Dissertations / Theses on the topic 'Malaria contr'

Deuxième pays le plus endémique pour le paludisme au monde, la république démocratique du Congo (RDC) a adopté officiellement l’initiative Faire Reculer le Paludisme en 2001 et depuis, aligne sa politique de lutte contre le paludisme sur les directives de l’OMS dont les orientations les plus récentes consistent en 3 stratégies :[1] assurer aux malades un accès rapide à un traitement efficace et abordable, [2] assurer aux personnes exposées au risque, notamment les jeunes enfants et les femmes enceintes, l’association la plus adaptée de mesures de protection au niveau personnel et communautaire et [3] donner l’accès, aux femmes enceintes exposées au risque, à des traitements préventifs.<p>Afin de contribuer à l’amélioration de la lutte antipaludique en RDC, le travail a été réalisé en 3 parties :une portant sur la pertinence du traitement préventif intermittent à la Sulfadoxine-Pyriméthamine (TPI-SP) chez la femme enceinte en contexte d’augmentation de la résistance du parasite, une 2e sur les facteurs déterminants l’adhésion des prestataires de soins, des vendeurs des médicaments et des patients à association Artesunate-Amodiaquine (AS-AQ) et une 3e décrivant le paludisme sévère chez l’enfant.<p>La 1ère partie du travail portant sur le TPI-SP a été réalisée en 2 temps. La première approche a consisté en une analyse rétrospective des poids de naissance des nouveau-nés en fonction de la prise du TPI-SP par les mères dans 3 maternités en 2007 où les niveaux de résistance à la SP étaient différents. La deuxième approche, comparait l’effet du traitement préventif intermittent à la Sulfadoxine-Pyriméthamine en 1998/1999 et en 2007 à la prophylaxie à base de chloroquine en 1998/1999 à l’Est de la RDC dans un milieu où la résistance à la Sulfadoxine-Pyriméthamine avait accru considérablement.<p>Dans les régions où la résistance du parasite était de faible (Mikalayi: 1,6% d’échec thérapeutique chez l’enfant) à modéré (Kisangani: 21,7% d’échec thérapeutique chez l’enfant), le TPI-SP réduit le risque de faible poids à la naissance, à Kisangani (OR ajusté :0,15; IC95%, 0,05-0.46) et à Mikalayi (OR ajusté :0,12; IC95%, 0,01-0,89). Dans ces 2 sites, le poids de naissance moyen des Nouveau-nés était plus élevé pour les mères ayant reçu 2 doses par rapport à celui des Nouveau-nés des mères en ayant reçu une seule ou aucune (P<0.001). A Rutshuru où la résistance était élevée (60,6% d’échec thérapeutique chez l’enfant), l’effet du TPI-SP semble moindre: en 2007 - en comparaison dose-dépendante (2 doses Vs 0-1 dose) du poids à la naissance des nouveau-nés en 2007 pour les mères sous TPI-SP – on observait un effet bénéfique chez les primigestes et non chez les multigestes et une légère régression du gain pondéral [(53,9g ( P=0,027) pour les nouveau-nés des mères sous SP en 2007 Vs 70,2g (P=0,003) pour ceux des mères sous SP en 1998/1999 par rapport à ceux des mères sous chloroquine en 1998/1999. Néanmoins, le TPI-SP reste efficace en 2007 comme en 1998-1999 par rapport à la prophylaxie à base de chloroquine en 1998/1999 (poids moyen supérieur et réduction du risque de PPN pour les 2 groupes sous SP). <p>La 2e partie, traitait des déterminants de l’adhésion des prestataires et des patients au nouveau médicament recommandé par la politique nationale pour la prise en charge des cas de paludisme simple ( AS-AQ ) en 2 enquêtes transversales :une étude préliminaire qui a été réalisée dans les CS fonctionnels de Kisangani en avril 2008 et une étude étendue à 3 des 10 districts sanitaires de la province Orientale de mars à juin 2009. Ces 2 enquêtes ont ensuite servi à une analyse systémique des facteurs d’adhésion des prestataires de soins à l’AS-AQ basée sur le modèle de diagnostic de Green et Kreuter et les étapes de changement de comportement de PROCHASKA pour la planification des interventions de promotion.<p>Le recours à l’AS-AQ pour le traitement du paludisme simple progresse (41% et 69% des prescriptions dans les services sanitaires respectivement 3 et 4 ans après le changement de politique national de lutte antipaludique), mais reste inférieur à la cible d’au moins 80% visée par la politique nationale. Malgré la croyance en l’efficacité du nouveau traitement, son utilisation effective rencontre comme principaux obstacles, selon l’avis des prestataires de soins, des vendeurs de médicaments et des patients, sa faible disponibilité, son coût élevé, la présence sur le marché d’antipaludiques retirés du protocole national de traitement et de l’AS-AQ de mauvaise qualité à un coût moindre et la crainte des effets indésirables. Tandis que les facteurs incitatifs à son utilisation sont, l’efficacité thérapeutique perçue de l’AS-AQ, la présence du médicament dans les formations sanitaires, la recommandation de son utilisation par les directives du Ministère de la Santé (notamment sous forme de guides techniques), la formation et la supervision des prestataires, l’intention de prescrire l’AS-AQ aux patients ou d’en prendre soi-même, une plus longue durée de consultation, le fait de fournir des explications aux patients, de travailler dans le milieu rural.<p>La dernière partie du travail consistait en une étude prospective menée du 1er janvier 2010 au 28 février 2011 décrivant le diagnostic et la prise en charge du paludisme grave chez les enfants admis dans 2 HGR de Kisangani.<p>Le paludisme constitue un des principaux motifs d’hospitalisation des enfants en RDC (37,0% à Kisangani) dont l’évaluation est souvent incomplète (53,6% avec goutte épaisse négative ou sans, insuffisamment explorés et traités comme paludisme grave) et le traitement parfois inadéquat (outre les affections non palustres probables non traitées, il y avait notamment surutilisation des produits sanguins exposant les enfants aux risques infectieux transfusionnels). Ainsi, les limites du plateau technique des HGR et l’organisation du circuit des malades semblent entraîner une sous-estimation, entre autre, des complications métaboliques du paludisme grave et des autres infections graves du jeune enfant et par conséquent des écarts au protocole de prise en charge préjudiciables aux patients.<p>Ces résultats mettent en lumière la nécessité :<p>•d’inscrire parmi les priorités du Programme National de Lutte contre le Paludisme, des recherches pour évaluer une option alternative au traitement préventif intermittent avec 2 doses de SP (traitement préventif intermittent avec d’autres antipaludiques) et à l’est du pays le recours préférentiel à la moustiquaire imprégnée à longue durée, en particulier chez la multigeste. <p>•de retenir, pour la promotion de l’utilisation de l’AS-AQ pour le traitement du paludisme simple, comme priorités :<p> o mettre à profit les opportunités actuelles de financement dans le domaine de la lutte antipaludique pour améliorer la disponibilité de l’AS-AQ à un coût accessible et à améliorer l’approvisionnement aussi bien des formations sanitaires publiques et privées que des officines pharmaceutiques ;<p> o assainir le secteur pharmaceutique de manière à endiguer la circulation d’antipaludique de mauvaise qualité à bas prix qui alimente les habitudes d’automédication courante dans les ménages ;<p> o élaborer des programmes de promotion de l’utilisation de l’AS-AQ, en élargissant la cible des interventions autant aux prestataires de soins du secteur privé qu’aux vendeurs de médicaments ;<p> o Adapter les programmes de promotion de l’AS-AQ au stade de changement de comportement auquel se trouve les acteurs après analyse des déterminants de leurs comportements notamment, les facteurs prédisposant (aussi bien les connaissances que les croyances et les intentions des prescripteurs), les facteurs potentialisant (notamment la disponibilité de l’AS-AQ de bonne qualité, son accessibilité financière aux patients) et les facteurs renforçant (supervision, contrats de performance).<p>•de renforcer le plateau technique des HGR et y améliorer le circuit des patients pour leur permettre de jouer pleinement leur rôle dans la prise en charge des formes graves du paludisme. /<p><p>Second most endemic country for malaria in the world, the Democratic Republic of Congo (DRC) has officially adopted the Roll Back Malaria (RBM) in 2001, since then aligns its malaria control policy on WHO guidelines which last orientations are based on three major strategies [1] prompt access to effective treatment and affordable for the patients [2] association of the most appropriate measures to protect the persons at risk both at individual and community level, including young children and pregnant women, [3] and access to preventive treatments to pregnant women at risk.<p>In order to contribute in improving malaria control in DRC, the study was carried out in three parts: the first one on the relevance of IPT with SP in pregnant women in the context of increased parasite resistance, the second one on the determinants of adherence of healthcare providers, drugs sellers and patients to AS-AQ, the last one describing severe malaria in children.<p>The first part of the study on IPTp-SP was performed in 2 stages. We had firstly carried out a retrospective analysis of birth weight comparing newborns whom mothers had received 2 SP doses to those whom mothers had received one or none, in three maternity hospitals in 2007 where levels of SP resistance were different. Then we evaluated the effect of IPTp-SP in 1998/1999 and 2007 compared to prophylaxis with chloroquine in 1998/1999 in eastern DRC in a region where resistance to SP was significantly increased. <p>In areas where parasite resistance was low (Mikalayi: 1.6% of therapeutic failure in children) our moderate (Kisangani: 21.7% of therapeutic failure in children), the IPTp-SP reduced the risk of LBW in Kisangani (OR adjusted 0.15, 95% CI, 0.04-0.58) and Mikalayi (adjusted OR, 0.12, 95% CI, 0.01-0.89). In both sites, the average birth weight was higher for mothers having received two rather than one or no SP doses (P<0.001). While in Rutshuru, where resistance was high (60.6% treatment failure), the effect of IPT-SP seems lower. In 2007, IPTp-SP had an effect only in primigravidae (dose-response comparison: 2 doses vs. 0-1dose). It was also observed in a slight decrease in body weight gain [(53.9 g (P = 0.027) for mothers having received SP in 2007 vs. 70.2 g (P = 0.003) for those mothers who had received SP in 1998/1999 compared to mothers who had received chloroquine in 1998/1999.<p>In the second part of the thesis, two cross-sectional surveys were carried out to identify determinants of the adherence of healthcare providers, drugs sellers and patients to the new drug recommended by the national policy for the treatment of uncomplicated malaria (AS-AQ). A preliminary survey was conducted in functional health centre in Kisangani in April 2008 and a second survey extended to three out of 10 health districts in the Eastern Province from March to June 2009. <p>The use of AS-AQ for the treatment of uncomplicated malaria progresses (from 41% to 69% prescriptions in health services between 2008 and 2009, 3 and 4 years respectively after the malaria control policy change), but still below the target of at least 80% pursued by national policy. Despite the perceived efficacy of AS-AQ by both healthcare providers and drugs vendors, its use was limited due to its low availability, high cost, mistrust on the quality of the available product, availability of inexpensive antimalarial drugs withdrew from national politicy and the fear for adverse effects. While the incentives for its use were, the therapeutic efficacy, availability, directives of the ministries of health (technical guidelines), training and supervision of healthcare providers, the intention to prescribe AS-AQ to patients or to use oneself, lengthy consultations, providing explanations to patients, working in rural areas.<p>The last part of the thesis was a prospective study conducted from January 2010 to February 2011 that included all children admitted for severe malaria with at least one of the criteria for severe malaria according to WHO.<p>Malaria is one of the main reasons for hospitalization of children in the DRC (37.0% in Kisangani) whose evaluation is often uncompleted (53.6% no or negative blood smear that are insufficiently explored and treated as severe malaria) and sometimes inadequately treated (in addition to non-malarial severe diseases treated as severe malaria, there was overuse of blood products conducting probably to exposition of children to risks of infection through transfusion). Thus, poor technical support and inadequate organization of the patient circuit seem to lead to underestimation, among others, of metabolic complications of severe malaria and in the non-recognition of other serious infections early childhood, problems that are detrimental to the patients, even when effective drugs are available.<p>These results highlight the need: <p>•to include among the priorities of the National Malaria Control Program, research to evaluate an alternative option to 2 doses IPTp-SP (IPT using other antimalarial drugs) and in the east of the country preferential use of MILD, especially in multigravidae. <p>•for the use of AS-AQ for the treatment of uncomplicated malaria primarily promote:<p> o the use of current funding opportunities in the field of malaria control to improve the availability of the AS-AQ at an affordable cost and to improve the supply of both public and private health facilities as well as pharmacies;<p> o to clean up the pharmaceutical sector in order to stem the flow of poor quality cheapest antimalarial drugs that feeds the habits of self-medication common in households;<p> o to develop communication programs, training and supervision of healthcare providers to promote the use of AS-AQ, expanding the target of interventions to both healthcare providers in the private sector and drugs sellers;<p> o To adapt AS-AQ promoting programs to the stage of behavior change after analysis of determinants of actors behavior, in particular, the predisposing factors (knowledge as well as beliefs and intentions of the prescriber), the potentializing factors (including the availability of the good quality AS-AQ, affordability to patients) and reinforcing factors (supervision, performance contracts).<p>•to strengthen the technical support of general hospitals and to improve the organization of the patient circuit in order to enable them to play their full role in the management of severe malaria.<p><br>Doctorat en Sciences de la santé publique<br>info:eu-repo/semantics/nonPublished

Orientador: Fabio Trindade Maranhão Costa<br>Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia<br>Made available in DSpace on 2018-08-23T23:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leite_JulianaAlmeida_D.pdf: 9218064 bytes, checksum: c5126692d8ce8a22660fbf8604dae7ef (MD5) Previous issue date: 2013<br>Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital<br>Abstract: The complete abstract is available with the full electronic document.<br>Doutorado<br>Imunologia<br>Doutora em Genética e Biologia Molecular

La maladie chronique du greffon contre l'hôte (ou GvHD) est une complication fréquente et sévère de la greffe de moelle. Même s'il a pu être montre que des phénomènes d'allo et d'auto réactivité étaient impliques dans le développement de cette réaction, les mécanismes aboutissant aux lésions tissulaires restent très mal connus. La peau est le principal organe cible de cette réaction avec 2 grands types de lésions appelées licheniennes et sclérodermiformes. Le travail a donc porte sur ce tissu. L'analyse du phénotype des lymphocytes infiltrants, des cytokines épidermiques et des molécules d'adhésion a permis de montrer l'implication de plusieurs signaux épidermiques (IL1, TNF mais pas IL8) et endothéliaux (E Sélectine, VCAM1) et une infiltration par des lymphocytes T mémoire, Cd8 prédominants tant dans les GvHD licheniennes et sclérodermiformes. La similitude de ces signaux (a l'exception de VCAM1) permet de penser que la GvHD sclérodermiforme est une forme de cicatrisation des memes anomalies que la GvHD lichenienne. Dans le même sens, l'étude des lésions pigmentées inexpliquées observées chez les greffes a peau foncée, a montre que ces lésions résultaient d'une inflammation épidermique suggérant la encore qu'il s'agissait d'une conséquence particulière de l'atteinte des kératinocytes de types lichenienne. La souffrance des kératinocytes, semblant être l'étape princeps de la GvHD, a été étudiée. Ceux ci meurent par apoptose et la mise en évidence d'ARNm de Fas-L sans expression de perforine-granzyme suggère une lymphocytotoxicite Fas-L mediee. Enfin, nous avons retrouve une déplétion profonde des cellules de Langerhans, qui sont chez les allogreffes, issues du donneur, suggérant la présence d'une auto réactivité. Au total, la GvHD chronique est une réaction ciblée sur le kératinocyte quel que soit l'aspect clinique ; divers signaux amplifient la réaction ; les kératinocytes sont lyses par la voie Fas-L et une auto réactivité est probablement présente.

Le sujet de cette thèse est la poursuite de la caractérisation et du développement à fins thérapeutiques du peptide P42 dans la maladie d’Huntington (MH). Ce peptide a été précédemment identifié dans l’équipe dirigée par Florence Maschat et est capable de réduire la présence d’agrégats dans différents modèles cellulaires, mais aussi de Drosophile et murins de maladie d’Huntington. P42 est aussi capable de prévenir la dégénérescence neuronale et les altérations du transport axonal dans des tests effectués chez la drosophile (Arribat et al. 2013). Enfin les anomalies motrices, la perte de poids, et l’atrophie cérébrale sont restituées in vivo dans des souris R6/2 traitées par P42. Dans ce cas, P42 a été conjugué au peptide de transduction TAT, dérivé de VIH, et a été inséré dans des microémulsions, permettant des administrations répétées du peptide par voie intra-muqueuse, protégeant le peptide jusqu’à son arrivée au cerveau et facilitant sa diffusion au travers des membranes et la barrière hémato-encéphalique (Arribat et al., 2014). L’efficacité de ce peptide a ainsi été montrée après administration dans une phase pré-symptomatique ; toutefois, des résultats non publiés suggèrent également une efficacité partielle au niveau post-symptomatique. Ainsi ce peptide agirait à travers l’inhibition de l’agrégation en interagissant avec la protéine Htt dans sa partie N-terminale, et notamment au niveau de la partie N17. Des résultats préliminaires suggèrent également que, en tant que partie physiologiquement présente dans la protéine Htt, P42 pourrait avoir un rôle bénéfique et physiologique, notamment au niveau du transport axonal, sur le niveau d’expression du Brain nerve factor (BDNF) et sur l’activité neuronale. Mon travail de thèse se compose d’une part d’un travail de laboratoire, et d’autre part d’un travail de documentation. Le travail de laboratoire a été conduit sur le modèle Drosophile. Dans une première partie j’ai essayé de mieux caractériser l’efficacité de P42TAT par rapport à P42 dans l’inhibition des agrégats dans les glandes salivaires et dans la protection de la dégénérescence de l’œil. Notamment, j’ai testé l’efficacité de l’administration orale de P42TAT sur la réduction des agrégats dans les glandes salivaires. Dans une deuxième partie j’ai contribué à évaluer l’efficacité d’un fragment plus court de P42, P42B ; ce fragment de 14 aa initialement identifié par des études de dégradation de P42TAT dans des extraits de cerveau par la technique MALDI est retrouvé après 3 h et pourrait donc être une partie active, suffisante pour l’efficacité du peptide. Dans une troisième partie j’ai contribué à des études visant à étudier le rôle physiologique de P42 dans le transport axonal. Le travail de documentation a été finalisé par la soumission d’un dossier à l’agence européenne pour la médecine (EMEA), qui a permis d’obtenir la reconnaissance de P42 en tant que médicament orphelin pour la MH. Ce résultat est particulièrement important et pourrait être un premier pas vers le développement clinique de ce peptide. En effet aucun traitement curatif n’existe à ce jour pour la MH et la possibilité de réaliser des tests pré-symptomatiques permet de disposer d’une fenêtre unique pour une intervention thérapeutique précoce. De plus, au cours de ces dernières années, des études cliniques de suivi de sujets pré-symptomatiques et symptomatiques ont été menées, (études PREDICT-HD et TRACK-HD), qui ont conduit à l’identification de bio-marqueurs, notamment d’imagerie, capables de suivre l’évolution de la maladie, dès un stade pré-symptomatique, utilisables pour évaluer de façon objective l’efficacité d’un traitement, si disponible. Enfin, l’ensemble de ce travail m’a permis d’acquérir une expertise et de mener une réflexion au sein du laboratoire sur l’utilisation des peptides à des fins thérapeutiques dans la maladie d’Huntington, avec la production d’un papier de revue sur le sujet, soumis dans une revue internationale<br>The subject of this thesis is the further characterization and development in therapeutic purpose of P42 peptide in Huntington's disease. This peptide was previously identified in the team led by Florence Maschat and it showed be able to reduce the presence of aggregates in different cell models, but also Drosophila and murine (mouse R6 / 2) of Huntington's disease. P42 is also able to prevent neuronal degeneration and alteration of axonal transport in the tests performed in Drosophila (Arribat et al. 2013). Finally the motor abnormalities, weight loss and brain atrophy are ameliorated in vivo in R6 / 2 mice treated with P42. In the latter case, P42 was conjugated to TAT transducing peptide, derived from HIV, and was inserted into microemulsions, with the purpose of enabling repeated administrations of the peptide by intra-mucosal route, protect the peptide until his arrival to the brain and facilitate its diffusion through the membranes and the blood-brain barrier (Arribat et al. 2014). The efficacy of this peptide has been shown following administration in a pre-symptomatic stage; however, unpublished results also suggest a partial efficacy in post-symptomatic level. Thus this peptide would be through the inhibition of aggregation by interacting with Htt in its N-terminal part, and in particular at the N17 part. Preliminary results also suggest that, as part physiologically present in the Htt protein, P42 and could have a beneficial physiological role, particularly in terms of axonal transport, level of expression of Brain nerve factor (BDNF), and neuronal activity.My thesis consists of a hand on a laboratory work, and secondly on a work documentation. The laboratory work was conducted using the Drosophila model. In the first part I tried to better characterize the effectiveness of P42TAT and compare it to that of P42 in inhibiting aggregates in the salivary glands and in the protection of the degeneration of the eye. In particular, I tested the efficacy of oral administration of the peptide P42TAT on reducing aggregates in the salivary glands. In the second part I helped evaluate the effectiveness of a shorter fragment of P42, P42B; this peptide was first identified through studies on the degradation of P42TAT in extracts of brain by MALDI; this fragment of 14 aa was found after 3 h and therefore could be an active portion, sufficient for the effectiveness of the peptide. In the third part I contributed to studies to study the physiological role of P42 in axonal transport.The documentation work was finalized at the submission of a dossier to the European Agency for medicine (EMEA), in order to obtain for P42 the label of orphan drug for Huntington's disease. This result is particularly important and could be a first step in the clinical development of this peptide. Indeed no curative treatment exists to date for Huntington's disease and the ability to perform pre-symptomatic tests can provide a single window for early therapeutic intervention. Moreover, in recent years, clinical studies monitoring symptomatic and pre-symptomatic patients were conducted (PREDICT-HD studies and TRACK-HD), which led to the identification of biomarkers, in particular of imaging, able to follow the evolution of the disease, already at a pre-symptomatic stage, be used to objectively evaluate the effectiveness of treatment if available. Finally, all of this work has allowed me to gain expertise and to reflect on the use of peptides for therapeutic purposes in Huntington's disease, with the production of paper review on the subject submitted to an international journal

Cette thèse est consacrée à la conception, la synthèse et l'évaluation biologique de différents dérivés quinoliniques en vue de développer de nouveaux médicaments contre les maladies infectieuses, en particulier la tuberculosis (TB) et le paludisme. La première partie de cette étude décrit la synthèse de dérivés de la méfloquine (MFL) et leur évaluation sur Mycobacterium tuberculosis. Une série de 26 composés a été synthétisée par une réaction de condensation entre la MFL et des dérivés d’aldéhyde diversement substitués. Les activités ont été évaluées sur la souche standard de M. tuberculosis H37Rv, qui est sensible aux différents médicaments existants, et sur la souche multirésistante T113 (résistante à trois médicaments de premier choix, l'isoniazide, la rifampicine et l'éthambutol, ainsi qu'à l'ofloxacine, une fluoroquinolone utilisée dans le traitement de second choix). La seconde partie de cette étude concerne la synthèse et l'évaluation pharmacologique des dérivés hybrides contenant un groupement 7-chloro-4-aminoquinoléine, et un dérivé fluoré d’artémisinine dans leurs structures. Nous avons décrit deux séries de dérivés d’artémisinine: le CF3-artésunate, et une seconde série où un acide est introduit en position 16 d’une artémisinine modifiée, dont la fonction cétal a été supprimée. Les produits ont été évaluées in vitro contre la souche de P. falciparum 3D7, sensible à la chloroquine. Toutes les substances ont montré une excellente activité de l'ordre du nM<br>The present work describes the design, synthesis and biological evaluation of several substances containing the quinoline nucleus, with potential activity against infectious diseases, with a focus on tuberculosis (TB) and malaria. In the first part of this work, we have been particularly interested in the synthesis of new mefloquine (MFL) derivatives which could help in the development of treatments against the Mycobacterium tuberculosis. A total of 26 new compounds were synthesized from reactions between MFL and a substituted arenealdehyde. The biological activities were evaluated against the standard strain of M. tuberculosis H37Rv, sensitive to the different drugs used in TB treatment and the multi-drug resistant (MDR) strain T113, resistant to three first line drugs (isoniazid, rifampicin and ethambutol) and ofloxacine, a fluoroquinolone used as a second choice treatment. The second part of this work presents the development of new hybrid molecules, containing a 7-chloro-4-aminoquinoline moiety and a CF3-artemisinin moiety. Two series were described, one containing a CF3-artesunate moiety and another one where a carboxylic acid functional group was introduced in position 16 of a modified artemisinin, where the ketal function was suppressed. The final products were assayed in vitro against the Plasmodium falciparum strain 3D7, sensitive to chloroquine. The substances displayed excellent activities, in the nM range<br>O presente trabalho descreve a concepção, a síntese e a avaliação biológica de diferentes derivados quinolínicos, com potencial atividade contra doenças negligenciadas, tendo como foco principal a tuberculose (TB) e a malária. A primeira parte desse estudo teve como objetivo a síntese de derivados da mefloquina (MFL) que pudessem auxiliar no desenvolvimento de novos tratamentos contra o Mycobacterium tuberculosis. Uma série de 26 compostos foi preparada a partir de uma reação de condensação entre a MFL e arenaldeídos substituídos. Os derivados tiveram sua atividade biológica verificada frente à cepa padrão de M. tuberculosis H37Rv, sensível aos diferentes tuberculostáticos e à cepa multirresistente T113, resistente a três fármacos utilizados no tratamento de primeira escolha (isoniazida, rifampicina e etambutol) e uma fluoroquinolona utilizada no tratamento de segunda escolha, o ofloxacino. A segunda parte desse trabalho visou à síntese e à avaliação biológica de derivados híbridos contendo um grupo 7-cloro-4-aminoquinolina e um grupamento trifluorometil-artemisinina em sua estrutura. Duas séries foram descritas, uma contendo um grupamento CF3-artesunato e a outra contendo um grupamento ácido carboxílico na posição 16 de uma artemisinina modificada, onde a função cetal foi suprimida. Os produtos finais foram testados in vitro contra a cepa de P. falciparum 3D7, susceptível à cloroquina. Todas as substâncias apresentaram uma excelente atividade, na ordem de nM

Malaria, caused by Plasmodium falciparum parasites remains a huge public health problem and a major cause of morbidity and mortality in sub-Saharan Africa, especially among children and infants. The parasite and its vector – the Anopheles spp mosquito - have tremendous adaptability capacities, including the acquisition of resistance to anti-malarial drugs and insecticides, making the development of new preventive tools, such as a safe and effective vaccine, a key element to counter balance this tendency. The most advanced malaria vaccine candidate, RTS,S/AS has progressed to a Phase III trial through a research and development plan as a result of an unforeseen partnership between African, European and American research institutions together with GSK Biologicals and the PATH Malaria Vaccine Initiative (MVI). This thesis describes some critical stages of the clinical development plan of this vaccine, reporting clinical trials of the RTS/AS candidate malaria vaccine conducted in Mozambican children and infants. Here we illustrates the assessment of the RTS,S/AS02D safety, humoral and cellular mediated immune responses and the duration of protection over a one year period in infants. We also provide a detailed immunogenicity data of 4 years of follow-up of children aged 1 to 4 years by the time of immunization with RTS,S/AS02A. These studies principally show that the vaccine is safe, well tolerated and highly immunogenic, eliciting both humoral and cell-mediated antibodies. The vaccine also protects children and infants against clinical malaria. Importantly, they also describe for the first time an association between the risk of clinical malaria and Plasmodium falciparum anticircumsporozoite antibody titters. The presented results support the hypothesis that developing a safe, immunogenic and efficacious malaria vaccine is feasible and, together with other studies, they should be the basis for the registry process of what should be the first generation of vaccines against malaria.<br>La malaria, causada por el parásito Plasmodium falciparum sigue siendo un gran problema de salud pública y una causa importante de mortalidad y morbilidad en el África Sub-Sahariana, especialmente entre los niños y lactantes. El parásito y su vector mosquito Anofeles spp. tienen una tremenda capacidad de adaptación, incluyendo la capacidad de adquirir resistencia a los fármacos antipalúdicos e insecticidas. Es por tanto prioritario desarrollar nuevas herramientas preventivas, entre las cuales una vacuna segura y eficaz, un elemento clave para contrarrestar esta tendencia. La vacuna candidata contra la malaria más avanzada, denominada RTS,S/AS, ha progresado hasta un ensayo de Fase III siguiendo un plan de investigación y desarrollo clínico resultado de una colaboración sin precedentes entre centros de investigación Africanos, Europeos y Americanos junto con la GSK Biologicals y PATH Malaria Vaccine Initiative (MVI). Esta tesis describe algunas de las fases críticas de estos logros, reportando los ensayos clínicos de la vacuna candidata contra la malaria RTS,S/AS llevados a cabo en niños y lactantes de Mozambique. Esta tesis analiza en detalle la evaluación de la seguridad de esta estrategia, la respuesta inmunológica (tanto humoral como celular) que esta vacuna confiere, y la duración de la protección durante un período de seguimiento de un año en los lactantes. Presentamos también los datos completos de 4 años de seguimiento de la inmunogenicidad de la RTS,S/AS02A administrada a niños de 1 a 4 años de edad en el momento de su primera vacunación. Estos estudios demuestran que la vacuna es segura, bien tolerada y altamente inmunogénica, produciendo respuestas tanto humorales como celulares. La vacuna también protege a los niños y lactantes contra la malaria clínica. Además se describe por primera vez una asociación entre el riesgo de malaria clínica y los niveles de anticuerpos contra la proteína de circumsporozoito del Plasmodium falciparum. Los resultados aquí presentados apoyan la tesis de que el desarrollo de una vacuna eficaz, inmunogénica y segura contra la malaria es posible, y deberá ser la base, junto con otros estudios, del proceso de registro de la que podrá ser la primera generación de vacunas contra la malaria.

O Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) tem sido sugerido como candidato a compor uma vacina contra estágios assexuados sanguíneos de Plasmodium. Recentemente nosso grupo identificou o domínio II (DII) de AMA-1 de Plasmodium vivax (PvAMA-1) como uma região altamente reconhecida por anticorpos IgG de indivíduos brasileiros infectados por P. vivax. No presente estudo avaliamos as propriedades imunogênicas da proteína recombinante DII, produzida a partir de Escherichia coli. Grupos de 6 camundongos fêmeas BALB/c foram imunizados quatro vezes com 10 &#181;g dessa proteína na presença de diferentes formulações de adjuvantes [Adjuvante Completo/Incompleto de Freund (ACF/AIF), MPL-TDM, TiterMax, Hidróxido de Alumínio (Alum), Quil A, QS-21 e CpG-ODN 1826], individualmente, ou em combinação (Alum + QS-21 ou Alum + CpG-ODN 1826)). Nosso objetivo foi avaliar comparativamente a resposta de anticorpos (IgM, IgG e isotipos de IgG), induzida pelos diferentes esquemas de imunizações, visando futuros estudos pré-clínicos em primatas não humanos. Os títulos de anticorpos IgG contra (o ectodomínio) PvAMA-1 foram determinados por ELISA, duas semanas após cada imunização. A presença de IgM e dos isotipos de IgG também foi avaliada após o final do esquema de imunizações. Nossos resultados demonstraram que a proteína recombinante DII foi altamente imunogênica em camundongos BALB/c quando administrada na presença dos adjuvantes testados. Altos títulos de IgG1, IgG2a e IgG2b foram observados na maioria dos grupos (com exceção do adjuvante Alum), sugerindo uma resposta mista Th1/Th2. Finalmente, demonstramos que anticorpos monoclonais e policlonais anti-DII reconheceram a proteína nativa expressa na superfície de merozoítas de P. vivax, por imunofluorescência. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a proteína recombinante o domínio II de PvAMA-1 (DII) foi imunogênico em camundongos BALB/c quando administrado na presença das diferentes formulações de adjuvantes testadas, sugerindo que esse antígeno possa ser utilizado como uma vacina de subunidade contra a malária vivax.<br>The Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) has been considered a malaria vaccine candidate against asexual blood stages of Plasmodium. Recently, we identified the domain II (DII) of Plasmodium vivax AMA-1 (PvAMA-1) as a region highly recognized by IgG antibodies from Brazilian individuals infected by P. vivax. In the present study, we evaluated the immunogenic properties of a bacterial recombinant PvAMA-1 DII. Groups of 6 female BALB/c were immunized four times with 10 &#181;g of recombinant protein in the presence of different adjuvant formulations [Complete/Incomplete Freunds Adjuvant (CFA/IFA), MPL-TDM, TiterMax, Aluminum hydroxide (Alum), Quil A, QS-21, CpG-ODN 1826] separately or in combination (Alum + QS-21 or Alum + CpG-ODN 1826). Our goal was to compare the antibody response (IgM, IgG and IgG subclass) induced by different protocols of immunization aiming at future pre-clinical studies in non-human primates. The IgG antibody titers against PvAMA-1 were determined by ELISA two weeks after each immunizing dose. The presence of IgM and IgG subclass were evaluated after the end of immunizations schedule. We found that the recombinant DII was highly immunogenic in BALB/c mice when administered in the presence of all adjuvant tested. High titers of IgG1, IgG2a and IgG2b were observed in all groups (except for Alum adjuvant), suggesting a mixed Th1/Th2 response. Finally, we demonstrated that monoclonal and polyclonal antibodies against DII recognized the native protein expressed on the P. vivax merozoite surface parasites by immunofluorescence. Together, our data demonstrated that the recombinant PvAMA-1(DII) was immunogenic in mice when administered in different adjuvant formulations, suggesting that this protein can be used as part of a sub-unit vaccine against malaria vivax.

Les maladies lysosomales sont caractérisées par une déficience génétique des glycosidases impliquées dans le catabolisme des glycosphingolipides. La maladie de Gaucher se traduit par un disfonctionnement de la b-glucocérébrosidase qui conduit à l’accumulation du glucosylcéramide non hydrolysé dans les cellules et à des symptômes sévères pouvant entraîner la mort avant l’âge adulte. Le premier objectif de ce travail était de synthétiser des inhibiteurs puissants et sélectifs de la glucosylcéramide synthase, l’enzyme responsable de la biosynthèse des glucosphingolipides. La N-butyl-désoxynojirimycine (ZavescaTM), un inhibiteur compétitif du céramide, est le seul traitement par voie orale de la maladie de Gaucher. Nous avons conçu des analogues de cet iminosucre en introduisant une deuxième chaîne alkyle en position O-2 et/ou O-4 afin de préparer de meilleurs mimes du céramide pour obtenir des inhibiteurs potentiellement plus puissants et plus sélectifs. Afin de préparer une petite librairie d’iminoglycolipides originaux, nous avons également mis au point une synthèse stéréodivergente donnant accès aux composés en séries D-galacto et D-manno. Les iminosucres testés se sont révélés moins actifs que le ZavescaTM. Notre second objectif était la conception et la synthèse d’inhibiteurs compétitifs comme chaperons chimiques de la b-glucocérébrosidase mutante. Nous avons ainsi préparé une série d’iminoxylitols originaux et identifié l’un des inhibiteurs les plus puissants et sélectifs actuellement connus de l’enzyme. Des tests cellulaires ont montré que cet iminosucre doublait l'activité enzymatique résiduelle à une concentration de seulement 10 nM, ouvrant la voie vers de futurs agents thérapeutiques.

Bacillus anthracis, agent responsable de la maladie du charbon ou anthrax, exprime à la surface de ses spores un tétrasaccharide ABCD qui a été démontré à la fois antigénique et immunogénique. La particularité de ce tétrasaccharide réside dans son unité terminale non réductrice A, dénommée anthrose qui exprime la majorité des déterminants antigéniques. Nous avons alors cherché à développer des vaccins glycoconjugués potentiellement actifs contre B. Anthracis, centrés sur l’utilisation du disaccharide AB ou de l’un de ses analogues, que nous anticipions suffisants pour induire une réponse immunitaire. Les vaccins glycoconjugués sont en effet connus pour être efficaces et sains pour l’Homme et connaissent actuellement un développement exponentiel. La préparation des haptènes AB a pu donner lieu au développement d’une nouvelle voie d’accès originale aux dérivés de l’anthrose. Finalement, plusieurs haptènes mono- (A) et disaccharidiques (AB natif et AB non-méthylé) ainsi que le tétrasaccharide ABCD ont pu être synthétisés. Des glycoconjugués sucres-protéines et un glycoconjugué complètement synthétique ont pu être préparés à partir des haptènes AB et leur immunogénicité a été évaluée chez la souris. Il s’est ainsi avéré que tous les glycoconjugués semi-synthétiques permettaient l’induction d’une forte réponse anticorps et que l’haptène AB non-méthylé, au même titre que l’haptène AB natif pouvaient être utilisés en tant que mimes du tétrasaccharide<br>Bacillus anthracis, the etiological agent of anthrax, display a tetrasaccharide ABCD on the outermost layer of its spores, which was proved to be both antigenic and immunogenic. The tetrasaccharide is capped at its non-reducing end with an usual sugar which was named anthrose and which expresses the main antigenic determinants. We are also interested in developing a glycoconjugate vaccine targeting B. Anthracis, based on the disaccharide AB or its analogues, which we expect being sufficient to induce an immune response. Glycoconjugate vaccines are indeed known to be safe and well-tolerated in humans and were currently subject to a growing interest. The preparation of haptens AB gave rise to the development of a novel entry to anthrose-containing derivatives. Several haptens including mono- (A) and disaccharides (AB native and AB non-methylated) along with the full tetrasaccharide ABCD have been synthetized. Several protein-carbohydrate glycoconjugates as well as a full-synthetic glycoconjugate were prepared from haptens AB and their immunogenicity was assessed in mice. All semi-synthetic glycoconjugates proved to be able to induce a strong antibody response, underlining the potential use of both haptens native AB and non-methylated AB as tetrasaccharide surrogates

Les associations de lutte contre le sida sont au centre du travail de these. Cette recherche analyse en effet la facon dont se sont developpes, a partir du monde social homosexuel, une mobilisation et un univers de lutte contre le sida. La diversite des positions sociales, des modes de vie socio-sexuels et des etats de sante des volontaires produit de la differenciation sociale au sein des associations. Selon leurs profils, les volontaires souhaitent developper des options de lutte contre le sida differentes (qu'elles soient "universalistes" ou au contraire communautaires) et des activites specifiques (prevention ou soutien). Ainsi, dans le domaine de la prevention, les experiences sociales et intimes des divers groupes d'intervenants alimentent des modeles concurrents de gestion collective de l'epidemie<br>The present research analyses the french non governmental movement of the fight against aids. Its birth derived from the french gay movement which pre-existed before the 1980's. Nevertheless, the new movement cannot be restricted to the factor of sexual orientation as not all homosexuals take part to the new engagement. Besides, even among gay volunteers, a great variety in terms of class status, sexual experiences and serological status appears. Precisely, this diversity played a major part in the development of the aids movement. Some of the volunteers wanted to promote a communitarist approch to fighting against aids, whereas others (who generally shared a higher social status and who were less integrated in the gay world) were not preoccupied only with the problems of gay men but with the whole population. Thus, this research analyses how the intimate experiences of the gay volunteers, those related with their personal experience of homosexuality, influence their political opinions and strategies for fighting against aids. Moreover, in the particular field of prevention, the private experiences (both social and intimate) of the volunteers happen to influence the rules of prevention that they want to promote

La forte prévalence des hémoglobinopathies, notamment l'HbAS, l'HbC et l'α-thalassémie dans des zones d'endémie palustre est considérée comme la conséquence de la protection qu'elles procurent contre les formes létales du paludisme. De nombreux mécanismes ont été évoqués pour expliquer cette protection, ne sont pas cohérentes avec toutes les observations épidémio-cliniques disponibles. La première partie de ces travaux de thèse a abordé la réduction de la cytoadhérence des globules rouges (GR) parasités comme mécanisme potentiel commun aux trois hémoglobinopathies. Pour explorer plus en profondeur ce mécanisme, nous avons mené une étude comparative des phénotypes de cytoadhérence des isolats primaires de P. falciparum obtenus chez des patients HbAS et HbAC et HbAA. Cela avait pour but de déterminer si l'HbAS et l'HbAC jouaient un rôle dans la sélection et le maintien des souches virulentes de P. falciparum dans la nature. La deuxième partie de la thèse a concerné l'influence du trait drépanocytaire (HbAS) sur la déformabilité des GR non parasités d'une part et sur la rétention splénique des GR non parasités et parasités par les formes jeunes de P. falciparum d'autre part. Nous avons observé que l'adhésion des GR parasités aux cellules endothéliales micro-vasculaires humaines ainsi qu'aux monocytes était réduite avec les GR α-thalassémiques par rapport aux GR HbAA. Aucune différence statistiquement significative n’a en revanche été observée entre les profils de cytoadhérence des isolats primaires de P. falciparum issus de sujets HbAA, HbAS ou HbAC. L’étude de la déformabilité des GR a montré que les GR HbAS sont légèrement mais significativement moins déformables que les GR HbAA. En revanche, les GR HbAS parasités par les jeunes parasites de P. falciparum (anneaux) n’étaient pas plus retenus que leurs homologues HbAA dans la rate humaine isolé perfusée ex vivo, ou en microsphiltration, quelles que soient les conditions d’oxygénation. Nous n’avons observé aucune différence au niveau du taux de falciformation entre les GR parasités et non parasités que ce soit avec les GR HbAS ou avec les GR HbSS. En conclusion, nous proposons que la réduction de la cythoadhérence et la rétention splénique des GR contenant les formes matures de P. falciparum constituent un mécanisme commun à la protection des sujets HbAS, HbC et α-thalassémiques contre le paludisme. Ces deux phénomènes interconnectés peuvent rendre compte de l’ensemble des observations épidemio-cliniques disponibles sur la protection conférée par ces hémoglobinopathies<br>The high prevalence of several inherited hemoglobin disorders, namely sickle cell trait (HbAS), HbAC and α-thalassemia, in malaria endemic areas is thought to be the consequence of their protective effects against malaria life-threatening manifestations. Numerous potential mechanisms have been proposed to explain this protective effect although many of them are not fully consistent with all available epidemiologic and clinical data. The first part of this thesis work explored the reduction of cytoadherence of infected RBC as a potential common mechanism for α-thalassemia-, HbAS- and HbAC-induced protection against malaria. To further explore this mechanism, and determine whether HbAS and HbAC select and maintain virulent P. falciparum parasite in nature, we compared the cytoadherence phenotype of P. falciparum isolates obtained from HbAS/HbAC and controls HbAA patients. The second part of the thesis work addressed the influence of HbAS on the deformability of uninfected RBC as well as the splenic retention of both uninfected RBCs and ring-infected RBCs. We observed a reduced adherence of α-thalassemic infected RBCs to human micro-vascular endothelial cells and monocytes compared to controls HbAA infected RBCs. The reduction was correlated to the number of non functional α- gene. Expression of PfEMP-1 on the surface of α- thalassemic infected RBCs was lower than on the surface of HbAA infected RBCs. There was no statistically significant difference between the cytoadherence of P. falciparum isolates obtained either from HbAS/HbAC or control HbAA malaria patients. The deformability of uninfected HbAS RBCs was slightly but significant lower than that of control uninfected HbAA RBCs. Retention rates of ring-infected HbAS and HbAA RBCs were similar either in human isolated spleen perfusion ex vivo and in microsphilters in vitro regardless of the oxygenation level. We did not observe any enhanced sickling of ring-infected RBCs compared to non infected RBCs, both in HbAS and HbSS samples. Based on these results along with available epidemiologic and previous experimental data, we propose a common malaria-protective mechanism of HbAS, HbAC and α-thalassemia whereby these hemoglobin disorders reduce the cytoadherence of mature P. falciparum-infected RBCs that stay in circulation where they are exposed to an enhanced splenic retention. These 2 mechanisms would act in conjunction to slower the rise of parasites loads in infected patients and protect them from sequestration-related complications of malaria

La maladie d'Alzheimer est une maladie neurodégénérative en progression constante dans nos pays développés. Le traitement actuel le plus courant repose sur des anticholinestérasiques permettant la restauration partielle du tonus cholinergique central, mais ils présentent l'inconvénient d'inhiber aussi la cholinestérase periphérique causant alors des effets indésirables. Ce travail présente un concept de bioprécurseur pouvant remédier à ce problème. Ce travail inclut la préparation de différents couples bioprécurseur / principe actif, leur évaluation in vitro et in vivo. Des essais in vitro portant sur l'inhibition de l'acétylcholinestérase et sur la fixation des molécules sur les récepteurs muscariniques ont permis de sélectionner trois composés d'intérêt. Une étude in vivo permettant la sélection d'un composé prometteur a été menée chez la souris.

Face à la stagnation voire à la réduction des ressources allouées à la lutte contre le paludisme, des études sur une connaissance approfondie de la micro-épidémiologie et le développement de vaccins antipaludiques s’imposent comme une alternative pour une utilisation rationnelle des fonds. Nos résultats montrent que l’hétérogénéité du risque de paludisme à l’intérieur du même village était perceptible pendant la saison sèche. L’analyse de séries chronologiques a montré un décalage de 3 mois entre le pic de la pluie et le pic des cas de paludisme. L’hétérogénéité était associée soit à la prévalence du portage asymptomatique du parasite, soit à la forte densité anophélienne ou aux deux facteurs simultanément. Des mesures de lutte ciblant les maisons ou les zones de forte transmission auront un impact très limité à l’échelle infra-villages, lorsque ceux-ci sont de faible dimension (&lt;1km2) et que l’incidence clinique est forte. La prise en compte des facteurs hydrométéorologiques de risque dans l’implémentation des stratégies de lutte contre le paludisme est nécessaire. L’essai clinique de phase 2 a montré un effet protecteur de MSP3 dans la zone de transmission saisonnière comparée à celle de transmission continue. La protection était associée aux fortes réponses anti-MSP3 cytophiliques, un résultat clé pour sélectionner et améliorer les formulations pour les futurs essais de terrain. L’essai clinique de phase 1b a montré que PfSPZ était bien toléré et protégeait significativement contre les infections naturelles dues à P. falciparum pendant toute la saison de transmission. La poursuite de la recherche sur ces candidats vaccins mérite dès lors une attention particulière<br>Faced with the stagnation or even the reduction of resources allocated to fight against malaria, studies focusing on a thorough knowledge of micro-epidemiology and the development of malaria vaccines are increasingly becoming an alternative for rational use of funds. Our results show that the heterogeneity of malaria risk within the same village was perceptible during the dry season. Time series analysis showed a 3-month lag between the peak of rain and the peak of malaria cases. The heterogeneity was associated either with the prevalence of asymptomatic parasite carriage, or with the high anopheles density or with both parameters. Thus, control measures targeting houses or areas of high transmission will have a very limited impact at village scale (&lt;1km2). The consideration of hydrometeorological risk factors in the implementation of malaria control strategies is necessary. The Phase 2 clinical trial showed a protective effect of MSP3 in the seasonal transmission zone compared to the continuous transmission zone. Protection was associated with strong anti-MSP3 cytophilic responses, a key outcome for selecting and improving formulations for future field trials. The Phase 1b clinical trial showed that the PfSPZ vaccine was well tolerated and significantly protected against natural P. falciparum infections throughout the transmission season. Further research into these vaccine candidates deserves special attention

Dans ce projet de recherche, les propriétés antibactériennes et le potentiel anti-destruction tissulaire des polyphénols du thé vert, plus particulièrement l’épigallocatéchine-gallate (EGCG), ont été évalués. Dans un premier temps, l’effet antibactérien d’un extrait de thé vert et de l’EGCG a été déterminé sur trois bactéries parodontopathogènes d’importance, soit Porphyromonas gingivalis, Aggregatibacter actinomycetemcomitans et Fusobacterium nucleatum. Les concentrations minimales inhibitrices se sont avérées être entre 1000 et 62,5 µg/ml. De plus, des effets synergiques et additifs des polyphénols du thé vert ont été observés lorsqu’utilisés en association avec le métronidazole ou la tétracycline, des antibiotiques couramment utilisés en thérapie parodontale. Dans un deuxième temps, un modèle de co-culture constitué de fibroblastes gingivaux intégrés dans un gel de collagène et recouvert de macrophages a été utilisé pour évaluer la capacité des polyphénols du thé vert à inhiber la sécrétion de métalloprotéinases matricielles (MMPs), notamment les MMP-3, MMP-8 et MMP-9. Il a été démontré que les polyphénols du thé vert atténuent la sécrétion des MMPs par le modèle de co-culture. En conclusion, les résultats de cette étude ont apporté des évidences supportant le potentiel des polyphénols du thé vert en vue d’une utilisation préventive et thérapeutique pour le contrôle des maladies parodontales.

Ce travail présente une nouvelle application des alcoxyamines en chimie thérapeutique et notamment pour lutter contre le parasite plasmodium falciparum, responsable du paludisme.Cette idée repose sur l'utilisation de la chimie radicalaire. A ce jour un traitement de choix met en œuvre l'artémisinine. Le mode d'action est la destruction du parasite par la formation de radicaux libres. L'artémisinine est activée par le Fe(II) de l'hème libéré lors de la digestion de hémoglobine par le parasite. L'activation conduit à la production de radicaux alkyles qui déclenchent l'apparition d'un stress oxydatif entrainant la mort du parasite.Dans ce travail, nous avons synthétisé des alcoxyamines inédites possédant des structures chimiques particulières. Ces alcoxyamines sont activables par protonation ou par complexation par des ions métalliques tels que le Fe(II) afin de produire de façon rapide et ciblée des radicaux capable d'induire un stress oxydatif. Des études cinétiques des molécules préparées dans ce manuscrit ont aussi été effectuées. Celles-ci ont montré une réduction drastique des énergies d'activation et des temps de demi-vie des alcoxyamines activées permettant de produire des radicaux rapidement et de manière sélective. Ce travail a permis d'obtenir des alcoxyamines modèles pour valider le concept d'alcoxyamines anti-paludéens<br>This work presents a new application of alkoxyamines in therapeutics chemistry, in order to fight the parasite plasmodium falciparum, a parasite responsible for malaria.This idea is based on a mechanism similar to that of artemisinin, a standard drug used for malaria. Artemisinin is activated by iron(II) of heme, released during hemoglobin digestion by the parasite. Activation leads to the formation of radicals which trigger oxidative stress leading to the death of the parasite.In this work, we have synthesized new alkoxyamines with particular chemical structures. These alkoxyamines, upon protonation or metal-complexation, produce radicals able to afford oxydative stress. Moreover kinetic studies showed a drastic reduction of the activation energies and half-lives of activated alkoxyamines in oder to produce quickly radicals, which makes it possible to obtain model alkoxyamines with anti-malarial activities

La maladie d’Alzheimer est la démence sénile la plus répandue dans le monde. C’est une maladie neurodégénérative irréversible dont les principales caractéristiques neuropathologiques sont l’agrégation du peptide β-amyloïde et l’hyperphosphorylation de la protéine tau. Malgré de nombreux essais cliniques, la maladie d’Alzheimer reste incurable. En effet, cette pathologie est extrêmement complexe et implique de nombreux dysfonctionnements biologiques. C’est pourquoi, une des approches thérapeutiques récemment développée réside dans la conception de ligands multi-cibles. Ces molécules sont capables d’agir simultanément sur plusieurs cibles et constituent donc une approche innovante pour le traitement des maladies complexes telles que les maladies neurodégénératives. Au sein du laboratoire, un candidat médicament à double activité (inhibiteur d’acétylcholinestérase et agoniste des récepteurs 5-HT4), nommé donécopride, a récemment été décrit. Sur la base de résultats prometteurs obtenus avec le donécopride, une nouvelle série de composés à triple action a été synthétisée. En sus des activités du donécopride, cette nouvelle série possède une activité complémentaire qui réside dans le blocage des récepteurs 5-HT6. Cette thèse décrit la synthèse ainsi que l’évaluation in vitro et in vivo de ces nouveaux composés à triple action<br>Alzheimer’s disease is the most common senile dementia in the world. It is an irreversible neurodegenerative disease whose main neuropathological hallmarks are β-amyloid peptide aggregation and hyperphosphorylation of tau protein. Despite numerous clinical trials, Alzheimer’s disease remains incurable. Indeed, this pathology is extremely complex and involves the dysfunction of multi-systems. That is why, one of the recently developed therapeutic approaches lays in the design of multi-target-directed ligands. These molecules are capable to simultaneously engage several targets and therefore represent an innovative approach to treat complex disease such as neurodegenerative disorders. Within the laboratory, a dual-activity drug candidate (acetylcholinesterase inhibitor and 5-HT4 receptor agonist) named donecopride was recently described. Thanks to the promising results obtained with donecopride, a new series of triple-activity compounds has been synthesized. This new series combines an additional activity that aims to block the 5-HT6 receptors. This thesis describes the synthesis and the in vitro and in vivo evaluation of these new triple-acting compounds

La maladie de Newcastle est une de deux pestes aviaires qui, comme l’influenza, impactent fortement les élevages d’oiseaux domestiques par leur incidence clinique et leurs conséquences économiques sur la filière (contrôle des mouvements d’animaux, abattages sanitaires et préventifs). Des vaccins contre cette maladie ont été développés il y a plusieurs décennies à base de souches virales isolées dans les années 60. Ils assurent normalement une excellente protection clinique. Toutefois, depuis une dizaine d’années, des observations de terrain, principalement en Afrique et en Asie, font état d’échecs partiels de vaccination avec occurrence de foyers réduits dans des élevages a priori correctement vaccinés. En parallèle, des essais in vivo en conditions contrôlées ont établi que les vaccins actuels protégeaient bien cliniquement contre une épreuve avec des souches virulentes récentes mais n’empêchaient pas leur excrétion par les animaux vaccinés. Pour résoudre cette problématique, l’objectif de ce travail a été de générer une souche vaccinale plus efficace contre les souches virulentes circulant actuellement à l’échelle du globe. Pour générer des virus atténués modifiés, nous avons dû dans un premier temps améliorer le système conventionnel de génétique inverse. Nous montrons que la réduction du nombre de plasmides à 2 dans le système, permet de générer plus de virus atténués que le système conventionnel basé sur 4 plasmides. Dans un second temps, nous nous sommes intéressés à étudier le comportement in vitro de virus atténués et virulents équipés de marqueurs fluorescents. Nous montrons que seuls les virus virulents induisent un effet cytopathique in vitro. En revanche, les deux types de virus induisent une infection persistante à long terme sans effet cytopathique. Les cellules infectées de façon persistante résistent à une surinfection par un autre virus. En revanche, lors de co-infections simultanées, nous établissons qu’une cellule infectée par un premier virus peut s’infecter par un second virus lors d’un transfert direct de matériel viral d’une cellule à une autre par des extensions membranaires. Cette observation est remise en perspective par rapport à la capacité de ces virus à se recombiner chez l’animal telle qu’identifiée par des analyses bioinformatiques comparatives de différents isolats. En effet, nous montrons que des cellules peuvent s’infecter avec plusieurs virus par contact direct. Dans un dernier travail, une nouvelle souche vaccinale a été générée consistant à insérer des antigènes immunoprotecteurs d’un virus original isolé à Madagascar en 2008, dans un génome d’une souche vaccinale conventionnelle utilisée depuis plus de 50 ans. Nous montrons que cette nouvelle souche protège efficacement contre trois génotypes viraux dont deux circulant actuellement en Afrique et en Asie<br>In addition to influenza, Newcastle disease is one of the two major diseases of poultry that strongly impact the animal health and farming owing to animal bans and depopulations. Vaccines against Newcastle disease are available. They have been developed some decades ago from isolates collected in the 60’s. They usually provide an excellent clinical protection. However, field reports of the last decade, mainly from Africa and Asia, suggest partial vaccination failures in some farms despite proper vaccination. In parallel, in vivo trials have shown that current vaccines provide a good clinical protection against a challenge with recent field strains, but do not prevent shedding of the challenge virus from vaccinated birds. To address this issue, one of the objectives of this study was to generate a new vaccine prototype with improved efficacy against virulent strains circulating worldwide. To generate new engineered attenuated viruses, we first developed an improved reverse genetics system. We demonstrate that the reduction of the number of plasmids to 2 compared to the conventional system based on 4 plasmids does not affect the performances of reverse genetics for virulent strains but significantly increases the yield of attenuated viruses. In a second step, we focused on the behavior of the attenuated and virulent viruses generated by reverse genetics. The viruses were tagged with fluorescent reporter genes to make easier they follow up in cell culture. We show that only virulent strains produce cytopathic effects in vitro. However, both attenuated and virulent strains are able to establish persistent infection in cells without cytopathic effects. Persistently infected cells resist to a super-infection by another virus. In contrast, after co-infection by two different viruses, we show that a cell infected by one virus can be infected by a second one by direct virus trafficking between the cells through cell membrane extensions. This observation supports the possibility of recombination events in the field which are frequently claim in the literature from comparative bioinformatics of field isolates and vaccine strains. Indeed, we show that cells can be infected by multiple viruses through direct contacts between cells. In a last step, a new vaccine prototype has been produced consisting in the substitution of immune-protective antigens in the conventional LaSota vaccine by their homologues derived from an original isolate of Madagascar (2008). We show that this prototype is protective against challenges with three different viruses, including two recent isolates from Africa and Asia

La maladie du greffon contre l’hôte (GVHD) reste la complication majeure de l’allogreffe de cellules soucheshématopoïétiques (allo-CSH). La GVHD résulte de l’activation de la réponse immunitaire et de la reconnaissanced’alloantigènes par les lymphocytes T (LT) du donneur, entrainant ainsi des lésions tissulaires principalement auniveau de la peau, des intestins et du foie. L’interleukine-22 (IL-22) est une cytokine sécrétée par les LT Th1,Th17 et les cellules de l’immunité innée (ILC). Compte tenu des propriétés de l’IL-22 dans les tissus cibles de laGVHD, nous avons évalué sa contribution dans la physiopathologie de la maladie à l’aide de modèlesexpérimentaux murins. Il apparaît que les souris qui reçoivent des lymphocytes T invalidés pour l’IL-22développent une maladie moins sévère, et leur mortalité est diminuée. L’IL-22 issue du greffon participe donc à lasévérité de la GVHD en favorisant l’inflammation systémique, mais aussi locale au niveau des organes cibles. Deplus, dans les intestins, l’IL-22 agit en synergie avec les interférons de type I pour amplifier l’inflammation de typeTh1 au cours de la GVHD. Chez l’homme, la GVHD est associée à une modification du microbiote intestinal.Nous avons montré que l’absence d’IL-22 semble favoriser la colonisation de lactobacilles au détriment declostridiums, ce qui pourrait également participer à la diminution de la GVHD intestinale. Enfin, nous avonsmontré que l’effet anti-tumoral est préservé malgré l’absence d’IL-22. Ces résultats permettent donc d’envisagerde nouvelles perspectives thérapeutiques dans le traitement de la GVHD<br>Graft-versus-host disease (GVHD) is still the major complication after allogeneic stem cell transplantation. GVHDresults from the activation of the immune response and the recognition by donor T cells of alloantigens leading totissue injury, especially in skin, gut and liver. Interleukin-22 (IL-22) is a cytokine secreted by CD4+ T cells Th1 andTh17 but also by innate lymphoid cells (ILC). Given that IL-22 functions in the GVHD target tissues, weinvestigated its contribution in GVHD physiopathology using mouse experimental models. We showed that IL-22deficiency in donor cells reduced the severity of GVHD by limiting systemic and local inflammation. Moreover, inthe large intestine, IL-22 acts in synergy with type I interferon to increase Th1-like inflammation. In humans,GVHD severity is associated with microbiotal modification in the intestine. We demonstrated that IL-22 deficiencyin donor cells seems to favor lactobacillus colonization instead of clostridium. These changes of microbiotacomposition may reduce the severity of intestinal GVHD. Finally, we showed that the antitumor effect is preservedeven in absence of IL-22 donor cells. Overall, our data support the design of new clinical approaches aiming totarget IL-22 pathways in GVHD patients

Les politiques de lutte contre les maladies plus généralement et celles relatives au paludisme singulièrement, mises en œuvre depuis 1948, ont connu des fortunes diverses dans leur application à l'échelle locale. L'exemple de la Côte d'Ivoire que cette recherche a mis en lumière en est la parfaite illustration. Ainsi, de la politique «d'éradication du paludisme» qui couvre la période 1955-1970, à laquelle succède celle du contrôle du paludisme depuis cette date, les directives de lutte, qui accompagnent les grands programmes de santé de l'institution internationale, ont été diversement appliquées, du moins en ce qui concerne le paludisme. Les raisons de ce décalage entre les indications normatives et les pratiques thérapeutiques sont à la fois exogènes et endogènes. Cette étude illustre ainsi les contradictions entre les politiques de santé décidées en amont, et leur application, en aval. Elle permet de saisir aussi, le rôle central de l'OMS dans la gouvernance de la santé mondiale. Mais, elle n'occulte pas pour autant les énormes difficultés encore pendantes des systèmes de santé des pays en voie de développement comme la Côte d'Ivoire, malgré tous les efforts entrepris par l'OMS pour y remédier<br>The policies to fight diseases in general and malaria in particular since 1948 have met different forms in their implementation on a local scale. The example of the Côte d'Ivoire that this study has brought into light perfectly illustrates that point. From an "eradication of malaria" policy that ranges from 1955 to 1970 to a control of malaria since then, the fighting directives, which go along with the main health programs of international institution, have been variously implemented, at least as far as malaria is concerned. The reasons that account for this discrepancy between normative indications and therapeutical practices are both exogenous and endogenous. This study thus illustrates the contradictions between health policies decided upstream and their implementation downstream. It also helps to understand the major role of the World Health Organisation in its govemance in world health. But it does not ignore the huge and still remaining difficulties of health systems of developing countries such as the Côte d'Ivoire in spite of all the efforts undertaken by the WHO to deal with them

L'objet de cette these est d'etudier les origines et la legitimation de misereor, oeuvre catholique contre la faim et la maladie dans le tiers monde, creee par le cardinal frings en 1958. Il s'agit de determiner comment cet organisme episcopal, qui se constitue independamment des differentes associations catholiques engagees dans la lutte contre la faim, reussit a faire admettre sa legitimite au sein du catholicisme allemand. La premiere partie porte sur la situation de l'eglise catholique en rfa au lendemain de la guerre et retrace les grandes lignes du catholicisme social en allemagne, afin de mettre en evidence l'heritage dans lequel s'inscrit misereor. La deuxieme partie etudie le processus selon lequel misereor se met en place et s'impose au sein du catholicisme allemand face a ceux qui contestent sa legitimite. La troisieme partie met en relation l'action de misereor avec les positions du saint-siege en matiere de lutte contre la faim et d'aide au developpement. Il s'agit de montrer le role du concile vatican ii et du discours pontifical dans le processus de legitimation de misereor<br>This doctorate thesis is an attempt to study the origins and recognition of misereor, a cathlic charity against hunger and disease in the third world, which was created by coroner frings in 1958. It seeks to determine how this association was created independly of other catholic associations - themselves already committed to fighting against hunger - finally manager to be fully recognized within german catholicism. The first part of the thesis deals with the situation of the catholic church in west germany soon after the war and retraces the evolution of major trends in social catholicism in germany thus focussing on the legacy to which misereor belongs. The second part studies how misereor was set up and managed to gain recognition within german catholicism with those who were questioning its legitimacy. The third part analyses the action of misereor in connection with the positions of the holy see on the matter of fighting against hunger and aiding developing countries. The question is to show the role played by the second vatican council and papal doctrine in the process of recognition of misereor

Résumé :Notre équipe a développé une thérapie cellulaire originale dérivant de la lignée monocytaire. Cette sous-population de cellules humaines suppressives d’origine myéloide, appelée Human Monocyte-derived Suppressor Cells (HuMoSC, cellules CD33+), est capable d’inhiber la prolifération des lymphocytes T effecteurs et d’induire des CD4 et CD8 Treg. De plus, les HuMoSC préviennent l’apparition de la maladie du greffon contre l’hôte (GvHD).Dans un premier temps, nous avons montré qu’un environnement inflammatoire ou la présence d’immunosuppresseurs ne diminuaient pas la capacité des HuMoSC à inhiber la prolifération lymphocytaire et à favoriser l’induction de CD4 et CD8 Treg. Enfin, nous avons montré que l’effet graft-versus-leukemia (GvL) est préservé en présence des HuMoSC. Toutes ces données confirment l’intérêt des HuMoSC dans la prévention de la GvHD.Cependant, en raison d’un faible rendement de génération des HuMoSC et d’un problème de disponibilité de billes de tri CD33+ GMP, nous avons aussi modifié notre protocole pour isoler les cellules CD14+, appelées CD14-HuMoSC. Ainsi, dans un second temps, nous nous sommes intéressés aux propriétés des surnageants des HuMoSC et des CD14- HuMoSC. Ces modifications du protocole ont permis d’obtenir un grand nombre de cellules CD14-HuMoSC et de grandes quantités de surnageant produit en conditions GMP. Nous avons montré que les deux surnageants diminuaient l’activation et la prolifération des LT, diminuaient la réponse Th1 au profit de la réponse Th2, favorisaient l’induction des Treg et diminuaient la capacité des cellules dendritiques à induire la prolifération des LT. In vivo, les surnageants préviennent le développement de la GvHD dans un modèle murin de GvHD xénogénique. Enfin, pour montrer que ces deux surnageants seront efficace chez les patients, nous avons montré qu’un environnement inflammatoire ou que la présence d’immunosuppresseurs n’altéraient pas l’effet immunosuppressif des surnageants. Ces résultats confirment leur intérêt thérapeutique. L’étude proteomique de ces deux surnageants a permis d’identifier des protéines immunosuppressives qui pourraient être responsables de leurs capacités immunosuppressives.En conclusion, les HuMoSC et les surnageants des cellules dérivées des HuMoSC représentent un arsenal thérapeutique prometteur dans la prévention de la GvHD mais aussi dans les maladies inflammatoires<br>Abstract :Our team has developed an original cell therapy derived from monocytes. This sub-population of human suppressor cells of myeloid origin, called Human Monocyte-Derived Suppressor Cells (HuMoSC, CD33+ cells) is able to inhibit effector T cell proliferation and to induce CD4 and CD8 Treg. It has been demonstrated that HuMoSC prevent from graft-versus-host disease (GvHD).In a first time, we showed that an inflammatory environment or the presence of immunosuppressive drugs did not decrease HuMoSC abilities to inhibit T cell proliferation and to promote CD4 and CD8 Treg induction. Finally, we showed that graft-versus-leukemia (GvL) effect is preserved in presence of HuMoSC. Taken together, those data confirm the interest of HuMoSC in GvHD prevention.Nevertheless, due to a low yield of HuMoSC generation with this protocol and problem with avaibility of CD33 GMP beads, we also modified our protocol to isolate CD14+ cells, called CD14-HuMoSC. This is why in a second time, we took interest in HuMoSC and CD14-HuMoSC supernatant properties. These protocol modifications allow us to obtain large number of CD14-HuMoSC cells and large quantities of supernatant produced under GMP conditions. We showed that both supernatants decrease T cell activation and proliferation, decrease Th1 response in favor of Th2 response, promote Treg induction and decrease capacity of dendritic cells to induce T cell proliferation. In vivo, supernatants prevent from GvHD in a murine model of xenogenic GvHD. Finally, in order to assess that these supernatants will be efficient in patient, we showed that an inflammatory environment or presence of immunosuppressive drugs did not alter both supernatant immunosuppressive effects. These results confirm their therapeutic interest. Proteomic analysis allowed us to identify immunosuppressive proteins which could be responsible for supernatants immunosuppressive capacities.In conclusion, HuMoSC and supernatant derived from HuMoSC represent a promising therapeutic arsenal for GvHD prevention but also in inflammatory diseases

Dans le contexte de recherche et développement d'un nouveau traitement thérapeutique, le chercheur veut surveiller ses thématiques de recherche pour actualiser ses connaissances. Il a besoin d'accéder à l'information qui lui est utile directement sur son ordinateur. La prise en compte de la complexité d'un système biologique, révèle la très grande difficulté à traduire de façon linguistique toute une réflexion hypothétique. Nous proposons dans ce travail, un procédé détaché du système de langue. Pour ce faire, nous présentons une méthodologie basée sur une indexation qualitative en utilisant un filtrage personnalisé. L'index n'est plus d'ordre linguistique mais de type " liaisons de connaissances ". Cette méthode d'indexation qualitative appliquée à " l'information retrieval " contraste avec l'indexation documentaire et l'utilisation d'un thésaurus tel que le MeSH lorsqu'il s'agit d'exprimer une requête complexe. Le choix du sujet d'expérimentation sur la base de données Medline via PubMed constitue une démonstration de la complexité d'expression d'une problématique de recherche. Le thème principal est un traitement possible de la maladie d'Alzheimer. Cette expérience permet de mettre en avant des documents contenus dans Medline qui ne répondent pas ou peu à une indexation en mots-clés. Les résultats obtenus suggèrent qu'une " indexation en connaissances " améliore significativement la recherche d'information dans Medline par rapport à une simple recherche sur Google pratiquée habituellement par le chercheur. Assimilable à une veille scientifique, cette méthodologie ouvre une nouvelle collaboration entre professionnels de l'information et chercheurs

La maladie alcoolique du foie et la stéatopathie métabolique figurent parmi les principales causes de morbi-mortalité dans les pays occidentaux en raison d'une accumulation progressive d'une fibrose dans le foie. Il n'existe à ce jour aucune molécule sûre et efficace dont l'effet antifibrosant ait formellement été démontré chez l'homme. Les macrophages du foie jouent un rôle central dans la pathogenèse de la fibrose hépatique en produisant des cytokines pro inflammatoires et fibrogéniques qui favorisent l'activation des cellules fibrogéniques du foie. L'autophagie est un processus de dégradation lysosomale qui présente des propriétés anti-inflammatoires en inhibant la production des cytokines pro-inflammatoires.Dans une première étude, nous démontrons que des souris invalidées pour le gène ATG5 dans la lignée myéloïde (Atg5Mye-/-) traitées par le CCl4, produisent une fibrose hépatique aggravée par rapport aux souris sauvages. En outre, les souris Atg5Mye-/- présentent une augmentation de l'atteinte hépatocytaire, du recrutement de cellules inflammatoires (monocytes et neutrophiles) et de la production des cytokines IL-1α et IL-1β. De plus, l'expression des marqueurs fibrogéniques est augmentée dans les myofibroblastes exposés à un milieu conditionné de macrophages ATG5-/- traités par le LPS par comparaison au milieu conditionné de macrophages sauvages. Ces effets sont reversés près prétraitement du milieu conditionné de macrophages ATG5-/- avec des anticorps neutralisant l'IL-1α et l'IL-1β. Enfin, l'administration simultanée d'un antagoniste de l'IL-1R1 aux souris Atg5Mye-/- traitées par le CCl4, atténuée l'atteinte hépatique et la fibrose, suggerant que les propriétés anti-inflammatoires et anti-fibrogéniques dans le foie de l'autophagie macrophagique sont influencés par l'IL-1α et l'IL-1β.Dans un deuxième temps, nous avons montré que les souris invalidées pour le récepteur CB2 dans les cellules myéloïdes (CB2Mye−/−) exprimaient fortement des gènes pro-inflammatoires et déclaraient une stéatose hépatique lors de l'induction alcoolique en comparaison aux souris sauvages. L'activation du récepteur CB2 par JWH-133 augmente l'autophagie des macrophages du foie chez les souris ayant reçu une alimentation alcoolisée, alors que cette autophagie est inhibée pour les souris CB2Mye−/− dans les mêmes conditions d'alimentation. Sur des cultures de macrophages péritonéaux, nous avons montré que JWH-133 limite l'induction des gènes inflammatoires provoquée par le LPS dans les macrophages péritonéaux sauvages, sauf pour les cellules déficientes en ATG5-, suggérant que les effets anti-inflammatoires et anti-stéatogènes du récepteur CB2 sont médiés par l'autophagie. En effet, les agonistes du récepteur CB2 pourraient jouer un rôle protecteur contre l'inflammation du foie et la stéatose induites par l'alcool chez l'individu sauvage, mais pas chez les souris ATG5Mye−/−.Ces résultats i) présentent l'autophagie des macrophages comme un nouveau processus anti-inflammatoire qui régule la fibrose hépatique et ii) identifient le récepteur CB2 comme un régulateur de l'autophagie dans les macrophages, qui protège de la stéatose induite par l'alcool par inhibition de l'inflammation hépatique<br>Alcohol abuse and non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) are leading causes of liver-related morbi-mortality in Western countries that may lead to accumulation of fibrosis in the liver. Efficient treatments are lacking and there is currently no molecule approved for the treatment of liver fibrosis. Hepatic macrophages play a pivotal role in the initiation and perpetuation of the inflammatory response in fatty liver disease and in progression to fibrosis. Autophagy is a lysosomal degradation pathway that limits the production of pro-inflammatory cytokines. The aim of my thesis was to explore the contribution of macrophage autophagy on alcohol-induced liver injury and fibrosis.In a first study, we show that mice invalidated for the autophagy-gene ATG5 in myeloid cells (Atg5Mye-/- mice) develop exacerbated fibrosis as compared to WT littermates in response the hepatotoxin CCl4. Moreover, Atg5Mye-/- mice produce higher hepatic levels of IL-1α and IL-1β, and show enhanced inflammatory cell recruitment associated with exacerbated liver injury. Hepatic myofibroblasts exposed to the conditioned medium of macrophages from Atg5Mye-/- mice displayed increased profibrogenic gene expression, which could be blunted by neutralizing IL-1α and IL-1β in the conditioned medium of Atg5-/- macrophages. Finally, administration of an IL-1R1 antagonist to Atg5Mye-/- mice exposed to carbon tetrachloride blunted liver injury and fibrosis, revealing that the deleterious effects of macrophage autophagy invalidation are mediated through IL-1α/β.In a second study, we generated mice invalidated for CB2 receptor (CB2Mye−/− mice) in myeloid cells. These mice showed enhanced alcohol-induced pro-inflammatory gene expression and hepatic steatosis as compared to WT littermates. Conversely, mice administered JWH-133 show reduced alcohol-induced liver injury. Activation of the CB2 receptor by JWH-133 increased macrophage autophagy in the livers of alcohol-fed mice, whereas autophagy was inhibited of alcohol-fed CB2Mye−/− mice. In cultured peritoneal macrophages, JWH-133 reduced the induction of inflammatory genes by LPS in WT peritoneal macrophages, but not in ATG5-deficient cells, suggesting that the anti-inflammatory and anti-steatogenic effects of the CB2 receptor are mediated through autophagy. Indeed, the CB2 agonist could protect against alcohol-induced liver inflammation and steatosis in WT, but not in ATG5Mye−/− mice.These results uncover macrophage autophagy as a novel anti-inflammatory pathway that regulates liver fibrosis, and identify CB2 receptor in macrophages as regulator of autophagy that protects from alcohol-induced steatosis by inhibiting hepatic inflammation. Exploiting macrophage autophagy may therefore be an interesting novel target in the treatment of chronic liver disease

Deux maladies virales majeures affectent les elevages cunicoles europeens: la myxomatose et la maladie hemorragique virale des lapins (rvhd). Pour tenter de proteger les lapins europeens (oryctolagus cuniculus) contre ces deux viroses, nous avons construit un virus recombinant vaccine-rhdv et deux virus recombinants myxomatose-rhdv. Ces virus recombinants expriment la proteine de capside (vp60) du virus de la maladie hemorragique virale des lapins (ou rhdv). La proteine recombinante ainsi produite, d'un poids moleculaire de 60kda, est immunoprecipitee par un serum immun anti-rhdv, et un anticorps monoclonal anti-vp60. L'administration de chacun des virus recombinants a de jeunes lapins induit la synthese d'anticorps specifiques anti-vp60 ; de plus, les virus recombinants myxomateux presentent un pouvoir antigenique comparable a celui du virus myxomateux parental. Une seule inoculation d'un des virus recombinants permet de proteger parfaitement les lapins contre la rvhd, les virus recombinants myxomateux induisant, quant a eux, une protection partielle contre la myxomatose, equivalente a celle procuree par le virus parental

Dans le contexte de recherche et développement d’un nouveau traitement thérapeutique, le chercheur veut surveiller ses thématiques de recherche pour actualiser ses connaissances. Il a besoin d’accéder à l’information qui lui est utile directement sur son ordinateur. La prise en compte de la complexité d’un système biologique, révèle la très grande difficulté à traduire de façon linguistique toute une réflexion hypothétique. Nous proposons dans ce travail, un procédé détaché du système de langue. Pour ce faire, nous présentons une méthodologie basée sur une indexation qualitative en utilisant un filtrage personnalisé. L’index n’est plus d’ordre linguistique mais de type « liaisons de connaissances ». Cette méthode d’indexation qualitative appliquée à « l’information retrieval » contraste avec l’indexation documentaire et l’utilisation d’un thésaurus tel que le MeSH lorsqu’il s’agit d’exprimer une requête complexe. Le choix du sujet d’expérimentation sur la base de données Medline via PubMed constitue une démonstration de la complexité d’expression d’une problématique de recherche. Le thème principal est un traitement possible de la maladie d’Alzheimer. Cette expérience permet de mettre en avant des documents contenus dans Medline qui ne répondent pas ou peu à une indexation en mots-clés. Les résultats obtenus suggèrent qu’une « indexation en connaissances » améliore significativement la recherche d’information dans Medline par rapport à une simple recherche sur Google pratiquée habituellement par le chercheur. Assimilable à une veille scientifique, cette méthodologie ouvre une nouvelle collaboration entre professionnels de l’information et chercheurs<br>In the context of research and development for a new therapeutic treatment, the researcher seeks to monitor relevant research topics in order to update field-specific knowledge. Direct computer access to relevant information is required. The complexity of biological systems increases the great difficulty of translating some hypothetical reflections in a linguistic manner or by semiotics. In this study, we propose a detached process of the system of language. To do this, we will present a methodology based on a qualitative indexing using personalized filtering. The index is no longer of a linguistic nature but a sort of “connection of knowledge”. This method of qualitative indexing applied to information retrieval is in contrast with documentation indexing systems and the use of thesauruses such as MeSH when it pertains to formulating a complex request. The choice of the experimentation subject using Medline database via PubMed proves the complexity of research problem formulation. The main theme is a possible treatment of Alzheimer's disease. This experiment makes it possible to highlight the documents contained in Medline which provide few or no answers by indexing keywords. The results obtained suggest that an indexing knowledge significantly improves search results for information via Medline in comparison to “Google” searches habitually carried out by the researcher. Comparable to scientific awareness, this methodology opens new collaboration possibilities between information professionals and research

La maladie d’Alzheimer (MA) est la forme de démence la plus fréquente rencontrée chez les personnes âgées. C’est une maladie neurodégénérative qui engendre un déclin progressif des facultés cognitives et de la mémoire. Actuellement, seuls quatre médicaments palliatifs sont autorisés pour traiter les patients atteints de la MA. Le concept de ligand multi-cibles est particulièrement intéressant pour traiter les aspects multifactoriels de cette pathologie. Cette approche consiste à associer deux ou plusieurs pharmacophores pour agir simultanément sur différentes cibles impliquées dans le processus neurodégénératif de la MA. Dans ce contexte, deux nouvelles familles de ligands multi-cibles ont été développées reposant sur un motif central, l’huprine, un puissant inhibiteur de l’AChE. Le second pharmacophore utilisé est une coumarine, un inhibiteur des MAOs, ou un flavonoïde/stilbénoïde, un antioxydant d’origine naturelle. Les propriétés biologiques de ces nouveaux ligands ont été évaluées in-vitro et ont montré des résultats très prometteurs. En parallèle, nous avons exploité les propriétés du motif huprine pour développer trois nouvelles familles de sondes fluorescentes pour visualiser l’AChE, une enzyme essentielle dans les domaines de la neuroscience et de la toxicologie. Un outil efficace et novateur permettant la détection de l’AChE fonctionnelle au niveau des jonctions neuromusculaires et du striatum a ainsi été développé<br>Alzheimer disease (AD) is the most common cause of dementia among the elderly. It is a neurodegenerative illness leading to progressive loss of cognitive abilities and memory. Currently, four drugs were approved by the FDA and offer only a palliative treatment against AD. The concept of multi-target directed ligand (MTDL) is particularly interesting for the treatment of multifactorial pathologies such as AD. This approach consists in associating two or more pharmacophores which act simultaneously toward different targets involved in the neurodegenerative process of AD. In this context, two new series of MTDLs have been synthesized, based on the huprine scaffold, known as a potent AChEI. The second pharmacophore is either a coumarin, a MAOs inhibitor, or a flavonoid/stilbenoid, a natural antioxidant. Biological properties of these new MTDLs have been evaluated in vitro and showed very promising results. Besides, we took the advantages of huprine properties to develop three new fluorescent probe families for AChE imaging, a key enzyme in neuroscience and toxicology. Hence, an efficient and innovative tool for the detection of active AChE at the neuromuscular junction and in striatum has been developed

A proteína de ligação em Duffy (PvDBP) dos merozoítos de P. vivax se liga a glicoproteínas de membrana, chamadas de grupo sanguíneo Duffy, conhecidas como DARC. Indivíduos DARC negativos são normalmente resistentes a infecção estágio sanguínea por P. vivax; portanto, PvDBP é um forte antígeno canditato a vacina. Aqui, investigamos respostas de anticorpos contra três proteínas derivadas de PvDBP e MSP119, em 343 indivíduos de uma região Amazônica brasileira. Anticorpos contra Sal III-His, OII-His, Sal III-IV-GST e MSP119-GST foram encontrados em 43,7%, 39,0%, 14,3% e 38,8% dos indivíduos. Os indivíduos FY*BESFY*BES foram os que menos apresentaram anticorpos contra PvDBP, porém encontramos proporções similares de respondedores entre indivíduos com outros genótipos. A análise de sequências revelou muitas variantes da região II de PvDBP em 41 isolados. A mais comum (encontrada em 28,8% dos isolados), difere de Sal I e PNG- O em seis codóns de aminoácidos. Nenhuma variante tipo Sal I, cujo protótipo de vacina está em teste clínico, foi encontrada nos parasitas locais.<br>The Duffy binding protein (PvDBP) of the P. vivax merozoites, which binds to a erythrocyte membrane glycoprotein known as Duffy blood group antigen for chemokines (DARC). DARC-negative individuals are usually resistant to blood-stage infection with P. vivax; therefore, PvDBP is a major vaccine candidate antigen. Here, we investigated antibody responses to three proteins derived from PvDBP and MSP119, in 343 subjects in the Amazon of Brazil. Antibodies to Sal III-His, OII-His, Sal III-IV-GST and MSP119-GST were found in 43,7 %, 39,0%, 14,3% and 38,8% of the subjects. FY*BESFY*BES individuals were less likely to have antibodies to PvDBP, but we found similar proportions of seropositive subjects with other genotypes. Sequence analysis revealed several region II PvDBP variants in 41 local P. vivax isolates. The most common of them (found in 28,8% isolates) differs from Sal I and PNG-O alleles in six amino acid codons. No Sal I-type variant, from which a PvDBP-based vaccine prototype currently under clinical testing has been derived, was found in local parasites.

No presente estudo, avaliamos a resposta de anticorpos, por ELISA, contra um recombinante bacteriano baseado no domínio 11 da Proteína Ligação ao Duffy (DBP-RII) em indivíduos naturalmente expostos Plasmodium vivax. Amostras de soro de 160 pacientes com malária vivax, procedentes de duas áreas endêmicas do Estado do Pará (Belém e São Jorge), foram utilizadas neste estudo. Estes soros foram também testados contra outras duas proteínas recombinantes derivadas de merozoítas de P. vívax, para efeito de comparação da resposta de anticorpos: AMA-1 (Antígeno 1 Membrana Apical) e MSP119 (região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 Superfície do Merozoíta). A freqüência de indivíduos que apresentaram anticorpos IgG específicos contra as proteínas recombinantes DBP-RII, AMA-1 e MSP119 foi de 15,6% 50% e 93,1%, respectivamente. Observamos que a proporção de indivíduos que apresentaram anticorpos contra DBP-RII e AMA-1 aumentou de acordo com o maior número de exposições prévias ao P. vivax, enquanto que resposta de anticorpos contra a MSP119 desenvolveu-se rapidamente após uma única exposição ao parasita. A persistência da resposta de anticorpos contra DBP-RII, AMA-1 MSP119 foi avaliada em amostras de soro coletadas durante a infecção patente e dois ou nove meses após o tratamento. Observamos que, durante este período, não houve uma diminuição significativa das freqüências respondedores contra DBP-RII e AMA-1. Por outro lado, a freqüência respondedores contra a MSP119, diminuiu significativamente nove meses após o tratamento. Não observamos diferença significativa entre os títulos anticorpos obtidos contra DBP-RII e AMA-1, durante a infecção e dois ou nove meses após o tratamento, indicando que a resposta de anticorpos se manteve. Por outro lado, os títulos de anticorpos para MSP119 foram significativamente maiores durante a infecção patente do que nove meses após o tratamento.<br>In the present study, we evaluated by ELISA the antibody immune response to a recombinant protein based on the domain II of the Duffy Binding Protein (DBP-RII) in individuals naturally exposed to Plasmodium vivax. Serum samples from 160 patients with vivax malaria were collected in two endemic areas of State of Pará (Belém and São Jorge). For purposes of comparison, ELISA were also performed using two other recombinant proteins representing antigens derived from P. vivax merozoites: AMA-1 (Apical Membrane Antigen-1) and MSP119 (19kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein-1). The frequency of individuals who presented IgG antibodies specific to the recombinant proteins DBP-RII, AMA-1 or MSP119 were 15.6%, 50% or 93.1 respectively. We observed that the proportions of individuals who presented antibodies against DBP-RII or AMA-1 increased according to the number malaria episodes, while the antibodies response to MSP1 19 developed quickly after a single contact with the parasite. The persistence of antibodies response to DBP-RII, AMA-1 or MSP119 was compared in serum samples during patent infection or two and nine months following treatment. We observed that during this period the frequency responders to DBP-RII and AMA-1 remained similar. In contrast, the frequency of responders to MSP119 dropped significantly nine months after treatment. No difference was observed when we compared the antibody titers obtained DBP-RII or AMA-1 during the infection or after treatment. These results established that the antibodies response to DBP-RII or AMA-1 remained similar two or nine months after treatment. In contrast, the antibody titers to MSP119 were significantly lower nine months after treatment when compared to patent infection.

La transplantation de cellules souches hématopoïétiques (CSH) constitue une avenue thérapeutique potentiellement curative pour plusieurs cancers hématologiques comme la leucémie. L’utilisation d’une thérapie immunosuppressive pour prévenir la maladie du greffon contre l’hôte (GvHD) est un déterminant majeur du succès de la greffe. Malgré tout, cette complication survient chez 25 à 50% des transplantés et est une cause majeure de mortalité. L’optimisation du régime d'immunosuppression est un facteur facilement modifiable qui pourrait améliorer le pronostic des patients. Particulièrement, les polymorphismes du génome du donneur ou du receveur dans les voies pharmacogénomiques des immunosuppresseurs pourraient influencer l’exposition et l’action de ces médicaments, de même que le pronostic du patient. Le profilage de 20 pharmacogènes prioritaires chez des paires de donneurs-receveurs en greffe de CSH a permis d’identifier des variations génétiques liées au risque de la GvHD aiguë. Principalement, le statut génétique du receveur pour les protéines ABCC1 et ABCC2, impliquées dans le transport du méthotrexate (MTX), ainsi que des cibles moléculaires de ce médicament (ATIC et MTHFR) ont été associées au risque de GvHD aiguë. Similairement, le NFATc1, codant pour une cible moléculaire de la cyclosporine, augmentait lui aussi le risque de la maladie. Les porteurs de deux génotypes à risque et plus étaient particulièrement prédisposés à développer cette complication. Par surcroît, le statut génétique du donneur influençait également le pronostic du receveur après la greffe. Entre autres, des allèles protecteurs ont été identifiés dans les voies liées au transport (SLC19A1) et à l’action du MTX (DHFR). Inversement, NFATc2 a été associé à une augmentation du risque de GvHD aiguë. Afin de mieux comprendre les associations observées entre ces marqueurs génétiques et le risque de GvHD aiguë, une étude prospective innovante est en cours chez des greffés de CSH. Cette étude permettra d’étudier comment la génétique du patient ou du donneur peut influencer la pharmacocinétique et la pharmacodynamie des immunosuppresseurs, de même que leurs liens avec la GvHD aiguë. Ces paramètres sont quantifiés grâce à des approches analytiques que nous avons mises au point afin de répondre aux besoins spécifiques et uniques de cette étude. Les approches proposées dans cette thèse sont complémentaires aux méthodes classiques de suivi des immunosuppresseurs et pourraient aider à optimiser la pharmacothérapie du patient. Une meilleure identification des patients à haut risque de GvHD aiguë avant la greffe, basée sur des marqueurs pharmacogénomiques identitaires, pourrait guider le choix de la prophylaxie immunosuppressive, et ainsi améliorer l’issue clinique de la greffe.<br>Hematopoietic stem cells transplantation (HSCT) is a potentially curative therapy for several hematological cancers such as leukemia. Following transplantation, effective immunosuppression prophylaxis is mandatory to prevent the graft-versus-host disease (GvHD) and improved the clinical outcome. However, GvHD still occurs in 25-50% of transplanted patient and is associated with high mortality rate. Optimization of immunosuppressive therapy is an easily modifiable factor that can improve the prognosis of patient after HSCT. In particular, polymorphisms of recipient and donor in genes with functions related to drugs transport, metabolism and action might influence the exposure and the efficacy of immunosuppressive therapy, and thus the clinical outcome. The evaluation of 20 candidate pharmacogenes in donor-recipient pairs of HSCT identified genetic polymorphisms associated with the risk of GvHD. Recipient genetic status for ABCC1 and ABCC2, related to methotrexate (MTX) transport, as well as polymorphisms in genes encoding molecular targets (ATIC and MTHFR) of this drug, exhibit a remarkable influence on acute GvHD prevalence. Similarly, the cyclosporin molecular target NFATc1 also increases the risk of GvHD. Importantly, the presence of ≥2 of these SNPs was found to be associated with high risk of developing severe grade of acute GvHD. In donor, we identified protective alleles in pathways related to transport (SLC19A1) and action (DHFR) of MTX. Conversely, NFATc2 enhances the risk of acute GvHD. To improve our understanding of the process behind these associations, we have an ongoing prospective study in HSCT. This innovative study will provide the opportunity to evaluate the influence of such genetic markers on the pharmacokinetic and pharmacodynamic of immunosuppressive drugs, as well as their relation with the risk of GvHD. For the specific needs of our study, we have developed two analytical methods based on mass spectrometry. The approaches we proposed in this thesis are complementary to conventional monitoring method and are promising tools to optimize drug therapy in HSCT. Identification of such biomarkers assessed before transplantation can help personalized patient care in order to prevent GvHD and improve survival.

Nous avons etudie les effecteurs et les antigenes mineurs d'histocompatibilite (agmh) cibles de la maladie du greffon contre l'hote (gvhd) dans un modele experimental murin de greffe de cellules de donneurs b10. D2 a des receveurs f#1 (dba/2 x b10. D2) h-2#d compatibles. La plupart des clones t isoles des splenocytes des souris malades exprime le phenotype tcr alpha/beta#+ cd4#+ cd8#- et est specifique d'agmh dba/2. Les clones t cd4#+, capables d'induire la gvhd mortelle, secretent de fort taux de tnf, suggerant que cette maladie pourrait resulter d'une reaction inflammatoire. Les agmh associes aux molecules de classe ii du cmh et individualises par les clones t cd4#+ ont une distribution tissulaire et cellulaire specifique et sont faiblement polymorphes. L'analyse des facteurs etiologiques de la gvhd a montre que la presence, chez le receveur, de provirus endogenes responsables des tumeurs mammaires de la souris (mtv) accelere le developpement de la gvhd. Ceci semble relie a la capacite qu'ont les mtv de coder pour des superantigenes (sags) qui seraient des costimulus de la reponse aux agmh. L'etude du repertoire t selectionne lors de la maladie revele qu'aucun agmh ne semble se comporter comme immunodominant lors de cette maladie. La gvhd letale est prevenue en immunisant le donneur par le sag mls-1#a. Ce sag permet l'activation de cellules t double-negatives (tcr alpha/beta#+ cd3#+ cd5#+ cd4#- cd8#-) qui suppriment le developpement de la gvhd letale. Les lymphocytes t des souris protegees sont tolerants aux ag de l'hote et la tolerance repose sur la suppression des lymphocytes t cd4#+ specifiques des agmh de l'hote. Les resultats obtenus a partir du modele de prevention de la maladie confirment le role du sag mls-1#a ainsi que celui des lymphocytes t cd4#+ specifiques des agmh dans la gvhd letale

Depuis une dizaine d'années, la recherche sur les molécules d'origine marine est l'objet de développements intenses. Certains de ces composés naturels, extraits d'organismes marins, ont été évalués en tant qu'inhibiteurs potentiels de kinases impliquées dans le cancer ou pour les maladies neurodégénératives (Alzheimer). L'objectif de nos travaux de recherche est de synthétiser et d'évaluer des analogues d'un alcaloïde marin appartenant à la famille des alcaloïdes pyrroles-imidazoles C₁₁N₅, le Dispacamide A, extrait d'une éponge marine (Agelas dispar) et isolé pour la première fois en 1992. L'exploration pharmacologique et les évaluations biologiques de ce composé sont peu décrites dans la littérature. Au sein du laboratoire, plusieurs projets combinant les méthodologies de la synthèse organique en accord avec les 12 principes de la chimie du développement durable (micro‑ondes, réactions multicomposantes…) et la synthèse de dérivés 2-amino-imidazol‑4‑ones, ont permis de développer des molécules possédant une activité inhibitrice vis-à-vis de certaines kinases (notamment des analogues de la leucettamine B). C'est en s'appuyant sur ce savoir-faire que nous avons synthétisé des analogues originaux du Dispacamide A dérivés d'imidazolin-4-ones et de thiazolin-4-ones, afin de tester leur activité sur des kinases impliquées dans des processus biologiques liés au cancer ou à la pathologie d'Alzheimer (DYRK, CDK, GSK3, CLK, PI3K, CK1) en partenariat avec la station biologique de Roscoff, la plateforme biologique d'Orléans et l'Inserm de Rennes<br>Since several years, marine molecules have been widely studied. Some of these natural compounds from marine organisms have been evaluated as kinase inhibitors in cancer or in neurodegenerative diseases (Alzheimer). Our goal is to synthesize and to evaluate marine alkaloid analogs derived from the Dispacamide A, a member of C11N5 pyrrole-imidazole family extracted from a marine sponge (Agelas Dispar) in 1992. Few pharmacologic exploration and biological evaluation are described in literature. In our laboratory, many projects combinating green chemistry (microwaves, multicomponent reactions…) and synthesis of 2-amino-imidazol-4-ones, have led to the development of new kinase inhibitors (mostly Leucettamine B analogs). Based on this experience, we aim at synthesize and evaluate new Dispacamide A analogs, derived from imidazolin-4-ones and thiazolin-4-ones, as potential kinase inhibitors against cancer and Alzheimer disease (DYRK, CDK, GSK3, CLK, PI3K, CK1). Biological screening is realized in partnership with the Station Biologique de Roscoff, the Plateforme kinase d’Orléans and the Inserm de Rennes

A maioria das cepas de Plasmodium falciparum mostra-se resistente à cloroquina (CQ), considerado o antimalárico ideal. A busca por novos agentes terapêuticos bem como a restauração do efeito antimalárico de fármacos disponíveis, através da associação a agentes moduladores da resistência (AMR), vem sendo enfatizada. Entretanto, ausência de efeito modulador da resistência e efeito antiplasmódico intrínseco foram observados quando AMR clássicos, como o fenotiazínico clorpromazina e o iminodibenzílico desipramina, foram ensaiados in vitro em isolados brasileiros de P. falciparum resistentes à CQ. Sabe-se que a ação antiparasitária de compostos de natureza tricíclica, como os fenotiazínicos, foi descrita há mais de um século e continua a ser de interesse. Em adição, vale notar a ocorrência de farmacóforo comum, formado por sistema heteroaromático, ligado a átomo de nitrogênio, secundário ou terciário, por cadeia lateral de três a quatro átomos de carbono, entre compostos quinolínicos antimaláricos, fármacos psicotrópicos e AMR. Este trabalho teve como objetivo estudar, por emprego da modelagem molecular, características estereo-eletrônicas e lipofílicas e a interação a nível molecular de compostos de natureza tricíclica (fenotiazínicos e iminodibenzílicos) com a hematina (provável sítio de ação da CQ) comparando ao antimalárico CQ. Semelhanças estéreo-eletrônicas e lipofílicas puderam ser visualizadas entre as moléculas da CQ e dos compostos tricíclicos. No entanto, algumas distinções ausência de planaridade e maior densidade eletrônica sobre os anéis tricíclicos dos anéis heterocíclicos quando comparadas à CQ. Tais características se fizeram refletir na interação com a hematina, como demonstrado nos estudos de ancoramento como também nos estudos de UV-VIS e de Raman Ressonante.<br>The most Plasmodium falciparum strains show resistance to chloroquine (CQ), yet considered the ideal antimalaric agent. The search for new therapeutic compounds and the restoration of the antimalarial effect of available drugs through the association with modulating agents has been emphasized. However, lack of modulating effect and intrinsic antiplasmodial activity were observed when classic modulating agents, such phenothiazine chlorpromazine and iminodibenzylic desipramine, were tested in vitro against Brazilian isolated resistant of P. falciparum to CQ. The antiparasitic action of tricyclic compounds as the phenotiazine class has been described for more than a century and continues to be of interest. In addition, it was noted the occurrence of common pharmacophore, formed by a heteroaromatic system, a secondary or tertiary nitrogen atom, linked by a side chain of three to four carbon atoms, present among the quinoline antimalarials, the psychotropic drugs and the modulating agents of chloroquine resistance. The goal of this work was by using molecular modeling to study stereo-electronic features and lipophilic characteristics and the interaction on molecular level of tricyclic compounds (phenothiazines and iminodibenzylics) with hematin (probable site of action of CQ) in comparison to antimalaric CQ. In results, similarities stereo-electronic and lipophilic could be viewed between the molecules of CQ and tricyclic compounds. However different features could be noticed such as absence of planarity and a higher electronic density on the tricyclic rings when compared to CQ. These features shown to be relevant to interaction with the &#181;-oxo dimer of hematin, as observed in docking studies and UV-VIS and Resonance Raman.

L’allogreffe de cellules hématopoïétiques est une stratégie thérapeutique importante dans les hémopathies malignes. La maladie du greffon contre l’hôte (GvH) en est une complication majeure menaçant le pronostic vital. Elle est due à la reconnaissance des antigènes du receveur par les lymphocytes T du donneur et à l’activation de ceux-ci, à l’origine de dommages tissulaires. L’altération de la barrière intestinale joue un rôle critique dans la GvH. La famille des protéines de choc thermique (HSP)90 comporte cinq membres dont trois cytosoliques dénommés HSP90, et un localisé dans le réticulum endoplasmique (RE), Gp96, qui peut être sécrété en cas de stress. Nous montrons dans nos travaux de thèse que la 17AAG, un inhibiteur des HSP90, réduit la mortalité liée à la GvH dans un modèle murin. Cet effet est associé à une augmentation de la réponse au stress du RE dans les cellules épithéliales intestinales comme en atteste l’augmentation de l’épissage du facteur de transcription XBP-1, corrélée à une diminution du dommage tissulaire intestinal. Ces résultats permettent d’envisager une place pour la 17AAG ou d’autres inhibiteurs de HSP90 dans la prévention de la GvH chez l’homme. D’autre part, nous montrons que Gp96 est sécrétée dans le sérum de patients développant une GvH aiguë sévère avec atteinte intestinale. Nous suggérons de valider la pertinence de Gp96 comme biomarqueur de GvH intestinale dans une étude de plus grande ampleur. Enfin, nous trouvons que Gp96 s’associe avec le composant 3 du complément, une protéine impliquée dans l’immunité innée et adaptative, et inhibe certaines de ses fonctions. Les conséquences fonctionnelles de cette association sont discutées<br>Allogeneic hematopoietic cell transplantation is a treatment for certain disorders including hematologic malignancies. Graft-versus-host-disease (GvHD) is a major, life-threatening complication. It is due to the recognition of recipient antigens by donor T cells, which activate and damage tissues. Intestinal barrier alteration plays a critical role in GvHD. Heat shock proteins (HSP)90 include five members, three cytosolic members named HSP90, and one member localized in endoplasmic reticulum (ER) called Gp96 and able to gain extracellular level in case of stress. We show in our thesis that 17AAG, a HSP90 inhibitor, reduces GvHD mortality in a mouse model. This effect is associated with an increase in ER stress pathway in intestinal epithelial cells as figured by transcription factor XBP-1 splicing, correlated to a decrease in intestinal tissue damage. These results suggest that 17AAG could be considered in GvHD prevention in human. Moreover, we show that Gp96 is secreted in serum of patients developing an acute GvHD with intestinal involvement. We propose to validate the relevance of Gp96 as an intestinal GvHD biomarker is a larger study. Finally, we find that Gp96 associate with complement component 3, a protein involved in innate and adaptive immunity, and inhibit some of its functions. Functional consequences of this association are discussed

Nos últimos anos, estudamos vários aspectos da resposta imune naturalmente adquirida em indivíduos de diferentes áreas endêmicas da Região Amazônica expostos à malária. Para isso, utilizamos proteínas recombinantes baseadas em antígenos de formas sanguíneas de P. vivax, os quais têm sido considerados candidatos à vacina contra a malária vivax. No presente trabalho, nossos estudos imunoepidemiológicos concentraram-se em 396 indivíduos de uma comunidade rural da Amazônia ocidental brasileira, localizada no Estado do Acre, com o objetivo de realizar um estudo transversal e longitudinal da resposta de anticorpos contra um painel de proteínas recombinantes derivadas de merozoítos de P. vivax (MSP119, AMA-1, MSP3&#945; e MSP3&#946;). Para isso, os soros desses indivíduos foram testados por ELISA quanto ao reconhecimento das quatro proteínas recombinantes. As proporções de indivíduos na linha de base com anticorpos IgG contra MSP119, AMA- 1, MSP3&#945; e MSP3&#946; foram de 59,8%, 50,0%, 23,5% e 26,5%, respectivamente. Dentre esses indivíduos, apenas 10,9% tinham infecções por P. vivax, P. falciparum ou malária mista. No grupo de infectados por P. vivax, a proporção de respondedores foi maior para as proteínas recombinantes MSP119 e AMA-1, atingindo 78,6%, em ambos os casos. A proporção de indivíduos com anticorpos para cada uma das proteínas associou-se com o maior tempo de exposição à malária, exceto para a MSP3&#946;. Além disso, a positividade foi mais alta nas áreas de maior risco de transmissão. Não observamos associações relevantes entre o genótipo do antígeno Duffy dos indivíduos e presença de anticorpos para as proteínas estudadas. No estudo longitudinal, observamos um aumento da prevalência de respondedores durante a parasitemia patente, sendo de 81,9%, 80,9%, 31,9% e 48,9% para a MSP119, AMA-1, MSP3&#945; e MSP3&#946;, respectivamente. Em conclusão, nossos resultados confirmam a alta antigenicidade dessas proteínas, o que pode ser de grande importância para futuros ensaios clínicos na região.<br>In recent years we studied various aspects of the naturally acquired immune response in individuals from different endemic areas of the Amazon region exposed to malaria. For this purpose we used recombinant proteins based on P. vivax blood stage antigens considered candidates for a vaccine against vivax malaria. In the present study, we focused on 396 individuals from a rural community in western Brazilian Amazon located at the state of Acre. We conducted a transversal and longitudinal study of the antibody response to a panel of recombinant proteins representing P. vivax merozoites surface antigens (MSP119, AMA-1, MSP3&#945; and MSP3&#946;). The sera of these individuals were tested by ELISA for the recognition of the four antigens mentioned above. The proportions of individuals at the baseline with IgG antibodies to MSP119, AMA-1, MSP3&#945; and MSP3&#946; were 59.8%, 50.0%, 23.5% and 26.5%, respectively. Among these individuals, 10.9% had patent malaria infections with either P. vivax or P. falciparum or both. Among individuals with patent P. vivax infection, the frequency of responders was high for MSP119 and AMA-1, (78.6% in both cases). Except in the case of MSP3&#946;, the proportion of individuals with antibodies to each protein correlated with the time of malaria exposure. Also, the positivity was higher in areas of higher transmission levels. No relevant association was found between the Duffy genotypes and presence of antibodies to the different antigen. In longitudinal study, we observed an increased prevalence of responders during patent parasitemia, 81.9% 80.9% 31.9% and 48.9% to MSP119, AMA-1, MSP3&#945; and MSP3&#946;, respectively. In conclusion, our results confirm the high antigenicity of these proteins, which can be of great importance for future clinical trials in the region.

Um importante fator na virulência do P. falciparum é sua capacidade de aderência a receptores endoteliais, mediada por proteínas PfEMP1. No Brasil, o número de variantes PfEMP1 é limitado, com raras evoluções graves da doença, e presença de indivíduos portadores do parasita e sem sintomas. Localizamos anticorpos contra a membrana do eritrócito infectado em plasmas de indivíduos de Rondônia; sem diferenças na resposta imune nos dois grupos (selecionados tanto para ICAM1 quanto CD36), tanto em frequência quanto em; encontramos diferenças significativas em capacidade de inibição de citoadência apenas em casos pontuais, sem correlação com índice de reatividade ou fenótipo; observamos presença de anticorpos pan-reativos, capazes de aglutinar diferentes isolados, porém sem diferenças entre os isolados selecionados para ICAM1 e CD36. Os dados indicam que a resposta contra a superfície da hemácia infectada - ao menos dos isolados e fenótipos testados neste trabalho - não parece ser um critério decisivo para o tipo de evolução de malaria sofrida pelo paciente.<br>An important factor in P. falciparum\'s virulence is its ability to adhere to endothelial receptors, mediated by PfEMP1 proteins. In Brazil the number of PfEMP1 variants is limited, severe disease is rare, and there are many individuals carrying the parasite without symptoms. We detected antibodies against the membrane of erythrocytes using plasma of infected individuals from Rondônia, finding only in some cases differences in the immune response, both in frequency and degree; we also could not find differences between the ability to inhibit cytoadherence in static condition. There was no correlation between this capacity and the reactivity index or phenotype; we observed the presence of pan-reactive antibodies that were capable of agglutinating different isolates, but without any difference between ICAM1 and CD36 selected isolates. Taken together, our data indicate the immune response against the infected red blood cell is not decisive for the outcome of malaria suffered by the patients.

De nombreux efforts ont été réalisés par les autorités nationales et les partenaires extérieurs au cours des dernières décennies pour améliorer l'efficacité des systèmes de santé dans les pays en développement. Mais de nombreux observateurs nationaux et internationaux constatent que les résultats ne sont pas à la hauteur des efforts consentis. Le constat sur le financement de la santé reste quasi-identique dans l'ensemble des pays à faible revenu : insuffisance de ressources, inefficience et faible protection financière des individus contre le risque maladie. La question de l'utilisation des ressources du secteur de la santé devient centrale pour les politiques de financement ainsi que la nécessité de développer des approches pour rendre plus efficientes les interventions publiques et privées de la santé. La thèse s'organise autour de quatre chapitres. Le premier chapitre est consacré à la mesure de l'efficience des systèmes de santé dans les pays en développement. L'analyse vise à approfondir la connaissance du degré d'efficience des systèmes de santé à l'échelle internationale et en tirer des implications politiques pour le secteur de la santé. Le chapitre 2 poursuit le précédent en cherchant à expliquer les différences d'efficience à l'échelle internationale en portant une attention particulière à la structure du financement des systèmes de santé. Le chapitre 3 prolonge les deux précédents par une analyse microéconomique de l'efficience. Il est consacré à la mesure et à l'analyse de la performance d'un échantillon de 21 hôpitaux en Chine rurale. Enfin, le chapitre 4 analyse les mécanismes d'assurance maladie existants en Afrique francophone et les facteurs susceptibles d'expliquer leur faible contribution au financement de la santé.

La malaltia pulmonar obstructiva crònica ( MPOC ) caracteritzada per la presència d’ obstrucció crònica i poc reversible del flux aeri, és una malaltia prevenible i tractable. L’ etiologia més freqüent en el nostre medi és el tabac. És causa freqüent de morbi mortalitat i una important causa de ingrés hospitalari en la nostra àrea, sent en la fase final quan la malaltia genera més despesa al sistema sanitari. No totes les persones fumadores acaben desenvolupant MPOC, cal una susceptibilitat genètica i la concurrència d’ una sèrie de factors afavoridors ( paquets-any acumulats, envelliment, exposició laboral o ambiental a tòxics respiratoris...) Es coneguda en la literatura l’ existència d’ un infradiagnòstic de la malaltia, en part per la desconeixença de la importància de determinats símptomes per part de la població i en part perquè els professionals no busquem prou la malaltia. Una base important en la lluita contra la malaltia és la detecció precoç. Per tal de tenir ben estudiada a la nostra població i mirar de frenar el creixement de la MPOC, vam decidir fer un estudi de cribratge, en l’ àmbit de l’ atenció primària , en la població més susceptible de tenir la malaltia , realitzant una enquesta validada de símptomes respiratoris i exposició laboral i una espirometria a totes les persones del CAP majors o iguals a 45 anys ( en l’ any 2006) que en la seva història informatitzada constaven com a fumadors i exfumadors. El fet de fer l’ espirometria en el CAP va facilitar la participació dels pacients, per la proximitat, en especial en adaptar-nos als seus horaris. La realització de les espirometries per personal del servei de Neumologia en el CAP, habituat a fer les proves, va assegurar un alt percentatge d’ espirometries correctament realitzades. L’ estudi va permetre detectar errors diagnòstics, corroborar diagnòstics de MPOC existents i diagnosticar de MPOC a persones que fins ara no es coneixien afectades de la malaltia, evitant el sobrediagnòstic d’ asmàtics fumadors com a pacients amb MPOC gràcies a la utilització de tractament amb beta-2 i corticoides inhalats durant 4 setmanes. Vam poder conèixer la susceptibilitat de la nostra població fumadora a patir la malaltia. En el treball utilitzarem com a sinònims susceptibilitat per desenvolupar MPOC i prevalença en exposats a tabac. També el grau d’ infradiagnòstic, determinar altres factors de risc per la MPOC diferents de l’ edat i els paquets-any , com són l’ exposició laboral, el dèficit d’ alfa-1 antitripsina i la presència de patologia cardiovascular. Vam determinar quins eren els símptomes respiratoris que s’ associaven amb més freqüència amb el patró d’ obstrucció parcialment irreversible. L’ estudi va demostrar que la patologia cardiovascular era més prevalent en els pacients amb MPOC i que la seva presència orientava a pensar que el pacient estava afectat de MPOC ( tenir PCV augmentava 1,7 vegades la susceptibilitat). També es va concloure que la MPOC era un factor de risc independent per l’ existència de patologia cardiovascular, com ho són el tabac, la hipertensió, la dislipèmia... L’ estudi ens va permetre fer una validació externa d’ un qüestionari de cribratge per MPOC en exposats a tabac, en l’ àmbit de l’ Atenció Primària , basat en l’ edat, els paquets-any, el IMC i uns pocs símptomes, realitzat per Price i col·laboradors, que ens va semblar d’ una gran utilitat per la seva simplicitat i sensibilitat. En analitzar els resultats del nostre estudi, per establir l’ associació entre la MPOC i els diferents paràmetres avaluats i evitar variables confusores, vam identificar variables molt similars a les que contenia el qüestionari de Price, als que vam incorporar l’ existència d’ antecedent d’ exposició laboral de risc i de tenir patologia cardiovascular. Amb aquest nou model de qüestionari afinàvem molt més en el cribratge de la MPOC en els nostres pacients exposats al tabac, permetent-nos detectar a aquells que tenen més susceptibilitat per desenvolupar la malaltia.<br>Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) characterized by the presence of chronic, poorly reversible obstruction of airflow is a preventable and treatable disease. The most frequent etiology in our area is tobacco. It is a common cause of morbidity and mortality and a major cause of hospitalization in our area, being the final stage when the disease leads to greater spending on healthcare. Not all smokers develop COPD, there must be a genetic susceptibility and the occurrence of a number of favouring factors (packs-year cumulative, age, occupational or environmental exposure to toxic breathing ...) It is known in the literature the existence of an under diagnosing of the disease, partly due to the ignorance of the population about the importance of certain symptoms and partly because professionals do not look for the disease systematically enough. An important foundation in the fight against the disease is early detection. In order to study our population and try to stop the growth of COPD, we decided to make a study of screening in the field of primary care in the more likely population to have the disease. To do so, we made a validated survey of occupational exposure and respiratory symptoms and a spirometry to every smoker or former smoker, who was aged 45 years or more in 2006. The fact of making the spirometry in the PCC (Primary Care Center) facilitated the participation of patients, because of the closeness, in order to adapt to their schedules. The execution of spirometry by trained technician from the service Pneumology in the PCC assured a high percentage of correctly performed spirometry. The study allowed detecting diagnostic errors, confirming existing diagnoses of COPD and diagnosing new COPD patients, avoiding the over diagnosing of asthmatic smokers as if they were COPD patients, through the use of treatment inhaled corticosteroids and beta-2 for 4 weeks. We could find the susceptibility of our smoking population to suffer the disease. The work used as synonyms susceptibility to develop COPD and prevalence in people exposed to tobacco, the degree of under diagnosing, determine risk factors for COPD apart form age and year-packages, such as the occupational exposure, the deficit of alpha-1 antitrypsin and the presence of cardiovascular disease. We determined which respiratory symptoms were more often associated with the pattern of obstruction partially irreversible. The study showed that cardiovascular disease was more prevalent in patients with COPD and that their presence led to think that the patient was suffering from COPD (PCV had increased 1.7 times the susceptibility). We also conclude that COPD was an independent risk factor for the existence of cardiovascular disease, as smoking, hypertension, dyslipidemia ... The study allowed us to have an external validation of a screening questionnaire for COPD patients exposed to tobacco in the field of primary care based on age, package-year, BMI and few symptoms conducted by Price and colleagues, which we find it has a great utility for its simplicity and sensitivity. In analyzing the results of our study to establish the association between COPD and the different evaluated parameters and to avoid confusing variables, we identify variables similar to those contained in the questionnaire of Price. We incorporated the existence of antecedent of occupational risk exposure and the fact of having cardiovascular disease. With this new questionnaire we improved a lot in the screening of COPD in our patients exposed to tobacco, allowing us to detect those who are more susceptible to developing the disease.

L'utilisation des lymphocytes T régulateurs (Treg) représente une nouvelle approche pour le traitement de maladies auto-immunes ou en transplantation. L'objectif principal de ma thèse a été de développer des approches thérapeutiques utilisables en clinique permettant d'amplifier et de sélectionner des Treg spécifiques d'antigènes. La première stratégie repose sur l'administration de faibles doses d'IL-2 pour augmenter in vivo le pourcentage de Treg afin de contrôler la GVH (maladie du greffon contre l'hôte). Contrairement à deux publications récentes décrivant un effet curatif dans la GVH chronique et la vascularite chez l'homme, nos travaux n'ont pas montré d'effet de l'IL-2 sur la GVH aiguë chez la souris. L'effet de l'IL-2 peut donc radicalement différer selon la pathologie cible, renforçant ainsi l'importance de valider ces approches thérapeutiques innovantes dans des modèles expérimentaux appropriés. La seconde stratégie a consisté à utiliser des Treg spécifiques d'un antigène exogène (exo-Treg). Bien qu'efficace pour contrôler la GVH, l'utilisation de Treg spécifiques des antigènes du receveur (rs-Treg) n'est pas réalisable en clinique du fait du risque de générer aussi des lymphocytes T effecteurs (Teff) potentiellement inducteurs de GVH. L'utilisation d'exo-Treg représente une alternative intéressante car des Teff contaminant ne devraient pas avoir d'effet pathogène du fait de l'absence d'expression de leur antigène cognitif par le receveur. Nous avons montré que les exo-Treg sont aussi efficaces que les rs-Treg pour contrôler la GVH et décrit à cette occasion un nouveau mécanisme d'induction de tolérance que nous avons appelé « effet systémique bystander »<br>The use of antigen specific regulatory T cells (Treg) offers substantial opportunities for the treatment of auto-immune diseases or allogeneic responses in the fields of transplantation. The main objective of my works was to develop different clinically rel able procedures to expand and select antigen specific Treg. The first one relies on low dose IL-2 administration to increase in vivo the percentage of Treg and try to prevent GVHD (Graft-Versus-Host Disease). Despite recent publications describing curative effect on chronic GVHD and vasculitis in humans by this approach, our works showed no curative or preventive effect of IL-2 on acute GVHD in mice. These results indicate that depending on the immunopathology, IL-2 effects can be radically différent. This reinforces the need to develop appropriate experimental models to validate therapeutic approaches and understand their mechanism of action. The second strategy was to expand and use Treg specific for an exogenous antigen (exo-Treg). Indeed, due to technical limitations, clinical grade preparation of recipient-specific (rs)-Treg, known to be efficient to suppress GVHD, would also contain significant numbers of highly pathogenic recipient-specific effector T cells (Teff). The use of exo-Treg represent an attractive alternative approach because the putative contaminating Teff would be non pathogenic in the absence of expression of their cognate antigen by recipients. We show that these exo-Treg are as efficient as rs-Treg to control GVHD and describe a new mechanism of tolerance that we defined as "systemic bystander effect"

Situation du sujet : En dépit des progrès réalisés en matière d'immunosuppression, la maladie vasculaire chronique (MVC) reste la première cause de perte du greffon après un an. Les modèles expérimentaux apparaissent indispensables pour une meilleure compréhension des mécanismes impliqués. Les modèles classiques sont limités par des difficultés de transposition des résultats à des situations cliniques chez l'homme. Objectif : Le but de ce travail était de développer un modèle d'étude original de la MVC. Il s'agissait de reconstituer de façon reproductible un conflit allogénique humain in vivo, chez des souris immunodéficientes. La mise au point de ce modèle supposait la réalisation de 4 étapes intermédiaires : 1. La mise en place d'un protocole de prélèvement à fins scientifiques chez les donneurs d'organes. 2. Le développement d'une technique assurant une humanisation reproductible de souris immuno- déficientes. 3. La mise au point d'une technique chirurgicale de greffe du segment artériel mésentérique humain chez la souris. 4. La mise en évidence de lésions de RVC dans le groupe de souris greffées humanisées en combinaison allogénique et l'absence de lésions dans le groupe contrôle isogénique. Matériels et méthodes : Un protocole de prélèvement de tissus humains chez les donneurs d'organes a été mis en place, à l'échelle régionale après avis favorables de l'Etablissement Français des Greffes et du Comité d'Ethique du CHU de Toulouse. Des souris SCID/Beige déficientes pour l'immunité T, B et NK ont été utilisées après vérification de l'absence d'immunité résiduelle (caractère " leaky "). Une première partie de ce travail a consisté à la mise au point du protocole d'humanisation : Des souris ont été réparties en 5 groupes recevant 5 à 100 millions de splénocytes humains et en 2 groupes recevant 5 ou 10 millions de cellules médullaires. Un prélèvement sanguin hebdomadaire permettait un typage des cellules humaines circulantes par cytométrie en flux, et dosage des IgG humaines par technique ELISA. Après sacrifice, les organes lymphoïdes étaient examinés en immunohistochimie et en cytométrie en flux à la recherche de cellules humaines. Dans une deuxième partie du travail, des souris SCID/Beige (non " leaky ") ont subi la greffe d'un segment d'artère mésentérique humaine issue de donneurs d'organes. Cinq à huit greffes ont été réalisées dans les 48 heures suivant chaque prélèvement multi organes. .<br>Background : In spite of progress in the field of immunosuppressive treatment, the allograft vasculopathy remains the first cause of graft loss after one year. The expérimental models appear essential for a better understanding of the implied mechanisms The traditional models are limited because of difficulties of transposition of the results to clinical situations in human. Goals : The goal of this work was to develop an original model to study AV consisting of the in vivo reconstitution in immunodeficient mice of human allogeneix conflicts. To achieve this goal, four intermediate stages were necessary : 1. The harvesting of human tissues in human cadaveric organ donors 2. The reconstitution of complete and functional human immune system in immunodeficient mice 3. The graft of human arterial grafts in mice 4. The reconstitution of expérimental groups (control, isogeneic, allogeneic) to valid the expérimental model of AV in allogeneic group and absence of AV in the control and isogeneic groups. Methods : The harvesting of human tissues in human cadaveric organ donors was organized in the whole Midi Pyrénées area after authorization of the ethic commitee of our insitution and of the French Transplantation Agency. Pièces of mesentery and segment of spleen were removed from the cadaveric organ donors. Defective SCID/Beige mice for immunity T, B and NK were used qfter checking of the absence of residual immunity (" leakiness "). A first part of this work focused on the reconsituttion of the human immune system in SCID/Beige mice : Mice were divided into 5 groups receiveing from 5 to 100 human illion splenocytes and into 2 groups receiving 5 to 10 million medullary cells. A weekly blood sample allowed typing of the circulating human cells (flow cytometry) and détection of human IgG (ELISA). After sacrifice, the lymphoid bodies were examined in immunohistochimy and flow cytometry. The second part of this work focused on the study of AV. SCID/Beige mice received infra rénal transplantation of segments of terminal collatéral of human mesenteric arteru using the " sleeve " anastomosis technique. Five to eight transplantation were carried out af in the 48 hours following each multi-organ harvesting. The transplantation was associated with an isogeneic immune reconstitution in 6 mice, while 12 mice underwent allogeneic reconstitution. .

Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo), l'agent causal de bactériose vasculaire du riz (BLB), injecte des protéines de liaison à l'ADN, appelées Transcription Activator-Like Effectors (TALEs) dans les cellules hôtes afin de moduler l'expression de gènes cibles. Certains TALEs agissent comme des facteurs de virulence majeurs, indispensables à la mise en place du BLB et ciblent des gènes de sensibilité du riz. Les TALEs majeurs de Xoo ciblent universellement les gènes de sensibilité de la famille SWEET. Il existe dans la nature un polymorphisme des séquences ADN des gènes SWEET reconnues par les TALEs qui confère une résistance à la maladie. L’utilisation de la technologie TALEN a permis d'introduire artificiellement ce type de mutation dans le promoteur du gène de sensibilité SWEET14 le rendant insensible aux TALEs et conférant une résistance à certaines souches de Xoo asiatiques. La caractérisation des populations de Xoo africaines montrent qu'elles sont distinctes de celles d’Asie. L’objectif du projet de thèse était de créer à l'aide des technologies d'édition des génomes des sources de résistances efficaces contre un large panel de Xoo maliennes.Dans une première partie, l'édition des boites ADN de SWEET14 ciblées par des TALEs majeurs de souches africaines a effectivement permis d'obtenir des résistances contre les souches utilisant le TALE TalF (initialement appelé Tal5) mais pas contre celles utilisant TalC. La caractérisation du répertoire de TALEs des souches maliennes par des approches fonctionnelles (sensibilité des lignées éditées, expression de SWEET14 et autres gènes cibles de TALEs) et in silico (séquençage du génome de 8 souches) à révélé une diversité fonctionnelle de ces répertoires et la présence simultanée quasi systématique de versions actives et redondantes de TalF et TalC. La caractérisation de la sensibilité de variétés de riz locales aux souches de Xoo maliennes a montré que ces dernières possèdent un large spectre de virulence et qu'à une exception près, toutes les variétés testées sont sensibles au BLB. L'édition en multiplex par la technique CRISPR/Cas9 des boites TalF et TalC a aboli l'induction de SWEET14 en réponse à une souche malienne. Cependant, les lignées correspondantes sont restées sensibles à cette souche. Dans la dernière partie, pour expliquer ce résultat, nous avons postulé l'existence d'au moins un gène de sensibilité, cible de TalC et redondant avec SWEET14. Une approche bioinformatique a permis d'identifier un locus dont plusieurs caractéristiques en faisaient un candidat intéressant. Ce locus, nommé ATAC (pour Alternative TalC Target) est composé de deux gènes, ATAC1 et ATAC2 induits de façon bidirectionnelle par TalC. Nous avons montré qu'ATAC2, qui code pour un facteur de transcription bHLH atypique potentiellement impliqué dans l’élongation cellulaire et l'immunité chez le riz, se comporte comme un locus de sensibilité lorsqu'il est induit par des TALE artificiels dans un système gain de fonction. Nous avons édité simultanément le promoteur SWEET14 et le locus ATAC. Ces éditions devraient empêcher la reconnaissance du promoteur SWEET14 et du locus ATAC par TalC et TalF afin de conférer une résistance large au BLB au Mali<br>Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo), the causal agent of bacterial leaf blight of rice (BLB), injects DNA binding proteins called Transcription Activator-Like Effectors (TALEs) into host cells to manipulate plant genes expression. Some TALEs behave as major virulence factors essential for BLB to occur by binding directly to target DNA boxes of rice susceptibility genes and inducing their expression. Xoo major TALEs universally target susceptibility genes of the SWEET family. In nature, polymorphism in the DNA sequence of SWEET genes recognized by TALEs confers resistance to BLB. Using the TALEN technology, this type of mutations has been artificially introduced in the promoter of the SWEET14 susceptibility gene to make it TALE-unresponsive and confer resistance to some Asian Xoo. The characterizations of Malian Xoo populations show that they are distinct from the Asian ones. The PhD project aimed to create broad tailored BLB resistance against Malian Xoo using genome editing technologies.First, editing SWEET14 DNA boxes targeted by major TALEs of African strains indeed yielded resistance against strains relying on TalF (initially named Tal5) but not against those relying on TalC. The characterization of Malian strains TALE repertoires using functional (edited lines susceptibility assays, SWEET14 and other TALE target expression studies) and in silico (genome sequencing of 8 strains) approaches uncovered functional diversity in these repertoires and, the almost systematic, simultaneous presence of active and redundant versions of TalF and TalC. In susceptibility assays of local rice varieties, Malian Xoo strains exhibited a broad virulence spectrum and, with one exception, all tested varieties were susceptible to BLB. Multiplex editing of TalF and TalC target boxes with the CRISPR/Cas9 technology abolished SWEET14 induction in response to a Malian strain. However the corresponding rice lines remained susceptible to this strain. Finally, to explain these results, we postulated the existence of, at least, a TalC target susceptibility gene redundant with SWEET14. Bioinformatics analysis identified a rice locus with several features electing it as a high priority candidate. This locus named ATAC (Alternative TalC Target) is composed of two genes, ATAC1 and ATAC2, bidirectionally upregulated by TalC. We further showed that ATAC2 which is predicted to code for an atypical bHLH transcription factor potentially involved in rice cell elongation and immunity, behaves as a susceptibility gene upon artificial TALEs-mediated induction in a gain of function assay. We used the CRISPR/Cas9 system to simultaneously edit the SWEET14 promoter and the ATAC locus. These mutations should prevent the recognition of the SWEET14 promoter and the ATAC locus by TalC and TalF, compromise their transcriptional induction and ultimately provide broad BLB resistance in Mali

O Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) é um dos mais promissores candidatos a vacina contra a fase sanguínea da malária. No presente estudo, geramos uma nova proteína recombinante baseada no ectodomínio de AMA-1 de P. vivax (PvAMA-1) a partir do gene sintético com códon otimizado para expressão secretada na levedura Pichia pastoris. Por ELISA, a proteína PvAMA-1 foi reconhecida por 62,5% dos soros de pacientes da Amazônia brasileira infectados por P. vivax. A imunogenicidade de PvAMA-1 foi avaliada em camundongos BALB/c, utilizando protocolos homólogos e heterólogos de indução e reforço com DNA plasmidial e/ou proteína recombinante, emulsificada em Adjuvante de Freund. Os resultados mostraram que a eficiência da imunização é dependente da presença da proteína emulsificada em adjuvante forte. As imunizações subseqüentes foram realizadas com a proteína recombinante emulsificada em diferentes adjuvantes: sais de alumínio (Alum), Monophosphoryl Lipid A (MPLA) de Bordetella pertussis, flagelina FliC de Salmonella Typhimurium, saponina Quil A e Adjuvante Incompleto de Freund (AIF). Os resultados demonstraram que as imunizações na presença de Quil A e AIF foram capazes de induzir altos títulos de anticorpos IgG e uma resposta de isotipos de IgG mais balanceada, caracterizando um padrão do tipo Th1/Th2. Títulos de anticorpos mais baixos, mas também expressivos, foram obtidos na presença de Alum, MPLA, Alum + MPLA e Alum + FliC. A análise da resposta proliferativa, por citometria de fluxo utilizando marcação com CFSE, mostrou que células esplênicas CD3+CD4+, assim como CD3+CD8+, de animais imunizados com PvAMA-1 na presença dos adjuvantes Alum, Alum + MPLA, Quil A e AIF foram capazes de proliferar especificamente in vitro. Por imunofluorescência, soros policlonais de camundongos imunizados com o antígeno na presença de MPLA e Quil A foram capazes de reconhecer a proteína nativa expressa em isolados de P. Vivax da Ásia. Visando futuros testes pré clínicos em primatas não humanos, a proteína PvAMA-1 foi produzida em boas práticas de laboratório (BPL) por uma companhia especializada e o potencial imunogênico da proteína foi confirmado em imunizações posteriores. Em conjunto, nossos resultados demonstram que PvAMA-1 é um antígeno promissor para ser explorado em protocolos de imunização contra malária vivax, individualmente, ou em combinação com outros antígenos.<br>The Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) is one of the most promissing vaccine candidates against the erythrocytic stage of malaria. In the present study we generated a new recombinant protein based on AMA-1 ectodomain of P. vivax (PvAMA-1) using a synthetic codon optimized gene for yeast secreted expression. By ELISA, the protein PvAMA-1 was recognized by 62,5% of the sera from Brazilian Amazonia patients infected by P. vivax. The immunogenicity of PvAMA-1 was evaluated in BALB/c mice using homologous and heterologous protocols of prime and boost with plasmidial DNA and/or recombinant protein emulsified in Freund adjuvant. The results showed that the efficiency of immunization is dependent on the presence of a strong adjuvant. The following immunizations were conducted using the protein emulsified in different adjuvants: aluminium salts (Alum), Monophosphoryl Lipid A (MPLA) of Bordetella pertussis, flagelin FliC of Salmonella Typhimurium, saponin Quil A and Incomplete Freund\'s Adjuvant (IFA). The results showed that immunizations in the presence of Quil A e IFA were able to induce high IgG titers and a more balanced IgG isotypes response, featuring a standard type Th1/Th2. Lower antibody titers, but also significant, were obtained in the presence of Alum, MPLA, Alum + MPLA and Alum + FliC. The proliferative cellular analysis, by flow cytometry using CFSE staining, showed that splenic cells CD3+CD4+, as well as CD3+CD8+ from immunized mice that received PvAMA-1 with Alum, Alum + MPLA, Quil A and IFA were specifically able to proliferate in vitro. By immunofluorescence, the polyclonal sera from mice immunized with the antigen in the presence of MPLA and Quil A were able to recognize native protein expressed in Asian P. vivax isolates. Aiming future pre-clinical assays in non-human primates, the protein PvAMA-1 was produced in good laboratory practices (GLP) conditions by a specialized company and its immunogenic efficiency was confirmed in later immunizations. Altogether, our results showed that PvAMA-1 is a promissor antigen to be explored in immunization protocols against vivax malaria, individually, or combined with other antigens.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2018-09-20T13:42:20Z No. of bitstreams: 0<br>Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-10-16T11:34:15Z (GMT) No. of bitstreams: 0<br>Made available in DSpace on 2018-10-16T11:34:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2018-02-28<br>Devido à ampla distribuição da malária entre os continentes e ao elevado número de casos clínicos e óbitos registrados anualmente, o desenvolvimento de uma vacina antimalárica segura e eficaz contra a doença ainda é de extrema importância. Dentre os vários modelos propostos até o momento, aquelas compostas por parasitos vivos ou por extrato proteico têm sido as mais promissoras no desenvolvimento de imunidade antimalárica. Entretanto, ainda não claro se imunizações com cepas com baixo potencial de virulência seriam capazes de prevenir ou amenizar os sintomas associados à malária grave. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar se camundongos imunizados com extrato proteico de Plasmodium berghei NK65, cepa de baixa virulência e não indutora de malária cerebral nesse modelo, são protegidos contra o desenvolvimento de malária cerebral induzida pela cepa ANKA de Plasmodium berghei (PbA). Para isto, foram realizados dois ciclos de imunização utilizando extrato proteico de Plasmodium berghei associado ao adjuvante CPG-ODN, com intervalo de 21 dias, em camundongos fêmeas C57BL/6, com idade entre 6 e 8 semanas. Após 30 dias da última imunização foi realizado o desafio experimental utilizando a cepa ANKA de P. berghei e iniciado o acompanhamento diário dos animais para avaliação do seu quadro clínico e da carga parasitária. Diante da presença de sinais neurológicos (escore clínico < 5), os animais foram pesados e eutanasiados para realização da coleta de sangue, baço e cérebro, enquanto animais sem esses sinais continuaram por ser acompanhados diariamente e, então, sacrificados a partir do 13º dia. A partir das amostras coletadas, foram determinados os níveis de anticorpos sorológicos, a frequência da população celular esplênica (células T CD4+ e CD8+, e linfócitos B), níveis de citocinas teciduais e análise histopatológica do tecido nervoso. Observouse que 46% dos animais imunizados com extrato de PbN e 69% dos animais imunizados com extrato de PbA foram protegidos do desenvolvimento de malária cerebral e tiveram sua taxa de sobrevivência prolongada, entretanto, estes animais desenvolveram hiperparasitemia sanguínea, com níveis de até 38% de parasitos circulantes. Estes animais não apresentaram sinais clínicos neurológicos, o que foi confirmado macroscopicamente pela ausência de hemorragia e reduzida inflamação no cérebro em relação aos animais que evoluíram para malária cerebral. Histopatologicamente, os animais com hiperparasitemia apresentaram poucos leucócitos aderidos ao endotélio vascular e ausência de vasos obstruídos. Em relação aos níveis de citocinas (IL-10, TNF-α, IFN-) e número de linfócitos esplênicos (T CD4+ e CD8+, e linfócitos B), estes estiveram significativamente reduzidos nos animais que desenvolveram hiperparasitemia em relação aos que desenvolveram malária cerebral. Interessantemente, os animais imunizados foram capazes de reconhecer tanto antígenos homólogos quanto heterólogos ao utilizado durante o processo de imunização, porém, esses anticorpos pareceram não influenciar o padrão clínico apresentado pelos animais. Portanto, nosso estudo demonstra que imunizações com parasitos de baixa virulência podem induzir imunidade capaz de proteger contra cepas altamente virulentas, mas os fatores que medeiam essa proteção ainda precisam ser melhor investigados.<br>The broad distribution of malaria around of the globe and the large number of clinical cases/deaths attributed to this disease turns the discovery of a safe and effective malaria vaccine an essential tool to halt the spread of the disease. Vaccines focused on the use of live parasites and crude parasites antigens have shown good results on the induction of antimalarial immunity, although it is still not clear if immunizations with low virulent strains are capable to prevent the development of symptoms of cerebral malaria. This research aim to investigate if immunizations with crude antigen of Plasmodium berghei NK65 (PbN), a low virulence strain noninductive of cerebral malaria in C57BL/6 mice, are able to protect the animals against the development of cerebral malaria after challenge with Plasmodium berghei ANKA (PbA). Mice were immunized twice with crude antigen associated to CPG-ODN adjuvant. Thirty days after the second immunization animals were challenged with 105 red blood cells infected with P. berghei ANKA. Animals were daily monitored to evaluate the clinical score and parasitaemia levels. If the presence of neurological signs (score < 5) were detected, animals were euthanized and blood samples, spleen and brain were collected; animals without neurological commitment were followed daily until the 14 day post-infection. Antibodies and cytokines levels, splenic cellular population (T CD4+, T CD8+ and B lymphocytes) and histopathological analysis were performed. The results showed that 46% of the animals immunized with crude antigen of PbN and 69% of the animals immunized with crude antigen of PbA were protected from the development of cerebral malaria and had their survival rate prolonged, however, these animals developed hyperparasitaemia, with levels up to 38% of circulating parasites. These animals did not present neurological signs which were confirmed macroscopically by the absence of hemorrhage and reduce brain inflammation in relation to the animals that evolved to cerebral malaria. Histopathologically, the animals with hyperparasitaemia presented few adhered leukocytes in the vascular endothelium and absence of obstructed vessels. In relation to cytokine levels and number of splenic lymphocytes, these were significantly reduced in animals that developed hyperparasitism in comparison with those who developed cerebral malaria. Interestingly, the immunized animals were able to recognize both homologous and heterologous antigens used during the immunization process, however, these antibodies did not appear to influence at the clinical condition presented by the animals. Therefore, our study demonstrates that immunizations with low virulence parasites may induce immunity capable of protecting against highly virulent strains, but the factors that mediate this protection still need to be better investigated.