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Dissertations / Theses on the topic 'Métalloprotéinases – Inhibiteurs'
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Le, Dour Gwennaël. "Synthèse de nouveaux inhibiteurs potentiels de métalloprotéinases matricielles (MMPs)." Reims, 2005. http://www.theses.fr/2005REIMP206.
Full textAbstract:
Les @métalloprotéinases matricielles (MMPs) sont des enzymes protéolytiques calcium et zinc dépendantes dont l'action principale est de dégrader les protéines et particulièrement celles de la matrice extracellulaire. Les MMPs jouent un rôle prépondérant dans divers processus physiologiques tels que le développement embryonnaire, la cicatrisation mais aussi pathologiques comme l'arthrite rhumatoïde et surtout le cancer. Du fait de l'intérêt grandissant pour l'inhibition des métalloprotéinases matricielles dans les thérapies anticancéreuses, le laboratoire s'est donné comme objectif de synthétiser de nouveaux inhibiteurs sélectifs. Nos recherches sont alors dirigées vers la synthèse d'analogues structuraux de l'Ilomastat®, inhibiteur puissant mais non sélectif. Trois familles de composés originaux sont développées tout en conservant leur activité et en tentant de leur conférer de meilleures sélectivité et biodisponibilité. Elles présentent des modifications structurales du squelette pseudopeptidique, pour une meilleure insertion dans les poches enzymatiques S'2, S'3, ainsi que sur le groupement fonctionnel chélatant l'ion zinc du site actif (" Zinc Binding Group "). La synthèse, l'évaluation et la sélectivité de ces différents inhibiteurs potentiels seront présentées@Matrix metalloproteinase (MMPs) are proteolytic calcium and zinc dependent enzymes. Their principal action is to degrade proteins, mainly on the extracellular matrix. MMPs play a determining role in various physiological processes such as the embryonic development, wound healing and also in pathological ones like arthritis and especially cancer. Thus, in this ongoing interest for the inhibition of MMPs in the anti-cancer therapies, the goal of our laboratory is to synthesize new selective inhibitors. Our research is then directed towards the synthesis of structural analogues of Ilomastat®, a potent but a no selective inhibitor. Three families of original compounds are developed preserving their activity and offering a better selectivity and bioavailability. They present structural modifications of backbone pseudopeptide for a best insertion in the enzymatic pocket S'2, S'3 and new ZBG (zinc binding group) functions for higher affinity. The synthesis, the evaluation and the selectivity of these various potential inhibitors will be presented
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Gogly, Bruno. "Effets des héparinoïdes sur la prolifération fibroblastique, l'expression des métalloprotéinases matricielles et de leurs inhibiteurs." Paris 5, 1997. http://www.theses.fr/1997PA05M087.
Full textAbstract:
Les héparines peuvent modifier le phénotype de fibroblaste dermique, gingivaux desmodontaux. Les polysaccharides étudiés modulent la prolifération cellulaire en fonction de leurs concentrations. Ainsi de faibles quantités d'héparine (800nM) stimulent la prolifération fibroblaste, alors que des concentrations plus élevés (supérieur à 8μM) l'inhibe. Les héparinoïdes agissent ainsi sur l'expression basale ou induite par l'interleukine 1 des métalloprotéinases matricielles sécrétées par les fibroblastes dermiques ou gingivaux. L'héparine et son fragment SR80258A inhibent, de façon dose-croissante, les sécrétions induites par la cytokine des MMP1, MMP3, TIMP1, MMP2, et du TIMP2. Les polysaccharides n'ont pas d'effets sur le niveau basal de TIMP1 et stimulent la sécrétion de la MMP2et du TIMP2 pour une concentration proche de 10μg/ml de milieu de culture. Le mode d'action des héparines pour la modulation de ces phénotypes est complexe. En effet, l'héparine agit à des niveaux très variés : liaison directes avec les constituants de la matrice extracellulaire, couplage aux membranes cellulaires, internalisation intracytoplasmique et intra-cellulaire, couplage au cytosquelette,. . . Nos futurs travaux concerneront les mécanismes de transduction qui pourraient être impliqués dans l'activité des héparines. Nos résultats démontrent que les fibroblastes gingivaux peuvent proliférer dans des conditions restrictives et que les fragments d'héparine sont capables de moduler la fonction des fibroblastes gingivaux durant la cicatrisation en influençant leur prolifération. De même les héparinoïdes, qui agissent sur la synthèse des métalloprotéases et de leurs inhibiteurs, peuvent constituer un agent pharmocologique utile pour contrôler la dégradation de la matrice qui survient lors des parodonpathies.
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Bourd-Boittin, Katia. "Rôle des métalloprotéinases matricielles (MMPs) dans l'odontologie." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05M001.
Full textAbstract:
La dégradation protéolytique des constituants de la matrice extracellulaire par les métalloprotéinases matricielles (MMPs) joue un rôle majeur dans l'odontogénèse. Après avoir identifié la présence et le profil d'expression des gélatinases (MMP-2 et MMP-9), de la MMP-20 et des TIMP-1 et -2 dans l'incisive de rat, nous avons cherché à mieux comprendre comment les MMPs et plus particulièrement les gélatinases et la MMP-20 pouvaient agir dans les processus d'organisation et de minéralisation des matrices dentaires. L'inhibition de leur activité par un inhibiteur synthétique des MMPs à large spectre, le Marimastat, dans un modèle des germes embryonnaires de souris en culture, a pertubé les mécanismes de nucléation dans la matrice dentinaire et a provoqué des pertubations sévères de la mise en place et par conséquent de la minéralisation de l'émail. Ces importantes altérations observées au niveau structural sont associées à des modifications au niveau moléculaire. En présence de Marimastat, deux des protéines majoritaires du tissu dentaire, la sialoprotéine dentinaire (DSP) et plus particulièrement l'amélogénine s'accumulent de manière anormale dans la matrice extracellulaire. Ces pertubations se traduisent par une modification de leurs différentes formes moléculaires. Ceci démontre la nécessité de la dégradation progressive de ces constituants matriciels. Le clivage de l'amélogénine par la MMP-20 a déjà été rapporté. En revanche, la dégradation protéolytique de la DSP par des protéases n'a jamais été décrite auparavant, nous avons pu montrer que la DSP mais aussi l'amélogénine sont clivées de manière rapide et totale par la MMP-2 recombinante. Par contre la MMP-9 n'a pas d'effet sur ces deux protéines dans les mêmes conditions expérimentales. La large distribution de la MMP-2 au sein des tissus dentaires, ainsi que sa capacité à dégrader certains constituants spécifiques des matrices dentaires permettent de lui attribuer un rôle majeur en association avec la MMP-20 dans l'établissement et la minéralisation de la dentine et de l'émailThe proteolytic degradation of the ECM components by the matrix metalloproteinases (MMPs) is thought to play a crucial role in odontogenesis. The aim of this thesis was to analyse the expression of several MMPs, namely MMP-2, MMP-9 and MMP-20, as well as of their physiological inhibitors, the TIMP-1 and TIMP-2 during tooth development and study their role in the formation and maturation of dental matrices. The two gelatinases (MMP-2 and MMP-9), enamelysin (MMP-20) and TIMP-1 and -2 have shown a developmentally regulated expression and specific localization within the developing tootth. The role of these MMPs in the processing and mineralization of the dental matrix was further studied in an organotypic culture model of developing mouse tooth germ. The inhibition of the MMPs activity in this model by a broad spectrum synthetic inhibitor, Marimastat, altered dental matrix nucleation and caused severe disruptions of enamel organisation and mineralization. These macroscopic effects was associated with significant modifications at the molecular level. MMP inhibition deregulated the molecular processing of two major dental matrix proteins, amelogenin and dental sialoprotein (DSP), coinciding with their accumulation and the loss of their normal distribution. While the cleavage of amelogenin by MMP-20 has been extensively studied, that of DSP has not been previously described. Our experiments provide evidence that MMP-2 is able to efficiently degrade DSP as well as amelogenin, while under the same conditions, MMP-9 had no effect. Based on the intense expression and large distribution of MMP-2 and its importance in the processing of the dental matrix, we suggest a major role for this enzyme, in association with MMP-20, in the maturation and mineramization of dentin and enamel
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Moussa, Amer. "Evaluation et optimisation de la synthèse de substrats de l'élastase de Pseudomonas aeruginosa à l'origine des infections associées aux maladies nosocomiales." Montpellier 2, 2007. http://www.theses.fr/2007MON20016.
Full text
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Robert, Catherine. "Les inhibiteurs de protéases matricielles dans les cancers bronchiques." Université Joseph Fourier (Grenoble), 1999. http://www.theses.fr/1999GRE19002.
Full text
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Faucher, Didier. "Inhibiteurs naturels de métalloproteinases : relations structure-activité." Tours, 1988. http://www.theses.fr/1988TOUR3805.
Full text
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Bridoux, Lucie. "Effet de l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases-1 (TIMP-1) dans les cellules érythroïdes normales et cancéreuses humaines. Caractérisation du récepteur." Reims, 2009. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00001015.pdf.
Full textAbstract:
En dehors de son activité inhibitrice de MMPs, le TIMP-1 présente d'autres activités biologiques telles que des effets mitogéniques et anti-apoptotiques sur différentes lignées cellulaires. Nous avons montré que le TIMP-1 induit la survie des cellules érythroleucémiques humaines UT-7 en activant la voie JAK2/PI 3-kinase/Akt. Récemment, nous avons montré que le TIMP-1 se fixe à une pro-MMP-9 localisée à la membrane plasmique des cellules UT-7 et que l'expression membranaire de la pro-MMP-9 est nécessaire à l'effet anti-apoptotique du TIMP-1. Dans une première partie, nous montrons que CD44 permet l'ancrage de la pro-MMP-9 à la surface cellulaire et que cette protéine joue un rôle crucial dans l'effet anti-apoptotique du TIMP-1 puisque si l'on éteint l'expression de CD44, la pro-MMP-9 n'est plus localisée à la surface cellulaire et le TIMP-1 n'est plus capable d'induire la survie cellulaire. Dans la signalisation anti-apoptotique du TIMP-1, JAK2 est la première tyrosine kinase qui est phosphorylée suite à une stimulation par le TIMP-1. Dans une deuxième partie, nous avons étudié l'interaction entre CD44 et la tyrosine kinase JAK2. Nous montrons que CD44 est associée de manière constitutive à JAK2 et que cette interaction se fait via le domaine FERM de JAK2. D'autres kinases pourraient intervenir dans la signalisation anti-apoptotique du TIMP-1, parmi lesquelles les Src kinases. Dans une troisième partie, nous avons étudié l'implication de la Src kinase Lyn dans l'effet anti-apoptotique du TIMP-1. Nous montrons que la Src kinase Lyn joue un rôle crucial dans l'effet anti-apoptotique du TIMP-1 en amont de la PI 3-kinaseBesides its ability to inhibit MMP activity, TIMP-1 exhibits other biological functions such as mitogenic and anti-apoptotic effects on various cell lines. We showed that TIMP-1 induced UT-7 erythroid cell survival through activation of the JAK2/PI 3-kinase/Akt pathway. Recently, we showed that TIMP-1 specifically bound to pro-MMP-9 localized at the UT-7 plasmic membrane and that pro-MMP-9 membrane expression is crucial for TIMP-1 anti-apoptotic effect. In a first part, we showed that CD44 anchored pro-MMP-9 at the cell surface and that this protein played a crucial role in TIMP-1 anti-apoptotic effect since CD44 silencing abrogated pro-MMP-9 cell surface localisation and enabled TIMP-1-mediated cell survival. In TIMP-1 anti-apoptotic signalling pathway, JAK2 is the first tyrosin kinase phosphorylated following TIMP-1 stimulation. In a second part, we studied the interaction between CD44 and tyrosin kinase JAK2. We showed that CD44 is associated in a constitutive manner to JAK2 via the JAK2 FERM domain. Other kinases could be implicated in TIMP-1 anti-apoptotic pathway, among them the Src kinases. In a third part, we studied the implication of Lyn Src kinase in TIMP-1 effect. We showed that Lyn played a crucial role in TIMP-1 anti-apoptotic effect upstream the PI 3-kinase
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Ogier, Crystel. "Expression et fonctions des Métalloprotéases matricielles (MMPs) et de leurs inhibiteurs tissulaires (TIMPs) au cours de l'ischémie cérébrale et des processus inflammatoires@." Aix-Marseille 2, 2005. http://www.theses.fr/2005AIX20658.
Full textAbstract:
La protéolyse est maintenant considérée comme un mécanisme requis pour achever le contrôle précis de nombreux processus biologiques tels que la mort et la survie, la différenciation, la croissance, l'adhérence et la migration cellulaire. Les métalloprotéases matricielles (MMPs) et leurs inhibiteurs endogènes, les inhibiteurs tissulaires de MMPs (TIMPs) sont les principaux régulateurs de l'espace péricellulaire en régulant le clivage protéolytique de substrats variés tels que les composants de la matrice extracellulaire, les cytokines, les récepteurs et molécules de surface cellulaire. Dans le système nerveux central (SNC), l'expression des MMPs et les TIMPs est largement régulée au cours des processus pathologiques, mais la compréhension de leurs rôles et de leurs mécanismes d'action reste encore peu claire. Nous avons donc établi comme objectif de mieux comprendre comment les MMPs et les TIMPs contribuent aux processus neuropathologiques associés à l'excitotoxicité et l'inflammation, avec un accent particulier sur les astrocytes qui représentent les cellules les plus abondantes du cerveau et aussi les sources principales de MMPs et de TIMPs. Nous avons évalué, au cours de l'ischémie cérébrale globale transitoire, la distribution spatio-temporelle de l'expression de la MMP-9 et de TIMP-1 et les changements d'activité protéolytique nette résultant de l'équilibre MMP/TIMP. Nous avons montré pour la première fois que la régulation de ces paramètres était étroitement associée à l'évolution de la mort neuronale et de la réactivité gliale, suggérant un rôle du système MMP/TIMP dans les mécanismes d'excitotoxicité et d'inflammation au cours de l'ischémie globale. Après ischémie, l'expression de TIMP-1 est régulée spécifiquement dans les astrocytes réactifs parmi les cellules gliales. Nous avons donc cherché à déterminer le rôle de TIMP-1 dans la réponse des astrocytes à des stimuli pro-inflammatoires. Grâce à l'utilisation de souris déficientes pour TIMP-1, nous avons mis en évidence que l'altération de l'équilibre MMP/TIMP dans les astrocytes influençait leur réactivité à des stimuli pro-inflammatoires et que l'activation de Fas modulait l'expression des membres du système MMP/TIMP. Nous proposons que les régulations croisées de la voie Fas/FasL et du système MMP/TIMP sont utilisées par les astrocytes pour moduler leur réponse inflammatoire à des stimuli environnementaux. Les astrocytes étant les principales sources neurales de MMPs et ces dernières intervenant dans les processus de migration cellulaire, nous avons étudié l'implication des MMPs sur la migration des astrocytes, un événement important dans les situations développementales et pathologiques. Nous fournissons la première évidence de l'implication de la MMP-2 dans la migration astrocytaire, probablement en interactions avec le cytosquelette d'actine, via les intégrines b1 qui pourraient jouer le rôle de lien entre la protéolyse péricellulaire et le cytosquelette et les protéines associées. L'ensemble de ces résultats renforce l'idée selon laquelle les MMPs et les TIMPs jouent des rôles prépondérants dans la physiopathologie du SNCProteolysis is now considered as a mechanism required to achieve precise control of numerous biological processes, including cell death/survival, differentiation, growth, adhesion and migration. Together, Matrix Metalloproteinases (MMPs) and their endogenous inhibitors, the tissue inhibitors of MMPs (TIMPs) are the principal regulators of the pericellular space by regulating the processing of numerous substrates such as extracellular matrix components, cytokines, cell surface molecules and receptors. In the central nervous system (CNS), the expression of MMPs and TIMPs is largely upregulated in pathological processes, but a precise understanding of their roles and mechanisms of action is still elusive. Our objective is to contribute to shed light on the contribution of MMPs and TIMPs to neuropathological processes associating excitotoxicity and inflammation, with a particular focus on astrocytes, which represent the majority of neural cells and the main source of MMPs and TIMPs. We evaluated, in transient global cerebral ischemia, the spatio-temporal regulation of MMP-9 and TIMP-1 expression and changes of net proteolytic activity resulting from MMP/TIMP ratio. We showed for the first time that the upregulation of these parameters were closely associated with the evolution of neuronal death and glial reactivity, suggesting a role of the MMP/TIMP system in the mechanisms of excitotoxicity and inflammation during global ischemia. Following ischemia, TIMP-1 expression was specifically regulated in reactive astrocytes among glial cells. Consequently, we investigated the role of TMP-1 in astrocyte response to pro-inflammatory stimuli. Using TMP-1 deficient mice, we provided evidence that the alteration of the MMP/TIMP balance in astrocytes influenced their reactivity to pro-inflammatory stimuli and that Fas activation modulated the expression of members of the MMP/TIMP axis. We hypothesize that the mutual regulation of the Fas/FasL transduction pathway and the MMP/TIMP system is an instrument used by astrocytes to modulate their inflammatory response to environmental stimuli. Astrocytes being the main neural source of MMPs, and the latter being instrumental for cell motility, we investigated the implication of MMPS in astrocyte migration, an important feature in both developmental and pathological situations. We provided the first evidence of the implication of MMP-2 in astrocyte motility probably through its interaction with the actin cytoskeleton, where ß1-integrin could play a role of linker between pericellular proteolysis and the intracellular cross-link proteins. Together, theses data reinforce the idea that MMPs and TIMPs play an important role in the physiopathology of the CNS
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Flores-Delgado, Guillermo. "Intéractions cellules endothéliales-plaquettes et activation de protéinases neutres : contribution à l'étude et à l'utilisation d'un inhibiteur d'une thiol-métalloprotéinase (EC 3.4.24.15)." Paris 12, 1992. http://www.theses.fr/1992PA120070.
Full textAbstract:
Il a ete etabli que l'endothelium constitue une surface non-throbogene, protegeant les plaquettes de leur activation par les macromolecules du sous-endothelium. L'interaction entre les cellules endotheliales et les plaquettes sanguines a des effets importants. Nous avons demontre que l'interaction entre les cellules endotheliales avec les plaquettes produisait (1) des changements dans la morphologie des cellules endotheliales (2) l'activation d'une proteinase de 85 kda, denommee pecap (de l'anglais platelet endothelial cell activated proteinase), (3) une modulation de deux metalloproteinases. L'activite proteasique pecap est une serine proteinase ayant des activites fibrinolytiques et caseinolytiques. A present, l'identite de la pecap reste inconnue. La pecap peut etre un produit de l'activite de la plasmine avec un facteur capable d'augmenter son activite, ou peut etre une autre proteinase ayant une masse moleculaire de 85 kda et des caracteristiques similaires a la plasmine. L'interaction des cellules endotheliales avec les plaquettes produit aussi une augmentation de l'expression de deux metalloproteinases, la gelatinase b (92 kda, mpm-2) et la gelatinase a (68 kda, mpm-2). Une approche pour l'elaboration des inhibiteurs synthetiques pour ces metallo-proteinases a ete initiee en utilisant comme modele l'enzyme thiol-dependant metalloendopeptidase, thimet oligopeptidase (ec3. 4. 24. 15). Les resultats concernant le developpement des inhibiteurs sera d'importance pour leur etude fonctionnelle
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Graesslin, Olivier. "Etude de l'expression des matrix-métalloprotéases (MMP-2, -7 et -9), des inhibiteurs tissulaires des métalloprotéases (TIMP-1 et -2), des facteurs apoptotiques (P53 et Bcl-2) et des recepteurs hormonaux (RE et RP) dans les cancers et les hyperplasies de l'endomètre par comparaison à l'endomètre sain : étude de la ploïdie et recherche des anomalies cytogénétiques par FISH : évaluation de l'implication de ces facteurs dans le processus de carcinogenèse endométriale et de leur intérêt pronostic." Paris 6, 2008. https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00811965.
Full textAbstract:
Le cancer de l'endomètre est le cancer gynécologique le plus fréquemment diagnostiqué chez les femmes en Europe, aux USA et au Japon. Les mécanismes de carcinogenèse endométriale sont encore mal appréhendés et les facteurs histopronostiques classiques ne permettent pas toujours de prédire le risque évolutif. Dans ce travail, l’étude de l’expression des métalloprotéases (MMP-2,-7 et -9) et des inhibiteurs tissulaires des métalloprotéases (TIMP-1 et -2) suggère l’implication de ce système enzymatique dans le processus de carcinogenèse endométriale avec un profil d’expression différent dans l’endomètre normal, l’hyperplasie et le cancer de l’endomètre. Nous avons par ailleurs pu montrer que l’analyse de l’expression de MMP-2 (gélatinase A) et de TIMP-2 permettait de définir un sous-groupe de cancer de l’endomètre qui était particulièrement à risque d’extension locale et à distance. Nos résultats ont également permis de confirmer le rôle prépondérant de la perte d’hétérozygotie (LOH) de TP53 dans la genèse des cancers de l’endomètre de type II et la survenue plus tardive de cet évènement dans les cancers de l’endomètre de type I (hormonodépendants). En terme de pronostic, l’analyse du gène TP53 par FISH (hybridation par fluorescence in situ) n’est pas supérieure à celle obtenue par IHC (immunohistochimie). Enfin, l’étude des corrélations histopronostiques réalisée dans ce travail suggère que l’évaluation conjointe de la ploïdie, de MMP-2 et TIMP-2, de p53, du Ki67 et des récepteurs hormonaux (E et P) sur les prélèvements tissulaires pourrait mieux définir une population à haut risque évolutif pouvant bénéficier de thérapeutique ciblée.
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Coulombeau, Agnès. "Synthèse de phosphinodipeptides." Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20147.
Full textAbstract:
Intervenant dans de nombreuses pathologies humaines, les metalloproteases sont, aujourd'hui, considerees comme des cibles therapeutiques de premiere importance. Dans la recherche de nouveaux inhibiteurs de metalloproteases a zinc, nous avons etudie la synthese d'analogues phosphinodipeptidiques dont l'interet reside d'une part dans la tres forte analogie existant entre leur structure et celle des substrats des metalloproteases a zinc dans leur etat de transition tetraedrique, et d'autre part, dans la possibilite d'incorporation en syntheses paralleles dans des structures peptidiques plus etendues. Afin d'obtenir des esters phosphores aussi stables que possible, nous avons d'abord effectue la synthese pas-a-pas de phosphinates d'ethyle. Mais, a cause de la difficulte a purifier les intermediaires hydrogenophosphinates d'ethyle, instables a divers traitements, nous n'avons pas poursuivi dans cette voie. Nous avons alors effectue une etude de la reaction conduisant au reactif de depart, l'hypophosphite d'alkyle, pour l'obtenir avec la meilleure purete possible. Une methode generale de synthese one-pot a ainsi ete elaboree pour la preparation des phosphinates de methyle obtenus sous forme protegee impliquant l'addition de l'hypophosphite de methyle sur des imines puis celle des hydrogenophosphinates resultants sur des esters ,-insatures. Cette methode permet de faire varier les substituants aliphatiques ou aromatiques sur les carbones en et en du phosphore avec de bons rendements en produits isoles. Des deprotections totale ou selectives fournissent les produits de depart pour des syntheses peptidiques ulterieures par elongation du cote n-, p-, ou c-terminal. Enfin, quelques essais de synthese asymetrique ont ete realises a titre exploratoire, visant a diminuer le nombre de diastereoisomeres obtenus lors de la synthese.
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Vaillant, Catherine. "Rôle des Métalloprotéinases et de leurs inhibiteurs dans la migration et la différenciation de cellules précurseurs du système nerveux central." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T134.
Full text
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Sbai, Oualid. "Distribution, trafic et sécrétion vésiculaire des MMPs et de leurs inhibiteurs dans les cellules neurales." Aix-Marseille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009AIX20733.
Full textAbstract:
Les métalloprotéinases matricielles (MMPs) et leurs inhibiteurs endogènes les Tissues inhibitors of MMPs (TIMPs) constitue le système MMP/TIMP, un des principaux régulateurs de l’espace péricellulaire. Cette régulation est réalisée via le clivage de nombreuses cibles protéiques, notamment les composants de la matrice extracellulaire, les protéines d’adhérence, les cytokines, les récepteurs et molécules de surface cellulaire. Les MMPs sont subdivisées en deux grands groupes selon qu’elles sont sécrétées ou membranaires (MT-MMPs). Dans le système nerveux central (SNC), l’expression des MMPs et les TIMPs est largement régulée au cours des processus développementaux et pathologiques. Cependant, rien n'est connu concernant la distribution intracellulaire et les voies de sécrétion des MMPs et des TIMPs dans les cellules neurales. En combinant des approches de biologie cellulaire et moléculaire, de biochimie et d’imagerie, nous avons entrepris une étude de la distribution intracellulaire, du transport et de la sécrétion de MMP- 2, MMP-9 et de leurs inhibiteurs TIMP-1 et de TIMP-2 dans les cellules neurales. Cette étude a permis de démontrer notamment une localisation nucléaire de MMP-2 et MMP-9 ainsi qu’une distribution vésiculaire différentielle des MMPs, notamment vis-à-vis des moteurs moléculaires qui participent au transport des vésicules le long des microtubules et des filaments d’actine. Nous montrons aussi que les vésicules MMP-9 sont de nature lysosomale et que les MMPs et les TIMPs sont sécrétées en partie sous forme vésiculaire dans le milieu extracellulaire. Ainsi, nos résultats suggèrent que ces protéinases ainsi que leurs inhibiteurs utilisent différentes voies de transport et de sécrétion associées à différents fonctions cellulaires. Nous avons également étudié le rôle de MT5-MMP, une MMP membranaire presque exclusivement exprimée dans le SNC, dans la plasticité neuronale. Nous avons comparé des souris naïves (WT) et des souris déficientes pour le gène MT5-MMP (KO) qui ont un développement apparemment normal. Cependant, elles présentent des déficits d’apprentissage dans un test olfactif impliquant la mémoire déclarative qui est dépendante de l’hippocampe, alors que leur mémoire procédurale qui elle est indépendante de l’hippocampe n’est pas affectée. Les souris KO présentent également des déficits dans la LTP, dont l’amplitude est diminuée comparé aux WT. Au niveau cellulaire, et à l’aide de protéines de fusion GFP, nous montrons que MT5-MMP a une distribution vésiculaire, elle co-localise avec les éléments du cytosquelette mais son transport semble indépendant des moteurs moléculaires kinésine et myosine V, contrairement à nos observations sur MMP-2 et MMP-9. Finalement, et de manière surprenante, MT5-MMP est également détectée dans le noyau en accord avec la présence de plusieurs sites d’adressage nucléaire dans sa séquence protéique. L’ensemble de ces résultats contribue à mieux comprendre la sécrétion et le trafic des MMPs dans les cellules neurales et renforce l’idée selon laquelle les MMPs et les TIMPs jouent des rôles prépondérants dans la physiopathologie du SNC.
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Jourquin, Jérôme. "Système MMP/ TIMP et implication des gélatinases et de TIMP-1 dans la mort neuronale et la plasticité réactive suite à des lésions excitotoxiques dans l'hippocampe." Aix-Marseille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003AIX20664.
Full textAbstract:
Les métalloprotéases matricielles (MMPs) sont impliquées dans l'homéostasie des tissus et sont contrôlées par les " tissue inhibitors of metalloproteases " (TIMPs). Une rupture de la balance MMP/TIMP semble impliquée dans la mort et la plasticité neuronales. Après kai͏̈nate : l'augmentation de l'activité gélatinolytique est séquentielle et dépend du type cellulaire ; augmentation neuronale de l'activité gélatinolytique dépend de l'activité neuronale ; l'inhibition générale des MMPs, ou de MMP-9, protège de l'excitotoxicité ; la MMP-9 induit une mort cellulaire dans l'hippocampe ; chez les souris KO TIMP-1 : pas de différence phénotypique évidente ; hyper-résistance à la mort neuronale ; bourgeonnement axonal nettement réduit, Les souris KO TIMP-1 ont un défaut d'apprentissage alors que les souris surexprimant TIMP-1 ont un apprentissage amélioréMatrix metalloproteinases (MMPs) are involved in tissue homeostasis and are controlled by the tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). An imbalance in the MMP/TIMP system seems to be involved in neuronal death and plasticity. After kai͏̈nate : sequential and cell-type dependent increase of gelatinolytic activity ; neuronal increase of gelatinolytic activity is neuronal-activity dependent ; broad inhibition of MMPs, or of MMP-9, protects against excitotoxicity ; MMP-9 induces cell death in the hippocampus ; the TIMP-1 KO mice : no gross phenotypic difference ; hyper-resistance to neuronal death ; reduced axonal sprouting,The TIMP-1 KO mice present an impaired learning and the TIMP-1 overexpressing mice present an improved learning
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Simon, Franck. "Influence des cellules épidermiques dans la cicatrisation hypertrophique." Thesis, Université Laval, 2010. http://www.theses.ulaval.ca/2010/27181/27181.pdf.
Full text
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Lepetit, Hélène. "Métalloprotéinases de la matrice extracellulaire dans le remodelage vasculaire en pathologie humaine : exemples de l'hypertension artérielle pulmonaire idiopathique et du syndrome d'apnées obstructives du sommeil." Paris 12, 2005. https://athena.u-pec.fr/primo-explore/search?query=any,exact,990002295580204611&vid=upec.
Full textAbstract:
Le remodelage vasculaire pulmonaire, dans l'hypertension artérielle pulmonaire idiopathique (HTAPI), ou systémique, dans le syndrome d'apnées obstructives du sommeil (SAOS), se caractérise en partie par un épaississement des parois artérielles. Ce dernier fait intervenir une prolifération cellulaire et un remaniement matriciel orchestrés par les métalloprotéases de la matrice extracellulaire (MMP) et leurs inhibiteurs (TIMP). Le but de ce travail était de caractériser les MMP impliquées dans le remodelage vasculaire de ces pathologies. Dans l'HTAPI nous avons montré un profil d'expression en faveur d'une accumulation de matrice et d'une fragmentation des fibres élastiques. Dans le SAOS nous avons montré l'augmentation et l'activation d'une MMP d'origine inflammatoire et d'un TIMP témoignant d'un remodelage actif et d'une possible fibrose vasculaire. Ces MMP et TIMP pourraient constituer soit des cibles thérapeutiques soit des marqueurs pronostiques de ces deux pathologiesPulmonary vascular remodeling in idiopathic pulmonary arterial hypertension (IPAH) and systemic vascular remodelling in obstructive sleep apnea syndrome (OSAS) are characterized in part by intima-media thickening (IMT). IMT results from cell proliferation and matrix deposition drived by matrix metalloproteases (MMPs) and their inhibitors. The aim of these studies was to characterize MMPs implicated in vascular remodelling in these two diseases. In IPAH we found a MMP/TIMP balance in favour of matrix deposition and elastic fiber fragmentation. In OSAS we showed an increase in inflammatory MMP and TIMP overexpression that could predict vascular fibrosis. These MMP and TIMP could be either therapeutic targets or prognostic markers of these diseases
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Uzan, Catherine. "Expression des métalloprotéinases et de leurs inhibiteurs, de la protéine c-kit, des protéines de l’apoptose et des protéines HER1 et 2 dans l’endométriose." Paris 6, 2008. http://www.theses.fr/2008PA066096.
Full textAbstract:
Introduction : L’endométriose est définie par la présence, hors de l’utérus, de tissu endométrial constitué de glandes et de chorion cytogène. Les métalloproteinases matricielles (MMPs) et leurs inhibiteurs endogènes (TIMPs), les protéines de l’apoptose, le récepteur c-kit et des protéines de la famille à récepteurs à l’EGF ont un rôle dans la progression tumorale mais leur rôle dans l’endométriose a été peu ou pas étudié. Matériel et méthodes : L’objectif de ces travaux était d’étudier en immunohistochimie l’expression de MMP-2, MMP-3, MMP-11, TIMP-1, TIMP-2, c-kit, des protéines de l’apoptose, HER1 et HER2 dans l’endomètre de patients atteintes ou non d’endométriose et dans les lésions d’endométriose péritonéale, ovarienne et colo-rectale. HER2 a de plus été étudié par FISH dans les lésions d’endométriose rectale et dans des prélèvements de carcinome endométrioïde de l’ovaire. De plus, des techniques de microdissection et de CGH (Hybridation Génomique Comparative) ont été effectuées pour rechercher des anomalies cytogénétiques dans les lésions d’endométriose. Résultats : Dans l’endomètre des patientes atteintes d’endométriose, comparé à l’endomètre de patientes non endométriosiques, une diminution de l’expression de MMP-2 et une perte complète de l’expression de MMP-3 ont été observées. L’expression de MMP-2, -3, -11, TIMP-1 et –2 était la même dans l’endomètre de patientes endométriosiques et dans les lésions d’endométriose péritonéale. L’expression de MMP-2, -3 et –11 était plus élevée dans les lésions colo-rectales que dans les lésions ovariennes et péritonéales. Inversement, l’expression de TIMP-2 était plus faible dans les lésions colo-rectales et ovariennes que dans les lésions péritonéales. L’expression de p53 et p21 était plus importante dans les endométriomes que dans l’endométriose péritonéale et l’endométriose colorectale. L’expression de bcl-2 était plus faible dans les endométriomes que dans l’endométriose péritonéale et l’endométriose colorectale. L'expression de c-kit était plus élevée dans les lésions colo-rectales que dans les lésions péritonéales et ovariennes. Il n’a pas été retrouvé d’expression d’HER1 et 2 dans les différentes lésions d’endométriose et il n’y avait pas de surexpression d’HER2 dans les lésions d’endométriose colorectales et dans les carcinomes endométrioïdes de l’ovaire. Conclusions : Ces résultats suggèrent une possible implication de MMP-2, –3 et TIMP-2, du c-kit et des protéines de l’apoptose dans la pathogénie de l’endométriose
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Gauriot, Marion. "Conception, synthèse et optimisation de modulateurs de l'Insulin-Degrading Enzyme et applications dans la maladie d'Alzheimer et le diabète." Thesis, Lille 1, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL10021/document.
Full textAbstract:
IDE (Insulin-Degrading Enzyme) est une métalloenzyme impliquée dans la dégradation de plusieurs peptides physiologiques. Des études lient la maladie d’Alzheimer et le diabète de type II à IDE. En effet, parmi ses substrats, l’enzyme compte le peptide Béta-amyloïde (A-Béta) responsable des plaques séniles de la maladie d'Alzheimer et l’insuline régulant la glycémie. En 2006, l’équipe du Pr. Tang a élucidé la structure cristallographique d'IDE qui a révélée que les substrats se lient à deux sites de l'enzyme : le site catalytique et un exosite. Grâce au criblage d'une chimiothèque, un composé a été découvert modulant de façon substrat-dépendante l'activité d'IDE. Ce composé a été cristallisé dans l’enzyme: il peut se lier aux deux sites importants pour l’hydrolyse des substrats: le site catalytique et l'exosite. Ce mode de liaison est cohérent avec la modulation substrat-dépendante observée. 80 analogues ont été synthétisés pour améliorer l’activité et la perméation cellulaire. La modulation substrat-dépendante de la protéase permet d’envisager l’obtention d’outils chimiques pour l’étude de la fonction de cette enzyme et ouvre de nouvelles perspectives dans des pathologies où des substrats d’IDE seraient impliqués. En parallèle, une réaction de Click Chemistry in situ a été effectuée et a permis l'identification de 32 ligands parmi 180 composés potentiels. 12 ont été resynthétisés et ont montré une activité inhibitrice de l'enzyme. Ces composés possèdent une fonction hydroxamate et se lient donc au site catalytique inhibant l'enzyme quelque soit son substrat. La co-cristallisation d'un des composés avec l'enzyme a confirmé ce mode de liaisonInsulin-Degrading Enzyme (IDE) is a zinc metalloprotease implicated in the clearance of numerous physiological peptides, in particular beta-amyloid (A[Béta]) peptide and insulin, respectively implicated in Alzheimer’s disease and Diabetes.Tang et al. elucidated the X-ray structure of the human IDE and found that substrates have two anchoring sites : the catalytic site at the zinc and an exosite which are both key features for the binding and hydrolysis.In our laboratory, we have screened a 2080-compound library on the enzyme and found a 5 µM hit inhibitor of A[Béta] hydrolysis. X-ray analysis of ligand-enzyme complexes, revealed that unexpectedly these compounds are either ligands of the catalytically site or the exosite of IDE.Consistently with their peculiar binding mode, these compounds behave as inhibitors or activators of the enzyme in a substrate-dependent manner.We made several chemical modulations on the hit structure and synthesized about 80 analogues to increase both potency and cell permeation.The mode of action of our compounds opens new avenues for the study of the function of IDE and for the design of therapeutic interventions.In the mean time, an in situ Click Chemistry experiment led to the identification of 32 ligands over 180 potential compounds. 12 compounds were resynthesised and showed inhibitory activities on the enzyme for all substrats. Co-crystallisation confirmed the binding to the catalytical site thanks to a hydroxamate function
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Augé, Franck. "Conception et synthèse de nouveaux ligands des métalloprotéinases de la matrice extracellulaire. Analyse de paramètres réactionnels et structuraux par des calculs théoriques." Reims, 2002. http://www.theses.fr/2002REIMP203.
Full textAbstract:
@Ce travail est composé de trois parties. La première concerne la conception et la synthèse d'inhibiteurs de métalloprotéinases de la matrice extracellulaire. Ainsi, après avoir donné un aperçu de l'état de l'art dans le domaine des inhibiteurs de MMP, la synthèse d'un ensemble d'inhibiteurs ne possédant pas de fonction hydroxamique est présentée. Les premiers tests biologiques par zymmographie font apparaître une activité sur plusieurs composés. La deuxième partie est consacrée à l'étude théorique de la formation et de la réactivité d'indolo-2,3-quinodiméthanes. Le profil complet de la réaction est présenté ainsi que le facteur qui influence la sélectivité de la réaction lorsque le substituant de l'azote varie. La dernière partie traite de l'étude conformationnelle de tétrahydro-ß-carbolines. La méthodologie d'étude présentée permet de reproduire les constantes de couplage entre les protons H3 et H4 de ce type de composés et est transposable à des systèmes analogues@This work is divided into three parts. The first one is about design and synthesis of matrix metalloproteinases inhibitors. Thus, after a brief review on the state-of-the-art of MMP inhibitors, the synthesis of several inhibitors without hydroxamic acid function is presented. The first biological analyses obtained by zymmography show good activities for several compounds. The second part deals with the theoretical study of the formation and the reactivity of indolo-2,3-quinodimethanes. The complete pathway of the reaction is given and also the factors which make the selectivity of the reaction change when the nitrogen substituent is modified. Finally, the last part is about the conformational study of tetrahydro-ß-carbolines. With the methodology presented here, we have been able to reproduce the coupling constant observed between protons H3 and H4 of this compounds. This experience could be used for the study of analogous compounds
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Graesslin, Olivier. "Etude de l'expression des matrix-métalloprotéases (MMP-2, -7 et -9), des inhibiteurs tissulaires des métalloprotéases (TIMP-1 et -2), des facteurs apoptotiques (P53 et Bcl-2) et des récepteurs hormonaux (RE et RP) dans les cancers et les hyperplasies de l'endomètre par comparaison à l'endomètre sain. Etude de la ploïdie et recherche des anomalies cytogénétiques par FISH. Evaluation de l'implication de ces facteurs dans le processus de carcinogenèse endométriale et de leur intérêt pronostic." Phd thesis, Université Pierre et Marie Curie - Paris VI, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00811965.
Full textAbstract:
Le cancer de l'endomètre est le cancer gynécologique le plus fréquemment diagnostiqué chez les femmes en Europe, aux USA et au Japon. Les mécanismes de carcinogenèse endométriale sont encore mal appréhendés et les facteurs histopronostiques classiques ne permettent pas toujours de prédire le risque évolutif. Dans ce travail, l'étude de l'expression des métalloprotéases (MMP-2,-7 et -9) et des inhibiteurs tissulaires des métalloprotéases (TIMP-1 et -2) suggère l'implication de ce système enzymatique dans le processus de carcinogenèse endométriale avec un profil d'expression différent dans l'endomètre normal, l'hyperplasie et le cancer de l'endomètre. Nous avons par ailleurs pu montrer que l'analyse de l'expression de MMP-2 (gélatinase A) et de TIMP-2 permettait de définir un sous-groupe de cancer de l'endomètre qui était particulièrement à risque d'extension locale et à distance. Nos résultats ont également permis de confirmer le rôle prépondérant de la perte d'hétérozygotie (LOH) de TP53 dans la genèse des cancers de l'endomètre de type II et la survenue plus tardive de cet évènement dans les cancers de l'endomètre de type I (hormonodépendants). En terme de pronostic, l'analyse du gène TP53 par FISH (hybridation par fluorescence in situ) n'est pas supérieure à celle obtenue par IHC (immunohistochimie). Enfin, l'étude des corrélations histopronostiques réalisée dans ce travail suggère que l'évaluation conjointe de la ploïdie, de MMP-2 et TIMP-2, de p53, du Ki67 et des récepteurs hormonaux (E et P) sur les prélèvements tissulaires pourrait mieux définir une population à haut risque évolutif pouvant bénéficier de thérapeutique ciblée.
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Lauzier, Marie-Claude. "Régulation de l'activité des facteurs de transcription induits par l'hypoxie." Thesis, Université Laval, 2009. http://www.theses.ulaval.ca/2009/26884/26884.pdf.
Full textAbstract:
Les facteurs de transcription induits par l’hypoxie (HIF) sont responsables de la transcription de nombreux gènes impliqués dans la réponse à l’hypoxie. En plus de réguler de nombreux processus cellulaires et physiologiques, ces facteurs sont impliqués dans plusieurs pathologies. Hétérodimères constitués d’une sous-unité β constitutive et d’une sous-unité α sensible à l’oxygène, ces facteurs sont majoritairement régulés par l’hydroxylation et la dégradation de la sous-unité α. En situation d’hypoxie, ce mécanisme de dégradation est inhibé, ce qui favorise la formation de complexes HIF.
Les travaux présentés dans cette thèse visent à élucider les mécanismes régulant l’activation de HIF en situation d’hypoxie ou de normoxie. Dans la section Résultats, vous retrouverez une section consacrée à l’activation de HIF par l’angiotensine II (AngII) chez les cellules musculaires lisses vasculaires. Plus précisément, le rôle de la transactivation de récepteurs à activité tyrosine kinase suivi de l’implication de HIF dans la biologie de ces cellules seront abordés. Dans un deuxième temps, un inhibiteur des métalloprotéases, le BiPS, vous sera présenté comme étant un puissant inducteur des protéines HIF-α. En effet, le BiPS est un puissant inhibiteur des enzymes responsables de la dégradation des protéines HIF-α. En outre, le BiPS permet l’activation des complexes HIF ainsi formés. Ces résultats inattendus pourraient avoir des répercussions importantes dans l’utilisation de cet agent à des fins angiostatiques dans le traitement du cancer en plus de présenter un nouvel agent ayant un potentiel thérapeutique important dans le traitement de pathologies ischémiques. Finalement, vous retrouverez une section consacrée à l’étude d’un nouveau répresseur de HIF, l’histone acétyltransférase HBO1. De façon étonnante, HBO1 réprime l’activité des complexes HIF par un mécanisme indépendant de la stabilisation des sous-unités α mais dépendant du remodelage de la chromatine.
En conclusion, ces résultats mettent en lumière de nouveaux mécanismes de régulation de l’activité des facteurs de transcription HIF. Considérant les rôles physiologiques importants de ces complexes ainsi que leurs implications dans diverses maladies, ces résultats permettront d’accroître les connaissances disponibles quant aux fonctions de ces complexes et mèneront vers le développement d’outils thérapeutiques efficaces.Hypoxia-inducible transcription factors (HIF) are decisive elements in the transcriptional regulation of numerous genes expressed in conditions of hypoxic stress. In addition to their roles in many physiological and cellular processes, HIF are also involved in diverse pathological situations. Obligate heterodimers composed of a constitutive β subunit and of an oxygen tension-regulated α subunit, these transcription factors are mainly regulated by the hydroxylation and subsequent degradation of the α subunit. In hypoxia, this degradation mechanism is inhibited, resulting in HIF complex formation and binding to specific DNA sequences. The work presented in this thesis aims to elucidate regulatory mechanisms involved in HIF activation during hypoxia or in normal oxygen conditions. In the Results section, you will find a study devoted to HIF activation by angiotensin II (Ang II) in vascular smooth muscle cells. Specifically, the role of receptor tyrosine kinase transactivation on HIF activation was evaluated along with a description of HIF-1’s role in smooth muscle cells biology. Next, an inhibitor of matrix metalloproteases, BiPS, will be presented as a novel and potent HIF activator. This unexpected effect may have important implications for the use of this compound for its angiostatic potential in cancer treatment. In addition, BiPS and derivative molecules could also have strong therapeutic potential in ischemic diseases. Finally, you will find a section devoted to the study of a new transcriptional repressor of HIF complexes, the histone acetyltransferase bound to ORC-1, HBO1. Surprisingly, HBO1 represses the activity of HIF complexes by a mechanism independent of the availability of the α subunits, but dependent on a chromatin remodelling event. In conclusion, this thesis highlights new regulatory mechanisms responsible for HIF activation. Considering the important physiological roles of HIF complexes and their implications in the pathogenesis of different diseases, these studies increase the available knowledge concerning the biological functions of these complexes and could contribute to the development of more effective and safe therapeutic tools.
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Barros, Sandra de. "Les métalloprotéases matricielles 2 et 9 et la différenciation des cellules progénitrices du tissu adipeux humain." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/62/.
Full textAbstract:
Le tissu adipeux (TA) peut se développer de manière excessive (obésité) mais aussi régresser (lipoatrophie). Cette plasticité peut s'expliquer par un remodelage cellulaire et matriciel. Les métalloprotéases matricielles (MMPs) sont des acteurs majeurs du remodelage tissulaire. Des travaux précédents menés au sein de l'équipe ont montré que les cellules de la fraction stroma vasculaire (FSV) du TA humain sécrètent les MMP-2 et -9 au cours de la différenciation adipocytaire in vitro. Durant ce travail, nous avons observé que l'inhibition de l'activité de MMP-9 par le batimastat et de son expression par les inhibiteurs de la protéase du VIH limite la différenciation adipocytaire des cellules de la FSV. L'étude des mécanismes moléculaires responsables de la diminution de l'expression de MMP-9 par les inhibiteurs de la protéase du VIH a montré que l'expression de MMP-9 est régulée par une voie impliquant l'activité du protéasome et le facteur de transcription NF-?B. Sachant que la FSV est une population cellulaire hétérogène contenant des cellules endothéliales, des cellules immuno-inflammatoires et des cellules progénitrices aux capacités adipogéniques et angiogéniques, nous avons souhaité déterminer l'implication de MMP-9 dans le devenir des cellules progénitrices. Pour cela, une condition de culture permettant simultanément l'expression des capacités adipogéniques et angiogéniques des cellules progénitrices a été mise au point. L'ensemble de ce travail indique que MMP-9 influence la différenciation des cellules progénitrices du TA humain et contribuent au remodelage du TA lors de son développement et/ou de sa régressionHuman adipose tissue (AT) has long attracted attention because of its capacity for excessive development and regression. Cellular and matrix remodelling can explain human AT plasticity. The matrix metalloproteinase (MMP) family is considered to play a major role in tissue remodelling. In a previous report, we demonstrated that the stroma-vascular fraction (SVF) of human AT produce and release MMP-2 and -9 during adipocyte differentiation in vitro. In this work, we evidenced that decrease of MMP-9 activity by batimastat and expression by HIV protease inhibitors decrease adipocyte differentiation of SVF cells. We showed that the way in which HIV protease inhibitor affect MMP-9 expression involve perturbations of proteasome and transcription factor NF-kappaB activities. Since the SVF of human AT represents a heterogeneous cell population containing capillary endothelial cells, inflammatory cells and progenitor cells that are able, under appropriate culture conditions, to express adipogenic and angiogenic abilities, we would like to determine MMP-9 involvement in the fate of progenitor cells. We defined a new culture condition in which progenitor cells express simultaneously adipogenic and angiogenic abilities. These data strongly suggests that MMP-9 modulate the differentiation of human progenitor cells and contribute to human AT remodelling and thus in this excessive development and/or regression
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Al-Masri, Mounir. "Conception, synthèse et évaluation des dérivés d'aminobenzosubérone comme inhibiteurs potentiels des aminopeptidases de la famille M1." Thesis, Mulhouse, 2017. http://www.theses.fr/2017MULH2862.
Full textAbstract:
Les aminopeptidases de la famille M1 sont des protéases qui catalysent l’hydrolyse d’une liaison peptidique en position N-terminale. Ce sont des métalloprotéases avec un ion zinc dans leur site actif conservé dans tous les membres de cette famille de protéine. Ces enzymes sont impliqués dans de nombreux processus physiologiques normaux, mais également dans des désordres métaboliques, tels que la progression tumorale, des maladies auto-immunes, ainsi que dans des infections virales, bactériennes et parasitaires. Pour ces raisons, ces aminopeptidases sont considérées comme des cibles thérapeutiques potentielles pour traiter ou diagnostiquer diverses maladies. En 2006, le laboratoire a découvert le châssis moléculaire de type 3-amino-2-benzosubérone inhibant puissamment et sélectivement et un des membres de cette famille d’aminopeptidases, à savoir l’APN. La conception et la synthèse des dérivés de ce châssis moléculaire comme inhibiteurs potentiels et sélectifs pour cinq autres membres de la famille M1 (APN, ERAP1/2, IRAP et PfA-M1) est au cœur de ce travail. Des études pharmacologiques, pharmacocinétiques jusqu’aux essais précliniques ont été menées et leurs résultats seront présentés dans le cas de l’inhibition de PfA-M1Aminopeptidases of the M1 family are proteases that catalyze the hydrolysis of a peptide bond in the N-terminal position. These are metalloproteases with a zinc ion in their active site conserved in all members of this protein family. These enzymes are involved in many normal physiological processes, but also in metabolic disorders, such as tumor progression, autoimmune diseases, as well as in viral, bacterial and parasitic infections. For these reasons, these aminopeptidases are considered potential therapeutic targets for treating or diagnosing various diseases. In 2006, the laboratory discovered the powerful and selectively inhibiting 3-amino-2-benzosuberone molecular chassis and one of the members of this family of aminopeptidases, namely the APN. The design and synthesis of derivatives of this molecular chassis as potential and selective inhibitors for five other members of the M1 family (APN, ERAP1 / 2, IRAP and PfA-M1) is at the heart of this work. Pharmacological, pharmacokinetic and preclinical studies have been conducted and their results will be presented in the case of PfA-M1 inhibition
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Zipfel, Pauline. "Conception, synthèse et évaluation biologique d'inhibiteurs de MT5-MMP : nouvelle cible d'intéret thérapeutique potentiel dans le traitement de la maladie d'Alzheimer." Thesis, Normandie, 2020. http://www.theses.fr/2020NORMC412.
Full textAbstract:
La maladie d’Alzheimer (MA) est une maladie neurodégénérative incurable à l’heure actuelle et la forme la plus commune des démences pour laquelle seuls 4 traitements symptomatiques sont disponibles. Au vu de l’impact socio-économique considérable de la MA, il est urgent de trouver de nouveaux traitements qui visent les causes moléculaires de la neurodégénérescence, mais ces dernières restent mal comprises en 2020. Dans ce contexte, certaines métalloprotéases matricielles (MMPs), en particulier MT5-MMP, ont montré récemment leur intérêt dans la littérature comme nouvelles cibles biologiques potentielles dans la MA. Cependant, le développement d’inhibiteurs sélectifs de MMPs reste un enjeu de taille étant donné la grande homologie structurale existant entre les membres de la famille des MMPs. Différentes stratégies de découverte de composés d’intérêts auront ainsi été explorées au cours de cette thèse dans l’objectif d’identifier un premier inhibiteur sélectif de MT5-MMP. Ce manuscrit décrit les travaux expérimentaux de chimie médicinale réalisés à cet effet, ainsi que les études de modélisation moléculaire et les évaluations biologiques effectuées. Plusieurs composés auront été identifiés par leur activité in vitro prometteuse vis-à-vis de MT5-MMP, ouvrant ainsi de nouvelles perspectives dans la recherche contre la MAAlzheimer's disease (AD), the most common form of dementia, is a neurodegenerative and incurable brain disorder, for which only 4 symptomatic treatments are available at this time. Because of the heavy economic and societal impacts, there is an urgent need to find new treatments that target the molecular causes of the neurodegenerative process, but these remain elusive in 2020. In this context, some matrix metalloproteinases (MMPs), in particular MT5-MMP, have been recently highlighted in the literature as potential new relevant biological targets in AD. However, the design of selective inhibitors of MMPs remains quite challenging, considering the high structural homology MMPs share. We therefore explored different drug design strategies during this thesis to find first-in-class small molecule inhibitors of MT5-MMP. This manuscript describes the experimental results of medicinal chemistry work, as well as molecular modeling studies and biological assesments. Different promising compounds were identified with good in vitro activity on MT5-MMP, opening new perspectives in the field of AD
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Fanchon, Stéphanie. "Effets de deux inhibiteurs de métalloprotéases (marimastat® et CT1166®) et d'un facteur de croissance (TGFβ-1) sur l'odontogénèse." Paris 5, 2005. http://www.theses.fr/2005PA05M005.
Full textAbstract:
Afin de préciser le rôle des métalloprotéases dans l'odontogénèse, nous avons d'abord testé les effets de deux inhibiteurs synthétiques de métalloprotéases matricielles, le marismatat® et la CT1166® sur des cultures organotypiques de germes dentaires d'embryons de souris. Après avoir validé notre modèle, nous avons montré une réelle implication des MMPs dans la formation de l'émail et dans la minéralisation de la dentine, en particulier des MMP-2, -9, -3 et -20. Les modifications structurales s'accompagnent de modifications moléculaires analysées aussi à l'échelle ultrastructurale. L'inhibition des MMPs entraîne le changement d'expression de certaines molécules, en particulier de l'amélogénine, la DSP, la décorine, du biglycan et du TGFβ. Puis, nous avons cherché à préciser les effets du TGFβ et plus particulièrement du TGFβ-1 dans les phénomènes de prolofération, de différenciation et d'expression de certaines molécules. Nous avons analysé le modèle de culture organotypique autorisant une supplémentation en TGFβ-1 et parallèlement étudié des souris mutantes surexprimant le TGFβ. Ces deux modèles présentent des modifications des matrices amélaire et dentinaire. Nos résultats révèlent un émail poreux, aprismatique présentant alors une architecture pertubée, une prédentine avec une densité accrue de fibrillles de collagène et une dentine hypominéralisée, ayant toutes les caractéristiques d'une ostéodentine depuis la jonction entre le manteau dentinaire et la dentine circumpulpaire. Ceci démontre l'implication des MMPs et du TGFβ dans l'odontogénèse. Il reste maintenant à préciser leurs mécanismes d'actionIn order to study the role of matrix metalloproteinases in odontogenesis, two MMPs inhibitors, marimastat® and CT1166®, were tested on an organotypic culture model of embryonic mouse tooth germs. MMPs are really implicated in the processing and mineralization of the dental matrix, possibly MMP-2, -9, -3 and -20. Macroscopic effects are associated with significant modifications at the molecular and ultrastructured levels. MMPs inhibition deregulated the molecular processing of e few molecules studied here, namely amelogenin, dental sialprotein, decorine, biglycan andTGFβ. Then, in order to get a better understanding of the TGFβ effects and more precisely on cell proliferation and differenciation, and espression of molecules, organotypic toooth germ culture were supplemented with TGFβ. They were analyzed. Along this way, mutant mice overexpressing TGFβ have been studied. These two models provide evidence that enamel and dentin matrix are altered. Enamel was porous, aprismatic with a malformed architecture. Predentin displayed a denser collagen fibrils accumulation and dentin was hypomineralized, and apparently revealed as an osteodentin rather than orthodentin in the circumpulpal dentin, whereas the mantle dentin was not altered. These results provide evidence that MMPs and TGFβ are implicated in odontogenesis. The mechanisms of these interactions remain to be elucidated
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Rocha, Gomes Sonia Da. "Applications de la stratégie SELEX : caractérisation d'un complexe ARN/ARN et identification d'aptamères spécifiques d'une protéine de la matrice extracellulaire." Bordeaux 2, 2005. http://www.theses.fr/2005BOR21275.
Full textAbstract:
Deux stratégies SELEX ont été mises tout d'abord contre une cible nucléique puis contre une cible protéique. La première sélection in vitro avait pour objectif d'identifier des aptamères spécifiques et affins pour le domaine II de l'IRES du virus de l'Hépatite C. Ce domaine II joue un rôle crucial dans la traduction dépendante de l'IRES, constituant une cible d'intérêt dans une stratégie d'inhibition de la synthèse de la polyprotéine virale. Le complexe formé entre l'aptamère et la cible était de type ALIL. Nous avons caractérisé de nouveaux déterminants structuraux de cette interaction. La seconde sélection in vitro visait trois protéines de la matrice extracellulaire, appelées MMP-2, -7 et -9. Ces protéases sont impliquées dans plusieurs processus biologiques pathologiques. Un aptamère a été identifié contre la MMP-9 et utilisé comme sonde moléculaire. Ce travail montre l'intérêt de la technique SELEX pour identifier des ligands acides nucléiques contre différentes ciblesTwo SELEX strategies have been developed, on one hand against a nucleic acid target and on the other hand against a protein target. The first in vitro selection was directed against the domain II of the hepatitis C virus IRES, in order to select aptamers with high affinity and high specificity. The domain II plays a crucial role for the IRES-dependent translation and therefore represents a target of interest to prevent viral polyprotein synthesis. The selected aptamer formed with the target an ALIL complex. We characterized new structural determinants of this RNA/RNA interaction. The second in vitro selection was directed against three extracellular matrix proteins, named MMP-2, -7 and -9. These proteinases are involved in several pathological biological processes. An aptamer has been identified against the MMP-9 and used as a molecular probe on glioblastoma sections. This work demonstrates the interest of the SELEX strategy to identify nucleic acid ligands against different targets
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Fougiaxis, Vasileios. "Discovery and Optimization of ERAP1-Metalloprotease Inhibitors through Kinetic Target-Guided Synthesis and Fragment-Based Screening." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2024. http://www.theses.fr/2024ULILS030.
Full textAbstract:
L’endoplasmic reticulum aminopeptidase 1 (ERAP1) est une métalloprotéase à zinc de la famille M1, impliquée dans le processing des antigènes. Avec l’aminopeptidase homologueERAP2, elle intervient dans le clivage de l’extrémité N-terminale des peptides précurseurs afin de générer des épitopes matures et prêts à être chargés sur les molécules du complexe majeur d’histocompatibilité de classe I (CMH-I), induisant finalement la réponse immune cellulaire. La modulation d’ERAP1 par des petites molécules pour des applications thérapeutiques potentielles dans les maladies auto-immunes et l’immuno-oncologie est actuellement au centre d’efforts importants de recherche. L’inhibition sélective d’ERAP1 est un challenge en raison de la grande similarité structurale des protéines de la famille de M1-aminopeptidases. Il est donc impératif d’identifier et d’optimiser de nouveaux squelettes chimiques capables de moduler sélectivementERAP1.Dans la première partie de cette thèse, nous avons identifié et optimisé des inhibiteurs d’ERAP1par la KTGS (Kinetic Target-Guided Synthesis). La KTGS est une stratégie de synthèse des ligands guidée par les protéines elles-mêmes. Une librairie de 250 alcynes variés a été utilisée en combinaison (chimie "click") avec 13 porteurs d’une fonction azoture hydroxamate. ERAP1 a catalysé la synthèse de triazoles ciblant le site catalytique et les ligands assemblés ont été détectés par spectrométrie de masse. Nous avons identifié 18 « hits » présentant une inhibition micromolaire dose-dépendante de hERAP1. Des études de relation structure-activité ont permis de concevoir des analogues dont 3 inhibiteurs sont plus puissants (IC50 < 10 μM) que le hit initial.La deuxième approche a consisté en un criblage biochimique d’une librairie de fragments(∼3000 composés) sur hERAP1 (FBDD). Le FBDD permet d’identifier des composés de masse moléculaire faible qui peuvent ensuite être optimisés pour se lier plus efficacement aux poches protéiques. Après avoir appliqué divers filtres (confirmation de la dose-réponse, LE, LLE,disponibilité commerciale, accessibilité synthétique et potentiel de dérivatisation), nous avons sélectionné 13 chimiotypes (hits) qui ont été explorés et optimisés par « fragment growing ». Une série chimique dérivée de l’acide 2-thiénylacétique a été priorisée et des études de docking moléculaire ont permis de proposer un mode de liaison des analogues à hERAP1Endoplasmic reticulum aminopeptidase 1 (ERAP1) is a zinc-metalloprotease of the M1-family, implicated in the antigen processing and presentation pathway. Together with the highly homologous isoform ERAP2, they mediate the N-terminus trimming of peptide precursors in order to generate mature antigenic epitopes ready for loading upon major histocompatibility complex class I (MHC-I) molecules, ultimately eliciting T-cytotoxic cellular responses. Modulation ofERAP1 and putative therapeutic applications in autoimmune disorders and immune-oncology have been in the center of recent efforts to develop small molecules able to fine-tune immune dysregulation. Targeted and controlled inhibition of ERAP1 constitutes a challenging task because of the high structural similarity and broad substrate specificity within the M1-aminopeptidase subfamily. Therefore, the identification and optimization of potent and novel chemical scaffolds for selective modulation of ERAP1 is imperative. In the first part of the following PhD thesis we present and discuss the identification and development of ERAP1 inhibitors through kinetic target-guided synthesis (KTGS). KTGS is a protein-templated strategy able to provide potent hits against druggable targets. A library of 250diverse alkynes was used in combination (in situ “click” chemistry) with 13 in-house synthesized hydroxamate azide warheads. ERAP1 catalyzed the equilibrium-driven synthesis of 1,4- or 1,5-disubstituted hydroxamic acid triazole mixtures targeting the catalytic site and the assembled ligands were detected by mass-spectrometry. We successfully identified 18 hits displaying a dose dependent inhibition of hERAP1 at low micromolar range. These are appealing starting points for further hit-to-lead optimization and SAR studies leading to 3 inhibitors of improved potency (IC50< 10 μM). The second approach involved a fragment-based biochemical screening of a large in-house and commercial library (∼3000 fragment entries) against hERAP1. Fragment-based methods can identify low-molecular weight hits that can be optimized to bind into a small protein region more efficiently. After applying various filters (dose-response confirmation, LE, LLE, commercial availability, synthetic feasibility and derivatization potential) we selected 13 confirmed chemotypes (hits) that were further explored and optimized by fragment-growing efforts. One chemical series (2-thienylacetic acid) was prioritized and supplementary in silico docking studies were performed (catalytic and allosteric sites) to visualize the binding mode of the developed analogues
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Blankaert, Dominique G. I. "Actions régulatrices des cytokines dans des systèmes cellulaires impliqués dans les processus invasifs: étude de la balance Matrixines/Inhibiteurs tissulaires des métalloprotéinases dans les cellules endothéliales et tumorales, en particulier dans les cellules du sarcome de Kaposi." Doctoral thesis, Universite Libre de Bruxelles, 1994. http://hdl.handle.net/2013/ULB-DIPOT:oai:dipot.ulb.ac.be:2013/212635.
Full text
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Huet, Eric. "Contrôle des cascades protéolytiques (système plasminogène/plasmine et métalloprotéinases matricielles) impliquées dans la progression tumorale : stimulation par les peptides d'élastine et inhibition par l'acide oléique." Reims, 2001. http://www.theses.fr/2001REIMM206.
Full textAbstract:
Nous nous sommes intéressés au contrôle des cascades protéolytiques impliquées dans la progression tumorale (système plasminogène/plasmine et métallo-protéinases matricielles). Nous avons pu ainsi montrer que les peptides d'élastine augmentent à la fois la sécrétion et l'activation des cascades protéolytiques par des cellules BZR et HT-1080 en culture. Cette augmentation entraîne une stimulation des capacités de ces cellules à envahir un gel de Matrigel ou une matrice de collagène de type I. Nous avons pu également mettre en évidence une accélération du processus d'angiogenèse par des HUVECs incubées en présence de peptides d'élastine. Ce phénomène est corrélé avec une augmentation de l'expression de la MT1-MMP et de l'activation de la MMP-2. Le contrôle des cascades protéolytiques apparaît comme une cible thérapeutique importante dans le traitement des cancers. Nous avons pu ainsi montrer que l'acide oléique inhibait à la fois l'activation et l'activité des cascades protéolytiquesWe here investigated the control of the proteolytic cascades implicated in tumoral progression (plasminogen/plasmin system and matrix metalloproteinases). Thus, we showed that elastin peptides stimulated proteolytic cascades by both BZR and HT-1080 cells. This stimulation enhanced the invasive capacity of cells toward Matrigel or type I collagen matrix. We could also evidenced the acceleration of angiogenesis when HUVECs were incubated with elastin peptides. This effect was correlated with an enhancement of MT1-MMP secretion and MMP-2 activation. The control of the proteolytic cascades appeared to be important for cancer treatment. Long chain unsaturated fatty acids as oleic acid were found to inhibit both proteolytic cascades activation and activity
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Cousaert, Nicolas. "Conception et synthèse d'inhibiteurs de métalloprotéases et de cibles à ligand acide." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2008. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00356629.
Full textAbstract:
L'objectif de ce travail était de développer de nouvelles voies d'obtention de produits acides potentiellement ligand du zinc dans le cadre d'un projet plus vaste mené au laboratoire sur deux cibles biologiques appartenant à la famille des métalloprotéases à zinc, l'aggrécanase et l'enzyme de conversion de l'angiotensine de type 2.La stratégie chimique utilisée a été la phase solide à l'aide d'une résine chlorure de trityle. La synthèse a été effectuée à partir de dérivés amino-acide protégés par un carbamate de fluorénylméthyle ou d'éthylène-oxy-triméthyle silicium permettant une déprotection en parallèle de la fonction amine une fois la fonction acide fixée à la résine. Nous avons obtenu une chimiothèque de 400 composés. A partir de ces 400 produits un hit a été identifié comme inhibiteur potentiel de l'aggrécanase 2. Des études de relations structures activités d'analogues de ce hit sont actuellement en cours.
En parallèle, comme le tétrazole fait partie des fonctions chimiques potentiellement ligand du zinc et est une fonction phare dans le développement d'inhibiteurs du récepteur à l'angiotensine 2 (AT1), nous avons développé une nouvelle technique de greffage de tétrazole sur résine et de synthèse de chimiothèque biphényltétrazole.Ces travaux ont permis la mise au point d'une nouvelle méthode de synthèse de biphényltétrazole en phase homogène au micro-onde et la synthèse innovante de dérivés biphényltétrazole en phase solide exemplifié par la synthèse de l'irbésartan en phase solide.
Nous avons ensuite développé des dérivés biphényltétrazole pyrazole. Pour cette famille de molécules, nous avons exploité les études effectuées sur la réaction de Buchwald que nous avons adaptée à nos composés. De plus ces mêmes travaux ont permis la mise au point d'une nouvelle réaction d'obtention de dérivés para-iodophényle pyrazole en une seule étape et qui ouvre une nouvelle voie rétrosynthétique de dérivés phényle pyrazole. Cinq de ces produits ont montré sur activité sur le récepteur AT1.
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Peco, Emilie. "Contrôle du cycle cellulaire et neurogenèse dans la moelle épinière embryonnaire des vertébrés : rôle de la phosphatase CDC25B." Toulouse 3, 2008. http://thesesups.ups-tlse.fr/485/.
Full textAbstract:
L'asthme allergique est une maladie inflammatoire chronique des voies respiratoires en forte augmentation. Deux sous populations de lymphocytes T CD4+ , les lymphocytes Th1 et Th2, diffèrent par leur fonction. Les lymphocytes Th 1 sécrètent de l'interféron gamma et les lymphocytes Th2 produisent de l'IL-4, 5 et 13. Les lymphocytes Th2 ont un rôle central dans la réaction inflammatoire caractéristique de l'asthme. Les voies de signalisation et surtout la régulation du calcium sont différentes entre les lymphocytes Th1 et Th2. Nos résultats montrent que les lymphocytes Th2 expriment spécifiquement des canaux calciques récepteurs aux dihydropyridines et que ces canaux sont absents des lymphocytes Th1. Ces canaux sont activés après stimulation du TCR et sont important pour la signalisation calcique et la production de cytokines Th2 (IL 4,IL 5 et IL-13). J'ai participé à montrer que la protéine kinase G est impliquée dans l'entrée de calcium dépendante des récepteurs aux dihydropyridines. Des études in vitro et in vivo montrent que l'inactivation de ces canaux inhibent la fonction des lymphocytes Th 2 avec un effet bénéfique dans l'asthme allergique expérimentale. Ces résultats montrent que des canaux calciques récepteur aux dihydropyridines exprimés spécifiquement par les lymphocytes Th 2 sont essentiels pour leur fonction. Cette voie pourrait être une nouvelle cible thérapeutique dans le traitement de l'asthme allergiqueAllergic asthma is a chronic inflamatory disease of the lungs which prevalence and severity are both increasing. CD4+ T cell subsets include Th1 cells that produce interferon-g (IFNg) and Th2 cells that produce interleukin 4,5 and 13. Th2 cells are considered as orchestrating the inflammatory reaction characteristic of asthma. Signaling pathways and especially calcium regulation differ between Th1 and Th2 cells which could offer an opportunity for the development of new therapies targeting calcium signaling in Th2 cells. We showed that voltage-operated calcium (Cav1) channels, that are characterised as dihydropyridine receptors (DHPR) in excitable cells, are specifically expressed in Th2 cells and not in Th1 cells. These channels are involved in TCR-dependent calcium response and in Th2-cytokine production (IL-4, IL-5, IL-10 and IL-13). I contributed to show that protein kinase G is implicated in calcium entry dependent on dihydropyridine receptors. In vitro and in vivo studies show that the inactivation of these channels inhibits Th2 cells functions with a beneficial effect in allergic asthma. These results show that dihydropyridine receptors calcium channels specifically expressed by Th2 cells are essential for their function. Targeting these channels is a rationale for the development of new therapies in the treatment of allergic asthma
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Mautino, Gisèle. "Augmentation de la production de la métalloprotéinase matricielle-9 et de son inhibiteur dans l'asthme, régulation de leur expression." Montpellier 1, 1997. http://www.theses.fr/1997MON13531.
Full text
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Paumier, Jean-Michel. "Métalloprotéases matricielles et maladie d'Alzheimer : étude des rôles de MT1- et MT5-MMP dans l'amyloïdogenèse et la neuro-inflammation." Thesis, Aix-Marseille, 2018. http://www.theses.fr/2018AIXM0709.
Full textAbstract:
Au cours de mon doctorat, j’ai étudié le rôle des métalloprotéases MT1- et MT5-MMP dans la maladie d'Alzheimer (MA). In vivo, nos travaux montrent un effet bénéfique de la délétion en MT5-MMP chez le modèle murin 5xFAD de la MA qui se caractérise par : i) une diminution des taux de métabolites toxiques de l’APP, dont le C99 et l’Aβ ; ii) une réduction de la réponse inflammatoire avec des taux diminués de cytokines pro-inflammatoires ; iii) une préservation de l’intégrité des réseaux neuronaux, des activités synaptiques et des performances cognitives. In vitro, nous montrons que MT5-MMP interagit avec l’APP, accroît sa localisation dans les endosomes précoces - l’un des sièges importants de l’activité de BACE-1 (beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1) et de la γ-sécrétase - et augmente la libération d’Aβ. Après surexpression dans des cellules HEK (human embryonic kidney) exprimant de manière stable la mutation Swedish de l’APP (HEKSwe), nous montrons que MT1-MMP stimule la production de C99 et d’Aβ selon un processus dépendant de l'activité de BACE-1. MT1-MMP interagit avec l’APP et le clive en partenariat avec MMP-2 pour générer deux fragments aux propriétés inconnues. MT1-MMP, comme MT5-MMP, favorise le trafic de l’APP vers les endosomes, pouvant expliquer son potentiel pro-amyloïdogénique. Enfin, la surexpression d’une forme catalytiquement inactive de MT1-MMP n’induit aucun des effets observés avec la forme active de la protéase. L’ensemble de ces travaux permet d’envisager MT1- et MT5-MMP comme de nouvelles cibles thérapeutiques pour cibler à la fois les processus pro-amyloïdogéniques et pro-inflammatoires caractéristiques de la MADuring my Ph.D., I studied the role of metalloproteinases MT1- and MT5-MMP in Alzheimer's disease (AD). In vivo, our work demonstrates a beneficial effect of the MT5-MMP deletion in the 5xFAD mouse model of AD, which is characterized by: i) a decrease in the levels of toxic metabolites of APP, including C99 and Aβ ; ii) a reduction in the inflammatory response with decreased levels of pro-inflammatory cytokines; iii) preservation of the integrity of neural networks, synaptic activities and cognitive performance. In vitro, we show that MT5-MMP interacts with APP, increases its localization in early endosomes - one of the important sites of BACE-1 (beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1) γ-secretase - and increases the release of Aβ. After overexpression in HEK (human embryonic kidney) cells stably expressing the Swedish APP mutation (HEKSwe), we show that MT1-MMP stimulates the production of C99 and Aβ according to a process dependent on BACE-1. Our data indicates that MT1-MMP interacts with the APP and cleaves it in partnership with MMP-2 to generate two fragments with unknown properties. MT1-MMP, like MT5-MMP, favors the trafficking of APP to early endosomes, which may explain its pro-amyloidogenic potential. Finally, overexpression of a catalytically inactive form of MT1-MMP induces none of the effects observed with the active form of the protease. All of this work makes it possible to consider MT1- and MT5-MMP as new therapeutic targets to target both pro-amyloidogenic and pro-inflammatory processes characteristic of AD
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He, Ben. "Design, Synthesis And Evaluation Of ERAP/IRAP Inhibitors." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2024. http://www.theses.fr/2024ULILS032.
Full textAbstract:
ERAP1, ERAP2 et IRAP sont trois zinc metalloprotéases de la famille M1, impliquées dans divers processus biochimiques. Parmi leurs fonctions, le rôle des ERAPs et d'IRAP dans la présentation antigénique est particulièrement intéressant. En clivant les précuseurs en N-terminal, elles génèrent des peptides antigéniques de longueur appropriée pour être compléxés avec les molécules de CMH de classe I, régulant ainsi la réponse immunitaire. Des études génétiques ont établi un lien entre les niveaux d'expression et les mutations de ces enzymes avec des maladies auto-immunes (MHC-Iopathies), des infections virales ou bactériennes, ainsi que le cancer. Par conséquent, le développement d'inhibiteurs sélectifs de ces enzymes pourrait offrir de nouveaux traitements dans ces pathologies.Il existe plusieurs groupes capables de se lier au zinc, tels que les acides carboxyliques, les benzamides, les thiols et les acides hydroxamiques. Les inhibiteurs à base d'acides hydroxamiques présentés dans ce travail sont inspirés d'un inhibiteur dePfAM1, métalloprotéase plasmodiale de la famille M1. A partir de ces inhibiteurs,plusieurs inhibiteurs micromolaires des ERAPs ont été obtenus et optimisés pour donner des inhibiteurs puissants d’ERAP1 et/ou IRAP. Ces composés optimisés ont servi de point de départ pour cette thèse visant à concevoir, à synthétiser et caractériser biologiquement des inhibiteurs sélectifs d'ERAP1 et/ou d'IRAP. Dans cette thèse, trois séries d'inhibiteurs ont été particulièrement étudiées. Parmi les molécules, un inhibiteur nanomolaire et sélectif d'IRAP a été obtenu, ainsi que plusieurs inhibiteurs sub-micromolaires pour ERAP1 et IRAP. Certains de ces inhibiteurs ont également démontré une efficacité dans la présentation croisée des antigènes en test cellulaireERAP1, ERAP2, and IRAP are three zinC-containing M1 family enzymes involved invarious biochemical processes in the human body. Among their functions, the role of ERAPs and IRAP in antigen processing is particulary interesting. By cleaving precursors at the N-terminus, ERAP1, ERAP2, and IRAP generate antigens of proper length to form complexes with MHC-I molecules, therefore regulating the immune response. Genetic studies have linked the expression levels and mutations to autoimmune disease (MHC-Iopathies), infectious diseases as well as cancer. Therefore, developing selective inhibitors of these enzymes may provide new clinical treatments for these diseases. There are multiple zinC-binding groups available, such as carboxylic acids,benzamides, thiols, and hydroxamic acids. The hydroxamic acid-based inhibitors of this work was inspired by inhibitors of PfAM1, a plasmodial metalloprotease of the M1 family. Initial pharmacomodulation allowed to obtain micromolar inhibitors of ERAPs. These hit compounds were further optimized, resulting in several potent inhibitors of ERAP1 and/or IRAP. These compounds serve as the starting point for this thesis, to design, synthesize and characterize biologically selective ERAP1 and/or IRAP inhibitors. In the thesis, three series of small molecule inhibitors were developed and synthesized. Docking was used to propose new structures and to rationalize the activity and selectivity of the inhibitors. Among these compounds, a nano-molar selective IRAP inhibitor was identified, along with several sub-micromolar inhibitors for both ERAP1 and IRAP. Some of these inhibitors also demonstrated potency in a cellular antigen cross-presentation assay
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Lavergne, Marion. "Rôle du TFPI-2, un inhibiteur de protéases à sérine, dans la progression des cancers broncho-pulmonaires à petites cellules." Thesis, Tours, 2013. http://www.theses.fr/2013TOUR3307.
Full textAbstract:
Les cancers broncho-pulmonaires à petites cellules (CBPPC), tumeurs endocrines représentant 20% des cancers pulmonaires, sont fortement associés au tabagisme. Ils sont très agressifs en raison de leur progression rapide et de la présence de métastases souvent présentes au moment du diagnostic. Moins de 10% des patients sont opérables et la plupart des échantillons de tumeurs sont recueillis par endoscopie bronchique ou par médiastinoscopie. Dans ce travail de thèse, nous avons montré que l’expression du TFPI-2, un gène suppresseur de tumeur, était diminué dans 65% des cas de CBPPC. Afin d’étudier l’impact du TFPI-2 sur la progression tumorale, nous avons préalablement développé un modèle orthotopique murin de CBPPC qui mime le développement de ce type de cancer pulmonaire. Des cellules NCI-H209, n’exprimant pas le TFPI-2, ont été préalablement transfectées pour exprimer la luciférase et la croissance tumorale a été suivie par imagerie de bioluminescence. L’expression du TFPI-2 a ensuite été restaurée dans ces cellules et nous avons montré que la croissance tumorale était alors réduite. Cet effet peut s’expliquer par une diminution de la prolifération des cellules exprimant le TFPI-2, associée à un arrêt du cycle cellulaire en phase G1/S dû à l’expression de p15 et de p27 et à une induction de l’apoptose. Nous avons aussi démontré que lorsque le TFPI-2 est surexprimé, les transcrits et les protéines MMP-1 et -3 sont diminuées, tout comme la phosphorylation des protéines de la voie des MAP Kinases impliquées dans l’induction des transcrits de ces MMP. Cette corrélation entre l’expression du TFPI-2 et la diminution de celle de la MMP-1 a été retrouvée dans 35% des échantillons de CBPPC humains. Ces résultats suggèrent que l’inactivation du TFPI-2 dans les CBPPC peut favoriser le développement de ce cancer. Enfin, nous avons également démontré, pour la première fois que le TFPI-2 peut aussi inhiber la kallicréine 12, une protéase à sérine potentiellement anti-angiogénique. L’ensemble de ces données suggèrent que le TFPI-2 peut être un potentiel biomédicament capable de limiter la progression des carcinomes pulmonaires à petites cellulesSmall Cell Lung Cancer (SCLC) is the most common neuroendocrine tumour of the lung (15% of cases) and is strongly associated with smoking. It is characterised by tumours that grow rapidly with early metastases. Less than 10% of patients with SCLC have a resectable tumour, thus surgical specimens are scarce and most tumour samples come from small biopsies obtained during bronchial endoscopy or mediastinoscopy. In this study, low levels of TFPI-2 expression were found in 65% of patients with SCLC. To study the impact of TFPI-2 in tumour progression, we first developed a clinically relevant animal model that resembles various stages of human SCLC. NCI-H209 cells, not expressing TFPI-2, were genetically modified to express firefly luciferase and the growth of the tumour was sensitively followed by bioluminescence imaging. TFPI-2 was then overexpressed in these cells and we showed that TFPI-2 inhibited lung tumour growth. Such inhibition could be explained in vitro by a decrease in tumour cell proliferation, blockade of G1/S phase cell cycle transition due to p15 and p27 expression, and an increase in apoptosis shown in NCI-H209 cells expressing TFPI-2. We also demonstrated that TFPI-2 upregulation in NCI-H209 cells decreased MMP expression, particularly by downregulating MMP-1 and MMP-3. Moreover, TFPI-2 inhibited phosphorylation of the MAPK signalling pathway proteins involved in the induction of MMP transcripts, among which MMP-1 was predominant in SCLC tissues and was inversely expressed with TFPI-2 in 35% of cases. These results suggest that downregulation of TFPI-2 expression could favour the development of SCLC. Finally, we also demonstrated for the first time that TFPI-2 could inhibit the kallikrein 12, an anti-angiogenic serine proteinase. Altogether, these results suggest that TFPI-2 could be a new potent therapeutic agent to control SCLC tumour progression in SCLC
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Ould-Yahoui, Adlane. "Le système MMP/TIMP dans la croissance neuritique et la motilité des cellules souches de la muqueuse olfactive." Thesis, Aix-Marseille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011AIX20672.
Full textAbstract:
Les métalloproteases matricielles (MMPs) appartiennent à une famille d'endopéptidases dépendantes du zinc, présentent sous forme secrétée ou membranaire (MT-MMP) et qui jouent un rôle fondamental dans la signalisation cellulaire. L'activité des MMPs est régulée par leur inhibiteurs endogènes, les inhibiteurs tissulaires des MMPs (TIMPs). Le système MMP/TIMP régule les interactions cellule-cellule et cellule-matrice extra cellulaire et module la motilité cellulaire par clivage protéolytique des composants de la matrice extra cellulaire aussi bien lors de processus physiologiques que dans des situations pathologiques.Dans un premier temps, nous avons mis en évidence le rôle de TIMP-1 dans la modulation de la croissance neuritique et la morphologie neuronale, via l'inhibition de MMP-2 et non de MMP-9. souches de la muqueuse olfactive (OE-MSCs). Nous montrons dans cette étude que les gélatinases MMP-2 et MMP-9 ainsi que la MMP membranaire MT1-MMP, sont impliquées dans la migration des OE-MSCs. Nous montrons également que les gélatinases sont probablement impliquées dans les propriétés neurotrophiques des OE-MSCs et des cellules engainantes olfactives.L'ensemble de ces résultats apporte de nouveaux éléments fondamentaux, dans la compréhension du rôle du système MMP/TIMP dans les processus post-lésionnels qui ont lieu au sein du système nerveux centralThe matrix metalloproteinases (MMPs) belong to a growing family of Zn2+-dependent endopeptidases, secreted or membrane-bound (MT-MMP), which play a fundamental role in the cell signalling. The activity of the MMPs is regulated by their endogenous inhibitors, the tissue inhibitors of MMPs (TIMPs). The MMP / TIMP system regulates the cell-cell and cell-extracellular matrix interactions and modulates the cellular motility through the cleavage of protein components of the extracellular matrix, as well during physiological and pathological conditions.Our results suggest that TIMP-1 is implicated in the modulation of the neurite outgrowth and morphology of cortical neurons through the inhibition at least in part, of MMP-2 and not MMP-9. Afterward, we study of the system MMP / TIMP in the migration of the stem cells of olfactory ectomesenchymal stem cells (OE-MSCs). We show that gelatinases MMP-2 and MMP-9 as well as MT1-MMP, are involved in OE-MSCs migration. We also show that gelatinases are probably involved in neurotrophic properties of the OE-MSCs and olfactory ensheathing cells.Altogether, these results provide new evidences on the role of MMP/TIMP system in central nervous system post-lesional processes
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Gaud, Guillaume. "Impact d'un inhibiteur de protéases à sérine, le TFPI-2, sur le microenvironnement tumoral pulmonaire." Thesis, Tours, 2009. http://www.theses.fr/2009TOUR4007/document.
Full textAbstract:
Le TFPI-2 (Tissue factor pathway inhibitor 2 est un inhibiteur de la plasmine qui peut limiter la génération de métalloprotéases (MMP) et réduire ainsi le potentiel invasif des cellules tumorales, essentiel à la formation de métastases. Deux clones cellulaires inactivés pour le TFPI-2 par une stratégie d’ARN interférence ont été réalisés (miRNA-1b et -2b). Ces clones ont un pourcentage de migration et d’invasion 2 à 3 fois supérieur au clone contrôle, associé à une plus grande adhérence à la laminine et au collagène IV et à une augmentation de l’expression des MMP-1 et –3. En cocultures directes avec des fibroblastes pulmonaires sains, une augmentation des MMP-3, -7 et–13 a été observée avec les clones miRNA-1b et -2b. En présence des milieux conditionnés des ces clones, une potentialisation de la surexpression des MMP-1, -3, -7 a été observée. Cette étude nous a permis de démontrer que le TFPI-2 a un impact sur les gènes impliqués dans le remodelage de la MEC, notamment lors des interactions entre les cellules tumorales et les cellules stromalesTFPI-2 (Tissue factor pathway inhibitor-2), an inhibitor of serine proteinases, particularly plasmin, can indirectly regulate the activation of MMPs, thus regulating ECM degradation and tumour cell invasion. Our results demonstrated that TFPI-2 silencing was associated with a 2 and 3-fold increase in invasive ability through basement membrane components, for clones NCI-H460 miRNA-1b and -2 respectively, associated with an increased in the relative attachment towards laminin and collagen IV and MMP-1 and MMP–3 overexpression. In direct coculture with fibroblasts, an increase in MMP-3, -7 and -13 transcriptional expression was observed when CCD19-Lu cells were cocultured with both miRNA-1b or -2b clones. In indirect coculture, allowing contact between fibroblasts and NCI-H460 clones conditioned media, an increase in MMP-1, -3 and -7 fibroblastic expression was measured. This study has demonstrated that TFPI-2 can influence ECM remodelling-associated genes and then act as a pericellular proteolysis inhibitor, particularly at the tumour-stroma interface
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Bednarek, Nathalie. "Mmp-2, -9, timp-1, -2 : recherche de biomarqueurs de lésions cérébrales chez l'enfant prématuré et à terme." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077103.
Full textAbstract:
Les atteintes cérébrales périnatales sont une cause majeure de décès ou de handicap. TJôtre hypothèse est que les MMP-2 et -9 et les TIMP-1, -2 pourraient être des marqueurs précoces de ces lésions cérébrales. Le profil cortical des MMP-2, -9, TIMP-1 et -2 a été étudié de la vie embryonnaire à l'âge adulte. Les profils plasmatiques de nouveaux-nés ont été étudiés en fonction de l'âge gestationnel, du sexe et des pathologies rencontrées en période néonatale. Le profil des MMP-2, -9, TIMP-1 et -2 ont été étudiés au niveau du cortex et du plasma dans des modèles animaux. MMP-2, leTIMP-1 et le TIMP-2 sont très exprimés respectivement pendant la période embryonnaire et en post-natal. MMP-9 est peu exprimée quel que soit le temps étudié. Le sexe n'influence pas l'expression des MMP-2 et -9 et des TIMP-1 et -2 chez l'animal et chez l'homme. Les MMP-9 et TIMP-1 sont élevés spécifiquement en cas d'EAI dans le plasma humain mais aussi chez la souris. Chez le nouveau-né présentant des lésions de substance blanche, il n'est pas observé de modifications des concentrations des MMP-9 et TIMP-1 alors que, chez l'animal, TIMP-1 s'élève exclusivement, de façon transitoire, dans le cortex et le plasma. Cette étude préliminaire apporte des arguments justifiant des explorations complémentaires concernant la MMP-9 et le TIMP-1 en tant que marqueurs de sévérité et pronostic de l'EAIThe perinal brain injuries are a major cause of death or handicap. We hypothezise that the MMP-2, -9, and the TIMP- 1 and 2 could be early markers of these cerebral lesions. The cortical profile of MMP-2, -9, TIMP-1 and -2 was studied during embryonic life to adulthood. The plasmatic neonatal profiles were studied according to the gestational age, gender and neonatal pathologies. They were also studied in animal models of perinatal brain injuries. MMP-2, TIMP-1 are largely expressed during embryonic life and TIMP-2 more likely in early post-natal period. MMP-9 is quasi undetectable whatever the moment. Gender does not influence the expression of MMP-2, -9 and their inhibitors in the new-born as well as in the mouse. In ischemic encephalopathy, MMP-9 and TIMP- 1 are specifically raised in new-born plasma but also in mice brain and plasma. In PWMD new-born, no gelatinase or inhibitor elevation was seen, but in mouse cortex and plasma, an exclusive and transitory raise of TIMP-1 is obvious. This preliminary study brings arguments to explore MMP-9 and TIMP-1 as severity and prognosis markers in hypoxic-ischemic encephalopathy
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Yao, Pin Mei. "Métalloprotéinases de la matrice extracellulaire et cellules épithéliales bronchiques humaines : caractérisation et régulation de l'expression des gélatinases 72 et 92 kDa et de leur inhibiteur (TIMP-1) en réponse à des agents infectieux et inflammatoires : rôle modulateur de la matrice extracellulaire." Paris 12, 1997. http://www.theses.fr/1997PA120016.
Full textAbstract:
Les cellules epitheliales bronchiques humaines (cebhs) sont appelees a jouer un role important, d'une part au cours de la croissance et du developpement pulmonaire, d'autre part sur le metabolisme de la matrice extracellulaire sous-jacente. Elles contribuent ainsi a maintenir l'integrite structurale et fonctionnelle pulmonaire. Pendant le processus de reepithelialisation survenant apres une agression bronchique, les cebhs peuvent se detacher de la membrane basale et migrer pour recouvrir la surface matricielle exposee. Ce processus est probablement module par les metalloproteinases de la matrice extracellulaire (mmps). Nous avons donc developpe deux axes de travail, bases sur une approche methodologique de type enzymatique, immunologique et par rt-pcr quantitative : 1) la caracterisation des gelatinases et de leur inhibiteur (timp-1) exprimes par les cebhs a l'etat basal, sachant que les gelatinases sont impliquees dans la degradation specifique de composants de la membrane basale. 2) etude de la regulation de l'expression de ces gelatinases et du timp-1 en reponse a l'endotoxine lps, aux cytokines inflammatoires il-1 et tnf, et a la matrice extracellulaire en tant que substrat de culture. La premiere partie de nos etudes examina la capacite des cebhs en culture primaire et issues d'explants bronchiques humains a generer des gelatinases, soit dans des conditions basales, soit en reponse a un stimulus de type infectieux, l'endotoxine lipopolysaccharidique (lps) issue d'escherichia coli. Cette approche methodologique repondait au souci de nous rapprocher le plus possible de conditions physiologiques. Cette etude a clairement demontre que la gelatinase 92 kda etait la gelatinase majoritairement exprimee par les cebhs, tant au niveau de la proteine qu'au niveau des arnm, et qu'elle etait sur-exprimee en reponse au lps, mettant ainsi l'accent sur la potentialite des cebhs a participer au remaniement des membranes basales sous-jacentes. La seconde partie de nos etudes exa mina la capacite des cebhs a reguler l'expression de la gelatinase 92 kda, via son inhibiteur preferentiel, le timp-1. En effet, il est bien connu que les mmps peuvent etre inhibees par une famille de timps dont les timp-1, timp-2 sont actuellement les mieux connus. Ces timps sont en general issus des memes cellules que celles generant les mmps et jouent un role cle pour controler in situ la liberation excessive de mmps. Effectivement, nos resultats montrent que les cebhs, dans les memes conditions de culture primaire que precedemment, sont capables, au niveau basal, d'exprimer et de secreter le timp-1. De plus, la mise en evidence d'un desequilibre de la balance entre timp-1 et gelatinase 92 kda au profit de la gelatinase, en reponse au lps et a des cytokines pro-inflammatoires telles que l'il-1 et le tnf, conforte le role fondamental susceptible d'etre joue par les cebhs au cours de desordres inflammatoires des espaces bronchiques. La troisieme partie de notre etude examina la modulation des gelatinases exprimees par les cebhs en fonction de la nature du substrat matriciel utilise (collagene de type iv ou melange de collagene de types i + iii) au cours de cultures primaires et a permis de preciser plusieurs elements de reponse differentielle permettant de conforter le role specifique de la matrice extracellulaire sur l'expression des metalloproteinases qui la degradent : un role promoteur du phenotype de resorption active des cebhs en reponse au collagene de types i + iii, par opposition au phenotype homeostasique observe en reponse au collagene de type iv. En conclusion, en mettant en evidence la capacite susceptible d'etre exercee par les cebhs pour remanier et degrader les membranes basales ou la matrice extracellulaire sous-jacente, et plus particulierement en reponse a des stimuli inflammatoires et infectieux, ces etudes nous permettent de proposer un role cle pour les cebhs au cours du remaniement physiologique et physiopathologique des structures matricielles sous-jacentes. Elles nous ont egalement permis d'etayer le role modulateur essentiel joue par la matrice extracellulaire elle-meme sur la regulation des gelatinases impliquees dans le remaniement de cette matrice.
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Kraupner, Nicolas. "Conception d'outils pharmacologiques pour comprendre le rôle de l'Insulin Degrading Enzyme (IDE) dans la gestion du stress protéotoxique." Electronic Thesis or Diss., Université de Lille (2022-....), 2022. http://www.theses.fr/2022ULILS039.
Full textAbstract:
L'Insulin Degrading Enzyme (IDE) est une métalloprotéase à zinc ubiquitaire retrouvée dans les compartiments extracellulaires et intracellulaires. IDE est impliquée dans la dégradation de peptides physiologiquement importants tels que l'insuline et d'autres peptides amyloïdogènes. Cependant, elle est remarquablement conservée dans les espèces et les tissus ne produisant pas ces peptides substrats. Cette observation suggère un rôle important d'IDE, non complétement identifié, et pas seulement corrélé à son activité catalytique. IDE est une enzyme pour laquelle on continue de découvrir de nouvelles implications biologiques et sa caractérisation est nécessaire pour mieux comprendre ces nouveaux rôles physiologiques ou pathologiques. En particulier, ces dernières années des études ont mis en évidence le lien entre IDE et le stress du réticulum endoplasmique (ER) notamment dans la voie ubiquitine-protéasome et la voie de l'Unfolded Protein Response (UPR). L'unité a récemment breveté l'utilisation d'une première série d'inhibiteurs d'IDE dont le chef de file est le BDM 44768 pour booster des cytotoxiques, notamment les inhibiteurs du protéasome tels que le carfilzomib, un des traitements de référence du myélome multiple.Basé sur cette série chimique du BDM 44768 et guidé par la structure cristallographique de nos composés dans IDE, plusieurs modulations ont été réalisées sur quatre différentes parties du pharmacophore ainsi que l'élaboration d'une série macrocyclique. Ces pharmacomodulations ont permis l'obtention de plusieurs molécules puissantes avec une activité de l'ordre du nanomolaire et possédant des propriétés pharmacocinétiques qui pourraient permettre leurs utilisations dans des modèles in vivo.Dans le but d'explorer les fonctions et l'implication d'IDE dans différents processus cellulaires cette thèse a également permis la conception et la synthèse de différents outils chimiques d'exploration. Premièrement, suite aux différents modes de liaison de nos molécules dans IDE, deux séries de sondes PROTAC ont été synthétisées. Leurs évaluations biologiques ont révélé qu'elles n'induisent pas la dégradation d'IDE mais de deux autres protéines, une protéine homologue à IDE, la pitrilysine, ainsi que la DPP3, une dipeptidyl peptidase. Pour terminer, deux sondes fluorescentes, qui restent à être optimisées, ont été conçues et synthétisées afin de pouvoir suivre la localisation d'IDE au sein de la cellule et plus particulièrement dans le réticulum endoplasmique dans le but de corréler cette localisation au cours du temps avec les effets sur les protéines de l'UPR et le stress réticulaire.Ainsi, lors de cette thèse de précieux résultats pour concevoir de futurs outils chimiques permettant l'étude d'IDE et l'élucidation des différents rôles de cette protéine ont été obtenus. De plus, plusieurs petites molécules puissantes, modulant l'activité d'IDE, ont été synthétisées dans le but de répondre aux différents besoins thérapeutiques associés à cette cibleInsulin Degrading Enzyme (IDE) is a ubiquitous zinc metalloprotease found in extracellular and intracellular compartments. IDE is involved in the degradation of physiologically important peptides such as insulin and other amyloidogenic peptides. However, it is remarkably conserved in species and tissues that do not produce these substrate peptides. This observation suggests an important role for IDE, not fully identified, and not only correlated with its catalytic activity. IDE is an enzyme for which new biological implications continue to be discovered and its characterization is necessary to better understand these new physiological or pathological roles. In particular, in the last few years studies have highlighted the link between IDE and endoplasmic reticulum (ER) stress, notably in the ubiquitin-proteasome pathway and the Unfolded Protein Response (UPR) pathway.The unit has recently patented the use of a first series of IDE inhibitors, with the BDM 44768 as lead compound, to boost cytotoxics, including proteasome inhibitors such as carfilzomib, one of the gold standard treatments for multiple myeloma.Based on this chemical series of BDM 44768 and guided by the crystallographic structure of our compounds in IDE, several modulations were performed on four different parts of the pharmacophore as well as the development of a macrocyclic series. These pharmacomodulations resulted in several potent molecules with nanomolar activity and pharmacokinetic properties that could allow their use in in vivo models.In order to explore the functions and involvement of IDEs in different cellular processes, this thesis also allowed the design and synthesis of different chemical exploration tools. First, following the different binding modes of our molecules in IDE, two series of PROTAC probes were synthesized. Their biological evaluations revealed that they do not induce the degradation of IDE but of two other proteins, a protein homologous to IDE, pitrilysin, and DPP3, a dipeptidyl peptidase. Finally, two fluorescent probes, that still need to be optimized, were designed and synthesized in order to be able to follow the localization of IDE within the cell and more particularly in the endoplasmic reticulum with the aim of correlating this localization over time with the effects on the UPR proteins and reticular stress.Thus, during this thesis, valuable results to design future chemical tools to study IDE and to elucidate the different roles of this protein were obtained. In addition, several potent small molecules modulating the activity of IDE were synthesized in order to address the different therapeutic needs associated with this target
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Czarny, Bertrand. "Déterminants moléculaires d’un inhibiteur sélectif de la MMP-12 par approches pluridisciplinaires combinant la cristallographie et la microcalorimétrie." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05P634.
Full textAbstract:
Le RXP470.1 est l’un des premiers inhibiteurs puissants de la MMP-12, une métalloprotéase à zinc impliquée dans de nombreuses pathologies comme l’athéroclérose et la bronchopneumopathie obstructive chronique (BPCO). Pour comprendre les bases moléculaires contrôlant l’interaction de cet inhibiteur avec sa cible, des approches pluridisciplinaires associant des relations structure-activité, avec des études de cristallographie de complexes enzymes inhibiteurs et d’études de microcalorimétrie, décrivant les contributions enthalpiques et entropiques impliquées dans la formation des complexes, ont été réalisées dans ce travail de thèse. Les affinités de trois analogues du RXP470.1 ont été tout d’abord déterminées. Puis quatre structures cristallographiques de complexes enzyme/inhibiteur décrivant le mode d’interaction duRXP470.1 et de ces trois analogues ont été obtenues avec des résolutions de 1.15 Å, 1.50 Å, 1.50Å et 1.30 Å, respectivement. Parallèlement les études de microcalorimétrie ont été menées pour étudier les facteurs énergétiques contrôlant l’interaction du RXP470.1 avec la MMP-12. Les résultats indiquent que la présence d’une chaîne latérale très longue et hydrophobe en position P1’de l’inhibiteur s’insérant dans la cavité S1’ de la MMP-12 est essentielle à la très bonne affinité de cet inhibiteur pour la MMP-12. Cette interaction met essentiellement en jeu un effet entropique très important de - 4 kcal/mol. L’interaction du RXP470.1 est aussi essentiellement dirigée par une forte augmentation d’entropie (-TDS= -10 kal/mol) et une composante enthalpique beaucoup plus faible (DH= -2.5 kcal/mol), et ce malgré l’observation dans le cristal de nombreuses interactions entre l’inhibiteur et le site actif de la MMP-12. L’étude de microcalorimétrie met aussi en lumière la prise d’un proton au cours de la formation du complexe enzyme inhibiteur impliquant deux résidus chargés négativement en solution, le résidu catalytique Glu219 et le groupe phosphoryle chélatant du zinc dans l’inhibiteur. Cette étude révèle aussi que si le groupe phosphoryle est considéré comme un chélatant faible de l’atome de zinc, il impose néanmoins des contraintes directionnelles très importantes qui ont un impact sur le positionnement des autres parties de l’inhibiteur dans le site actif de l’enzyme. Ce dernier effet pourrait expliquer pourquoi un certain nombre d’interactions entre l’inhibiteur et l’enzyme ne sont pas optimisées et pourquoi la variation d’enthalpie pour former le complexe reste relativement faible. Cette étude ouvre maintenant la voie à d’autres études en plaçant au centre des futurs travaux le rôle du groupe chélatant dans la conception des inhibiteurs de MMP, ainsi de nouveaux inhibiteurs puissants et sélectifs d’autres MMP devraient voir le jour grâce à ce travail et aux résultats obtenusRXP470.1 is one of the first highly potent and selective inhibitor of MMP-12, a zinc protease involved in several human diseases such as atherosclerosis and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). To understand the molecular determinants controlling the interaction of RXP470.1 with MMP-12 active site, a multidisciplinary approach combining structure-activity data, crystallography and microcalorimetry have been performed on RXP470.1 and its three analogues. The affinities of the three RXP470.1 analogues have been determined. Then, fourcrystal structures of MMP-12 in interaction with these inhibitors have beendetermined at high resolution, 1.15 Å, 1.50 Å, 1.50 Å et 1.30 Å, respectively. These data have indicated that the presence of a long hydrophobic side chain in the P1’ position of the RXP470.1, which enters deeply inside the S1’ cavity of MMP-12, is playing a key role in the inhibitor affinity. The contribution of this side chain is mostly entropic (-TDS - 4 kcal/mol). The interaction of RXP470.1 with MMP-12 is also mostly driven by a sizeable entropy increase (-TDS= -10 kal/mol) and a more modest enthalpy contribution (DH= -2.5 kcal/mol), despite the observation in the crystal structure of several contacts between inhibitor and MMP-12 active site. Furthermore, this study reveals that the binding of RXP470.1 to MMP-12 is linked to a proton uptake involving two negatively charged residues, the catalytic Glu219 and the phosphoryl group of the inhibitor. Furthermore, despite that the phosphoryl group is considered as a weak zincbinding group, this study highlights that the interactions of this group with the active site zinc atom involved strong directionality between these two groups. This effect has strong impact on the positioning of the other parts of the inhibitor in the MMP-12 active site. This last effect could be responsible for the modest enthalpy increase associated with the binding of RXP470.1 to MMP-12, by preventing the optimization of several interactions between the inhibitor and the enzyme. The results indicate that the role of the zinc-binding group should be better consider in the future. Finally this study opens a new vision in this field and should allow the design of new selective inhibitors of other MMPs
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Guignabert, Christophe. "Balance gélatinases/TIMP & agressions pulmonaires par radiomimétique et rayonnements ionisants." Paris 12, 2005. https://athena.u-pec.fr/primo-explore/search?query=any,exact,990002535240204611&vid=upec.
Full textAbstract:
Dans ce travail, nous avons recherché si un déséquilibre dans la balance MMP/inhibiteurs, au niveau épithélial, participe aux lésions tissulaires observées dans deux modèles d'agressions pulmonaires : exposition à l'ypérite (radiomimétique) et aux rayonnements ionisants. Dans la première partie, à l'aide d'un modèle in vivo d'intoxication pulmonaire à l'ypérite, nous avons montré l'implication de la balance gélatinase-TIMP dans la mise en place des lésions. De plus, nos travaux supportent fortement l'usage d'inhibiteurs de protéases (Doxycycline) dans la prévention des lésions induites par l'ypérite. Dans la seconde partie, à l'aide d'un modèle in vitro d'irradiation de cultures primaires de cellules épithéliales alvéolaires, nous avons également montré un déséquilibre de la balance gélatinases-TIMP et une baisse de de perméabilité trans-épithéliale. Nos travaux montrent que ce phénomène semble indépendant de cette balance, mais dû à des atteintes du cytosquelette d'actineIn the present work, we investigated the potential role of an epithelial imbalance between gelatinases and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in pulmonary dysfunction resulting from ionizing radiation (IR) and radiomimetic chemical (sulfur mustard) toxicity. First, with the use of an in vivo model of sulfur mustard intoxication, our results support a role for gelatinases in sulfur mustard-induced respiratory lesions. They also suggest that doxycycline (MMPs inhibitor) may hold promise as a therapeutic tool. Second, after exposure of primary culture of alveolar epithelial cells to IRs, we have also reported an in vitro gelatinase-TIMPs imbalance. We tested the implication of these increased gelatinase activity in the epithelial permeability. Our results failed to demonstrate a role for MMPs in the γ radiation-induced decrease in trans-epithelial permeability, but they suggest that this phenomenom may be due in part to the alteration of the actin cytoskeleton network
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Rollin, Jérôme. "Expression comparée de deux anti-protéases, TFPI-2 et RECK, et des métalloprotéases MMP-2 et MMP-9 dans le cancer broncho-pulmonaire non à petites cellules." Tours, 2006. http://www.theses.fr/2006TOUR3303.
Full textAbstract:
Le TFPI-2 et RECK sont des anti-protéases que régulent in vitro l’activation de plusieurs MMP impliquées dans la progression tumorale. Nous avons montré que l’expression de ces deux anti-protéases est diminuée dans, respectivement, 37% et 51% des tumeurs issues de cancer broncho-pulmonaire non à petites cellules. De plus, une hyperméthylation de la région promotrice du TFPI-2 est associée à une diminution d’expression du gène dans 50% des cas. Parallèlement, le pourcentage de formes actives de MMP-2 et de MMP-9 est plus élevé dans les tumeurs mais ne varie pas selon le niveau d’expression du TFPI-2 ou de RECK. Cette étude a également montré que la survie des patients portant le génotype MMP-2-735CC est significativement plus courte, bien que le niveau d’expression tumorale de la MMP-2 soit plus faible. En conclusion, ces résultats supportent que le TFPI-2 et RECK contribuent à inhiber la progression du cancer, mais les mécanismes impliqués in vivo restent à être identifiésTFPI-2 and RECK are anti-proteases which regulate in vitro the activation of several MMP involve in cancer progression. We have demonstrated that gene expressions of these two inhibitors are decreased in 37% and 51% of non-small cell lung cancer tumours, respectively. In addition, hypermethylation of TFPI-2 gene promoter is associated with decreased expression of TFPI-2 gene in 50% of cases. On the other hand, the percentage of active forms of MMP-2 and MMP-9 was higher in tumours but did not significantly vary according to RECK or TFPI-2 gene expression. This study has also demonstrated that the survival time of patients with the MMP-2-735CC genotype was significantly shorter, despite tumour MMP-2 mRNA levels measured were significantly lower. In conclusion, these data support that TFPI-2 and RECK are likely contributing to inhibit tumour progression in NSCLC, but the exact mechanisms involved to regulate in vivo MMP remain to be identified
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Mezil, M'Hidi Lynda. "Repositionnement d'un inhibiteur de métalloprotéases dans le cancer du sein." Thesis, Aix-Marseille, 2013. http://www.theses.fr/2013AIXM5000.
Full textAbstract:
Dans cette étude, nous décrivons pour la première fois les propriétés anti-tumorales de composés de type thiomorpholine sulfonamide hydroxamate dans le cancer du sein. Nous avons montré que le TMI-1, un inhibiteur à spécificité double MMPs/ADAM-17, est un puissant inhibiteur de la croissance tumoral in vitro et in vivo. Cette activité anti-tumorale est indépendante de l’inhibition d’ADAM-17 et des MMPs. En effet, le TMI-1 inhibe la croissance tumorale in vitro de 89% des lignées tumorales mammaires à des IC50 de l’ordre du micromolaire, par sa double capacité d’induire l’arrêt du cycle cellulaire en G0/G1 et l’apoptose dépendante de la voie extrinsèque. TMI-1 n’a aucun effet sur les cellules normales. In vivo, le TMI-1 inhibe le développement tumoral et l’apparition de nouvelles tumeurs dans les souris transgéniques MMTV-ERBB2/neu. A la différence des drogues cytotoxiques conventionnelles, TMI-1 à une activité sélective sur les cellules tumorales en affectant le pool de cellules souches cancéreuses mammaires. De plus, le TMI-1 agit en synergie en association avec les drogues de chimiothérapie et de thérapies ciblées. TMI-1 a déjà été utilisé en clinique, est une molécule candidate au repositionnement clinique en cancérologie. D’une manière intéressante, une corrélation marquée a pu être mise en évidence entre TMI-1 et le statut mutationnel de P53. Finalement, TMI-1 représente une alternative thérapeutique prometteuse dans le traitement des cancers, d’autant que la sélectivité semble associée à un marqueur « compagnon » P53, muté dans environ 50% des cancers. Le lien existant entre ces composés et P53 passe par l’identification de la ou les cibles. Ce travail est actuellement en cours, utilisant des approches de protéomique inverseIn this study, we focused on breast cancer and reported for the first time in vitro and in vivo antitumor properties of thiomorpholin sulfonamide hydroxamate compounds. We found that TMI-1, a dual ADAM-17 and MMP inhibitor is a strong anti-cancer agent. TMI-1 exerts its antitumor activity at micromolar range by induction of cell cycle arrest in G0/G1 and extrinsic apoptosis pathway. TMI-1 is not cytotoxic for normal cells. 89% of breast tumor cells are sensitive to TMI-1 in vitro. TMI-1 is also efficient in vivo, inhibits tumor growth and prevents the formation of additional tumors in MMTV-ERBB2/neu transgenic mice. Unlike conventional cytotoxic drugs, TMI-1 has a selective activity on tumor cells by affecting the pool of cancer stem cells. Interestingly TMI-1 is a potent synergistic drug for breast cancer therapy. TMI-1, already used to treat inflammatory disease, is a candidate for drug repositioning in oncology. Interestingly, a marked correlation was found between TMI-1 and the mutational status of P53. Finally, TMI-1 is of outstanding interest, as efficiency may be related to the surrogate marker P53 mutated in approximately 50% of cancers. The relationship between these compounds and P53 is currently in progress. This is done by a reverse proteomic approaches attempting to identify direct target(s)
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Baccouche, Rym. "Conception de ligands protéiques artificiels par ingénierie moléculaire in silico." Phd thesis, Université René Descartes - Paris V, 2012. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00807525.
Full textAbstract:
Les travaux réalisés portent sur la conception de ligands protéiques capables de cibler le site catalytique des métalloprotéases matricielles (MMPs) grâce à une méthode d'ingénierie développée au laboratoire qui repose sur le greffage de motifs fonctionnels. Le motif fonctionnel choisi correspond aux 4 résidus N-terminaux du TIMP-2, un inhibiteur naturel des MMPs. Des plates-formes protéiques possédant des motifs d'acides aminés dans une topologie similaire à celle du motif de référence dans le complexe TIMP-2/MMP-14 ont été identifiées par criblage systématique de la PDB à l'aide du logiciel STAMPS (Search for Three-dimensional Atom Motif in Protein Structure). Dix candidats ligands satisfaisant les contraintes topologiques, stériques et de similarité électrostatique avec le ligand naturel TIMP-2 ont été sélectionnés. Ces ligands ont été produits par synthèse chimique ou par voie recombinante puis leur capacité à inhiber une série de 6 MMPs a été évaluée. Les résultats indiquent que tous les ligands protéiques conçus in silico sont capables de lier les sites catalytiques des MMPs avec des constantes d'association allant de 450 nM à 590 mM, sans optimisation supplémentaire. La caractérisation structurale par diffraction X de 2 variants d'un de ces ligands protéiques a permis de montrer que les interactions établies par le motif 1-4 dans ces ligands étaient similaires à celles observées dans le complexe TIMP-2/MMP-14, avec cependant des différences dans la géométrie de certaines d'entre elles. Des études de simulation par dynamique moléculaire ont également permis de mettre en évidence de possibles différences dans la géométrie et la stabilité de certaines des interactions reproduites dans les 10 plates-formes, pouvant contribuer aux affinités modestes observées pour ces ligands. Cependant, les résultats obtenus montrent que la méthode de conception in silico utilisée est capable de fournir une série de ligands protéiques de 1ère génération ciblant de manière spécifique un site catalytique d'intérêt avec un bon rendement. Cette méthode pourrait constituer la 1ère étape d'une approche hybride de conception in silico de ligands combinée à des techniques de sélection expérimentales.
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Lapierre, Marion. "Impact des proprotéines convertases sur le phénotype malin de lignées cancéreuses du sein." Paris 7, 2008. http://www.theses.fr/2008PA077242.
Full textAbstract:
Le cancer du sein est la première cause de mortalité par tumeur maligne chez les femmes dans les pays occidentaux. Les grandes avancées sur la compréhension des mécanismes de progression tumorale ont permis la mise en place de traitements très efficaces. Cependant, les traitements ne sont pas forcément spécifiques de la tumeur développée dans le sens où chaque cancer est spécifique de 1a personne. C'est pourquoi de nouvelles stratégies thérapeutiques se développent, en essayant d'y apporter une spécificité en fonction des caractéristiques de la tumeur. Les Proprotéines tonvertases (PCs) font partie de ces molécules émergentes dont l'étude apporte de nouvelles opportunités. C'est pour ces raisons que nous avons inhibé ces enzymes avec l'inhibiteur général al-PDX et en parallèle avec leur prosegment, afin de déterminer leur possible fonction dans le cancer du sein. Nous avons démontré que l'inhibition des PCs par l'al-PDX ainsi que par ppPACE4 et ppPC5 aggrave le phénotype malin des lignées cellulaires étudiées, via une hausse du ratio [activité de MMP- 9]/[sécrétion de TIMP-1]. En effet, il en résulte une augmentation de la motilité cellulaire, migration et invasion sur collagène in vitro; alors que l'inhibition induite par ppFurine entraine un ralentissement sévère des processus biologiques en modulant négativement le ratio [activité de MMP-9]/[sécrétion de TIMP-1], Ainsi, la conception ou l'identification d'inhibiteurs des Convertases puissants et spécifiques en tant qu'agents respectivement anti-tumoraux et/ou anti- métastatiques pourrait déboucher sur un nouvel arsenal utilisé seul ou en combinaison avec les agent déjà existants pour le traitement de certains cancersBreast cancer is the leading cause of death from cancer in women in the western countries. The advances on the understanding of the mechanisms of tumoral progression allowed the implementation of very effective treatments. However, treatments are not necessarily specific of the tumor developed, in the sense that every cancer is specific of the person. That ‘s why new therapeutic strategies develop, by trying to bring it a specificity according to the characteristics of the tumor. The Proprotein Convertases (PCs) is a part of these emergent molecules the study of which brings new opportunities. It is for these reasons that we inhibited these enzymes with the general inhibitor al- PDX and in parallel with their prosegment, in order to determine their possible function in breast cancer, We demonstrated that the inhibition of PCS by al-PDX as well as ppPACE4 and ppPCS aggravates the malignant phenotype of breast cancer cells, via an increase of the ratio [MMP-9 activity]/[TIMP-l secretion]. In effect, it increases cell motility, migration and invasion on collagen in vitro; while the inhibition by ppFurine results in a drastic down regulation of biological processes, modulating negatively the ratio [MMP-9 activity]/[TIMP-l secretion]. Thus, the design or the identification of potent and specific inhibitors of Convertases as agents respectively anti-tumoral and/or anti-metastatic can emerge in a new armory used alone or in combination with the already existing agents for the treatment of cancers
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Cousin, Rémi. "Pharmaco-régulation de la progression tumorale de cancers mammaires par des oligosaccharides de lambda carraghénanes inhibiteurs d’héparanase." Thesis, La Rochelle, 2021. http://www.theses.fr/2021LAROS024.
Full textAbstract:
Des molécules à base de sucre telles que les héparines ou les polysaccharides d'héparane sulfate naturels ont été développées et largement étudiées pour contrôler l'activité enzymatique de l'héparanase (HPSE), acteur clé du remodelage de la matrice extracellulaire au cours de la pathogenèse du cancer. Cependant, des fonctions non enzymatiques de l'HPSE ont également été décrites dans les mécanismes tumoraux. Compte tenu de leurs propriétés polyvalentes, nous avons émis l'hypothèse que les inhibiteurs à base de sucre peuvent interférer avec les activités enzymatiques mais aussi non enzymatiques de l’HPSE. Dans ce travail, nous avons évalué les effets d'un oligosaccharide marin original dérivé du carraghénane-λ (CO-λ) que nous avons décrit précédemment, ainsi que ceux de son homologue natif et des héparines, sur la viabilité cellulaire, la prolifération, la migration et l'invasion des cellules cancéreuses du sein, MDA-MB- 231, mais aussi des cellules sh-MDA-MB231, dans lesquelles l'expression de l’HPSE a été sélectivement régulée à la baisse en utilisant la stratégie shRNA. Nous n'avons montré aucun effet cytotoxique ni prolifératif de nos candidats inhibiteurs, mais le CO-λ était le plus efficace pour réduire la migration et l'invasion cellulaire par rapport aux héparines et ce, de manière HPSE dépendante. Nous avons mis en évidence que le CO-λ contrôlait étroitement un axe HPSE/MMP-14/MMP-2 conduisant à une activité MMP-2 réduite. Au final, cette étude met en évidence que le CO-λ est un puissant « modulateur » de l'HPSE capable de réduire non seulement l'activité enzymatique de l'HPSE mais également les fonctions contrôlées par les niveaux d'HPSESugar-based molecules such as heparins or natural heparan sulfate polysaccharides have been developed and widely studied for controlling heparanase (HPSE) enzymatic activity, a key player in extracellular matrix remodeling during cancer pathogenesis. However, non-enzymatic functions of HPSE have also been described in tumor mechanisms. Given they have their versatile properties, we hypothesized that sugar-based inhibitors may interfere with enzymatic but also non-enzymatic HPSE activities. In this work, we assessed the effects of an original marine Symbol-carrageenan derived oligosaccharide (λ-CO) we previously described, along with those of its native counterpart and heparins, on cell viability, proliferation, migration and invasion of MDA-MB-231 breast cancer cells but also of sh-MDA-MB-231 cells, in which the expression of HPSE was selectively downregulated using shRNA strategy. We showed neither cytotoxic nor proliferative effects of our inhibitor candidates but λ-CO was the most efficient to reduce cell migration and invasion compared with heparins and that, in a HPSE dependent-manner. We evidenced that λ-CO tightly controlled a HPSE/MMP14/MMP-2 axis leading to reduced MMP-2 activity. Altogether, this study highlights λ-CO as a potent HPSE “modulator” capable of reducing not only the enzymatic activity of HPSE but also the functions controlled by the HPSE levels
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Ntayi, Carole. "Implication des metalloprotéinases matricielles-1 et -2 dans l'invasion du mélanome : régulation par le collagène de type I et les peptides d'élastine." Reims, 2003. http://www.theses.fr/2003REIMM204.
Full textAbstract:
L'objectif de notre travail a été d'étudier (i) l'implication des MMP-1 et MMP-2 dans le potentiel invasif de cellules de mélanome au sein d'une matrice tridimensionnelle de collagène de type I, et (ii) l'influence des peptides d'élastine dans ce processus. Nos résultats montrent que l'invasion in vitro d'une matrice tridimensionnelle de collagène de type I par des cellules de mélanome est corrélée à l'activation des MMP-1 et MMP-2, et à une diminution concomitante des TIMP-1 et TIMP-2. L'ajout de peptides d'élastine à la matrice collagénique a pour effet de potentialiser les capacités invasives de la lignée de mélanome la plus invasive, en augmentant préférentiellement l'activation de la MMP-2 via le récepteur de l'élastine@In this study, we investigated the role of MMP-1 and MMP-2 in melanoma cells invasion through a three-dimensional type I collagen matrix, and regulation by elastin peptides in vitro. We showed that melanoma cells invasion through a three-dimensional type I collagen matrix was correlated with MMP-1 and MMP-2 activation, and a concomitant decrease of TIMP-1 and TIMP-2. Adding elastin-derived peptides to the collagen matrix, enhanced invasive potential of the highly metastatic melanoma cells via elastin binding protein by up-regulating MMP-2 activation
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Creidy, Rita. "L' Encéphalomyélite auto-immune expérimentale, modèle d'étude des mécanismes de recrutement des cellules immunes dans le système nerveux central : Influence de TWEAK et de TIMP-1 dans le recrutement des cellules immunitaires dans le SNC au cours de l'EAE." Aix-Marseille 2, 2008. http://www.theses.fr/2008AIX20680.
Full textAbstract:
L’encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE), modèle d’étude des mécanismes de recrutement des effecteurs immunitaires dans le système nerveux central (SNC), est utilisée pour tester des approches thérapeutiques pour le traitement de la sclérose en plaques (SEP). Nous avons exploré deux cibles thérapeutiques : un membre récemment identifié de la famille du TNF, TWEAK et le système métalloprotéases/inhibiteurs des métalloprotéases (MMPs/TIMPs). Une première contribution concerne l 'illustration de l’implication de TWEAK exprimé constitutivement dans le SNC comme son principal récepteur, Fn14. L’analyse de l’EAE chez des souris C57BL/6 transgéniques surexprimant du TWEAK soluble et l’injection d’anticorps bloquants aux différents stades de l'EAE nous permettent de conclure que (1) TWEAK n’exerce pas d’action, contrairement à d’autres membres de la famille du TNF, sur la réponse immunitaire et (2) que son action est limitée aux étapes de recrutement et de processus lésionnels neuroinflammatoires. TWEAK augmente la libération de cytokines, de chimiokines et de MMPs par les cellules endothéliales et les astrocytes et favorise ainsi le recrutement central de cellules immunes. Les MMPs clivent les éléments de la matrice extracellulaire (MEC) et favorisent le passage des cellules immunes aux niveaux de la barrière hémato-encéphalique (BHE) et de la barrière sang-LCR. L’influence de l’équilibre MMPs/TIMPs a été étudiée chez des souris 129/Sv invalidées pour l’expression d’un inhibiteur endogène des MMPs, TIMP-1. Paradoxalement, les souris TIMP-1-/- sont plus résistantes à l’EAE active alors qu’elles développent, comme attendu, une pathologie plus grave que les souris contrôles dans le modèle d’EAE par transfert adoptif. L’augmentation de l’activité métalloprotéasique peut être« anti-inflammatoire » en inhibant des étapes de la réponse immunitaire et en limitant les conséquences pro-inflammatoires dépendantes de l’activation de la voie Fas. Les données de la littérature permettent également de proposer que les observations paradoxales in vivo soient liéesà des effets « pro-inflammatoires » propres de TIMP-1. Nos travaux appellent donc à une grande prudence sur la mise en place de protocole thérapeutique ciblant les MMPs dans le but de limiter le recrutement inflammatoire dans le SNC de patients souffrant de SEP. Les voies d’entrée dans le SNC, détaillées dans l’introduction, sont multiples. La plupart des travaux ont porté jusqu’à présent sur la BHE. Le passage des lymphocytes à travers la barrière épithéliale des plexus choroïdes a été très peu étudié du fait notamment de l’absence de modèle de culture expérimental. La contribution majeure du travail a été la mise au point d’un nouveau modèle d’étude in vitro de l’épithélium choroïdien adapté à l’étude du passage des cellules immunes. Nous montrons que la barrière épithéliale est plus perméable au passage des lymphocytes T que la BHE. Le passage des lymphocytes se fait, sans aucune altération de la sélectivité de la barrière, au niveau des contacts épithéliaux tricellulaires. Ce modèle, une fois totalement caractérisé, sera utilisé pour déterminer l’influence de différentsfacteurs sur le passage de cellules immunes et étudier leurs mécanismes moléculaires de passage transépithélial. Dans les perspectives, un intérêt particulier sera porté sur le recrutement dans le SNC des populations immunes régulatrices dont les cellules NK qui exercent des rôles neuroprotecteurs dans l’EAE
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Bret, Caroline. "Biologie de syndecan-1 au cours du myélome multiple : synthèse, modifications et inhibition." Thesis, Montpellier 1, 2010. http://www.theses.fr/2010MON1T012.
Full textAbstract:
Ce travail de thèse a eu pour thème principal le protéoglycane syndecan-1 au cours du myélome multiple, une hémopathie maligne caractérisée par la présence d'un clone de plasmocytes tumoraux au sein de la moelle osseuse. Syndecan-1 est un élément majeur de la physiopathologie du myélome multiple, ce protéoglycane étant au coeur d'un réseau complexe d'interactions moléculaires conditionnant le devenir des cellules plasmocytaires tumorales.Les chaînes de glycosaminoglycanes présentes sur le core protéique de syndecan-1sont responsables d'une grande partie de son activité. Nous avons ainsi caractérisé, par une approche transcriptomique, 100 gènes codant les protéines impliquées dans la synthèse et la modification de ces chaînes. Nous avons de cette manière identifié des cibles moléculairesen vue de moduler, voire d'inhiber leur activité.Dans le but d'identifier les métalloprotéinases des familles ADAM et ADAMTS susceptibles d'interagir avec syndecan-1, nous avons réalisé l'étude du profil d'expression des gènes codant ces reprolysines et leurs inhibiteurs dans les cellules de la différentiation lymphocytaire B, les cellules plasmocytaires normales et tumorales ainsi que dans l'environnement médullaire.Dans une dernière partie, nous avons évalué l'efficacité d'une approche d'inhibitiondes chaînes héparanes sulfates via l'utilisation de l'héparine. Nous observons que certaines lignées myélomateuses sont inhibées par l'héparine et ses dérivés et que ces mêmes lignées sont stimulées par l'antidote de l'héparine, le sulfate de protamine. Les mécanismes mis enjeu sont en relation avec la modulation de la biodisponibilité des facteurs permettant la croissance des cellulesMultiple myeloma is a hematological malignancy characterized by the expansion of aclone of malignant plasma cells in the bone marrow compartment. Syndecan-1 is a majorproteoglycan involved in a complex network of molecular interactions in multiple myelomaphysiopathology. As heparan sulfate and chondroitin sulfate chains are the bioactive components ofsyndecan-1, we first analysed the signature of genes encoding 100 proteins involved in thesynthesis of these chains, from precursor uptake to post-translational modifications, usingAffymetrix microarrays.In order to identify the metalloproteinases belonging to ADAM and ADAMTS familiespotentially implicated in the interactions with syndecan-1, we performed a gene expressionprofile focused on the genes encoding these reprolysines and their inhibitors.In a last part, we evaluated the efficacy of an inhibitory approach based on theutilization of heparin in human myeloma cell lines in vitro, inhibitory effects being in relationwith a modulation of the biodisponibility of heparin-binding factors.This work led us to identify targets of interest in relation with syndecan-1 biology inmultiple myeloma. They could be used to design new therapeutic strategies