Academic literature on the topic 'Listeria monocytogenes – Effets du sel sur'

L’objectif de cette étude vise l’évaluation in vitro de l’activité antioxydante, antiproliférative et antimicrobienne des extraits organiques Salvia clandestina du Maroc. L’effet antioxydant est estimé par le test de balayage du radical DPPH. L’activité antiproliférative est évaluée sur deux lignées cellulaires cancéreuses en utilisant le test MTT. L’activité antimicrobienne est évaluée contre Escherichia coli, Staphyloccocus aureus et Listeria monocytogenes. L’extrait d’hexane et de dichlorométhane ont montré des capacités antioxydantes à l’IC50 = 118,28 ± 2,108 et 191,36 ± 2,72 μg/ml, respectivement. Alors que l’extrait méthanolique a montré une remarquable activité antiproliférative contre la lignée RD (IC50 = 86,24 μg/ml). Concernant l’activité antimicrobienne, les extraits hexanique et méthanolique sont plus actifs, alors que Staphylococcus aureus s’est montré la plus sensible. Vu les résultats obtenus, Salvia clandestina pourrait être considérée comme une source importante de molécules bioactives. Cependant, d’autres investigations sont nécessaires regardant les principes actifs responsables des effets pharmacologiques obtenus ainsi que l’investigation de l’action antibactérienne et anticancéreuse.

Réduire le sodium dans les aliments transformés est une recommandation de Santé Canada. Or, le NaCl a un effet barrière reconnu sur la croissance des microorganismes. Des souches de L. monocytogenes et S. aureus ont été génotypées et étudiées selon leur tolérance au NaCl. Leur cinétique de croissance a été étudiée dans des caillés modèles Camembert soumis à différentes réductions en NaCl ou substitutions partielles par du KCl. La croissance de L. monocytogenes était légèrement supérieure à la surface de caillés réduits de 30 % de NaCl alors qu’au centre, l’utilisation du KCl permettait une diminution de sa croissance. Les conditions expérimentées ont permis la survie de S. aureus dans tous les caillés. Dans chacun des cas, il y a eu croissance inacceptable des pathogènes du point de vue de l’innocuité alimentaire : le risque relié à leur croissance dans un Camembert est donc peu influencé par les conditions salines.

Listeria monocytogenes est une bactérie à Gram+, ubiquiste, pathogène intracellulaire d’origine alimentaire, responsable chez l’homme, de nombreuses infections telles que les infections foeto-maternelles, des méningo-encéphalites et des septicémies. La bactérie utilise préférentiellement le glucose qui est transporté via le système phosphoenolpyruvate:sucre phsosphotransferase (PTS) et des perméases non-PTS. Les deux principaux transporteurs de glucose chez L. monocytogenes seraient des PTS de la classe mannose. Le premier est codé par l’opéron manLMN (man) et le deuxième, par l’opéron mpoABCD (mpo). Nous avons, dans un premier temps, mis en évidence le transport de glucose par ces PTS chez L. monocytogenes et aussi identifier d’autres transporteurs non-PTS de glucose. Des tests de croissance en milieu minimum (MM) additionné de glucose et des tests de consommation de glucose ont permis de montrer que les mutants ΔmanL (manL code pour l’EIIABMan) et ΔmanM (manM code pour l’EIICMan) utilisent moins vite le glucose que la souche sauvage AML73 ou EGDe (3 à 4 fois moins vite). Le mutant ΔmpoA (mpoA code pour l’EIIAMpo) montre un phénotype similaire à la souche sauvage tandis que le mutant ΔmpoB (mpoB code pour l’EIIBMpo) utilise 4 à 5 fois moins vite le glucose que la souche sauvage. Des tests de qRT-PCR ont par ailleurs permis de montrer que la délétion du gène mpoA permet une expression constitutive de l’opéron man tandis que la délétion du gène mpoB entraîne une inhibition de l’expression de cet opéron. Nous avons aussi montré que l’opéron man est induit par le glucose et l’opéron mpo est exprimé constitutivement. Le PTSMan est le principal système de transport de glucose chez L. monocytogenes et le PTSMpo pourrait fonctionner comme un senseur de glucose qui en présence de ce sucre stimule l’expression de l’opéron man en régulant l’activité de ManR. Le mutant ΔptsI (ptsI code pour la protéine générale EI du PTS) utilise 8 à 10 fois moins vite le glucose que la souche sauvage et présente une très faible expression de l’opéron man. L’utilisation du glucose (bien que faible) par le mutant ΔptsI permet d’affirmer qu’il existerait des transporteurs non-PTS qui permettraient à ce mutant d’utiliser le glucose. Des tests de complémentation hétérologue dans la souche E. coli LJ140 (incapable de transporter le glucose) ont permis de montrer que les trois protéines GlcU (GlcU1, GlcU2 et GlcU3, identifiées par homologie de séquences aux GlcU d’autres firmicutes) permettent le transport de glucose chez L. monocytogenes mais avec une très faible affinité. Un rôle potentiel du PTS et des transporteurs non-PTS dans la régulation de PrfA a également été mis en évidence par des tests de dosage β-D-glucuronidase à partir de cultures bactériennes réalisées en milieux liquides ou sur géloses et aussi par des tests de qRT-PCR (pour l’expression des gènes actA et hly). Ces tests ont été réalisés à partir de la souche L. monocytogenes AML73 (portant la fusion Phly-gus) et des mutants ΔmanL, ΔmanM, ΔmpoB, ΔmpoA, ΔptsI et glcU (construits dans cette souche). Les mutations manL, manM, mpoB, ptsI entraînent une augmentation de l’activité de PrfA (de 2 à 14 fois) et une augmentation de l’expression des gènes de virulence PrfA-dépendants (hly et actA) est également observée dans les mutants ΔmanL, ΔmanM et ΔmpoB. Les mutations glcU et mpoA ne montrent aucun effet sur l’activité de PrfA. Les mutants montrant une forte activité de PrfA contiennent peu ou pas de protéine EIIABMan qui est supposée jouer un rôle dans la régulation de l’activité de PrfA par le glucose. L’effet des mutations PTS observé sur l’expression des gènes de virulence dépend de PrfA car cet effet disparaît quand le gène prfA est délété dans les mutants ΔmanL, ΔmanM et ΔmpoB. Les mutations montrant un effet sur l’activité de PrfA ont également été étudiées in vitro par des infections des cellules épithéliales (Caco-2 et Jeg-3) avec les différents mutants et également in vivo dans la souris. La délétion du gène ptsI montre un effet dans l’infection plus particulièrement dans l’entrée des bactéries dans les cellules
L. monocytogenes is a ubiquitous foodborne pathogenic Gram-positive bacterium, which can multiply in host cells and infect humans causing septicemia, spontaneous abortion and méningoencephalitis. This bacterium transports glucose via phosphoenolpyruvate:sugar phosphotransferase systems (PTS) and non-PTS permeases. Two major glucose-transporting PTSs belong to the mannose class. One is encoded by the manLMN (man) operon and the second by the mpoABCD (mpo) operon. One goal was to study the transport of glucose by the proteins encoded by these operons and to identify non-PTS glucose transporters. Growth studies in MM supplemented with glucose and glucose consumption assays with several mutants revealed that deletion of manL (encodes EIIABMan) or manM (encodes EIICMan) significantly slowed glucose utilization (3- to 4-fold) compared to the WT AML73 or EGDe strain. Deletion of mpoA (encodes EIIAMpo) had no significant effect on glucose utilization (same phenotype as the WT) whereas deletion of mpoB (encodes EIIBMpo) significantly slowed glucose utilization (4- to -5 fold). By using qRT-PCR, we show that expression of the man operon is induced by glucose, whereas the mpo operon is expressed constitutively. Nevertheless, deletion of mpoA causes constitutive man operon expression whereas deletion of mpoB inhibits it. The PTSMpo therefore functions as a constantly synthesized glucose sensor regulating man operon expression. Deletion of ptsI (encodes the general PTS component EI) also inhibits man expression and the ΔptsI mutant was most strongly impeded in glucose utilization. The residual glucose uptake probably owes to three GlcU-like non-PTS transporters. The successful heterelogous complementation of the E. coli LJ140 strain, wich is unable to transport glucose, suggests that the L. monocytogenes GlcU proteins, GlcU1, GlcU2 and GlcU3 (identified by sequences homology to GlcU proteins in other firmicutes) are indeed capable of transporting glucose.A potential role of PTS and non-PTS components in PrfA regulation was studied in the L. monocytogenes AML73 strain (contains a Phly-gus fusion) and in the ΔmanL, ΔmanM, ΔmpoB, ΔmpoA, ΔptsI, glcU mutants derived from it. For that purpose, I carried out β-D-glucuronidase activity tests with bacteria grown either in liquid or on solid medium and qRT-PCR experiments (expression of actA and hly genes). Interestingly, deletion of ptsI, manL, manM and mpoB caused elevated PrfA activity (2- to -14 fold) and elevated expression of virulence gene expression (actA and hly) in the ΔmanL, ΔmanM and ΔmpoB mutants was observed. Nevertheless, glcU inactivation and mpoA deletion had no effect on PrfA activity. The elevated PrfA activity disappeared when the prfA gene was also deleted in the ΔmanL, ΔmanM and ΔmpoB mutants, confirming that the stimulatory effect of the various mutations on virulence gene expression is PrfA-dependent. All mutants exhibiting elevated virulence gene expression contain no or only little unphosphorylated EIIABMan, which we therefore suspect to play a major role in glucose-mediated PrfA inhibition. The effect of the PTS mutations was also tested in in vitro host cells infection assays (Caco-2, Jeg-3 cells) and in an in vivo mouse model. Deletion of ptsI led to elevated infection of the host cells, which probably owes to the elevated synthesis of the InlA protein

Listeria monocytogenes est une espèce bactérienne qui pose de réels problèmes en environnement fromager, de par son caractère ubiquiste, sa capacité à survivre à pH acide, en présence de sel ou à basse température et par la diversité de ses souches. Dans l'objectif d'étudier l'adaptation de L. Monocytogenes aux traitements rencontrés au cours de la fabrication du fromage notamment l'étape de salage en saumure, nous avons évalué le comportement de 2 souches de collection vis à vis d'un stress salin à pH neutre et acide appliqués à deux températures (22ʿ et 30ʿC). Ces 2 souches sont capables de croître en présence de concentrations élevées en sel (10% NaCl) à pH neutre à 22ʿC, par contre à pH acide seule une souche a montré une croissance possible en présence de 10% de sel. De plus, l'application d'un stress salin à 30ʿC a un effet plus inhibiteur qu'à 22ʿC sur la croissance des souches de L. Monocytogenes. Une variabilité entre les souches a été obtenue dans le sens d'une adaptation plus rapide des souches isolées d'environnement fromager en comparaison avec les souches de collection
L'observation en microscopie électronique à balayage a mis en évidence une modification morphologique des cellules en réponse à l'effet combiné du sel et du pH acide (condition drastique de croissance), les cellules apparaissent sous forme filamenteuse. L'influence de la concentration en sel et du pH sur les propriétés de surface bactériennes estimées par la méthode MATS à mis principalement en évidence une augmentation du caractère hydrophile des 2 souches en réponse à des conditions drastiques de croissance. L'aptitude des souches de collection à adhérer à l'acier est faiblement modifiée par les conditions de croissance, le risque de contamination des surfaces n'est donc pas négligeable même dans des conditions hostiles où la croissance est ralentie. L'analyse des protéines de surface a montré pour les 2 souches des profils très proches en condition optimale de croissance avec de grandes différences des profils protéiques en fonction des conditions de culture [. . . ]

Listeria monocytogenes est une bactérie à Gram+, ubiquiste, pathogène intracellulaire d'origine alimentaire, responsable chez l'homme, de nombreuses infections telles que les infections foeto-maternelles, des méningo-encéphalites et des septicémies. La bactérie utilise préférentiellement le glucose qui est transporté via le système phosphoenolpyruvate:sucre phsosphotransferase (PTS) et des perméases non-PTS. Les deux principaux transporteurs de glucose chez L. monocytogenes seraient des PTS de la classe mannose. Le premier est codé par l'opéron manLMN (man) et le deuxième, par l'opéron mpoABCD (mpo). Nous avons, dans un premier temps, mis en évidence le transport de glucose par ces PTS chez L. monocytogenes et aussi identifier d'autres transporteurs non-PTS de glucose. Des tests de croissance en milieu minimum (MM) additionné de glucose et des tests de consommation de glucose ont permis de montrer que les mutants ΔmanL (manL code pour l'EIIABMan) et ΔmanM (manM code pour l'EIICMan) utilisent moins vite le glucose que la souche sauvage AML73 ou EGDe (3 à 4 fois moins vite). Le mutant ΔmpoA (mpoA code pour l'EIIAMpo) montre un phénotype similaire à la souche sauvage tandis que le mutant ΔmpoB (mpoB code pour l'EIIBMpo) utilise 4 à 5 fois moins vite le glucose que la souche sauvage. Des tests de qRT-PCR ont par ailleurs permis de montrer que la délétion du gène mpoA permet une expression constitutive de l'opéron man tandis que la délétion du gène mpoB entraîne une inhibition de l'expression de cet opéron. Nous avons aussi montré que l'opéron man est induit par le glucose et l'opéron mpo est exprimé constitutivement. Le PTSMan est le principal système de transport de glucose chez L. monocytogenes et le PTSMpo pourrait fonctionner comme un senseur de glucose qui en présence de ce sucre stimule l'expression de l'opéron man en régulant l'activité de ManR. Le mutant ΔptsI (ptsI code pour la protéine générale EI du PTS) utilise 8 à 10 fois moins vite le glucose que la souche sauvage et présente une très faible expression de l'opéron man. L'utilisation du glucose (bien que faible) par le mutant ΔptsI permet d'affirmer qu'il existerait des transporteurs non-PTS qui permettraient à ce mutant d'utiliser le glucose. Des tests de complémentation hétérologue dans la souche E. coli LJ140 (incapable de transporter le glucose) ont permis de montrer que les trois protéines GlcU (GlcU1, GlcU2 et GlcU3, identifiées par homologie de séquences aux GlcU d'autres firmicutes) permettent le transport de glucose chez L. monocytogenes mais avec une très faible affinité. Un rôle potentiel du PTS et des transporteurs non-PTS dans la régulation de PrfA a également été mis en évidence par des tests de dosage β-D-glucuronidase à partir de cultures bactériennes réalisées en milieux liquides ou sur géloses et aussi par des tests de qRT-PCR (pour l'expression des gènes actA et hly). Ces tests ont été réalisés à partir de la souche L. monocytogenes AML73 (portant la fusion Phly-gus) et des mutants ΔmanL, ΔmanM, ΔmpoB, ΔmpoA, ΔptsI et glcU (construits dans cette souche). Les mutations manL, manM, mpoB, ptsI entraînent une augmentation de l'activité de PrfA (de 2 à 14 fois) et une augmentation de l'expression des gènes de virulence PrfA-dépendants (hly et actA) est également observée dans les mutants ΔmanL, ΔmanM et ΔmpoB. Les mutations glcU et mpoA ne montrent aucun effet sur l'activité de PrfA. Les mutants montrant une forte activité de PrfA contiennent peu ou pas de protéine EIIABMan qui est supposée jouer un rôle dans la régulation de l'activité de PrfA par le glucose. L'effet des mutations PTS observé sur l'expression des gènes de virulence dépend de PrfA car cet effet disparaît quand le gène prfA est délété dans les mutants ΔmanL, ΔmanM et ΔmpoB. Les mutations montrant un effet sur l'activité de PrfA ont également été étudiées in vitro par des infections des cellules épithéliales (Caco-2 et Jeg-3) avec les différents mutants et également in vivo dans la souris. La délétion du gène ptsI montre un effet dans l'infection plus particulièrement dans l'entrée des bactéries dans les cellules

Listeria monocytogenes est une bactérie pathogène ubiquiste responsable de toxi-infections alimentaires chez l'homme et l'animal. Le contact des denrées alimentaires avec un équipement de production souillé représente une source potentielle de contamination dont les conséquences dépendent de l'état physiologique des bactéries incriminées. Dans les industries alimentaires, l'alternance des périodes de production et des opérations de nettoyage occasionne des stress thermiques et de carence nutritionnelle pour les bactéries de l'environnement, majoritairement présentes sous forme de biofilm. Les objectifs de notre travail étaient d'une part, d'étudier l'impact de ces stress sur le comportement de L. Monocytogenes en milieu simulant le tfomage (bouillon de Richard) et sur Camembert et d'autre part, identifier les protéines impliquées par les stress de carence et/ou d'adhésion par une approche protéomique. L'application d'un traitement thermique (56ʿC/30 min) a détruit plus de 78% des cellules de L. Monocytogenes. Les cellules survivantes n'ont acquis aucune résistance croisée à l'acide et se développent ou survivent moins bien dans les conditions (pH, ToC) de la production du Camembert. Les cellules issues d'un biofilm ont présenté une croissance plus rapide à 4ʿC et une acidorésistance accrue à pH 5 témoignant d'une physiologie propre à l'état adhérent. La carence a retardé la croissance des cellules à pH 7. Elle a augmenté (à l2ʿC) ou diminué (à 4ʿC) leur résistance à pH 5. D'après les fonctions des protéines induites identifiées, les cellules planctoniques carencées semblent orientées vers le maintien d'une activité métabolique minimum et l'acquisition de résistances. Les cellules du biofilm semblent être dans une dynamique de synthèse protéique, de division cellulaire et d'adaptation. Cetté étude contribue à la compréhension des mécanismes de survie de L. Monocytogenes dans l'environnement et de leurs conséquences en production alimentaire.