Dissertations / Theses: 'MicroARNs (miRs)'

1

Le, Corvec Tom. "Mécanismes moléculaires de l’hétérogénéité des plaques d’athérosclérose et des calcifications dans les artères périphériques : régulation des miRs dans les calcifications vasculaires des artères périphériques." Electronic Thesis or Diss., Nantes Université, 2024. http://www.theses.fr/2024NANU1041.

Full text

Abstract:

Le premier objectif de ce travail était d'identifier les miRs associés aux calcifications vasculaires (CV), de caractériser leur implication dans la minéralisation des CMLVs, et de déterminer leurs gènes cibles. Le second objectif était d’étudier les mécanismes de l’hétérogénéité artérielle en comparant le phénotype des CMLVs carotides et fémorales, et leur réponse aux stimuli pro-athérosclérotiques. Premièrement, nous avons utilisé des artères athéromateuses humaines calcifiées et non calcifiées (Biocoll.ECLAGEN) pour identifier les miRs associés aux CV en combinant une analyse miRNomique (puces microfluidiques) et transcriptomique pour sélectionner des miRs candidats et leurs gènes cibles prédits. Nous avons ensuite validé le rôle fonctionnel des miRs candidats dans la minéralisation cellulaire des CMLVs humaines aortiques. Deuxièmement, nous avons extrait des CMLVs d’artères carotides et fémorales saines (Biocoll.ECLA-H) pour étudier les différences phénotypiques (marqueurs contractiles/inflammatoires, migration, contractilité, captation des lipides) à l’état basal et après stimulation par des cytokines pro-inflammatoires (IL1β, IL6) ou pro-fibrosantes (TGFβ et PDGF). Notre étude a d’abord permis l’identification de 12 miRs associés aux CV. Parmi eux, nous avons montré que l'expression des miR136, miR155 et miR183 était régulée pendant la minéralisation des CMLVs, que leur surexpression induisait la minéralisation des CMLVs et des modifications phénotypiques transcriptionnelles. L'analyse croisée a conduit à l'identification des voies CD73 et Smad3 comme gènes cibles prédits responsables de la fonction pro-minéralisante du miR155. Dans un deuxième temps, l’étude phénotypique comparative des CMLVs carotides et fémorales nous a permis de montrer certaines différences transcriptionnelles, l’expression des marqueurs d’activation (ICAM-1, VCAM-1) était supérieure dans le territoire carotidien, l’expression des marqueurs contractiles (ACTA2, SM22α, SMMHC) était supérieure dans le territoire fémoral. Les expériences préliminaires d’analyse de contractilité et de réponse au stress lipidique suggéraient une tendance à une contractilité et une captation de lipides plus importante dans le territoire fémoral. Nous n’avons pas montré de différence lors de l’analyse des switch phénotypiques et de la migration cellulaire. Ces résultats montrent le bénéfice potentiel de l'inhibition du miR155 pour limiter le développement des calcifications vasculaires dans les lésions athéromateuses des artères périphériques
The first objective of this work was to identify the miRs associated with vascular calcification (VC), to characterise their involvement in the mineralisation of VSMCs, and to determine their target genes. The second objective was to study the mechanisms of arterial heterogeneity by comparing the phenotype of carotid and femoral VSMCs and their response to pro-atherosclerotic stimuli. Firstly, we used calcified and non-calcified human atheromatous arteries (Biocoll.ECLAGEN) to identify VC-associated miRs by combining miRNomic (microfluidic arrays) and transcriptomic analysis to select candidate miRs and their predicted target genes. We then validated the functional role of candidate miRs in cell mineralisation of human aortic VSMCs. Secondly, we extracted VSMCs from healthy carotid and femoral arteries (Biocoll.ECLA-H) to study phenotypic differences (contractile/inflammatory markers, migration, contractility, lipid uptake) in the basal state and after stimulation with pro-inflammatory (IL1β, IL6) or pro-fibrotic cytokines (TGFβ and PDGF). In our study, we first identified 12 miRs associated with VC. Among them, we showed that the expression of miR136, miR155 and miR183 was regulated during VSMC mineralisation and that their overexpression induced VSMC mineralisation and phenotypic transcriptional changes. Cross-analysis led to the identification of the CD73 and Smad3 pathways as predicted target genes responsible for the pro-mineralising function of miR155. Secondly, a comparative phenotypic study of carotid and femoral VSMCs allowed us to demonstrate several transcriptional differences, with higher expression of activation markers (ICAM-1, VCAM-1) in the carotid territory and higher expression of contractile markers (ACTA2, SM22α, SMMHC) in the femoral territory. Preliminary experiments analysing contractility and response to lipid stress suggested a trend towards greater contractility and lipid uptake in the femoral territory. No difference was observed when phenotypic switches and cell migration were analysed. These results demonstrate the potential benefit of miR155 inhibition in limiting the development of VC in atheromatous lesions of peripheral arteries

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

2

Masmoudi, Asma. "Identification des micro-ARNS (miARNS) impliqués dans la progression du cancer de la vessie et étude fonctionnelle du rôle oncogénique ou suppresseur de tumeurs de ces miARNS." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA11T032.

Full text

Abstract:

Les tumeurs de vessie suivent deux voies de progression tumorale. La voie des tumeurs papillaires qui progressent rarement vers des tumeurs invasives mais qui récidivent très fréquemment et la voie des carcinomes in situ (CIS) qui progressent pour envahir le chorion puis le muscle. Les tumeurs infiltrant le muscle sont de mauvais pronostic et les traitements par chimiothérapie restent d’efficacité limitée. Il est alors important d’en comprendre les bases moléculaires. Les microRNAs sont d’importants régulateurs de l’expression post-transcriptionnelle des gènes. Des perturbations de leur expression et/ou de leur activité contribuent au développement tumoral en dérégulant l’expression de gènes clés dans les cancers. Nos travaux ont porté sur l’étude de l’expression et des fonctions des microRNAs dans la carcinogenèse urothéliale. Dans la première partie, nous avons choisi d’étudier, par une approche de gènes candidats, miR-155, un oncomiR dont l’expression dérégulée a été rapportée dans plusieurs cancers mais pas encore dans le cancer de la vessie. J’ai identifié une surexpression significative de ce miARN dans un sous-groupe de cancers invasifs de vessie. Ensuite, j’ai montré par des analyses fonctionnelles, le rôle de miR-155 dans l’invasion et la migration tumorale mais pas dans la prolifération cellulaire. Dans la deuxième partie, nous avons utilisé une approche plus globale. J’ai d'abord effectué une revue extensive de la littérature pour rechercher les miR dont l'expression avait été montrée comme dérégulée dans les cancers de vessie et/ou les miR impliqués fonctionnellement dans ce cancer. J’ai ensuite réalisé une analyse multiparamétrique en intégrant les données d'expression de ces miR, les données anatomopathologiques et moléculaires (stade et grade, statut mutationel de TP53 et FGFR3, phénotype épigénétique MRES et signature CIS) et les données du transcriptome (puces Affymetrix U133 Plus 2.0), des altérations génomiques (puces Illumina 370.000 sondes) et de méthylation (puces Illumina 27.000 sondes). Ce travail m’a permis, d'identifier des miR associés à l'une des deux voies de progression identifiées dans les cancers de vessie et de proposer des cibles candidates de ces miR. La recherche des altérations épigénétiques pouvant affecter l’expression de ces miR a permis d’identifier une association significative entre l’expression d’un miARN (miR-17-5p) et la méthylation d’un promoteur. En revanche les altérations génétiques n’ont été associées à aucune expression de miR. Ce travail propose une liste de très bons candidats miARNs pour lesquels des études fonctionnelles pourront être envisagées au-delà de mon travail de thèse
Bladder tumors are characterized by two progression pathways. The first pathway leads to the developpement of papillary tumors, which are at high risk of recurrence but that rarely progress to invasive tumors. Another pathway involves carcinoma in situ (CIS), which often progresses by first invading the lamina propria and then the muscle. Tumors infiltrating the muscle have a poor prognosis and chemotherapy regimens are of limited benefits. It is yet important to understand the molecular basis underlying these events. The microRNAs are important regulators of post-transcriptional gene expression. Alteration in their expression and /or activity is believed to contribute to tumor development by deregulating the expression of cancer-related genes. Our work has been focused on studying the expression and function of microRNAs in urothelial carcinogenesis. In the first part, we employed a candidate gene approach to study miR-155, a oncomiR whose dysregulated expression has been reported in many cancers, but not in bladder cancer. I identified a significant overexpression of this miRNA in a subgroup of invasive bladder cancers. Next, I demonstrated a role for miR-155 in tumor invasion and migration, without any apparent effect on cell proliferation. In the second part, we used a more comprehensive approach in which I first conducted an extensive review of the literature to search for miR whose expression was already found to be deregulated and/or miR functionally involved in bladder cancer. I then performed a multiparametric analysis by integrating expression data of miR, pathological and molecular data (stage and grade, mutational status of FGFR3 and TP53, MRES epigenetic phenotype and CIS signature) data of the transcriptome (Affymetrix U133 Plus 2.0), genomic alterations (370,000 chips Illumina probes) and methylation (Illumina chips 27,000 probes). This work allowed us to identify miRs associated with one or the other pathway linked to progression of bladder cancer and also, it revealed candidate targets for these miRs. The search for epigenetic alterations capable to affect the expression of those miRs showed significant association between expression of a particular miRNA (miR-17-5p) and the methylation of its promoter. Genetic alterations however, have failed to associate with expression of miR. Finally, this work suggests a list of good candidates miRNAs for which future functional studies should help to get insight into the role of these miRNAs

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

3

Lannes, Jérôme. "Les microARN et la fonction gonadotrope hypophysaire." Thesis, Sorbonne Paris Cité, 2016. http://www.theses.fr/2016USPCC236/document.

Full text

Abstract:

Mon travail de thèse s’est focalisé sur l’étude du rôle des miARN comme modulateurs de l’expression des gonadotropines en réponse à un traitement par la GnRH. Dans un premier temps, nous avons étudié les miARN-132 et -212 fortement induits en réponse à la GnRH dans les cellules gonadotropes. Nous démontrons que l’induction de la production de FSH par la GnRH est dépendante de l’activation des miR-132/212 dans les cellules hypophysaires de rat et dans la lignée cellulaire gonadotrope LβT2. Nous montrons à l’aide de cette lignée que l’élévation de miR-132/212 inhibe l’expression de la lysine déacétylase SIRT1, favorisant ainsi l’acétylation inhibitrice d’un répresseur transcriptionnel de la FSH, conduisant donc à l’activation de l’expression de la FSH (Lannes et al, 2015). J’ai ensuite étudié l’action d’un miARN fortement inhibé en réponse à la GnRH, miR-125b. Nous démontrons que miR-125b bloque la signalisation Gαq/11 en réprimant plusieurs effecteurs de cette voie, sans réguler la voie Gαs. Lors de l'exposition à la GnRH, miR-125b est inactivé par transfert d’un groupement méthyle par l’ARN méthyltransférase NSun2, activée par phosphorylation Gαs/PKA-dépendante. Nous observons que l’induction demiR-132 et de la phosphatase PP1α en réponse à la GnRH dépend de la voie Gαq/11 et est induite par l’inactivation de miR-125b. Nous démontrons que NSun2 est une cible de miR-132 et que la phosphorylation de NSun2 est supprimée par la phosphatase PP1α. Des analyses cinétiques nous ont permis de décrypter le mécanisme de désensibilisation à la stimulation GnRH. Lors de la phase d’induction par la GnRH, l’activation de la voie Gαs/PKA inactive miR-125b permettant une levée d’inhibition de la voie Gαq/11 et par là, l’induction des gènes des gonadotropines, de miR-132 et PP1α. L’activation de ces derniers contribue à l’inactivation de NSun2 et à un retour de miR-125b à son état d'équilibre permettant de nouveau l’inhibition de la voie Gαq/11 et donc de l’expression des gonadotropines (Lannes et al, 2016). Notre étude montre pour la première fois le rôle crucial d’une boucle de régulation entre deux miARN dans le mécanisme de la désensibilisation de la réponse à la GnRH. Le caractère ubiquitaire des acteurs de cette boucle de régulation laisse penser qu’elle pourrait jouer un rôle plus général. Les travaux complémentaires effectués montrent que la GnRH induit la sécrétion de plusieurs miARN. In vitro, nous avons démontré que la GnRH provoque une libération calcium-dépendante de miR-125b et de miR-132 dans le milieu extracellulaire par les cellules gonadotropes. In vivo, nous mettons en évidence chez la rate et la femme, une augmentation sérique des miARN-125b et -132 au moment de la décharge ovulante de LH induite par la GnRH. Ces résultats suggèrent que la cellule gonadotrope hypophysaire est capable d’émettre un message original, sous la forme de miARN, dans la circulation sanguine. Mes travaux de thèse éclairent le rôle clé joué par les miARN dans la réponse de la cellule gonadotrope à la stimulation prolongée à la GnRH. Ils mettent en évidence l’effet bloquant d’un seul miARN, miR-125b sur la signalisation liée à la protéine Gαq/11, une voie activée par nombre de récepteurs. Ils révèlent l’existence d’une boucle de régulation responsable de la désensibilisation à la GnRH mais qui pourrait être plus largement répandue. Enfin, la sécrétion des miARN dans la circulation sanguine induite par la GnRH que nous mettons en évidence pour la première fois ouvre des perspectives particulièrement intéressantes sur la nature du signal généré par les cellules gonadotropes et permet d’envisager l’existence de nouveaux tissus cibles
GnRH is a hypothalamic neurohormone that stimulates synthesis and release of the pituitary gonadotropins, LH and FSH. Mammalian GnRH receptor lacks a C-terminal tail and is thus not submitted to homologous desensitization. Desensitization of gonadotrope cells to sustained exposure to GnRH relies on post-receptor mechanisms operating at different levels of the Gαq/11-mediated signalling pathway. GnRH was shown to modulate the expression of microRNAs (miRNAs), a new class of signalling regulators composed of small single-stranded RNAs that regulate gene expression at a post-transcriptional level. The purpose of my PhD thesis was to investigate the role of miRNAs in contributing to the regulation of gonadotrope cells by GnRH and notably to its desensitization effect. I first demonstrated that a GnRH-induced rise in miR-132 and miR-212 in rat primary pituitary culture cells and in the LβT2 murine gonadotrope cell line was necessary for efficient stimulation of FSH production. We then showed that the miR-132/212-mediated action of GnRH involved a posttranscriptional decrease of SIRT1, a lysine deacetylase. The lower level of SIRT1 allowed an increase in the acetylated form of FOXO1, a transcriptional repressor of Fshb, leading to its exit from the nucleus and to an increase in FSH expression (Lannes et al, 2015). Then, I focussed on the involvement of miR-125b, a miRNA that was strongly inhibited in response to GnRH. We showed that miR-125b blocked the Gαq/11 signalling pathway, through the repression of several effectors of this pathway, without affecting the Gαs signalling pathway. Upon exposure to GnRH, miR-125b was inactivated by methylation on adenosine by the NSun2 RNA methyltransferase. This later enzyme was activated by a Gαs/PKA-dependent phosphorylation. We observed that the induction of miR-132 and PP1α phosphatase in response to GnRH depends on a Gαq/11 activation allowed by the inactivation of miR-125b. We demonstrated that NSun2 is a target of miR-132 and that phosphorylation of NSun2 is suppressed by PP1α. Kinetic analyses enabled us to decipher the desensitization mechanism to GnRH stimulation. During the induction phase, the Gαs/PKA activation led to lower miR-125b levels, allowing Gαq/11 signalling and hence, transcriptional activation of gonadotropins genes. Co-activation of miR-132 and PP1α contributed to the inactivation of NSun2 and a return of miR-125b back to its equilibrium state leading to Gαq/11 signalling inhibition and therefore, to the arrest of gonadotropins expression (Lannes et al, 2016). Our study shows for the first time the crucial role of a miRNAs regulatory loop in the GnRH-induced mechanism of desensitization. The ubiquitous nature of the actors of this regulatory loop suggests that it may play a more general role. Additional works carried out showed that GnRH induces the secretion of several miRNAs. In vitro, we demonstrated that the GnRH causes a calcium-dependent release of miR-125b and miR-132 in the extracellular medium by the gonadotrope cells. In vivo, we highlighted a miRNA-125b and -132 increase in serum at the time of the ovulating LH surge induced by GnRH in rats and women. These results suggest that the pituitary gonadotropic cell is capable of transmitting an original message in the form of miRNA, into the bloodstream. My PhD work unravels the key role played by miRNAs in the gonadotrope cells response to GnRH-sustained stimulation. They highlight the blocking effect of a single miRNA, miR-125b on the Gαq/11 signalling, a pathway activated by many other membrane receptors. They indicate the existence of a regulation loop responsible for the desensitization to GnRH but which could be more widespread. Finally, the secretion of miRNAs in blood flow induced by the GnRH that we show for the first time opens up particularly interesting perspectives on the nature of the signal generated by the gonadotrope cells and allows to consider the existence of new target tissues

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

4

Quero, Laurent Jean. "Radiosensibilité de lignées cellulaires prostatiques : effet du bicalutamide (Casodex®), rôles des microARNs." Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA11T070/document.

Full text

Abstract:

Notre étude a porté, d'une part sur l'effet du bicalutamide, un inhibiteur du récepteur aux androgènes, sur la réponse de trois lignées de cancer de prostate en association avec les rayonnements ionisants, d'autre part sur la recherche d'une corrélation entre l'expression des microARN miR-210 et miR-373 sur la tolérance à l'hypoxie et la réponse au rayonnement.Nous montrons que le bicalutamide induit un effet cytostatique et cytotoxique dans la lignée LNCaP, qui exprime le récepteur aux androgènes. Les lignées DU145 et PC3, qui n’expriment pas ou peu le récepteur, sont sensiblement plus résistantes mais sont cependant affectées par les concentrations élevées de bicalutamide. Cette sensibilité résiduelle suggère l'existence d'un mécanisme secondaire, indépendant de la voie de signalisation du récepteur aux androgènes. L'inhibition de la prolifération produite par le bicalutamide s'accompagne d'un blocage du cycle cellulaire en phase G1 avec une augmentation de l’expression de la protéine p27 et une diminution de l’expression de la protéine HER2. L'association concomitante au bicalutamide se traduit par un effet radioprotecteur dans la lignée LNCaP. Cette observation nous conduit à déconseiller l’association concomitante du bicalutamide avec la radiothérapie, notamment en cas d’irradiation hypofractionnée.Facteur bien connu de radiorésistance dans les tumeurs solides, l'hypoxie est associée à un mauvais pronostic dans les cancers de la prostate. Nos données montrent qu'en sus de l'induction de marqueurs classiques comme HIF-1α, CA9 et VEGF, l'hypoxie promeut l’expression du microARN miR-210, (mais non de miR-373) indépendamment de l’expression du récepteur aux androgènes. Les données suggèrent que miR-210, dont l'expression apparaît corrélée à la résistance à l'hypoxie, pourrait constituer un bon biomarqueur pronostique dans le cancer de la prostate. En revanche, l’inhibition de l’expression de miR-210 n'a aucun effet sur la radiosensibilité des cellules en condition d’hypoxie
The first aim of our study was to evaluate the effect of the association between bicalutamide, an androgen receptor inhibitor, and ionizing radiation in three prostate cancer cell lines. The second aim was to examine a possible a correlation between the expression of miR-210 or miR-373, the tolerance to hypoxia tolerance and the responses to radiation.We found that bicalutamide produced cytostatic and cytotoxic effects in the androgen receptor- positive LNCaP cell line. The androgen receptor-negative DU145 and PC3 cell lines were more resistant to bicalutamide. However, these cell lines were affected by high bicalutamide concentration with the same endpoints as for LNCaP cells. The inhibition of proliferation by bicalutamide was associated with G1 cell cycle phase arrest, increased expression of p27KIP1 protein, and decreased expression of HER2 protein. Last but not least, bicalutamide elicited a marked radioprotective effect in LNCaP cells when associated with concomitant irradiation. This result suggests that bicalutamide and radiotherapy should not be delivered in close temporal proximity, especially in case of hypofractionated radiotherapy protocols.Hypoxia is a well known radioresistance factor in tumors and is associated with a bad prognosis in prostate cancer. In this study, we found that hypoxia promotes the expression of HIF-1α, CA9, VEGF and miR-210 but not miR-373 in prostate cancer cell lines irrespective of their androgen receptor status.Our findings suggest that miR-210 expression is correlated with resistance to hypoxia and could be used as a prognostic marker in prostate cancer. Conversely, miR-210 inhibition did not impact the radiation susceptibility of PC3 prostate cancer cell line under hypoxia

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

5

Giroud, Maude. "Implication des microARNs dans la conversion des adipocytes blancs en adipocytes thermogéniques." Thesis, Nice, 2015. http://www.theses.fr/2015NICE4082/document.

Full text

Abstract:

La découverte récente d'adipocytes bruns fonctionnels chez les humains adultes a conduit à envisager leur utilisation afin d’augmenter la dépense énergétique dans de potentiels traitements contre l'obésité et les maladies associées. Par ailleurs, des ilots d’adipocytes bruns, appelés adipocytes "brite" (brown in white), émergent dans le tissu adipeux blanc après une exposition au froid ou une stimulation des récepteurs β3-adrénergiques. En utilisant les cellules hMADS, nous avons identifié plusieurs miARNs régulés pendant le « britening ». miR-125b et let-7i ont des niveaux d’expression plus bas dans les adipocytes « brites ». Des analyses fonctionnelles utilisant un « mimic » de miR-125b ou un inhibiteur ont révélé que miR-125b agit comme un frein sur le « brunissage » des cellules hMADS en altérant leur respiration ainsi que leur contenu mitochondrial. In vivo, nous avons montré que miR-125b et let-7i sont moins exprimés dans le tissu adipeux brun par rapport au tissu adipeux blanc. La stimulation des récepteurs β3-adrénergiques ou l'exposition au froid induit une diminution d’expression des miARNs dans les deux tissus et est associée à l'activation du tissu adipeux brun et au recrutement des adipocytes « brites ». Nous avons constaté que l’injection de miR-125b ou let-7i dans le tissu adipeux blanc sous-cutané inhibait l’expression de gènes du « brunissage » induite par la stimulation de la voie β3-adrénergique. En conclusion, nos observations ont montré que miR-125b et let-7i jouaient un rôle important dans la modulation des adipocytes « brites » et des adipocytes « bruns » en ciblant l’expression de gènes mitochondriaux et en diminuant la biogenèse mitochondriale
The recent discovery of functional brown adipocytes in adult humans has led to the consideration of their use to increase energy expenditure in the treatment of obesity and associated metabolic disorders. Furthermore, in rodents and humans, islands of thermogenic adipocytes, termed “brite” (brown in white) adipocytes, emerge within white adipose tissue after cold exposure or β3-adrenergic receptor stimulation. Using hMADS cells, we identified several miRNAs regulated during “britening” including miR-125b and let-7i which showed lower levels in brite adipocytes. Functional analysis using miR-125b mimic or miR-125b inhibitor transfection revealed that miR-125b-5p acts as a brake of the browning of hMADS cells by impairing respiration rate as well as their mitochondrial content. miR-125b and let-7i levels were lower in brown compared to white adipose tissue. In vivo, we showed that both miRNAs levels were down regulated in mice sub-cutaneous white and brown adipose tissues upon β3-adrenergic receptors stimulation or cold exposure, which is associated with BAT activation and brite adipocyte recruitment. We found that injection of both miRNA mimics in subcutaneous white adipose tissue inhibited β3-adrenergic-induced brown adipocyte markers expression. Altogether, our observations showed that miR-125b and let-7i played an important role in the modulation of brite and brown adipocytes function targeting oxygen consumption and mitochondrial gene expression

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

6

Bouhallier, Frantz. "Rôle potentiel du microARN miR-34c au cours de la spermatogenèse." Thesis, Lyon 1, 2009. http://www.theses.fr/2009LYO10219.

Full text

Abstract:

La spermatogenèse est un processus cyclique de différenciation aboutissant à la production de spermatozoïdes haploïdes, à partir de spermatogonies diploïdes. Ce processus est soumis à de nombreuses régulations, notamment au niveau post-transcriptionnel. Les microARN (miARN) sont de petits ARN non codant de 20 à 25 nucléotides, impliqués dans le contrôle de multiples processus biologiques, telles que la prolifération, l’apoptose et la différenciation. Afin d’étudier si les miARN pouvaient jouer un rôle dans la spermatogenèse, nous avons dans un premier temps, caractérisé les miARN exprimés lors de ce processus. Ainsi, nous avons montré que miR-34c avait une expression préférentielle dans la lignée germinale. Par ailleurs, l’expression de miR-34c n’est pas contrôlée par P53 dans les cellules germinales au contraire des cellules somatiques. Nous avons ensuite constaté que la surexpression de miR-34c dans les cellules HeLa provoquait une réorientation du transcriptome de ces cellules vers un profil germinal, ainsi que l’apparition de certains gènes préférentiellement exprimés dans le testicule. Puis, nous avons identifié les cibles de miR-34c pertinentes dans la différenciation germinale. TGIF2 et NOTCH2 constituent des cibles directes de ce miARN, impliquées dans des voies de régulation de la spermatogenèse (respectivement la voie du TGFβ et la voie Notch). Ces résultats établissent une connexion inédite entre un miARN, miR-34c, et la spermatogenèse. De plus, des cellules Souches Embryonnaires déjà engagées vers la lignée germinale (cellules ES VASA+) voient leur phénotype accentué par la surexpression de miR-34c
Spermatogenesis is a cyclic process in which diploid spermatogonia differentiate into haploid spermatozoa. This process is highly regulated, notably at the post-transcriptional level. MicroRNAs (miRNAs), single stranded non coding RNA molecules of about 20-25 nucleotides, are implicated in the regulation of many important biological pathways such as proliferation, apoptosis and differentiation. We wondered whether miRNAs could play a role during spermatogenesis. First, miRNA expression repertory was tested in germ cells and we present data showing that miR-34c was highly expressed only in these cells. Moreover, in male gonads, miR-34c expression is largely P53-independent, in contrast to somatic cells. The exploration of the expression profile of HeLa cells over-expressing miR-34c showed a shift towards testis lineage and the presence of preferentially expressed in testis genes. Furthermore, we identified miR-34c direct target genes (TGIF2 and NOTCH2) that are involved in germ lineage differentiation control (TGFβ and Notch pathway respectively). These results established a link between a miRNA miR-34c and spermatogenesis. Moreover, in ES cells over-expressing DDX4 gene (VASA-ES cells), already primed and engaged in the germ cell lineage, ectopic expression of miR-34c has a more drastic effect. We could detect an up-regulation of germ specific genes. These data suggest that miR-34c could play a role by enhancing the germinal phenotype of cells already committed in this lineage

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

7

Espadinha, Anne-Sophie. "Identification de microARN impliqués dans la leucémogenèse." Thesis, Bordeaux, 2016. http://www.theses.fr/2016BORD0437/document.

Full text

Abstract:

La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une hémopathie maligne causée par l‘apparition du chromosome Philadelphie dans la cellule souche hématopoïétique (CSH), conduisant à l‘expression de la protéine de fusion BCR-ABL1. L‘activité tyrosine kinase dérégulée de cette oncoprotéine provoque l‘activation de plusieurs voies de signalisation critiques dans la leucémogenèse. Si les inhibiteurs de tyrosine kinase (ITK) ciblant BCR-ABL1 représentent des traitements dans l'ensemble très efficaces, plusieurs études montrent que les cellules leucémiques les plus immatures de la moelle osseuse y sont insensibles. Cette thèse propose de compléter les connaissances relatives aux effets de BCR-ABL1 dans la cellule, et plus généralement aux propriétés des CSH de LMC. Notre intérêt s‘est focalisé sur le rôle potentiel des microARN. Dans un premier travail, nous nous sommes intéressés à l‘effet de l‘activité BCR-ABL1 sur le protéome et sur l‘expression des microARN dans la lignée cellulaire K562. Les résultats montrent que BCR-ABL1 régule l'expression d'un microARN fréquemment surexprimé dans les cancers, miR-21. Cet effet dépend du facteur de transcription STAT5, cible bien connue de l'activité kinase de BCR-ABL1. Dans une seconde partie, nous avons montré que dans la moelle osseuse des patients LMC, la fraction cellulaire enrichie en cellules souches (les cellules CD34+CD38low) exprime quatre microARN particuliers: mir-10a, mir-150, miR-155 et miR-146a. Deux de ces microARN (miR-150 et miR-155) sont trouvés spécifiquement dans les cellules des patients, et pas dans celles des individus sains
In chronic myeloid leukemia (CML), the activity of the constitutively active tyrosine kinase BCR-ABL1 drives the activation of the PI3K/AKT, JAK/STAT, and RAS/RAF/MEK/ERK pathways. Among other consequences, activated or inhibited transcription factors induce important modifications of the CML cells gene expression pattern that could impact cell cycle control, apoptosis and genetic instability, leading to the expansion of the oncogene-transformed cells and to the acquisition of potentially harmful de novo mutations. However, indirect BCR-ABL1-dependant regulations might also occur, for instance through the action of microRNAs (miRNAs). Among the ~2000 miRNAs reported in humans, numerous species are up- or down-regulated in various cancer models. In the context of CML however, there is no clear consensus regarding the role of specific miRNAs, despite several studies. The first aim of this thesis was to study the effects of a clinically relevant concentration of imatinib, a tyrosine-kinase inhibitor (TKI) that blocks BCR-ABL1, on the CML cell line K562: both the microRNA expression profile and the cells proteome were analyzed. Using microarray hybridization, RT-qPCR experiments and a functional assay, we identified miR-21 as one of the most significantly down-regulated microRNA in cells that were treated with imatinib. In parallel, a semi-quantitative proteomic approach identified the tumor suppressor programmed cell death protein 4 (PDCD4) as the most over-expressed protein in imatinib-treated cells. We showed that miR-21 can bind to PDCD4 3'UTR and decrease its expression. The STAT5 - miR-21 - PDCD4 pathway was conserved in CML primary CD34+ cells, and to some extent in acute myeloid leukemia (AML) models as well; the known functions of miR-21 and PDCD4 suggest that their regulation by BCR-ABL1 could participate in the antileukemic response triggered by tyrosine kinase inhibitors. In the second part of this manuscript, we was interested in the immature stem cells population that cannot be eliminated by TKI. The underlying mechanisms of this resistance are not fully understood. The TKI-resistant CML stem cells reside in the CD34+/CD38low subpopulation, that can be sorted from the mononuclear cells fraction using FACS. In this project, we propose to describe the microRNA repertoire of the CML CD34+/CD38low cells to highlight the potential role of microRNA in the resistance mechanisms by identifying some of their targets, using bioinformatic and experimental approaches. This combination of miRNome and functional analysis would allow to increase the knowledge of the biology of the TKI-resistant CML stem cells. Our results have shown that the cellular fraction enriched in stem cells (CD34+CD38low) expressed specifically four microRNA: miR-10a, miR-146, miR-150 and miR-155. It is also interested to notice that only two of them, miR-150 and miR-155, are highly expressed in CML-patient CD34+CD38low cells compared to normal cells

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

8

Gastaldi, Cécile. "Études des microARNs dans le développement des carcinomes spinocellulaires cutanés." Thesis, Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4120/document.

Full text

Abstract:

Les carcinomes spinocellulaires cutanés (cSCCs) sont le deuxième type de cancer par ordre de fréquence et sont responsables de 25% des décès dus aux cancers de la peau. Il est donc essentiel de caractériser les mécanismes responsables de la cancérisation de l'épiderme afin de développer de nouveaux traitements. Dans ce contexte, les miRNAs apparaissent comme des cibles de choix pour le développement de futures thérapies anti-tumorales. Toutefois, leur implication dans la physiopathologie des cSCCs est encore peu documentée. Au cours de cette étude, j’ai identifié, par séquençage à haut débit, 112 miRNAs dont l’expression est altérée au cours du développement tumoral dans un modèle murin de carcinogénèse chimique cutanée. J’ai ensuite focalisé mon attention sur le cluster miR-193b/365a et sur miR-708 dont les niveaux diminuent au cours de la progression tumorale, suggérant des fonctions de suppresseurs de tumeur. En accord avec cette hypothèse, l’expression ectopique de ces miRNAs inhibe la prolifération, la survie et la migration de cellules tumorales, alors que le blocage de leur action par des anti-sens stimule ces fonctions cellulaires dans des kératinocytes normaux. L’association d’approches in silico et d’analyses du transcriptome de cellules de cSCC sur-exprimant ces miRNAs m’a permis d’identifier leurs gènes cibles potentiels. J’ai validé KRAS et MAX comme cibles communes de miR-193b et miR-365a, et montré par l’utilisation de siRNAs que la répression de ces cibles mime les effets de ces miRNAs. Ces résultats suggérent que le ciblage de ces gènes pourrait médier en partie les effets suppresseurs de tumeur de miR-193b et de miR-365a dans les cSCCs
Cutaneous squamous cell carcinomas (cSCCs) are the second most common cancer and are responsible for up to 25% of all skin cancer deaths. It is therefore essential to characterize the mechanisms responsible for epidermis carcinogenesis to develop new treatments. In this context, miRNAs appear to be prime targets for the development of future anti-tumor therapies. However, their involvement in the pathophysiology of cSCCs is still poorly documented. In this study, I identified using Small RNA sequencing, 112 miRNAs whose expression is altered during tumor development in a mouse model of cutaneous two-stage chemical carcinogenesis. Then, I focused my attention on the miR-193b/365a cluster and on miR-708, that are down-regulated during tumorigenesis, suggesting tumor suppressor functions. Consistent with this hypothesis, the ectopic expression of these miRNAs inhibit the proliferation, survival and migration of tumor cells, while blocking their action with antisense oligonucleotides stimulates these cellular functions in normal keratinocytes. Combining in silico target-prediction approaches and transcriptome analyzes of cSCC cells over-expressing these miRNAs, I identified their potential target genes. I validated KRAS and MAX as direct targets of miR-193b and miR-365a, and I showed that repression of these genes using siRNAs mimics the effects of these miRNAs. These results suggest that targeting these genes might mediate, at least in part, the tumor suppressor action of miR-193b and miR-365a in cSCCs

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

9

Muther, Charlotte. "MicroARNs et vieillissement épidermique : identification et exploration fonctionnelle de nouvelles cibles anti-âge." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1282.

Full text

Abstract:

Les microARNs sont de petits ARN non codants régulant négativement l'expression génique au niveau post-transcriptionnel. Ils interviennent dans de nombreux processus biologiques et leur rôle dans la régulation de l'homéostasie cutanée est clairement démontrée. Cependant, leur fonction durant le vieillissement épidermique n'a jamais été étudiée. Nous avons donc réalisé une analyse exhaustive du miRnome épidermique durant son vieillissement afin d'identifier les microARNs différentiellement exprimés avec l'âge dans ce tissu. Plusieurs microARNs significativement modulés dans des kératinocytes âgés, nous ont permis d'établir une signature du vieillissement épidermique. Parmi eux, les deux brins du microARN miR-30a sont induits dans les épidermes âgés. La construction d'un lentivirus permettant la surexpression stable et inductible de ce microARN a facilité son étude fonctionnelle dans un modèle organotypique d'épiderme reconstruit. Nous avons observé que la surexpression de ce microARN dans un modèle de culture tridimensionnelle induit un phénotype épidermique présentant des similitudes avec celui observé durant son vieillissement chronologique et caractérisé par une forte altération de la différenciation des kératinocytes, par une perturbation de sa fonction barrière et par une augmentation de l'abondance des cellules apoptotiques. Ce projet de thèse a permis l'identification de 3 cibles directes de miR-30a dans les kératinocytes. Il s'agit de LOX, codant pour la lysyl oxydase qui intervient dans la balance prolifération/différenciation des kératinocytes, d'AVEN, un inhibiteur de caspase et d'IDH1, codant pour l'isocitrate déshydrogénase, enzyme du métabolisme énergétique. Ainsi, ce projet de thèse a révélé un nouveau microARN acteur du vieillissement épidermique et a permis de de mettre à jour de nouveaux mécanismes moléculaires expliquant certaines altérations phénotypiques observées dans l'épiderme avec l'âge
MicroRNAs are small non-coding RNA that negatively regulate gene expression at the post-transcriptional level. There are involved in many biological processes and play a key role in the regulation of skin homeostasis. However, their function during epidermal aging has never been studied. We performed an exhaustive analysis of the epidermal miRnome during its aging in order to identify microRNAs differentially expressed with age in this tissue. Several microRNAs significantly modulated in elderly keratinocytes, allowed us to establish a signature of epidermal aging. Among them, the two strands of the microRNA miR-30a are induced in aged epidermis. The construction of a lentivirus allowing inducible and stable overexpression of this microRNA facilitated its functional study in an organotypic model of reconstructed epidermis. We observed that the overexpression of this microRNA in a three-dimensional culture model induces an epidermal phenotype similar of those observed during its chronological aging characterized by a strong alteration of keratinocyte differentiation, by a disturbance of its barrier function and by an increase in the abundance of apoptotic cells. This thesis project allowed the identification of three miR-30a targets in keratinocytes : LOX encoding lysyl oxidase, which plays a role in proliferation/differentiation balance of keratinocytes, AVEN encoding a caspase inhibitor and IDH1 encoding isocitrate deshydrogenase, a key enzyme of cellular metabolism.Our work revealed a new miRNA actor and deciphered new molecular mechanisms to explain some alterations observed in epidermis during aging, especially those concerning keratinocytes differentiation and apoptotic death

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

10

Fluckiger, Aurélie. "Effet anti-tumoral de l'acide docosahexaénoïque : implication des microARNs et du TNFalpha." Thesis, Dijon, 2015. http://www.theses.fr/2015DIJOS042/document.

Full text

Abstract:

L’acide docosahexaénoïque (DHA) est un acide gras polyinsaturé oméga-3 avec des propriétés anti-inflammatoires et anti-tumorales. L’effet du DHA dans le cadre du cancer colorectal pourrait être la conséquence d'une action anti-proliférative directe sur les cellules cancéreuses et de sa capacité à réduire l’inflammation propice au développement de la tumeur. Le Tumor Necrosis Factor-alpha (TNFa) est une cytokine pro-inflammatoire et présente des effets paradoxaux. En fonction du contexte cellulaire, le TNFa activera une voie de signalisation dépendante de la kinase RIP1 engageant la cellule cancéreuse vers la prolifération ou la mort cellulaire. Notre objectif fut d'évaluer le rôle du TNFa dans l'effet anti-prolifératif du DHA sur des cellules cancéreuses coliques et de préciser les mécanismes moléculaires régulant l'expression de cette cytokine. Le DHA induit l'expression de TNFa et sa sécrétion par les cellules cancéreuses. Nous avons montré que des anticorps neutralisant l'action autocrine du TNFa sur les cellules cancéreuses prévenait l'effet pro-apoptotique du DHA et abolissait l'effet anti-cancéreux observé dans des souris nude avec tumeurs HCT-116 sous régime DHA. L’induction de l'expression de TNFa par le DHA prend son origine à un niveau post-transcriptionnel par la répression du microARN miR-21 perdant sa capacité à dégrader l'ARNm TNFa. Le DHA par l'activation des kinases AMPKa et RIP1 déclenche la translocation nucléaire du facteur de transcription FOXO3a se fixant sur le promoteur miR-21 et diminuant l’expression de ce microARN. Nos travaux mettent en évidence un nouveau mécanisme moléculaire soutenant l'action anti-tumorale du DHA
Docosahexaenoic acid (DHA) is an omega-3 polyunsaturated fatty acid with anti-inflammatory and anti-tumoral properties. The anti-tumor effect of DHA in colorectal cancer might be attributed to direct anti-proliferative action on cancer cells and to its ability to reduce inflammatory status involved in tumor growth. Tumor Necrosis Factor-alpha (TNFa) is an inflammatory cytokine with paradoxical effect in cancer biology. According to the cellular context, TNFa activates RIP1 kinase dependent signaling pathway leading to proliferation or cell death. Our aim was to evaluate the role of TNFa in anti-proliferative effect of DHA in colon cancer cells and to precise the molecular mechanisms regulating TNFa expression.DHA treatment increased TNFa expression and secretion by cancer cells. We have shown that neutralization of autocrine TNFa action prevented the pro-apoptotic effect of DHA colon cancer cells and abolished anti-cancer effect in tumor HCT-116 bearing nude mice fed a DHA-enriched diet. Induction of TNFa expression by DHA occured at post-transcriptional level through microRNA miR-21 repression reducing its ability to induce TNFa mRNA degradation. DHA activates AMPKa and RIP1 kinases triggering nuclear translocation of the transcription factor Foxo3a which bound to miR-21 promoter and repressed the microRNA expression. Our works highlight a new molecular mechanism supporting the anti-cancer action of DHA

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

11

Cabon, Owen. "Rôles des miR-199-5p et miR-468 au cours de la différenciation ostéoblastique." Paris 7, 2012. http://www.theses.fr/2012PA077156.

Full text

Abstract:

Les microARNs, de petits ARN non codants endogènes, interviennent dans la régulation génique post-transcriptionnelle en réprimant la traduction de gènes cibles. Ils participent à la régulation de nombreux processus physiologiques et pathologiques. Des études ont montré que les miRNAs étaient impliqués dans la différenciation de l'ostéoblaste soit de manière positive en ciblant des inhibiteurs ou des régulateurs négatifs ou bien en réprimant des facteurs ostéogéniques essentiels à la différenciation ostéoblastique. Dans notre étude, nous avons établi le profil d'expression des microARNs au cours de la différenciation ostéoblastique par micro-array dans deux lignées cellulaires. Nous nous sommes concentrés sur le miR-199b-5p et le miR-468, dont l'expression augmente et diminue respectivement au cours de la différenciation ostéoblastique. Nous avons établi que Runx2, le facteur clé de la formation osseuse, est l'élément central dans ce nouveau mécanisme de régulation. Nos résultats indiquent que miR-468 et miR199b-5p coopèrent pour réguler les stades précoces et tardifs de la différenciation des ostéoblastes : 1) l'expression précoce de miR-468 permet le maintien de la cellule à un stade peu différencié en inhibant l'expression de Runx2 ; 2)miR-199b-5p induit la différenciation ostéoblastique de façon indirecte en inhibant l'expression de miR-468 et donc en augmentant l'expression de Runx2. Dans cette étude, nous avons déterminé une nouvelle voie de régulation de Runx2 impliquant l'inhibition de l'expression de miR-468 par miR-199b-5p. Nous proposons un mécanisme général par lequel miR-199b-5p et miR-468 contrôlent la différenciation des précurseurs en ostéoblastes matures
MicroRNAs, small endogenous non-coding RNAs of about 19-26 nucleotides, are involved in the post-transcriptional regulation of gene expression by repressing the translation of target genes. They participate in the regulation of many physiological and pathological processes. Numerous studies have shown that miRNAs are involved in the differentiation of osteoblasts either positively by targeting negative regulators or inhibitors or by repressing osteogenic factors essential for osteoblast differentiation. In our study, we identified by miRNA microarray a set of miRNAs that are differentially regulated during osteoblast differentiation in two cell lines. We focused on miR-199b-5p and miR-468 which expressions were respectively increasing and decreasing during osteoblast differentiation. We have established that Runx2, a key factor in bone formation, is the central element in this new regulatory mechanism. The results of our study indicate that miR-468 and miR199b-5p cooperate to regulate the early and late stages of osteoblast differentiation. 1) the early expression of miR-468 helps maintain the cell at an early stage differentiated by inhibiting the expression of Runx2, 2) miR-199b-5p induces osteoblast differentiation indirectly by inhibiting miR-468 expression and by regulating Runx2 expression. In this study, we determined a new regulatory pathway for Runx2 expression involving the inhibition of miR-468 expression by miR-199b-5p. We suggest a global mechanism by which miR-199b-5p and miR-468 control differentiation of precursor cell into mature osteoblast

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

12

Guérit, David. "Rôle des miR-29a et miR-574-3p au cours de la différenciation chondrocytaire de la cellule souche mésenchymateuse." Thesis, Montpellier 1, 2012. http://www.theses.fr/2012MON1T013/document.

Full text

Abstract:

Avec l'augmentation de l'espérance de vie, les pathologies ostéo-articulaires comme l'arthrose ou la polyarthrite rhumatoïde, caractérisées par la dégradation du cartilage articulaire, deviennent de réels problèmes de santé publique. Les traitements actuels sont essentiellement symptomatiques et aboutissent en ultime recours à la pose de prothèses. En absence de réparation spontanée du tissu et de traitement efficace, des approches d'ingénierie tissulaire du cartilage sont envisagées. Les techniques actuelles reposent sur la transplantation de chondrocytes autologues mais dans la majorité des cas, cette approche n'apporte pas de résultats supérieurs aux techniques chirurgicales utilisées actuellement. Grâce à leurs propriétés de différenciation, les cellules souches mésenchymateuses (CSM) représentent une nouvelle source de cellules ayant des potentiels thérapeutiques intéressants. Cependant, la complexité du processus de différenciation des CSMs vers des chondrocytes articulaires matures rend difficile l'obtention de cartilage fonctionnel après implantation. Il est donc important de mieux comprendre le processus de différenciation de ces cellules afin de mieux contrôler leur devenir in vivo. C'est pourquoi, le laboratoire s'intéresse au rôle des micro-ARNs (miARNs) dans la régulation du processus de différenciation des CSMs. L'objectif de mon projet de thèse a consisté à identifier des miARNs modulés dans la différenciation chondrocytaire des CSM humaines primaires et à étudier leur rôle et leur régulation au cours de la chondrogenèse. Nous avons identifié deux miARNs : miR-29a dont l'expression diminue progressivement au cours de la différenciation et miR-574-3p dont l'expression augmente rapidement puis est maintenue jusqu'à la fin de la différenciation. Ces deux miARNs sont régulés par le facteur de transcription SOX9 mais de manière opposée : SOX9 inhibe miR-29a et induit miR-574-3p. Nous montrons que SOX9 interagit avec YY1 pour réguler miR-29a mais pas miR-574-3p, ce qui pourrait expliquer les effets opposés de SOX9 sur l'expression des deux miARNs. Nous montrons également que ces miARNs sont des inhibiteurs de la différenciation chondrocytaire et avons identifié FOXO3A et RXRα comme cibles respectives de miR-29a et miR-574-3p. L'inhibition de FOXO3A ou RXRα avant l'induction de la différenciation, en utilisant des siARNs spécifiques ou en sur-exprimant les miARNs correspondants, bloque la différenciation des CSM. Ces résultats confirment sur des CSMs adultes, que ces protéines jouent un rôle important dans la chondrogenèse et que miR-29a et miR-574-3p participent aux processus de régulation de la différenciation chondrocytaire. En conclusion, nous avons identifié deux nouveaux miARNs contrôlés par SOX9 et régulant négativement la chondrogenèse grâce à la modulation de deux gènes cibles, dont l'expression est nécessaire avant d'induire la différenciation chondrocytaire
Roles of miR-29a and miR-574-3p during the chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells. With the constant increase of the lifespan, osteoarticular pathologies such as osteoarthritis or rheumatoid arthritis, characterized by articular cartilage degradation, are important public health problems. In absence of spontaneous regeneration, cartilage engineering approaches are being considered. Current techniques rely on autologous chondrocyte transplantation but in the majority of cases, this approach gives similar results as current surgeries. Due to their capacity of differentiation toward chondrocytes, mesenchymal stem cells (MSC) represent a new source of cells with therapeutic potential. However, production of a functional cartilage in vivo after implantation of expanded MSC is hampered by the difficulty to reproduce the complexity of the differentiation process to get mature chondrocytes from MSC. The objective of my Ph.D thesis aimed to identify micro-RNAs (miRNAs) modulated during chondrogenic differentiation of primary human MSCs and to study their role as well as their regulation in this process. We identified two miRNAs: miR-29a whose expression decreases progressively during the differentiation and miR-574-3p whose expression rapidly increases and stays constant until the end of the differentiation. Both miRNAs are regulated by the transcription factor Sox9 but in an opposite manner: Sox9 inhibits miR-29a and induces miR-574-3p. We show that YY1 directly interact with Sox9 to regulate miR-29a but not miR-574-3p; this interaction likely explaining the opposite effects of Sox9 on miR-29a and miR-574-3p expression. Moreover we showed that miR-29a and miR-574-3p are both inhibitors of chondrogenesis and we identified FOXO3A and RXRα as their respective targets. In conclusion, we identified two new miRNAs which are regulated by Sox9 and inhibitors of chondrogenesis. They act through the modulation of two target genes, whose role during chondrogenic differentiation of adult MSC was previously not characterized

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

13

Poissonnier, Loïc. "Expression et fonctions du microARN miR-126-5p dans les cellules endothéliales." Phd thesis, Université du Droit et de la Santé - Lille II, 2014. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01070032.

Full text

Abstract:

Le gène Egfl7 codant une protéine majoritairement sécrétée par les cellules endothéliales a été découvert au sein du laboratoire. Ce gène a la particularité d'héberger dans sa séquence intronique deux microARNs complémentaires nommés miR126-3p et miR-126-5p. Les microARNs sont de petites séquences de 20 à 25 nucléotides régulant l'expression de leurs cibles en se fixant sur leurs ARNm pour induire leur dégradation ou l'inhibition de leur traduction. L'expression endothéliale et les fonctions du microARN miR126-3p (microARN principal du duplex miR126-3p/126-5p) ont déjà été très largement abordées alors que celles de miR126-5p (microARN secondaire du duplex) restent inconnues. Les objectifs de notre étude ont donc été d'établir le patron d'expression de miR-126-5p lors du développement vasculaire et de caractériser ses fonctions dans les cellules endothéliales. Par hybridation in situ, miR-126-5p a été détecté dans les vaisseaux sanguins embryonnaires de souris principalement dans les cellules endothéliales. Cette spécificité endothéliale a été retrouvée dans différents organes tels que le cœur et les poumons et est maintenue in vitro. L'inhibition et la surexpression de miR-126-5p dans des cellules endothéliales veineuses (HUVEC) in vitro n'affectent pas les capacités de prolifération, de migration ou d'organisation en pseudocapillaires de ces cellules. En revanche, l'inhibition de miR-126-5p dans les HUVECs entraine une répression de l'adhérence des leucocytes à la surface d'un tapis de cellules endothéliales ainsi qu'une augmentation de la transmigration de monocytes à travers une monocouche endothéliale. A l'inverse, sa surexpression génère des phénotypes opposés. Des analyses in silico de recherche de cibles pour miR-126-5p en lien avec le recrutement leucocytaire ont permis d'identifier une protéine participant à la transmigration des leucocytes in vitro et in vivo nommée ALCAM. A l'aide de test de transactivation, nous avons pu démontrer que miR-126-5p était capable de se fixer au 3'UTR de l'ARNm d'ALCAM afin de réprimer l'expression de la protéine. De plus, l'augmentation de la transmigration induite par la chute d'expression de miR-126-5p dans les cellules endothéliales est inhibée suite au blocage direct de la protéine ALCAM montrant ainsi que l'effet répresseur de miR-126-5p sur ce mécanisme est établi via ALCAM. Une étude par microarray, réalisée sur des HUVECs où miR-126-5p a été inhibé, a permis d'identifier une seconde cible pour miR-126-5p nommée SetD5 pour laquelle aucune fonction n'est connue à ce jour. Des tests de transactivation ont permis de confirmer que SetD5 était une cible de miR-126-5p. De plus, l'effet de miR-126-5p sur l'adhérence des leucocytes aux cellules endothéliales est directement lié à la modulation d'expression de ce gène. Enfin, l'analyse de l'inhibition de miR-126-5p in vivo a permis de montrer que notre microARN d'intérêt contrôle effectivement les expressions d'ALCAM et de SetD5. Cependant, alors que miR-126-5p régule uniquement l'expression d'ALCAM dans les poumons, celle de SetD5 est sous le contrôle de miR-126-5p dans la rétine.Nos travaux ont donc permis de mettre en évidence l'expression endothéliale de miR-126-5p et d'identifier deux de ses cibles lui permettant de jouer un rôle dans le recrutement des leucocytes au niveau de l'endothélium.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

14

Giroud, Maude. "Implication des microARNs dans la conversion des adipocytes blancs en adipocytes thermogéniques." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2015. http://www.theses.fr/2015NICE4082.

Full text

Abstract:

La découverte récente d'adipocytes bruns fonctionnels chez les humains adultes a conduit à envisager leur utilisation afin d’augmenter la dépense énergétique dans de potentiels traitements contre l'obésité et les maladies associées. Par ailleurs, des ilots d’adipocytes bruns, appelés adipocytes "brite" (brown in white), émergent dans le tissu adipeux blanc après une exposition au froid ou une stimulation des récepteurs β3-adrénergiques. En utilisant les cellules hMADS, nous avons identifié plusieurs miARNs régulés pendant le « britening ». miR-125b et let-7i ont des niveaux d’expression plus bas dans les adipocytes « brites ». Des analyses fonctionnelles utilisant un « mimic » de miR-125b ou un inhibiteur ont révélé que miR-125b agit comme un frein sur le « brunissage » des cellules hMADS en altérant leur respiration ainsi que leur contenu mitochondrial. In vivo, nous avons montré que miR-125b et let-7i sont moins exprimés dans le tissu adipeux brun par rapport au tissu adipeux blanc. La stimulation des récepteurs β3-adrénergiques ou l'exposition au froid induit une diminution d’expression des miARNs dans les deux tissus et est associée à l'activation du tissu adipeux brun et au recrutement des adipocytes « brites ». Nous avons constaté que l’injection de miR-125b ou let-7i dans le tissu adipeux blanc sous-cutané inhibait l’expression de gènes du « brunissage » induite par la stimulation de la voie β3-adrénergique. En conclusion, nos observations ont montré que miR-125b et let-7i jouaient un rôle important dans la modulation des adipocytes « brites » et des adipocytes « bruns » en ciblant l’expression de gènes mitochondriaux et en diminuant la biogenèse mitochondriale
The recent discovery of functional brown adipocytes in adult humans has led to the consideration of their use to increase energy expenditure in the treatment of obesity and associated metabolic disorders. Furthermore, in rodents and humans, islands of thermogenic adipocytes, termed “brite” (brown in white) adipocytes, emerge within white adipose tissue after cold exposure or β3-adrenergic receptor stimulation. Using hMADS cells, we identified several miRNAs regulated during “britening” including miR-125b and let-7i which showed lower levels in brite adipocytes. Functional analysis using miR-125b mimic or miR-125b inhibitor transfection revealed that miR-125b-5p acts as a brake of the browning of hMADS cells by impairing respiration rate as well as their mitochondrial content. miR-125b and let-7i levels were lower in brown compared to white adipose tissue. In vivo, we showed that both miRNAs levels were down regulated in mice sub-cutaneous white and brown adipose tissues upon β3-adrenergic receptors stimulation or cold exposure, which is associated with BAT activation and brite adipocyte recruitment. We found that injection of both miRNA mimics in subcutaneous white adipose tissue inhibited β3-adrenergic-induced brown adipocyte markers expression. Altogether, our observations showed that miR-125b and let-7i played an important role in the modulation of brite and brown adipocytes function targeting oxygen consumption and mitochondrial gene expression

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

15

Quero, Laurent. "Radiosensibilité de lignées cellulaires prostatiques : effet du bicalutamide (Casodex®), rôles des microARNs." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00659538.

Full text

Abstract:

Notre étude a porté, d'une part sur l'effet du bicalutamide, un inhibiteur du récepteur aux androgènes, sur la réponse de trois lignées de cancer de prostate en association avec les rayonnements ionisants, d'autre part sur la recherche d'une corrélation entre l'expression des microARN miR-210 et miR-373 sur la tolérance à l'hypoxie et la réponse au rayonnement.Nous montrons que le bicalutamide induit un effet cytostatique et cytotoxique dans la lignée LNCaP, qui exprime le récepteur aux androgènes. Les lignées DU145 et PC3, qui n'expriment pas ou peu le récepteur, sont sensiblement plus résistantes mais sont cependant affectées par les concentrations élevées de bicalutamide. Cette sensibilité résiduelle suggère l'existence d'un mécanisme secondaire, indépendant de la voie de signalisation du récepteur aux androgènes. L'inhibition de la prolifération produite par le bicalutamide s'accompagne d'un blocage du cycle cellulaire en phase G1 avec une augmentation de l'expression de la protéine p27 et une diminution de l'expression de la protéine HER2. L'association concomitante au bicalutamide se traduit par un effet radioprotecteur dans la lignée LNCaP. Cette observation nous conduit à déconseiller l'association concomitante du bicalutamide avec la radiothérapie, notamment en cas d'irradiation hypofractionnée.Facteur bien connu de radiorésistance dans les tumeurs solides, l'hypoxie est associée à un mauvais pronostic dans les cancers de la prostate. Nos données montrent qu'en sus de l'induction de marqueurs classiques comme HIF-1α, CA9 et VEGF, l'hypoxie promeut l'expression du microARN miR-210, (mais non de miR-373) indépendamment de l'expression du récepteur aux androgènes. Les données suggèrent que miR-210, dont l'expression apparaît corrélée à la résistance à l'hypoxie, pourrait constituer un bon biomarqueur pronostique dans le cancer de la prostate. En revanche, l'inhibition de l'expression de miR-210 n'a aucun effet sur la radiosensibilité des cellules en condition d'hypoxie.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

16

Philipot, Didier. "Implication du miR-24 et du miR-199a-5p dans le vieillissement prématuré du chondrocyte au cours de l'arthrose." Thesis, Montpellier 1, 2012. http://www.theses.fr/2012MON1T015/document.

Full text

Abstract:

L'arthrose tardive est la plus répandue des maladies ostéo-articulaires dont la prévalence augmente avec l'âge. Dans le cartilage arthrosique, des changements spécifiques des chondrocytes s'opèrent. Ils présentent une diminution de leur propriété de synthèse de la matrice extracellulaire, une diminution de leur réponse aux facteurs de croissance anabolisants et une augmentation de la sénescence cellulaire. Elle est caractérisée par un arrêt irréversible du cycle cellulaire, une érosion des télomères, une activation de la voie de dommages à l'ADN (ATM/p53/p21), une activation de la voie p16INK4a/pRb, l'établissement d'un sécrétome associé à un phénotype sénescent/hypertrophique appelé SAPS. Le sujet de ma thèse porte sur l'identification de microARNs impliqués dans le vieillissement prématuré du chondrocyte. Les microARNs (miRs) sont des petits ARNs non codant endogènes qui contrôlent un certain nombre de fonctions biologiques comme la prolifération, la différenciation ou la sénescence. Deux études ont montré le rôle préventif des miRs dans l'induction de la sénescence et dans l'hypertrophie. Au cours de ma thèse, nous avons utilisé un modèle de chondrocytes arthrosiques en 3D traités à l'IL-1β afin de récapituler le phénotype sénescent observé dans la pathologie. Cela nous a permit d'identifier deux miRs réprimés en réponse à cette cytokine : miR-24 et miR-199a-5p. Nous montrons que la répression de miR-24 conduit à une induction de p16INK4a et MMP1 associé à un phénotype hypertrophique. De plus, nos données préliminaires montrent que le miR-199a-5p est potentiellement un régulateur négatif de l'hormone anti-vieillissement Klotho qui est retrouvée dérégulée dans notre modèle cellulaire
Osteoarthritis (OA) is an age-related disease whose prevalence increases with late life. In osteoarthritic cartilage, chondrocytes presents age-specific changes such as a decrease in synthesis properties, a decrease in their response to growth and anabolic factors and an increase of cellular senescence. Senescent chondrocytes are characterized by an irreversible cell cycle arrest, DNA damage response activation (ATM/p53/p21), p16INK4a/pRb signaling pathway activation and the establishment of SAPS triggering to hypertrophy. The aim of my PhD project consisting to identify microRNAs involved in chondrocyte premature aging. microRNAs are small endogenous RNAs controlling several biological processes such as proliferation, differentiation and senescence. Two studies show that microRNAs have a preventive role in senescence and hypertrophy. During my PhD, we perform a cellular model based on OA chondrocytes placed in 3D and treated with IL-1β. We identified two miRs: miR-24 and miR-199a-5p. Repression of miR-24 leads to the induction of p16INK4a and MMP1, associated with chondrocyte hypertrophy. Moreover, preliminary datas suggests that miR-199a-5p is a potential regulator of anti-aging hormone Klotho which is deregulated in our model

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

17

Kroiss, Auriane. "Régulation androgénique du microARN miR-135a et implication dans la progression tumorale prostatique." Phd thesis, Ecole normale supérieure de lyon - ENS LYON, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00965286.

Full text

Abstract:

La voie de signalisation des androgènes, à travers le récepteur aux androgènes (AR), joue un rôle important dans le développement et la fonction de la prostate, ainsi que dans l'initiation et la progression du cancer de la prostate. La découverte de nouveaux effecteurs de la signalisation androgènes-AR permettra une meilleure compréhension de ces mécanismes. MiR-135a a été identifié comme un gène cible de la voie de signalisation androgènes-AR. Après stimulation androgénique, AR active directement la transcription du gène miR-135a2, en se fixant sur un élément de réponse aux androgènes dans la région promotrice.Une surexpression de miR-135a inhibe la migration et l'invasion de cellules prostatiques cancéreuses, en régulant négativement l'expression des protéines ROCK1 et ROCK2, deux gènes cibles de miR-135a nouvellement identifiés.De plus, miR-135a cible et régule négativement l'expression du facteur de transcription FOXN3, capable de moduler l'activité transcriptionnelle de AR et la prolifération cellulaire dépendante des androgènes.L'étude fonctionnelle de miR-135a suggère donc qu'il puisse être impliqué dans la progression du cancer de la prostate, en régulant la formation des métastases et la signalisation androgénique. L'expression de miR-135a, dans le tissu tumoral par rapport au tissu sain adjacent, de prostatectomies de patients, est inversement corrélée aux paramètres d'agressivité de la maladie, suggérant qu'il puisse être utilisé comme marqueur de pronostic du cancer de la prostate.Ces résultats font de miR-135a un nouvel effecteur de la voie de signalisation de AR, pouvant contribuer à la progression du cancer de la prostate.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

18

Cornejo, Pierre-Jean. "Implication de la voie p53 et du microARN miR-34a dans la résistance à l'insuline adipocytaire." Thesis, Nice, 2014. http://www.theses.fr/2014NICE4115.

Full text

Abstract:

La dysfonction du tissu adipeux lors de l’obésité participe au développement de la résistance à l’insuline. L’activation de p53 dans l’adipocyte a récemment été impliquée dans la résistance à l’insuline lors de l’obésité, par des mécanismes inconnus. Le microARN miR-34a participe à la réponse cellulaire induite par p53 dans différents types cellulaires. Parmi ses cibles figurent Vamp2 et Sirt1, deux protéines impliquées respectivement dans la translocation des transporteurs de glucose (Glut4) et la sensibilité à l’insuline. Nous montrons que l’expression de p53 est augmentée dans les adipocytes de souris rendues obèses par un régime riche en graisses. Nous observons une augmentation du nombre d’adipocytes avec des dommages à l’ADN et également plus de dommages dans les adipocytes provenant des souris obèses. L’induction de dommage à l’ADN par la doxorubicine et la stabilisation de p53 par la nutline inhibe le transport de glucose induit par l’insuline et la signalisation de l’insuline dans des adipocytes en culture d’origine murine et humaine. En accord avec l’activation de p53 dans l’adipocyte lors de l’obésité, nous montrons que l’expression de miR-34a est augmentée dans le TA et les adipocytes de souris obèses. La surexpression de miR-34a dans des adipocytes 3T3-L1 inhibe le transport de glucose en réponse à l’insuline, la signalisation insulinique, la lipolyse, et augmente l’expression de l’ARNm de la leptine. Nous montrons que l’inhibition de la signalisation insulinique est due à l’induction de l’ARNm et de la tyrosine phosphatase PTP1B par miR-34a. L’inhibition de la lipolyse s’accompagne d’une inhibition d’expression d’ATGL, l’enzyme limitante de la lipolyse
Dysfunction of adipose tissue in obesity is involved in the development of insulin resistance. Activation of p53 in adipocytes has recently been implicated in insulin resistance in obesity, by unknown mechanisms. MicroRNA miR-34a is involved in the cellular response induced by p53 in different cell types. Among its targets, VAMP2 and Sirt1are two proteins involved respectively in the translocation of glucose transporters (Glut4) and the insulin sensitivity. We show that p53 expression is increased in adipocytes of obese mice. We are seeing an increased number of fat cells with DNA damage and also more damage in adipocytes from obese mice. The induction of DNA damage by doxorubicin and stabilization of p53 by Nutline inhibits glucose transport induced by insulin and the insulin signaling in murine and human adipocytes in vitro. Consistent with the p53 activation in adipocytes in obesity, we show that the expression of miR-34a is increased in the TA and obese mice adipocytes. Overexpression of miR-34a in 3T3-L1 adipocytes inhibits glucose transport in response to insulin, insulin signaling, lipolysis, and increases expression of the mRNA of leptin. We show that the inhibition of the insulin signaling is due to induction of the mRNA and the tyrosine phosphatase PTP1B by miR-34a. Inhibition of lipolysis is accompanied by inhibition of expression of ATGL, the rate-limiting enzyme in lipolysis. Common to all of these effects is the control of the expression of these proteins by Sirt1, a NAD + dependent deacetylase. However, inhibition of expression of miR-34a by Sirt1 can not account for all the observed effects

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

19

Bertero, Thomas. "MiR-483-3p : un nouveau régulateur de la cicatrisation cutanée." Nice, 2012. http://www.theses.fr/2012NICE4051.

Full text

Abstract:

La caractérisation des mécanismes régulant la migration, la prolifération et la différenciation des kératinocytes lors de la cicatrisation est un enjeu majeur d’un point de vue physiologique et physiopathologique. Dans ce contexte, l’étude de l’implication potentielle des microARNs nous a semblé innovante et originale. Mes travaux ont mis en évidence une augmentation tardive de l’expression de miR-483-3p dans des cultures de kératinocytes humains blessés in vitro et dans un modèle murin de cicatrisation in vivo. Cette accumulation de miR-483-3p intervient lors du retour à confluence des kératinocytes blessés et précède leur arrêt de prolifération, suggérant que miR-483-3p pourrait être un signal d’arrêt de la réépithélisation. J’ai confirmé cette hypothèse en montrant que miR-483-3p inhibe effectivement la prolifération des kératinocytes en bloquant leur entrée dans le cycle cellulaire. De plus, sa neutralisation en fin de réépithélisation maintient les cellules dans un état prolifératif et retarde leur engagement dans le programme de différenciation terminale. Par des expériences de complémentation et l’utilisation d’oligonucléotides « Target Protector », j’ai montré que ces effets résultent de l’invalidation de la phosphatase CDC25A qui augmente la phosphorylation sur tyrosine des kinases CDK4 et CDK6 et inhibe leur association avec les cyclines D, empêchant leur activation et séquestrant les cellules en phase G1 précoce. Par ailleurs, compte tenu des similitudes existant entre la cicatrisation et la tumorigénèse cutanée, j’ai montrée que miR-483-3p exerce des propriétés anti-tumorales in vivo par un mécanisme pro-apoptotique résultant du « ciblage » des gènes BIRC5 et RAN
The mechanisms that regulate keratinocyte migration, proliferation and differentiation in wound healing remain largely unraveled, in particular with respect to the possible involvement of microRNAs. We showed the up-regulation of miR-486-3p in two distinct models of wound healing : scratch-injured cultures of human keratinocytes and wounded skin in mice. MiR-483-3p accumulation peaks at the final stage of the wound closure process, consistent with a role in the arrest of “healing” progression. I confirmed this hypothesis by showing that miR-483-3p actually inhibits keratinocyte proliferation and prevents their entry into the cell cycle. In addition, blocking miR-483-3p accumulation in wounded-keratinocytes strongly the cell cycle exit, maintains cells into a proliferative state, and retards their differentiation program. Using rescue experiments and “Target Protector” oligonucleotides, I demonstrated that these effects result from the invalidation of the CDC25A phosphatase which consequently increases the tyrosine phosphorylation status of CDK4 and CDK6 kinases, inhibits their association with cyclin D and prevents their activation leading to early G1 phase blockade. Moreover, given the similarities between wound healing and skin tumorigenesis, I have shown that miR-483-3p exerts powerful anti-tumoral properties in vivo due to a pro-apoptotic effect resulting from BIRC5 and RAN direct targeting

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

20

Gastaldi, Cécile. "Études des microARNs dans le développement des carcinomes spinocellulaires cutanés." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4120.

Full text

Abstract:

Les carcinomes spinocellulaires cutanés (cSCCs) sont le deuxième type de cancer par ordre de fréquence et sont responsables de 25% des décès dus aux cancers de la peau. Il est donc essentiel de caractériser les mécanismes responsables de la cancérisation de l'épiderme afin de développer de nouveaux traitements. Dans ce contexte, les miRNAs apparaissent comme des cibles de choix pour le développement de futures thérapies anti-tumorales. Toutefois, leur implication dans la physiopathologie des cSCCs est encore peu documentée. Au cours de cette étude, j’ai identifié, par séquençage à haut débit, 112 miRNAs dont l’expression est altérée au cours du développement tumoral dans un modèle murin de carcinogénèse chimique cutanée. J’ai ensuite focalisé mon attention sur le cluster miR-193b/365a et sur miR-708 dont les niveaux diminuent au cours de la progression tumorale, suggérant des fonctions de suppresseurs de tumeur. En accord avec cette hypothèse, l’expression ectopique de ces miRNAs inhibe la prolifération, la survie et la migration de cellules tumorales, alors que le blocage de leur action par des anti-sens stimule ces fonctions cellulaires dans des kératinocytes normaux. L’association d’approches in silico et d’analyses du transcriptome de cellules de cSCC sur-exprimant ces miRNAs m’a permis d’identifier leurs gènes cibles potentiels. J’ai validé KRAS et MAX comme cibles communes de miR-193b et miR-365a, et montré par l’utilisation de siRNAs que la répression de ces cibles mime les effets de ces miRNAs. Ces résultats suggérent que le ciblage de ces gènes pourrait médier en partie les effets suppresseurs de tumeur de miR-193b et de miR-365a dans les cSCCs
Cutaneous squamous cell carcinomas (cSCCs) are the second most common cancer and are responsible for up to 25% of all skin cancer deaths. It is therefore essential to characterize the mechanisms responsible for epidermis carcinogenesis to develop new treatments. In this context, miRNAs appear to be prime targets for the development of future anti-tumor therapies. However, their involvement in the pathophysiology of cSCCs is still poorly documented. In this study, I identified using Small RNA sequencing, 112 miRNAs whose expression is altered during tumor development in a mouse model of cutaneous two-stage chemical carcinogenesis. Then, I focused my attention on the miR-193b/365a cluster and on miR-708, that are down-regulated during tumorigenesis, suggesting tumor suppressor functions. Consistent with this hypothesis, the ectopic expression of these miRNAs inhibit the proliferation, survival and migration of tumor cells, while blocking their action with antisense oligonucleotides stimulates these cellular functions in normal keratinocytes. Combining in silico target-prediction approaches and transcriptome analyzes of cSCC cells over-expressing these miRNAs, I identified their potential target genes. I validated KRAS and MAX as direct targets of miR-193b and miR-365a, and I showed that repression of these genes using siRNAs mimics the effects of these miRNAs. These results suggest that targeting these genes might mediate, at least in part, the tumor suppressor action of miR-193b and miR-365a in cSCCs

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

21

Le, Guillou Sandrine. "Du miRNome au rôle de miR-30b : implication des microARN dans la glande mammaire." Versailles-St Quentin en Yvelines, 2013. http://www.theses.fr/2013VERS0024.

Full text

Abstract:

La glande mammaire est un organe dynamique, passant par des stades de prolifération, de différenciation puis de dédifférenciation au cours de cycles de reproduction. La compréhension des mécanismes régulant ces différentes étapes est un enjeu de recherche important. Parmi les régulateurs potentiels, l’implication de nouveaux acteurs, les microARN, a été récemment démontrée. Aujourd’hui, les données relatives à l’identification des microARN et de leur rôle dans la glande mammaire normale sont encore rares et concernent surtout l’étude de leur expression anormale lors de cancers du sein. Au cours de ce travail de thèse, une approche globale a été développée afin de décrire, pour la première fois, l’ensemble des microARN exprimés, le miRNome, dans la glande mammaire murine et bovine en lactation. Leur analyse a mis en évidence de nouveaux microARN potentiels et une signature de la glande mammaire, définie par 15 microARN, dont deux potentiellement spécifiques de la lactation. Les microARN actifs, présents dans RISC, ont été analysés afin de préciser le miRNome « fonctionnel » de la glande mammaire pendant la lactation. Par ailleurs, le rôle du microARN miR-30b dans le développement et la différenciation des cellules épithéliales mammaires a été défini à l’aide de souris transgéniques sur-exprimant ce microARN, montrant que la dérégulation d’un seul microARN peut provoquer un fort dysfonctionnement mammaire. La combinaison de ces deux approches a apporté des éléments nouveaux permettant la compréhension de l’impact des microARN sur la régulation du développement normal de la glande mammaire
The mammary gland is a dynamic organ, undergoing proliferation, differentiation and dedifferentiation stages during reproductive cycles. Understanding the mechanisms regulating these stages is a major research challenge. Among others potential regulators, the involvement of new molecules, the microRNA, has recently been demonstrated. Until now, data relating to the identification of microRNA and their role in mammary gland are still scarce and mainly concern the study of their abnormal expression in breast cancer. In this PhD work, a global approach has been developed to describe, for the first time, all expressed microRNA, the miRNome, in murine and bovine lactating mammary gland. This analysis revealed new potential microRNA and defined a mammary gland signature of 15 microRNA, including two that seems lactation stage-specific. Active microRNA, present in RISC, have been analyzed to specify the “functional” miRNome in lactating mammary gland. Moreover, the role of the microRNA miR-30b in the development and differentiation of mammary epithelial cells has been defined using transgenic mice over-expressing this microRNA, showing that the deregulation of a single microRNA can cause a large mammary dysfunction. The combination of these two approaches has provided new evidence for understanding the impact of microRNA on the regulation of the normal development of the mammary gland

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

22

Stankevicins, Luiza. "MicroRNAs in Breast Cancer Progression and DNA Damage Response." Thesis, Paris 11, 2012. http://www.theses.fr/2012PA11T041.

Full text

Abstract:

Le cancer du sein est marqué par une grande hétérogénéité. C´est une maladie complexe, fortement influencée par l´environnement pourtant, elle dépend aussi d´une accumulation de mutations génétiques associées à la dérégulation épigénétique des voies clés. Les altérations présentes dans le profil d´expression génique observées dans la tumeur, peuvent être le résultat de mécanismes de régulation des gènes à différent niveaux, comme des modifications post-transcriptionnelles menées par le mécanisme d´ARN d´interférence sous forme de microARN (miARN). Ce mécanisme peut conduire au début et développement du cancer aussi bien qu’à la résistance aux thérapies. Les miARN font partie d’une classe d´ARN non-codants qui ont émergé ces dernières années comme l'un des principaux régulateurs de l'expression des gènes par sa capacité à réguler négativement l'activité des ARN messagers (ARNm). L´importance de cette régulation a été observée par la présence de ce type de contrôle dans plusieurs processus biologiques, parmi eux, des voies liées à la prolifération, différentiation et apoptose. Afin de mieux comprendre les mécanismes d’initiation et progression tumorale dans le cancer du sein, nous avons fait une analyse globale de l´expression des miARN, par la technique de microarray, dans la série de lignées cellulaires 21T. Cette série est un modèle in vitro de la progression tumorale, comprenant la lignée 16N, obtenue à partir de l’épithélium normal infecté par des virus HPV-16, les lignées 21PT et 21NT, qui correspondent au carcinome in situ et les lignées 21MT1 et 21MT2 obtenues à partir d´une effusion pleurale métastatique à l’endroit de la métastase. Etant donné que les miARN jouent un rôle dans la régulation de l´apoptose et d´autres mécanismes de réponse aux dommages fait à l´ADN et que l´irradiation dans des formes différentes est couramment utilisée comme outil diagnostique, par exemple dans des mammographies, nous avons évalué l´expression de miARN après avoir soumis les cellules à des irradiations de haute et basse énergie, et au traitement avec de la doxorubicine. Les tests ont été faits sur les lignées non tumorales (MCF-10A et HB-2) et sur les lignées tumorales (MCF-7 et T-47D). On a pu observer que le rayon X de basse énergie est capable de causer des cassures double brin à l´ADN et de conduire les cellules à l´apoptose. Une légère altération dans les profils d´expression des miARN impliqués dans cette voie, comme let-7a, miR-34a et miR-29b, a aussi été remarquée. En ce qui concerne la réponse aux dommages fait à l´ADN, une upregulation dans l´expression de miR-29b, qui sous des conditions physiologiques normales est régulée négativement, a été observée après les traitements. Le microARNome de la série 21 montre une importante sous-expression de miR-205, un enrichissement du facteur pro-métastatique ZEB-1 et une réduction conséquente dans les niveaux d’e-cadherine, observée par western blot, seulement dans les lignées métastatiques (21MT). L´ensemble des résultats, suggèrent que miR-29b peut être un bio-marqueur potentiel du stress génotoxique et que miR-205 peut participer du processus de transition épithélium-mésenchyme et, en outre, quand il est sous-exprimé, peut augmenter le potentiel métastatique des cellules de la série 21T
Breast tumors are characterized by their high heterogeneity. Breast cancer is a complex disease, which has its development strongly influenced by environmental factors, combined with a progressive accumulation of genetic mutations and epigenetic dysregulation of critical pathways. Changes in gene expression patterns may be a result of a deregulation in epigenetic events as well as in post-transcriptional regulation driven by RNA interference endogenously represented by microRNA (miRNA). These mechanisms are capable to promote the initiation, maintenance and progression of carcinogenesis and are also implicated on the development of therapy resistance. miRNAs form a class of non-coding RNAs, which have emerged in recent years as one of the major regulators of gene expression through its capacity to silence messenger RNAs (mRNAs) containing a partially complementary sequence. The importance of regulation mediated by miRNAs was observed on their ability to regulate a wide range of biological processes, including cell proliferation, differentiation and apoptosis.To gain insights into the mechanisms involved in breast cancer initiation and progression we conducted a miRNA global expression on 21T series that are an in vitro model of breast cancer progression, comprising cell lines derived from the same patient, which include a normal epithelia (16N), primary in situ ductal carcinoma (21PT and 21NT) and cells derived from pleural effusion of lung metastasis (21MT-1 and 21MT-2). Considering the importance of miRNAs in the regulation of apoptosis, and that irradiation in different spectra is commonly used in diagnostic procedures, as mammography and on radiotherapy, we evaluated the miRNA expression after cell low and high energy irradiation and doxorubicin treatment to determine whether miRNAs are useful biomarkers to detect cell response after DNA damage. The experiments were done on the non-tumoral cell lines MCF-10A and HB-2 and on the breast carcinoma derived cell lines MCF-7 and T-47D. We observed that low energy X-rays is able to promote DNA strand breaks and apoptosis and to slightly change the expression of miRNAs involved on this pathway, such as let-7a, miR-34a and miR-29b. Regarding DNA stress response pathways, an upregulation on miR-29b expression, that in normal conditions is downregulated in tumor cell lines could be observed after all treatments. The microRNAome of 21T series revealed a significant downregulation of miR-205, an enrichment of the pro-metastatic factor ZEB-1, potential target for miR-205 and the consequent reduction of e-cadherin levels in 21MT cells checked by western blot. Our results indicate that miR-29b is a possible biomarker of genotoxic stress and that miR-205 can participate on the metastatic potential of 21T cells

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

23

Clément, Thomas. "Recherche de liens entre expression d'ARN non codants et physiopathologies articulaires, utilisation des microARN comme biomarqueurs du phénotype chondrocytaire." Thesis, Université de Lorraine, 2014. http://www.theses.fr/2014LORR0113/document.

Full text

Abstract:

L’arthrose est la pathologie articulaire la plus répandue et, avec l’allongement de l’espérance de vie, sa prévalence ne cesse d’augmenter. Elle se caractérise par une dégénérescence du cartilage articulaire associée à une inflammation synoviale et un remodelage anormal de l’os sous-chondral, qui résultent en une perte progressive de mobilité et des douleurs très handicapantes. Dans le cartilage, le chondrocyte est le seul type cellulaire et il est responsable de la synthèse des composants de la matrice extracellulaire (collagènes, protéoglycanes). Au cours de l’arthrose, le phénotype du chondrocyte est altéré et la balance synthèse/dégradation des composants matriciels est déséquilibrée en faveur de la dégradation du cartilage. Il n’existe actuellement aucun traitement permettant de ralentir efficacement l’évolution du processus arthrosique, de sorte que la recherche de biomarqueurs pertinents et de cibles thérapeutiques potentielles est en pleine effervescence depuis l’explosion de l’étude des microARNs. Les microARNs sont des petits ARNs non codants régulant négativement l’expression des gènes. On estime que 50% des gènes sont potentiellement régulés par les miARNs. Les miARNs semblent impliqués dans tous les processus biologiques majeurs tels que la différenciation cellulaire, l’apoptose ou encore la cancérisation. Ces petits ARN non codants sont donc des biomarqueurs potentiels très intéressants. Au cours de ces travaux de thèse l’implication des miARN dans la régulation du phénotype chondrocytaire a été étudiée. A partir d’un modèle de perte du phénotype chondrocytaire différencié, provoquée par des repiquages successifs ou une stimulation par l’IL-1β les variations du profil d’expression des miARNs ont été analysées par l’utilisation de puces dédiées. Ces données ont permis de mettre en évidence 43 miARNs candidats dont le cluster miR-23~27b~24-1 et miR-29b. L’étude de la régulation de la production différentielle des miARNs de ce cluster a été entreprise, sans que nous parvenions toutefois à apporter une réponse formelle sur les mécanismes impliqués. Néanmoins, nous avons identifié miR-29b comme un régulateur négatif de l’expression du gène codant Col-IIa1 au cours de la perte du phénotype différencié, ainsi que chez les chondrocytes « arthrosiques ». Enfin, comme il a été montré au laboratoire que l’équilibre entre les concentrations extracellulaires de pyrophosphate/phosphate inorganique (ePi/ePPi) était essentiel au maintien du phénotype chondrocytaire différencié, nous nous sommes intéressés à la régulation des gènes codant les acteurs protéiques impliqués dans cette balance (ANK, PC1, Pit-1 et TNAP). A partir de prédictions de cibles par analyse in silico, un panel de 4 miARNs candidats a été établi : let7e, miR-9, miR-188 et miR-219. Nos travaux avec des systèmes rapporteurs ont démontré l’implication de miR-9 en tant que régulateur négatif de l’expression des gènes PC-1, Pit-1 et TNAP, de façon cohérente ou non avec les prédictions bio-informatiques
Osteoarthritis (OA) is the most frequent joint disease and its prevalence still grows with the increase in lifespan. OA is characterized by articular cartilage degeneration, together with synovitis and abnormal subchondral bone remodeling, leading to progressive loss of mobility and pain. Chondrocyte is the unique cell type in cartilage which accounts for the synthesis of extracellular matrix (ECM) components (collagens, proteoglycans). During OA, chondrocyte phenotype is altered and the balance between ECM synthesis and degradation is impaired towards cartilage degradation. To date no treatment can efficiently reduce OA progression so that the search for reliable biomarkers and potential therapeutic targets is very active, particularly since the discovery of microRNAs. miRNAs are estimated to regulate 50% of cellular genes. They contribute to major cellular processes such as cell differentiation, apoptosis or tumorigenesis. Therefore, miRNAs are interesting putative biomarkers. During this PhD thesis, we studied the contribution of miARNs to the control of chondrocyte phenotype. Using a model of chondrocyte differentiated phenotype loss induced by extensive subculturing or IL-1β challenge we studied changes in miRNAs profile with microarrays. We determined a panel of 43 varying miRNA including the miR-23~27b~24-1 cluster and miR-29b. The differential production of miRNAs from this cluster has been investigated, but we didn’t succeed in identifying the underlying mechanisms. However, we identified miR-29b as a negative post-transcriptional regulator of Col-IIa1 during differentiated phenotype loss and OA. Finally, as equilibrium between extracellular levels of inorganic phosphate and pyrophosphate (ePi/ePPi) was previously shown in the laboratory to be crucial for the maintenance of a differentiated chondrocyte phenotype, we studied the regulation of the genes encoding the 4 proteins regulating this balance (ANK, PC1, Pit-1 and TNAP). From in silico analysis, we selected a panel of 4 miRNAs: let7e, miR-9, miR-188 and miR-219. Using reporter assays, we showed that miR-9 was a negative regulator of PC-1, Pit-1 and TNAP, according or not to bioinformatics prediction

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

24

Trécul, Anne. "Effet de l'acide valproïque sur l'hématopoïèse : rôle du réseau de régulation "microARN/ facteurs de transcription"." Thesis, Université de Lorraine, 2014. http://www.theses.fr/2014LORR0143/document.

Full text

Abstract:

L’acide valproïque (VPA) est un inhibiteur des histones désacétylases (HDACi), qui présente des propriétés anti-tumorales nsur différents types de cancers. Son utilisation depuis plusieurs décennies comme médicament antiépileptique a révélé des effets secondaires, notamment sur le système hématopoïétique. Dans la présente étude, nous nous sommes intéressés à l’effet du VPA sur les réseaux microARN (miR)/Facteurs de transcription (FT) spécifiquement impliqués dans la régulation des voies de différenciation érythro-mégacaryocytaires. Nous montrons que le VPA est capable d’inhiber la différenciation érythroïde dans les cellules érythroleucémiques humaines TF1 et K562 et dans les cellules souches hématopoïétiques (CSH) CD34+, stimulées par l’érythropoïétine recombinante (Epo) ou par l’aclacinomycine A. Cette inhibition se traduit par une diminution de l’expression de la glycophorine A, de la γ-globine, des miR-144/451 et du FT GATA-1. L’inhibition du pré-miR-144 suggère que le VPA est capable de réguler l’expression du gène miR-144/451 au niveau transcriptionnel, via GATA-1. Dans les cellules Epo/CD34+, le VPA induit l’augmentation du FT PU.1 en accord avec l’inhibition du miR-155 et favorise son interaction avec GATA-1 pour inhiber son activité. L’utilisation d’un analogue du VPA, sans activité HDACi (Valpromide) et d’un inhibiteur d’HDAC de classe I, le MS-275, a montré que l’activité HDACi du VPA n’est pas requise pour l’inhibition de la différenciation érythroïde. Le VPA affecte également la voie mégacaryocytaire issue d’un progéniteur commun aux cellules érythroïdes. Dans la lignée mégacaryoblastique Meg-01, le VPA induit des modifications morphologiques du type mégacaryocytaire, une augmentation du marqueur CD61, du FT GATA-2 et du miR-27a. En revanche, l’expression du FT GATA-1 et des miR-144/451 diminuent. L’augmentation du miR-27a coïncide avec la diminution de l’expression de l’ARNm du FT RUNX1, en accord avec l’induction de la voie mégacaryocytaire. En conclusion, le VPA est capable de moduler le programme de différenciation érythro-mégacaryocytaire, à travers un micro réseau de régulation miR/FT
Valproic acid (VPA), a histone deacetylase inhibitor (HDACi), exhibits anti-cancer properties against several tumor types. Its use as an anti-epileptic drug for several decades reveled side effects at the hematological level. In this study, we analyzed the effect of VPA on an erythro-megakaryocyte-specific miR/transcription factors network. VPA inhibited erythroid differentiation in the erythroleukemia cell lines TF1 and K562 as well as in CD34+/hematopoietic stem cells (HSCs), induced by the recombinant erythropoietin (Epo) or aclacinomycin. This inhibition was characterized by glycophorin-A, γ-globin and GATA-1/miR-144/451 down-regulation. Inhibition of pre-miR-144 expression suggested that VPA regulates transcription of the miR-144/451 gene through GATA-1. In Epo-stimulated HSCs, VPA induced PU.1 expression in correlation with miR-155 inhibition and promoted GATA-1/PU.1 interaction. The use of valpromide, a VPA analogue without HDACi activity and the class-I HDACi MS-275, showed that HDAC inhibition by VPA was not required for its inhibitory activity on erythropoiesis. VPA also induced megakaryocyte features in Meg-01 cells, at both cellular and molecular levels. Notably, CD61, GATA-2 and miR-27a were over-expressed. RUNX1 mRNA expression and GATA-1/miR-144/451 axis decreased in accordance with megakaryocyte differentiation. In conclusion, VPA is able to modulate erythro-megakaryocytic differentiation program, through a regulatory micro-network involving miRs and TFs

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

25

Blondel, Sophie. "Utilisation des cellules souches induites à la pluripotence pour la modélisation pathologique du syndrome de Hutchinson Gilford." Thesis, Evry-Val d'Essonne, 2013. http://www.theses.fr/2013EVRY0014/document.

Full text

Abstract:

La progéria est une maladie génétique rare caractérisée par un vieillissement global, prématuré et accéléré entrainant le décès des enfants atteints aux alentours de l’âge de 13 ans. La compréhension des mécanismes moléculaires à l’origine de ce syndrome ont récemment permis de démarrer deux protocoles d’essai clinique, avec un objectif commun : ralentir la progression de la maladie en bloquant la maturation de la protéine mutée. Cependant, l’identification de nouvelles voies thérapeutiques reste encore, pour cette pathologie, un défi à relever. L’objectif de ce travail de thèse a consisté à utiliser le potentiel unique des cellules souches induites à la pluripotence (iPSCs) pour explorer les mécanismes cellulaires et moléculaires de ce syndrome, identifier de nouvelles cibles thérapeutiques et proposer des pistes innovantes de traitement.La première étape de cette thèse s’est consacrée à la dérivation et la caractérisation des lignées d’iPSCs à partir de cellules de patients atteints par ce syndrome. De manière surprenante,cette étude a mis en évidence une préservation des neurones générés à partir d’iPSCs de patients progeria. L’étude des mécanismes moléculaires à l’origine de cette protection neuronale a par la suite permis d’identifier l’implication d’un microARN, miR-9, capable de réguler l’expression de la progérine et de protéger les neurones de ce vieillissement accéléré. La seconde partie de ces travaux de thèse s’est attachée à explorer le potentiel de ces cellules pour étudier l’efficacité des composés proposés aux patients dans le cadre des différents essais cliniques réalisés ces dernières années. Bien que l’ensemble des molécules testées améliore de façon significative les défauts de structuration de l’enveloppe nucléaire, nos travaux soulignent un certain nombre de différences fonctionnelles tant au niveau de leurs effets sur la prolifération cellulaire que sur la différentiation ostéogénique ou encore le métabolisme énergétique. Enfin, sur la base de ce travail de modélisation pathologique, la dernière partie de ce projet de thèse a eu pour objectif de développer et réaliser un criblage à haut contenu de plus de vingt mille petites molécules pouvant réguler le processus de maturation de la prélamine A. Au cours de cette étude, onze composés à fort potentiel thérapeutique ont été identifiés, dont trois appartenant à la même famille chimique, les mono-aminopyrimidines, ouvrant de nouvelles perspectives thérapeutiques dans la progéria
Progeria is a rare genetic disease characterized by a global, premature and accelerated aging, leading to patient death at average 13 years old. The understanding of the molecular mechanism of this syndrome has recently opened the possibility to start two clinical trials, with one common objective: slow down the disease progression blocking the maturation of the mutated protein. However, the identification of new therapeutic pathway is still a challenge to rise for this pathology. The objective of this PhD thesis has consisted to use the unique potential of induced pluripotent stem cells (iPSCs) to explore cellular and molecular mechanisms of this syndrome, identify new therapautical target and propose innovative trails of treatment. The first step of this thesis was focused on the derivation and the characterization of the iPSCs lines from patient's cells affected by this syndrome. In a surprising manner, this study has highlighted a preservation of neurons generated from progeria patients. The study of the molecular mechanisms led to the identification of the microRNA miR-9 involvement. This latter regulates progerin expression, protecting neurons from accelerated aging. The second part of this work has endeavored to explore the potential of progeria iPSCs to study the efficiency of chemical compounds proposed to patients in the different clinical trials realized these last years. Although the set of tested molecules significantly improved nuclear architecture, differences in proliferation or in osteogenic differentiation or in metabolic energetic have been detected. Finally, on the basis of this pathological modeling work, the last part of this thesis praject was to develop and realize a high content screening of more than twenty thousand small molecules to select drugs which block the maturation process of prelamin A. Eleven molecules with a high therapeutical potential have been identified, with three belonging to the same chemical family, the mono-aminopyrimidins, opening new therapeutical perspectives in progeria

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

26

Bassand, Kévin. "Modulation du processus d’angiogenèse induite par la chimiokine CXCL12 (SDF-1α) : Implication du miR-126 et des Glycosaminoglycannes." Thesis, Paris 13, 2019. http://www.theses.fr/2019PA131070.

Full text

Abstract:

Les pathologies ischémiques constituent l’une des principales causes de mortalité dans le monde. En situation ischémique, afin d’éviter une nécrose tissulaire, la stimulation de l’angiogenèse est permise par la synthèse de facteurs pro-angiogéniques comme des chimiokines ou des microARNs (miRs). CXCL12 (SDF-1α), est une chimiokine exprimée par les cellules endothéliales en situation d’ischémie. Le miR-126 (miR-126-3p et miR-126-5p) est impliqué dans l’angiogenèse en accélérant le recrutement de progéniteurs endothéliaux attiréspar CXCL12, en stimulant l’expression de ses récepteurs à la surface des cellules endothéliales. En revanche, le rôle de CXCL12 dans la régulation de l’expression des miR-126 et leur implication dans le processus angiogénique induite par cette dernière demeure inconnue. Durant ma thèse, je me suis intéressé à l’implication des miR-126 et des glycosaminoglycannes (GAGs) dans l’angiogenèse induite par CXCL12.Nos résultats montrent pour la première fois que CXCL12 induit l’expression du miR-126-3p in vitro dans les cellules HUVEC et ex vivo dans des aortes de rats. De plus, le miR-126-3p est nécessaire à la formation de réseaux vasculaires (in vitro et ex vivo) et au processus de migration des HUVEC induite par CXCL12. Par ailleurs, nous montrons que CXCL12 induit une diminution de l’expression protéique de SPRED-1 (une cible connue du miR-126-3p) et cette inhibition stimule de façon plus importante la formation de réseaux vasculaires induite par CXCL12. Enfin, nous montrons que les GAGs sont nécessaires à la formation de réseauxvasculaires (in vitro et ex vivo) induite par CXCL12
Ischemic diseases are one of the leading causes of death in the world. In ischemic tissue, in order to avoid tissue necrosis, angiogenesis is stimulated through pro-angiogenic factors synthesis such as chemokines or microRNAs (miRs). CXCL12 (SDF-1α), is a pro-angiogenic chemokine expressed by endothelial cells in ischemic conditions. miR-126 (miR-126-3p and miR-126-5p) is involved in angiogenesis by accelerating endothelial progenitor’s recruitment induced by CXCL12, by stimulating the expression of its receptors on the endothelial cells surface. On the other hand, the role of CXCL12 in miR-126 regulation and their involvement in angiogenic processes induced by CXCL12 remains unknown. During my thesis, I was interested in the involvement of miR-126 and glycosaminoglycans (GAGs) in CXCL12-induced angiogenesis. Our results showed for the first time that CXCL12 induces miR-126-3p expression in vitro in HUVEC and ex vivo in rat aorta. In addition, miR-126-3p is necessary for the formation of vascular networks (in vitro and ex vivo) and for CXCL12-induced HUVEC migration process. In addition, we showed that CXCL12 induces a decrease of SPRED-1 protein expression (aknown target of miR-126-3p) and this inhibition have stimulated the formation of vascular networks induced by CXCL12 more significantly. Finally, we showed that GAGs are necessary for the formation of vascular networks (in vitro and ex vivo) induced by CXCL12

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

27

Mallat, Youssef. "La régulation du cytosquelette et du métabolisme énergétique par mir-378 et 378* dans les cardiomyocytes." Paris 6, 2013. http://www.theses.fr/2013PA066604.

Full text

Abstract:

Les microARNs sont des régulateurs endogènes de l’expression protéique. MiR-378 et miR-378* se trouvent dans un intron du gène Ppargc1b qui code le co-activateur transcriptionnel PGC-1β, régulateur de la dépense énergétique et de la biogenèse mitochondriale. Ces deux miRs étant hautement exprimés dans les cellules cardiaques, nous avons voulu mieux comprendre leur rôle dans ces cellules et identifier leurs cibles à travers un crible protéomique. Nous avons surexprimé ces deux miRs dans des H9c2 et avons identifié 87 protéines sous exprimées en leur présence. Nos analyses bioinformatiques ont permis d’identifier 20 protéines prédites comme cibles des miRs, dont 10 ont été validées par Q-PCR et essais luciférase. Nos résultats montrent que ces miRs ciblent des protéines chaperonnes et/ou régulatrices du calcium impliquées dans le stress du réticulum endoplasmique (RE) comme la GRP78, la PPIA et la caluménine. MiR-378 inhibe également la lactate déshydrogénase A et réduit la prolifération cellulaire alors que miR-378* cible les protéines du cytosquelette : l’actine, la vimentine et la desmine. La surexpression de MiR-378* désorganise le cytosquelette de desmine dans le cardiomyocyte et induit une diminution de la surface du réseau mitochondrial, ainsi que des marqueurs de la chaîne respiratoire. Cette diminution est un effet direct de l’atteinte du réseau de desmine car son sauvetage par un vecteur AAV surexprimant la desmine bloque l’effet du miR. Nos résultats montrent que miR-378 et 378* établissent une lien entre le métabolisme énergétique, le remodelage du cytosquelette et les fonctions du RE via la régulation post-transcriptionnelle des protéines clés de ces voies
MicroRNAs are endogenous regulators of gene expression. MiR-378 and miR-378* are localized in the first intro of the Ppargc1b gene that codes the transcriptional co-activator PGC-1β, a regulator of energy expenditure and mitochondrial biogenesis. These miRs are highly expressed in cardiac cells. To better assess their role in cardiomyocytes, we identified miR-378 and 378* targets via a proteomic screen. We overexpressed these miRs in an H9c2 cell line and identified 87 down regulated proteins in their presence. Bioinformatic algorithms predicted 20 proteins as targets of the miRs. We validated 10 of them by Q-PCR and luciferase reporter assay. Our results show that these miRs target proteins involved in endoplasmic reticulum stress response such as chaperone and/or calcium buffering proteins GRP78, PPIA and calumenin. MiR-378 also targets lactate dehydrogenase A and impacts on cell proliferation whereas miR-378* targets cytoskeleton proteins actin, vimentin and desmin. MiR-378* disrupts the desmin network in the cardiomyocyte. Its overexpression decreases mitochondrial network area and the expression level of respiratory chain components. This decrease seems to be a direct effect of the damage to the desmin network since its rescue with a desmin-overexpressing-AAV blocks the deleterious effect of miR-378*. Our results show that the miR-378/378* hairpin establishes a connection between energy metabolism, cytoskeleton remodeling and endoplasmic reticulum function through post-transcriptional regulation of key proteins involved in theses pathways

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

28

Rau, Frédérique. "Étude de la dérégulation de miR-1 dans le coeur de patients atteints de dystrophies myotoniques." Strasbourg, 2011. http://www.theses.fr/2011STRA6043.

Full text

Abstract:

Les dystrophies myotoniques sont les formes les plus courantes de dystrophies musculaires observées chez l’adulte. Les patients souffrent de défauts de la conduction et du rythme cardiaques. Les DM sont dues à l’expression d’ARN mutés contenant des expansions de répétitions des nucléotides CUG ou CCUG. Il a été montré que ces expansions de répétitions interfèrent avec la fonction de MBNL1 et CUGBP1. Les microARN (miARN) jouent un rôle important dans le fonctionnement du cœur. Nous avons identifié une diminution significative de l’expression de miR-1 dans des échantillons de cœur de patients DM. En accord avec cette diminution, les cibles de miR-1 sont surexprimées au niveau protéique dans le cœur de patients DM. De plus, nous avons observé une diminution de l’expression de la forme mature de miR-1 alors que la quantité de son précurseur, pré-miR-1, est inchangée, suggérant un défaut de la maturation de pré-miR-1 dans le cœur de patients DM. La surexpression de longues répétitions CUG ou la déplétion de MBNL1 par shARN inhibent la maturation de pré-miR-1 suggèrant une régulation de la maturation de miR-1 par MBNL1. D’autre part, nous avons montré que la voie Lin28-TUT4 inhibe la maturation de pré-miR-1 par Dicer. Finalement, MBNL1 et Lin28 entrent en compétition pour la liaison de pré-miR-1 suggérant un modèle selon lequel MBNL1 protégerait l’uridylation de pré-miR-1 par TUT4 en empêchant Lin28 de se lier. En conclusion, nos résultats démontrent une dérégulation de la maturation d’un miARN chez les patients DM. Enfin, nous proposons que la diminution de miR-1 dans le cœur de patients DM puisse participer aux défauts cardiaques observés chez les patients DM
Myotonic Dystrophy (DM) is the most common form of muscular dystrophy in adult and is characterized by several symptoms including cardiac conduction abnormalities and arrhythmia resulting in sudden death. DM is caused by expansions of CUG or CCUG repeats which interfere with pre-mRNAs processing through dysfunction of the MBNL1 and CUGBP1 RNA-binding proteins. Micro-RNAs (miRNA) play an important role in heart functions. Using microarray and qRT-PCR, we identified a downregulation of miR-1, in heart samples of Myotonic Dystrophic patients. In agreement with decreased level of miR-1 we found that targets of miR-1 are up-regulated at the protein level in DM1. Importantly, while we found a down-regulation of the mature miR-1, we observed no changes in the quantity of pre-miR-1 both in DM1 cell models and patient heart samples. We demonstrated that expanded CUG repeats and shRNA-mediated depletion of MBNL1 inhibit exogenous and endogenous pre-miR-1 processing. Furthermore, we found that MBNL1 binds UGC motifs located within the pre-miR-1 loop. Next, we observed that Lin28 binds pre-miR-1 loop and promotes uridylation of pre-miR-1 by TUT4. Finally, we demonstrated that MBNL1 and Lin28 compete for pre-miR-1 binding suggesting a model in which MBNL1 protects pre-miR-1 from uridylation by Lin28-TUT4. In conclusion, our results demonstrate for the first time that miRNA maturation is altered in Myotonic Dystrophic patients, and suggest a novel function to MBNL1 as a regulator of miRNA processing and a new target of Lin28-TUT4: miR-1. We propose that the down-regulation of miR-1 may be involved in the heart defects observed in DM patients

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

29

Hoareau-Osman, Magali. "Caractérisation fonctionnelle des ARN nucléolaires U8 et U13 et des microARN du cluster miR-379/410." Toulouse 3, 2010. http://www.theses.fr/2010TOU30333.

Full text

Abstract:

Ces dernières années, le monde du non-codant a connu une formidable expansion grâce à la découverte de nouveaux petits ARNnc régulateurs chez les mammifères. Certains d'entre eux présentent des caractéristiques encore jamais observées puisqu'ils peuvent être tissu-spécifiques, répétés en tandem ou soumis à l'empreinte génomique parentale. Cependant, la fonction de beaucoup d'entre eux reste à ce jour inconnue. Nos travaux ont porté, par des approches de perte de fonction, sur la caractérisation fonctionnelle d'ARN appartenant à deux grandes familles de petits ARNnc : les ARN nucléolaires à boîtes C/D (snoARN C/D) et les microARN. Les snoARN C/D sont connus pour participer à la biogenèse des ARN ribosomiques (ARNr) et du petit ARN du spliceosome U6 (snARN U6). Afin d'étudier la fonction de deux snoRNP humaines, U8 et U13, nous avons développé une nouvelle technique d'inactivation de ces ARN C/D dans des cellules en culture, basées sur l'utilisation d'oligonucléotides antisens modifiés appelés LNA (Locked Nucleic Acids). Nous avons ainsi pu démontrer, pour la première fois, l'importance de snoRNP humaines pour la croissance cellulaire ainsi que leur rôle éventuel de chaperon dans des conditions de stress cellulaire. De plus, nous avons montré pour U8 une implication dans la biogenèse des ARN ribosomiques. Ces travaux constituent donc une première étape dans l'étude systématique des nombreux snoARN de mammifères dont la fonction est encore inconnue. Les microARN sont des régulateurs de l'expression des gènes à un niveau post-transcriptionnel. Nos travaux portent sur le cluster de microARN murin miR-379/410, codant pour 54 microARN et représentant près de 10% des microARN murins identifiés à ce jour. Il est situé au locus Dlk1-Dio3, une région ayant la particularité d'être soumise à l'empreinte génomique parentale, un mécanisme épigénétique qui conduit à une expression monoallélique des gènes, et ce de manière strictement dépendante de l'origine parentale du chromosome qui porte les allèles. Afin d'étudier la fonction des microARN du cluster miR-379/410, nous avons généré une lignée de souris knockout pour ce cluster. Nos premiers résultats montrent que ces microARN sont importants pour la viabilité post-natale des souris ainsi que pour leur croissance. Ces travaux constituent une avancée importante dans la compréhension du rôle des miARN chez les mammifères
In the past few years, non-coding world has greatly expanded thanks to the discovery of new small regulatory ncRNAs in mammals. Some of them have particular features, as they may be tissue-specific, repeated in tandem or subjected to genomic imprinting. However, the function of many of them remains unknown. Our work has focused, using loss of function approaches, on the functional characterization of RNAs from two large families of small ncRNAs: C/D box small nucleolar RNAs (snoRNAs) and microRNAs. C/D snoRNAs are known to participate in the biogenesis of ribosomal RNAs (rRNAs) and small spliceosome U6 RNA (U6 snRNA). To investigate the function of two human snoRNPs, U8 and U13, we developed a new inactivation technique of C/D RNAs in cultured cells, using modified antisense oligonucleotides called LNA (Locked Nucleic Acids). We were able to demonstrate, for the first time, the importance of human snoRNPs for the cell growth and their possible role as a chaperone under conditions of cellular stress. Furthermore, we showed the involvement of U8 in the biogenesis of ribosomal RNAs. Thus, this work is a first step in the systematic study of many mammalian snoRNAs whose function is still unknown. MicroRNAs are regulators of gene expression at a posttranscriptional level. Our work focused on the cluster of murine microRNAs miR-379/410, encoding 54 miRNAs that represent nearly 10% of murine miRNAs identified to date. It is located in the DLK1-DIO3 locus, a region subjected to genomic imprinting, an epigenetic mechanism that leads to monoallelic expression of genes dependent on the parental origin of chromosome that carries the alleles. To study the function of microRNAs cluster miR-379/410, we generated a knockout mouse line for that cluster. Our first results show that these miRNAs are important for mice postnatal viability as well as for their growth. This work represents an important advance in understanding miRNAs roles in mammals

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

30

Cornejo, Pierre-Jean. "Implication de la voie p53 et du microARN miR-34a dans la résistance à l'insuline adipocytaire." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2014. http://www.theses.fr/2014NICE4115.

Full text

Abstract:

La dysfonction du tissu adipeux lors de l’obésité participe au développement de la résistance à l’insuline. L’activation de p53 dans l’adipocyte a récemment été impliquée dans la résistance à l’insuline lors de l’obésité, par des mécanismes inconnus. Le microARN miR-34a participe à la réponse cellulaire induite par p53 dans différents types cellulaires. Parmi ses cibles figurent Vamp2 et Sirt1, deux protéines impliquées respectivement dans la translocation des transporteurs de glucose (Glut4) et la sensibilité à l’insuline. Nous montrons que l’expression de p53 est augmentée dans les adipocytes de souris rendues obèses par un régime riche en graisses. Nous observons une augmentation du nombre d’adipocytes avec des dommages à l’ADN et également plus de dommages dans les adipocytes provenant des souris obèses. L’induction de dommage à l’ADN par la doxorubicine et la stabilisation de p53 par la nutline inhibe le transport de glucose induit par l’insuline et la signalisation de l’insuline dans des adipocytes en culture d’origine murine et humaine. En accord avec l’activation de p53 dans l’adipocyte lors de l’obésité, nous montrons que l’expression de miR-34a est augmentée dans le TA et les adipocytes de souris obèses. La surexpression de miR-34a dans des adipocytes 3T3-L1 inhibe le transport de glucose en réponse à l’insuline, la signalisation insulinique, la lipolyse, et augmente l’expression de l’ARNm de la leptine. Nous montrons que l’inhibition de la signalisation insulinique est due à l’induction de l’ARNm et de la tyrosine phosphatase PTP1B par miR-34a. L’inhibition de la lipolyse s’accompagne d’une inhibition d’expression d’ATGL, l’enzyme limitante de la lipolyse
Dysfunction of adipose tissue in obesity is involved in the development of insulin resistance. Activation of p53 in adipocytes has recently been implicated in insulin resistance in obesity, by unknown mechanisms. MicroRNA miR-34a is involved in the cellular response induced by p53 in different cell types. Among its targets, VAMP2 and Sirt1are two proteins involved respectively in the translocation of glucose transporters (Glut4) and the insulin sensitivity. We show that p53 expression is increased in adipocytes of obese mice. We are seeing an increased number of fat cells with DNA damage and also more damage in adipocytes from obese mice. The induction of DNA damage by doxorubicin and stabilization of p53 by Nutline inhibits glucose transport induced by insulin and the insulin signaling in murine and human adipocytes in vitro. Consistent with the p53 activation in adipocytes in obesity, we show that the expression of miR-34a is increased in the TA and obese mice adipocytes. Overexpression of miR-34a in 3T3-L1 adipocytes inhibits glucose transport in response to insulin, insulin signaling, lipolysis, and increases expression of the mRNA of leptin. We show that the inhibition of the insulin signaling is due to induction of the mRNA and the tyrosine phosphatase PTP1B by miR-34a. Inhibition of lipolysis is accompanied by inhibition of expression of ATGL, the rate-limiting enzyme in lipolysis. Common to all of these effects is the control of the expression of these proteins by Sirt1, a NAD + dependent deacetylase. However, inhibition of expression of miR-34a by Sirt1 can not account for all the observed effects

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

31

Beldiman, Cornelia. "Role of miR-205 in Breast Cancer Development." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T094.

Full text

Abstract:

Au cours de ma thèse, j’ai étudié la contribution de miR-205 dans le développement du cancer du sein. MiR-205 a été choisi suite à l'analyse comparative de l'expression du miRome entre la lignée « normale » MCF10A et une lignée cancéreuse dérivée MCF10A-CA1a. J’ai démontré que l’expression de miR-205 augmente durant la tumorigenèse tandis que miR-205 est non détectable dans la lignée cellulaire ayant un potentiel métastatique. De plus, j’ai montré que les cellules souches du cancer du sein expriment miR-205, contrairement à la population non souche. En utilisant des cultures de cellules épithéliales 3D, j’ai corrélé la fonction tumorigène de miR-205 à la répression de l'apoptose et non à une prolifération accrue. De plus, le niveau d'expression de la E-Cadhérine dépend de la quantité de miR-205 dans les différentes lignées cellulaires de MCF10A. Les études de perte de fonction suggèrent que la E-Cadhérine est impliquée dans le phénotype acini miR-205-Dépendant, en corrélation avec la transformation de cellules épithéliales du sein. L’ensemble de ces résultats met en lumière la complexité et la duplicité des miRNA durant le processus de cancérisation. Ce type d’étude ouvre des perspectives d’utilisation des miRNA dans le cadre des diagnostics et/ou thérapeutiques
During the time I was working on my thesis, I aimed to understand the role of miR-205 in breast cancer development. MiR-205 was chosen from the comparative analysis of total micro-RNAs expression in non-Transformed and tumorigenic cell lines of the MCF10A breast epithelial cell model. I demonstrated the complexity of miR-205 functions during breast epithelial cell transformation by showing miR-205 overexpression in transformed non-Invasive cell lines and miR-205 down-Regulation in cell line with metastatic potential. Moreover, we demonstrated increased level of miR-205 expression in breast cancer stem cells in comparison with non-Stem cells. Using 3D cultures of breast epithelial cells, I succeeded to correlate the tumorigenic function of miR-205 with its role in modulation of acinar size, and to attribute it to the apoptosis repression but not increased proliferation. Further, I was able to show that miR-205 exercises its oncogenic functions via targeting ZEB1, an inhibitor of E-Cadherin. Indeed, E-Cadherin expression level depends on the amount of miR-205 in different MCF10A cell lines. Downregulating E-Cadherin restored normal acinar morphology in miR-205 expressing cells, consistent with E-Cadherin being involved in the miR-205-Dependent acini phenotype that correlates with tumorigenic breast epithelial cell transformation

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

32

Rainone, Sara. "Étude du rôle physiologique et pathologique de la famille miR-132/212 dans le cerveau." Doctoral thesis, Université Laval, 2018. http://hdl.handle.net/20.500.11794/32444.

Full text

Abstract:

La maladie d'Alzheimer (MA) est la forme de démence la plus fréquente dans le monde. Au niveau microscopique, le cerveau des patients atteints par la MA présente deux principales caractéristiques pathologiques : les plaques amyloïdes, constituées d'agrégats du peptide Aβ (Amyloïde Bêta), et les dégénérescences neurofibrillaires, formées par des agrégats de la protéine Tau anormalement hyperphosphorylée. Parmi les facteurs endogènes qui pourraient participer à la progression de la MA, il y a les microARNs (miRs). Les miRs sont des petits ARNs non codants qui régulent l’expression de gènes cibles au niveau post-transcriptionnel. En particulier, la famille miR-132/212 est fortement régulée à la baisse dans le cerveau des patients atteints de la MA. Des études précédentes ont démontré que, chez la souris 3xTg-AD, un modèle de la MA, la délétion génétique de la famille miR-132/212 conduit à une augmentation de la phosphorylation et de l’agrégation de la protéine Tau, les deux mécanismes présumés à la base de la formation des dégénérescences neurofibrillaires. En dehors de son rôle dans la MA, la famille miR-132/212 est également impliquée dans plusieurs troubles neurologiques. Notamment, son niveau d’expression est dérégulé dans d’autres pathologies neurodégénératives, telles que la démence fronto-temporale et la maladie de Parkinson. Il est donc possible que la famille miR-132/212 contribue au processus neurodégénératif de ces pathologies. Dans ce contexte, les travaux présentés visent à étudier le rôle de la famille miR132/212 dans la MA et, plus généralement, dans le cerveau. Tout d’abord, puisque la famille miR-132/212 a déjà un rôle connu dans la formation des dégénérescences neurofibrillaires, nous avons évalué son implication dans la formation des plaques amyloïdes, deuxième caractéristique pathologique de la MA. Nous avons ainsi démontré que la délétion génétique de la famille miR-132/212 favorise la production du peptide Aβ et la formation de plaques amyloïdes chez le modèle murin 3xTg-AD. En utilisant une approche d’ARN-Seq et de bio-informatique, nous avons identifié des gènes faisant partie du réseau de la famille miR-132/212 qui ont des rôles dans la régulation du métabolisme de l'Aβ, y compris Tau, Mapk et Sirt1. En accord avec ces résultats, nous avons montré que la modulation du miR-132, ou de sa cible Sirt1, peut réguler directement la production d’Aβ dans les cellules. Finalement, nous avons démontré que les niveaux de la famille miR-132/212 corrèlent avec la quantité des plaques amyloïdes chez l'Homme. Ensuite, afin d’élucider le rôle de la famille miR-132/212 dans le cerveau, nous nous sommes concentrés sur l’identification de cibles régulées par cette dernière. Dans un premier temps, cette analyse a été conduite dans plusieurs modèles cellulaires in vitro, dans lesquels le rôle du miR-132, un des deux composants de la famille, a été spécifiquement étudié. Dans ce contexte, nous avons démontré que les cibles régulées par le miR-132 sont peu nombreuses et spécifiques au type cellulaire considéré. Dans un deuxième temps, l’analyse d’identification des cibles a été conduite dans un modèle de souris de délétion conditionnelle pour la famille miR-132/212 que nous avons spécifiquement généré. Nous avons ainsi caractérisé des cibles et des réseaux moléculaires modulés par la famille miR-132/212 dans ce modèle. Pris ensemble, ces résultats suggèrent que i) Le réseau de la famille miR-132/212, dont Sirt1 et probablement d'autres gènes cibles, participe à la production du peptide Aβ et la formation de plaques amyloïdes dans la MA ; ii) Même si le miR-132 peut potentiellement cibler un grand nombre de gènes simultanément, son ciblage est sélectif et spécifique au contexte cellulaire étudié. Enfin, les résultats obtenus mettent en évidence un ensemble de nouvelles cibles et de voies de signalisation régulées par la famille miR-132/212. En conclusion, ces travaux contribuent à l'avancement des connaissances du rôle physiologique et pathologique de la famille miR-132/212 dans le cerveau.
Alzheimer's disease (AD) is the most common form of dementia in the world. At the microscopic level, two main pathological features characterize the brain of AD patients: amyloid plaques, consisting of aggregates of the Aβ (Amyloid Beta) peptide, and neurofibrillary tangles, formed by aggregates of abnormally hyperphosphorylated Tau protein. Endogenous factors that may be involved in the progression of AD include microRNAs (miRs). MiRs are small non-coding RNAs that regulate the expression of target genes at the post-transcriptional level. In particular, the miR-132/212 family is strongly downregulated in the brain of AD patients. Previous studies have shown that in the 3xTg-AD mouse model of AD, the genetic deletion of the miR-132/212 family leads to an increase in phosphorylation and aggregation of Tau protein, two mechanisms leading to the formation of neurofibrillary tangles. Apart from its role in AD, the miR-132/212 family is also involved in several neurological disorders. In particular, its level of expression is deregulated in other neurodegenerative pathologies, such as frontotemporal dementia and Parkinson's disease. It is therefore possible that the miR-132/212 family contributes to the neurodegenerative process of these pathologies. In this context, the work presented aims to study the role of the miR-132/212 family in AD and, more generally, in the brain. First of all, since the miR-132/212 family already has a known role in the formation of neurofibrillary tangles, we wanted to evaluate its involvement in the formation of the other major pathological feature of AD: the amyloid plaques. We have demonstrated that the genetic deletion of the miR-132/212 family promotes Aβ production and amyloid plaque formation in the 3xTg-AD mice. Using RNA-Seq and bioinformatics, we identified genes of the miR-132/212 network with documented roles in the regulation of Aβ metabolism, including Tau, mapk, and sirt1. Consistent with these findings, we show that the modulation of miR-132, or its target sirt1, can directly regulate Aβ production in cells. Finally, we have shown that miR-132/212 levels correlate with the amount of amyloid plaques in humans. Then, in order to elucidate the role of the miR-132/212 family in the brain, we focused on identifying targets regulated by the miR-132/212 family. In a first step, this analysis was conducted in several in vitro cell models, in which the role of miR-132, one of two components of the family, was specifically studied. In this context, we have demonstrated that the targets regulated by miR-132 are few and specific to the cell type considered. In a second step, the target identification analysis was conducted in a conditional knockout mouse model for the miR-132/212 family that we specifically generated. We have therefore characterized the molecular targets and networks modulated by the miR-132/212 family in this model. Taken together, these results suggest that i) miR-132/212 network, including Sirt1 and likely other target genes, contributes to abnormal Aβ metabolism and senile plaque deposition in AD; ii) Although miR-132 can potentially target a large number of genes simultaneously, its targeting is selective and specific to the cellular context studied. Finally, the results obtained highlight a set of new targets and signalling pathways regulated by the miR-132/212 family. In conclusion, this work contributes to the advancement of the knowledge of the physiological and pathological role of the miR-132/212 family in the brain.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

33

Abdel, Salam Ibrahim Mohamed Sherine. "A duo implication of miR-134 microRNA and LIM Kinase1 protein in neuropathic pain modulation of the rat spinal cord." Thesis, Bordeaux 2, 2012. http://www.theses.fr/2012BOR21932/document.

Full text

Abstract:

Les douleurs neuropathiques ayant une origine à la suite de blessures traumatiques du SNC ou du SNP sont particulièrement difficiles à traiter en utilisant les moyens thérapeutiques actuellement disponibles. Il est donc nécessaire d'identifier de nouvelles stratégies thérapeutiques. Notre objectif était donc de définir les mécanismes impliqués dans ces douleurs neuropathiques. LIMK1 est l'un des acteurs possibles de la réorganisation épinière qui caractérise les lésions nerveuses. Une fonction très caractérisé de cette protéine, est la phosphorylation d'une famille de protéines appelées « cofilines ». Sa phosphorylation, ce qui induit la réorganisation du cytosquelette d'actine. Récemment, il a été montré qu’un microARN (miARNs) nomé miR-134 régule l'expression de LIMK1 en se liant au messager de LIMK1 (ARNm), inhibant sa traduction en protéine physiologiquement active. Notre hypothèse était que la régulation de LIMK1 par miR-134 pourrait jouer un rôle essentiel dans la sensibilisation à la douleur. Cette régulation pourrait ainsi être liée non seulement à la modulation neurochimique neuronale mais aussi à la plasticité fonctionnelle associée. Au cours de cette thèse, l’HIS a montré une diminution de miR-134 chez des rats SNL (neuropathique), cette sous-expression était concomitante à une augmentation de LIMK1 illustrée par l’IHC. Il est important de noter ici que l'ISH est une méthode de détection connue récemment et qui a été identifiée pour visualiser les miARNs. Des différents protocoles de l’HIS ont également été discutés dans le cadre de cette thèse. Ce résultat a été confirmé par Le qRT-PCR . Par la suite, afin de vérifier les changements comportementaux douloureux induits par miR-134 et LIMK1. Nous avons effectués des injections intrathécales de siRNA anti-LIMK1 pour inhiber l'expression endogène de LIMK1 chez les SNL. C’était intéressant de ne pas avoir trouvé aucun changement comportemenal chez les SNL après ce type d’injection. Une surexpression artificielle de miR-134 en utilisant un précurseur de miR-134 (premiR-134) chez les SNL a montré le même effet. Ensuite, nous avons essayé d'effectuer les mêmes injections chez les Sham (control), et c’était plus intéressant de trouver que ces injections (siRNA LIMK1 et premiR-134) ont provoqué une hypersensibilité douleureuse chez les sham. Cela a été illustré au moyen de deux tests de comportement; le Von Frey (VF) et la distribution pondérale dynamique (DWB). Pour etudier l'effet inverse, nous avons inhibé miR-134 en utilisant une sonde spécifique KD (Knock-Down); une diminution significative inattendue dans le seuil de retrait a été observée avec VF et DWB. qRT-PCR dans la plupart de ces cas, a confirmé la corrélation in vivo entre miR-134 et LIMK1. Enfin, nous avons cherché un mécanisme d'action possible qui pourrait réguler cette modulation. Des données récentes publiées ont montré une implication de l'ADF/cofiline sur le trafic des récepteurs AMPA (AMPAR). En accord avec les résultats mentionnés ci-dessus, la transfection du KD de miR-134 a montré une diminution dans AMPAR adressés à la membrane plasmique. Tout ensemble ces données suggèrent que l'effet antinociceptif de KD de miR-134 et la surexpression de LIMK1 sont indirectement régulé par l'insertion des AMPAR à la membrane plasmique.Il semble que miR-134 exerce un effet différent sur la douleur neuropathique que miR-103, discuté aussi dans le cadre de cette thèse. Il était demontré comme un régulateur de plusieurs cibles, les trois sous-unités formant les canaux calciques de type-L « Cav1.2 LTC ». MiR-103 a été trouvé également réprimés chez les SNL. La surexpression de miR-103 soulage la douleur neuropathique. Contrairement au miR-134, miR-103 exerce un rôle pronociceptive pendant la douleur neuropathique
Pains having a neuropathic origin following CNS or PNS traumatic injury are particularly difficult to treat using the actually available therapeutic means. It is thus necessary to identify new therapeutic strategies. Hence, our aim was to define the mechanisms implicated in these neuropathic pains. Nervous lesions are characterised by an anatomical reorganization of the neuronal network of the dorsal horn. Neurochemical alterations are also involved. Some of the molecular mechanisms underlying the neuronal plasticity (a main feature of neuropathic pain) have been emphasized here by a variety of complementary technical approaches. LIMK1 is one of the possible actors of this reorganization. Among this protein’s known functions, and the most characterized is the phosphorylation of a family of proteins known as cofilins. Their phosphorylation induces the reorganization of actin cytoskeleton. Recently, it has been shown that a miR-134 miRNA regulates LIMK1 expression by binding to the LIMK1 messenger, inhibiting its translation into physiologically active protein. Our hypothesis is that LIMK1 regulation by miR-134 might play an essential role in pain sensitization by modulating neuron neurochemical reorganization and the associated functional neuronal plasticity. Firstly, by means of IHC and ISH, we studied miR-134/LIMK1 distribution within the dorsal horn of the spinal cord in sham animal (control group) and in neuropathic pain model (SNL model). Important to note here that ISH is a known detection method recently identified to visualize miRNA. Different protocols of ISH were discussed in a part of this thesis. ISH showed a decrease in miR-134 expression in SNL rats concomitantly with an increase in LIMK1 illustrated by IHC. This finding has been confirmed by qRT-PCR techniques. Afterward, in order to check for the possible behavioural-induced changes of miR-134 and LIMK1. We intrathecally injected an anti-LIMK1 siRNA to inhibit endogenous LIMK1 expression in SNL rats. Interestingly no significant changes in pain behaviour have been observed. Artificial overexpression of miR-134 using a PremiR-134, showed the same effect. Then we tried to perform the same injections on sham rats, and more interestingly, siRNA LIMK1 and premiR-134 evoked pain hypersensitivity in shams rats. This was illustrated by means of two behaviour tests; Von Frey (VF) and the Dynamic Weight bearing (DWB). To explore the reverse effect, we inhibited miR-134 using a specific KD probe in SNL rats; unexpectedly a significant decrease in pain withdrawal threshold was observed with VF and DWB. qRT-PCR in most cases confirmed the in vivo correlation between miR-134 and LIMK1. Finally, we searched for the possible mechanism of action that could regulate this modulation. Recent published data showed an involvement of ADF/cofilin on AMPAR trafficking. In line with the above mentioned findings, miR-134 KD transfection showed a decrease in AMPAR addressed to the plasma membrane. Altogether suggest that the antinociceptive effect of miR-134 KD and LIMK1 overexpression are mediated by AMPAR insertion at the plasma membrane. It seems that miR-134 exerts a different effect on neuropathic pain than miR-103 another miRNA discussed within the frame of this thesis. MiR-103 has been proved to regulate multiple targets, the three subunits forming Cav1.2 LTC. Pain sensitization involves Cav1.2 activation which consequently alters gene expression during this form of plasticity. MiR-103 was found downregulated also in the SNL model. Conversely to miR-134, overexpression of miR-103 partially alleviates pain. It decreases pain withdrawal threshold of the Von Frey test. Unlike miR-134, miR-103 exerts a pronociceptive role during neuropathic pain

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

34

Dubes, Sandra. "Rôle du microARN miR-124 dans la plasticité homéostatique via le contrôle de l’expression de la synaptopodine et des récepteurs AMPA dans les neurones de l'hippocampe." Thesis, Bordeaux, 2019. http://www.theses.fr/2019BORD0104.

Full text

Abstract:

Le synaptic scaling est une forme de plasticité homéostatique par lequel les synapses ajustent leur efficacité pour compenser des variations normales ou pathologiques de l'activité neuronale notamment lors des maladies neurodégeneratives ou suite à la perte d’afférences sensorielles après une lésion. Dans un modèle expérimental classique, le traitement chronique des neurones primaires avec la tétrodotoxine (TTX) pour bloquer la propagation des potentiels d'action présynaptiques induit une augmentation significative de l'amplitude des courants miniatures excitateurs transmis par les récepteurs du glutamate AMPA postsynaptiques. Plusieurs voies de signalisation ont été proposées, dont celle impliquant les microARNs (miRs), de petits ARN non-codants qui inhibent la traduction des protéines en se liant aux ARN messagers cibles. Dans ce contexte, nous avons exploré l'hypothèse que le microARN, miR-124, fortement exprimé dans le cerveau, pourrait être un régulateur important de l'homéostasie synaptique en contrôlant l'expression de la protéine synaptopodine, une protéine structurante des épines dendritiques et indispensable à l'expression du synaptic scaling.En combinant des approches de RTq-PCR, d'immunocytochimie et d'électrophysiologie in vitro, nous avons montré dans un premier temps que la privation globale de l'activité des neurones primaires d’hippocampe diminuait le niveau d'expression de miR-124 et augmentait celui de la synaptopodine et des récepteurs AMPA dont la sous-unité GluA2 est une autre cible de miR-124. Par ailleurs, en rendant des synapses individuelles inactives via l’expression présynaptique de la toxine tétanique, nous avons observé que le recrutement synaptique des récepteurs AMPA et de la synaptopodine était spécifique de ces synapses, suggérant une régulation homéostatique locale. Dans un deuxième temps, nous avons trouvé que la surexpression de miR-124 ou l’inhibition de son interaction avec l’ARNm de la synaptopodine ou de GluA2 bloquaient la réponse synaptique homéostatique induite par le traitement TTX. Enfin, des expériences de FRAP ont suggéré que la synaptopodine influençait le trafic des récepteurs AMPA à la membrane probablement en les stabilisant à la synapse, ce qui expliquerait ainsi son rôle pendant la plasticité homéostatique
Synaptic scaling is a form of homeostatic plasticity where synapses adjust their own efficacy to compensate for normal or pathological variations in neuronal activity such as neurodegenerative disorders or sensory deprivation after a lesion. In a well-established paradigm, the chronic application of tetrodotoxin (TTX) in primary neurons, to block presynaptic action potential propagation, induces a significant upscaling of miniature excitatory postsynaptic currents mediated-AMPA receptors. Numerous regulators of this plasticity have been identified including microRNAs (miR), which are small endogenous non-coding RNAs, inhibiting protein translation by binding to mRNA targets. This led us to hypothesize that the most highly expressed microRNA in the brain, miR-124, could be an important regulator of homeostatic scaling by controlling the expression of synaptopodin, a structural protein of dendritic spines playing a crucial role in homeostatic plasticity.By combining qRT-PCR, immunocytochemistry and in vitro electrophysiology approaches, first we showed that a global 48hrs TTX treatment in hippocampal primary neurons led to a decrease in miR-124 level and an increase in the expression of synaptopodin and synaptic AMPA receptors containing the GluA2 subunit which is another miR-124 target. Moreover, we observed that the synaptic accumulation of AMPA receptors and synaptopodin could be synapse-specific by expressing the tetanus toxin to block the activity of individual presynapses, which suggested a local homeostatic regulation. Importantly, we found that overexpressing miR-124 or inhibiting its interaction with synaptopodin or GluA2 mRNAs blocked the synaptic homeostatic response. In addition, FRAP experiments suggested that synaptopodin controlled AMPA receptor trafficking at the membrane by probably retaining them in dendritic spines, which could explain its role during homeostatic plasticity

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

35

Boukrout, Nihad. "Rôle de la boucle de régulation négative MUC4-miR-210-3p dans la cancérogenèse pancréatique et la chimio-résistance." Thesis, Université de Lille (2022-....), 2022. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/EDBSL/2022/2022ULILS003.pdf.

Full text

Abstract:

Contexte : l'adénocarcinome pancréatique (PDAC) est un cancer mortel dontle pronostic est extrêmement sombre. La mucine membranaire MUC4 estnéoexprimée dans les lésions néoplasiques pancréatiques précoces et est associéeà la progression du PDAC et à la chimiorésistance. Dans les cancers, les microARNs(miARNs, petits ARNs non codants) sont des régulateurs cruciaux de lacancérogenèse, de la réponse aux chimiothérapies et même des processusmétastatiques. Dans cette étude, nous avons voulu caractériser les miARNs activésen aval de la signalisation associée à MUC4 dans l'adénocarcinome pancréatique et de mettre en évidence leurs rôles dans la cancérogenèse pancréatique et la résistance aux chimiothérapies.Méthodes : Afin d’identifier les miARNs potentiellement régulés par MUC4, unmiRnome a été réalisé sur les cellules cancéreuses invalidées pour MUC4 (MUC4-KD) et leurs contrôles Mock. Nous avons sélectionné, pour cette étude, le miR-210-3p qui est sous exprimé suite à l’invalidation de MUC4. Nous avons ensuite vouludéterminer ses rôles biologiques dans les PDACs. Le niveau d'expression de miR-210-3p a été analysé par RT-qPCR dans des lignées cellulaires cancéreuses pancréatiques (PANC89, PANC89 Mock et MUC4-KD, PANC-1 et MiaPACA-2), ainsi que dans des tissus de souris et de patients. La régulation réciproque entre MUC4 etmiR-210-3p a été étudiée par des tests fonctionnels tels que des mesures d’activité luciférase et des expériences d'immuno-précipitation de la chromatine. Des lignées cellulaires exprimant stablement le miR-210-3p ou un anti-miR-210-3p ont été établies en utilisant la technologie Crispr/Cas9 ou la transduction lentivirale. Nous avons évalué l'activité biologique de miR-210-3p in vitro en mesurant la prolifération et la migration cellulaire et in vivo en mesurant la croissance tumorale après xénogreffe sous-cutanée des cellules Capan-1 LV-miR-210-3p. Enfin, nous avons évalué l’effet de miR-210-3p sur la réponse aux chimiothérapies gemcitabine et FOLFIRINOX par la réalisation de tests MTT.Résultats : L’invalidation de MUC4 induit une baisse significative de l’expression de miR-210-3p dans les cellules cancéreuses pancréatiques PANC89MUC4-KD. Le miR-210-3p est surexprimé dans les PDACs et son expression est corrélée à l'expression de MUC4 dans les cellules cancéreuses pancréatiques, dans des échantillons de tissus PDAC humains, ainsi que dans des tissus murins du modèle préclinique Pdx1-Cre ; LstopL-KrasG12D développant des lésions PanINs.MUC4 active transcriptionnellement l’expression de miR-210-3p via l’altération de la voie de signalisation NF-κB. Des expériences d'immunoprécipitation de la chromatine ont montré la liaison de la sous-unité p50 de NF-κB sur les régions promotrices dumiR-210-3p. Nous avons mis en évidence une régulation réciproque puisque le miR-210-3p réprime l'expression de MUC4 transcriptionnellemment via l’inhibition de la voie du TGF-β SMAD dépendante et post-transcriptionnellement via le 3’UTR. La surexpression transitoire et stable de miR-210-3p dans les cellules PANC89, PANC-1 et MIA PaCa-2 conduit à une baisse significative de la prolifération et de la migration cellulaire. En revanche l’anti-miR-210-3p induit les effets inverses. Enfin,nous avons montré que le miR-210-3p inhibe la croissance et la prolifération des tumeurs pancréatiques in vivo. Nos résultats préliminaires suggèrent également un rôle de miR-210-3p dans la réponse aux chimiothérapies.Conclusion : Nous avons mis en évidence pour la première fois l’existence d’une boucle de régulation entre une mucine et un miARN [...]
Background: Pancreatic adenocarcinoma (PDAC) is a deadly cancer with anextremely poor prognosis. MUC4 membrane-bound mucin is neoexpressed in earlypancreatic neoplastic lesions and is associated with PDAC progression andchemoresistance. In cancers, miRNA (small noncoding RNAs) are crucial regulatorsof carcinogenesis, chemotherapy response and even metastatic processes. In thisstudy, we aimed at identifying and characterizing miRNAs activated downstream ofMUC4-associated signaling in pancreatic adenocarcinoma. MiRnome analysiscomparing MUC4-KD versus Mock cancer cells showed that MUC4 inhibitionimpaired miR-210-3p expression. Therefore, we aimed to better understand themiR-210-3p biological roles.Methods: miR-210-3p expression level was analyzed by RT-qPCR in PDACderivedcell lines (PANC89 Mock and MUC4-KD, PANC-1 and MiaPACA-2), as wellas in mice’s and patients’ tissues. The MUC4-miR-210-3p regulation wasinvestigated using luciferase reporter construct and chromatin immunoprecipitationexperiments. Stable cell lines expressing miR-210-3p or anti-miR-210-3p wereestablished using Crispr/Cas9 technology or lentiviral transduction. We evaluated thebiological activity of miR-210-3p in vitro by measuring cell proliferation and migrationand in vivo using a model of subcutaneous xenograft.Results: miR-210-3p expression is correlated with MUC4 expression inPDAC-derived cells and human samples, and in pancreatic PanIN lesions of Pdx1-Cre; LstopL-KrasG12D mice. MUC4 enhances miR-210-3p expression levels viaalteration of the NF-κB signaling pathway. Chromatin immunoprecipitationexperiments showed p50 NF-κB subunit binding on miR-210-3p promoter regions.We established a reciprocal regulation since miR-210-3p repressed MUC4expression via its 3′-UTR. MiR-210-3p transient transfection of PANC89, PANC-1and MiaPACA-2 cells led to a decrease in cell proliferation and migration. Thesebiological effects were validated in cells overexpressing or knocked-down for miR-210-3p. Finally, we showed that miR-210-3p inhibits pancreatic tumor growth andproliferation in vivo.Conclusion: We identified a MUC4-miR-210-3p negative feedback loop inearly-onset PDAC, but also revealed new functions of miR-210-3p in both in vitro andin vivo proliferation and migration of pancreatic cancer cells, suggesting a complexbalance between MUC4 pro-oncogenic roles and miR-210-3p anti-tumoral effects

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

36

Gaudelot, Kelly. "Rôle de miR-21 dans la progression tumorale et la chimiorésistance des carcinomes rénaux à cellules claires : étude de la boucle de régulation entre miR-21 et PPARα." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S011/document.

Full text

Abstract:

Le carcinome rénal à cellules claires (cRCC) est le principal type histologique de carcinome rénal et l'une des tumeurs les plus résistantes à la chimio et à la radiothérapie. L'absence de biomarqueurs pour la détection précoce et pour le suivi des patients est responsable d'un mauvais pronostic. Il est nécessaire d'identifier de nouveaux biomarqueurs et des cibles thérapeutiques pour améliorer la prise en charge des patients. Les microARNs, des petits ARN non codants de 22 nucléotides, qui ont été précédemment montrés comme favorisant l'initiation et la progression tumoral, semblent être de bons candidats. Nous avons focalisé notre étude sur (i) miR-21 qui est le principal oncomiR surexprimé dans le cRCC et (ii) le récepteur nucléaire PPARα (Peroxisome Proliferator Activated Receptor), l'une des cibles de miR-21.D'une part, sur une cohorte de 99 échantillons de cRCC primaires, nous avons montré que l'expression de miR-21 était plus élevée dans les tissus cancéreux que dans les tissus non tumoraux adjacents. In vitro, miR-21 est également surexprimé dans les lignées cellulaires de carcinomes rénaux comparées à la lignée cellulaire épithéliale HK-2 provenant de tubes proximaux humains. De plus, nous avons également montré que la surexpression de miR-21 augmente les propriétés de migration et d'invasion des cellules cancéreuses rénales ainsi que les voies de signalisation prolifératives et anti-apoptotiques, alors que des résultats opposés ont été observés en utilisant une stratégie d'inhibition anti-miR-21. Enfin, nous avons évalué le rôle du miR-21 dans la chimiorésistance du cRCC et montré, en outre, que l'inhibition de miR-21 augmentait significativement la chimiosensibilité au paclitaxel, au 5-fluorouracile, à l'oxaliplatine et au dovitinib, diminuait l'expression des transporteurs à efflux MRP1-6/ABCC1-6 et augmentait l'expression des transporteurs à influx SLC22A1/OCT1, SLC22A2/OCT2 et SLC31A1/CTR1. Ces résultats ont permis la publication d'un article dans Tumor Biology se trouvant en annexe.D'autre part, dans les tissus de patients atteints de cRCC, nous avons montré pour la première fois que la surexpression de miR-21 est en corrélation avec une perte d'expression de PPARα. In vitro, nous avons montré que miR-21 cible le 3'-UTR de PPARα et diminue son expression protéique et que la surexpression de miR-21 diminue l'activité transcriptionnelle de PPARα. En outre, la surexpression et l'activation de PPARα diminuent l'expression de miR-21. En effet, PPARα interagit avec les facteurs de transcription AP-1 et NF-κB et empêche ainsi leur liaison au promoteur de miR-21 diminuant ainsi sa transcription.En conclusion, nous avons montré que (i) miR-21 est un acteur clé de la progression du cancer du rein et joue un rôle important dans la résistance aux chimiothérapies et (ii) qu'il existe une boucle de régulation négative entre miR-21 et PPARα dans le cRCC
Renal clear cell carcinoma (cRCC) is the major histological type of renal carcinoma and one of the most chemo- and radio-resistant tumors. The absence of biomarkers for early detection and for monitoring patients is responsible of a poor prognosis. It is necessary to identify new biomarkers and therapeutic targets to improve patient care. MicroRNAs, small noncoding RNAs of 22 nucleotides, which have been previously shown to promote malignant initiation and progression, appear to be good candidates.We focused our study on (i) miR-21 which is the main overexpressed oncomirs in cRCC and (ii) the nuclear receptor PPARα (Peroxisome Proliferator Activated Receptor), one of miR-21 targets.In one hand, by using a cohort of 99 primary cRCC samples, we showed that miR-21 expression in cancer tissues was higher than in adjacent non-tumor tissues. In vitro, miR-21 was also overexpressed in renal carcinoma cell lines compared to HK-2 human proximal tubule epithelial cell line. Moreover, we also showed that miR-21 overexpression increased migratory, invasive, proliferative, and anti-apoptotic signaling pathways whereas opposite results were observed using an anti-miR-21-based silencing strategy. Finally, we assessed the role of miR-21 in mediating cRCC chemoresistance and further showed that miR-21 silencing significantly increased chemosensitivity of paclitaxel, 5-fluorouracil, oxaliplatin and dovitinib, decreased expression of multi-drug resistance genes and increased SLC22A1/OCT1, SLC22A2/OCT2 and SLC31A1/CTR1 platinum influx transporter expression. These results led to the publication of an article in Tumor Biology in annex.In other hand, in cRCC tissue patients, we showed for the first time that miR-21 overexpression correlates with a loss of expression of PPARα. In vitro, we showed that miR-21 targets PPARα 3'-UTR and decreases its protein expression and miR-21 overexpression decreases the transcriptional activity of PPARα. Furthermore, PPARα overexpression and activation decrease miR-21 expression. In fact, PPARα interacts with AP-1 and NF-kappaB transcription factors and thus prevents their binding to the miR-21 promoter thus decreasing its transcription.In conclusion, we have shown that (i) miR-21 is a key actor of renal cancer progression and plays an important role in the resistance to chemotherapeutic drugs and (ii) there is a negative regulatory loop between miR-21 and PPARα in cRCC

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

37

Quéré, Cécile. "Régulation post-transcriptionnelle du gène unc-54 de Caenorhabditis elegans identifiée in vivo par un système de double rapporteurs fluorescents." Thesis, Bordeaux, 2014. http://www.theses.fr/2014BORD0347/document.

Full text

Abstract:

Le développement de Caenorhabditis elegans est finement régulé et aboutit au nombre constant de 959 cellules par individu. Une partie de ces régulations repose sur les microARN, ARN simple brin d’environ 22 nucléotides. Ils peuvent diminuer l'expression des gènes en ciblant des séquences homologues dans les régions 3' non transcrites (3'UTR) des ARN messagers. Pour déterminer l'impact de cette régulation, nous utilisons une méthode permettant de visualiser in vivo une différence d'expression induite post-transcriptionnellement. Cette méthode se base sur l'utilisation de deux protéines fluorescentes : la GFP (verte) et la mCherry (rouge) exprimées sous le contrôle du promoteur du gène d'intérêt. La mCherry est suivie par un 3'UTR contrôle et reflète l'activité du promoteur. La GFP est suivie par le 3'UTR du gène d'intérêt et subit les mêmes régulations que le gène endogène. La différence d'expression entre les deux protéines devrait donc refléter la régulation s'opérant sur le 3'UTR du gène. La transparence de C. elegans permet de localiser les protéines rapportrices par microscopie en fluorescence à tous les stades du développement dans l'organisme entier. Initialement, le 3'UTR du gène unc-54 (myosine de type II) a été choisi comme contrôle. Le rapporteur bicolore a révélé une régulation s’opérant sur unc-54 3’UTR jusqu’ici considérée comme permissif. La régulation observée s’opère dans les muscles et les neurones ADF. La caractérisation de cette régulation a permis de mettre en évidence le rôle potentiel de mir-1820. Le profil d’expression de mir-1820 a pu être établi grâce à une fusion avec la GFP et correspond au profil des régulations observées sur unc-54 3’UTR
Caenorhabditis elegans development is very tightly regulated, leading to the same number of cells in each individual. Part of this regulation network relies on small single strand RNAs (miRNAs), which can target homologous sequences in the 3’ untranslated regions (3’UTR) of messenger RNAs. We want to investigate the contribution of miRNAs during neurons differentiation. In order to study the miRNA contribution to gene regulation we use double fluorescent reporters that allow us to visualize the posttranscriptional contribution to regulation throughout development. The GFP and the mCherry are expressed under the control of the gene promoter, but followed by either the 3’UTR of interest, or a control 3’UTR. We first chose as a control 3’UTR the unc-54 3’UTR (myosin class II). The gene unc-54 is expressed through all larval stages and in the adult worms. The two colors reporter system showed that unc-54 3’UTR undergoes a regulation in the ADF pair of neurons and partially in the body wall muscle. The characterization of this regulation pointed out a potential role for mir-1820. The GFP was cloned between mir1820 5’ and 3’ sequences and the construction displayed an expression profile overlapping with the regulation pattern observed on unc-54 3’UTR

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

38

Fareh, Mohamed. "Le cluster miR 302-367 : inhibiteur des propriétés tumorales des cellules souches cancéreuses issues de glioblastomes humains." Nice, 2011. http://www.theses.fr/2011NICE4041.

Full text

Abstract:

Les gliomes malins sont les tumeurs primitives infiltrantes du système nerveux central les plus fréquentes chez l’adulte. Les options thérapeutiques sont restreintes et ces tumeurs demeurent de mauvais pronostic avec une médiane de survie inférieure à 15 mois. L’hétérogénéité tumorale et la régénération des tumeurs à l’arrêt du traitement, a conduit à faire l’hypothèse de cellules souches cancéreuses (CSC), minoritaires dans la masse tumorale. Les échecs des thérapies anticancéreuses proviennent de la capacité de ces cellules à réduire les dommages cellulaires en amplifiant les mécanismes de réparation de l’DN et les mécanismes d’efflux des drogues. Les cellules tumorales différenciées sensibles au traitement meurent, mais la tumeur se régénère en raison des propriétés d’auto-renouvellement des CSC. Dans ce contexte particulier, de récentes publications démontent que l’engagement des CSC en cellules tumorales différenciées diminue de manière drastique leur potentiel tumorigénique, ainsi que leur résistance aux traitements génotoxiques. Induire la sortie de l’état souche de ces cellules et inhiber leur potentiel d’auto-renouvellement est par conséquent un axe majeur de recherche pour contribuer à leur éradication. Ce projet de thèse a été réalisé sur plusieurs lignées primaires de CSC, issues de glioblastome humain, et a permis d’identifier un cluster de microARNs, le miR 302-367 : son expression n’est détectée qu’au cours de la différenciation des CSC, suggérant ainsi un rôle régulateur important. Nous avons pu montrer que la surexpression stable du miR-302-367 dans les CSCs est suffisante pour inhiber leur « signature souche », leur potentiel d’auto-renouvellement ainsi que leur capacité à infiltrer un tissu cérébral hôte. Cette inhibition se fait majoritairement par la répression directe de la voie de signalisation du CXCR4. En effet, nous avons montré que le cluster miR-302-367 cible directement l’extrémité 3’UTR de l’ARNm du récepteur CXCR4 et de son ligand SDF1, inhibant ainsi leur expression. Cela conduit à une rupture du réseau Shh-Gli-Nanog, indispensable à l’auto-renouvellement des CSCs des gliomes, ainsi qu’à l’expression d’une signature proche de celle des cellules souches embryonnaires. Nous avons donc montré pour la première fois que miR-302-367 est capable d’induire une cascade d’événements inhibiteurs des propriétés « souches et tumorigéniques » des CSCs. La co-culture de CSCs exprimant de manière stable le cluster miR-302-367 (CSC-miR) avec des CSCs contrôles permet d’induire, dans ces dernières, tous les effets de l’expression du cluster miR 302-367, à savoir la répression des marqueurs souches et de l’auto-renouvellement, ainsi que l’inhibition des propriétés clonales et d’infiltration dans un tissu neural hôte. Les mêmes résultats sont obtenus en cultivant les CSCs contrôles dans le milieu conditionné des CSC-miR. D’une manière remarquable, nous avons démontré l’efficacité de cet effet suppresseur de tumeur paracrine in vivo, puisque la greffe de différents ratios de mélanges de CSCs contrôles et CSC-miR dans le striatum de souris immunodéficientes compromet l’initiation et le développement tumoral. Le criblage de chimiokines, associé à une invalidation fonctionnelle par interférence ARN, nous a permis d’identifier l’interleukin-8 (IL8) comme facteur indispensable pour méditer l’effet paracrine du cluster miR-302-367. D’une manière intéressante, nos résultats montrent que l’IL8, ainsi que chaque membre du cluster miR-302-367, sont contenus dans des vésicules sécrétées par les cellules CSC-miR. Ces vésicules sont capables de fusionner avec des cellules-hôtes, permettant ainsi le transfert à distance de l’IL8 et du cluster miR-302-367. Nos résultats décrivent les propriétés paracrines anti-tumorales du cluster miR-302-367 et suggèrent son utilisation dans de nouvelles thérapies pour le traitement des glioblastomes
Glioblastoma multiforme (GBM) is the most common form of primary brain tumor in adults, often characterized by poor survival. Glioma-initiating cells (GICs) are defined by their extensive self-renewal, differentiation, and tumor initiation properties. GICs are known to be involved in tumor growth and recurrence, and in resistance to conventional treatments. One strategy to efficiently target GICs in GBM consists in suppressing their stemness and consequently their tumorigenic properties. In this study, we show that the miR-302-367 cluster is strongly induced during serum-mediated stemness suppression. Stable MiR-302-367 cluster expression is sufficient to suppress the stemness signature, self-renewal, and cell infiltration within a host brain tissue, through inhibition of the CXCR4 pathway. Furthermore, inhibition of CXCR4 leads to the disruption of the sonic hedgehog (SHH)-GLI-NANOG network, which is involved in self-renewal and expression iof the embryonic stem cell-like signature. In conclusion, we demonstrated that the miR-302-367 cluster is able to efficiently trigger a cascade of inhibitory events leading to the disruption of GICs stem-like and tumorigenic properties. Our studies have shown a paracrine effect tumor suppressor related to the overexpression of miR-cluster 302-367 in the GICs. This paracrine effect of GICs-miR is mediated by the secretion of exosomes containing IL-8 and miR-302-367. This paracrine effect can alter the expression of stemness markers, clonogenicity and proliferation of GICs-Ctrl and consequently compromise their tumorigenic properties in vivo

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

39

Bandiera, Simonetta. "Investigating the existence of a link between mitochondria and microRNAs." Thesis, Paris 5, 2012. http://www.theses.fr/2012PA05T064.

Full text

Abstract:

La mitochondrie est une organite ayant un rôle central dans le métabolisme énergétique de la cellule. Bien que la mitochondrie exprime son propre génome, plusieurs protéines et ARN non-codants issus du génome nucléaire sont nécessaires à la biogenèse et aux fonctions mitochondriales. Les microARNs (miRNAs) sont de petits ARN non-codants qui s'associent à la protéine Argonaute 2 (Ago2) pour moduler l'expression génique au niveau post-transcriptionnelle par ARN interférence. Classiquement, les miRNAs s’apparient à des sites de liaison complémentaires situés dans le 3’-UTR de l’ARNm cible. Nous faisons l'hypothèse que les miRNAs seraient impliqués dans la communication entre le noyau et la mitochondrie. Notre travail a donc porté sur l’étude du rôle des miRNAs dans le contexte de maladies génétiques caractérisées par une dysfonction mitochondriale. Nous avons choisi d’étudier l’ataxie de Friedreich, la plus fréquente des ataxies héréditaires, qui est causée par un déficit d’expression de la protéine mitochondriale frataxine (FXN). Nous avons montré qu'environ 90% de patients étaient homozygotes pour un haplotype spécifique des variants génétiques du 3'-UTR du gène FXN. Ce résultat a été retrouvé dans deux cohortes de patients indépendantes. Par une combinaison d’approche bioinformatique et d’expériences de co-transfections, nous avons montré que les miRNAs, et en particulier miR-124, ciblent les variants du 3’-UTR. En parallèle, nous avons évalué la possibilité que les miRNAs ciblent directement la mitochondrie. Pour cela, nous avons analysé l’expression des miRNAs dans des fractions d'ARN mitochondriale et cytosolique isolées à partir de mêmes cellules HeLa. Nous avons identifié une signature de 13 miRNAs spécifiquement enrichis dans la fraction d'ARN mitochondriale que nous avons appelé «mitomiRs». Nos prédictions ont révèle des fonctions spécifiques de ces mitomiRs à la mitochondrie, y compris la modulation de l'activité de la chaîne respiratoire. Nous avons également montré une localisation de la protéine Ago2 à l’espace inter-membranaire mitochondriale.Notre travail définit ainsi les miRNAs et Ago2 comme un nouveau niveau de communication entre le noyau et les mitochondries. Nous discutons de la possibilité que la mitochondrie agisse comme acteur du ARN interférence ou plutôt comme organite cible. Notre travail ouvre la voie à un nouveau domaine de recherche, qui pourrait avoir une utilité thérapeutique pour palier les dysfonctions mitochondriales
Mitochondria are organelles that have a central role in the energetic metabolism of the cell. Although mitochondria express their own genome, they rely on the expression of the nuclear genome for their biogenesis and function. microRNAs (miRNAs) are small non-coding RNAs that associate with Argonaute 2 (Ago2) protein to regulate gene expression post-transcriptionallythrough RNA interference. The ‘classic’ view of RNA interference describes the pairing of miRNAs with complementary binding sites within the 3’untranslated region (3’-UTR) of the target mRNA. We hypothesized that miRNAs might be instrumental to the cross-talk between the nucleus and the mitochondria. In the first part, we assessed the role of miRNAs in the context of a rare genetic disease involving mitochondrial dysfunction. We focused on Friedreich's ataxia, the most frequent of inherited ataxia in Europe, which is caused by reduced expression of the mitochondrial protein frataxin (FXN). Intwo independent cohorts of patients, we discovered that about 90% of patients were homozygous forone specific haplotype of genetic variants of the FXN3'-UTR. By a combination of computational target prediction analysis and co-transfection experiments, we showed that miRNAs, and specifically miR-124, are involved in the regulation of the FXN.We then challenged further the relationship between the miRNAs and mitochondria through questioning their localization at mitochondria. To this end, we studied miRNAs from mitochondrial and cytosolic RNA fractions isolated from the same HeLa cells. We identified a signature of 13 miRNAs specifically enriched in the mitochondrial RNA fraction that we termed ‘mitomiRs’. Through pathway-enrichement analysis, we observed a specific mitochondrial role for mitomiRs, including regulation of ATP synthesis coupled electron trasport. We also provided the evidence of Ago2 protein location inside human mitochondria at the inter-membrane space. Our work sketches miRNAs and Ago2 as a novel layer of the interplay between the nucleus and the mitochondria. We discuss whether mitochondria may be instrumental to RNA interference or a target per se. Our work paves the way to a new field of research, which may unravel therapeutic outcomes to rescue mitochondrial dysfunction

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

40

Kropp, Jérémie. "Régulation de la différenciation du muscle strié squelettique par la voie let-7 – E2F5." Thesis, Paris 11, 2014. http://www.theses.fr/2014PA11T090/document.

Full text

Abstract:

A la suite d’un criblage pangénomique, nous avons montré que l’inhibition d’un miARN de la famille let-7, miR-98, entraîne une forte accélération de la différenciation musculaire avec hypertrophie des myotubes. Lors de ma thèse, j’ai cherché à comprendre comment miR-98 retarde la différenciation du muscle strié squelettique. Des analyses transcriptomiques dans des myoblastes où ce miARN a été inhibé ont montré la perturbation de l’expression d’environ 240 gènes. Parmi eux, j’ai montré que le répresseur transcriptionnel E2F5 est important pour la régulation de la différenciation musculaire via miR-98, et est directement ciblé par ce miARN. L’inhibition de E2F5 permet de rétablir un niveau de différenciation normal malgré l’inhibition de miR-98. E2F5 est un régulateur important du cycle cellulaire. Sa fonction dans le muscle n’avait pas encore été explorée. Mes résultats montrent que E2F5 accélère le processus de différenciation musculaire. J’ai ensuite montré que E2F5 peut réguler directement des gènes répresseurs de la différenciation musculaire, comme ID1 et HMOX1, et indirectement des répresseurs de la voie TGF-β, expliquant son action sur la différenciation. Au final, miR-98 régule la différenciation du muscle strié squelettique en agissant directement sur l’expression de E2F5, et indirectement sur ses multiples cibles. Mes résultats ont ainsi mis en évidence une nouvelle voie de régulation de la différenciation musculaire : la voie let-7 – E2F5
A genome-wide screen had previously shown that knocking-down miR-98, a miRNA of let-7 family, leads to a dramatic increase of terminal myogenic differentiation, with myotube hypertrophy. My PhD project aimed to understand how miR-98 delays skeletal muscle differentiation. Transcriptomic analysis of human myoblasts with knocked-down miR-98 revealed that approximately 240 genes were sensitive to miR-98 depletion. Among these potential targets, I have identified the transcriptional repressor E2F5, which turned out to be important for miR-98 regulation of muscle differentiation. Knocking down E2F5 and miR-98 simultaneously had almost fully restored normal differentiation. I have subsequently shown that E2F5, an important cell cycle regulator, is a direct target of miR-98 in muscle, where its function had never been investigated before. My results show that E2F5 is a positive regulator of the muscle differentiation process. E2F5 can directly repress inhibitors of muscle differentiation, such as ID1 and HMOX1, and indirectly regulate TGF-β pathway family members. In conclusion, miR-98 regulates skeletal muscle differentiation by directly regulating E2F5 expression, and thus controlling the expression of multiple E2F5 targets. My results have highlighted a new regulatory pathway of muscle differentiation: the let-7 – E2F5 pathway

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

41

Gourzones, Claire. "Libération extra-cellulaire de microARN et de complexes nucléo-protéiques par les cellules infectées par EBV : rôle des exosomes et d’autres transporteurs." Thesis, Paris 11, 2011. http://www.theses.fr/2011PA11T072/document.

Full text

Abstract:

En pathologie tumorale, l’étude du micro-environnement tumoral doit prendre en compte différents modes de communication cellulaire : contacts directs entre membranes plasmiques, émission et réception de cytokines et enfin émission et internalisation d’objets biologiques plus complexes comme les microvésicules et les exosomes qui peuvent être assimilés à de véritables organites extra-cellulaires. Le virus d’Epstein-Barr (EBV) participe à l’oncogenèse de plusieurs affections malignes humaines d’origine épithéliale (carcinomes nasopharyngés ou NPC) ou lymphocytaire (lymphomes post-transplantation). Dans ces tumeurs, les cellules malignes qui sont infectées de façon latente par EBV libèrent des exosomes et des microvésicules qui contiennent des protéines et des acides nucléiques d’origine virale. L’étude de ces éléments doit permettre de mieux comprendre les interactions hôte-tumeur et de mettre en évidence de nouveaux biomarqueurs utiles pour le diagnostic précoce et la surveillance de la maladie sous traitement. Le premier objectif de ma thèse consistait à étudier la sécrétion par les cellules malignes d’une famille de microARN viraux appelés miR-BART et leur diffusion dans le sang périphérique chez les sujets porteurs de tumeurs associées à EBV. Pour la première fois j’ai mis en évidence une sécrétion d’exosomes porteurs de miR-BART par les cellules de NPC en culture in vitro. J’ai également montré que les miR-BART, particulièrement miR-BART7, sont détectables dans le plasma de sujets porteurs de NPC. Contrairement à ce qui se passe in vitro les miR-BART plasmatiques ne sont pas transportés par des exosomes. Des données obtenues chez la souris montrent qu’ils peuvent être transportés par des complexes extra-cellulaires que l’on peut précipiter au moyen d’anticorps anti-ago2. Nous cherchons à confirmer ces données sur des échantillons de plasma provenant de patients porteurs de NPC. Ces données pourront guider à l’avenir l’utilisation des miR-BART circulants comme source de biomarqueurs.Le deuxième volet de ma thèse avait pour but d’étudier les modifications du protéome des exosomes induites par une oncoprotéine du virus d’Epstein-Barr appelée LMP1 (latent membrane protein 1). J’ai montré que la LMP1, lorsqu’elle est exprimée dans les cellules lymphocytaires ou épithéliales, infectées ou non par EBV, induit la libération de la protéine PARP1 dans le milieu extra-cellulaire. Cette PARP1 extra-cellulaire n’est pas associée aux exosomes ni aux microvésicules mais à des nano-objets non-vésiculaires contenant notamment des histones et de l’ADN. Nous avons désignés ces objets sous le terme de complexes ADN-protéines extra-cellulaires. Nous ne savons presque rien de la biogenèse de ces complexes ; nous pensons qu’ils ne proviennent pas uniquement de cellules en apoptose. En revanche, des expériences préliminaires suggèrent que la présence de PARP1 dans ces complexes coïncide avec une activation permanente de la PARP1 induite dans les cellules productrices par l’expression de l’oncoprotéine LMP1. Cette hypothèse est en cours de vérification grâce à des expériences menées sur des lignées cellulaires exprimant différentes formes sauvages ou mutées de la LMP1. Ces données sur l’activation de la PARP1 et sur sa sécrétion induite par la LMP1 auront des retombées intéressantes pour notre compréhension des mécanismes d’oncogenèse et d’auto-immunité liés à l’infection par le virus d’Epstein-Barr
The study of tumoral microenvironment should take into account different modes of intercellular communications: direct contacts between extracellular membranes, secretion and uptake of cytokines and finally emission and uptake of complex biological objects like exosomes and microvesicles.Epstein-Barr virus (EBV) is associated with several human malignancies of epithelial origin (Nasopharyngeal carcinoma or NPC) or of lymphoïd origin (post-transplant lymphoproliferative disorder or PTLD). In these tumors, malignant cells are latently infected by EBV and release exosomes and microvesicles containing viral nucleic acids and proteins. Studying them will enable a better understanding of tumor-host interactions and the discovery of new markers which could be useful for early diagnostic and the follow-up of the disease under treatment.The first aim of this thesis was to study the release by malignant cells of EBV microRNAs belonging to the BART family and their blood diffusion in patients bearing NPC tumors. For the first time, I’ve shown that exosomes released by NPC cells in vitro contain EBV miR-BART microRNAs. Moreover, ebv-miR-BART7 can be detected in the plasma of NPC patients. Unlike what is observed in vitro, circulating BART microRNAs are not carried by exosomes. Recent data from studies in xenografted mice show that they are carried by extra-cellular complexes which can be immunoprecipitated by anti-Ago2 antibodies. We are currently trying to confirm these data in plasma from NPC patients. This work will ease the use of miR-BARTs as potential biomarkers.The second aim was to study the proteome modifications induced by the EBV Latent Membrane Protein 1 protein (LMP1). I’ve shown that LMP1 expression in lymphoid or epithelial cells infected or not by EBV induces the release of PARP1 in the extra-cellular space. This extra-cellular PARP1 is not carried by exosomes or microvesicles but is embedded in non-vesicular nano-objects containing histones and DNA. We have called these objects “DNA-proteins complexes”. We don’t know how they are produced and released by cells. We think that they are not only secreted by apoptotic cells. Recent data show that this release of extra-cellular PARP1 is associated with PARP1 activation by LMP1 oncoprotein expression. We are trying to prove this hypothesis using cell lines expressing wild type or mutated LMP1. The release and the activation of PARP1 induced by LMP1 expression will help to understand the mechanisms of EBV-associated oncogenesis and auto-immunity

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

42

Ghousein, Amani. "MiR-4510 inhibe le développement du carcinome hépatocellulaire en ciblant RAF1 et en inhibant la voie MAPK/ERK." Thesis, Bordeaux, 2018. http://www.theses.fr/2018BORD0020.

Full text

Abstract:

Le profil d'expression aberrant des micro(mi)ARN est une caractéristique typique de nombreux cancers, dont le carcinome hépatocellulaire (CHC), une tumeur hépatique maligne primaire qui se classe seconde dans le monde en termes de mortalité par cancer. Notre équipe a récemment montré la baisse d’expression de miR-4510 dans des échantillons de patients atteints de CHC et son activité « suppresseur de tumeur ». L'analyse de données protéomiques recueillies à partir de cellules Huh7 transfectées par miR-4510 a révélé une diminution importante de plusieurs oncogènes, dont la sérine / thréonine protéine kinase RAF1. J’ai également découvert que le taux de protéine RAF1 était significativement surexprimé chez les patients atteints de CHC. Le rôle de RAF1 et de miR-4510 dans le CHC étant mal compris, j’ai étudié la fonction du couple RAF1/miR-4510 dans la tumorigenèse du foie. Mes analyses ont montré que miR-4510 régule négativement les taux de protéine RAF1 et d'ARNm. Une analyse par le système de double fluorescence-FunREG a révélé que miR-4510 interagit directement avec la région 3’ non-traduite de l’ARN de RAF1 via un site unique. La déplétion de RAF1 dans deux lignées tumorales de CHC par miR-4510 ou ARN interférant désactive leur caractère tumorigène in vitro et in vivo. Collectivement, mes données suggèrent que miR-4510 participe à la carcinogenèse du foie via son action directe sur RAF1 et la régulation de la voie MAPK/ERK. En conclusion, mon étude soutient l’hypothèse selon laquelle un traitement à base de miR-4510 pourrait être efficace pour traiter les patients atteints de CHC de type avancé ou réfractaire à la chimiothérapie
Aberrant micro(mi)RNA expression signature is a hallmark of many cancers including hepatocellular carcinoma (HCC), a primary malignant liver disease which ranks second in cancer mortality worldwide. Our team previously reported the downregulation of miR-4510 in HCC samples and identified this miRNA as a strong tumor suppressor in liver. Proteomic data analysis collected from Huh7 cells transfected by miR-4510 showed a significant decrease of multiple oncogenes including RAF1 serine/threonine protein kinase. I also found that RAF1 protein level is significantly increased in HCC patients. The role of RAF1 and miR-4510 in HCC being poorly understood, I studied the function of RAF1/miR-4510 pair in tumorigenesis of the liver. My results showed that miR-4510 overexpression significantly decreases both RAF1 protein and mRNA levels and inhibits MAPK/ERK signaling. The dual fluorescence-FunREG assay revealed that miR-4510 directly interacts with RAF1 3’-untranslated region through a unique site. Silencing of RAF1 in two hepatic cell lines by miR-4510 or a specific small interfering RNA suppressed important tumorigenic features (proliferation, migration….) both in vitro and in vivo. Collectively, my data suggest that miR-4510 participates in liver carcinogenesis through RAF1 targeting and MAPK/ERK signaling inactivation. In addition, my study suggests that miR-4510-based therapy may represent a promising strategy to treat patients with advanced or refractory HCC

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

43

Lozano, Claire. "Rôle de mir-342-3p dans l'hétérogénéité fonctionnelle des ostéoclastes et implication dans l’arthrite auto-immune." Thesis, Montpellier, 2020. http://www.theses.fr/2020MONTT016.

Full text

Abstract:

Les micro-ARNs (miARNs) sont de petits ARN simples brins non codants qui contrôlent l’expression des gènes au niveau post-transcriptionnel, dans de nombreux processus cellulaires. Ils jouent un rôle clé dans la régulation de l’ostéoclastogenèse, un processus de différenciation cellulaire qui aboutit à la formation d’ostéoclastes (OCs). Les OCs sont des cellules multinucléées du tissu osseux issus de précurseurs myéloïdes. Ce sont les seules cellules de l’organisme capables de résorption osseuse, donc essentielles à l'homéostasie osseuse et au renouvellement osseux. Toute anomalie de leur fonctionnement est associée à des pathologies osseuses. Dans le cas de la polyarthrite rhumatoïde (PR), les OCs participent activement à l'érosion osseuse. La PR est une maladie auto-immune invalidante caractérisée par une atteinte articulaire inflammatoire associée à une destruction du cartilage et de l’os. Il a été décrit différents types d’OCs sur la base de leurs propriétés immunologiques : les OC tolérogènes (t-OCs) et les OC inflammatoires (i-OCs). Des études récentes ont montré que les i-OCs dérivent exclusivement de précurseurs circulants qui infiltrent les articulations arthritiques. Mon travail a consisté à combiner les analyses du miRNome et du transcriptome des sous-types t-OCs et i-OCs, en contexte physiologique et arthritique, afin d’identifier des miARNs spécifiques de chaque type d’OCs et les voies biologiques associées. Parmi les miARNs associés aux i-OCs, j’ai identifié miR-342-3p, encore non décrit dans l’ostéoclastogenèse ou l’arthrite. J’ai montré que miR-342-3p a un effet pro-ostéoclastique in vitro en soutenant la phase précoce de l’ostéoclastogenèse par induction de la survie et de la motilité des précurseurs myéloïdes. J’ai optimisé l’inhibition de miR-342-3p dans les précurseurs des i-OCs dans le modèle murin de l’arthrite auto-immune (K/BxN serum-transfer arthritis, STA) par l’administration systémique ou locale d’un inhibiteur ou agoniste de miR-342-3p formulé avec le liposome cationique DMAPAP/DOPE. J’ai montré le ciblage des monocytes inflammatoires Ly6Chigh du sang et de l’articulation, associée à l’inhibition d’Adam17 quand un lipoplex miR-342-3p est injecté. J’ai enfin montré qu’Adam17 est une nouvelle cible de miR-342-3p dans les précurseurs OCs. Mes travaux suggèrent que la modulation in vivo de l’expression de miR-342-3p dans les précurseurs des i-OCs pourrait être une stratégie thérapeutique intéressante pour réduire l’érosion osseuse liée à l’arthrite
MicroRNAs (miRNAs) are small, single-strand non-coding RNAs that negatively regulate gene expression at the post-transcriptional level in many cellular processes. They play a key role in the regulation of osteoclastogenesis, a process of cell differentiation that leads to the formation of osteoclasts (OCs). OCs are multinucleated cells located in bone tissue that derived from myeloid precursors. OCs are the only cells capable of bone resorption, which role is essential to bone homeostasis and turnover. However, they actively participate in bone erosion in rheumatoid arthritis (RA), an autoimmune disease characterized by chronic joint inflammation associated with destruction of cartilage and bone. Based on their immunological properties, two OC subsets have been identified, the so called tolerogenic OCs (t-OCs) and inflammatory OCs (i-OCs). Recent studies have shown that the i-OCs associated with arthritis exclusively derive from circulating Ly6Chigh precursors that infiltrate inflamed joints. Combining miRNome and RNA-Seq analyses of t-OC and i-OC subsets, I aimed at identifying miRNAs markers specific for each subset and associated biological pathways. Among the miRNAs associated with i-OCs, I identified miR-342-3p, neither described yet in osteoclastogenesis or in arthritis. I demonstrated that miR-342-3p has a pro-osteoclastic effect in vitro by supporting the early phase of osteoclastogenesis, through the control of survival and motility of the precursors. I optimized the delivery of miR-342-3p agonist or neutralizing molecules in the precursors of i-OCs using the mouse model of autoimmune arthritis (K/BxN serum-transfer arthritis, STA) and the cationic liposome DMAPAP/DOPE. I showed that the systemic or intra-articular administration of miR-342-3p lipoplex selectively targets blood and joint inflammatory Ly6Chigh monocytes, and that in vivo neutralization of miR-342-3p in Ly6Chigh OC precursors of STA mice increased Adam17 expression. I identified Adam17 as a novel target for miR-342-3p. Overall, my data indicate that the in vivo modulation of miR-342-3p expression in i-OC precursors could be a potential therapeutic strategy to reduce bone erosion in arthritis

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

44

Henaoui, Imène Sarah. "MiR-199a-5p, un « fibromiR » amplificateur de la voie du TGF-beta dans la fibrose pulmonaire idiopathique." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4136.

Full text

Abstract:

La Fibrose Pulmonaire idiopathique (FPI) est une maladie fibroproliférative pour laquelle il n’existe aucun traitement efficace. Les mécanismes à l’origine de cette pathologie sont méconnus et impliquent plusieurs types cellulaires et facteurs de croissance, comme le TGF-β responsable de la différenciation de fibroblastes en myofibroblastes. Pour mieux comprendre ces mécanismes physiopathologiques, nous nous sommes intéressés à l’implication des miARN dans ce processus. Une analyse par puces à ADN de l’ensemble des miARN modulés dans des échantillons pulmonaires de souris, résistantes ou sensibles à la fibrose pulmonaire induite par la bléomycine, nous a permis d’identifier miR-199a-5p comme le meilleur candidat associé à la fibrose pulmonaire mais aussi fibrose rénale et hépatique. J’ai ensuite démontré que l’expression de miR-199a-5p était induite par le TGF-β in vitro, et que sa surexpression ectopique induisait la différenciation des fibroblastes. Une combinaison d’approche in silico et expérimentale, m’a permis d’identifier la Cavéoline-1 (CAV-1) comme cible de ce miARN. La CAV-1 est impliquée dans la dégradation du récepteur TGF-β. Ainsi, l’inhibition de CAV-1 par miR-199a-5p constitue une boucle de rétrocontrôle positif exacerbant la voie TGF-β. De manière intéressante, l’inhibition de miR-199a-5p in vitro régule la différenciation, la prolifération et la migration des fibroblastes pulmonaires par le TGF-β. Par ailleurs, nos résultats précliniques indiquent que l’inhibition de ce miARN diminue les marqueurs de fibrose, permettant d’envisager le développement de nouvelles approches thérapeutiques dans le traitement de la FPI et d’autres maladies fibroprolifératives
Idiopathic Pulmonary Fibrosis (IPF) is a fibroproliferative disease with poor prognosis and for which no effective treatment exists. The mechanisms of this disease remain poorly understood and involve numerous cell types and growth factors such as TGF-β, which leads to the activation of lung fibroblasts into myofibroblasts; the key cell type driving the fibrogenic process. In this context, we focused the involvement of miRNAs in fibrosis process. To identify miRNAs with potential roles in lung fibrogenesis, we performed a genome-wide assessment of miRNA expression in lungs from two different mouse strains known for their distinct susceptibility to lung fibrosis after bleomycin exposure. We identified miR- 199a-5p as the best candidate associated with lung fibrosis but also kidney and liver fibrosis. I observed that miR-199a-5p expression was induced upon TGF-β exposure, and that its ectopic expression was sufficient to promote the pathogenic activation of pulmonary fibroblasts. Using combination of targets miRNA prediction tools and a transcriptomic approach we identified the Caveolin-1 (CAV-1), a critical mediator of pulmonary fibrosis, as a specific target of miR-199a-5p. Thus, we shown that miR-199a-5p is a key effector of TGF-β signaling in lung fibroblasts by regulating CAV1. Interestingly, inhibition of miR-199a-5p in vitro prevents the differentiation, proliferation and migration of fibroblasts after TGF-β stimulation. Finally, our preclinical results indicate that inhibition of this miRNA decreases fibrosis markers. Thus, miR-199a-5p behaves as a major regulator of tissue fibrosis with therapeutic potency for the treatment of IPF and fibroproliferative diseases

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

45

Chevalier, Benoît. "Rôle des microARN dans la différenciation de l'épithélium respiratoire humain : caractérisation de miR-449 comme acteur central de la multiciliogenèse conservé chez les vertébrés." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2013. http://www.theses.fr/2013NICE4131.

Full text

Abstract:

Chez les vertébrés, le battement coordonné des cils motiles présents par centaines à la surface apicale des cellules multiciliées (MCC) est requis pour propulser directionnellement les fluides biologiques à l’intérieur de certains organes (voies respiratoires, ventricules cérébraux, trompes utérines ou certaines structures embryonnaires). De nombreuses pathologies humaines sont associées à des défauts ciliaires ou à une perte des MCC (dyskinésies ciliaires, mucoviscidose, asthme,...). Dans ce contexte, mon travail de thèse a consisté à élucider les mécanismes complexes contrôlant la différenciation des MCC et donc la formation des cils motiles (multiciliogenèse). Par des approches de génomiques fonctionnelles à partir de deux modèles d’épithéliums multiciliés évolutivement éloignés (épithélium respiratoire humain et épiderme d’embryon de Xénope) nous avons identifié la famille des microARN (petits ARN non-codants régulateurs de l’expression génique) miR-449 comme majoritairement exprimée dans les MCC. Nous avons montré que miR-449 contrôle la multiciliogenèse i) en bloquant le cycle cellulaire, ii) en réprimant directement la voie de signalisation Notch et iii) en inhibant l’expression de la petite GTPase R-Ras. Enfin, nos travaux montrent que l’ensemble de ces mécanismes est conservé chez les vertébrés. En conclusion, miR-449 est un nouveau régulateur clé de la multiciliogenèse conservé au cours de l’évolution. Nos résultats pourraient ouvrir la voie à de nouvelles stratégies thérapeutiques utilisant des petits ARN régulateurs dans le traitement de certaines pathologies associées à des défauts ciliaires
In vertebrates, the coordinated beating of hundreds of motile cilia present at the apical surface of multiciliated cells (MCC) is required for propel directionally flow of biological fluids inside some organs (airways, cerebral ventricles, fallopian tubes or some embryonic structures). Many human diseases are associated with ciliary defects or loss of MCC (ciliary dyskinesia, cystic fibrosis, asthma ...). In this context, my thesis has sought to elucidate the complex mechanisms that control the differentiation of MCC and thus the formation of motile cilia (multiciliogenesis). By functional genomic approaches from two evolutionarily distant models of multiciliated epithelia (human respiratory epithelium and epidermis of Xenopus embryo) we identified the miR-449 family of microRNAs (small non-coding RNAs regulating gene expression) as mainly expressed in MCC. Then, we showed that miR-449 controlled multiciliogenesis by i) blocking the cell cycle ii) directly suppressing the Notch pathway and iii) by inhibiting the expression of the small GTPase R-Ras. Finally, we have demonstrated that all these mechanisms were conserved in vertebrates. In conclusion, miR-449 is a new key and conserved regulator of multiciliogenesis. Our findings could pave the way for new therapeutic strategies using small regulatory RNAs in the treatment of several diseases associated with ciliary defects

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

46

Chevalier, Benoît. "Rôle des microARN dans la différenciation de l'épithélium respiratoire humain : caractérisation de miR-449 comme acteur central de la multiciliogenèse conservé chez les vertébrés." Phd thesis, Université Nice Sophia Antipolis, 2013. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01070643.

Full text

Abstract:

Chez les vertébrés, le battement coordonné des cils motiles présents par centaines à la surface apicale des cellules multiciliées (MCC) est requis pour propulser directionnellement les fluides biologiques à l'intérieur de certains organes (voies respiratoires, ventricules cérébraux, trompes utérines ou certaines structures embryonnaires). De nombreuses pathologies humaines sont associées à des défauts ciliaires ou à une perte des MCC (dyskinésies ciliaires, mucoviscidose, asthme,...). Dans ce contexte, mon travail de thèse a consisté à élucider les mécanismes complexes contrôlant la différenciation des MCC et donc la formation des cils motiles (multiciliogenèse). Par des approches de génomiques fonctionnelles à partir de deux modèles d'épithéliums multiciliés évolutivement éloignés (épithélium respiratoire humain et épiderme d'embryon de Xénope) nous avons identifié la famille des microARN (petits ARN non-codants régulateurs de l'expression génique) miR-449 comme majoritairement exprimée dans les MCC. Nous avons montré que miR-449 contrôle la multiciliogenèse i) en bloquant le cycle cellulaire, ii) en réprimant directement la voie de signalisation Notch et iii) en inhibant l'expression de la petite GTPase R-Ras. Enfin, nos travaux montrent que l'ensemble de ces mécanismes est conservé chez les vertébrés. En conclusion, miR-449 est un nouveau régulateur clé de la multiciliogenèse conservé au cours de l'évolution. Nos résultats pourraient ouvrir la voie à de nouvelles stratégies thérapeutiques utilisant des petits ARN régulateurs dans le traitement de certaines pathologies associées à des défauts ciliaires.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

47

Gourzones, Claire. "Libération extra-cellulaire de microARN et de complexes nucléo-protéiques par les cellules infectées par EBV : rôle des exosomes et d'autres transporteurs." Phd thesis, Université Paris Sud - Paris XI, 2011. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00759635.

Full text

Abstract:

En pathologie tumorale, l'étude du micro-environnement tumoral doit prendre en compte différents modes de communication cellulaire : contacts directs entre membranes plasmiques, émission et réception de cytokines et enfin émission et internalisation d'objets biologiques plus complexes comme les microvésicules et les exosomes qui peuvent être assimilés à de véritables organites extra-cellulaires. Le virus d'Epstein-Barr (EBV) participe à l'oncogenèse de plusieurs affections malignes humaines d'origine épithéliale (carcinomes nasopharyngés ou NPC) ou lymphocytaire (lymphomes post-transplantation). Dans ces tumeurs, les cellules malignes qui sont infectées de façon latente par EBV libèrent des exosomes et des microvésicules qui contiennent des protéines et des acides nucléiques d'origine virale. L'étude de ces éléments doit permettre de mieux comprendre les interactions hôte-tumeur et de mettre en évidence de nouveaux biomarqueurs utiles pour le diagnostic précoce et la surveillance de la maladie sous traitement. Le premier objectif de ma thèse consistait à étudier la sécrétion par les cellules malignes d'une famille de microARN viraux appelés miR-BART et leur diffusion dans le sang périphérique chez les sujets porteurs de tumeurs associées à EBV. Pour la première fois j'ai mis en évidence une sécrétion d'exosomes porteurs de miR-BART par les cellules de NPC en culture in vitro. J'ai également montré que les miR-BART, particulièrement miR-BART7, sont détectables dans le plasma de sujets porteurs de NPC. Contrairement à ce qui se passe in vitro les miR-BART plasmatiques ne sont pas transportés par des exosomes. Des données obtenues chez la souris montrent qu'ils peuvent être transportés par des complexes extra-cellulaires que l'on peut précipiter au moyen d'anticorps anti-ago2. Nous cherchons à confirmer ces données sur des échantillons de plasma provenant de patients porteurs de NPC. Ces données pourront guider à l'avenir l'utilisation des miR-BART circulants comme source de biomarqueurs.Le deuxième volet de ma thèse avait pour but d'étudier les modifications du protéome des exosomes induites par une oncoprotéine du virus d'Epstein-Barr appelée LMP1 (latent membrane protein 1). J'ai montré que la LMP1, lorsqu'elle est exprimée dans les cellules lymphocytaires ou épithéliales, infectées ou non par EBV, induit la libération de la protéine PARP1 dans le milieu extra-cellulaire. Cette PARP1 extra-cellulaire n'est pas associée aux exosomes ni aux microvésicules mais à des nano-objets non-vésiculaires contenant notamment des histones et de l'ADN. Nous avons désignés ces objets sous le terme de complexes ADN-protéines extra-cellulaires. Nous ne savons presque rien de la biogenèse de ces complexes ; nous pensons qu'ils ne proviennent pas uniquement de cellules en apoptose. En revanche, des expériences préliminaires suggèrent que la présence de PARP1 dans ces complexes coïncide avec une activation permanente de la PARP1 induite dans les cellules productrices par l'expression de l'oncoprotéine LMP1. Cette hypothèse est en cours de vérification grâce à des expériences menées sur des lignées cellulaires exprimant différentes formes sauvages ou mutées de la LMP1. Ces données sur l'activation de la PARP1 et sur sa sécrétion induite par la LMP1 auront des retombées intéressantes pour notre compréhension des mécanismes d'oncogenèse et d'auto-immunité liés à l'infection par le virus d'Epstein-Barr.

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

48

Bardin, Pauline. "Inflammation pulmonaire et rôle des microARN dans la mucoviscidose Small RNA and transcriptome sequencing reveal the role of miR-199a-3p in inflammatory processes in cystic fibrosis airways Mucoviscidose : dans la ligne des miR." Thesis, Sorbonne université, 2019. http://www.theses.fr/2019SORUS046.

Full text

Abstract:

La mucoviscidose (CF pour Cystic Fibrosis) est la conséquence de mutations du gène codant pour le canal chlorure CFTR. L’absence de ce canal conduit à une hyper-inflammation, dont les mécanismes de régulation sont altérés, notamment la voie de signalisation NF-κB qui est hyper-activée. L’origine de cette dérégulation demeurant incertaine, l'objectif de ce travail était d’étudier le rôle des miR dans la physiopathologie pulmonaire chez les patients CF. Une analyse du miRNome sur des cellules épithéliales bronchiques cultivées en interface air-liquide issues de patients CF et non-CF a permis d’identifier le miR-199a-3p, sous-exprimé dans les cellules CF, qui régule directement IKKβ et donc la voie NF-κB et la sécrétion en IL-8. L’origine de la dérégulation de miR-199a-3p est due à des variations calciques intracellulaires qui modulent son expression via l’un des gènes le synthétisant. L’expression de miR-199a-3p peut être diminuée suite à une infection par P. aeruginosa, le pathogène le plus fréquemment retrouvé dans les voies aériennes des patients CF. Le miR-199a-3p peut interagir avec d’autres miR dérégulés chez les patients CF, les miR-636 et miR-9. Le miR-636 montré comme sur-exprimé dans des cellules CF par le miRNome, régule directement IL1R1 et IKKβ négativement et RANK positivement mais pas FAM13A. La surexpression de miR-636 permet de diminuer la voie NF-κB et la sécrétion en IL-8 et IL-6. Nous avons montré que le miR-199a-3p était un potentiel biomarqueur sanguin et les miR-636 et miR-9 de potentiels biomarqueurs neutrophiles chez les patients CF par rapport aux non-CF. L’ensemble de ces résultats illustrent le rôle pivot des miR dans l'inflammation pulmonaire
In patients with cystic fibrosis (CF), at the pulmonary level, the ionic imbalance caused by CFTR chloride channel dysfunction promoting hyper-inflammation, whose regulatory mechanisms are altered. In this context, the NF-κB pathway is hyper-activated, but the origin of its deregulation remains uncertain. The aim of this work was to study the role of miRNA in pulmonary pathophysiology in CF patients. A small RNAseq analyse on bronchial epithelial cells cultured in air-liquid interface from CF patients and non-CF healthy subjects, allowed to identify miR-199a-3p, which is underexpressed in CF cells and regulates IKKβ directly and consequently the NF κB pathway activation and IL-8 secretion. In CF cells, miR-199a-3p origin is not due to pro-inflammatory context, nor CFTR intrinsic dysfunction but due to intracellular calcium concentration variation whose modulate the miR-199a-3p expression through one of the genes that synthesize it. Moreover, miR-199a-3p expression could be decreased following an infection by Pseudomonas aeruginosa, the most frequently found pathogen in CF airways. MiR-199a-3p can interact with others dysregulated miRNA in CF, the miR-636 and miR-9. MiR-636, an another miR identified by the small RNAseq, is overexpressed in CF cells and regulates negatively IL1R1 and IKKβ and positively RANK. Overexpression of miR-636 allows decreasing NF-κB pathway activation and IL-8, IL-6 secretions. MiR-199a-3p was a potential biomarker of plasma and miR-636 and miR-9 potential neutrophil biomarkers in CF patients vs non-CF. All these results illustrate the pivotal role of miRNA in lung inflammation in cystic fibrosis patients

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

49

Mercey, Olivier. "Interactions des microARN de la famille miR-34/449 avec les voies de signalisation intracellulaire : rôle dans la différenciation des cellules multiciliées chez les vertébrés." Thesis, Université Côte d'Azur (ComUE), 2016. http://www.theses.fr/2016AZUR4119/document.

Full text

Abstract:

Les cellules multiciliées (MCC) possèdent à leur surface apicale des centaines de cils mobiles générant un flux directionnel liquidien nécessaire par exemple pour le nettoyage des voies respiratoires. La fabrication de ces cils (multiciliogénèse) requiert une séquence d’évènements cellulaires dont un arrêt du cycle cellulaire, une réorganisation du réseau apical d’actine, une multiplication massive des centrioles suivie de leur migration au pôle apicale et de leur maturation en corps basal, à partir desquels les cils s’allongent.Mon laboratoire d’accueil a mis en évidence le rôle conservé de la famille de microARN miR-34/449 dans le contrôle de la multiciliogénèse en inhibant la voie de signalisation Notch ainsi qu’en induisant un arrêt du cycle. Au cours de ma thèse, j’ai mis en évidence un nouveau niveau de régulation de ces microARN par lequel ils contrôlent la réorganisation apicale du cytosquelette d’actine, en modulant l’expression et l’activité de certaines petites GTPases. Par ailleurs, j’ai identifié et caractérisé des séquences variantes des miR-34/449 canoniques, appelées isomiR. Tandis que ces isomiR partagent des fonctions semblables à celles de leurs homologues canoniques, ils apportent également une complémentarité d’action en modulant des transcrits cibles spécifiques. Enfin, le dernier axe de mon travail a permis d’identifier le rôle de la voie de signalisation BMP dans la multiciliogénèse ainsi que d’élucider certains des mécanismes moléculaires par lesquels elle contrôle ce phénomène. L’ensemble de nos découvertes offre une opportunité inédite pour développer des stratégies thérapeutiques dans le traitement de maladies associées à des désordres ciliaires
Vertebrate multiciliated cells (MCC) project hundreds of motile cilia at their apical surface which coordinately beat to generate a directional fluid flow necessary for many biological functions including airway cleansing. Biogenesis of multiple cilia (multiciliogenesis) follows different key cellular steps corresponding to a cell cycle arrest, a massive multiplication of centrioles which then migrate to the apical surface to form basal bodies, from which cilia elongate. In 2011, my host laboratory evidenced that the miR-34/449 family of microRNAs control vertebrate multiciliogenesis by inducing the cell cycle arrest and by repressing the Notch pathway. My thesis work has revealed a new role of miR-34/449 by demonstrating that they modulate expression and activity of small GTPases to drive the apical reorganization of the actin network, a prerequisite for basal body anchoring. Besides, I have identified and characterized variant sequences of canonical miR-34/449 family, named isomiRs. Whereas these isomiRs share common biological functions with canonical miR-34/449 miRNAs, they may also contribute to a complementary effect by targeting specific transcripts. Finally, the last part of my work has contributed to the identification of the conserved role of the BMP pathway in the control of multiciliogenesis. I have evidenced some molecular mechanisms by which the BMP signal controls this phenomenon. Importantly, I demonstrated that BMP inhibition promotes regeneration of tracheal MCC in vivo in an asthmatic mouse model. Overall, our findings offer an unprecedented opportunity to develop novel therapeutic strategies to treat diseases associated with ciliary disorders

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

50

Ammari, Meryem. "Rôle de miR-146a dans la régulation des fonctions monocytaires dans l’arthrite." Thesis, Montpellier 1, 2014. http://www.theses.fr/2014MON1T020.

Full text

Abstract:

Les monocytes sont des leucocytes dérivés de précurseurs de la moelle osseuse pouvant se différencier en macrophages, cellules dendritiques (CD), ou ostéoclastes (OC). Ils jouent un rôle critique dans la persistance de l'inflammation et la destruction des articulations par le biais de mécanismes encore mal connus. Les monocytes sont composés de deux grandes sous-populations chez la souris, discriminées sur la base du marqueur de surface Ly6C. Il a été suggéré que les OC pouvait être préférentiellement différenciés à partir de la sous-population monocytaire Ly6Chigh, dont l'activation excessive et prolongée est une signature clé de nombreuses pathologies inflammatoires. Parmi les acteurs moléculaires responsables de la régulation de l'expression des gènes, les miARNs jouent un rôle majeur dans de nombreux processus physiologiques, dont la réponse inflammatoire, en régulant finement les programmes génétiques au niveau post-transcriptionnel. Leur implication dans l'ostéoclastogénèse est encore mal connue. Par ailleurs, leur expression est perturbée dans de nombreuses pathologies, dont la polyarthrite rhumatoïde qui implique à la fois un dysfonctionnement de la réponse inflammatoire et de l'homéostasie osseuse. Mon projet de thèse vise à mieux comprendre l'implication des sous-populations monocytaires dans la persistance de l'inflammation et de l'activité des OC au travers de l'étude du rôle de miR-146a dans des conditions physiologiques et inflammatoires. J'ai montré que miR-146a est le miARN le plus différemment exprimé entre monocytes classiques Ly6Chigh et non-classiques Ly6Clow, et que son expression est diminuée dans les Ly6Chigh en conditions arthritiques. J'ai également montré que la perte de miR-146a augmente l'ostéoclastogénèse in vitro et l'érosion osseuse in vivo chez les souris arthritiques. Enfin, la surexpression artificielle de miR-146a dans les monocytes Ly6Chigh inhibe la différenciation osteoclastique et la perte osseuse dans l'arthrite expérimentale chez la souris. Mes résultats suggèrent que miR-146a contrôle l'hétérogénéité fonctionnelle des monocytes et qu'une diminution de son expression dans la sous-population Ly6Chigh serait responsable de l'augmentation de l'osteoclastogénèse et de l'érosion osseuse observées en conditions arthritiques. Pour finir, mes résultats montrent également qu'augmenter l'expression de miR-146a dans les monocytes Ly6Chigh présente un intérêt thérapeutique pour contrecarrer la perte osseuse associée à l'arthrite
Introduction : Monocytes represent a prototypic cell type when investigating the interplay between immune and skeletal systems as they can give rise to different cell types including dendritic cells, macrophages and osteoclasts (OC), which play key roles in immunity and bone homeostasis. Circulating monocytes consist of at least two main functional subsets, Ly6Chigh and Ly6Clow monocytes. It has been suggested that OC might develop preferentially from the Ly6Chigh monocyte subset, which excessive and prolonged activation is a hallmark of many inflammatory diseases. Among key molecular rheostats of cell fate, micro(mi)RNAs are a class of regulatory RNAs that control basic biological functions and orchestrate inflammatory responses. Few miRNAs have been involved in osteoclastogenesis. The present study aimed at investigating the role of miRNAs in osteoclastogenesis in the context of monocyte subsets, under steady state and inflammatory conditions. Methods & Results : Using genome-wide miRNA expression study we have identified miRNAs and putative targeted pathways that are differentially expressed between Ly6Chigh and LyC6low FACS sorted mouse monocytes, and common to their human counter parts CD14+CD16- and CD14dimCD16+ monocytes, respectively. Among these, miR-146a showed higher expression in Ly6Clow monocytes when compared to Ly6Chigh monocytes. Under inflammatory arthritis conditions, expression of miR-146a in Ly6Chigh monocytes was down regulated as compared to healthy controls. Using mouse deficient for miR-146a, we showed that knockdown of miR-146a increased OC differentiation in vitro. While no bone phenotype was evidenced in miR-146a deficient mice, nor under steady state or ovariectomized conditions, arthritis-induced bone resorption and bone loss were increased in miR-146a knockout mice. Finally, using a liposomal formulation able to delivermiR-146a mimics to Ly6Chigh monocytes upon intravenous injection, we showed that enforced expression of miR-146a led to decreased number of TRAP positive cells within the synovium of arthritic mice, and efficiently reduced bone erosion in inflammatory arthritis. This effect was associated with decreased RelB expression in miR-146a-overexpressing Ly6Chigh osteoclast progenitors. Conclusion : Overall, our results show that specific over-expression of miR-146a in Ly6Chigh monocytes altered OC differentiation and decreased bone erosion in inflammatory arthritis. These data suggest a novel role for miR-146a in controlling osteoclast fate of Ly6Chigh monocyte progenitors and that reduced miR-146a expression in Ly6Chigh monocytes under arthritic conditions contributes to pathogenic bone loss. Finally, delivery of miR-146a mimics to Ly6Chigh monocytes may offer valuable therapeutic potential to interfere with pathological bone loss

APA, Harvard, Vancouver, ISO, and other styles

Dissertations / Theses on the topic 'MicroARNs (miRs)'

Create a spot-on reference in APA, MLA, Chicago, Harvard, and other styles