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Filho, Renato Evando Moreira. "Micologia forense: a dinÃmica da microbiota fÃngica na investigaÃÃo do perÃodo post mortem." Universidade Federal do CearÃ, 2008. http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=2981.
Full textAbstract:
CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior<br>With developing of forensic observations, certain species of insects and microorganisms were described as indicators of periods of the degradation of the body. However, the literature is still scarce in the field of Forensic Mycology. It was investigated the microbiological characteristics of fungi presence in the post mortem change, as well as, it esteemed the value of the mycology exams in the study. 400 collections was accomplished in 60 human bodies (34 of the bloated stage, 06 of the putrefaction stage and 20 of the skeletonization stage) at the Fortaleza city morgue and public cemeteries in the state of CearÃ, The picked material was analyzed through macro/microcharacteristics and specific biochemical tests. Ally to such analyses, was also accomplished the test of the perforation of the hair in vitro in hair of corpses in the bloated stage and in hair of healthy adults. The material gathered was analyzed at the Specialized Medical Mycology Center of the Federal University of CearÃ. With the anthropological results, it was observed that male, in the interval of the 31 to the 40 years, was more commonly attacked, being the capital (Fortaleza) the more involved in the number of deaths. In the bloated stage, among the identified filamentous fungi, the presence of four orders was observed: Order Eurotiales (63 isolated Aspergillus spp and 21 isolated Penicillium spp), Order Mucorales (4 Mucor spp), Order Hypocreales (2 Acremonium spp, 1 Trichoderma spp and 1 Fusarium spp) and Order Saccharomycetales (2 Geotrichum spp). In the yeast distribution, it was observed the orders:Saccharomycetales (44 Candida spp) and Tremellales (5 Trichosporon spp). In the putrefaction stage, it was isolated the following
orders: Eurotiales (Penicillium spp 2 and Aspergillus 2) and Hypocreales 1 (Acremonium spp). Regarding the yeasts, it was just isolated the Order Saccharomycetales (Candida spp 3). In the eskeletonization stage, the following orders were observed: Order Eurotiales (Aspergillus spp 22 and Penicillium spp 18), Order Mucorales (Mucor spp 10) and Order Hypocreales (Acremonium spp 2 and Trichoderma spp 1). Regarding the yeasts, two orders were found: Tremellales (Trichosporon spp 1) and Saccharomycetales (Candida spp 1). In the hair perforation test in vitro, it was positive in the bloated stage, differing of healthy adults,where the test was negative. For conclusion, Forensic Micology is still a rich field in data and
fungi can come to be a tool in the aid of human post mortem diagnosis.<br>Com o evoluir das observaÃÃes mÃdico-legais, determinadas espÃcies de insetos e microrganismos foram descritos como indicadores de perÃodos da degradaÃÃo do corpo.
Entretanto, a literatura cientÃfica ainda à escassa no campo da Micologia Forense. Assim, investigaram-se as caracterÃsticas microbiolÃgicas dos fungos partÃcipes na mudanÃa de flora post mortem em humanos, bem como estimou-se o valor da realizaÃÃo de exames micolÃgicos
no estudo cronotanatolÃgico. Foram realizadas um total de 400 coletas em 60 corpos humanos (34 do perÃodo gasoso, 06 do coliquativo e 20 do esqueletizado) examinados no Instituto
MÃdico-Legal de Fortaleza e em cemitÃrios do Estado do CearÃ. Foram realizados estudos macro/micromorfÃlogicos e testes bioquÃmicos especÃficos para cada grupamento fÃngico
isolado. Aliado a tais anÃlises, foi tambÃm realizado o teste da perfuraÃÃo do pÃlo in vitro em pÃlos de cadÃveres no perÃodo gasoso e em pÃlos de adultos hÃgidos. Estas identificaÃÃes
foram realizadas no Centro Especializado em Micologia MÃdica da Universidade Federal do CearÃ. Com os resultados antropolÃgicos, foi observado que o sexo masculino, dos 31 aos 40 anos, foi o mais comumente acometido, sendo a capital (Fortaleza) a mais envolvida no nÃmero de mortes. No perÃodo gasoso, dentre os fungos filamentosos identificados, foi observada a presenÃa de quatro ordens: Eurotiales (63 isolados de Aspergillus spp e 21 de Penicillium spp), Mucorales (4 Mucor spp) e Hypocreales (2 Acremonium spp, 1 Trichoderma spp e 1 Fusarium spp) e Saccharomycetales (2 Geotrichum spp). No referente Ãs leveduras, verificaram-se as ordens: Saccharomycetales (Candida spp 44) e Tremellales (Trichosporon spp 5). No perÃodo coliquativo, registraram-se as ordens: Eurotiales (Penicillium spp 2 e Aspergillus 2) e Hypocreales 1 (Acremonium spp). No referente Ãs leveduras, isolou-se apenas a Ordem Saccharomycetales (Candida spp 3). No perÃodo de esqueletizaÃÃo, verificaram-se as seguintes ordens: Eurotiales (Aspergillus spp 22 e Penicillium spp 18), Mucorales (Mucor spp 10) e Hypocreales (Acremonium spp 2 e Trichoderma spp 1). No referente Ãs leveduras, registraram-se duas ordens: Tremellales (Trichosporon spp 1) e Saccharomycetales (Candida spp 1). Quanto ao teste de perfuraÃÃo do pÃlo in vitro, a positividade foi observada no perÃodo gasoso, diferindo de adultos hÃgidos, em que foi negativa. Conclui-se que o estudo da Micologia Forense ainda à um campo rico em dados e que os fungos poderÃo vir a ser uma ferramenta complementar no estudo do tempo de morte em Medicina Legal.
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Moreira, Filho Renato Evando. "Micologia forense : a dinâmica da microbiota fúngica na investigação do período post mortem." reponame:Repositório Institucional da UFC, 2008. http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/1832.
Full textAbstract:
MOREIRA FILHO, Renato Evando. Micologia forense : a dinâmica da microbiota fúngica na investigação do período post mortem. 2008. 133 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008.<br>Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-05T16:01:17Z
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Previous issue date: 2008<br>With developing of forensic observations, certain species of insects and microorganisms were described as indicators of periods of the degradation of the body. However, the literature is still scarce in the field of Forensic Mycology. It was investigated the microbiological characteristics of fungi presence in the post mortem change, as well as, it esteemed the value of the mycology exams in the study. 400 collections was accomplished in 60 human bodies (34 of the bloated stage, 06 of the putrefaction stage and 20 of the skeletonization stage) at the Fortaleza city morgue and public cemeteries in the state of Ceará, The picked material was analyzed through macro/microcharacteristics and specific biochemical tests. Ally to such analyses, was also accomplished the test of the perforation of the hair in vitro in hair of corpses in the bloated stage and in hair of healthy adults. The material gathered was analyzed at the Specialized Medical Mycology Center of the Federal University of Ceará. With the anthropological results, it was observed that male, in the interval of the 31 to the 40 years, was more commonly attacked, being the capital (Fortaleza) the more involved in the number of deaths. In the bloated stage, among the identified filamentous fungi, the presence of four orders was observed: Order Eurotiales (63 isolated Aspergillus spp and 21 isolated Penicillium spp), Order Mucorales (4 Mucor spp), Order Hypocreales (2 Acremonium spp, 1 Trichoderma spp and 1 Fusarium spp) and Order Saccharomycetales (2 Geotrichum spp). In the yeast distribution, it was observed the orders:Saccharomycetales (44 Candida spp) and Tremellales (5 Trichosporon spp). In the putrefaction stage, it was isolated the following orders: Eurotiales (Penicillium spp 2 and Aspergillus 2) and Hypocreales 1 (Acremonium spp). Regarding the yeasts, it was just isolated the Order Saccharomycetales (Candida spp 3). In the eskeletonization stage, the following orders were observed: Order Eurotiales (Aspergillus spp 22 and Penicillium spp 18), Order Mucorales (Mucor spp 10) and Order Hypocreales (Acremonium spp 2 and Trichoderma spp 1). Regarding the yeasts, two orders were found: Tremellales (Trichosporon spp 1) and Saccharomycetales (Candida spp 1). In the hair perforation test in vitro, it was positive in the bloated stage, differing of healthy adults,where the test was negative. For conclusion, Forensic Micology is still a rich field in data and fungi can come to be a tool in the aid of human post mortem diagnosis.<br>Com o evoluir das observações médico-legais, determinadas espécies de insetos e microrganismos foram descritos como indicadores de períodos da degradação do corpo. Entretanto, a literatura científica ainda é escassa no campo da Micologia Forense. Assim, investigaram-se as características microbiológicas dos fungos partícipes na mudança de flora post mortem em humanos, bem como estimou-se o valor da realização de exames micológicos no estudo cronotanatológico. Foram realizadas um total de 400 coletas em 60 corpos humanos (34 do período gasoso, 06 do coliquativo e 20 do esqueletizado) examinados no Instituto Médico-Legal de Fortaleza e em cemitérios do Estado do Ceará. Foram realizados estudos macro/micromorfólogicos e testes bioquímicos específicos para cada grupamento fúngico isolado. Aliado a tais análises, foi também realizado o teste da perfuração do pêlo in vitro em pêlos de cadáveres no período gasoso e em pêlos de adultos hígidos. Estas identificações foram realizadas no Centro Especializado em Micologia Médica da Universidade Federal do Ceará. Com os resultados antropológicos, foi observado que o sexo masculino, dos 31 aos 40 anos, foi o mais comumente acometido, sendo a capital (Fortaleza) a mais envolvida no número de mortes. No período gasoso, dentre os fungos filamentosos identificados, foi observada a presença de quatro ordens: Eurotiales (63 isolados de Aspergillus spp e 21 de Penicillium spp), Mucorales (4 Mucor spp) e Hypocreales (2 Acremonium spp, 1 Trichoderma spp e 1 Fusarium spp) e Saccharomycetales (2 Geotrichum spp). No referente às leveduras, verificaram-se as ordens: Saccharomycetales (Candida spp 44) e Tremellales (Trichosporon spp 5). No período coliquativo, registraram-se as ordens: Eurotiales (Penicillium spp 2 e Aspergillus 2) e Hypocreales 1 (Acremonium spp). No referente às leveduras, isolou-se apenas a Ordem Saccharomycetales (Candida spp 3). No período de esqueletização, verificaram-se as seguintes ordens: Eurotiales (Aspergillus spp 22 e Penicillium spp 18), Mucorales (Mucor spp 10) e Hypocreales (Acremonium spp 2 e Trichoderma spp 1). No referente às leveduras, registraram-se duas ordens: Tremellales (Trichosporon spp 1) e Saccharomycetales (Candida spp 1). Quanto ao teste de perfuração do pêlo in vitro, a positividade foi observada no período gasoso, diferindo de adultos hígidos, em que foi negativa. Conclui-se que o estudo da Micologia Forense ainda é um campo rico em dados e que os fungos poderão vir a ser uma ferramenta complementar no estudo do tempo de morte em Medicina Legal.
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Teixeira, Carlos Eduardo Cordeiro. "Atividade da molÃcula tirosol, vancomicina e antibiÃticos beta-lactÃmicos sobre o crescimento de candida spp. resistentes a derivados azÃlicos, na forma planctÃnica e biofilme." Universidade Federal do CearÃ, 2014. http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=12847.
Full textAbstract:
Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico<br>Diversos sÃo os relatos de resistÃncia in vitro de cepas de Candida spp a fÃrmacos antifÃngicos, em especial a derivados azÃlicos A produÃÃo de biofilme à um importante fator de virulÃncia e traz grandes repercussÃes clÃnica devido ao aumento da resistÃncia à terapia antifÃngica Deste modo a prospecÃÃo de novos compostos com propriedade antifÃngica se faz necessÃria Alguns estudos tÃm evidenciado a atividade das molÃculas de quorum-sensing farnesol e tirosol e de antibiÃticos beta-lactÃmicos e glicopeptÃdeos contra espÃcies de Candida. Por conseguinte o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da molÃcula quorum-sensing tirosol associados ou nÃo a antifÃngicos clÃssicos e dos antimicrobianos vancomicina meropenem cefepime e piperacilina-tazobactam sobre o crescimento de Candida spp resistentes a derivados azÃlicos nas formas planctÃnicas e em biofilme Para tanto foram utilizadas cepas de C albicans (n=10) e C tropicalis (n=10) A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) foi determinada por meio da tÃcnica de microdiluiÃÃo preconizada pelo CLSI Adicionalmente foi investigada a aÃÃo do tirosol e dos antibacterianos sobre o biofilme em formaÃÃo e maduro de Candida spp As CIMÂs para tirosol variaram de 2,5 a 5 mM e para os antibiÃticos variaram de 500 a 2000 Âg/mL para ambas as espÃcies Foi observado efeito sinÃrgico na associaÃÃo entre itraconazol e tirosol (18/20 cepas) e entre o fluconazol e tirosol (18/20 cepas) enquanto a associaÃÃo anfotericina B e tirosol apresentou sinergismo em 5 cepas de C tropicalis e 6 cepas de C albicans O tirosol isolado apresentou efeito sobre a formaÃÃo de biofilme de ambas as espÃcies na concentraÃÃo 50XMIC (P<0,0001) Em relaÃÃo ao efeito do tirosol sobre biofilme formado observou-se um aumento na concentraÃÃo 10XMIC e uma diminuiÃÃo na concentraÃÃo 50XMIC A combinaÃÃo entre tirosol e drogas antifÃngicas apresentou um aumento na atividade do biofilme maduro diretamente proporcional à concentraÃÃo testada quando o tirosol foi associado a derivados azÃlicos e uma diminuiÃÃo quando associado com anfotericina B Todos os antibacterianos apresentaram efeito estatisticamente significativo sobre o biofilme em de Candida spp em formaÃÃo (P<0,0001) Em relaÃÃo ao efeito dos antibiÃticos vancomicina meropenem piperacilina/tazobactam e cefepime sobre o biofilme formado de Candida spp foram observadas reduÃÃes estatisticamente significativa na atividade celular nas concentraÃÃes MIC/10 (P<0,0001) MIC (P<0,0001) 10XMIC (P<0,0001) e 50XMIC (P<0,0001) Este estudo apresenta uma possÃvel aÃÃo do tirosol isolado ou combinado com drogas antifÃngicas e de antibacterianos sobre Candida spp na forma planctÃnica e em biofilme<br>Diversos sÃo os relatos de resistÃncia in vitro de cepas de Candida spp. a fÃrmacos antifÃngicos, em especial a derivados azÃlicos. A produÃÃo de biofilme à um importante fator de virulÃncia e traz grandes repercussÃes clÃnica devido ao aumento da resistÃncia à terapia antifÃngica. Deste modo, a prospecÃÃo de novos compostos com propriedade antifÃngica se faz necessÃria. Alguns estudos tÃm evidenciado a atividade das molÃculas de quorum-sensing farnesol e tirosol e de antibiÃticos beta-lactÃmicos e glicopeptÃdeos contra espÃcies de Candida. Por conseguinte, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da molÃcula quorum-sensing tirosol associados ou nÃo a antifÃngicos clÃssicos, e dos antimicrobianos vancomicina, meropenem, cefepime e piperacilina-tazobactam, sobre o crescimento de Candida spp., resistentes a derivados azÃlicos, nas formas planctÃnicas e em biofilme. Para tanto, foram utilizadas cepas de C. albicans (n=10) e C. tropicalis (n=10). A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (CIM) foi determinada por meio da tÃcnica de microdiluiÃÃo, preconizada pelo CLSI. Adicionalmente foi investigada a aÃÃo do tirosol e dos antibacterianos sobre o biofilme em formaÃÃo e maduro de Candida spp. As CIMÂs para tirosol variaram de 2,5 a 5 mM e para os antibiÃticos variaram de 500 a 2000 Âg/mL, para ambas as espÃcies. Foi observado efeito sinÃrgico na associaÃÃo entre itraconazol e tirosol (18/20 cepas) e entre o fluconazol e tirosol (18/20 cepas), enquanto a associaÃÃo anfotericina B e tirosol apresentou sinergismo em 5 cepas de C. tropicalis e 6 cepas de C. albicans. O tirosol isolado apresentou efeito sobre a formaÃÃo de biofilme de ambas as espÃcies na concentraÃÃo 50XMIC (P<0,0001). Em relaÃÃo ao efeito do tirosol sobre biofilme formado, observou-se um aumento na concentraÃÃo 10XMIC e uma diminuiÃÃo na concentraÃÃo 50XMIC. A combinaÃÃo entre tirosol e drogas antifÃngicas apresentou um aumento na atividade do biofilme maduro diretamente proporcional à concentraÃÃo testada, quando o tirosol foi associado a derivados azÃlicos e uma diminuiÃÃo quando associado com anfotericina B. Todos os antibacterianos apresentaram efeito estatisticamente significativo sobre o biofilme em de Candida spp. em formaÃÃo (P<0,0001). Em relaÃÃo ao efeito dos antibiÃticos vancomicina, meropenem, piperacilina/tazobactam e cefepime sobre o biofilme formado de Candida spp., foram observadas reduÃÃes estatisticamente significativa na atividade celular nas concentraÃÃes MIC/10 (P<0,0001), MIC (P<0,0001), 10XMIC (P<0,0001) e 50XMIC (P<0,0001). Este estudo apresenta uma possÃvel aÃÃo do tirosol isolado ou combinado com drogas antifÃngicas e de antibacterianos, sobre Candida spp. na forma planctÃnica e em biofilme.
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Carvalho, Vitor Luz. "Fungos isolados de sirÃnios e cetÃceos no brasil: uma abordagem fenotÃpica, genotÃpica, diagnÃstica e de virulÃncia." Universidade Federal do CearÃ, 2015. http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=17802.
Full textAbstract:
CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior<br>O objetivo desse trabalho foi isolar fungos de sirÃnios e cetÃceos no Brasil, visando investigar aspectos fenotÃpicos, genotÃpicos, diagnÃsticos e de virulÃncia. Para tanto, foi coletadoâ com swabs estÃreisâ material da cavidade oralâ narina/espirÃculoâ abertura genital e/ou reto de 104 animais, incluindo 50 peixes-bois-da-AmazÃnia (Trichechus inunguis), 33 peixes-bois-marinho (T. manatus), 13 botos-vermelhos (Inia geoffrensis), trÃs cachalotes-anÃo (Kogia sima), dois golfinhos-cabeÃa-de-melÃo (Peponocephala electra)â um cachalote-pigmeu (K. breviceps)â um cachalote (Physeter macrocephalus) e uma baleia-jubarte (Megaptera novaeangliae). Dentre estes animais, um peixe-boi-da-AmazÃnia e oito peixes-boi-marinho apresentaram lesÃes suspeitas de micose cutÃnea, sendo realizados raspados de pele. Os swabs foram semeados em placas contendo Ãgar Sabouraud com cloranfenicolâ mantidas a 37ÂC por cinco dias, enquanto as escamas de pele foram semeadas em tubos contendo Ãgar Sabouraud com cloranfenicol a 25ÂC por dez dias. As leveduras isoladas foram identificadas atravÃs de provas bioquÃmicas, micromorfologia, sistema automatizado Vitek, PCR, RFLP e/ou sequenciamento, enquanto os fungos filamentosos foram identificados pela macro e micromorfologia. As cepas de Candida spp. (n=114) obtidas foram submetidas ao teste de microdiluiÃÃo em caldo para avaliaÃÃo do perfil de sensibilidade aos antifÃngicos itraconazolâ fluconazol e anfotericina B e aos testes de produÃÃo de fatores de virulÃncia (fosfolipases, proteases e biofilme). Leveduras da espÃcie C. albicans foram submetidas à tipagem molecular por MLST. Foram diagnosticados dois casos de micoses superficiais cutÃneas em sirÃnios, sendo uma levedurose mista por C. tropicalis e Trichosporon asahii e um caso de feohifomicose por Bipolaris hawaiiensis, bem como um surto de fusariose (Fusarium sp.). Foram isoladas 155 cepasâ sendo 112 de T. inunguis (40 Candida albicansâ 14 C. parapsilosis sensu strictoâ 3 C. metapsilosis, 4 C. orthopsilosis, 9 C. guilliermondiiâ 3 C. pelliculosaâ 2 C. tropicalisâ 2 C. glabrataâ 1 C. famataâ 1 C. kruseiâ 1 C. norvegensisâ 1 C. ciferriâ 22 Trichosporon sp.â 6 T.asahii, 2 Rhodotorula sp., 1 Cryptococcus laurentii), 29 de T. manatus (12 C. albicansâ 4 C. tropicalisâ4 C. famataâ 3 C. guilliermondiiâ 1 C. kruseiâ 1 Rhodotorula sp.â 2 R. mucilaginosa, 1 R. minuta, 1 Trichosporon sp.) e 14 de cetÃceos (6 C. tropicalis, 2 C. parapsilosis, 2 C. famata, 1 Candida sp., 3 Cryptococcus sp.). As concentraÃÃes inibitÃrias mÃnimas (CIMs) para anfotericina B variaram de 0â03 a 1Âg/mLâ nÃo sendo observadas cepas resistentes. As CIMs de itraconazol e fluconazol variaram de 0â03 a 16 Âg/ml e de 0â125 a 64 Âg/mlâ respectivamenteâ sendo constatada resistÃncia a pelo menos uma droga em 34â2% dos isolados, com destaque para C. albicans e C. tropicalis. Quanto aos fatores de virulÃncia testados, 50% produziram fosfolipases, com elevada frequÃncia em C. albicans; 50% produziram proteases, com maior prevalÃncia em C. albicans e C. tropicalis; e 35% produziram biofilme em escalas variÃveis, com maior prevalÃncia em C. tropicalis e C. orthopsilosis. A tipagem molecular foi realizada com 45 cepas de C. albicans, obtendo-se genÃtipos pertencentes a seis clados dentre os 18 existentes para a espÃcie, variando de acordo com o hospedeiro e localizaÃÃo geogrÃfica. Baseado no exposto, esse estudo representa uma contribuiÃÃo sistemÃtica e multidisciplinar acerca da micologia de mamÃferos aquÃticos.
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Serpa, Rosana. "Biofilmes de Trichosporon asahii e Trichosporon inkin: aspectos morfofisiolÃgicos, sensibilidade a antifÃngicos e inibiÃÃo mediada por ritonavir." Universidade Federal do CearÃ, 2016. http://www.teses.ufc.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=17985.
Full textAbstract:
CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior<br>Nos Ãltimos anos, diversos estudos tÃm considerado os fungos do gÃnero Trichosporon como patÃgenos oportunistas emergentes em pacientes imunocomprometidos. Embora a dinÃmica nÃo seja bem compreendida, sabe-se que eventos associados à formaÃÃo de biofilme nestes fungos tÃm papel importante no processo infeccioso. Desta forma, o presente estudo analisou aspectos morfofisiolÃgicos dos biofilmes produzidos por T. inkin, bem como o papel de um inibidor de proteases sobre as cÃlulas e biofilmes de T. asahii e T. inkin. Na primeira parte da pesquisa, foi investigada a formaÃÃo de biofilmes de T. inkin (n=7) nos meios RPMI, Caldo CLED e Caldo Sabouraud, em pH 5,5 e pH 7,0, com inÃculos iniciais de 1x104, 1x105 e 1x106 cÃlulas/mL, incubados a 28ÂC e 35ÂC, de forma estÃtica ou agitaÃÃo a 80 rpm, por 48h. Os biofilmes formados foram avaliados quanto à biomassa e atividade metabÃlica, contagem de cÃlulas viÃveis, quantificaÃÃo de Ãcidos nuclÃicos e atividade proteÃsica. Investigou-se ainda a sensibilidade dos biofilmes frente à anfotericina B, caspofungina, fluconazol, itraconazol e voriconazol. Para avaliaÃÃo da atividade inibitÃria do ritonavir sobre a estrutura e o funcionamento dos biofilmes de T. asahii e T. inkin, biofilmes foram formados na presenÃa de ritonavir e avaliados quanto à adesÃo celular, desenvolvimento estrutural e atividade proteÃsica. Adicionalmente, o ritonavir foi avaliado sobre biofilmes maduros, composiÃÃo de matriz e alteraÃÃes estruturais. CÃlulas planctÃnicas de T. asahii e T. inkin (n=2 cada) tambÃm foram investigadas quanto à sensibilidade ao ritonavir isolado e em combinaÃÃo com antifÃngicos. Por fim, cÃlulas planctÃnicas foram prÃ-expostas ao ritonavir e avaliadas quanto à capacidade de formaÃÃo de biofilmes, sensibilidade a antifÃngicos e alteraÃÃo na hidrofobicidade de suas superfÃcies. A produÃÃo de biofilmes foi mÃxima em RPMI pH 7,0, em inÃculo de 1x106 cÃlulas/mL, e incubaÃÃo a 35ÂC, sob agitaÃÃo. Os biofilmes produzidos nessas condiÃÃes sÃo formados por comunidades dinÃmicas, associadas a uma matriz extracelular, e mostram aumento da atividade metabÃlica e biomassa ao longo do tempo, atingindo estabilidade apÃs 48 h de cultivo. Durante o desenvolvimento dos biofilmes, ocorre liberaÃÃo de cÃlulas viÃveis e Ãcidos nuclÃicos para o ambiente circundante. Os biofilmes de T. inkin produzem mais proteases e toleram maiores concentraÃÃes de antifÃngicos que as cÃlulas planctÃnicas relacionadas. Dada à presenÃa de proteases durante o desenvolvimento do biofilme de T. inkin, foi hipotetizado que essas enzimas poderiam ser consideradas alvos importantes no controle dos biofilmes. Os resultados mostraram que o ritonavir diminuiu a adesÃo celular e formaÃÃo de biofilmes maduros, alÃm de reduzir a atividade proteÃsica e alterar a estrutura dos biofilmes. O ritonavir nÃo interferiu na atividade metabÃlica de biofilmes maduros, mas alterou a composiÃÃo da matriz extracelular dos biofilmes, as quais apresentaram diferentes espectros protÃicos em comparaÃÃo com o grupo controle. O ritonavir inibiu o crescimento planctÃnico de T. asahii e T. inkin a 100 μg/mL. Entretanto, nÃo foi observado sinergismo entre o ritonavir e os antifÃngicos testados. Em cÃlulas planctÃnicas, a prÃ-exposiÃÃo ao ritonavir reduziu significativamente os valores de concentraÃÃo inibitÃria mÃnima da anfotericina B em T. asahii e T. inkin, embora nÃo tenha alterado a resposta aos azÃlicos. A prÃ-incubaÃÃo com ritonavir reduziu a adesÃo das cÃlulas, mas nÃo a formaÃÃo de biofilmes maduros, alÃm de alterar a hidrofobicidade da superfÃcie celular. O presente artigo detalhou caracterÃsticas dos biofilmes de T. inkin e mostrou o potencial do uso de um inibidor de proteases no controle dos biofilmes de T. asahii e T. inkin.<br>In recent years, several studies have considered Trichosporon genus as emerging opportunistic pathogens in immunocompromised patients. Although the dynamics are not well understood, it is known that events associated with biofilm formation on these fungi play an important role in the infectious process. Thus, the present study analyzed morphophysiological aspects of biofilms produced by Trichosporon spp., as well as the role of a protease inhibitor on T. asahii and T. inkin cells and biofilms. In the first part of the study, we investigated the biofilm formation of T. inkin (n=7) in RPMI broth, CLED broth and Sabouraud broth at pH 5.5 and pH 7.0, with initial inoculum of 1x104, 1x105 and 1x106 cells/ml, incubated at 28ÂC and 35ÂC in static or shaking at 80 rpm. Biofilms were evaluated for their biomass and metabolic viability, viable cell counts, quantification of nucleic acids and proteinase activity. It was also investigated the sensitivity of the biofilm front of amphotericin B, caspofungin, fluconazole, itraconazole and voriconazole. To evaluate the inhibitory activity of ritonavir on the structure and functioning of T. asahii and T. inkin biofilms, biofilms were formed in the presence of ritonavir and evaluated for cell adhesion, structural development and proteinase activity. Additionally, ritonavir was assessed on mature biofilms, matrix composition and structural changes. Planktonic cells of T. asahii and T. inkin (n=2 each) were also investigated for sensitivity to ritonavir alone and in combination with antifungals. Finally, planktonic cells were pre-exposed to ritonavir and evaluated for biofilm formation capacity, susceptibility to antifungal agents, and changes in their surface hydrophobicity. Maximum biofilms growth in RPMI pH 7.0 for inoculation of 1x106 cells/ml and incubation at 35ÂC under stirring. Biofilms produced under these conditions are formed by dynamic communities associated with an extracellular matrix, and show increased viability and biomass over time, reaching stability after 48 hours of cultivation. During the development of biofilms occurs release of viable cells and nucleic acids into the surrounding environment. T. inkin biofilms produce more proteases and tolerate higher concentrations of antifungals that planktonic cells related. Due to the presence of proteases in the development of T. inkin biofilm, it was hypothesized that these enzymes could be considered important targets in controlling biofilms. The results showed that ritonavir decreased cell adhesion and formation of mature biofilms, and reduce protease activity and change the structure of biofilms. Ritonavir did not affect the viability of mature biofilms, but changed the composition of the extracellular matrix of biofilms, which showed different protein spectra compared to the control group. Ritonavir was able to inhibit planktonic growth of T. asahii and T. inkin approximately 50%. However, there was no synergism between ritonavir and tested antifungals. In planktonic cells, pre-exposure to ritonavir significantly reduced values of minimum inhibitory concentration of Amphotericin B in T. asahii and T. inkin, although not change the response to azoles. Preincubation with ritonavir reduced cell adhesion, but not the formation of mature biofilms, in addition to changing the hydrophobicity of the cell surface. The article detailed characteristics of T. inkin biofilms and showed the potential use of a protease inhibitor in controlling these biofilms.
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Santos, Luciano da Ressurreição. "Investigação das concentrações plasmáticas e pulmonares da Anfotericina B (AMB) estruturada em polímero biodegradável de Ácido Polilático-Poliglicólico (PLGA) revestido com Ácido Dimercaptossuccínico (DMSA)." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2010. http://repositorio.unb.br/handle/10482/8352.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2010.<br>Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-06-13T18:11:49Z
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2010_LucianodaRessurreicaoSantos.pdf: 1435722 bytes, checksum: 5b20f61ccd78addf9a53d5a83dc2c0c8 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2011-06-14T15:01:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2010_LucianodaRessurreicaoSantos.pdf: 1435722 bytes, checksum: 5b20f61ccd78addf9a53d5a83dc2c0c8 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2011-06-14T15:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2010_LucianodaRessurreicaoSantos.pdf: 1435722 bytes, checksum: 5b20f61ccd78addf9a53d5a83dc2c0c8 (MD5)<br>O presente trabalho avaliou a utilização e validou um método de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) para quantificar o antifúngico anfotericina B (AMB) em amostras de plasma e pulmão de camundongos. Este método foi utilizado para quantificar os níveis de AMB em amostras teciduais obtidas de animais tratados com um possível sistema deliberação sustentada de AMB, Nano-D-AMB (NanoAnf), baseado em misturas de polímeros de ácido polilático-co-glicólico (PLGA) e ácido dimercaptossuccínico(DMSA). O protocolo experimental incluiu a extração em fase sólida da AMB, seguido por uma análise por CLAE com detecção UV a 382 nm. Para a separação cromatográfica, utilizou-se uma coluna C18 defase reversa e uma fase móvel composta por acetonitrila:EDTA 10 mM (40:60, v/v) em pH4,65. Foi observada resposta linear no intervalo de concentração de 2,25-180 μg . mL-1, com limite de quantificação de 0,68 μg . mL-1. Os desvios padrões relativos dos ensaios intra-dia e inter-dia foram inferiores a 6% (n = 15). As taxas de recuperação das extrações variaram de acordo com os tecidos avaliados e com as concentrações utilizadas na fortificação dos mesmos (0,5-5 μg . mL-1), obtendo-se valores médios de 74,6% e 61,3% para plasma e pulmões, respectivamente. Os testes de concentração plasmática e pulmonar de AMB foram realizados em camundongos, divididos em 6 grupos de 5 animais, como segue: grupo I(tratado com Nano-D-AMB (NanoAnf), 6 mg . kg-1 i.p., eutanásia em 24 h); grupo II (tratado com Nano-D-AMB (NanoAnf), 6 mg . kg-1 i.p., eutanásia em 48 h); grupo III (tratado com Nano-D-AMB (NanoAnf), 6 mg . kg-1 i.p., eutanásia em 72 h); grupo IV (tratado com Anforicin B®, 6 mg . kg-1 i.p., eutanásia em 24 h); grupo V (tratado com Anforicin B®, 6 mg .kg-1 i.p., eutanásia em 48 h); grupo VI (tratado com Anforicin B®, 6 mg . kg-1 i.p., eutanásia em 72 h). As concentrações plasmáticas de AMB nos tempos 24 h, 48 h, e 72 h foram superiores nos grupos tratados com Nano-D-AMB (NanoAnf) (2,04 ± 0,51; 2,31 ± 0,57; 1,85± 0,46, respectivamente) em relação àqueles tratados com Anforicin B® (1,16 ± 0,19; 1,41 ±0,56; 1,32 ± 0,41, respectivamente) (p<0,05, Mann-Whitney test). Quanto aos níveis pulmonares, não foi verificada diferença significativa entre os tratamentos. Para ambas aspreparações, verificou-se um pico de concentração tecidual de AMB após 48 h de tratamento,apesar da diferença não apresentar significância estatística. Concluindo, o presente estudo avaliou um protocolo de CLAE exato e preciso para determinação de AMB no plasma e pulmões de camundongos. A preparação nano estruturada de AMB, Nano-D-AMB(NanoAnf), apresentou níveis plasmáticos superiores ao longo do tempo, o que pode sugerir um fenômeno de liberação sustentada do fármaco a partir das estruturas poliméricas de PLGA e DMSA. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>The present work was aimed to validate a High Performance Liquid Chromatography(HPLC) method for measuring amphotericin B (AMB) concentrations in murine plasma andlung samples. This method was used to quantify the levels of AMB in tissue samples obtained from animals treated with a desoxycholate amphotericin sustained delivery system based on poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) and dimercaptosuccinic acid (DMSA)polymeric blends (Nano-D-AMB). The experimental protocol includes the solid-phase extraction of AMB followed by HPLC analysis with UV detection at 382 nm. Forchromatographic separation, we used a C18 reversed-phase column and a mobile phase composed by acetonitrile:EDTA 10 mM (40:60, v/v) at pH 4.65. A linear response was observed in the concentration range of 2.25-180 μg . mL-1, with a limit of quantification of0.68 μg . mL-1. The intra-day and inter-day relative standard deviations (R.S.D.) were lessthan 6% (n=15). The extraction recovery rates varied according to the tissue and the spiked concentrations used (0.5-5 μg . mL-1); the recovery rates were 74.6% and 61.3% for plasma and lungs, respectively. For testing the AMB levels in lungs and plasma of treated mice, the animals were randomly divided into six groups of 5 animals as follows: group I (treated withNano-D-AMB 6 mg . kg-1 i.p., euthanized at 24 h); group II (treated with Nano-D-AMB, 6mg . kg-1 i.p., euthanized at 48 h); group III (treated with Nano-D-AMB, 6 mg . kg-1 i.p.,euthanized at 72 h); group IV (treated with Anforicin B®, 6 mg . kg-1 i.p., euthanized at 24 h);group V (treated with Anforicin B®, 6 mg . kg-1 i.p., euthanized at 48 h); group VI (treatedwith Anforicin B®, 6 mg . kg-1 i.p., euthanized at 72 h). Nano-D-AMB provided higher AMBconcentrations in plasma at 24 h, 48 h, and 72 h (2.04 ± 0.51; 2.31 ± 0.57; 1.85 ± 0.46,respectively) than Anforicin B® (1.16 ± 0.19; 1.41 ± 0.56; 1.32 ± 0.41) (p<0.05, Mann-Whitney test). However, no significant differences were found in the pulmonary levels for allperiod of time tested. Although the level of AMB has showed a peak at 48 h after treatment,no significant differences were found along of the time intervals for both tested preparations.In conclusion, this study evaluated a HPLC protocol that provided an accurate and precise method to measure AMB concentrations in murine plasma and lung samples. Thenano structured preparation of AMB named Nano-D-AMB showed a marked increase inplasma concentration over the time, which could reflect a sustained drug releasing behaviorfrom the PLGA and DMSA polymeric blends.
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Nóbrega, Yanna Karla de Medeiros. "Análise da expressão de genes envolvidos na interação inicial entre macrófagos murinos e Fonsecaea pedrosoi ou suas frações." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2011. http://repositorio.unb.br/handle/10482/14702.
Full textAbstract:
Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2011.<br>Submitted by Guimaraes Jacqueline (jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-26T10:59:37Z
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2011_Yanna Karla de Medeiros Nóbrega.pdf: 5544359 bytes, checksum: 01418a2067021b2e3180c45b348f3394 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-26T11:06:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2011_Yanna Karla de Medeiros Nóbrega.pdf: 5544359 bytes, checksum: 01418a2067021b2e3180c45b348f3394 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2013-11-26T11:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2011_Yanna Karla de Medeiros Nóbrega.pdf: 5544359 bytes, checksum: 01418a2067021b2e3180c45b348f3394 (MD5)<br>A cromoblastomicose é uma micose crônica, supurativa e granulomatosa desenvolvida no tecido cutâneo e subcutâneo, causada por vários fungos dematiáceos sendo o Fonsecaea pedrosoi, o principal fungo isolado de pacientes acometidos por esta doença. A parede celular deste fungo é composta pelas frações F1 (ß 1 3 glicana e quitina) e F2 (a 1 3 glicana e melanina), sendo importantes estruturas de reconhecimento pelo hospedeiro. Os eventos iniciais da ativação das células da resposta imune inata após a interação com o patógeno tem despertado grande interesse. Na resposta imune ao F. pedrosoi os macrófagos têm um papel fundamental no curso da infecção, pois estão envolvidas no desenvolvimento da resposta inflamatória granulomatosa e nos mecanismos microbicidas. Para que essas células produzam intermediários reativos microbicidas é necessário que sejam ativados, no curso da cromoblastomicose, F. pedrosoi é capaz de modular a ativação dos macrófagos, tornando os apenas fungistático. Uma forma de avaliar o padrão de ativação dos macrófagos, após contato com o patógeno, é analisar a expressão de genes envolvidos no reconhecimento, adesão do fungo e na produção de citocinas. Considerando que o perfil da expressão gênica de macrófagos após a interação com F. pedrosoi até o momento não foi analisado, o objetivo deste trabalho foi definir o padrão de expressão dos genes (Itga5, Clec2, Cd14, Tlr2, Tlr4, Myd88, Nf?b, N?rf e Tnf$a ) envolvidos nas etapas iniciais de interação (30min, 1h, 3h, 6h e 24h) com o fungo ou seus componentes de parede isolados. Quando analisamos a modulação da expressão de genes pela interação entre macrófagos e os conídios, os resultados demonstram que houve o aumento no número de transcritos do gene Tlr4 e Myd88 (em 30min) e Cd14 e Tlr2 (em 6h), embora os transcritos dos genes que participam da ativação da via de sinalização do NF ?B (Nf?B, Tnf$a e N?rf) não tenham sido detectados. Quando analisamos a interação entre macrófagos e a fração F1 de F. pedrosoi, vimos que houve aumento do número de transcritos nos genes Cd14, Tlr2, Nf?B e Tnf$a (em 6h) e repressão para o gene N?rf, apontando para uma sinalização da via de NF ?B, sendo possível sugerir que a interação entre o macrófago e essa fração pode modular a ativação dessa célula. Para a interação entre macrófagos e a fração F2, o tempo mais expressivo também foi de 6h, quando houve aumento no número de transcritos dos genes Clec$2, Nf?B e Tnf$a, com repressão do gene N?rf, sugerindo que essa fração parece modular a resposta do macrófago ao fungo, através do indução de transcritos do gene Clec$2 inicialmente. Os resultados sugerem que os componentes de parede celular do fungo F. pedrosoi após interagirem com macrófagos são capazes de modular os genes destas células, aumentando a capacidade destas células de reconhecer os componentes da parede celular do fungo, com subseqüentes mudanças funcionais, que a tornam incapaz de eliminar esse fungo. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>The chromoblastomycosis is a chronic, suppurative and granulomatous mycosis that
affects the skin and subcutaneous tissue and is caused by various different dematiaceous
fungi. Fonsecaea pedrosoi is the main fungus isolated from patients suffering from this
disorder. The cell wall of this fungus is composed by two fractions – the F1 fraction (β-
1-3-glucan and chitin) and the F2 fraction (α-1-3-glucan and melanin). These structures
are important in the recognition of the fungus by the host immune system. Macrophages
play a key role in the initial events of the innate immune reaction to this pathogen since
they are involved in the developmental of a granulomatous inflammatory response and
bactericidal activity. The macrophage microbicidal activity depends on reactive
intermediates that need to be activated during the course of chromoblastomycosis.
However, F. Pedrosoi is capable to modulate the activation of the macrophages
reducing their activity only to fungistatic. The analysis of the expression of the genes
involved in the recognition and adhesion of the fungus and the production of cytokines
is a way to assess the pattern of activation of macrophages after their contact with the
pathogen. The gene expression profile of the macrophages after their interaction with F.
pedrosoi has not been analyzed so far. Consequently the aim of the present study was to
define the expression pattern of the genes (Itga5, Clec2, Cd14, Tlr2, Tlr4, Myd88, Nfκb,
Nκrf and Tnf-α) involved in the initial stages of interaction of the macrophage with the
fungus or the distinct components of its wall (at 30min, 1h, 3h, 6h and 24h). The
analysis of the modulation genes expression caused by the interaction between
macrophages and conidia disclosed an increase in the number of transcripts Tlr4 and
Myd88 (at 30min) and of Cd14 and Tlr2 (at 6h), although transcripts of genes
participating in the activation of the signaling pathway of NF-κB (Nfκb, Tnf-α and Nκrf)
could not been detected. In addition, the analysis of the interaction between
macrophages and the fraction F1 of F. pedrosoi showed an increased in transcripts of
the genes Cd14, Tlr2, Nfκb and Tnf-α (at 6h) and inhibition of the gene Nκrf, pointing to
a signaling pathway of NF-κB, which suggests that the interaction between this fraction
and the macrophage can modulate the activation of this cell. The analysis of the
interaction between macrophages and the fraction F1 of F. pedrosoi, disclosed an
increased numbers of transcribed genes Cd14, Tlr2, Nfκb and Tnf-α (at 6h) and
repression of the gene Nκrf, pointing to a signaling pathway of NF-κB, which might
suggest that the interaction between this fraction and the macrophage can modulate the
activation of this cell. In considering the interaction between macrophages and the
fraction F2 the time with more expression was also at 6 hours when an increase in the
number of transcripts of the genes Clec-2, Nfκb and Tnf-α was detected, with
simultaneous repression of the Nκrf gene, which suggests that this fraction apparently
initially modulate the macrophage response to the fungus through the induction of the
gene transcript Clec-2. These results suggest that components of the fungal cell wall of
F. pedrosoi, after interacting with macrophages are able to modulate the genes of these
cells, increasing their capacity to recognize the components of the fungal cell wall, with
subsequent functional changes, which result in their inability to eliminate the fungus.
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Silva, Roberta Peres da [UNESP]. "Análise de cDNA diferencialmente expressos durante o processo de infecção de Paracoccidioides brasiliensis a queratinócitos e pneumócitos." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2010. http://hdl.handle.net/11449/94785.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2010-06-01Bitstream added on 2014-06-13T19:14:39Z : No. of bitstreams: 1
silva_rp_me_arafcf.pdf: 536845 bytes, checksum: 3ba525b127840312a55b9b1b1e2c7d26 (MD5)<br>Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)<br>A paracoccidioidomicose é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas incluem desde formas localizadas até doença disseminada que pode evoluir para letalidade, dependendo provavelmente da relação entre a virulência do fungo, a resposta imunológica e a habilidade deste em interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro e invadir células epiteliais e mononucleares. P. brasiliensis tem a capacidade de invadir células epiteliais de linhagens humanas e animais, pode circunscrever os sinais celulares via actina e tubulina para invadir células normalmente não fagocíticas, assim como a citoqueratina parece desempenhar um importante papel. Neste projeto foi estudado o comportamento de P. brasiliensis quanto ao perfil de infecção aos queratinócitos e as células epiteliais pulmonares. Por outro lado, identificou-se a expressão diferencial de RNAm e de proteínas quando o fungo foi posto em contato com os dois tipos celulares, no intuito de caracterizar genes diferencialmente expressos e proteínas durante a infecção de P. brasiliensis. Verificou-se que a porcentagem de fungos que interagiu com os dois tipos celulares foi bastante semelhante. No entanto, o mecanismo de interação pode ser diferente, uma vez que as proteínas encontradas ligadas fracamente à parede do fungo apresentaram diferenças significativas no perfil eletroforético. O fungo após o contato com as células NOK aparentemente induziu alterações expressivas nas células, aparecendo prolongamentos celulares, fruto da provável alteração do citoesqueleto em que actina pode estar envolvida, principalmente em cinco e oito horas de infecção. Por outro lado, a técnica de RDA foi extremamente útil, fornecendo-nos uma visão global da situação da célula nas horas iniciais de contato...<br>Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. Clinical manifestations range from localized forms to disseminated disease that can progress to lethality, probably depending on the relationship among the virulence of the fungus, the immune response, the ability to interact with the surface structures and invade epithelial cells and mononuclear cells of the host. In order to study the steps involved from the initial contact of P. brasiliensis until the events of adhesion and invasion culminating in its entry into the cell. Using this model, it was demonstrated that not only P. brasiliensis has the ability to invade human and animal epithelial cells, as correlated for the first time, the degree of virulence with the adhesion ability of the isolates. Among the components of the cytoskeleton, P. brasiliensis probably using the actin and tubulin to invade cells, and cytokeratin seems to play an important role. In this study, we evaluated the behavior of P. brasiliensis and the profile of infection to keratinocytes and lung epithelial cells. Furthermore, we identified the differential expression of mRNA and protein when the fungus was placed in contact with the two cell types in order to characterize differentially expressed genes and proteins during P. brasiliensis infection. The percentage of fungi that interacted with the two cell types was very similar. However, the mechanism of interaction may be different, since the expressed proteins showed significant differences in electrophoretic profile. We analyzed two cDNA populations of P. brasiliensis, one obtained from contact between P. brasiliensis and pneumocytes, and other PB and keratinocytes. Our analysis identified transcripts related to 28 proteins involved in different biological processes. Transcripts were found with multiple functions... (Complete abstract click electronic access below)
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XIMENES, Pamella de Brito. "Perfil de carboidratos de parede celular de Cryptococcus neoformans e capacidade de formação do biofilme para avaliação do tratamento da criptococose experimental." Universidade Federal de Pernambuco, 2014. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/26266.
Full textAbstract:
Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-28T20:26:22Z
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DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5)<br>Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T22:05:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2
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DISSERTAÇÃO Pamella de Brito Ximenes.pdf: 725670 bytes, checksum: 773fe191224a95dcbb799276505c593c (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-09-05T22:05:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2014-02-26<br>CAPES<br>O Cryptococcus neoformans, levedura capsulada, acomete geralmente de forma disseminada imunossuprimidos, com predileção pelo sistema nervoso central. Os glicoconjugados da cápsula podem ser evidenciados por marcação com lectinas, que possuem especificidade a diversos carboidratos distintos. As lectinas desempenham atividades biológicas, e desta forma podem reconhecer padrões de expressão de glicoproteínas relacionadas a processos patológicos e maturação celular. Ainda nos processos patológicos, a capacidade desta levedura na formação do biofilme indica maior possibilidade de dano ao hospedeiro. Assim, essa pesquisa objetivou definir o perfil de virulência de C. neoformans quanto aos carboidratos da parede celular, capacidade de formação de biofilme e avaliação do tratamento da criptococose experimental. Foram avaliados 30 isolados utilizando as lectinas ConA, WGA, UEA-I e PNA conjugadas a flurosceína. Para formação do biofilme foi utilizado meio mínimo para o crescimento do fungo e os resultados foram avaliados visualmente. A criptococose experimental foi reproduzida com uma cepa capaz de produzir biofilme, segundo perfil in vitro, sendo tratado com anfotericina B. A lectina wheat germ agglutinin (WGA) foi aquela mais reconhecida pelos carboidratos. Todos os isolados formaram biofilme sem variação de intensidade. Após o tratamento, foi demonstrada a resistência a terapêutica antifúngica. Portanto, verifica-se que a composição da superfície com maior expressão de N-acetil-glicosamina em Cryptococcus contribui para formação do biofilme, proporcionando maior resistência à anfotericina B no tratamento experimental.<br>Cryptococcus neoformans encapsulated yeast, usually affects immunosuppressed disseminated form, with a predilection for the central nervous system. The glycoconjugates of the capsule may be evidenced by staining with lectins that have specificity to several different carbohydrates. The lectins play biological activities, and therefore can recognize the expression patterns of pathological processes related to the glycoproteins and cell maturation. Even in pathological processes, the ability of this strain in biofilm formation indicates a higher possibility of damage to the host. Thus, this research aimed to establish the profile of virulence of C. neoformans as the cell wall carbohydrates, the ability of biofilm formation and evaluation of the treatment of experimental cryptococcosis. 30 isolates were evaluated using ConA, WGA, UEA - I and PNA lectins conjugated to fluorescein. For biofilm formation was minimal medium used for growth of the fungus and the results were evaluated visually. The experimental cryptococcosis was reproduced with a strain able to produce biofilm, second profile in vitro, and treatment with amphotericin B. The lectin wheat germ agglutinin (WGA) was the most recognized by carbohydrates. All isolates formed biofilm with no intensity variation. After treatment was demonstrated resistance to antifungal therapy. Therefore, it is seen that the surface composition with increased expression of N-acetyl-glucosamine on Cryptococcus contributes to biofilm formation, providing greater resistance to amphotericin B in the experimental treatment.
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Silva, Roberta Peres da. "Análise de cDNA diferencialmente expressos durante o processo de infecção de Paracoccidioides brasiliensis a queratinócitos e pneumócitos /." Araraquara : [s.n.], 2010. http://hdl.handle.net/11449/94785.
Full textAbstract:
Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini<br>Banca: Henrique Leonel Lenzi<br>Banca: Eduardo Bagagli<br>Resumo: A paracoccidioidomicose é micose sistêmica causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. As manifestações clínicas incluem desde formas localizadas até doença disseminada que pode evoluir para letalidade, dependendo provavelmente da relação entre a virulência do fungo, a resposta imunológica e a habilidade deste em interagir com as estruturas superficiais do hospedeiro e invadir células epiteliais e mononucleares. P. brasiliensis tem a capacidade de invadir células epiteliais de linhagens humanas e animais, pode circunscrever os sinais celulares via actina e tubulina para invadir células normalmente não fagocíticas, assim como a citoqueratina parece desempenhar um importante papel. Neste projeto foi estudado o comportamento de P. brasiliensis quanto ao perfil de infecção aos queratinócitos e as células epiteliais pulmonares. Por outro lado, identificou-se a expressão diferencial de RNAm e de proteínas quando o fungo foi posto em contato com os dois tipos celulares, no intuito de caracterizar genes diferencialmente expressos e proteínas durante a infecção de P. brasiliensis. Verificou-se que a porcentagem de fungos que interagiu com os dois tipos celulares foi bastante semelhante. No entanto, o mecanismo de interação pode ser diferente, uma vez que as proteínas encontradas ligadas fracamente à parede do fungo apresentaram diferenças significativas no perfil eletroforético. O fungo após o contato com as células NOK aparentemente induziu alterações expressivas nas células, aparecendo prolongamentos celulares, fruto da provável alteração do citoesqueleto em que actina pode estar envolvida, principalmente em cinco e oito horas de infecção. Por outro lado, a técnica de RDA foi extremamente útil, fornecendo-nos uma visão global da situação da célula nas horas iniciais de contato... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abstract: Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. Clinical manifestations range from localized forms to disseminated disease that can progress to lethality, probably depending on the relationship among the virulence of the fungus, the immune response, the ability to interact with the surface structures and invade epithelial cells and mononuclear cells of the host. In order to study the steps involved from the initial contact of P. brasiliensis until the events of adhesion and invasion culminating in its entry into the cell. Using this model, it was demonstrated that not only P. brasiliensis has the ability to invade human and animal epithelial cells, as correlated for the first time, the degree of virulence with the adhesion ability of the isolates. Among the components of the cytoskeleton, P. brasiliensis probably using the actin and tubulin to invade cells, and cytokeratin seems to play an important role. In this study, we evaluated the behavior of P. brasiliensis and the profile of infection to keratinocytes and lung epithelial cells. Furthermore, we identified the differential expression of mRNA and protein when the fungus was placed in contact with the two cell types in order to characterize differentially expressed genes and proteins during P. brasiliensis infection. The percentage of fungi that interacted with the two cell types was very similar. However, the mechanism of interaction may be different, since the expressed proteins showed significant differences in electrophoretic profile. We analyzed two cDNA populations of P. brasiliensis, one obtained from contact between P. brasiliensis and pneumocytes, and other PB and keratinocytes. Our analysis identified transcripts related to 28 proteins involved in different biological processes. Transcripts were found with multiple functions... (Complete abstract click electronic access below)<br>Mestre
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Alencastro, Filho Tito Regis de. "Fungos da ordem Erysiphales encontrados em hospedeiros nativos do bioma cerrado." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2006. http://repositorio.unb.br/handle/10482/2297.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006.<br>Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-11-24T21:01:09Z
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Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-11-25T15:41:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1
Dissertacao TITO REGIS DE ALENCASTRO FILHO.pdf: 2889646 bytes, checksum: e5de1704de0bfd750a4c8ad1c8d08b51 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2009-11-25T15:41:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2006<br>Nove espécies de fungos da Ordem Erysiphales foram estudadas em treze hospedeiros nativos do Bioma Cerrado. O material estudado foi proveniente tanto de áreas nativas quanto de arborização urbana e viveiro de mudas, e foi depositado na Coleção Micológica de Referência da Universidade de Brasília (CMRUnB). Foram propostas quatro espécies novas de Oidium sp. encontrados associados aos hospedeiros Astronium fraxinifolium e Myracrodruon urundeuva, Caryocar brasiliense, Pouteria ramiflora, e Pterogyne nitens. Uma espécie nova de Erysiphe foi encontrada parasitando duas espécies de Bauhinia. A espécie Phyllactinia paulowniae cf. foi encontrada parasitando Tabebuia avellanadae, T. impetiginosa, e T.serratifolia e descreveu-se pela primeira vez a fase anamórfica de Erysiphe alvimii encontrada sobre Bowdichia virgilioides e o primeiro relato de um membro da ordem Erysiphales na família Caryocaraceae. Para os gêneros botânicos Astronium, Brosimum, Myracrodruon, Pouteria, e Pterogyne relatou-se pela primeira vez o gênero Oidium. Erysiphe peruviana foi relatado pela primeira vez em T. ochracea, assim como o anamorfo Ovulariopsis em T.caraiba. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Nine fungi species belonging to the Erysiphales were investigated here in association with thirteen native hosts from the Brazilian Cerrado. The specimes came from native areas, urban trees and nurseries and are stored at the Coleção Micológica de Referência da Universidade de Brasília (CMRUnB). Four new species of Oidium have been proposed having the following plants as hosts: Astronium fraxinifolium and Myracrodruon urundeuva, Caryocar brasiliense, Pouteria ramiflora, and Pterogyne nitens. A new species of Erysiphe was found growing in two Bauhinia species. Phyllactinia paulowniae cf. was found growing on Tabebuia avellanadae, T. impetiginosa, T.serratifolia. The anamorphic stage of Erysiphe alvimii was found for the first time in association with Bowdichia virgilioides and a first report of a member of the Erysiphales attacking a host in the Caryocaraceae family. Oidium sp. was found for the first time attacking members of the following genera: Astronium, Brosimum, Myracrodruon, Pouteria, and Pterogyne. In addition, Erysiphe peruviana was also reported on Tabebuia ochracea, as well as the anamorph Ovulariopsis on T.caraiba.
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Nicola, André Moraes. "Estudo de fatores associados à virulência e imunidade na interação entre macrófagos e Cryptococcus neoformans." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2011. http://repositorio.unb.br/handle/10482/10388.
Full textAbstract:
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular. 2011.<br>Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-05-04T11:00:25Z
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Tese versao final.pdf: 34222648 bytes, checksum: 674bc4915b3bdf2d82beeb39a1bcfb06 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-07T14:37:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1
Tese versao final.pdf: 34222648 bytes, checksum: 674bc4915b3bdf2d82beeb39a1bcfb06 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2012-05-07T14:37:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Tese versao final.pdf: 34222648 bytes, checksum: 674bc4915b3bdf2d82beeb39a1bcfb06 (MD5)<br>Cryptococcus neoformans é uma levedura encapsulada patogênica, causadora de meningoencefalite severa. Estima-se uma incidência anual de um milhão de casos de criptococose no mundo, com mais de 600.000 mortes. O desenvolvimento da criptococose se correlaciona fortemente com o estado imunitário do paciente, sendo os macrófagos as principais células efetoras na resposta imune contra esse fungo. O objetivo desta tese é estudar fatores do hospedeiro e do patógeno que sejam importantes durante a interação entre C. neoformans e macrófagos. Os trabalhos desta tese foram divididos em quatro capítulos baseados em quatro objetivos específicos. O primeiro objetivo foi estudar vesículas extracelulares de C. neoformans, utilizadas pelo fungo para secretar polissacarídeos capsulares e outros fatores de virulência. Sondas lipofílicas mostraram vesículas na superfície da cápsula e sugeriram que estas estruturas possuem RNA. Outros dois projetos também mostraram a importância das vesículas na melanização de C. neoformans e na secreção de toxinas por Bacillus anthracis. Outro tema abordado foi o mecanismo de ação de anticorpos monoclonais contra a cápsula de C. neoformans. Experimentos de expressão gênica feitos com fungos expostos a anticorpos monoclonais sugeriram indução da biossíntese de ácidos graxos. Esta alteração metabólica foi confirmada por métodos bioquímicos e se correlacionou com um aumento na susceptibilidade ao antifúngico anfotericina B, sugerindo que anticorpos ajam também alterando o metabolismo do patógeno. Em outro trabalho, foi feita uma varredura com biblioteca de RNAs de interferência para identificar o receptor de superfície do isotipo IgG3 murino. A interferência com um dos genes identificados na varredura, a integrina beta 1 (Itgb1), levou a diminuição da ligação deste isotipo à superfície de macrófagos e da fagocitose mediada por IgG3, sem nenhum efeito na função do isotipo IgG1. Estes resultados sugerem que Itgb1 possa ser o receptor específico deste isotipo de IgG murino, que vem sendo procurado há três décadas. Foram também estudadas por citometria de fluxo a cinética da fagocitose e a exocitose não-lítica de C. neoformans, um fenômeno descrito recentemente pelo qual o fungo é expelido pelo macrófago sem que nenhuma das duas células morra. Drogas que neutralizam a acidez do fagolisossomo alteraram a taxa de exocitose não-lítica, indicando que o pH deste compartimento é importante para a liberação do fungo. Adicionalmente, a metodologia citométrica foi utilizada para medir exocitose não-lítica em pulmões de camundongo, com aproximadamente 45% em comparação com taxa de pouco menos de 10% in vitro. Estes resultados sugerem que a exocitose não-lítica ocorra durante a criptococose, com importantes implicações no entendimento desta doença. Por fim foi testada a hipótese de que a autofagia do macrófago seja importante na resposta imune contra C. neoformans. A autofagia é um mecanismo conservado em eucariotos para a reciclagem de material intracelular que tem sido implicado na imunidade contra um número cada vez maior de patógenos intracelulares. Experimentos de imunofluorescência mostraram fagossomos contendo C. neoformans positivos para o marcador de autofagossomos LC3. RNA de interferência contra ATG5, um gene essencial para autofagia, diminuiu a atividade antifúngica de macrófagos e as taxas de exocitose não-lítica e aumentou a secreção de citocinas pró-inflamatórias como IL-6, TNF-α, IL-12 e IFN-γ. Camundongos com nocaute condicional de ATG5 não apresentaram nenhuma diferença de sobrevida em relação aos controles após infecção por C. neoformans. Entretanto, estes animais tiveram uma resposta imune com melhor balanço Th1/Th2 que resultaram em menor carga fúngica e diferenças no padrão histopatológico pulmonar. Estes resultados sugerem que a autofagia tem múltiplos papéis na imunidade contra C. neoformans.
Em conjunto, estes trabalhos esclarecem alguns pontos na importante relação entre C. neoformans e macrófagos do hospedeiro e podem servir como base para trabalhos translacionais que melhorem a profilaxia ou terapêutica da criptococose. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Cryptococcus neoformans is an encapsulated pathogenic yeast that causes severe meningoencephalitis. It is estimated that over one million cases of cryptococcosis occur each year, with about 600,000 deaths. Macrophages are the main effector cells in immunity against this fungus. The objective of this thesis is to study host and pathogen factors that are important during the interaction between C. neoformans and macrophages. The work described in this thesis has been divided in four chapters based in four specific objectives. The first objective was to study C. neoformans extracellular vesicles, used by the fungus to secrete capsular polysaccharide and several other virulence factors. Lipophilic probes revealed vesicles on the capsule surface and suggested that they may carry RNA. Two other projects also showed the importance of extracellular vesicles in C. neoformans melanization and Bacillus anthracis toxin secretion. Another subject was the mechanism of action of monoclonal antibodies to the C. neoformans capsule. Gene expression studies made with C. neoformans that had been exposed to monoclonal antibodies suggested an induction of fatty acid biosynthesis. This metabolic alteration was confirmed using biochemical methods and correlated with increased susceptibility to the antifungal amphotericin B, suggesting that antibodies also act by altering the metabolism of the pathogen. Another project involved screening an RNAi library to search for the cell surface receptor of murine IgG3. Interference with one of the genes identified in the screening, integrin beta 1 (Itgb1), resulted in decreased binding of this antibody to macrophage surface and impaired IgG3-mediated phagocytosis, with no effect in the function of IgG1. These results suggest that Itgb1 may be the specific murine IgG3 receptor, which has been pursued for over three decades. The kinetics of phagocytosis and non-lytic exocytosis, a recently described phenomenon in which C. neoformans is expelled from macrophages without harm to either cell type, were also studied using flow cytometry. Drugs that neutralize the phagolysosomal acidity altered the non-lytic exocytosis rates, indicating that the pH inside this compartment influences fungal release. Additionally, the cytometric methodology was used to measure non-lytic exocytosis in mouse lungs, with a rate of approximately 45% in comparison with 10% in vitro. The suggestion that non-lytic exocytosis happens during cryptococcosis could have important implications in understanding this disease. Lastly, the hypothesis that macrophage autophagy is involved in the immune response against C. neoformans was tested. Autophagy is a mechanism conserved in all eukaryotes to recycle intracellular material and has been implicated in immunity against an ever-growing list of intracellular pathogens. Immunofluorescence showed C. neoformans-containing phagosomes positive for the autophagosome marker LC3. RNA interference against ATG5, a gene that is essential for autophagy, decreased macrophage antifungal activity and non-lytic exocytosis and increased secretion of pro-inflammatory cytokines such as IL-6, TNF-α, IL-12 e IFN-γ. ATG5 conditional knockout mice had no survival difference compared to controls after infection with C. neoformans. However, these animals had an immune response with better Th1/Th2 balance that resulted in lower fungal burden and different histopathological pattern in the infected lungs. These results suggest that autophagy has multiple roles in immunity against C. neoformans. As a whole, the work described in this thesis clarify some points in the important interaction between C. neoformans and host macrophages and could be the basis for future translational studies that could improve cryptococcosis prophylaxis or therapy.
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Sant'Ana, Letícia Araujo Menezes. "Análise estrutural e funcional da região promotora do gene quitina sintase 4 de Paracoccidioides brasiliensis." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2008. http://repositorio.unb.br/handle/10482/3815.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008.<br>Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2010-02-27T13:37:00Z
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2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-03-02T02:17:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2008_LeticiaAraujoMenezesSantAna.pdf: 953556 bytes, checksum: c3e7506e3274ec41213555aecdcc8af3 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2010-03-02T02:17:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2008-10-30<br>O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, a micose sistêmica com maior prevalência na América Latina. A patogenia deste fungo parece estar diretamente ligada ao processo dimórfico. A expressão diferencial de genes é essencial em diversos processos biológicos como resposta ao estresse, diferenciação celular, interação hospedeiro-patógeno, entre outros. P. brasiliensis, é capaz de sobreviver e se replicar no interior dos macrófagos do hospedeiro. Nesse sentido, genes ortólogos a potenciais fatores de virulência de outros microrganismos patogênicos são encontrados em P. brasiliensis. Nesse contexto, esse trabalho analisa a regulação do gene quitina sintase 4 (CHS4), responsável pela polimerização da quitina, um polímero que atua na biosíntese da parede celular. Visando a análise da função promotora do gene CHS4, um fragmento de DNA contendo a região promotora deste gene foi clonado e transformado em A. nidulans utilizando o gene repórter lacZ. Os transformantes foram cultivados em meios contendo diferentes fontes de carbono. Os resultados sugerem que o precursor de quitina, Nacetilglicosamina, ativa o promotor de CHS4. Também foi realizada uma busca por regiões consenso a sítios de ligação para fatores de transcrição. Foram encontrados vários sítios para fatores de transcrição diversos e selecionado uma região que continha um elemento consenso ao sítio de ligação a PacC e dois sítios consenso para STRE. Para essa região foi sintetizado um oligonucleotídeo utilizado como sonda para o experimento de retardo de mobilidade eletroforética (EMSA). Os resultados do EMSA sugerem uma interação DNA-proteína específica em ambas as fases e outra interação micélio específica. Esses resultados nos mostram que a região utilizada como sonda pode estar atuando na regulação transcricional do gene CHS4, mas ainda são dados insuficientes para determinar qual proteína está interagindo com a região promotora deste gene.
_______________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>The fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of the paracoccidioidomycosis, the major systematic mycosis prevalent in Latin America. This fungus is able to survive and replicate in the interior of the host macrophages, and its pathogenesis seems to be directly correlated with its dimorphism for which differential gene expression is essential. The differential gene expression is also crucial in different biological processes such as stress-response, cellular differentiation, host-pathogen interactions, and others. Furthermore, orthologs genes to potential virulence factors in other pathological microorganisms are found in P. brasiliensis. In this context, this work analyses the regulation of chitin synthase 4 (CHS4), responsible for the polymerization of chitin - a polymer which acts in the biosynthesis of the cellular wall. In the attempt to analyse the promoter function of the CHS4 gene, a DNA fragment containing the promoter region of this gene was cloned and transformed in Aspergillus nidulans, using lacZ as the gene reporter. The transformants were cultivated in broth containing different sources of carbon. The results from these experiments suggest that the chitin precursor, N-acetylglucosamine, activates the promoter of CHS4 gene. A search for consensus regions to transcriptional factors’ binding sites was also performed and assorted sites for diverse transcriptional factors were found. A region which contained a consensus element to the binding site of PacC and two consensus sites for STRE was selected for further investigation. An oligonucleotide, for this region, was synthesized to be used as a probe for the electro mobility shift assay (EMSA). The results suggest two specific protein- DNA interactions, one in both phases and another peculiar to the mycelium phase. This would suggest the region used as a probe may act in the transcriptional regulation of the CHS4 gene; nevertheless the results so far are insufficient to determine which protein is interacting with the promoter region.
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Compart, Luciana Cristina Amaral. "Suporte cerâmico para imobilização de basidiomicetos em biorremediação de solos." reponame:Repositório Institucional da UFOP, 2004. http://200.239.128.16/handle/123456789/6357.
Full textAbstract:
Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Materiais. Rede Temática em Engenharia de Materiais, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.<br>Submitted by Marise Leite (marise_mg@yahoo.com.br) on 2016-02-29T12:41:36Z
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DISSERTAÇÃO_SuporteCerâmicoImobilização.pdf: 1573561 bytes, checksum: 17913c0266fe0cce055fa399b92bc745 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2016-04-11T13:22:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2
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license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)<br>Made available in DSpace on 2016-04-11T13:22:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2004<br>Entre os compostos sintéticos mais poluentes, podemos citar os organoclorados. A vida extremamente longa desses compostos, em ambientes naturais, amplifica a sua toxicidade e os problemas de riscos à saúde humana. No Brasil, fungos basidiomicetos estão sendo avaliados para a biorremediação de solos contaminados com organoclorados empregando-se biorreatores com 400kg de solo. Na etapa da inoculação ocorre perda de 70% da viabilidade do inóculo, devido ao atrito ocasionado pela mistura do micélio ao solo. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver e caracterizar um suporte para a imobilização do inóculo fúngico, visando diminuir o atrito e manter a viabilidade do inóculo. Dentre as diversas matérias-primas avaliadas (bucha vegetal, compósito celulose/caramelo, pó de ardósia e de alumina) foi selecionado o pó de ardósia. A forma de esfera oca (de ~16mm, ~22mm e ~49mm de diâmetro) foi considerada a mais apropriada para a elaboração dos suportes. A densidade real da ardósia estudada foi de 2,70g/cm3. As barbotinas (suspensão de pó de ardósia em água) nas concentrações de sólido de 40% e 50% v/v foram analisadas quanto à viscosidade e ao potencial Zeta, sendo a concentração de 40% v/v a que apresentou menor viscosidade e maior valor de potencial Zeta. A sinterização foi realizada nas temperaturas de 850°C, 950°C, 1000°C, 1050°C e 1070°C. O produto sinterizado foi analisado por difração de Raios-X (DRX), microscopia eletrônica de varredura (MEV), e porosidade por intrusão de mercúrio (PIM). O DRX mostrou que as fases presentes no pó de ardósia são quartzo, clorita, moscovita e albita, enquanto nas peças sinterizadas a 1050°C são quartzo, microclínio e albita. A temperatura de 1050°C é a mais indicada para a sinterização dos suportes cerâmicos, porque permite a obtenção dos suportes com porosidade menor que 1%, sem que ocorra a deformação dos mesmos. A imobilização de Psilocybe castanella CCB444 foi realizada por meio da inoculação de discos de crescimento obtidos em meio agar extrato de malte (MEA) nos suportes contendo o substrato lignocelulósico, previamente esterilizado. Os suportes colonizados foram incubados a 28°C. A biomassa fúngica foi estimada pela quantificação do ergosterol (conversão ergosterol-biomassa). O crescimento exponencial de P. castanella, imobilizado nos suportes, foi observado a partir do 14° dia. As atividades de fenoloxidases e de lacases foram determinadas em diferentes tempos de cultivo, empregando-se metodologias padronizadas. Estas atividades foram detectadas a partir do quinto dia de crescimento do inóculo imobilizado. Os suportes colonizados foram submetidos a teste de eficiência mecânica em moinho (75rpm), contendo areia grossa. O desgaste dos suportes, determinado por avaliação visual antes e após o teste, não foi influenciado pelo tamanho da esfera, nem pelo tempo de duração do ensaio. O teste de viabilidade consistiu em colocar o suporte (na proporção de 3%) no moinho contendo areia, por 45’ a 75rpm, e determinar a biomassa fúngica e as atividades enzimáticas, antes e após o ensaio. O inoculo não imobilizado também foi avaliado. O fungo imobilizado no suporte cerâmico teve uma perda de atividade enzimática de 5%, enquanto para o fungo não imobilizado esta perda foi de 88%. Os resultados evidenciaram o potencial dos suportes cerâmicos, produzidos com o pó de ardósia, para imobilização de inóculo fúngico, visando sua utilização em processos de biorremediação de solos. ____________________________________________________________________________________<br>ABSTRACT: Among the most pollutant synthetic compounds we can mention the organochlorines. The extremely long duration of these substances in the environment amplifies their toxicity and the risks for the human health. In Brazil, the basidiomycetes fungi are being evaluated for the bioremediation of contaminated soil using bioreactors with capacity of handling 400kg of soil. During the inoculation stage there is a loss of ~70% of the inoculum due to friction during mixing of the mycelia to the soil. The objective of the present work was to develop and characterize a support for fungi inoculum immobilization aiming to avoid the direct friction between inoculum and soil. We have investigated some raw materials (vegetable sponge, cellulose/caramel composite, alumina and slate powder for ceramics) for the support prodution. The slate powder was selected as the raw material for the ceramic support. The hollow sphere form (of ~16mm, ~22mm and ~49mm of diameter) was considered the most appropriate for the ceramic supports. The true density of the slate powder was mesured as 2.7g/cm3. The viscosity and the Zeta potential of the slips made with concentrations of 40% and 50% v/v of the slate powder were measured. The 40% v/v slip presented the lowest viscosity and the highest module of Zeta potential. The sintering was performed in an eletric muffle at 850°C, 950°C, 1000°C, 1050°C and 1070°C during 60 minutes. The sintered materials were analyzed used X-ray diffraction (XRD), scanning eletron microscopy (SEM) and mercury intrusion porosimetry (MIP). The XRD showed that the phases in the slate powder are quartz, chlorite, muscovite and albite while in the ceramic sample sinterized at 1050°C the phases were quartz, microcline and albite. The sintering temperature of 1050°C was selected for the production of ceramic support since we obtained samples with porosity < 1% and no cracks or warping. The immobilization of the Psilocybe castanella CCB444 was made by inoculating the mycelial disks into the ceramic supports with lignocellulose substrate. Colonized supports were incubated at 28°C. The fungal biomass was calculated by the quantification of ergosterol (ergosterol-to-biomass conversion). The exponential growth of P. castanella immobilized in the supports was observed after the day 14. The phenoloxidases and laccases activities have been determined at different time intervals and these activities have been detected after the 5th day of growth of immobilized inoculum. The colonized supports have been tested for mechanic resistence in a milling mill (75rpm) containing coarse sand. The abrasion of the supports determined by visual inspection before and after the test was not influenced neither by the size of the sphere nor by the testing time duration. In the viability test we have added 3% of the support spheres in the milling mill (75rpm during 45'). The determination of the fungic biomass and the enzymatic activities were measured before and after the assay. Immobilized fungus in the ceramic support had a 5% loss in the enzymatic activity while not immobilized fungus had a 88% loss. The results commfirm the great potential of the ceramic supports for fungal inoculum immobilization.
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ROBERTO, Ana Emília de Medeiros. "Detecção de resistência as Equinocandinas de Isolados Clínicos de Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis através de Espectrometria de massas." Universidade Federal de Pernambuco, 2016. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/25070.
Full textAbstract:
ROBERTO, Ana Emília de Medeiros, também é conhecida em citações bibliográficas por: MEDEIROS, A. E. R.<br>Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-07-11T20:48:52Z
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DISSERTAÇÃO Ana Emília de Medeiros Roberto.pdf: 2427887 bytes, checksum: 98fa3502db60df7b1feef1a3e2887aa1 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-07-13T22:51:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2016-03-01<br>CAPES<br>Observa-se um contínuo aumento na resistência de espécies de Candida aos antifúngicos disponíveis. Faz-se necessário que o diagnóstico seja oportuno e verossímil, associado à indicação terapêutica que é corretamente direcionada a partir de testes de sensibilidade antifúngica in vitro. A utilização da espectrometria de massas através da técnica de Matrix Assisted Laser Desorption/Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) que reduz o tempo de diagnóstico em comparação com métodos de rotina já é uma realidade, contudo estudos apontam a capacidade dessa metodologia em identificar cepas resistentes pela detecção de mudanças mínimas no perfil proteíco da cepa após exposição ao fármaco. Assim, objetivou-se diagnosticar, em pacientes internados em UTI, isolados clínicos do complexo Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis e Candida metapsilosis) através da técnica proteômica Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) e correlacionar sua sensibilidade/resistência às equinocandinas com mudanças no espectro protéico. Trata-se de uma pesquisa experimental analítica com abordagem qualitativa. Amostras sanguíneas venosas foram coletadas entre agosto de 2014 e julho de 2015, a partir de pacientes internados em UTI, foram observadas ao exame direto e colhidas em frascos de hemocultura. As leveduras isoladas foram identificadas por MALDI-TOF MS e testes de sensibilidade antifúngica foram realizados através do CLSI frente a anidulafungina, caspofungina e micafungina. A detecção na resistência através da mudança mínima do plano espectral protéico obtida no MALDI-TOF MS, foi possível após o cruzamento de cada concentração do espectro com uma das duas concentrações extremas, máxima ou nula, onde formou-se uma matriz a partir do Índice de Correlação do Composto (ICC) utilizado para gerar mapas de calor. Foram diagnosticados 44 casos de candidemia, sendo 26 por Candida parapsilosis, dez C. albicans, dois casos por C. metapsilosis, dois C. orthopsilosis, dois por C. tropicalis, um C. haemulonii e um Candida sp. Vinte e oito (93,2%) isolados do complexo Candida parapsilosis foram sensíveis as equinocandinas de acordo com CLSI e 24 (79,9%) foram sensíveis de acordo com MALDI-TOF. A Concentração Inibitória Mínima e a Mudança Mínima no Perfil Protéico obtidos através do CLSI e MALDI-TOF, apresentaram concordância de 91,6%, 96,6% e 98,3% para anidulafungina, caspofungina e micafungina, respectivamente, frente os isolados de Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS é capaz de determinar o breakpoint de uma levedura clínica após 15 horas de exposição ao antifúngico e permite predizer a melhor escolha antifúngica para pacientes críticos com candidemia.<br>Recently, there is an increase in resistance of Candida species to antifungal drugs available. It is necessary that the diagnosis is timely and credible associated with therapeutic indication that is directed from in vitro antifungal susceptibility testing. The use of mass spectrometry through the technique of Matrix Assisted Laser Desorption / Ionisation Time-Of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS), which reduces the time of diagnosis as compared to routine methods is already a reality, however pointed studies this methodology can identify resistant strains by detecting minimal changes in protein profile of strain after exposure. Thus, the objective was to diagnose in ICU patients, clinical isolates of complex Candida parapsilosis lato sensu (Candida parapsilosis stricto sensu, Candida orthopsilosis and Candida metapsilosis) through proteomic technique Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) and correlate their sensitivity/resistance to echinocandins with changes in the protein spectrum. It is an analytical experimental research with qualitative approach. Venous blood samples were collected between August 2014 and July 2015, from ICU patients were observed in the direct examination and harvested in blood culture bottles. The yeasts were identified by MALDI-TOF MS and sensitivity tests were performed using CLSI antifungal and MALDI-TOF MS, compared to anidulafungin, caspofungin and micafungin. After crossing every spectrum concentration with one of the two extreme concentrations, maximum or zero, formed the matrix of Compound Correlation Index (ICC) used to generate heat maps. 44 cases of candidemia were diagnosed, 26 by Candida parapsilosis ten C. albicans, two cases of C. metapsilosis two C. orthopsilosis two by C. tropicalis, a C. haemulonii and one case of Candida sp. Twenty-eight (93.2%) isolates of Candida parapsilosis complex echinocandins according to CLSI and 24 were sensitive (79.9%) were sensitive according to MALDI-TOF. The Minimum Inhibitory Concentration and Minimum Change in Protein Profile obtained by CLSI and MALDI-TOF showed concordance of 91.6%, 96.6% and 98.3% for anidulafungin, caspofungin and micafungin, respectively, compared isolates Candida parapsilosis. MALDI-TOF MS is able to determine the breakpoint of a clinical yeast after 15 hours of exposure to antifungal and allows predicting the best antifungal choice for critically ill patients with candidemia
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Abarca, Salat Ma Lourdes. "Contribución al estudio de la micoflora presente en el hábitat de animales aparentemente sanos." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 1986. http://hdl.handle.net/10803/672797.
Full textAbstract:
La célula animal puede ser parasitada por un amplio grupo de hongos miceliares y levaduras que desencadenan procesos clínicos característicos: dermatofitosis, micosis profundas, etc. Estos microorganismos han sido objeto de estudio por parte de numerosos investigadores, pero son escasos los trabajos que hacen referencia a la micoflora presente en animales sin afección fúngica alguna.
La presencia de todo tipo de hongos en la piel y plumas de los animales está directamente relacionada con el contenido en propágulos fúngicos viables del hábitat propio de cada animal: atmósfera, suelos, nidos, camas, etc.
Otro aspecto de gran interés es el de las micotoxicosis, originadas tras el consumo de alimentos contaminados por cepas fúngicas toxigéni ca s , capaces de elaborar y acumular micotoxinas sobre este sustrato o directamente por las micotoxinas, metabolitos secundarios de marcada resistencia a los factores ambientales y que una vez vertidos al medio por parte de las cepas productoras, pueden persistir activos durante un largo período de tiempo.
Por todo lo expuesto, hemos considerado de interés llevar a cabo una investigación que permita establecer la distribución de hongos en animales procedentes de granjas y explotaciones
ubicadas en su totalidad en Cataluña y que no presentaban procesos micóticos aparentes, así como estudiar la capacidad de elaborar y acumular aflatoxinas por parte de las cepas pertenecientes al grupo “Aspergillus flavus” aisladas de muestras de alimentos destinados al consumo animal, estudiando de forma exhaustiva su capacidad tóxica y determinando los niveles de las mismas que las cepas mencionadas pueden producir en diversas condiciones de cultivo.
El estudio detallado de los resultados obtenidos tiene por objeto indicar las relaciones ecológicas entre los hongos aislados de los diversos sustratos estudiados y la posible incidencia de animales portadores de hongos patógenos que pueden ser el elemento transmisor de procesos de infección a otros animales e incluso al hombre, así como detectar la presencia de cepas con capacidad de elaborar aflatoxinas, metabolitos que pueden ser acumulados en el animal y tras el consumo del mismo o de sus derivados, originar un proceso de micotoxicosis en el hombre.
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Silva, Julhiany de Fátima da. "Estudo de diferentes isolados de Paracoccidioides brasiliensis quanto ao padrão de adesão e expressão de ligantes da matriz extracelular /." Araraquara : [s.n.], 2008. http://hdl.handle.net/11449/94789.
Full textAbstract:
Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini<br>Banca: Célia Maria de Almeida Soares<br>Banca: Gil Bernard<br>Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico causador da paracoccidioidomicose, doença de comprometimento orgânico múltiplo e de evolução prolongada. A virulência de P. brasiliensis pode ser atenuada ou perdida após subseqüentes ciclos de subcultivos durante longos períodos e restabelecida após inoculações em animais ou pela passagem em cultura de células. Um aspecto importante na interação entre P.brasiliensis e seu hospedeiro é a habilidade do fungo em aderir aos componentes da matriz extracelular. O entendimento e identificação destas moléculas revestem-se de importância na descoberta de tratamentos eficientes para as micoses sistêmicas. Assim, neste trabalho, foram estudados 13 diferentes isolados de P. brasiliensis quanto ao padrão de infecção à cultura de células epiteliais pulmonares (A549), genotipagem com os iniciadores OPJ4, M13 e GACA4 empregando as técnicas de RAPD e PCR fingerprinting, bem como a verificação de proteínas expressas diferencialmente, e sua capacidade de ligação a componentes da matriz extracelular (MEC). Os diferentes isolados de P. brasiliensis apresentaram maior capacidade de infecção após reisolamento de células epiteliais. As amostras mais aderentes foram Pb18, Pb2508 e Pb2367 e as menos aderentes foram Pb2669, Pb2508 e Pb2367. Quanto aos genótipos, perfis diferenciais foram observados e correlação com padrão de infecção e distribuição geográfica foi observada para alguns isolados com dois dos iniciadores (OPJ4 e M13). A análise protéica dos extratos "cell free" de P. brasiliensis, por eletroforese bidimensional também forneceu perfis diferenciais entre as amostras subcultivadas e reisoladas e 62 ligantes de colágeno tipo I, 18 de laminina e 23 de fibronectina de um total de 420 proteínas expressas foram observados...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abastract: Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus, ethiologic agent of paracoccidioidomycosis, disease of multiple organic implications and prolonged evolution. P. brasiliensis virulence can be attenuated or lost after subsequent cycles of subcultive for during long periods and reestablished after by the passage in animals or in the epithelial cells culture. The success of colonization is a complex event, generally involving a ligand coded by the pathogen (adhesins) and a cell receptor. An important aspect in the interaction between P.brasiliensis and your host is the ability to adhere to matrix extracelular components (ECM). This fungal employs a series of strategies to colonize and to disseminate, including ligands. The understanding and identification of these molecules is very important in the discovery of efficient treatments for the systemic mycoses. The aim of this study was to investigate the P. brasiliensis infection pattern to the pulmonary epithelial cells (A549), the molecular typing by RAPD and PCR fingerprinting using, respectively, the primers OPJ4, M13 and GACA4, as well as the protein expressed and the ligand to ECM of the different strains. All P. brasiliensis isolates presented different capacity to adhere to epithelial cells. The most and less adherent isolates were respectively Pb18, Pb2508ar and Pb2367ar, and Pb2669ar, Pb113 e Pb2663ar. Regarding the genomic polymorphisms, differential RAPD's profiles and PCR fingerprinting were observed and a relative correlation with the infection pattern and geographical distribution could be observed. The profile of four P. brasiliensis "cell-free" extracts from subcultivated and reisolated strains was analysed by two-dimensional electrophoresis. Differentially expressed proteins were identified. Furthermore, a lot of ligands were observed to ECM components, 62 ligands to collagen type I, 23 to fibronectin...(Complete abstract, click electronic access below)<br>Mestre
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Moraes, Daniella de Sousa. "Análise da região promotora dos genes 1,3-ß-glicana sintase e quitina sintase 4 de Paracoccidioides brasiliensis." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2009. http://repositorio.unb.br/handle/10482/4570.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009.<br>Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-03-10T18:11:30Z
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2009_DanielladeSousaMoraes.pdf: 1854028 bytes, checksum: a3cd31cb45bfc1c91939808ab2cc1175 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T13:47:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009<br>Paracoccidioides brasiliensis, o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), é um fungo termodimórfico que cresce como micélio à temperatura ambiente e se diferencia para levedura em culturas a 37°C e no tecido do hospedeiro. A transição dimórfica de P. brasiliensis está associada com alterações na parede celular. Quando o fungo se diferencia de micélio para levedura, o conteúdo de quitina é aumentado e a composição de glicana é alterada, reduzindo o conteúdo de 1,3-b-glicana e aumentando o conteúdo de 1,3-a-glicana. Em P. brasiliensis, um homólogo do gene de 1,3-b-glicana sintase (Pbfks1) e seis genes de quitina sintase (Pbchs1, Pbchs2, Pbchs3, Pbchs4, Pbchs5 e Pbchs6) foram identificados. Em nosso estudo, nós investigamos a região promotora dos genes Pbfks1 e Pbchs4. Por meio de ensaio de retardo da mobilidade eletroforética (EMSA), analisamos sondas referentes aos promotores desses dois genes e identificamos prováveis sítios regulatórios. A análise da região promotora do gene Pbfks1 indica um TATA Box que pode ser funcional, e sugerimos que o promotor do gene Pbchs4 possa estar sendo regulado pelo elemento de resposta ao estresse (STRE). Além disso, demonstramos também que o domínio de ligação ao DNA de PacC de P. brasiliensis reconhece um sítio descrito para PacC de A. nidulans, porém, a proteína não reconheceu uma variação na seqüência consenso presente no promotor do gene Pbchs4. Observamos que uma sonda referente ao promotor do gene Pbchs4 que contém um sítio para o fator de transcrição CreA não interage com o domínio de ligação ao DNA de CreA de Humicola grisea, mas apresenta interações DNA-proteína específicas nas fases de micélio e levedura. Adicionalmente, resultados de RT-PCR em tempo real revelaram que o gene Pbfks1 é mais expresso em meio com acetato do que em meio com glicose como fonte de carbono. Portanto, o trabalho desenvolvido em nosso grupo de pesquisa fornece dados que podem contribuir para a compreensão da regulação dos promotores dos genes 1,3-b-glicana sintase e quitina sintase 4 em P. brasiliensis. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Paracoccidioides brasiliensis, the etiological agent of paracoccidioidomycosis (PCM), is a thermal dimorphic fungus which grows as a mycelium at room temperature and differentiates to yeast in cultures at 37°C and in the host tissue. The dimorphic transition of P. brasiliensis is associated with changes in the cell wall. When the fungus differentiates from mycelium to yeast, the chitin content is increased and the composition of glucan changes, reducing the 1,3-β-glucan content and enhancing the content of 1,3-α-glucan. In P. Brasiliensis, one homologous of 1,3-β-glucan synthase gene (Pbfks1) and six genes of chitin synthase (Pbchs1, Pbchs2, Pbchs3, Pbchs4, Pbchs5 e Pbchs6) were identified. In our study, we investigated the promoter region of Pbfks1 and Pbchs4 genes. By means of Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA), we analyzed probes referring to promoters of these two genes and we identified probable regulatory sites. The analysis of the promoter region of the Pbfks1 gene indicates one TATA Box that could be functional, and we propose that the Pbchs4 promoter may be regulated by the stress responsive elements (STRE). Furthermore, we also demonstrated that the PacC DNA binding-domain of P. brasiliensis recognizes one A. nidulans’s PacC described site, nevertheless, the protein didn’t recognize one variation in the consensus sequence in the Pbchs4 promoter. We observed one Pbchs4 promoter probe with one CreA transcription factor site doesn’t interact with the CreA DNA bind-domain of Humicola grisea, but shows specific DNA-protein interactions in mycelium and yeast phases. Additionally, results of Real Time RT-PCR disclosed that Pbfks1 gene is more expressed in medium with acetate then in medium with glucose as a carbon source. Therefore, the work developed in our research group provides data which may contribute for the comprehension of 1,3-β-glucan synthase and chitin synthase 4 promoters’ regulation in P. brasiliensis.
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Nóbrega, Yanna Karla de Medeiros. "Influência das frações da parede celular do fungo Fonsecaea pedrosoi sobre a ativação de células peritoneais de camundongos in vitro." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2007. http://repositorio.unb.br/handle/10482/8896.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2007.<br>Submitted by Rafael Barcelos Santos (rafabarcelosdf@hotmail.com) on 2011-06-30T18:34:21Z
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2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Raquel Viana(tempestade_b@hotmail.com) on 2011-07-03T21:39:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2011-07-03T21:39:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2007_YannaKarladeMedeirosNobrega.pdf: 579781 bytes, checksum: 9bbb338dba79606d079de33ad6822337 (MD5)<br>A Cromomicose é uma micose crônica, supurativa e granulomatosa, que tem distribuição cosmopolita. O Fonsecaea pedrosoi é o principal agente etiológico da cromomicose no mundo. A infecção inicia-se a partir de um trauma com a implantação no tecido subcutâneo de conídios e fragmentos de hifas do fungo, causando a lesão inicial. No hospedeiro essas estruturas do fungo se diferenciam em células escleróticas, estabelecendo a doença. Em função da importância do estabelecimento de uma resposta imune celular eficiente através da
interação entre as células do sistema imunológico com os componentes da parede celular dos fungos, que são capazes de promover a ativação destas, o objetivo do presente trabalho foi analisar a influência das frações da parede celular do Fonsecaea pedrosoi na ativação dos fagócitos peritoneais obtidos de camundongos. Nossos resultados revelaram que após 4 horas
da inoculação das preparações houve a migração predominante de neutrófilos, e com 72 horas a migração de macrófagos. As frações F2 e o fungo inativado estimularam a migração de linfócitos B predominantemente e os fagócitos de 4 horas produziram óxido nítrico espontaneamente. A fração F1 induziu uma alta produção de IL-12 nas células que migraram após 72 horas da inoculação das frações. O fungo inativado e a fração F2 induziram a produção de IL-10. A estimulação prévia das células com a fração F2 diminuiu o índice de fagocitose e aumentou a produção de IL-10. Nossos resultados sugerem que a fração F2 modula a resposta imunológica para Th2 enquanto que a fração F1 modula a resposta imunológica para Th1 na cromomicose. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Chromoblastomycosis is a chronic suppurative granulomatous mycosis that exists all around
the world. The Fonsecaea pedrosoi is the most frequent etiologic agent in the world. The infection begins with a trauma and the implantation of conidia or hyphae fragments in the subcutaneous tissue producing the initial lesion. Inside the host, a fungus structure differentiates into sclerotic forms allowing the establishment of the disease. Considering the importance of the establishment of an efficient immune cellular response, through the interaction between the cells of the immunologic system with the components of the fungus wall, the objective of the present work was to analyze the influence of the fractions from the
Fonsecaea pedrosoi cellular wall in the activation of murine peritoneal phagocytes extracted from mice. Our result demonstrates that after 4 hours after of the inoculation of the solutions the migration was constituted predominantly by neutrophils, and after 72 hours predominantly by macrophages. The F2 fractions and the inactive fungus stimulate predominantly the
migration of B lymphocytes and the four hours phagocytes produced spontaneously nitric oxide. The F1 fraction induced the high production of IL-12 in the cells that migrated after 72 hours of the fractions inoculation. The inactive fungus and the F2 fraction induced the IL-10 production. Cells previously stimulated with the F2 fraction resulted in a decreased phagocytosis index and increased the IL-10 production. Our results suggest that, in chromoblastomycosis, the F2 fraction modulates the immunological Th2 type response while the F1 fraction modulates the immunological Th1 type response.
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Soares, William Rosa de Oliveira. "Meliolaceae em plantas do Cerrado." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2012. http://repositorio.unb.br/handle/10482/10482.
Full textAbstract:
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2012.<br>Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-11T16:14:42Z
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2012_WilliamRosaOliveiraSoares_Parcial.pdf: 9914177 bytes, checksum: 03281b5c24a571a50d595d3978a5f926 (MD5)<br>Rejected by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br), reason: inserir resumo. on 2012-05-14T16:41:38Z (GMT)<br>Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-05-15T12:55:26Z
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2012_WilliamRosaOliveiraSoares.pdf_Parcial.pdf: 9938693 bytes, checksum: f4411fea09fdf2a22b5cd4b945dc5cb7 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-16T17:44:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2012_WilliamRosaOliveiraSoares.pdf_Parcial.pdf: 9938693 bytes, checksum: f4411fea09fdf2a22b5cd4b945dc5cb7 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2012-05-16T17:44:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2012_WilliamRosaOliveiraSoares.pdf_Parcial.pdf: 9938693 bytes, checksum: f4411fea09fdf2a22b5cd4b945dc5cb7 (MD5)<br>Vinte espécies diferentes pertencentes à família Meliolaceae foram documentadas parasitando membros de treze famílias de plantas hospedeiras, provenientes de diversas regiões do cerrado brasileiro. Desse total, doze são prováveis espécies novas, três são prováveis variedades novas
e cinco espécies já conhecidas. Das doze primeiras, nove espécies pertencem ao gênero
Meliola, duas ao gênero Appendiculella e uma ao gênero Irenopsis, Já as variedades,
pertencem ao gênero Meliola. Além disso, Anemopaegma acutifolium, Merremia
contorquens, Sweetia fruticosa, Eriosema congestrum, Albizia polyantha, Sorocea
guilleminiana e Psycotria melaneoides, foram, pela primeira vez, relatados como hospedeiras de melioláceos. Além disso, nove das espécies estudadas se constituíram em novos registros para os estados em que foram coletadas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Twenty different fungal species collected in several areas of the Brazilian Cerrado, belonging in family Meliolaceae and infecting members of thirteen plant families were described, illustrated, and identified. Twelve samples belong probably in new species, three new varieties, and finally five were known species. Among the first group nine are Meliola, three Appendiculella species and one Irenopsis. All varieties detected are Meliola species. The host
plants, Anemopaegma acutifolium, Merremia contorquens, Sweetia fruticosa, Eriosema
congestrum, Albizia polyantha, Sorocea guilleminiana and Psycotria melaneoides, for the first time listed as hosts of meliolaceous fungi. Also, nine of the species studied are new records for the states where they were collected.
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Ghizelini, Angela Michelato. "Sucessao de fungos em acículas de Pinus taeda em decomposição." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2013. http://hdl.handle.net/1884/2714.
Full textAbstract:
A serapilheira depositada sobre a superfície do solo apresenta quantidades
significativas de nutrientes, que podem ser reciclados pela decomposição
microbiana, principalmente pelos fungos do solo. Sabendo-se da dependência entre
a produtividade do sítio, a ciclagem de nutrientes e o processo de decomposição da
serapilheira acumulada, o conhecimento da micobiota responsável pela
decomposição é o caminho adequado para se obter respostas sobre a produtividade
florestal e a demanda de nutrientes. O objetivo desse estudo foi conhecer a
diversidade e sucessão dos fungos durante a decomposição da serapilheira de
acículas de Pinus taeda, ao longo de 12 meses. Assim como, estabelecer uma
relação entre a presença dos fungos e as condições climáticas locais. O estudo foi
estabelecido em um plantio experimental de P. taeda, com 4 anos de idade,
localizado em Três Barras, SC. Para acompanhar a sucessão, acículas senescentes
foram coletadas das árvores e colocadas em sacolas seletivas para microrganismos,
deixadas sob a floresta. A primeira amostra foi levada ao laboratório e o restante foi
mantido in situ para que as acículas continuassem seu processo de decomposição
natural, sendo coletadas a cada três meses. No laboratório, a cada coleta, as
acículas foram submetidas a 20 lavagens sucessivas e retirados fragmentos, os
quais foram inseridos em placas de Petri contendo meio Extrato de Malte 2% e
incubados sob condição ambiente. Dados referentes a temperatura e precipitação
pluviométrica da área experimental foram comparados com o número de registros
dos fungos isolados para fins de correlação estatística. Durante a sucessão fúngica,
foram identificados 13 gêneros fúngicos: Acremonium, Alternaria, Epiccoccum,
Cladosporium, Coletotrichum, Gliocladium, Fusarium, Penicillium, Pestalotia,
Trichoderma (Deuteromycetes), Mucor (Zygomycetes) e Rhizoctonia
(Basidiomycetes). Os gêneros significativamente mais abundantes foram
Trichoderma, Fusarium e Verticillium. Sobre a correlação entre os fatores climáticos
e a presença dos fungos, verificou-se que somente as temperaturas média e máxima
influenciaram significativamente a abundância dos fungos em acículas de pínus em
decomposição, durante o período estudado
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SILVEIRA, Alice Cristiane Rangel. "Infecções fúngicas em unidade de terapia intensiva cardiológica e caracterização dos agentes etiológicos quanto à capacidade de aderência e formação de biofilme." Universidade Federal de Pernambuco, 2013. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/16730.
Full textAbstract:
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-19T17:17:06Z
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DISSERTAÇÃO Alice Cristiane Rangel Silveira.pdf: 1302269 bytes, checksum: 8f5b04b6d5f0a0232c8c70de8f20da1d (MD5)
Previous issue date: 2013-02-19<br>CNPQ<br>Infecções fúngicas constituem um problema crescente em pacientes críticos como os
admitidos em unidades de terapia intensiva cardiológica (UTIc). Os agentes etiológicos
dessas infecções podem expressar fatores de virulência que propiciem sua instalação e
disseminação, como a capacidade de aderência e formação de biofilme. Assim, este
trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência de infecções fúngicas em pacientes
internados em UTIc de hospital público de referência em cardiologia do estado de
Pernambuco/Brasil, caracterizar os agentes etiológicos quanto à capacidade de aderência a
células epiteliais bucais e formação de biofilme e relatar dois casos de infecção fúngica.
Foram realizadas coletas de diversas amostras clínicas de pacientes de UTIc com suspeita
de infecção fúngica e procedeu-se à investigação laboratorial no Laboratório de Micologia
Médica da Universidade Federal de Pernambuco/Brasil. Do total de 70 pacientes avaliados,
dezesseis (22,85%) desenvolveram infecção fúngica. Destes, oito apresentaram
candidemia, cinco infecção superficial, dois infecção urinária, um apresentou candidemia
associada à infecção urinária. O agente mais frequente foi Candida albicans (5) seguido
de C. tropicalis (4), C. parapsilosis (3), C. krusei (3), Malassezia sp. (2), C. guilliermondii
(1). Também foi isolada C. albicans em ponta de catéter de um caso de candidemia
causado pela mesma espécie de levedura. De um total de 19 isolados obtidos, em dez
(52,63%) foi evidenciada a capacidade de forte aderência celular, sendo oito obtidos em
amostras de sangue. Formação de biofilme intermediária a forte foi revelada em 14
(73,68%) isolados, onze provenientes de amostras de sangue. Candidíase prevalece como a
infecção fúngica mais frequente em UTIc, e os agentes etiológicos dessas infecções estão
associados a uma maior virulência por frequentemente apresentarem alta capacidade de
aderência a células epiteliais bucais e formação de biofilme moderada a forte.<br>Fungal infections are an increasing problem in critically ill patients as those admitted to
cardiology intensive care units (CICU). The etiologic agents of these infections can
express virulence factors that facilitate their installation and dissemination as the ability of
adherence and biofilm formation. Thus, this study aimed to analyze the occurrence of
fungal infection in patients admitted to CICU of public referral hospital in cardiology of
the state of Pernambuco/Brazil, characterize the etiologic agents with respect to their
ability of adherence to oral epithelial cells and biofilm formation and report two cases of
fungal infection. Various clinical specimens were collected from CICU patients with
suspected fungal infection and the laboratory investigation was conducted in the Medical
Mycology Laboratory of the Federal University of Pernambuco/ Brazil. Of the total 70
patients, 16 (22.85%) developed fungal infection. Of these, eight had candidemia, five
superficial infections, two urinary tract infection and one had candidemia associated with
urinary tract infection. The most frequent agent was Candida albicans (5) followed by C.
tropicalis (4), C. parapsilosis (3), C. krusei (3), Malassezia sp. (2) C. guilliermondii (1).
Was also isolated C. Albicans from catheter tip in a case of candidemia caused by the same
species of yeast. Of a total of 19 isolates, 10 (52.63%) were strongly adherent to epithelial
cells, eight obtained from blood samples. Biofilm formation was revealed moderate to
strong in 14 (73.68%) isolated from 11 blood samples. Candidiasis prevails as the most
common fungal infection in CICU and the etiologic agents of these infections are
associated with greater virulence often associated to high capacity of adherence to oral
epithelial cells and moderate to strong biofilm formation.
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LEITE, Melyna Chaves. "Formação de biofilme por leveduras emergentes: desenvolvimento, arquitetura e reposta ao tratamento." Universidade Federal de Pernambuco, 2016. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/24418.
Full textAbstract:
Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:31:48Z
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DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5)<br>Made available in DSpace on 2018-04-20T18:31:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1
DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5)
Previous issue date: 2016-02-24<br>CNPQ<br>As infecções fúngicas invasivas causadas por leveduras representam causa frequente de óbito, especialmente em pacientes de Unidades de Terapia Intensiva. Apesar de Candida albicans ser a mais comum, espécies emergentes de Candida, tem surgido como importante causa de infecções graves, além de se mostrarem resistentes aos tratamentos. Dentre as mais importantes causas desta infecção, destaca-se a formação de biofilme. O biofilme, conjunto de microrganismos envolvidos numa matriz polimérica extracelular de carboidratos, proteínas e ácidos nucleicos, pode se aderir a tecido vivo e superfície inerte como os dispositivos médicos. Deste modo, conduz importantes repercussões clínicas, uma vez que vem sendo verificado aumento da resistência à terapia antifúngica e da habilidade das células em resistir às defesas do sistema imune. Assim, o objetivo da pesquisa foi avaliar leveduras emergentes quanto à formação de biofilme analisando arquitetura e resposta antifúngica. Foram analisadas 15 leveduras emergentes provenientes de amostras clínicas e estocadas na Micoteca URM, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil. As culturas foram autenticadas por características morfofisiológicas e proteômica/MALDI-TOF MS. A avaliação do biofilme foi por redução do XTT (quantitativo) e então, selecionados quanto a maior capacidade de formação. A arquitetura foi avaliada em discos de cateteres, analisados em 24 e 48 horas por microscopia de varredura. Foram realizados tratamento anti-biofilme com anfotericina B e fluconazol seguindo o protocolo do M27-A3 baseado em testes de sensibilidade com células planctônicas. As leveduras testadas formaram biofilme, destacando-se o isolado clínico de C. ciferri do qual, não há relatos quanto a este potencial de virulência. Na sensibilidade antifúngica, houve mudança no perfil entre células planctônicas e as agregadas, as quais se mostram mais resistente. Diante do alto potencial de virulência verificado nos isolados, é necessário a busca por novas substâncias como futura alternativa terapêutica de candidíase invasiva.<br>Invasive fungal infections caused by yeast are a frequent cause of death, especially in patients of Intensive Care Units. Although Candida albicans is the most common, emerging species of Candida, it has emerged as a major cause of serious infections, in addition to being resistant to treatments. Among the most important causes of this infection is the biofilm formation. Biofilm, a collection of microorganisms involved in an extracellular polymeric matrix of carbohydrates, proteins and nucleic acids, can adhere to living tissue and inert surfaces such as medical devices. Thus, it has important clinical repercussions, since it has been verified increased resistance to antifungal therapy and the ability of cells to resist immune system defenses. Thus, the objective of the research was to evaluate emerging yeasts regarding biofilm formation analyzing architecture and antifungal response. Fifteen emerging yeasts from clinical samples and stored at the URM Micoteca, Federal University of Pernambuco, Brazil, were analyzed. The cultures were authenticated by morphological and proteomic characteristics / MALDI-TOF MS. The evaluation of the biofilm was by reduction of the XTT (quantitative) and then, selected for the greater capacity of formation. The architecture was evaluated in catheter discs, analyzed in 24 and 48 hours by scanning microscopy. Antibiofilm treatment with amphotericin B and fluconazole following the M27-A3 protocol based on sensitivity tests with planktonic cells was performed. The yeasts tested formed a biofilm, with a clinical isolate of C. ciferri, of which there are no reports of this virulence potential. In the antifungal sensitivity, there was a change in the profile between planktonic cells and aggregates, which are more resistant. In view of the high potential of virulence in isolates, it is necessary to search for new substances as a future therapeutic alternative for invasive candidiasis.
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Sugizaki, Maria Fatima. "Contribuição ao estudo do isolamento de Paracoccidioides brasiliensis : avaliação da temperatura e da nistatina na descontaminação." [s.n.], 1986. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/288472.
Full textAbstract:
Orientador: Pedro Bertolini<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba<br>Made available in DSpace on 2018-07-16T20:23:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Sugizaki_MariaFatima_M.pdf: 2623810 bytes, checksum: 731401dad432440f82c91b75281af3d1 (MD5)
Previous issue date: 1986<br>Resumo: Não informado<br>Abstract: Paracoccidioidomycosis, an infectious disease induced by the pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis has drawn a great deal of attention in Brazil, specially in the State of são Paulo, where the infection is endemic. The major difficulty in studying this disease , by the mycological view point, is related to theethiological agent isolation usually provided from clinical samples, which are
always contamineted other kinds of microorganisms, whose accelerated growth impedes recuperation from P. brasiliensis ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations<br>Mestrado<br>Mestre em Biologia e Patologia Buco-Dental
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Diniz, José Nelson Martins. "Cryptococcus neoformans de fontes ambientais e biopropecção de extratos de plantas com atividade saneante /." Araraquara : [s.n.], 2009. http://hdl.handle.net/11449/103856.
Full textAbstract:
Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini<br>Banca: Ana Marisa Fusco Almeida<br>Banca: Márcia de Souza Carvalho Melhem<br>Banca: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro<br>Banca: Regina Célia Candido<br>Resumo: Cryptococcus neoformans é levedura capsulada saprobiota que acomete principalmente indivíduos com o sistema imunológico comprometido. Seu habitat está relacionado com algumas espécies de árvores, madeira em decomposição e fezes de pássaros, em especial de pombos do gênero Columba livia. Nas grandes cidades estas aves vêm causando diversos problemas devido a sua multiplicação intensa. Desta maneira, medidas saneantes serão de grande auxílio para controlar a população desta levedura. Assim, este estudo teve como objetivo reidentificar 67 isolados de C. neoformans de fontes ambientais e caracterizá-los quanto ao seu genótipo e perfil de sensibilidade aos antifúngicos anfotericina B, cetoconazol, itraconazol e fluconazol, utilizando o método da difusão em ágar seguindo o documento M44A e determinando a concentação inibitória mínima frente a fluconazol pelo método M27-A2, ambos preconizados pelo CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). Por outro lado, verificar o efeito antifúngico de extratos de plantas e sua atividade saneante em fezes de pombos comprovadamente contaminadas com isolado ATCC 90012 de C. neoformans. Todos isolados foram Mating Type α e tipo VNI. Pelo método de microdiluição, 21% (14/67) dos isolados ambientais apresentaram sensibilidade diminuída ao fluconazol com CIM de 16 μg/mL e mais de 50% (34/67) apresentaram CIM de 8 μg/mL.O extrato de Alibertia macrophylla apresentou efeito saneante com índice de eficiência de mais de 80% após 24 horas, na grande maioria dos isolados de C. neoformans. Este extrato foi estável... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abstract: Cryptococcus neoformans is a saprobiote capsuled yeast that proliferates mainly in individuals who have the immunologic system compromised. It natural habitat is related to some species of trees, decaying wood and bird excrement, in special Columba livia doves. In big cities, these birds have caused many problems due to its intense proliferation and the cleaning measures will be of great help in controlling this yeast. The aim of this study was to re-identify 67 C. neoformans isolates and characterize them according to their genotype and susceptibility to antifungal amphotericin B, cetoconazole, itraconazole e fluconazole, using the method of agar diffusion following the M44A document and determining the minimum inhibitory concentration to fluconazole by method M27-A2, both recommended by the CLSI (Clinical Laboratory Standard Institute). On the other hand, the verification of the effect of plant extracts e and their cleaning activity on dove excrement previously contaminated with isolate ATCC 90012 of C. neoformans. All the isolates were Mating Type α and VNI. For the microdilution method, 21% (14/67) of the environmental isolates showed decreased susceptibility to fluconazole with MIC of 16 mg/mL and more than 50% (34/67) had MICs of 8 mg/mL. The extract of Alibertia macrophylla presented clean effect with index of efficiency of 80% after 24 hours, in the great majority of C. neoformans isolates. This extract was stable to the light incidence, to the heat and variation of pH. Our results are of great use for the development and utilization of active natural compounds in the fight against C. neoformans from environmental and the study of other variables are necessary for the viability of its use as a domestic cleaner.<br>Doutor
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Scorzoni, Liliana. "Estudo da atividade antifúngica e perfil de expressão de proteínas em leveduras do gênero Candida após tratamento com extratos de Kielmeyera rubriflora /." Araraquara : [s.n.], 2008. http://hdl.handle.net/11449/94782.
Full textAbstract:
Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini<br>Banca: Helena Siqueira Silva<br>Banca: Maristela Pereira<br>Resumo: As novas descobertas tecnológicas e o avanço da medicina têm proporcionado a sobrevida de muitos pacientes. No entanto, estes passam a ser mais suscetíveis a infecções, principalmente por fungos. O aumento dessas infecções tem gerado problemas no tocante ao diagnóstico, bem como na terapêutica empregada. A disponibilidade de antifúngicos na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente e com toxicidade elevada. Recentemente, houve um agravante do quadro devido ao surgimento de resistência a determinadas drogas, o que reforçou a demanda por novas alternativas terapêuticas. Nosso país é privilegiado pela grande biodiversidade. A busca por novos alvos, o entendimento dos mecanismos de virulência, bem como os de resistência microbiana são fundamentais diante do quadro atual. O objetivo deste estudo foi pesquisar extratos e substâncias de plantas com atividade antifúngica para Candida albicans e C. krusei, selecionar os de maior atividade e verificar o perfil de proteínas de ambas as leveduras, antes e após o contato com a substância de origem vegetal, realizando sua caracterização. Os extratos acetato de etila (AcOEt) e etanólico (EtOH) de Kielmeyera rubriflora foram os que apresentaram maior atividade antifúngica. Os componentes protéicos de C. albicans sem tratamento e tratados com 1400 mg/mL de fluconazol e 1000 mg/mL dos extratos AcOEt e EtOH foram analisados por SDS-PAGE e eletroforese bidimensional. O tratamento com fluconazol revelou modificações na expressão de nove proteínas, que variaram seus pIs de 5,64 a 6,67 e massa molecular de 59,1 a 17,4 kDa, enquanto que os extratos de plantas influenciaram na expressão de 10 e 11 proteínas, respectivamente. O extrato AcOEt influenciou na expressão de proteínas na faixa de pIs de 5,7 a 5,2, massa molecular de 90,5 a 18,8 kDa, enquanto que o...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)<br>Abstract: The new discoveries and technological advances in medicine have provided the survival of many patients. However, they become more susceptible to infections, mainly by fungi. The increase in these infections has created problems regarding the diagnosis and the therapy employed. The availability of antifungals in medical practice is relatively small, inefficient and sometimes with high toxicity. Recently, there was an aggravating problem due to the emergence of resistance to certain drugs, which increased the demand for new alternative therapies. Our country is privileged in biodiversity. The search for new targets, the understanding of the mechanisms of virulence, as well as, the microbial resistance is essential before the current framework. This study aimed to find extracts of plants and substances with antifungal activity to Candida albicans and C. krusei, select the extracts with the best activity and verify the profile of proteins of both yeasts, before and after contact with the ethyl acetate (AcOEt) and ethanol (EtOH) extracts from Kielmeyera rubriflora, performing its characterization. The AcOEt and EtOH extracts from K. rubriflora had the greater antifungal activity. The C. albicans and C. krusei cells proteins untreated and treated with 1400 mg / mL of fluconazole and 1000 mg / mL of AcOEt and EtOH extracts were analyzed by SDS-PAGE and two-dimensional electrophoresis. Treatment with fluconazole revealed changes in the expression of nine proteins, which varied its pIs of 6.67 to 5.64 and molecular weight of 59.1 to 17.4 kDa, while the plants extracts influenced the expression of 10 and 11 proteins, respectively. The AcOEt extract influenced the expression of proteins in the range from pIs of 5.7 to 5.2, molecular weight of 90.5 to 18.8 kDa, while the EtOH in pIs of 5.8 to 7.4, and mass molecular of 89.2 to 16.3 kDa. The plants extracts ...(Complete abstract click electronic access below)<br>Mestre
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Basset, Charlie. "Pesquisa de substâncias antifúngicas provenientes de madeiras duráveis da amazônia." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2011. http://repositorio.unb.br/handle/10482/10146.
Full textAbstract:
Submitted by Sabrina Silva de Macedo (sabrinamacedo@bce.unb.br) on 2012-03-22T19:55:13Z
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2011_CharlieBasset.pdf: 17077300 bytes, checksum: 719d811a0947d0f5011b197a2fe6596e (MD5)<br>Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2012-03-23T12:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2011_CharlieBasset.pdf: 17077300 bytes, checksum: 719d811a0947d0f5011b197a2fe6596e (MD5)<br>Made available in DSpace on 2012-03-23T12:38:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2011_CharlieBasset.pdf: 17077300 bytes, checksum: 719d811a0947d0f5011b197a2fe6596e (MD5)<br>Hoje em dia, a descoberta de novos agentes terapêuticos para o tratamento de doenças fúngicas torna-se essencial. Algumas árvores da Amazônia desenvolveram ao longo da evolução metabólitos secundários de defesa, para proteger-se contra a degradação. Estas mesmas substâncias vegetais podem tornar-se candidatas potenciais para o desenvolvimento de compostos antifúngicos. Esta tese de doutorado descreve a seleção bio-inspirada e a coleta de espécies da floresta amazônica da Guiana Francesa possuidoras de madeira altamente resistente aos fungos; a partir das quais é proposto isolar, identificar e valorizar os metabólitos secundários responsáveis da durabilidade natural, e estudar as suas propriedades em fungos patogénicos humanos. O estudo levou ao isolamento de substâncias inéditas e forneceu informações adicionais quimiotaxonômicas importantes para as espécies estudadas. No mais, foi possível estabelecer que duas substâncias podem ser relevantes para o desenvolvimento de terapias antimicóticas. __________________________________________________________________________________ABSTRACT<br>It is now essential to discover new therapeutic agents against the increase of human fungal infections. On the other hand, some Amazonian trees have succeeded to develop a chemical defense arsenal to protect themselves against fungal degradation. These compounds of plant origin could become potential candidates for the development of antifungal compounds for the treatment of human fungal diseases. Therefore, this manuscript describes the bio-inspired selection and collection of Amazonian tree species capable of specializing a highly fungi-resistant wood; from which it is proposed to isolate, identify and valorize the secondary metabolites responsible for the natural durability, and study their properties on human pathogenic fungi. Ultimately, this study led to the isolation of new compounds and providing additional important chemotaxonomic information for the species studied. In addition, it as been established that two compounds could be relevant for the development of antimitotic therapies.
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Rezende, Tereza Cristina Vieira de. "Proteômica de Paracoccidioides brasiliensis : uma análise quantitativa das fases miceliana e leveduriforme e da transição dimórfica." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2011. http://repositorio.unb.br/handle/10482/9957.
Full textAbstract:
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2011.<br>Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-02-08T13:54:16Z
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2011_TerezaCristinaVieiraRezende.pdf: 7799530 bytes, checksum: ac6b8b811bee8d8f780e0d60ae6f7bc8 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-02-15T11:45:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2011_TerezaCristinaVieiraRezende.pdf: 7799530 bytes, checksum: ac6b8b811bee8d8f780e0d60ae6f7bc8 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2012-02-15T11:45:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2011_TerezaCristinaVieiraRezende.pdf: 7799530 bytes, checksum: ac6b8b811bee8d8f780e0d60ae6f7bc8 (MD5)<br>Dimorfismo é uma característica importante para sobrevivência fúngica em diferentes ambientes e tem sido relacionado com a virulência. O fungo ascomiceto, Paracoccidioides brasiliensis, agente
causador da paracoccidioidomicose, pode crescer nas fases de micélio ou de levedura. A patogenicidade do P. brasiliensis é frequentemente associada com a transição dimórfica, de saprófita a patogênico, mas os mecanismos que regulam esse processo permanecem obscuros. Uma das maneiras de estudar esse fenômeno seria isolar e caracterizar proteínas que são especificamente expressas em um dos estágios do ciclo de vida e/ou durante a diferenciação. Eletroforese bidimensional (2-DE) foi utilizada para comparar o proteoma de micélio e de levedura do isolado Pb01
e após 22 h de transição de micélio para levedura. Os géis corados pela prata de três replicatas biológicas independentes foram digitalizados e as imagens foram analisadas utilizando-se o software Image Master 2D Platinum 6.0 software (GE Healthcare). A detecção dos spots e o pareamento foram
realizados. A intensidade dos spots foi normalizada e as análises estatísticas avaliada por one-way ANOVA. Os spots de interesse obtidos dos géis 2-D foram retirados, digeridos com tripsina e os
peptídeos foram então analisados por MS e/ou MS/MS. Um total de 100 proteínas/isoformas foi identificado; 81 foram diferencialmente expressas nas três fases do fungo, enquanto que 19 proteínas/isoformas foram constitutivamente expressas. A expressão de proteínas como superóxido dismutase e peroxiredoxina mitocondrial foi mais abundante na fase miceliana. Nos estágios iniciais da transição (22 h) algumas enzimas envolvidas na glicólise, como enolase e fosfoglicomutase, estão aumentadas. Proteínas de choque térmico e ATP sintase também estão significantemente aumentadas durante o evento de transição. Proteínas preferencialmente expressas na fase
leveduriforme foram identificadas. Muitas das enzimas da via glicolítica e algumas enzimas do ciclo do glioxalato e metabolismo de lipídeos foram mais abundantes em levedura. Para validar os resultados dos géis 2-D foi realizado western blotting de seis proteínas diferentes, e os resultados
foram confirmados. Os resultados foram validados por RT-PCR em tempo real nas três condições estudadas, incluindo conídio e transição de conídio para levedura. Os resultados demonstram uma mudança no metabolismo durante a transição de micélio para levedura; o mesmo padrão foi evidenciado na transição de conídio para levedura. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Fungal dimorphism is important for survival in different environments and has been related to virulence. The ascomycete Paracoccidioides brasiliensis, the causative agent of paracoccidioidomycosis, can grow as mycelia or yeast. The pathogenicity of P. brasiliensis is frequently associated with the dimorphic shift, from a saprobe to a pathogenic lifestyle, but the mechanisms that regulate the process is still poorly understood. One way to study this phenomenon is to isolate and characterize proteins that are specifically expressed in one of the stages of the life cycle and/or during differentiation. Two-dimensional gel electrophoresis we used to investigate the proteins expressed differentially during transition from mycelia to yeast forms of isolate Pb01 after 22 h of temperature shift. Silver-stained gels of three independent biological replicates were digitalized and the images were analyzed using the ImageMaster 2D Platinum 6.0 software (GE Healthcare). Spot detection and matching was performed. Spot intensities were normalized and the statistics analyses
were estimated by one-way ANOVA. The spots of interest were excised, in-gel digested with trypsin, and the peptides were then analyzed by MS and/or MS/MS. A total of 100 proteins/isoforms were identified; 81 were differentially expressed in the three phases of the fungus, whereas 19 proteins/isoforms were constitutively expressed. Enzymes such as superoxide dismutase and mitochondrial peroxiredoxin have been detected as abundant in the mycelium phase. After the early
stage of transition (22 h) some enzymes involved in glycolysis, such as enolase and
phosphoglutomutase, were increased. Heat shock proteins and ATP synthase were also significantly increased in the transition event. Proteins preferentially expressed in the yeast phase were identified. Most of the enzymes of glycolysis, and some of the glyoxylate cycle and lipid metabolism were more abundant in yeast cells. To validate the 2-D gels results we performed western blotting of six different proteins, and the results were confirmed. The results were also validated by real-time RT-PCR in the
three studied conditions, including conidia and conidia-yeast transition. The results demonstrated a shift in the metabolism during transition from mycelia to yeast cell; the same patterns were evidenced
in the conidia to yeast transition.
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Ferreira, Rafael Rodrigues. "Avaliação de diferentes concentrações de histamina e extratos alergênicos em cães sadios submetidos a teste intradérmico." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2013. http://hdl.handle.net/10183/81225.
Full textAbstract:
Teste intradérmico avalia reação de hipersensibilidade a diversos agentes que possam apresentar poder reacional alérgico e são comumente utilizados para complementar o diagnóstico da dermatite atópica canina (DAC). Ainda não existe consenso sobre as concentrações de histamina e extratos alergênicos a serem utilizadas. Para determinar a concentração ideal de histamina, como controle positivo, e do limiar irritativo de extratos alergênicos em teste intradérmico é necessário que diversas concentrações sejam avaliadas em uma população bem numerosa de cães hígidos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar em 160 cães sadios submetidos a teste intradérmico, quais seriam as concentrações de histamina e de extratos alergênicos consideradas ideais. A solução contendo 0,1 mg/mL de histamina foi considerada como parâmetro ideal, provocando reações cutâneas com diâmetro médio, mediana e desvio padrão, de 15,18 mm, 14,97 mm e 2,07 mm, respectivamente. A partir do estabelecimento da concentração de histamina, foram determinadas as concentrações ótimas dos extratos alergênicos, expressas em PNU/mL: 1.000 para Dermatophagoides pteronyssinus, 500 para D. farinae, 125 para Blomia tropicalis e 2.000 para Malassezia pachydermatis. Futuros estudos devem ser conduzidos em cães atópicos para verificação da acurácia dos testes intradérmicos realizados com essas concentrações.<br>Intradermal testing evaluates hipersensitivity reaction to different agents that can present allergic reactivity power. It is commonly used to complement canine atopic dermatitis diagnosis. There is still no consensus about histamine concentrations and allergen extracts to be used. The determination of the histamine ideal concentration as positive control and the irritant threshold of allergen extracts for intradermal testing, requires evaluation of different concentrations on a large population of healthy dogs. The purpose of this research was to evaluate the ideal histamine and allergen extracts concentrations on 160 healthy dogs submitted to intradermal testing. A histamine solution 0,1 mg/mL was considered the ideal parameter. It caused cutaneous reactions with average diameter, median measure and standard deviation of 15.18 mm, 14.97 mm and 2.07 mm, respectively. From the histamine concentration establishment, the optimum allergen extracts concentrations were determined, expressed by PNU/mL: 1.000 for Dermatophagoides pteronyssinus, 500 for D. farinae, 125 for Blomia tropicalis and 2.000 for Malassezia pachydermatis. Future studies have to be conducted on atopic dogs to verify the accuracy of the intradermal testing with these concentrations.
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Minatel, Igor Otavio [UNESP]. "Clamidósporos do Paracoccidioides brasiliensis: isolamento e estudo da infecticidade em modelo experimental murino." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2011. http://hdl.handle.net/11449/94780.
Full textAbstract:
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minatel_io_me_botfm.pdf: 544547 bytes, checksum: 59badd66f5a35b170a0b8a597f1cc3f0 (MD5)<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)<br>Este trabalho objetivou desenvolver um protocolo para produção, isolamento e purificação de clamidósporos do P. brasiliensis (Pb) e estudar seu potencial infectante em camundongos. A cepa Bt83 foi cultivada em meio líquido por 14 dias à temperatura de 25 ºC e posteriormente incubada por 36 horas a 32°C para a produção de clamidósporos. Os clamidósporos foram liberados por agitação magnética e sonicação. A purificação foi realizada em gradiente de concentração com Percoll a 95%, resultando em suspensão de clamidósporos com viabilidade de 90% e com poucos (8%) fragmentos miceliais. Para avaliar seu potencial infectante, os clamidósporos foram inoculados em camundongos por via intranasal, e os animais eutanasiados após 24h, 1, 2 e 4 semanas de infecção foram estudados através da histologia e quantificação da carga fúngica pela contagem de unidades formadoras de colônia dos pulmões, baço e fígado. Vinte e quatro horas pós-infecção observaram-se no pulmão focos de broncopneumonia contendo grande número de leveduras, algumas em brotamento múltiplo. Nos períodos subseqüentes observaram-se lesões granulomatosas, com presença de fungos, principalmente nos pulmões. A disseminação para baço e fígado foi precoce, iniciando na 1ª semana de infecção. Neste trabalho demonstramos que os clamidósporos do Pb podem ser, fácil e rapidamente, produzidos e isolados. Também mostramos que estes esporos são altamente infectantes e capazes de disseminação precoce. Os resultados indicam que os clamidósporos podem desempenhar um importante papel na infecção e desenvolvimento da paracoccidioidomicose<br>This study aimed at development a protocol for production, isolation and purification of chlamydospores of P. brasiliensis (Pb) and study their potential infectious in mice. Bt83 strain was grown in liquid medium for 14 days at 25 °C and then incubated for 36 hours at 32°C to produce chlamydospores. The chlamydospores were released by magnetic stirring and sonication. The purification was performed in concentration gradient with Percoll to 95%, resulting in a suspension of chlamydospores 90% viable and few (8%) mycelia non-viable fragments. To assess their potential infectious the chlamydospores, mice were inoculated intranasally and euthanized after 24 h, 1, 2 and 4 weeks of infection and their lungs, spleen and liver studied histologically and quantified the fungal burden by colony forming units counting. Twenty-four hours postinfection, multiple foci of bronchopneumonia were seen containing many multibudding yeast cells. In subsequent periods there were granulomatous lesions with the presence of fungi, mainly in the lungs. Dissemination to the spleen and liver was an early event, starting at 1 week of infection. This work provided evidences that the chlamydospores of Pb can be quickly and easily produced and isolated. It was also shown that these spores are highly infectious and have great ability to disseminate soon after infection. These results indicate that chlamydospores might be elected as an important infectious particle in paracoccidioidomycosis
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Midoricava, Luana Rossi Oliveira [UNESP]. "Prospecção de substâncias anti histoplasma capsulatum nas formas planctônica e biofilme e análise proteômica." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2015. http://hdl.handle.net/11449/134141.
Full textAbstract:
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000854060.pdf: 3213706 bytes, checksum: 918cc12ee2165eed29dfc4857e28e7a9 (MD5)<br>Histoplasma capsulatum variedade capsulatum é um fungo dimórfico causador da Histoplasmose, uma doença fúngica sistêmica que constitui um importante problema de saúde mundial. A infecção ocorre através da inalação de propágulos infectantes provenientes do meio ambiente. A capacidade de formação de biofilme por esse fungo foi caracterizada recentemente, porém ainda pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na sua formação. Neste caso, estudos com abordagens proteômicas seriam de fundamental importância para o entendimento da diferença entre a forma planctônica e o biofilme. Os antifúngicos usados na terapia convencional contra biofilmes não são eficientes, além disso, doses elevadas para perfusão destes fármacos nesta forma seriam tóxicas para os pacientes. O presente trabalho teve como objetivo verificar a atividade anti-Histoplasma de 92 compostos derivados de chalcona e do ácido protocatecuico; caracterizar o biofilme do isolado clínico H. capsulatum 317 e pesquisar compostos anti-biofilme buscando um provável mecanismo de ação através da análise proteômica diferencial entre o biofilme tratado e não tratado. Os testes de susceptibilidade foram realizados conforme o documento M27-A3, proposto pelo CLSI (2008). Os biofilmes foram formados em caldo BHI suplementado e a atividade metabólica foi determinada através do ensaio de redução do XTT. Para a caracterização da formação do biofilme e da ação do composto, utilizou-se a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia confocal, enquanto que a massa do biofilme e a matriz extracelular foram quantificadas pelo cristal violeta e safranina. E como etapa final foi realizada a análise do perfil proteico dos biofilmes com e sem tratamento. Os melhores valores de concentração inibitória mínima (CIM) foram obtidos por seis derivados de chalconas (T50, C3, E2A, F2A, T18A e T46A) e...<br>Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungi that causes Histoplasmosis, a systemical fungal disease that is a major health problem worldwide. Infection occurs by inhalation of infective propagules from the environment. The biofilm formation by this fungi was characterized recently, however little is known about the mechanisms involved in their formation. In this case, studies with proteomic approaches would be of fundamental importance for understanding the difference between the planktonic and biofilm forms. The antifungal agents used in conventional therapy are not effective against biofilms, in addition, high doses of these drugs can be toxic to patients. This study aimed to verify the anti-Histoplasma activity of 93 compounds derived from chalcones and protocatechuic acid; characterize the biofilm formation by the clinical isolate H. capsulatum 317 and discover new anti-biofilm compounds searching for a mechanism of action by differential proteomics analysis, comparing the treated and untreated biofilms. Susceptibility tests were performed according to the document M27- A3, proposed by the CLSI (2008). The biofilms were formed in BHI broth supplemented and metabolic activity was determined by the XTT reduction assay. For the characterization of biofilm formation and action of the compound, was used the scanning electron microscopy (SEM) and confocal microscopy, while the mass of the biofilm and the extracellular matrix were quantified by crystal violet and safranin. Lastly was performed the analysis of the protein profile of biofilms with and without treatment. The best minimum inhibitory concentration values (MIC) were obtained for six derivatives of chalcones (T50, C3, E2A, F2A, T18A and T46A) and nonyl protocatechuate (MIC = 3.9 mg/L). The clinical isolate H. capsulatum EH317 was able to form biofilms in vitro after 96 hours. After 96 hours, the biofilm ...
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Midoricava, Luana Rossi Oliveira. "Prospecção de substâncias anti histoplasma capsulatum nas formas planctônica e biofilme e análise proteômica /." Araraquara, 2015. http://hdl.handle.net/11449/134141.
Full textAbstract:
Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida<br>Banca: Maria Aparecida de Resende Stoianoff<br>Banca: Juliana Campos Junqueira<br>Resumo: Histoplasma capsulatum variedade capsulatum é um fungo dimórfico causador da Histoplasmose, uma doença fúngica sistêmica que constitui um importante problema de saúde mundial. A infecção ocorre através da inalação de propágulos infectantes provenientes do meio ambiente. A capacidade de formação de biofilme por esse fungo foi caracterizada recentemente, porém ainda pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na sua formação. Neste caso, estudos com abordagens proteômicas seriam de fundamental importância para o entendimento da diferença entre a forma planctônica e o biofilme. Os antifúngicos usados na terapia convencional contra biofilmes não são eficientes, além disso, doses elevadas para perfusão destes fármacos nesta forma seriam tóxicas para os pacientes. O presente trabalho teve como objetivo verificar a atividade anti-Histoplasma de 92 compostos derivados de chalcona e do ácido protocatecuico; caracterizar o biofilme do isolado clínico H. capsulatum 317 e pesquisar compostos anti-biofilme buscando um provável mecanismo de ação através da análise proteômica diferencial entre o biofilme tratado e não tratado. Os testes de susceptibilidade foram realizados conforme o documento M27-A3, proposto pelo CLSI (2008). Os biofilmes foram formados em caldo BHI suplementado e a atividade metabólica foi determinada através do ensaio de redução do XTT. Para a caracterização da formação do biofilme e da ação do composto, utilizou-se a microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia confocal, enquanto que a massa do biofilme e a matriz extracelular foram quantificadas pelo cristal violeta e safranina. E como etapa final foi realizada a análise do perfil proteico dos biofilmes com e sem tratamento. Os melhores valores de concentração inibitória mínima (CIM) foram obtidos por seis derivados de chalconas (T50, C3, E2A, F2A, T18A e T46A) e...<br>Abstract: Histoplasma capsulatum var. capsulatum is a dimorphic fungi that causes Histoplasmosis, a systemical fungal disease that is a major health problem worldwide. Infection occurs by inhalation of infective propagules from the environment. The biofilm formation by this fungi was characterized recently, however little is known about the mechanisms involved in their formation. In this case, studies with proteomic approaches would be of fundamental importance for understanding the difference between the planktonic and biofilm forms. The antifungal agents used in conventional therapy are not effective against biofilms, in addition, high doses of these drugs can be toxic to patients. This study aimed to verify the anti-Histoplasma activity of 93 compounds derived from chalcones and protocatechuic acid; characterize the biofilm formation by the clinical isolate H. capsulatum 317 and discover new anti-biofilm compounds searching for a mechanism of action by differential proteomics analysis, comparing the treated and untreated biofilms. Susceptibility tests were performed according to the document M27- A3, proposed by the CLSI (2008). The biofilms were formed in BHI broth supplemented and metabolic activity was determined by the XTT reduction assay. For the characterization of biofilm formation and action of the compound, was used the scanning electron microscopy (SEM) and confocal microscopy, while the mass of the biofilm and the extracellular matrix were quantified by crystal violet and safranin. Lastly was performed the analysis of the protein profile of biofilms with and without treatment. The best minimum inhibitory concentration values (MIC) were obtained for six derivatives of chalcones (T50, C3, E2A, F2A, T18A and T46A) and nonyl protocatechuate (MIC = 3.9 mg/L). The clinical isolate H. capsulatum EH317 was able to form biofilms in vitro after 96 hours. After 96 hours, the biofilm ...<br>Mestre
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Castro, Nadya da Silva. "Proteinas de superficie de Paracoccidioides brasiliensis." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2008. http://repositorio.unb.br/handle/10482/1714.
Full textAbstract:
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008.<br>Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-09-15T19:37:58Z
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2008_NadiaSilvaCastro.pdf: 1694398 bytes, checksum: 0128cdccb93616f46069ecd716dbb71a (MD5)<br>Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-09-21T12:39:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2008_NadiaSilvaCastro.pdf: 1694398 bytes, checksum: 0128cdccb93616f46069ecd716dbb71a (MD5)<br>Made available in DSpace on 2009-09-21T12:39:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2008-05<br>Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico, agente etiológico da paracoccidioidomicose. Em humanos, a infecção inicia-se pela inalação de propágulos fúngicos que alcançam os pulmões. A parede dos microrganismos constitui um importante reservatório de macromoléculas imunoreativas e um potencial alvo para a procura de candidatos a vacinas. Em muitos patógenos, as proteínas com âncoras de glicosilfosfatidilinositol (GPI) mostraram-se imunogênicas e importantes fatores de virulência. Assim, com o objetivo de estudar as proteínas de superfície foram efetuadas análises no banco de dados do transcriptoma de P. brasiliensis, onde pesquisou-se por proteínas GPI-ancoradas localizadas na membrana plasmática ou parede celular, bem como por proteínas que estivessem envolvidas na síntese, ligação e clivagem da âncora de GPI. Estas proteínas foram identificadas em várias categorias funcionais, tais como: (i) enzimas: glicanosiltransferases (1-3), (ii) prováveis antígenos de superfície, (iii) proteínas com papel estrutural e envolvidas na biossíntese da parede celular. Foram identificados transcritos codificantes para proteínas da via de biossíntese e hidrolise da âncora de GPI. Visando o conhecimento de mecanismos moleculares que participem da montagem e morfogênese da parede celular de P. brasiliensis, foi realizado o estudo de ?-1,3-glicanosiltransferas e 3 (PbGel3). PbGel3 mostrou-se em cópia única no genoma deste fungo com maiores níveis do transcrito e de proteína na fase miceliana. A proteína foi imunolocalizada na superfície de células leveduriformes e de micélio de P. brasiliensis. O potencial papel de PbGel3p na biossíntese e remodelamento foi evidenciado pela habilidade em recuperar o fenótipo do mutante gas1? de Saccharomyces cerevisiae. O homólogo da proteína DFG5 (deficiente para o crescimento filamentoso 5) de P. brasiliensis, uma proteína glicosilada provavelmente ligada à parede celular pela rede de ?-glicana foi estudado. Estudos de interação demonstraram que a proteína PbDfg5p recombinante se liga aos componentes da matriz extracelular, sugerindo um papel importante nos passos iniciais de colonização e aderência de P. brasiliensis aos tecidos do hospedeiro. Em função de seu papel biológico, bioquímica única, organização estrutural e a ausência da maioria de seus constituintes em células de mamíferos, a parede celular é um alvo atraente para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos e essencial para o entendimento da patogênese fúngica. _____________________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Paracoccidioides brasiliensis is a temperature dependent dimorphic fungus, the etiological agent of paracoccidioidomycosis. In human, infection starts by inhalation of fungal propagules reaching the pulmonary epithelium, where the morphogenetic conversion is correlated with changes in the cell wall composition, organization and structure. The cell wall constitute an important reservoir of immunoreactive molecules and potential target for the search of vaccine candidates. In many pathogens, the proteins with glicosilfosfatidilinositol (GPI)-anchors are immunogenic and important virulence factors. Thus, P. brasiliensis transcriptome data were analyzed for potential GPI-anchored proteins localized in plasma membrane or cell wall, as well as for proteins involved in synthesis, attachment and cleavage of the GPI anchor. The proteins were identified in several functional categories: (i) enzymes: glucanosyltransferases(1- 3), (ii) probable surface antigens, (iii) proteins involved in cell wall biosynthesis and structural role. It was identificated transcript encoding to proteins involved in GPI anchor biosynthesis and hydrolysis. In an effort to elucidate the molecular mechanisms involved in the fungus cell wall-assembling and morphogenesis it was performed the study of the B-1,3-glucanosyltransferase 3 (PbGel3). PbGel3 showed one copy in genome of this fungus with the highest level of transcript and protein in the mycelium phase. The protein was immunolocalized at the surface in both mycelium and yeast phase. The potential role of PbGel3p in cell wall biosynthesis and remodeling was evidenced by its ability to rescue the phenotype of the Saccharomyces cerevisiae gas1 mutant. The DFG5 (defective in filamentous growth) homologue of P. brasiliensis, a probably glicosylated and B-glucan linked cell-wall protein was also studied. Studies demonstrated that the recombinant PbDfg5p binds to extracellular matrix components, indicating that it can be important for initial steps leading of P. brasiliensis attachment and colonization of host tissues. Because of its essential biological role, unique biochemistry, structural organization and the absence of the most of their constituents in mammalians cells, the cell wall is an attractive target for the development of new antifungal agents and essential for understanding the fungal pathogenesis.
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Oliveira, Adriane Alves de. "Perfil transcricional do fungo Paracoccidioides na interação com célula pulmonares humanas (A549) : análise comparativa entre P. brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (Pb01)." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2010. http://repositorio.unb.br/handle/10482/7425.
Full textAbstract:
Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010.<br>Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T23:09:11Z
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2010_AdrieneAlvesdeOliveira.pdf: 669257 bytes, checksum: caccf186a24fa4e80ddf59c3ade9eccc (MD5)<br>Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T23:10:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1
2010_AdrieneAlvesdeOliveira.pdf: 669257 bytes, checksum: caccf186a24fa4e80ddf59c3ade9eccc (MD5)<br>Made available in DSpace on 2011-04-16T23:10:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1
2010_AdrieneAlvesdeOliveira.pdf: 669257 bytes, checksum: caccf186a24fa4e80ddf59c3ade9eccc (MD5)<br>Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica humana causada por espécies do fungo termo-dimórfico Paracoccidioides. Até há pouco tempo, apenas a espécie P. brasiliensis era reconhecida dentro deste gênero, mas recentemente foi identificada a espécie P. lutzii, filogeneticamente distante da anterior. A infecção é adquirida provavelmente pela inalação de propágulos transportados pelo ar derivados da forma miceliana do fungo e que se alojam principalmente nos pulmões. Vários estudos sugerem que o parasitismo intracelular do fungo seja importante na colonização do hospedeiro e na disseminação da doença. Para avaliar essa hipótese foi analisado comparativamente o perfil transcricional de Paracoccidioides - P. brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (Pb01) recuperados do interior de pneumócitos humanos em cultura (A549) durante uma cinética de interação. Para tanto foi utilizada a técnica de microarranjos de cDNA no caso de P. lutzii e PCR em tempo real para os representantes das duas espécies. Os genes diferencialmente expressos identificados neste trabalho estão relacionados principalmente à limitação de glicose, resposta ao estresse oxidativo, remodelagem da parede celular e adesão aos tecidos do hospedeiro. Os resultados demonstram que de uma forma semelhante ao que ocorre no interior de macrófagos murinos peritoniais, Paracoccidioides apresenta uma plasticidade transcricional para sobreviver no microambiente de pneumócitos humanos, que de forma geral é semelhante entre as espécies analisadas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT<br>Paracoccidioidomycosis (PCM) is a human systemic mycosis caused by the thermaldimorphic fungus Paracoccidioides. Until recently, P. brasiliensis was recognized as the only species inside this genus, nevertheless last year P. lutzii was acknowledged as new specie phylogenetically distant from the former. The infection is acquired by the inhalation of propagules derived from the mycelium form of the fungus and establishes itself mainly in the lungs. Various studies suggest that the intracellular parasitism of this fungus is relevant in the host’s colonization and the dissemination of the disease. In order to evaluate this hypothesis a comparative transcriptional profile between P. brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (Pb01) obtained from the interior of human pneumocytes linage (A549), during the interaction kinetics, was analysed. For this objective, cDNA microarray was used for P. lutzii (Pb01) and Real Time PCR for the representatives of both species of Paracoccidioides (Pb18 and Pb01). The genes identified by this study as differentially expressed were related mostly to glucose limitation, oxidative stress response, cell wall remodelling and adhesion to host’s tissues. Our results demonstrated that, in a similar manner in which occurs inside peritoneal murine macrophages, Paracoccidioides displays a transcriptional plasticity to survive in the microenvironment of the human pneumocytes, which is alike between both species analysed.
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MAGALHÃES, Mioni Thieli Figueiredo. "Caracterização fenotípica de isolados de Cryptococcus gattii." Universidade Federal do Pará, 2005. http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/9128.
Full textAbstract:
Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-09-29T15:27:32Z
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Dissertacao_CaracterizacaoFenotipicaIsolados.pdf: 1039438 bytes, checksum: 3c6c87cbf938c2196c47c8af4a7fe355 (MD5)<br>Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-02T16:49:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2
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Dissertacao_CaracterizacaoFenotipicaIsolados.pdf: 1039438 bytes, checksum: 3c6c87cbf938c2196c47c8af4a7fe355 (MD5)<br>Made available in DSpace on 2017-10-02T16:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2
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Previous issue date: 2005-02-25<br>CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior<br>Cryptococcus neoformans foi descrito como patógeno humano em 1894. Desde então, estudos abrangendo aspectos da biologia, taxonomia, ecologia e epidemiologia do fungo , vêm se desenvolvendo com significante importância para a medicina e para o meio ambiente. O fungo foi recentemente classificado em duas espécies distintas, C. neoformans (sorotipo A, D e AD) e C. gattii (sorotipos B e C), cada uma com características morfológicas e genéticas bem definidas, assim como seus aspectos ecológicos e epidemiológicos. C. neoformans acomete principalmente indivíduos imunocomprometidos, especialmente aqueles infectados pelo HIV, enquanto C. gattii infecta principalmente indivíduos imunocompetentes, atingindo todas as faixas etárias. Os fatores principais que determinam a patogênese da criptococose são relacionados com a situação de defesa do hospedeiro, o tamanho do inóculo e a virulência da cepa, sendo este último determinado por quatro características principais: a cápsula polissacarídica, a produção de melanina, a diferença de tipos sexuados (MAT e MATa) e a termotolerância. O fungo possui ciclo de vida transitório entre formas leveduriformes haplóides e formas filamentosas dicarióticas. A reprodução sexuada envolve mistura de material genético de parentais que formam progênies contendo características genéticas de ambos. A forma sexuada pode ocorrer através de um processo conhecido como frutificação haplóide. As espécies são heterotálicas, com dois tipos sexuados MAT e MATa. Estudos de caracterização fenotípica, incluindo a identificação da espécie, sorotipo e tipo sexuado tem grande relevância para a condução de estudos mais aprofundados devido ao estreito relacionamento entre seus aspectos ecológicos variáveis e seu ciclo de desenvolvimento e multiplicação, especialmente para o Norte e Nordeste do Brasil, onde o sorotipo B destaca-se como principal agente de meningite fúngica em hospedeiros normais. Este trabalho utilizou a técnica do CGB para a análise metabólica (identificação da espécie), onde 28 cepas apresentaram resultado positivo, caracterizando C. gattii e duas apresentaram resultado negativo, caracterizando C. neoformans . Os resultados de sorotipagem, realizados através de teste de aglutinação revelaram 28 cepas do sorotipo B e duas do sorotipo A. A determinação do tipo sexuado foi realizada através de técnica de PCR e todas as amostras eram MAT.<br>Cryptococcus neoformans was described as human pathogen in 1894. Since then, studies about fungal aspects as biology, taxonomy, ecology and epidemiology have been developed with great importance to medicine and the environment. The fungus was recently classified in two separated species, C. neoformans (serotypes A, D and AD) and C. gattii (serotypes B and C) each one with well defined genetic and morphological features as well as ecology and epidemiology aspects. C. neoformans occurs mainly in immunocompromised hosts, especially those infected by HIV. In the other hand, C. gattii infects mainly immunocompetents individuals to all lifetimes. The main factors determining the cryptococcosys pathogenesis have relations with the host defenses state, the size of particle and strain virulence, this last for four main features: the polyssacharide capsule, the melanin production, the mating types (MAT and MATa) and thermotolerance. The fungus has a transitory life cycle between haploid yeast form and dykariotic filamentous forms. The sexual cycles includes a mixture of genetic parental genes that form progenies containing the genetic characteristics of both. The asexual cycle occurs through a process know as haploid fruiting. The species are heterothallic with two mating types MAT and MATa. Phenotypic characterization studies, including the species identification, serotype and mating type have a great importance for conductions of profound studies because of the close relation between the ecological variants features and its development cycle and multiplication, especially in Brazilian regions North and Northeast where serotype B is the most prevalent cause of meningitis in ordinary hosts. This work used the CGB techniques for methabolic analysis (species identification), where 28 strains were positive, characterizing C. gattii and two were negative, characterizing C. neoformans. The serotyping results, make among agglutination test reveals 28 strains of serotype B and two of serotype A. The mating type was realized by PCR technique and all strains were MAT.
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Ruiz, Luciana da Silva. "Fungemia por leveduras: perfis fenotípicos e moleculares e sensibilidade antifúngica de amostras isoladas no hospital das clínicas de Botucatu, São Paulo." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42132/tde-25112008-103426/.
Full textAbstract:
Os objetivos deste estudo foram: re-identificar 70 isolados de Candida em micoteca por método tradicional e API 20C; identificar a presença de C. dubliniensis; determinar e comparar as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) das amostras, frente a sete antifúngicos (E-test); caracterizar molecularmente as amostras seqüenciais de Candida pela técnica de PFGE; estudar e comparar o perfil genotípico de isolados de C. albicans e C. parapsilosis, através da análise de marcadores microsatélites e cariotipagem. O nível de concordância entre o método tradicional e o API 20C foi de 93%. Nenhum isolado de C. dubliniensis foi identificado no estudo. Em relação à sensibilidade antifúngica, a maioria das amostras apresentou alta porcentagem de sensibilidade às sete drogas testadas. A análise molecular pela técnica de PFGE, mostrou seis perfis de cariótipos diferentes em 24 amostras seqüenciais. Em relação à comparação das técnicas de PFGE e microssatélites, observamos que a última mostrou maior poder discriminatório para as amostras de estudadas.<br>This study was aimed to: identify the 70 isolates of Candida in a culture collection by the traditional method and by API 20C; identify the presence of C. dubliniensis; determine and compare the minimum inhibitory concentrations (MICs) of these samples in regard to the seven drugs (E-test); molecularly characterize sequential samples from the same patient by the PFGE technique; study the genotypic profile of all the isolates of C. albicans and C. parapsilosis by means of the microsatellite technique and compare the results with those obtained by the PFGE technique. The level of agreement between the traditional method and the API 20C was 93%. No isolate of C. dubliniensis was identified in the study. In relation to antifungal susceptibility, most of the samples presented a high percentage of susceptibility to the seven drugs tested. The molecular analysis by the PFGE technique revealed six different karyotype profiles among 24 sequential samples. In the comparison between the PFGE and microsatellite, the latter showed a greater discriminatory power for samples.
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Guàrdia, i. Valle Laia. "Tricomicets ibèrics." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2004. http://hdl.handle.net/10803/3704.
Full textAbstract:
Aquesta tesis té com a principal objectiu fer una aproximació al coneixement de la diversitat de tricomicets de la Península Ibèrica i Illes Balears. Es tracta d'organismes filamentosos endosimbionts d'artròpodes, anteriorment inclosos en la classe Trichomycetes (Zygomycota), actualment disgregats entre la SubDiv. Kickxellomycotina (Fongs) i la Classe Mesomycetozoea (Protozous). Es tracta d'organismes simbionts que habiten el tracte digestiu dels seus hostes, bàsicament insectes aquàtics o terrestres, diplòpodes i crustacis. En aquesta tesis es segueix la taxonomia clàssica, incloent tots els ordres en la classe Tricomicets, ja que en el moment de redacció i defensa de la tesis encara no s'havien produït els canvis sistemàtics profunds que afectarien aquest grup i l'organitzarien de manera coherent. En aquesta obra s'han estudiat un total de 23 gèneres (17 Harpellales, 2 Asellariales i 4 Eccrinales), dels quals, dos son nous per la ciència. El nombre d'espècies ascendeix a 54 (46 Harpellales, entre les quals, 15 noves per a la ciència i 19 cites inèdites peninsulars; 4 Asellariales, de les quals una nova per a la ciència i les altres inèdites a nivell peninsular; 4 Eccrinales, totes cites noves peninsulars). S'hi descriuen zigòspores (espores sexuals) en espècies i gèneres on aquestes eren desconegudes (Bojamyces, Orphella, diversos Smittium). Es descriuen processos de germinació també inèdits (en Spartiella barbata o Orphella coronata). S'hi inclouen estudis micromorfològics amb Scanning que mostren estructures anteriorment desconegudes, com ara ornamentacions en espores i altres cèl·lules. També es descriu per primer cop un tricomicet capaç de créixer fora de l'hoste viu (Bojamyces transfuga). En definitiva, el coneixement dels tricomicets a la Península s'ha ampliat considerablement, però evidentment que el mostreig no ha pogut abraçar la totalitat del territori, i podem anticipar el futur descobriment de nous tàxons, nous hostes o noves localitats de tricomicets a la Península i Balears.<br>Esta tesis pretende ser una aproximación al conocimiento de la diversidad de tricomicetos en la Península Ibérica y Baleares. Se trata de organismos filamentosos endosimbiontes de artrópodos, anteriormente agrupados en la clase de los Tricomicetos (Zigomicota), y actualmente disgregados entre la SubDiv. Kickxellomycotina (hongos) y la Clase Mesomycetozoea (Protozoos). Se trata de organismos que habitan en el tracto digestivo de sus hospedantes, básicamente insectos acuáticos o terrestres, diplópodos y crustáceos. El tratamiento taxonómico que se hace en la disertación no incluye los recientes cambios sistemáticos que han reorganizado este complejo de organismos. Se han estudiado un total de 23 géneros de tricomicetos (17 Harpellales, 2 Asellariales y 4 Eccrinales), de los cuales, dos son nuevos para la ciencia. El número de especies asciende a 54 (46 Harpellales, entre ellas, 15 nuevas para la ciencia y 19 citas inéditas peninsulares; 4 Asellariales, de las cuales una nueva para la ciencia y las otras inéditas a nivel peninsular; 4 Eccrinales, todas citas nuevas para la Península). Hemos hallado zigósporas (esporas sexuales) en especies y géneros donde estas eran anteriormente desconocidas (Bojamyces, Orphella, varios Smittium). Se describen procesos de germinación también inéditos (en Spartiella barbata o Orphella coronata). Se incluyen estudios micromorfológicos con Scanning, los cuales muestran estructuras novedosas, como ornamentaciones en esporas y otras células. Se describe por primera vez un tricomiceto capaz de desarrollarse fuera del huésped vivo (Bojamyces transfuga). En definitiva, el conocimiento de los hongos tricomicetos en la Península ha sido ampliado, pero es evidente que el muestreo no ha podido abarcar la totalidad del territorio, con lo cual es de prever aun el futuro descubrimiento de nuevos taxones, en nuevos hospedantes o nuevas localidades.<br>The main objective of the present dissertation is the achievement of a better knowledge on the diversity of trichomycetes in the Iberian Peninsula and Balearic Islands. These are filamentous organisms living symbiotically associated with diverse arthropods, counting insects, diplopods and crustaceans. The taxonomic treatment in the dissertation is based on the classic conception of the group as a Class, which has been recently disaggregated into the SubPhyllum Kickxellomycotina (the fungal components) and the Class Mesomycetozoea (the protozoan components). The study includes a total of 23 genera (17 Harpellales, 2 Asellariales and 4 Eccrinales), of which two are new for he science. The number of species treated is 54 (46 Harpellales, of which, 15 new species and 19 new peninsular reports; 4 Asellariales, including one new species and 3 new peninsular records; 4 Eccrinales, all new for the Iberian territory). Zygospores are described for the first time in diverse species and genera (Bojamyces, Orphella, and diverse Smittium species). Inedit observations on germination processes are also described (for Spartiella barbata and Orphella coronata). Diverse microscopy techniques have been used, and new features as spore ornamentations have been observed with SEM. The dissertation also includes the report of a new species that can grow outside the living host (Bojamyces transfuga). The development of this dissertation has provided new and interesting information on Iberian trichomycetes; nonetheless many attractive localities in the territory are yet to be explored and new species, hosts and/or localities may be discovered in the coming years.
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Minatel, Igor Otavio. "Clamidósporos do Paracoccidioides brasiliensis : isolamento e estudo da infecticidade em modelo experimental murino /." Botucatu : [s.n.], 2011. http://hdl.handle.net/11449/94780.
Full textAbstract:
Resumo: Este trabalho objetivou desenvolver um protocolo para produção, isolamento e purificação de clamidósporos do P. brasiliensis (Pb) e estudar seu potencial infectante em camundongos. A cepa Bt83 foi cultivada em meio líquido por 14 dias à temperatura de 25 ºC e posteriormente incubada por 36 horas a 32°C para a produção de clamidósporos. Os clamidósporos foram liberados por agitação magnética e sonicação. A purificação foi realizada em gradiente de concentração com Percoll a 95%, resultando em suspensão de clamidósporos com viabilidade de 90% e com poucos (8%) fragmentos miceliais. Para avaliar seu potencial infectante, os clamidósporos foram inoculados em camundongos por via intranasal, e os animais eutanasiados após 24h, 1, 2 e 4 semanas de infecção foram estudados através da histologia e quantificação da carga fúngica pela contagem de unidades formadoras de colônia dos pulmões, baço e fígado. Vinte e quatro horas pós-infecção observaram-se no pulmão focos de broncopneumonia contendo grande número de leveduras, algumas em brotamento múltiplo. Nos períodos subseqüentes observaram-se lesões granulomatosas, com presença de fungos, principalmente nos pulmões. A disseminação para baço e fígado foi precoce, iniciando na 1ª semana de infecção. Neste trabalho demonstramos que os clamidósporos do Pb podem ser, fácil e rapidamente, produzidos e isolados. Também mostramos que estes esporos são altamente infectantes e capazes de disseminação precoce. Os resultados indicam que os clamidósporos podem desempenhar um importante papel na infecção e desenvolvimento da paracoccidioidomicose<br>Abstract: This study aimed at development a protocol for production, isolation and purification of chlamydospores of P. brasiliensis (Pb) and study their potential infectious in mice. Bt83 strain was grown in liquid medium for 14 days at 25 °C and then incubated for 36 hours at 32°C to produce chlamydospores. The chlamydospores were released by magnetic stirring and sonication. The purification was performed in concentration gradient with Percoll to 95%, resulting in a suspension of chlamydospores 90% viable and few (8%) mycelia non-viable fragments. To assess their potential infectious the chlamydospores, mice were inoculated intranasally and euthanized after 24 h, 1, 2 and 4 weeks of infection and their lungs, spleen and liver studied histologically and quantified the fungal burden by colony forming units counting. Twenty-four hours postinfection, multiple foci of bronchopneumonia were seen containing many multibudding yeast cells. In subsequent periods there were granulomatous lesions with the presence of fungi, mainly in the lungs. Dissemination to the spleen and liver was an early event, starting at 1 week of infection. This work provided evidences that the chlamydospores of Pb can be quickly and easily produced and isolated. It was also shown that these spores are highly infectious and have great ability to disseminate soon after infection. These results indicate that chlamydospores might be elected as an important infectious particle in paracoccidioidomycosis<br>Orientador: Denise Fecchio<br>Coorientador: Julio Defaveri<br>Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares<br>Banca: Terezinha Inez Estivalet Svidzinski<br>Mestre
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Copetti, Marina Venturini. "Avaliação micológica de rações comerciais para cães e gatos e potencial micotoxinogênico de espécies selecionadas." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2005. http://hdl.handle.net/10183/4932.
Full textAbstract:
A eficácia dos meios ágar batata acidificado, ágar dicloram rosa de bengala e cloranfenicol e ágar dicloram glicerol 18% foi comparada para isolamento e quantificação de fungos a partir da análise de 54 amostras de rações comerciais secas para cães e gatos (34 para cães e 20 para gatos), produzidas por 9 empresas. A atividade de água das amostras foi quantificada, apresentando valores entre 0,45 e 0,82. Em 74% das amostras foi detectada a presença fúngica, onde, além de fungos com micélio estéril e leveduras, 23 gêneros de fungos foram identificados. As 40 amostras positivas apresentaram níveis de contaminação, com contagens variando entre 101 e 103 UFC/g. Não se verificou correlação entre atividade de água e contaminação fúngica e não se observou diferença significativa entre o número de colônias isoladas e os diferentes meios de cultivo utilizados. Apesar disto, o DG18 foi o meio que apresentou melhores resultados tanto na quantidade quanto na variedade de fungos isolados. Comparando-se os resultados obtidos com diferentes meios observa-se que os microrganismos isolados dependem dos meios de cultivo empregados. O gênero Aspergillus e a espécie Aspergillus niger foram os mais freqüentemente isolados. Isolados pertencentes a espécies potencialmente produtoras de aflatoxinas e ocratoxina A foram avaliados através do método de ágar plug-TLC. Vinte por cento dos A. flavus isolados produziram aflatoxina B1, todos os isolados de A. ochraceus produziram ocratoxina A e nenhum isolado de A. niger foi detectado como produtor de ocratoxina através do método de screening utilizado. A avaliação fúngica realizada com o emprego de 3 meios de cultura tornou claro que a detecção de fungos é dependente do meio de cultura utilizado. A Aw do alimento e do meio também devem ser consideradas para que as análises microbiológicas possam detectar ou valorar a micobiota que, efetivamente, está contaminando o alimento.
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Oliveira, Tatiane Martins de. "Dejeto líquido de suíno como adubo no cultivo de milho : microbiota bacteriana e fúngica do solo argiloso e repercussão na micologia associada à produção de fumonisina no grão." Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentos, 2011. http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000162337.
Full textAbstract:
O dejeto líquido de suíno (DLS) é formado de fezes, urina, água de consumo e de lavagem das instalações da suinocultura, constitui-se de macronutrientes, apresentando bactérias e fungos. A geração de grande quantidade de resíduos necessita de um adequado manejo para a minimização de problemas ambientais, dessa forma o DLS vem sendo aplicado como fertilizante no solo. No entanto, a sua utilização pode alterar a qualidade microbiológica do solo e dos grãos. O milho (Zea mays L.) é um alimento consumido mundialmente por humanos e animais, e a qualidade dos grãos pode ser prejudicada pela contaminação por Fusarium verticillioides e produção de fumonisinas. Os objetivos deste trabalho foram analisar o efeito do uso de dejeto líquido de suíno (DLS) como adubo no solo na microbiota bacteriana e fúngica do solo, e na micologia e na produção de fumonisinas nos grãos. O delineamento experimental foi em blocos ao acaso com quatro repetições, sendo os tratamentos equivalentes a kg de N (ha ano)-1: controle (sem adubação), adubação mineral (150), DLS (50), DLS (100), DLS (150), DLS (200) e DLS (300). A caracterização do DLS utilizado como fertilizante na safra 2009/10 apresentou 4,3 x 103 e 5,8 x 107 UFC mL-1 de fungos e bactérias, respectivamente. Na análise química foram encontradas concentrações de 29,8g de nitrogênio e 29,0g de potássio por kg de matéria seca. O solo apresentou médias de 1,7 x 108 UFC g-1 bactérias e 5,8 x 105 UFC g-1 de fungos na pós semeadura e 1,5 x 108 UFC g-1 bactérias e 2,0 x 107 UFC g-1 de fungos na colheita. A similaridade genotípica de bactérias região 16S foi de 57% de similaridade genotípica entre todos os solos. O perfil do DLS não foi detectado em solo coletado na colheita do milho, indicando que as bactérias do DLS não estavam presentes no solo. Nas amostras de solo adubado com DLS, a contagem total de fungos variou entre 1,0 x 105 a 8,0 x 105 UFC g-1 e a
contagem total de bactérias de 4,0 x 107 a 3,0 x 108 UFC g-1. Na safra 2009/2010 a concentração de fumonisina total nos grãos de milho com tratamento controle apresentou média de 0,5 µg g-1 de milho. A concentração de fumonisina FB1 no milho sob adubação com 150 DLS apresentou variação entre 0,4 a 0,5 µg g-1 e o milho com adubação mineral 0,7 a 0,8 µg g-1 de fumonisina FB1. Portanto, o DLS apresentou grande quantidade de nutrientes e não apresentou efeito significativo na contaminação fúngica e na produção de fumonisinas em grãos de milho. Conforme a avaliação de diversidade genotípica, a ausência do perfil de dejeto líquido de suíno no solo na época da colheita significa que não há possibilidade de contaminação dos grãos e alteração da qualidade microbiológica.<br>Swine slurry (SS) is composed of feces, urine, drinking water, washing facilities water in swine farming, of macronutrients, so as bacteria and fungi. The generation of large quantities of waste requires an appropriate management to minimize environmental problems, so the SS has been used as fertilizer in the soil. However, their use may alter the microbiological quality of soli and grains. Maize (Zea mays L.) is a worldwide food consumed by humans and animals, grain quality can be compromised by contamination by Fusarium verticillioides and fumonisins production. The objectives this work were to analyze the effect of the use of Swine Slurry (SS) as a fertilizer in the soil bacterial and fungi microbiota of soil and in mycology and fumonisins production in grain. The experiment design was a randomized block design with four replications, with treatments equivalent to kg N (ha year)-1: control (without fertilization), mineral fertilizer (150), SS (50), SS (100), SS (150), SS (200) and SS (300). The microbiological characterization of SS used as fertilizer in 2009/2010 had 4.3 x 103 and 5.8 x 107 CFU mL-1 of fungi and bacteria, respectively. Chemical analysis were found concentration of 29.8g of nitrogen and 29.0g of potassium per kg dry matter. The soil showed an average of 1.7 x 108 CFU g-1 bacteria and 5.8 x 105 CFU g-1 of fungi after sowing and 1.5 x 108 CFU g-1 bacteria and 2.0 x 107 CFU g-1 of fungus at harvest. The genotypic similarity of bacterial was 57% between all soils. The profile of the SS was not detected in soil collected at harvest of maize, indicating that bacteria were not presented in soil. In the Soil fertilized with SS, the total count of fungi ranged from 1.0 x 105 to 8.0 x 105 CFU g-1 and bacteria count of 4.0 x 107 to 3.0 x 108 CFU g-1. In the season 2009/2010 the total concentration of fumonisin in maize with control treatment showed an average of 0.5 µg g-1 of maize. The concentration of fumonisin FB1 in maize under fertilization with 150 SS varied between 0.4 to 0.5 µg g-1, and mineral fertilizer of 0.7 to 0.8 µg g-1 of fumonisin FB1. Therefore,
the swine slurry presented a greater quantity of nutrients, can be used as organic fertilizer, and no significant effect was noted on fungal growth and production of fumonisins in maize grains. The assessment of genotypic diversity bacterial, the absence of profile of swine slurry in soil at harvest time means there not possibility of contamination of the grains and alteration of the microbiological quality.
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Colombo, Tatiana Elias [UNESP]. "Relação fenotípica e genotípica entre isolados clínicos e ambientais de Candida spp em dois hospitais de São José do Rio Preto, SP." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2010. http://hdl.handle.net/11449/94828.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2010-07-20Bitstream added on 2014-06-13T20:16:32Z : No. of bitstreams: 1
colombo_te_me_sjrp.pdf: 855064 bytes, checksum: ad2e08a9f257905e52f58887fb31dbcb (MD5)<br>Famerp<br>As leveduras estão amplamente distribuídas em diversos ambientes, sendo também habitantes normais do corpo humano. São consideradas patógenos oportunistas causando infecções que variam desde superficiais até profundas e fatais. Espécies de Candida spp ocupam, atualmente, lugar de destaque como principais causadoras das infecções a corrente sanguínea. A investigação da suscetibilidade antimicrobiana, frente aos antifúngicos rotineiramente preconizados na terapêutica, é de fundamental importância, além disso, métodos moleculares como o RAPD (Polimorfismo do DNA aleatoriamente amplificado) e PFGE (Eletroforese em campo pulsátil) são conhecidos por ajudar na identificação das fontes de infecção e delineamento epidemiológico. O Laboratório de Microbiologia da FAMERP, em parceria com o Hospital de Base de São José do Rio Preto, vem desenvolvendo projetos de pesquisa que envolve o isolamento, a identificação e manutenção de coleção de culturas de espécies microbianas. O presente projeto teve como objetivo identificar as espécies leveduriformes presentes em isolados clínicos e ambientais, avaliar a sua suscetibilidade antimicrobiana, além de estudar a relação genética entre tais isolados por ambas técnicas - RAPD e PFGE, na tentativa de elucidar as possíveis fontes de aquisição, prática considerada fundamental na rede de vigilância. No período de agosto de 2007 a outubro de 2009, foram analisados 119 episódios de candidemia. A distribuição dos casos de candidemia foi mais frequente em pacientes com idade inferior a 1 ano e superior a 60 anos, não havendo tendência para nenhum gênero. O grupo geral manteve como período de internação uma média de 35 dias, com frequência de óbito correspondente a 61%. C. albicans foi a espécie mais prevalente (29%), seguida por C. parapsilosis (28%) e C. tropicalis (23%)...<br>As leveduras estão amplamente distribuídas em diversos ambientes, sendo também habitantes normais do corpo humano. São consideradas patógenos oportunistas causando infecções que variam desde superficiais até profundas e fatais. Espécies de Candida spp ocupam, atualmente, lugar de destaque como principais causadoras das infecções a corrente sanguínea. A investigação da suscetibilidade antimicrobiana, frente aos antifúngicos rotineiramente preconizados na terapêutica, é de fundamental importância, além disso, métodos moleculares como o RAPD (Polimorfismo do DNA aleatoriamente amplificado) e PFGE (Eletroforese em campo pulsátil) são conhecidos por ajudar na identificação das fontes de infecção e delineamento epidemiológico. O Laboratório de Microbiologia da FAMERP, em parceria com o Hospital de Base de São José do Rio Preto, vem desenvolvendo projetos de pesquisa que envolve o isolamento, a identificação e manutenção de coleção de culturas de espécies microbianas. O presente projeto teve como objetivo identificar as espécies leveduriformes presentes em isolados clínicos e ambientais, avaliar a sua suscetibilidade antimicrobiana, além de estudar a relação genética entre tais isolados por ambas técnicas - RAPD e PFGE, na tentativa de elucidar as possíveis fontes de aquisição, prática considerada fundamental na rede de vigilância. No período de agosto de 2007 a outubro de 2009, foram analisados 119 episódios de candidemia. A distribuição dos casos de candidemia foi mais frequente em pacientes com idade inferior a 1 ano e superior a 60 anos, não havendo tendência para nenhum gênero. O grupo geral manteve como período de internação uma média de 35 dias, com frequência de óbito correspondente a 61%. C. albicans foi a espécie mais prevalente (29%), seguida por C. parapsilosis (28%) e C. tropicalis (23%)... (Complete abstract click electronic access below)
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Rochelle, Sergio Luiz de Almeida 1956. "Influencia do meio de cultura na extração de proteinas intracelulares de leveduras do genero Candida isoladas na cavidade oral para aplicação em PAGE-SDS." [s.n.], 1996. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/289351.
Full textAbstract:
Orientador: Jose Francisco Hofling<br>Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba<br>Made available in DSpace on 2018-07-22T03:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1996<br>Resumo: Os fungos, especialmente as leveduras do Gênero Candida, são agentes potencialmente patogênicos, capazes de provocar inúmeras doenças nos seres vivos, em especial quando se aproveitam da queda da resistência orgânica, sendo considerados oportunistas. Com o surgimento da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida, parece oportuno, a crescente ampliação de pesquisas com esses microorganismos, os quais têm sido estudados do ponto de vista fisiológico, bioquímico, soro lógico, genético, etc. Na cavidade oral, são responsáveis por doenças que afetam as diversas estruturas bucais, justificando o crescente aumento de casos clínicos e de investigações nessa área. Dentre as técnicas que têm sido empregadas com o objetivo de identificar e caracterizar melhor esses organismos, as de Biologia Molecular desempenham, um poderoso papel investigativo. A PAGE-SDS, tem se mostrado uma técnica importante nos estudos de identificação e caracterização desses microorganismos...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital<br>Abstract: Fungi, especially the genus Candida yeasts, are potentially patogenic agents, able to cause numberless iIInesses in being, particularly when take advantage in the fali of the organic resistance, being considered opportunists. The arise of the Acquired Immune Deficiency Syndrome, seems suitable, that the increasing amplification of researches with these microorganisms, which has been studied in physiological, biochemical, serological, genetical, etc., point of view. In the oral cavity, are responsible for illnesses that affect variol.js orais structures, justifying the increase of clinical cases and the investigations in this area. Among the techniques that have been used with the objective to identify and characterize these organisms from the Molecular Biology attends, a powerful investigator role. The SDS-PAGE, has been shown a technique of complementary value and important studies of identification and
characterization of these microorganisms...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations<br>Mestrado<br>Biologia e Patologia Buco-Dental<br>Mestre em Ciências
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Hayakawa, Márcia. "Fagocitose, produção de óxido nítrico e de citocinas pró-inflamatórias por macrófagos estimulados por diferentes agentes de cromoblastomicose\"." Universidade de São Paulo, 2005. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-04012018-172811/.
Full textAbstract:
A cromoblastomicose é infecção da pele e do tecido subcutâneo que resulta da implantação traumática transcutânea de propágulos originários de diversas espécies fúngicas. A doença é insidiosa e as lesões causadas pelos mesmos apresentam evolução lenta e os pacientes cronicamente infectados deixam de responder a alguns tratamentos. Considerando a importância dos macrófagos na interação dos sistemas imune inato e adaptativo, bem como na ativação de células T, no presente trabalho foram realizados ensaios de fagocitose empregando conídios das principais espécies fúngicas causadoras da cromoblastomicose (Fonsecaea pedrosoi, Cladophialophora carrionii, Rhinocladiella aquaspersa e Phialophora verrucosa), viabilidade de conídios seguidos da dosagem de citocinas. Verificamos que os receptores de manose atuaram significativamente no processo de fagocitose dos fungos Fonsecaea pedrosoi e Rhinocladiella aquaspersa. Além da da manose, outros açúcares como glicose e lactose, também inibiram a fagocitose desses fungos. Já os conídios fagocitados por macrófagos, provocaram diminuição significativa na expressão de suas moléculas de superfície, tais como CD80, CD86 e MHC classe II. Foi demonstrado que os fungos Rhinocladiella aquaspersa, Phialophora verrucosa e Cladophialophora carrionii permaneceram viáveis após 72 horas de interação com os macrófagos no processo fagocítico. Assim como observamos que ocorreu uma produção elevada de NO no período de 12 horas principalmente na presença de Fonsecaea pedrosoi, entretanto, o fungo não foi eliminado pelo macrófago. Ao analisarmos a síntese de IL-1β e IL-6, os fungos Rhinocladiella aquaspersa e Cladophialophora carrionii produziram esta citocina significativamente. Ao contrário, na síntese de TNF-α, todos os agentes da cromoblastomicose secretaram esta interleucina. Esses resultados sugerem que apesar dos diferentes fungos causarem a mesma patologia, os vários agentes etiológicos na cromoblastomicose pode levar a uma resposta imunológica diferente e conseqüentemente alterar a evolução da doença.<br>Abstract not available.
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Marcos, Caroline Maria [UNESP]. "Funcionalidade das proteínas EF-Tu e 14-3-3 na virulência de Paracoccidioides brasiliensis." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2015. http://hdl.handle.net/11449/132196.
Full textAbstract:
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000851710.pdf: 5518013 bytes, checksum: 8a378cf5a8a0a17841f43b423f397e01 (MD5)<br>Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)<br>Programa de Apoio ao Desenvolvimento Científico da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da UNESP (PADC)<br>Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica com ampla distribuição na América Latina. A adesão e invasão de células do hospedeiro são eventos cruciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. Além disso, estes utilizam suas moléculas de superfície para se ligar aos componentes da matriz extracelular para estabelecer a infecção. O sucesso de colonização dos tecidos do hospedeiro pelo fungo é um evento complexo, geralmente envolvendo um ligante codificado pelo patógeno (adesinas) e um receptor da célula (freqüentemente um componente da matriz extracelular). A identificação de mecanismos de adesão, invasão ou evasão imune por Paracoccidioides é extremamente relevante e tem sido alvo de pesquisas recentes desenvolvidas por vários grupos. Neste intuito o estudo dos passos envolvidos desde o contato inicial de P. brasiliensis até os que culminam com a sua entrada na célula através da caracterização funcional de proteínas de membrana de P. brasiliensis, principais alvos de interação com moléculas do hospedeiro, é de grande importância. O Fator de elongação Tu, pertence ao grupo de proteínas denominadas moonlighting, tais moléculas possuem a capacidade de exercer mais de uma função e, normalmente, localizam-se em diferentes compartimentos da célula. Há relatos que EF-Tu de agentes patogênicos possa atuar como um fator de virulência. Previamente esta proteína foi identificada em P. brasiliensis por análise proteômica, sendo diferencialmente expressa quanto o fungo foi cultivado na presença de sangue de carneiro, porém esta ainda não foi caracterizada sendo interessante então a elucidação do seu papel na interação deste fungo às células epiteliais. O objetivo deste estudo foi produzir a proteína EF-Tu recombinante e seu respectivo anticorpo policlonal, verificar...<br>Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis with broad distribution in Latin America. The adhesion and host cell invasion are critical events involved in the infection and dissemination of the pathogen. Furthermore, they use their surface molecules to bind to extracellular matrix components to establish infection. The successful colonization of host tissues by the fungus is a complex event, usually involving a linker encoded by the pathogen (adhesins) and a cell receptor (often an extracellular matrix component). The identification of adhesion mechanisms, invasion or immune evasion by P. brasiliensis is extremely important and has been investigated in recent studies developed by several groups. In order to study the steps involved from the initial contact of P.brasiliensis until the culminating in its entry into the host cell through the functional characterization of P. brasiliensis membrane proteins, the main targets of interaction with host molecules, is of great importance. The elongation factor Tu (EF-Tu) belongs to the group of proteins called moonlighting such molecules have the ability to perform more than one function, and typically are located in different compartments of the cell. There are reports that EF-Tu of pathogens can act as a virulence factor. This protein has been previously identified in P. brasiliensis by proteomic analysis, but this has not yet been characterized as being interesting then the elucidation of its role in interacting of the fungus with epithelial cells. For this purpose the aim of this study was to produce the recombinant protein and its respective polyclonal antibody, verify your role in the fungus interaction with pneumocytes, extracellular matrix and plasminogen. Also in order to characterize the EF-Tu protein the present study aimed to obtain isolated with low expression of the gene encoding EF-Tu and with this verifies the role of EF-...
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Marcos, Caroline Maria. "Funcionalidade das proteínas EF-Tu e 14-3-3 na virulência de Paracoccidioides brasiliensis /." Araraquara, 2015. http://hdl.handle.net/11449/132196.
Full textAbstract:
Orientador : Ana Marisa Fusco Almeida<br>Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini<br>Banca: Eduardo Bagagli<br>Banca: Alexandra Ivo de Medeiros<br>Banca: Márcia Regina von Zeska Kress<br>Banca: Angela Maria Victoriano de Cmpos Soares<br>Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica com ampla distribuição na América Latina. A adesão e invasão de células do hospedeiro são eventos cruciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. Além disso, estes utilizam suas moléculas de superfície para se ligar aos componentes da matriz extracelular para estabelecer a infecção. O sucesso de colonização dos tecidos do hospedeiro pelo fungo é um evento complexo, geralmente envolvendo um ligante codificado pelo patógeno (adesinas) e um receptor da célula (freqüentemente um componente da matriz extracelular). A identificação de mecanismos de adesão, invasão ou evasão imune por Paracoccidioides é extremamente relevante e tem sido alvo de pesquisas recentes desenvolvidas por vários grupos. Neste intuito o estudo dos passos envolvidos desde o contato inicial de P. brasiliensis até os que culminam com a sua entrada na célula através da caracterização funcional de proteínas de membrana de P. brasiliensis, principais alvos de interação com moléculas do hospedeiro, é de grande importância. O Fator de elongação Tu, pertence ao grupo de proteínas denominadas "moonlighting", tais moléculas possuem a capacidade de exercer mais de uma função e, normalmente, localizam-se em diferentes compartimentos da célula. Há relatos que EF-Tu de agentes patogênicos possa atuar como um fator de virulência. Previamente esta proteína foi identificada em P. brasiliensis por análise proteômica, sendo diferencialmente expressa quanto o fungo foi cultivado na presença de sangue de carneiro, porém esta ainda não foi caracterizada sendo interessante então a elucidação do seu papel na interação deste fungo às células epiteliais. O objetivo deste estudo foi produzir a proteína EF-Tu recombinante e seu respectivo anticorpo policlonal, verificar...<br>Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis with broad distribution in Latin America. The adhesion and host cell invasion are critical events involved in the infection and dissemination of the pathogen. Furthermore, they use their surface molecules to bind to extracellular matrix components to establish infection. The successful colonization of host tissues by the fungus is a complex event, usually involving a linker encoded by the pathogen (adhesins) and a cell receptor (often an extracellular matrix component). The identification of adhesion mechanisms, invasion or immune evasion by P. brasiliensis is extremely important and has been investigated in recent studies developed by several groups. In order to study the steps involved from the initial contact of P.brasiliensis until the culminating in its entry into the host cell through the functional characterization of P. brasiliensis membrane proteins, the main targets of interaction with host molecules, is of great importance. The elongation factor Tu (EF-Tu) belongs to the group of proteins called "moonlighting" such molecules have the ability to perform more than one function, and typically are located in different compartments of the cell. There are reports that EF-Tu of pathogens can act as a virulence factor. This protein has been previously identified in P. brasiliensis by proteomic analysis, but this has not yet been characterized as being interesting then the elucidation of its role in interacting of the fungus with epithelial cells. For this purpose the aim of this study was to produce the recombinant protein and its respective polyclonal antibody, verify your role in the fungus interaction with pneumocytes, extracellular matrix and plasminogen. Also in order to characterize the EF-Tu protein the present study aimed to obtain isolated with low expression of the gene encoding EF-Tu and with this verifies the role of EF-...<br>Doutor
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Ferreira, Rafael Rodrigues. "Pesquisa sorológica de Aspergillus fumigatus e cultivo fúngico de amostras obtidas de cães com descarga nasal." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2008. http://hdl.handle.net/10183/14331.
Full textAbstract:
Aspergilose é a doença fúngica mais comum em cães com alterações clínicas nasais e Aspergillus fumigatus é a espécie mais encontrada em animais com envolvimento primário do trato respiratório superior. Por serem agentes cosmopolitas, diversas espécies de Aspergillus estão freqüentemente presentes na biota anemófila e, portanto, estão também comumente presentes no trato respiratório superior de cães sadios. Devido a isto, resultados positivos no exame de cultivo não são suficientes para firmar o diagnóstico de aspergilose nasal. Já o exame sorológico, serve de bom suporte ao clínico para o diagnóstico de aspergilose nasal canina, principalmente com o emprego da técnica de eletrosinerese, a qual apresenta alta sensibilidade e especificidade. Apesar da aspergilose nasal canina ser relatada com relativa freqüência em diversos países, a literatura veterinária brasileira não registra a ocorrência desta doença. Esta situação sugere que a mesma não está sendo colocada como casuística diferencial no diagnóstico das prováveis moléstias de cães portadores de descarga nasal em âmbito nacional. Os objetivos principais deste trabalho foram a pesquisa de anticorpos circulantes anti-Aspergillus fumigatus através do teste sorológico de eletrosinerese e o cultivo fúngico de amostras obtidas de 83 cães com descarga nasal, atendidos no Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, no período de agosto de 2006 a julho de 2007. O objetivo secundário foi verificar uma possível concordância entre os resultados obtidos por estas duas técnicas laboratoriais. Doze cães (14,4%) tiveram resultados positivos no teste sorológico de eletrosinerese. Não houve nenhuma associação significativa entre a variável sorologia (positiva e negativa) com as demais variáveis (raça, sexo, conformação craniana e faixa etária). Quatorze gêneros foram isolados no cultivo fúngico. Não houve concordância entre os exames sorológico e cultivo, posto que dos 12/83 animais que tiveram exame sorológico positivo, apenas 2/12 (16,6%) cães tiveram cultivo fúngico positivo para Aspergillus fumigatus. Cultivo fúngico realizado a partir de amostras colhidas por swab direto da descarga nasal deve ser analisado com cautela para se estabelecer o diagnóstico de aspergilose nasal canina. A partir dos resultados obtidos neste trabalho e dos relatos encontrados em vários outros países, pode-se concluir que a doença provavelmente não seja rara no Brasil, e que os clínicos veterinários deveriam incluir esta entidade nosológica como casuística potencial no diagnóstico diferencial das doenças do trato respiratório superior de cães, o que certamente possibilitará estudos comparativos (clínicos e epidemiológicos) de dados obtidos de diversas regiões do Brasil.<br>Aspergillosis is the most common fungal disease in dogs with nasal disorders and Aspergillus fumigatus is the most often specie found in animals with primary involvement of the upper respiratory tract. As cosmopolitans agents, diverse species of Aspergillus are frequently found in the anemophilous biota, therefore, it is also found in the upper respiratory tract of healthy dogs. Due this, fungal culture positive results are not sufficient to confirm nasal aspergillosis in dogs. Nevertheless, serological tests can serve as a good support to the clinicians for the diagnosis of canine nasal aspergillosis, specially with electrosyneresis technique, which presents high sensitivity and specificity. Despite canine nasal aspergillosis have been frequently described in different countries, in the Brazilian veterinary literature does not register any occurrence. This finding can suggest that nasal aspergillosis has not been included in the differential diagnosis of dogs with nasal discharge in this country. The main aims of this study were the search for the presence of anti-Aspergillus fumigatus circulating antibodies means electrosyneresis of technique and to obtain positive cultures of Aspergillus fumigatus from 83 dogs with nasal discharge, presented at the Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, from August, 2006 to July, 2007. Another purpose of this study was to observe whether a correlation could be established between the methods. Twelve dogs (14,4%) were identified as serological positive. No significant association was observed among the serological test (positive and negative) and dog’s features (breed, sex, head conformation and age). Fourteen fungi genus were isolated in cultures. There was no correlation between the serological test and the culture. Only 2 from a contingent of 12 dogs with positive serological test had simultaneous positives cultures to Aspergillus fumigatus. Cultures obtained from samples collected with swab from nasal discharge must be analyzed with caution to establish the diagnosis of canine nasal aspergillosis. Taken into account the herein presented results and looking into the results from reports elsewhere, we conclude that canine nasal aspergillosis probably is not rare in our environment, and veterinarians must include this entity in the differential diagnosis of dog´s upper respiratory tract disorders. The data generated by the present dissertation will undoubtedly contribute to further studies and for comparative trials about the frequency of the disease in dogs from other regions of Brazil.
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Caitano, Cinthia Elen Cardoso. "PATOGENICIDADE DE Lecanicillium fungicola EM Agaricus bisporus /." Jaboticabal, 2020. http://hdl.handle.net/11449/192648.
Full textAbstract:
Orientador: Diego Cunha Zied<br>Resumo: O fungo Lecanicillium fungicola é um importante patógeno no cultivo de Agaricus bisporus, apresentando diversos sintomas e perdas de produção. O objetivo do trabalho foi avaliar interações in vivo e in vitro dos fungos Lecanicillium fungicola e Agaricus bisporus. Os experimentos in vitro foram feitos utilizando discos de micélio do patógeno e composto colonizado pelo A. bisporus. O composto colonizado também foi utilizado para a frutificação de cogumelos tanto em tamanho menor em placas de petri como em maior quantidade. Foram aplicados quatro suspensões de esporos L. fungicola nos cogumelos em placas de petri, de acordo com o seu tratamento. Não ocorreu a paralisação do crescimento micelial in vitro no momento em que o patógeno e o hospedeiro se encontram. Após 36 horas a inoculação do patógeno foi possível a visualização de manchas no píleo e após 60 horas a visualização de hifas e esporos. A linhagem coloração creme apresentou maior massa e diâmetro do píleo e menor porcentagem de rompimento do véu. A linhagem de A. bisporus de coloração branca obteve maior produtividade do que a linhagem de coloração creme. O isolado LF 19/03 apresentou maior agressividade em ambas as linhagens de A. bisporus. Os diversos sintomas encontrados no decorrer da pesquisa possibilitaram a confecção de uma escala diagramática para auxiliar o produtor na comercialização dos cogumelos doentes.<br>Abstract: The fungus Lecanicillium fungicola is an important pathogen in the cultivation of Agaricus bisporus, presenting several symptoms and production losses. The objective of the work was to evaluate interactions in vivo and in vitro of the fungi Lecanicillium fungicola and Agaricus bisporus. The in vitro experiments were done using mycelium discs of the pathogen and compound colonized by A. bisporus. The colonized compost was also used for the fruiting of mushrooms both in smaller size in petri dishes and in greater quantity. Four suspensions of L. fungicola spores were applied to the boxes according to their treatment. Mycelial growth did not stop in vitro at the time the pathogen and host meet. After 36 hours the inoculation of the pathogen made it possible to see spots on the cap and after 60 hours, to view hyphae and spores. The cream-colored lineage showed greater mass and diameter of the cap and lesser percentage of rupture of the veil. The white colored A. bisporus strain obtained higher productivity than the cream colored strain. The isolate LF 19/03 showed greater aggressiveness in both strains of A. bisporus. The various symptoms found in the course of the research enabled the production of a diagrammatic scale to assist the producer in the sale of sick mushrooms.<br>Mestre
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Aldars, García Laila. "Predictive mycology as a tool for controlling and preventing the aflatoxin risk in postharvest." Doctoral thesis, Universitat de Lleida, 2017. http://hdl.handle.net/10803/418806.
Full textAbstract:
Les aflatoxines són potents carcinògens que representen una amenaça significativa per a la salut humana. La incidència d'aquestes micotoxines en els aliments és alta, de manera que el seu control i prevenció són necessaris en la indústria alimentària. El desenvolupament de models predictius apropiats que ens permetin predir el creixement fúngic i la producció de micotoxines és de gran utilitat com a eina per controlar, predir i prevenir el risc de micotoxines en aliments. És important que els models predictius siguin capaços d'explicar les condicions ambientals que es troben al llarg de la cadena alimentària. Entre aquestes condicions trobem: condicions subòptimes per al creixement i producció de micotoxines, distribució aleatòria d'espores en l'aliment, presència de diferents soques de la mateixa espècie o condicions ambientals canviants.
El present treball proporciona una base per al desenvolupament de models científicament provats, que poden ser aplicats per la indústria alimentària per millorar el control en postcollita.<br>Las aflatoxinas son potentes carcinógenos que representan una amenaza significativa para la salud humana. La incidencia de estas micotoxinas en los alimentos es alta, por lo que su control y prevención es obligatoria en la industria alimentaria. El desarrollo de modelos predictivos apropiados que nos permitan predecir el crecimiento fúngico y la producción de micotoxinas es de gran utilidad como herramienta para controlar, predecir y prevenir el riesgo de micotoxinas en alimentos. Es importante que los modelos predictivos sean capaces de explicar las condiciones ambientales que se encuentran a lo largo de la cadena alimentaria. Entre tales condiciones encontramos: condiciones subóptimas para el crecimiento y producción de micotoxinas, distribución aleatoria de esporas fúngicas en el alimento, presencia de diferentes cepas de la misma especie o condiciones ambientales dinámicas. El presente trabajo proporciona una base para el desarrollo de modelos científicamente probados, que pueden ser aplicados por la industria alimentaria para mejorar el control de micotoxinas en postcosecha.<br>Aflatoxins are potent carcinogens that pose a significant threat to human health. Incidence of these mycotoxins in foodstuffs is high, thus their control and prevention is mandatory in the food industry. The development of appropriate predictive models that allow us to predict fungal growth and mycotoxin production will be a valuable tool to monitor, predict and prevent the mycotoxin risk. To develop accurate predictive models it is important to account for the real conditions that we will encounter through the food chain. Such conditions include: suboptimal conditions for growth and mycotoxin production, even distribution of spores across the food matrix, presence of different strains of the same species or dynamic environmental conditions.
Given the scope and complexity of the problem the present work provides the basis for scientifically proven models, which can be applied in the food industry in order to improve postharvest control of commodities.
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Scorzoni, Liliana [UNESP]. "Estudo da atividade antifúngica e perfil de expressão de proteínas em leveduras do gênero Candida após tratamento com extratos de Kielmeyera rubriflora." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2008. http://hdl.handle.net/11449/94782.
Full textAbstract:
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scorzoni_l_me_arafcf.pdf: 1618197 bytes, checksum: eb9318b4559acb7fd55cac086d26db34 (MD5)<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)<br>Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)<br>Universidade Estadual Paulista (UNESP)<br>As novas descobertas tecnológicas e o avanço da medicina têm proporcionado a sobrevida de muitos pacientes. No entanto, estes passam a ser mais suscetíveis a infecções, principalmente por fungos. O aumento dessas infecções tem gerado problemas no tocante ao diagnóstico, bem como na terapêutica empregada. A disponibilidade de antifúngicos na prática médica é relativamente pequena, algumas vezes ineficiente e com toxicidade elevada. Recentemente, houve um agravante do quadro devido ao surgimento de resistência a determinadas drogas, o que reforçou a demanda por novas alternativas terapêuticas. Nosso país é privilegiado pela grande biodiversidade. A busca por novos alvos, o entendimento dos mecanismos de virulência, bem como os de resistência microbiana são fundamentais diante do quadro atual. O objetivo deste estudo foi pesquisar extratos e substâncias de plantas com atividade antifúngica para Candida albicans e C. krusei, selecionar os de maior atividade e verificar o perfil de proteínas de ambas as leveduras, antes e após o contato com a substância de origem vegetal, realizando sua caracterização. Os extratos acetato de etila (AcOEt) e etanólico (EtOH) de Kielmeyera rubriflora foram os que apresentaram maior atividade antifúngica. Os componentes protéicos de C. albicans sem tratamento e tratados com 1400 mg/mL de fluconazol e 1000 mg/mL dos extratos AcOEt e EtOH foram analisados por SDS-PAGE e eletroforese bidimensional. O tratamento com fluconazol revelou modificações na expressão de nove proteínas, que variaram seus pIs de 5,64 a 6,67 e massa molecular de 59,1 a 17,4 kDa, enquanto que os extratos de plantas influenciaram na expressão de 10 e 11 proteínas, respectivamente. O extrato AcOEt influenciou na expressão de proteínas na faixa de pIs de 5,7 a 5,2, massa molecular de 90,5 a 18,8 kDa, enquanto que o...<br>The new discoveries and technological advances in medicine have provided the survival of many patients. However, they become more susceptible to infections, mainly by fungi. The increase in these infections has created problems regarding the diagnosis and the therapy employed. The availability of antifungals in medical practice is relatively small, inefficient and sometimes with high toxicity. Recently, there was an aggravating problem due to the emergence of resistance to certain drugs, which increased the demand for new alternative therapies. Our country is privileged in biodiversity. The search for new targets, the understanding of the mechanisms of virulence, as well as, the microbial resistance is essential before the current framework. This study aimed to find extracts of plants and substances with antifungal activity to Candida albicans and C. krusei, select the extracts with the best activity and verify the profile of proteins of both yeasts, before and after contact with the ethyl acetate (AcOEt) and ethanol (EtOH) extracts from Kielmeyera rubriflora, performing its characterization. The AcOEt and EtOH extracts from K. rubriflora had the greater antifungal activity. The C. albicans and C. krusei cells proteins untreated and treated with 1400 mg / mL of fluconazole and 1000 mg / mL of AcOEt and EtOH extracts were analyzed by SDS-PAGE and two-dimensional electrophoresis. Treatment with fluconazole revealed changes in the expression of nine proteins, which varied its pIs of 6.67 to 5.64 and molecular weight of 59.1 to 17.4 kDa, while the plants extracts influenced the expression of 10 and 11 proteins, respectively. The AcOEt extract influenced the expression of proteins in the range from pIs of 5.7 to 5.2, molecular weight of 90.5 to 18.8 kDa, while the EtOH in pIs of 5.8 to 7.4, and mass molecular of 89.2 to 16.3 kDa. The plants extracts ...(Complete abstract click electronic access below)
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Silva, Julhiany de Fátima da [UNESP]. "Estudo de diferentes isolados de Paracoccidioides brasiliensis quanto ao padrão de adesão e expressão de ligantes da matriz extracelular." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2008. http://hdl.handle.net/11449/94789.
Full textAbstract:
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silva_jf_me_arafcf.pdf: 3465468 bytes, checksum: eab4e4e0a1aeaa20d426752498e4bdf0 (MD5)<br>Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)<br>Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)<br>Universidade Estadual Paulista (UNESP)<br>Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico causador da paracoccidioidomicose, doença de comprometimento orgânico múltiplo e de evolução prolongada. A virulência de P. brasiliensis pode ser atenuada ou perdida após subseqüentes ciclos de subcultivos durante longos períodos e restabelecida após inoculações em animais ou pela passagem em cultura de células. Um aspecto importante na interação entre P.brasiliensis e seu hospedeiro é a habilidade do fungo em aderir aos componentes da matriz extracelular. O entendimento e identificação destas moléculas revestem-se de importância na descoberta de tratamentos eficientes para as micoses sistêmicas. Assim, neste trabalho, foram estudados 13 diferentes isolados de P. brasiliensis quanto ao padrão de infecção à cultura de células epiteliais pulmonares (A549), genotipagem com os iniciadores OPJ4, M13 e GACA4 empregando as técnicas de RAPD e PCR fingerprinting, bem como a verificação de proteínas expressas diferencialmente, e sua capacidade de ligação a componentes da matriz extracelular (MEC). Os diferentes isolados de P. brasiliensis apresentaram maior capacidade de infecção após reisolamento de células epiteliais. As amostras mais aderentes foram Pb18, Pb2508 e Pb2367 e as menos aderentes foram Pb2669, Pb2508 e Pb2367. Quanto aos genótipos, perfis diferenciais foram observados e correlação com padrão de infecção e distribuição geográfica foi observada para alguns isolados com dois dos iniciadores (OPJ4 e M13). A análise protéica dos extratos “cell free” de P. brasiliensis, por eletroforese bidimensional também forneceu perfis diferenciais entre as amostras subcultivadas e reisoladas e 62 ligantes de colágeno tipo I, 18 de laminina e 23 de fibronectina de um total de 420 proteínas expressas foram observados...