEMS. Nous avons démontré que le peroxyde d'hydrogène inactive la NEP d'une façon dose dépendante et que cet effet est observé à des concentrations de peroxyde d'hydrogène qui sont susceptibles d'être générées dans les tissus au cours des processus inflammatoires. Nous concluons que l'obstruction bronchique induite par la BK et la perception de cette réponse sont liées à l'intensité de l'inflammation à éosinophiles et des lésions de l'épithélium bronchique chez les sujets asthmatiques. Ces résultats sont importants à considérer dans les mécanismes de l'hyperréactivité bronchique à la BK, qui est une anomalie spécifique de l'asthme. Bien que l'activité des peptidases puisse être altérée par les effets des oxydants in vitro, la modulation par la NEP et l'ACE des effets locaux des kinines et des tachykinines dans les voies aériennes des sujets asthmatiques et des rhinitiques allergiques ne semble pas être diminuée. En revanche, l'existence d'une augmentation de l'activité de ces peptidases pourrait représenter un mécanisme physiologique compensateur associé à l'inflammation. L'expression de la NEP et de l'ACE dans la muqueuse des voies respiratoires semble résulter d'interactions complexes liées aux mécanismes de l'inflammation chronique dans l'asthme et dans la rhinite allergique.
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Rodríguez, Pedro. "Controle de la permeabilite des jonctions serrees (tight) dans divers types d'epitheliums." Paris 5, 1996. http://www.theses.fr/1996PA05S022.
Full textAbstract:
La caracteristique essentielle des cellules epitheliales est la presence a leur apex des jonctions d'occlusion (tight junctions, tj) qui ferment de maniere plus ou moins etanche la voie paracellulaire. La permeabilite des tj peut etre modifiee dans differentes conditions. La cryofracture est une technique qui permet l'etude de ce type jonctionnel. La premiere partie de cette these concerne la barriere intestinale. Nous avons etudie les effets du tnf- en association avec l'ifn- sur la barriere des cellules ht29-19a. Cette association de cytokines entraine l'augmentation de la permeabilite et l'alteration morphologique du reseau des tj. La deuxieme partie, realisee in vivo, concerne la malnutrition proteique. Nous avons trouve que les alterations morphologiques des tj observees chez les animaux malnourris sont liees a l'augmentation de la permeabilite intestinale et que le zinc empeche la perte de la capacite de barriere chez les animaux malnourris. La troisieme partie concerne le passage d'une polarite epitheliale simple vers une polarite hepatique chez les cellules wif-b9 ou les tj passent successivement d'un stade de macula vers fascia et zonula. Finalement, dans le cerveau, les fse (fibres supra-ependymaires) ne semblent pas etre a l'origine de la repression de l'expression des tj dans les ependymocytes typiques.
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Mehul, Bruno. "Mise en evidence et role d'une interaction laminine-ecto-5'-nucleotidase au cours du developpement du muscle srtie chez le poulet." Paris 5, 1992. http://www.theses.fr/1992PA05S013.
Full textAbstract:
La 5'-nucleotidase ecto-membranaire (5'-n) dephosphoryle le 5'-amp. Par differentes approches methodologiques in vivo et in vitro, il nous a ete possible de mettre en evidence d'une part, une heterogeneite de la 5'-n entre le muscle strie, cardiaque et lisse de gesier de poulet (notamment en ce qui concerne son activite enzymatique au cours du developpement) ainsi que la presence de formes ancrees par un phosphatidyl inositol glycanne qui pourrait coexister avec des formes transmembranaires interagissant avec le cytosquelette ; hypothese renforcee par la presence de 5'-n dans les jonctions tendon-muscle et dans le plasmalemme superpose aux bandes i des sarcomeres des fibres musculaires (structures enrichies en integrines et proteines interagissant avec le cytosquelette). D'autre part, une co-distribution in vivo et une interaction in vitro entre la 5'-n et la laminine (glycoproteine de la matrice extracellulaire). Cette interaction est impliquee au cours de l'etalement des myoblastes en culture independamment du site catalytique de la 5'-n. L'activite ecto-5'-nucleotidase n'intervient ni dans l'attachement des myoblastes, ni de facon significative dans la migration, la proliferation et la fusion des myoblastes en myotubes. La laminine augmente la quantite de 5'-n a la surface des myoblastes et stimule par son bras long (fragment proteolytique e8) l'activite ampase de la 5'-n par contre, le fragment proteolytique e'1 de la laminine inhibe l'activite ampase. Cette observation suggere que le taux d'adenosine extracellulaire, regule par la 5'-n, pourrait etre module selon la nature de la matrice extracellulaire.
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Koutsouris, Dionissios. "Etude de la deformabilite erythrocytaire par la methode du debit initial de filtration et l'analyse du temps de transit cellulaire." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S015.
Full text
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Roux, Damien. "Impact de la colonisation des voies aériennes à Candida albicans sur l'émergence de pneumopathies bactériennes." Paris 5, 2009. http://www.theses.fr/2009PA05T045.
Full textAbstract:
La colonisation des voies aériennes à Candida sp est fréquente chez les patients ventilés en réanimation et pourrait favoriser le développement de pneumonies bactériennes. Un modèle original de colonisation des voies aériennes à C. Albicans se caractérise par une faible réaction inflammatoire des voies aériennes distales et une réponse inflammatoire pulmonaire de type Th1 et Th17. Cette colonisation augmentait l'incidence des pneumonies à P. Aeruginosa, à Staphylococcus aureus et à Escherichia coli, montrant l'absence de spécificité de l'interaction entre Candida et une bactérie particulière. Un traitement antifongique améliorait la clairance fongique et annulait l'effet facilitateur sur le développement de pneumonies bactériennes. Les capacités de phagocytose des macrophages alvéolaires étaient altérées, avec une diminution de la production de radicaux libres en présence de C. Albicans et une diminution de l'internalisation des bactéries non-opsonisées en culture avec de l'IFN-gammaAirway colonization with Candida is frequent in ventilated patients in intensive care units and could favor bacterial pneumonia. An original model of airway colonization with C. Albicans in rats was developed through intratracheal instillation, A Th1 and Thl7 Immune response was observed in lungs. This fungal colonization increased the incidence of P. Aeruginosa pneumonia. This facilitating effect was observed with other laboratory strains of P. Aeruginosa and with Staphylococcus aureus and Escherichia colij showing the lack of interaction specificity between these microorganisms. The phagocytosis capacity of alveolar macrophages was altered in the presence of C. Albicans, with a decreased production of reactive oxygen species, and also in the presence of IFN-y, with a marked decrease of internalization of non-opsonized bacteria. Antifungal treatments allowed a higher pulmonary clearance of C. Albicans, and a decreased incidence of bacterial pneumonia as compared to untreated colonized
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Drissi, Moulay Hicham. "Etude de l'expression et de la regulation du gene calci dans les cellules osteoblastiques humaines ; caracterisation d'un recepteur du cgrp." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05S014.
Full textAbstract:
Le gene calc i code par epissage alternatif, pour la calcitonine et pour le peptide apparente au gene de la calcitonine (cgrp). Plusieurs travaux ont montre que le cgrp est exprime localement au niveau du tissu osseux, ce qui suggere que le cgrp pourrait avoir un role dans la regulation du metabolisme des cellules osseuses. Nous avons etudie l'expression du gene calc i dans les cellules osteoblastiques humaines, ainsi que sa regulation par le dibutyryl ampc dans une lignee d'osteosarcome humain ohs-4. Afin de determiner les mecanismes par lesquels le cgrp pourrait agir sur les cellules osteoblastiques humaines, nous avons par la suite clone puis sequence un recepteur du cgrp dans les cellules ohs-4, et nous avons etudie les mecanismes de transduction qu'utilise ce recepteur dans ces cellules. Nos travaux montrent : la presence d'arn messagers codant pour la calcitonine et le cgrp dans les cellules osteoblastiques humaines. Une stimulation des transcrits de la calcitonine et du cgrp sous l'effet du dibutyryl ampc. L'augmentation de ces deux transcrits s'accompagne d'une induction de la differenciation des cellules osteoblastiques humaines ohs-4. La caracterisation d'un recepteur du cgrp a la surface de ces cellules, qui n'utilise pas la voie de l'adenylate cyclase pour la transduction du signal. La signalisation qu'il utilise implique une mobilisation du calcium intracellulaire et un influx du calcium extracellulaire a l'interieur de la cellule. L'augmentation du calcium intracellulaire dans les cellules ohs-4 sous l'effet du cgrp, met en jeu les proteines gq/11 qui stimulent la plc1. Ce travail met en evidence que le cgrp est produit par les cellules osteoblastiques humaines et qu'il pourrait exercer des effets autocrins sur ces cellules. Nous avons aussi montre que le recepteur du cgrp utilise uniquement la voie de la phospholipase c pour la transduction du signal dans les cellules ohs-4, voie qui a ete decrite comme etant impliquee dans la proliferation des cellules osteoblastiques.
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Le, Minor Jean-Marie. "Anatomie comparée et aspects évolutifs des os sésamoïdes métacarpo-et métatarso-phalangiens ventraux." Paris 5, 1987. http://www.theses.fr/1987PA05S023.
Full text
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Medjahed, Halima. "Développement d'outils génétiques pour étudier la virulence de Mycobacterium abscessus." Paris 7, 2010. http://www.theses.fr/2010PA077077.
Full textAbstract:
Mycobacîerium abscessus est un pathogène émergent responsable d'infections respiratoires sévères chez les patients atteints de la mucoviscidose. Cette espèce est également responsable d'infections extra-pulmonaires, notamment en cas de transplantation, et se caractérise par une faible susceptibilité aux antibiotiques. Le génome de cette mycobactérie a été séquence et des puces à ADN ont été développées. Des études effectuées sur des variants naturels lisses et rugueux montrent que les isolats rugueux sont hypervirulents. Ces isolats ne produisent pas de glycopeptidolipides (GPL), un métabolite lipidique de surface. On peut donc se demander si l'absence de ce lipide est responsable de cette hypervirulence. La première partie de ma thèse a été de développer des outils génétiques adaptés à M. Abscessus. En utilisant le système dit de « recombineering », nous avons construit une souche mutante caractérisée par sa faible production des GPL (AmmpL4b). Afin de prouver le rôle de ce gène dans un phénotype donné, nous avons aussi adapté un système de complémentation à M. Abscessus en testant des plasmides réplicatifs et intégratifs ayant démontré leur efficacité chez d'autres espèces. Dans ce travail, nous avons montré que la production des GPL engendre des modifications de surface de la cellule comme la mobilité par glissement. La virulence des souches (sauvage, mutante et complémentée) a été évaluée in vitro dans des modèles cellulaires et in vivo dans des modèles murins. Ces tests de virulence montrent que ce n'est pas que l'absence des GPL qui est impliquée dans la virulence de M abscessus. Nous privilégions à l'heure actuelle l'hypothèse qu'un autre facteur intervient directement ou indirectement dans cette virulence. Dans le futur, la caractérisation de la virulence de cet organisme ouvra la voie au développement de nouvelles drogues ou vaccins contre ce pathogène émergentMycobacterium abscessus is a rapidly growing mycobacterial species that can be involved in pulmonary and disseminated infections in immunosuppressed or young cystic fibrosis patients. It is an emerging pathogen and has attracted recent attention due to the numerous cases of infection; furthermore, genomic tools have been developed for this species. Nevertheless, the study of this species has until now been limited to spontaneous variants. We have compared three different mutagenesis Systems : the ts-sacB, the phage, and the recombineering Systems, and show that there are important differences in their efficiency for the construction of allelic-exchange mutants. We show, using the mmpL4b gene of the glycopeptidolipid pathway as a target, that allelic-exchange mutants can be constructed with a reasonable efficiency ( 7%) using the recombineering System. Studies on this species were limited so far to natural spontaneous variants. These studies have nevertheless showed that the Rough variants of M abscessus which are characterized by a low production of glycopeptidolipids are hypervirulent in human and also in in vivo models. Interestingly, these highly virulent isolates strongly induce TNF-α secretion by macrophages. However, the mechanism of the higher virulence process is currently unknown. The mutant constructed in this study, which is low glycopeptidolipids producer, is unable to slide and it loss the ability to form biofilms. These confirm the role of glycopeptidolipids in the modification of cell surface. Using in vivo model the virulence of this mutant has been tested. This study shows that other factor is involved with the lack glycopeptidolipids in the virulence of M abscessus. The study of the mechanism of the virulence of M abscessus is a pre-requisite to develop new drugs or vaccine candidates against this emerging pathogen
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Surdeau, Natacha. "Biofilms et infections nosocomiales : évaluation de l'efficacité d'un nouveau désinfectant OXSIL® 320N." Reims, 2004. http://www.theses.fr/2004REIMO201.
Full textAbstract:
@On appelle infections nosocomiales, les maladies infectieuses contractées au cours d'une hospitalisation qui n'étaient ni en incubation ni présentes à l'admission du patient. Elles peuvent être d'origine endogène ou exogène : le patients lui-même, le personnel, le matériel, les surfaces et l'environnement. Cette contamination peut résulter d'un manque d'efficacité des procédures de nettoyage-désinfection, déficience souvent attribuée à l'état dans lequel se trouve ces germes indésirables (biofilms). Pour réduire ces risques de contamination deux axes ont été abordés : d'une part les prédictions d'adhésion entre le support en acier inoxydable AISI 304 (constituant majeur du matériel en bloc opératoire) et quatre souches responsables d'infections nosocomiales (E. Coli, S. Aureus, P. Aeruginosa et E. Hirae) et d'autres parts, l'évaluation de l'efficacité ainsi que les conditions d'utilisation d'un nouveau désinfectant OXSILÒ 320N sur des cellules planctoniques et des biofilms. L'étude physicochimique a montré toute la complexité des interactions impliquées dans la phase initiale d'adhésion. Si en théorie, il est possible d'enrayer l'adhésion bactérienne à un support en modifiant ses caractéristiques de surface, notre étude montre qu'il est impossible de limiter l'adhésion simultanée des 4 souches bactériennes étudiées au support AISI 304. Face à une telle situation, il est donc impératif d'optimiser les procédures de nettoyage-désinfection. OXSILÒ320N possède une activité de spectre 4 selon la norme AFNOR NF T 72-150 sur des cellules planctoniques à la concentration de 3,13%. Par contre les biofilms sont plus résistants que leurs homologues planctoniques. Ceci serait dû à la présence de mécanismes de défense connus. Selon les recommandations d'utilisation de SODIFRA les conditions optimales pour obtenir un niveau "zéro" de contamination sont : 12,52% d'OXSILÒ320N et un temps de contact de 10 min évitant tout risque infectieux entre deux opérations de courtes ou de longues durées en blocs opératoires. Ces résultats ont mis en évidence la nécessité d'utiliser ce désinfectant à une concentration appropriée et de ne pas négliger les conséquences d'une utilisation en infradose même si celle-ci autorise selon les normes AFNOR une activité bactéricide@Nosocomial infections are hospital acquired infections. They are not present or incubating when the patient is admitted to the hospital, and are either endogenous or exogenous. Endogenous ones are caused by organisms present in the patient own flora and exogenous infections are caused by organisms originating from medical devices, hospital staff, or environment. This contamination might be the result of a lack of efficiency in cleaning and disinfection procedures, those deficiencies being often attributed to the state in which these harmful microorganisms are found (biofilms). To reduce the risks of contamination, two parts have been developed in this thesis: at first, predictions of adhesion between stainless steel AISI 304 (major component of equipment in operating room) and four nosocomial strains (E. Coli, S. Aureus, P. Aeruginosa et E. Hirae), and in the second part, we determine, the efficient concentration of a new disinfectant OXSILÒ 320N in order to eliminate biofilms. Physico-schemical studies demonstrated the complexity of interactions involved in the initial phase of adhesion. We suggest that a change of the stainless steel surface properties could theoretically limit bacterial adhesion. However it was nearly impossible to limit adhesion between the four studied bacterial strains and the support AISI 304. It is then necessary to optimise preventive hygienic conditions. The bactericidal concentration of OXSILÒ 320N against planktonic cells, according to AFNOR Norm NF T 72-150, was 3,13%. Furthermore, biofilms were commonly more resistant than their planktonic counterparts due to the presence of known resistance mechanisms. According to the SODIFRA recommendations, the optimal conditions, required to avoid any contamination, were a concentration 12,52% and 10 min contact. These conditions can eliminate infection risks during short or long laps between two interventions in an operating room. These results revealed the necessity to use this disinfectant at appropriate concentration and but also the consequences of using it in infradose, although this concentration is considered as an efficient concentration by AFNOR Norm
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Labit, Hélène. "Régulation de l'initiation de la réplication chez les vertèbrés : analyse du programme temporel d'activation des origines de réplication dans les extraits d'oeufs de xénope." Paris 7, 2007. http://www.theses.fr/2007PA077176.
Full textAbstract:
Chez les vertébrés, l'activation des origines de réplication est soumise à une régulation spatiale et temporelle. Dans les embryons précoces de xénope, les origines sont positionnées sans aucune spécificité de séquence et sont activées en clusters à différents moments de la phase S. L'objectif principal de ce travail a consisté à caractériser cette régulation temporelle en analysant d'une part, l'activation des origines au sein de fibres individuelles d'ADN, et d'autre part, la distribution des foyers de réplication au sein de noyaux de spermatozoïde incubés dans des extraits d'œufs de xénope. Grâce à la technique de peignage moléculaire, nous avons comparé la distribution des origines de réplication au début de deux phases S consécutives. L'absence de coïncidence « temporelle » entre les origines démontre que le moment d'activation des origines ne dépend pas de la position génomique et qu'il n'existe pas de régulation épigénétique du moment de réplication à l'échelle des origines. Cependant l'observation d'une coïncidence entre les foyers utilisés au début de deux cycles consécutifs suggère qu'une organisation chromosomique pourrait influencer le moment de réplication. L'analyse de la réplication de l'ADN ribosomique par FISH a fourni un exemple de domaine chromosomique répliqué plus tardivement que l'ADN génomique global. Une structure chromatinienne particulière pourrait expliquer ce retard. Par ailleurs, la fréquence d'initiation à ce locus est deux fois plus faible dans l'espaceur intergénique très riche en G+C que dans la région codante. Au sein de ce locus, il pourrait donc exister des facteurs locaux influençant le positionnement des origines de réplicationIn Vertebrates, replication origins are activated according to a spatial and temporal program. In early Xenopus embryos, origins are located at apparently random sequences and are activated in clusters that fire at different times throughout S phase. The main object of the present work is to characterize the temporal regulation of replication in Xenopus egg extracts through analysis of origin activation on single DNA fibers and replication foci distribution in sperm nuclei. Using molecular combing of DNA, we compared the distributions of replication origins fired at the beginning of two following S phases. Absence of significative coincidence between origins shows that the temporal order of replication does not depend on genomic position. Furthermore, no epigenetic central regulates the moment of origin firing. However the detection of coincidence between replication foci labeled at the beginning of two following S phases suggests that the chromosomal organization may influence the replication timing. Using FISH, we showed that the replication of the ribosomic DNA is delayed compared to the replication of whole genomic DNA. An altered chromatin structure may be responsible for this delay. Mapping of origins revealed that initiation frequency is two fold lower in the G+C rich intergenic spacer than in the coding rDNA sequence. At the rDNA, local parameters such as nucleotide composition may influence the localization of replication origins
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Robinet, Arnaud. "Régulation de l'expression et/ou de l'activation de la Gélatinase A par deux peptides issus de la thrombospodine et de l'élastine : Implication dans l'invasion tumorale et angiogénèse." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM208.
Full textAbstract:
La @protéolyse de la matrice extracellulaire est une étape importante dans l'invasion tumorale et l'angiogénèse. Cette protéolyse matricielle est effectuée par de nombreuses enzymes. Sont particulièrement impliquées les métalloprotéinases matricielles et notamment les gélatinases (MMP-2 et MMP-9). Cette dégradation aboutit à la fragmentation des protéines matricielles pouvant donner de petits peptides possédant certaines activités biologiques (Matrikines). Ce travail s'est intéressé à la régulation de la gélatinase A ou MMP-2 par deux peptides issus de la thrombospondine-1 (GGWSHW) et de l'élastine (VGVAPG) dans l'invasion tumorale et l'angiogénèse. Un système de régulation par interaction avec la TSP-1 impliquant le récepteur LRP dans les cellules HT1080 issues de fibrosarcomes a été mis en évidence. En effet, il a été observé par résonance plasmonique de surface, une interaction entre la TSP-1 et le domaine CBD123 de la MMP-2. Cette interaction est inhibée par compétition en présence des séquences GGWSHWSPWSS et GGWSHW (motifs présents dans les domaines TSRs de la TSP-1), ce qui se traduit par une augmentation de la quantité et de l' activation de la MMP-2 dans les milieux conditionnés. Ceci a pour conséquence une augmentation de l'invasivité des cellules HT1080. Il a été également montré une régulation de l'expression et de l'activation de la MT1-MMP et de la MMP-2 par les peptides d'élastine dans le processus angiogénique. La présence de peptides d'élastine ou du peptide VGVAPG a pour effet d'engendrer une accélération du processus angiogénique faisant intervenir la MT1-MMP et la MMP-2. L'expression et l'activation de ces deux métalloprotéinases sont augmentées en présence de kappa élastine ou du peptide VGVAPG. Cet effet observé en présence des peptides d'élastine implique le récepteur S-Gal (EBP), en effet en présence de lactose, nous observons une inhibition totale du phénomène. Le contrôle de ces différents types de régulation apparaît comme une cible thérapeutique importante dans le traitement de diverses pathologies. Ces travaux montrent un rôle essentiel des Matrikines dans la régulation d'enzymes protéolytiques et plus particulièrement dans celle de la gélatinase A dans les modèles étudiésNeoangiogenesis, the formation of new blood capillaries from preexisting vessels, plays an important role in a number of physiological and pathological processes, particularly in tumor growth and metastasis. Extracellular proteolysis by matrix metalloproteinases or other neutral proteinases is an absolute requirement for initiating tumor invasion and angiogenesis. Cryptic segments or preexisting domains within larger proteins, most of them belonging to the extracellular matrix, can be exposed by conformational changes and/or generated by partial enzymatic hydrolysis. They can positively or negatively regulate important functions of endothelial cells including adhesion, migration, proliferation, cell survival and cell-to-cell interactions. Such regulations by cryptic segments and proteolytic fragments led to the concept of matricryptins and matrikines, respectively. Matrix metalloproteinases and matrikines in conjunction with other pro -or anti- angiogenic factors might act in concert at any step of the angiogenesis process. A number of matrikines have been identified as potent anti-angiogenic factors, which could provide a new alternative to anti-proteolytic strategies for the development of anti-angiogenic therapeutic molecules aimed at inhibiting tumor growth and metastasis. Some of them are currently being investigated in clinical trials
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Dilda, Pierre. "Caractérisation de CFTR dans des vésicules membranaires purifiées a partir d'épithélium de trachée bovine : approche pharmacologique." Paris 5, 1995. http://www.theses.fr/1994PA05CD08.
Full textAbstract:
CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) est le produit du gène impliqué dans la mucoviscidose. Lorsque ce gène est muté, CFTR contenu dans les membranes plasmiques des épithélia sécréteurs n'assure plus convenablement sa fonction de canal chlore sensible à l'AMP cyclique. Il en résulte tous les dysfonctionnement épithéliaux liés à la maladie. Dans le but de créer un outil biochimique afin de tester des effecteurs pharmacologiques de CFTR, nous avons utilisé l'épithélium de trachée bovine. Ce modèle animal est d'un grand intérêt puisqu'il existe une très grande homologie entre CFTR humain et bovin. A partir de ce tissu, disponible en grande quantité, nous avons purifié des vésicules membranaires d'origine apicale orientées à l'envers. Des études d'immunoempreintes nous ont permis de détecter CFTR mature (170 kDa) dans les vésicules membranaires apicales et de déterminer sa distribution au niveau de la membrane plasmique des cellules épithéliales de trachée bovine. Les mesures de flux de chlore radioactif dans ces vésicules, les immunoprécipitations suivies de phosphorylations ont démontrées que ce CFTR isolé est fonctionnel. La pharmacologie du canal chlore CFTR, que nous observons, confirme et complète les résultats antérieurs obtenus en électrophysiologie. Nous avons mis en évidence une forte activité ATPasique présente dans les vésicules membranaires apicales ne correspondent à aucune ATPase connue. Le parallélisme évident entre l'inhibition par une nouvelle molécule à la fois de la fonction canal de CFTR et l'activité ATPasique détectée est un nouvel argument en faveur d'une hydrolyse d'ATP par CFTR.