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Dissertations / Theses on the topic 'Mucines'
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Lahdaoui, Fatima. "Régulation de l’expression de la mucine MUC4 par les miARN et identification de nouveaux miARN dans le cancer du pancréas." Thesis, Lille 2, 2014. http://www.theses.fr/2014LIL2S020/document.
Full textAbstract:
La mucine MUC4 est un acteur important de la cancérogenèse pancréatique. Elle favorise la progression tumorale et son expression est associée à un mauvais pronostic. Il a également été montré l’implication de la mucine MUC4 dans la résistance aux chimiothérapies. L’ensemble de ces données souligne l’intérêt de la mucine MUC4 comme cible thérapeutique. De plus, sa néoexpression dès les stades précoces de la cancérogenèse pancréatique lui confère un rôle potentiel de marqueur précoce de la carcinogenèse. Les mécanismes moléculaires responsables de l’induction précoce de l’expression de MUC4 sont toutefois encore peu connus.L’étude de la régulation de l’expression de la mucine MUC4 contribuerait donc mieux à comprendre son rôle dans la cancérogenèse. Ainsi, il a été montré que le gène MUC4 est régulé in vitro par des mécanismes transcriptionnels et par des mécanismes épigénétiques de méthylation de l’ADN et des modifications post-traductionnelles des histones. En revanche, la régulation post-transcriptionelle de l’expression de MUC4 notamment par les miARN est peu connue. Nos travaux ont pour but d’identifier les miARN dérégulés dans le cancer du pancréas et/ou ciblant potentiellement MUC4, de déterminer le(s) miARN inhibant l’expression de la protéine oncogénique MUC4 et l’impact de l’administration de ce(s) miARN dans la cancérogenèse pancréatique, et d’identifier les miARN impliqués dans la chimiorésistance médiée par MUC4 dans le cancer du pancréas.Dans un premier temps, nous avons dressé le profil d’expression des miARN dans des lignées cellulaires pancréatiques humaines normales et cancéreuses par puces miARN. Nous avons pu mettre en évidence une signature d’expression de miARN qui a permis de valider nos modèles cellulaires. Puis, à l’aide des bases de données TargetScan, Microcosm et MiRanda, nous avons identifié les miARN ciblant potentiellement MUC4. L’analyse par PCR quantitative a permis de montrer que seuls le miR-145 et miR-219-1-3p étaient sous-exprimés dans l’ensemble des lignées cancéreuses étudiées. Finalement, uniquement miR-219-1-3p est capable d’inhiber l’expression protéique de MUC4 ; c’est pourquoi nous nous sommes intéressés à son rôle dans le cancer du pancréas.Nous avons observé une perte d’expression du miR-219-1-3p dans des tissus de patients atteints d’adénocarcinome pancréatique. Par deux approches complémentaires de surexpression (transitoire ou stable) ou d’inhibition de miR-219-1-3p, nous avons montré qu’il était capable de réprimer l’expression de MUC4 au niveau protéique en se fixant directement sur son 3’-UTR. Nous avons observé une inhibition de la migration et de la prolifération cellulaires associées à une diminution de l’expression de la cycline D1 et de l’activation des voies de signalisation Akt et Erk. In vivo, la croissance tumorale est fortement ralentie après l’injection intratumorale de miR-219-1-3p. Grâce au modèle murin Pdx1-Cre;LSL-KrasG12D de lésions PanIN, nous avons pu mettre en évidence que la perte d’expression du miR-219-1-3p intervient précocement dès les stades PanIN-1/2 de la cancérogenèse pancréatique et qu’il existait une corrélation inverse entre l’expression de miR-219-1-3p et celle de la mucine Muc4.Par ailleurs, nous avons observé que le traitement des cellules cancéreuses pancréatiques humaines par la gemcitabine induit une forte surexpression du miR-219-1-3p qui laisse penser à un rôle potentiel de ce miARN dans la sensibilité des cellules à la chimiothérapie. Cependant, cette surexpression n’a montré aucun effet sur la survie cellulaire après traitement. Nous avons par la suite mis en évidence un profil d’expression différentiel des miARN entre les cellules invalidées pour MUC4 et les cellules contrôles. [...]<br>The MUC4 mucin is an important actor of pancreatic tumorigenesis as it contributes to tumor progression and its expression correlates with a poor prognosis. It has also been shown that MUC4 is involved in resistance of cells to chemotherapies. In this context, MUC4 is a potential therapeutic target in pancreatic cancer. MUC4 neoexpression at early stages of carcinogenesis confers to this mucin a potential interest as an early marker. Molecular mechanisms responsible for MUC4 induction of expression are not well defined. Thus, studying MUC4 gene expression regulation would contribute to better understand its role in tumorigenesis. MUC4 gene is regulated at the transcriptional level and epigenetically by DNA methylation and histone modifications mechanisms. However, MUC4 post-transcriptional regulation notably by miRNA is largely unknown. Our work aimed at (i) identifying miRNA dysregulated in pancreatic cancer and/or potentially targeting MUC4, (ii) determining miRNA(s) inhibiting MUC4 expression and its (their) impact on pancreatic carcinogenesis and finally (iii) identifying miRNAs involved in chemoresistance mediated by MUC4 in pancreatic cancer.First, using miRNA microarrays we established the miRNA expression profile of normal and cancerous pancreatic cell lines. We showed a cancer-specific miRNA signature which allows us to validate our cellular models. Then, performing in silico studies with TargetScan, Microcosm and MiRanda databases led us to identify miRNA potentially targeting MUC4. Analysis by qRT-PCR showed that miR-145 and miR-219-1-3p were downregulated in human pancreatic cancer cell lines. Finally, only miR-219-1-3p inhibited MUC4 expression thus we focused on its role in pancreatic cancer.We observed a loss of miR-219-1-3p expression in pancreatic cancer tissues. Complementary approaches overexpressing (transiently or stably) and inhibiting miR-219-1-3p expression, led us to show that miR-219-1-3p represses MUC4 protein expression by interacting directly with its 3’-UTR. We observed a decrease of cell migration and cell proliferation which was associated with an inhibition of cyclin D1 expression and an inhibition of Akt and Erk activation. Tumor growth in scid mice was strongly slowed down following miR-219-1-3p intratumoral injection. In the Pdx1-Cre;LSL-KrasG12D mouse model of PanIN, loss of miR-219-1-3p expression was an early event as soon as PanIN1/2 and miR-219-1-3p expression was conversely correlated to Muc4 expression.While the strong induction of miR-219-1-3p following gemcitabine treatment of pancreatic cancer cells suggests a potential role of this miRNA in sensitivity of cells,miR-219-1-3p has no effect on survival rate of cells treated with gemcitabine. We then established the miRNA expression profile of MUC4 knocked-down (MUC4-KD) cells and control cells (Mock) and showed a dysregulation of miRNA expression in MUC4-KD compared to Mock cells.To conclude, our results indicate that miR-219-1-3p, downregulated in pancreatic cancer, negatively regulates MUC4 expression, alters cancer cell biological properties and has an antimoral effect in vivo. Altogether, these results propose miR-219-1-3p as tumor suppressor in pancreatic cancer. Loss of MUC4 leads to an aberrant miRNA expression profile suggesting a potential role of miRNA as markers of chemoresistance in pancreatic cancer
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Desseyn, Jean-Luc. "Organisation du gène de mucine humaine MUC5B : bases moléculaires d'une nouvelle classification des mucines." Lille 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LIL10151.
Full textAbstract:
Le gène humain MUC5B, localise avec muc6, muc2 et muc5ac en 11p15 code une grande mucine qui forme le gel de mucus. Il s'étend sur plus de 36,5 kb. La répartition complète exon-intron a été déterminée. Le gène comprend 48 exons qui ont des tailles comprises entre 32 et 10713 pb. Les 47 introns ont des tailles comprises entre 87 pb et 1,7 kb. Tous les introns, a l'exception de l'intron 8, ont des sites d'epissage conformes au site consensus gt/ag. Le peptide déduit de la région centrale (3570 aa) est compose de 19 sous-domaines. Certains ont des similarités entre eux et l'alternance de 3 sous-domaines donne naissance a un motif élémentaire répète de 528 aa. L'un de ces sous-domaines, appelé sous-domaine cys (108 aa, 10 cys), est trouve sept fois dans muc5b, deux fois dans muc2 et au moins six fois dans muc5ac. Les régions amino- (1286 aa) et carboxy-terminales (808 aa) sont très similaires aux régions amino- et carboxy-terminales de muc2, muc5ac et du pro-facteur von willebrand. Les similarités de ces domaines nous ont permis de proposer un schéma montrant l'évolution des 4 gènes de mucine localises en 11p15 a partir d'un gène ancestral.
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PASQUALINI, ROUALT GISELE. "Etude des mucines pancreatiques : revue de la litterature concernant les mucines en pathologie digestive." Aix-Marseille 2, 1990. http://www.theses.fr/1990AIX20271.
Full text
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Lo-Guidice, Jean-Marc. "Sulfatation des mucines bronchiques humaines." Lille 1, 1996. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1996/50376-1996-73.pdf.
Full textAbstract:
Les mécanismes de sulfatation des mucines dans les secrétions tracheobronchiques normales et pathologiques sont peu connus. Afin d'aborder cette étude, nous avons isole, grâce à la mise au point de techniques de chromatographie d'échange d'anions hautement résolutive (hpaec), des oligosaccharides sulfates de mucines provenant de l'expectoration de deux patients atteints respectivement de mucoviscidose et de bronchite chronique. La RMN du proton a 400 mhz et la spectrométrie de masse nous ont permis de déterminer la structure de 32 oligosaccharides différents, et de localiser les groupements ester-sulfate, soit sur le c3 d'un résidu de galactose terminal, soit sur le c6 d'un résidu de n-acetylglucosamine interne, suggérant ainsi l'activité d'au moins deux sulfotransferases différentes. Sur la base de ces résultats, nous avons caractérisé, pour la première fois, une activité sulfotransferasique dans la muqueuse bronchique humaine, agissant sur les chaines glycanniques de mucine. Cette activité catalyse le transfert d'un groupement sulfate sur l'hydroxyl porte par le c3 d'un résidu de galactose terminal d'une unité n-acetyl-lactosaminique. Enfin, nous avons recherche un modelé de cellules bronchiques humaines, secrétant des mucines sulfatées et exprimant la protéine cftr (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator). La lignée mm39, dérivant de glandes sous-muqueuses de l'arbre tracheobronchique, présente certaines propriétés de cellules séreuses ; elle exprime la protéine cftr mais elle secrète des mucines très faiblement sulfatées: elle a donc un phénotype mixte, à la fois séreux et muqueux. A l'avenir, la recherche de conditions de culture favorisant la sécrétion de mucines sulfatées devrait permettre de développer une stratégie destinée à comprendre l'origine des anomalies de sulfatation rencontrées dans la mucoviscidose.
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Leroy, Xavier. "Implication des gènes de mucines au cours de la morphogenèse et de la cancérogenèse rénale." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2MT17.
Full text
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Larousse, Marie. "Étude de l’interaction entre Phytophthora parasitica et le microbiote rhizosphérique à la surface de la plante hôte Solanum lycopersicum." Thesis, Nice, 2016. http://www.theses.fr/2016NICE4038.
Full textAbstract:
Les oomycètes phytopathogènes ont co-évolué avec les microbiotes des plantes hôtes. Il en résulte la formation de biofilms et des réseaux complexes d’interactions dont nous commençons juste à comprendre l’incidence sur la biologie et la virulence des oomycètes. Déterminer la nature de ces interactions et leur rôle dans le contexte d’une infection est aujourd’hui un enjeu cognitif qui concerne la caractérisation des mécanismes moléculaires et communautaires sous-jacents. C’est également une opportunité en termes d’innovation pour élaborer des méthodes de lutte alternative à l’usage de fongicides. Dans ce contexte, ce travail de thèse a consisté à étudier, d’une part, la formation de biofilm chez Phytophthora parasitica, un oomycète polyphage et tellurique, ainsi que, d’autre part, les interactions au sein de ce biofilm entre P. parasitica et le microbiote procaryote rhizosphérique de la plante hôte Solanum lycopersicum. L’analyse du génome de P. parasitica et du transcriptome du biofilm a conduit à la caractérisation d’une nouvelle famille de mucines restreinte à la lignée des oomycètes, les protéines MUCL. Ces 315 protéines sécrétées (25-30 kDa) sont réparties en 15 groupes et possèdent deux domaines : un domaine hautement conservé de fonction inconnue ; un domaine caractéristique des mucines, riche en résidus Sérine et Thréonine avec de très nombreux sites putatifs d’O-glycosylation. Chez P. parasitica, les 3 gènes PPMUCL1/2/3 sont exprimés et co-régulés spécifiquement au stade biofilm<br>The interactions between a pathogen and the host surface resident microbiota are critical to disease outbreak. These interactions shape the distribution, the density and the genetic diversity of inoculum. However for most plant pathogens how each of these interactions acts on disease as a single one or as a member of a functional network remains to be specified. This issue is addressed here through the analysis of two types of interactions involving the polyphagous oomycete P.parasitica : (i) the intraspecific interaction that leads to monospecific biofilm formation by P. parasitica zoospores on plant surface; (ii) the interspecific interactions that occur between P. parasitica biofilm and the prokaryotic microbiota of Solanum lycopersicum rhizosphere. The biology of monospecific biofilm is investigated through the characterization of MUCL, a new oomycete-specific Mucin-like Protein family. Gene profiling, biochemical and immunohistological analyses define the extent of this family and lead to identify three members, PPMUCL1/2/3, as residing in P. parasitica biofilm. The Phytophthora parasitica-Microbiota interaction is explored using first a metagenomic approach. Two microbial metagenomes derived from a soil of a tomato greenhouse is defined and compared after 16S RNA gene sequencing: M1 which corresponds to the sub-rhizospheric microbiota able to colonize the roots of axenic tomato seedlings; M2, the sub-microbiota able to colonize the tomato seedling roots previously coated with P. parasitica monospecific biofilm. A representative collection of microorganisms from M2 were also obtained through in vitro selection on a medium prepared from P. parasitica extract
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Duruisseaux, Michaël. "Signature moléculaire des adénocarcinomes pulmonaires de type lépidique prédominant et mucineux invasif et dérégulation." Thesis, Paris 6, 2015. http://www.theses.fr/2015PA066277/document.
Full textAbstract:
Les adénocarcinomes lépidiques prédominant (ALP) sont une entité originale sur le plan histologique, clinique et biologique parmi les adénocarcinomes pulmonaires. Il s’agit de tumeurs non-mucineuses mais il existe un variant mucineux, l’adénocarcinome mucineux invasif (AMI), caractérisé par un plus mauvais pronostic et l’absence de traitement efficace dans les formes avancées. L’objectif de ce travail était d’étudier les différences moléculaires distinguant ALP et AMI et d’en dégager les implications biologiques. Après avoir détaillé les caractéristiques cliniques et les altérations oncogéniques d’une cohorte d’ALP et d’AMI, nous avons exploité les banques de prélèvements issus de cette cohorte. Une étude de l’expression en immunohistochimie des mucines MUC1, 2, 5B, 5AC et 6 au sein des pièces opératoires de 27 ALP et 27 AMI montrait un profil d’expression spécifique entre ALP et AMI. L’expression de MUC1 était associée aux ALP, celle de MUC5AC, 5B et 6 aux AMI. L’expression de MUC1 était associée aux mutations EGFR et MUC5B et 5AC aux mutations KRAS. Un réarrangement NRG1 a été détecté par FISH dans 1 AMI sur 25. La chimiokine CXCL10 était surexprimée dans les surnageants de lavages broncho-alvéolaires (LBA) de patients avec AMI (n=38) comparés aux ALP (n=25), et cette surexpression était de mauvais pronostic. La voie cytokine/récepteur CXCL10/CXCR3-A était surexprimée dans les AMI, faisait la promotion de la migration des cellules tumorales mucineuses et gouvernait l’expression tumorale de VEGF. Le VEGF issu du LBA des patients était à l’origine in vitro d’une augmentation significative de la formation de tubes vasculaires inhibée par l’anti-VEGF bevacizumab. Le ciblage de CXCL10/CXCR3-A et du VEGF pourraient être des options thérapeutiques dans les AMI. Ces résultats permettent d’affiner les connaissances biologiques des ALP et des AMI et dégagent des voies de recherche originales qui pourraient amener au développement de nouveaux traitements<br>Lepidic predominant adenocarcinoma (LPA) represents an original entity in terms of histological, clinical and biological characteristics among adenocarcinomas of the lung. While LPA is typically a non-mucinous adenocarcinoma, a mucinous variant does exist, termed invasive mucinous adenocarcinoma (IMA), associated with a worse prognosis and a lack of effective treatment in advanced diseases. This work sought to study molecular differences between LPA and IMA, and explore their biological meanings. A cohort of LPA and AMI has been studied in regard of clinical characteristics and oncogenic drivers and samples from this cohort were exploited. An immunohistochemical study of expression of mucins MUC1, 2, 5B, 5AC and 6 in surgical samples of 27 LPA and 27 IMA showed different profile of expression between LPA and IMA. MUC1 expression was associated to MUC1 and MUC5AC, 5B and 6 to IMA. MUC1 was associated to EGFR mutations and MUC5B and 5AC to KRAS mutations. One NRG1 rearrangement was detected by FISH in one in 25 IMA. The CXCL10 chemokine was overexpressed in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) supernatants of IMA (n=38) compared to LPA (n=25). This overexpression was linked to worse prognosis. The cytokine/receptor axis CXCL10/CXCR3-A was overexpressed in IMA and promoted migration of mucinous tumoral cells and drived tumoral expression of VEGF. VEGF from BALF of patients significantly enhanced human lung endothelial tubes formation in vitro which was inhibited by anti-VEGF bevacizumab. CXCL10/CXCR3 and VEGF could present valuable therapeutic targets in IMA. These results improve knowledge in biology of LPA and AMI and identify new lines of research which could lead to development of new therapies
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Crépin, Michel. "Mise en évidence de l'hétérogénéité de l'axe peptidique des mucines trachéobronchiques humaines." Lille 1, 1989. http://www.theses.fr/1989LIL10148.
Full textAbstract:
La détermination de la structure peptidique des mucines a toujours représenté une difficulté technologique majeure malgré la miniaturisation et l'automatisation de la dégradation de Edman. Le caractère hautement glycosylé de ces o-glycoprotéines, leur richesse en thréonine, en sérine, en proline sont les causes essentielles de ces difficultés. Une déglycosylation préalable a donc été envisagée. Nous en avons optimisé les conditions (TFMS). La dégradation de Edman a été peu efficace et rejetée au profit de la biologie moléculaire. Le travail préliminaire à savoir purification de fragments de mucines et leur déglycosylation a alors été fort utile autorisant la préparation d'un immunsérum reconnaissant l'axe peptidique des mucines trachéobronchiques humaines. Grâce à cet immunsérum, le criblage d'une banque d'ADNc en vecteur d'expression lambda gt onze provenant de muqueuse respiratoire humaine nous a permis de sélectionner douze clones positifs. Trois familles de motifs structuraux ont pu être déduits de leurs séquences, se distinguant par l'existence ou non de zones hyperglycosylables, de domaines répétitifs ou par un agencement alterné de zones nues et de zones glycosylables. L'analyse des ARN a permis de confirmer une très grande hétérogénéité peptidique. Parallèlement nous avons pu également montrer que l'expression des mucines présentait une spécificité cellulaire (immunohistochimie) et tissulaire (analyse des ARN de différentes muqueuses humaines)
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Guyonnet, Duperat-Bianchi Véronique. "Etude des gènes de mucines humaines localisés en 11P15 : mégacartographie et approche de l'organisation génomique de MUC5B et MUC5AC." Lille 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LIL10172.
Full text
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Marianne-Pépin, Thérèse. "Les précurseurs polypeptidiques des mucines bronchiques humaines." Lille 1, 1987. http://www.theses.fr/1987LIL10219.
Full textAbstract:
Une étude en microscopie électronique, de mucines préparées à partir de mucus directement prélevé dans la lumière bronchique a montré des structures filamenteuses très diverses et dont la longueur maximum se situe entre 1500 et 1650 nm (ce qui correspond à un axe polypeptidique de l'ordre de 400 à 500 nm. L'utilisation de sondes immunologiques pour piéger les précurseurs dans les cellules bronchiques avant toute modification post-traductionnelle a permis le repérage de plusieurs précurseurs de masse moléculaire comprise entre 200 et environ 400 kda
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Marianne-Pepin, Thérèse. "Les Précurseurs polypeptidiques des mucines bronchiques humaines." Grenoble 2 : ANRT, 1987. http://catalogue.bnf.fr/ark:/12148/cb37607702p.
Full text
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Robbe-Masselot, Catherine. "Étude de la glycosylation des mucines intestinales humaines : développement de nouvelles stratégies de criblage des O-glycannes de mucines." Lille 1, 2003. https://pepite-depot.univ-lille.fr/RESTREINT/Th_Num/2003/50376-2003-231-1.pdf.
Full textAbstract:
L'intestin normal est revêtu d'une couche protectrice de mucus. Le mucus est une sécrétion physiologique constituée majoritairement de mucines qui sont des glycoprotéines renfermant plusieurs centaines de chaînes glycanniques différentes. Au niveau gastrointestinal, ces molécules représentent un élément essentiel de la défense de la muqueuse. Elles protègent notamment l'intestin contre la colonisation par des parasites et autres agents pathogènes, tout en favorisant le maintien de la flore naturelle. De nombreux travaux ont montré l'existence d'un gradient d'expression des gènes MUC le long du tractus intestinal ainsi qu'une colonisation régio-spécifiqu des bactéries dans l'intestin. Nous avons donc cherché à savoir s'il existait également un répertoire spécifique de glycosylation des mucines pour chaque étage du tractus intestinal Pour cela. Nous avons tout d'abord développé de nouvelles méthodes d'analyse structurale de la glycosylation des mucines permettant d'obtenir rapidement une cartographie des différentes structures caractéristiques d'une mucine donnée, à partir d'échantillons disponibles en faible quantité. Ces tecbniques sont basées essentiellement sur l'utilisation de la spectrométrie de masse (MALDI-TOF et ESI-Q-TOF). Elles permettent d'obtenir des informations sur le type de noyau. Sur la position et la liaison des différents sucres périphériques (Fuc, NeuAc, SO3-) ainsi que sur le type de chaînes 1actosaminiques. Ces différentes techniques de MS ainsi que les techniques de RMN ont ensuite été appliquées à l'analyse structurale des glycannes présents au niveau des mucines intestinales humaines. Les mucines étudiées ont été prélevées à différents étages du tractus intestinal, à savoir l'iléon, le caecum. Le côlon tr. Msverse, le côlon sigmoi͏̈de et le rectum. Chez des individus sains. Ces travaux ont permis de démontrer l'existence de différents gradients d'expression des oligosaccharides le long du tractus intestinal: en effet. Les structures sont hautement fucosylées dans l'iléon et deviennent de plus en plus acides vers le rectum (présence de nombreux résidus d'acides sialiques et de sulfate). De plus, l'expression des antigènes de groupe sanguins ABH est limitée à l'iléon et à la partie proximale du côlon alors que l'expression de lépitope Sda/Cad augmente progressivement du transverse vers le côlon distaI. Cette diversité glycannique semble reliée aux fonctions biologiques différentes jouées par ces molécules dans l'intestin telles que le transport des électrolytes ou encore l'adhésion bactérienne.
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Portal, Céline. "Fonctions in vivo de la mucine Muc5b : création et caractérisation d'une lignée transgénique rapporteur Muc5b-GFP." Thesis, Lille 2, 2016. http://www.theses.fr/2016LIL2S023/document.
Full textAbstract:
MUC5B, une des 5 mucines gélifiantes chez les mammifères, constitue la matrice de gels de mucus et est responsable des propriétés visco-élastiques de ces gels. Cette macromolécule est sécrétée par des cellules caliciformes dont la densité reflète l'homéostasie des épithéliums sécrétoires.L'objectif principal de ce travail de thèse était la création et la caractérisation d'une souris transgénique afin de suivre facilement la production in vivo de Muc5b. Le second objectif était de montrer, chez des souris mucoviscidosiques CftrΔF508, qu'une nutrition enrichie en acides gras polyinsaturés à longues chaînes (n-3) module la production de la mucine Muc5b, confirmant des résultats précédemment publiés sur la régulation transcriptionnelle du gène Muc5b chez des souris de type sauvage par ce régime alimentaire.Une souris transgénique Muc5b-GFP a été créée par insertion d'une séquence codant la GFP (pour « Green Fluorescent Protein ») à la place du codon Stop de Muc5b. Le profil d'expression de Muc5b a été déterminé ex vivo sur tissus et chez la souris anesthésiée. Muc5b est produit dans l'oreille moyenne, l’œil, la cavité nasale, la trachée, la vésicule biliaire, le cervix, ainsi que dans le poumon embryonnaire à E12,5. Nous apportons la preuve de concept que Muc5b-GFP est un biomarqueur de la densité des cellules à mucus dans un modèle de syndrome de l’œil sec où nous mesurons, chez la souris anesthésiée, une diminution de la densité en cellules caliciformes qui est restaurée par application topique d'interleukine 13. La souris Muc5b-GFP est donc un modèle pré-clinique pour suivre la production de la mucine et la densité de cellules caliciformes. Dans le modèle murin CftrΔF508, nous montrons qu'une supplémentation à long terme en acides gras polyinsaturés à longues chaînes (n-3) n'influence pas le taux d'expression de Muc5b suite à une inflammation pulmonaire aiguë, mais améliore l'histologie pulmonaire et module la réponse inflammatoire<br>MUC5B, one of the 5 gel-forming mucins in mammals, is part of the mucus gels and responsible of the visco-elastic properties of these gels. The density of goblet cells, which secrete this macromolecule, reflects the homeostasis of secretory epitheliums.The main goal of this thesis was the creation and characterization of a transgenic mouse to easily follow in vivo the production of Muc5b. The second goal was to show that, as previously reported by the laboratory in wild-type mice, a (n-3) long chain polyunsaturated fatty acid enriched diet modulates the production of Muc5b in the cystic fibrosis mouse model CftrΔF508.A Muc5b-GFP transgenic mouse was created by replacing the Stop codon of Muc5b with a GFP (Green Fluorescent Protein) coding sequence. Muc5b expression pattern was studied ex vivo in tissues and in anaesthetized mouse. Muc5b is produced in middle ear, eye, nasal cavity, trachea, gallbladder, cervix, and in embryonic lung at E12.5. As a proof-of-concept, we show that Muc5b-GFP is a biomarker of goblet cell density in a dry eye model. In anaesthetized mice, we measured a decreased goblet cell density after dry eye induction, which was restored by interleukin 13 topical application. Muc5b-GFP mouse is a preclinical model to follow the mucin production and goblet cell density. In the cystic fibrosis mouse model CftrΔF508, we show that a long term (n-3) long chain polyunsaturated fatty acid supplementation has no effect after an acute pulmonary inflammation on the Muc5b expression level, but induces an improvement of lung histology and a modulation of the inflammatory response
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Gibold-Lyonne, Lucie. "Impact des facteurs micro-environnementaux de l'hôte sur la colonisation instestinale des Escherichia Coli adhérents et invasifs." Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2016. http://www.theses.fr/2016CLF1MM22/document.
Full textAbstract:
La maladie de Crohn (MC) est une affection inflammatoire chronique du tube digestif dont l’étiologie est multifactorielle. Les lésions intestinales des patients atteints de MC sont anormalement colonisées par des souches pathogènes d’Escherichia coli appartenant au pathovar AIEC pour «Adherent-Invasive Escherichia coli ». Ces souches sont capables d’adhérer et d’envahir les cellules épithéliales intestinales, et ont la capacité de survivre et de se multiplier en macrophages en induisant une synthèse intense de cytokines pro-inflammatoires. Les AIEC pourraient ainsi être impliquées dans l’induction et/ou l’entretien de l’état inflammatoire de la muqueuse intestinale.L’objectif de ce travail est d’identifier les déterminants bactériens des AIEC qui vont intervenir dans les étapes précoces de l’implantation des AIEC au niveau intestinal et de définir quel est le rôle des facteurs micro-environnementaux de l’hôte dans cette implantation.Nous montrons que l’AIEC LF82 possède une activité mucinolytique qui est portée par le gène vat-AIEC et qui favorise la traversée du mucus et la colonisation intestinale. Nous avons retrouvé ce gène chez 42% des souches AIEC isolées de patients atteints de MC, et chez 97% des souches AIEC appartenant au phylogroupe B2. Par ailleurs, nous avons montré que les sels biliaires augmentent l’expression de cette mucinase.Nous avons ensuite étudié l’influence des sels biliaires sur l’expression globale des gènes de la souche LF82. Les sels biliaires modifient profondément le métabolisme de la souche, induisant une diminution globale des voies de biosynthèse (protéines, lipides) et une augmentation des voies de dégradation (alcools, acides carboxyliques, polyamines, …). L’étude du catabolisme de l’éthanolamine et du propanediol indique que les AIEC pourraient se servir de ces substrats pour s’implanter au sein de la flore iléale. De plus, les analyses transcriptomiques révèlent que les sels biliaires augmentent l’expression de gènes codant des facteurs de virulence comme l’invasine IbeA, les systèmes de sécrétion de type VI et la yersiniabactine. Nous montrons également qu’ils favorisent la formation de biofilm chez les souches AIEC.Ces données indiquent que les sels biliaires constituent un signal permettant à la souche AIEC LF82 de mettre en place différentes voies métaboliques et déterminants bactériens nécessaires à son implantation au niveau intestinal.Mots-clé : Escherichia coli, maladie de Crohn, mucines, serine protéase, mucinase, AIEC<br>The etiology of Crohn's disease (CD) involves disorders in host genetic factors and intestinal microbiota. Ileal mucosa of CD patients is often abnormally colonized by adherent-invasive Escherichia coli (AIEC). These strains isolated from the intestinal mucosa of CD patients are able to adhere to intestinal epithelial cells (IECs). This adhesion to IECs promotes the invasion of cells by the bacteria. Furthermore, the invasive ability of AIEC strains allows bacteria to translocate across the human intestinal epithelium, move into the deep tissues and activate immune cells continuously upon arrival. Thus AIEC could be involved in the inflammatory state of the intestinal mucous membrane. The aim of this study was to identify components of AIEC virulence, which might favor their implantation in the gut of CD patients and to define the role of several chemical factors from the ileal environment. Here, we reported a protease called Vat-AIEC from AIEC which favors the penetration of AIEC through the mucus layer and enhances gut colonization. The screening of E. coli strains isolated from CD patients revealed a preferential vat-AIEC association with AIEC strains belonging to the B2 phylogroup. Besides, Vat-AIEC transcription was increased with bile salts from the ileum environment. Then a global RNA sequencing (RNA-seq) of E. coli LF82 has been used to observe the impact of bile salts on the expression of bacterial genes. The results demonstrate the explosive effect of bile salts with a dysregulation of about 40% of the genome, with a global upregulation of genes involved in degradation and downregulation of those implicated in several biosynthesis. Our results show that LF82 use ethanolamine as a nitrogen source and propane diol as a carbon source, which can favor their colonization in the gut compared to the other bacteria. We also studied virulence genes expression in the presence of bile salts. They increase the expression of several virulence factors like the IbeA invasion, the type 6 secretion systems and the yersiniabactin. Furthermore, we noticed an increased expression of genes implicated in biofilm formation. These results improve the understanding of the global regulatory network in the presence of bile salts and thus of AIEC implantation in the human gut of CD patients
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Dufosse, José. "Mucines trachéobronchiques humaines localisées en 11p15 mise en évidence d'un nouveau type d'organisation peptidique." Lille 1, 1993. http://www.theses.fr/1993LIL10008.
Full textAbstract:
Une banque d'adnc en vecteur gt 11 de muqueuse tracheobronchique humaine a ete criblee avec un serum immun dirige contre l'axe peptidique de mucines tracheobronchiques humaines deglycosylees. Deux clones jer 28 et jer 57, obtenus par ce criblage ont ete utilises pour isoler deux autres adnc: jul 10 et jul 7 d'une banque adnc en vecteur gt 10 de muqueuse tracheobronchique humaine. Ces quatre clones, tous localises sur le chromosome 11 en p15, sont constitues d'une repetition d'unites de 87 pb degenerees par des insertions et des deletions. Cette degenerescence cree un decalage du cadre de lecture et detruit la structure peptidique repetitive. Les peptides sont constitues d'une alternance de domaines hydrophiles glycosylables et de domaines hydrophobes depourvus de chaines glycanniques. Leurs arnm sont exprimes surtout dans la muqueuse respiratoire. Ces sondes de mucines humaines sont des marqueurs potentiels de differenciation et de cancerisation des cellules epitheliales.
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Moniaux, Nicolas. "Caractérisation de l'extrémité 3' du gène MUC4 (gène d'apomucine humaine) : isoformes solubles et membranaires, approche des relations structure-fonction." Lille 1, 1999. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1999/50376-1999-137.pdf.
Full textAbstract:
Le gène de mucine humaine MUC4, localisé sur le chromosome 3 dans la région q29, est exprimé dans de nombreux épithéliums et constitue un marqueur de carcinomes. Nous avons étudié la structure de ce gène et montré que l'apomucine MUC4 est l'homologue humain de la sialomucine de rat SMC. Comme SMC, MUC4 a une structure modulaire composée de deux domaines, l'un de type mucine, MUC4 et l'autre contenant deux motifs de type EGF, un domaine hydrophobe potentiellement transmembranaire et une queue intracytoplasmique, MUC4[Béta]. MUC4 comme MUC1 et SMC appartiendrait donc au groupe des « mucin-like » dont les fonctions multiples dans la morphogenèse et le renouvellement des épithéliums ou dans la promotion des métastases seraient en rapport avec des propriétés d'adhérence. Le gène MUC4 code une famille d'isoformes comportant au moins 8 variants distincts, 5 formes solubles et 3 formes membranaires. Ces variants sont obtenus par un épissage alternatif complexe de l'extrémité 3’-terminale de l'ARNm de MUC4. Les formes solubles ne possèdent pas les domaines de type EGF. Un variant dénommé MUC4/Y semble, lui, être dépourvu du domaine de type mucine. Comme SMC qui chez le rat est le ligand de p185neu, MUC4 pourrait selon des travaux préliminaires se lier à ErbB2 et induire la prolifération des cellules de la lignée de cancer mammaire MCF7. Le gène MUC4 présente un polymorphisme complexe de type VNTR en rapport avec la présence d'au moins 4 séquences répétitives distinctes exonique et introniques. Leur rôle sur l'expression qualitative ou quantitative du gène MUC4 est étudié au laboratoire en rapport avec la susceptibilité au développement des pathologies des muqueuses.
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Barcelo, Aline. "Étude de la secrétion de mucus dans le colon isolé et vascularisé de rat." Lyon 1, 2001. http://www.theses.fr/2001LYO1T005.
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Escande, Fabienne. "Participation à la caractérisation moléculaire des gènes d'apomucines humains et de leurs homologues murins." Lille 2, 2003. http://www.theses.fr/2003LIL2MT10.
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Renaud-Monsarrat, Florence. "Vers une meilleure compréhension des tumeurs colorectales de la voie festonnée : intérêt des gènes de mucines." Thesis, Lille 2, 2015. http://www.theses.fr/2015LIL2S044/document.
Full textAbstract:
Les cancers colorectaux (CCR) constituent un véritable problème de santé publique. En France, en 2015, ils se situent au 3ème rang des cancers et au 2ème rang des décès par cancer, en raison d’un diagnostic souvent tardif et de réponses variables aux thérapeutiques. L’amélioration des tests de dépistage ces vingt dernières années n’a pas significativement réduit la morbi/mortalité liée au CCR et une meilleure caractérisation des différents sous-types moléculaires reste importante pour l’identification de nouveaux biomarqueurs. Les tumeurs colorectales sont hétérogènes tant sur le plan clinico-pathologique que moléculaire, issues de différentes voies de cancérogenèse. Les tumeurs de la voie festonnée représentent 20 à 30% des CCR. Elles sont caractérisées par une instabilité épigénétique (CpG Island Methylation Phenotype, CIMP), une instabilité microsatellitaire (MSI) et des mutations fréquentes du gène BRAF. Sur le plan phénotypique, ce sont des tumeurs volontiers mucisécrétantes surexprimant les mucines MUC2 et MUC5AC. L’identification précoce de leurs précurseurs reste actuellement un enjeu, d’autant que la séquence carcinogénétique des tumeurs festonnées serait particulièrement rapide.Dans cette étude, nous avons déterminé les caractéristiques clinico-pathologiques et moléculaires d’une série de cancers et polypes colorectaux et évalué l’intérêt des gènes de mucines MUC2 et MUC5AC pour classer les polypes festonnés et identifier les lésions précurseurs des cancers CIMP/MSI.L’étude a porté sur 418 CCR et 330 polypes coliques, incluant 218 polypes festonnés et 112 adénomes conventionnels, dont nous avons déterminé le profil moléculaire (mutations KRAS/BRAF, MSI, CIMP, méthylation MGMT, MLH1), ainsi que le profil d’expression et de méthylation des gènes de mucines MUC2 et MUC5AC. Les résultats ont été comparés aux données cliniques et anatomo-pathologiques.Nous montrons que l’hypométhylation du gène MUC5AC est un marqueur spécifique des CCR CIMP/MSI, indépendant des données clinico-pathologiques. De plus, nous montrons que l’hypométhylation de MUC5AC est un évènement précoce qui est spécifiquement associé aux polypes hyperplasiques de type microvésiculaire (MVHP) et adénomes festonnés sessiles (SSA), suggérant une filiation entre ces deux lésions, qui seraient les précurseurs des CCR CIMP/MSI. L’hypométhylation de MUC5AC était par ailleurs très spécifique des lésions festonnées mutées BRAF, CIMP ou MSI.En conclusion, nos résultats suggèrent un rôle de la mucine MUC5AC dans le développement des tumeurs coliques de la voie festonnée. L’hypométhylation du gène MUC5AC est un évènement précoce qui pourrait avoir un intérêt pour le diagnostic des polypes festonnés, en particulier lorsque la morphologie est ambiguë, et pour l’identification précoce des lésions à potentiel malin. De plus, nos résultats suggèrent que certains MVHP pourraient progresser en SSA et en CCR CIMP/MSI, d’où l’importance de réaliser des biopsies des polypes festonnés lors de l'endoscopie afin de repérer le sous-type microvésiculaire parmi les polypes hyperplasiques colorectaux, qui pourrait, bénéficier d’une surveillance minimale<br>Colorectal cancer (CRC) is a major public health problem yet it remains the third most common and the second deadliest cancer for both men and women in the United States and in Europe, owing to diagnosis at advanced stage and variable response to the treatments. However, the incidence and mortality appear to be steadily declining in countries with programmatic screening and it remains critical to characterize CRC molecular subtypes to identify new biomarkers. CRC display a wide clinicopathological and molecular heterogeneity and arise from different carcinogenesis pathway. Approximately 20% to 30% of CRC occur by the means of the serrated neoplasia pathway. CRC from the serrated pathway are associated with frequent epigenetic instability (CIMP, CpG island methylator phenotype) which causes most sporadic microsatellite instability (MSI) CRC through epigenetic inactivation of MLH1 and frequent BRAF mutation. CRC from the serrated pathway frequently display a mucinous pattern and are prone to express secreted mucins MUC2 and MUC5AC. Early identification of serrated pathway precursor lesions is currently challenging since the progression to adenocarcinoma in this pathway is particularly brief.We assessed in this study clinicopathological and molecular features of colorectal carcinomas and polyps and we analyzed the interest of mucin genes MUC2 and MUC5AC to classify serrated polyps and to identify the precursor lesions of CIMP/MSI carcinomas._x000D_A series of 418 CRC and 330 polyps was included in the study, with 218 serrated polyps and 112 conventional adenomas. We assessed the molecular profile (KRAS/BRAF mutations, MSI, CIMP, MGMT methylation, MLH1) and the expression and methylation profile of MUC2 and MUC5AC genes and further correlation with clinical and pathological data were performed.We show that MUC5AC hypomethylation is a specific marker of CIMP/MSI CRC, independently of other clinical or pathological factors. We show moreover than MUC5AC hypomethylation is an early event of carcinogenesis, specific to microvesicular hyperplastic polyps (MVHP) and sessile serrated adenoma (SSA) suggesting a filiation between these two lesions and also a progression of MVHP to SSA, SSA with dysplasia, and then to MSI/CIMP CRC. MUC5AC hypomethylation was moreover highly specific of BRAF mutated, CIMP or MSI serrated lesions.In conclusion, our results suggest that the MUC5AC mucin is involved/plays a role in the development/progression of colorectal tumors of the serrated pathway. MUC5AC hypomethylation occurs early during carcinogenesis and may be of interest for the diagnosis of serrated polyp especially in the presence of ambiguous morphology and to early detection of polyps carrying a malignant potential. Our results suggest moreover that some MVHP may progress to SSA and CIMP/MSI CRCs highlighting the importance to perform biopsy of serrated polyps during endoscopy to identify microvesicular subtype among colorectal hyperplastic polyps, which could require a minimal surveillance
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Buisine, Marie-Pierre. "Mucines et différenciation des épitheliums : étude de l'expression des gènes de mucines au cours de la morphogénèse, de la carcinogenèse et de la réparation des épithéliums et contribution à la détermination de leur structure." Lille 2, 1999. http://www.theses.fr/1999LIL2T017.
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Guzzo-chambraud, Lydie. "Glycocalyx filamenteux et mucines de l'épithélium intestinal de lapin." Aix-Marseille 3, 1991. http://www.theses.fr/1991AIX30026.
Full textAbstract:
La surface de l'epithelium intestinal de lapin est recouverte par deux structures: le glycocalyx filamenteux et la couche de mucus. Des observations en microscopie electronique montrent que le glycocalyx filamenteux est integre dans la membrane plasmique du sommet des microvillosites des cellules absorbantes intestinales. Nous avons montre qu'il etait l'un des rares glycoconjugues de la bordure en brosse a exprimer des determinants antigeniques groupe sanguin humain a type 3. Grace a cette caracteristique immunologique nous avons pu purifier pour la premiere fois le glycocalyx filamenteux. Nos resultats montrent que l'antigenicite a type 3 est portee par une seule proteine de poids moleculaire apparent 400 kd qui pourrait etre associee de facon non covalente a au moins trois sous-unites. La sous-unite de 400 kd contient 45% de sucres. Nous avons egalement mis en evidence l'existence d'une sous-population de glycocalyx filamenteux dont la sous-unite 400 kd ne porte pas l'antigenicite a type 3. La couche de mucus est composee de glycoproteines fibrillaires de haut poids moleculaire ou mucines synthetisees et secretees par des cellules en gobelet. Des anticorps monoclonaux specifiques des mucines nous ont permis de montrer qu'elles etaient immunologiquement differentes du glycocalyx fibrillaire. Un de ces anticorps monoclonaux reconnait une structure oligosaccharidique dont l'expression augmente au cours de la maturation de la cellule. Par immunomarquage avec cet anticorps nous avons montre qu'il existe une secretion continuelle de mucus selon un mecanisme d'exocytose et qu'au cours de la migration des cellules en gobelet le long de l'axe crypte-villosite, dans la premiere moitie de la villosite, les granules de mucus sont renouvellees au moins deux fois
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Decré, Dominique. "Les mucines intestinales : structure, biosynthèse, dégradation et fonctions générales." Paris 5, 1988. http://www.theses.fr/1988PA05P032.
Full text
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Homsi, Mahmoud El. "Étude des mécanismes de régulation de la sécrétion et de l'expression des mucines gastrointestinales par la leptine." Lyon 1, 2007. http://tel.archives-ouvertes.fr/docs/00/18/17/50/PDF/these.pdf.
Full textAbstract:
Les mucines sont les molécules structurales de base du gel de mucus qui assure la protection et la lubrification de la muqueuse gastro-intestinale. Notre but était de déterminer l'effet de la leptine sur la sécrétion et l'expression des mucines gastro-intestinales. Cette étude a été réalisée in vivo chez le rat et in vitro à l’aide des lignées cellulaires de rat DHE et humaine HT29-MTX. Nous avons trouvé que ces 2 lignées expriment les récepteurs (Ob-R) de la leptine. La perfusion luminale de la leptine dans le côlon de rat ainsi que la stimulation des cellules DHE par la leptine a entraîné une augmentation de la sécrétion de mucines et du niveau des ARNm codant pour rMuc2, rMuc3 et rMuc4. Cet effet de la leptine était dose dépendant. Testée dans les HT29-MTX, la leptine a provoqué une augmentation de la sécrétion de mucines ainsi qu’une augmentation des transcrits de MUC2, MUC4 et MUC5AC via la voie de la PKC, la PI3K et les MAPK. Ces résultats montrent que la leptine pourrait jouer un rôle essentiel dans la protection de la muqueuse colique<br>Mucins are the basic components of the mucus layer which ensures the protection and lubrication of the gastrointestinal mucosa. Our aim was to study the leptin effect on gastrointestinal mucins secretion and expression. This study was carried out in vivo in the rat and in vitro using the DHE and the HT29-MTX cell lines. We found that these cell lines express the leptin receptors. Luminal perfusion of leptin in the colon of rat or stimulation of DHE by leptin increased mucin secretion and the mRNA levels of rMuc2, rMuc3 and rMuc4. This effect of leptin was dose dependent. In the HT29-MTX, leptin produced an increase in mucin secretion in the supernatants as well as MUC2, MUC4 and in MUC5AC mRNA by targeting PKC, PI3K and MAPK pathways. These results showed that leptin could play an essential role in the protection of the colonic mucosa
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Zoghbi, Sandra. "Régulation de la sécrétion et de l'expression des mucines gastro-intestinales par les β-casomorphines et étude de leur évolution dans les phses précoces du cancer colorectal". Lyon 1, 2007. http://www.theses.fr/2007LYO10022.
Full textAbstract:
Les mucines sont les composantes du mucus qui assure la protection et la lubrification de la muqueuse gastro-intestinale. Nous avons déterminé l'effet des beta-casomorphines, peptides bioactifs issus du lait, sur l'expression des mucines gastro-intestinales. La beta-CM 1-7 a augmenté l'expression et la sécrétion de mucines dans la lignée humaine et de rat. Cet effet est observé de manière temps- et dose-dépendante et passerait par la voie mu-opioïde. Parallèlement, de nombreuses altérations de l'expression des mucines sont observées dans les cancers coliques. Nous avons étudié leur évolution dans des lésions précancéreuses qui sont donc caractérisées par une évolution complexe des mucines avec une expression aberrante de MUC5AC et une forte diminution de MUC2 dont il a été prouvé que l'invalidation du gène entraîne un développement de tumeurs. Ces résultats ouvrent la voie vers l'étude de l'impact de facteurs nutritionnels sur les mucines et à l'effet sur l'évolution des lésions précancéreuses<br>Mucins are the major components of mucus gel that is an important factor of gastro-intestinal physiologic defense mechanisms. We studied the direct effect of beta-casomorphins, milk bioactive peptides, on the function of intestinal globet cells. Beta-CM1-7 induced an increased expression and secretion of mucins in a human and a rat cell lines. This effect was time- and dose-dependant and required the mu-opiod pathway. Numerous alterations in mucin expression were described in colorectal cancers. We studied their evolution in precancerous lesions, and characterized a complex evolution of MUC2 and MUC5AC with an aberrent expression of MUC5AC and a strong diminution of MUC2. The latter was proved to induce intestianl tumor when invalidated. These results lead us to think about the impact of nutrition on mucin expression and their impact on colorectal cancer evolution
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Mourad, Rabih. "Analyse structurale des chaînes glycanniques des mucines oviducales spécifiques de l'espèce Rana ridibunda." Lille 1, 1999. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1999/50376-1999-59.pdf.
Full textAbstract:
Les gangues ovulaires d'amphibiens sont essentiellement constituées de glycoprotéines de type mucine dont les chaînes glycanniques sont strictement spécifiques de chaque espèce étudiée. Ces gangues assurent une protection de l'oeuf et de l'embryon et participent aux mécanismes de la fécondation : capacitation, réaction acrosomienne, blocage de la polyspermie. Notre étude a porté sur l'analyse des gangues ovulaires de Rana ridibunda. Après libération des chaînes glycanniques par [Béta]-élimination, et isolement par Chromatographie Liquide Haute Pression, la structure primaire de ces composés a été établie par méthylation, résonance magnétique nucléaire et spectrométrie de masse. Les 25 oligosaccharides alditols ainsi caractérisés sont spécifiques de Rana ridibunda, résultat qui confirme les observations antérieures selon lesquelles les chaînes glycanniques sont des marqueurs phénotypiques des espèces animales. Compte tenu du rôle joue par les chaînes glycanniques au cours de la fécondation et dans les interactions hôte-parasite, nous suggérons donc que des mutations affectant le génome des glycosyltransférases a contribué aux phénomènes de sélection naturelle responsables de la biodiversité.
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Valque, Hélène. "MUC5B, Mucine gélifiante clé : embryogenèse, mucoviscidose et cancer mammaire." Thesis, Lille 2, 2011. http://www.theses.fr/2011LIL2S050.
Full textAbstract:
Le mucus recouvre et protège les épithéliums des tractus respiratoire, gastro-intestinal et reproducteur. Les mucines sécrétées sont des molécules mosaïques de très grande taille moléculaire, fortement O-glycosylées et responsables des propriétés rhéologiques du gel de mucus. MUC5B est l’une des cinq mucines gélifiantes et est principalement sécrétée dans le tractus respiratoire. Chez l’Homme, MUC5B est impliquée dans le cancer mammaire et la mucoviscidose. MUC5B est exprimée dans plus de 80% des cancers mammaires alors que MUC5B n’est pas exprimée dans le tissu mammaire sain. Par ailleurs, MUC5B pourrait jouer un rôle majeur dans le poumon de patients atteints de mucoviscidose. Pour étudier la fonction de MUC5B, nous avons utilisé des protéines recombinantes composées de différents domaines de MUC5B et des modèles animaux. Nous avons montré que MUC5B favorise la prolifération cellulaire et l’invasion in vitro et favorise la croissance tumorale et la dissémination métastatique chez des souris immunodéprimées. MUC5B apparait donc comme une cible thérapeutique intéressante pour ralentir la prolifération cellulaire et la dissémination métastatique dans le cancer du sein. Nous avons également montré que l’expression de Muc5b et le nombre de cellules Muc5b positives sont plus élevés dans un modèle murin de mucoviscidose (Cftr–/–) que chez les souris frères-sœurs contrôles, ce qui suggère que les souris Cftr–/– sont prédisposées à former des bouchons bronchiques. Les souris Cftr–/– infectées expérimentalement par Pseudomonas aeruginosa développent des bouchons bronchiques AB-PAS positifs principalement composés de la mucine Muc5b et d’ADN. MUC5B semble être une cible thérapeutique intéressante pour diminuer la viscosité du mucus dans la mucoviscidose. Enfin, nous avons montré que la protéine Muc5b est exprimée très précocement (dès E8.5) au cours du développement embryonnaire murin. A E11.5, Muc5b est exprimée dans le bourgeon pulmonaire, dans le bourgeon formant la trachée et l’œsophage et dans l’estomac. De manière inattendue, Muc5b est exprimée au niveau baso-latéral des cellules épithéliales suggérant un rôle clé de MUC5B dans la morphogenèse<br>Respiratory, gastrointestinal and reproductive tracts are protected by a mucus layer. Secreted mucins are large, high molecular weight and heavily O-glycosylated mosaic proteins that are responsible for the rheological properties of mucus gel. MUC5B is one of the five secreted gel-forming mucins and is mainly secreted in the respiratory tract. In human pathology, MUC5B has been implicated in breast cancer and cystic fibrosis (CF). This ‘non mammary’ mucin is expressed in more than 80% of breast cancer and it has been suggested that MUC5B may represent the main mucin to be implicated in the lung disease of CF.To investigate the function of MUC5B, we used recombinant proteins of several MUC5B domains and animal models. We show that MUC5B promotes cell proliferation and invasion in vitro and tumor growth and metastasis using SCID mice suggesting that MUC5B may represent a therapeutic target to slow down the tumor growth and dissemination in breast cancer. We show also that Cftr–/– mice harbor more Muc5b positive Clara cells than do control littermates suggesting that CF mice are predisposed to develop mucus plugs. Experimental infection with Pseudomonas aeruginosa increased the number of Muc5b-positive cells and the formation of mucus plugs in bronchi or bronchioles of Cftr–/– mice. These plugs are mainly composed of Muc5b and DNA suggesting that MUC5B may be a valuable target for decreasing mucus viscosity in CF. Finally, Muc5b protein was detected very early in mouse embryogenesis (at day 8.5). At E11.5, Muc5b is expressed in pulmonary bud, in tracheo-esophagal groove and in stomach. Unexpectedly, Muc5b is expressed at the basal and lateral membrane of epithelial cells of the buds suggesting a key role in epithelial morphogenesis
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Delmotte, Philippe. "Les déterminants Lewis x et ses dérivés sialylés et/ou sulfatés des mucines bronchiques humaines sécrétées dans la mucoviscidose : effets de TNF-alpha sur leur biosynthèse : interactions avec Pseudomas aeruginosa." Lille 2, 2002. http://www.theses.fr/2002LIL2MT09.
Full textAbstract:
Les mucines bronchiques humaines sont des molécules d'une extraordinaire diversité notamment au niveau de leur chaînes glycanniques. La glycosylation et la sulfatation des mucines bronchiques humaines sont modifiées dans la mucoviscidose et une étude récente suggère que les modifications de glycosylation seraient, en partie, liée à l'inflammation importante de la muqueuse bronchique des sujets malades. Dans la première partie de notre travail de thèse, nous démontrons qu'une cytokine, le TNFα, augmente l'activité et l'expression de glycosyl- et sulfo-transférases responsable de la biosynthèse de l'épitope Lewis x et de ses dérivés sialylés et/ou sulfatés dans la muqueuse bronchique humaine. Dans la seconde partie de notre travail, nous nous sommes intéressés aux possibles implications d'anomalies de glycosylation et de sulfatation des mucines bronchiques dans l'adhésion de Pseudomonas aeruginosa aux mucines. Nous avons plus précisément démontré que les glycotopes sialyl-Lewis x et 6-sulfo-sialyl-Lewis x sont des récepteurs pour P. Aeruginosa. Nous démontrons aussi que la protéine FliD, protéine de l'extrémité du flagelle qui est impliqué dans l'adhésion aux mucines bronchiques, reconnaît les glycotopes Lewis x et sialyl-Lewis x. De plus, nos résultats suggèrent qu'un autre composant du flagelle de certaines souches de P. Aeruginosa, la flagelline, intervient également dans l'adhésion aux mucines bronchiques<br>Human bronchial mucins are a very broad family of polydisperse high molecular weight glycoproteins. The glycosylation and sulfation of human airway mucins are modified in cystic fibrosis and a recent work suggests that these modifications are related to the severe inflammation of bronchial mucosa obtained from patients. In a first part of our work, we demonstrated that a cytokine, the TNF, increased the activities and the expression of Lewis x epitope and its sialylated and/or sulfated derivatives in the human mucosa. In a second part, we investigated the implications of glycosylation and sulfation alterations of bronchial mucins in the binding of Pseudomonas aeruginosa to mucins. We demonstrated that sialyl-Lewis x and 6-sulfo-sialyl-Lewis x epitopes are receptors for Pseudomonas aeruginosa. We also demonstrated that FliD protein, the flagellar cap protein of Pseudomonas aeruginosa which is a mucin-specific adhesin, recognise the sialyl-Lewis x epitopes. Another flagellar components of some Pseudomonas aeruginosa strains, the flagellin, may be involved in the adhesion to bronchial mucins
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Coppin, Lucie. "Mécanismes de régulation post-transcriptionnelle de l'expression des mucines par la galectine-3." Thesis, Lille 2, 2017. http://www.theses.fr/2017LIL2S008/document.
Full textAbstract:
L’adénocarcinome pancréatique canalaire s’accompagne d’une néoexpression de la mucine membranaire MUC4 et d’une surexpression des mucines membranaires MUC1 et MUC16. Ces O-glycoprotéines de haut poids moléculaire sont codées par des ARNm possédant des particularités inhabituelles par rapport aux autres transcrits humains, comme une longue demi-vie et une très grande taille. La galectine-3, une lectine endogène également surexprimée au cours du cancer pancréatique, exerce de très nombreuses fonctions biologiques, en particulier dans le domaine du trafic intracellulaire des glycoprotéines et de l’épissage des pré-ARNm. Cependant, l’implication de cette galectine à un autre niveau du cycle de vie des ARNm n’avait pas été explorée jusque-là dans la littérature. De précédents travaux du laboratoire ont démontré que la suppression de l’expression de la galectine-3 dans la lignée cellulaire cancéreuse pancréatique humaine CAPAN-1 s’accompagne d’une diminution de l’expression des transcrits de certaines mucines membranaires. L’objectif de ce travail a donc été d’étudier les mécanismes de régulation de l’expression des mucines membranaires, et plus particulièrement MUC4, par la galectine-3.Nous avons démontré que la galectine-3, in vitro, régule l’expression de MUC4 au niveau post-transcriptionnel en stabilisant les transcrits de cette mucine. Ceci passe par la potentialisation de la fixation de la RNA Binding Protein hnRNP-L sur l’élément cis-régulateur CA repeat présent dans le 3’UTR de MUC4. Nos résultats indiquent que cette régulation est présente in vivo au niveau physiologique dans des tissus épithéliaux digestifs murins. Par ailleurs, nous avons mis en évidence que la galectine-3 interagit avec hnRNP-L dans le cytoplasme mais qu’elle interagit faiblement avec des marqueurs de P-Bodies ou de granules de stress. Concernant le rôle de la galectine-3 dans le cycle de vie des ARNm, nos données révèlent que celle-ci se lie à aux transcrits matures de MUC4 au niveau périnucléaire, probablement dans des granules de stockage qui ne sont ni des granules de stress ni des P-bodies et dont le type reste à déterminer. Nous avons également élargi nos résultats en étudiant l’implication de cette lectine dans le métabolisme d’autres ARNm et nos analyses indiquent que la galectine-3 serait impliquée dans la régulation post-transcriptionnelle positive ou négative d’un ensemble de transcrits dont les fonctions convergent vers les voies UPR (Unfolded protein response) et ERAD (Endoplasmic-reticulum-associated protein degradation) mais également plus généralement vers le processing des protéines en réponse au stress du réticulum endoplasmique.En conclusion, nos travaux mettent en évidence un nouveau rôle de la galectine-3 en tant que RNA binding protein dans la stabilisation des ARNm de MUC4 mais aussi un nouveau rôle dans la coordination de l’expression de répertoires de transcrits matures ayant des rôles biologiques communs (RNA regulon) permettant à la cellule de s’adapter au plan morphologique, métabolique et biologique à des changements physiopathologiques. Ceci renforce les interconnexions largement décrites dans la littérature entre mucines, galectine-3 et les grandes fonctions cellulaires qui sont perturbées en situation cancéreuse<br>Pancreatic ductal adenocarcinoma is characterized by a neo expression of the membrane-bound mucin MUC4 and an overexpression of membrane-bound mucins MUC1 and MUC16. These high molecular weight O-glycoproteins are encoded by mRNA sharing unusual features among human transcripts, such as a long half-life and a very large size. Galectin-3, an endogenous lectin frequently over-expressed in pancreatic cancer, has many biological functions, especially in intracellular glycoprotein trafficking and pre-mRNA splicing. However, the involvement of this lectin in another step of mRNA life cycle has not been explored in literature yet. Previous works performed in the laboratory have demonstrated that LGALS3 gene knock-down in a human cancerous pancreatic cancer cell line is followed by a decrease of the expression of several membrane-bound mucin mRNAs. The aim of this present work was to study the mechanism of the regulation of mucins expression, especially for MUC4, by galectin-3.We have demonstrated that galectin-3, in vitro, regulates MUC4 expression at the post-transcriptionnal level through the stabilization of the transcripts of this mucin. Galectin-3 potentiates the binding of hnRNP-L, a RNA-Binding protein, on the CA repeat region present in MUC4 3’UTR. Our results show that this regulation occurs physiologically in vivo in mice digestive epithelial tissues. Moreover, we have demonstrated that galectin-3 interacts with hnRNP-L in cell cytoplasm but scarcely with protein markers of P-Bodies or stress granules markers. Regarding the influence of galectin-3 in mRNA life cycle, our results suggest that it binds to mature MUC4 transcripts in the perinuclear area, probably in storage granules whose type should to be determined. We have also broadened our results by studying this lectin’s involvement in the metabolism of other mRNA. Our analyzes suggest that galectin-3 could be involved in the positive or negative post-transcriptionnal regulation of a mRNA subset whose functions are linked to unfolded protein response (UPR) and Endoplasmic-reticulum-associated protein degradation (ERAD) pathways, but also more generally towards protein processing in response to endoplasmic reticulum stress.In conclusion, our work highlights a new function for galectin-3 as a RNA binding protein in the stabilization of MUC4 mRNA, but also a new function in the coordination of the expression of repertories of mature transcripts with shared functions or (RNA regulon) allowing morphological, biological and metabolic cell adaptation to physiopathological changes. These results strengthen the interplay between mucins, galectin-3 and cellular functions which are disturbed in cancer
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Nicoletti, Cendrine. "Nouvelles mucines membranaires et sécrétées de l'épithelium intestinal de lapin." Aix-Marseille 3, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX30101.
Full textAbstract:
Au niveau des epitheliums et en particulier dans le tractus digestif les cellules caliciformes synthetisent et secretent une grande quantite de mucines, glycoproteines fortement o-glycosylees qui forment un gel protecteur. Huit mucines humaines designees de muc1 a muc8 ont ete identifiees grace au sequencage au moins partiel de l'adnc codant pour leur squelette peptidique. Le glycocalyx filamenteux de la bordure en brosse (fbbg) qui forme un reseau fibrillaire recouvrant la surface de l'epithelium des villosites de l'intestin grele et des plateaux du colon essentiellement constitues de cellules absorbantes, constitue une protection supplementaire de l'epithelium intestinal. Nous avons montre chez le lapin que le fbbg est constitue d'une mucine ancree dans le microdomaine membranaire du sommet des microvillosites de ces cellules. Grace a un anticorps monoclonal (acm) specifique, le 6g2, nous avons caracterise une nouvelle mucine intestinale (m-6g2) qui contient une chaine legere de 150 kda dont la sequence n-terminale est differente des sequences peptidiques des mucines actuellement connues mais qui presente 54% d'homologie avec la sequence n-terminale de la chaine legere de muc2 de lapin dont nous avons montre l'existence. Les sequences peptidiques des 22 premiers acides amines des chaines legeres de muc2 de lapin et d'homme sont identiques. Contrairement a muc2 qui est synthetisee par l'ensemble des cellules caliciformes intestinales, m-6g2 n'est pas synthetisee par les cellules caliciformes des glandes coliques alors qu'elle est abondamment synthetisee par toutes les cellules caliciformes de l'intestin grele mais aussi de la trachee et des bronches. De plus au niveau du caecum et du colon proximal l'acm 6g2 reconnait une proteine integree dans la membrane de la bordure en brosse des cellules absorbantes qui pourrait etre une forme membranaire de m-6g2. Afin de pouvoir classer le fbbg et m-6g2 dans la famille des mucines et d'etablir les relations structurales pouvant exister d'une part entre les formes membranaire et soluble de m-6g2 et d'autre part entre le fbbg et la forme membranaire de m-6g2, nous avons entrepris le clonage des adnc codant pour ces proteines a partir de deux banques d'expression que nous avons construites a partir d'arnm de muqueuse d'intestin grele de lapin. Le criblage immunologique avec des anticorps reconnaissant la chaine legere de m-6g2 et/ou le fbbg deglycosyle nous a permis d'isoler huit clones positifs. Quatre d'entre eux (a22a, a22d, a26e et a27a) ont ete caracterises. Ils contiennent un insert de respectivement 2,8 ; 1,2 ; 1,7 et 1,6 kb codant pour le domaine c-terminal de quatre proteines differentes portant des determinants antigeniques communs. Leurs sequences partielles ne presentent aucune homologie significative avec les sequences repertoriees dans les banques de donnees. La determination de leur sequence complete qui est en cours permettra de preciser leur relation structurale et de leur appartenance ou non a la famille des mucines.
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Degroote, Sophie. "Glycosylation et sulfutation des mucines bronchiques humaines : influence de l'inflammation." Lille 1, 1999. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1999/50376-1999-295.pdf.
Full textAbstract:
Dix ans après la découverte du gène CFTR responsable de la mucoviscidose, l'infection pulmonaire persistante des malades par Pseudomonas aeruginosa reste mal comprise. Cette bactérie se fixe majoritairement sur les chaînes glycanniques des mucines bronchiques, dont la glycosylation et la sulfatation sont modifiées dans la mucoviscidose. Nous avons tout d'abord caractérisé une GlcNAc-6-O-sulfotransférase de muqueuse bronchique humaine, qui pourrait être responsable de l'hypersulfatation des mucines bronchiques des patients atteints de mucoviscidose (CF). Puis nous avons défini la séquence de biosynthèse, par les transférases de muqueuse bronchique humaine, des dérivés sulfatés et/ou sialylés de l'épitope Lewis x qui sont présents en périphérie des mucines bronchiques de patients CF. Certains de ces épitopes, en particulier le 6-sulfo sialyl Lewis x qui est le meilleur ligand de la L-sélectine, pourraient interagir avec les leucocytes et moduler la réponse inflammatoire<br>Nous avons ensuite caractérisé, en périphérie des mucines bronchiques de patients CF ou atteints de bronchite chronique, une hypersialylation et une surexpression de l'épitope sialyl Lewis x liées à l'inflammation (et à l'infection), alors que l'hypersulfatation des mucines bronchiques serait une anomalie primaire, liée aux mutations du gène CFTR. L'influence de l'inflammation sur les phénomènes de glycosylation et de sulfatation a été confirmée en caractérisant une certaine augmentation des activités (Alpha)1-3-fucosyltransférasiques, (Alpha)2-3-sialyltransférasiques et GlcNac-6-O-sulfotransférasique induite par le facteur de nécrose tumorale dans la lignée MM-39 d'origine glandulaire bronchique humaine, et dans des explants bronchiques. Enfin, nous avons démontré que P. Aeruginosa reconnaissait préférentiellement l'épitope sialyl Lewis x présent en périphérie des mucines bronchiques humaines et surexprimé chez les patients très infectés, ce qui pourrait expliquer la persistance de cette bactérie dans la mucoviscidose
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Demouveaux, Bastien. "Modification des gels de mucus par la délivrance de molécules composées de domaines CYS." Thesis, Lille 2, 2019. http://www.theses.fr/2019LIL2S029.
Full textAbstract:
Le mucus est un gel conservé chez les vertébrés et les invertébrés. Ses fonctions majeures sont la protection et l’hydratation des épithéliums non kératinisés. Les mucines gélifiantes sont des protéines multi-domaines qui s’associent en polymères linéaires et enchevêtrés pour former la matrice glycoprotéique du mucus. Les interactions covalentes bien caractérisées des mucines, mais aussi les associations non covalentes (réversibles),sont responsables du caractère viscoélastique du mucus. Le domaine CYS des mucines est retrouvé dans le mucus à la surface de toutes les muqueuses sécrétoires humaines. Il est très conservé chez les vertébrés et très hydrophobe. De ce fait, il est l’un des meilleur scandidats pour l’établissement de liaisons hydrophobes réversibles.L’objectif de ce travail est d’étudier l’impact d’un enrichissement en domaine CYS sur les propriétés des gels de mucus. Pour cela, un modèle murin transgénique (Tg222) e tune lignée cellulaire muco-sécrétante (HT29-MTX E12), sécrétant constitutivement une molécule recombinante composée de 12 domaines CYS consécutifs (rCYSx12), ont été développés. L’effet de la délivrance endogène de rCYSx12 sur la perméabilité du gel de mucus, la motilité cellulaire et les propriétés rhéologiques du gel ont été étudiés. Des modèles cellulaires sécrétant des molécules constituées de domaines CYS (poly-CYS) ont aussi été développés afin d’envisager la délivrance exogène de cette molécule, et d’étudier son effet dans un contexte pathologique.La délivrance endogène de rCYSx12 dans le mucus de la lignée cellulaireHT29-MTX E12 diminue la perméabilité du gel de mucus. La sécrétion de rCYSx12est également associée à une diminution de la motilité bactérienne (vitesse et linéarité du déplacement) dans les mucus des modèles cellulaire et murin. Les propriétés rhéologiques du mucus colique murin ont été déterminées à plusieurs échelles. La délivrance derCYSx12 entraîne un remodelage de la matrice protéique du mucus en réduisant la taille des mailles que forment les mucines gélifiantes. La production d’une molécule poly-CYS aété développée chez la levure Pichia pastoris et dans la lignée cellulaire d’origine humaineHEK293. Contrairement à P. pastoris, la lignée HEK293 produit et sécrète la molécule poly-CYS sans modifications importantes apparentes.La molécule rCYSx12 revêt un grand intérêt thérapeutique pour renforcer les gels de mucus dans des contextes pathologiques, comme la rectocolite hémorragique ou les infections intra-utérines. Le développement de modèles sécrétant stablement une molécule poly-CYS permettra de réaliser des tests de délivrance exogène, et ainsi déterminer le potentiel thérapeutique de cette molécule<br>Mucus is a gel conserved among vertebrates and invertebrates. Its major functions arethe protection and hydration of non-keratinized epithelia. Gel-forming mucins are multidomainproteins, which self-associate together to form linear and entangled polymers toform the mucus glycoprotein matrix. The well-characterized covalent interactions, but alsonon-covalent (reversible) links, are responsible for the viscoelastic character of mucus. Themucin CYS domain is found in mucus on the surface of all secretory human mucosae. Itis very well conserved in vertebrates and very hydrophobic. Thus, it is one of the bestcandidates for establishing reversible hydrophobic bonds.The aim of this work is to study the impact of CYS domain enrichment on propertiesof mucus gels. For this, a transgenic mouse model (Tg222) and a mucus-secretingcell line (HT29-MTX E12), constitutively secreting a recombinant molecule made of 12consecutive CYS domains (rCYSx12), were developed. The effect of endogenous deliveryof rCYSx12 on mucus gel permeability, cellular motility and rheological properties wasstudied (micro- and macro-scale). Cellular models secreting a molecule made up of CYSdomains (poly-CYS) have also been developed in order to consider the exogenous deliveryof this molecule, and to study its effect in a pathological context.Endogenous delivery of rCYSx12 into the mucus of the HT29-MTX E12 cell linedecreased the permeability of the mucus gel. The secretion of rCYSx12 was also associatedwith a decrease in bacterial motility (velocity and linearity of displacement) in the mucusof the cellular and mouse models. The rheological properties of the colonic mucus weredetermined at multi-scale levels. The delivery of rCYSx12 leads to a remodeling of the mucus protein matrix by reducing its mesh size. The production of a poly-CYS moleculewas developed in the yeast Pichia pastoris and in the human cell line HEK293. UnlikeP. pastoris, the HEK293 cell line produced and secreted the poly-CYS molecule withoutapparent modifications.The rCYSx12 is of great therapeutic interest for strengthening mucus gels in pathologicalcontexts such as ulcerative colitis or intrauterine infections. The development ofmodels stably secreting the poly-CYS molecule will make it possible to carry out exogenousdelivery tests, and thus to evaluate the therapeutic potential of this molecule
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Morelle, Willy. "Diversité des structures glycanniques des mucines oviducales d'Amphibiens impliquées dans les mécanismes de fécondation." Lille 1, 1997. http://www.theses.fr/1997LIL10181.
Full textAbstract:
Les ovocytes des amphibiens sont enrobés par trois à huit couches de substance gélatineuse appelée gangue ovulaire, qui assure différents rôles biologiques tant au niveau de la fécondation que durant la phase embryonnaire du développement. Les principaux composés de ces gangues ovulaires sont des glycoprotéines de type mucine renfermant jusqu'a 80% de matériel glucidique. Nous nous sommes intéressé à déterminer la structure des oligosaccharides présents dans les mucines oviducales de trois espèces d'amphibiens : rana utricularia, bufo bufo et bufo arenarum. Les chaînes glycanniques de ces mucines ont été libérées de la partie peptidique et purifiées par différentes techniques de chromatographie. L'analyse structurale de ces oligosaccharides a été réalisée par résonance magnétique nucléaire, spectrométrie de masse désorption laser et méthylation. Les résultats obtenus nous ont permis de confirmer que les chaînes glycanniques des mucines oviducales d'amphibiens sont spécifiques de chaque espèce. La dernière partie de ce travail propose une méthode permettant de déterminer la séquence d'oligosaccharide-alditols en utilisant les possibilités offertes par la spectrométrie de masse, plus particulièrement en tandem, et faisant appel a une technique d'ionisation qui est l'électrospray. Cette méthode repose sur une oxydation périodique ménagée de l'oligosaccharide-alditol provoquant ainsi un clivage spécifique. Les fragments résultant sont couples a une molécule de 2-aminopyridine et purifies par chromatographie liquide haute performance. L'esms/ms de ces dérivés permet de déterminer de façon univoque la séquence des oligosaccharides et la localisation des éventuels points de branchement.
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Nollet, Séverine. "Étude du gène d'apomucine humaine MUC4 : cartographie, clonage, polymorphisme et organisation de la région 5'." Lille 1, 1999. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1999/50376-1999-111.pdf.
Full textAbstract:
Le gène de mucine humaine MUC4, isolé dans notre laboratoire à partir de clones d'ADNc provenant d'une muqueuse trachéobronchique, est caractérisé par l'existence de séquences répétées en tandem de 48 pb et codant de nombreux résidus de thréonine et de sérine. Ce gène a une expression anormale dans divers carcinomes ainsi que dans quelques lésions prétumorales et il est donc considéré comme marqueur tumoral potentiel. L'étude de l'organisation génomique de MUC4 est donc nécessaire afin d'identifier les domaines peptidiques fonctionnels de cette apomucine et de comprendre sa fonction dans la croissance et la différenciation des cellules épithéliales. L'identification du promoteur et des séquences régulatrices de MUC4 facilitera les études sur l'expression de cette mucine en situation normale et pathologique et fournira peut-être des outils thérapeutiques. Au cours de ce travail, nous avons : - caractérisé la totalité de la séquence codante répétitive de MUC4<br>Il est apparu que le domaine répétitif est de grande taille, homogène et codé par un seul exon inhabituellement grand. Il présente un polymorphisme complexe de type VNTR (Variable Number of Tandem Repeats), mais également un polymorphisme de restriction ; - identifié un deuxième domaine répétitif situé en aval de l'exon central dans un intron. Ce domaine présente également un polymorphisme de type VNTR. Il contient de nombreux sites potentiels de fixation de facteurs de transcription ; - caractérisé la totalité de la séquence amino-terminale située en amont du domaine répétitif central de MUC4 ; - établi l'organisation génomique de la partie 5 de MUC4 ; - confirmé le rôle potentiel du peptide signal trouve dans la séquence N-terminale de MUC4, ce peptide signal présentant une très forte similarité de séquence avec celui de la sialomucine de rat ASGP-1 ; - caractérisé et analyse la région contenant le promoteur et les séquences régulatrices du gène MUC4
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Larousse, Marie. "Étude de l’interaction entre Phytophthora parasitica et le microbiote rhizosphérique à la surface de la plante hôte Solanum lycopersicum." Electronic Thesis or Diss., Nice, 2016. http://www.theses.fr/2016NICE4038.
Full textAbstract:
Les oomycètes phytopathogènes ont co-évolué avec les microbiotes des plantes hôtes. Il en résulte la formation de biofilms et des réseaux complexes d’interactions dont nous commençons juste à comprendre l’incidence sur la biologie et la virulence des oomycètes. Déterminer la nature de ces interactions et leur rôle dans le contexte d’une infection est aujourd’hui un enjeu cognitif qui concerne la caractérisation des mécanismes moléculaires et communautaires sous-jacents. C’est également une opportunité en termes d’innovation pour élaborer des méthodes de lutte alternative à l’usage de fongicides. Dans ce contexte, ce travail de thèse a consisté à étudier, d’une part, la formation de biofilm chez Phytophthora parasitica, un oomycète polyphage et tellurique, ainsi que, d’autre part, les interactions au sein de ce biofilm entre P. parasitica et le microbiote procaryote rhizosphérique de la plante hôte Solanum lycopersicum. L’analyse du génome de P. parasitica et du transcriptome du biofilm a conduit à la caractérisation d’une nouvelle famille de mucines restreinte à la lignée des oomycètes, les protéines MUCL. Ces 315 protéines sécrétées (25-30 kDa) sont réparties en 15 groupes et possèdent deux domaines : un domaine hautement conservé de fonction inconnue ; un domaine caractéristique des mucines, riche en résidus Sérine et Thréonine avec de très nombreux sites putatifs d’O-glycosylation. Chez P. parasitica, les 3 gènes PPMUCL1/2/3 sont exprimés et co-régulés spécifiquement au stade biofilm<br>The interactions between a pathogen and the host surface resident microbiota are critical to disease outbreak. These interactions shape the distribution, the density and the genetic diversity of inoculum. However for most plant pathogens how each of these interactions acts on disease as a single one or as a member of a functional network remains to be specified. This issue is addressed here through the analysis of two types of interactions involving the polyphagous oomycete P.parasitica : (i) the intraspecific interaction that leads to monospecific biofilm formation by P. parasitica zoospores on plant surface; (ii) the interspecific interactions that occur between P. parasitica biofilm and the prokaryotic microbiota of Solanum lycopersicum rhizosphere. The biology of monospecific biofilm is investigated through the characterization of MUCL, a new oomycete-specific Mucin-like Protein family. Gene profiling, biochemical and immunohistological analyses define the extent of this family and lead to identify three members, PPMUCL1/2/3, as residing in P. parasitica biofilm. The Phytophthora parasitica-Microbiota interaction is explored using first a metagenomic approach. Two microbial metagenomes derived from a soil of a tomato greenhouse is defined and compared after 16S RNA gene sequencing: M1 which corresponds to the sub-rhizospheric microbiota able to colonize the roots of axenic tomato seedlings; M2, the sub-microbiota able to colonize the tomato seedling roots previously coated with P. parasitica monospecific biofilm. A representative collection of microorganisms from M2 were also obtained through in vitro selection on a medium prepared from P. parasitica extract
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Aubert, Sébastien. "Régulation par l'hypoxie de l'expression du gène de mucine membranaire MUC1 dans un modèle cellulaire rénal : implications potentielles de MUC1 en physiopathologie rénale." Lille 2, 2009. http://www.theses.fr/2009LIL2S036.
Full textAbstract:
MUC1 est une O-glycoprotéine hautement glycosylée transmembranaire relativement ubiquitaire. Les précédents travaux réalisés au sein du laboratoire ont montré une surexpression de MUC1 dans les carcinomes à cellules claires du rein (cRCC) qui était corrélée de façon significative avec le grade nucléaire de Fürhman et le stade TNM, deux éléments pronostiques majeurs des cRCC. La principale voie de cancérogenèse rénale est la voie pVHL/HIF, où pVHL contrôle la demi-vie du facteur de transcription HIF (Hypoxia Inducible Factor). En hypoxie ou lorsque VHL est inactivé (80% des cRCC), HIF est stabilisé et peut exercer ses effets transactivateurs sur le promoteur de multiples gènes cibles tels que VEGF, AC9. Notre hypothèse est que MUC1 est régulé en conditions hypoxiques via HIF et que MUC1 jouerait un rôle dans la progression tumorale rénale. A l’aide de différents modèles cellulaires rénaux, nous mettions en évidence une surexpression de MUC1 tant au niveau ARN que protéique en conditions hypoxiques. Cette induction était inhibée soit par technique d’ARN interférence ciblant la sous-unité HIF1α soit à l’aide d’un inhibiteur pharmacologique spécifique de HIF1α, YC-1. Par transfections transitoires, nous montrions une augmentation de l’activation transcriptionnelle de MUC1 en conditions hypoxiques. Par immunoprécipitation de la chromatine et technique de retard sur gel, nous montrions une interaction directe entre HIF1 et le promoteur de MUC1, que nous confirmions par mutagenèse dirigée des éléments cis de HIF1 sur le promoteur de MUC1. On observait en outre, en conditions hypoxiques, une dérégulation de l’expression de MUC1 via les voies PI3K et NF-κB, à l’aide d’inhibiteurs pharmacologiques spécifiques. Dans un modèle d’hypoxie chez le rat, on confirmait in vivo l’induction de MUC1 dans le parenchyme rénal après clampage du pédicule vasculaire. D’autre part, nous observions dans nos modèles cellulaires rénaux que l’hypoxie induisait l’acquisition de propriétés migratoires et invasives. En invalidant de façon permanente l’expression de MUC1 par technique de shRNA, nous 13 observions une perte des propriétés d’invasion et de migration. Ces données font état que i) MUC1 est un gène cible de HIF1 ii) la régulation de MUC1 en hypoxie s’effectue également via les voies PI3K et NFκB iii) MUC1 pourrait jouer un rôle dans la progression tumorale rénale. Au cours de ces travaux, nous observions que l’hypoxie prolongée était responsable d’un processus de transition épithélium mésenchyme (TEM) où les cellules rénales changeaient de morphologie, perdaient certaines de leurs caractéristiques épithéliales et acquerraient des marqueurs mésenchymateux ainsi que des propriétés invasives. De façon surprenante, MUC1, considérée comme un marqueur épithélial, présentait une expression augmentée au cours de ce processus. Ces résultats préliminaires nous font suggérer que MUC1 pourrait jouer un rôle au cours de la TEM et plus particulièrement dans les processus de régénération/réparation rénale mais aussi dans la progression tumorale, qui est apparenté de plus en plus à une TEM dans la littérature.
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CHARNEAU, JACKY. "Histochimie des mucines dans l'endobrachyoesophage : une etude prospective de 40 cas." Angers, 1988. http://www.theses.fr/1988ANGE1039.
Full text
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Debailleul, Virginie. "Expression des gènes de mucines humaines : étude de la stabilité, de l'hétérogénéité et du polymorphisme des ARNm." Lille 1, 1997. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/1997/50376-1997-77.pdf.
Full textAbstract:
Les mucines confèrent au mucus ses propriétés physicochimiques et biologiques. Huit gènes de mucines ont été caractérisés possédant tous dans leurs séquences codantes un domaine compose de sous-unités répétées en tandem. L'organisation de deux de ces gènes, muc 1 et muc 7, a été publiée et codent chacun pour une petite mucine. Les autres gènes muc 2, muc 3, muc 4, muc 5ac, muc 5b et muc 6 révèlent en northern blot, un continuum homogène de transcrits s'étendant de 1 à 20 kb environ et dont la signification biologique était inconnue à ce jour. Différentes hypothèses ont été débattues dans la littérature autour de mécanismes biologiques (diversité, instabilité) ou Arte factuels (dégradation, séquence inusuelle répétitive). Au cours de ce travail, nous avons explore ces deux hypothèses afin d'élucider cette caractéristique propre à ces gènes de mucines. L'étude des fractions nucléaires, polynomiales et cytoplasmiques des arnm exprimes par la muqueuse colique puis l'étude de leur demi-vie dans le modelé cellulaire colique ht 29-mtx nous ont permis de démontrer la grande stabilité des arnm de ces gènes de mucines. Ensuite, l'étude de différents protocoles de purification des arn et de séparation electrophoretique (conventionnelle ou en champs pulses) nous ont permis de démontrer la taille inusuelle de ces arnm comprise entre 14 et 22 kb. Chaque gène, dans les tissus étudies, code un seul transcrit présentant un polymorphisme de type v. N. T. R. (variable number of tandem repeats) variable (excepte muc 5b) dont l'étude a pu être abordée
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Garcia, Bellmunt Laia. "Colonització bacteriana en la mpoc: paper dels mecanismes de defensa de la via aèria i nous mètodes diagnòstics." Doctoral thesis, Universitat Autònoma de Barcelona, 2016. http://hdl.handle.net/10803/386490.
Full textAbstract:
La malaltia pulmonar obstructiva crònica (MPOC) representa un problema sanitari de primer ordre, donada la seva elevada prevalença, que és una causa creixent de morbi-mortalitat arreu del món i donada l’elevada despesa sanitària que representa.
Diversos estudis amb tècniques invasives han demostrat que el 30-50% dels pacients amb MPOC greu clínicament estables presenten bactèries potencialment patògenes (BPP) a la seva via aèria, fet que es relaciona amb més inflamació, una major pèrdua de funció pulmonar i amb aguditzacions més freqüents i greus.
En l’actualitat però, no és conegut per què uns pacients amb MPOC són més susceptibles que d’altres a la colonització bacteriana. Per contra, està ben establerta la importància dels mecanismes de defensa innats del sistema respiratori, com són les mucines per mantenir la via aèria estèril. Per altra banda, el diagnòstic de la presència bacteriana a la via aèria en aquests pacients es realitza mitjançant el cultiu d’esput, que és un mètode no invasiu àmpliament estès en la pràctica clínica diària però que presenta importants limitacions.
La hipòtesi de la tesi postula que les mucines (mecanismes de defensa pulmonar) estan alterades en alguns pacients amb MPOC greu, fet que els fa més susceptibles a ser colonitzats per BPP. I que els mètodes diagnòstics no invasius com la Tomografia Computeritzada d´Alta Resolució (TACAR) o el nas electrònic (e-nose) poden facilitar-ne el seu diagnòstic.
Per a estudiar els objectius proposats, es van dissenyar 3 estudis prospectius en el quals es van incloure pacients amb MPOC moderada-greu en fase d’estabilitat clínica (> 8 setmanes sense agudització) i sense altra patologia respiratòria concomitant. En tots els pacients es va realitzar l’obtenció de mostra d’esput induït, una fibrobroncoscòpia amb rentada broncoalveolar (RBA) i es van recollir variables demogràfiques i de funcionalisme pulmonar. Es va realitzar l’estudi microbiològic de les mostres respiratòries. En el primer estudi es va realitzar determinació de les mucines, dels pèptids antimicrobians i de les citocines inflamatòries. En el segon estudi es realitzava l’adquisició d’imatges pulmonars mitjançant la TACAR i determinació de signes radiològics d’infecció. En el darrer estudi, es van determinar els compostos orgànics volàtils (COVs) en l’aire exhalat mitjançant el nas electrònic.
Com a resultats es va detectar que l’expressió disminuïda de la mucina 2 (MUC 2) a la via aèria s’associava a la colonització bacteriana bronquial i a una major inflamació de la via aèria (determinada pels nivells de IL-6). Es va observar que existia una relació inversa entre els nivells de IL-6 a la via aèria i els nivells de mucina 2. En l’estudi de la TACAR, es va observar que aquesta no detectava diferències en els patrons radiològics estudiats entre els subjectes amb colonització respecte aquells sense colonització. Per altra banda l’e-nose, sí va mostrar una correcta capacitat per classificar els MPOC en colonitzats i no colonitzats, amb una sensibilitat del 82% i una especificitat del 96%.
En conclusió, els nivells disminuïts de la MUC 2 a la via aèria es relacionen amb la colonització bacteriana bronquial i amb valors més elevats d’inflamació. La TACAR no permet detectar els individus amb BPP a la via aèria, mentre que el nas electrònic sí permet detectar aquells pacients amb MPOC que tenen colonització bronquial.<br>Chronic Obstructive Pulmonary Disease (COPD) is a leading cause of morbidity, mortality and resource use worldwide.
Several studies using invasive diagnostic tools showed that 30-50 % of patients with clinically stable COPD have potentially pathogenic bacteria (PPB) in their airway, which is associated with more inflammation, a higher decrease in lung function and more frequent and severe exacerbations.
However, it is not known why some patients with COPD are more susceptible than others to bacterial airway colonization. It is well established the importance of respiratory system innate defense mechanisms, such as mucins to maintain the airway sterile. On the other hand, sputum culture is a non-invasive diagnostic tool for airway bacterial colonization. Even though is a widespread method in daily clinical practice it has important limitations.
The hypothesis of the thesis postulates that mucin levels are altered in some patients with severe COPD, which makes them more likely to be colonized by PPB. In addition, we postulate that new non-invasive techniques such as the High Resolution Computed Tomography (HRCT) and the electronic nose (e- nose), may facilitate bacterial colonization diagnosis.
Three prospective studies were designed. Inclusion criteria were patients with moderate to severe COPD clinically stable (> 8 weeks without exacerbation) with no other concomitant respiratory disease. In all patients demographic variables and lung function data were collected, induced sputum sample was obtained and a bronchoscopy with broncoalveolar lavage (BAL) was performed. We performed microbiological study of the respiratory samples. In the first study mucin levels, antimicrobial peptides levels and inflammatory cytokines levels were determined. In the second study HRCT images were analysed for radiological signs of infection. In the last study the volatile organic compounds (VOCs) in the exhaled air were studied by the electronic nose.
In result, it was found that decreased levels of airway mucin 2 were associated with bacterial colonization and increased airway inflammation (determined by IL- 6 levels). It was noted that there was an inverse relationship between IL- 6 levels and airway mucin 2 levels. In the second study no differences in HRCT imaging patterns were detected among subjects with and those without bronchial colonization. The e-nose instead, was able to classify COPD patients in colonized and non- colonized with a sensitivity of 82 % and a specificity of 96%.
In conclusion, low airway MUC 2 levels in severe COPD patients were associated with airway bacterial colonization and higher levels of inflammation (IL-6). HRCT is not usefull in the detection of potentially pathogenic bacteria in the airway of COPD patients. The e-nose detects those COPD patients with bronchial colonization.
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Maury, Jacques. "Le FBBG, une mucine membranaire, marqueur d'hyperpolarisation et de différenciation des entérocytes." Aix-Marseille 3, 1994. http://www.theses.fr/1994AIX30100.
Full textAbstract:
La protection des epithelia contre les agressions exterieures telles que les infections parasitaires, bacteriennes, et virales, est essentiellement assuree par la couche de mucus secretee par des cellules epitheliales specialisees. Des observations en microscopie electronique montrent toutefois que de nombreux epithelia, et en particulier l'epithelium intestinal, sont egalement recouverts par un reseau de glycoconjugues filamenteux implantes dans la membrane apicale des cellules epitheliales, que nous avons appele dans le cas des cellules absorbantes intestinales, le glycocalyx filamenteux de la bordure en brosse ou fbbg. De tres faibles quantites d'un glycoconjugue de poids moleculaire apparent de 400 kda ont ete purifiees a partir de vesicules de bordure en brosse. Un anticorps monoclonal, le 3a4, qui reconnait un epitope glycosidique specifique de la glycoproteine de 400 kda en immunoempreinte a ete produit. Cet anticorps a permis de montrer par immunomarquage de coupes d'intestin, que seul le fbbg est immunorevele, et qu'il est exclusivement ancre dans le microdomaine membranaire situe au sommet des microvillosites, ce qui confere aux enterocytes, le caractere de cellules epitheliales hyperpolarisees. L'immunopurification du fbbg, par l'anticorps 3a4, a permis de montrer que la glycoproteine de 400 kda est l'unique constituant du fbbg. Sa caracterisation biochimique montre que c'est une glycoproteine membranaire fortement glycosylee, puisque la chaine peptidique, qui contient 40% de residu de serine et threonine, ne represente que 27% de la masse moleculaire. Le fbbg possede les caracteristiques biochimiques des glycoproteines regroupees au sein de la famille des glycoproteines de type mucine. Son expression et sa glycosylation au cours de la differenciation enterocytaire le long de l'axe crypte-villosite ont ete abordees. Des etudes d'immunomarquage de surface et de coupes de tissus ont permis de montrer que le nombre d'enterocytes qui synthetise un fbbg portant l'antigenicite 3a4 peut varier de 100 a 0%. La distribution en mosaique des enterocytes exprimant ou non l'antigenicite 3a4 sur les villosites, associee a la monoclonalite des cellules des cryptes et a la migration lineaire des enterocytes le long des villosites, suggerent que les enterocytes d'une meme crypte peuvent suivre un programme de differenciation heterogene. L'etude de l'expression hyperpolarisee du fbbg par l'anticorps 3a4, le long de l'axe crypto-villositaire, a permis de mettre en evidence trois etapes distinctes de la differenciation enterocytaire
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Rahmoune, Hassan. "Étude des sulfoglycoconjugués dans la sécrétion bronchique." Lille 1, 1990. http://www.theses.fr/1990LIL10081.
Full textAbstract:
Au cours de ce travail sur les sulfoglycoconjugués trachéo-bronchiques, (i) un système de culture organo-typique de la muqueuse trachéo-bronchique de cobaye a été mis au point: il a permis de définir les sulfoglycoconjugués normalement sécrétés par cette muqueuse, mucines, o-glycoprotéines sulfatées et protéoglycannes à chondroïtine sulfate; (ii) en fonction de ces résultats, la présence de chondroïtine-sulfate dans la sécrétion bronchique humaine a été recherchée: certaines sécrétions bronchiques très infectées, notamment au cours de la mucoviscidose, contiennent du chondroïtine-sulfate; (iii) les caractéristiques de la sulfatation des mucines bronchiques humaines ont été étudiées et des liaisons ester-sulfate sur le c-3 de résidus de galactose terminaux, liaisons qui étaient jusqu'à présent inconnues dans les chaînes glycanniques des mucines, ont été mises en évidence
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Carnoy, Christophe. "Interactions mucines - Pseudomonas aeruginosa dans la mucoviscidose : mise en évidence d'adhésines et de sites de reconnaissance glycanniques." Lille 1, 1991. http://www.theses.fr/1991LIL10133.
Full textAbstract:
Dans le but d'expliquer la prédominance de P. Aeruginosa au cours des infections bronchiques dans la mucoviscidose, nous nous sommes intéressé à l'interaction de ce genre avec les mucines salivaires de patients atteints de mucoviscidose. La mucoviscidose se caractérise par (i) une hypersécrétion de mucines salivaires, (ii) une sialylation importante de tous les glycopeptides salivaires et (ii) une sulfatation importante des glycopeptides de haute masse moléculaire. Une technique d'adhésion in vitro a permis de montrer que P. Aeruginosa adhérait de manière plus importante sur les glycopeptides salivaires de patients atteints de mucoviscidose que sur ceux de patients normaux et que cette adhésion était en partie liée à l'acide sialique. Une caractérisation des chaînes glycanniques a été effectuée en utlisant des techniques de purification par HPLC, et d'analyse par spectrométrie de masse FAB et spectroscopie RMN. Pour la première fois une forte hétérogénéité des chaînes glycanniques de mucines salivaires humaines a été décrite et 45 oligosaccharides neutres et sialylés ont été identifiés. L'utilisation de néoglycolipides présentant des structures glycanniques similaires à celles rencontrées au niveau des mucines a permis de démontrer que la structure N-acétyllactosamine et les structures sialylées en α2,3 étaient reconnues par P. Aeruginosa. A l'aide d'une technique originale de révélation des protéines membranaires par des mucines radiomarquées, une adhésine membranaire de P. Aeruginosa reconnue par les mucines salivaires d'un patient souffrant de mucoviscidose a été caractérisée
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Barbier, Diane. "Impact du virus Influenza de type A sur la régulation de MUC5AC, l’une des principales mucines respiratoires." Paris 6, 2010. http://www.theses.fr/2010PA066683.
Full textAbstract:
Les virus Influenza de type A (VIA) sont les agents étiologiques de la grippe, une pathologie respiratoire aigue hautement contagieuse qui constitue une cause majeure de mortalité et de morbidité dans le monde. En effet, ces virus sont responsables d’épidémies saisonnières chaque année mais également de pandémies sévères chaque siècle. Au cours de l’infection grippale, l’organisme va mettre rapidement en place un système de défense immunitaire inné afin de limiter la propagation du virus et de l’éradiquer. En particulier, le mucus qui tapisse les voies aériennes supérieures, constitue une barrière physique potentiellement capable de capter et de séquestrer des pathogènes tels que des bactéries ou des virus. Au cours de ma thèse, nous nous sommes intéressés à la régulation de MUC5AC, l’une des principales mucines respiratoires, par le VIA in vitro dans des cellules épithéliales pulmonaires et in vivo chez la souris. Notre projet a été de mettre en évidence la voie de signalisation impliquée dans cette régulation et de discuter le rôle de l’expression de MUC5AC au cours de l’infection grippale. Nos résultats démontrent qu’à la fois des souches saisonnières et pandémiques, de type H3N2 ou H1N1, sont capables d’augmenter l’expression de MUC5AC au niveau de l’ARNm et au niveau protéique. Notre travail démontre également que l’induction de MUC5AC est dépendante de la réplication virale et de l’induction de protéases et implique la voie de signalisation EGFR/MEK/ERK/Sp1. Nos résultats dissèquent pour la première fois la voie d’induction de MUC5AC par le VIA et ouvrent de nouvelles perspectives pour la compréhension du rôle des mucines dans les infections virales
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Coppin, Alexandra. "Spécificité d'espèce associée aux chaînes glycanniques des mucines oviducales d'amphibiens : analyse structurale par résonnance magnétique nucléaire et spectrométrie de masse des oligosaccharide-alditols libérés par [bêta]-élimination." Lille 1, 2000. https://pepite-depot.univ-lille.fr/LIBRE/Th_Num/2000/50376-2000-374-375.pdf.
Full textAbstract:
Les gangues oviducales d'amphibiens sont en majorité constituées de glycoprotéines de type mucine dont les chaînes glycanniques présentent une remarquable hétérogénéité structurale. Notre travail a consisté en l'étude de ces chaînes glycanniques chez 4 amphibiens : rana temporaria, rana arvalis, bufo viridis et bombina bombina. Pour chacune de ces espèces, les oligosaccharides ont été libérés par -élimination en milieu réducteur, purifiés par les techniques chromatographiques conventionnelles (tamisage moléculaire, échange d'ions, hplc) et leur structure primaire a été établie par résonance magnétique nucléaire du proton et du carbone et par spectrométrie de masse utilisée en différents modes (maldi-tof, gc-ms, esi-ms/ms). Ainsi, à partir des 60 oligosaccharide-alditols libérés et identifiés, nous avons précisé la carte d'identité structurale de chacune de ces mucines. Selon l'espèce, l'acidité est portée par des groupements sulfates, de l'acide glucuronique ou bien par un acide sialique (neuac ou kdn). La séquence glcnac(1-3)fuc(1-4)glcnac(1-6)galnac-ol est majoritairement presentée chez b. Viridis et b. Bombina. Mais son élongation est caractéristique de cette dernière espèce. De plus, certains oligosaccharides sont porteurs des déterminants antigéniques cad, le x et le y<br>Nous avons également identifié pour la première fois, chez r. Arvalis, un nouveau type de sulfatation (galactose-4-sulfate). Nos résultats démontrent ainsi la haute spécificité d'espèce portée par les chaînes glycanniques qui constituent des marqueurs phénotypiques stricts. S'il existe une glycosylation relativement bien conservée en ce qui concerne la n-glycosylation, la o-glycosylation, quant à elle, apparaît spécifique de chaque espèce. Compte tenu du rôle des mucines en tant que première barrière de protection et de niche écologique vis-à-vis d'organismes pathogènes ou de symbiontes, la diversité et la spécificité d'espèce des structures o-glycanniques peut aujourd'hui résulter des processus de pression de sélection du génome des glycosyltransférases
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Coppin, Alexandra Strecker Gérard. "Spécificité d'espèce associée aux chaînes glycanniques des mucines oviducales d'amphibiens analyse structurale par résonnance magnétique nucléaire et spectrométrie de masse des oligosaccharide-alditols libérés par [bêta]-élimination /." [S.l.] : [s.n.], 2000. http://www.univ-lille1.fr/bustl-grisemine/pdf/extheses/50376-2000-374-375.pdf.
Full text
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Gomes, Maryline. "Evènements moléculaires spécifiques au cours des adénocarcinomes pulmonaires lépidiques humains et animaux." Thesis, Lyon, 2017. http://www.theses.fr/2017LYSE1101/document.
Full textAbstract:
Le cancer est l'une des principales causes de morbidité et de mortalité dans le monde avec environ 14 millions de nouveaux cas et 8,2 millions de décès liés aux cancers selon l'OMS (Organisation Mondiale de la Santé). Le cancer du poumon est le premier cancer diagnostiqué chez l'homme et compte pour 20% du nombre de mort par cancer par an dans le monde. Parmi les cancers pulmonaires, on distingue les cancers à petites cellules et les cancers non à petites cellules. Ce travail a porté sur l'étude des adénocarcinomes pulmonaires lépidiques, un type de cancer non à petites cellules, chez l'homme et l'animal. Chez l'homme, il fait partie des tumeurs pulmonaires rares, pas ou peu lié au tabagisme. Il est similaire cliniquement, radiologiquement et histologiquement à l'adénocarcinome pulmonaire ovin, un cancer du poumon induit par le β-rétrovirus JSRV (Jaagsiekte Sheep RetroVirus) affectant les petits ruminants domestiques. JSRV transforme les cellules épithéliales du parenchyme via son enveloppe oncogénique. Ces tumeurs humaines et animales ne sont pas associées au développement de métastases extra-thoraciques ou pleurales. Le but de notre travail a été d'étudier les évènements moléculaires spécifiques des adénocarcinomes lépidiques humains et animaux par i. l'analyse transcriptomique de l'expression des gènes dans ces deux cancers, ii. la caractérisation de l'adénocarcinome pulmonaire ovin par l'expression des mucines et iii. l'étude d'un rôle putatif des séquences rétrovirales endogènes dans l'induction de l'adénocarcinome lépidique humain. Premièrement, notre étude a porté sur l'analyse en parallèle des mécanismes moléculaires spécifiques des adénocarcinomes lépidiques prédominants par l'analyse des profils d'expression des gènes impliqués dans les voies de signalisation BMI1, NOTCH, Hedgehog et WNT importantes dans le développement du poumon normal et au cours des cancers pulmonaires et dans la voie de l'angiogenèse, permettant la dissémination des cellules tumorales. L'augmentation de l'expression de CDH1 (E-cadherin), acteur crucial de la voie BMI1, et la diminution de l'expression des ligands et récepteurs activateurs de l'angiogenèse VEGF/VEGFR (Vascular Growth Factor), PDGF/PDGFR (Platelet-derived Growth Factor) et ANGPT/TIE (Angiopoietin/Tyrosine kinase with immunoglobulin like and EGF like domains) ont été observées dans ces deux cancers. Lors de l'analyse de l'expression des ARNm et des protéines, nous avons mis en évidence le blocage de la voie principale de l'angiogenèse dans les cancers lépidiques. En effet, l'absence d'expression du ligand VEGFA (Vascular Endothelial Growth Factor A) et de son récepteur VEGFR2 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2) a été observée. Ce blocage n'était pas compensé par la surexpression de gènes impliqués dans les voies alternatives d'angiogenèse. Le blocage de la voie de l'angiogenèse explique l'absence de métastases extrathoraciques dans les adénocarcinomes lépidiques chez l'homme et l'animal. Deuxièmement, les adénocarcinomes pulmonaires lépidiques chez l'homme sont subdivisés en deux entités majoritaires : les adénocarcinomes lépidiques prédominants non mucineux et les adénocarcinomes mucineux invasifs. Dans le contexte des analogies entre ces cancers humains et l'adénocarcinome induit par le virus JSRV, nous avons analysé l'expression des mucines dans les cancers animaux. Nous avons montré que sur 37 cancers pulmonaires induits par JSRV, 62% étaient non mucineux, qu'ils sur exprimaient MUC1 (mucin 1, cell surface associated) et que 50% exprimaient MUC5B (mucin 5B, oligomeric mucus/gel-forming). Par ces résultats, nous avons montré que les adénocarcinomes pulmonaires ovins se rapprochaient principalement des adénocarcinomes lépidiques prédominants<br>Cancer is the main cause of morbidity and mortality worldwide with 14 million new cases and approximately 8.2 million deaths according to the WHO (World Health Organization). Lung cancer is the most diagnosed cancer in men and account for 20% of cancer death in the world annually. Among lung cancers, there are small cell lung cancers and non-small cell lung cancers. My work focused on the lepidic adenocarcinoma, a subtype of nonsmall cell lung cancer, in humans and animals. In humans, it is a rare lung cancer and it is not or rarely linked to tobacco smoking. Lepidic adenocarcinomas share striking clinical, radiological and histopathological similarities with ovine pulmonary adenocarcinomas induced by the β-retrovirus JSRV (Jaagsiekte Sheep RetroVirus) affecting sheep and goats. JSRV transforms epithelial cells of the distal lung through its oncogenic envelope. These human and animal tumors are not associated with pleural or extra thoracic metastases. My work was to study specific molecular events in human and animal lepidic adenocarcinomas by i. a transcriptomic analysis of the gene expression in these two lung cancers, ii. ovine pulmonary adenocarcinoma characterization by mucin expression and iii. the study of a potential role for endogenous retroviral sequences in the induction of human lepidic adenocarcinomas. First, my work focused on the parallel analysis of expression patterns in genes implicated in BMI1, NOTCH, Hedgehog and WNT pathways important for lung development and for lung cancer development and the angiogenesis pathway whose activation leads to cancer cell dissemination. CDH1 (E-cadherin) up regulation and the down regulation of main angiogenic ligand and receptors VEGF/VEGFR (Vascular Endothelial Growth Factor), PDGF/PDGFR (Platelet-derived Growth Factor) and ANGPT/TIE (Angiopoietin/Tyrosine kinase with immunoglobulin like and EGF like domains) were observed. Then, when analyzing lepidic adenocarcinomas mRNA and protein expression, we highlighted the blockade of the main angiogenesis pathway. Indeed, the VEGFA ligand and its receptor VEGFR2 were absent in lepidic adenocarcinomas. Moreover, this blockade was not compensated with angiogenic alternative pathways. These results correlate with the absence of extra thoracic metastases in human and animal lepidic adenocarcinomas. Secondly, human lepidic predominant adenocarcinomas are divided in two groups, non-mucinous lepidic adenocarcinomas and invasive mucinous adenocarcinomas. To characterize ovine pulmonary adenocarcinomas and determine to which one of these two human lepidic adenocarcinomas they are close to, we analyzed mucine expression in animal lung cancer. On 37 JSRV-induced lung cancer, 62% were nonmucinous, 100% expressed MUC1 (mucin 1, cell surface associated) and 50% expressed MUC5B (mucin 5B, oligomeric mucus/gel-forming). These results highlighted that ovine pulmonary adenocarcinomas are closer to non-mucinous lepidic adenocarcinomas
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Ouellet, Cristine. "Effets des mucines sur les défenses mucosales innées pulmonaires : Implications en fibrose kystique." Mémoire, Université de Sherbrooke, 2008. http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3929.
Full textAbstract:
La fibrose kystique (FK) est causé par la déficience de la protéine CFTR (cystic fibrosis transmembrane conductance regulator). L'absence de cette protéine entraine une diminution de la sécrétion d'ions chlorures et une hyperabsorption de sodium au niveau de la surface épithéliale apicale pulmonaire. La combinaison de ces deux phénomènes cause ainsi une déshydratation du liquide de surface des voies respiratoires (ASL). La déplétion du ASL engendre I'épaississement et la concentration de la mucine respiratoire, glycoprotéine de haut poids moléculaire anionique. Cette accumulation de mucine respiratoire entraîne une diminution du transport mucociliaire, l'un des mécanismes de défense des plus importants. Ainsi, les patients FK ont de façon récurrente et persistante des infections chroniques pulmonaires aux bactéries Pseudomonas aeruginosa. Par contre, la clairance mucociliaire n'est pas le seul système de défense au niveau pulmonaire, plusieurs protéines antibactériennes cationiques telles que le lysosyme et les béta-défensines ainsi que les neutrophiles permettent l'éradication des pathogènes. Par contre, chez le patient FK, ces deux autres phénomènes antibactériens ne semblent pas être efficaces. Puisque la clef de la pathogenèse de la FK semble être l'accumulation et la concentration de la mucine, le but de cette étude a été de vérifier si celle-ci interfèrerait dans les principaux mécanismes de défense pulmonaire soit sur le mécanisme bactéricide du neutrophile et sur l’action antimicrobienne des peptides extracellulaires pulmonaires. L'utilisation de colonnes d'affinité a permis de purifier de la mucine respiratoire provenant d'expectoration de patients FK ainsi que de la mucine salivaire provenant de salive de volontaires sains. Par immunobuvardage de type Western (anti-MUC5B, anti-MUC5AC), les mucines ont été caractérisées. L'utilisation de techniques de mortalité bactéricide et de phagocytose a démontrée l'effet négatif des mucines sur les mécanismes de défense pulmonaire. L'ensemble des travaux a démontré que la mucine respiratoire diminuait le mécanisme bactéricide des neutrophiles humains sans toutefois affecter leur capacité de phagocytose et de production d'oxydants. Par contre, l'ensemble des peptides antimicrobiens neutrophiles est inhibé en présence de celle-ci. De plus, les deux types de mucine causent une diminution de l'activité antimicrobienne de la béta-défensine 2, un peptide extracellulaire. Ayant des structures chargés de façon opposées (mucine négative, peptide positif), l'association et la neutralisation de ceux-ci permettent d'expliquer en partie la perte de pouvoir bactéricide. Finalement, cette étude a démontré que l'accumulation et la concentration de la mucine respiratoire chez les patients atteints de FK pourrait diminuer grandement leurs capacités de défenses antimicrobiennes tels que les neutrophiles et les protéines antibactérienne cationiques extracellulaire via possiblement une neutralisation des charges.
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Creuzot-Garcher, Catherine. "Expression des gènes et des antigènes des mucines conjonctivales humaines saines et pathologiques." Dijon, 1998. http://www.theses.fr/1998DIJOMU04.
Full text
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Landemarre, Ludovic. "Anticorps monoclonaux anti-mucines de pleurodele : reconnaissance de glycoconjugues de cellules tumorales humaines." Orléans, 1996. http://www.theses.fr/1996ORLE2036.
Full textAbstract:
Les cellules tumorales expriment des structures glycanniques qui sont modifiees qualitativement et quantitativement par rapport aux cellules normales. Ces modifications d'expression entrainent un changement du comportement de ces cellules vis a vis de leur environnement, elles peuvent aussi conduire a l'expression d'antigenes glycanniques specifiques de tumeurs. L'identification de ces structures contribue a la comprehension des mecanismes de regulation de leur expression et a l'elaboration de nouvelles approches therapeutiques ou diagnostiques. Dans le but d'identifier de nouveaux epitopes glycanniques exprimes par des lignees cellulaires humaines derivees de carcinome du sein et du colon, nous nous sommes propose de produire des anticorps monoclonaux diriges contre des structures oligosaccharidiques portees par des mucines de pleurodeles waltlii dont certaines ont ete decrites comme associees au cancer. La production des anticorps monoclonaux a ete realisee en utilisant comme immunogenes differentes formes de mucines (native, reduite, desialylee), et les hybridomes secretant des anticorps potentiellement diriges contre des structures oligosaccharidiques ont ete selectionnes. La reactivite des anticorps monoclonaux preselectionnes a ete etudiee sur les differentes formes de mucines de pleurodele, sur ces formes traitees par oxydation periodique et par beta elimination, et sur differentes mucines d'amphibiens et de mammiferes. Cinq de ces anticorps monoclonaux ont montre leur capacite a se fixer a la surface de cellules derivees de carcinomes du sein et du colon. Pour analyser les molecules qui expriment des epitopes glycanniques associes aux cellules etudiees, nous avons utilise l'anticorps monoclonal n 3 qui est dirige contre une structure fucosylee et qui presente une fixation importante a la surface des cellules tumorales. L'anticorps n 3 reconnait un epitope porte par plusieurs glycoproteines au niveau des cellules derivees de carcinome du sein et du colon ; par contre, aucune fixation de l'anticorps n 3 n'a pu etre demontree sur des extraits lipidiques totaux issus de cellules de la lignee mcf-7. Par ailleurs, l'epitope reconnu par l'anticorps n 3 n'est pas exprime a la surface de lignees cellulaires derivees de carcinome du sein plus invasives que la lignee mcf-7
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BILDSTEIN, LAURE. "Evaluation quantitative des mucines conjonctivales par dosage du ca 19-9 sur empreintes." Dijon, 1994. http://www.theses.fr/1994DIJOM061.
Full text
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LeSimple, Pierre. "Rôle des peptides trifoliés et des mucines dans la régénération et la différenciation de l'épithélium respiratoire humain." Reims, 2006. http://theses.univ-reims.fr/exl-doc/GED00000410.pdf.
Full textAbstract:
L'@épithélium respiratoire de surface est fréquemment lésé et doit rapidement régénérer pour maintenir ses fonctions de barrière et de défense. L'identification de molécules capables de promouvoir la différenciation de l'épithélium respiratoire est donc d'un intérêt thérapeutique majeur. Les peptides trifoliés et les mucines, exprimés notamment par les épithéliums muqueux, ont des rôles importants dans de nombreux processus biologiques, mais leur rôle dans la régénération de l'épithélium respiratoire humain n'est pas connu. Dans cette étude, nous décrivons l'expression des mucines MUC1, MUC4, MUC5AC et MUC5B, et des peptides trifoliés, au cours de la régénération de l'épithélium respiratoire de surface humain dans un modèle ex vivo de xénogreffe bronchique humanisée et dans un modèle in vitro de culture à l'interface air / liquide. Nous montrons que le peptide trifolié TFF3 est capable de favoriser la migration des cellules épithéliales in vitro et la différenciation des cellules ciliées de l'épithélium respiratoire humain dans le modèle de culture à l'interface air / liquide, de façon dépendante de l'activation du récepteur à l'EGF. Nous proposons un modèle selon lequel le peptide TFF3, sécrété par les cellules intactes en bordure de lésion, favoriserait la régénération et la différenciation de l'épithélium respiratoire fonctionnel in vivo. Cet effet pourrait nécessiter une association avec les mucines. Ce travail permet de mieux comprendre le rôle du peptide TFF3 dans la régénération de l'épithélium respiratoire humain, et ouvre des perspectives de thérapies régénératives applicables aux pathologies lésionnelles de l'épithélium respiratoire<br>@Following injury, the surface airway epithelium has to rapidly repair and redifferentiate to recover its barrier and protective functions. Mucins and trefoil factors are expressed by mucous epithelia and have been shown to play important roles in various biological processes. However, their role in human airway epithelial regeneration and differentiation is not known. We analyzed the spatio-temporal expression of trefoil factors and mucins MUC1, MUC4, MUC5AC and MUC5B during airway epithelial differentiation and regeneration using an in vivo open tracheal xenograft model and an in vitro air-liquid interface cell culture model. We show that trefoil factor TFF3 is able to enhance human airway epithelial cell migration in vitro and human airway epithelium differentiation in the air / liquid interface culture model. This last effect was dependent on EGF receptor activation. We propose that the trefoil factor family peptide TFF3 secreted by goblet cells surrounding a lesion could enhance in vivo the regeneration and differentiation of a mature and functional airway surface epithelium, possibly in association with mucins. This study provides an insight on the role played by trefoil factor TFF3 in the human airway epithelium regeneration and differentiation processes, and suggests that it could be applied as regenerative therapy in chronic airway diseases with epithelial injury. Résumé anglais : idem