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Dissertations / Theses on the topic 'Leptospira'
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Truccolo, Johann. "Virulence des Leptospira : aspects physiopathologiques et thérapeutiques." Paris 6, 2002. http://www.theses.fr/2002PA066358.
Full text
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Matos, Vanessa Ramos. "Caracterização funcional de uma provável colagenase de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-22042015-170400/.
Full textAbstract:
A leptospirose é uma zoonose, amplamente difundida pelo mundo, causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, que colonizam os túbulos renais de animais silvestres e domésticos. A transmissão ocorre, principalmente, pelo contato direto com água e solo contaminados com a urina de animais infectados que podem ser clinicamente assintomáticos. As leptospiras patogênicas invadem os tecidos do hospedeiro através da penetração da pele lesada ou mucosas da boca, narina e olhos. Logo após ultrapassar as superfícies de contato, as bactérias chegam rapidamente à corrente sanguínea e espalham-se para todos os órgãos causando lesões, principalmente, no fígado e rins onde produzem hemorragia e necrose tecidual. Após a entrada no hospedeiro, a progressão da infecção envolve a adesão das bactérias às células eucarióticas e às proteínas de matriz extracelular seguida pela invasão aos tecidos. Estudos recentes demonstraram que as leptospiras são capazes de se translocarem através das monocamadas celulares, o que poderia ser um mecanismo de evasão do sistema imune e também facilitaria a entrada e saída da corrente sanguínea para infectar órgãos-alvo. O mecanismo envolvido na invasão do patógeno através das barreiras extracelulares não está bem elucidado. Enzimas capazes de degradar proteínas da matriz extracelular poderiam contribuir com a motilidade e quimiotaxia das bactérias durante a invasão. Bactérias patogênicas sintetizam e secretam diferentes tipos de proteases, que atuam degradando colágeno e glicoproteínas entre outras proteínas do hospedeiro. Recentemente, um estudo, utilizando gelatina e caseína como substratos e lisado bacteriano, mostrou haver uma variedade de proteases em Leptospira spp. Análises do genoma indicam a presença de vários genes que codificam prováveis proteases. A comprovação experimental da existência e a caracterização funcional destas proteínas poderão contribuir no entendimento da patogenia da leptospirose. Neste sentido, este trabalho teve como objetivos a clonagem, expressão e caracterização funcional de uma provável colagenase (ColA) de L.interrogans sorovar Copenhageni. As sequências codificantes do domínio de colagenase 1 (D1), do domínio de colagenase 2 (D2) e de ambos os domínios (Full) da ColA foram amplificadas por PCR a partir de DNA genômico de Leptospira e clonadas no vetor de expressão pAE. Os fragmentos D1, D2 e Full da ColA foram expressos em E. coli BL21 - SI e purificados a partir das frações insolúveis por cromatografia de afinidade a níquel. Os fragmentos recombinantes purificados foram utilizados na obtenção dos antissoros policlonais, e as atividades enzimáticas de cada um foram avaliadas. Os antissoros policlonais produzidos em coelho apresentaram elevados níveis de anticorpos detectados por ELISA. Experimentos de Western - blotting demonstraram a presença de proteína ColA em diferentes sorovares patogênicos de Leptospira spp. As proteínas Full e D2 apresentaram atividade catalítica sobre o colágeno desnaturado e sobre peptídeo sintético e atividade hemorrágica em camundongos. Estes resultados indicam que ColA é provavelmente uma proteína de leptospira envolvidas na invasão de tecidos do hospedeiro.<br>Leptospirosis is a zoonosis widespread throughout the world, caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira, which colonize the renal tubules of wild and domestic animals. Transmission occurs mainly through direct contact with water and soil contaminated with urine of infected animals that may be clinically asymptomatic. Pathogenic leptospires invade host tissues by penetrating damaged skin or the mucous membranes of the mouth, nostrils and eyes. Soon after passing the contact surfaces, leptospires come quickly into the bloodstream and spread to all organs causing damage mainly in the liver and kidneys where they produce hemorrhage and tissue necrosis after entering the host, the progression of the infection involves the adhesion of bacteria to eukaryotic cells and extracellular matrix proteins followed by invasion of tissues. Recent studies have shown that leptospires are able to translocate across cell monolayers, which could be a mechanism for evasion of the immune system and also facilitate the entry and exit from the bloodstream to infect target organs. The mechanism involved in pathogen invasion through extracellular barriers is not well elucidated. Enzymes capable of degrading extracellular matrix proteins could contribute to motility and chemotaxis of bacteria during the invasion. Pathogenic bacteria synthesize and secrete different types of proteases that degrade collagen and glycoproteins among other host proteins. Recently, a study using gelatin and casein as substrates and bacterial lysate showed a variety of proteases in Leptospira spp. Analysis of the genome indicate the presence of several genes encoding probable protease. The experimental proof of the existence and functional characterization of these proteins may contribute to the understanding of the pathogenesis of leptospirosis. In this sense, this work aimed the cloning, expression and functional characterization of a probable collagenase (ColA) from L.interrogans serovar Copenhageni. Coding sequences of the collagenase domain 1 (D1), collagenase domain 2 (D2), and both domains (Full) of the ColA gene were amplified by PCR from genomic Leptospira DNA and cloned into the pAE expression vector. The D1, D2 and Full fragments of ColA protein were expressed in E. coli BL21-SI and purified from the insoluble fractions by nickel affinity chromatography. The purified fragments were used to obtain the polyclonal antiserum, and their enzymatic activities were evaluated by zymography. Rabbit polyclonal antiserum against the recombinant protein fragments were produced with a high antibody level detected by ELISA. Western-blotting experiments demonstrated the presence of ColA protein in different pathogenic serovars of Leptospira. The Full and D2 proteins showed catalytic activity on denatured collagen and synthetic peptide and hemorrhagic activity in mice. These results indicated that ColA is probably a leptospiral protein involved in invasion of host tissues.
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Herrmann, Geder Paulo. "Leptospira sp em ovinos do Rio Grande do Sul soroprevalência e avaliação da imunogenicidade da bacterina leptospira hardjo." Universidade Federal de Minas Gerais, 2002. http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8C7HDA.
Full textAbstract:
We determined the seroprevalence of anti-Leptospira sp aglunininas in 1360 serum samples from sheep, the Southeast and Southwest messorregiãoes Rio Grande, between the months January to March of 199. The highest seroprevalence of Leptospira sp, more frequently to serovar hardjo, we elaborated a monovalent L hardjo, as oil adjuvant, administered to two groups of sheep consisting of 15 sheep and a third consisting of 10 control animals. The first group received two doses of vaccine with an interval of 30 days and the second group only one dose of vaccine by the microscopic agglutination test and ELISA, for period of 120 days. The determination of the prevalence of Leptospira spp in sheep in the Southeast and Southwest Mesorregiãoes Rio Grande, including development of an experimental killed vaccine proved to be important tools that can be used in epidemiological surveys and control programs implanting of Leptospirosis in sheep<br>Foi determinada a soroprevalência de aglunininas anti-leptospira sp, em 1360 amostras de soros de ovinos, das messorregiãoes Sudeste e Sudoeste Rio-Grandense, entre os meses de janeiro a marco de 199. A maior soroprevalência da Leptospira sp, com maior frequencia a sorovariedade hardjo, elaborou-se de uma vacina monovalente L hardjo, como adjuvante oleoso, aplicada em dois grupos de ovinos formado por 15 ovelhas e um terceiro controle formado por 10 animais. O primeiro grupo recebeu duas doses de vacina com intervalo de 30 dias e o segundo grupo apenas uma dose da vacina pela técnica de aglutinação microscópica e ELISA, por periodo de 120 dias. A determinação da prevalência de Leptospira sp em ovinos nas Mesorregiãoes Sudeste e Sudoeste Rio-Grandense, com elaboração de uma vacina oleosa experimental revelaram-se importantes ferramentas, podendo ser utilizados nos inquéritos epidemiológicos e na implatação de programas de controle das Leptospiroses dos ovinos
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Zilber, Anne-Laure. "Rôle du rat brun (Rattus norvegicus) dans la persistance des leptospires en conditions naturelles." Thesis, Lyon 1, 2015. http://www.theses.fr/2015LYO10243/document.
Full textAbstract:
La leptospirose est une zoonose ré-émergente de distribution mondiale, causée par un spirochète du genre Leptospira. L'OMS rapporte environ un million de cas sévères de leptospirose humaine par an à travers le monde, avec un taux de mortalité de 10 %. Les rongeurs étant considérés comme les principaux hôtes réservoirs de cette bactérie, la transmettent aux Hommes et aux animaux, par un contact direct ou indirect via de l'urine infectée. Le rat brun (Rattus norvegicus) est important d'un point de vue épidémiologique car il est réservoir du principal sérogroupe incriminé dans les cas de leptospirose humaine : le sérogroupe Icterohaemorrhagiae. Chez ce rongeur, l'infection est asymptomatique et a été caractérisée par des modèles expérimentaux centrés sur la colonisation rénale des leptospires faisant appel à une voie d'inoculation éloignée des conditions naturelles. De plus, les détails sur la dynamique de transmission rat-rat restent encore inconnus. Il est donc important de mieux comprendre le rôle du rat dans le maintien des leptospires dans l'environnement, afin de mieux contrôler les épidémies de leptospirose humaine et animale. À partir d'un modèle expérimental avec une voie d'inoculation mimant des conditions naturelles (conjonctivale ou sous-cutanée), nous avons mis en évidence que la réponse sérologique semblerait être indépendante de la mise en place de la colonisation rénale, et que la voie conjonctivale serait plus efficace pour devenir porteur rénal que la voie sous-cutanée. De plus, une étude de l'infection naturelle sur le terrain avec les mêmes méthodes d'analyse, a permis de mettre en évidence la présence de leptospires dans les poumons de manière concomitante à un portage rénal chez le même individu. Grâce à la mise au point d'une nouvelle méthode de typage moléculaire, nous avons identifié les souches circulantes de leptospires dans une population urbaine de rats et leur dynamique de transmission. Toutes les souches portées par les rats appartenaient au sérogroupe Icterohaemorrhagiae et chaque colonie de rat ne semblait maintenir qu'une seule souche de leptospires dans sa population<br>The leptospirosis is a zoonosis caused by spirochetes of the genus Leptospira, which could infect human and animals. This infection represents a major problem of public health in several countries. The WHO estimates at one million of severe cases of human leptospirosis by year in the world, with a 10 % fatality rate. In the human, the leptospirosis is a mortal infection if it is not treated. The rodents, including the brown rat (Rattus norvegicus), are considered as a carrier and excrete pathogenic leptospires via urine, which becomes the main source of direct or indirect contamination of human and animal. In the rat, the asymptomatic infection was few characterized by experimental model, or only focused on the renal colonization using a no-natural inoculation route. Furthermore, the details of the transmission rat-rat remain still unknown. It is important to know the role of the rat in the persistence of leptospires in rural or urban environments, in order to better control leptospirosis epidemics. With an experimental model using conjunctival and subcutaneous routes, we showed that the antibodies production was independent of the rate of renal colonization and that the conjunctival route was more efficient to become renal carrier than the subcutaneous route. Furthermore, a study of the characteristics of natural infection using the same methods showed the presence of leptospires in lung of rat which are renal carriers. With a new method of molecular typing, we have studied the circulating of the Leptospira strains in the rat’s urban population. All the strains belonged to the Icterohaemorrhagiae serogroup and every colony of rats maintained only one strain of Leptospira. The characterization of the infection with the experimental and field studies, and the epidemiological studies are also important to model the infection in the brown rat, for the prevention of human and animal leptospirosis
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Thaipadungpanit, Janjira. "Multilocus Sequence Typing of the Genus Leptospira." Thesis, Open University, 2008. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.495577.
Full textAbstract:
Epidemiological studies in rural Thailand have demonstrated that leptospirosis is a major cause of acute febrile illness in this setting. Superimposed on this was a sustained outbreak in northeast Thailand between 1999-2003, the basis for which was unknown. Outbreaks elsewhere in the world are commonly associated with the presence of a dominant, region-specific serovar of Leptospira, and it was postulated here that the Thai outbreak was due to the emergence of a single biologically successful clone. An inherent weakness in defining the population genetic structure of Leptospira is that the commonly used serovar is not a unit of genetic identity. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) has been described for Leptospira but is an imperfect tool since a number of variable strains appear identical by banding pattern. In response to this, a multilocu~ sequence typing (MLST) was developed for Leptospira interrogans (the most common species associated with human leptospirosis), and this was used to investigate the Thai outbreak. MLST data were also compared with PFGE and serovar typing. MLST was successfully applied to clinical and rodent isolates cultured from Thailand and reference isolates cultured from a more diverse geographical region. MLST demonstrated that the majority ofhuman infection (68%) in Thailand was caused by a single clone ofL. interrogans serovar Autumnalis, termed sequence type (ST) 34. This clone was also found in the rodent population, making a link between maintenance and accidental hosts. STs were compared with those of Leptospira drawn from the reference collection. This indicated a much more diverse population genetic structure for the reference collection. Unlike serovar and PFGE, MLST could differentiate between species and identify genetically related clones of L. interrogans and the highly related species L. kirschneri. MLST of L. interrogans represents a useful new tool for the genetic investigation of this important pathogen.
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Perolat, Philippe. "Typage moléculaire et taxonomie des Leptospira pathogènes." Paris 11, 1993. http://www.theses.fr/1993PA114834.
Full text
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Ricaldi, Camahuali Jessica Nancy. "Genomic insights into the pathogenesis of Leptospira." Diss., [La Jolla, Calif.] : University of California, San Diego, 2009. http://wwwlib.umi.com/cr/ucsd/fullcit?p3356365.
Full textAbstract:
Thesis (Ph. D.)--University of California, San Diego, 2009.<br>Title from first page of PDF file (viewed July 9, 2009). Available via ProQuest Digital Dissertations. Vita. Includes bibliographical references (p. 124-143).
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Moseley, Mark. "The diversity and ecology of Leptospira in Madagascar." Thesis, University of Aberdeen, 2017. http://digitool.abdn.ac.uk:80/webclient/DeliveryManager?pid=236422.
Full textAbstract:
Multi-host pathogens include some of the most important pathogens of humans and livestock and, due to their complex biology, are particularly difficult to control. Leptospirosis is one of the most common, but neglected, zoonotic diseases in the world and an important cause of production losses in livestock. In Madagascar, potentially pathogenic Leptospira have been identified in both invasive and endemic small mammal hosts with strict associations noted between Leptospira species and host genera. However, in other regions, it is understood that Leptospira can infect multiple hosts and that livestock may also be important reservoir hosts. The aim of this study was to use molecular assays to elucidate the epidemiology of Leptospira infections in small mammals and livestock and to explore their role as reservoir hosts in Madagascar. Sampling of the small mammal community was performed across a heterogeneous landscape in eastern Madagascar and abattoir sampling of livestock was undertaken. We identified complex transmission dynamics, including mixed infections, within the reservoir community with spillover between endemic and invasive small mammal hosts, small mammals and livestock and a potential molecular link between a human case of leptospirosis in Madagascar and small mammal infections. In Rattus rattus, the most abundant invasive small mammal in Madagascar, the epidemiology of L. borgpetersenii and L. interrogans infections differs and facilitation of infection between the two species occurs. Moreover, we show that invasive small mammals (R. rattus and Mus musculus) and cattle may act as epidemiological bridges and amplification hosts, respectively. The reservoir for Leptospira in Madagascar is complex and both invasive small mammals and livestock may play a significant role as sources of human infection in Madagascar. These results suggest that further research in this system has the potential to answer important questions regarding the epidemiology, ecology and evolution of multi-host pathogens.
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Silva, Lucas Pereira e. "Clonagem, expressão e caracterização de prováveis proteínas de membrana indentificadas no genoma de Leptospira interrogans." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24082016-094832/.
Full textAbstract:
A leptospirose é uma doença sistêmica, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. O desenvolvimento de novas estratégias para prevenir a doença é necessário. As pesquisas atuais têm interesse em identificar antígenos conservados que estão envolvidos nas interações patógeno-hospedeiro. Dois genes de L. interrogans foram selecionados, clonados, expressos e suas respectivas proteínas caracterizadas. Os genes foram amplificados por PCR e clonados no vetor de expressão PAE. As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade ao metal. A proteína rLIC10821 foi capaz de se ligar a laminina, plasminogênio e fibrinogênio. Ambas as proteínas foram localizadas na membrana externa de acordo com as três metodologias utilizadas: imunofluorescência, proteinase K, leptospira intacta. A proteína rLIC10821 que interagiu com o PLG foi capaz de gerar plasmina. Após a interação da proteína rLIC10821 com o fibrinogênio, foi possível identificar uma diminuição de 60% no coágulo de fibrina.<br>Leptospirosis is a systemic disease caused by pathogenic bacteria of genus Leptospira. The development of new strategies to prevent the disease is needed. Currently research has focused to identify conserved antigens related to the host-pathogen interaction. Two genes of L. interrogans were selected, cloned, expressed and its proteins characterized. The genes were amplified by PCR and cloned into expression vetor pAE. The recombinant proteins were purified by chromatography of metal affinity. The protein rLIC10821 were able to bind to laminin, plasminogen and fibrinogen. Both proteins were localized in the outer membrane according three methodologies: immunofluorescence, proteinase K, intact leptospira. The protein rLIC10821 interacted with PLG was able to generate plasmin. After the interaction of the protein rLIC10821 with fibrinogen, we could identify a decrease of 60% in the fibrin clot.
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Fazolo, Demétria Luci. "Estudo da interação de prováveis lipoproteínas de membrana externa de Leptospira com proteínas do hospedeiro." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-06122014-085815/.
Full textAbstract:
A leptospirose é uma zoonose mundial causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, que colonizam os túbulos renais de animais domésticos e silvestres e são liberadas ao ambiente externo pela urina. Neste estudo avaliou-se a interação de seis prováveis lipoproteínas de membrana externa de leptospira com as proteínas do hospedeiro: colágeno I, colágeno IV, elastina, fibrinogênio, fibronectina celular e plasmática, laminina e plasminogênio. Os experimentos de adesão demonstraram que as proteínas recombinantes Lp21, Lp22 e Lsa30 apresentaram interação com os componentes do hospedeiro de maneira dose-dependente. Estas aderiram à fibronectina plasmática e laminina, além destes, a Lp21 e a Lp22 interagiram com plasminogênio, a Lp22 e a Lsa30 interagiram com colágeno IV. A Lp22 aderiu à elastina e ao fibrinogênio. No estudo de conservação gênica, os genes que codificam estas proteínas foram observados somente nas Leptospiras patogênicas. Portanto estas proteínas devem contribuir na adesão aos tecidos do hospedeiro na patogênese da Leptospira.<br>Leptospirosis is a worldwide zoonosis caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira that colonize the renal tubules of wild and domestic animals and are excreted in the environment by their urine. The aim of this work was to study the interaction of six leptospiral probable outer-membrane lipoproteins with host proteins: collagen I, collagen IV, elastin, fibrinogen, cellular fibronectin, plasma fibronectin, laminin, and plasminogen. The binding experiments demonstrated that the recombinant proteins showed interaction with host components in a dose-dependent manner were Lp21, Lsa30 and Lp22. These proteins adhered to plasma fibronectin and laminin, in addition to these components, Lp21 and Lp22 interacted with plasminogen, Lp22 and Lsa30 interacted with collagen IV. The Lp22 adhered to elastin and fibrinogen. The genes encoding the probable lipoproteins were found only in pathogenic Leptospira. These results demonstrated that these proteins may contribute in the adhesion to host tissues, in the pathogenesis of Leptospira.
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Figueredo, Jupciana Martins. "Avaliação do papel de duas proteínas de Leptospira interrogans na patogênese da leptospirose." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-23032017-151831/.
Full textAbstract:
Leptospirose é uma zoonose mundial que acomete várias espécies de mamíferos, incluindo humanos, causada por espécies de bactérias patogênicas do gênero Leptospira. Possui um quadro de manifestação clínico muito variado, podendo apresentar desde sintomas comuns a outras doenças como febre, calafrios, cefaleia, dores musculares, enjoo, vômitos, diarreia e uma forma mais severa da infecção denominada síndrome de Weill. Seguindo a estratégia de genômica funcional, foram selecionados genes de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, LIC10377, LIC11122, LIC11184 e LIC12287, tendo como critério a predição de localização das proteínas na membrana. Os fragmentos referentes aos genes LIC11122 e LIC12287 foram clonados no vetor pGEM-T Easy e subclonados no vetor de expressão pAE. As proteínas avaliadas interagem com laminina e plasminogênio, de forma dose-dependentes e saturáveis, sugerindo atuam nos processos de patogênese da bactéria. A presença de um fator sigma na superfície celular desempenhando um papel secundário, sugere que a rLIC11122 pode ser uma proteína moonlight.<br>Leptospirosis is a worldwide zoonosis that affects several species of mammals, including humans, caused by species of pathogenic bacteria of the genus Leptospira. It has a very varied clinical manifestation board and may have symptoms from common tropical diseases such as fever, chills, headache, muscle aches, nausea, vomiting, diarrhea and a severe syndrome of infection known as Weill syndrome. Following the functional genomics strategy, genes were selected from Leptospira interrogans serovar Copenhageni, LIC10377, LIC11122, LIC11184 and LIC12287, with the criterion of the prediction location of proteins in the membrane. The fragments related to genes LIC11122 and LIC12287 were cloned into pGEM-T Easy vector and subcloned into the expression vector pAE. The evaluated proteins interact with laminin and plasminogen, dose-dependent and saturable manner, suggesting participation in bacterial pathogenesis processes. The presence of a sigma factor on the cell surface plays a secondary role, suggests that performs a moonlight rLIC11122 protein.
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Yan, Ke-Ting. "Aspects of immunity to Leptospira borgpetersenii serovar hardjo." Thesis, Queen's University Belfast, 1996. http://ethos.bl.uk/OrderDetails.do?uin=uk.bl.ethos.387931.
Full text
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Guerra, Neto Guilherme. "Freqüência de anticorpos contra Leptospira spp. em felídeos neotropicais em cativeiro no Brasil /." Jaboticabal : [s.n.], 2006. http://hdl.handle.net/11449/96007.
Full textAbstract:
Orientador: Raul José Silva Gírio<br>Banca: Luiz Augusto do Amaral<br>Banca: João Barbudo Filho<br>Resumo: Levantamentos sorológicos em todo o mundo têm demonstrado o envolvimento de diferentes espécies silvestres na epidemiologia da da leptospirose, como roedores, edentatas, carnívoros, marsupiais e artiodáctilos. São poucos os estudos sobre a leptospirose em animais silvestres cativos, especialmente com animais neotropicais, onde a literatura é ainda mais escassa. Com o objetivo de determinar a freqüência de anticorpos contra Leptospira spp. em felídeos neotropicais e identificar os sorovares de maior predominância nas diferentes espécies estudadas, foram colhidas amostras sanguíneas de 359 felídeos de cativeiro provenientes de 41 instituições localizadas em 41 cidades nos Estados de São Paulo, Minas Gerais e Rio de Janeiro. Dos 359 soros sangüíneos, 46 (12,81%) foram reagentes no teste de soroalglutinação microscópica (SAM). As espécies de felídeos que apresentaram amostras reagentes foram: Panthera onca, Puma concolor; Leopardus pardalis, Leopardus tigrinus e Herpailurus yagouaroundi. Os felídeos .das espécies Leopardus wiedii, Oncifelis colocolo e Oncifelis geoffroy não foram reagentes. O sorovar Grippotyphosa foi o mais freqüente (39,13%) e a maior freqüência de soros reagentes foi para a espécie Leopardus pardalis (20,54%). As freqüências de animais reagentes, com exceção das jaguatiricas, quando comparadas estatisticamente entre os Estados de São Paulo e Minas Gerais não apresentaram diferença significativa. Os exames das amostras de felídeos pertencentes às instituições no Estado do Rio de Janeiro não foram suficientes para verificar a presença de anticorpos contra Leptospira spp.<br>Mestre
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Shimabukuro, Fabio Hiroto [UNESP]. "Avaliação sorológica e detecção molecular de leptospiras em tecidos de camundongos experimentalmente infectados com estirpes patogênicas de Leptospira interrogans sorovar Pomona e Canicola." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2007. http://hdl.handle.net/11449/106033.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2007-01-06Bitstream added on 2014-06-13T18:46:32Z : No. of bitstreams: 1
shimabukuro_fh_dr_botfmvz.pdf: 764320 bytes, checksum: fa6d5388815d1f8f1e1f09bd68504a95 (MD5)<br>Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)<br>Camundongos experimentalmente infectados com estirpes patogênicas de Leptospira interrogans sorovar Pomona e Canicola foram avaliados quanto à produção de anticorpos antileptospiras e distribuição do microrganismo em tecidos, em diferentes momentos após infecção. A técnica de soroaglutinação microscópica foi avaliada após tratamento das amostras de soro com 2-mercaptoetanol (SAM-2ME), e pela comparação do seu resultado com as respectivas amostras não tratadas (SAM) foi possível determinar a presença de anticorpos da classe IgM e, dessa forma, diferenciar a fase da infecção. Pela SAM, não houve reação para qualquer outro sorovar testado, diferente do homólogo inoculado, podendo indicar resposta imunológica específica em camundongos para os sorovares inoculados experimentalmente. Em relação à distribuição do microrganismo nos tecidos, pesquisado pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), observou-se que os camundongos infectados não apresentaram fase de leptospiremia, e não houve colonização renal e ovariana, sugerindo que esses animais, talvez, não participem de forma importante na epidemiologia da leptospirose para os sorovares Pomona e Canicola.<br>Experimentally infected mice with pathogenic strains of Leptospira interrogans serovar Pomona and Canicola were evaluated to anti-leptospiral antibodies production and to verify the distribution of the microrganism in tissues in different moments of the infection. Microscopic agglutination test was evaluated after treatment of the sera samples with 2-mercathoethanol (MAT-2ME), and by the comparison of its results with the respective samples not-treated (MAT) was possible to determine the presence of IgM antibodies and, thus, to differentiate the stage of infection. MAT does not present reaction for any other serovar tested, different the homologous serovar inoculated, indicating specific immunological response in mice to the experimentally inoculated serovars. In relation to the distribution of the microrganism in the tissues detected by polymerase chain reaction (PCR), the infected mice didn't present leptospiremia, and there was not renal and ovarian colonization, suggesting that these animals, maybe do not participate of the epidemiology of leptospirosis to the serovar Pomona and Canicola.
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Shimabukuro, Fabio Hiroto. "Avaliação sorológica e detecção molecular de leptospiras em tecidos de camundongos experimentalmente infectados com estirpes patogênicas de Leptospira interrogans sorovar Pomona e Canicola /." Botucatu : [s.n.], 2007. http://hdl.handle.net/11449/106033.
Full textAbstract:
Resumo: Camundongos experimentalmente infectados com estirpes patogênicas de Leptospira interrogans sorovar Pomona e Canicola foram avaliados quanto à produção de anticorpos antileptospiras e distribuição do microrganismo em tecidos, em diferentes momentos após infecção. A técnica de soroaglutinação microscópica foi avaliada após tratamento das amostras de soro com 2-mercaptoetanol (SAM-2ME), e pela comparação do seu resultado com as respectivas amostras não tratadas (SAM) foi possível determinar a presença de anticorpos da classe IgM e, dessa forma, diferenciar a fase da infecção. Pela SAM, não houve reação para qualquer outro sorovar testado, diferente do homólogo inoculado, podendo indicar resposta imunológica específica em camundongos para os sorovares inoculados experimentalmente. Em relação à distribuição do microrganismo nos tecidos, pesquisado pela reação em cadeia pela polimerase (PCR), observou-se que os camundongos infectados não apresentaram fase de leptospiremia, e não houve colonização renal e ovariana, sugerindo que esses animais, talvez, não participem de forma importante na epidemiologia da leptospirose para os sorovares Pomona e Canicola.<br>Abstract: Experimentally infected mice with pathogenic strains of Leptospira interrogans serovar Pomona and Canicola were evaluated to anti-leptospiral antibodies production and to verify the distribution of the microrganism in tissues in different moments of the infection. Microscopic agglutination test was evaluated after treatment of the sera samples with 2-mercathoethanol (MAT-2ME), and by the comparison of its results with the respective samples not-treated (MAT) was possible to determine the presence of IgM antibodies and, thus, to differentiate the stage of infection. MAT does not present reaction for any other serovar tested, different the homologous serovar inoculated, indicating specific immunological response in mice to the experimentally inoculated serovars. In relation to the distribution of the microrganism in the tissues detected by polymerase chain reaction (PCR), the infected mice didn't present leptospiremia, and there was not renal and ovarian colonization, suggesting that these animals, maybe do not participate of the epidemiology of leptospirosis to the serovar Pomona and Canicola.<br>Orientador: Paulo Francisco Domingues<br>Coorientador: Hélio Langoni<br>Banca: Paulo Roberto de Oliveira<br>Banca: Silvio Arruda Vasconcelos<br>Banca: Marcio Garcia Ribeiro<br>Banca: Luiz Carlos de Souza<br>Doutor
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Brich, Michelle [UNESP]. "Infecção Experimental com Leptospira interrogans sorovariedade Canicola, relacionada à pesquisa de alterações oculares em cães." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2010. http://hdl.handle.net/11449/94639.
Full textAbstract:
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brich_m_me_jabo.pdf: 460245 bytes, checksum: 3dd3a22b2996a7679b355cb0da04c9d3 (MD5)<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)<br>A uveíte em mamíferos tem sido relacionada à infecção por Leptospira spp., e, embora ocorra com maior frequência na espécie equina, já foi observada e relatada em outras espécies mamíferas, inclusive na humana. O objetivo deste trabalho foi investigar a relação entre a infecção por leptospiras e a ocorrência de alterações oculares em cães. Para a obtenção dos dados foram utilizados 32 cães, em idade reprodutiva, recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses do Município de São José do Rio Preto, que apresentaram reação negativa, em duas provas de soroaglutinação microscópica (SAM) no intervalo de sete dias. Dos 32 cães, 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovariedade Canicola e 12 formaram o grupo controle. Com a finalidade de avaliar as possíveis alterações do globo ocular post mortem, oito cães (cinco inoculados e três controles) foram sacrificados nos dias: sete, 15, 30 e 45 após o dia da inoculação. Amostras de humor aquoso, de um dos olhos de cada animal, foram retiradas para realização de PCR e SAM; o outro globo ocular foi retirado para realização de exame histopatológico e para a técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero, três, cinco, sete, 10 e após, a cada cinco dias, inclusive no dia do sacrifício, foram realizadas avaliações do estado físico do animal, do globo ocular e realizadas colheitas de sangue. O soro sanguíneo foi submetido à SAM para estabelecer os títulos obtidos em cada fase da infecção. Embora todos os animais tenham apresentado títulos sorológicos, indicando o sucesso da infecção, nenhum dos testes de detecção resultou positivo em até 45 dias de observação; no exame clínico apenas três animais apresentaram alterações perceptíveis: dois apresentavam irritação ocular, com hiperemia da esclera e um animal apresentava lacrimejamento...<br>Uveitis in mammals has been related to Leptospira spp. And although it occurs more frequently in the horse has already been observed and reported in other mammalian species, including the human. The aim of this study was to investigate the relationship between leptospira infection and the occurrence of ocular changes in dogs. To obtain the data were used 32 dogs in the reproductive age, collected by the Center for Zoonosis Control in São José do Rio Preto, which showed negative reaction in both tests of microscopic agglutination test (MAT) within seven days. Of the 32 dogs, 20 were inoculated with a pathogenic strain of Leptospira interrogans sorovar Canicola and 12 formed the control group. With the aim of assessing possible changes of the eye post mortem, eight dogs (five inoculated and three controls) were sacrificed on days: seven, 15, 30 and 45 days after inoculation. Samples of aqueous humor of one eye of each animal were removed for PCR, and MAT, and the other eye was removed for histological examination and the staining technique Levaditi. On days zero, three, five, seven, 10 and, thereafter, every five days, including the day of sacrifice, were assessed the physical condition of the animal, the eyeball and blood samples. The serum was subjected to SAM to establish the qualifications obtained at each stage of infection. Although all animals have serologic evidence indicating the success of infection, no detection tests resulted positive in up to 45 days of observation and by clinical examination only three animals showed noticeable changes: two had eye irritation with redness of the sclera and one animal showed tearing. We conclude that 45 days of infection with Leptospira interrogans sorovar Canicola are not enough to cause serious damage to the ocular system of dogs
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Letocart, Marine. "Hétérogénéité du genre Leptospira. Intérêt des méthodes moléculaires pour la taxonomie et l'épidémiologie." Bordeaux 2, 1997. http://www.theses.fr/1997BOR28541.
Full text
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Fontana, Célia. "Identification et caractérisation des gènes impliqués dans la virulence des Leptospires." Thesis, Lyon, 2016. http://www.theses.fr/2016LYSE1091.
Full textAbstract:
La leptospirose est une zoonose de distribution mondiale provoquant plus d'un million de cas sévères chez l'Homme et causant des infections chez les animaux. Les agents responsables de cette maladie sont les espèces pathogènes du genre Leptospira, bactéries atypiques dont les mécanismes de virulence sont largement méconnus. Des vaccins humains et vétérinaires existent mais leur action est restreinte à certains sérovars qui ne reflètent que partiellement l'épidémiologie actuelle, complexe et fluctuante dans l'espace et le temps. Les objectifs de la thèse présentée dans ce manuscrit ont été d'une part de caractériser de nouveaux facteurs de virulence de Leptospira et d'autre part d'identifier des candidats vaccins capables d'induire une protection croisée dans le cadre du projet collaboratif COVALEPT mené par Merial, regroupant des partenaires académiques et industriels. Dans un premier temps, un outil de numération par cytométrie en flux, plus rapide et performant que la méthode standard, a été développé. Par la suite, l'étude de mutants générés par transposition aléatoire ou spontanés a permis d'identifier trois facteurs de virulence : LIC12144, requis pour la synthèse des lipopolysaccharides, FliM, essentiel à la motilité, et LIC11221, potentiellement impliqué dans le chimiotactisme. De plus, deux candidats vaccins, une protéine recombinante et une souche vivante atténuée, ont été conçus et ont démontré une efficacité partielle contre la maladie en modèle rongeur. En conclusion, ce travail apporte des connaissances inédites sur les facteurs de virulence de Leptospira et permet d'envisager le développement de vaccins à large spectre de protection contre la leptospirose<br>Leptospirosis is a worldwide zoonosis responsible for more than 1 million human cases and severe infections in animals. The causative agents are pathogenic species of Leptospira. The virulence mechanisms of these atypical bacteria remain largely unknown. Human and animal vaccines exist but the protection is restricted to a few serovars, representing only partially the complex and fluctuating epidemiology of the disease. The aims of the thesis presented in this manuscript were to characterize new virulence factors on Leptospira on the one hand and to identify new cross-protective vaccine candidates on the other hand, in the context of the COVALEPT collaborative project led by Merial, gathering industrial and academic partners. First, a flow cytometry based enumeration method for leptospires was developed, more rapid and efficient than the current standard technique. Then, the study of mutants generated by random transposition and spontaneously avirulent strains led to the identification of three virulence factors: LIC12144, required for lipopolysaccharides biosynthesis, FliM, essential for motility, and LIC11221 which may be involved in chemotaxis. Finally, two vaccine candidates conferring partial protection against the disease in a rodent model were conceived, a recombinant protein and a live attenuated strain. Altogether, this work brings new knowledge on Leptospira virulence and supports the development of broad spectrum vaccines against leptospirosis
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Schiettekatte, Olivier. "Rôle des phages dans l'évolution des leptospires." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2018. https://theses.md.univ-paris-diderot.fr/SCHIETTEKATTE_Olivier_2_va_20181116.pdf.
Full textAbstract:
La leptospirose est une zoonose bactérienne de répartition mondiale causée par des leptospires pathogènes dont le réservoir principal est le rat, qui disperse la bactérie dans l’environnement via ses urines. Malgré l’importance déterminante de la survie des leptospires dans l’environnement, en particulier dans les eaux douces, l’écologie de ces spirochètes reste méconnue. Le genre Leptospira est très diversifié, avec 34 espèces et plus de 300 sérovars. Les leptospires sont classés selon leur phylogénie en trois groupes : les espèces pathogènes, intermédiaires et saprophytes. Les études phylogénétiques et évolutives sont rares et ne prennent pas en compte les leptospires saprophytes qui sont peu recherchés, ce qui constitue un biais important pour des études évolutives robustes. Les virus exercent une pression évolutive majeure chez beaucoup de modèles bactériens ; pourtant, les rôles des phages et prophages dans l’évolution des leptospires n’ont pas encore été investigués et l’isolement de nouveaux leptophages n’a plus été rapporté depuis 30 ans. Le séquençage du seul phage tempéré de leptospires a permis l’identification de prophages au sein du genre. Ceux-ci ont été trouvés dans le génome de leptospires pathogènes uniquement, suggérant un lien avec la pathogénie.Dans ce travail de thèse, un premier axe de recherche a été développé sur l’étude des phages de leptospires. Nous avons caractérisé de façon morphologique, génomique, et protéomique les deux seuls leptophages lytiques connus, LE3 et LE4, dont l’hôte est une espèce saprophyte. Les études génomiques de LE3 et LE4 ont montré très peu de similarités avec les génomes de virus connus ; mais ont néanmoins permis d’identifier un nouveau prophage au sein du génome de l’espèce pathogène L. mayottensis. Des tests d’induction à la mitomycine C ont été effectués sur plusieurs souches de leptospires potentiellement lysogènes, et la production de queues de phages a été constatée chez L. interrogans, la principale espèce pathogène. Parallèlement, des phages environnementaux ont été recherchés dans des échantillons d’eaux douces, notamment dans l’écosystème insulaire modèle de Mayotte où la leptospirose est endémique. Dans un second axe de recherche, nous avons entrepris une étude phylogénétique des leptospires pour faire un nouvel état de la diversité du genre, passant, selon nos résultats, de 34 à 64 espèces. Parmi ces espèces, 5 forment un nouveau clade. Le séquençage des génomes entiers de ces souches nous a permis de mettre en place un premier schéma de typage universel pour le genre Leptospira. Nous avons choisi à cette fin le typage moléculaire multi-locus basé sur le core-génome (cgMLST), qui s’appuie sur le séquençage de génomes entiers pour typer les isolats correspondants de façon robuste et profonde. Ce schéma permet aujourd’hui d’étudier l’évolution des leptospires, et de faire un suivi épidémiologique à l’échelle globale. Par ailleurs, l’utilisation du séquençage de troisième génération nous a permis de détecter de nouveaux réplicons extra-chromosomiques dans plusieurs souches de leptospires. Une partie de ces réplicons sont des prophages dont le rôle dans l’évolution des leptospires reste à investiguer.L’exploration de la diversité des leptospires et la caractérisation de nouveaux phages et prophages révèlent une relation étroite entre les leptospires et leurs phages qui était jusque-là inconnue. Ces travaux changent notre vision de l’évolution des leptospires dont la diversité pourrait s’expliquer en partie par la transmission de prophages et la transduction virale<br>Leptospirosis is a bacterial zoonosis of worldwide distribution caused by pathogenic leptospires, whose main reservoir is the rat, which disperses the bacterium into the environment via its urine. Despite the crucial importance of the survival of leptospires in the environment, especially in freshwater, the ecology of these spirochetes remains unknown. The genus Leptospira is very diverse, with 34 species and more than 300 serovars. Leptospires are classified according to their phylogeny into three groups: pathogenic, intermediate and saprophytic species. Phylogenetic and evolutionary studies are scarce and do not take into account the saprophytic leptospires that are little sought-after, this constitutes an important bias for robust evolutionary studies. Viruses exert a major evolutionary pressure in many bacterial models; however, the roles of phages and prophages in the evolution of leptospires have not yet been investigated and the isolation of new leptophages has not been reported for 30 years. Sequencing of the only temperate phage of leptospires made possible the identification of Leptospira prophages. These prophages were found solely in the genome of pathogenic species, suggesting a link with pathogenesis.Herein, we initiate a novel line of research regarding Leptospira phages. The only known lytic leptophages, LE3 and LE4, whose host is a saprophytic species, are characterized morphologically, genomically, and proteomically. Genome studies of LE3 and LE4 showed very little similarity to presently-annotated viral genomes; but have nevertheless made possible the identification of a new prophage within the genome of the pathogenic species L. mayottensis. Mitomycin C induction tests were performed on several putative Leptospira lysogenic strains, and production of phage tails were observed in L. interrogans, the main pathogen. At the same time, environmental phages have been investigated in freshwater samples, particularly in the model ecosystem of Mayotte Island where leptospirosis is endemic.In a second line of research, we undertook a phylogenetic study of Leptospira to make a new inventory of the diversity of the genus, passing, according to our results, from 34 to 64 species. Among these species, 5 form a new clade. The sequencing of whole genomes of these strains allowed us to set up a first universal typing scheme for the genus Leptospira. We have chosen for this purpose the core-genome-based multi-locus molecular typing (cgMLST), which relies on the sequencing of whole genomes to type the corresponding isolates in a robust and deep manner. This scheme now makes possible the study of the evolution of leptospires, and an epidemiological follow-up on a global scale. In addition, the use of third-generation sequencing has allowed us to detect new extra-chromosomal replicons in several leptospiral strains. Some of these replicons are prophages whose role in the evolution of leptospires awaits investigation.The exploration of leptospiral diversity and characterization of new phages and prophages reveal a close relationship between leptospires and their phages that was previously unknown. This work changes our view of the evolution of Leptospira, the diversity of which could be explained partly by transmission of prophages and viral transduction
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Chagas, Júnior Adenizar Delgado das. "O imprint como método para detecção de Leptospira SSP." s.n, 2009. https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/4113.
Full textAbstract:
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-05-31T19:55:30Z
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Adenizar Chagas Júnior. O Imprint como método para detecção de Leptospira SSP. 2009.pdf: 396164 bytes, checksum: 8f423288d4f795e861df22e9de3acb59 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2012-05-31T19:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Adenizar Chagas Júnior. O Imprint como método para detecção de Leptospira SSP. 2009.pdf: 396164 bytes, checksum: 8f423288d4f795e861df22e9de3acb59 (MD5)
Previous issue date: 2009<br>Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil<br>Na determinação da eficácia de novas candidatas à vacina para leptospirose, o
marcador primário considerado é a mortalidade, e um marcador secundário
importante é a indução de uma imunidade estéril. Entretanto, a avaliação da
imunidade estéril é dificultada pelo tempo demandado e pela complexidade de
métodos como o isolamento pela cultura. Neste estudo, foi avaliado o uso do método
do imprint (ou touch preparation) na detecção da presença de leptospiras em tecidos
de hamsters infectados com L. interrogans sorovar Copenhageni. Comparado com a
cultura, o imprint demonstrou igual ou melhor detecção de leptospiras em amostras
de rim, fígado, pulmão e sangue coletadas após a infecção obtendo uma
concordância geral boa (κ = 0.61). Além disso, na avaliação de hamsters imunizados
com uma proteína recombinante de Leptospira candidata à vacina e subsequente
desafio com leptospiras patogênicas, a concordância entre a cultura e o imprint foi
alta (κ = 0.84). Estes achados indicam que o imprint é um método rápido para a
observação direta de Leptospira spp. e que pode ser facilmente aplicado na
avaliação de animais infectados experimentalmente com leptospiras e na
determinação de imunidade esterilizante durante avaliações de potenciais
candidatas à vacina.<br>In determining the efficacy of new vaccine candidates for leptospirosis the primary
endpoint is death and an important secondary endpoint is sterilizing immunity.
However, evaluation of this endpoint is often hampered by the time consuming
demands and complexity of methods such as culture isolation (CI). In this study, we
evaluated the use of an imprint (or touch preparation) method (IM) in detecting the
presence of leptospires in tissues of hamsters infected with L. interrogans serovar
Copenhageni. Compared to CI, the IM exhibited equal or improved detection of
leptospires in kidney, liver, lung and blood samples collected post-infection and the
overall concordance was good (κ = 0.61). Furthermore, in an evaluation of hamsters
immunized with a recombinant Leptospira protein-based vaccine candidate and
subsequently challenged with leptospires, the agreement between the CI and IM was
very good (κ = 0.84). These finding indicate that the IM is a rapid method for the
direct observation of Leptospira spp. that can be readily applied to evaluating
Leptospira infection in experimental animals and determining sterilizing immunity
when screening potential vaccine candidates.
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Fuverki, Renata Benício Neves [UNESP]. "Padronização de um protocolo para detecção molecular de Leptospira spp. e Brucella spp. em sêmen bovino comercial." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2010. http://hdl.handle.net/11449/94627.
Full textAbstract:
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fuverki_rbn_me_jabo.pdf: 380911 bytes, checksum: 1e3cde0d1d852b172186ddec592ea827 (MD5)<br>Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)<br>Com a crescente disponibilidade das biotécnicas de reprodução animal, o comércio dos produtos envolvidos com essas práticas também está em expansão, oferecendo a possibilidade de melhoria dos índices zootécnicos às produções de bovinos. Porém deve-se levar em consideração que há riscos sanitários em práticas como a inseminação artificial caso não se realize o controle do material biológico utilizado. Dentre os agentes infecciosos que podem estar presentes no sêmen e passíveis de serem transmitidos por esse estão a leptospirose e a brucelose, enfermidades responsáveis por grandes perdas reprodutivas e econômicas na bovinocultura mundial. Este projeto teve como objetivos detectar molecularmente esses patógenos em amostras de sêmen bovino provenientes de centrais de comercialização brasileiras, utilizando um kit comercial para extração de DNA (“RTP Bacteria DNA Mini Kit” (Invitek®), aperfeiçoá-lo para a extração de DNA bacteriano a partir de sêmen e avaliar sua aplicabilidade à rotina laboratorial. O DNA bacteriano foi extraído e quantificado por eletroforese em gel de agarose. Pretendeu-se também realizar reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os “primers” B4 e B5 para amplificação do DNA de Brucella spp. e os “primers” Lep 1 e Lep 2 para Leptospira spp. O kit de extração foi otimizado com sucesso, e todas as 96 amostras examinadas foram negativas para qualquer DNA bacteriano. Os resultados podem ser úteis para estabelecer alternativas de controle sanitário em touros doadores de sêmen e permitir o fornecimento de material genético livre de patógenos, aumentando o “status” sanitário da reprodução de bovinos no Brasil<br>With the increasing disponibility of animal reproduction biotechniques, trading of products involved with these activities is also in expansion offering improving possibilities in zootecnic indexes of bovine herds. However, considerations should be taken about sanitary risks in practices like artificial insemination if any control is applied to this biological material. Among infectious agents that could be present and transmitted by semen are leptospirosis and brucellosis, diseases that are responsible for numerous reproductive and economic losses in world’s cattle culture. The goals of this project were to molecularly detect these pathogens in bovine semen samples from Brazilian artificial insemination centers using a commercial kit for DNA extraction (RTP Bacteria DNA Mini Kit (Invitek®), to improve it for extracting bacterial DNA from semen and to analyze its applicability in laboratory routine. Bacterial DNA was extracted and quantified by agarose gel electrophoresis. We also intended to realize polymerase chain reaction (PCR) using primers B4 and B5 for amplification of Brucella spp. DNA and primers Lep 1 e Lep 2 for Leptospira spp. DNA. The extraction kit was successfully optimized and all of 96 examined samples were negative for any bacterial DNA. Results could be useful to establish alternative measures of sanitary control in semen donors and to allow the supplying of genetic material free of pathogens, increasing sanitary status of bovine reproduction in Brazil
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Fernandes, Luís Guilherme Virgilio. "Caracterização da interação de Leptospira interrogans com o sistema protrombina/trombina e possíveis implicações na virulência." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-09022018-113614/.
Full textAbstract:
Os mecanismos responsáveis pelas manifestações hemorrágicas durante a leptospirose severa ainda são pouco compreendidos. Este trabalho avaliou os efeitos diretos e indiretos das leptospiras sobre moléculas do sistema de coagulação. Foi verificado que leptospiras virulentas são eficientes em bloquear a atividade da enzima trombina por meio do sequestro de seu sítio de ligação ao substrato, gerando uma menor formação do coágulo de fibrina, acarretando em sangramento e consequente disseminação do patógeno para outros sítios de infecção. Foi mostrado também que a inflamação causada pela resposta imune contra as bactérias causa uma ativação da coagulação, muito provavelmente via expressão de Fator Tissular, o que ocasiona um consumo e consequente esgotamento dos fatores e inibidores de coagulação, culminando em hemorragia e formação de trombos, os quais podem levar à falência de órgãos. Estes resultados melhoram o entendimento da patogênese da leptospirose e podem favorecer o desenvolvimento de terapias para as manifestações hemorrágicas.<br>The mechanisms responsible for the hemorrhagic manifestations during severe leptospirosis are still poorly understood. This work evaluated the direct and indirect effects of leptospires upon molecules of the coagulation system. It has been shown that virulent leptospires are effective in blocking the activity of the enzyme thrombin by sequestration of its substrate binding site, generating less fibrin clot formation, leading to bleeding and consequent dissemination of the pathogen to other sites of infection. It has also been shown that the inflammation caused by the immune response against the bacteria causes an activation of the coagulation, most probably via expression of Tissue Factor, which causes a consumption and consequent depletion of coagulation factors and inhibitors, culminating in hemorrhage and thrombus formation, which can lead to organ failure. These results improve the understanding of the pathogenesis of leptospirosis and may favor the development of therapies for hemorrhagic manifestations.
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Domingos, Renan Francisco. "Caracterização de duas proteínas de Leptospira interrogans na patogênese da leptospirose." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-09122014-122906/.
Full textAbstract:
O sequenciamento da L. interrogans sorovar Copenhageni e as análises bioinformáticas permitiram a identificação de candidatos vacinais e fatores de virulência. Foram selecionados dois genes, LIC11834 e LIC12253, que foram submetidos a ensaios de presença do DNA genômico e RNA mensageiro em diferentes sorovares de Leptospira. Observamos que o gene LIC12253 foi o mais presente entre os sorovares testados. Os genes foram clonados em vetor de expressão pAE e expressos em E. coli BL21 SI. As proteínas recombinantes foram purificadas e submetidas a ensaio de dicroísmo circular, o qual confirmou que ambas as proteínas estavam estruturadas. Por meio de testes de imunogenicidade em camundongos, ambas as proteínas mostraram-se imunogênicas, apresentando altos títulos de anticorpos, porém não foram capazes de promover resposta imune celular. Em ensaios de localização das proteínas nativas podemos observar a presença destas proteínas na membrana externa de Leptospira. Ensaios de reatividade com soros de pacientes diagnosticados com leptospirose mostraram que há reconhecimento das proteínas por anticorpos presentes nesses soros, sugerindo que as proteínas são expressas durante a infecção. Em ensaios de adesão a componentes de matriz extracelular e componentes do soro e plasma humano, rLIC11834 apresentou ligação à laminina, sendo nomeada de Lsa33, além de ligação ao plasminogênio, ao C4bp e ao fibrinogênio de forma dose-dependente; rLIC12253 apresentou ligação à laminina, sendo chamada de Lsa25, e ao C4bp de forma dose-dependente. Ensaios de desafio demonstraram que as proteínas não apresentam proteção contra infecção letal em hamsters. Assim, acreditamos que estas proteínas multifuncionais possam interagir com proteínas do hospedeiro e ter participação na patogênese da doença.<br>The genomic sequencing and the advances of bioinformatics analysis allowed the identification of new vaccine candidates and new virulence factors. Therefore, two genes from L. interrogans serovar Copenhageni, LIC11834 and LIC12253 were selected and subjected to assays for the presence of genomic DNA and mRNA in different serovars of Leptospira. These assays found that the gene LIC12253 was the most present among the tested serovars. The genes were then cloned in the expression vector pAE and expressed in E. coli BL21 SI. The recombinant proteins were purified and subjected to circular dichroism, which confirmed that both proteins presented secondary structures. Immunogenicity tests in mice showed that both proteins are immunogenic, with high antibodies titers, but don\'t induce cellular immune response. Localization assays of the native proteins on the leptospiras demonstrated the presence of the proteins on the surface of Leptospira. Reactivity assays with sera of patients diagnosed with leptospirosis showed that the recombinant proteins could be recognized by their antibodies, suggesting that they are expressed during infection. Adhesion assays to the extracellular matrix components, human serum and plasma components, showed that the protein rLIC11834 binds to laminin and was called Lsa33. In addition, Lsa33 interacts to plasminogen, to C4bp and to fibrinogen in a dose-dependent manner. The protein rLIC12253 showed binding to laminina, named Lsa25, and to C4bp in a dose-dependent manner. Challenge assays showed that both recombinant proteins don\'t afford protection against lethal infection in hamsters. Thus, we believe that these multifunctional proteins may interact with host proteins and may play a role in leptospiral pathogenesis.
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Breda, Leandro Carvalho Dantas. "Mecanismos de evasão do sistema complemento por Leptospira ssp.: interação com inibidor de C1 esterase e C4BP." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-12082014-153344/.
Full textAbstract:
O sistema complemento (SC) é um importante componente da imunidade inata na eliminação de patógenos. Suas proteínas reguladoras são necessárias para controlar a excessiva ativação sobre células próprias. Porém, alguns patógenos ligam a estas proteínas reguladoras para escapar do SC. A Leptospira spp. - agente etiológico do leptospirose - interage com Fator H e C4BP permitindo a evasão ao SC. As regiões SCR 7 e 8 da C4BP são responsáveis pela interação com proteínas LcpA e LigBC, e os SCRs 4, 7 e 8 são responsáveis pela interação com LigAC e L. interrogans íntegra. Estas interaçôes são dependentes de forças iônicas e inibidas por heparina. Outro importante regulador da via clássica e das lectinas é o inibidor de C1 esterase. Observamos sua a interação com leptospira atenuada, patogênica e não patogênica. Ensaios de sobrevivência de leptospira sugerem sua importância na sobrevida de leptospira atenuada, podendo ser utilizado como mecanismo de escape à via clássica e das lectinas do SC, sendo o primeiro mecanismo deste tipo, investigado em leptospiras.<br>Leptospirosis is a zoonosis caused by bacteria Leptospira. The Complement System plays a crucial role in the immune response against Leptospira. Non-pathogenic leptospira is eliminated by complement while pathogenic is able to avoid complement activation by the acquisition of host complement inhibitors Factor H and C4BP. We verified that SCR 7 and 8 of C4BP alpha chain are responsible to interaction with outer membrane proteins of L. interrogans LcpA and LigBC while SCR 4, 7 and 8 are responsible to interaction with LigAC and L. interrogans. We characterized this protein-protein interaction and verified that is ionic strength dependent and is inhibited by heparin. C1INH, another important regulator of classical and lectin pathways, interacts with the surface of leptospiras pathogenic, non-patogenic and attenuated and it is still able to regulates the classical pathway. We also performed a killing experiment and verified that C1INH is important to the survival of leptospiras attenuated, been the first complement system evasion mechanisms verified at this strain.
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Carvalho, Enéas de. "Análise das proteínas de Leptospira com possível papel hemolítico através de expressão recombinante: detecção de expressão nativa, atividade biológica e potencial vacinal." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41131/tde-18072008-155232/.
Full textAbstract:
A leptospirose é considerada a zoonose mais difundida do mundo, assim como uma doença reemergente. Esta enfermidade, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira, possui altas taxas de infecção em países em desenvolvimento, ocasionando graves prejuízos econômicos e de saúde pública. Até o momento, não existem vacinas humanas licenciadas contra leptospirose. Após o seqüenciamento do genoma de três espécies de Leptospiras vários genes foram apontados como candidatos vacinais promissores. Uma categoria importante de genes candidatos são aqueles com possível atividade hemolítica. Neste trabalho, clonamos e expressamos diversas proteínas com possível atuação hemolítica. As proteínas recombinantes obtidas, no entanto, não exibiram atividade hemolítica. Uma destas proteínas, TlyC, foi investigada quanto à sua capacidade de interagir com os componentes da matriz extracelular (MEC). Os resultados obtidos indicam que TlyC liga-se com alta afinidade a diversos componentes da MEC, e que esta proteína é capaz de inibir competitivamente a adesão de Leptospiras à um material biológico que se assemelha à MEC. A transcrição e expressão destas proteínas foi detectada em cultura de Leptospira. Algumas das proteínas recombinantes foram utilizadas em um desafio animal contra leptospirose, mas nenhum delas foi protetora. Concluímos que estas proteínas não parecem ser bons candidatos vacinais e que TlyC é uma proteína que interage com componentes da MEC.<br>Leptospirosis is considered the most disseminated zoonosis of the world, and also a reemerging disease. This disease, caused by pathogenic bacteria of the genus Leptospira, has high rates of infection in developing countries, leading to severe economic and medical costs. There is not a licensed vaccine against leptospirosis for human use. After the genome sequencing of three species of leptospires, several genes were pointed to be promising vaccinal candidates. An important category of these candidates are those with putative hemolytic activity. In this work, we cloned and expressed some proteins with putative hemolytic activity. The recombinant proteins obtained, however, did not show hemolytic activity. One of these proteins, TlyC, was investigated with regard to its possible ability to interact to extracellular matrix (ECM) components. The results obtained indicate that TlyC binds with high affinity to several ECM components and that this protein can inhibit the Leptospira bind to a biological material that ressambles the ECM. The transcription and expression of these proteins were detected in leptospires cultures. Some of the recombinant proteins were used in an animal challenge against leptospirosis, but none of them were protective. We conclude that these proteins do not seem to be good vaccine candidates and that TlyC is a protein that interacts with the ECM and its components.
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Pereira, Priscila Romero Mazzini. "Caracterização imunogênica e funcional de duas lipoproteínas preditas de Leptospira interrogans expressas em Escherichia coli." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-23052017-141254/.
Full textAbstract:
A leptospirose é a zoonose mais disseminada no mundo e uma das principais causas de perda econômica no agronegócio. O estudo de novos antígenos de superfície de Leptospira interrogans, é intrigante e pode fornecer conhecimento na interação inicial patógeno-hospedeiro. Os genes LIC13059 e LIC10879, escolhidos por bioinformática, com predição de localização na superfície celular, foram clonados e as proteínas recombinantes expressas em E. coli, para avaliar a interação com componentes do hospedeiro. Após purificação, as proteínas encontravam-se estruturadas e foram reconhecidas por soro de indivíduos infectados. As proteínas recombinantes interagem com plasminogênio, fibrinogênio e laminina. rLIC13059, nomeada Lsa25.6, quando ligada ao fibrinogênio é capaz de inibir a formação de coágulo de fibrina e rLIC10879, nomeada Lsa16, interage com e-caderina, sugerido envolvimento na cascata de coagulação e ligação com o hospedeiro, respectivamente. O plasminogênio ligado às proteínas é convertido em plasmina, o que poderia ajudar a penetração bacteriana no hospedeiro.<br>Leptospirosis is the most widespread zoonosis and also a major cause of economic loss in animal production worldwide. The study of new surface antigens of Leptospira interrogans is intriguing and may shed light into the initial pathogen-host interactions. We set out to study two novel coding sequences LIC13059 and LIC10879 predicted to be located at the cell surface. The genes were cloned and the recombinant proteins were expressed in E. coli. The purified recombinant proteins presented secondary structures, and interacted with plasminogen, fibrinogen and laminin human components. rLIC13059, named Lsa25.6, when bound to fibrinogen was capable of inhibiting the formation of fibrin clot, while rLIC10879, named Lsa16, interacted with e-cadherin, a mammalian cell receptor, suggesting participation in coagulation pathway and host-cell binding, respectively. The plasminogen captured by both recombinant proteins could be converted into plasmin, a mechanism that could help bacterial penetration in the host.
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Silva, Ludmila Bezerra da. "Interação da proteína de superfície LcpA de Leptospira com Fator H, principal regulador solúvel da via alternativa do sistema complemento humano." Universidade de São Paulo, 2013. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-26112013-143254/.
Full textAbstract:
A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, com maior incidência nas regiões tropicais. As bactérias que causam a doença pertencem ao gênero Leptospira, família Leptospiracea e ordem Spirochaetales. A leptospirose é mantida na natureza pela colonização persistente dos túbulos renais proximais dos animais portadores. Uma estratégia adotada por estas espiroquetas para sobreviver à ação do sistema imune inato do hospedeiro é a capacidade que possuem de interagir com os reguladores do sistema complemento Fator H (FH) e proteína de ligação a C4b (C4BP). O sistema complemento é um componente vital da imunidade inata, uma vez que desempenha um papel crucial na defesa do hospedeiro, particularmente contra bactérias Gram-negativas. Dados recentes gerados por nosso grupo mostraram que C4BP interage com a proteína de superfície LcpA de Leptospira. Com cerca de 20 kDa, essa proteína é capaz de se ligar a C4BP purificado ou solúvel no soro de maneira dose-dependente. Uma vez ligado à proteína, C4BP permanece funcional agindo como cofator de Fator I na clivagem de C4b. O presente estudo teve como principal objetivo avaliar a interação da proteína LcpA com FH humano, principal regulador solúvel da via alternativa do sistema complemento. A proteína LcpA e suas porções N-Terminal, Intermediária e CTerminal recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade a metal a partir da fração insolúvel. A interação dessas proteínas com FH foi avaliada por dois métodos distintos: ELISA e Western blot com overlay. Os resultados indicaram que a porção C-Terminal da proteína LcpA é responsável pela interação com FH. Curiosamente, C4BP também se liga a esse domínio da proteína. Uma vez que esses dois reguladores solúveis do sistema complemento interagem com o mesmo segmento da LcpA, realizaram-se, a seguir, ensaios de competição com o objetivo de avaliar se ambos compartilhariam os mesmos sítios de interação. Os dados mostraram que FH e C4BP devem se ligar a sequências distintas desta proteína. Com o objetivo de se avaliar a funcionalidade de FH ligado à LcpA, realizou-se um ensaio para investigar sua atividade de co-fator de Fator I na clivagem de C3b. Produtos de degradação de 46 kDa e 43 kDa da cadeia α' de C3b foram detectados, indicando que FH permanece funcional. Em se tratando de uma proteína com funções relacionadas ao processo de evasão ao sistema imune inato, decidiu-se realizar ensaios de desafio em modelo de hamster com a finalidade de se avaliar seu potencial imunoprotetor. Os três ensaios realizados indicaram que a proteína não é capaz de conferir proteção. Os ensaios de ELISA visando à avaliação dos títulos de anticorpos mostraram que LcpA não é imunogênica, fato que explica os resultados dos ensaios de desafio observados. Portanto, embora interaja com moléculas do hospedeiro e pareça contribuir para o processo de evasão ao sistema imune inato, essa proteína de membrana não se mostrou promissora como candidato vacinal contra leptospirose.<br>Leptospirosis is a zoonosis of global distribution, with higher incidence in tropical areas. The bacteria that cause the disease belong to the genus Leptospira, family Leptospiracea and order Spirochaetales. Leptospirosis is maintained in nature by persistent colonization of proximal renal tubules of carrier animals. One strategy adopted by these spirochetes to escape from host´s innate immune system is the ability to interact with the complement regulators Factor H (FH) and C4b Binding Protein (C4BP). The complement system is a vital component of the innate immune system, being crucial for host´s defense, particularly against Gram-negative bacteria. According to our recent published data, C4BP interacts with the leptospiral surface protein LcpA. This 20 kDa outer membrane protein binds both purified and serum C4BP in a dose-dependent manner. Once bound, C4BP remains functional acting as a cofactor for Factor I in the cleavage of C4b. In the present study we evaluated the interaction of LcpA with human FH, the main soluble regulator of the alternative pathway of complement. The intact protein as well as its N-terminal, intermediate and C-terminal portions were purified by metal-affinity chromatography from the insoluble pellet. The interaction of these proteins with FH was evaluated by two distinct methods: ELISA and Western blot overlay. Our results indicate that the C-terminal domain of LcpA mediates interaction with FH, and also with C4BP. Since both complement regulators interact with the same fragment of LcpA, we next performed competition assays to assess if they would share binding sites. According to our data, FH and C4BP have distinct binding sites on LcpA. Cofactor activity of FH bound to immobilized LcpA was confirmed by detecting the C3b α' chain cleavage fragments of 46 and 43 kDa upon incubation with Factor I, thus indicating that it remains functionally active. Given the LcpA´s role in host´s innate immune evasion, we also evaluated its vaccine potential in a hamster model. Data from three challenge assays indicated that the protein can not afford protection. Low ELISA antibody titers of hamsters immunized with LcpA were observed, which strongly suggests that this protein is not immunogenic. In conclusion, LcpA interacts with host´s molecules and seems to contribute to the bacterial immune evasion. Nevertheless, this outer membrane protein is not a promising vaccine candidate against leptospirosis.
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Costa, Joana Sequeira. "Nefrite intersticial crónica em bovinos : exame post mortem." Master's thesis, Universidade de Lisboa, Faculdade de Medicina Veterinária, 2021. http://hdl.handle.net/10400.5/21180.
Full textAbstract:
Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária<br>A Leptospirose é uma zoonose reemergente globalmente disseminada e de elevada relevância em todo o mundo. Particularmente em contextos ocupacionais, tem importância em trabalhos agrícolas ou profissões que impliquem contacto com animais que possam estar infetados, como explorações de bovinos ou matadouros. É responsável por perdas económicas em explorações de ruminantes, devido principalmente a alterações reprodutivas. O principal objetivo deste trabalho foi estudar a possível relação entre as lesões renais encontradas em bovinos que foram motivo de reprovação durante a inspeção post mortem, e as infeções por espécies patogénicas de Leptospira. Foram selecionados aleatoriamente entre março e julho de 2018, num matadouro da DAV de Setúbal, 40 rins com lesões de nefrite intersticial crónica, bem como 10 rins sem lesões, que constituíam o grupo de controlo. Os bovinos a partir dos quais se recolheram os rins pertenciam a 26 explorações diferentes da Região de Setúbal. Recolheram-se amostras desses rins, submetendo-as a análise histopatológica e a PCR convencional para pesquisa de ADN de espécies patogénicas de Leptospira. Para isso foi feita a amplificação do gene lipL32. Como controlo positivo foi utilizado ADN de Leptospira interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagiae sorovar Copenhageni, e como controlo interno o gene β-actina de bovino. Os resultados histopatológicos confirmaram a presença de nefrite intersticial nos rins reprovados. Dos 40 rins recolhidos com lesões, 10 revelaram-se positivos, pertencendo os bovinos positivos a apenas 2 explorações. É esperado que este trabalho seja mais um contributo para o estudo epidemiológico da Leptospirose bovina em Portugal.<br>ABSTRACT - Leptospirosis is a reemerging zoonosis that is globally disseminated and highly relevant worldwide. Particularly in occupational contexts, it is important in agricultural work, or professions that involve contact with animals that may be infected, such as cattle farms or in slaughterhouses. It is responsible for economic losses in ruminant farms, mainly due to reproductive changes. The main objective of this work was to study the possible relationship between kidney lesions found in cattle which were condemned during post-mortem inspection, and infections by pathogenic Leptospira species. Between March and July 2018, at a slaughterhouse in Setúbal, 40 kidneys with lesions compatible with chronic interstitial nephritis were selected at random, as well as 10 kidneys without lesions, which constituted the control group. The cattle from which the kidneys were collected belonged to 26 different farms in the Setúbal Region. Samples of these kidneys were collected and submitted to histopathological analysis and conventional PCR for DNA screening for pathogenic Leptospira species. lipL32 gene was amplified. DNA from Leptospira interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae serovar Copenhageni was used as positive control, and the bovine β-actin gene was used as internal control. Histopathological results confirmed the presence of interstitial nephritis in the condemned kidneys. From the 40 kidneys collected with lesions, 10 were positive, with positive cattle belonging to only 2 herds. This work is expected to be one more contribute for the epidemiological study of bovine Leptospirosis in Portugal.<br>N/A
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Santos, Luciane Amorim. "Leptospira interrogans sorovar Copenhageni e Icterohaemorrhagiae: relação evolutiva, diferenças genéticas e associação com desfecho clínico." reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, 2015. https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/12085.
Full textAbstract:
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-10-26T14:15:02Z
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Luciane Amorim Santos. Leptospira... 2015Tese.pdf: 2475098 bytes, checksum: 1cc01b7226dc488ff72bd8c3d6df2c00 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-10-26T14:16:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1
Luciane Amorim Santos. Leptospira... 2015Tese.pdf: 2475098 bytes, checksum: 1cc01b7226dc488ff72bd8c3d6df2c00 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2015-10-26T14:16:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Luciane Amorim Santos. Leptospira... 2015Tese.pdf: 2475098 bytes, checksum: 1cc01b7226dc488ff72bd8c3d6df2c00 (MD5)
Previous issue date: 2015<br>Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil<br>A leptospirose é a zoonose mais disseminada mundialmente por infectar diversas espécies
diferentes de animais mamíferos. Apresenta 22 espécies identificadas, sendo dez patogênicas,
cinco intermediarias e sete saprofiticas, além de apresentar mais de 250 sorovares diferentes. Em
Salvador, Leptospira interrogans sorovar Copenhageni é a causadora da epidemia urbana na
cidade e apresenta ratos como seu hospedeiro reservatório. As formas clínicas da leptospirose
podem variar de assintomática a formas graves. As manifestações clínicas mais graves envolve o
desenvolvimento da síndrome Hemorrágica pulmonar severa, e óbito do paciente. Estudos para
entender as diferenças genéticas entre as diferentes espécies e sorovares é de extrema importância
para identificar fatores de virulência da bactéria, genes que possam está associado aos diferentes
formas clinicas, e sua capacidade de se adaptar aos diferentes ambientes. Neste trabalho foi
estudado o genoma de dois importantes serovares de L. interrogans, o sorovar Copenhageni e o
serovar Icterohaemorrhagiae, e suas diferenças genéticas e associação com dados clínicos e
epidemiológicos. Um total de 141 isolados tiveram seus genomas sequenciados. Foi construindo
e validado um pipeline para a o mapeamento e construção dos genomas e a identificação de SNPs
e Indels. Os resultados encontrados demostraram um alta similaridade entre os isolados dos dois
serovares, de diferentes regiões geográficas e isolados em anos diferentes. As sequências deste
estudo se mostram conservadas ao longo do tempo sem apresentar nenhuma mutação associada
as diferentes forma clínicas da doença, indicando que outros fatores, tais como os do hospedeiro,
podem estar envolvidos na diversidade de sintomatologia. Na comparação do genoma dos
isolados de L. interrogans, sorovar Copenhageni e sorovar Icterohaemorrhagiae foi identificado
apenas uma mutação que as difere geneticamente. Essa mutação está presente no gene LIC12008
que produz uma proteína hipotética, e que a sua avaliação in silico demostrou estar envolvida na
síntese de LPS, justificando assim as diferenças encontradas no teste serológico. Além disto,
também foram avaliadas as diferenças entre 20 das 22 espécies de Leptospira, para identificar
possíveis fatores de virulência e genes que possam estar envolvidos na patogênese e adaptação da
bactéria ao ambiente. Estudos de fatores genéticos da Leptospira pode auxiliar ao manejo da
doença, com uma melhor assistência e terapia para os pacientes, desenvolvimento de vacinas e
diagnostico desta doença negligenciada.<br>There are 22 different species of Leptospira spp. in which 10 are pathogenic, 5 intermediate and
7 saprophytic species. In Salvador the Leptospira interrogans sorovar Copenhageni is the main
serovar detected, responsible for the urban epidemics, and has rats as their main host. The clinical
manifestations of leptospirosis can vary from asymptomatic form to severe disease like
pulmonary hemorrhagic syndrome, and death. Studies to understand de genetic differences
among the species and serovars are of great importance to identify virulence factors, genes that
could be related to the different clinical manifestations and its capacity to adapt in different
environments. Here, the genome of two epidemiologically important serovar of the L.
interrogans, the serovar Copenhageni and serovar Icterohaemorrhagiae, and their genetic
differences and the association of these differences with epidemiological and clinical data were
studied. A total of 141 strains were genome sequenced. A pipeline for the genome mapping and
variant call were constructed and validated. The results showed a high similarity among the
strains from both serovars from different geographic locations and year of isolation. The
sequences from this study showed to be very conserved, not presenting any mutation associated
with the different clinical outcome, indicating that other factors, like host factors, could be related
to the diversity of clinical outcome. Only one genetic mutation was detected in the genome
comparison of the strains belonging to the L. interrogans sorovar Copenhageni and sorovar
Icterohaemorrhagiae. This mutation was found in the gene LIC12008 that produce a hypothetical
protein, in which its in silico analysis reviled that this protein could be related to the LPS
synthesis, justifying the serological test differences between the two serovar. Besides that, the
differences between 20 of the 22 species of Leptospira identified were evaluated to detect
possibly virulence factors and genes that could be involved in the pathogenesis and adaptation.
Studies of the Leptospira virulence factors can give support to the disease management, giving a
better assistance and treatment to the patients and developing vaccines and better diagnostic for
the neglected disease
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Pearce, Jacqueline Winona. "Detection of Leptospira interrogans in fixed equine eyes affected with end-stage equine recurrent uveitis." Diss., Columbia, Mo. : University of Missouri-Columbia, 2007. http://hdl.handle.net/10355/4925.
Full textAbstract:
Thesis (M.S.)--University of Missouri-Columbia, 2007.<br>"May 2007" The entire dissertation/thesis text is included in the research.pdf file; the official abstract appears in the short.pdf file (which also appears in the research.pdf); a non-technical general description, or public abstract, appears in the public.pdf file. Includes bibliographical references.
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Rosa, Adriana Helena. "Mastite : síndrome da queda do leite e infecção por Leptospira interrogans em ovelhas da raça Santa Inês." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2010. http://repositorio.unb.br/handle/10482/6040.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010.<br>Submitted by Suelen Silva dos Santos (suelenunb@yahoo.com.br) on 2010-11-25T16:02:47Z
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2010_AdrianaHelenaRosa.pdf: 1765942 bytes, checksum: 3be8da3748a58a4c0e116ff2bcde41c2 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-12-01T22:46:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2010_AdrianaHelenaRosa.pdf: 1765942 bytes, checksum: 3be8da3748a58a4c0e116ff2bcde41c2 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2010-12-01T22:46:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2010_AdrianaHelenaRosa.pdf: 1765942 bytes, checksum: 3be8da3748a58a4c0e116ff2bcde41c2 (MD5)
Previous issue date: 2010-03<br>A ovinocultura tem crescido muito no Distrito Federal, bem como em toda a região Centro Oeste e os rebanhos têm evoluído principalmente em relação à composição genética e nesse sentido, a raça Santa Inês tem se destacado por apresentar alto potencial para produção de carne e adaptar-se com facilidade aos climas quentes, além de ser bastante prolífera. Porém, ainda observa-se uma imensa lacuna no que se refere às pesquisas sobre sanidade. A mastite em ovinos é de grande importância em rebanhos destinados à produção de leite, contudo, recentemente, o interesse por mastite tem aumentado também em relação a rebanhos destinados a produção de carne, pois a doença pode levar à redução no ganho de peso dos cordeiros e aumento na mortalidade. A síndrome da queda do leite consiste em uma redução brusca na produção leiteira em vacas, não acompanhada de quaisquer sinais clínicos de enfermidade, especialmente mastite, ou privação de alimento ou água. Estresse calórico, particularmente a combinação de calor e umidade, e leptospirose devido à Leptospira Hardjo, estão entre as causas mais comuns. Esta síndrome também ocorre em ovelhas, mas pouco tem sido descrito nessa espécie. Neste estudo, foram analisadas todas as ovelhas da raça Santa Inês de 12 rebanhos do Distrito Federal, totalizando 1000 animais. Deste total, 98 animais apresentaram sinais de mastite clínica (9,8%), sendo uma ocorrência alta quando comparada à encontrada por outros autores em outros países. Após sorologia, nenhuma relação entre animais soroposivos para Leptospira spp. e presença de mastite clínica e síndrome da queda do leite foi encontrada. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>The sheep industry has grown significantly in the Distrito Federal, as well as throughout the Midwest region. The genetic composition of flocks has evolved and the Santa Ines breed has increased in use due to high perceived potential for meat production, and adaptation to hot climates, as well as being very prolific. There is still a lack of sanity information issues. Ovine mastitis is of great importance to dairy flocks, although, recently the interest in mastitis has grown in meat-producing sheep flocks, as the disease can lead to weight loss in lambs and increase mortality. The milk drop syndrome consists of a sudden reduction in milk yield, with no clinical signs of disease, specially mastitis, or food and water deprivation. Heat stress, particularly the combination of heat and humidity, and leptospirosis due to Leptospira Hardjo are among the most common causes. This syndrome also occurs in ewes, but there are few studies in this species. In this study, were examined all ewes from 12 Santa Ines flocks in the Distrito Federal, total of 1000 animals. From these, 98 animals presented signs of clinical mastitis (9.8%), a high occurrence when compared to other authors in other countries. After serology, no relation was found between Leptospira spp. seropositives animals and the presence of clinical mastitis and milk drop syndrome.
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Brich, Michelle. "Infecção Experimental com Leptospira interrogans sorovariedade Canicola, relacionada à pesquisa de alterações oculares em cães /." Jaboticabal : [s.n.], 2010. http://hdl.handle.net/11449/94639.
Full textAbstract:
Resumo: A uveíte em mamíferos tem sido relacionada à infecção por Leptospira spp., e, embora ocorra com maior frequência na espécie equina, já foi observada e relatada em outras espécies mamíferas, inclusive na humana. O objetivo deste trabalho foi investigar a relação entre a infecção por leptospiras e a ocorrência de alterações oculares em cães. Para a obtenção dos dados foram utilizados 32 cães, em idade reprodutiva, recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses do Município de São José do Rio Preto, que apresentaram reação negativa, em duas provas de soroaglutinação microscópica (SAM) no intervalo de sete dias. Dos 32 cães, 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovariedade Canicola e 12 formaram o grupo controle. Com a finalidade de avaliar as possíveis alterações do globo ocular post mortem, oito cães (cinco inoculados e três controles) foram sacrificados nos dias: sete, 15, 30 e 45 após o dia da inoculação. Amostras de humor aquoso, de um dos olhos de cada animal, foram retiradas para realização de PCR e SAM; o outro globo ocular foi retirado para realização de exame histopatológico e para a técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero, três, cinco, sete, 10 e após, a cada cinco dias, inclusive no dia do sacrifício, foram realizadas avaliações do estado físico do animal, do globo ocular e realizadas colheitas de sangue. O soro sanguíneo foi submetido à SAM para estabelecer os títulos obtidos em cada fase da infecção. Embora todos os animais tenham apresentado títulos sorológicos, indicando o sucesso da infecção, nenhum dos testes de detecção resultou positivo em até 45 dias de observação; no exame clínico apenas três animais apresentaram alterações perceptíveis: dois apresentavam irritação ocular, com hiperemia da esclera e um animal apresentava lacrimejamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abstract: Uveitis in mammals has been related to Leptospira spp. And although it occurs more frequently in the horse has already been observed and reported in other mammalian species, including the human. The aim of this study was to investigate the relationship between leptospira infection and the occurrence of ocular changes in dogs. To obtain the data were used 32 dogs in the reproductive age, collected by the Center for Zoonosis Control in São José do Rio Preto, which showed negative reaction in both tests of microscopic agglutination test (MAT) within seven days. Of the 32 dogs, 20 were inoculated with a pathogenic strain of Leptospira interrogans sorovar Canicola and 12 formed the control group. With the aim of assessing possible changes of the eye post mortem, eight dogs (five inoculated and three controls) were sacrificed on days: seven, 15, 30 and 45 days after inoculation. Samples of aqueous humor of one eye of each animal were removed for PCR, and MAT, and the other eye was removed for histological examination and the staining technique Levaditi. On days zero, three, five, seven, 10 and, thereafter, every five days, including the day of sacrifice, were assessed the physical condition of the animal, the eyeball and blood samples. The serum was subjected to SAM to establish the qualifications obtained at each stage of infection. Although all animals have serologic evidence indicating the success of infection, no detection tests resulted positive in up to 45 days of observation and by clinical examination only three animals showed noticeable changes: two had eye irritation with redness of the sclera and one animal showed tearing. We conclude that 45 days of infection with Leptospira interrogans sorovar Canicola are not enough to cause serious damage to the ocular system of dogs<br>Orientador: Raul José Silva Gírio<br>Coorientador: Fernanda Senter Magajevski<br>Banca: Luis Antonio Mathias<br>Banca: Heloisa Cristina da Silva<br>Mestre
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Soares, Luciane Marieta. "O uso da talidomida como terapia adjuvante na leptospirose experimental." reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, 2013. https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/7524.
Full textAbstract:
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-04-22T16:33:20Z
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Luciane Marieta Soares O uso da talidomida...2013.pdf: 1032465 bytes, checksum: 705c1f8374aee3a4f8a1b0f537cd33f6 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2014-04-22T16:33:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Luciane Marieta Soares O uso da talidomida...2013.pdf: 1032465 bytes, checksum: 705c1f8374aee3a4f8a1b0f537cd33f6 (MD5)
Previous issue date: 2013<br>Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil<br>A leptospirose é uma zoonose de importância global, causada por leptospiras patogênicas. Seu tratamento é limitado quando iniciado após quatro dias do surgimento de sintomas, portanto, novas terapias adjuvantes são necessárias. Objetivo. Testar a droga imunomoduladora talidomida como terapia adjuvante à ampicilina no modelo de tratamento tardio da leptospirose experimental em hamsters. Métodos. 60 hamsters foram infectados via intraperitoneal por Leptospirainterrogans cepa L1-130, e foram separados em grupos: nenhum tratamento (NONE), talidomida (TAL), ampicilina (AMP) e ambos (AMP-TAL). A talidomida foi administrada via sonda orogástrica na dosagem de 50 mg/Kg diluída em óleo de linhaça (2ml/Kg) por três dias. Já a ampicilina por via intramuscular: 100mg/Kg/bid por seis dias. Foram realizados dois desenhos experimentais. Experimento 1: o tratamento foi iniciado 48h após o início dos sinais clínicos da doença. Experimento 2: o tratamento foi iniciado imediatamente após a detecção do primeiro óbito entre os animais infectados. Resultados. Experimento1: todos os hamsters dos grupos AMP e AMP-TAL sobreviveram (n=8) enquanto todos os animais dos grupos NONE (n=6) e TAL (n=8) morreram. Os hamsters dos grupos AMP e AMP-TAL não mostraram lesões renais, pulmonares ou hepáticas. Baixa carga de leptospiras foi detectada nos órgãos alvo. Experimento 2: o desfecho letal foi observado em 6/6 hamsters no grupo NONE, 8/8 do grupo TAL, 6/8 do AMP e 6/8 do AMP-TAL. A talidomida usada como adjuvante não prolongou a sobrevida dos animais tratados com ampicilina. No entanto, o grupo TAL apresentou sobrevida mais longa que o grupo que não recebeu tratamento algum. Os animais tratados apresentaram maior frequência de destrabeculação de hepatócitos. Conclusão: Esse estudo abre novas perspectivas no desenvolvimento de um tratamento tardio na leptospirose, contudo observou-se que a talidomida utilizada como terapia adjuvante não teve impacto na sobrevida de hamsters como modelo de início tardio de terapia antimicrobiana.<br>Leptospirosis is a zoonosis of global importance, caused by pathogenic leptospira. His treatment is limited when started after four days of onset of symptoms, increasing the risk of morbidity and mortality, so new adjuvant therapies are needed.Objectives.To test the immunomodulatory drug, thalidomide, as an adjuvant therapy to antibiotics in experimental leptospirosis. Methods. Hamsters were infected by Leptospirainterrogans strain L1-130, and groups were assigned based on no treatment (NONE), thalidomide only (TAL), ampicillin only (AMP) or both (AMP-TAL). Thalidomide was administered via a gastric tube: 50 mg/kg in linseed oil and 2 ml/kg for three days. Ampicillin was administered intramuscularly at the rate of 100 mg/kg/bid for six days. Treatment was started two days after the onset of symptoms (experiment 1) and immediately after detection of the first death (experiment 2). Results. Experiment 1: all hamsters from the groups AMP and AMP-TAL survived (n=8), while all hamsters from groups NONE (n=6) and TAL (n=8) died. The AMP and the AMP-TAL groups showed no renal, lung or liver pathology and absent or very low leptospiral burden in target organs. Experiment 2: lethal outcome was observed in 6/6 hamsters in the NONE group, 8/8 in the TAL group, and 6/8 in the AMP group and the AMP-TAL group. Thalidomide showed no survival benefit when compared to hamsters treated with ampicillin alone. The TAL group, however, had a longer interval between infection and death when compared to the NONE group. Treated animals had a higher frequency of liver plate disarray. The TAL, AMP and AMP-TAL groups had very low tissue leptospiral counts. Conclusion: This study may open new perspectives to assist the development of a delayed treatment in leptospirosis, however it was observed that thalidomide used as adjuvant therapy had no impact on the survival of hamsters as late onset of antimicrobial therapy model.
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Cunha, Carlos Eduardo Pouey da. "Caracterização fenotípica e sequenciamento do genoma de Leptospira kirschneri isolada de caso clínico humano." Universidade Federal de Pelotas, 2014. http://repositorio.ufpel.edu.br:8080/handle/prefix/3729.
Full textAbstract:
Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-10-17T12:13:57Z
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Previous issue date: 2014-10-24<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES<br>A leptospirose é uma zoonose negligenciada difundida mundialmente com mais de 800.000 casos em humanos por ano. A doença é causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, classificadas em 10 espécies e mais de 260 sorovares, agrupados em mais de 30 sorogrupos. As principais espécies responsáveis por casos de leptospirose humana são L. interrogans, L. borgpetersenii e L. kirschneri. No Brasil, onde os climas tropical e subtropical favorecem a disseminação da doença, a maioria dos casos é causada por L. interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagiae. Apesar de Pelotas apresentar um clima temperado, a taxa de infecções por Leptospira (10 casos por 100 mil habitantes) é superior a regiões com climas tropical e subtropical (3.5 casos por 100 mil habitantes). Trabalhos de vigilância em leptospirose desempenham papel fundamental no combate à doença identificado espécies e sorovares endêmicos a determinada região. Este trabalho descreve o isolamento e caracterização de uma cepa de Leptospira de uma paciente da zona rural de Pelotas que relatou contato com coleções hídricas, bovinos, caninos e roedores, e apresentou sintomas clássicos da fase aguda da doença. O isolado foi caracterizado como L. kirschneri sorogrupo Pomona sorovar Mozdok, conforme determinado por multilocus sequence typing (MLST). O genoma do isolado possui 3.398 sequencias codificadoras, 39 tRNAs, 1 região codificadora de rRNA e conteúdo G+C de 34,6%. O cromossomo I tem 3.738.643 pares de base, e o segundo, 335.634, totalizando 4,07 Mb. Imunofluorescência indireta mostrou a expressão dos fatores de virulência LipL32, LigA e LigB. O isolado foi capaz de causar danos severos aos tecidos renal, hepático e pulmonar, como revelado por histopatologia e a presença de leptospiras nesses tecidos confirmada pela técnica de imprint. Este é o primeiro relato de isolamento de L. kirschneri sorovar Mozdok de caso clínico humano no Hemisfério Sul, de acordo com a literatura disponível. Os resultados aqui apresentados são de grande importância epidemiológica, bem como para o desenvolvimento de novas vacinas e testes rápidos de diagnóstico.<br>Leptospirosis is a neglected zoonosis spread worldwide with more than 800,000 human cases each year. The disease is caused by pathogenic members of the genus Leptospira, which is classified in 10 species and more than 260 serovars, grouped in more than 30 serogroups. The main species associated with human cases of leptospirosis are L. interrogans, L. borgpetersenii and L. kirschneri. L. interrogans serogroup Icterohaemorrhagiae causes the majority of human leptospirosis cases in Brazil, where the tropical and subtropical climates favour the spread of the disease. Even though the climate in Pelotas is temperate, Leptospira infection rates (10 cases per 100 thousand inhabitants) are higher than other regions with tropical and subtropical climates (3.5 cases per 100 thousand inhabitants). Leptospirosis surveillance studies play a vital role against the disease through the identification of endemic species and sorovars to a given region. This work describes the characterization of a Leptospira strain isolated from an inhabitant of the rural area of Pelotas. The patient reported contact with water, cattle, dogs and rodents and presented classical symptomatology for leptospirosis. Multilocus sequence typing (MLST) determined the isolate to be a L. kirschneri serogroup Pomona serovar Mozdok. The genome of the isolate includes of 3,398 coding sequences, 39 tRNAs, 1 rRNA coding region and 34.6% G+C content. Chromosome I has 3,738,643 base pairs, and chromosome II has 335,634 base pairs, totalizing 4.07 Mb. Indirect immunofluorescence showed the expression of LigA and LigB virulence factors as well as the LipL32 protein. The isolate was capable of causing severe renal, hepatic and lung damage, as revealed by histopathological analysis and the presence of leptospiras in these tissues was confirmed by the imprint technique. This is the first report of isolation of L. kirschneri serovar Mozdok from a human patient in the Southern Hemisphere, according to the literature. Results presented herein are important for epidemiologic studies, as well as for the development of new vaccines and rapid diagnosis tests.
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Lima, Swiany Silveira. "Identificação de adesinas de Leptospira interrogans por shotgun phage display." Universidade de São Paulo, 2013. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-02052013-095417/.
Full textAbstract:
Em Leptospira interrogans algumas proteínas com capacidade de ligação aos componentes de matriz extracelular foram identificadas e, em sua maioria, são fatores de virulência. Phage display é considerada uma técnica poderosa na identificação de novos ligantes, inclusive de moléculas adesinas, importantes no primeiro estágio de infecção do hospedeiro. A técnica de shotgun phage display foi utilizada visando à obtenção de ligantes à células de mamíferos. Quatro bibliotecas, por inserção de fragmentos aleatórios obtidos por sonicação do DNA de L. interrogans nos fagomídeos pG8SAET (BBT1 e BBT2) e pG3DSS (BBT5 e BBT6), foram construídas. As bibliotecas BBT1 e BBT5 contém insertos maiores e as BBT2 e BBT6 contém insertos menores, com tamanhos médios de 1500 pb e 350 pb, respectivamente. Após ensaio de panning da BBT5 contra células de mamíferos e soro fetal bovino, as sequências de clones selecionados foram analisadas quanto a orientação correta e se a fusão estava em fase com a proteína pIII. As proteínas codificadas pelos genes LIC11719, LIC10769, LIC13143 e LIC12976 foram selecionadas com estas características. Os genes que codificam a LIC12976, LIC10768, LIC10769 e LIC13418, tiveram sua conservação avaliada em diferentes sorovares da espécie patogênica L. interrogans e no sorovar Patoc da espécie de vida livre L. biflexa. As proteínas LIC12976 (selecionada pela técnica de phage display) e LIC13418 (selecionada por ferramentas de bioinformática) tiveram suas sequências amplificadas por PCR, clonadas em pGEM T easy, subclonadas em vetor de expressão pAE e expressas na fração celular correspondente ao corpúsculo de inclusão em E. coli BL21 (DE3) Star pLysS e E. coli BL21 SI, respectivamente. Após renaturação e purificação destas proteínas por cromatografia de afinidade a metal bivalente, um grupo de cinco animais BALB/c fêmeas foi imunizado. Ambas as proteínas se mostraram imunogênicas com títulos dos soros policlonais 1:256000 e 1:512000, respectivamente. Em ensaio de Western Blot os soros foram específicos no reconhecimento das proteínas recombinantes e as proteínas nativas foram verificadas em extratos de sorovares patogênicos de L. interrogans. Em ensaios de adesão, as proteínas recombinantes aderiram às células A31, LLC-PK1 e Vero e especificamente à laminina. Em ensaios de interferência em células usando laminina houve um aumento da adesão das proteínas recombinantes, o que pode ser explicado pela ligação da laminina às células e uma maior ligação das LICs estudadas. Em ensaio de localização celular usando imunofluorescência e microscopia eletrônica, foi observado que ambas as proteínas se encontram na superfície da L. interrogans. No experimento de desafio animal, a LIC12976 e a LIC13418 não se mostraram protetoras. Este trabalho contribuiu para a identificação das novas adesinas LIC13418 e LIC12976 que podem participar da virulência de leptospiras patogênicas envolvendo a primeira etapa da infecção na interação patógeno-hospedeiro<br>In Leptospira interrogans, proteins capable to bind to extracellular matrix components have been identified and most of them are important virulence factors. Phage display is a powerful technique to identify new ligands, including adhesin molecules that are important in the first stage of host infection. A shotgun phage display technique was used in order to obtain cell ligands. Four libraries were constructed by inserting random fragments obtained by sonication of L. interrogans DNA into phagemids pG8SAET (BBT1 and BBT2) and pG3DSS (BBT5 and BBT6). The libraries BBT1 and BBT5 contain larger inserts and BBT2 and BBT6 contain smaller inserts, with 1500 bp and 350 bp average sizes, respectively. After panning of BBT5 against mammalian cells and bovine fetal serum, the sequences of selected clones were analyzed for correct orientation and fusion with pIII protein. The proteins encoded by genes LIC11719, LIC10769, LIC13143 and LIC12976 were selected. The genes LIC12976, LIC10768, LIC10769 and LIC13418 were evaluated for their conservation in different pathogenic serovars of L. interrogans and free-living L. biflexa serovar Patoc. Proteins LIC12976 (selected by phage display technique) and also LIC13418 that was selected by bioinformatic tools, were amplified by PCR, cloned into pGEM T easy, subcloned into expression vector pAE and expressed in cellular fraction corresponding to the inclusion body in E. coli BL21 (DE3) Star pLysS and E. coli BL21 SI, respectively. After protein renaturation protocol and purification by affinity chromatography, a group of five BALB/c mice was immunized with the purified proteins. Both proteins were shown to be immunogenic with 1:256000 and 1:512000 polyclonal sera titers, respectively. In Western blot the sera were specific to recognize recombinant proteins and native proteins were detected in pathogenic L. interrogans serovars extracts. In binding assays, recombinant proteins bind to A31, LLC-PK1 and Vero cells and specifically to laminin. In interference cell assay using laminin there was an increase of recombinant protein bindings, which can be explained by the laminin binding to cells and further binding of the recombinant LICs. In cellular localization assay using immunofluorescence and electron microscopy, it was observed that both are surface proteins of L. interrogans. In the animal challenge, the LIC12976 and LIC13418 were not protective. As a whole, this work contributed to the identification of LIC12976 and LIC13418 as new adhesins and they can participate in the virulence of pathogenic Leptospira in the first stage of host pathogen interaction.
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Miragaia, Lídia dos Santos. "Interação de proteínas de membrana de Leptospira com vitronectina humana." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-09032017-155237/.
Full textAbstract:
A leptospirose é uma zoonose causada por leptospiras patogênicas que possuem estratégias para driblar a ação do sistema complemento ao interagir com diversos reguladores negativos, como a vitronectina. Neste projeto, avaliou-se a interação de vitronectina com três proteínas de membrana de Leptospira: LigA, LigB e LcpA. Verificou-se que essas interações ocorrem nas porções C-terminais das proteínas e nos domínios de ligação com heparina da vitronectina. Essas proteínas também se ligam a C9 e são capazes de impedir a formação do poro in vitro e a formação do MAC em um ensaio clássico de hemólise. Essas proteínas de Leptospira interagem com diversos reguladores negativos do sistema complemento. Ensaios de competição demonstram que estes reguladores interagem simultaneamente com as proteínas através de sítios distintos. A caracterização funcional de proteínas e a descoberta de novos mecanismos utilizados por esse patógeno para sobreviver no hospedeiro podem auxiliar nossa compreensão no que diz respeito a aspectos relacionados à clínica e à prevenção da leptospirose.<br>Leptospirosis is a zoonotic disease caused by pathogenic Leptospira that have strategies to escape the action of the complement system interacting with several negative regulators, such as vitronectin. In this project, we evaluated the interaction of vitronectin with three Leptospira membrane proteins: LigA, LigB and LcpA. It has been found that such interactions occur at the C-terminal portions of these proteins and the heparin binding domain of vitronectin. These proteins also bind to C9 and are capable of preventing the formation of the pore in vitro and the formation of MAC in a classical test of hemolysis. These proteins interact with various Leptospira negative regulators of the complement system. Competition assays demonstrated that both interact with these regulatory proteins through distinct sites. The functional characterization of these proteins and the discovery of new mechanisms used by this pathogen to survive in the host may help our understanding with regard to clinical aspects and prevention of leptospirosis.
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Oliveira, Rosane de. "Caracterização de lipoproteínas de Leptospira interrogans expressas em Escherichia coli." Universidade de São Paulo, 2013. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-14052014-160155/.
Full textAbstract:
Leptospirose é uma zoonose altamente disseminada causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira. Nos centros urbanos, os roedores são os mais importantes reservatórios da doença. Desde que o controle dos roedores e medidas sanitárias não são facilmente implementadas, o desenvolvimento de uma vacina é necessário para o combate da leptospirose. Desta maneira, os genes LIC10258, LIC12880 e LIC12238 foram selecionados por análises de bioinformática e amplificados do DNA genômico de L. interrogans por metodologia de PCR. A avaliação da capacidade de adesão das proteínas recombinantes com componentes da matriz extracelular mostrou que rLIC10258 interage com a laminina e fibronectina plasmática. Todas as proteínas recombinantes foram capazes de ligar ao plasminogênio e gerar plasmina, mostrando atividade proteolítica específica, enquanto que apenas rLIC12238 foi capaz de ligar ao fibrinogênio. Os resultados obtidos sugerem que estas proteínas podem desempenhar algum papel na patogênese da doença.<br>Leptospirosis is worldwide zoonosis caused by pathogenic spirochaetes of the genus Leptospira. In the urban settings, rodents are the most important reservoirs. Since the control of the rodents and sanitation measures are not easily implemented, the development of vaccine is necessary to combat the leptospirosis. Thus, the genes sequences of LIC10258, LIC12880 and LIC12238 were selected by bioinformatics analysis and amplified by PCR methodology from genomic DNA of L. interrogans. Evaluation of the adhesion capacity of the recombinant proteins with extracellular matrix components showed that rLIC10258 interacts to laminin and plasma fibronectin. All recombinant proteins were capable to bind plasminogen and to generate plasmin, showing specific proteolytic activity, whereas that only rLIC12238 was capable to bind fibrinogen. The results obtained suggest that these proteins may play a role in leptospiral pathogenesis.
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Fraga, Tatiana Rodrigues. "Estudo de potencias antígenos vacinais de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni." Universidade de São Paulo, 2009. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-17082009-092435/.
Full textAbstract:
A utilização de vacinas destaca-se como medida preventiva contra a leptospirose. Sete potenciais antígenos vacinais de L. interrogans sorovar Copenhageni foram estudados: LipL32, LipL23 e LipL22 (lipoproteínas), SphH e Sph4 (hemolisinas), AnkB (domínio anquirina) e OmpA76 (domínio OmpA). Os genes foram amplificados, clonados e as proteínas expressas em E.coli e Salmonella enterica para ensaios de imunização e desafio. As sete proteínas foram purificadas. No primeiro desafio, hamsters foram imunizados com a salmonela recombinante para expressar a OmpA76 e desafiados com sorovar Pomona. Sobreviveu 30% do grupo salmonela recombinante, 100% da vacina comercial e 10% dos controles. No segundo desafio, hamsters foram imunizados com pool das sete proteínas e desafiados com sorovar Copenhageni. Sobreviveram 30% do grupo pool de proteínas, 90% da vacina comercial, 100% da bacterina e 0% do grupo PBS. A LipL32, OmpA76, LipL23 e LipL22 reagiram com soros de hamsters infectados. Extratos de leptospiras foram reconhecidos pelos soros específicos contra LipL32, OmpA76 e LipL23.<br>Preventive measures as vaccines are the best strategies to combat leptospirosis. Seven potential vaccine candidates from L. iInterrogans serovar Copenhageni were studied: LipL32, LipL23 and LipL22 (lipoproteins), SphH e Sph4 (hemolysins), AnkB (ankyrin domain) and OmpA76 (OmpA domain). The genes were amplified, cloned and the proteins expressed in E. Coli e Salmonella enteric for challenge assays. In the first assay, hamsters were immunized with the recombinant salmonella to express OmpA76 in vivo, and challenged with serovar Pomona. The survival was 30% of the recombinant salmonella group, 100% of the commercial vaccine and 10% of the control groups. In the second assay, hamsters were immunized with a pool of the purified proteins and challenged with serovar Copenhageni. The survival was 30% of the group pool of proteins, 90% of the commercial vaccine, 100% of the bacterin and 0% of the PBS group. LipL32, OmpA76, LipL23 and LipL22 reacted with hamsters infected sera. Leptospiral extracts were recognized by specific sera against LipL32, OmpA76 and LipL23.
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Fonseca, Luciane Schons da. "Caracterization of the SOS response in Leptospira interrogans sorovar Copenhageni." Universidade de São Paulo, 2015. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-25032015-110306/.
Full textAbstract:
Leptospira is a basal genus in an ancient group of bacteria, the spirochetes. The pathogenic species are responsible for leptospirosis, a disease with worldwide distribution and of public health importance in developed tropical countries. L. interrogans serovar Copenhageni is the agent for the majority of human leptospirosis in Brazil. In this work, we used a great variety of experimental approaches to characterize the SOS system in this serovar, to identify its impact in general DNA damage response, as well as to assess the DNA repair toolbox owned by pathogenic and saprophytic leptospires. We identified an additional repressor LexA, acquired by lateral gene transfer, exclusively in serovar Copenhageni. We also observed that UV-C irradiation led to massive death of cells and blockage of cell division in the survivors. Both repressors were active and we identified the sequences responsible for binding to promoters. However, the LexA1 SOS box was redefined after a de novo motif search on LexA1 ChIP-seq enriched sequences. This regulator was able to bind to at least 25 loci in the genome. DNA damage also caused a massive rearrangement of metabolism: increase in expression was observed in transposon and prophage genes, in addition to DNA repair pathways and mutagenesis inducers; on the other hand, motility, general metabolism and almost all virulence genes were repressed. Two induced prophages provided several proteins with useful functions. We also assessed the DNA repair-related genes presented by the three species of Leptospira: the saprophytic L. biflexa, the facultative pathogen L. interrogans and the obligatory pathogen L. borgpetersenii. There are more diversity and redundancy of repair genes in L. interrogans in comparison with the other species. Lateral gene transfer seems to be an important supplier of DNA repair functions. In addition, leptospires share characteristics of both Gram-positives and Gram-negatives bacteria. Representative genes from several different pathways were induced during infection of susceptible mice kidneys, suggesting DNA repair genes are active while causing disease. All these data suggest mobile genetic elements are the major forces in leptospiral evolution. Moreover, during DNA damage response, several SOS-dependent and independent mechanisms are employed to decrease cell growth and virulence in favor of controlled induction of mechanisms involved in genetic variability.<br>Leptospira é um gênero basal em um grupo já considerado um dos mais ancestrais, as espiroquetas. As espécies patogênicas são responsáveis pela leptospirose, uma doença presente em todo o mundo e de principal importância em países tropicais em desenvolvimento. L. interrogans sorovar Copenhageni é o agente da maior parte dos casos no Brasil. Nesse trabalho, utilizamos diversas abordagens experimentais para caracterizar o sistema SOS nesse sorovar, identificar seu impacto na resposta geral a danos no DNA, assim como avaliar as funções de reparo de DNA disponíveis em leptospiras patogênicas e saprofíticas. Identificamos um repressor LexA adicional, adquirido por transferência horizontal e exclusivo do sorovar Copenhageni. Observamos também que irradiação por UV-C causou significativa morte celular e bloqueio da divisão celular dos sobreviventes. Ambos os repressores são ativos e identificamos as sequências que utilizam para se ligar aos promotores dos genes regulados. Entretanto, o SOS box de LexA1 foi redefinido após uma busca de novo por motivos enriquecidos nas sequências recuperadas por ChIP-seq. Esse regulador ligou-se ao menos a 25 locais do genoma. A maioria desses alvos teve aumento de expressão após UV-C. Danos no DNA também causaram um importante rearranjo metabólico: houve aumento de expressão em transposons e profagos, além de indutores de mutagênese e vias de reparo; por outro lado, mobilidade, crescimento celular e quase todos os fatores de virulência foram reprimidos. Dois profagos induzidos durante essa resposta, possivelmente proporcionam algumas proteínas de funções importantes. Nós também avaliamos a presença de genes envolvidos no reparo de DNA em três espécies de leptospira: L. biflexa, L. interrogans e L. borgpetersenii. L. interrogans é a espécie com maior diversidade e redundância de genes de reparo. Além disso, transferência horizontal parece ser um importante fornecedor de funções de reparo nesse gênero. Leptospiras também apresentam genes característicos tanto de bactérias Gram-positivas quanto Gram-negativas. Genes representando diferentes vias de reparo foram induzidos durante infecção em modelo animal, sugerindo que essas vias estão ativas no curso da doença. Todos esses dados, em conjunto, sugerem que elementos genéticos móveis são de extrema importância na evolução do gênero e das vias de reparo. Assim, durante a resposta a danos no DNA, diversos mecanismos dependentes e independentes de SOS são empregados para frear o crescimento celular e virulência em favor da indução controlada de mecanismos para aumentar variabilidade genética.
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Siuce, Moreno Juan José. "Identificación de serogrupos patogenos de leptospira spp. en caninos domésticos." Master's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2014. https://hdl.handle.net/20.500.12672/3999.
Full textAbstract:
La leptospirosis es una zoonosis bacteriana de gran impacto en la salud pública a nivel mundial. Los perros y otros animales, pueden infectarse, sufrir la enfermedad, constituyendo así, un factor importante en la diseminación de la bacteria hacia humanos. La infección es causada por cualquiera de los 250 serovares patógenos, de los 25 serogrupos de Leptospira spp. El estudio tuvo como objetivo identificar a los serogrupos de Leptospira spp. presentes en caninos domésticos. Para ello, se obtuvieron 305 muestras de suero sanguíneo, de perros con diagnóstico clínico presuntivo de Leptospirosis, mayores de 6 meses de edad, no vacunados o con un tiempo mayor a seis meses desde la última vacunación contra Leptospirosis. Las muestras fueron remitidas por Médicos Veterinarios al Laboratorio de Microbiología – Sección Bacteriología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, provenientes de 31 distritos de Lima Metropolitana. Se realizó la Prueba de Microaglutinación (MAT), estableciéndose títulos ≥1/100 de serorreactividad como seropositivos, utilizando cepas de referencia de los 25 serogrupos, incluyendo al nuevo serogrupo Iquitos serovar varillal 10, aislado y reportado en casos humanos en Perú. Se detectaron 177 seropositivos (58.03%), de los cuales 31 (10.16%) fueron coaglutinaciones. Los serogrupos de mayor frecuencia fueron: Iquitos (46/305; 15.08%), Tarassovi (37/305; 12.13%), Canicola (37/305; 12.13%), Australis (14/305; 4.59%), Icterohaemorrhagiae (13/305; 4.26%), Pomona (12/305; 3.93%), Mini (10/305; 3.28%) y Ballum (8/305; 2.62%). No se identificó serorreactores a los serugrupos Bataviae, Celledoni, Hebdomadis, Lousiana, Panama, Ranarum, Sarmin.
Palabras claves: Perros, leptospirosis, leptospira, MAT, serovar, serogrupo<br>Leptospirosis is an important bacterial zoonosis on worldwide. Dogs and other animals can be infected and suffered the disease, they constituting an important role in the spread of the bacteria to humans. The infection is caused by any of the 250 pathogenic serovars, grouped in 25 serogroups of Leptospira spp. The aim of this study was to identify the serogroups of Leptospira spp. circulating in domestic dogs. For this, 305 serum samples were obtained from dogs, who had a presumptive clinical diagnosis of Leptospirosis, over 6 months old, unvaccinated or more than six months since the last vaccination against Leptospirosis, The samples were submitted by veterinarians to Microbiology Lab - Bacteriology, Faculty of Veterinary Medicine of Universidad Nacional Mayor de San Marcos, from 31 districts of Lima. The microagglutination test (MAT) was performed, establishing seroreactivity titles ≥ 1/100 as seropositive using reference strains of the 25 serogroups, including the new serogroup Iquitos, serovar Varillal, Var 10 strain, isolated and reported human outbreaks in Peru. 177 seropositive samples (58.03%) were detected, 31 of them (10.16%) were co-agglutinations. Seropositive reacted against 18 serogroups, the most frequent were: Iquitos (46/305; 15.08%), Tarassovi (37/305; 12.13%), Canicola (37/305; 12.13%), Australis (14/305; 4.59%), Icterohaemorrhagiae (13/305; 4.26%), Pomona (12/305; 3.93%), Mini (10/305; 3.28%) and Ballum (8/305; 2.62%). There were no seroreactors to serogroups: Bataviae, Celledoni, Hebdomadis, Lousiana, Panama, Ranarum, and Sarmin.
Keywords: Dog, leptospirosis, leptospira, MAT, serovar, serogroup.<br>Tesis
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Reis, Renato Barbosa. "Avaliação ambiental e do gradiente social nas infecções por leptospira." Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, 2014. https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/8394.
Full textAbstract:
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-09-18T13:20:38Z
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Previous issue date: 2014<br>Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil<br>Introdução: A leptospirose tem emergido como um importante problema de saúde pública no
mundo. Esta zoonose é responsável por epidemias anuais que acometem principalmente
indivíduos residentes em comunidades negligenciadas como as existentes em Salvador.
Poucos estudos longitudinais foram realizados com objetivo de identificar os fatores de risco
para infecção, fontes de transmissão e compreender a real dimensão da leptospirose nessas
comunidades. Objetivo: Identificar fatores de risco para infecção prévia e novas infecções
por leptospiras no contexto ambiental e socioeconômico em uma comunidade em Salvador
Bahia. Métodos: Estudos de soroprevalência e coorte foram conduzidos na comunidade de
Pau da Lima, com a realização de entrevistas domiciliares, avaliação peridomiciliar, coleta de
material biológico e análises espaciais para mensurar a associação epidemiológica entre
fatores de risco ambientais e as infecções. O teste de microaglutinação foi utilizado para
avaliar amostras sorológicas obtidas. Resultados: Residir próximo aos esgotos abertos e do
fundo do vale proximidade do domicílio a acúmulo de lixo e baixa renda foram associados
com as infecções. A incidência anual de infecções secundárias foi de 2,3 vezes maior que as
infecções primárias. Conclusão: O presente estudo sugere que medidas preventivas devem
focalizar nas deficiências de infraestrutura que servem como fontes de transmissão.
Intervenções mais efetivas precisam se concentrar especialmente nos adultos jovens e nos
grupos populacionais mais desfavorecidos nestas comunidades.<br>Introduction: Leptospirosis has emerged as an important public health problem in the world.
This zoonosis is responsible for annual epidemics affecting mainly individuals living in
disadvantaged communities as existing in Salvador. Few longitudinal studies have been
conducted in order to identify risk factors for infection, transmission sources and understand
the real dimension of leptospirosis in these communities. Objective: To identify risk factors
for early infection and new infections by Leptospira in environmental and socioeconomic
context in a community in Salvador Bahia. Methods: Seroprevalence and cohort studies were
conducted in Pau da Lima community, conducting home interviews peridomicilary review,
collection of biological material and spatial analysis to measure the epidemiological
association between environmental risk factors and infections. The agglutination test was used
to evaluate serum samples obtained. Results: Residing next to open sewers and the valley
floor near the homes of waste accumulation and low income were associated with infections.
The annual incidence of secondary infections was 2.3 times higher than primary infections.
Conclusion: This study suggests that preventive measures should focus on infrastructure
deficiencies that serve as sources of transmission. More effective interventions need to focus
especially on young adults and the most disadvantaged population groups in these
communities.
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Lafeta, Barbara Nobre. "Perfil protéico da membrana externa da Leptospira interrogans sorovariedade hardjoprajitno." Universidade Federal de Minas Gerais, 2006. http://hdl.handle.net/1843/MASA-7BAHX9.
Full textAbstract:
Outer membrane proteins (OMPs) were isolated from Leptospira interrogans serovar hardjoprajitno using Triton X114, precipitated with acetone, and separated by electrophoresis 2-D and SDS PAGE and resolved by western blot. Gel migration patterns were compared usingimage analysis of 35 gel-purified proteins. Among the proteins identified by this approach included the outer membrane lipoproteins ipL22/Loa22, LipL32, Omp34, LipL41 and LipL63. The SDS PAGE identified 14 protein profiles in total. The major leptospiral OMPs were 63 KDa (LipL63), 47 KDa (LipL48), 29 KDa (LipL32) and 22 KDa (LipL22/Loa22). The results by western blot showed that antiserum from experimentally infected rabbits and naturally infected bovine evidentiated different protein patterns. The outer membrane proteins of 51,1 KDa, 36 KDa, 27KDa, 24,5 KDa, 20,5 KDa, 17,7 KDa and 14 KDa were principally detected by rabbit antibody. In contrast, two leptospiral OMPs of 47 KDa (Omp45) and 29 KDa (LipL32) were detected in significantly greater amounts using bovine serum. These findings suggested differences asdetermined by patogenicity and protein structure of L. interrogans serovar hardjoprajitno.<br>Este trabalho teve como objetivo estudar o perfil das proteínas da membrana externa (PMEs) da Leptospira interrogans sorovariedade hardjoprajitno por meio da eletroforese uni e bidimensional e testes de Western blot. Foram utilizadas técnicas de extração da membranaexterna com Triton x114 e precipitação das proteínas com acetona. As imagens foram analisadas pelo programa de computador Gel-Proanalyze 3.1. (MediaCybernetics®) para determinação da massa molecular das proteínas detectadas nos géis bidimensionais e nasmembranas de nitrocelulose. Na eletroforese unidimensional foram visualizadas 14 bandas de proteína, sendo que quatro delas, de massas moleculares eqüivalentes a 63 KDa (LipL63), 47 KDa (LipL48), 29 KDa (LipL32) e 22 KDa (LipL22/Loa22), apresentaram-se como os principais componentes das proteínas de membrana externa. Nos géis de eletroforese bidimensional foram visualizadas 35 bandas de roteínas que predominam na membrana externa dessa leptospira, sendo que cinco delas se destacaram como de maior intensidade: 22,54 KDa(LipL22), 30/26 KDa (LipL32), 34,41 KDa (PME34), 42,75 KDa (LipL41) e 58,59 KDa (LipL63).. A eletroforese bidimensional mostrou-se com maior poder de resolução para separação das PMEs em comparação com a eletroforese unidimensional. Os testes de Western blot realizados com soros de coelhos hiperimunizados identificaram nove proteínas reagentes nos soros dos coelhos de massas moleculares de 51,1 KDa, 36 KDa, 27 KDa, 24,5 KDa, 20,5 KDa, 17,7 KDa e 14 KDa. Em soros de bovinos apenas duas proteínas modularam a resposta imune desses animais com pesos aparentes de 47 KDa (Pme45) e 29 KDa (LipL32). A diferença encontrada nos resultados dos soros de bovinos naturalmente infectados em relação aos resultados encontrados nos soros dos coelhos hiperimunizados podem ser atribuídas às diferenças de patogenicidade das amostras de Leptospiras que infectaram esses animais. As amostras que infectaram os bovinos estavam se mantendo na natureza, enquanto as amostras que foram utilizadas para produzir o soro hiperimune tem sido mantidas em laboratório a muito tempo.
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Lafeta, Barbara Nobre. "Produção e caracterização da proteína recombinante LipL32 de Leptospira spp." Universidade Federal de Minas Gerais, 2010. http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9HCPXE.
Full textAbstract:
This work aimed to study the profile of outer membrane proteins (OMPs) of Leptospira interrogans serovars Hardjobovis, Icterohaemorrhagiae, Pomona and Wolffi, express a sintetic gene LipL32 and test the LipL32 protein front of serum from naturally infected bovine. Techniques were used to extract the outer membrane with Triton X114 and precipitation
with acetone, cloning and subcloning of the gene LipL32, optimization of the LipL32 gene for expression in E. coli, construction of the LipL32 synthetic gene, expression and testing of the LipL32 protein in Western blot. In SDS-PAGE bands of molecular mass to 22, 29, 32, 36, 41 and 48 kDa proved to be the major components of outer membrane proteins of the four serovars tested. In the Western blot bands with molecular mass to 22, 29, 32, 41, 48, 52 and 75 kDa reacted in all the serovars tested. The LipL32 protein expression from synthetic gen was successful but did not achieve high levels of expression. Protein LipL32 was reactive in all
Western blot tests performed.<br>Este trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil das proteínas da membrana externa (PMEs) da Leptospira interrogans sorovariedades Hardjobovis, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Wolffi; produzir e testar a proteína LipL32 frente ao soro de animais naturalmente infectados.
Foram utilizadas técnicas de extração da membrana externa com Triton X114 e precipitação das proteínas com acetona, clonagem e subclonagem do gene LipL32, otimização do gene LipL32 para códons próprios da E. coli, construção do gene LipL32 de forma sintética,
produção da proteína LipL32 e testes Western blot com a proteína recombinante LipL32. Na eletroforese com gel de poliacrilamida sob condições desnaturantes as bandas de massa molecular iguais a 22, 29, 32, 36, 41 e 48 KDa apresentaram-se como os principais componentes das PME das quatro sorovariedades testadas. Nos testes de Western blot as bandas com massas moleculares iguais a de 22, 29, 32, 41, 48, 52 e 75 KDa reagiram em todas as sorovariedades testadas. A expressão do gene sintético LipL32 foi realizada com sucesso, porém não foram obtidos níveis de expressão satisfatórios. A proteína LipL32
recombinante foi reagente em todos os testes de Western blot realizados.
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Diniz, Juliana Alcoforado. "Produção e caracterização de IgY contra rLipL32 de Leptospira interrogans." Universidade Federal de Pelotas, 2012. http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/123456789/1206.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2012-09-12<br>Leptospirosis is a zoonosis caused by bacteria of the Leptospira genus. In recent years, efforts to identify immunogenic components of leptospires have resulted in the characterization of several outer membrane lipoproteins that are expressed during infection. Previously, our group had produced polyclonal IgY antibodies against whole-cell leptospires strain Fiocruz L1-130, which were used in different forms of capture ELISAs. In this study we produced and characterized IgY antibodies against LipL32 in recombinant form (rLipL32), the most abundant lipoprotein in the proteome of pathogenic leptospires, in order to use they in diagnostic assays and prophylaxis of leptospirosis. For this, two 22-week-old hens were immunized on day 0 with rLipL32 and oil adjuvant by intramuscular route. Three booster immunizations on days 14, 28 and 42 were held, and the eggs were collected daily from day 45. The yolks were processed and the antibodies purified with polyethylene glycol, and monitored by SDS-PAGE. Specificity of purified antibodies was assessed through indirect ELISA and Western blot (WB) using both rLipL32 and whole-cell Fiocruz L1-130. After standardization of the first batch of IgY, antibodies were conjugated with horseradish peroxidase and fluorescein (FITC). In addition, we conducted a passive immunoprotection assay in hamster model, using homologous and heterologous challenge. SDS-PAGE confirmed the successful purification of IgY and a batch with a concentration of 13μg.μL-1 was stored at -20ºC until use. Both IgY and IgY conjugated with horseradish peroxidase recognized the recombinant and native protein in ELISA and WB. In this study we produced and characterized successfully IgY against rLipL32. Although these antibodies have not been tested with clinical samples from humans or animals, they have antigen detecting potential for use in the diagnosis of leptospirosis.<br>A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias do gênero Leptospira. Nos últimos anos, esforços para a identificação de componentes imunogênicos nas leptospiras resultaram na caracterização de várias lipoproteínas de membrana externa que são expressas durante a infecção. Anteriormente, nosso grupo havia produzido IgY contra Leptospira interrogans cepa Fiocruz L1-130 inteira, a qual foi usada em diferentes formatos de ELISA de captura. No presente estudo, objetivamos produzir e caracterizar anticorpos IgY contra a proteína LipL32 na forma recombinante (rLipL32), a lipoproteína mais abundante no proteoma das leptospiras patogênicas, com intuito de utilizá-los posteriormente, no diagnóstico e na imunoprofilaxia da leptospirose. Para isso, duas galinhas com 22 semanas de idade foram imunizadas no dia 0 com rLipL32 e adjuvante oleoso, através da via intramuscular. Três outras imunizações foram realizadas nos dias 14, 28 e 42 e os ovos coletados diariamente a partir do dia 45. Os anticorpos foram obitidos através do processamento das gemas, purificados com polietilenoglicol e monitorados por SDS-PAGE. A especificidade dos anticorpos foi avaliada através de ELISA indireto e Western blot (WB), ambos utilizando rLipL32 e Fiocruz L1-130 inteira. Após a padronização do primeiro lote de IgY, os anticorpos foram conjugados com peroxidase e fluoresceína (FITC), e avaliados em um ensaio de imunização passiva em hamsters, com desafio homólogo e heterólogo. O SDS-PAGE confirmou o sucesso de purificação, e um lote de IgY com a concentração de 13μg.μL-1 foi estocado a -20ºC até o uso. A IgY pura e conjugada com peroxidase reagiram com as proteínas recombinante e nativa no ELISA e no WB. Nesse estudo, produzimos e caracterizamos com sucesso IgY contra rLipL32. Embora esses anticorpos não tenham sido testados com amostras clínicas de humanos e animais, eles possuem potencial para compor ensaios que visem a detecção do antígeno no diagnóstico da leptospirose.
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Felix, Samuel Rodrigues. "Avaliação do potencial imunoprotetor de antígenos recombinantes de Leptospira interrogans." Universidade Federal de Pelotas, 2009. http://repositorio.ufpel.edu.br/handle/ri/2559.
Full textAbstract:
Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009-11-27<br>Leptospirosis is a disease caused by pathogenic spirochetes of the Leptospira
genus. It is the most widespread zoonosis in the world, representing a veterinarian
and public health problem especially in developing countries. From a veterinarian
point of view, leptospirosis is important both as a medical problem, mainly in dogs,
which can suffer the ailment as well as transmit it, and as an economic problem,
mainly in cattle and pigs, where it causes direct production and reproductive losses.
Vaccination of these animals is largely applied, however protection is limited.
Conventional vaccines confer protection restricted to the sorovars present in the
preparation and fail to protect against renal infection, allowing seemingly healthy
animals to shed bacteria, and produce short term protection requiring frequent
revaccination. The vaccines are also available for humans, but are used only in a
few countries such as Cuba and China. The goal of this work was to test the immune
protective potential of recombinant Leptospira interrogans proteins produced in
Escherichia coli, using the hamster model. Twenty recombinant vaccine candidates
were produced and inoculated in hamsters in two doses, fourteen days apart. Two
weeks after the second dose all animals were challenged with 100 leptospires
(~2xLD50). After the challenge, animals were observed daily for disease. Of all the
proteins tested, seven protected animals to some extent, ranging from 16.7% to
50%. Two proteins presented promising results, and were recommended for further
studies, as potential leptospira subunit vaccine candidates.<br>A leptospirose é uma doença causada por espiroquetas do gênero
Leptospira. Ela é a zoonose mais difundida no mundo, sendo um problema de
saúde pública e veterinária, principalmente em países em desenvolvimento. Na área
de veterinária, a leptospirose é preocupante do ponto de vista clínico e econômico,
devido ao risco à saúde pública, perdas reprodutivas e óbitos. A vacinação animal é
amplamente realizada como medida de prevenção da enfermidade. Entretanto, a
proteção conferida pelas vacinas convencionais é limitada aos sorovares nelas
presentes, não evitando o estado portador, mantendo assim o potencial transmissor
desses animais, para humanos e outros animais. Por outro lado, vacinas para
humanos estão disponíveis e empregadas em alguns países como a China e Cuba.
O objetivo deste trabalho foi avaliar, em modelo animal, proteínas recombinantes de
Leptospira interrogans quanto ao seu potencial imunoprotetor. Para tanto, vinte
proteínas foram expressas em Escherichia coli e, após a adsorção em hidróxido de
alumínio, foram administradas em hamsters através da via intramuscular, em duas
doses, com intervalo de 14 dias. Duas semanas após a segunda dose realizou-se o
desafio dos animais com 100 leptospiras (~2xDL50). Após o desafio, os animais
foram observados diariamente para o aparecimento de sinais clínicos da
enfermidade e óbitos, e após 24 dias procedeu-se a eutanásia e necropsia dos
animais sobreviventes. Como resultado da avaliação realizada, sete proteínas
conferiram proteção ao modelo animal que variou de 16,7% a 50%. Das proteínas
que apresentaram maiores níveis de proteção, duas foram indicadas como
possíveis candidatas à vacina recombinante contra leptospirose.
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Forno, Cuyutupa Giulianna Luisa. "La Práctica veterinaria con caninos domésticos como factor de riesgo para la presentación de infecciones por Leptospira sp entre el personal laboral de clínicas y consultorios veterinarios." Bachelor's thesis, Universidad Nacional Mayor de San Marcos, 2010. https://hdl.handle.net/20.500.12672/675.
Full textAbstract:
El objetivo del estudio fue determinar la tasa de seroreactores a Leptospira sp. y cuantificar el riesgo de infección entre los profesionales que laboran en contacto directo con caninos en comparación a los que no tienen contacto directo con estos dentro de sus labores en consultorios o clínicas veterinarias. Con esta finalidad se colectaron 287 muestras de suero de personas para la detección de anticuerpos mediante la prueba de microaglutinación. El 9.1% (13/143) de expuestos y el 0.7% (1/144) de no expuestos resultaron seropositivos. Los serovares reactivos fueron varillal, panama y ballum para expuestos; y en el grupo de profesionales no expuesto sólo se encontró un seroreactor multiple a los serovares australis, copenhageni y wolfii. El análisis por Regresión Logistica mostró que la exposición por práctica veterinaria tiene un Odds Ratio de 13.31 (IC 95%:1.43 - 124.08); y además la presencia de roedores intradomiciliarios obtuvo un Odds Ratio de 8.70 (IC 95%:1.83 – 41.26), encontrándose diferencia estadística para ambos factores de riesgo.
Palabras clave: Leptospira sp, seroreactores, clínicas y consultorios veterinarios.<br>--- The objective of this study was to determine the frequency of seroreactors against Leptospira sp. and to quantify the risk of infection in professionals who work in direct contact with canine and the professionals who do not have direct contact with these animals in veterinary offices or small animal clinics. Serum samples were taken from 287 professionals who were assessed for the presence of antibodies against Leptospira sp. by the Microagglutination Test. The 9.1 % (13/143) of exposed professionals and 0.7% (1/144) of unexposed professionals had positive serology to Leptospira sp. The reactive serovars were varillal, panama and ballum in the exposed; and australis, copenhageni and wolfii in the unexposed. The exposition for veterinary practice had a Odds Ratio of 13.31 (IC 95%:1.43 - 124.08); and too the presence of rodents in home had a Odds Ratio of 8.70 (IC 95%:1.83 – 41.26), being statistically difference for both factors of risk.
Keywords: Leptospira sp., seroreactors, veterinary offices or small animal clinics<br>Tesis
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Miotto, Bruno Alonso. "Study of urinary shedding and identification of chronic carriers of pathogenic leptospires in dogs kept in public or private animal shelters of metropolitan São Paulo area." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10136/tde-20032017-122316/.
Full textAbstract:
Leptospirosis is a zoonotic disease of global importance caused by pathogenic Leptospira species. Dogs are reservoir hosts for pathogenic Leptospira and can act as potential transmission sources of the disease. Identification of such individuals and characterization of leptospires involved in chronic infections may promote a better understanding of the role of dogs in the epidemiology of particular leptospiral strains and the overall contribution of dogs to environmental contamination in urban and rural scenarios. The present work describes the identification of dogs presenting asymptomatic urinary shedding of different pathogenic Leptospira species among stray and sheltered dog populations, as well as the characterization of leptospiral strains isolated from chronic carriers. Blood and urine samples were taken from three different populations: (I) 92 dogs kept in a public shelter at the University of São Paulo campus; (II) seven stray dogs living inside the University of São Paulo campus; and (III) 24 dogs kept in a public shelter from the city of Mogi das Cruzes. Dogs identified as urinary shedders by PCR-based DNA detection were prospectively evaluated in order to confirm persistent renal carriage of the pathogen and to recover viable leptospires for proper characterization. Leptospiruric dogs were identified in all populations studied. Quantitative PCR targeting the lipL32 gene and the 16S rRNA detected urinary shedding in 10 dogs (10,87%) from population I: two of these dogs were recently admitted at the facility and one dog was adopted immediately after presenting large quantities of leptospires in urine. Prospective evaluation of nine leptospiruric dogs enabled the identification of two chronic carriers, allowing the recovery of leptospires from both dogs. The strains were further characterized by MLST analysis and serogrouping, thus confirming infection caused by L. interrogans serogroup Canicola and L. santarosai serogroup Sejroe. Two leptospiruric dogs (28,5%) were detected in population II by 16S and secY PCR amplification; one dog presented persistent urinary shedding of L. interrogans, but no isolates could be recovered. The other leptospiruric dog presented asymptomatic infection caused by L. santarosai and could not be reevaluated. Only one dog from population III (4,1%) presented leptospiruria detected by PCR; the dog could not be reevaluated, however sequence analysis revealed infection caused by L. santarosai. The results indicate the first report of L. santarosai infection in dogs. Asymptomatic infection caused by this leptospiral species was observed in all populations studied, thus indicating a possible role of dogs in the chain of transmission of this particular pathogen. The results also suggest a possible genetic distinction between lineages of Brazilian L. santarosai maintained by dogs and other animal hosts. Isolation and persistent chronic carriage of L. santarosai found shows that dogs can persistently harbor leptospires other than L. interrogans. This study also points out that dogs can be inadvertently admitted and adopted in dog shelters, potentially increasing the risks of occupational and zoonotic transmission by bringing infected animals closer to shelter workers, adopters and their households.<br>A leptospirose é uma doença zoonótica de importância global causada por espécies patogênicas do gênero Leptospira. Cães são hospedeiros de manutenção de leptospiras patogênicas e podem atuar como potenciais fontes de infecção da doença. A identificação de tais indivíduos e a caracterização de leptospiras envolvidas na infecção crônica podem ajudar a compreender o papel dos cães na epidemiologia da doença tanto em ambientes rurais quanto urbanos. O presente trabalho descreve a identificação de cães errantes e mantidos em abrigos coletivos com eliminação assintomática de leptospiras patogênicas, além de descrever também a caracterização das diferentes estirpes obtidas de cães cronicamente infectados. Amostras de sangue e urina foram coletadas de 3 populações distintas: (I) 92 cães mantidos em um abrigo coletivo localizado dentro da Universidade de São Paulo; (II) sete cães errantes capturados dentro do campus da Universidade de São Paulo; e (III) 24 cães mantidos em um abrigo coletivo localizado na cidade de Mogi das Cruzes. Cães identificados como leptospirúricos por técnicas moleculares (PCR) foram prospectivamente avaliados para confirmar a persistência da eliminação bacteriana e para obter isolamento da cepa infectante e sua subsequente caracterização. A amplificação de fragmentos dos genes 16S rRNA e lipL32 permitiu a identificação de 10 cães (10,87%) leptospirúricos na população I. Dois dos 10 cães haviam sido recentemente admitidos no local, e outro cão foi adotado logo após apresentar grandes quantidades de leptospiras na urina. A avaliação prospectiva de nove animais leptospirúricos permitiu a caracterização da infecção crônica e assintomática em dois cães, o que possibilitou o isolamento de leptospiras de ambos os animais. As cepas foram tipificadas pelas técnicas de MLST e sorogrupagem, caracterizando duas cepas distintas, sendo elas L. interrogans sorogrupo Canicola e L. santarosai sorogrupo Sejroe. Dois cães leptospirúricos (28,5%) foram identificados na população II pela amplificação por PCR dos genes 16S rRNA e secY; um deles apresentou eliminação persistente de L. interrogans, no entanto não foi possível o isolamento do patógeno. O outro cão leptospirúrico não pôde ser reavaliado, entretanto a análise filogenética permitiu identificar infecção causada por L. santarosai. Apenas um cão da população III (4,1%) apresentou eliminação de leptospiras na urina, que foi confirmada pela amplificação de fragmento dos genes 16S rRNA e secY; o cão não pôde ser reavaliado, no entanto a análise filogenética dos fragmentos amplificados confirmou infecção causada por L. santarosai. Os resultados indicam o primeiro registro de infecção causada por L. santarosai em cães. A ocorrência da infecção assintomática causada por essa espécie nas três populações avaliadas indica um possível papel dos cães na cadeia de transmissão desse patógeno em centros urbanos, além de demonstrar que cães podem se tornar portadores de diferentes espécies de leptospiras. Os resultados sugerem uma possível distinção genotípica de cepas de L. santarosai mantidas por cães quando comparadas com estirpes desta espécie isoladas de outros hospedeiros. O presente estudo também foi capaz de demonstrar que cães leptospirúricos podem ser inadvertidamente admitidos ou adotados em abrigos coletivos, aumentando potencialmente os riscos de transmissão ocupacional e zoonótica da doença.
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Rossini, Amanda Diaz. "Caracterização de uma proteína de Leptospira interrogans e avaliação do seu envolvimento na relação patógeno-hospedeiro." Universidade de São Paulo, 2018. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-15062018-101521/.
Full textAbstract:
As bactérias patogênicas do gênero Leptospira são o agente causador da leptospirose, uma doença de importância global. As leptospiras patogênicas causam infecção em um amplo espectro de animais e no homem. As leptospiras podem invadir o corpo humano através de abrasões na pele e mucosa. A invasividade bacteriana depende de várias etapas, tais como: aderência, invasão e disseminação através dos tecidos do hospedeiro. Recentemente, nosso grupo identificou proteínas de membrana externa que atuam como adesinas de leptospira e/ou receptores de componentes do plasma hospedeiro, o que poderia contribuir para a patogenicidade bacteriana. Assim, o presente projeto tem como objetivo avaliar as propriedades funcionais do gene LIC10920, identificado na sequência genômica de Leptospira interrogans sorovar Copenhageni, como uma proteína hipotética, predita de membrana externa. A sequência LIC10920 foi amplificada por PCR e clonada no vetor de expressão pAE. O plasmídeo pAE contendo o inserto foi introduzido em estirpes de E. coli para a expressão da proteína. A proteína recombinante rLIC10920 foi purificada por cromatografia de afinidade a níquel e sua integridade estrutural foi avaliada pela técnica de dicroísmo circular. Camundongos foram imunizados com a LIC10920 para a avaliação da sua imunogenicidade. A presença de IgG humano contra LIC10920, foi avaliada por ELISA, em amostras de soro de pacientes com leptospirose. Assim, como a sua ligação com componentes da matriz extracelular e plasma do hospedeiro. Animais imunizados apresentaram alto título de anticorpos contra LIC10920. Além disso, a proteína foi reconhecida por anticorpos presente em amostras de soro humano infectado. A proteína foi capaz de interagir com plasminogênio e laminina de maneira dose-dependente e saturável. Em ambas as interações, a participação das regiões imunogênicas se mostrou importante. rLIC10920 foi capaz de capturar o plasminogênio direto do soro humano também de maneira dose-dependente. Por fim, foi observado que o plasminogênio ligado a rLIC10920 pode ser convertido em plasmina. A proteína em estudo é expressa durante a infecção e podemos atribuir a função de adesina, com papel na patogênese da bactéria.<br>Pathogenic bacteria of genus Leptospira are the causative agent of leptospirosis, a disease of global importance. Pathogenic leptospires cause infection in a broad spectrum of animals and humans. Pathogenic leptospires can efficiently invade the human body through skin and mucosa and promptly spread into blood vessels, reaching target organs. Bacterial invasiveness depends on several steps, such as adherence, invasion and throughout host tissues. Recently, our group has identified outer membrane proteins that act as leptospiral adhesins and/or receptors of host plasma components, which could contribute for bacterial pathogenesis. This project aims to evaluate the functional properties of the gene LIC10920, identified in the genome sequence of Leptospira interrogans serovar Copenhageni, as a predicted outer membrane protein of unknown function. The LIC10920 sequence was amplified by PCR, cloned into the expression vector pAE. Plasmids containing cloned DNA were introduced in E. coli strains for protein expression. The recombinant protein was purified by the metal affinity chromatography and its structural integrity was assessed by circular dichroism spectroscopy. Mice were subcutaneously immunized with LIC10920 for immunogenicity evaluation. The presence of IgG against LIC10920 in confirmed leptospirosis human serum samples was evaluated by ELISA. Binding of protein with extracellular matrix or plasma components was also assessed. Sera from immunized animals show that the rLIC10920 protein is capable to stimulate antibody immune response in mice. In addition, the protein is recognized by antibodies in leptospirosis human serum samples. The recombinant protein was capable of binding plasminogen and laminin. Dose-dependent and saturable binding was observed when increasing concentrations of the rLIC10920 were allowed adhere to a fixed concentration of plasminogen or of laminin, fulfilling the receptor-ligand interactions. In both cases, the participation of the immunogenic regions occurs, but in the case of laminin, the dependence is greater with structured epitopes. It has been shown that plasminogen linked to rLIC10920 can be converted to plasmin in the presence of activator. The recombinant protein was able to capture the plasminogen directly from normal human serum in a dose-dependent manner, suggesting the involvement of native protein in host-pathogen interactions. The protein under study is expressed during the infection and due to its capacity of interaction with host components, we may anticipate its role in leptospiral pathogenesis.
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Teixeira, Aline Rodrigues Florencio. "Avaliação e caracterização de candidatos vacinais voltados para o controle da leptospirose." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-25082016-100745/.
Full textAbstract:
A leptospirose é uma doença sistêmica, causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. O desenvolvimento de novas estratégias para prevenir a doença é necessário. Vacinas surgem como fortes candidatas para contornar o problema. As pesquisas atuais têm interesse em identificar antígenos conservados que estão envolvidos nas interações patógeno-hospedeiro.O presente projeto selecionou três proteínas hipotéticas de L. interrogans para serem caracterizadas quanto ao seu papel na patogênese e avaliadas quanto ao seu potencial protetor. Os genes foram amplificados por PCR e clonados no vetor de expressão PAE. As proteínas recombinantes foram purificadas por cromatografia de afinidade e foram reconhecidas por soro de indivíduos infectados. As proteínas LIC13479 e LIC10050 foram capazes de se ligar a laminina, plasminogênio e fibronectina plasmática. Em relação à LIC10537, dois fragmentos recombinantes foram gerados. Apenas o fragmento 2 foi capaz de interagir com PLG. As proteínas que interagiram com o PLG foram capazes de gerar plasmina As proteínas foram capazes de estimular uma resposta imune e LIC13479 e LIC10050 exerceram proteção parcial no modelo de leptospirose em hamsters.<br>Leptospirosis is a systemic disease caused by pathogenic bacteria of genus Leptospira. The development of new strategies to prevent the disease is needed. Vaccines emerge as strong candidates to fight the problem.Currently research has focused to identify conserved antigens This project selected three hypothetical proteins of L. interrogans. Thesecoding sequences were characterized for their possible role in pathogenesis and their potential to protect animals against challenge with virulent leptospires. Genes were amplified by PCR and cloned into the expression vector pAE. The recombinant proteins were purified by metal affinity chromatography and were recognized by confirmed human leptospirosis serum samples.LIC13479 and LIC10050 proteins were able to bind with laminin, plasminogen and plasma fibronectin. The coding sequence LIC10537 was cloned in two fragments. Fragment 2was able to interact with plasminogen. All proteins were able to generate active plasmin. The recombinant proteins were able of inducing an immune response. Evaluation of immunoprotection in leptospirosis hamster model followed by challenge with virulent bacteria showed that the recombinant proteins conferred partial protection.
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Moreno, Luisa Zanolli. "Caracterização e análise comparativa de genomas de estirpes de Leptospira isoladas no Brasil." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-03082017-155135/.
Full textAbstract:
O presente estudo teve como objetivo caracterizar o genoma de estirpes de Leptospira isoladas no Brasil e realizar a análise comparativa destes com os genomas disponíveis no banco de dados GenBank. Foram caracterizadas 17 estirpes isoladas de distintas espécies animais, em diferentes regiões do Brasil, no período de 1998 a 2012. Estas foram previamente tipificadas por sequenciamento do gene 16S rRNA e soroaglutinção microscópica em seis espécies (L. interrogans, L. santarosai, L. inadai, L. kirschneri, L. borgpetersenii e L. noguchii) e mais de oito sorogrupos. Foi realizado o sequenciamento em plataforma Illumina™ MiSeq e montagem dos genomas com algoritmo ab initio. Para ordenação e anotação foram utilizados genomas de referência das respectivas espécies estudadas. Foi realizada a análise in silico da Tipagem por Sequenciamento de Multilocus (MLST) para os três protocolos vigentes de Leptospira. A análise comparativa dos genomas, incluindo wgSNP, foi realizada intra-espécie avaliando as variações existentes entre os sorogrupos das espécies de Leptospira estudadas. As estirpes de L. interrogans apresentaram resultados na MLST congruentes com a sua identificação prévia. No caso de L. kirschneri, apenas uma estirpe apresentou novos alelos nos três protocolos de MLST e se distancia das demais estirpes brasileiras de L. kirschneri. As estirpes de L. santarosai, assim como as de L. borgpetersenii e L. noguchii, possuem novos alelos e/ou perfis alélicos para pelo menos dois dos protocolos vigentes de MLST, sendo que ainda se destacam em um agrupamento próprio de origem brasileira. Os genomas de L. interrogans apesar de apresentarem alta identidade e sintenia com a referência sorovar Copenhageni, também apresentaram regiões de diferença entre os respectivos sorogrupos. Os genomas dos sorogrupos Australis e Serjoe se destacaram por apresentarem inserções e deleções, respectivamente, principalmente no cromossomo 2. O genoma de L. borgpetersenii também apresentou grande variação de composição, como esperado para espécie, sendo esta proporcionada por sequências de inserção e transposição de elementos móveis. Os sorogrupos Canicola e Pomona apresentaram maior proximidade entre si na análise wgSNP. Também foram identificados dois plasmídeos nos genomas do sorogrupo Canicola com alta identidade aos plasmídeos descritos na estirpe chinesa do mesmo sorovar. Na espécie L. kirschneri, a estirpe 47 (M36/05) apresentou alta identidade e sintenia com os genomas do sorovar Mozdok, como esperado, incluindo a estirpe brasileira de origem humana. Já a estirpe 55 (M110/06) se diferenciou dos demais genomas de L. kirschneri tanto no MLST quanto no wgSNP. O genoma brasileiro de L. inadai apresentou alta identidade à referência americana de origem humana, incluindo a presença de um bacteriófago próprio da espécie. A distinção das estirpes brasileiras de L. santarosai na MLST, também foi evidenciada na análise comparativa e no wgSNP, sendo que a estirpe 68 (M52/8-19), que não apresentou reatividade aos sorogrupos testados, ainda se diferencia das demais reafirmando a possibilidade de novo sorogrupo/sorovar. Dessa forma, o estudo genômico possibilitou a identificação de particularidades das estirpes brasileiras de Leptospira, incluindo a existência de elementos extra-cromossomais, proximidade com estirpes de origem humana indicando maior risco para saúde pública, além da possibilidade de novo sorogrupo de L. santarosai.<br>The present study aimed to characterize the genome of Leptospira strains isolated in Brazil and to perform their comparative analysis with GenBank available genomes. 17 strains isolated from distinct species, in different regions of Brazil, from 1998 to 2012 were characterized. These were previously typified through 16S rRNA sequencing and microscopic agglutination into six species (L. interrogans, L. santarosai, L. inadai, L. kirschneri, L. borgpetersenii and L. noguchii) and over eight serogroups. Illumina™ MiSeq sequencing and genome assembly with ab initio algorithm were performed. For ordering and annotation, reference genomes of the respective species were used. The in silico analysis of Multilocus Sequencing Typing (MLST) was performed for the three current Leptospira protocols. The comparative genomic analysis, including wgSNP, was performed intra-species evaluating the existing variations between the serogroups of the studied Leptospira species. The L. interrogans strains presented MLST results congruent with their previous identification. In the case of L. kirschneri, only one strain presented new alleles in the three MLST protocols and distanced itself from the other Brazilian L. kirschneri strains. The L. santarosai strains, as well as L. borgpetersenii and L. noguchii, presented new alleles and/or allelic profiles for at least two of the current MLST protocols, and still stand out in a separate group of Brazilian origin. Even though the L. interrogans genomes presented high identity and synteny with serovar Copenhageni reference, they also presented regions of difference between the respective serogroups. Serogroups Australis and Serjoe genomes stood out for having insertions and deletions, respectively, mainly in chromosome 2. The L. borgpetersenii genome also presented great variation of composition, as expected for the species, which is provided by insertion sequences and transposition of mobile elements. The serogroups Canicola and Pomona presented higher proximity in the wgSNP analysis. Two plasmids were also identified in the serogroup Canicola genomes with high identity to the plasmids described in the Chinese strain of the same serovar. In the L. kirschneri species, the strain 47 (M36/05) presented high identity and synteny with the serovar Mozdok genomes, as expected, including the Brazilian strain of human origin. The strain 55 (M110/06) differed from other L. kirschneri genomes in both MLST and wgSNP. The Brazilian L. inadai genome presented high identity to the American reference of human origin including the presence of bacteriophage specific for the species. The distinction of the Brazilian L. santarosai strains in the MLST was also evidenced in the comparative analysis and in the wgSNP, and the strain 68 (M52 / 8-19), which showed no reactivity to the tested serogroups, also differs from the others reaffirming the possibility of a new serogroup/serovar. Therefore, the genomic study allowed the identification of particularities of Brazilian Leptospira strains, including the existence of extrachromosomal elements, proximity to strains of human origin indicating a greater risk for public health, in addition to the possibility of a new L. santarosai serogroup.