Dissertations / Theses on the topic 'Mananara'

Avant d'aborder un terrain nouveau, l'étudiant ou le chercheur découvre la région par le biais de lectures dont certaines lui donneront peut être une vision déformée de la situation. Ainsi, dans certains textes sur Madagascar, ses habitants, ses forêts ou son agriculture, nous avons retrouvé les mêmes discours sur la disparition de la forêt, l'érosion des sols et le cercle vicieux qui englobe la dégradation de l'environnement et la crise du développement.
Le tableau dressé par ces textes présente des forêts brûlées par des populations en accroissement rapide : les forêts tropicales humides de l'est de Madagascar qui regorgent de richesses naturelles partent en fumée, en particulier à cause des paysans pratiquant la riziculture sur brûlis (essartage). Cette activité consiste à défricher et à brûler une parcelle de forêt pour cultiver du riz pluvial pendant un ou deux ans, avant que le terrain soit abandonné et que l'agriculteur parte brûler ailleurs.
Les mêmes textes avancent que, dans un contexte de grande pauvreté, des agriculteurs de plus en plus nombreux ne survivent que par l'essartage. La pauvreté et l'incapacité des agriculteurs face à la situation gênent le développement d'alternatives à l'essartage, comme la riziculture irriguée. Avec la croissance démographique, les durées des jachères diminuent, les sols s'épuisent et l'érosion s'aggrave. Telle est la vision de la côte est de Madagascar propagée par certains écrits.
Notre découverte de la région de Mananara à Madagascar a bouleversé la vision à priori donnée par ces textes. Les collines n'étaient pas dénudées mais étaient couvertes par de grandes étendues d'arbres plantés (des girofliers et des caféiers). La transparence de l'eau des rivières dénotait un transport de sédiments et une érosion assez faibles. Outre les bas-fonds entièrement aménagés en rizières, des terrasses rizicoles étaient visibles sur les collines et des techniques originales de riziculture étaient appliquées. Leur présence contrastait nettement avec les discours sur l'absence d'alternatives à l'essartage.
Un autre fait marquant de l'observation de la région de Mananara est lié à la densité de population. Alors que l'accroissement démographique est considéré comme un fléau dans certains discours sur l'environnement, nous avons découvert que les zones les plus peuplées sont celles où les paysages ressemblent le moins aux visions catastrophiques.
Cette confrontation entre différentes lectures des paysages nous a conduit à vouloir étudier la dynamique du paysage. En supposant que la démographie joue un rôle dans la construction du paysage, une question émerge : quel est ce rôle ?
L'hypothèse est que les actions des agriculteurs, bâtisseurs du paysage, dépendent de la situation dans laquelle ils évoluent et qu'il existe des facteurs expliquant la construction du paysage. La situation économique locale, comme les prix des produits agricoles ou l'enclavement, a probablement une influence sur les paysages, de même que les politiques foncières ou forestières. Peut-on mettre en évidence des relations entre la construction du paysage et le contexte ? Plus généralement, quel est le rôle de la démographie et du contexte politique, économique ou social dans la dynamique environnementale ? Le contexte est défini comme l'ensemble des facteurs exogènes à un décideur qui influencent sa décision. Il comprend à la fois les facteurs exogènes à un groupe social qui influencent les décisions individuelles (les lois, les prix, le marché du travail,) et les facteurs qui régissent les interactions entre les individus au sein du groupe (les relations sociales, les règles d'actions collectives,).
A partir de cette observation de terrain et des interrogations qui l'ont suivie, une question spécifique de recherche s'est progressivement construite. Après un aperçu des théories relatives aux relations entre population et environnement, la formation de la question de recherche sera présentée. Elle concerne le rôle de la démographie et du contexte économique, politique ou social dans la construction des paysages ruraux et s'applique à la région de Mananara. Nous voulons montrer que l'évolution démographique est un moteur de la construction du paysage et que le contexte oriente cette construction.
L'application de la question de recherche au terrain a conduit au développement d'un itinéraire méthodologique à plusieurs échelles. Des résultats de terrain seront présentés. Enfin, une comparaison avec d'autres sites et une réflexion sur la méthode seront proposées.

Cette thèse porte sur le contexte foncier à Madagascar et la nature des rapports qui en découlent entre les multinationales, l’État malgache et les paysans dans la région Analanjirofo. L'enjeu est d'étudier les deux formules de droit foncier qui ont été mises en place successivement à Madagascar depuis 2008 et la façon dont elles ont influé sur la vie des agriculteurs locaux qui, pour la plupart, exploitaient jusqu'à présent des terres immatriculées au nom d'anciens colons ou n'avaient pas mis à jour leurs titres fonciers. Il a été ainsi saisi non seulement les pratiques foncières avant et après les réformes entreprises par l'État malgache, mais aussi les limites de ces réformes et les points d'achoppement de cette politique inédite à Madagascar. L'état des lieux concerne des terres agricoles malgaches faisant l'objet ou non de cession par l'État malgache aux investisseurs nationaux et étrangers depuis la mise en place de la réforme foncière dans un contexte où les terres agricoles deviennent de plus en plus rares et chères et où la spéculation foncière devient plus que jamais un moyen de s'enrichir, le but de ces investisseurs étant de pratiquer une agriculture extensive sur des terres qu'ils auront acquises en dehors de leurs territoires d'origine. Dès lors, le foncier s'est retrouvé au cœur des stratégies d'investissement de ces multinationales. C'est dans ce cadre que, depuis 2008, Madagascar est devenu l'un des pays cibles des achats de terres agricoles et minières par des investisseurs internationaux, alors même que Madagascar rencontre des problèmes de sécurité alimentaire, les agriculteurs locaux ne produisant pas assez pour couvrir les besoins alimentaires de la population malgache. Il s'agit de considérer simultanément les intérêts fonciers des agriculteurs locaux, de l'État malgache et des investisseurs étrangers. La deuxième partie précise le contexte local particulier dû au non achèvement de la réforme foncière et à son caractère partiel, cette réforme n'intéresse finalement qu'une partie des terrains dans une commune donnée. La mise en place très partielle de guichets fonciers censés permettre aux agriculteurs locaux d'officialiser leurs biens fonciers se retrouve contemporaine de l'attribution par l'État de terres aux investisseurs étrangers. Cette partie revient sur l'absence d'adhésion effective de la population à la réforme foncière et sur le sentiment d'insécurité foncière qui règne au sein de la population qui se retrouve confrontée à une forme d'accaparement des terres par les investisseurs étrangers dans un climat de confusion entretenu par des statuts juridiques contradictoires des terres, le droit coutumier coexistant avec les guichets fonciers et la cession de terres par l'État aux investisseurs étrangers. Ainsi, pour les agriculteurs locaux, l'accaparement des terres devient un enjeu principal de la réforme foncière. Dans un troisième temps, la thèse va s'attacher à mettre en évidence le contexte dans lequel s'installent les investisseurs étrangers à Madagascar et à montrer pourquoi ces investissements réalisés à des fins de développement les conduisent finalement à une forme d'accaparement des terres. Elle va montrer également les rapports teintés de défiance entre les agriculteurs locaux et les investisseurs étrangers et la perte de confiance des agriculteurs envers l'État malgache, perçu comme manipulateur car utilisant les investissements étrangers pour s'enrichir. Une solution consisterait à, selon la formule consacrée, "donner du temps au temps", en laissant s'appliquer de manière complète et définitive la réforme foncière des guichets fonciers, sans laquelle les paysans sont, de toute évidence, démunis face à l'aspect de la mondialisation que sont les investissements étrangers
This thesis focuses on land context in Madagascar and the nature of relations between multinationals, Malagasy State and farmers in the Analanjirofo region. The challenge is to study two land law formulas that have been implemented successively in Madagascar since 2008 and how they have affected the lives of local farmers who, for the most part, have worked lands registered in the name of former colonists or have not updated their land titles. It has been not only focused on land practices before and after reforms undertaken by the Malagasy State but also on the limits of these reforms and the critical contentious points of this new policy in Madagascar. It made an inventory of Malagasy farmland being subject (or not) to the Malagasy State assignment to domestic and foreign investors for the implementation of land reform in a context where agricultural land is becoming increasingly scarce and expensive, and where property speculation is becoming, more than ever, a way to get rich, the goal of these investors is to practice extensive farming on land they have acquired outside their home territories. Therefore, the land swung at the heart of the multinational investment strategies. It is in this context that, since 2008, Madagascar has become one of the target countries of agricultural land and mine purchases by international investors, even if Madagascar meets food safety issues, local farmers do not produce enough to cover the food needs of the Malagasy population. These are considered simultaneously land and local farmers interests, the Malagasy government and foreign investors. The second part specifies the particular local context due to the non-completion of the land reform and its partial nature, this reform concerns, finally, only a single part of land in a given municipality. The very partial implementation of land tenure offices, intended to allow local farmers to formalise their land goods, is contemporary to the giving away of land to foreign investors by the state. This section returns to the absence of effective public adhesion to land reform and to the feeling of land insecurity among the population confronted by a kind of 'land grabbing' by foreign investors in a climate of confusion maintained by the contradictory legal status of land, customary law coexisting with the land tenure offices and the transfer of land by the State to foreign investors. Thus, for local farmers, 'land grabbing' is a major issue of land reform. Thirdly, the thesis will seek to highlight the context in which foreign investors settle in Madagascar and will show why these investments for the purpose of development eventually lead to a kind of land grabbing. It will also show how relationships between local farmers and foreign investors are tinged with mistrust and the loss of confidence of farmers towards the Malagasy state, which is perceived as manipulative because of the use of foreign investments for self-enrichment. One solution would be, as the saying goes, to "give time to time", by allowing a comprehensive and definitive implementation of land reform and the reform of land tenure offices, without which farmers are obviously powerless in the face of foreign investments, an aspect of globalisation

Orientador: Prof. Dr. Wanius José Garcia da Silva
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2014.
A proteina endo-B-1,4-mananase da bacteria Thermotoga petrophila (TpMan) e uma enzima hipertermoestavel que catalisa a hidrolise de ligacoes B-1,4-manosidicas em varios polissacarideos contendo manana. Um recente estudo mostrou que a enzima TpMan e composta de um dominio catalitico GH5 e um dominio de ligacao ao carboidrato CBM27 conectados atraves de um linker, entretanto, ate o momento, a estrutura tridimensional cristalografica nao foi determinada para a enzima completa. Pouco se sabe sobre a conformacao da enzima TpMan intacta como tambem o papel do comprimento e flexibilidade do linker sobre o arranjo espacial dos dominio constitutivos. Neste estudo, nos reportamos a primeira caracterizacao estrutural da enzima TpMan completa utilizando a tecnica de espalhamento de raios-X a baixos angulos (SAXS) combinada com a estrutura tridimensional dos dominios individuais para elucidar o modelo de baixa resolucao, as dimensoes globais, e a flexibilidade desta enzima modular em diferentes temperaturas. Nossos resultados sao consistentes com um linker que apresenta uma estrutura compacta e que ocupa um pequeno volume quando comparado com seu grande numero de residuos de aminoacidos (102 residuos de aminoacidos). Alem disso, a 20 oC os resultados sao consistentes com um modelo onde a enzima TpMan e um monomero composto de tres dominios e que apresenta nivel de flexibilidade molecular em solucao. Mesmo a enzima intacta apresentando algum grau de flexibilidade, existe uma conformacao preferivel, a qual pode ser descrita pelo procedimento de modelagem de corpo rigido. Finalmente, os resultados indicam que a enzima TpMan sofre uma transicao dependente da temperatura entre estados conformacionais de sua estrutura secundaria regular. Nossos resultados sugerem que o linker pode otimizar a geometria entre os outros dois dominios com respeito ao substrato a altas temperaturas. Os estudos apresentados aqui devem proporcionar uma base util para futuros estudos biofisicos da enzima TpMan intacta.

Orientador: Maria Cristina Thomaz
Banca: Fábio Henrique Lemos Budino
Banca: Luciano Hauschild
Resumo: A utilização de prebióticos na nutrição animal vem sendo amplamente estudada, uma vez que a utilização de antimicrobianos está restrita e/ou banida de vários países. Dentre estes, destacam-se os oligossacarídeos de parece celular de levedura, mananas e glucanas, os quais têm seus efeitos ainda não totalmente esclarecidos sobre a nutrição de leitões desmamados. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da inclusão de mananas e glucanas na dieta de leitões recém-desmamados, dos 24 aos 66 dias de idade, sobre o desempenho, incidência de diarreia, tempo de trânsito gastrintestinal, e características morfofisiológicas e microbiológicas do trato gastrintestinal [pH, concentração de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), ácido lático, análise microbiológica e estrutura do intestino delgado]. Foram utilizados 96 leitões desmamados aos 24 dias de idade (7,7 ± 1,76kg), distribuídos em um delineamento em blocos casualizados de acordo com os tratamentos: Controle positivo: dieta com antimicrobiano (40ppm de sulfato de colistina, na 1ª fase); Controle negativo: dieta sem adição de aditivos; N+CA: Controle negativo com adição de 0,10% de MOS e 0,18% de β-glucano; N+CB: Controle negativo com adição de 0,036% de MOS e 0,040% de β-glucano; com 8 repetições por tratamento e 3 animais por unidade experimental. A suplementação com MOS e β-glucano não influenciou (P>0,05) as variáveis de desempenho, microbiologia, AGCC, ácido lático e o tempo de trânsito gastrintestinal. Os animais do tratamento CN apresentaram as menores (P<0,05) alturas de vilosidades no duodeno e jejuno. Os leitões do tratamento N+CA apresentaram maiores (P<0,05) alturas de vilosidades no duodeno, comparados aos do CP. Para a variável profundidade de cripta, os leitões do tratamento CN apresentaram os maiores valores (P<0,05) no duodeno, e para o jejuno, aqueles que receberam N+CA e N+CB...
Abstract: The use of prebiotics in animal nutrition has been extensively studied, since the use of antimicrobials is restricted and/or banned in many countries. Among these, we highlight the oligosaccharides from yeast cell wall, mannans and glucans, which have uncleared effects on nutrition of weaned piglets. The aim of the study was to evaluate the effect of inclusion of mannans and glucans in the diet of weanling pigs, from 24 to 66 days of age on performance, diarrhea incidence, rate passage of digesta, and morphophysiological and microbiological characteristics of the gastrointestinal tract [pH, concentration of short-chain fatty acids (SCFA), lactic acid, microbiological analysis and structure of the small intestine]. It was used 96 newly weaned piglets at 24 days old (7.7 ± 1.76kg), distributed in a randomized block design according to the treatments: Positive control: diet with antimicrobial (40ppm of colistin sulfate, in the first phase); Negative control: diet free of antimicrobial and prebiotics; N + CA: negative control with the addition of 0.10% MOS and 0.18% β-glucan; N + CB: negative control with the addition of 0.036% MOS and 0.040% β-glucan; with 8 replicates per treatment and 3 animals each. Supplementation with MOS and β-glucan did not influence (P>0.05) the performance variables, microbiology, SCFA, lactic acid and gastrointestinal transit time. The animals of CN treatment showed lower (P<0.05) villus height in the duodenum and jejunum. The piglets fed N+CA treatment showed higher (P<0.05) villus heights in the duodenum, compared to those of CP. For the variable crypt depth, the piglets of CN treatment showed the highest values (P<0.05) in the duodenum, and in the jejunum, those fed N+CA and N+CB had lower (P<0.05) crypt depths, compared to those fed CP and CN, and animals fed CP had lower (P<0.05) than those of CN. The AV:PC ratio was higher in the duodenum, for the animals fed N+CA ...
Mestre

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Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
A utilização de prebióticos na nutrição animal vem sendo amplamente estudada, uma vez que a utilização de antimicrobianos está restrita e/ou banida de vários países. Dentre estes, destacam-se os oligossacarídeos de parece celular de levedura, mananas e glucanas, os quais têm seus efeitos ainda não totalmente esclarecidos sobre a nutrição de leitões desmamados. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito da inclusão de mananas e glucanas na dieta de leitões recém-desmamados, dos 24 aos 66 dias de idade, sobre o desempenho, incidência de diarreia, tempo de trânsito gastrintestinal, e características morfofisiológicas e microbiológicas do trato gastrintestinal [pH, concentração de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), ácido lático, análise microbiológica e estrutura do intestino delgado]. Foram utilizados 96 leitões desmamados aos 24 dias de idade (7,7 ± 1,76kg), distribuídos em um delineamento em blocos casualizados de acordo com os tratamentos: Controle positivo: dieta com antimicrobiano (40ppm de sulfato de colistina, na 1ª fase); Controle negativo: dieta sem adição de aditivos; N+CA: Controle negativo com adição de 0,10% de MOS e 0,18% de β-glucano; N+CB: Controle negativo com adição de 0,036% de MOS e 0,040% de β-glucano; com 8 repetições por tratamento e 3 animais por unidade experimental. A suplementação com MOS e β-glucano não influenciou (P>0,05) as variáveis de desempenho, microbiologia, AGCC, ácido lático e o tempo de trânsito gastrintestinal. Os animais do tratamento CN apresentaram as menores (P<0,05) alturas de vilosidades no duodeno e jejuno. Os leitões do tratamento N+CA apresentaram maiores (P<0,05) alturas de vilosidades no duodeno, comparados aos do CP. Para a variável profundidade de cripta, os leitões do tratamento CN apresentaram os maiores valores (P<0,05) no duodeno, e para o jejuno, aqueles que receberam N+CA e N+CB apresentaram as menores (P<0,05) profundidades, comparados aos do CP e CN, e os do CP foram menores (P<0,05) que os do CN. A relação AV:PC foi maior no duodeno, nos animais que receberam N+CA e N+CB, comparados ao CP e CN, e os do CP apresentaram melhores (P<0,05) resultados comparados aos do CN. No jejuno, os leitões do tratamento CN apresentaram piora (P<0,05) na relação AV:PC comparados aos dos demais tratamentos. Os tratamentos não influenciaram (P<0,05) a contagem de células caliciformes no duodeno, coloração Alcian Blue, porém, no jejuno, houve aumento na expressão destas células para os animais suplementados com os prebióticos e antibiótico. Para a contagem de células caliciformes, coloração PAS, os animais do tratamento CN apresentaram as menores (P<0,05) contagens no duodeno e jejuno. A incidência de diarreia foi maior para os animais do tratamento CN comparados aos dos demais tratamentos. Houve diminuição (P<0,05) do pH estomacal para os animais dos tratamentos N+CB e CP, e diminuição no pH do duodeno para os dos tratamentos N+CA, comparados ao CP. Os prebióticos estudados levaram os animais a apresentarem resultados semelhantes ou melhores que os que receberam antibióticos para algumas variáveis, o que demonstra que a utilização destes prebióticos foi capaz de modular o trato gastrintestinal, mantendo o mesmo padrão de desempenho e, assim, podem ser utilizados em substituição ao antimicrobiano.
The use of prebiotics in animal nutrition has been extensively studied, since the use of antimicrobials is restricted and/or banned in many countries. Among these, we highlight the oligosaccharides from yeast cell wall, mannans and glucans, which have uncleared effects on nutrition of weaned piglets. The aim of the study was to evaluate the effect of inclusion of mannans and glucans in the diet of weanling pigs, from 24 to 66 days of age on performance, diarrhea incidence, rate passage of digesta, and morphophysiological and microbiological characteristics of the gastrointestinal tract [pH, concentration of short-chain fatty acids (SCFA), lactic acid, microbiological analysis and structure of the small intestine]. It was used 96 newly weaned piglets at 24 days old (7.7 ± 1.76kg), distributed in a randomized block design according to the treatments: Positive control: diet with antimicrobial (40ppm of colistin sulfate, in the first phase); Negative control: diet free of antimicrobial and prebiotics; N + CA: negative control with the addition of 0.10% MOS and 0.18% β-glucan; N + CB: negative control with the addition of 0.036% MOS and 0.040% β-glucan; with 8 replicates per treatment and 3 animals each. Supplementation with MOS and β-glucan did not influence (P>0.05) the performance variables, microbiology, SCFA, lactic acid and gastrointestinal transit time. The animals of CN treatment showed lower (P<0.05) villus height in the duodenum and jejunum. The piglets fed N+CA treatment showed higher (P<0.05) villus heights in the duodenum, compared to those of CP. For the variable crypt depth, the piglets of CN treatment showed the highest values (P<0.05) in the duodenum, and in the jejunum, those fed N+CA and N+CB had lower (P<0.05) crypt depths, compared to those fed CP and CN, and animals fed CP had lower (P<0.05) than those of CN. The AV:PC ratio was higher in the duodenum, for the animals fed N+CA and N+CB, compared to CP and CN, and those of CP had higher (P<0.05) results compared to those of the CN. In the jejunum, the pigs of CN treatment showed worse (P<0.05) relation AV:PC compared to the animals of the other treatments. The treatments did not affect (P<0.05) the count of goblet cells in the duodenum, Alcian Blue staining. For counto f globet cells, PAS staining, the animals of the CN treatment had the lowest (P<0.05) scores in the duodenum and jejunum. The incidence of diarrhea was higher for animals of CN treatment compared to those of the other treatments. There was a decreased (P<0.05) in the stomach pH of animals fed N+CB and CP treatments, and decreased pH in the duodenum for animals of N+CA treatment compared to animals fed CP. The prebiotics studied led the animals to exhibit similar or better results than those who received antibiotics for some variables, what shows that the use of these prebiotics has been able to modulate the gastrointestinal tract, keeping the same standard of performance, and thus, they can be used to replace the antimicrobial.
CNPq: 131970/2014-3

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-08-04T11:22:16Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 833895 bytes, checksum: 90f9543d3b8376907e8bff8ded0a6a59 (MD5)
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
Foram conduzidos três experimentos no Setor de Avicultura do Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa com o objetivo de avaliar a inclusão da enzima β-mananase em dietas a base de milho e de farelo de soja sobre o desempenho,valores de energia metabolizável e coeficientes de digestibilidade ileal de aminoácidos em dietas para frangos de corte. No experimento de desempenho foram utilizados 1600 pintos de corte machos, da linhagem Cobb, de 1 a 42 dias de idade, distribuídos em um delineamento experimental inteiramente casualizado, com 8 tratamentos no esquema fatorial 2 x 4, sem e com adição da enzima -mananase (BM) em 4 níveis nutricionais (NN), com 10 repetições de 20 aves por unidade experimental. As rações controle (NN1 e NN1+BM) foram formuladas para atenderem as exigências nutricionais das aves (Rostagno et al., 2011), sendo a partir delas realizadas reduções de 100kcal de energia metabolizável (NN2 e NN2+BM); 3% dos aminoácidos totais (NN3 e NN3+BM); e 100kcal de energia metabolizável e 3% dos aminoácidos totais (NN4 e NN4+BM).No período de 01 a 21 dias os frangos alimentados com nível nutricional 1 (NN1) apresentaram maior ganho de peso (P<0,001) quando comparados com aqueles que receberam rações comos níveis nutricionais NN2, NN3 e NN4; e melhora da conversão alimentar (P<0,001) em relaçãoaos níveis NN2 e NN4. De 22 a 42 dias as aves submetidas ao NN1 tiveram ganho de peso maior (P<0,007) em relação as aves do NN3 e NN4, e semelhante a NN2; e os NN1, NN2 e NN3 proporcionarammelhora da conversão alimentar (P<0,005)quando comparados aos frangos alimentados com NN4. No período total, 01 a 24 dias, os frangos alimentados com as dietas do NN1 apresentaram melhor ganho de peso (P<0,001) quando comparados com aqueles que receberam dietas dos níveis NN2, NN3 e NN4; e verificou-se pior conversãoconversão (P<0,001) dos animais submetidos ao NN4 frente aos demais níveis. A inclusão de β-mananase não foi capaz de influenciar os parâmetros de desempenhona fase inicial de 01 a 21 dias de idade. Na fase de 22 a 42 dias a suplementação enzimática aumentou o ganho de peso (P<0,001), o consumo de ração (P<0,039) e melhorou a conversão alimentar (P<0,005) dos animais em relação àqueles que não receberam a enzima na dieta. No período total a adição de β-mananase melhorou o ganho de peso (P<0,001) e a conversão alimentar (P<0,005) dos frangos de corte alimentados com enzima. Para determinação dos valores da energia metabolizável e do balanço de nitrogênio das dietas, foi realizado um ensaio de metabolismo com 384 frangos de corte machos, da linhagem Cobb, de 13 a 21 dias de idade, distribuídos em delineamento inteiramente ao acaso, em 8 tratamentos (os mesmos utilizados no ensaio de desempenho), 8 repetições e 6 animais por unidade experimental. A redução de 100kcal dos níveis NN2 e NN4 promoveu diminuição da EMAn (P<0,001). Observou-se que a adição da enzima - mananase proporcionou melhor utilização da energia com aumento da EMAn (P<0,001). Para a determinação da digestibilidade dos aminoácidos das dietas experimentais foram utilizados 360 pintos machos, da linhagem Cobb, de 22 a 27 dias de idade, distribuídos em delineamento inteiramente ao acaso, em 8 tratamentos, 6 repetições e 6 aves por unidade experimental, sendo os tratamentos iguais à respectiva fases do desempenho com adição de uma dieta isenta de proteína para determinação das perdas endógenas. A redução de 3% dos aminoácidos totais nos níveis NN3 e NN4 ocasionou diminuição (P<0,005) dos coeficientes de digestibilidade aparente ileal dos aminoácidos cistina e glicina; e dos aminoácidos lisina (P<0,004), valina (P<0,001) e prolina (P<0,002) apenas para o nível NN4 quando comparados ao NN1. A adição de enzima aumentou o coeficiente de digestibilidade aparente de quase todos os aminoácidos, com exceção para treonina, valina e isoleucina. Houve diminuição (P<0,005) dos coeficientes de digestibilidade verdadeiros dos aminoácidos cistina em e glicina para os níveis NN3 e NN4; e dos aminoácidos lisina (P<0,026), valina (P<0,003) e prolina (P<0,004) apenas para o nível NN4 quando comparados ao NN1. Para os valores dos coeficientes de digestibilidade verdadeiros dos aminoácidos, a suplementação com β-mananase promoveu aumento (P<0,005) desses valores para todos os aminoácidos avaliados. Assim, pode-se concluir que a enzima β-mananase é capaz de melhorar os parâmetros de desempenho de 22 a 42 dias de idade e durante todo o ciclo de criação, de 01 a 42 dias. Além disso, promove o aumento dos valores de EMAne dos coeficientes de digestibilidade dos aminoácidos para frangos de corte.
Three experiments were conducted on the Avian Section of the Department of Animal Science of Universidade Federal deViçosa in order to evaluate the inclusion of the enzyme -mannanase in diets based on corn and soybean meal on performance and digestibility of metabolizable energy and amino acid for broilers. In the trial performance were used 1600 (1-42 days) male chicks of the commercial line Cobb distributed in a completely randomized design with 8 treatments in a factorial 2 x 4 (without and with addition of -mannanase and 4 nutritional levels) with 10 replicates of 20 birds each. The control diets (NN1 and NN1 + BM) were formulated to attend the nutritional requirements of birds (Rostagno et al, 2011), and from them made reductions in metabolizable energy of 100kcal (NN2 and NN2 + BM), 3% of the total amino acids was reduced (NN3 and NN3 + BM), and 100 kcal of metabolizable energy and in 3% of the total amino acids (NN4 and NN4 + BM), without and with addition of the enzyme β-mannanase in the diets. The chickens fed with the nutritional level 1 (NN1) had higher weight gain (P<0.001) when compared with those who received nutritional levels 2, 3 and 4 (NN2, NN3 and NN4), and feed conversion higher (P <0.001) than NN4 and NN2 for the 01-21 days. From 22 to 42 days the birds subjected to NN1 had a greater weight gain (P<0.007) compared to the birds of the NN3 and NN4, and similar to NN2, and NN1, NN2 and NN3 showed higher feed conversion (P<0.004) than birds fed with NN4. For the whole period the chickens fed with NN1 showed better weight gain (P<0.001) compared with those receiving diets levels NN2, NN3 and NN4, and was observed decrease of feed conversion (P<0.001) of animals subjected to NN4 compared to other levels. -mannanase was unable to influence the performance parameters of the initial stage 01-21 days of age. In 22-42 days of age enzyme increased weight gain (P<0.001), feed intake (P<0.039) and feed conversion (P<0.004) compared to animals who have not received enzyme. For the whole period the additin of β - mannanase improved weight gain (P<0.001) and feed conversion (P<0.005) in broilers fed with β-mannanase enzyme. For determination of the values of metabolizable energy and nitrogen balance of diets, a metabolism trial was performed with 384 male broilers,Cobb, from 13 to 21 days of age, distributed in a completely randomized design with 8 treatments (the same used in the performance trial), 8 repetitions and 6 animals per experimental unit. The reduction of 100kcal of the levels NN4 and NN2 caused a - decrease of AMEn (P<0.001). Its was observed that addition of the enzyme β- mannanase promoted an increase of AMEn (P<0.001).For the determination of amino acid digestibility, 360 male chicks, Cobb 500, 22-27 days of age in a completely randomized design in 8 treatments, 6 repetitions and 6 birds per experimental unit were used, the trataments were equal to the performance phases, with addition of a protein- free diet to determine endogenous losses. The decrease of 3% in the level of total amino acids of NN3 and NN4, decrease (P<0.005) the coefficients apparent digestibility of amino acids cystine and glycine, and the amino acids lysine (P<0.004), valine (P<0.001) and proline (P<0.002) for NN4 only compared to NN1. Enzyme addition increased the apparent digestibility of almost all amino acids, except for threonine, valine and isoleucine. A decrease (P<0.005) from the true digestibility coefficients of the amino acid cystine and glycine to NN3 and NN4 levels was observed, and the amino acids lysine (P<0.026), valine (P<0.003) and proline (P <0.004) were decreased just to the NN4, when compared to NN1. For the coefficients of amino acids true digestibility, suplementation with β -mannanase promoted increase (P<0.05) of these values for all amino acids evaluated. Thus, it can be concuded that β -mannanase enzyme is able to increase the performance parameters 22 to 42 days of age, and throughout the cycle from 01 to 42 days of age. Moreover, it is able to increase values of metabolizable energy and coefficients of amino acids true digestibility for broilers.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, Instituto de Biologia, 2014.
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As holocelulases compreendem as enzimas que atuam na degradação dos polissacarídeos da parede celular vegetal, e apresentam várias aplicações em processos que empregam a biomassa vegetal como matéria-prima. Neste trabalho, Penicillium fellutanum foi cultivado, por 7 dias, em 6 diferentes fontes de carbono lignocelulósicas: casca de maracujá, casca do grão de soja, piolho de algodão sujo, engaço de bananeira, bagaço de cana-de-açúcar e casca de laranja. Cultivos de 15 dias nos mesmos substratos e mais uma composição de piolho de algodão, casca de soja e casca de laranja (1:1:1) foram avaliados quanto à presença de complexos pela técnica de BN-PAGE. Os extratos brutos foram pesquisados quanto às atividades de mananase, xilanase, pectinase, carboximetilcelulase (CMCase) e avicelase. O isolado de P. fellutanum demonstrou a capacidade de secretar holocelulases nas fontes de carbono avaliadas, e o perfil de enzimas secretadas foi influenciado pela fonte de carbono. Também foram detectados complexos putativos em todos os cultivos avaliados, sendo a presença de alguns deles específica em função do substrato lignocelulósico utilizado. O extrato bruto de cultivos de 5 dias em piolho-de-algodão sujo foram concentrados por ultrafiltração, e a atividade de mananase presente na fração concentrada foi parcialmente purificada por cromatografia de exclusão molecular (S100) e troca iônica (QFF) e caracterizada. Foram detectadas duas enzimas na fração semi-purificada, de tamanhos entre 45 e 66 kDa. As enzimas apresentaram atividade máxima a 55°C e 65°C, e em pH de 3,5. A atividade enzimática foi fortemente inibida pelos íons Cu2+, Ag+, Fe3+ e Hg2+, e ativada por Na+, Ca2+ e K+. A atividade enzimática não foi afetada pela maioria dos compostos fenólicos empregados, e foi fortemente ativada em presença de ácido ferúlico. Os valores de Km e Vmáx foram 1,16±0,21 mg/mL e 0,312±0,015 U.I/mL, respectivamente. Os complexos protéicos detectados serão posteriormente identificados. A atividade de mananase parcialmente purificada a partir de cultivos em piolho-de-algodão sujo demonstrou potencial para aplicação como aditivo em rações animais, em função de seu caráter ácido. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT
Holocellulases comprise a group of enzymes involved in degradation of plant cell wall polysaccharides, and they have several applications in processes employing plant biomass as feedstock. In this work, Penicillium fellutanum was growth during seven days in six different lignocellulosic carbon sources: passion fruit peel, soybean hull, dirty cotton gin waste, banana stalk, sugarcane bagasse and orange peel. Fifteen days cultures on the same substrates plus a composition of dirty cotton gin trash, soybean hulls and orange peel (1:1:1) were evaluated for the presence of complexes through BN-PAGE technique. Crude extracts were screened for mannanase, xylanase, pectinase, carboxymethylcellulase (CMCase) and avicelase activities. The strain of P. fellutanum was able to secrete holocellulases on evaluated carbon sources and the profile of secreted enzymes was influenced by the carbon source. Putative complexes were also detected in all cultures evaluated, and their presence was dependent on the lignocellulosic substrate used. Five days cultures on dirty cotton gin trash were concentrated by ultrafiltration, and mannanase activity present in the concentrated fraction was partially purified by size exclusion chromatography (Sephacryl S-100) and ion exchange (QFF) and characterized. Two enzymes of sizes between 45 and 66 kDa were detected in semi-purified fraction. The enzymes showed maximum activity at 55°C and 65°C and pH 3.5. The activity was strongly inhibited by Cu2+, Ag+, Fe3+ and Hg2+, and activated by Na+, Ca2+ and K+. The activity was not affected by most of the phenolic compounds employed, and interestingly was strongly activated in the presence of ferulic acid. Km and Vmax values were found to be 1.16 ± 0.21 mg / mL and 0.312 ± 0.015 IU / mL, respectively. The protein complexes detected will be subsequently identified. Partially purified mannanase activity from cotton gin waste crude extracts demonstrated potential for application as additive in animal feed, due to its acidic character.

Orientador : Profª. Drª. Luciana Porto Souza Vandenberghe
Coorientadores : Prof. Dr. Carlos Ricardo Soccol e Profª. Drª.Vanete Thomaz Soccol
Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 15/06/2015
Inclui referências : f. 145-166
Área de concentração: Agroindústria e biocombustíveis
Resumo:As mananases são enzimas aplicadas nos mais diversos segmentos industriais devido à sua capacidade de decompor as cadeias de mananas, presentes na fração hemicelulósica da parede celular vegetal. São produzidas comercialmente por fermentação submersa (FSm) e também estudadas à partir da fermentação no estado sólido (FES) porém, são desconhecidos relatos que abordam sua produção à partir da fermentação semissólida (FESS). A técnica de FESS é uma alternativa para o escalonamento de processos com o emprego de biorreatores, pois une importantes características da FES e da FSm, como por exemplo, o emprego de subprodutos agroindustriais como substratos sólidos e a simplificada recuperação do produto final. Os principais objetivos deste trabalho foram investigar a produção de mananase por via convencional utilizando diferentes técnicas fermentativas (FES, FESS e FSm) e por via recombinante (expressão heteróloga), bem como avaliar a estabilidade do extrato enzimático após o uso de diferentes aditivos, para composição da formulação líquida de mananase. Para tanto, foi realizada seleção de subprodutos agroindutriais para seu emprego como substratos nos processos de FES e FESS, que visaram a produção de mananases por via convencional com o fungo filamentoso Aspergillus niger NRRL 328. A casca de soja (CS) foi o substrato mais eficiente para emprego em processos de FESS, o qual se mostrou viável para produção da mananase (76,86 U mL-1). O aumento da escala produtiva de mananases por FESS foi explorada em biorreatores do tipo Tanque Agitado (STR) e Coluna de Bolhas (BCR), sendo este último, o modelo que apresentou a melhor resposta (30,02 U mL-1). A produção de mananases por via recombinante foi realizada com sucesso quanto à clonagem, obtenção do plasmídeo recombinante e expressão heteróloga pela levedura Pichia pastoris GS115, com índice superior à mananase nativa proveniente da cepa parental A. niger, em condições fermentativas similares. A análise quantitativa aliada ao perfil protéico obtido por SDS-PAGE, revelaram que a mananase recombinante não foi totalmente secretada pela levedura e que sua expressão pode ser melhorada. A formulação líquida de mananases, avaliada quanto à sua estabilidade pela ação de diferentes aditivos e também quanto à sua toxicidade ao organismo teste Artemia salina (CL50), teve sua composição considerada ideal na presença do extrato mananolítico semi-purificado, acrescido de citrato de sódio (0,15%), glicerol (2,5 M) e EDTA (0,01%), com comprovada estabilidade da mananase (99%), sob condição acelerada de armazenamento (50 °C durante 15 dias). A mesma formulação, na faixa de concentração entre 1 e 1,35%, não apresentou toxicidade (CL50) para A. salina. No estudo de estabilidade normal, o armazenamento à 4 °C do extrato mananolítico semi-purificado na ausência de aditivos, impediu a contaminação microbiana e manteve 90% da atividade enzimática durante 120 dias. O desenvolvimento deste trabalho correspondeu às expectativas uma vez que possibilitou avanços importantes acerca da produção de mananases por via convencional e recombinante, bem como a obtenção de produto com bio-atividade e estabilidade comprovadas. Palavras-chave: Mananase, Fermentação Semissólida, Cascas de Soja, Biorreatores, Formulação Líquida, Expressão Heteróloga.
Abstract: Mannanases are enzymes applied in the most several industrial segments, due its capacity to breaking down mannan chains, founded in the hemicelulosic portion of plant cell wall. Comercially produced by submerged fermentation (SmF) and also studied from solid-state fermentation (SSF), the report from production using semisolid- state fermentation (SSSF) are unknow. The semi-solid-state fermentation technique is an alternative for process scale-up employing bioreactors since it combines important features of SSF and SmF, e.g. the use of agroindustrial byproducts as solid substrates and the simplified recovery of the final product. The main objectives of this work were to investigate the mannanase production by conventional way using different fermentative techniques (SSF, SmF and SSSF) and by recombinant way (heterologous expression), as well as, evaluate the stability of the enzyme extract by studying different additives, which were added to a liquid mananase-based formulation. For this, the screening of several agroindustrial byproducts was carried out to test them as solid substrate in the SSF and SSSF processes for mannanase production by conventional way with the filamentous fungus Aspergillus niger NRRL 328. Soybean husks (SH) was the most efficient substrate for mannanase production by SSSF processes (76.86 U mL-1). Mannanase production scale up by SSSF was exploited in Stirred Tank (STR) and Bubble Column (BCR) bioreactors. STR promoted a better response (30.02 U mL-1). Recombinant mannanase production was conducted success fully in respect to cloning, recombinant plasmimid achieving and heterologous expression by the yeast Pichia pastoris GS115. Superior rates of mannanase production were achieved in comparison to native mannanase from parental strain A. niger in similar fermentative conditions. Quantitative analyzes, combined to the protein profile obtained by SDSPAGE, revealed that the recombinant mannanase was not totally secreted by the yeast and the expression could be improved. The liquid mannanase formulation, evaluated with respect to its stability by the action of several additives and also its toxicity for the organism test Artemia salina (LC50), was composed by the mannanolytic semi-purified extract addicted of sodium citrate (0.15%), glycerol (2.5 M) and EDTA (0.01%). The formulation showed a mannanase stability of 99%, under accelerated storage conditions (50 °C during 15 days). The same formulation in the concentration range between 1 and 1.35%, did not show toxicity (LC50) for A.salina. In the normal stability study, the storage at 4 °C of the pre-purified mannanolytic extract, without additives, did not show microbial contaminations with 90% of enzymatic activity stability during 120 days. The development of this work allowed important advances concerning mannanases production by conventional and recombinant way, as well as, the definition of a mannanase-based product with proven bio-activity and stability. Key-words: Mannanase, Semi-solid-state Fermentation, Soybean Husks, Bioreactors, Liquid Formulation, Heterologous Expression.

Mestrado em Bioquímica, Ramo Alimentar
Mano-oligossacarídeos (MOS) são hidratos de carbono constituídos por 2 a 10 resíduos de manose, que podem ser obtidos a partir de galactomananas (GM). As GM são polissacarídeos compostos por resíduos de D-manopiranose em ligações (β1→4), que podem estar substituídos em O-6 por resíduos únicos de α-D-galactopiranose. As GM com baixo grau de substituição tendem a ser insolúveis em água e com elevado grau de substituição, se tiverem um grau de polimerização elevado, tendem a formar soluções de alta viscosidade. A hidrólise das GM pela β-mananase permite a produção de MOS, sendo a reutilização da enzima possível se esta estiver imobilizada. Neste trabalho foram utilizadas GM obtidas a partir do resíduo de café (SCG) e da goma de alfarroba. Para solubilizar as GM do SCG foram testadas a hidrólise ácida parcial e a torra, tendo sido obtidas, por ambas as metodologias, GM solúveis. Estas GM solúveis foram caracterizadas por análise de açúcares neutros, análise de ligações glicosídicas e cromatografia de exclusão molecular. Foi também analisada uma amostra de GM solúvel de SCG, obtida por extração assistida por micro-ondas. A β-mananase, de origem comercial foi imobilizada usando a quitina, obtida previamente a partir das cascas de camarão, como suporte. Usou-se como reagente bi-funcional a genipina. A percentagem de imobilização foi de 36%. A atividade da enzima foi avaliada, utilizando como substrato as GM do SCG e monitorizada pela formação de manobiose por cromatografia em fase gasosa acoplada a deteção por ionização de chama (GC-FID). A formação de trissacarídeos (Man3 e Gal-Man2) e outros MOS também foi avaliada por GC-FID e por cromatografia de exclusão molecular. Os parâmetros cinéticos da β-mananase livre e imobilizada foram determinados por hidrólise das GM de SCG e formação de manobiose. Estes foram calculados a partir da equação de Lineweaver-Burk. A enzima livre apresentou uma Vmáx de 10,5 mmol/min e um Km de 0,047 mg/mL. No caso da enzima imobilizada a Vmáx (6,4 mmol/min) foi ligeiramente inferior à da enzima livre, enquanto que o Km (1,57 mg/mL) foi 30 vezes superior. A β-mananase imobilizada foi utilizada para a produção de MOS a partir de GM de goma de alfarroba (LBG), tendo-se verificado a formação de trissacarídeos e tetrassacarídeos, para além de MOS de maior tamanho, não tendo, no entanto, sido produzidos dissacarídeos. Os MOS produzidos a partir das GM do SCG e da LBG não apresentaram citotoxicidade com células do baço de ratinho. No entanto, não foi observada atividade imunoestimuladora. Foi também avaliada a atividade prebiótica para a estirpe Lactobacillus casei ssp. paracasei não se tendo verificado atividade prebiótica.
Mano-oligosaccharides (MOS) are carbohydrates consisting of 2 to 10 mannose residues that can be obtained from galactomannans (GM). GM are polysaccharides composed by (β1→4) linked D-mannopyranose residues that can be substituted at O-6 with single residues of α-D-galactopyranose. GM with low degree of substitution tend to be insoluble in water whereas GM with high degree of substitution, and high degree of polymerization, tend to form high viscosity solutions. Hydrolysis of GM with β-mannanase allows the production of MOS, and enzyme immobilization allows its reuse. In this study, GM obtained from spent coffee grounds (SCG) and also from locust bean gum (LBG) were used. To render them soluble in water, a pretreatment of GM of the SCG by partial acid hydrolysis and also by roasting was tested. The efficiency of pretreatment was evaluated by neutral sugar analysis, analysis of glycosidic bonds and molecular exclusion chromatography. The sample of SCG previously obtained by microwave assisted extraction was also analyzed. The β-mannanase from commercial sources was immobilized on chitin, as support, previously obtained from shrimp shells. Genipin was used as bifunctional reagent. The percentage of enzyme immobilization was 36%. The enzyme activity was measured by gas chromatography with flame ionization detection (GC-FID) through the formation of mannobiose from galactomannans of the SCG. The formation of trisaccharides (Man3 and Gal-Man2) and other MOS was also evaluated by GC-FID and size exclusion chromatography. The kinetic parameters of both free and immobilized β-mannanase were determined by hydrolysis of GM of the SCG and mannobiose formation, calculated from Lineweaver-Burk equation. The free enzyme showed a Vmax of 10.5 mmol/min and Km of 0.047 mg/mL. In case of the immobilized enzyme the Vmax (6.4 mmol/min) was slightly lower than the free enzyme, while the Km (1.57 mg/mL) was 30 times higher. The activity of immobilized β-mannanase was tested in GM of the LBG, allowing to obtain tetrasaccharides and trisaccharides, as well as other major MOS. However, disaccharides have not been produced. The MOS obtained by hydrolyses of GM of the SCG and LBG trough β-mannanase immobilization did not show cytotoxicity against mouse spleen cells. However, no immunostimulatory activity was observed. Prebiotic activity was also evaluated for the strain Lactobacillus casei ssp. paracasei prebiotic activity was not verified.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2014.
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A casca do grão da soja, um resíduo agroindustrial que possui em sua estrutura elevado teor de manana, foi utilizada no cultivo do fungo Aspergillus foetidus para a produção de mananases. A curva de indução enzimática demonstrou um aumento progressivo na produção de mananase, chegando ao máximo no 15° dia de cultivo, com atividade de 1,987 UI.mL-1 quando o fungo foi cultivado em casca do grão da soja. O concentrado, obtido pelo procedimento de ultrafiltração, quando incubado a 60°C em tampão acetato de sódio 50 mM pH 4,0 apresentou atividade de mananase de 6,392 UI.mL-1 e termoestabilidade a 60°C com atividade de 6,448 UI.mL-1 no 2° dia de incubação, perdendo 50% de atividade no 12º dia. O concentrado foi aplicado em coluna de filtração em gel do tipo Sephacryl S-100, e as frações apresentando atividade de mananase (58-65) foram submetidas à eletroforese em condições desnaturantes e análise por zimografia. A fração 58, denominada man 58, apresentou maior atividade de mananase, sendo selecionada para posteriores passos de caracterização. Man 58 foi mais ativa em tampão acetato de sódio 50 mM pH 4,0 a 60°C, atingindo maior atividade no 1° dia de incubação (1,015 UI.mL-1) e mantendo-se estável durante os 11 dias nos quais sua estabilidade à temperatura foi avaliada. Os valores de KM e Vmax de man 58 foram 3,29 mg/mL e 1,76 UI.mL-1, respectivamente. Man 58 foi ativada na presença de CaCl2, FeSO4 e NaCl, mas foi inibida por AgNO3, CoCl2, MgSO4, FeCl3, CuSO4, MgCl2, ZnCl2, ZnSO4, CuCl2, KCl, e EDTA. Os seis compostos fenólicos testados não apresentaram efeito inibitório significativo em man 58. Os licores de auto-hidrólise inibiram man 58. Quando avaliada por espalhamento de luz dinâmico (ELD), observou-se a presença de outras enzimas agregadas à man 58. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT
The soybean husk is an agricultural residue presenting in its structure a high level of mannan. It was used as carbon source in the cultivation of Aspergillus foetidus aiming the production of mannanase. The curve of enzyme induction showed a progressive production of mannanase, reaching a maximum on the 15th day of cultivation, on soybean husk. The concentrate obtained by ultrafiltration when incubated at 60°C in sodium acetate buffer pH 4.0 50 mM showed activity of mannanase of 6,392 UI.mL-1 and thermostability at 60°C with activity of 6,448 UI.mL-1 on the 2nd day of incubation, losing 50% activity on the 12th day. The concentrate was submitted to chromatography on Sephacryl S-100 gel filtration column, and the fractions showing the activity of mannanase (58-65) were submitted to electrophoresis under denaturing conditions and zymography analysis. The fraction 58 showed better activity of mannanase, called man 58, being selected for further characterization steps. Man 58 was most active at 50 mM sodium acetate buffer pH 4.0 50 mM at 60°C, reaching higher activity on 1st day of incubation (1.015 UI.mL-1) and remained stable during the 11 days when their temperature stability was evaluated. The KM and Vmax values were 3.29 mg/mL and 1.76 IU.mL-1, respectively. Man 58 was activated in the presence of CaCl2, FeSO4 and NaCl, but it was inhibited by AgNO3, CoCl2, MgSO4, FeCl3, CuSO4, MgCl2, ZnCl2, ZnSO4, CuCl2, KCl and EDTA. The six phenolic compounds tested showed little inhibitory effect on man 58. The auto-hydrolysis liquors inhibited man 58. When evaluated by dynamic light scattering (DLS), it was observed the presence of other enzymes aggregated with man 58.

No presente trabalho, foram desenvolvidas nanocápsulas de núcleo lipídico (LNCs) para posterior revestimento com manana através da utilização de duas metodologias diferentes, sendo ambas por interações eletrostáticas. Na primeira metodologia, soluções de manana em diferentes concentrações foram gotejadas sobre a formulação LNC-Quit+ e na segunda metodologia a LNC-Quit+ foi injetada nas soluções de manana. Através de análises de diâmetro, mobilidade eletroforética, potencial zeta e viscosidade, foi possível notar que a primeira metodologia não apresenta reprodutibilidade, demonstrando valores aleatórios, ao passo que, na segunda metodologia os valores são reprodutíveis para a concentração de 0,5 μg/mL final de manana. Também foi possível observar que as nanopartículas revestidas com manana não apresentam estabilidade após 24 horas, sugerindo-se que a manana se desprende da superfície da partícula. Nas duas metodologias foram utilizadas concentrações diferentes de material de partida, e com isso, foi criada a metodologia 2B para que as anteriores pudessem ser comparadas. Com estes resultados tem-se um caminho promissor para estudos futuros e o aprimoramento deste tipo de revestimento.
In the present work, lipid core nanocapsules (LNCs) was developed for subsequent coating with mannan by using two different methodologies and both by electrostatic interactions. In the first methodology, mannan solutions at different concentrations were drop wise on LNC-Quit+ formulation and the second methodology, LNC-Quit+ was injected in mannan solutions. Through analysis of diameter, electrophoretic mobility, zeta potential and viscosity, it was possible to notice that the first methodology was not reproductible, showing random values, whereas, in the secont methodology the values was reproductible for the 0,5 μg/mL concentration. It was also possible to observe that the particle coated with mannan has no stability after 24 hours, suggesting that mannan detaches from the particle surface. In this methodologies, two different concentrations of raw materials are used, and with that, it was created the methodology 2B so that the results could be compared. With these results, it was a promising path way for future studies and enhancement of this type of coating.

Mestrado em Química e Qualidade dos Alimentos
Neste estudo foram obtidas mananas provenientes do resíduo de café por extracção sequencial com água quente, um agente quelante e soluções alcalinas de NaOH e derivatização por acetilação de modo a torná-las solúveis em soluções aquosas. As fracções de mananas acetiladas obtidas foram analisadas quanto à quantidade e tipo de açúcares e ao seu grau de acetilação e foram também caracterizadas estruturalmente por Espectrometria de Massa Tandem (MS/MS) de iões formados em ESI (ionização por electrospray). A acetilação das mananas do resíduo de café ocorreu preferencialmente nas cadeias laterais constituídas por resíduos de galactose e de arabinose, apesar de também serem encontrados resíduos de manose acetilados. As mananas acetiladas do resíduo de café e as mananas isoladas e purificadas a partir de infusões preparadas do grão de café sujeito a dois diferentes graus de torra, suave e forte, foram utilizadas para testar o seu efeito imunomodulador. Como padrão de comparação usou-se as acemananas bioactivas de Aloe vera. As mananas do resíduo e das infusões de café apresentaram estimulação de linfócitos B e de linfócitos T de ratinhos, avaliados pela sua expressão in vitro de marcadores de activação de superfície. Este efeito foi mais marcado nos linfócitos B que nos T, não tendo, contudo, havido um efeito proliferativo. As mananas testadas não apresentaram indução da activação de macrófagos nem indução de efeito imuno-supressivo in vitro. Os ensaios in vivo realizados, ainda preliminares dado o reduzido número de réplicas, estão de acordo com as observações feitas in vitro, nomeadamente, a activação de linfócitos B e T sem proliferação de células. Apesar do padrão de acetilação das mananas do resíduo de café ser diferente do das infusões de café e do Aloe vera, os resultados obtidos mostram que estas mananas têm propriedades imunomoduladoras comparáveis entre si. ABSTRACT: In this study, mannans were obtained from coffee residue by sequential extraction with hot water and alkali solutions and were acetylated to allow their solubilization in water solutions. The fractions of acetylated mannans obtained were analysed in order to identify and quantify their composition in sugars and the degree of acetylation. They were also structurally characterized by Tandem Mass Spectrometry (MS/MS) of ions formed by ESI (ionization by electrospray). The chemical acetylation of the mannans of coffee residue occurred preferentially in the galactose and arabinose side chain residues, although mannose residues were also found, The acetylated mannans from coffee residue and from coffee infusions of coffee beans submitted to two different degrees of roast, light and dark, were used to study their potential immunomodulatory activity. Aloe vera bioactive acemannan was used for comparison. The mannans from coffee infusions and coffee residue were shown to stimulate murine B and T lymphocytes, as evaluated by in vitro expression of surface lymphocyte activation markers. This effect was more marked on B than on T lymphocytes, without a noticed proliferative effect. The mannans did not induce in vitro macrophage activation neither immunosuppressive effect. In vivo assays, although preliminary due to the reduced number of replicates, are in accordance to in vitro observations, showing activation of B and T lymphocytes without cell proliferation. Although the acetylation pattern of coffee residue mannans was different from the one presented by coffee infusions and Aloe vera, the results obtained suggest that those mannans have comparable immunomodulatory properties.

The objectives of this research were to analyze the differences between populations of coquinho-azedo (Butia capitata), in relation to the characteristics of the fruit, of the pyrene, of the seed, of the embryo, of the germination and of the seedling vigor; verify what is the main component of phenotypic variance for the characteristics of the seed, of the germination and of the seedling vigor and what characteristics of the seed and of the embryo present the greatest variation among populations. Moreover, it was aimed, also, to get a new spectrophotometric method more efficient, from high sensitivity, low cost and easy execution to determine the enzymatic activity of the endo--mannanase in seeds, and apply it to samples of coquinho-azedo (Butia capitata) to determine the location of enzyme activity in different parts of the seeds. Coquinho-azedo fruits (B. capitata) were obtained from five populations located in north of Minas Gerais. In samples of 1000 fruits from each population was evaluated the length, the diameter and the dry mass of the fruits and of the pyrene (endocarp + seed). In samples of 200 seeds from each population were evaluated also the length, the diameter and the fresh mass. The embryos were excised of the seeds for evaluation of total length, length and diameter of petiole and length and diameter of haustoria. The embryos were cultured in vitro and evaluated after 30 days as for germination, emission of roots and sheaths. It was observed that there is variability among populations for fruit characteristics, of the pyrene, of the seed, of the germination and of the seedling vigor. The genotypic variability is the main responsible for the phenotypic variability for the characteristics of the seed, embryo, germination and seedling vigor, and the dimensions of the embryo and seed mass are the main features that discriminate the populations. The obtained spectrophotometric method for determine the activity of the endo--mannanase consists in extracting the seed enzyme and using it to hydrolyze the galactomannan Locust Bean Gum. The reducing sugars formed are subjected to a reaction with the p-hydroxybenzoic acid hydrazide and quantified by spectrophotometry in the visible region. The method presented low limits of quantification for the reducing sugar formed and for the enzymatic activity of mannanase with the respective values of 6g of mannose and 1000 µU (peak mol of reducing sugar formed per time unit). The coefficient of variation among replicates was satisfactory with values below 10%. Seeds coquinho-azedo (B.Capitata) without operculum presented upper enzymatic activity to the seeds with the operculum, and in both of them the higher enzyme activity was detected in the region adjacent to the embryo.
Os objetivos desta pesquisa foram analisar as diferenças entre populações de coquinho-azedo (Butia capitata), em relação às características do fruto, do pirênio, da semente, do embrião, da germinação e do vigor de plântulas; verificar qual é o principal componente da variância fenotípica para as características da semente, da germinação e do vigor de plântulas e quais as características da semente e do embrião que apresentam maior variação entre as populações. Além disso, objetivou-se, também, obter um novo método espectrofotométrico mais eficiente, de elevada sensibilidade, baixo custo e de fácil execução para determinar a atividade enzimática da endo--mananase em sementes; e aplicá-lo em amostras de coquinho-azedo (Butia capitata) para determinar a localização da atividade da enzima em diferentes partes das sementes. Frutos de coquinho-azedo (B. capitata) foram obtidos de cinco populações localizadas no norte de Minas Gerais. Em amostras de 1000 frutos, de cada população, avaliaram-se o comprimento, o diâmetro e a massa fresca dos frutos e dos pirênios (endocarpo+sementes). Em amostras de 200 sementes, de cada população, também avaliaram-se o comprimento, o diâmetro e a massa fresca. Os embriões foram excisados das sementes para a avaliação do comprimento total, comprimento e diâmetro do pecíolo e o comprimento e diâmetro do haustório. Os embriões foram cultivados in vitro e avaliados após 30 dias, quanto à germinação, emissão de raízes e bainhas. Observou-se que há variabilidade entre populações para as características do fruto, do pirênio, da semente, da germinação e do vigor de plântulas. A variabilidade genotípica é a principal responsável pela variabilidade fenotípica para as características da semente, embrião, germinação e vigor de plântulas, e as dimensões do embrião e a massa da semente são as principais características que discriminam as populações. O método espectrofotométrico obtido para determinar a atividade da endo--mananase, consiste em extrair a enzima da semente e utilizá-la para hidrolisar o galactomanano Locust Bean Gum. Os açúcares redutores formados são submetidos a uma reação com a hidrazida ácida p-hidroxibenzóico e quantificados por espectrofotometria na região do visível. O método apresentou baixos limites de quantificação para o açúcar redutor formado e para a atividade enzimática da mananase com os respectivos valores de 6µg de manose e 1000 µU (pico mol de açúcar redutor formado por unidade de tempo). O coeficiente de variação entre as repetições foi satisfatório com valores inferiores a 10%. Sementes de coquinho-azedo (B.Capitata) sem opérculo apresentaram atividade enzimática superior às sementes com o opérculo e, em ambas, a maior atividade enzimática foi detectada na região adjacente ao embrião.

Concept Maps (CMs) are considered a well-known pedagogy technique in creating curriculum, educating, teaching, and learning. Determining comprehension of concepts result from comparisons of candidate CMs against a master CM, and evaluate "goodness". Past techniques for comparing CMs have revolved around the creation of a subjective rubric. We propose a novel CM scoring scheme called MAnanA based on a Fuzzy Similarity Scaling (FSS) score to vastly remove the subjectivity of the rubrics in the process of grading a CM. We evaluate our framework against a predefined rubric and test it with CM data collected from the Introduction to Computer Security course at the University of New Orleans (UNO), and found that the scores obtained via MAnanA captured the trend that we observed from the rubric via peak matching. Based on our evaluation, we believe that our framework can be used to objectify CM analysis.

Orientador: Marcos Silveira Buckeridge
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Made available in DSpace on 2018-08-03T19:35:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lisboa_CesarGustavoSerafim_M.pdf: 19512076 bytes, checksum: 2f67235487f803777476cf49276d414d (MD5) Previous issue date: 2003
Resumo: As sementes de muitas plantas possuem endosperma, um tecido especializado com funções tanto de reserva como de constrição mecânica do embrião nas primeiras etapas de desenvolvimento. Em muitas espécies de leguminosas, estes tecidos especializados armazenam como polissacarídeo de reserva, o galactomanano. Este polímero apresenta um cadeia central de manose ( ß-1,4 ligadas) e ramificações de galactose (?-l,6 ligadas ao esqueleto central). Três enzimas estão envolvidas na hidrólise do galactomanano: a endo-ß- mananase, a ?-galactosidase e a ß-manosidase. Da forma com que a endo-mananase ataca o polímero, inicialmente produz oligossacarídeos galactosilados que, são posteriormente hidrolisados pelas duas últimas exo-enzimas (?-galactosidase e ß-mananase) até galactose e manose livres. Neste trabalho, uma endo-ß-mananase foi purificada do endosperma das sementes de Sesbania virgata, uma leguminosa nativa. Uma curva de tempo de germinação mostrou que a atividade da mananase aparece inicialmente na região do endosperma próxima à área de protrusão da radícula e, subseqüentemente, aumenta na região lateral do endosperma da semente seguindo o desenvolvimento da plântula. Medindo a atividade em pH 5 a 45°C, o máximo da atividade catalítica correspondeu a 120h de desenvolvimento para, em seguida, decair. Para a purificação da enzima, utilizou-se uma coluna de troca iônica DEAE-celulose seguida de uma coluna de afinidade biológica em Sepharose Concanavalina A. A mananase purificada é uma glicoproteína de peso molecular de cerca de 30KDa, com pH ótimo entre 3,5 e 5, temperatura ótima de 45°C e ponto isoelétrico 4,5. A caracterização da atividade da endo-mananase sobre diferentes galactomananos com diferentes razões manose:galactose, indicou que a ramificação do polissacarídeo com galactose é o "fator-chave" na modulação da própria ação catalítica dessa enzima. Com essas observações, foi concluído que, a atividade da endo-mananase, além de estar relacionada com a mobilização de reservas, facilita a emersão da radícula agindo na área próxima à protrusão. Entendendo que a mananase pura não foi capaz de degradar o galactomanano da Trigonellafoenum-graecum (razão 1:1 de manose/galactose), sugere-se que exista uma relação inversa entre o grau de ramificação e a porcentagem de hidrólise da endo-mananase
Abstract; Many plant seeds have an endosperm, a tissue specialised either as storage or mechanical constraint to embryo growth. In many legume species, endosperms contain galactomannan. This polyssacharide is composed of a main chain of 1,4-ß-mannan branched with variable amounts of 1,6-?-linked galactosyl residues. Three enzymes produced by an aleurone layer are involved in galactomannan hydrolysis: endo-ß-mannanase, ?-galactosidase and ß- mannosidase. The former with mannanase attacks the polymer producing galactosylated oligossacharides which are further hydrolysed by the two last exo-enzymes to free mannose and galactose. In the present work, an endo-ß-mannanase was purified from the endosp erm of Sesbanía vírgata, a Brazilian native legume. The time-course shows that the activity of mannanase appears initially in the endosperm cap of seeds prior to radicle emergence and subsequently increases in the remaining lateral endosperm following seedling growth. Measuring the activity at pH 5 and 45°C, endo-mannanase peaked at 120h and then decreased. We used these conditions to perform purification procedures in DEAE-cellulose followed by affinity chromatography with Sepharose Concanavaline-A. The enzyme is a glycoprotein with an apparent molecular weight of 30Kda, optimum pH at 4.5 and temperature at 45°C, pI at 4.5. The mode of action of the enzyme on different galactomannans indicates the modulation of mannanase activity by the branching pattems of the polymers with galactose. From these observations it was concluded that mannanase activity facilitates radicle protrusion through the surrounding endosperm by weakening it in the area close to the radicle tip. On the basis that the pure enzyme can not degrade the fenugreek galactomannan (a fully substituted polysaccharide), we suggest that there is an inverse relationship between galactose branching and the degree of hydrolysis
Mestrado
Biologia Celular
Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-18Bitstream added on 2014-08-13T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000776180.pdf: 1926203 bytes, checksum: 60db49d6033717478f4a4a7a4f1c63aa (MD5)
Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os ....
Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ...

Orientador: Luciane Dias de Oliveira
Co-orientador: Mariella Vieira Pereira Leão
Banca: Antônio Olavo Cardoso Jorge
Banca: Célia Regina Gonçalves e Silva
Resumo: Os probióticos são capazes de equilibrar a microbiota residente e modular a resposta imune aos diferentes estímulos microbianos, entretanto, seus efeitos imunomoduladores ainda não estão claramente elucidados. O presente estudo avaliou o efeito imunomodulador de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos sobre macrófagos (RAW 264.7) ativados por lipopolissacarídeo (LPS), ácido lipoteicóico (LTA) ou manana, pela análise da produção de citocinas pró e anti-inflamatórias (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). Foi utilizada a cepa padrão de L. rhamnosus ATCC 7469, semeada em Ágar Man-Rogosa-Shape (MRS) e cultivada a 37ºC/5% CO2 por 24 h. Foram empregadas três diferentes preparações de probióticos: 1) L. rhamnosus vivo (LV) na concentração de 2,5 x 107 células/mL; 2) L. rhamnosus morto (LM) obtido por autoclavagem da preparação anterior a 121°C/15 min; 3) Sobrenadante da suspensão de L. rhamnosus (SL), resultante da centrifugação da suspensão LM a 8300 xg/10min. Foram utilizados macrófagos de camundongos (RAW 264.7), cultivados em meio DMEM completo (suplementado com 10% de soro fetal bovino) foram distribuídos em microplacas de poliestireno na concentração de 5 x 105 células viáveis/poço/mL de meio DMEM completo. Após 24 h de incubação (37°C/5% CO2) para adesão celular, as placas foram lavadas com PBS estéril e apirogênico e as células foram estimuladas com LPS de Escherichia coli, LTA de Streptococcus faecalis ou manana de Saccharomyces cerevisiae na concentração de 1 μg/mL, na presença ou ausência das diferentes preparações dos probióticos por 2,5h. Em seguida as placas foram lavadas com PBS, tiveram seu meio trocado e foram incubadas por 16h (37°C/5% CO2). Os sobrenadantes das culturas foram coletados para a detecção e quantificação das citocinas (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 e IL-12) pelo método imunoenzimático ELISA. Os ....
Abstract: Probiotics are able to balance the resident microbiota and modulate the immune response to different microbial stimuli, however its immunomodulatory effects are not clearly understood. This study intends to evaluate the immunomodulatory effect of Lactobacillus rhamnosus or its products on macrophages (RAW 264.7) activated by lipopolysaccharide (LPS), lipoteicoic acid (LTA) or mannan through the analysis of the production of pro and anti-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1 β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12). It was used the standard strain of L. rhamnosus ATCC 7469, seeded on Agar Man-Rogosa-Shape (MRS) and grown at 37°C/5% CO2 for 24 h. Three different preparations of probiotics were prepared: 1) L. rhamnosus solution at a concentration of 5 x 107 cells/mL; 2) Heat-killed L. rhamnosus, obtained by autoclaving previous preparation at 121°C/15 min, 3) Supernatant of L. rhamnosus suspension, obtained through centrifugation of the suspension with heat-killed probiotic at 8300 xg/10 min. Mouse macrophages (RAW 264.7) grown in complete DMEM medium (supplemented with 10% fetal bovine serum) were distributed in polystyrene microplates at a concentration of 1 x 106 viable cells/well/ml complete DMEM medium. After 24 h incubation (37°C/5% CO2) for cell adhesion, plates were washed with sterile-apirogenic physiologic saline and cells were stimulated with Escherichia coli LPS, Enterococcus faecalis LTA or Saccharomyces cerevisiae mannan at a concentration of 1 μg/mL, in the presence or absence of the different preparations of probiotics at the same time for 2,5 h. Then the plates were washed, had its medium traded and were incubated for 16 h (37°C/5% CO2). Culture supernatants were 14 collected for the detection and quantification of cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10 and IL-12) by ELISA immunoenzymatic method. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey tests (p≤0,05). With ...
Mestre

Orientador: Gil Eduardo Serra
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos
Made available in DSpace on 2018-07-21T21:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_ElaineMeirede_D.pdf: 4507712 bytes, checksum: 47b546d8fc82531b28946f071612f253 (MD5) Previous issue date: 1996
Resumo: A parede celular de levedura de fermentação industrial de cerveja (Saccharomyces cerevisiae) é composta basicamente de polissacarídeos, representando um material que pode ter utilização industrial e importante valor econômico. Embora exista um considerável conhecimento da estrutura dos polissacarídeos componentes da parede celular de S. cerevisiae, neste trabalho foram estudadas duas fontes comerciais representadas por: a) células residuais de levedura de fermentação industrial de cerveja; b) parede celular residual de produção de extrato de levedura, com autólise das células referidas no item a. O processo de rompimento das células intactas de leveduras foi realizado em um moinho de esferas de vidro em escala piloto (Dyno-Milí) e otimizado, permitindo atingir aproximadamente 95% de rompimento. O fracionamento delineado permite uma separação seqüencial de frações a partir das paredes brutas, e, praticamente, isolar frações purificadas e homogêneas e assim determinar o polissacarídeo componente de cada uma e indiretamente sua ocorrência nas frações de origem. Cada fração foi quantificada, caracterizada quimicamente e o polissacarídeo teve sua estrutura identificada. Para a verificação da estrutura as amostras foram submetidas às análises por CG-EM, RMN13C e espectrometria de infravermelho (IR). A parede celular obtida por rompimento mecânico apresentou um rendimento de 30% do peso total da célula em base seca. As frações de polissacarídeos isoladas da parede celular obtida por rompimento e parede celular industrial residual apresentaram, respectivamente, um rendimento em peso seco em relação à parede celular de: 16,7 e 11,2% de glicoproteína; 7,1 e 7,8% de manana; 0,8 e 1,0% de glucana álcali solúvel; 59,2 e 63,8% de glucana insolúvel, e 1,8 e 2,2% de glucana ácido solúvel, respectivamente. Quanto à glicoproteína, quatro subtrações foram isoladas, com 1,3 e 2,7% (fração A), 56,3 e 44,2% (fração B), 10,5 e 12,0% (fração C) e, 10,6 e 12,7% (fração D). As três principais frações de polissacarídeos da parede celular, quantitativamente, foram a glicoproteína, a manana e a glucana insolúvel. As duas primeiras tiveram seu polissacarídeo confirmado como a-D-{1->6) manopiranana 2-O-substituída, com ramificações a-D-(1->2) manopiranosidicas e uma unidade terminal não redutora a-D-(1-»3) manopiranosídica; a glucana insolúvel foi confirmada como ß-D-(1->3) glucopiranana. Das subtrações isoladas a partir da glicoproteína através de fracionamento com Cetavlon, a fração mais abundante (Fração B) teve seu polissacarídeo identificado com estrutura idêntica à da fração de manana. O RNA presente na parede celular foi encontrado integralmente na fração A da glicoproteína, o que elimina tal composto das demais frações e subfrações. A parede celular constituída pelo subproduto industrial de autólise, mostrou características gerais similares à da parede separada por rompimento mecânico, ou seja, mesmo exposta a enzimas nativas e outras, durante a autólise, esta parede foi basimente preservada, embora seja possível observar seu comportamento diferenciado quanto à solubilização e dispersão durante as etapas de fracionamento. o trabalho consolida num texto único, novas informações em adição a outras, já descritas de forma segmentada e em condições diversas.
Abstract: The cell wall of yeast (S. cerevisiae) from industrial beer fermentation is composed of polissacharides which can be utilized in the food and others industries. Considerable information about the chemical structure of cell wall polissacharides of S. cerevisiae is related in the literature and was obtained from laboratory cell cultures grown in synthetic media. The aim of this work was to establish a parallel between the fractionation routine, the yield of each fraction and their compositions, using two commercial sources of raw material: a) residual yeast cells from industrial beer fermentation; b) residual cell wall material from the production of yeast extract, with autolysis of the cells referred to in item a. The rupture of the yeast cells was carried out in a pilot glass ball mill (Dyno Mill);this operation was optimized and reached near 95% of cell disruption. The fractionation design for the sequential separation of the fractions obtained from the cell wall, allowed for the isolation of virtually homogeneous purified fractions and the polysaccharide component's of each one could then be determined and indirectly their ocurrence in the original fractions. Each fraction was quantified, characterized chemically and identified structurally. The samples were subjected to GC-MS, 13C NMR and IR spectroscopy in order to determine the structure. The cell wall obtained mechanical rupture showed a yield of 30% of the dry cell weight. The purified polissacharide fractions of cell walls obtained from the mechanical rupture of cells and from the cell walls of industrial residues showed, respectively, the following yields in dry weight related to the cell wall: 16.7 and 11.2% of glycoprotein; 7.1 and 7.8% of mannan; 0.8 and 1.0% of alkali soluble glucan; 59.2 and 63.8% of insoluble glucan and 1.8 and 2.2% of acid soluble glucan. From the glycoprotein four subfractions were isolated with yields of: 1.3 and 2.7 %, fraction A; 56.3 and 44.2%, fraction B; 10.5 and 12.0 %, fraction C and 10.6 and 12.7 %, fraction D. The three quantitatively main fractions of cell wall polissacharides were glycoprotein, manan and insoluble glucan. The polissacharide of the former two fractions was confirmed as 2-O-substituted a-D- (1->6) mannopyranan with a-D-(1-»2) mannopyranosidic branches and a non- reducing terminal unit of a-D-(1->3) mannopyranoside; the insoluble glucan being ß-D-(1->3) glucopyranan. From the subfractionation of the glycoprotein using Cetavlon, the polissacharide of the most abundant subtraction (B) showed a structure identical to that of the mannan fraction. The RNA present in the cell wall was almost totally found in subtraction A, practically eliminated this compound from the other fractions and subtractions. The cell wall byproduct from industrial autolysis, showed almost the same general characteristics when compared to that from mechanical rupture, i.e., even when exposed to native and others enzymes during autolysis, it was basically preserved, although a different behaviour with respect to solubilization and dispersion during the fractionation procedures was observed. This work consolidates in one publication some new information together with information already described but in a fragmented form and obtained under a variety of conditions.
Doutorado
Doutor em Tecnologia de Alimentos

Dissertação apresentada na Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Nova de Lisboa para obtenção do grau de Mestre em Engenharia Química e Bioquímica
Este trabalho foi realizado no âmbito da Optimização da Produção Industrial de Produtos Cosméticos e Detergentes. O trabalho realizado teve como finalidade o estudo e acompanhamento da Unidade Fabril, mais concretamente a nível laboratorial, com o objectivo de introduzir novas formulações, optimizar e simular os processos de produção industrial, para posterior aplicação. O plano de estágio proposto foi associado a diversas tarefas inseridas em vários projectos, dos quais se destacam: Optimização e implementação de novas fórmulas de detergentes líquidos; Estudo da variação do parâmetro da viscosidade em geles de banho e detergentes líquidos; Realização de auditorias internas de higiene; Acompanhamento do novo projecto “Tang” de detergentes em pó; Estudo da recuperação enzimática através do Auto analisador e Resolução de problemas surgidos na produção diária. Das actividades realizadas é de salientar os seguintes resultados: Na elaboração do produto Domestos Lixívia Espessa, foi necessário verificar se a adição da matéria-prima C, noutra fase do processo iria alterar a viscosidade do produto final. Para a análise procedeu-se à execução de cargas laboratoriais, constatando-se que a diferença da viscosidade obtida entre o espessante sem e com a adição de C, é significativa. No entanto, relativamente ao produto final, as viscosidades são idênticas e encontram-se dentro dos limites de especificação. Avaliou-se também a viscosidade dos espessantes ao longo do tempo, para verificar se é possível a utilização da bomba disponível na Lever. Efectuou-se a validação do método de análise da enzima Mananase, a qual apresentou uma taxa de recuperação de 105,4%. Na sequência do problema de baixa viscosidade detectada numa carga industrial, analisaram-se métodos correctivos, sugerindo-se a mistura de dois produtos: um produto com viscosidade dentro dos limites e outro produto de baixa viscosidade, de forma a aumentar o valor de viscosidade. Verificou-se que a proporção ideal da mistura seria 2:1.

As doenças negligenciadas infectam mais de um bilhão de pessoas no mundo, no entanto, uma fração ínfima dos fármacos registrados nos últimos anos é direcionada a essas patologias. Entre as doenças negligenciadas consideradas prioridade, encontram-se doença de Chagas e leishmaniose. A tuberculose, que recentemente não é mais classificada como negligenciada pela Organização Mundial da Saúde, também está entre as prioridades do Ministério da Saúde no Brasil. O arsenal terapêutico disponível para o tratamento destas enfermidades compreende fármacos com toxicidade elevada e resistência crescente, entre outros inconvenientes. Dessa forma, verifica-se a importância no desenvolvimento de novos fármacos para as referidas doenças. Para este fim, o presente trabalho objetivou a síntese de um fármaco dirigido de hidroximetilnitrofural (NFOH) com manana para a liberação específica em macrófagos. O processo de latenciação foi utilizado para a consecução desse objetivo por meio da estratégia de fármacos dirigidos, buscando elevar seletividade e potência do NFOH. Este composto protótipo possui ação potencial tripanomicida, leishmanicida e tuberculostática. O transportador utilizado foi a manana, polímero de manose, que direciona a liberação da molécula ativa em receptores de manose observados na superfície de macrófagos. Em razão da presença de Trypanosoma cruzi, Leishmania sp. e Mycobacterium tuberculosis no interior de macrófagos em parte de seu ciclo biológico, o referido receptor é considerado um alvo adequado à liberação específica. Na tentativa de obter o referido fármaco dirigido, diversas metodologias sintéticas foram desenvolvidas. Também, realizaram-se estudos de modelagem molecular a fim de se obter informações sobre a liberação do fármaco dirigido proposto. Face à dificuldade de obtenção do derivado de NFOH, adicionalmente, realizou-se metodologias sintéticas a fim de se sintetizar um fármaco dirigido de metronidazol, fármaco que possui atividade antichagásica conhecida. Realizaram-se, também, estudos de modelagem molecular relacionados à sua liberação.
Neglected diseases infect more than one billion people worldwide. However, a small fraction of the drugs registered in recent years is addressed to these pathologies. Leishmaniasis and Chagas\' disease are among the neglected diseases considered priority. Tuberculosis, which is no longer classified as a neglected disease by the World Health Organization, is also among the priorities of the Ministry of Health in Brazil. The therapeutic arsenal available for the treatment of those diseases comprehends drugs with high toxicity and increasing resistance, among other inconveniences. Thus, it is important the development of new drugs for those diseases. For this purpose, this study aimed at synthesizing hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) drug targeted with mannan for the specific release in the macrophages. Prodrug design was used to achieve this goal by means of targeted drugs strategy towards increasing NFOH selectivity and potency. This lead compound has potential trypanocidal, leishmanicidal and tuberculostatic activity. The directing group used was a mannose polymer, mannan, which directs the release of the active compound to mannose receptors (MR) on macrophages surface. Due to the presence of Trypanosoma cruzi, Leishmania sp. and Mycobacterium tuberculosis inside macrophages during part of their life cycle, MR are considered a suitable target for specific release. In an attempt to obtain the proposed compound, several synthetic methods have been developed. Also, molecular modeling studies were carried out to obtain information about the targeted drug release. Due to the difficulty of obtaining NFOH derivative, the synthesis of metronidazole targeted drug was tried. Also molecular modeling studies to predict metronidazole release from mannan derivative were performed.

Durante a maturação da semente, a partir da fertilização do óvulo, há alterações inerentes à formação da semente, com destaque para as variações do tamanho, do teor de água, das massas da matéria fresca e seca e da germinação das sementes. Paralelamente, para os frutos carnosos há alterações visíveis nos frutos relacionados à forma, à cor e à senescência. Não há, todavia, relatos de quais mudanças (morfológica, anatômica, fisiológica e bioquímica) ocorrem nas sementes que se desenvolvem no interior de frutos carnosos mantidos em repouso por diferentes períodos de tempo. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a fase final da formação das sementes de pimentão, considerando as variações da morfologia externa dos frutos e do parâmetro fisiológico, da morfologia interna, da enzima endo-?-mananase, da anatomia e do acúmulo de substâncias de reservas e do ciclo celular das sementes, visando verificar se essas mudanças explicam as alterações fisiológicas das sementes de pimentão após o repouso pós-colheita do fruto e durante o armazenamento das sementes. As sementes foram extraídas de frutos em diferentes estádios de maturação, (cores verde, verde-avermelhada e vermelha), mantidos em repouso por 3, 7 ou 14 dias ou sem repouso, e avaliadas logo após a colheita e durante o armazenamento. Os frutos foram avaliados quanto à coloração, dimensões e massa. As sementes foram avaliadas quanto ao teor de água, massa de matéria seca, massa de 1000 sementes, germinação e vigor, além da avaliação de imagens de raios X para o estudo da morfologia interna das sementes, da atividade da enzima endo-?-mananase pelo método da difusão em gel, análises histoquímicas para o estudo da anatomia e de substâncias de reserva e a avaliação do ciclo celular. A colheita das sementes de pimentão pode ser caracterizada pela coloração dos frutos. Em função do repouso há alteração da cor do fruto, do ciclo celular das sementes hidratadas, da atividade da enzima endo-?-mananase e de algumas substâncias de reserva, interferindo positivamente na qualidade das sementes de pimentão. Entretanto, o repouso de frutos, que estão em estágio avançado de desenvolvimento, causa redução da qualidade das sementes. O teor de água, a massa de matéria seca e a morfologia interna da semente, a anatomia das células do endosperma e a presença de substâncias de reservas das sementes não são alterados durante o repouso do fruto, mas estão relacionados ao estádio de formação das sementes. Na medida em que há a deterioração natural das sementes durante o armazenamento, há redução da germinação e do vigor, da atividade da endo-?-mananase, da quantidade de lipídios, proteínas e polissacarídeos das células do embrião e do endosperma. Durante o repouso do fruto por 14 dias, as sementes extraídas de frutos verdes têm tolerância à desidratação, caracterizada principalmente pelo aumento da germinação após a secagem das sementes. A maturidade fisiológica das sementes é caracterizada pela coloração verde-avermelhada dos frutos e também pela estabilização do teor de água das sementes (30%), pela quantidade de matéria seca e pelo conteúdo de DNA 4C; não há coincidência entre maturidade fisiológica e máxima germinação.
During seed maturation there are some significant alterations in seed size, moisture content, fresh and dry matter and germination. Furthermore, for fleshy fruits, visible alterations occur as the fruit shape, color and senescence. There are not reports about which morphological, anatomical, physiological and biochemical alterations occur in seeds that develop inside fleshy fruits during the rest of them, for different periods of time. The objective of this research was to evaluate the final stage of the bell pepper seed formation and it was considered the variations of the external morphology of the fruit, and the physiological parameter, internal morphology, activity of endo-?-mannanase, anatomy and the reserve substances accumulation, and cell cycle of the seeds to verify if these changes explain the physiological changes of the bell pepper seeds after the fruit resting and during the seed storage. The seeds were extracted from fruits at different maturation stages (colors green, reddish-green and red), with (3, 7 or 14 days) or without fruit resting, and during the seed storage. The fruits were evaluated by color, and the measurements and weight. The seeds were evaluated for moisture content, dry mass, mass of 1000 seeds, germination and vigor and X-ray imaging to study the internal morphology of the seeds, endo-?-mannanase activity by gel diffusion assay, histochemical analyzes to study seed anatomy and reserve substances, and flow cytometry to assess the cell cycle. The harvest of bell peppers seeds can be made by the color of the fruits. The fruit resting alters the fruit color, germination, vigor, endo-?-mannanase activity, some storage substances and cell cycle improving bell pepper seed quality. However it has a negative role when the fruits are in advanced stage of development (red fruits and resting time more than 7 days). The moisture content, dry matter and the internal morphology of the seeds do not change by the fruit resting, but because of the seed maturation stage. It was observed reduction of all the physiological parameters, including the amount of lipids in the cells and endo-?-mannanase activity. During fruit resting, the endo-?-mannanase activity and the 4C DNA content of the cells decrease and there is an increased rate of germination and vigor. The water content, dry matter, internal morphology and anatomy of the cells of the endosperm and the presence of reserves substances in the seeds are not changed due to the rest of the fruit, but are related to the seed formation stage. There is natural seed deterioration during storage and a reduction of germination and vigor, endo-?-mannanase activity, amount of lipids, proteins and polysaccharides in the embryo and endosperm cells. During the fruit resting (14 days), the seeds extracted from green fruits have desiccation tolerance, characterized by increased of the seed germination after drying. The physiological maturity is reached when the fruits are reddish-green, characterized by stabilizing the water content of the seeds (30 %), amount of dry matter and the 4C DNA content. There is not a coincidence between physiological maturity and maximum germination.

Mestrado em Engenharia Química
A resistência física é essencial para a integridade do papel fabricado em qualquer uma das suas aplicações. O objectivo deste projeto foi estudar o efeito que o tratamento de TMP por xilanases, mananases, uma celulase e uma lacase teria sobre a resistência à tração, rasgamento e rebentamento do papel fabricado a partir deste tipo de pasta. Curvas de concentração foram efetuadas para cada uma das enzimas a testar na TMP disponível. A pasta foi previamente branqueada com H2O2, 3,00% (w/w) e submetida a 1000 revoluções no refinador PFI. As xilanases foram NS-51191, NS-51207 e NS-51168; as mananases foram NS-51184 e NS-51180; a celulase foi NS-51137; e a lacase foi NS-51003. As curvas de concentração foram repetidas para NS-51180 e NS-51003 de modo a verificar os resultados nos primeiros testes. Também foram medidas características da fibra, a serem comprimento, largura, percentagem de finos, “curl” e “kinks”/mm, bem como TOC. As estratégias típicas de refinação e branqueamento aplicadas tiveram efeitos positivos, do ponto de vista estatístico, motivo pelo qual foram plicados em todos os ensaios com tratamento enzimático. Nos ensaios onde houve tratamento enzimático, verificaram-se índices de resistência fracos, capacidade de resposta reduzida ou nula por parte das enzimas e um grau não desprezável de variabilidade foram verificados durante os ensaios. A explicação para tal ocorrência foi a variabilidade inerente associada a pastas mecánicas, TMP em particular, as condições bastante uniformes de tratamento (T = 60°C, tempo de incubação igual a 60 minutos, pH ajustado conforme a enzima em estudo) e a presença significativa de lenhina, que impediu o acesso das enzimas a camadas mais internas das fibras. São necessários testes em condições de temperatura, tempo de incubação e pH diferentes para ter a certeza de que as enzimas não conseguem dar um contributo positivo no âmbito da resistência física.
Physical strength is essential for the integrity of the manufactured paper in any of its applications. The aim of this project is to study the effect treatment of TMP by xy-lanases, mannanases, cellulase and laccase would have on the tensile, tearing and bursting strengths of paper manufactured from this type of pulp. Dosage curves were performed with each of the enzymes to be tested on the available TMP. The pulp was previously bleached with H2O2, 3,00% (w/w) and submitted to 1000 revolutions in the PFI mill. Xylanases were NS-51191, NS-51207 and NS-51168; mannanases were NS-51184 and NS-51180; cellulase was NS-51137; and laccase was NS-51003. Repeatability trials were done with NS-51180 and NS-51003 to verify the results in the first tests. Fiber characteris-tics, i.e. length, width, percentage of fines, curl and kinks/mm, as well as TOC, were also measured. The typical refining and bleaching strategies applied had a statistically positive effect, which is why they were applied in all enzymatic treatment trials. Whenever enzymatic treatment was performed, weak resistance indexes, reduced or no responsiveness by enzymes and a not negligible degree of variability were verified during the assays. The explanation for such occurrence was the inherent variability associated with mechanical pulps, TMP in particular, fairly uniform treatment conditions (T = 60 ° C, incubation time equal to 60 minutes, pH ad-justed according to the enzyme at study) and the presence of lignin, which pre-vented the enzymes from accessing the inner layers of the fibers. Tests at differ-ent temperature, incubation time and pH are required to make sure that the en-zymes fail to make a positive contribution in terms of the physical resistance

Prebióticos são aditivos alimentares não digeríveis que afetam beneficamente a saúde do hospedeiro pela estimulação seletiva do crescimento ou da atividade de um número limitado de bactérias probióticas. Apesar do avanço científico observado nesta área, poucos estudos têm sido reportados no que diz respeito à utilização de derivados de parede celular de levedura como prebióticos. Sendo assim, o presente estudo visou avaliar diferentes condições de crescimento e produção de enzimas extracelulares pela cepa Bacillus licheniformis E-44, com o objetivo de se obter um extrato enzimático para promover a hidrólise da parede celular de Saccharomyces cerevisiae gerando derivados que apresentam propriedades prebióticas. Os cultivos foram realizados em reator de bancada e em frascos Erlenmeyer sob diferentes condições de pH, composição de meio, fonte de carbono, agitação e aeração, sendo as amostras retiradas periodicamente para determinação do crescimento celular por turbidimetria e quantificação das respectivas enzimas (protease, ? -1,3-glucanase e ? -mananase). Os resultados demostraram que Bacillus licheniformis E-44 apresentou melhor desempenho, no que se refere ao crescimento celular, na presença de caseína como fonte de carbono, pH 8,0-8,5, agitação de 200 rpm e relação volume de frasco/volume de meio de 1:10. Por outro lado, no tocante à síntese das respectivas enzimas, essa não foi detectada nas condições avaliadas.
Prebiotics are described as \"non-digestible food additives that beneficially affect the host health by selectively stimulating the growth and/or activity of some probiotic species\". In despite of the scientific developments observed in this area, few studies are found concerning the utilization of yeast cell wall compounds as prebiotics. Therefore, the present study aimed to evaluate different conditions of growth and extracellular enzyme production by Bacillus licheniformis E-44 with the goal of obtaining an enzymatic extract to promote the hydrolysis of the cell wall of Saccharomyces cerevisiae generating compounds which present some prebiotic properties. The growth was carried out in lab scale bioreactors and in Erlenmeyer flasks under different conditions of the pH, medium composition, carbon sources, agitation and aeration. The samples were withdraw periodically for determination of cellular growth by turbidimetry and quantification of protease, ? -1,3-glucanase and ? -mannanase activities. The results showed that Bacillus licheniformis E-44 presented the best performance concerning to cellular growth when this strain was cultivated in a medium containing casein as carbon source, pH 8,0-8,5, 200 rpm of agitation rate and flask/medium bulk relation of 1:10. On the other hand, regarding the synthesis of those enzymes, there was not detected any activities in the conditions evaluated.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
The traditional use of antibiotics in aquaculture as growth promoters has been limited due to the negative effects caused by these drugs. As an alternative to the use of these drugs has been sought manipulation of the microbiota of the gastrointestinal tract of aquatic animals through the use of oligosaccharides and dietary fibers with prebiotic potential. Thus, this study aimed to apply different methodologies to obtain Dietary Fiber Concentrates (DFC) = mucilage (MG); pectin (PN) and β-glucan + manan (βG + M) and evaluate the prebiotic potential of these supplements in the diet of juvenile jundiá (Rhamdia quelen). The determination of the nutritional composition of the ingredients revealed that the predominant component in all DFCs were dietary fiber and insoluble fiber. The DFC that had higher extraction yield was βG + M (19.81 ± 8.54%), followed by pectin (14.54% ± 2.72), and mucilage (7.18 ± 1.54%). The composition of mucilage and pectin had a greater diversity of monosaccharides, since the βG+M consisted primarily of mannose (74.5%) and glucose (24.3%). The supplementation of DFC in jundiás diet was assessed for eight weeks through study of growth, body nutrient deposition, digestive enzymes, biochemical and metabolic parameters, responses to stress and immune and intestinal morphology. The jundiás supplemented with DFCs achieved higher growth than the control group and similar to animals supplemented with 5 g kg-1 commercial prebiotic (CP 5). Most somatic parameters and whole fish proximate composition were influenced by supplementation of DFCs. The supplementation of pectin promoted lower activity of digestive enzymes in relation the control group. The animals supplemented with DFC obtained positive changes in biochemical parameters. Furthermore, jundiás showed no response to application of the stressor, maintaining basal cortisol levels. The fish supplemented with DFCs had higher hepatic glycogen stores in relation the control group. Moreover, supplementation with DFCs increased the height of intestinal villi of jundiá. However, these values were lower for the animals of the group PC 5. For thickness of the epithelium this variable was higher in the control group compared to animals supplemented with β-glucan+Manana.
O uso tradicional de antibióticos na aquicultura como promotores de crescimento tem sido limitado em função dos efeitos negativos promovidos por estes medicamentos. Como alternativa ao uso destas drogas, tem se buscado a manipulação da microbiota do trato gastrointestinal dos animais aquáticos através da utilização de oligossacarídeos e de fibras alimentares com potencial prebiótico. Neste sentido, este estudo teve como objetivo aplicar metodologias para obtenção de diferentes Concentrados de Fibras Alimentares (CFAs) = Mucilagem (MG); Pectina (PN) e β-Glicana+Mananas (βG+M) e avaliar o potencial prebiótico destes suplementos na dieta de juvenis de jundiá (Rhamdia quelen). A determinação da composição nutricional dos ingredientes revelou que os componentes predominantes em todos os CFAs obtidos foram fibra alimentar total e fibra insolúvel. O CFA que apresentou maior rentabilidade de extração foi a βG+M (19,81%±8,54), seguida da Pectina (14,54%±2,72) e Mucilagem (7,18%±1,54). A composição da Mucilagem e Pectina obtiveram maior diversidade de monossacarídeos, já a βG+M consistiu basicamente de manose (74,5%) e glicose (24,3%). A suplementação dos CFAs na dieta de jundiás foi avaliada durante oito semanas, através de estudo de crescimento, deposição corporal de nutrientes, enzimas digestivas, parâmetros bioquímicos e metabólicos, resposta ao estresse e imunológica e morfometria intestinal. Os jundiás suplementados com os CFAs obtiveram crescimento superior em relação ao grupo controle e similar aos animais suplementados com 5 g kg-1 de prebiótico comercial (PC 5). A maioria dos parâmetros somáticos e de composição centesimal de peixe inteiro foram influenciados pela suplementação dos CFAs. A suplementação de Pectina promoveu menor atividade das enzimas digestivas em relação ao grupo controle. Os animais suplementados com os CFAs obtiveram alterações positivas nos parâmetros bioquímicos avaliados. Além disso, os jundiás não mostraram resposta à aplicação do agente estressor, mantendo os níveis de cortisol basal. Os peixes suplementados com os CFAs obtiveram maiores estoques de glicogênio hepático em relação ao grupo controle. Além do mais, a suplementação com os CFAs promoveu aumento na altura de vilos intestinais dos jundiás. Porém, estes valores foram menores em relação aos animais do grupo PC 5. Para espessura do epitélio (EE) esta variável foi maior no grupo Controle comparado aos animais suplementados com β- glicana + Manana.

Doutoramento em Química
The use of plants with medicinal purposes is an ancient practice still very common in developing regions, and is rapidly spreading in industrialized countries. This fact is evidenced by the large number of ethnobotanical studies found in the literature referring that these plants are often used as decoctions and infusions. In most studies the reported biological activities are attributed to the presence of phenolic compounds, due to their antioxidant properties, and to polysaccharides, with its anti-tumoral properties. In “Trás-os-Montes” region, some of the most popular infusions used by the popular medicine are prepared with the dried leaves of Fraxinus angustifolia, the dried shoots of Mentha suaveolens, and the dried inflorescences of Pterospartum tridentatum. However, there are no studies about the polysaccharides present in these infusions. Thus, through the structural characterization of the polysaccharides present in the infusions of F. angustifolia, M. suaveolens, and P. tridentatum, the present PhD thesis intends to evaluate the possible relation between polysaccharides and the immunostimulatory activity that these infusions might present. In a preliminary phase, infusions of F. angustifolia were prepared according to the popular tradition, and it was observed that the obtained water soluble material contained approximately 85% of material non-retained in C18 cartridges, with hydrophilic characteristics, with the remaining 15% comprising retained-material with hydrophobic characteristics. It was also shown that the infusions only contained between 2 and 4% of high molecular weight material (HMWM), which comprised approximately 30% of carbohydrate material. Sugar and methylation analysis of the HMWM suggested the presence of pectic polysaccharides, together with type II arabinogalactans, mannans, and xyloglucans. However, the amount of material obtained is to low for the fractionation, and structural analysis of the polysaccharides present. The 4 h decoction, divided in two periods of 2 h, with water renewal, allowed to increase the HMWM yield, relatively to the infusions traditional infusions. It was also observed that the decoction also allowed to increase the HMWM proportion of carbohydrate material, due to an increase in the proportion of uronic acid present, although the neutral sugar residues seemed to be detected in similar proportions. Therefore, in all the experiments subsequently performed, the HMWM used was obtained through the decoction of F. angustifolia dried leaves, M. suaveolens dried shoots, and P. tridentatum dried inflorescences. x After the fractionation, through ethanol precipitation, and anion exchange chromatography, of the polysaccharides from the HMWM obtained by the decoction of the vegetable material of the distinct studied plants, it was observed the presence of high proportions of pectic polysaccharides, containing type I arabinogalactans, together with minor proportions of type II arabinogalactans, mannans, and xyloglucans. The presence of pectic polysaccharides in the extracts from F. angustifolia was also evidenced through endo-polygalacturonase treatment, and ESI-MS and ESI-MS/MS experiments. The detection of linked pentose and uronic acid residues, also seemed to suggest the presence of xylogalacturonan domains in the pectic polysaccharides from F. angustifolia. The extracts from F. angustifolia dried leaves also contained type II arabinogalactans that exhibited a higher structural diversity than those detected in the M. suaveolens, and P. tridentatum extracts, particularly in the substitution degree of the galactan backbone, and in the extension of the (1→5)-Araf side chains. Moreover, for all the plants studied, it was also observed that the type II arabinogalactans, extracted during the 2nd 2h of the extraction process, exhibited a substitution degree of the galactan backbone higher than those extracted during the 1st 2h. The extracts from P. tridentatum dried inflorescences contained higher proportions of mannans, and also of xyloglucans, both presenting a substitution degree higher than those, which were detected in lower proportion in the extracts of F. angustifolia and M. suaveolens. Through ESI-MS and ESI-MS/MS it was possible to evidence that the mannans present in the extracts of P. tridentatum presented acetyl groups on the O-2 of the mannosyl residues. It was also evidenced that the P. tridentatum mannans were more extensively acetylated than the mannans detected in the coffee infusion, LBG, and other non-conventional mannan sources. Moreover, it was detected the presence of oligosaccharides comprising hexose residues linked to non acetylated pentose residues, suggesting the possible presence of arabinose residues in the mannans from P. tridentatum extracts. The immunostimulatory activity of three fractions isolated from the extracts of F. angustifolia, M. suaveolens, and P. tridentatum, was tested and an increase in the NO production by macrophages, without compromising their cellular viability, was observed. The type I, and type II arabinogalactans detected in the extracts from F. angustifolia, and M. suaveolens seem to have contributed for the observed immunostimulatory activity. For the fraction from P. tridentatum, the mannans acetylation, and the presence of type I, and type II arabinogalactans seemed to contribute for the macrophage immunostimulatory activity observed. The possible presence of storage xyloglucans from the inflorescences seeds, also seems to have contributed for the immunostimulatory activity registered when the macrophages were stimulated with higher extract concentrations. The results obtained allow to conclude that the extracts of F. angustifolia dried leaves, M. suaveolens dried shoots, and P. tridentatum dried inflorescences contained high proportions of pectic polysaccharides, exhibiting type I arabinogalactans, together with other polysaccharides, such as type II arabinogalactans, mannans, and xyloglucans. This polysaccharide mixture seems to have contributed to the immunostimulatory activity of fractions isolated from the extracts of the studied plants. Therefore, as the same type of polysaccharides seem to be present in the decoctions and in the infusions, it seems possible that the polysaccharides might contribute for the therapeutic properties frequently associated by the popular tradition to the infusions of these plants.
O uso de plantas com fins medicinais é uma prática antiga, ainda bastante frequente em regiões de países em desenvolvimento, e que se tem vindo a disseminar em países mais industrializados. Este facto é suportado pelo elevado número de estudos etnobotânicos, onde se refere que estas plantas são frequentemente usadas na forma de decocções e infusões. Na maioria dos estudos as atividades biológicas são associadas à presença de compostos fenólicos e às suas propriedades antioxidantes, assim como aos polissacarídeos, nomeadamente devido às propriedades antitumorais. Na região de Trás-os-Montes, algumas das infusões mais utilizadas pela medicina popular têm por base as folhas secas do freixo (Fraxinus angustifolia), a parte aérea seca do mondrasto (Mentha suaveolens) e as inflorescências secas da carqueja (Pterospartum tridentatum). No entanto, não existe nenhum estudo sobre os polissacarídeos presentes nas infusões das folhas secas do freixo (Fraxinus angustifolia), da parte aérea do mondrasto (Mentha suaveolens) ou das inflorescências da carqueja (Pterospartum tridentatum). Deste modo, com a presente dissertação pretende-se, através da caracterização estrutural dos polissacarídeos presentes nas infusões de F. angustifolia, M. suaveolens e P. tridentatum, avaliar a possível relação entre os polissacarídeos e a atividade imunoestimuladora que estas infusões possam apresentar. Numa primeira fase, foram preparadas infusões tradicionais de F. angustifolia, tendo-se mostrado que o material solúvel das infusões continha cerca de 85% de material não retido em cartuchos C18 com características hidrofílicas, sendo os restantes 15% compostos por material retido de características hidrofóbicas. Mostrou-se ainda que as infusões obtidas apenas continham cerca de 2 a 4% de material de alto peso molecular (HMWM), que era composto por cerca de 30% de carboidratos. A análise de açúcares e a análise de metilação do HMWM sugeriu a presença de polissacarídeos pécticos, em conjunto com arabinogalactanas do tipo II, mananas e xiloglucanas. No entanto, a quantidade de material obtido é muito baixa para o fracionamento e a análise estrutural dos polissacarídeos presentes. A decocção de 4 h, divididas em 2 períodos de 2 h, com renovação da água, permitiu um aumento no rendimento em HMWM, relativamente às infusões tradicionais. Verificou-se ainda, que a decocção também permitiu aumentar a proporção de carboidratos no HMWM, particularmente devido ao aumento da proporção de ácido urónico presente, embora os resíduos de açúcares neutros se encontrassem em proporção semelhante. Deste modo, em todas as experiências realizadas posteriormente, o HMWM utilizado foi obtido através da decocção das folhas secas de F. angustifolia, da parte aérea seca de M. suaveolens e das inflorescências secas de P. tridentatum. Após fracionamento por precipitação em etanol e cromatografia de troca aniónica dos polissacarídeos presentes no HMWM obtido através da decocção dos materiais vegetais das diferentes plantas estudadas, verificou-se a presença de elevadas proporções de polissacarídeos pécticos, contendo arabinogalactanas do tipo I, em conjunto com menores proporções de arabinogalactanas do tipo II, mananas e xiloglucanas. A presença de polissacarídeos pécticos nos extratos de F. angustifolia foi também evidenciada através do tratamento enzimático com endopoligalacturonase e de experiências de ESI-MS e ESI-MS/MS. A deteção de resíduos de pentose ligados a resíduos de ácido urónico também pareceu indicar a presença de domínios de xilogalacturonana nos polissacarídeos pécticos de F. angustifolia. Os extratos das folhas secas de F. angustifolia mostraram conter arabinogalactanas do tipo II com uma maior diversidade estrutural do que as que foram detetadas nos extratos de M. suaveolens e P. tridentatum, particularmente no que diz respeito à substituição das cadeias de (1→3)-Galp e à extensão das cadeias laterais compostas por resíduos de (1→5)-Araf. Para além disso, verificou-se que, para todas as plantas estudadas, as arabinogalactanas do tipo II presentes nas frações obtidas durante a segunda parte do processo de extração apresentaram uma substituição das cadeias de (1→3)-Galp maior do que as extraídas durante a primeira parte da extração. Os extratos das inflorescências de P. tridentatum continham maiores proporções de mananas e de xiloglucanas, tendo-se detetado estruturas que apresentaram um maior grau de substituição do que as que foram detetadas em menores proporções nos extratos de F. angustifolia e M. suaveolens. Através das técnicas de ESI-MS e ESI-MS/MS, foi possível demonstrar que as mananas presentes nos extratos de P. tridentatum se encontravam acetiladas no O-2 dos resíduos de manose. Verificou-se que as mananas presentes nos extratos de P. tridentatum se encontravam acetiladas em maior extensão do que as mananas detetadas na infusão do café, na goma de alfarroba e em outras fontes não convencionais de mananas. Para além disso, também foram detetados oligossacarídeos contendo resíduos de pentose, ligados a resíduos de hexose, sugerindo a presença de resíduos de arabinose na estrutura das mananas de P. tridentatum. A atividade imunoestimuladora de três frações isoladas a partir dos extratos de F. angustifolia, M. suaveolens e P. tridentatum foi avaliada, tendo-se observado o aumento da produção de NO por parte de macrófagos, sem comprometer a sua viabilidade celular. As arabinogalactanas do tipo I e II parecem contribuir para a atividade imunoestimuladora observada nas frações dos extratos de F. angustifolia e de M. suaveolens No caso da fração obtida a partir dos extratos de P. tridentatum, a acetilação das mananas, bem como a presença de arabinogalactanas do tipo I e II parecem ter contribuído para a atividade imunoestimuladora dos macrófagos observada. A possível presença de xiloglucanas de armazenamento, provenientes das sementes das inflorescências de P. tridentatum, também poderá contribuir para a atividade imunoestimuladora observada quando os macrófagos foram estimulados com maiores concentrações de extrato. Os resultados obtidos permitem concluir que os extratos das folhas secas de F. angustifolia, da parte aérea de M. suaveolens e das inflorescências de P. tridentatum contêm elevadas proporções de polissacarídeos pécticos, contendo arabinogalactanas do tipo I, misturados com outros polissacarídeos, tais como arabinogalactanas do tipo II, mananas e xiloglucanas. Esta mistura de polissacarídeos mostrou contribuir para a atividade imunoestimuladora de frações isoladas a partir dos extratos das plantas estudadas. Deste modo, e como o mesmo tipo de polissacarídeos parece estar presente nas infusões e decoções, é possível que os polissacarídeos possam contribuir para as propriedades terapêuticas frequentemente atribuídas pela tradição popular às infusões destas plantas.

La problématique centrale de ce travail repose sur l'étude de la construction de nouvelles figures mythiques dans le cinéma espagnol de l'après-franquisme (1975-1995). Pendant la période de la transition (1975-1983), plusieurs nouvelles images se révèlent sur le corps féminin, le corps homosexuel, et le corps délinquant. Etudier l'introduction des nouvelles images-pensées de ces corps, permet de cerner un processus de construction. La démarche adoptéé comprend d'abord une définition des nouveaux mythes en tant que nouveaux systèmes de croyances exprimés par de nouvelles images-pensées sur le corps : à un niveau latent, le corps fait référence à un archétype, à un niveau manifeste le corps s'articule et s'actualise par une image-pensée en symbolisant à la fois des corps stéréotypes, prototypes, clichés. .
This thesis presents the process of constructing new mythological figures in Spanish cinema after Francoisme (1975-1995). During the transition period (1975-1983) various new images emerged in Spanish film concerning the female body, homosexual body and delinquent body. It is by analysing the appearance of the new thought-images of these bodies that we can understand the process of constructing new myths in Spanish cinema. The discussion begins with the definition of myths as systems of beliefs expressed by new thought-images of the body. Then, it is shown how the body can be referred to different kinds of archetypes (femme fatale, mother figure, male heroism, etc. ). Finally, it is demonstrated how the body expressed these archetypes through its thought-images in a contemporary language symbolising possibly stereotypes, prototypes and clichés. .

Recent molecular evidence suggests staurozoans are medusozoans that diverged from Medusozoa before the medusa stage emerged. Morphological studies are needed to determine whether this framework can provide insight into medusa evolution. I studied the neuromuscular morphology of two staurozoans, Haliclystus ‘sanjuanensis’ and Manania handi using FMRFamide and α-tubulin antibodies to label neurons, and phalloidin to label muscles. Results indicate that similar to polyps, staurozoans possess one regionally differentiated FMRFamide and α-tubulin immunoreactive (IR) nerve net, and smooth muscles only. Comparisons with other cnidarians indicate that ancestral medusozoans had a marginal circular muscle and muscular manubrium, but lacked the parallel conducting nerve nets, striated muscle, and pacemaker required to coordinate medusa swimming. A possibly light-sensitive concentration of neurons at the base of the primary tentacles suggests that staurozoan primary tentacles are homologous to medusozoan rhopalia. The unique neuromusculature of nematocyst clusters suggests a defensive or predatory function for these staurozoan synapomorphies.
Graduate
0287
0317

PhD (Xitsonga)
MER Mathivha Centre for African Languages, Arts and Culture
Ku va tiko ra Afrika-Dzonga ri simekile mfumo wa xidemokirasi hi 1994 swi vile mhaka yo saseka na ku va ndzhuti wa Vantima wu vuyiseriwa evutshan’wini bya wona. Mfumo wa xidimokirasi wu katsa na timhaka ta ndzingano wa tindzimi. Ndzavisiso lowu wu kanerile timfanelo ta tindzimi ni matimba ya tindzimi tin’wana hi ku langutisa ndhawu ya Xitsonga exikarhi ka tindziminyingi ta Afrika-Dzonga. Ndzavisiso lowu wu tirhisile maendlelo ya nongonoko wa swivutiso ku hlengeleta mahungu ya nkoka. Lawa i maendlelo ya swivutiso yo tsala kunene. Hi maendlelo lawa machudeni yo ringana makumembirhi lawa ya endlaka lembe ro hetelela ra Xitsonga na lama endlaka masitasi ya Xitsonga eyunivhesiti yin’we eAfrika-Dzonga va nyikiwile maphepha ya swivutiso kutani va hlamula hi ku tsala. Mulavisisi u kotile ku kuma mahungu eka machudeni mayelana na mavonelo ya vona ya ndhawu ya Xitsonga exikarhi ka tindziminyingi ta Afrika-Dzonga. Eka ndzavisiso lowu maendlelo ya nkoka na wona ma tirhisiwile. Wonaya tirhisiwile ku kombisa mavonelo ya vatekaxiave hi ku ya tlhantlha na ku ya hlamusela hi ku enta.Maendlelo ya nxopaxopo wa switsariwa ya tirhisiwile. Hi maendlelo lawa mulavisisi u anamisile miehleketo ya yena hi ku hlaya tibuku, tipholisi na milawu leyi khumbaka timhaka ta ririmi. Ndzavisiso lowu wu tirhisile thiyori ya ‘the universality and relativity of human rights, leyi yi boxaka leswaku timfanelo ta munhu hi leti munhu a nga na tona hikuva munhu i munhu. Hi ku kongomisa, timfanelo ta munhu i masungusungu ya vumunhu. Ndzavisiso lowu i wa nkoka hikuva wu ta endla leswaku vavulavuri va tindzimi leti nga na matimba lamatsongo va tiva timfanelo ta vona.Tlhandlakambirhi, vavulavuri va tindzimi leti nga na matimba lamatsongo na vona va ta titwa leswaku ririmi ra vona i ra nkoka exikarhi ka tiko ra tindziminyingi. Hi nga dlayiseta hi ku vula leswaku vavulavuri va Xitsonga hi ku kongomisa eka ndzavisiso lowu, va ta kota ku swi vona leswaku na vona va na lunghelo mayelana na vukorhokeri na nhluvukiso wa ririmi ra vona.
NRF

Summaries in English, Xitsonga and Afrikaans
Reading literacy for many black South African learners is a problem. In order to understand what happens in the South African foundation phase classrooms that affect learners’ reading performance, this study uses the adapted early grade reading assessment (EGRA) tool to assess Grade 1 learners’ reading abilities in the home language (four schools) and in the first additional language (one school). The EGRA is important for measuring foundational literacy skills. Its outcomes help teachers plan instruction that accommodates diverse learning capabilities. Data were collected through observing literacy practices and activities in the Grade 1 classrooms, evaluate classroom settings and interview Grade 1 teachers and curriculum advisors of the general education and training band to understand their perception of Curriculum and Assessment Policy Statement (CAPS). The main findings revealed that the Grade 1 learners are acquiring foundational reading skills in Xitsonga very slowly during the first year of schooling and on all measures, performance was either low or very low. The teachers’ lack of deep understanding of how early reading develops and how each of the reading activities contributes to different aspects of this development may have contributed to the learners’ reading outcomes. Findings further revealed that the ability to read fluently and with comprehension is determined by hierarchical relationships between various reading skills. Thus, knowledge of letter-sounds facilitates word reading which impacts reading fluency and then reading comprehension – all these skills are important for reading development during early learning only if they are taught well in the classroom.
Ku hlaya ni ku tsala swi tikela vadyondzi vo tala laha Afrika Dzonga. Eka ndzavisiso lowu, ku va hi ta kota ku twisisa leswi swi humelelaka mayelana na matirhelo yo hlaya ya vadyondzi va ntangha R-3, hi kambela vuswikoti lebyi vadyondzi va ntlawa wo sungula (Giredi 1) va nga na byona byo hlaya hi ririmi ra manana (mune wa swikolo) na hi ririmi leri ri nga le eka xiyimo xa masungulo (xikolo xin’we) hi ku tirhisa xikambelwana lexi xi vuriwaka early grade reading assessment (EGRA). Xikambelwana lexi (EGRA) xi ni nkoka lowu kulu mayelana ni ku kambela vuswikoti bya n’wana byo hlaya. Mbuyelo wa xikambelo lexi wu pfuna ngopfu mayelana na leswaku vadyondzisi va kota ku kunguhata madyindziselo lama ya angarhelaka vadyondzi hinkwavo. Ndzavisiso lowu wu humelerisiwile hi ku kambela madyondziselo yo hlaya ni ku tsala eka ntlawa wo sungula (Giredi 1), ku kambela xivumbeko xa kamara ro dyondzela eka rona, ni ku kambela vutivi bya kharikhulamu bya vadyondzisi va ntlawa wo sungula na vaseketeri va vona (curriculum advisors). Mbuyelonkulu wu humesele erivaleni leswaku vadyondzi va kuma ntokoto wo hlaya hi Xitsonga hi ku nonoka va ha ri eka lembe ra vona ro sungula xikolo. Leswi swi thlela swi nyanyisa na hi leswaku mbuyelo wa vona wo hlaya eka swiyenge hinkwaswo swa xikambelo lexi xi nga tirhisiwa ku va kambela a wu ri ehansi ngopfu. Eka ndzavisiso lowu, ku pfumala ka vadyondzisi vutivi hi vuenti bya ku dyondzisa vana eku hlaya swi nga va swi vile na xiave eka mbuyelo wa vadyondzi wo hlaya. Vulavisisi lebyi byi thlela byi humesela erivaleni leswaku vuswikoti byo hlaya hi ku twisisa swi koteka ntsena loko mudyonzi a ri ni ntokoto eka swiyenge hinkwaswo swa ku hlaya hikuva swi na vuxaka. Hikokwalaho, vuswikoti byo hlaya mimpfumawulo ya maletere swi pfuneta ku hlaya marito lawa ya thlelaka ya pfuneta ku hlaya hi nkhuluko ni ku twisisa leswi swi hlayiwaka. Vuswikoti lebyi hinkwabyo byi ni nkoka mayelana ni ku dyondza ku hlaya ntsena loko madyondziselo yo hlaya ya landzelerisa leswi kunguhatiweke eka kharikhulamu.
Leesgeletterdheid vir baie swart Suid-Afrikaanse leerders is ‘n probleem. Om te verstaan wat in die Suid-Afrikaanse grondslagfase-klaskamers gebeur wat die leesprestasie van leerders beïnvloed, word in die studie die aangepaste instrument vir vroeë graad leesassessering (EGRA) gebruik om die leesvermoëns van Graad 1-leerders in die huistaal (vier skole) en in die eerste addisionele taal (een skool). Die EGRA is belangrik vir die meting van fundamentele geletterdheidsvaardighede. Die uitkomste daarvan help onderwysers om onderrig te beplan wat voldoen aan verskillende leervermoëns. Data is versamel deur die waarneming van geletterdheidspraktyke en aktiwiteite in die Graad 1-klaskamers, die klaskamerinstellings te evalueer en onderhoude met Graad 1-onderwysers en kurrikulumadviseurs van die algemene onderwys- en opleidingsband te onderneem om hul persepsie van Curriculum and Assessment Policy Statement (CAPS) te verstaan. Die belangrikste bevindings het getoon dat die graad 1-leerders in die eerste jaar van skool baie stadig basiese leesvaardighede in Xitsonga verwerf, en dat prestasies op alle maatstawwe laag of baie laag was. Die onderwysers se gebrek aan diep begrip van hoe vroeë lees ontwikkel en hoe elkeen van die leesaktiwiteite bydra tot verskillende aspekte van hierdie ontwikkeling, het moontlik tot die leerders se leesuitkomste bygedra. Bevindinge het verder aan die lig gebring dat die vermoë om vlot en met begrip te lees, bepaal word deur hiërargiese verwantskappe tussen verskillende leesvaardighede. Kennis van letterklanke vergemaklik dus die lees van woorde wat die vloeiendheid van lees en dan leesbegrip beïnvloed - al hierdie vaardighede is slegs belangrik vir leesontwikkeling tydens vroeë leer as dit goed in die klaskamer geleer word.
Linguistics and Modern Languages
Ph. D. (Languages, Linguistics and Literature)