Academic literature on the topic 'Mesures érythrocytaires'

Les concentrations moyennes de glutathion érythrocytaire chez les bovins zébus Wadara nigérians (n = 32) étaient de 43,9 ± 11,7 mg/dl de globules rouges ou 1,96 ± 0,57 mg/gHb. Les valeurs du glutathion érythrocytaire exprimées dans ces deux mesures ont montré une corrélation (r = 0,85) l'une envers l'autre. L'hématocrite et les concentrations d'hémoglobine sont corrélés (r = 0,59, 0,52) avec les valeurs du glutathion érythrocytaire. La répartition des fréquences a montré que 37,5 % et 90.6 % des valeurs étaient respectivement inférieures aux 40 et 60 mg/dl de globules rouges. La concentration moyenne de l'acide ascorbique du plasma était de 0,7 ± 0,2 mg/dl. De faibles corrélations non significatives (r = -0,01, -0,36) ont été observées entre les concentrations du glutathion érythrocytaire et de l'acide ascorbique du plasma. En conséquence, les valeurs du glutathion érythrocytaire étaient affectées de façon significative par celles de l'hématocrite et de l'hémoglobine, mais pas par celles de l'acide ascorbique du plasma.

L'infection chronique à Trypanosoma brucei gambiense chez le lapin engendre une anémie légère initialement macrocytique et normochrome mais qui évolue, ultérieurement, vers une forme microcytique et hypochrome. Une anisocytose moyenne et une poïkilocytose sont apparues dès le 14e jour après l'infection (p.i.). Les cellules rouges à noyau - normales chez le lapin -, que l'on pouvait observer avant l'infection, ont vu leur nombre diminuer au fur et à mesure que la maladie progressait. Ont également été observées : une leucocytose à neutrophiles et éosinophiles, une monocytose et une lymphopénie en phase terminale. Le changement essentiel dans la morphologie des lymphocytes était la présence de lymphocytes atypiques liée à des niveaux accrus de jeunes neutrophiles dans la circulation périphérique. En conclusion, les changements majeurs des lignées érythrocytaire et leucocytaire, lors de l'infection expérimentale à T. b. gambiense chez le lapin, sont ceux d'une anémie légère devenant, en phase terminale, microcytique et hypochrome, et une leucocytose transitoire due à une neutrophilie et à une monocytose

Le comportement de la membrane de l'hématie et en particulier la mesure de sa résistance osmotique présente un intérêt diagnostique pour le clinicien. De nombreuses pathologies hémolytiques influencent considérablement cette résistance (maladies hémolytiques auto-immunes, sphérocytose héréditaire,). Quelques appareils commercialisés permettent d'étudier les propriétés rhéologiques de la membrane, mais aucun ne réalise spécifiquement la mesure de la résistance des membranes jusqu'à leur rupture. Actuellement seule la technique manuelle proposée par DACIE est utilisée en routine par les laboratoires d'analyses médicales. Dans ce travail, il est développé un appareil (fragilimètre) destiné à la mesure de la résistance des membranes à l'hémolyse provoquée. Le principe consiste à faire évoluer progressivement la force ionique, de 0,154 M à environ 0,025 M d'une suspension d'hématies diluées dans une solution tampon. La variation de pression osmotique engendrée au niveau de la cellule provoque l'ouverture de pores par lesquels s'échappe l'hémoglobine. La mesure en temps réel de l'intensité de transmission lumineuse traversant une solution de sang total diluée renseigne sur le phénomène. Les résultats obtenus renseignent directement sur la résistance de la membrane qui est considérée optiquement comme une particule diffusante. La détermination de la transmission initiale, à 50% et totale permet d'apprécier les caractéristiques de l'hémolyse. Les études ont porté principalement sur l'analyse d'échantillons de sang témoins frais à 37°C et incubé 24 h à 37°C. Les résultats des valeurs obtenues sur ces 2 populations permettent au système de les distinguer aisément. L'expérience, entièrement automatisée, est réalisée en moins de 20 min.

La mesure des propriétés mécaniques des membranes entourant les cellules vivantes pourraient révéler/refléter leur état physiologique, leur état pathologique ou l’influence d'un agent externe tel qu'un médicament ou un virus, ou encore la réponse à une stimulation ou à un protocole thérapeutique. Les principales techniques de mesure de ces propriétés présentent de nombreuses limitations notamment en termes de qualité, de fiabilité, de la rapidité de la mesure et du nombre d’acquisitions. Cette thèse est centrée sur l’utilisation du Mode Circulaire de Microscopie à Force Atomique ou MC-AFM en milieu liquide pour des applications dans le domaine de la Santé. Ce mode est obtenu en modifiant l’électronique d’un AFM pour générer un contact en glissement en mouvement relatif circulaire. Couplé au mode spectroscopie de force AFM (i.e l’application d’un mouvement vertical à la pointe), le MC-AFM permet d’accéder en une seule procédure de mesure réalisée en régime stationnaire (déplacement continu à vitesse constante), à de nombreuses propriétés mécaniques de la membrane biologique, dont certaines sont inaccessibles par les procédures AFM conventionnelles.L’objectif principal de ce travail de doctorat est d’élaborer une série de protocoles et d’adapter le MC-AFM pour mesurer les propriétés mécaniques d’objets biologiques complexes. Une fois les protocoles validés à partir de globules rouges du sang, leurs intérêts pour des applications dans le domaine du Vivant sont démontrés à partir de (1) l’étude de l’influence de protocoles nutritionnels originaux à base de micro-algue sur les propriétés mécaniques des membranes de globules rouges pour et (2) l’étude de l’effet d’un traitement à base de phytostérols sur les cellules cancéreuses du sein. Ces protocoles s’avèrent également utiles pour mieux comprendre les mécanismes physiologiques impliqués, ou/et le rôle des molécules constituants la membrane sur l’évolution des propriétés mécaniques<br>Measurement of the mechanical properties of the membranes surrounding living cells could reveal/reflect their physiological state, pathological condition, or the influence of an external agent such as a drug or virus, or also, the response to stimulation or a therapeutic protocol. The main techniques for measuring these properties have many limitations, particularly in terms of quality, reliability, speed of measurement and number of acquisitions. This thesis focuses on the use of the Circular Mode Atomic Force Microscopy or CM-AFM in liquid media for applications in the field of Health. This mode is obtained by modifying the electronics of an AFM to generate a sliding contact in a circular relative motion. Coupled with the AFM force spectroscopy mode (i.e. the application of a vertical movement to the tip), the MC-AFM allows access, in a single measurement procedure and performed under steady state conditions (continuous displacement at constant speed), to numerous mechanical properties of the biological membrane, some of which are inaccessible by conventional AFM procedures.The main objective of this PhD project is to develop a series of protocols and adapt the MC-AFM to measure the mechanical properties of complex biological objects. Once the protocols have been validated using red blood cells, their interest for applications in the field of Life science is demonstrated by (1) studying the influence of original microalgae-based nutritional protocols on the mechanical properties of red blood cell membranes and (2) for studying the effect of a phytosterol-based treatment on breast cancer cells. These protocols are also useful to better understand the physiological mechanisms involved, and/or the role of the molecules constituting the membrane on the evolution of mechanical properties

Les études d’association pan-génomiques ont révélé plusieurs variants génétiques associés à des traits complexes. Les mesures érythrocytaires ont souvent fait l’objet de ce genre d’études, étant mesurées de façon routinière et précise. Comprendre comment les variations génétiques influencent ces phénotypes est primordial étant donné leur importance comme marqueurs cliniques et leur influence sur la sévérité de plusieurs maladies. En particulier, des niveaux élevés d’hémoglobine fœtal chez les patients atteints d’anémie falciforme est associé à une réduction des complications et une augmentation de l’espérance de vie. Néanmoins, la majorité des variants génétiques identifiés par ces études tombent à l’intérieur de régions génétiques non-codantes, augmentant la difficulté d’identifier des gènes causaux. L’objectif premier de ce projet est l’identification et la caractérisation de gènes influençant les traits complexes, et tout particulièrement les traits sanguins. Pour y arriver, j’ai tout d’abord développé une méthode permettant d’identifier et de tester l’effet de gènes knockouts sur les traits anthropométriques. Malgré un échantillon de grande taille, cette approche n’a révélé aucune association. Ensuite, j’ai caractérisé le méthylome et le transcriptome d’érythroblastes différentiés à partir de cellules souches hématopoïétiques et identifié plusieurs gènes potentiellement impliqués dans les programmes érythroïdes fœtaux et adultes. Par ailleurs, j’ai identifié plusieurs micro-ARNs montrant des motifs d’expression spécifiques entre les stages fœtaux et adultes et qui sont enrichis pour des cibles exprimées de façon opposée. Finalement, j’ai identifié plusieurs variants génétiques associés à l’expression de gènes dans les érythroblastes (eQTL). Cette étude a permis d’identifier des variants associés à l’expression du gène ATP2B4, qui encode le principal transporteur de calcium des érythrocytes. Ces variants, qui sont également associés à des traits sanguins et à la susceptibilité à la malaria, tombent dans un élément d’ADN spécifique aux cellules érythroïdes. La délétion de cet élément par le système CRISPR/Cas9 induit une forte diminution de l’expression du gène et une augmentation des niveaux de calcium intracellulaires. En conclusion, des échantillons de génotypages exhaustifs seront nécessaires pour étudier l’effet de gènes knockouts sur les traits complexes. Les érythroblastes montrent de grandes différences au niveau de leur méthylome et transcriptome entre les différents stages développementaux. Ces différences influencent potentiellement la régulation de l’hémoglobine fœtale et impliquent de nombreux micro-ARNs et régions régulatrices non-codantes. Finalement, l’exemple d’ATP2B4 montre qu’intégrer des études épigénomiques, transcriptomiques et des expériences d’édition de génome est une approche puissante pour caractériser des variants génétiques non-codants. Par ailleurs, ces résultats impliquent ATP2B4 dans l’hydratation des érythroblastes, qui est associé à la susceptibilité à la malaria et la sévérité de l’anémie falciforme. Cibler ATP2B4 de façon thérapeutique pourrait avoir un impact majeur sur ces maladies qui affectent des millions d’individus à travers le monde.<br>Genome-wide association studies (GWAS) have revealed several genetic variants associated with complex phenotypes. This is the case for red blood cell (RBC) traits, which are particularly amenable to GWAS as they are routinely and accurately measured. Understanding RBC trait variation is important given their significance as clinical markers and modifiers of disease severity. Notably, increased fetal hemoglobin (HbF) production in sickle cell disease (SCD) patients is associated with a higher life expectancy and decreased morbidity. Nonetheless, most variants identified through GWAS fall in non-coding regions of the human genome, increasing the difficulty of identifying causal links. The main goal of this project was to identify and characterize genes influencing complex traits, and in particular RBC phenotypes. First, I developed an approach to identify and test potential gene knockouts affecting anthropometric traits in a large sample from the general population, which did not yield significant associations. Then, I characterized the DNA methylome and transcriptome of erythroblasts differentiated ex vivo from hematopoietic progenitor stem cells (HPSC), and identified several genes potentially implicated in fetal and adult-stage erythroid programs. I also identified microRNAs (miRNA) that show specific developmental expression patterns and that are enriched in inversely expressed targets. Finally, I mapped expression quantitative trait loci (eQTL) in erythroblasts, and identify erythroid-specific eQTLs for ATP2B4, the main calcium ATPase of RBCs. These genetic variants are associated with RBC traits and malaria susceptibly, and overlap an erythroid-specific enhancer of ATP2B4. Deletion of this regulatory element using CRISPR/Cas9 experiments in human erythroid cells minimized ATP2B4 expression and increased intracellular calcium levels. In conclusion, large and comprehensive genotyping datasets will be necessary to test the role of rare gene knockouts on complex phenotypes. The transcriptomes and DNA methylomes of erythroblasts show substantial differences correlating with their developmental stages and that may be implicated in HbF production. These results also suggest a strong implication of erythroid enhancers and miRNAs in developmental stage specificity. Finally, characterizing the erythroid-specific enhancer of ATP2B4 suggest that integrating epigenomic, transcriptomic and gene editing experiments can be a powerful approach to characterize non-coding genetic variants. These results implicate ATP2B4 in erythroid cell hydration, which is associated with malaria susceptibility and SCD severity, suggesting that therapies targeting this gene could impact diseases affecting millions of individuals worldwide.