Dissertations / Theses on the topic 'Lymphocytes T régulateurs – immunologie – Dissertations universitaires comme sujet'

La première partie de ce travail nous a permis de montrer, dans un modèle de souris original, que les cellules T CD4+ régulatrices jouent un rôle important et direct dans la prévention de l'autoimmunité causée par les lymphocytes T CD8+ périphériques. Nous proposons que les cellules T CD4+ Foxp3+ régulatrices induisent l'apparition à la périphérie de lymphocytes T CD8+ régulateurs qui régulent à leur tour les lymphocytes T CD8+ conventionnels. La seconde partie de ce travail suggère fortement que des événements de reconnaissance du soi sont requis pour contrôler les lymphocytes T effecteurs autoréactifs et potentiellement pathogéniques. L'autoréactivité serait donc nécessaire à son propre contrôle<br>The first part of this work showed, in an original mice model, that regulatory CD4+ T cells play an important role in preventing peripheral CD8+ T cell-mediated autoimmunity. We suggest that regulatory CD4+ Foxp3+ T cells induce the generation at the periphery of regulatory CD8+ T cells that can then regulate conventional CD8+ T cells activity. The second part of this work suggests strongly that self-recognition events are required to control autoreactive, potentially pathogenic, conventional T cells. Autoreactivity would thus be necessary for its own control

La réponse immune représente une réponse complexe à laquelle correspond une succession d’événements orchestrés finement. Parmi les mécanismes qui régulent la réponse immune, les lymphocytes T régulateurs (Treg) assurent le maintien de la tolérance en périphérie et le contrôle des réponses immunes adaptatives. Ils représentent une population hétérogène et leurs mécanismes de suppression sont toujours l’objet d’intenses recherches. Suivant le contexte de suppression et leur nature, les lymphocytes Treg réalisent une inhibition de l’activation des lymphocytes Th, soit directement, soit via la modulation de la fonction des cellules dendritiques. Dans un modèle d’immunisation par des DC chargées de KLH, les lymphocytes Treg naturels contrôlent sélectivement l’initiation des réponses de type Th1/CTL spécifiques de l’antigène. Le but de ce travail était de définir quels sont les acteurs potentiels du contrôle de cette réponse. A l’aide de l’anticorps PC61 dirigé contre le récepteur CD25 et éliminant les lymphocytes Treg naturels, nous avons montré que le ligand de costimulation CD70 joue un rôle clé dans leur régulation de la réponse Th1/CTL (Article 1). Ainsi, dans des conditions normales, la cytokine IL-12 induit principalement l’initiation de la réponse Th1 in vivo, tandis qu’en l’absence de lymphocytes Treg naturels, la voie CD70/CD27 est une voie alternative d’induction de l’IFN-γ. Cette voie d’activation pourrait être opérationnelle dans certains contextes infectieux lorsque les lymphocytes Treg sont déstabilisés voire éliminés. Nous avons montré que les lymphocytes Treg naturels diminuent l’expression du ligand CD70 sur les DC, de manière dépendante de son récepteur CD27. Ensuite, nous nous sommes intéressés à une deuxième population de lymphocytes T régulateurs, les lymphocytes Treg ICOShigh induits in vivo par le traitement avec l’anticorps anti-CTLA-4. Dans le cadre d’une colite induite par l’agent alkylant TNBS et mettant en jeu une réponse Th1, cette population de lymphocytes Treg amplifiée par le traitement à l’anticorps anti-CTLA-4 régule la réponse immune via la cytokine anti-inflammatoire IL-10 et l’enzyme immunosuppressive IDO (Article 2). Ainsi, les résultats obtenus nous ont permis de répondre à notre objectif et de définir certains mécanismes de suppression par les lymphocytes Treg naturels et les lymphocytes Treg induits. Dans la dernière partie de ce travail, nous avons cherché à comparer les populations de lymphocytes Treg naturels et ICOShigh présentes dans l’intestin d’une souris naïve. Une analyse transcriptomique a révélé que ces deux populations s’opposent sur les plans phénotypique et fonctionnel. Nous proposons un modèle dans lequel les deux populations de lymphocytes Treg agiraient en synergie pour maintenir l’homéostasie intestinale. Les lymphocytes Treg ICOShigh différenciés au niveau local et continuellement activés contrôleraient la réponse inflammatoire associée à la présence de la flore commensale. Les lymphocytes Treg naturels, en quiescence dans les ganglions mésentériques, n’interviendraient qu’en cas d’infection par des pathogènes. L’étude des lymphocytes T régulateurs soulève un certain nombre de concepts clés de l’immunité : la spécificité des réponses, la distinction entre les microorganismes commensaux et pathogènes… Mieux connaître les lymphocytes Treg dans un modèle murin permettra de mieux comprendre les réponses inflammatoires intestinales chroniques observées chez l'homme et d’envisager, à terme, de nouveaux traitements<br>An immune response is complex and implies numerous sequential events. It is regulated by different mechanisms, among which regulatory T cells maintain peripheral tolerance and control adaptive immune responses. Regulatory T cells (Tregs) are very heterogeneous and suppress immune responses through different mechanisms, still under investigation. They can inhibit T cell activation directly or through the modulation of dendritic cell function, depending on their nature and the tissular context. In a dendritic cell-mediated immunization model, naturally occurring regulatory T cells selectively control the priming of antigen-specific Th1/CTL responses. Our goal was to define the potential actors of this control, targeted by natural regulatory T cells. Using the PC61 antibody which targets and depletes these cells, we showed that the costimulation ligand CD70 plays a key role in their control of Th1/CTL responses (first article). We showed that mainly IL-12 provokes Th1 development in normal conditions, wheras CD70 plays a major role in priming Th1 responses in the absence of natural Tregs. This pathway can be operational if regulatory T cells are destabilized or even depleted, for example during some infections. We showed that natural Tregs downregulate CD70 expression on the surface of DCs. Next, we focused on another regulatory T cell population, induced in vivo by the anti-CTLA-4 mAb treatment. In a model of pro-Th1 colitis, induced by the alkylating agent TNBS, these ICOShigh regulatory T cells exert an IL-10 and IDO-dependant control over the immune response (second article). Thus, we succeeded in determining some control mechanisms of the immune response targeted by two populations of regulatory T cells. Finally, we compared two regulatory T cell populations: naturally occurring regulatory T cells and ICOShigh regulatory T cells from the intestines of naïve mice. A transcriptional analysis revealed two populations phenotypically and functionally distinct. We proposed a model in which these populations act synergistically and both maintain intestinal homeostasis. ICOShigh regulatory T cells might control commensal gut flora-specific inflammatory responses and quiescent natural regulatory T cells from mesenteric lymph nodes might control potential pathogen infections. As a conclusion, this study raises some immunological issues: specificity of immune responses, distinction between commensal and pathogenic microorganisms… A better knowledge of these regulatory populations will lead to a better understanding of human intestinal responses and in the medium term will lead to new therapeutic approaches and tools

La réponse immune anti-tumorale naturelle est contrecarrée par différents mécanismes d'échappement de la tumeur au système immunitaire dont le recrutement de lymphocytes T régulateurs (LTreg) inhibant les réponses LT-CD8+ anti-tumorales notamment. La vaccination anti-tumorale cherche donc à induire des réponses LTCD8 tout en bloquant ces LTreg. J'ai analysé deux nouvelles stratégies d'inhibition de cette population par un antagoniste de CCR4 ou un antiangiogénique, le sunitinib. L'antagoniste de CCR4, associé à une vaccination, inhibe l'activité des LTreg et permet l'induction de LT-CD8 contre différents antigènes du soi. Chez des patients atteints de cancers du rein métastasiques, le sunitinib entraine une diminution significative des LTreg corrélée à la survie globale. Les LTreg représentent un biomarqueur potentiel de suivi de la réponse au traitement antiangiogénique. L'intérêt serait d'associer ces molécules à une stratégie de vaccination thérapeutique anti-tumorale<br>Natural anti-tumor immune response is inhibited by different immunosuppresive mechanisms such as intratumor regulatory T cell recruitment which inhibits anti-tumor CD8+ T cell responses and inhibit LTreg. I analysed two novel molecules which inhibit LTreg: a CCR4 antagonist and an antiangiogenic molecule, Sunitinib. The CCR4 antagonist inhibits LTreg activity and is able to induce CD8+ T cells responses against various selfantigens when it was combined with vaccination. Sunitinib induces significannt LTreg diminution which is correlated with overall survival of patients with metastasic renal carcinoma treated by antiangiogenic therapy. The measurement of LTreg may have a predictive value on antiangiogenic clinical response. These two molecules may endogenous antitumor response and synergize with immunotherapy protocols

Au cours de leur vie, les lymphocytes T subissent plusieurs changements phénotypiques importants: migration vers et à travers les organes lymphoïdes secondaires et passage d’un état quiescent à un état activé. La migration et l’activation sont régulées en partie par l’activité des Rho GTPases, une famille de protéines impliquées dans la régulation de très nombreux processus biologiques. Nous avons identifié le produit du gène c6orf32 comme un partenaire des Rho GTPases. Cette protéine n’est que peu décrite dans la littérature et ne présente aucun motif consensus. Par ailleurs, elle n’avait fait l’objet d’aucune étude dans le système immunitaire. Nous avons montré que cette protéine agissait en tant qu’inhibiteur des voies de signalisation contrôlées par la Rho GTPase RhoA. Le niveau d’expression de c6orf32 affecte la capacité des cellules à répondre à un signal migratoire (activation de CCR7) ou activateur (engagement du TCR). L’ampleur des réponses n’est pas affectée, mais la taille de la sous-population répondeuse varie. Cette protéine contribue donc à fixer le seuil de sensibilité des cellules aux stimuli. Nous avons montré que l’expression du gène c6orf32 était contrôlée par les facteurs de transcription FoxOs, dont l’activité est réprimée au moment de l’activation lymphocytaire. La présence du produit de c6orf32 est donc associée à un phénotype quiescent. Des approches biochimiques nous ont permis de montrer que la protéine codée par c6orf32 se fixait directement et diminuait la quantité de RhoA en conformation active présent dans les cellules. C’est pourquoi nous avons baptisé cette protéine, FINROD (FoxOs-Induced RhoA Down-Modulator)<br>In the course of their lifes, T cells undergo many phenotypic changes. They adopt a migratory behavior to and through secondary lymphoid organs, and switch upon infection from a resting to an activated state. Migration and activation are partly regulated by Rho GTPases. They form a family of proteins whose activity is crucial in the modulation of many biological processes. We have identified the c6orf32 gene product as a partner of Rho GTPases in human lymphocytes. This protein is barely described in the literature and does not display any consensus motifs. We have shown that this protein is an inhibitor of RhoA. The expression level of c6orf32 accordingly modulates the ability of T cells to respond to migratory cues (chemokines) or activation signals (TCR triggering). The magnitude of individual cellular responses is not affected; however, the protein participates in setting the threshold of response of RhoA-dependent pathways. Furthermore, we have shown that the c6orf32 gene was controlled by FoxOs transcription factors, whose activities are repressed after T lymphocytes activation. Therefore, the c6orf32-encoded protein is associated with a resting phenotype. Biochemical studies led us to discover that this protein directly binds to RhoA and subsequently diminishes the amount of active RhoA in cells. Thus, we decided to name it FINROD (FoxOs-induced RhoA Down-modulator)

Dans le travail portant sur l'immunorégulation de la réponse immunitaire dans le modèle expérimental d'asthme, nous avons montré que les basophiles étaient activés par des ARN double brin poly (A:U) et que cette stimulation exacerbait les réponses d'asthme. Nous avons ensuite étudié la modulation de l'asthme en utilisant des agonistes de la voie TLR/IL1R. Les résultats obtenus ont montré que le R848 , agoniste de TLR7 qui induit les réponses immunitaires antivirales de type Th1, et l'IL-33 qui favorise les réponses Th2, activaient les cellules NKT dont la production rapide et modulée des cytokines pourraient avoir un effet modulateur dans l'asthme. Nous avons montré que les cellules NKT avaient une fonction régulatrice sur le développement et l'activité des cellules Th17. Enfin, nous avons décrit les effets protecteurs et suppresseurs induits par le R848 dans le modèle d'asthme et montré que ces effets suppresseurs étaient dépendants des cellules T régulatrices et du TGF-β<br>In our experimental work focusing on the immunoregulation response in a model of asthma, we showed firstly that the basophils were activated by double-stranded RNA poly(A:U) and that this stimulation exacerbated asthmatic responses in vivo. We then investigated the modulation of asthmatic responses using natural and synthetic ligands of TLR/il1r signaling pathway. The results showed that R848, a synthetic TLR7 agonist which promotes Th1 antiviral responses, and IL-33, which is known to favor Th2 responses, activated NKT cells whose rapid and modulated production of cytokines suggested that these cells might have a modulatory effect in asthma. We demonstrated that NKT cells have a regulatory function on development and activity of newly identified Th17 cells. Finally we described the protective and suppressive effects by R848 in the model of asthma and showed that suppression effects were dependent on regulatory T cells and the TGF-β

Depuis 1961 quand Jacques Miller a découvert, presque accidentellement la fonction du thymus, le développement lymphocytaire T a été largement étudié. De nombreuses sous-populations des lymphocytes T comme les T invariants associés aux muqueuses (MAIT) ou les T régulateurs (CD4+ CD25+ Foxp3+) suscitent aujourd’hui un grand intérêt dans le domaine. Alors que le développement des cellules MAIT est peu connu, celui des Treg est controversé. Le but de mes travaux de Thèse de Sciences a été de déterminer quels types cellulaires sont responsables de la sélection/induction intra-thymique de ces deux populations lymphocytaires Tαβ récemment décrites. Pour ce faire nous avons utilisé plusieurs systèmes de culture de l’organe thymique in vitro, certains d’entre eux permettant la manipulation des différents types cellulaires présents dans le thymus. Nous avons d’abord démontré que le développement des cellules MAIT est, en fait, intra-thymique, ainsi qu’indépendant d’antigènes périphériques et des cellules B (bien que les deux soient nécessaires à une phase postérieure d’expansion en périphérie). De plus, nous avons mis en place et optimisé la technique de culture de l’organe thymique reagrégé (RTOC). Les aspects techniques étant établis, nous pourrons dans un futur proche, identifier la cellule qui sélectionne les MAIT dans le thymus. Dans une étude parallèle, nous avons cherché à déterminer la contribution respective des cellules épithéliales médullaires thymiques (mTEC) et des trois sous populations de cellules dendritiques thymiques (TDC) dans l’induction des Treg. Nous avons démontré que les quatre populations cellulaires sont capables d’engager la différentiation de thymocytes en Treg. Cependant, elles le font avec une efficacité très variable, suggérant que leur contribution relative dans un thymus in vivo est différente pour chacune de ces cellules présentatrices d’antigène. De plus nous avons montré que cette différence ne s’expliquait pas par le niveau d’expression des molécules du complexe majeur d’histocompatibilité. Cela suggère qu’une différence autre, sois quantitative ou qualitative, pour l’instant non identifiée, est mise en jeu. Mieux comprendre ce qui permet aux cDCthy d’être les plus adaptées à l’induction des Treg nous permettra aussi d’identifier ce qui déclenche, sur un thymocyte, son engagement vers un Treg<br>Since 1961, when Jacques Miller almost accidentally discovered the function of the thymus, the development of mainstream T cells has been widely studied. A number of smaller populations of T cells, such as mucosal associated invariant T (MAIT) cells and CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatory T (Treg) cells are currently gaining attention in the field. While little is known of MAIT cell development, Treg cell development is somewhat controversial. The purpose of this thesis has been to determine which types of cell are responsible for the intrathymic selection/induction of these two relatively recently discovered αβT cells that are of interest to our laboratory, i. E. MAIT and Treg cells. To do this we used several in vitro thymic organ culture systems, some of them allowing the manipulation of the cell types present in the thymus during development. We showed that MAIT cell development is intrathymic and independent of peripheral antigens or B cells (although they are both needed for a further phase of peripheral expansion). Further, in order to identify the cell that selects MAIT cells in the thymus, we set up the reaggregate thymic organ culture (RTOC) technique. By the time of writing this thesis, the technical aspects of MAIT RTOCs were established. This means that the first key aspects of MAIT cell intrathymic selection should be revealed in the near future. In a parallel study, we set out to determine the relative contribution of medullary thymic epithelial (mTEC) cells and the three types of thymic dendritic cell (TDC) subpopulations to Treg induction and to unify the conflicting results published on the subject by others. We showed that the four populations were all capable of inducing SP4 into Tregs when loaded with the cognate antigen. However, they did it with very different “intensities”, suggesting that the relative contribution to Treg induction in a normal thymus is different for each of these APC populations. We found that Sirpα- conventional DCs that develop intrathymically (here called cDCthy) were the strongest Treg inducer, followed by Sirpα+ recirculatory cDCs (here called cDCrec). PDC and mTECs were weak Treg inducers in our system. Further, we showed that this difference was not explained by the level of MHC expression on each APC, suggesting that some other still unknown quantitative or qualitative difference between cDCthy and the other thymic APCs must be responsible. Understanding what makes cDCthy more suited for Treg induction will also help identifying what needs to be triggered on a thymocyte for Treg-lineage commitment in the thymus

Malgré le statut immunologique particulier du système nerveux central (SNC), l'immunothérapie active représente une approche intéressante dans le traitement des tumeurs cérébrales. Loin d'être immunologiquement muet, le SNC possède même son propre réseau de cellules immunocompétentes spécialisées : les cellules microgliales. D'origine myeloïdes, elles sont capables de jouer le rôle de cellules présentatrices d'antigènes (CPA) après activation et sont idéalement situées pour induire une réponse immunitaire cytotoxique anti-tumorale efficace La manipulation de la microglie pour augmenter les réponses immunes représentent donc une approche thérapeutique particulièrement attractive dans le traitement de ces cancers. Afin de mieux caractériser les cellules microgliales, nous avons développé un modèle de souris rendues aplasique par irradiation, au sein duquel seule la microglie peut jouer le rôle de CPA. Ainsi, nous avons pu observé que dans des conditions adéquates (CpG-ODN, GM-CSF, sCD40L) les cellules microgliales sont douées in vivo d'une activité de présentation antigénique croisée et que celle-ci conduit à l'activation des LT CD8+ spécifique. En parallèle, nous avons évalué un protocole d'immunothérapie active dans un modèle préclinique de tumeur cérébrale basé sur l'implantation stéréotaxique de cellules E. G7-OVA. Ce protocole se base sur l'injection de CpG-ODN, une molécule d'origine microbienne permettant d'activer les cellules du système immunitaire et plus précisément les CPA infiltrant les tumeurs, et sur l'élimination temporaire des lymphocytes T régulateurs, des cellules qui assimilent les antigènes tumoraux à des peptides du soi et conduisent à l'anergie du système immunitaire. Les résultats obtenus montrent que ce traitement induit le rejet de la tumeur pour l'ensemble des souris et que ce rejet est dépendant de la présence des cellules NK (" natural killer ")<br>Despite the particular immune status of the central nervous system (CNS), active immunotherapy represents a promising approach for the treatment of malignant brain tumor. Of myeloid origin, microglia are the major immunocompetent cells of the CNS. They harbour an interesting potential in anti-cancer therapies through their preferential location in cerebral tumors and their antigen presenting cell (APC) activities. In order to better characterization of microglia, we have set up an original protocol, based on the mice body irradiation (except the head), allowing to exclude the involvement of migrating peripheral APC. Results showed that resident microglia cross-present in vivo exogenous Ag and prime naive CD8+ T lymphocytes. Moreover, their Ag cross-presentation activity is potentiated by a multistep activation process, including proinflammatory signals (CpG-ODN and GM-CSF) and sCD40L. At the same time, we evaluated immunotherapy for the treatment of mice brain tumor, based on CpG-ODN injection, a potent APC activator, and regulatory T cells (Treg) depletion, which are described to favour tumor escape. Results showed that applied-protocol allows the tumor rejection in all mice and that NK cells are essential for tumor rejection

Le diabète de type 1 (DT1) est une maladie multifactorielle pour laquelle des facteurs environnementaux associés à un terrain génétique de prédisposition sont responsables de la destruction auto-immune des cellules |3 insulino-sécrétrices par des lymphocytes T. Au locus Iddô du chromosome 6 murin, les allèles NOD confèrent à la lignée témoin NOD (CO) une susceptibilité au DT1 alors que les allèles C3H/HeJ confèrent une protection contre la maladie à la lignée congénique NOD. C3H 6. VHI (lignée 6. YIII). Mes résultats suggèrent que plusieurs facteurs concourent à une meilleure régulation de la réaction auto-immune chez la lignée 6. VTH : (i) une activité suppressive in vivo accrue des cellules T régulatrices, (ii) une diminution de la voie de signalisation TLR1 conduisant à l'altération des signaux de costimulation au niveau des cellules T et à la diminution de l'expression de cytokines pro-inflammatoires par les macrophages, (iii) une altération du développement des cellules iNKT CD4+<br>Type 1 diabetes (T1D) is a multifactotial disease: some environmental factors in association with susceptible genetic background lead to the destruction of insuline-producing {J cells by autoreactive T cells. NOD alleles at the Idd6 locus (murine chromosome 6) confer susceptibility to T1D whereas C3H/HeJ alleles in NOD genetic background confer resistance to the disease. Our studies of the congenic mouse strain NOD. C3H 6. VTH (strain 6. VHI) showed that some factors are responsible of its diabetes resistance : (i) a higher suppressive function of regulatory T cells, (ii) the downregulation of Tlrl gene expression leads to reduced costimulatory signals on T cells and to the downregulation of pro-inflammatory cytokines genes expression by macrophages. Genetic(s) factor(s) involved in this phenotype localize at the Idd6. 3 locus (iii) a two fold reduction of iNKT CD4+ cells subset, restricted to the Idd6. 2 locus

Le rôle pathogène des lymphocytes B dans les maladies auto-immunes est bien établi. Cependant, leur déplétion n’est pas toujours bénéfique, suggérant qu’ils peuvent aussi exercer un rôle protecteur. Il existe en effet plusieurs sous-populations de cellules B régulatrices (Breg) dont on connaît encore mal le développement. On ignore si elles dérivent d’un précurseur unique ou de précurseurs divers et si de tels précurseurs présentent déjà eux-mêmes des propriétés tolérogènes. Le présent travail a permis de caractériser une nouvelle population de progéniteurs hématopoïétiques immunorégulateurs émergeant sous l’influence de signaux moléculaires infectieux. Nous montrons qu’au sein d’une moelle osseuse de souris, l’activation des Toll-like récepteurs par la voie de signalisation impliquant l’adaptateur MyD88 entraîne in vitro comme in vivo l’émergence de progéniteurs pro-B tolérogènes. Après transfert adoptif, ces progéniteurs se différencient exclusivement en précurseurs transitionnels de type 2 des cellules B de la zone marginale de la rate (T2-MZP-B), l’un des sous-types de Breg les plus efficaces. Nous avons nommé ces progéniteurs induits, innés, inflammatoires, les « iproBs ». L’interféron gamma produit par les lymphocytes T effecteurs activés induit l’expression de la molécule de mort Fas-L sur les i-proBs, les rendant capables de tuer par apoptose ces mêmes effecteurs T. De plus les iproBs orientent vers un profil Th1 les effecteurs T épargnés, y augmentent les niveaux d’expression du facteur de transcription éomésodermine et réduisent l’expression d’ICOS, ce qui conduit à une diminution très importante de la production d’interleukine-21 (IL-21). Chez la souris Non Obese Diabetic qui développe un diabète spontané pour lequel l’IL-21 constitue un facteur de prédisposition, le transfert de moins de cent mille iproBs syngéniques suffit à protéger durablement de l’émergence de la maladie. Ces résultats montrent pour la première fois qu’à côté et en amont des Breg matures peuvent émerger en conditions infectieuses des sous-populations de progéniteurs hématopoïétiques tels que les iproBs, à la fois tueurs et immunorégulateurs, donnant ensuite par différenciation des Breg plus matures, ici les T2-MZP-B, également tueurs. En produisant de telles populations de progéniteurs hématopoïétiques tolérogènes, l’hématopoïèse adaptative constitue une des réponses les plus précoces de l’organisme pour le contrôle de la transition entre immunité innée et immunité adaptative, permettant de réguler l’inflammation et l’autoimmunité<br>B lymphocytes play both pathogenetic and protective role in autoimmune diseases. Several regulatory B cell (Breg) populations exist whose development remains so far elusive. What are their progenitors and whether they exhibit themselves tolerogenic properties remains to be investigated. We herein describe a novel tolerogenic population of pro-B cell progenitors, emerging in vitro as well as in vivo within the bone marrow upon activation of Toll-like receptors. We named those induced, innate, inflammatory progenitors "iproBs". Interferon-gamma released by activated effector T cells (Teff) induced the expression of the death molecule FasL at the surface of iproBs; enabling them to kill by apoptosis the Teff. In addition, iproBs dramatically reduced interleukin-21 (IL-21) production by Teff. When adoptively transferred into the Non Obese Diabetic mouse that develops spontaneous type 1 diabetes, less than one hundred thousand iproBs were sufficient to prevent durably disease onset. Our results describe for the first time the emergence in infectious settings of a sub-population of hematopoietic progenitors such as iproBs with both killer and immunoregulatory properties. Their regulatory potential is further prolonged by their in vivo differenciation into more mature, still killer Bregs, in this case splenic transitional type 2 marginal zone precursor B cells that represent one of the most efficient Breg subtypes

Mon sujet de thèse consiste à étudier le rôle des différentes voies possible à l’interaction CD40/CD40L au cours de la réponse primaire des lymphocytes T CD8 et à caractériser la réponse des lymphocytes T CD8 CD40-/-. Les résultats obtenus jusqu’à présent semblent montrer deux effets à une interaction CD40/CD40L en fonction de la localisation de la molécule CD40 selon le type cellulaire (sur les lymphocytes T CD8 ou sur les cellules présentatrices d’antigène). Le premier effet est la mis en place d’une réponse primaire optimale de la part des lymphocytes T CD8 et est dû à l’expression de CD40 par les cellules présentatrices d’antigène. Le deuxième effet est la génération de la mémoire immunitaire T CD8 au cours de la réponse primaire et est dû à l’expression de CD40 par les lymphocytes T CD8. Nos résultats montrent que l’interaction CD40/CD40L passant par les cellules présentatrices d’antigène envoie les signaux suffisants pour la prolifération et la cytotoxicité de la réponse primaire T CD8. En revanche, l’interaction CD40/CD40L passant par les lymphocytes T CD8 est indispensable à la génération de la mémoire T CD8. Si la déficience en CD40 par les lymphocytes T CD8 n’affecte pas la réponse primaire, ce n’est pas le cas de la réponse secondaire. En effet, dans ce cas, les lymphocytes T CD8 présentent une réponse secondaire altérée. Comparé à une réponse secondaire classique, les lymphocytes T CD8 CD40-/- présentent une amplitude de réponse diminuée et un pic de réponse décalé, une réponse plus proche d’une réponse primaire. Ces cellules présentent également une cytotoxicité et une survie altérées, ainsi qu’une sensibilité aux facteurs immunorégulateurs accrue<br>My thesis project is to study the role of different possible pathways possible for the CD40/CD40L interaction during the primary response of CD8 T cells and to characterize the response of CD8 T cell CD40-/-. The results suggest two CD40/CD40L interaction effects depending on the location of the CD40 molecule expressed on different cell types (on CD8 T cells or on antigen presenting cells). The first effect is to set up an optimal primary response from the CD8 T cells and is due to the expression of CD40 by antigen presenting cells. The second effect is the generation of memory CD8 T cells during the primary response and is due to the expression of CD40 by CD8 T cells. Our results show that the CD40/CD40L interaction via the antigen presenting cells sends signals sufficient for proliferation and cytotoxicity of CD8 primary response. However, the CD40/CD40L interaction via the CD8 T cells is essential for the generation of memory CD8 T cells. If the deficiency of CD40 by CD8 T cells does not affect the primary response, it is not the case of the secondary response. Indeed, in this case, CD8 T cells exhibit altered secondary response. Compared to a classical secondary response, the CD8 T cells CD40-/- exhibit a decreased response amplitude and delayed peak response, a response closer to a primary response. These cells also exhibit impaired cytotoxicity and survival. Finally these cells have a more sensitivity to immunoregulatory factors

Les lymphocytes T régulateurs ( Treg) sont une population de lymphocytes T exprimant les molécules CD4 et CD25 ainsi que le facteur de transcription Foxp3. Les Treg ont la capacité d'inhiber les mymphocytes B, T CD4, T CD8, les NK, ainsi que la maturation des cellules dendritiques. Nous nous sommes intéressés au rôle de cette population cellulaire dans le cadre des pathologies cancéreuses. Nous avons démontré qu'il existe une augmentation du nombre de Treg dans les organes lymphoïdes d'animaux porteurs de tumeurs. La tumeur fabrique un facteur soluble induisant la production de TGF-β par les cellules dendritiques. Ces cellules dendritiques deviennent alors capables d'induire la prolifération des Treg. Chez l'homme il existe aussi une augmentation du nombre de Treg chez les patients porteurs de cancers. Nous avons démontré que ces cellules peuvent contrôler les fonctions NK en diminuant l'expression de NKG2D à la surface des NK. Une augmentation du nombre de Treg aggrave le pronostic des patients porteurs de cancers NK sensibles. Les techniques de déplétions en Treg comme le cyclophosphamide pourraient augmenter l'efficacité de l'immunothérapie des cancers.

La réponse anti-tumorale médiée par les lymphocytes T (LT) est fréquemment mise en défaut. Une raison généralement mise en avant est l’environnement immunosuppresseur de la tumeur. Mon travail de thèse souligne un autre point rarement pris en compte : la localisation des LT dans la tumeur. Ceux-ci se trouvent, le plus souvent, non pas en contact direct avec les cellules tumorales mais dans le stroma qui entoure les îlots tumoraux. Pour étudier les facteurs contrôlant la distribution et la migration des LT dans les tumeurs, nous avons visualisé par imagerie dynamique la mobilité de LT fluorescents dans des tranches de tissu vivant, réalisées à partir de biopsies tumorales fraîches de patients atteints de cancer pulmonaire, et d’un modèle de tumeurs humaines développées dans des souris immunodéficientes. Les LT déposés sur les tranches de tumeur migrent préférentiellement dans le stroma. Nos résultats révèlent que l’organisation des fibres de la matrice extracellulaire joue un rôle clé dans le contrôle de la migration des LT dans les tumeurs, par leur densité et leur disposition. Les LT migrent peu dans les zones riches fibrillaire dense, tandis qu’une mobilité active, en partie dépendante des chimiokines, est observée dans les régions peu denses en fibres. Les fibres disposées parallèlement à l’interface entre le stroma et les îlots tumoraux dictent la migration des LT et limitent ainsi leur accès aux régions tumorales. Nos résultats apportent un éclairage nouveau sur l’importance des fibres matricielles du stroma qui, en contrôlant l’infiltration T dans les îlots tumoraux, régulent ainsi l’immunité anti-tumorale<br>Tumor cells express antigens recognized by T cells and are thus able to trigger an anti-tumor adaptive immune response. However, these responses often turn out to be mostly ineffective. The tumor immunosuppressive environment is often pointed to account for such failures of T cell anti-tumor functions. My PhD work emphasizes another explanatory factor, commonly overlooked, which is T cell distribution within tumors. In most carcinomas, T cells are indeed preferentially found in the peri-tumoral stroma rather than in tumor nests. As tumor cells are considered as their main targets, the uneven distribution of T cells within tumors could restrict their anti-tumor functions and represent a major obstacle to T cell-based immunotherapy. My PhD project consisted in studying elements that control T cell distribution and migration within solid tumors. To that end, we used a real-time imaging approach to visualize recruitment and mobility of fluorescent T cells in viable slices of human lung tumors. Slices were made from fresh tumor biopsies of lung cancer patients and from a xenograft model of human tumors developed in immunodeficient mice. Overlaid T cells behave like their endogenous counterparts and preferentially migrate into the stroma. Our results reveal that matrix fibers organization plays a key role in controlling T cell positioning and migration within tumors. Active T cell motility, partly dependent on chemokines, is observed in loose fibronectin regions, whereas T cells poorly migrate in dense matrix areas. Besides, parallel fibers around tumor epithelial cell region dictate the migratory trajectory of T cells and restrict them from entering tumor islets. In conclusion, our results shed light on the importance of stromal matrix fibers which regulate anti-tumor immunity by controlling T cell infiltration into tumor nests

Actuellement, les études en transplantation ont pour objectif d'induire une tolérance spécifique du donneur à long terme. Notre équipe a montré dans un modèle d'allotransplantation cardiaque chez le rat que le blocage de la voie CD40/CD40L induit des lymphocytes T régulateurs (Tregs) CD8+CD45RClow spécifiques du donneur et avec un fort potentiel suppresseur. L'importance de l'interaction du récepteur des Tregs (TCR) dans leur développement et leur fonction reste mal connue. Ces travaux de thèse ont eu pour objectif d'étudier la spécificité antigénique et le répertoire TCR associé des Tregs CD8+. Nous avons démontré pour la première fois en transplantation que les Tregs CD8+CD45RClow induits reconnaissent un allopeptide de 15 acides aminés, dérivé d'une molécule du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de classe II du donneur. Ce peptide active les Tregs in vitro en présence de cellules dendritiques plasmacytoïdes et stimule in vivo, et sans autre traitement, la génération et/ou la fonction de Tregs CD8+ spécifiques, qui inhibent les réponses immunes anti-donneur et induisent une tolérance chez des receveurs naïfs transplantés. De plus, le complexe CMH du soi/allopeptide identifié est reconnu par des TCRs sélectionnés pour les chaînes Vβ11 et Vβ18 exprimées par les Tregs, présentant un répertoire privé et assez divers dans la rate, mais plus restreint dans le greffon, et assurant une inhibition efficace des réponses alloimmunes. Ces travaux ont permis d'approfondir les connaissances sur la biologie des Tregs CD8+ chez le rat et mettent en évidence le potentiel thérapeutique des Tregs spécifiques d'antigènes dans le contrôle des rejets aigu et chronique d'allogreffe<br>Currently, a major goal of transplantation research is to induce long term donor-specific tolerance. Our team has already shown in a rat cardiac allotransplantation model that CD40/CD40L costimulation blockade induces donor-specific CD8+CD45RClow regulatory T cells (Tregs), with potent suppressive activity. The requirement for a TCR interaction in the development and function of Tregs remains unclear. The purpose of this study was to characterize the antigenic specificity and the related CD8+ Tregs' TCR repertoire. We have demonstrated for the first time in transplantation that induced CD8+ Tregs recognize a 15 amino acids allopeptide derived from a donor major histocompatibility complex class II (MHC) molecule. This peptide activates Tregs in vitro in presence of plasmacytoid dendritic cells and supports in vivo, without additional treatment, specific CD8+ Tregs generation and/or function, that in turn, inhibit anti-donor immune responses allowing establishement of tolerance in naive transplanted recipients. In addition, the self-MHC/allopeptide complex identified is recognized by Vβ11 and Vβ18-specific Tregs' TCRs displaying a private and diverse repertoire in the spleen, but restricted in the graft, that ensures effective suppression of alloreactive immune responses. This work has increased our knowledge of the biology of CD8+ Tregs in the rat and highlights the therapeutic potential of antigen-specific Tregs in the control of acute and chronic allograft rejection

Les cellules dendritiques (DC) sont les seules présentatrices d'antigènes capables d'activer les lymphocytes T (LT) naïfs. Lors de l'infection par le VIH, elles sont cruciales pour initier les réponses immunitaires adaptatives indispensables au contrôle de la réplication virale. Nous avons mis en évidence un transfert d'antigènes du VIH aux DC, depuis des LT CD4 infectés vivants. Ces antigènes sont aussi efficacement présentés aux LT CD8 que ceux issus de débris apoptotiques, et plus efficacement que ceux du VIH libre. Nous avons aussi montré l'antigénicité de DC transfectées par des ARNm de gag du VIH. Ces résultats permettent d'envisager des thérapies contre les formes provirales issues des cellules quiescentes qui sont des réservoirs viraux difficiles à éradiquer. Dans un but de vaccination préventive, nous avons comparé des vecteurs vaccinaux rougeole, MVA, Ad5 et BCG, codant le gène gag du VIH. Nous montrons que les vecteurs viraux induisent une maturation incomplète des DC, tandis que le BCG induit une maturation complète, mais beaucoup d'IL1O. Nous avons alors restauré les propriétés déficientes de ces vecteurs par des agonistes des récepteurs de type Toll. Enfin nous montrons que les DC plasmacytoïdes (pDC) humaines peuvent effectuer la présentation croisée d'un vaccin lipopeptidique, et d'antigènes issus de LT CD4 infectés apoptotiques. La présentation croisée par les pDC pourrait conduire à la tolérance en l'absence d'une stimulation appropriée. Nous montrons qu'une stimulation par le virus de la grippe augmente les réponses effectrices induites par la présentation croisée des pDC. Ces résultats devraient améliorer les protocoles de vaccination contre le VIH<br>Dendritic cells (DC) are the only antigen presenting cells able to stimulate naive T lymphocytes. Upon HIV infection, they are crucial to initiate adaptive immune responses that control viral replication. We have shown the transfer of HIV antigens to DC from live infected CD4 T cells. These antigens were presented as efficiently as those from apoptotic infected CD4 T cells and much more effïciently than those from free HIV particles. We also showed the antigenic potential of HTV gag mRNA transfected DC. These results may be important in developing new therapies against provirus from resting cells that represent an important viral reservoir difficult to eradicate. To improve preventive vaccination, we compared the vaccinal vectors MV (measles), MVA, Ad5 and BCG, all encoding the HlV-1lai gag gene. We showed that the viral vectors induced an incomplete DC maturation, whereas BCG induces complete maturation but high levels of IL 10. We were able to restore these missing properties by using specific TLR agonists. Finally, we demonstrated that plasmacytoid dendritic cells (pDC) can cross-present a vaccinal lipopeptide and HIV antigens from infected, apoptotic CD4 T cells. Cross-presentation by pDC might lead to tolerance in vivo in the absence of an appropriate stimulation. We show here that stimulation with Influenza virus enhances effector responses induced by cross presentation by pDC. These results will hopefully be useful in designing new vaccination strategies against HIV

Les cellules MAIT (mucosal Associated Invariant T) sont des lymphocytes T dits innés qui expriment un répertoire de récepteurs à l’antigène restreint : une chaine α du TCR (iVα19-Jα33 chez la souris et iVα7. 2-Jα33 chez l’homme) associé à un nombre limité de chaine β (principalement Vβ6, Vβ8 chez la souris et Vβ2, Vβ13 chez l’homme). Les cellules MAIT sont sélectionnées par MR1 qui est une molécule du CMH de classe I non classique très conservée (90% d’homologie entre l’homme et la souris). De part leur développement spécifique, ces cellules ont des capacités particulières telles que leur localisation tissulaire, la taille clonale élevée et des capacités effectrices immédiates. Les cellules MAIT ont une réactivité antimicrobienne mais leurs fonctions restent à définir. Chez l’homme, les cellules MAIT sont des lymphocytes T CD161hiIL-18Rα+. Ces cellules présentent un phénotype mémoire effecteur (CD45RA-CD45RO+CD95hiCD62Llo) et l’expression de leurs récepteurs aux chimiokines (CCR9intCCR7-CCR5hiCXCR6hiCCR6hi) indique une localisation préférentielle dans les tissus et particulièrement dans l’intestin et le foie dans lequel les cellules MAIT représentent entre 20 et 45% des lymphocytes T. Les cellules MAIT expriment ABCB1 qui leur confère une résistance à la chimiothérapie et qui pourrait également leur permettre de résister aux xénobiotiques sécrétés par les bactéries intestinales. La plupart des cellules MAIT sont quiescentes et ne prolifèrent pas de façon extensive après stimulation. D’autre part, les cellules MAIT présentent des fonctions effectrices différentes selon le contexte de stimulation. Les cellules MAIT CD8-CD4- et CD8+ sont capables de sécréter de l’IFNγ, du TNFα après stimulation par des billes recouvertes d’anticorps anti-CD3 et anti-CD28 ou par des cellules présentatrices d’antigènes infectées par des bactéries. Cependant elles sécrètent également de l’IL-2 et de l’IL-17 après stimulation par la PMA-Ionomycine. Les cellules MAIT expriment également la granulysine et la perforine et dégranulent après stimulation par la PMA-Ionomycine. Par conséquent, les cellules MAIT présentent des capacités cytotoxiques, en induisant la lyse de cellules cibles infectées par des bactéries (monocytes, HELA-MR1 et HT10-80-MR1). Ainsi les cellules MAIT présentent différentes capacités fonctionnelles qui pourraient dépendre du type de cellules présentatrices d’antigène, de la nature et de l’intensité de la costimulation. Ces capacités pourraient leur permettre de jouer différents rôles dans l’immunité des muqueuses<br>Mucosal associated Invariant T (MAIT) cells are an innate like T lymphocyte population that express an antigen receptors with a very limited diversity. MAIT cells are selected on the strikingly conserved MHC-Ib molecule MR1. They follow a specific ontogenic pathway, which imparts them with selected tissue homing capacity, an elevated clonal size and immediate effector functions. MAIT cells have anti-microbial specificity but their functions remain unclear. MAIT cells are CD161hiIL-18Ra+ T-cells. We now show that they display an effector-memory phénotype and their chemokine receptor expression pattern indicates preferential homing to tissues and particularly to the intestine and the liver. MAIT cells can represent up to 45 % of the liver lymphocytes. MAIT cells express the multidrug resistance transporter (ABCB1), which confers resistance to chemotherapy. These features might also allow them to resist to xenobiotics secreted by gut bacteria. Most MAIT cells are non-cycling and do not extensively proliferate after stimulation. Nonetheless, MAIT cells display various effector functions depending on the context of this stimulation. MAIT cells secrete IFNg, TNFa and Granzyme B after stimulation with bacteria-infected antigenpresenting cells. However, IL-2 and IL-17 are additionally found after Ionomycine+PMA stimulation. MAIT cells display cytotoxic capacities, inducing the lysis of target cells infected by bacteria. Thus, MAIT cells display various functional capacities depending on the type of antigen-presenting cells and strength of co-stimulation. These features might enable them to react in different types of insults at mucosal surfaces

Les cellules iNKT, une sous-population de cellules T, expriment un TCRαβ très conservé constitué d'une chaîne a invariante et des marqueurs spécifiques des cellules NK. Ils reconnaissent des antigènes glycolipidiques présentés par la molécule de classe I non classique CD1d et sécrètent rapidement de grandes quantités de cytokines variées, ce qui leur permet d'exercer de nombreux effets dans de diverses maladies inflammatoires ou auto-immunes. Dans l'EAE, la protection contre la maladie par les lymphocytes iNKT est associée à une infiltration des cellules iNKT doubles négatives dans le SNC et à une expression locale de CD1d. Cette protection est indépendante de l'expression de CD1d en périphérie. Dans l'ALD, autre pathologie neurodégénérative, les patients ont une fréquence réduite de lymphocytes iNKT et une expression diminuée de CD1d à la surface des cellules B. Enfin, les lymphocytes iNKT 17 étant détectés à une fréquence beaucoup plus élevée chez la souris NOD que chez la souris C57BL/6, nous avons cherché à identifier leur rôle dans le diabète de type 1<br>INKT cells are a subpopulation of T cells that express a highly conserved αβTCR characterized by an invariant a chain, along with specific markers of NK cells. They recognize glycolipid antigens presented by the non classical class I molecule CD1d and secrete rapidly large amounts of various cytokines, which enables them to exert numerous effects in various inflammatory or autoimmune diseases. In EAE, the prevention from the development of the disease by iNKT lymphocytes is associated with an infiltration of double negative iNKT cells in the CNS and a local expression of CDld molecule. This prevention is independent from the peripheral CD1d expression. In ALD, another neurodegenerative pathology, patients have a lower frequency of iNKT cells and a decreased expression of CD1d on the surface of B cells. Finally, we were interested in identifying the role of iNKT 17 lymphocytes in type 1 diabetes, these lymphocytes being detected in a higher frequency in NOD mice than in C57BL/6 mice

Insulin-degrading enzyme (IDE) est une metallo-protéase avec une forte affinité pour l'insuline. Les souris déficients en IDE sur fond B6 montrent un niveau élevé d'insuline et une intolérance pour le glucose. Ces phénotypes sont associés au diabète de type 2. Dans un modèle murin du diabète de type 1, un phénotype exceptionnel a été mis en évidence dans des souris invalidées pour le gène IDE: une baisse de l'incidence du diabète auto-immun et de l'infiltrat dans les cellules bêta du pancréas. En analysant ces souris protégées, nous avons pu observer une réduction d'activation et du nombre de lymphocytes T auto-immuns. Des transferts de cellules effectrices dans des souris Rag KO ont montré que les cellules issues de souris IDE KO induisent un diabète retardé. En outre la réponse des cellules T CD8+ aux peptides immunodominants était réduite dans les souris IDE KO. Une différence dans la réponse cytokinique a été également observée. Des PBMCs activés des souris IDE KO sécrètent plus d'IL-4 anti-inflammatoire et moins de TNF-alpha proinflammatoire. Des résultats analogues ont été observés pour les lymphocytes infiltrants et les splénocytes. Le mécanisme expliquant ces résultats sont à confirmer. La déficience en IDE pourrait changer la présentation antigénique et la sélection négative des cellules T autoréactives dans le thymus. La protection contre le diabète pourrait alternativement s'expliquer par une réduction de la présentation antigénique de l'épitope PI 15-23 par des cellules bêta ou les cellules dendritiques expliquer. Il est possible que IDE joue un rôle dans le metabolism et la réponse au stress<br>Insulin-degrading enzyme (IDE) is a metalloprotease with high affinity for insulin. IDE knockout mice on thé C57BL/6 genetic background show increased sérum insulin levels and glucose intolérance, findings associated with type 2 diabètes. To investigate thé rôle of IDE in type I diabètes, IDE knockout was bred to thé NOD background. IDE déficient NOD mice were found to be protected from diabètes and also displayed reduced levels of insulitis. To explore thé mechanism of protection, we performed transfers of splenic effector T cells from IDE ko and wt mice to Rag2 ko NOD mice. Effector T cells from IDE wt mice transfered diabètes more rapidly then enriched effector cells from IDE knockout mice, suggesting a réduction in thé number and/or functional activity of diabetogenic T cells in IDE déficient mice. Moreover, thé CD8+ T cell responses to immunodominant bêta cell epitopes derived from proinsulin and IGRP were reduced in IDE ko mice. Additionally a différence in thé cytokine répertoire was observed: activated PBMC from IDE knockout mice secret more anti-inflammatory IL-4 and less pro-inflammatory TNF-a compared to IDE wildtype mice. Analogous results were obtained with islet-infiltrating lymphocytes and splenocytes. The mechanism underlying thèse findings remains to be clarified. IDE deficiency could change antigen présentation and négative sélection of autoreactive T cells by thymic epithelial cells. Alternatively, reduced présentation of thé immunodominant CD8+ T cell epitope proinsulin 615-23 by bêta cells or cross presenting LN dendritic cells is conceivable. It is also possible that IDE plays a rôle in thé metabolism and/or stress response of bêta cells

La sous unité B de la toxine de Shiga (STxB) est un vecteur vaccinal ciblant les cellules dendritiques. Des réponses lymphocytaires T-CD4 et CD8 ainsi que la production d'anticorps ont été observées après vaccination de souris avec des protéines chimériques associant STxB couplée à différents antigènes. STxB ne favorisant pas la maturation des cellules dendritiques, nous avons évalué l'efficacité vaccinale de STxB mélangée à différents adjuvants. Ainsi, STxB couplée à différents antigènes et associée à l'aGalCer, glycolipide activant les cellules NKT, permet d'augmenter la fréquence de LT-CD8 et de réduire de façon drastique les doses d'antigènes. Cette combinaison vaccinale a également permis de rompre une tolérance à des antigènes du soi et de protéger contre le développement d'une infection virale. Par ailleurs, nous avons montré que la voie d'immunisation influait sur le type de réponses immunitaires (humorale muqueuse, cellulaire systémique) observées après l'utilisation de STxB<br>The Shiga toxin subunit B (STxB) is a vaccinal vector targeting dendritic cells. CD4+ and CD8+ T cells responses as well as antibody production were observed after vaccination of mice with chimeric proteins composed of STxB coupled with different antigens. STxB doesn't favour maturation of dendritic cells, thus we assessed the STxB efficiency as vector in combination with different adjuvants. STxB coupled with different antigens and mixed with aGalCer, a glycolipide activating NKT cells, resulted in an increase CD8+ T cells frequency and it also allowed the dramaticaly reduction of antigen doses. This vaccine also permitted to break tolerance to self-antigens and to protect against the development of viral infection. In addition, we have showed that the route of immunization had an influence on the type of immune response (mucosal humoral response jind cellular^ systemic response) observed after the use of STxB

Les lymphocytes NK participent à la réponse immunitaire innée. Leur activation résulte de l'action coordonnée de récepteurs activateurs et inhibiteurs. Quelques récepteurs NK (NKR) activateurs sont présents à la surface des cellules T CD8+, où ils peuvent fournir un signal de costimulation. L'expansion anormale de lymphocytes T CD4+CD28-NKR+ a été notée en pathologie, notamment au cours de la maladie de Wegener (MW). Le but de notre travail a été de mieux caractériser ces cellules au cours de la MW. Nos résultats mettent en évidence une population de lymphocytes T CD4+CD28-NKR+ au cours de la MW, ayant un phénotype et des capacités « NK-like ». Cette population pourrait jouer une rôle délétère, en exerçant sa cytotoxicité contre les cellules endothéliales et en participant à la vascularite. L'activité cytotoxique de ces cellules pourrait être liée à l'expression anormale de la molécule adaptatrice DAP12, normalement absente chez les CD4 et semble s'expandre sous le contrôle de l'IL-15<br>NK cells participate in innate immune response. Their activation depends on coordonate stimulation of activating and inhibitory receptors. Some activating NK receptors (NKR) are also present on CD8+T cells, where they play the role of co stimulatory molecules. Abnormal expression of activating NKR have been described on CD4+CD28- T cells in pathologies such as Wegener's granulomatosis (WG). Our goal in this work was to further characterize those cells. Our results show the aberrant expansion of CD4+CD28-NKR+ T cells in WG patients, with « NK-like » phenotype and properties. This population could be delerious to vascular endothelial cells and participate to vasculitis. Cytotoxicity could be consecutive to abnormal expression of DAP12, an adaptator molecule that is usually not expressed on CD4+T cells. Those unusual cells develop under abnormal IL-15 signaling