Academic literature on the topic 'Multirésistance virale aux médicaments'

Background: In sub-Saharan Africa where genotypic anti-retroviral (ARV) drug resistance testing is rarely performed and poor adherence is blamed for the inability to achieve viral suppression and treatment failure, programmatic approaches to preventing and handling these are essential. This study was aimed at assessing the virological outcomes among HIV patients receiving second-line anti-retroviral therapy (ART) in Southwestern Nigeria.Methodology: This was a 5-year observational retrospective study of randomly selected people living with HIV (PLWHIV) who have been switched to second-line ART for at least six months before the commencement of the study in multiple comprehensive ART sites across the three levels of care, in Ondo and Ekiti States, Southwestern Nigeria, from January 2015 to December 2019. Quantitative viral load analysis was done using polymerase chain reaction (PCR) assay. Data were analyzed using the Statistical Package for Social Sciences (SPSS) version 24.0.Results: A total of 249 (71 males and 178 females) subjects eligible for the study were recruited using simple random sampling technique. The mean age (± SD) of the subjects was 44.21 ± 11.45 years. The mean number of years the patients have been on ART regimen was 7.92 ± 2.68 years. The mean number of years the patients were on first line ART regimen before being switched to second line was 4.27 ± 2.63 years. Patients with viral load <1000 RNA copies/ml (suppressed viral load) were 216 (86.7%) out of which 113 (45.4%) had viral load <20 RNA copies/ml while 33 (13.3%) had viral load >1000 RNA copies/ml (unsuppressed viral load or virological failure).Conclusion: About 13% of the patients on second line ART had unsuppressed viral load of more than 1000 RNA copies/ml indicating virological failure. Thus, critical factors such as poor adherence to ART and drug resistance chiefly contributing to virological failure have to be routinely checked. Keywords: suppression, ART, resistance, virological, failure, Nigeria French title: Preuve d'échec virologique chez les patients sous traitement antirétroviral de deuxième intention dans le sud-ouest du Nigeria: une indication pour le test de résistance aux médicaments contre le VIH Contexte: En Afrique subsaharienne, où les tests génotypiques de résistance aux antirétroviraux (ARV) sont rarement effectués et où une mauvaise observance est imputée à l'incapacité d'obtenir la suppression virale et l'échec du traitement, des approches programmatiques pour les prévenir et les gérer sont essentielles. Cette étude visait à évaluer les résultats virologiques chez les patients VIH recevant un traitement antirétroviral (TAR) de deuxième intention dans le sud-ouest du Nigeria. Méthodologie: Il s'agissait d'une étude rétrospective d'observation de 5 ans portant sur des personnes vivant avec le VIH (PVVIH) sélectionnées au hasard et passées à un TAR de deuxième intention pendant au moins six mois avant le début de l'étude dans plusieurs sites de TAR complets aux trois niveaux. de soins, dans les États d'Ondo et d'Ekiti, dans le sud-ouest du Nigéria, de janvier 2015 à décembre 2019. L'analyse quantitative de la charge virale a été effectuée à l'aide d'un test de réaction en chaîne par polymérase (PCR). Les données ont été analysées à l'aide du logiciel Paquet statistique pour les sciences sociales (SPSS) version 24.0. Résultats: Un total de 249 (71 hommes et 178 femmes) sujets éligibles à l'étude ont été recrutés à l'aide d'une technique d'échantillonnage aléatoire simple. L'âge moyen (± ET) des sujets était de 44,21±11,45 ans. Le nombre moyen d'années pendant lesquelles les patients ont été sous traitement antirétroviral était de 7,92±2,68 ans. Le nombre moyen d'années pendant lesquelles les patients étaient sous traitement antirétroviral de première ligne avant de passer en deuxième ligne était de 4,27 ± 2,63 ans. Les patients avec une charge virale <1000 copies d'ARN/ml (charge virale supprimée) étaient 216 (86,7%) dont 113 (45,4%) avaient une charge virale <20 copies d'ARN/ml tandis que 33 (13,3%) avaient une charge virale >1000 ARN copies/ml (charge virale non supprimée ou échec virologique). Conclusion: Environ 13 % des patients sous TAR de deuxième ligne avaient une charge virale non supprimée de plus de 1000 copies d'ARN/ml indiquant un échec virologique. Ainsi, les facteurs critiques tels qu'une mauvaise adhésion au TARV et la résistance aux médicaments contribuant principalement à l'échec virologique doivent être systématiquement vérifiés. Mots clés: suppression, TAR, résistance, virologique, échec, Nigeria

Le suivi thérapeutique des patients infectés par le VIH nécessite la détection des virus résistants aux antirétroviraux. Les tests de génotypage basés sur le séquençage nécessitant une certaine expertise, des techniques plus simples, basées sur le principe d'hybridation à des sondes oligonucléotidiques, ont été développées (LiPA, Puces à ADN, PCR différentielle. . . ). Nous avons montré, que pour le LiPA, le polymorphisme important du VIH au voisinage des codons d'intérêt entraîne un pourcentage conséquent de non hybridation. De plus, le LiPA appartient à une catégorie de tests permettant seulement l'analyse de quelques codons. Or, le nombre de drogues utilisées a considérablement augmenté ces dernières années avec, pour conséquence, une multiplication des mutations et des mécanismes de résistance (insertions, délétions, réactions croisées. . . ). Il est donc actuellement nécessaire de séquencer la totalité du gène de la protéase et une partie du gène de la RT. Deux types de tests permettent l'analyse d'une séquence entière : le séquençage par la méthode classique de Sanger et les puces à ADN. Des kits de diagnostic utilisant des méthodes de séquençages sont aujourd'hui disponibles. Nous avons montré que les kits basés sur l'utilisation du séquençage classique (Trugene, Viroseq) permettent la détection des insertions alors que plusieurs études ont montré que les puces à ADN (PRT 440) ne pouvaient pas détecter ce type de mutations. Toutefois, ces kits de séquençage classique nécessitent quelques améliorations au niveau de leur logiciel d'analyse pour une meilleure signalisation des insertions. Actuellement, le séquençage par la méthode de Sanger reste la technique de référence pour la détection des mutations de résistance. Nous avons montré que l'analyse du virus plasmatique permettait de détecter plus de mutations que l'analyse du virus proviral. Cependant, chez les patients ayant un passé thérapeutique long et chaotique, le séquençage de l' ADN proviral pourrait être envisagé afin de déterminer toutes les mutations de résistance archivées dans les lymphocytes mais pas forcement présentes dans le virus plasmatique. Enfin, l'utilisation d'une technique« maison » de séquençage nous a permis: - de séquencer les sites de clivage et de mettre en évidence une forte association entre la mutation A431V du site P7 / P1 et la mutation M46I de la protéase, - de réaliser une étude épidémiologique au Burundi, montrant que le sous-type C est majoritairement présent dans ce pays.

Enterobacter aerogenes est devenu, ces dernières années, un pathogène incontournable du milieu hospitalier. Le caractère clonal des isolats et leur phénotype de résistance élevé aux antibiotiques représentent les deux caractéristiques principales de son épidémiologie. A côté des mécanismes d'inactivation enzymatique efficaces, sont maintenant décrits des processus générant une imperméabilité membranaire et un efflux actif. De telles souches sont considérées comme présentant un phénotype de " Multidrug-Resistance " (MDR). Face à cette situation, il est indispensable de caractériser les systèmes génétiques contrôlant l'apparition de la MDR. Notre travail a montré que E. Aerogenes regroupe sur son génome deux systèmes de régulation de la MDR : l'opéron marRAB et le gène ramA. Les deux régulateurs RamA et MarA permettent à E. Aerogenes de contrôler finement les systèmes d'échange avec le milieu extérieur et de répondre efficacement contre les agressions. Ces régulateurs peuvent fonctionner aussi bien indépendamment que simultanément et l'expression de l'un régule celle de l'autre. MarA et RamA entraînent, chez E. Aerogenes, une régulation négative des porines, voie d'entrée des antibiotiques hydrophiles, créant une imperméabilité membranaire, et l'expression de la pompe d'efflux AcrAB-TolC permettant d'éjecter hors de la cellule les composés intracellulaires toxiques. L'imperméabilité membranaire est également responsable de la résistance à l'imipénème et nous avons montré, in vitro, qu'un traitement par cet antibiotique active l'opéron marRAB. Les isolats MDR présentent ainsi des modulations de perméabilité de l'enveloppe bactérienne jouant un rôle important dans la résistance aux antibiotiques ; ces modifications relèvent d'un schéma général de régulation
Enterobacter aerogenes is a nosocomial pathogen associated with high mortality rate in intensive care units. Besides the presence of an extended b-lactamase (ESBL) and a chromosomal derepressed cephalosporinase, 5% of clinical isolats show a MultiDrug Resistant (MDR) phenotype. Our work showed that E aerogenes gathers on its genome two systems of MDR regulation: the marRAB and the ramA gene. The two regulators RamA and MarA allow E aerogenes to control exchanges with the external medium and to answer effectively against aggressions. MarA and RamA are able to negatively down-regulate porin expression and to activate the expression of the AcrAB-TolC efflux pump

La résistance aux antibiotiques est une menace non négligeable pour la santé publique. Ces résistances peuvent être portées par différents supports dont les îlots génomiques. Il a été démontré que les îlots génomiques Salmonella Genomic Island 1 (SGI1) et Proteus Genomic Island 1 (PGI1) sont des acteurs importants de la multirésistance aux antibiotiques. Quelques variants de SGI1 et PGI1 ont déjà été décrits au sein de l’espèce P. mirabilis. Dans ce contexte, ce projet de thèse se proposait d’approfondir notre connaissance de la situation épidémiologique de la diffusion de SGI1 et PGI1 chez P. mirabilis chez l’homme et l’animal en France, en ce qui concerne la diversité des isolats, mais aussi celles des variants de SGI1/PGI1. En parallèle, une autre volonté a été d’identifier d’autres facteurs et acteurs permettant l’acquisition de gènes de résistances d’intérêt au sein des Morganellaceae (β-Lactamases à Spectre Etendu, céphalosporinase AmpC, Plasmid-mediated Quinolone Resistance...). Au final, cette étude a permis en outre de révéler les premiers cas de SGI1 et PGI1 chez P. mirabilis chez l’animal en France. De nouveaux variants de SGI1 ont également été mis en évidence. Et pour la première fois, SGI1 a été décrit chez M. morganii, une autre espèce d’entérobactérie
The antibiotic resistance is a major treat for public health. These resistances can be hold by different element and genomic islands are one of them. Salmonella Genomic Island 1 (SGI1) and Proteus Genomic Island 1 (PGI1) are important genetic elements for the antibiotic resistance. A few SGI1 and PGI1 variants were already described in P. mirabilis. It is in this context that this thesis project aimed to improve our knowledge about the epidemiological spread of SGI1 and PGI1 in P. mirabilis in humans but also in animals in France (diversity of isolates and SGI1/PGI1 variants). Moreover, another wish was to identify other factors and actors for the acquisition of antibiotic resistance in the Morganellaceae tribe (Extended-Spectrum β-Lactamases, AmpC cephalosporinase, Plasmid-mediated Quinolone Resistance…). Finally, this study revealed the first cases of SGI1 and PGI1 in P. mirabilis in animals in France. New SGI1 variants were also described. And for the very first time, SGI1 was found in M. morganii, another entrobacterial species

Dans un modèle cellulaire de résistance multiple, la nature de l'interaction médicament/membrane reste un paramètre encore mal décrit bien qu'important pour définir l'incorporation intracellulaire du xénobiotique. Les objectifs ont été de développer des méthodes spectroscopiques permettant une analyse de l'intégration de la mitoxantrone (MTX) dans un modèle de résistance cellulaire de type BCRP/MXR. D'une part, la spectroscopie SERS (Surface-Enhanced Raman Scattering) implique un colloïde d'argent extracellulaire permettant une exaltation Raman de molécules en situation membranaire. D'autre part, le transfert d'énergie d'une sonde membranaire fluorescente vers MTX permet de déterminer des paramètres d'intégration du médicament dans les deux feuillets de la membrane. Une exaltation SERS de MTX est observée lorsque le rayonnement laser est focalisé sur un grain de colloïde en contact avec la membrane de cellules traitées par le médicament. Ces résultats sont interprétés comme une intégration partielle de MTX sur la membrane plasmique. De plus, une intensité SERS de MTX trois fois plus importante est observée chez les cellules résistantes, ce qui est assimilée à une accessibilité plus importante de MTX par le colloïde. Par transfert d'énergie de fluorescence, une quantité équivalente de molécules de MTX intégrées dans la membrane entre les deux types cellulaires a été déterminée. En conclusion, la spectroscopie SERS et le transfert d'énergie de fluorescence permettent une analyse sélective de molécules anticancéreuses à l'échelle de la membrane plasmique. Des modifications de la structure membranaire pourraient être à l'origine des différences d'intégration de MTX
The nature of drug/membrane interaction remains in the multi-drug resistance an elusive parameter, though important to define the intracellular uptake of xenobiotic. The aims of this work were to develop different spectroscopic methods in order to analyse the insertion mode of mitoxantrone (MTX) in a resistant BCRP/MXR cell model. On the one hand, SERS spectroscopy (Surface-Enhanced Raman Scattering) implicating an extracellular silver colloid to enhance Raman scattering of molecules at the surface of the plasma membrane was used. On the other hand, energy transfer from a membrane fluorescent probe to MTX allowed to determine insertion parameters of MTX in the two leaflets of the membrane. Raman scattering of MTX was observed after focusing the laser on a colloid nanoparticle in contact with the membrane of MTX-treated cells. These results were interpreted as a partial insertion of MTX on the plasma membrane. Moreover, a three-fold SERS intensity increase of MTX was observed for resistant cells, which was explained by a higher xenobiotic accessibility to the colloid. The comparison of insertion time-course investigated by fluorescence energy transfer revealed a similar quantity of membrane-inserted MTX molecules between two cell lines. In conclusion, SERS spectroscopy and fluorescence energy transfer allowed to analyse selectively anticancer molecules at the level of the plasma membrane. Changes of the membrane structure could be at the origin of incorporation differences of MTX

L'@apparition de cellules tumorales résistantes aux agents anticancéreux demeure l'un des obstacles majeurs aux traitements chimiothérapeutiques des cancers. Parmi les mécanismes de résistance des cellules cancéreuses, la "multidrug resistance" (MDR) est sans nul doute le mieux connu. Ce phénotype MDR est en grande partie dû à la surexpression de la glycoprotéine , responsable de l’efflux de médicaments. Dans le but d’inhiber l’activité de cette glycoprotéine, nous avons développé, une stratégie d’immunothérapie anti-MDR. Des auto-anticorps spécifiques des boucles extracellulaires 1, 2 et 4 de la glycoprotéine P murine ont été induits chez la souris après immunisation avec des peptides synthétiques palmitoylés reconstitués dans des liposomes. Les animaux immunisés, ne présentent aucun symptôme d’auto-immunité 18 mois après l'immunisation, répondent mieux à la chimiothérapie à base de doxorubicine et de vinblastine, et ont une survie augmentée de 77%. In vitro, les sérums de souris immunisées sont capables de réduire la résistance à la chimiothérapie. Nous avons analysé par RT-PCR l’expression des gènes : mdr1 (ou mdr1a), mdr3 (ou mdr1b), tous deux actifs dans le transport d’agents anticancéreux, sur les cellules murines résistantes à la doxorubicine (B16 R, P388 R, L1210 R, LM(tk-) R) et dans les organes de souris immunisées. Les sérums de souris immunisées sont capables de réduire la résistance à la vinblastine et la doxorubicine en fonction de l'expression des gènes impliqués. Dans le souci de lutter contre la résistance aux agents anticancéreux, nous avons également développé une approche utilisant le trans-resvératrol sur des lignées cellulaires leucémiques (P388R, L1210R), fibroblastiques (LM(tk-)R) et démontré son pouvoir antiprolifératif et pro-apoptotique. Ces cellules cultivées en présence de doxorubicine avec des doses non toxiques de trans-resvératrol, retrouvent une sensibilité vis-à-vis de l’agent anticancéreux. De plus, nous avons constaté une accumulation de doxorubicine dans les cellules leucémiques ainsi qu’une modulation de l’expression du gène mdr1. Ces résultats montrent que ces deux approches pourraient être utiles dans une association aux traitements chimiothérapeutiques traditionnels pour lutter contre le mécanisme de résistance qui apparaît fréquemment dans le cancer
@Among the mechanisms by which cancer cells evade chemotherapy, multidrug resistance (MDR) is certainly the best known. Overproduction of a transmembrane glycoprotein, called P-glycoprotein, was found to correlate with the development of resistance phenotypes to number of unrelated drug and acts as an efflux pump. The aim of this study was to inhibit glycoprotein P activity. We developed an immunotherapy strategy anti-MDR. Specific auto-antibodies to extracellular loops 1, 2 and 4 of murine P-glycoprotein were elicited in mice using palmitoylated synthetic peptides reconstituted in liposomes, with or without Lipid A, and resuspended in alum. The immune response against lipopeptides shows an increase of IgG anti-mpp2 at the third immunization Animals did not show any auto-immune symptoms or induced toxicity up to 18 months after the immunization, answer better of chemotherapy treatments with doxorubicin and vinblastine, an increase of 77% in the survival half time is observed. In vitro, immunized mice sera are able to decrease resistance to chemotherapy. In mice, three mdr isoforms expressed in some normal tissues are known. We analysed by RT-PCR the expression of mdr1, mdr2 and mdr3 in several organs of B6D2F1 mice after vaccination and murine cells. Culture of murine cell lines resistant to doxorubicin (B16R, P388R, L1210R, LM(tk-)R) in the presence of elicited antibodies led to decrease cellular resistance to Vinblastine and Doxorubicin according to mdr genes expression. To reverse the drug resistance, we used trans-resveratrol (trans-3, 4', 5-trihydroxystilbene), on leukemia cells (L1210R, P388R), fibroblastic cells LM(tk-)R. When cells are treated with doxorubicin and sublethal concentrations of trans-resveratrol, the cells became sensitive to doxorubicin. We reported here that trans-resveratrol induced doxorubicin accumulation in leukemic cells as well as modulation of mdr1 gene expression. These data suggest that both, immunotherapy and trans-resveratrol have a strong potential to be used in combination with conventional chemotherapeutic drugs to reverse MDR in cancer cells

La tuberculose humaine demeure un problème majeur de santé publique. L'un des aspects les plus alarmants concernant la tuberculose, est l'émergence et la dissémination de souches M. Tuberculosis résistantes aux médicaments, en particulier les souches multi-résistantes (MDR) qui sont de graves menaces pour la lutte contre la tuberculose. La détection précoce de la résistance aux médicaments de M. Tuberculosis dans les isolats cliniques est essentielle pour un traitement approprié afin d'éviter la propagation des souches résistantes. La première partie de ce travail a comparé des tests moléculaires pour la détection de la résistance à la rifampicine (RIF) et à l'isoniazide (INH) par rapport au test conventionnel de sensibilité aux médicaments et le séquençage. Le test Génotype MTBDRplus semble être un outil fiable pour la détection d'INH et de RIF résistance dans des souches. En outre, ce travail a également confirmé que le spoligotype T2 est commun parmi les isolats MDR circulant en République Centrafricaine (RCA). Dans la deuxième partie, nous avons montré que contrairement à la souche de référence (H37Rv), les souches T2 induisent une réponse inflammatoire moins importante et nous avons observé que ces souches semblent toutes provenir d'un ancêtre commun. Enfin, nous avons évalué l'aspiration à l'aiguille fine (FNA) dans le diagnostic des adénopathies tuberculeuses chez les enfants. Cet outil a permis la détection de 67,2% des cas de tuberculose. Il s'agit d'une technique simple et non invasive capable de fournir des échantillons pour la confirmation bactériologique ou moléculaire de la tuberculose
Human tuberculosis remains a major public health problem. One of the most alarming trends concerning tuberculosis is the emergence and spread of drug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis, especially multidrug-resistant (MDR) strains, which are serious threats to the control of tuberculosis. Early detection of M. Tuberculosis drug resistance in clinical isolates is crucial for appropriate treatment to prevent the development of further résistance and the spread of resistant strains. The first part of our study compare molecular tests for the detection of rifampin (RIF) and isoniazid (INH) resistant strains to conventional drug susceptibility testing (DST) and sequencing. Génotype MTBDRplus testing seems to be reliable tool for the detection of INH and RIF résistance in various strains. In addition, our work has also confirmed that T2 spoligotype is common among MDR isolates circulating in Central African Republic (CAR). Second, we studied the innate immune response by infecting in vitro human macrophages with T2 and other M. Tuberculosis strains. Our results show that, compared to reference strains (H37Rv), T2 strains induce a less inflammatory response. Sequencing identified SNPs carried by ail T2 strains suggesting a phylogenetic link. These preliminary results give an important information on chacteristics and pathogenicity of MDR strains in CAR. Finally, we assessed Fine-needle aspiration (FNA) in the diagnosis of tuberculous adenopathy in children. FNA allowed detection of 67. 2»% of TB cases. This tool is simple, cost-effective and non-invasive that provides samples that could be used for bacteriological or molecular confirmation of TB

Le genre Acimtobacter groupe des bacilles à coloration de Gram négatif, aérobie strict et oxydase négatif responsable principalement d'infections nosocomiales sévères chez des patients immunodéprimés. La récente émergence d'acquisition de résistances aux antibiotiques notamment aux p-lactamines au sein de ce genre complique énormément la gestion des infections qui lui sont liées. Ce travail a, tout d'abord, abordé la caractérisation structurale et fonctionnelle des îlots de résistance génomiques de type AbaR chez A. Baumannii. Une structure conservée de type transposon de classe II de ces îlots de type AbaR dont un module de transposition complexe a été mise en évidence. Cette partie du travail a permis une meilleure compréhension de la genèse de cette structure génétique. L'analyse des mécanismes de résistances émergents aux ß-lactamines chez A. Baumannii a permis d'identifier les propriétés biochimiques de même que les mécanismes génétiques d'acquisition de la première p-lactamase à spectre étendue de type GES (GES-14) hydrolysant de toutes les ß-lactamines. L'étude de son environnement génétique a mis en évidence que les gènes blaNDM ₋₁/₋₂ sont mobilisé par une structure de type transposon (Tn125). Ce transposon de 10,099 pb est encadré par deux copies de la séquence d'insertion lSAba125. Afin de déterminer si l'émergence de ces gènes chez A. Baumannii était la conséquence de la diffusion d'un clone, d'un plasmide ou d'une structure génétique, nous avons étudié une collection de souches possédant le gène blaNDM ₋₁/₋₂ d'origine géographique variée. Dans le cadre de la recherche de progéniteur de p-lactamase, quatre nouvelles carbapénèmases de classe D intrinsèque aux espèces Acinetobacter calcoaceticus, Acinetohacter haemolyticus, Acinetobacter johnsonii et Acinetobacter bereziniae. De manière générale, ce travail contribue à préciser les mécanismes d'acquisition de la résistance aux antibiotiques chez un pathogène humain d'importance grandissante
The genus Acinetobacter corresponds to Gram-negative aerobes responsible for severe nosocomial infections in immunocompromised patient. The recent emergence of acquisition of antibiotic résistance in this species greatly complicates the management of infections associated with it. The objectives of our work have included on the one hand in a study of structural and functional of AbaR-type genomic islands in A. Baumannii. A conserved structure of AbaR-type genomic islands has been demonstrated including a complex transposition module. On the other hand, our job consisted in to analyze the emerging mechanisms of résistance to ß-lactams in A. Baumannii. In this context, we determined the biochemical properties and mechanisms of acquisition of a extended-spectrum P-lactamase (ESBL) GES-14 with carbapenemase properties showing hydrolysis of all ß-lactam antibiotics and a peculiar genetic environment leading to resistance to carbapenems. This was the first report of a p-lactamase able to hydrolyze significantly all- ß-lactams. The dissemination of the worrisome NDM-type gene in A. Baumannii has been evidenced. This transposon of 10,099 bp in size was bracketed by two copies of lSAba125. In order to determine if the emergence of the blaNDM ₋₁/₋₂ genes was linked to a clone, a plasmid or a genetic structure, a collection of NDM-producing A. Baumannii from wolrdwide origin was studied. Four new class D carbapenemases intrinsic to Acinetobacter calcoaceticus, Acinetobacter haemolytiens, Acinetobacter johnsonii and Acinetobacter bereziniae were characterized. In the latest species, a carbapenem-resistant isolate was identified. The résistance to carbapenems was mediated by mutations in promoter sequences leading to overexpression. This finding was verified by qRT-PCR. Overall, this work helps to clarify the mechanisms of acquisition of antibiotic resistances in a increasingly important pathogen

L'apparition d'une résistance aux agents anticancéreux est toujours redoutée en clinique, en particulier chez les patients atteints d'une tumeur solide disséminée. Plusieurs mécanismes sont mis en cause, un des plus importants paraît être celui qui est sous la dépendance d'une glycoprotéine membranaire (P-gp) agissant vis-à-vis de nombreux anticancéreux comme une pompe à efflux ATP-dépendante, non spécifique. Les principales approches explorées à ce jour pour circonvenir cette résistance ont surtout porté sur la mise au point d'inhibiteurs compétitifs ou non de la P-gp. Malgré le grand nombre de molécules synthétisées, très peu sont arrivées au stade d'essais cliniques et les résultats peuvent être encore considérés comme préliminaires. Par ailleurs, il a été démontré in vitro que les anticorps dirigés contre la P-gp pouvaient diminuer la résistance des cellules à la chimiothérapie. Nos travaux démontrent qu'il est possible dans certaines conditions d'induire la formation d'auto-anticorps dirigés contre la P-gp murine. Des épitopes correspondant aux boucles extracellulaires 1, 2 et 4 de la P-gp obtenus par synthèse peptidique et incorporés dans des liposomes ont été injectés chez la souris B6D2F1 permettant d'obtenir des réponses immunitaires. Ces anticorps ont démontré une spécificité aux épitopes extracellulaires de la P-gp et une activité inhibitrice de la pompe à efflux. Par ailleurs, cette préparation vaccinale associée à une chimiothérapie améliore la survie des souris ayant reçu des cellules cancéreuses P388 résistantes à la doxorubicine. Ce projet concernant le développement d'une stratégie de lutte contre la multidrogue résistance nous donne des résultats encourageants. Les retombées dans le domaine du cancer vont nous permettre : -d'optimiser la réponse immunitaire spécifique anti P-gp chez la souris et compte tenu de la similarité de structure de la P-gp murine et humaine, -de pouvoir envisager un développement de stratégie vaccinale applicable à l'homme
@Resistance of tumor cells to cytotoxic drugs is a major impediment to cancer chemotherapy. Multidrug resistance in human cells determined by the mdr1 gene encoding a membrane glycoprotein called P-glycoprotein found to correlate with the development of resistance phenotypes to a number of drugd (anthracyclines, epipodophyllotoxins, vinca alkaloids, actinomycin D, taxoid derivatives). Complete primary structure of human P-gycoprotein has been determined from the cDNA sequence. The protein 1280 amino acids long consists of two homologous halves, each comprising six putative transmembrane domains, and one nucleotide binding site which acts as an efflux pump on compounds which have neither common chemical structure nor common mechanism of pharmacological action. The murine mdr1 cDNA encodes a 1276 amino acids protein with a structure similar to its human homologue and sequences are 80% homologous with the strongest homology occurring in the intracytoplasmic part of the protien, whereas extracellular sequences differ significantly. Specific auto antibodies to extracellular loops 1, 2 and 4 of murine mdr1 P-gp were elicited in mice using palmitoylated synthetic peptides reconstituted in liposomes. The immune response against lipopeptides shows an increase of IgG anti-mpp1, anti-mpp2 and anti-mpp4 at the third immuzation. Following i. P inoculation of monocytic P388 resistant cells and chemotherapy, in vivo a 77% increase of the survival time in the immunized group (mean time survival of 39 days / 22 days in control group) was observed. Culture of resistant cell lines in the presence of elicited antibodies led to decrease cellular resistance to vinblastin and doxorubicin in monocytic P388R cells (expressing mdr1) and leukemic L1210R cells (expressing mdr1 and mdr3) but not in fibroblastic LM(tk-)R cells and in melanocytic B16R cells. This “vaccine” approach might have potentiel clinical application in resistance typically due to mdr1 expression

Le cerveau est isolé du reste de l'organisme par des barrières cellulaires. Ces barrières, qui permettent le maintien de l'homéostasie cérébrale, expriment de nombreux transporteurs dont ceux de la superfamille des protéines ABC impliquées dans les phénotypes de multirésistance médicamenteuse. Nous avons étudié l'expression et la régulation de quatre transporteurs ABC (P-gp, Mrp1, Mrp5 et Mxr) dans le cerveau de rongeur. Par immunohistochimie, nous avons mis en évidence la P-gp, la Mrp1 et la Mrp5 sur différents types cellulaires cérébraux tels que les astrocytes. Dans les cultures primaires d'astrocytes de rat, nous avons mis en évidence une induction temps et concentration dépendants de la P-gp par la doxorubicine mais pas de la Mrp1 ni de la Mrp5. Par RT-PCR, nous avons mis en évidence un enrichissement des capillaires cérébraux en ARNm Abcg2 ainsi qu'une augmentation des ARNm Abcg2 chez les souris mdr1a(-/-)
Cellular barriers separate the brain from the rest of the body and preserve hydro-ionic balance and volume. These barriers express many transporters including ABC protein implicated in multidrug resistance. We have studied the expression and regulation of four ABC transporters (P-gp, Mrp1, Mrp5 and Mxr) in rodent brain. By immunohistochemistry, we showed the presence of P-gp, Mrp1 and Mrp5 on different cell types including astrocytes. In rat astrocyte primary cultures, we showed an up-regulation, time and concentration dependant, of P-gp by doxorubicine but not Mrp1 and Mrp5. By RT-PCR, we showed an Abcg2 mRNA enrichment of brain capillaries and an up-regulation of Abcg2 mRNA in mdr1a(-/-) mice