Dissertations / Theses on the topic 'Microsporum canis'

Lietuvoje registruotų dezinfekcinių priemonių: baliklio, TH4+, Safe 4, Ecocid S, formalino, buvo atliktas tyrimas, nustatyti Microsporum canis jautrumą, dezinfektantui. Patogeninio mikromiceto M. canis kolonijos išskirtos iš dermatofitija sergančių kačių.
Experiment was done to determine Microsporum canis sensitivity for disinfectant, using detergents which are registered in Lithuania: bleach , TH4 + , Safe 4 , S ecocide , formalin. Micromycetes pathogenic M. canis colonies isolated from cats which infected by dermatophytosis.

Microsporum canis é um dermatófito zoofílico e o fungo mais frequentemente isolado de cães e gatos, de crianças com tinea capitis e de adultos com tinea corporis. Ainda não se conhece as possíveis variáveis envolvidas no estabelecimento de infecções clínicas ou subclínicas em cães e gatos, assim como os fatores envolvidos na transmissão de M. canis para os seres humanos. Diversas técnicas de biologia molecular falharam em demonstrar variabilidade genética entre diferentes linhagens de M. canis, porém, estudos recentes indicam que a utilização de primers mais discriminatórios, como os marcadores microsatélites, possibilite a detecção de diferentes genótipos de M. canis. Os objetivos deste trabalho de pesquisa foram: identificar e comparar o genótipo de M. canis isolados de cães e gatos sintomáticos e assintomáticos e de seres humanos utilizando marcadores microssatélites e investigar uma possível correlação entre as características genotípicas e dados epidemiológicos de M. canis isolados de cães, gatos e seres humanos. Foram incluídos no estudo isolados de 102 cães e gatos sintomáticos e assintomáticos e de pacientes humanos com tinea nos quais se isolou o M. canis durante os anos de 2006 a 2010. Essas amostras foram provenientes de Curitiba, Porto Alegre, Florianópolis e Cuiabá. Dentre elas, 37 eram de gatos sintomáticos, 35 de gatos assintomáticos, 19 de pacientes humanos sintomáticos, 9 de cães assintomáticos e 2 de cães sintomáticos. A amplificação da região de microsatélites do DNA foi realizada utilizando dois primers, McGT13 e McGT17, a qual possibilitou a formação de grupos de acordo com o grau de similaridade genética baseada no número de repetições nessas duas regiões do DNA do M. canis. Os loci Mc(GT)13 e Mc(GT)17 revelaram 3 e 6 alelos, variando de 2 e 5 repetições de dinucleotídeos dentro de cada locus, respectivamente. Dos 14 genótipos e 5 grandes grupos formados após análise da árvore filogenética gerada pelo método Dc, 1 foi compartilhado por 26 isolados, outro por 21, um por 12 isolados e outros dois com 11 isolados cada um. Outros dois pequenos grupos foram formados com 7 e 5 isolados cada. Os marcadores microssatélites possibilitaram a identificação, o estudo filogenético e a comparação dos isolados de M. canis oriundos de gatos, cães e pacientes humanos incluídos no estudo. Apesar da formação de grupos geneticamente relacionados, não houve correlação entre as linhagens e os dados epidemiológicos analisados entre as isolados, incluindo fonte, sintomatologia, quadro clínico, raça, idade, sexo, moradia e localização geográfica.
Microsporum canis is a zoophilic dermatophyte and the most commonly isolated fungi from dogs, cats, children with tinea capitis and adults with tinea corporis. There are unknown variables in establishment of clinical or subclinical infection in dogs and cats and also in M. canis transmission to humans. Several molecular techniques failed to show genetic variability between different strains of M. canis, but recent studies indicate that the use of more discriminatories primers, as microsatellite markers, may detect different genotypes of this dermatophyte. This study has as objectives to identify and compare M. canis strains genotype isolated from symptomatic and asymptomatic dogs and cats and from people with dermatophytosis using microsatellite technique and to investigate a possible correlation between epidemiologic data and genotypic characteristics of M. canis isolated from dogs, cats and people. One hundred and two strains of M. canis isolated from symptomatic and asymptomatic dogs and cats and people with tinea between 2006 and 2010 were included in this study. These strains were from Curitiba, Porto Alegre, Florianópolis and Cuiaba. Among them, 37 were from symptomatic cats, 35 from asymptomatic cats, 19 from people with tinea, 9 from asymptomatic dogs and 2 from symptomatic dogs. Amplification of microsatellite DNA region was performed using two primers, McGT13 e McGT17, which allowed the formation of groups according to the degree of genetic similarity based on the amount of repetition in these two regions of M. canis DNA. Loci Mc(GT)13 e Mc(GT)17 revealed 3 and 6 alleles, varying between 2 and 5 dinucleotide repeats within each locus, respectively. Of the 14 genotypes and 5 major groups formed after phylogenetic tree analysis generated by DC method, 1 was shared by 26 strains, the other by 21, one by 12 strains and another two with 11 strains each. Microsatellite markers allowed identification, phylogenetic analysis and comparison of M. canis strains isolated from cats, dogs and people included in this study. Despite the formation of genetically related groups, there was no correlation between the lineage and epidemiologic characteristics, including source, symptoms, clinical picture, breed, age, sex, housing and geographical location.

Microsporum canis est le principal agent de dermatophytose chez les carnivores domestiques et est a l'origine d'infections zoonotiques tres frequentes dans le monde entier. Pour mieux comprendre les interactions hote-parasite, il est necessaire d'etudier les differents composants des champignons pouvant intervenir dans leur pathogenicite ainsi que les mecanismes de defense de l'hote, en particulier, la reponse immune. Ainsi pour etudier l'infection a m. Canis chez les carnivores domestiques, nous avons, dans un premier temps, isole de nombreuses souches de m. Canis chez des carnivores domestiques. Ensuite nous avons compare leurs profils electrophoretiques et leurs activites enzymatiques. Dans toutes ces souches, nous avons decele une activite keratinasique ; en outre, les souches exprimant une forte activite chymotrypsique provenaient des lesions les plus inflammatoires. Parallelement, nous avons teste un modele experimental d'infection par microsporum canis chez le chat notamment avec un inoculum forme d'arthroconidies produites in vitro. Ensuite, afin d'etudier les keratinases de m. Canis, nous avons selectionne les souches les plus productives et optimise les conditions de culture. Une keratinase a ete caracterisee comme etant une serine-protease de type chymotrypsique/substilisine avec un ph optimal de 8,5. La purification de cette protease par chromatographie d'affinite sur phenylalanine-agarose suivie d'une analyse en sds-page nous a permis d'estimer sa masse moleculaire a 33 kda. Enfin, nous avons etudie l'immunite humorale chez des carnivores naturellement et experimentalement infectes par m. Canis par electrosynerese et par immuno-empreinte (western blot). Des anticorps anti-m. Canis ont ete detectes chez 24% des animaux infectes par m. Canis, mais plus frequemment chez les chiens infectes (65%) que chez les chats (13%). Nous avons montre que cette reponse humorale etait dirigee contre de nombreux antigenes de m. Canis ; en revanche la recherche d'anticorps anti-chymotrypsine de m. Canis s'est revele negative

A dermatofitose é a zoonose micótica mais difundida mundialmente e os animais domésticos são os principais reservatórios dos dermatófitos zoofílicos que, em alguns países, são causadores mais frequentes da doença em humanos do que as espécies antropofílicas. Especificamente em relação ao Microsporum canis, principal espécie zoofílica nas zonas urbanas, pouco sucesso foi obtido com a produção de vacinas para seu controle. Os objetivos dessa pesquisa foram verificar a ocorrência gatos clinicamente sadios portadores de dermatófitos na região metropolitana de Porto Alegre e, também, analisar estatisticamente a influência de fatores como idade, sexo, raça e acesso à rua. Amostras foram obtidas do pelame de 191 gatos sem sinais clínicos de dermatoses após fricção dos pelos (face, região pré-auricular, dorso, cauda e membros) que foram semeadas em ágar Sabouraud acrescido de cloranfenicol e ciclohexamida e incubadas a 27°C por até 21 dias. A possibilidade da associação entre as variáveis preditoras e a variável resposta foi avaliada através de um modelo de regressão logística univariado. Somente espécies de Microsporum (8,4%) foram isoladas de amostras positivas: M. canis (5,8%) e M. gypseum (2,6%). Em 15 (7,8%) das amostras não ocorreu crescimento fúngico. Nos restantes 160 (83,8%) cultivos foram isolados diversos fungos saprotróficos: filamentosos hialinos (Penicillium sp., Aspergillus sp., Acremonium sp., Chrysosporium sp., Paecilomyces sp., Fusarium sp. e Scopulariopsis sp.); filamentosos dematiáceos ( Cladosporium sp., Alternaria sp. e Curvularia sp.); zigomicetos (Rhizopus sp. e Mucor sp.) e leveduras (Malassezia sp. e Candida sp.). Foi observado um maior risco relativo para o isolamento de dermatófito quando o animal era do sexo masculino e teve acesso à rua em uma magnitude de 3,43 e 3,52, respectivamente. Não foi identificado nenhum fator protetivo na análise multivariada. O modelo final teve poder discriminatório de 72%. Ainda são poucas as informações sobre o complexo mecanismo de infecção e a susceptibilidade dos animais, mas o isolamento fúngico de gatos sadios aliado a dados epidemiológicos são importantes ferramentas para o diagnóstico e tratamento desta micose. Os resultados obtidos corroboram estudos similares realizados em regiões metropolitanas de outros países. É enfatizada a possibilidade de contágio humano a partir de gatos assintomáticos e a necessidade da adoção de medidas profiláticas para reduzir a disseminação dos dermatófitos.
Dermatophytoses are in the list of the most frequent skin diseases of pets and livestock all over the world. Contagiousness among animal communities, difficulty in implementing control measures, and the eventual transmition of animal ringworm to people explain its great importance. A wide variety of dermatophytes have been isolated from animals, but a few zoophilic species are responsible for the majority of the cases. Microsporum canis is one of these and in some countries seems to cause a high proportion of human infections, outnumbering classical ringworm anthropophilic dermatophytes. So far, a safe and efficient vaccine is not available for protecting cats and dogs exposed to M. canis. The objective of this study is to survey dermatophytes in clinically normal cats in the metropolitan area of Porto Alegre, south of Brazil, and weight the possible influence of age, sex, breed and living conditions in the presence of these fungi. Samples were obtained from 191 cats with no skin disease after brushing the body (head, neck, dorsum, limbs and tail) and incubated on Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol and cyclohexamide at 27°C for up to 21 days. The possibility of association between predictors variables and a variable answer was evaluated by an univariate logistic regression model. Only Microsporum species, (8,4%) were isolated from positive specimens: M. canis (5,8%) and M. gypseum (2,6%). On 15 samples (7,8%) there was no fungal growth. Of the remaining 160 samples (83,8%), several saprotrophic fungi were isolated: hyaline filamentous fungi (Penicillium sp., Aspergillus sp., Acremonium sp., Chrysosporium sp., Paecilomyces sp., Fusarium sp. and Scopulariopsis sp.); dematiaceous filamentous fungi (Cladosporium sp., Alternaria sp. and Curvularia sp.); Zygomycetes (Rhizopus sp. and Mucor sp.) and yeasts (Malassezia sp. and Candida sp.). It was observed an higher relative risk for the isolation of dermatophyte when the cat was male and was allowed to walk outdoors in a magnitude of 3.43 and 3.52, respectively. The multivariate analysis did not identify any protective factor against dermatophytosis. The final model had a discriminatory power of 72%. There are few informations about the complex mechanisms of infection and susceptibility of the animals, but fungal isolation from healthy cats associated with epidemiological features are important tools in the diagnosis and management of the problem. Results of this research are similar to others conducted around urban areas of different countries across the world. It is emphasized that human beings can be contaminated from apparently healthy cats and the author stresses the necessity of prophylactic measures in order to reduce the spread of dermatophytosis.

As dermatofitoses causadas por um grupo de fungos filamentosos e queratinofílicos, na maioria cosmopolita, acometem um grande número de mamíferos. Os cães e gatos são os principais reservatórios e fontes de infecções de Microsporum canis aos humanos e a outros animais domésticos. Dados epidemiológicos sobre as infecções fúngicas são importantes para diagnóstico, tratamento e prevenção. Os objetivos do trabalho foram analisar a frequência, os fatores de risco e a tendência secular da dermatofitose em cães e gatos no período de 1979 a 2009 em Porto Alegre, RS, Brasil. Foi realizado um estudo epidemiológico observacional retrospectivo, com os dados de 6695 amostras de animais com suspeita clínica de dermatofitose (5584 (83,4%) cães e 1111 (16,6%) gatos). A frequência encontrada foi de 16,6%, sendo o fungo Microsporum canis o mais isolado em cães (78,4%) e gatos (97%). Observou-se uma maior frequência de amostras positivas provenientes de gatos. A frequência também foi maior em cães e gatos com raça definida. Nos cães foi observada maior chance de dermatofitose em animais com idade entre 1 e 24 meses e com pelagem média a longa. Já nos gatos a chance foi maior em animais jovens, onde a probabilidade de isolamento diminui aproximadamente 2,3% a cada incremento de um mês na idade. Também uma maior chance de dermatofitose em gatos com pelagem média a longa. As análises mostraram um aumento médio da positividade com o aumento da umidade relativa do ar e período de tempo. O exame microscópico dos pelos apresentou 48% de sensibilidade e 97,4% de especificidade, enquanto o teste da lâmpada de Wood 64,52% de sensibilidade e 89,22% de especificidade quando comparados com o cultivo fúngico. A espécie fúngica com maior frequência de isolamentos nesta população foi o Microsporum canis, além disso, os gatos apresentaram maior risco de contrair dermatofitose por este agente do que os cães. Os fatores de risco encontrados nessa população estavam relacionados com idade (animais jovens), pelagem (média a longa) e umidade relativa do ar (maiores índices). A frequência de isolamentos aumentou ao longo do período (1979 – 2009) e o cultivo fúngico foi considerado como padrão-ouro para diagnosticar a dermatofitose.
Dermatophytoses are caused by a group of fungi with keratinophilic and keratinolytic properties. A wide variety of dermatophytes have been isolated from a large number of mammals. Dogs and cats are the main carriers and sources of infections of Microsporum canis to human as well as to other domestic animals. Epidemiological data about fungal infections are important for diagnosis, treatment and prevention. The objectives of the present study were to analyze the frequency, the risk factors, and the secular tendency of dermatophytoses in dogs and cats from 1979 to 2009 in Porto Alegre, RS, Brazil. A retrospective observational epidemiological study was performed based on data obtained from 6695 samples of animals with clinical suspicion of dermatophytoses [5584 (83.4%) dogs and 1111 (16.6%) cats]. The frequency found was 16.6%, being Microsporum canis the most isolated fungus in dogs (78.4%) and cats (97%). It was observed a higher frequency of positive samples originated from cats. The frequency was also higher in dogs and cats with a defined breed. In dogs, the probabilitie of dermatophytoses was greater in animals between 1 and 24 months, with medium to long coat. On the other hand, the chance observed in cats was higher in young animals, where the probability of isolation decreases around 2.3% for each additional month of age. There is a greater chance of dermatophytosis in cats with medium to long coats as well. The analyses had demonstrated a medium raise in positivity with the increasing of the relative air humidity and period of time. The microscopic examination of the coat revealed 48% of sensitivity and 97% of specificity, while with Wood’s lamp test, it was achieved 64.52% of sensitivity and 89.22% of specificity when compared to fungal culture. The fungal species with higher frequency of isolation in this population was Microsporum canis and cats were more likely to be infected by this agent than dogs. The risk factors found in this population were related to age (young animals), coat (medium to long), and relative air humidity (higher rates). The frequency of isolation increased throughout the period (1979 - 2009) and fungal culture was considered as the “gold standard” for diagnosing dermatophytoses.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-06-18T14:44:33Z No. of bitstreams: 1 Carlos Adriano de Santana Leal.pdf: 1268535 bytes, checksum: 8c99ca6fceca2937628813239c097e09 (MD5)
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The aim of this study was to standardize a multiplex PCR (mPCR) reaction to detect Microsporum canis, Microsporum gypseum and the Trichophyton mentagrophytes complex in fur and/or crusts samples of dogs and cats. 250 samples were analyzed by direct examination and culture; The DNA from these samples was extracted using the DNeasy Blood & Tissue extraction kit (QIAGEN®, Hilden-Germany). For the PCR, primers were designed for the M. canis, M. gypseum and T. mentagrophytes species and the DNA extracted from colonies of M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) and T. mentagrophytes (URM 6211) from the Collection of Cultures of the Micoteca of the Mycology Department of the Biological Sciences Center of the Federal University of Pernambuco, were utilized as positive controls. A PCR for the detection of M. canis and an mPCR for the detection of M. canis, M. gypseum and the T. mentagrophytes complex was standardized. The protocols standardized in this study, from drawn primers, showed good sensitivity and high specificity in the detection of M. canis, M. gypseum and T. mentagrophytes directly from samples of fur and/or crusts of dogs and cats, making possible a faster and specificity in the results, can be used in the laboratory routine as methods capable of speeding the detection of the agents in question.
Objetivou-se neste estudo padronizar uma reação do tipo multiplex PCR (mPCR) para detectar Microsporum canis, Microsporum gypseum e o complexo Trichophyton mentagrophytes em amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos. Foram analisadas 250 amostras por meio de exame direto e cultura; o DNA destas mesmas amostras foi extraído utilizando-se o kit de extração DNeasy Blood & Tissue (QIAGEN®, Hilden - Germany). Para a PCR foram desenhados primers para as espécies M. canis, M. gypseum e T. mentagrophytes e como controle positivo da reação utilizou-se o DNA extraído de colônias de M. canis (URM 6273), M. gypseum (URM 6921) e T. mentagrophytes (URM 6211), provenientes da Coleção de Culturas da Micoteca do Departamento de Micologia do Centro de Ciências Biológicas da Universidade Federal de Pernambuco. Padronizou-se uma PCR para detecção de M. canis e uma mPCR para detecção de M. canis, M. gypseum e o complexo T. mentagrophytes. Os protocolos padronizados neste estudo, a partir de primers desenhados, apresentaram boa sensibilidade e alta especificidade na detecção de M. canis, M. gypseum e T. mentagrophytes diretamente de amostras de pelos e/ou crostas de cães e gatos, viabilizando um diagnóstico mais rápido e específico, podendo ser empregados na rotina laboratorial como métodos para agilizar a detecção dos agentes estudados.

No Brasil, a casuística de dermatofitose de cães e gatos, atendida em hospitais escola e clínicas veterinárias oscila entre 1,7 à 11,5%. E embora o percentil de casos de dermatofitoses na rotina da clínica veterinária, seja reduzido, quando cotejado a outras dermatopatias, tem relevância pelo fato de tratar-se de uma antropozoonose, refletindo então sua grande importância em saúde pública. Relata-se que cerca de 15% dos casos de dermatofitose em humanos sejam de origem zoonótica. A dermatofitose animal é uma dermatopatia causada por fungos queratinofílicos e queratinolíticos pertencentes aos gêneros Microsporum e Trichophyton. Assim sendo, o fungo zoofilico M. canis é o dermatófito mais comumente isolado em carnívoros domésticos, sendo considerado como o agente causador de 90 a 100% dos casos de dermatofitose. Os dermatófitos são transmitidos por contato direto com pelos ou escamas infectadas por artrósporos, presentes nos animais, no ambiente ou por fômites. A diferenciação diagnóstica deve ser considerada em todo e qualquer caso de presença de lesões alopécicas, ceratóticas e escamocrostosas. A consecução diagnóstica é desafiadora e o emprego de cultivos fúngicos é bastante útil, porém requerem experiência laboratorial e necessitam de tempo, de cerca de 21 dias, para se obter o resultado final. Diante da escassez de trabalhos envolvendo procedimentos diagnósticos alternativos, a exemplo de técnicas sorológicas para a diagnose da microsporíase, e da necessidade de dispor de exames confiáveis e rápidos para um precoce diagnóstico, objetivou-se desenvolver e avaliar a eficácia diagnóstica dos testes imunoenzimáticos ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) e Western blot (WB), para o diagnóstico sorológico da dermatofitose felina causada por M. canis em gatos Persas assintomáticos. Para tanto, selecionou-se 70 felinos de idades variadas e de quaisquer dos sexos, os quais foram alocados em três Grupos: S (Sintomático) com 20 animais, AS (Assintomáticos) com 30 animais e N (Negativos) constituído por 20 felinos. Todos os animais foram submetidos à colheita de sangue para realização dos testes sorológicos, interposição pela Lâmpada de Wood e cultivo micológico. Comparando-se os valores de ELISA entre os grupos positivos e negativos, obtiveram-se 94% de sensibilidade e 75% especificidade. Obteve-se, também, área sob a curva ROC de 0,92. Observou-se que não houve diferença estatística entre os Grupos Sintomáticos e Assintomáticos (p<0,05). Ao WB detectou-se 13 bandas dos seguintes pesos moleculares: 132, 83, 75, 73, 57, 54, 50, 40, 35, 33, 32, 30 e 25 kDa. Considerou-se a proteína mais imunogênica a de 50 kDa, onde observou-se reatividade de 83,3% no Grupo sintomático e de 66,6% no Grupo assintomático. Conclui-se que a dermatofitose induz evidente resposta imune humoral, que se expressa pela elevação dos níveis de IgG anti-M.canis. Conclui-se, também, que as técnicas de ELISA e WB são eficazes para o diagnóstico sorológico da dermatofitose causada por M. canis em gatos Persas sintomáticos e assintomáticos
The number of dogs and cats affected by ringworm seen at teaching hospitals and veterinary clinics in Brazil ranges from 1,7 to 11,5 %. And although the percentile of ringworm cases in veterinary practice routine is reduced when compared with other skin diseases, it has relevance because it is anthropozoonosis with public health significance. In humans, 15% of ringworm's (tinea) cases come from zoonotic transmission and most of these cases are acquired through contact with affected cats. Animal dermatophytosis is a skin disease caused by keratinolytics and keratinophilics fungi belonging to the genera Microsporum and Trichophyton. The zoophilic fungus M. canis is the most frequently isolated dermatophyte in domestic carnivores, being regarded as the causative agent associated with 90 to 100% of ringworm cases. Dermatophytes are transmitted by direct contact with scales or hairs infected by arthrospores, present in the animals, in the environment or in fomites. The differential diagnosis for dermatophytosis should be considered in every case of alopecia, keratotic scales and crusty lesions. The diagnosis is challenging and the use of fungal cultures is quite useful but requires laboratorial experience and need at least 21 days to get the result. Given the scarcity of studies involving alternative diagnostic procedures, like serological techniques for the dermatophytosis's diagnosis, and the need for reliable and rapid tests for early diagnosis, this study aimed to develop and evaluate the diagnostic efficacy of enzyme immunoassays ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay) and Western blot (WB), for the diagnosis of feline's dermatophytosis caused by M. canis in Persian cats. Seventy cats of various ages and any of the sexes were divided into three groups: S (symptomatic) with 20 animals, AS (asymptomatic) with 30 animals and N (negative) with other 20 cats. All animals were submitted to mycological cultivation, Wood lamp and blood samples for carrying out the serological tests. Comparing the ELISA values between positive and negative groups yielded 94% sensitivity and 75% specificity. There was no statistic difference between groups symptomatic and asymptomatic (p <0,05). The WB technique detected 13 bands of the following weights: 132, 83, 75, 73, 57, 54, 50, 40, 35, 33, 32, 30 and 25 kDa. The 50 kDa protein was considered the most immunogenic protein, observing reactivity in 83.3% in the symptomatic group and 66.6% in the asymptomatic group. The study concludes that the ringworm induces clear humoral immune response. In addition, the ELISA and WB techniques are effective for the diagnosis of dermatophytosis caused by M. canis in symptomatic and asymptomatic Persian cats

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Biosurfactants are amphiphilic molecules produced by micro-organisms that consist of a hydrophilic portion and a hydrophobic portion. The hydrophilic portion consists of mono-oligo-or polysaccharides, proteins or peptides and the hydrophobic portion contains saturated, unsaturated and hydroxy fatty acids or alcohols. Many micro-organisms produce surfactants with antibacterial, antifungal, antitumor, antiparasitic and herbicide use in medicine and agriculture. In this sense, producing a biosurfactant by Streptomyces sp. DPUA1559 isolated Amazon region, grown in medium containing soybean oil and waste frying peptone was performed using a 22 factorial design to investigate the effects and interactions on the response variables surface tension, emulsification index and production yield. The production of the biosurfactant was confirmed by reduction of surface tension. The critical micelle concentration (CMC) was 10 mg/ml and the average surface tension at the focal point was about 25,34 mN/m in a yield of 1,17 g/l. The isolated biosurfactant showed emulsification index 89% to 95% engine oil and engine oil residual. The kerosene emulsification showed a 40%, while the diesel oil was not emulsified effectively. For vegetable oils (corn, canola, soybean, and sunflower) emulsion was formed around 47%. The isolated biosurfactant was stable when subjected to extreme environmental conditions of pH, temperature and NaCl concentration and showed no toxicity when tested against the micro-crustacean Artemia salina and seeds of vegetables lettuce (Lactuca sativa L.) and cabbage (Brassica oleracea L.). The characterization of biomolecule analysis demonstrated the chemical composition of 20% protein and 38% carbohydrate. Molecular characterization on polyacrylamide gel electrophoresis SDS-PAGE showed the biosurfactant a single protein band and 14.3kDa character acid. The spectral analysis method by FT-IR-Atr revealed a chemical structure composed mainly of peptides with different polarities. The strains of Microsporum canis isolates from dogs superficial mycoses were susceptible in the presence of biosurfactant isolated presenting a growth inhibition at concentrations of 1.9 to 1000 μg/ml.
Biossurfactantes são moléculas anfifílicas produzidas por micro-organismos que consistem em uma porção hidrofílica e uma porção hidrofóbica. A porção hidrofílica é constituída por mono-oligo ou polissacarídeos, peptídeos ou proteínas e a porção hidrofóbica contém saturado, insaturado e hidroxilados de ácidos graxos ou álcoois. Muitos micro-organismos produzem surfactantes com atividade antibacteriana, antifúngica, antitumoral, antiparasitária e herbicida com uso na medicina e agricultura. Neste sentido, a produção de um biossurfactante por Streptomyces sp. DPUA1559 isolado da Região Amazônica, cultivado em meio contendo óleo de soja residual de fritura e peptona, foi realizada utilizando-se um planejamento fatorial 22 para verificar os efeitos e interação sobre as variáveis respostas tensão superficial, índice de emulsificação e rendimento de produção. A produção do biossurfactante foi confirmada pela redução da tensão superficial. A concentração micelar crítica (CMC) foi de 10 mg/ml e a média da tensão superficial no ponto central foi em torno de 25,34 mN/m com um rendimento de 1,17 g/l. O biossurfactante produzido apresentou índice de emulsificação 89% para óleo de motor e 95% óleo de motor residual. O querosene apresentou uma emulsificação de 40%, enquanto o óleo diesel não foi efetivamente emulsificado. Para os óleos vegetais (milho, canola, soja e girassol) a emulsão formada foi em torno de 47%. O biossurfactante produzido mostrou estabilidade quando submetido a condições ambientais extremas de pH, temperatura e concentração de NaCl e não apresentou toxicidade quando testado frente ao micro-crustáceo Artemia salina e às sementes dos vegetais alface (Lactuca sativa L.) e repolho (Brassica oleracea L.). A analise da caracterização da biomolécula demostrou na sua composição química 20% de proteína e 38% de carboidrato. Na caracterização molecular em eletroforese de gel de poliacrilamida SDS-PAGE o biossurfactante mostrou uma única banda proteica 14,3 kDa e caráter ácido. A análise espectral pelo método FT-IR-Atr revelou uma estrutura química composta basicamente por peptídeos, com polaridades diferentes. As linhagens de Microsporum canis isolados de micoses superficiais de cães foram susceptíveis na presença do biossurfactante isolado, apresentando uma inibição de crescimento a partir da concentração de 1,9 a 1000 μg/ml.

Dermatófitos são denominados os fungos filamentosos queratinofílicos e queratinolíticos responsáveis pela dermatofitose, uma importante zoonose de ocorrência mundial. Gatos são considerados hospedeiros naturais e potenciais carreadores de fungos dermatofíticos, especialmente Microsporum canis, principal agente da dermatofitose em pequenos animais e que frequentemente acomete humanos. A prevalência dos dermatófitos em gatos sem dermatopatias apresenta variações regionais atribuídas aos aspectos climáticos e às características associadas a cada população. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi estimar a frequência de dermatófitos isolados de gatos que não apresentavam sinais clínicos de dermatopatias na região metropolitana de Florianópolis - SC, entre julho de 2015 e outubro de 2016. Características como sexo, idade, comprimento do pelame, sorologia para FIV e FeLV, acesso à rua e contato com outros gatos foram avaliadas em associação ao isolamento de dermatófitos. Amostras do pelame de 198 gatos foram obtidas através da técnica de MacKenzie que consiste na escovação vigorosa dos pelos, por todo corpo do animal, utilizando escova dental estéril. Cento e dez amostras (55,6%) foram colhidas em clínicas veterinárias e 88 (44,4%) em domicílios com numerosos gatos (11 em média). O cultivo micológico foi realizado em Sabouraud Agar Cloranfenicol-Ciclo-hexamida (SCC) e a incubação realizada a 25-27°C, durante 21-28 dias. O diagnóstico foi baseado nas características macro e micromorfológicas do dermatófito isolado. A frequência de dermatófitos correspondeu a 3,0% (6/198), onde apenas o gênero Microsporum foi observado com predomínio de M. canis (66,7%; 4/6), seguido de M. gypseum (33,3%; 2/6). Fungos saprotróficos foram observados em 94,4% das culturas e 5,6% das amostras não tiveram crescimento fúngico. A maior parte dos isolados ocorreu de gatos adultos (66,7%; 4/6), fêmeas (83,3%; 5/6) e de pelame longo (5,4%; 3/55), em comparação às amostras de pelame curto (2,1%; 3/143). Uma parcela dos gatos (30,0%; 59/198) havia sido testada para FIV/FeLV e destes, 27,0% (16/59) eram positivos: 22,0% para FeLV e 5,0% para FIV. Microsporum gypseum foi isolado de um gato FeLV positivo. Dermatófitos foram isolados de gatos em contato com outros gatos (5/165). No entanto, gatos provenientes de domicílios com alta densidade populacional não apresentaram cultura positiva para dermatófitos, fato atribuído à intensa contaminação por espécies saprotróficas. Na ausência de sinais clínicos, há o desafio de detectar fungos dermatofíticos nas criações, o que ressalta a necessidade de controle entre os felinos. O cultivo micológico é um método eficaz, econômico e deve ser indicado pelos médicos veterinários que atuam na clínica médica, tanto no âmbito doméstico, como em abrigos para prevenção e controle da infecção em animais e humanos.
Dermatophytes are the filamentous fungi keratinophilic and keratinolytic responsible for dermatophytosis, an important worldwide zoonosis. Cats are considered natural hosts and potential carriers of dermatophytes especially Microsporum canis, the main agent of dermatophytosis in small animals and frequently affects humans. The prevalence of dermatophytes in cats without dermatopathies presents regional variations attributed to the climatic aspects and the characteristics associated with each population. In this context, the aim of this study was to estimate the frequency of dermatophytes isolated from cats that had no clinical signs of dermatopathies in the Metropolitan Area of Florianópolis - SC between July 2015 and October 2016. Sex, age, length of hair, serology for FIV and FeLV, outdoors access and contact with other cats were evaluated in association with the isolation of dermatophytes. Hair samples of 198 cats were obtained through the MacKenzie brush technique consisting of vigorous brushing of the hairs, throughout the animal's body, using a sterile toothbrush. One hundred and ten samples (55.6%) were collected in veterinary clinics and 88 (44.4%) in multiple household cats (average 11). Mycological culture was performed onto Sabouraud Agar Chloramphenicol- Cyclohexamide (SCC), and incubated at 25-27°C for 21-28 days. The diagnosis was based on the macro and micromorphological characteristics of the isolated dermatophyte. The frequency of dermatophytes corresponded to 3.0% (6/198). Only the genus Microsporum was observed with predominance of M. canis (66.7%; 4/6), followed by M. gypseum (33.3%; 2/6). Saprotrophic fungi were observed in 94.4% of the cultures and 5.6% of the samples did not occurred fungal growth. Most of the isolates occurred in adult (66.7%; 4/6), female (83.3%; 5/6) and long hair cats (5.4%; 3/55) compared to the short hair (2.1%). Part of this cats (30.0%, 59/198) had been tested for FIV / FeLV and, among them, 27.0% were positive (22.0% FeLV and 5.0% FIV). Microsporum gypseum was isolated from one FeLV positive cat. Dermatophytes were isolated from cats in contact with other cats (5/165). However, multiple household cats had no positive cultures and this outcome can be associated to high contamination by saprotrophic fungi. In the absence of clinical signs, the challenge of detecting dermatophytic fungi in the creations, which highlights the needs of control among the felines. Mycological cultivation is an effective, economical method and should be indicated by veterinarians working in the medical clinic, both at home and in shelters for the prevention and control of animal and human infection.

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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Piper umbellatum L. Miq. é uma planta pertencente à família Piperaceae encontrada em todas as regiões do Brasil e tradicionalmente usada para diversas enfermidades e afecções. O trabalho visou estudar a atividade antifúngica de P. umbellatum frente a isolados clínicos de Microsporum canis e Trichophyton rubrum, por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM). O estudo fitoquímico dos extratos hexânico e etanólico de partes aéreas de Piper umbellatum levou ao isolamento de 2 substâncias, a sesamina e o 4-nerolidicatecol (4NC). Frente a M. canis, o extrato etanólico apresentou CIM de 39,1 μg/mL, o hexânico apresentou CIM de 1250 μg/mL, enquanto os extratos clorofórmico e acetato de etila apresentaram CIMs de 78,13 μg/mL, sendo 16 μg/mL para o fluconazol como controle positivo para ambos os fungos. O fracionamento do extrato etanólico levou à obtenção da fração 11 que apresentou o melhor valor de CIM entre as frações, de 9,77 μg/mL para o M. canis. O 4NC foi obtido desta fração 11 e apresentou os melhores CIMs observado deste estudo, de 2,4 μg/mL para M. canis e 4,88 μg/mL, para T. rubrum. Após tratamento com 4NC, Microsporum canis demonstrou uma alteração no perfil proteico avaliado por SDS-PAGE, com o aparecimento de bandas de aproximadamente 139 e 30 kDa entre as proteínas intracelulares e de 35 e 15 kDa entre as extracelulares, bandas que foram analisadas por LC-MS/MS (MALDI-TOF/TOF). O extrato etanólico não demonstrou citotoxicidade a 500 μg/mL, enquanto o 4NC apresentou valores de IC50 de 18,3 e 31,5 μg/mL frente às linhagens de Hep G2 e MRC-5.
Piper umbellatum L. Miq. is a plant belonging to the Piperaceae family found in all regions of Brazil and traditionally used for various diseases and disorders. This work evaluates the antifungal activity of P. umbellatum against clinical isolates of Microsporum canis and Trichophyton rubrum by the determination of minimal inhibitory concentration (MIC).The phytochemical study of hexane and ethanol extracts of the aerial parts of Piper umbellatum led to the isolation of two substances, sesamin and 4-nerolidylcatechol (4NC). When tested against M. canis, the ethanol extracts showed MIC value of 39.06 μg/mL meanwhile the chloroform and ethyl acetate extracts showed MICs value of 78.13 μg/mL and the hexane extract showed MIC of 1250 μg/mL, the MIC value of fluconazole used as control was 16 μg/mL. The fractionation of the ethanol extract led to obtain of fraction 11 that presented the best MIC between the fractions, of 9.77 μg/mL to M. canis. 4NC was obtained from fraction 11 and presented the best MIC in this study, 2.44 μg/mL for M. canis and 4.88 μg/mL, for T. rubrum. M. canis showed a change in the protein profile in SDS-PAGE after treatment with 4NC, with the appearance of bands of approximately 139 and 30 kD intracellular protein and 35 and 15 kDa in extracellular protein, each of those bands was analyzed through LC-MS/MS (MALDI-TOF/TOF). The ethanolic extract wasn‟t citotoxic until 500 μg/mL, while 4NC presented IC50 values of 18.3 and 31.5 μg/ml to Hep G2 and MRC-5 cell lines.
FAPESP: 13/10578-0

Orientador: Rosemeire Cristina Linhari Rodrigues Pietro
Coorientador: Ana Marisa Fusco Almeida
Banca: Ana Helena Januario
Banca: Tais Maria Baub
Resumo: Piper umbellatum L. Miq. é uma planta pertencente à família Piperaceae encontrada em todas as regiões do Brasil e tradicionalmente usada para diversas enfermidades e afecções. O trabalho visou estudar a atividade antifúngica de P. umbellatum frente a isolados clínicos de Microsporum canis e Trichophyton rubrum, por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM). O estudo fitoquímico dos extratos hexânico e etanólico de partes aéreas de Piper umbellatum levou ao isolamento de 2 substâncias, a sesamina e o 4-nerolidicatecol (4NC). Frente a M. canis, o extrato etanólico apresentou CIM de 39,1 μg/mL, o hexânico apresentou CIM de 1250 μg/mL, enquanto os extratos clorofórmico e acetato de etila apresentaram CIMs de 78,13 μg/mL, sendo 16 μg/mL para o fluconazol como controle positivo para ambos os fungos. O fracionamento do extrato etanólico levou à obtenção da fração 11 que apresentou o melhor valor de CIM entre as frações, de 9,77 μg/mL para o M. canis. O 4NC foi obtido desta fração 11 e apresentou os melhores CIMs observado deste estudo, de 2,4 μg/mL para M. canis e 4,88 μg/mL, para T. rubrum. Após tratamento com 4NC, Microsporum canis demonstrou uma alteração no perfil proteico avaliado por SDS-PAGE, com o aparecimento de bandas de aproximadamente 139 e 30 kDa entre as proteínas intracelulares e de 35 e 15 kDa entre as extracelulares, bandas que foram analisadas por LC-MS/MS (MALDI-TOF/TOF). O extrato etanólico não demonstrou citotoxicidade a 500 μg/mL, enquanto o 4NC apresentou valores de IC50 de 18,3 e 31,5 μg/mL frente às linhagens de Hep G2 e MRC-5.
Abstract: Piper umbellatum L. Miq. is a plant belonging to the Piperaceae family found in all regions of Brazil and traditionally used for various diseases and disorders. This work evaluates the antifungal activity of P. umbellatum against clinical isolates of Microsporum canis and Trichophyton rubrum by the determination of minimal inhibitory concentration (MIC).The phytochemical study of hexane and ethanol extracts of the aerial parts of Piper umbellatum led to the isolation of two substances, sesamin and 4-nerolidylcatechol (4NC). When tested against M. canis, the ethanol extracts showed MIC value of 39.06 μg/mL meanwhile the chloroform and ethyl acetate extracts showed MICs value of 78.13 μg/mL and the hexane extract showed MIC of 1250 μg/mL, the MIC value of fluconazole used as control was 16 μg/mL. The fractionation of the ethanol extract led to obtain of fraction 11 that presented the best MIC between the fractions, of 9.77 μg/mL to M. canis. 4NC was obtained from fraction 11 and presented the best MIC in this study, 2.44 μg/mL for M. canis and 4.88 μg/mL, for T. rubrum. M. canis showed a change in the protein profile in SDS-PAGE after treatment with 4NC, with the appearance of bands of approximately 139 and 30 kD intracellular protein and 35 and 15 kDa in extracellular protein, each of those bands was analyzed through LC-MS/MS (MALDI-TOF/TOF). The ethanolic extract wasn‟t citotoxic until 500 μg/mL, while 4NC presented IC50 values of 18.3 and 31.5 μg/ml to Hep G2 and MRC-5 cell lines.
Mestre

A dermatofitose é micose superficial desencadeada, principalmente, pelo Microsporum canis e de ocorrência comum nos felinos da raça Persa. Objetivou-se no presente estudo avaliar e comparar a melhora clínica e negativação micológica nos animais tratados com a terbinafina em pulsoterapia em relação a terapia contínua; evidenciar o acúmulo de terbinafina no pelame e o tempo em que o fármaco permanece em doses terapêuticas após a suspensão de sua administração; correlacionar a melhora clínica com a quantificação do fármaco no pelame; comparar a ocorrência de efeitos colaterais em pulsoterapia em relação a terapia contínua.. Foram incluídos nesse estudo, 27 gatos da raça Persa, 17 portadores assintomáticos e 10 sintomáticos do M. canis, o Grupo I foi composto por 13 fêmeas tratadas em pulsoterapia. Durante os primeiros sete dias a terbinafina foi administrada na dose de 20 mg/kg a cada 24 horas por via oral, seguidos por um período de suspensão da medicação pelos 21 dias subseqüentes, posteriormente foi realizado um segundo ciclo de sete dias, na dose de 40 mg/kg a cada 24 horas, novamente seguidos por um período de suspensão do fármaco nos 21 dias posteriores. O Grupo 11 foi constituído por 14 machos, que receberam terapia contínua, durante 56 dias. Nos primeiros 28 dias foi administrada a dose de 20 mg/kg a cada 24 horas por via oral e nos 28 dias subseqüentes a dose foi aumentada para 40 mg/kg diários. Os animais foram submetidos à duas colheitas de pelame pela Técnica do carpete com intervalo de 15 dias, anteriormente e posteriormente à terapia. Também eram realizadas colheitas de pelame nos dias zero, sete, 28, 35 e 56 dias para realização da quantificação das concentrações de terbinafina no pelame dos animais tratados, pela cromatografia líquida de alta performance (HPLC). Quinzenalmente, colhia-se sangue para realização de função hepática. Houve cura clínica e micológica em 100% dos animais tratados, as concentrações de terbinafina no pelame dos gatos se mantiveram acima daquelas consideradas terapêuticas por 21 dias após a pulsoterapia de sete dias, tanto na dose de 20, quanto na dose de 40 mg/kg diários, mas ocorreu maior acúmulo do fármaco na dose mais alta em terapia contínua, todavia esses animais apresentaram episódios eméticos na primeira semana de terapia, além de aumento da atividade sérica das transferases e da fosfatase alcalina. Já no grupo da pulsoterapia, não houve aumento da atividade sérica das enzimas hepáticas. A terbinafina foi eficaz e segura no tratamento de portadores sintomáticos e assintomáticos de M. canis.
Dermatophytosis is a superficial mycosis caused mainly by Microsporum canis and is very common in Persian cats. The goals of this study were: to evaluate the clinical and mycological cure in the animais treated with terbinafine in pulse therapy compared with continuous therapy; the accumulation of terbinafine in cats hair and the time that it is maintained in therapeutical concentrations after its suspension; correlates the clinical cure with the quantity of the drug in the hair and compare the side effects in pulse therapy in relation to continuous therapy. In this study were included 27 Persian cats, 17 healthy carriers of M. canis and 10 cats with dermatophytosis. The group I was composed of 13 females treated with pulse therapy, during the first seven days in the dosis of 20 mg/kg, daily, followed by a period of suspension of the medication for 21 days, subsequently, it was realized a new cycle of therapy, more seven days of terbinafine in the dosis of 40 mg/kg daily, repeating a period of suspension for another 21 days . The group 11 was composed of 14 males, that received continuous therapy, during 56 days, in the first 28 days they received the oral dosis of 20 mg/kg daily and 40 mg/kg daily for the next 28 days. The animais were submitted to two mycological cultures collected by the carpet square method with 15 days of interval, before and after the therapy. It was realized also manual avulsion of the cats hair for the quantification of terbinafine by high performance liquid chromatography (HPLC) in the days zero, seven, 28, 35 and 56. Every 15 days, blood samples were taken for hepatic function evaluation. There were clinical and mycological cure in 100% of treated animais; the concentrations of terbinafine in cats hair were maintained above therapeutical concentrations in pulse therapy in the dosis of 20, and also in 40 daily oral administration, but there was a higher accumulation of the drug when it was used in the higher dosis in continuous therapy. Although were seen emesis in the first week of therapy, and also higher serical activities of hepatic enzymes. There were no alterations in the values of AL T and FA in the pulse therapy group. Terbinafine had good efficacy and was secure for the treatment of healthy carriers of M. canis and also in animais with dermatophytosis.

碩士
國立中興大學
獸醫學系
84
Of the 112 stray- and 317 house-dogs affected with skin disease were collected for dermatopathological studies.According to the disease pattern,26 skin diseases belongs to groups were diagnosed and shown as(1)BActerial diseases:impetigo, Furunculosis,phlegmon;(2)Parasitic diseases:fleas-bite allergy, sarcoptic mange,demondectic mange(3)Pigmentary abnormalities: acanthosis nigrican,vitiligo;(4)Immune-mediated dermatoses: urticaria,pemphigus;(5)Keratinization defects:acne,tail gland hyperplasia,Keratosis,idiopathic seborrhea;(6)Physicochemical diseases:callosites,hygroma,traumatic lesions,contact irriant;(7)Endocrine alopecia;(8)Mycotic diseases;(9)Neoplasm. From analysis of breed,age,sex,signs,lesion location,histology changes and other diagnostic aids,each of those skin disease had been described and discussed in detail.Although different etiologies resulted in some fundamental lesions of the skin,most of the cases revealed multiple lesions which were presumptively related to multiple etiological factors.(2)Twenty one fungus isolates were collected from 95 suspected dermatophytosis of stray- and house-dogs,and the isolation rate were13.3%(house) and55%(stray)respectively.Of which,three species were idetified including Microsporum canis(14/21),Microsporum gypseum(5/21), Trichophyton mentagrophytes(2/21)although M. canis(42.8%)was the principle isolate noticed in house dogs,M. gypseum(19%andT. mentagrophytes(9.5%)were two other major species found in stray dogs.Four antifungals(Griseofulvin,Clotrimazole,Thiabendazole, Ketoconazole)were conducted for MIC test.The result indicated that most strain of M. canis and M. gypseum showed markly sensitive to Griseofulvin and Clotrimazole under the concentration of 0.25cg/ml.However,Thiabendazole was less efficiency against most of the strains even increase the concentration of more than 64 ncg/ml.Theresults of skin inoculation model and treatment test showed that antifungal efficiency was enhanced by using suitable solvent(E:D=2:8)with respect to treat 0.125%.Moreover,increased the concentration of both Griseofulvin and Clotrimazole from 0.125% to 0.5% could even shorten the cure of period from 6-8 weeks to 2 weeks.

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2017
En esta tesis, los estudios in vitro demostraron que hifas vivas de M. canis activan a las células XS106 (línea celular derivada de LC murinas) y a LC localizadas dentro de la epidermis. Además, ambos tipos celulares fueron capaces de inducir un perfil Th17 en cultivos con linfocitos alogénicos. Esta tesis abre diferentes perspectivas de investigación para comprender la inmunidad de la piel en el contexto de la infección dermatofítica.
Burstein, Verónica Liliana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina.
Chiapello, Laura Silvina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.
Masih, Diana Teresa. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina.
Degano, Alicia Laura. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.
Irazoqui, Fernando José. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina.
Baldi, Pablo César. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina.