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Dissertations / Theses on the topic 'Murino'
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Pereira, Natalia Rubio Claret. "Eficácia terapêutica de nanocápsulas de metotrexato em glioblastoma murino: estudos in vivo e in vitro." Universidade de São Paulo, 2015. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9141/tde-02062015-134406/.
Full textAbstract:
O glioblastoma multiforme (GBM) é uma doença grave e sem tratamento eficaz, especialmente pelos agentes terapêuticos disponíveis causarem reações adversas importantes nas doses terapêuticas. O metotrexato (MTX) é um fármaco citotóxico utilizado para tratar diversas neoplasias, no entanto, sua utilização é limitada pela baixa biodisponibilidade e reações adversas. A nanotecnologia tem sido utilizada para aumentar a eficácia dos medicamentos antitumorais, com o intuito de direcioná-los para o sítio de ação e reduzir os efeitos adversos. Nesse sentido, realizamos ensaios com nanocápsulas lipídicas de MTX (LNC MTX) para avaliar os mecanismos de captação em linhagens celulares de glioblastoma e micróglia, além investigar a eficácia terapêutica da LNC MTX em ensaios in vitro e in vivo. Inicialmente, ensaios de microscopia de fluorescência, empregando bloqueadores farmacológicos específicos para transportes de membrana, mostraram que as LNC MTX marcadas com Rodamina B penetram em células tumorais GL261 por endocitose, dependente de caveolinas, e em células de micróglia da linhagem BV2 por fagocitose e macropinocitose. Os tratamentos com LNC MTX ou solução de MTX (em concentrações correspondentes) em células GL261 inibiram a proliferação; aumentaram a fragmentação de DNA, mas, somente as LNC induziram a morte celular por necrose e diminuíram o número de células na fase G1/G0 do ciclo celular. Na linhagem celular BV2, os tratamentos com LNC MTX ou solução de MTX inibiram a proliferação, reduziram a quantidade de células na fase G1/G0 do ciclo celular, aumentaram a fragmentação de DNA e induziram morte celular por apoptose e apoptose tardia. Os ensaios in vivo de microscopia intravital mostraram que a LNC MTX atravessa a barreira Hematoencefálica (BHE) de camundongos fêmea C57Bl/6 após administração intravenosa ou oral, sem danificar a sua estrutura. O tamanho do glioblastoma in vivo foi reduzido em animais tratados com LNC MTX por via oral em relação aos animais tratados com salina. Esta redução não foi detectada em animais tratados com solução de MTX. Em conjunto, os dados obtidos mostram que a LNC MTX penetram em células de glioma e da glia e causam toxicidade, atravessam a BHE in vivo e sugerem que a nanoencapsulação do MTX pode ser uma estratégia importante para o tratamento do glioblastoma.Glioblastoma multiforme (GBM) is a serious disease and no effective treatment is availabe, especially because the drugs cause significant adverse reactions in therapeutic doses. Methotrexate (MTX) is a cytotoxic drug used to treat many neoplasms, however, their use is limited by the low bioavailability and adverse reactions. Nanotechnology has been used to increase the effectiveness of antitumor drugs in order to direct them to the site of action and to reduce adverse effects. Accordingly, we carried out an experimental approach with MTX lipid nanocapsules (MTX LNC) to evaluate the uptake mechanisms in glioblastoma and microglia cell lines, and the therapeutic efficacy of MTX LNC in vitro and in vivo systems. Initially, fluorescence microscopy assays employing specific pharmacological blockers for membrane transport showed that the MTX LNC stained with Rhodamine B penetrated into GL261 tumor cells by caveolae-mediated endocytosis, and in BV2 microglia cells by phagocytosis and macropinocytosis. Treatment with MTX solution or MTX LNC (at corresponding concentrations) on GL261 cells inhibited the proliferation; increased DNA fragmentation, but only the LNC induced cell death by necrosis and decreased the number of cells in the G1/G0 phase of the cell cycle. In BV2 cells, treatment with MTX solution or MTX LNC inhibited proliferation, reduced number of cells in the G1/G0 phase of the cell cycle, increased DNA fragmentation and cell death, induced by apoptosis and late apoptosis. Intravital microscopy study showed that the MTX LNC across the Blood-Brain Barrier (BBB) of C57BL/6 female mice after intravenous or oral administrations, without damaging its structure. The area of glioblastoma in vivo was reduced in animals oral treated with MTX LNC comparing to saline treated mice. This reduction was not observed in animals treated with MTX solution. Together, the data herein obtained show that MTX LNC penetrate the cell membrane and cause cell toxicity on glioma and neurons lineage, cross the BBB and suggest that the nanoencapsulation of MTX can be an important strategy for the treatment of glioblastoma.
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Silva, James Fernando Malta da. "Transporte de água em células de melanona murino S91 submetidas a condições anisosmóticas." Universidade de São Paulo, 2007. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/41/41135/tde-29082007-092546/.
Full textAbstract:
Uma das principais necessidades da célula é a regulação do seu ambiente interno. Aparte da considerável importância teórica, o transporte de água é de importância prática numa ampla gama de processos, desde a proteção de células na preservação criogênica até os efeitos de certos hormônios em alguns tecidos. Virtualmente todas as células são submetidas a transições osmóticas durante o seu período de vida, uma vez que tanto o metabolismo intracelular quanto o transporte por membranas produzem flutuações nas concentrações dos solutos osmoticamente ativos. A regulação de volume celular é um fenômeno ubíquo e permite, às células, manter o seu volume normal. Células submetidas a choques anisosmóticos agudos sofrem rápidas alterações de volume (dependentes do gradiente osmótico e da permeabilidade da membrana à água e osmólitos) podendo ou não ser seguidas de lentas alterações regulatórias de volume. Assim, o objetivo do presente trabalho visou esclarecer alguns aspectos do transporte de água em células de melanoma murino S91 submetidas a condições anisosmóticas. Células de melanoma murino S91, foram mantidas em meio de cultura F12 HAM (290 mOsm.kgH2O-1). As medidas morfométricas das mudanças relativas de volume foram realizadas usando-se um sistema de aquisição e análise de imagens (Image Pro-Lite, Media Cybernetics). As células foram expostas tanto a choques hiposmóticos agudos (190 mOsm.kgH2O-1) como a choques hiperosmóticos agudos (350 mOsm.kgH2O-1) em diferentes temperaturas (de 17 a 37 oC) e em diferentes doses (de 0,001 a 1000 µM) de HgCl2, um bloqueador de aquaporinas (AQP). Os resultados sugerem que: (i) o tempo de regulação de volume em células de melanoma murino S91 é dependente da temperatura; (ii) o fluxo osmótico de água apresenta valores de Energia de Ativação compatíveis com aqueles propostos para o trânsito de água através de aquaporinas (Ea < 6 kcal.mol-1); (iii) o HgCl2 afeta de forma dose dependente as respostas osmóticas em células de melanoma murino S91 e sugerem a presença de mais de um tipo de AQP. Nestas condições as concentrações necessárias para reduzir ao máximo a permeabilidade osmótica à água estão localizadas na faixa de 0,1-1,0 µM HgCl2.One of the major needs of living cells is the regulation of their internal environment. Apart from being of considerable theoretical importance, the transport of water is of practical importance in a broad range of process, from the protection of cells undergoing cryogenic preservation to the effects of certain hormones in some tissues. Virtually all the cells are submitted the osmotic transitions during their period of life, because both intracellular metabolism and transmembrane transport produce fluctuations in concentrations of osmolytes. The regulation of cellular volume is a phenomenon ubiquitous and allows, to the cells, to keep their normal volume. Cells subjected to acute anisosmotic shocks suffer from fast alterations in volume (depending on the osmotic gradient and on the permeability of the membrane to the water and osmotically active substances), and followed or not by a slow volume regulation response. Thus, the present work aims to clarify some aspects of the water transport in murine melanoma S91 cells subjected to anisosmotic conditions. S91 murine melanoma cells were grown in F12 HAM medium (290 mOsm.kgH2O-1). Morphometric measurements of relative changes in cell volume were performed using a video microscopy system and a PC software (Image Pro-Lite, Media Cybernetics). The experimental cells were exposed either to acute hyposmotic shocks (190 mOsm.kgH2O-1) or to acute hyperosmotic shocks (350 mOsm.kgH2O-1), in different temperatures (ranging from 17 to 37 oC) and in the presence of HgCl2 (from 0,001 to 1000 µM), an aquaporin blocker. The results of the present study indicate that: (i) the time of volume regulation in S91 murine melanoma cells is dependent on temperature; (ii) the values of osmotic water flow are compatible with activation energy through aquaporins (E < 6 kcal.mol-1) and (iii) HgCl2 treatments affect osmotic behavior of S91 murine melanoma cells in a dose-response manner and also suggest the presence of more than one type of aquaporin. Minimum osmotic water permeabilities were observed in a range of µM HgCl2 treatments.
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Machado, Alexandre Paulo [UNIFESP]. "Cromoblastomicose: à procura do modelo experimental murino." Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008. http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9283.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2008-12-29Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Mato Grosso (FAPEMAT)
A ausência de um modelo animal adequado de infecção crônica para estudo da cromoblastomicose experimental e o desconhecimento sobre as formas fúngicas infectantes de Fonsecaea pedrosoi estimularam a realização da presente investigação. Inicialmente, diferentes formas micelianas de F. pedrosoi, hifas, conídios e células conidiogênicas, foram testadas quanto ao seu potencial infectivo em camundongos BALB/c. Cada estrutura demonstrou capacidade distinta de sobrevida frente à resposta tecidual do hospedeiro. A transformação in vivo do inóculo fúngico para corpos escleróticos somente foi verificada nas infecções com células conidiogênicas. Neutrófilos parecem ser importantes no controle de F. pedrosoi, possivelmente pela degranulação e liberação de produtos tóxicos, enquanto macrófagos podem ser mais relevantes nos processos de clearance. A inoculação do fungo em único sítio produziu resposta inflamatória com formação de abscesso rico em fagócitos, ocorrendo eliminação da infecção em até dois meses. No entanto, coestímulo antigênico em dois sítios distintos, tais como pata s.c. e peritônio, respectivamente, com células fúngicas viáveis e inviáveis, nas diferentes linhagens de camundongos e animais knockouts, provocou a formação de lesões multifocais ricas em histiócitos e infecção persistente por F. pedrosoi, ocorrendo cura clínica e micológica desses animais, em geral, após 4 meses. Nos animais coestimulados, quando o foco primário (abscesso rico em neutrófilos) desaparecia, a migração de neutrófilos se intensificava para o sítio secundário (lesões focais ativas), culminando com a eliminação fúngica. Tais dados corroboraram para hipótese de atuação individualizada da resposta imune em focos múltiplos, porém com resolução, sistemicamente, coordenada das lesões. Após imunização das mucosas e infecção da pata com células de F. pedrosoi também foi verificada maior duração das lesões infecciosas, indicando que a apresentação antigênica de sítios distintos poderia estar envolvida com mecanismos tolerogênicos aos antígenos fúngicos. Camundongos CD4 KO que receberam duplo-estímulo, embora manifestassem agravamento das lesões nos períodos iniciais pós-inoculação fúngica, controlaram a infecção mais tardiamente. Progressão exarcebada e agravamento da infecção foram verificados em animais KO CD8 coestimulados. Camundongos co-estimulados apresentaram lesões com perfil anatomopatológico similar, no entanto, os animais IL-10 KO não desenvolveram infecção prolongada após coestimulação. Animais XID coestimulados desenvolveram infecção crônica, o que demonstrava a possibilidade das células B1 atuarem antagonicamente à resposta imunossupressora. Em outro estudo, selecionamos uma cepa bacteriana com propriedades antagônicas aos fungos filamentosos, identificada como B. subtilis, para ser utilizada em ensaios de interação com a cepa de F. pedrosoi. Em cocultivos, verificamos alterações celulares, como modificação das hifas para formas artroconidiadas, produção de clamidoconídios terminais e indução da síntese de melanina fúngica. Tais células cocultivadas foram inoculadas em camundongos, sendo os clamidoconídios terminais mais resistentes in vivo a ação dos fagócitos. No último experimento, utilizamos culturas axênicas de F. pedrosoi, mantidos em cultivos por seis meses. Formas fúngicas variadas, tais como células arredondadas, clamidoconídios terminais e intercalares, com parede celular composta por múltiplas camadas, foram analisadas por microscopia óptica e eletrônica. Essas células fúngicas foram inoculadas em camundongos BALB/c, produzindo infecção crônica, principalmente em grupo de animais infectados em dois sítios. Por fim, nossos achados evidenciaram que o desenvolvimento de um modelo murino adequado para cromoblastomicose depende de fatores ligados ao parasito e hospedeiro. Células fúngicas ou formas, potencialmente, infectantes devem ser utilizadas de modo preferencial no desenvolvimento dos modelos experimentais, devendo os mecanismos de imunossupressão, como a coestimulação antigênica, ser empregados como “ferramenta auxiliar” para ampliar as chances de sucesso na obtenção de lesões crônicas em animais hígidos.
This study was prompted by the lack of a satisfactory chronic infection animal model for studies of experimental chromoblastomycosis and the fact that very little is known about the infective fungal forms of Fonsecaea pedrosoi. First, we investigated the infective potential of different mycelial forms of F. pedrosoi, hyphae, conidia and conidiogenous cells, in BALB/c mice. The extent to which each structure could survive the host tissue response was found to vary. In vivo transformation of the fungal inoculum into muriform cells was only observed when the mice were infected with conidiogenous cells. Neutrophils appeared to play an important role in the control of F. pedrosoi, possibly by degranulating and releasing toxic products, while macrophages may be of greater importance in clearance. Fungal inoculation of a single site led to an inflammatory response accompanied by the formation of abscesses rich in phagocytes. The fungus was eliminated efficiently in up to two months. However, antigenic co-stimulation with viable and nonviable fungal cells in two different sites, such as the footpad (s.c.) and peritoneum, led to the formation of multifocal lesions rich in histiocytes and to prolonged F. pedrosoi infection in different strains of mice and knockout animals. Clinical and mycological cure in these animals generally occurred after 4 months. When the primary focus in the co-stimulated animals (an abscess rich in neutrophils) disappeared, neutrophil migration to the secondary site (active multifocal lesions) increased, culminating in the elimination of the fungi. These data support the hypothesis that multifocal infections show individual immune responses, while systemic resolution of lesions is coordinated as a whole. After the mucosae had been immunized and footpads had been infected with F. pedrosoi cells, infectious lesions were found to be more prolonged, indicating that antigen presentation at different sites may be involved in peripheral tolerance mechanisms. Although lesions in co-stimulated CD4 KO mice worsened during the initial period following inoculation with the fungus, the mice were found to control the infection later. Exacerbated inflammatory progression and a worsening of the infection were observed in co-stimulated CD8 KO animals. Lesions in co-stimulated KO mice had a similar pathologic profile, but IL-10 KO animals did not developed prolonged infection after co-stimulation. Co-stimulated xid mice developed chronic infection, showing that B1 cells may have an antagonistic effect on the immunosuppressive response. In another study, we selected the bacterial strain B. subtilis, which has known antagonistic properties against filamentous fungi, for use in interaction assays with the F. pedrosoi strain. The main cell changes observed after co-culture were the transformation of hyphae into arthroconidial forms and the production of terminal chlamydoconidia. The induction of synthesis of fungal melanin was also observed. Fungal cells from co-cultures were inoculated into mice. The chlamydoconidia from these co-cultures were more resistant in vivo to the actions of phagocytes. In the final experiment, we used axenic F. pedrosoi cultures that had been maintained for six months. Various fungal forms, such as round cells and terminal and intercalary chlamydoconidia, with cell walls made up of multiple layers, were found in aged cultures. When inoculated into BALB/c mice, these fungal forms produced chronic infection, primarily in the group of animals infected at two sites. Our findings show that the development of a satisfactory murine model of chromoblastomycosis depends on factors associated with the parasite and the host. Potentially infective fungal cells should preferably be used when developing experimental models, and immunosuppression mechanisms such as antigenic costimulation should be used as “auxiliary tools” to increase the likelihood of obtaining chronic lesions in healthy animals.
CNPq: 14170/2004-9
FAPEMAT: 002.138/2007
TEDE
BV UNIFESP: Teses e dissertações
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Dalan, Camilla de Aguiar. "Estabelecimento de modelo murino para neurotuberculose experimental." Universidade Federal de Sergipe, 2015. https://ri.ufs.br/handle/riufs/3250.
Full textAbstract:
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESThe occurrence of tuberculosis (TB) reaches much of the world's population and the prevalence is accompanied by the World Health Organization (WHO) since 1990. The same organization publishes the overall situation of the disease, as well as the situation of countries where the disease is not under control. Moreover, in recent years the number of people infected with Mycobacterium tuberculosis grows for many reasons, especially those derived from social inequality, AIDS, migration and the emergence of resistant bacilli to drugs. Moreover, the infection in the central nervous system (CNS) the bacillus is one of the most devastating clinical manifestations of the disease. This is called extrapulmonary neurotuberculosis (Ntb) and stands out with a high rate of mortality and morbidity among the extrapulmonary manifestations. The risk factors include age Ntb, coinfection with HIV, malnutrition, children with recent measles, alcoholism, malignant diseases, the use of immunosuppressant‟s in adults and in community prevalence of the disease. However, pathophysiological mechanisms of the disease need to be better understood. In this respect, more research is urgently needed to better understand the disease and to study new vaccines against the disease. Methods: On day 0 C57BL / 6 mice were challenged in the CNS of the lateral ventricle with micro stereotactic injection technique containing virulent Mycobacterium tuberculosis (H37Rv). After 30 days, the brain and lung CFU were analyzed and histology. Results: In this study, we observed large numbers of bacilli in the CNS determined by the CFU. Moreover, histological analysis showed an intense inflammatory activity in the ventricle while the animal was challenged with H37Rv. Thus demonstrating a model infection with H37Rv strain infused into the lateral ventricle of the CNS in male C57BL / 6 mice. In conclusion, this model is the closest to the normal course of disease in humans, as presented granulomatous tissue lesion characteristics therefore an important strategy for studying the pathophysiology well as mediators involved in the progression, and prevention of this disease.
A ocorrência da tuberculose (TB) atinge grande parte da população mundial e essa prevalência é acompanhada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) desde 1990. A mesma organização publica anualmente a situação global da doença, assim como também a situação dos países onde a doença não está sob controle. Além disso, nos últimos anos o número de pessoas infectadas pelo Mycobacterium tuberculosis cresce por muitas razões, principalmente as derivadas de desigualdade social, AIDS, migração e o surgimento de bacilo resistente aos medicamentos. Além disso, a infecção no Sistema Nervoso Central (SNC) pelo bacilo é uma das manifestações clínicas mais devastadoras da doença. Esta forma extrapulmonar é denominada neurotuberculose (Ntb) e se destaca com uma elevada taxa de mortalidade e morbidade entre as manifestações extrapulmonares. Os fatores de risco para a Ntb incluem a idade, a coinfecção com o HIV, desnutrição, crianças com sarampo recente, alcoolismo, doenças malignas, o uso de imunossupressores em adultos e prevalência da doença na comunidade. Entretanto, mecanismos fisiopatológicos da doença precisam ser melhor compreendidos. Neste sentido mais pesquisas são urgentemente necessárias para uma melhor compreensão da doença e para estudar novas vacinas contra a doença. Métodos: No dia 0 camundongos C57BL/6 foram desafiados no ventrículo lateral do SNC com técnica de micro injeção estereotáxica contendo cepa virulenta Mycobacterium tuberculosis (H37Rv). Após 30 dias, o cérebro e pulmão foram analisados por CFU e histologia. Resultados: Neste estudo observou-se grande número de bacilos no SNC determinadas pelo CFU. Além disso, a análise histológica mostrou uma intensa atividade inflamatória no ventrículo, quando o animal foi desafiado com H37Rv. Demonstrando assim um modelo de infecção com a cepa H37Rvinfundida no ventrículo lateral do SNC nos camundongos machos C57BL/6. Em conclusão, este modelo é o mais próximo com o curso normal da doença em humanos, pois apresentou lesão tecidual com características granulomatosa portanto uma importante estratégia para estudar a fisiopatologia assim como mediadores envolvidos na progressão e prevenção desta doença.
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Evangelista, Fernanda Cristina Gontijo. "Evaluation of in vitro antitumor activity of triazole / azide synthetic chalcones." Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, 2018. http://bdtd.inpa.gov.br/handle/tede/2639.
Full textAbstract:
Submitted by Repositorio Tarefa (tarefarepositorio@gmail.com) on 2018-10-22T15:15:33Z
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Avaliação de atividade antitumoral in vitroELIDA.PDF: 334912 bytes, checksum: 7e3630670b1d8ca55012362260918128 (MD5)
license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)Made available in DSpace on 2018-10-22T15:15:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Avaliação de atividade antitumoral in vitroELIDA.PDF: 334912 bytes, checksum: 7e3630670b1d8ca55012362260918128 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-10-01
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP
Many compounds isolated from lichens exhibit biological activity, and a number of them are proven sources of antitumor drugs. Even simple structural changes to these bioactive compounds can lead to potentiation of their activity. The purposes of this study were to evaluate the antiproliferative activity and selectivity of the following compounds isolated from lichens: atranorin; diffractaic, divaricatic, perlatolic, psoromic, norstitic, protocetraric, and fumarprotocetraric acids; and alkyl derivatives. Cytotoxicity tests based on the sulforhodamine B dye were performed on seven lines of neoplastic cells and one line of normal cells (3T3)
Muitas substâncias isoladas de liquens apresentam atividades biológicas, e algumas demonstraram ser fontes promissoras de drogas antitumorais. Modificações estruturais simples a partir dessas substâncias bioativas podem levar a potencialização da atividade apresentada. Os objetivos deste estudo foram avaliar a atividade antiproliferativa e seletividade dos seguintes compostos isolados de liquens: atranorina, ácidos difractaico, divaricático, perlatólico, psorômico, norstítico, protocetrárico e fumarprotocetrárico e derivados alquílicos. O ensaio de citotoxicidade foi realizado com corante sulforrodamina B em sete linhagens de células neoplásicas e uma linhagem de células normais (3T3)
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Zapana, Priscila Rosse Mamani. "Desenvolvimento de um modelo murino para estudo da resposta imune conferida pela proteína do Nucleocapsídeo do vírus Oropouche." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-25042018-153023/.
Full textAbstract:
O vírus Oropouche (OROV) é um arbovírus que ocorre na região amazônica causando surtos de doenças febris agudas e que, ocasionalmente, podem ser associados a meningoencefalite. Aproximadamente 500.000 casos de Oropouche teriam ocorrido no Brasil. Entretanto, não existe vacina contra o OROV. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um modelo animal de infecção por OROV para estudar a patogênese da doença e um modelo para testar candidatas vacinais. Protótipo vacinal utilizando a proteína recombinante do nucleocapsídeo (N) de OROV (NrOROV), que é o principal antígeno viral, foi usado como potencial candidato para vacina. Neste estudo utilizou-se um modelo animal em camundongos Balb/c de 12 semanas de idade, inoculados intracerebralmente com 8x105 PFU de OROV, capaz de induzir 100% de letalidade após o terceiro dia da infecção. Altos títulos virais foram encontrados no cérebro e na medula espinhal dos animais. Surpreendentemente, 12 e 24 horas pós-infecção foi possível detectar vírus no fígado e baço (3 Log10 PFU/g) dos camundongos. Com este modelo foram testados os candidatos vacinais. Grupos de camundongos foram imunizados 3 vezes com OROV, OROV e FCA, NrOROV, NrOROV e FCA, NrOROV, Poli I:C e Montanide ISA 720. Após 3 imunizações, os animais foram desafiados com 10 LD50 de OROV e observados por 20 dias. Os animais imunizados com NrOROV e adjuvantes, não foram capazes de produzir anticorpos neutralizantes e adquirir imunidade protetora contra OROV enquanto que os imunizados com OROV apresentaram altos níveis de anticorpos neutralizantes e completa proteção in vivo. Ainda, os anticorpos produzidos pelos animais imunizados permitiram estudar o ciclo de replicação celular do OROV utilizando imunofluorescência.Oropouche (OROV) is an arbovirus that occurs in the South American, Amazon region, producing outbreaks of acute febrile illness occasionally associated to meningoencephalitis. Approximately 500,000 cases of Oropouche have been reported in Brazil in the last 60 years. However, there is no available vaccine for OROV. We show here the development of an animal model of OROV suitable for studies on pathogenesis and vaccine testing. A vaccine prototype based on recombinant OROV nucleocapsid protein (NrOROV), an important viral antigen, was evaluated in the animal model. Initialy, we observed that all 12-week-old Balb/c mice inoculated intracerebrally with 8x105 PFU died after the third day of infection. Surprisingly, OROV genome was detectable in the liver as early as 12 hours post infection (pi) and in the spleen at 24 hours pi at 3 log10 PFU/g. Besides, high viral titers were found in brain and spinal cord. To test the NrOROV as a vaccine candidate, animals divided in 5 groups were immunized subcutaneously 3 times, two weeks apart with either OROV, OROV and Freud complete Adjuvant (FCA), NrOROV, NrOROV and FCA, NrOROV and Poly I:C and Montanide ISA 720. The experiment also included a group of naïve animals. After the third immunization, the animals were challenged with 10LD50 by intracerebral route and followed for 20 days. The animals immunized with NrOROV and adjuvants developed specific antibodies that were not able to neutralize the virus or confer protective immunity against OROV. Nevertheless, mice immunized with OROV showed high levels of neutralizing and protective antibodies. Despite the discouraging results with NrOROV as a vaccine, the mouse model is suitable to study pathogenesis, and to test other vaccines for OROV.
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Veronez, Luciana Chain. "Atividade da fosfoetanolamina sintética em melanoma murino experimental." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-15122012-123717/.
Full textAbstract:
O desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas ao melanoma é de particular importância devido à sua baixa resposta aos tratamentos tradicionais. No presente trabalho, utilizamos modelo de melanoma murino experimental para estudarmos os efeitos da fosfoetanolamina (PEA) sintética sobre o desenvolvimento deste tumor. Nossos resultados demonstram que o fosfomonoéster apresentou efeito inibidor da proliferação de células da linhagem B16F10 in vitro, induzindo apoptose após estimulação por 24 a 72h. In vivo, o tratamento (via oral) de animais portadores de melanoma com diferentes doses de PEA (10, 20 e 40mg/Kg), durante 10 ou 20 dias consecutivos, resultou em volumes tumorais pelo menos 70% menores que o de animais controle e diferenças macroscópicas consideráveis. PEA induziu, de maneira dose-dependente, aumento da apoptose e diminuição da proliferação de células tumorais. O tratamento resultou em alterações hematológicas como aumento do número de plaquetas, eritrócitos e leucócitos. Dentre os leucócitos, observou-se uma maior proporção de linfócitos e monócitos após 10 e 20 dias de tratamento, respectivamente. Em adição, PEA induziu uma maior produção da citocina pró-inflamatória IL-6 e das citocinas anti-inflamatórias IL-10 e TGF- e menores níveis da citocina pró-inflamatória IFN-. Os níveis de IL-1, IL-12p70 e IL-17 não foram alterados com o tratamento. Nossos resultados demonstram um papel inibidor da PEA sobre a progressão do melanoma, contribuindo para um melhor entendimento de sua atividade anti-tumoral.The low responsiveness of melanoma to traditional treatments together with its increasing incidence makes the development of new therapeutic strategies against this type of cancer extremely important. In this study, we used a murine melanoma model to evaluate the effects of synthetic phosphoethanolamine (PEA) on the development of this tumor. In vitro, PEA had an inhibitory effect on the proliferation of B16F10 cells, inducing apoptosis after 24 to 72h stimulation. In vivo, oral treatment of melanoma-bearing animals with different doses of PEA (10, 20 e 40mg/Kg) during 10 or 20 consecutive days resulted in reduced tumor volumes (at least 70% compared to the control) and in expressive macroscopic differences. PEA also induced a dose-dependent increase of apoptosis and decrease in tumor cell proliferation. The treatment also resulted in hematological changes, such as increased numbers of platelets, erythrocytes and leukocytes. Among leukocytes, we observed a higher proportion of lymphocytes and monocytes after 10 and 20 days of treatment, respectively. In addition, PEA induced higher levels of the pro-inflammatory cytokine IL-6 and of the anti-inflammatory cytokines IL-10 and TGF-, and it also induced a lower production of the pro-inflammatory cytokine IFN-. No differences were observed in the levels of IL-1, TNF-, IL-12p70 and IL-17 upon treatment. Our results demonstrate an inhibitory role of PEA in the development of melanoma, contributing to a better understanding of its antitumoral activity.
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Palma, Luana Carneiro. "Doença esteatóica não alcoólica do fígado: comparação das alterações histológicas hepáticas entre modelo murino e pacientes obesos." Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz, 2013. https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/7149.
Full textAbstract:
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-15T15:33:27Z
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Luana Palma. Doença esteatotica...2012.pdf: 6491139 bytes, checksum: 17714fa9ab206495fbf5e1aa05890deb (MD5)Made available in DSpace on 2013-10-15T15:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Luana Palma. Doença esteatotica...2012.pdf: 6491139 bytes, checksum: 17714fa9ab206495fbf5e1aa05890deb (MD5) Previous issue date: 2013
Universidade Federal da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil
A Doença Esteatótica Não Alcoólica do Fígado (do inglês Nonalcoholic Fatty Liver Disease – NAFLD) é uma doença crônica hepática de caráter espectral, que vai desde a esteatose simples até a esteato-hepatite não alcoólica. A progressão para cirrose e carcinoma hepatocelular têm sido descrita. A NAFLD apresenta aspectos histológicos semelhantes à doença hepática relacionada ao álcool (esteatose, inflamação lobular, corpúsculos de Mallory e fibrose), mas acomete indivíduos com história negativa de consumo excessivo de álcool. A NAFLD é uma das principais doenças crônicas hepáticas mundiais, e os indivíduos obesos representam a maioria dos casos da doença. Os mecanismos envolvidos na progressão da esteatose para esteato-hepatite não são bem compreendidos. Neste aspecto, modelos murinos da NAFLD têm sido frequentemente utilizados para elucidação destes mecanismos. A maioria dos modelos disponíveis é resultante de modificações genéticas e/ou nutricionais e, em geral, não simulam as alterações metabólicas e histológicas comumente vistas em pacientes com NAFLD. Em nosso grupo, foi proposto um novo modelo de NAFLD. Camundongos C57BL/6 alimentados com dieta rica em gordura (High Fat - HF) demonstraram alterações metabólicas e histológicas sugestivas de NAFLD. O objetivo do presente trabalho foi comparar alterações histológicas hepáticas presentes nestes camundongos com as alterações observadas em pacientes obesos. Amostras de fígados de pacientes obesos e de camundongos alimentados com a dieta HF foram utilizadas. Os tecidos hepáticos foram corados em Hematoxilina & Eosina e Picrossírius Red para avaliação das alterações hepáticas (esteatose, balonização, inflamação, corpúsculos de Mallory-Denk e fibrose). Além disso, foi realizada imunoistoquímica para avaliação da presença de células estrelares ativadas e de células progenitoras hepáticas, células envolvidas na fibrose e no desenvolvimento de carcinoma hepatocelular, respectivamente. Os resultados demonstraram que os fígados de todos os pacientes obesos exibiram esteatose macrovacuolar, balonização hepatocelular, inflamação lobular e fibrose perissinusoidal, o que caracterizou estes pacientes como portadores da NAFLD. As mesmas alterações foram observadas em fígados de camundongos alimentados com a dieta HF. As células estrelares ativadas foram observadas em todos os pacientes obesos, assim como em camundongos de dieta HF. As células progenitoras hepáticas foram observadas na maioria dos pacientes obesos. O fígado de todos os camundongos alimentados com dieta HF exibiram células progenitoras hepáticas. A partir dos dados obtidos, pode-se concluir que fígados de camundongos alimentados com dieta HF exibem alterações histológicas hepáticas similares às observadas em pacientes obesos. Isto abre perspectivas para a utilização do modelo proposto em estudos que busquem elucidar os mecanismos envolvidos na patogênese da NAFLD.
Nonalcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD) is a chronic liver disease ranging from simple steatosis to nonalcoholic steatohepatitis. The progression to cirrhosis and hepatocellular carcinoma has been reported. The NAFLD shows histological features similar to alcohol-related liver disease (steatosis, lobular inflammation, fibrosis and Mallory-Denk bodies), but affects individuals with no history of excessive alcohol consumption. The NAFLD is a major chronic hepatic disease in the world, and obese individuals represent the majority of cases of the disease. The mechanisms involved in the progression of steatosis to steatohepatitis are not well understood. In this regard, murine models of NAFLD have been frequently used for elucidation of these mechanisms. Most available models are the result of genetic or nutritional modifications, and generally do not mimic metabolic and histologic changes commonly seen in patients with NAFLD. In our group, we have proposed a new model of NAFLD. Mice fed high fat diet (HF diet) demonstrated metabolic and histological features suggestive of NAFLD. The aim of this study was to compare liver histological alterations present in these mice with the changes observed in obese patients. Samples of livers of obese patients and mice fed HF diet were used. For assessment of liver alterations, such as steatosis, ballooning, inflammation, Mallory- Denk bodies and fibrosis, tissues were stained with hematoxylin & eosin and picrossirius red. In addition, the presence of activated stellate and progenitor liver cells was estimated using immunohistochemistry. The results show that the livers of all obese patients exhibited macrovesicular steatosis, hepatocellular ballooning, perisinusoidal fibrosis, and lobular inflammation, which characterized these patients with NAFLD. Similar changes were observed in livers of mice that fed the HF diet. Activated stellate cells were observed in all obese patients as well as in mice HF. Hepatic progenitor cells were observed in most obese patients. The liver of all animals fed the HF diet exhibited liver progenitor cells. From the data obtained, it can be concluded that livers of mice fed with HF diet exhibit liver abnormalities similar to those observed in obese patients. This opens perspectives for the use of the proposed model in studies that seek to elucidate the mechanisms involved in the pathogenesis of NAFLD.
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Alves, Caio Cesar de Souza. "Infecção intratorácica com Paracoccidioides brasiliensis em modelo experimental murino." Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF), 2007. https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/3201.
Full textAbstract:
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-02-03T13:11:46Z
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caiocesardesouzaalves.pdf: 1872262 bytes, checksum: f03fadd9407262d508f6744a7f73820f (MD5)Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-02-03T13:14:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 caiocesardesouzaalves.pdf: 1872262 bytes, checksum: f03fadd9407262d508f6744a7f73820f (MD5)
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A Paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica humana causada pelo fungo dimórfico, Paracoccidioides brasiliensis, que acomete, principalmente, indivíduos adultos do sexo masculino. O presente estudo propôs a padronização do modelo de infecção com P. brasiliensis pela via intratorácica em camundongos BALB/c. Este estudo foi monitorado pela detecção do P. brasiliensis através da contagem de unidades formadoras de colônia e pela presença de DNA do fungo nos pulmões dos animais infectados em diferentes pontos pósinfecção (2o, 7o, 15o, 30o, 45o, 60o e 90o dias) e a taxa de sobrevida dos camundongos. Além disto, foram avaliados alguns parâmetros imunológicos como a produção de óxido nítrico, TNF-alpha, IFN-gama, e IL-10 por células presentes no lavado intratorácico, contagem total e diferencial do número de células do lavado intratorácico, o estudo histopatológico dos pulmões e a detecção de anticorpos específicos anti-P. brasiliensis nos pulmões e no soro. Os resultados mostram um aumento gradual do número de colônias e de DNA de P. brasiliensis nos pulmões. Até o 15o dia após a infecção pode ser observado um aumento na produção de óxido nítrico e IFN-gama pelas células do lavado intratorácico, bem como um aumento do número total de células e da porcentagem de leucócitos mononucleares. A partir do 30o dia após a infecção observa-se um aumento de anticorpos específicos (IgG1) no soro e no pulmão, um aumento da produção de IL-10 e TNF-alpha pelas células do lavado intratorácico e conseqüente diminuição da produção de IFN-gama e óxido nítrico. Além disso, observa-se um aumento da porcentagem de células polimorfonucleares no lavado. No estudo histopatológico pode ser constatado um aumento gradual no tamanho e complexidade dos granulomas presentes nos cortes histológicos. Os camundongos utilizados no estudo de sobrevida começaram a morrer no 60o dia após a infecção. Os resultados mostram uma resposta inicial do hospedeiro com um perfil Th1 mudando durante a infecção para uma resposta Th2 que leva ao óbito dos camundongos BALB/c.
Paracoccidioidomycosis or South American blastomycosis, is a chronic granulomatous human male infection caused by the Paracoccidioides brasiliensis. The present study it considered the standardization of the model of infection with P. brasiliensis for the intrathoracic route in BALB/c mice. This study was monitored by the detection of the P. brasiliensis through the counting of colony forming units and by the presence of DNA of fungi in the lungs of the infected animals in different points (2, 7, 15, 30, 45, 60 and 90 days) and the survival rate of the mice. Moreover, some immune parameters had been evaluated as the nitric oxide production, TNF-alpha, IFN-gamma, and IL-10 for cells in the intrathoracic washed, total and distinguishing counting of cells of the intrathoracic washed, the lung histopathology and the detection of specific antibodies anti-P. brasiliensis in the lungs and serum. The results show a gradual increase of the number of colonies and P. brasiliensis DNA in the lungs. Until 15 day after the infection can be observed an increase in the nitric oxide production and IFN-gamma for the cells of the washed, as well as an increase of the total number of cells and the percentage of mononuclear. From 30 day after the infection observes an increase of specific antibodies (IgG1) in the serum and the lung, an increase of the production of IL-10 and TNF-alpha for the cells of the washed and consequent reduction of the IFN-gamma production and nitric oxide. Moreover, observed an increase of the percentage of cells polimorphonuclear in the washed. In the histopathology it can be evidenced a gradual increase in the size and complexity of granulomas in the cuts. The mice used in the survival study had started to die in 60 day after the infection. The results show an initial reply of the host with a Th1 profile moving during the infection for a Th2 reply that leads to the death of the BALB/c mice.
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Namazu, Lilian Bernadete. "Efeito da amitriptilina em um modelo murino de colite." Universidade de São Paulo, 2015. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10133/tde-27082015-152949/.
Full textAbstract:
Doenças inflamatórias intestinais (DII) em humanos são reações crônicas de etiologia complexa. Trata-se de uma reação imunológica exacerbada e depende da microbiota. O sistema nervoso interage com a imunidade do intestino de um modo bidirecional. Relatos clínicos e poucos achados experimentais apontam para uma ligação entre transtornos depressivos e doenças inflamatórias intestinais, sugerindo interação neuroimunológica na patogenia deste processo. Ainda, o tratamento de Doenças inflamatórias intestinais (DIIDoença de Crohn e Colite Ulcerativa) com antidepressivos em modelos murino de colite têm sugerido bons resultados na redução da inflamação. O mecanismo da inflamação na DII e a participação do sistema nervoso ou da modulação de tal processo pelo emprego de antidepressivos ainda não está totalmente elucidado. Este estudo teve como objetivo estudar o efeito do antidepressivo amitriptilina em um modelo murino de colite. A colite foi induzida em camundongos C57BL/6 por Dextrano Sulfato de Sódio (DSS) e a amitriptilina (AMT) foi administrada por via oral, em regime profilático ou terapêutico. Avaliamos a dose de AMT no teste de suspensão da cauda (TSC), o acúmulo de neutrófilos pela atividade de mieloperoxidase (MPO), burst oxidativo, curva de sobrevida, histopatologia do intestino, atividade da doença por sintomas clínicos, a depleção de muco intestinal, citocinas inflamatórias no cólon e no soro, fenotipagem de linfócitos T CD4+, T CD8+, e monócitos CD14+,. Resultados: A dose de AMT (200 μg/ml) e os regimes de tratamento utilizados aqui foram capazes de impedir ou diminuir a histopatologia da colite, os sinais clínicos (ganho de peso (%), comprimento e peso do cólon) e a mortalidade dos animais no modelo terapêutico do grupo inflamado e tratado com AMT. A atividade de MPO, níveis circulantes de IL- 1 β, IL- 6 e TNF- α foram reduzidas nos dois protocolos experimentais (profilático e terapêutico). Conclusões: Este estudo incluiu um período de tratamento prolongado, visto que os antidepressivos são conhecidos por serem eficazes em seres humanos depois de várias semanas a meses de prescrição, e confirmou a eficiência da via de administração oral, uma vez que os antidepressivos são geralmente administrados por via oral a seres humanos. Este regime de tratamento melhorou o potencial anti-inflamatório de AMT na redução DSS-colite em camundongos, com base nos parâmetros estudadosInflammatory bowel disease (IBD) in humans is a complex etiology of chronic reactions. It is an exacerbated immune reaction and depends on the microflora. The nervous system interacts with the intestinal immunity of a bidirectional fashion. Clinical reports and few experimental findings point to a link between depressive disorders and inflammatory bowel disease, suggesting neuroimmunological interaction in the pathogenesis of this process. Also, treatment of inflammatory bowel diseases (Crohn\'s disease DII- and Ulcerative Colitis) with antidepressants in murine models of colitis have pointed to positive results in reducing inflammation. The mechanism of inflammation in IBD and the involvement of the nervous system or modulation of this process by the use of antidepressants is not yet fully elucidated. This study aimed to study the effect of amitriptyline in a murine model of colitis. Colitis was induced in C57BL / 6 mice by Dextran Sodium Sulfate (DSS) and amitriptyline (AMT) were orally administered in a prophylactic or therapeutic regimen. We evaluated the AMT dose in the tail suspension test (TST), the accumulation of neutrophils by myeloperoxidase activity (MPO), oxidative burst, survival curve, bowel histopathology, disease activity by clinical symptoms, depletion of intestinal mucus, colon and inflammatory cytokines in the serum phenotype of CD4+ T lymphocytes, CD8+ and CD14+ monocytes. Results: The dose of AMT (200 μg / ml) and treatment regimens used herein are able to prevent or decrease the pathology of colitis, clinical signs (weight gain (%), colon weight and length) and mortality animals in the therapeutic model inflamed group and treated with AMT. MPO activity, circulating levels of IL- 1 β, IL- 6 and TNF- α were reduced in both experimental protocols (prophylactic and therapeutic). Conclusions: This study included a prolonged period of treatment, as antidepressants are known to be effective in humans after several weeks or months of limitation, and confirmed the effectiveness of oral administration route, since antidepressants are generally administered orally to humans. This treatment scheme has improved potential anti-inflammatory AMT in reducing DSS colitis in mice based on the study parameters
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Muraro, Ângela Roberta Conte. "Desenvolvimento de lesão muscular por esmagamento em modelo murino." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2012. http://hdl.handle.net/10183/107049.
Full text
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Silva, Muriel Vilela Teodoro. "Avaliação do efeito da expressão do gene da interleucina 32 (IL-32) humana em modelo murino de infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis." Universidade Federal de Goiás, 2016. http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/6333.
Full textAbstract:
Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-03T14:21:30Z
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license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-03T14:21:53Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Muriel Vilela Teodoro Silva - 2016.pdf: 1776615 bytes, checksum: bc5d7dd181834fb9ecdb5584e16756a9 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)
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Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG
IL-32 is a proinflammatory cytokine which has different isoforms. IL-32γ isoform is the most powerful and was detected in lesions of patients with cutaneous leishmaniasis. Murine cells respond to IL-32, however mice lack the gene for this cytokine. To understand the role of IL- 32 in Leishmania (L.) amazonensis, we used transgenic mice for human IL-32γ (IL-32γTg). C57BL/6 mice (WT) and C57BL/6 IL-32γTg were infected with L. amazonensis promastigotes in the ear. The lesion development was followed weekly with a digital caliper (measured in mm of injury). After 3, 6 and 9 weeks, the animals were euthanized for tissue parasitism analysis by the limiting dilution technique, in infected ears, draining lymph node and spleen of mice. The draining lymph node cells were incubated (48 h) in the presence or absence of L. amazonensis antigen (Ag) for analysis of cytokines by ELISA. IL-32γTg mice present IL-32 production in spleen, liver, lymph node and ear. IL-32γTg mice have a lower injury than the WT mice during the third week of infection. From the 5th to the 9th week of infection, the two groups had similar lesion development profiles. Interestingly, in the 3rd week of infection, the parasitic load in the lesion of IL-32γTg mice was 100 times greater than that of WT mice. After three weeks, IL-32γTg mice maintained the same parasitic load up to nine weeks. In WT mice, however, the number of parasites increased exponentially during weeks evaluated. The parasite load in the spleen and lymph node was lower in IL-32γTg mice when compared with WT mice. There was no difference in histological sections of the lesions in WT and IL-32γTg mice infected with L. amazonensis. We did not observe differences between WT and IL-32γTg groups on the product -10) by lymph node cells stimulated with Ag, in the 3rd, 6th and 9th week of infection. Our data suggest that IL-32γ favors infection by L. amazonensis in the early stages, allowing the growth of the parasites. However, this cytokine seems to limit the growth and spread of parasites in the later stages of infection. In vitro analyzes show the similar percentage of infected cells and the number of parasites per infected cell in WT macrophages and IL-32γTg after 3 and 48h of infection with L. amazonensis. However, the production of NO by macrophages seems to be lower in IL- 32γTg mouse cells during infection with L. amazonensis. Understanding the mechanisms by which IL-32γ modulates Leishmania amazonensis infection in mice is essential to define the components that control cutaneous leishmaniasis caused by this specie in humans.
A IL-32 é uma citocina pró-inflamatória que apresenta diferentes isoformas. A isoforma IL- 32γ é a mais potente e foi detectada em lesões de pacientes com leishmaniose tegumentar americana. Células murinas respondem à IL-32, no entanto, camundongos não têm o gene para essa citocina. Para entender o papel da IL-32 na infecção por Leishmania (Leishmania) amazonensis, foram utilizados camundongos transgênicos para a IL-32γ humana (IL-32γTg). Camundongos C57BL/6 (WT) e C57BL/6 IL-32γTg foram infectados com formas promastigotas de L. amazonensis na orelha. O desenvolvimento da lesão foi acompanhado semanalmente com paquímetro digital (medida em mm de lesão). Após 3, 6 e 9 semanas, os animais foram eutanasiados para análise de parasitismo tecidual, pela técnica de diluição limitante, nas orelhas infectadas, no linfonodo drenante e no baço dos camundongos. As células do linfonodo drenante foram incubadas (48 h), na presença ou ausência de antígeno de L. amazonensis (Ag), para análise de citocinas pela técnica de ELISA. Camundongos IL- 32γTg apresentam produção de IL-32 no baço, fígado, linfonodo e orelha. Camundongos IL- 32γTg apresentam uma lesão menor do que a lesão dos camundongos WT, na terceira semana de infecção. Da 5ª até a 9a semana de infecção, os dois grupos apresentaram perfis semelhantes de desenvolvimento da lesão. Curiosamente, na 3ª semana de infecção, a carga parasitária na lesão do camundongo IL-32γTg era 100 vezes maior do que a dos camundongos WT. Após três semanas, os camundongos IL-32γTg mantiveram a mesma carga parasitária até nove semanas. Em camundongos WT, no entanto, o número de parasitos aumentou exponencialmente durante as semanas avaliadas. A carga parasitária do linfonodo e no baço foi menor nos camundongos IL-32γTg, quando comparado com camundongos WT. Não foi observada diferença nos perfis histológicos das lesões nos camundongos WT e IL-32γTg infectados por L. amazonensis. Não foi observada nenhuma diferença entre os grupos WT e IL-32γTg em relação à produção de citocinas (IFNγ, TNFα e IL-10), pelas células dos linfonodos estimuladas com Ag, na 3a, 6a e 9a semana de infecção. Os nossos dados sugerem que a IL-32γ favorece a infecção por L. amazonensis nas fases iniciais, permitindo o crescimento do parasito; no entanto, essa citocina parece limitar o crescimento e a disseminação dos parasitos nas fases mais tardias da infecção. As análises in vitro mostraram porcentagem de células infectadas e número de parasitas por célula infectada semelhantes nos macrófagos dos WT e IL-32γTg com 3 e 48h de infecção por L. amazonensis. Entretanto, a produção de NO por macrófagos parece ser menor nas células de camundongos IL-32γTg durante a infecção por L. amazonensis. Compreender os mecanismos pelos quais a IL-32γ modula a infecção por L. amazonensis nos camundongos é fundamental para a definição dos componentes que controlam a leishmaniose tegumentar causada por esta espécie em seres humanos.
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Kmetiuk, Louise Nicolle Bach. "Desenvolvimento e avaliação comparativa do melanoma oral em camundongos, frente sua ocorrência espontânea em cães." Universidade Estadual de Ponta Grossa, 2016. http://tede2.uepg.br/jspui/handle/prefix/2761.
Full textAbstract:
Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2019-03-15T11:31:48Z
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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
ntrodução: O Melanoma é a principal neoplasia em cavidade oral de cães domésticos. Ocorre principalmente em gengiva, e caracteriza-se pela progressão acelerada, altos índices de recidiva, metástase e resistência a terapias propostas. Tais aspectos impulsionaram o presente estudo, considerando a ausência de um modelo experimental para essa neoplasia, que possibilite a realização de ensaios pré-clínicos. Objetivos: Induzir a formação de melanoma oral murino em camundongos C57Bl/6J, e estudar suas características macroscópicas e histopatológicas. Método: trata-se de um estudo experimental. Trinta camundongos C57Bl/6J (Mus musculus) foram submetidos a indução tumoral através da injeção de células da linhagem de melanoma murino B16F10 em gengiva inferior direita porção vestibular, em duas concentrações celulares, originando dois grupos distintos: Grupo 1 (n=15) que receberam 0,1 ml contendo 1x104 células de melanoma murino B16F10; Grupo 2 (n=15) que receberam 0,1 ml contendo 5x104 células de melanoma murino B16F10. Para ambos os grupos foram realizadas eutanásias programadas aos sétimo, décimo quarto e vigésimoprimeiro dias de pós-operatório, com ressecção ex-vivo da hemicabeça direita. Após a exclusão dos indivíduos que foram a óbito antes do período determinado para eutanásia, obteve-se um número de indivíduos na amostra (n) de 21. Foi realizada análise macroscópica das formações tumorais. Para o estudo histológico comparativo, analisaram-se amostras de melanoma oral canino melânico no que tange aos aspectos morfométricos e morfológicos. Resultados: Houve diferença no desenvolvimento tumoral para cada concentração celular utilizada na indução. Notouse correlação positiva entre volume tumoral e número de células. Conclusão: A indução de melanoma oral em camundongos para fins de modelo de estudo pré-clínico para cães se mostrou uma alternativa útil, viável e reproduzível.
Introduction: Melanoma is the most common neoplasm in oral cavity of dogs. Melanoma has a predilection for the gum, and it is characterized by accelerated progression and high rates of relapse, metastasis and resistance to proposed therapies. Those factors inspires the present study, considering the lack of an experimental model for melanoma. Method: This is an experimental study. Thirty C57Bl / 6J mice (Mus musculus) were submitted to tumor induction by injecting murine melanoma B16F10 cells into the right lower gum using two different cell concentrations. Mice were divided in two groups: Group 1 (n = 15) received 1x104 murine melanoma B16F10 cells injection; Group 2 (n = 15) received 5x104 murine melanoma B16F10 cells injections. For both groups, euthanasia was scheduled at the 7th., 14th. and 21th. postoperative day, with post-mortem hemi-resection of the jaw. Individuals who died before the euthanasia period were excluded, leaving 21 mice. Macroscopic analysis of tumor formations was performed. For comparative histological study, oral canine melanoma samples were analyzed for morphological aspects. Data sete analyzed with BioStat 5.3 and submitted to non-parametric statistical tests. Results: Different tumor characteristics (tumor volume, presence of irregular margins, ulceration and dark coloration) were observed for each cell concentration used in the induction, as well perfect correlation between tumor volume and tumor growth. Conclusion: The induction of oral melanoma in mice for purposes of preclinical study model for dogs is an useful, viable and reproducible alternative.
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Grippo, Mariangela Carnivalli. "Identificação e caracterização de um coronavirus murino (MHV-CAM) atraves da comparação com o virus da hepatite murina tipo 3." [s.n.], 2002. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316958.
Full textAbstract:
Orientador : Liana VerinaudDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
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Mestrado
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Junior, Abdo Salomão. "Infusão transdérmica de fármaco no tratamento do melanoma murino B16F10." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5167/tde-03012018-111449/.
Full textAbstract:
A incidência de casos de melanoma tem aumentado em todo o mundo sendo que, apesar do diagnóstico precoce e do advento das terapias moleculares, o número de pacientes que morrem com a doença em estágio avançado continua em elevação. Deste modo as pesquisas atuais têm focado no desenvolvimento de diferentes estratégias para a disponibilização de terapias eficazes e acessíveis. Nesse contexto, a via de administração transdérmica constitui uma alternativa promissora para aumentar a eficácia local e sistêmica de fármacos, incluindo agentes antitumorais. Diversos métodos têm sido desenvolvidos para maximizar a permeação cutânea de fármacos, destacando-se, entre esses, a ablação térmica por radiofrequência (RF). Esse processo resulta na criação de vários microcanais entre a epiderme e a derme, pelos quais diversas moléculas podem passar em direção às camadas mais profundas da pele. Nesse estudo, a eficácia da infusão transdérmica de etoposídeo por dispositivo de radiofrequência fracionada foi avaliada em modelo de melanoma murino. Camundongos da linhagem C56BL/6 foram divididos nos seguintes grupos experimentais: 1) controle; 2) tratados com radiofrequência; 3) tratados com a aplicação tópica de etoposídeo; e 4) tratados com radiofrequência e posterior aplicação tópica de etoposídeo. Os tratamentos foram realizados durante o período de 28 dias. O peso corpóreo, o volume tumoral e o perfil hematológico foram avaliados semanalmente. Ao término do tratamento os animais foram eutanasiados e procedeu-se a coleta da massa tumoral e dos órgãos (pulmão, baço, rins, linfonodos e fígado) para análise histopatológica. As células tumorais obtidas das massas tumorais foram analisadas quanto às alterações do ciclo celular e do potencial transmembrânico mitocondrial. Os resultados demonstraram que o tratamento com etoposídeo isolado reduziu a sobrevida dos animais e ocasionou alterações histológicas indicativas de toxicidade. Em contrapartida, a infusão transdérmica do etoposídeo por dispositivo de radiofrequência promoveu redução significativa do volume tumoral, em comparação com todos os grupos experimentais, sem ocasionar mortalidade. Esse tratamento também diminuiu a plaquetocitose e elevou o número de eritrócitos em comparação com os outros grupos. A análise histopatológica dos órgãos dos animais tratados com RF + etoposídeo evidenciou que não houveram alterações significativas na arquitetura tecidual. Ainda, o grupo tratado com RF + etoposídeo foi o que apresentou o maior percentual de células estacionadas na fase S/G2M e com mitocôndrias inativas, evidenciando o aumento da eficácia demonstrada no estudo in vivo. O conjunto de resultados sugere que o tratamento com a radiofrequência seguida do etoposídeo resulta em melhor resposta antitumoral do quimioterápico, com baixos índices de toxicidade sistêmicaThe incidence of melanoma cases has increased worldwide and, despite early diagnosis and targeted molecular therapy, the number of patients dying from metastatic disease continues to rise. Thus, current research has focused on the development of different treatment strategies to provide efficient and accessible solutions. In this sense, transdermal delivery is a promising alternative enhancing the local and systemic efficacy of drugs, including antitumor agents. Several methods have been developed to improve the skin permeation of drugs, highlighting, among those, the radiofrequency thermal ablation (RFA). This process results in the creation of many microchannels between the epidermis and the dermis through which several molecules can pass towards the deeper layers of the skin. In this study, the efficacy of the transdermal delivery of etoposide by a fractional radiofrequency device was evaluated in a murine melanoma model. C56BL/6 lineage mice were divided into the following experimental groups: 1) control; 2) treated with radiofrequency; 3) treated with topical applications of etoposide; and 4) treated with radiofrequency followed by topical applications of etoposide. The animals were treated for 28 days and the body weight, tumor volume and hematological profile were analyzed weekly. At the end of the treatments, the animals were euthanized and the tumor mass and organs (lung, spleen, kidneys, lymph nodes and liver) were collected for histopathological analysis. Tumor cells obtained from the tumor masses were analyzed for changes in the cell cycle and mitochondrial transmembrane potential. The results showed that the treatment with etoposide alone reduced the survival of the animals and caused histological changes indicating toxicity. On the other hand, the transdermal delivery of etoposide by a radiofrequency device resulted in a significant reduction of the tumor volume, in comparison with all the experimental groups, not causing mortality. This treatment also decreased thrombocytosis and increased the number of red blood cells compared to the other groups. The histopathological analysis of the organs from animals treated with RFA + etoposide demonstrated that there was no significant change in tissue architecture. Furthermore, the group treated with RFA + etoposide presented the highest percentage of cells with inactive mitochondria and interruption at the S/G2M stage, corroborating the increased efficacy of the in vivo study. The set of results indicates that the treatment with radiofrequency followed by etoposide results in better antitumor responses of chemotherapy, with low toxicity rates
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FARIAS, Alexandre Maia de. "Estudo da neuropatologia induzida pelo vírus Marabá em modelo murino." Universidade Federal do Pará, 2014. http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/5386.
Full textAbstract:
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UEPA - Universidade do Estado do Pará
UFPA - Universidade Federal do Pará
IEC - Instituto Evandro Chagas
O vírus Marabá (Be AR 411459) é um Vesiculovírus (VSV), membro da família Rhabdoviridae, isolado em 1983, de um pool de flebotomíneos capturado em Marabá-PA pela Seção de Arbovírus do Instituto Evandro Chagas. Na literatura pouco se tem sobre neuropatologia experimental induzida pelo vírus Marabá, apesar dos 30 anos de isolamento. Um único estudo, porém, revelou que a infecção viral em camundongos recém-nascidos provoca necrose e picnose em neurônios em várias regiões do sistema nervoso central (SNC) O objetivo do presente trabalho foi investigar a distribuição do vírus Marabá no SNC, a ativação microglial e astrocitária, aspectos histopatológicos; e a expressão de citocinas e óxido nítrico (NO), na encefalite induzida pelo vírus Marabá em camundongo BALB/c adultos. Para tanto, foram realizados processamentos de amostras para análise histopatologica; immunohistoquímica para marcação de microglia, astrócitos e antígeno viral; testes de quantificação de citocinas e NO; e análises estatísticas. Os resultados demonstraram que os animais infectados (Ai) 3 dias após a inoculação (d.p.i.) apresentam discreta marcação do antígeno viral, bem como quanto a ativação de microglia e astrócitos no SNC. Por outro lado, nos Ai 6 d.p.i. a marcação do antígeno viral foi observada em quase todas regiões encefálicas, observando-se intensa ativação microglial nestes locais, embora a astrogliose tenha sido menor. Edema, necrose e apoptose de neurônios foram observados principalmente no bulbo olfatório, septo interventrícular e córtex frontal dos Ai 6 d.p.i. A quantificação dos níveis de IL-12p40, IL-10, IL-6, TNF- α, INF-ү, MCP-1 e de NO mostrou aumentos significativos nos Ai 6 d.p.i., quando comparados aos animais controles e Ai 3 d.p.i.. Por outro lado, os níveis de TGF-β, importante imunossupressor, não foi significativo em todos os grupos e tempos avaliados (3 e 6 d.p.i.). Estes resultados indicam que o vírus Marabá pode infectar diversas regiões do SNC de camundongo BALB/c adulto 6 d.p.i., produzindo alterações anátomo-patológicas e uma forte resposta imune inflamatória que pode ser letal para o animal.
The Marabá virus (Be AR 411459) is an Vesiculovirus (VSV), member of the Rhabdoviridae family, isolated in 1983 from a pool of sandflies captured in Marabá - PA by Section Arbovirus the Evandro Chagas Institute. In literature There are few studies on experimental neuropathology Marabá virus induced, despite 30 years of isolation. A single study, however, revealed that viral infection in newborn mice causes necrosis and pyknosis in neurons in several regions of the central nervous system (CNS). The objective of this study was to investigate the distribution of Marabá virus in the CNS, reactive microglia and astrocytes, histopathologic features, and the expression of cytokines and nitric oxide (NO), in Marabá virus-induced encephalitis in BALB / c mice. Thus was performed processing of samples for histopathological examination; Immunohistochemistry for observation of microglia, astrocytes and viral antigen; tests for quantification of cytokines and NO, and statistical analyzes. The results showed that infected animals (Ai) 3 days after inoculation (d.p.i.) with discrete labeling of viral antigen, as well as the activation of microglia and astrocytes in the CNS. Moreover , in Ai 6 d.p.i. marking the viral antigen was observed in almost all brain regions, with intense microglial activation in these locations, although was less astrogliosis. Edema, necrosis and apoptosis of neurons were mainly observed in the olfactory bulb, septum and frontal cortex of Ai 6 d.p.i. Quantification of IL - 12p40, IL- 10, IL- 6, TNF- α, INF- ү, MCP-1 and NO, showed significant increases in Ai 6 d.p.i., when compared with controls animals and Ai 3 d.p.i. On the other hand, TGF-β, important immunosuppressant, has not been significant in all groups and evaluated times (3 and 6 d.p.i.). These results indicate that Marabá virus can infect various CNS regions of BALB /c mouse adult 6 d.p.i., producing anatomical and pathological changes and strong inflammatory immune response that can be lethal to the animal.
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Corrêa, Laura Trevizan. "Efeitos citotóxicos de resolvinas da série D em glioma murino." Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, 2015. http://hdl.handle.net/10923/7432.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2015Glioblastoma multiform (GBM) is a highly aggressive tumor of the central nervous system and has a few available therapies. In GBM, proinflammatory signaling pathways, such as STAT3 and NF-κB are aberrantly activated and associated with cell proliferation, survival, invasion and resistance to chemotherapy. Therefore, inhibition of these pro-inflammatory pathways has been suggested as a strategy to combat malignant cells. Resolvins of D-series promote resolution of inflammation by decreasing the activation of NF-κB. The Resolvin D2 (RvD2) is derived from a double sequence of docosahexaenoic acid lipoxygenation, which is derived from the essential fatty acid Omega-3. Our hypothesis is that the resolvins, by direct or indirect inhibition of pro-inflammatory pathways, could compromise the survival and growth of glioma. Our goal is to assess the role of RvD2 and its precursor 17 (R) HDHA (HR17) on tumor cell proliferation and survival in murine glioma model. For this, murine glioma cell line (GL261) was treated in vitro with RvD2 and HR17, and cell death and proliferation were evaluated. Furthermore, the effect of RvD2 and HR17 was evaluated in vivo after GL261 brain implantation; histopathological characteristics and immunohistochemistry for activated caspase-3 were evaluated to. It was found that RvD2 GL261 induces apoptosis in vitro. Furthermore, in vivo treatment of RvD2 and HR17 increased the number of tumor cells positive for activated caspase-3, although not alter tumor area. Interestingly, the HR17 treatment reduces tumor mitotic index in vivo. These results suggest that RvD2 and HR17 have a potential role in the induction of apoptosis in murine glioma cells.
Glioblastoma multiforme (GBM) é um tumor altamente agressivo do Sistema Nervoso Central e possui poucas terapias disponíveis. Em GBM, vias de sinalização pró-inflamatórias, como da STAT3 e NF-κB, são aberrantemente ativadas e associadas com a proliferação celular, sobrevivência, invasão e resistência à quimioterapia. Por conseguinte, a inibição dessas vias próinflamatórias tem sido sugerida como uma estratégia para combater as células malignas. As resolvinas da série D promovem resolução da inflamação diminuindo a ativação de NF-κB. A Resolvina D2 (RvD2) deriva de uma sequencia de dupla lipoxigenação do ácido docosahexaenóico, o qual é derivado do ácido graxo essencial Omega-3. Nossa hipótese é que as resolvinas, por inibição direta ou indireta de vias pró-inflamatórias, poderiam comprometer a sobrevivência e o crescimento do glioma. Nosso objetivo consiste em avaliar o papel da RvD2 e de seu precursor 17(R)HDHA (HR17) sobre a proliferação de células tumorais e sobrevivência em um modelo de glioma murino. Para isso, a linhagem de células de glioma murino (GL261) foi tratada in vitro com RvD2 e HR17, e amorte celular e proliferação foram avaliadas. Além disso, o efeito de RvD2 e HR17 foi avaliado in vivo após o implante de GL261 no cérebro, avaliando-se características histopatológicas e a imunohistoquímica para caspase-3 ativada. Verificou-se que RvD2 induz apoptose de GL261 in vitro. Além disso, o tratamento de RvD2 e HR17 in vivo aumentou o número de células tumorais positivas para caspase-3 ativada, embora não alterassem a área do tumor. Curiosamente, o tratamento HR17 reduz o índice mitótico tumoral in vivo. Estes resultados sugerem que RvD2 e HR17 têm um potencial papel na indução de apoptose em células de glioma murino.
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Prado, Christian. "Transplante de microbiota em modelo experimental murino de enterocolite neonatal." reponame:Repositório Institucional da UNESC, 2017. http://repositorio.unesc.net/handle/1/5228.
Full textAbstract:
Dissertação apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense - UNESC, como requisito parcial para a obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde.A enterocolite necrosante é uma doença grave que acomete neonatos prematuros, provocando necrose parcial ou completa da parede gastrointestinal. Seu tratamento é realizado com antibióticos, nutrição parenteral, suporte avançado de vida, e em parte significante dos casos também cirurgia. A despeito do desenvolvimento tecnológico em terapia intensiva neonatal, persiste causando mortalidade elevada, com até 50% de óbitos nos pacientes que necessitaram de tratamento cirúrgico. A microbiota intestinal tem um papel importante no desenvolvimento da doença, principalmente quando alterada, apresentando predomínio de bactérias patogênicas, ao que é chamado desbiose. Na busca de novas opções de tratamento, foi pesquisado se o transplante de microbiota de um doador saudável adulto previne, ou diminui, a resposta inflamatória em um modelo murino experimental de enterocolite necrosante. O experimento utilizou 71 ratos Wistar, divididos da seguinte forma: um rato adulto doador das fezes para o experimento, 10 ratos controle de 3 dias de vida amamentados por sua progenitora (grupo controle = GC), 20 ratos Sham submetidos a indução de enterocolite necrosante, (grupo sham = GS), 20 ratos que receberam transplante de microbiota antes da indução (transplante de microbiota pré = TMPE) e 20 ratos que receberam o transplante de microbiota após a indução (transplante de microbiota pós = TMPO). A indução da enterocolite seguiu metodologia já descrita, que envolve alimentação por fórmula artificial, hipotermia, hipóxia e administração de endotoxina por via oral. O transplante de microbiota foi realizado através da admistração de 100μL da solução contendo 3x108 células, provenientes das fezes do rato doador adulto. Foram analisados a resposta inflamatória aguda através das dosagens dos níveis de TNF-α, IL-1β e IL-6, a presença de dano oxidativo pelas técnicas de TBARS e carbonil. A presença de dano nitrosativo por Western blotting de 3-nitrotirosina. A avaliação do grau de lesão histológica na mucosa intestinal foi realizada através de escore desenvolvido por Caplan et al. Este escore varia de 0, que equivale a mucosa normal, até 4, o qual representa lesão transmural. O GS teve aumento significativo em relação ao GC dos níveis de TNF-α, IL-1β e IL-6, na atividade da mieloperoxidase e equivalente MDA, e na de dosagem 3-nitrotirosina (p<0,05). O TMPE teve redução significativa em relação ao GS em relação aos níveis de de TNF-α, IL-1β e IL-6 na atividade da mieloperoxidase e equivalente MDA, e na de dosagem 3-nitrotirosina (p<0,05). O TMPO teve redução significativa em relação ao GS em relação aos níveis de IL-6 , equivalente MDA, e na de dosagem 3-nitrotirosina (p<0,05). Não houve variação significativa entre os grupos em relação a carbonilação de proteínas. No escore histológico de lesão intestinal, o GS apresentou valores maiores que os outros grupos, variando entre 1 e 3 (p<0,05). Os espécimes do GC, TMPE e TMPO apresentaram predominantemente escore 0, equivalente a mucosa normal, desta forma, sem diferença significativa entre si. O transplante de microbiota apresentou potencial terapêutico para o tratamento de enterocolite necrosante, principalmente na prevenção, quando realizada precocemente, no modelo experimental de indução da doença.
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Espinel, Júlio de Oliveira. "Terapia celular no tratamento da bronquiolite obliterante em modelo murino." reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS, 2013. http://hdl.handle.net/10183/88432.
Full textAbstract:
Introdução: O transplante pulmonar consolidou-se como terapia de escolha para pneumopatias terminais. A bronquiolite obliterante limita a sobrevida dos pacientes transplantados e não tem um tratamento definido e eficaz. Células-tronco têm propriedades imunomoduladoras. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar o papel das células tronco mesenquimais na diminuição do processo inflamatório do aloenxerto em modelo murino de bronquiolite obliterante. Material e Métodos: Trabalho desenvolvido na Unidade de Experimentação Animal do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Realizado alotransplante traqueal heterotópico em bolsa dorsal subcutânea e injetado 5x105 células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo sistemicamente. Procedida a análise em HE, picrosirius e morfometria digital. Resultados: Os animais foram divididos em 2 grupos, conforme o tempo de sacrifício: T7 e T21. Os T7 tratados com terapia celular apresentaram mediana de área obstruída do enxerto de 0 contra 0,54 dos controles (p = 0,635). Os T21 tratados apresentaram mediana de área obstruída da luz do enxerto de 0,25 nos tratados e 0 nos controles (p = 0,041). Conclusão: A terapia celular injetada sistemicamente em modelo experimental murino de bronquiolite obliterante não reduziu a gravidade do processo inflamatório no aloenxerto de forma estatisticamente significativa em 7 dias; de modo contrário, em 21 dias, aumentou o processo inflamatório no aloenxerto.
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Souza, Regina Celia. "Efeitos da irradiação com laser infravermelho (780 nm) em células de melanoma murino B-16 com melanogênese estimulada ou inibida e em melanócitos murino melan-A." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2010. http://hdl.handle.net/1884/23034.
Full textAbstract:
Orientadora : Profa. Glaucia Regina MartinesCo-orientadora : Profa. Sheila M.B. Winnischofer
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 24/02/2010
Bibliografia: fls. 92-102
As radiações ultravioleta (UV), infravermelha (IR) e visível (Vis) estão presentes na luz solar. Sabe-se que a radiação UV-A (320 – 400 nm) promove a formação de espécies reativas de oxigênio (ROS) que podem gerar danos ao DNA das células da pele. A radiação IR também causa alterações na pele, como o envelhecimento precoce e hiperpigmentação, além disso, tem potencial fotocarcinogênico e estimula a geração de ROS. Estudos mostram que a melanina da pele do ser humano, produzida nos melanócitos e transferida para os queratinócitos, absorve as radiações solares e protege o DNA da luz solar. O uso do laser infravermelho 780nm na pele, como instrumento de tratamento, não está totalmente esclarecido em relação aos seus efeitos sobre células normais e/ou tumorais. Foi mostrado que a radiação IR incidente na pele gera ROS. O principal alvo deste trabalho foi a análise dos efeitos da radiação IR proveniente de um laser 780nm sobre células Melan-a (melanócito murino imortalizado) e B16-F10 (melanoma murino), avaliando parâmetros de morte celular e estresse oxidativo. As células B16-F10 tiveram a melanogênese modulada antes da irradiação. Não foram observadas grandes alterações de viabilidade em função das doses, quantidade de melanina endógena ou dos tempos de recuperação, exceto em duas condições: na linhagem B16-F10 sem estímulo e irradiadas com laser infravermelho de 780nm, 70mW, dose 538,2 J/cm², houve aumento de 38,9% na percentagem das células viáveis em relação ao controle após 24 h e na linhagem Melan-a sem estímulo e irradiadas com laser infravermelho de 780nm, 70mW, dose 89,7 J/cm², que tiveram diminuição de 23% na percentagem das células viáveis em relação ao controle após 48 h. Não foi observada alteração da lipoperoxidação ou fragmentação de DNA em nenhuma das linhagens celulares após irradiação. Usando a sonda DCF-DA, não foi observada a geração de ROS intracelular nas células B16-F10 e Melan-a. A melanina de Sepia officinalis irradiada com Laser IR 780nm em solução aquosa de dimetilsulfóxido promoveu a geração de ROS de forma dependente do pH do meio em que se encontrava no momento da irradiação. Os resultados em conjunto mostraram que não houve uma resposta biológica agressiva para as células B16-F10 e Melan-a quando submetidas a apenas uma aplicação para irradiação nas doses de laser IR 780mn de 89,7 a 538,2 J/cm², e, além disso, a quantidade de melanina endógena não afeta os parâmetros de morte celular e geração de ROS.
Ultraviolet (UV), infrared (IR) and visible (Vis) radiation are present in solar light. It is known that UV-A (320 – 400 nm) promotes the formation of reactive oxygen species (ROS) that can cause DNA damage in skin cells. IR radiation causes skin changes such as premature aging, and hyperpigmetation; furthermore, it has potencial for photocarcinogenicity and stimulates the generation of ROS. Studies show that melanin produced in melanocytes and transferred to keratinocytes in human skin absorbs solar radiation and protects DNA from solar light. The use of 780nm infrared laser on the skin, as a means of treatment, is not fully understood in relation to their effect on normal and/or tumor cells. Several studies show that the IR radiation on skin generates ROS. The main aim of this work was the analysis of IR radiation effects from a 780nm laser on Melan-a (immortalized murine melanocyte) and B16-F10 (murine melanoma) by evaluating cell death and oxidative stress parameters. The B16- F10 cells had the melanogenesis modulated before irradiation. Results did not show any major changes in viability in function of treatments, amount of endogenous melanin or recovery times, except for two conditions: B16-F10 without stimulation and irradiated with infrared laser 780 nm, 70 mW, dose 538,2 J/cm², that had an increase of 38.9% in the percentage of viable cells compared to control after 24h and Melan-a cell line irradiated with infrared laser 780 mn, 70 mW, dose 89,7 J/cm², that had a 23% decrease in the percentage of viable cells compared to control after 48 h. There were no changes in lipid peroxidation or DNA fragmentation in any of the cell lines after irradiation. Using the probe DCF-DA in cells B16-F10 and Melan-a, it was not observed the generation of intracellular ROS. Melanin from Sepia officinalis, irradiated with 780nm IR Laser in aqueous dimethylsulfoxide, promoted the generation of ROS, which was dependent of the pH of the medium at the time of irradiation. The overall results showed that there was not an aggressive biological response in B16-F10 cells and Melan-a when exposed to only one application of irradiation at doses of 780 nm IR laser from 89,7 a 538,2 J/cm² and, moreover, the amount of endogenous melanin did not affect the parameters of cell death and generation of ROS.
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Pereira, Beatriz Aparecida Soares. "Patogenicidade e imunogenicidade de isolados clínicos do complexo Paracoccidioides brasiliensis." Botucatu, 2019. http://hdl.handle.net/11449/181206.
Full textAbstract:
Orientador: Rinaldo Poncio MendesResumo: Introdução. A correlação entre gravidade da paracoccidioidomicose e patogenicidade e imunogenicidade dos fungos causadores tem sido pouco investigada e foi o objetivo deste estudo. Metodologia. As cincos cepas Pb192, Pb234, Pb326, Pb417 e Pb531 foram identificadas pelo seqüenciamento da região Exon 2 da gp43. A patogenicidade foi determinada pelo cálculo da dose letal 50% (DL50%) e pela contagem do número de unidades formadoras de colônias, realizada na sexta semana pós-infecção de camundongos BALB/c. A imunogenicidade foi determinada pela avaliação da resposta imune humoral específica, utilizando-se a reação de imunodifusão dupla em gel de ágar e da imunidade celular, determinada pela concentração das citocinas interleucina -2, interleucina-10, interferon-γ, fator de necrose tumoral – α e do fator de crescimento do endotélio vascular, em tecido pulmonar. Quatro amostras clínicas foram recém-isoladas de pacientes com paracoccidioidomicose, provenientes da Região de Botucatu - os isolados Pb234 e Pb417, de pacientes com a forma crônica moderada; o Pb326 de um caso com a forma aguda grave; e o Pb531, de um caso com a forma crônica grave. As demais cepas Pb192, Pb01 e 8334 foram cedidas pelo laboratório de Moléstias infecciosas. Resultados. As cepas Pb417 e Pb326 agruparam-se às cepas identificadas como P. brasiliensis S1a, a Pb531 às P. brasiliensis S1b e as cepas Pb234 e Pb192 às cepas depositadas como P. restrepiensis (PS3). Os resultados demonstraram correlação direta entre ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo)
Abstract: Introduction. The investigation of paracoccidioidomycosis and pathogenicity and immunogenicity of the provoking fungi has been little investigated and was the objective of this study. Methodology. As strains, Pb192, Pb234, Pb326, Pb417 and Pb531 were included by sequencing the Exon 2 region of gp43. The pathogenicity was determined by calculating the 50% lethal dose (LD50%) and by counting the number of colony forming units performed in the sixth week post-infection of BALB / c mice. Immunogenicity was determined by the humoral immune response, using the agar gel immunodiffusion reaction and the cellular immunity, determined the concentration of cytokines interleukin-2, interleukin-10, interferonγ, tumor necrosis factor - and factor of vascular endothelial growth in lung tissue. Surgical has been associated with patients with paracoccidioidomycosis, derived from the Botucatu - the Pb234 and Pb417; the Pb326 of a case with a severe severe form; and Pb531, of a case with severe chronic form. The other strains Pb192, Pb01 and 8334 were transferred by the laboratory of Infectious Diseases. Results. Pb417 and Pb326 strains were grouped into the associated strains P. brasiliensis S1a, Pb531 to P. brasiliensis S1b and strains Pb234 and Pb192 to strains deposited as P. restrepiensis (PS3). The results demonstrate the pathogenicity of disease error and severity. The small LD 50 values were measured in the following cases: severe disease, Pb531 and Pb326. Pb531 strain was considered to... (Complete abstract click electronic access below)
Mestre
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Paioli, Fernanda Somma. "Efeito citotóxico da crotoxina em células de melanoma murino e fibroblastos." Universidade de São Paulo, 2011. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-17032011-105046/.
Full textAbstract:
A crotoxina é a toxina mais abundante e ativa do veneno da cascavel brasileira Crotalus durissus terrificus. É composta por duas sub-unidades ligadas não covalentemente. A sub-unidade ácida é enzimaticamente inativa e não possui toxicidade, é também conhecida como crotapotina e potencializa a ação da fosfolipase A2 (sub-unidade básica). Alguns autores atribuem à crotoxina um efeito citotóxico e sugerem seu uso como um agente terapêutico contra tumores. Neste trabalho, foi investigada a citotoxidade da crotoxina e suas subunidades em células de melanoma murino e fibroblastos. Os ensaios de indicam que a crotoxina é tóxica para as células de melanoma promovendo a morte até em concentrações mais baixas enquanto os fibroblastos foram afetados somente em concentrações mais altas. Ensaios com as subunidades mostraram que a fosfolipase A2 foi mais tóxica para as células de melanoma que para os fibroblastos.Crotoxin is the most abundant and active toxin from the venom of the Brazilian rattlesnake Crotalus durissus terrificus. It is composed of two subunits non covalently linked. One acidic with no enzymatic or toxic activity, known as crotapotin, which enhances the phospholipase A2 (basic subunit) action. Some authors have also attributed to this toxin a direct cytotoxic effect, and have suggested its use as a therapeutical agent against tumoral cells. In the present work, we investigated the cytotoxic effect of crotoxin and its subunitis on murine melanoma cells and fibroblasts. Our results indicate that crotoxin is highly toxic to the melanoma cells inducing cell death even at the lowest concentration while the fibroblast were only affected with the higher concentrations. The subunits assays showed that the phospholipase A2 had a higher toxicity on melanoma cells than on fibroblasts.
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Costa, Thiago André Carreo. "Ressuscitação volêmica com diferentes soluções em modelo murino de choque hemorrágico." Universidade Federal de Goiás, 2015. http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/7854.
Full textAbstract:
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Despite being the main form of treatment for resuscitation in shock cases, the fluid therapy remains controversial. In this sense, this study aimed to make a fluid resuscitation review in hemorrhagic shock cases to identify the controversies that concern this topic and then, conduct an experimental study evaluating the cardiocirculatory effects of some mixed protocols of fluid resuscitation on a murine model of hemorrhagic shock. On the experiment was compared the performance of lactated Ringer's solution (RL) (RLG, n=6), 7.5% NaCl (HIPG, n=6), hydroxyethyl starch 130/0.4 6% (CG n=6), and a combination of 20% NaCl with hydroxyethyl starch 130/0.4 6% (HCG, n=6). All treatments was followed by the use, if required, of RL so that the mean arterial pressure (MAP) was maintained ≥ 75mmHg for 120 minutes (late phase). No one of the resuscitation treatments was enough to maintain MAP above 75 mmHg for 120 minutes, making it necessary to supplement fluid therapy with RL (61.7±11.4mL/kg in the RLG, 73.2±23.7mL/kg in HIPG, 46.2±20.7mL/kg in CG and 46.4±26.1mL/kg in HCG). In CG and HCG groups all animals survived the early and late stages of resuscitation. In GRL and GHIP groups, two animals (33.3%) died at the late phase of experiment. In conclusion the resuscitation in RLG and HIPG groups was less efficient than the resuscitation in HCG and CG groups. The hydroxyethyl 130/0.4 6% administration was most advantageous becouse promote adequate and durable fluid resuscitation in rats.
Apesar de ser a principal forma de tratamento para reposição volêmica em casos de choque, a fluidoterapia ainda é bastante controversa. Por conta disto, o presente trabalho teve por objetivos fazer uma revisão bibliográfica acerca da ressuscitação volêmica após choque hemorrágico, a fim de identificar as principais disparidades que tangem este tema. Em seguida, realizou-se experimento que avaliou os efeitos cardiocirculatórios de alguns protocolos mistos de ressuscitação volêmica em um modelo murino de choque hemorrágico. No experimento foi comparado o desempenho das soluções de Ringer com lactato (RL) (GRL, n=6), NaCl a 7,5% (GHIP, n=6), hidroxietilamido 130/0,4 a 6% (GVLV, n=6) e uma associação de NaCl a 20% com hidroxietilamido 130/0,4 a 6% (GCH, n=6), todas seguidas da utilização, se necessário, de RL para manter a pressão arterial média (PAM) ≥ 75 mmHg durante 120 minutos (fase tardia). Em nenhum dos grupos a ressuscitação inicial foi suficiente para manter a PAM acima de 75 mmHg por 120 minutos, fazendo-se necessária a administração de fluidoterapia complementar com RL 61,7±11,4 mL/kg no GRL; 73,2±23,7 mL/kg no GHIP; 46,2±20,7 mL/kg no GVLV e 46,4±26,1 mL/kg no GCH. Nos grupos GVLV e GCH todos os animais sobreviveram às fases inicial e tardia da ressuscitação. Nos grupos GRL e GHIP dois animais (33,3%) morreram na fase tardia. Concluiu-se que a ressuscitação nos grupos GRL e GHIP foi menos eficiente do que a dos grupos GVLV e GCH e que a administração de hidroxietilamido 130/0,4 a 6% promove ressuscitação volêmica mais adequada e duradoura.
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Ono, Bruno Andrade. "Avaliação da resposta fotodinâmica em células de melanoma murino utilizando Photodithazine." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-02052016-104501/.
Full textAbstract:
A terapia fotodinâmica é uma técnica que vem sendo aprimorada para o tratamento de cânceres e infecções e seu efeito terapêutico consiste na geração de espécies reativas de oxigênio que causam danos irreversíveis às células, levando-as a morte. Ela é considerada menos invasiva que outros tratamentos, podendo ser repetida diversas vezes e utilizada em conjunto com outros tratamentos sem o comprometimento do paciente. Um dos focos da terapia fotodinâmica é o tratamento de cânceres de pele melanoma devido a localização superficial das lesões e a elevada taxa de letalidade que a doença ocasiona, esta alta taxa esta relacionada a formação de tumores secundários em outras regiões do corpo que dificulta a cura. Neste trabalho buscou-se entender a interação do fotossensibilizador de segunda geração, Photodithazine, com as células de melanoma murino de linhagem B16F10. Foram analisadas a captação celular e a co-localização intracelular deste fotossensibilizador através da marcação de componentes celulares em microscopia confocal. Ensaios de viabilidade celular foram realizados para obtenção das concentrações menos citotóxicas sem e com luz, utilizando o teste de MTT. Foi realizada a caracterização do tempo de vida médio fluorescência do fotossensibilzador durante a terapia fotodinâmica em microscópio FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy). Os resultados indicaram que um maior tempo de incubação no escuro causa maior citotoxicidade para as concentrações acima de 0,1 mg/mL de Photodithazine. Os ensaios de terapia fotodinâmica apresentaram redução de mais de 90% de viabilidade celular para baixas concentrações de Photodithazine®, utilizando fluências acima de 2J/cm2. O tempo de vida médio de fluorescência do Photodithazine livre em solução apresentou tempo de 3,75 ns e quando ligado às células de 4,63 ns, durante a terapia fotodinâmica o tempo de vida médio de fluorescência apresentou alteração de aproximadamente 0,2 ns. Através do cálculo de coeficientes de correlação, foi observado a alta co-localização em mitocôndrias.Photodynamic therapy is a technique manly applied in the treatment of cancers and infections. The principal compound of this therapy is the reactive oxygen species generated that react and damage various cellular components, causing cell death. Photodynamic therapy is considered minimally invasive and can be repeated several times without compromising the patient. One of the main focuses of photodynamic therapy is threatment of melanoma skin cancer due to it is superficial location of the lesions and also because the disease has a high rate of mortality, caused by the formation of secondary tumors elsewhere in the body that makes it difficult to cure. In this study, murine melanoma cells were studied in monolayer model using Photodithazine, a photosensitizer of second generation. Cellular uptake and intracellular co-localization of the photosensitizer was observed by labeling cellular components that were analyzed by confocal microscopy. Cell viability assays were performed to obtain the cytotoxic concentrations in the dark, using the MTT test. Using the less cytotoxic concentrations, photodynamic therapy trials was performed to obtain the cytotoxic fluences. Finally, the average lifetime fluorescence of photosensitizer was measured to characterize the photodynamic therapy in FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy). The results indicated that longer dark incubation cause greater cytotoxicity at the concentrations above 0.1 mg/mL of Photodithazine. Thereby the results of photodynamic therapy experiments observed the decreasing from over 90% cell viability at low concentrations of Photodithazine using fluences above 2 J/cm2. The average fluorescence lifetime of the free Photodithazine solution was 3.75 ns and cell-bound 4.63 ns, during the photodynamic therapy the average lifetime fluorescence changed approximately 0.2 ns. By calculating correlation coefficients, the high colocalization was observed in mitochondria.
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Maria, Andrea Gutierrez. "Papel do receptor B1 de cininas no desenvolvimento de melanoma murino." Universidade de São Paulo, 2011. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-06012016-162046/.
Full textAbstract:
O melanoma malígno está entre os cânceres que mais têm aumentado nas últimas décadas representando um grande desafio terapêutico. Quando diagnosticado precocemente, as chances de cura por excisão cirúrgica com margens de segurança adequadas são altas. Entretanto, casos avançados de melanoma são resistentes às formas atuais de terapia; assim, um dos maiores desafios para a pesquisa em melanoma é a identificação de alvos moleculares para o desenvolvimento de novas estratégias de tratamento. A capacidade de impedir o desenvolvimento de um tumor depende do melhor entendimento das vias celulares e moleculares que operam no microambiente tumoral. Uma inflamação crônica e persistente contribui para o desenvolvimento do câncer, e mesmo tumores que não são epidemiologicamente ligados a patógenos, são caracterizados pela presença de componentes inflamatórios em seu microambiente. O Sistema Calicreínas-Cininas (SCC) é responsável por uma série de efeitos biológicos, como vasodilatação, modulação da dor e inflamação, contração/relaxamento da musculatura lisa e efeitos sobre a proliferação celular. A participação do receptor B1 de cininas é bem relacionada a processos inflamatórios; contudo, a relação entre o SCC e câncer ainda é pouco descrita na literatura. Com relação ao melanoma, não existem na literatura, estudos que relacionam a participação do SCC e essa patologia. Portanto, a identificação de mecanismos genéticos e de vias de sinalização que levam à formação e progressão tumoral é de extrema importância para um desenho racional de terapias. Assim, o objetivo desse trabalho foi estudar a participação do receptor B1 de cininas no desenvolvimento de melanoma. Primeiramente realizou-se ensaios in vitro com células de melanoma murino, B16F10, verificando-se a presença dos componentes do SCC nesta linhagem celular, bem como a capacidade de migração das células quando estimuladas com o agonista e antagonista do receptor B1. Posteriormente, induziu-se melanoma em animais selvagens e knockout para o receptor B1 e verificou-se expressão de citocinas, vias de proliferação e apoptose e vascularização nesses tumores a partir técnicas de PCR, western blotting e análise histológica. Observou-se que células B16F10 estimuladas com o agonista do receptor B1, diminuem a capacidade de migração. Tumores desenvolvidos em animais knockout para o receptor B1, possuem uma menor expressão gênica desse receptor quando comparados com tumores desenvolvidos em animais selvagens e apresentam vias de proliferação celular mais ativadas, além de uma vascularização irregular. Considerando esses resultados, sugerimos que o receptor B1 de cininas contribui para o impedimento da progressão tumoral, podendo, futuramente, ser um alvo terapêutico para o tratamento de melanoma.Malignant melanoma is between the cancer types that most have been increased in the last decades, representing a therapeutic challenge. When it is early detected, chances of cure through surgical excisions with secure margins are high. However, advanced cases of melanoma are resistant to all types of therapies; thus, one of the most challenges for research in melanoma is the identification of molecular targets to further develop new strategies of treatment. The ability to blockade the development of a tumor depends on a better understanding of cellular and molecular pathways that operate in the tumor microenvironment. A chronic and persistent inflammation contributes to cancer development, and, even tumors that are not epidemiologically linked to pathogens present inflammatory components in their microenvironment. The Kallicrein-Kinin System (KKS) is responsible for several biological effects, like, vasodilatation, modulation of pain and inflammation, contraction/relaxation of smooth muscles and cell proliferation. The kinin B1 receptor is well related to inflammatory processes, however, the involvement of the KKS in cancer development is, yet, not well described in the literature. Regarding to melanoma, studies relating the involvement of the KKS in melanoma development is still not available. This way, identification of genetic mechanisms and signaling pathways that drive melanoma formation and progression is extremely important for designing rational therapies in the future. Thus, the aim of this study was evaluate the participation of the kinin B1 receptor in melanoma progression. First, in vitro assays with murine melanoma cells, B16F10, were performed to verify the presence of the KKS components in this cell lineage, as well as the capacity of migration when these cells are stimulated with the B1 receptor agonist and antagonist. Then, melanoma was induced in wild type and B1 receptor knockout mice and the expression of cytokines, proliferation and apoptosis pathways and vascularization were studied by PCR, western blotting and histological analyses. We observed that B16F10 cells stimulated with the B1 receptor agonist had their capacity of migration decreased. Tumors developed in B1 receptor knockout mice showed a lower expression of this gene comparing to the tumors developed in wild type animals, also presenting higher activation of proliferation pathways and abnormal vessels. Considering these results, we suggest that the kinin B1 receptor contributes to blockade, at least in part, the tumor progression which can, in the future, become a therapeutic target for melanoma treatment.
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Gonçalves, Jenifer Pendiuk. "Complexos naturais altamente diluídos alteram parâmetros de malignidade em melanoma murino." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2016. http://hdl.handle.net/1884/44991.
Full textAbstract:
Orientador : Profª. Drª. Carolina Camargo de OliveiraCoorientador : Prof. Dr. Edvaldo da Silva Trindade
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 24/03/2016
Inclui referências : f. 74-83
Resumo: O melanoma compreende a maior causa de morte por cancer de pele, pois e altamente refratario as terapias existentes. Celulas tumorais apresentam mutacoes somaticas responsaveis pela ativacao constitutiva de vias de sinalizacao que normalmente seriam ativadas pela interacao de fatores de crescimento com seus receptores. Uma vez ativas em celulas de melanoma, essas vias levam a proliferacao continua das celulas e, consequentemente, a progressao da doenca ao promover escape da morte celular, expressao de oncogenes, invasividade, angiogenese e metastase. Alem disso, essas celulas apresentam alteracoes em diversas moleculas de adesao a outras celulas e a matriz extracelular, o que contribui para seu fenotipo agressivo e invasivo. As celulas cancerosas, apesar de suas caracteristicas fenotipicas adquiridas por alteracoes geneticas e epigeneticas, nao agem sozinhas no desenvolvimento da doenca. Os fibroblastos associados ao cancer estao envolvidos em todos os processos que levam as transformacoes fisiologicas que permitem as celulas cancerosas tornarem-se malignas, como a producao de moleculas de matriz extracelular e de proteinas de remodelacao dessa matriz, fornecendo sinais para a sobrevivencia, invasao e proliferacao das celulas cancerosas. Terapias para pacientes portadores de cancer, que utilizam altas diluicoes de compostos naturais, apresentam evidencias de eficacia, levando a melhoria do bem-estar. Nosso grupo de pesquisa tem obtido resultados interessantes com complexos naturais altamente diluidos, denominados M1 ou M8, em especial em melanoma, com estudos in vitro e in vivo. Dessa forma, esse trabalho teve como objetivo entender de que forma M1 ou M8 atuam sobre os mecanismos moleculares de celulas de melanoma murino in vitro, resultando na reducao de suas caracteristicas metastaticas, bem como avaliar se induzem algum tipo de alteracao no processo de comunicacao entre essas celulas cancerosas e fibroblastos. Os resultados obtidos mostraram que o tratamento com M1 foi capaz de reduzir a marcacao das celulas B16-F10 para N-caderina e aumentar para CD54, enquanto M8 reduziu as marcacoes para N-caderina e tambem CD44. Ambos tratamentos nao alteraram a marcacao para NG2, LAMP-1 e ƒÀ-catenina, bem como a ativacao de AKT. Ambos tratamentos com M1 ou M8 reduziram a capacidade das celulas B16-F10 de formar colonias a partir de si. Quando as celulas B16-F10 foram cocultivadas com fibroblastos Balb/3T3 nao houve alteracao na marcacao para CD44 e ƒ¿-SMA apos ambos os tratamentos. M8 foi capaz de inibir a sintese/liberacao de acido hialuronico no sobrenadante da cocultura, bem como a marcacao para N-caderina no extrato celular. Tanto M1 quanto M8 nao causam alteracoes nos padroes de proliferacao e viabilidade quando aplicados sobre os fibroblastos isolados. A atividade da MMP-2 secretada no sobrenadante das culturas nao foi alterada para B16-F10, porem mostrou-se reduzida na cocultura. Com esse trabalho foi possivel demonstrar que os tratamentos com M1 e com M8, alem de seguros possuem atividade seletiva modulando as caracteristicas tumorais, levando-as a um fenotipo de menor malignidade. Palavras-chave: B16-F10. Altas diluicoes. Moleculas de adesao. Comunicacao celular. Microambiente tumoral.
Abstract: Melanoma comprises the leading cause of death from skin cancer, especially because it is highly refractory to existing therapies. Tumor cells exhibit somatic mutations responsible for constitutive activation of signaling pathways that would normally be activated by the interaction of growth factors with their receptors. Once active in melanoma cells, these pathways lead to continued cells proliferation and, therefore, the disease progression by promoting cell death scape, oncogene expression, cell survival, invasiveness, angiogenesis and metastasis. Moreover, these cells present changes in several adhesion molecules to other cells and to the extracellular matrix that contributes to their aggressive and invasive phenotype. Cancer cells, despite their phenotypic characteristics acquired by genetic and epigenetic alterations, do not act alone in the development of the disease. Cancer-associated fibroblasts are involved in all the processes leading to physiological changes that allow cancer cells to become malignant, such as the production of extracellular matrix molecules, and its remodeling, providing survival signals, and promoting cancer cells invasion and proliferation. Therapies for cancer patients using high dilutions of natural compounds present evidence of efficacy leading to improved welfare. Our research group has obtained interesting in vitro and in vivo results with highly diluted natural complexes, called M1 and M8, particularly in melanoma studies. Thus, this study aimed to understand how M1 and M8 act on the molecular mechanisms of murine melanoma cells in vitro, resulting in reduced metastatic characteristics and also assess whether they induce changes in the communication process between these cancerous cells and fibroblasts. The results showed that treatment with M1 was able to reduce B16-F10 cells labeling for N-cadherin and increase to CD54, while M8 reduced N-cadherin and CD44 labeling. No alterations were observed on NG2, LAMP-1, ?-catenin, and AKT activation; on the other hand, B16-F10 colony formation capacity was decreased by both treatments. When B16-F10 cells were co-cultured with Balb/3T3 fibroblasts there were no changes in CD44 and ?-SMA labeling after both treatments. M8 was able to inhibit hyaluronic acid synthesis/release by cells to coculture supernatant, as well as N-cadherin cell expression. Fibroblasts proliferation and viability were not altered by any treatment. The activity of MMP-2 secreted into the cultures supernatant was not changed for B16-F10 alone but was reduced in coculture with fibroblasts. The current work demonstrated that treatments with M1 and M8 are safe and have selective activity modulating tumor characteristics, leading to a less malignant phenotype. Keywords: B16-F10. High dilutions. Adhesion molecules. Cell communication. Tumor microenvironment.
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Ferreira, Lucas Souza [UNESP]. "Avaliação da apoptose e resposta Th17 em modelo murino de esporotricose." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2014. http://hdl.handle.net/11449/121837.
Full textAbstract:
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000819693.pdf: 840249 bytes, checksum: e9fee68251a03d59293c0127b9197308 (MD5)A descoberta recente das células T “helper” 17 (Th17) e de inúmeros outros subtipos de células Th expandiu o paradigma Th1/Th2, que persistia desde sua introdução por Mosmann e colaboradores em 1986, mas que não fornecia explicação suficiente para uma série de condições homeostáticas e patológicas. Definidas caracteristicamente pela expressão do fator de transcrição “retinoic acid receptor-related orphan receptor” γt (RORγt) e pela produção de interleucina (IL)- 17, as células Th17 são potentes indutoras de inflamação tecidual, com reconhecido papel no combate a bactérias e fungos extracelulares e na manutenção da homeostasia em mucosas. Apesar disso, o interesse pelo seu estudo veio do papel central que desempenham no desenvolvimento de condições inflamatórias crônicas importantes como esclerose múltipla, artrite reumatóide e doença de Crohn, razão pela qual têm sido alvo de novas e promissoras terapias especificamente voltadas para o seu bloqueio. Nesse sentido, tem importância profilática a identificação de patógenos oportunistas cuja eliminação dependa da resposta Th17 e que possam representar risco a pacientes submetidos a terapias anti-Th17. Conforme mostramos aqui pela primeira vez, este é o caso do fungo Sporothrix schenckii, causador da esporotricose, e que até agora apresentava importância clínica quase que exclusivamente limitada a pacientes imunodeprimidos, quer seja como consequência do tratamento farmacológico da rejeição a transplantes ou contra o câncer, ou por imunodeficiências primárias ou adquiridas diversas. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a participação da resposta Th17 na infecção por S. schenckii e qual o grau de importância desta para a capacidade do animal eliminar a infecção. Para isso, nós desenvolvemos um modelo de infecção sistêmica por S. schenckii em camundongos e avaliamos o desenvolvimento das células e a produção de ...
The discovery of T helper 17 (Th17) cells, along with many other Th cell subsets in the recent years, has expanded the Th1/Th2 paradigm that had persisted since its proposition by Mosmann and colleagues in 1986. Defined by the characteristic expression of the transcription factor retinoic acid receptor-related orphan receptor γt (RORγt) and production of interleukin (IL)-17, Th17 cells are powerful inducers of tissue inflammation with a recognized role against extracellular bacteria and fungi and in the maintenance of mucosal homeostasis. Despite all this, the interest in their study came from the pivotal role they play in the development of major chronic inflammatory conditions such as multiple sclerosis, rheumatoid arthritis and Crohn’s disease, reason why they have been the target of promising new therapies specifically aimed at their blockade. Accordingly, the identification of opportunistic pathogens whose clearance relies on the Th17 response is of huge prophylactic importance, for they could become a risk for patients subjected to anti-Th17 therapies. As shown here for the first time, this applies to Sporothrix schenckii, the agent of sporotrichosis, whose clinical importance was, until now, almost exclusively limited to immunodepressed individuals, either as a consequence of pharmacological treatment against transplant rejection or cancer, or due to various primary or acquired immunodeficiency disorders. In light of the above, the aim of this study was to assess the role of the Th17 response in the S. schenckii infection and its importance for the animal’s ability to eliminate the infection. In order to do that, we developed a murine model of S. schenckii systemic infection and assessed the development and effector cytokines production from Th17 cells. Additionally, the Th17 response’s importance for infection control was assessed by treating mice with an anti-IL-23p19 neutralizing monoclonal antibody, which was aimed at ...
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Ferreira, Lucas Souza. "Avaliação da apoptose e resposta Th17 em modelo murino de esporotricose /." Araraquara, 2014. http://hdl.handle.net/11449/121837.
Full textAbstract:
Orientador : Iracilda Zeppone CarlosBanca: Fernanda de Freitas Anibal
Banca: Angela Maria Victoriano de Campos Soares
Banca: Ana Marisa Fusco Almeida
Banca: Danielle Cardoso Geraldo Duharte
Resumo: A descoberta recente das células T "helper" 17 (Th17) e de inúmeros outros subtipos de células Th expandiu o paradigma Th1/Th2, que persistia desde sua introdução por Mosmann e colaboradores em 1986, mas que não fornecia explicação suficiente para uma série de condições homeostáticas e patológicas. Definidas caracteristicamente pela expressão do fator de transcrição "retinoic acid receptor-related orphan receptor" γt (RORγt) e pela produção de interleucina (IL)- 17, as células Th17 são potentes indutoras de inflamação tecidual, com reconhecido papel no combate a bactérias e fungos extracelulares e na manutenção da homeostasia em mucosas. Apesar disso, o interesse pelo seu estudo veio do papel central que desempenham no desenvolvimento de condições inflamatórias crônicas importantes como esclerose múltipla, artrite reumatóide e doença de Crohn, razão pela qual têm sido alvo de novas e promissoras terapias especificamente voltadas para o seu bloqueio. Nesse sentido, tem importância profilática a identificação de patógenos oportunistas cuja eliminação dependa da resposta Th17 e que possam representar risco a pacientes submetidos a terapias anti-Th17. Conforme mostramos aqui pela primeira vez, este é o caso do fungo Sporothrix schenckii, causador da esporotricose, e que até agora apresentava importância clínica quase que exclusivamente limitada a pacientes imunodeprimidos, quer seja como consequência do tratamento farmacológico da rejeição a transplantes ou contra o câncer, ou por imunodeficiências primárias ou adquiridas diversas. Diante disso, o objetivo desse estudo foi avaliar a participação da resposta Th17 na infecção por S. schenckii e qual o grau de importância desta para a capacidade do animal eliminar a infecção. Para isso, nós desenvolvemos um modelo de infecção sistêmica por S. schenckii em camundongos e avaliamos o desenvolvimento das células e a produção de ...
Abstract: The discovery of T helper 17 (Th17) cells, along with many other Th cell subsets in the recent years, has expanded the Th1/Th2 paradigm that had persisted since its proposition by Mosmann and colleagues in 1986. Defined by the characteristic expression of the transcription factor retinoic acid receptor-related orphan receptor γt (RORγt) and production of interleukin (IL)-17, Th17 cells are powerful inducers of tissue inflammation with a recognized role against extracellular bacteria and fungi and in the maintenance of mucosal homeostasis. Despite all this, the interest in their study came from the pivotal role they play in the development of major chronic inflammatory conditions such as multiple sclerosis, rheumatoid arthritis and Crohn's disease, reason why they have been the target of promising new therapies specifically aimed at their blockade. Accordingly, the identification of opportunistic pathogens whose clearance relies on the Th17 response is of huge prophylactic importance, for they could become a risk for patients subjected to anti-Th17 therapies. As shown here for the first time, this applies to Sporothrix schenckii, the agent of sporotrichosis, whose clinical importance was, until now, almost exclusively limited to immunodepressed individuals, either as a consequence of pharmacological treatment against transplant rejection or cancer, or due to various primary or acquired immunodeficiency disorders. In light of the above, the aim of this study was to assess the role of the Th17 response in the S. schenckii infection and its importance for the animal's ability to eliminate the infection. In order to do that, we developed a murine model of S. schenckii systemic infection and assessed the development and effector cytokines production from Th17 cells. Additionally, the Th17 response's importance for infection control was assessed by treating mice with an anti-IL-23p19 neutralizing monoclonal antibody, which was aimed at ...
Doutor
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AIRES, André de Lima. "Susceptibilidade in vitro e in vivo de estágios evolutivos de Schistosoma mansoni frente a ß-lapachona." Universidade Federal de Pernambuco, 2013. https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/11678.
Full textAbstract:
Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T14:57:02Z
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FACEPE - Fundação de Amparo à Pesquisa de Pernambuco
Uma a cada trinta pessoas é portadora de esquistossomose ao redor do mundo. Atualmente, o praziquantel (PZQ) é o único medicamento recomendado para o tratamento e controle da esquistossomose. Embora seguro e eficaz, é preocupante disponibilizar apenas uma droga para o tratamento de uma doença que afeta milhões de pessoas. Além disso, o PZQ apresenta baixa atividade contra esquistossômulos, vermes jovens e vermes fêmeas adultas e diversos estudos alertam para uma possível seleção de cepas Schistosoma-resistentes e/ou tolerantes a esse fármaco. Isso nos encoraja a contribuir com novos estudos para preservar o PZQ. Inicialmente desenvolvida como droga anti-tumoral, ß-lapachona (ß-lap), orto-naftoquinona lipofílica de ocorrência natural, análogo semi-sintético do lapachol, tem recebido muita atenção da comunidade científica devido a sua ampla atividade biológica. As naftoquinonas, incluindo β-Lap, têm se mostrado ativas contra o S. mansoni bloqueando a penetração cercariana quando aplicados topicamente e também atuando como cercaricida; inibindo a glicólise aeróbica de vermes adultos; alterando a motilidade e superfície do tegumento dos vermes e atuando como moluscicida contra adulto e massas de ovos de Biomphalaria glabrata. O presente estudo fornece, pela primeira vez, conclusões sobre as propriedades esquistossomicida in vitro e in vivo de ß-lap. Nos ensaios in vitro a mortalidade, motilidade e alterações no tegumento observadas por microscopia eletrônica de varredura foram utilizadas como parâmetros esquistossomicida. Em modelo murino avaliamos os efeitos esquistossomicida da ß-lap sobre esquistossômulo de pele, esquistossômulo pulmonar, vermes jovens e vermes adultos. In vitro a morte do parasito foi precedida por progressivo dano na superfície da membrana, caracterizado por descamação do tegumento, redução dos espículos, formação de bolhas, ruptura e aparecimento de erosão na superfície tegumentar. Além disso, intenso edema generalizado, áreas de rachaduras com superfície rugosa, sulcos e aparente fibrose, também foram visualizadas na porção anterior do verme. O número de parasitos mortos foi concentração e tempo dependentes. ß-Lap reduziu significativamente (p < 0,001) a carga parasitária total em 29,78%, 37,2%, 24,2% e 40,22%, quando administrado in vivo durante as fases de esquistossômulo de pele, esquistossômulo pulmonar, vermes jovens e vermes adultos, respectivamente. Redução significativa também foi alcançada na carga de vermes fêmeas para os mesmos esquemas \terapêuticos. Em todos os grupos, houve redução significativa no número de ovos e granulomas no tecido hepático. A intervenção, realizada durante a fase de vermes adultos, reduz o tamanho dos granulomas hepático e percentual de ovos imaturos, além de aumentar a porcentagem de ovos maduros e mortos. O emprego de novas formulações contendo ß-lap abrem perspectivas de novos estudos que visem aumentar sua atividade e elucidar seu mecanismo de ação, além de utilizá-la como protótipo para a síntese de novos derivados naftoquinônicos com potencial esquistossomicida.
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Fedele, Thiago Antonio. "Análise metabolômica de animais portadores de melanoma murino B16F10 por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN)." Universidade de São Paulo, 2012. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5160/tde-22012013-165318/.
Full textAbstract:
O metaboloma é definido como a coleção qualitativa e quantitativa de todos os metabólitos de baixa massa molecular presentes nas células, os quais participam de reações bioquímicas necessárias para a manutenção, crescimento e fisiologia celular. A avaliação metabolômica permite o delineamento do processo bioquímico de sistemas a fim de ampliar o entendimento de como as patologias se manifestam. A Espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) é usada para investigar uma variedade de processos biológicos em diversos sistemas. A magnética aplicada a células e biópsias de tecido intacto de melanoma murino B16F10 contribuiu para a caracterização bioquímica de biomarcadores das diferentes fases de progressão tumoral do melanoma murino B16F10. Os resultados obtidos neste estudo permitiram a identificação de 33 metabólitos possíveis, envolvidos na carga lipídica e no metabolismo secundário da via glicolítica, que favorecem o crescimento e a progressão tumoral. A presença da taurina, prolina, serina, fenilalanina, que aumentaram quantitativamente, são possíveis marcadores da invasão, progressão e metastatização. A análise quantitativa desses metabólitos mostrou diferença significativa em 11 compostos, dos quais 9 estão diretamente envolvidos na expressão das respostas proliferativas, de morte celular e angiogênese, nos diferentes períodos de crescimento do melanoma B16F10, avaliados neste estudo. Desta forma, os achados obtidos neste estudo, quando associados no futuro a outros fatores, poderão ser úteis no diagnóstico e auxiliar na escolha terapêutica alvo com maior especificidade e menores efeitos colaterais. RMN pode ter um importante impacto na monitorização de metabólitos em células e tecidos tumorais, possibilitando a detecção mais precoce de tumores malignos, em suma, através da combinação de métodos de ressonância magnética.The metabolome is defined as the qualitative and quantitative collection of all low weight molecular metabolites in cells that participate in biochemical reactions necessary for the maintenance, growth and physiology of cell. The metabolomic evaluation allows the design of systems of biochemical process in order to broaden the understanding of how diseases manifest. The Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy (NMR) is used for investigating a variety of biological processes in several systems. The magnetics applied to cell and tissue biopsies intact murine melanoma B16F10 contributed to the biochemical characterization of biomarkers of different stages of tumor progression of murine melanoma B16F10. The results obtained in this study allowed the identification of 33 potential metabolites involved in lipid content in the secondary metabolism of the glycolytic pathway, which promote growth and tumor progression. The presence of taurine, proline, serine, phenylalanine, which quantitatively increased, is possibly markers of invasion and metastasis progression. Quantitative analysis of these metabolites showed a significant difference in 11 compounds, of which 9 are directly involved in the expression of proliferative responses, cell death and angiogenesis in different periods of growth of B16F10 melanoma, evaluated in this study. Thus, the findings from this study, when associated in the future with other factors, may be useful in the diagnosis and may assist in choosing therapeutic target with greater specificity and fewer side effects. NMR may have a significant impact on monitoring metabolites in tumor cells and tissues, allowing for earlier detection of malignant tumors; in short, by combining MRI methods.
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Pàez, Ribes Marta. "La resistencia adaptativa a terapias antiangiogénicas en un modelo murino de cáncer." Doctoral thesis, Universitat de Barcelona, 2011. http://hdl.handle.net/10803/37912.
Full textAbstract:
Los objetivos de este estudio son:
1. Caracterización de la resistencia a la inhibición farmacológica de la angiogénesis:
a. Caracterización de la resistencia a la inhibición selectiva de la vía VEGF/VEGFR2.
b. Caracterización de la resistencia al tratamiento antiangiogénico con un inhibidor multidiana de receptores tirosina quinasa.
2. Caracterización del efecto antiangiogénico y sus consecuencias tras el tratamiento con un inhibidor de vías angiogénicas independientes de VEGF.
3. Estudio de las causas de la invasión tras recibir tratamiento antiangiogénico.
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Christ, Ana Paula Guarnieri. "Modulação da resposta alérgica por BCG recombinante em modelo murino de asma." Universidade de São Paulo, 2008. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-10032009-130929/.
Full textAbstract:
Asma alérgica é uma inflamação pulmonar crônica mediada por células Th2. A Hipótese da Higiene é a teoria aceita para explicar o aumento das alergias nas últimas décadas e preconiza que a menor exposição dos indivíduos a componentes microbianos prejudica a geração mecanismos imunorregulatórios. Nosso estudo abordou a modulação da resposta alérgica pulmonar induzida por ovalbumina, por cepas de bacilo Calmette-Guérin recombinantes (rBCG) que expressam fragmentos de toxinas bacterianas. Observamos que dependendo do antígeno heterólogo expresso, a imunização intranasal com rBCG pode levar tanto a supressão como a exacerbação da resposta alérgica pulmonar. Demonstramos que tanto em um contexto profilático quanto terapêutico, rBCG é capaz de suprimir os parâmetros alérgicos, e a supressão não envolve o recrutamento de células T regulatórias, é um fenômeno local, está associada a maior produção de IFN-g do que IL-4 e é dependente de IL-12. Estes dados sugerem que a infecção pulmonar por rBCG gera um milieu capaz de bloquear a migração de células Th2 inflamatórias.Allergic asthma is an atopic disorder mediated by Th2 cells. The Hygiene Hypothesis is the accepted theory to explain the increasing in allergy in recent deacades. It states that modern health care and hygiene practices have led to a reduced exposure to microorganisms components which impairs the generation of immunoregulatory mechanisms. The present study analysed how the intranasal infection with recombinant bacillus Calmette-Guérin (rBCG) strains expressing fragments of bacterial toxins could modulate an allergic pulmonary inflammation induced by ovalbumin. We demonstrated that the rBCG strains could supress or exacerbate the allergic inflammation depending on the expressed heterologous antigen. We analysed the effect of the mycobacterial infection in a prophylactic and in a therapeutical contexts, and we have identified that for both situations the of supression allergic features does not involve the recruitment of regulatory T cells to the lungs, is a local phenomena, is associated with an increased production of IFN-g, and is an IL-12 dependent mechanism. Taken togheter, this data suggest that the rBCG pulmonary infection generates a milieu capable to supress the chemotaxis for Th2 cells, which suppress the establishment of the allergic inflammation in the lungs.
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Andrade, Luciana Nogueira de Sousa. "Evidência da dualidade funcional de galectina-3 no crescimento de melanoma murino." Universidade de São Paulo, 2007. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-21062007-095821/.
Full textAbstract:
Tumores são definidos como microambientes compostos não só pelas células malignas, mas também por células endoteliais, fibroblastos e leucócitos, que promovem o crescimento tumoral e a angiogênese. Galectina-3, uma proteína que se liga a b- galactosídeos, é abundantemente expressa por monócitos/macrófagos, dentre outros leucócitos. Inúmeras evidências sugerem que galectina-3 atua como uma molécula reguladora da resposta inflamatória. Tendo em vista que o infiltrado inflamatório pode promover a progressão de tumores, o objetivo do presente trabalho foi avaliar se galectina-3, expressa tanto pela célula tumoral como pelas células estromais, modula o crescimento de melanoma. Para tal, células de melanoma murino Tm1 foram transfectadas com o gene de galectina-3. Ambos clones celulares (galectina-3 positivos e negativos) foram injetados na intrafáscia ou no subcutâneo de camundongos (fêmeas) C57BL/6 selvagens e/ou nocautes para o gene de galectina-3 para análise da implantabilidade e crescimento tumoral. Com relação à implantabilidade, não foi observado diferenças no estabelecimento de uma massa tumoral proliferativa em animais selvagens inoculados com células Tm1 transfectadas ou não com o gene de galectina-3 em animais selvagens. Em relação a taxa de crescimento dos tumores, nenhum animal nocaute inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentou tumores de dimensões mensuráveis até o 11º dia pós-inóculo. Independente do nível de expressão de galectina- 3 pela célula tumoral, os tumores originados nos animais nocautes apresentavam menor massa em gramas comparados ao grupo selvagem, sugerindo que galectina-3 expressa pelas células estromais promove o crescimento tumoral. Ainda, os tumores originados nos animais nocautes e no grupo selvagem inoculado com células Tm1 galectina-3 positivas apresentavam menor extensão de área necrótica do que os animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. Interessantemente, os animais selvagens e nocautes inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas apresentaram tumores com menor área vascular e menor número de estruturas vasculares funcionais quando comparados aos animais selvagens inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas. A análise de expressão gênica nos tumores mostrou que os níveis relativos de RNAm de VEFG (fator de crescimento de endotélio vascular) foram menores nos animais inoculados com células Tm1 galectina-3 positivas em relação aos inoculados com células Tm1 galectina-3 negativas, indicando que galectina-3 expressa pelas células tumorais atua como uma molécula anti-angiogênica. Finalizando, o presente trabalho sugere que galectina-3 pode atuar como uma molécula pró- ou anti-tumoral, dependendo do tipo celular que a expressa no microambiente tumoral.Tumors have been described as microenvironments composed not only by malignant cells, but also by endothelial cells, fibroblasts and leukocytes, which can promote tumor growth and angiogenesis. Galectin-3, a b-galactoside binding protein, is expressed by monocytes/macrophages and others leukocytes. In fact, several lines of evidence suggest that galectin-3 act as master regulators of the inflammatory response. Based on the fact that the inflammatory infiltrate can promote tumor progression, the proposal of this study was to evaluate if galectin-3, either from tumor or stromal cells could modulate melanoma growth. Tm1 murine melanoma cell line was transfected with the galectin-3 gene. Both clones (galectin-3 negative and positive) were injected in the foot pad or subcutaneous in female C57BL/6 wild-type (WT) and galectin-3 knock-out (KO) mice to tumor engraftment and growth analysis. There was no difference in the tumor engraftment between animas injected with Tm1 galectin-3 positive or negative cells. In addition, any knock-out mice injected with galectin-3 positive cells had measurable tumors up to day 11 post inoculation. Regardless the galectin-3 expression level in the melanoma cell, tumors from galectin-3 KO mice were smaller than those from WT animals, suggesting that galectin-3 expressed by stromal cells promotes tumor growth. Moreover, tumor necrotic area was smaller in KO mice and in wild-type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to wild type animals injected with Tm1 galectin-3 negative cells. Interestingly, both vascular area and the number of functional vessels in animals injected with galectin-3 positive Tm1 cells were smaller in WT as well as in KO mice compared to the same animals injected with galectin-3 negative Tm1 cells. Gene expression analysis showed that VEGF (vascular endothelial growth factor) mRNA levels were smaller in wild type animals injected with Tm1 galectin-3 positive cells compared to those injected with Tm1 galectin-3 negative cells, indicating that galectin-3 expressed by tumor cells can act as an anti-angiogenic molecule. The present study suggests that galectin-3 can act either as a pro or antitumoral molecule, depending on which type of cell (tumoral or stromal) this lectin is expressed within tumor microenvironment.
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Cabral, Fernanda Viana. "Estudo da terapia fotodinâmica no tratamento de Leishmaniose cutânea em modelo murino." Universidade de São Paulo, 2017. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85134/tde-05052017-145507/.
Full textAbstract:
Leishmaniose é uma zoonose desenvolvida por protozoários do gênero Leishmania. A doença se manifesta sob a forma visceral e cutânea cujo tratamento apresenta diversas limitações como alto custo, elevada toxicidade dos fármacos e altos índices de recidiva. A leishmaniose cutânea abrange lesões destrutivas e ulceradas que podem evoluir para condições mais graves culminando em óbito dos hospedeiros acometidos. Tratamentos alternativos tem sido implementados com a finalidade de proporcionar acessibilidade financeira e menores efeitos colaterais aos pacientes. A terapia fotodinâmica se insere nesse contexto devido à praticidade, custo reduzido, mínima toxicidade e sem relatos de resistência descritos na literatura. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica em leishmaniose cutânea induzida em camundongos BALB/c infectados com leishmaniose cutânea. A otimização da PDT também foi avaliada pela administração de doadores de óxido nítrico (S-nitroso-MSA) encapsulados em nanopartículas de quitosana (CSNPs), já que esse composto é altamente reativo e potencialmente tóxico para o parasito. Camundongos BALB/c foram infectados no membro posterior esquerdo com 1.106 promastigotas de Leishmania (L) amazonensis que expressam o gene da luciferase e acompanhados por 4 semanas até o surgimento da lesão. Após esse período, os animais foram distribuídos em 6 grupos (n=4): Controle (não tratado), PDT1 (submetidos à uma sessão de PDT), PDT2 (duas sessões ), PDT1NPNO e PDT2NPNO (uma sessão e duas sessões de PDT em associação com S-nitroso-MSACPNPS, respectivamente), e NPNO (somente S-nitroso-MSA-CP NPS). A segunda sessão foi realizada 24 h após a primeira. A PDT foi efetuada usando um diodo emissor de luz (LED, λ=660 ± 22 nm) e azul de metileno (100 μM), com densidade de energia de 150 J/cm2. O progresso da doença foi avaliado por meio do tamanho da lesão e escala de dor utilizando um paquímetro e filamentos von Frey, respectivamente. A carga parasitária foi quantificada por intermédio do bioimageamento nas primeiras 96 h após o tratamento e nas 4 semanas seguintes. Os resultados obtidos demonstraram redução na carga parasitária durante o período experimental, com exceção do grupo PDT1NPNO. Houve redução parasitária significante em 72 h e 96 h para os grupos PDT2, PDT2NPNO e NPNO. A maior redução da lesão foi observada para o grupo PDT2 bem como menor sensibilidade ao estímulo doloroso. Nossos resultados indicam efeitos benéficos da PDT em duas sessões, sugerindo que pode ter ocorrido modulação do processo inflamatório. Entretanto, o uso das nanopartículas nas condições utilizadas nesse experimento não foi capaz de otimizar a eficiência da PDT nos animais infectados com Leishmania (L) amazonensis.Leishmaniasis is a zoonotic disease developed by protozoa of genus leishmania. There are two dominant forms including visceral and cutaneous manifestations in which treatments are limited because of price, toxicity and resistance. Cutaneous leishmaniasis (CL) promotes destructive and ulcerated lesions that might intensify to a more severe symptom that could lead to patient death. Alternative treatments have been studied to promote reduction of side effects, cost and higher efficacy for the hosts. Photodynamic therapy has been introduced once the technic is practical, less expensive and with no resistance described in literature. Additionally, several studies indicate that the administration of exogenous NO donors represents an interesting strategy against cutaneous leishmaniasis. The aim of this work was to evaluate the effects of photodynamic therapy on cutaneous leishmaniasis in BALB/c mice. Besides, the optimization of PDT was evaluated through its association with encapsulated NO donors (S-nitroso-MSA) in chitosan nanoparticles (CSNPs) on CL in BALB/c mice using real time bioluminescence. In addition, we monitored lesion size progression and hyperalgesia. Promastigotes of L. (L) amazonensis transgenic line expressing luciferase were used. BALB/c mice were infected in the left footpad with 1.106 promastigotes. After 4 weeks, mice were randomly assigned to 6 experimental groups (n=4): Control (non-treated), PDT1 (submitted to one PDT session) PDT2 (submitted to two PDT sessions), (PDT1NPNO and PDT2NPNO (submitted to one and two PDT sessions following S-nitroso-MSA-CSNPs, respectively) and NPNO (treated only with S-nitroso-MSA-CSNPs). The second PDT session was performed 24 h after the first. PDT was performed using a red LED (λ= 660±22 nm), MB (100 μM) and fluence of 150 J/cm2. Disease progression was evaluated once a week for 4 weeks by measuring lesion size with a caliper and hyperalgesia with von Frey filaments. Parasite burden was analyzed through luciferase detection by bioimaging, every day, in the first 96 h and then for the next 4 weeks. Test groups presented significant reduction in parasite load compared to control during all experimental period except for PDT2NPNO. Our results indicate that two PDT sessions were more efficient suggesting a modulation of the inflammatory process. However, under these conditions, our results demonstrate that CSNPs were not able to enhance MB-mediated PDT efficiency on parasite burden on L. (L) amazonensis-induced CL in mice.
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Cabral, Priscilla Carvalho. "Desenvolvimento de modelo experimental murino para o estudo da imunobiologia do melanoma." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42133/tde-16112016-093857/.
Full textAbstract:
O câncer compreende uma doença multifatorial responsável por altíssimos indíces de mortalidade globalmente. Embora atualmente tenhamos resultados positivos em relação ao tratamento do câncer principalmente voltados à imunoterapia, dados alarmantes ainda são encontrados. Assim, desenvolvemos linhagens tumorais geneticamente modificadas para expressarem ovalbumina (mOVA ou cOVA) e luciferase, a fim de estudarmos as interações do sistema imune com o tumor. Em nossos resultados, a presença da ovalbumina indicou: Alteração no perfil de crescimento tumoral em animais previamente imunizados com OVA e posteriormente desafiados com o tumor, ativação de células TCD8+ citóxicas anti-OVA além de demonstrar também a capacidade imunogênica das linhagens tumorais quando estas são administradas nos animais em estado necrótico. Ao todo, nosso modelo demonstrou que estratégias de vacinação anti-tumorais possuem a capacidade de ativação do sistema imune para na otimização do reconhecimento e resposta anti-tumoral.Cancer is characterized as a multifactorial disease responsible for many deaths globally. Although nowadays we can find positive perspectives regarding cancers treatment, it is still very common to notice some alarming data. Therefore, our group developed some genetically modified tumoral lineages expressing ovalbumin (mOVA or cOVA) together with luciferase, in order to elucidate the relationship between tumor and the immune system. In our results, the presence of ovalbumin demonstrated: Changes in tumoral growth when animals were previously immunized with OVA and then challenged with our tumoral lineages; TCD8+ lymphocytes anti-OVA activation thus ovalbumin immunogenic potential when lineages were exposed to necrotic death followed by in vivo administration. In summary, our model showed that anti-tumoral vaccinations are indeed capable of promoting immune systems activation and consequently, improving the anti-tumor immunity.
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Corr?a, Laura Trevizan. "Efeitos citot?xicos de resolvinas da s?rie D em glioma murino." Pontif?cia Universidade Cat?lica do Rio Grande do Sul, 2015. http://tede2.pucrs.br/tede2/handle/tede/6174.
Full textAbstract:
Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-06-25T11:34:05Z
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471145 - Texto Completo.pdf: 583122 bytes, checksum: b9760b9161356a851110fa2f73635187 (MD5)Made available in DSpace on 2015-06-25T11:34:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 471145 - Texto Completo.pdf: 583122 bytes, checksum: b9760b9161356a851110fa2f73635187 (MD5) Previous issue date: 2015-03-09
Glioblastoma multiform (GBM) is a highly aggressive tumor of the central nervous system and has a few available therapies. In GBM, proinflammatory signaling pathways, such as STAT3 and NF- ?B are aberrantly activated and associated with cell proliferation, survival, invasion and resistance to chemotherapy. Therefore, inhibition of these pro-inflammatory pathways has been suggested as a strategy to combat malignant cells. Resolvins of D-series promote resolution of inflammation by decreasing the activation of NF-?B. The Resolvin D2 (RvD2) is derived from a double sequence of docosahexaenoic acid lipoxygenation, which is derived from the essential fatty acid Omega-3. Our hypothesis is that the resolvins, by direct or indirect inhibition of pro-inflammatory pathways, could compromise the survival and growth of glioma. Our goal is to assess the role of RvD2 and its precursor 17 (R) HDHA (HR17) on tumor cell proliferation and survival in murine glioma model. For this, murine glioma cell line (GL261) was treated in vitro with RvD2 and HR17, and cell death and proliferation were evaluated. Furthermore, the effect of RvD2 and HR17 was evaluated in vivo after GL261 brain implantation; histopathological characteristics and immunohistochemistry for activated caspase-3 were evaluated to. It was found that RvD2 GL261 induces apoptosis in vitro. Furthermore, in vivo treatment of RvD2 and HR17 increased the number of tumor cells positive for activated caspase-3, although not alter tumor area. Interestingly, the HR17 treatment reduces tumor mitotic index in vivo. These results suggest that RvD2 and HR17 have a potential role in the induction of apoptosis in murine glioma cells.
Glioblastoma multiforme (GBM) ? um tumor altamente agressivo do Sistema Nervoso Central e possui poucas terapias dispon?veis. Em GBM, vias de sinaliza??o pr?-inflamat?rias, como da STAT3 e NF-?B, s?o aberrantemente ativadas e associadas com a prolifera??o celular, sobreviv?ncia, invas?o e resist?ncia ? quimioterapia. Por conseguinte, a inibi??o dessas vias pr?inflamat?rias tem sido sugerida como uma estrat?gia para combater as c?lulas malignas. As resolvinas da s?rie D promovem resolu??o da inflama??o diminuindo a ativa??o de NF-?B. A Resolvina D2 (RvD2) deriva de uma sequencia de dupla lipoxigena??o do ?cido docosahexaen?ico, o qual ? derivado do ?cido graxo essencial Omega-3. Nossa hip?tese ? que as resolvinas, por inibi??o direta ou indireta de vias pr?-inflamat?rias, poderiam comprometer a sobreviv?ncia e o crescimento do glioma. Nosso objetivo consiste em avaliar o papel da RvD2 e de seu precursor 17(R)HDHA (HR17) sobre a prolifera??o de c?lulas tumorais e sobreviv?ncia em um modelo de glioma murino. Para isso, a linhagem de c?lulas de glioma murino (GL261) foi tratada in vitro com RvD2 e HR17, e amorte celular e prolifera??o foram avaliadas. Al?m disso, o efeito de RvD2 e HR17 foi avaliado in vivo ap?s o implante de GL261 no c?rebro, avaliando-se caracter?sticas histopatol?gicas e a imunohistoqu?mica para caspase-3 ativada. Verificou-se que RvD2 induz apoptose de GL261 in vitro. Al?m disso, o tratamento de RvD2 e HR17 in vivo aumentou o n?mero de c?lulas tumorais positivas para caspase-3 ativada, embora n?o alterassem a ?rea do tumor. Curiosamente, o tratamento HR17 reduz o ?ndice mit?tico tumoral in vivo. Estes resultados sugerem que RvD2 e HR17 t?m um potencial papel na indu??o de apoptose em c?lulas de glioma murino.
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Bordignon, Juliano. "Genomica funcional da neurovirulência por vírus dengue sorotipo-1 em modelo murino." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2009. http://hdl.handle.net/1884/18567.
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Andrade, Lucas Ferrari de. "Avaliação da ação do medicamento M1 sobre o melanoma murino "in vivo"." reponame:Repositório Institucional da UFPR, 2012. http://hdl.handle.net/1884/28352.
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Castro, André Peres Barbosa de [UNESP]. "Produção de antígeno de Toxoplasma gondii em células de sarcoma murino TG180." Universidade Estadual Paulista (UNESP), 2007. http://hdl.handle.net/11449/98347.
Full textAbstract:
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castro_apb_me_botfmvz.pdf: 208554 bytes, checksum: 0ef69e5e00358dd8ecdb9255b9ddff62 (MD5)Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP)
A toxoplasmose é uma protozoonose causada pelo Toxoplasma gondii, de distribuição mundial e que acomete todos os animais homeotérmicos, incluindo o homem. Apresenta desde quadros assintomáticos a manifestações sistêmicas graves. Nos seres humanos a infecção atinge com maior gravidade principalmente indivíduos imunocomprometidos e gestantes, sendo que a primoinfecção, pode levar a óbitos, abortamentos, natimortos além de lesões severas do sistema nervoso central. Técnicas sorológicas precisas de fácil aplicação a campo e de menores custos, podem auxiliar na promoção de medidas de prevenção e controle, mas para isso é importante garantir a produção de antígenos em quantidade e de qualidade, a fim de atender as necessidades do método empregado, para garantir a sua padronização. A produção in vitro de taquizoítos de T.gondii usando células de sarcoma murino TG180 em histoculturas, mostra-se uma alternativa viável para a produção de antígeno de T. gondii, em quantidade e qualidade para uso no diagnóstico dessa infecção utilizando-se o Método de Aglutinação Direta, o que pode permitir sua difusão como um teste rápido a campo, possibilitando a sua utilização por profissionais autônomos ou unidades de saúde, podendo-se assim agilizar com uma maior rapidez as ações de prevenção dessa zoonose.
Toxoplasmosis is one protozoonosis caused by Toxoplasma gondii, of world-wide distribution and that acomete to all the animals, including the man. It presents since without symptoms until serious clinical manifestations. In the human beings the infection reaches with bigger gravity immunocompromised patients individuals mainly and pregnant woman, being that the primary infecction, it can take the deaths, abortions, stillborn beyond severe injuries of the central nervous system. Serologicals techniques of easy application in the field and of lesser costs, can assist in the promotion of measures of prevention and control, but for this it is important to guarantee the production of antigens in amount and quality, in order to take care of the necessities of the employed method to guarantee its standardization. The production in vitro of taquizoitos of T.gondii using cells of sarcom murine TG180 in histoculture, reveals to a viable alternative for the antigen production of T. gondii, in amount and quality for use in the diagnosis of this infection by the Direct Agglutination Test, what it can allow its diffusion as a fast test in the field, allowing its use for independent professionals or units of health, and thus allowing to a bigger rapidity in the actions of prevention of this zoonose.
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Santos, Junior André Avelino dos. "Papel do receptor P2X7 em modelo murino de infecção por Mycobacterium tuberculosis." Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, 2012. http://hdl.handle.net/10923/1395.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2012Tuberculosis (TB) remains a leading cause of death worldwide, due to the great adaptability of the bacillus, which can survive in various conditions inside and outside the human host. Previous studies showed evidence that polymorphisms in P2X7 receptor are e associated with increased risk of TB. The present study aimed to analyze the role of purinergic P2X7 receptor in M. tuberculosis infection and host interaction mechanisms in vitro and in vivo. The macrophage murine cell line RAW 264. 7 was used for in vitro experiments. Our results demonstrated that treatment of RAW 264. 7 cells with ATP (3 and 5 mM) resulted in a statistically significant reduction of counting colony forming units (CFUs). Male wild-type C57BL/6 (wild-type) and P2X7 receptor KO (P2X7R-/-) mice (25–30 g) were used throughout this study for in vivo. Immunohistochemistry showed that the purinergic P2X7 receptor expression was found significantly augmented in the lungs of mice infected with M. tuberculosis. Furthermore, M. tuberculosis-infected P2X7R-/- mice showed an increase of M. tuberculosis burden in lung tissue, when compared to infected wild type mice. Infected mice showed a marked increase in the spleen weight, in comparison to non-infected animals, indicating the occurrence of splenomegaly. In P2X7R-/- spleens, we observed a significant decrease in the populations of Treg (CD4+Foxp3+), T cells (CD4+, CD8+CD25+ and CD4+CD25+), dendritic cells (CD11c+) and B220+ cells. However, a significant increase in CD11b+ cells was observed in P2X7R-/- mice, when compared to wild-type animals. In the lungs, P2X7R-/- M. tuberculosis-infected mice exhibited pulmonary infiltrates containing an increase of Treg cells (CD4+Foxp3+), T cells (CD4+ and CD8+) and a decrease in the B220+ cells, when compared with wild-type M. tuberculosis-infected mice. The findings observed in the present study provide novel evidence on the role of P2X7 receptors in the pathogenesis and control of tuberculosis. Whether selective agonists or antagonists of this receptor might be useful for improving TB complications remains a matter to be investigated.
A tuberculose (TB) continua sendo uma das principais causas de morte no mundo, devido à grande capacidade de adaptação do bacilo que pode sobreviver em diferentes condições dentro e fora do hospedeiro humano. Estudos prévios mostraram evidências de que polimorfismos no receptor purinérgico P2X7 estão associados ao aumento da suscetibilidade à TB. O presente estudo objetivou analisar o papel do receptor purinérgico P2X7, na infecção por M. tuberculosis em camundongos, e os possíveis mecanismos de interação do receptor P2X7 com o hospedeiro, em modelos in vivo e in vitro. Nos experimentos para avaliação da viabilidade da micobacteria intracelular in vitro foi utilizada a linhagem de macrófagos murinos, RAW 264. 7. Nossos resultados demonstraram que o tratamento das células RAW 264. 7 com ATP (3 e 5 mM) resultou em uma redução estatisticamente significativa da contagem de unidades formadoras de colônias (CFUs). Nos experimentos in vivo foram utilizados camundongos machos C57BL/6 (tipo selvagem) e camundongos knockout para o receptor P2X7 (P2X7R-/-) (25-30 g). Os resultados com imuno-histoquímica mostraram que a expressão do receptor purinérgico P2X7 foi encontrada significativamente aumentada nos pulmões de camundongos infectados com M. tuberculosis. Além disso, camundongos P2X7R-/- infectados com M. tuberculosis mostraram um aumento da carga da micobacteria no tecido pulmonar, quando comparado com camundongos do tipo selvagem infectados. Camundongos infectados mostraram um aumento marcante no peso do baço quando comparado com animais não infectados, indicando a ocorrência de esplenomegalia. Em baços de camundongos P2X7R-/-, observou-se uma diminuição significativa nas populações de Treg (CD4 + Foxp3 +), células T (CD4 +, CD8 + CD25 + e CD4 + CD25 +), células dendríticas (CD11c +) e células + B220. No entanto, houve um aumento significativo de células CD11b + em camundongos P2X7R-/-, quando comparados aos animais do tipo selvagem. Nos pulmões, camundongos P2X7R-/- infectados com M. tuberculosis apresentaram infiltrado pulmonar contendo um aumento de células Treg (CD4 + Foxp3 +), células T (CD4 + e CD8 +) e uma diminuição nas células + B220, quando comparado com camundongos do tipo selvagem infectados com M. tuberculosis. Portanto, os resultados observados no presente estudo fornecem novas evidências sobre o papel dos receptores P2X7 na patogênese e controle da tuberculose. O uso de agonistas ou antagonistas seletivos deste receptor como uma ferramenta terapêutica continua sendo uma questão a ser investigada.
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Schmidt, Camila Zanelatto Parreira. "Estudo de novos modelos experimentais em doença pulmonar alérgica em modelo murino." Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, 2011. http://hdl.handle.net/10923/4670.
Full textAbstract:
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Previous issue date: 2011Introduction: Animal models studies of asthma have been criticized because of some limitations. Protocols with features and remote results of human asthma are widely used, mainly because of the need to use adjuvant and intraperitoneal administration of allergens for sensitization. Aims: We have tested alternative protocols using animal models of acute and chronic asthma, with features closer to human disease, using OVA without adjuvant. Methods: Adult female BALB/c mice were used and divided into groups according to sensitization with OVA. The acute model used two doses of OVA subcutaneously (s. c. ) without adjuvant, on days 0 and 7, and after intranasal (i. n. ) challenge for consecutives three days, compared with a standard protocol using three doses of OVA for sensitization. The chronic model also used OVA s. c. for sensitization, adjuvant-free, on days 0 and 14, and after i. n. challenge, 3 times a week, for consecutives eight weeks. Total (TCC) and differential cell counts from bronchoalveolar lavage (BAL) and histopathology of the lungs were performed 24 hours after the last OVA challenge. Results: In the two models of protocols studied, acute and chronic, we have observed similar allergic pulmonary response between the groups. Cell counts and histological analysis of lung tissue showed no significant difference between groups. Conclusion: the use of sensitization with OVA s. c., with no adjuvant, resulted in an expected allergic pulmonary response, with predominant eosinophils. These protocols may be a future option to animal models of asthma closer to the human disease, both in the acute and chronic patterns.
Introdução: estudos em modelos animais de asma têm sido criticados devido a algumas limitações. Protocolos com características e resultados distantes da asma em humanos são muito utilizados, principalmente devido à necessidade do uso de adjuvante e administração intraperitoneal do alergeno para sensibilização. Objetivo: testar alternativas de protocolos com modelos animais de asma aguda e crônica que apresentem características mais próximas da doença em humanos, utilizando OVA livre de adjuvante.Métodos: foram utilizadas fêmeas adultas de camundongos BALB/c, divididas em grupos de acordo com as sensibilizações com OVA. O modelo agudo utilizou duas doses de OVA subcutânea (s. c. ), sem adjuvante, com intervalo de 7 dias, com posterior desafio intranasal (i. n. ) durante 3 dias, comparado ao protocolo padrão que utiliza 3 doses de OVA intraperitoneal (i. p. ), no período de sensibilização. O modelo crônico também utilizou OVA s. c. livre de adjuvante para sensibilização, com intervalo de 14 dias e posterior desafio i. n., 3 vezes por semana, durante 8 semanas. Contagem total (CTC) e diferencial de células no lavado broncoalveolar (LBA) e análise histológica dos pulmões foram realizadas 24 horas após o último desafio com OVA. Resultados: nos dois modelos estudados, agudo e crônico, observamos uma resposta eosinofilica pulmonar semelhante entre os grupos. Contagem de células e análise histológica do tecido pulmonar não apresentaram diferença significativa entre os grupos estudados. Conclusão: o uso de sensibilização s. c. com OVA, sem adjuvante, resulta em uma significativa resposta inflamatória pulmonar alérgica, com predomínio de eosinófilos, podendo ser uma opção futura para experimentos mais próximos ao modelo humano, tanto na fase aguda, como na fase crônica da doença.
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Castro, André Peres Barbosa de. "Produção de antígeno de Toxoplasma gondii em células de sarcoma murino TG180 /." Botucatu : [s.n.], 2007. http://hdl.handle.net/11449/98347.
Full textAbstract:
Orientador: Helio LangoniBanca: Márcia Marinho
Banca: Antônio Carlos Paes
Resumo: A toxoplasmose é uma protozoonose causada pelo Toxoplasma gondii, de distribuição mundial e que acomete todos os animais homeotérmicos, incluindo o homem. Apresenta desde quadros assintomáticos a manifestações sistêmicas graves. Nos seres humanos a infecção atinge com maior gravidade principalmente indivíduos imunocomprometidos e gestantes, sendo que a primoinfecção, pode levar a óbitos, abortamentos, natimortos além de lesões severas do sistema nervoso central. Técnicas sorológicas precisas de fácil aplicação a campo e de menores custos, podem auxiliar na promoção de medidas de prevenção e controle, mas para isso é importante garantir a produção de antígenos em quantidade e de qualidade, a fim de atender as necessidades do método empregado, para garantir a sua padronização. A produção in vitro de taquizoítos de T.gondii usando células de sarcoma murino TG180 em histoculturas, mostra-se uma alternativa viável para a produção de antígeno de T. gondii, em quantidade e qualidade para uso no diagnóstico dessa infecção utilizando-se o Método de Aglutinação Direta, o que pode permitir sua difusão como um teste rápido a campo, possibilitando a sua utilização por profissionais autônomos ou unidades de saúde, podendo-se assim agilizar com uma maior rapidez as ações de prevenção dessa zoonose.
Abstract: Toxoplasmosis is one protozoonosis caused by Toxoplasma gondii, of world-wide distribution and that acomete to all the animals, including the man. It presents since without symptoms until serious clinical manifestations. In the human beings the infection reaches with bigger gravity immunocompromised patients individuals mainly and pregnant woman, being that the primary infecction, it can take the deaths, abortions, stillborn beyond severe injuries of the central nervous system. Serologicals techniques of easy application in the field and of lesser costs, can assist in the promotion of measures of prevention and control, but for this it is important to guarantee the production of antigens in amount and quality, in order to take care of the necessities of the employed method to guarantee its standardization. The production in vitro of taquizoitos of T.gondii using cells of sarcom murine TG180 in histoculture, reveals to a viable alternative for the antigen production of T. gondii, in amount and quality for use in the diagnosis of this infection by the Direct Agglutination Test, what it can allow its diffusion as a fast test in the field, allowing its use for independent professionals or units of health, and thus allowing to a bigger rapidity in the actions of prevention of this zoonose.
Mestre
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Silva, Teane Milagres Augusto da. "Identificação de genes envolvidos na patogênese de Brucella ovis em modelo murino." Universidade Federal de Minas Gerais, 2010. http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9HJMZW.
Full textAbstract:
Brucella ovis is one of the main causes of reproductive failure in sheep. Due to the scarcity of studies of B. ovis infection in the mouse, a murine model of infection was developed in this study. BALB/c or C57BL/6 male mice were inoculated intraperitoneally with 106CFU of B. ovis and fragments of the spleen, liver and genital tract were collected for bacteriology, histopathology and immunohistochemistry. Both mice strains had similar kinetics of B. ovis infection and developed microgranulomas in the liver and spleen, with low numbers of intralesional immune-stained B. ovis. There was minimal colonization of genital tract in both mice strains, resulting in mild periorchitis or periepididimytis, indicating that B. ovis does not have a clear tropism for the genital tract in the mouse. However, the mouse is a suitable infection model for B. ovis. Additionally, B. ovis mutant strains were generated by deletion of virB2 gene (nonfunctional T4SS), deletion of putative hemagglutinin or deletion of ORFs encoding an ABC transporter. ABC and virB2 mutant strains were attenuated for colonization in spleen and liver when compared to the wild type (WT) strain (p<0.001) at all time points. However, hemagglutinin had wild type levels of colonization in the spleen and liver, suggesting that putative hemagglutinin gene is not required for B. ovis pathogenesis. Additionally, ABC and virB2 survive less than WT (p<0.01) in peritoneal macrophages and extracellularly in the peritoneal cavity. Moreover, ABC transporter and WT virulence were compared in IRF-1-/- male mice. WT infection was 100% lethal to IRF-1-/- mice until 14 dpi, whereas ABC transporter was not lethal. These results confirm the requirement of specific ABC transporter and T4SS for full virulence and survival in vivo of B. ovis.Brucella ovis é uma das principais causas de problemas reprodutivos em ovinos. Considerando a escassez de estudos da cinética de infecção por B. ovis em camundongos, foi desenvolvido neste estudo um modelo murino de infecção. Camundongos machos BALB/c e C57BL/6 foram inoculados com 106UFC de B. ovis, via intraperitoneal, sendo coletados fragmentos de baço, fígado e trato genital para bacteriologia, histopatologia e imunoistoquímica. Ambas as linhagens apresentaram cinética de infecção similar para B. ovis, sendo observados microgranulomas no baço e fígado com discreta imunomarcação de B. ovis. A colonização do trato genital foi mínima, com discreta periorquite e periepididimite, não caracterizando tropismo de B. ovis pelo trato genital masculino em camundongos. Cntudo, o camundongo demonstrou ser bom modelo de infecção para B. ovis. Adicionalmente, cepas mutantes foram construídas a partir da deleção de virB2 (SST4 afuncional), de hemaglutinina ou de ORFs que codificam proteína ABC transportadora. As cepas ABC e virB2 foram atenuadas no baço e fígado de camundongos em todos os tempos. Contudo, hemaglutinina apresentou colonização similar à amostra virulenta, sugerindo que o gene putativo de hemaglutinina não é essencial para patogênese de B. ovis. Adicionalmente, ABC e virB2 sobreviveram menos do que a cepa parental (p<0,01) em macrófagos peritoneais e no meio extracelular. A virulência de ABC e da cepa parental também foram comparadas em camundongos IRF-1-/- machos. A infecção pela cepa parental resultou em 100% de letalidade em IRF-1-/- até 14 dpi, enquanto a infecção pelo mutante não foi letal. Estes resultados confirmam que SST4 e ABC transportador são essenciais para virulência e sobrevivência in vivo de B. ovis.
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CABRAL, FERNANDA V. "Estudo da terapia fotodinâmica no tratamento de Leishmaniose cutânea em modelo murino." reponame:Repositório Institucional do IPEN, 2017. http://repositorio.ipen.br:8080/xmlui/handle/123456789/27962.
Full textAbstract:
Submitted by Marco Antonio Oliveira da Silva (maosilva@ipen.br) on 2017-10-27T12:46:47Z
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Leishmaniose é uma zoonose desenvolvida por protozoários do gênero Leishmania. A doença se manifesta sob a forma visceral e cutânea cujo tratamento apresenta diversas limitações como alto custo, elevada toxicidade dos fármacos e altos índices de recidiva. A leishmaniose cutânea abrange lesões destrutivas e ulceradas que podem evoluir para condições mais graves culminando em óbito dos hospedeiros acometidos. Tratamentos alternativos tem sido implementados com a finalidade de proporcionar acessibilidade financeira e menores efeitos colaterais aos pacientes. A terapia fotodinâmica se insere nesse contexto devido à praticidade, custo reduzido, mínima toxicidade e sem relatos de resistência descritos na literatura. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica em leishmaniose cutânea induzida em camundongos BALB/c infectados com leishmaniose cutânea. A otimização da PDT também foi avaliada pela administração de doadores de óxido nítrico (S-nitroso-MSA) encapsulados em nanopartículas de quitosana (CSNPs), já que esse composto é altamente reativo e potencialmente tóxico para o parasito. Camundongos BALB/c foram infectados no membro posterior esquerdo com 1.106 promastigotas de Leishmania (L) amazonensis que expressam o gene da luciferase e acompanhados por 4 semanas até o surgimento da lesão. Após esse período, os animais foram distribuídos em 6 grupos (n=4): Controle (não tratado), PDT1 (submetidos à uma sessão de PDT), PDT2 (duas sessões ), PDT1NPNO e PDT2NPNO (uma sessão e duas sessões de PDT em associação com S-nitroso-MSACPNPS, respectivamente), e NPNO (somente S-nitroso-MSA-CP NPS). A segunda sessão foi realizada 24 h após a primeira. A PDT foi efetuada usando um diodo emissor de luz (LED, λ=660 ± 22 nm) e azul de metileno (100 μM), com densidade de energia de 150 J/cm2. O progresso da doença foi avaliado por meio do tamanho da lesão e escala de dor utilizando um paquímetro e filamentos von Frey, respectivamente. A carga parasitária foi quantificada por intermédio do bioimageamento nas primeiras 96 h após o tratamento e nas 4 semanas seguintes. Os resultados obtidos demonstraram redução na carga parasitária durante o período experimental, com exceção do grupo PDT1NPNO. Houve redução parasitária significante em 72 h e 96 h para os grupos PDT2, PDT2NPNO e NPNO. A maior redução da lesão foi observada para o grupo PDT2 bem como menor sensibilidade ao estímulo doloroso. Nossos resultados indicam efeitos benéficos da PDT em duas sessões, sugerindo que pode ter ocorrido modulação do processo inflamatório. Entretanto, o uso das nanopartículas nas condições utilizadas nesse experimento não foi capaz de otimizar a eficiência da PDT nos animais infectados com Leishmania (L) amazonensis.
Dissertação (Mestrado em Tecnologia Nuclear)
IPEN/D
Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP
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Figueiredo, Tiana Baqueiro. "Desenvolvimento de modelo experimental de alergia a Blomia tropicalis e suas utilizações em estudos de imunoprofilaxia." reponame:Repositório Institucional da UFBA, 2013. http://www.repositorio.ufba.br/ri/handle/ri/12176.
Full textAbstract:
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T16:54:43Z
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FAPESB; RENORBIO
O ácaro de poeira doméstica Blomia tropicalis é encontrado em regiões tropicais e subtropicais da América, Europa e Ásia, sendo um das mais importantes fontes de aeroalérgenos nestas regiões. Este trabalho teve por objetivo o desenvolvimento de um modelo experimental de alergia a B. tropicalis e sua utilização em estudos de imunoprofilaxia. Para isto, quatro linhagens de camundongos foram sensibilizadas e desafiadas com extrato de B. tropicalis (Bt) sendo considerados como marcadores de inflamação pulmonar e de resposta Th2 a elevação do número de leucócitos, da atividade de peroxidase de eosinófilos e de IL-4 no lavado bronqueoalveolar (BAL) e da atividade de peroxidase de eosinófilos no pulmão, bem como elevação de IgE sérica específica para Bt. A linhagem A/J foi considerada a mais sensível a inflamação pulmonar induzida pelo sendo utilizada nas análises subseqüentes. O modelo de alergia experimental ao B. tropicalis foi utilizado então para a investigação do efeito da imunização com adjuvantes em desempenhar papel protetor ao desenvolvimento da alergia experimental. Entre os diversos candidatos a adjuvantes testados destacaram-se a saponina e o CpG emulsionados em montanide ISA 720 por proteger os animais da inflamação pulmonar induzida pela sensibilização com Bt, embora a resposta imune estimulada por esses adjuvantes seja aparentemente mista com produção de citocinas Th1 e Th2. Visando a utilização de um antígeno mais purificado partimos para o fracionamento do Bt por cromatografia líquida de troca iônica. As frações obtidas foram inicialmente analisadas quanto ao papel hipersensibilizante para o ser humano, através de dosagem de IgE específica para cada fração obtida no soro de indivíduos com teste cutâneo positivo para B. tropicalis e em indivíduos controle. A fração que apresentou maior reatividade frente aos soros positivos (74,3%) foi utilizada no modelo murino como agente sensibilizante. Observamos então que a fração do Bt utilizada foi efetiva em promover resposta inflamatória pulmonar em alguns dos critérios analisados, no entanto não foi observada produção de IL-4 no BAL nem IgE específica nos animais. A sensibilização com B. tropicalis induziu em camundongos o desenvolvimento de doença inflamatória pulmonar análoga a asma humana. Oligonucleotídeos CpG e a saponina mostraram-se promissores candidatos a adjuvantes em formulações de vacinas. O fracionamento do extrato de B. tropicalis produziu frações reativas a IgE humana e capazes de promover inflamação pulmonar murina, sendo um bom caminho para a obtenção de antígenos mais purificados.
Salvador
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Cervelló, Alcaraz Irene. "Identificación, caracterización y aislamiento de células madre somáticas del endometrio murino y humano." Doctoral thesis, Universitat de València, 2008. http://hdl.handle.net/10803/10150.
Full textAbstract:
El presente trabajo de investigación tiene como objetivo la identificación de células madre somáticas en el endometrio murino y humano. En la mayoría de los tejidos de individuos adultos, existen pequeñas poblaciones de células indiferenciadas que poseen la capacidad de diferenciarse a tipos celulares maduros, dividiéndose a su vez para mantener el balance necesario de células progenitoras indiferenciadas. Estas células reciben el nombre de células madre somáticas y se caracterizan por ser células indiferenciadas presentes en tejidos u órganos diferenciados; siendo además las encargadas del mantenimiento, regeneración y renovación celular en el lugar dónde residen. Por otro lado, el endometrio es un tejido altamente dinámico con capacidad regenerativa y proliferadora, renovándose mensualmente de novo y así sucesivamente durante cada ciclo menstrual y durante toda la vida reproductiva de la mujer. En este contexto, la hipótesis de partida de este trabajo ha sido que en el endometrio murino y humano debe de existir una población de células madre somáticas responsables de su alta capacidad regenerativa. Este trabajo se ha desarrollado basándose en dos modelos: el murino y el humano.Se elaboró un modelo animal mediante el cual se demuestra la existencia de células madre somáticas en el endometrio del ratón. A los ratones neonatos (3 días de edad) se les admministró 5-Bromo-2-desoxiuridina (BrdU), tras esto los animales fueron sacrificados en diferentes momentos de su vida, entre ellos día 7 (control de la técnica), día 14 (momento del destete), día 21 (madurez sexual) y días 49 en adelante (vida adulta). La localización de las células que retuvieron el marcaje se realizó mediante inmunohistoquímica y además las células que presentaron tinción se co-localizaron con marcadores típicos de células madre como Oct-4 (marcador de células madre embrionarias) y c-Kit (marcador de células madre hematopoyéticas). Los estudios murinos permitieron concluir tanto a nivel proteico como molecular la existencia de una población de células madre somáticas en el endometrio del ratón, encontrándose estas localizadas en la región basal del estroma endometrial. Del mismo modo, en el estudio se realizó el análisis de muestras endometriales humanas para determinar la existencia y presencia de células madre somáticas en este tejido. La técnica de detección de esta población celular se realizó mediante el método del Hoescht y la identificación de la Side Population (SP) por citometría de flujo con capacidad de separación celular. Esta técnica permitió aislar la población SP desde el endometrio humano correspondiente a las fracciones epiteliales y estromales de este tejido. Dicha población fue caracterizada a nivel molecular y presentó marcadores de indiferenciación típicos tal como Oct-4 y c-Kit. Además las células SP aisladas presentaron actividad telomerasa, actividad típica de células inmortales e indiferenciadas. El porcentaje de células SP en el endometrio humano permaneció constante en los rangos de edades estudiadas, sugiriendo así que esta población permanecería estable a lo largo de la vida de la mujer. Ela análisis fenotípico determinó el posible origen mesenquimal de las células aisladas ya que presentaron el marcador de células mesenquimales CD90.Estos avances en la identificación y caracterización de células madre somáticas en el endometrio humano y murino ofrecen un nuevo punto de vista para el estudio de la endometriosis y el cáncer de endometrio; ya que es posible que las células madre somáticas endometriales jueguen un papel fundamental en la fisiopatología de determinadas enfermedades ginecológicas como las anteriormente citadas.Nowadays the identification, characterization and isolation of somatic stem cells in the majority of the tissues/organs have been one of the major challenges carried out by the cellular biology. The endometrium in menstruating and non-menstruating species has cycles of growth, differentiation and regeneration during the reproductive life. In this regard, the concept that endometrial stem cells are responsible for the regenerative capacity of this tissue was proposed many years ago. This study is based in two models: murine and human.Although the mice do not menstruate, in the murine endometrium occurs phenomenon of growth, differentiation, regression and reabsorption. For this reason, in the reproductive and regenerative medicine, the mouse is a well- established animal model for research studies based on the existence of the presence of somatic stem cells in this tissue. A reliable method for identifying the putative endometrial somatic stem cells in murine endometrium is based on the use of 5-brome-2-deoxyuridine (BrdU). Moreover, uteri from BrdU-treated mice were analysed by inmuno-histochemistry in an attempt to co-localize LRCs with undifferentiated markers like c-Kit and Oct-4The Hoechst method and the isolation of the Side Population (SP) are one of the techniques applied to isolate human somatic stem cells from different tissues. In this study we demonstrate the existence of SP cells in the human endometrium. Furthermore, the SP cells isolated expressed typical undifferentiated markers such as c-KIT and OCT-4 at mRNA levels, and they have an intermediate profile of telomerase activity between human embryonic stem cells line and differentiated cells. The phenotypic analysis of this SP population is suggestive of a putative mesenchymal origin (CD90+).
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Silva, Calliandra Maria de Souza. "Caracterização das bases moleculares da resposta imune inata do hospedeiro murino à paracoccidiomicose." reponame:Repositório Institucional da UnB, 2015. http://dx.doi.org/10.26512/2015.10.T.19650.
Full textAbstract:
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Departamento de Biologia Celular, 2015.Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-02-29T16:31:53Z No. of bitstreams: 1 2015_CalliandraMariadeSouzaSilva.pdf: 5665217 bytes, checksum: 9f6e99bb7df736ed20ba2e9203882c3c (MD5)
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A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença endêmica, considerada a micose sistêmica mais prevalente no Brasil. A resposta ao agente etiológico, o fungo Paracoccidioides spp. é multifatorial e complexa, sendo que a natureza da resposta imune inicial, ou inata, resultará em um padrão de suscetibilidade ou resistência à PCM. Este estudo teve como principal foco a análise dos padrões moleculares de suscetibilidade ao P. brasiliensis, comparando as diferenças na resposta de células importantes na primeira linha de defesa ao fungo, por meio da análise da expressão gênica, em duas linhagens de camundongo: uma suscetível (B10.A) e outra resistente (A/J). Para isto, células dendríticas (BMDC) e macrófagos polarizados (M1-like, GM-BMM, e M2-like, M-BMM), derivados da medula óssea dessas duas linhagens murinas, foram co-cultivados, na ausência ou na presença de leveduras de P. brasiliensis. Após 6 horas, de co-cultivo, o RNA das BMDCs foi extraído e empregado em análises transcritômicas em larga escala (RNA-seq). As análises preliminares validam a qualidade das sequências obtidas e asseguram seu uso nas etapas subsequentes das análises dos dados gerados pelo experimento de RNA-seq. Dentre os genes descritos como diferencialmente expressos entre o grupo controle (não infectado) e o grupo experimental, oito tiveram sua expressão validada por qRT-PCR. Os genes diferencialmente expressos em ambas as linhagens foram agrupados por ontologia gênica e vias de KEGG para fornecer um panorama geral da reprogramação do transcritoma em resposta à infecção por P. brasiliensis. Em resumo, as BMDCs da linhagem A/J montam uma resposta controlada com poucos genes diferencialmente expressos em relação à condição controle. Já, as BMDCs da linhagem B10.A apresentam uma resposta intensa, com uma maior variação de expressão diferencial de genes. Neste trabalho, também avaliamos o impacto da polarização de macrófagos no modelo murino de PCM. Em geral, independente da linhagem de camundongos, os macrófagos com polarização similar a M2 (M-BMM), mostraram-se mais bem equipados para combater o fungo, apresentando o aumento nos níveis de transcritos de quimiocinas e citocinas. Ainda sobre o padrão desta resposta de macrófagos do tipo M2, também foi observado que comparado a B10.A, os M2-like de A/J desenvolveram uma resposta mais efetiva quanto ao controle da infecção, tendo sido também observado o aumento nos níveis de transcritos associados às vias de transdução de sinal dos TLRs, Dectina-1 e complemento, entre ouros. Por outro lado, os macrófagos com a diferenciação similar a M1 (GM-BMM) de ambas as linhagens de camundongo aumentaram os níveis dos transcritos de IL-2, IL-6, IL-10, IL-12 e TNF-α quando comparados aos M-BMMs (tipo M2) infectados. GM-BMMs de B10.A mostrou uma diminuição nos níveis de alguns transcritos associados às vias de sinalização a partir de TLRs, Dectina-1 e complemento, entre outros PRRs anti-fúngicos, quando comparados aos GM-BMMs da linhagem A/J.
Paracoccidioidomycosis (PCM), a rural and suburban endemic disease, is considered the most prevalent systemic mycosis in Brazil. The response to its etiological agent (Paracoccidioides spp.) is multifactorial and complex. However, the manner in which the initial response is developed will determine if the patient presents a resistance or susceptibility to this infection. The focus of this study was to analyze the molecular patterns of susceptibility to P. brasiliensis infection, by comparing the differences in gene expression of cells of a susceptible (B10.A) and a resistant (A/J) mice strain, important in the first line of defense, in response to this fungus. To this end, dendritic cells (BMDC) and polarized macrophages (M1-like, GM-BMM, and M2-like, M-BMM) derived from the bone marrow of both murine strains were co-cultured with P. brasiliensis. After 6 hours co-culture, the RNA extracted from dendritic cells were sequenced by RNA-seq. Preliminary analysis of the RNA-seq data validated the quality of the sequences obtained and therefore ensured their use in subsequent steps of analysis. Of these, the expression of eight genes, up-regulated and/or not modulated, were validated by qRT-PCR. The genes differentially expressed in both strains were grouped then by gene ontology and KEGG pathways to provide an overview of the transcriptome reprogramming to P. brasiliensis infection. In summary, the BMDCs of the A/J strain mounts a controlled response with few differentially expressed genes relative to the control condition. While, the BMDCs of B10.A strain presents a more intense response with a wider range of differential gene expression. In this work, we also evaluated the impact of macrophage polarization in the murine model of PCM. In general, regardless of mouse strain, macrophages with M2-type polarization (M-BMM), proved to be better equipped to fight the fungus, with increase transcripts accumulation of chemokines and cytokines. Even within this polarazition, in comparison with B10.A M-BMMs, A/J M-BMMs developed a more effective control of infection, being also observated an increase in the transcripts levels associated with the signal transduction of TLRs, Dectin-1, complement, and others. Moreover, the macrophages with type M1 differentiation (GM-BMM) infected with P. brasiliensis of both mouse strains increased transcript levels of IL-2, IL-6, IL-10, IL-12 and TNF-α when compared to infected M-BMMs (M2 type). B10.A GM-BMM showed a decrease in the levels of some transcripts associated with TLR, Dectin-1 and complement signaling pathways, and other associated antifungal PRRs when compared to A/J GM-BMM.
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Bastos, Débora Campanella 1981. "Efeitos da inibição da atividade de FASN sobre a linfangiogenese em modelo murino." [s.n.], 2009. http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/290693.
Full textAbstract:
Orientador: Edgard GranerDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-13T01:25:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bastos_DeboraCampanella_M.pdf: 5817801 bytes, checksum: cdb6cd787fadb415e31229779a0f07d9 (MD5) Previous issue date: 2009
Resumo: A enzima ácido graxo sintase (FASN) é responsável pela síntese endógena de ácidos graxos, e tem alta expressão em diversas neoplasias malignas, pois sua atividade parece ser necessária para a síntese dos fosfolipídios de membrana das células tumorais. A droga orlistat (Xenical®), usada para tratamento de obesidade, foi recentemente descrita como tendo propriedades anti-neoplásicas em câncer de próstata, mama e melanoma devido à sua capacidade de bloquear especificamente a atividade de FASN. O tratamento de células endoteliais com orlistat bloqueia a síntese de ácidos graxos e inibe a proliferação e a neovascularização em ensaio ex vivo, o que sugere um papel antiangiogênico. O sistema linfático é o componente da circulação responsável pela drenagem do fluido intersticial e é essencial no funcionamento do sistema imunológico além disso os vasos linfáticos são também a via primária de metástase de várias neoplasias malignas, dentre elas o melanoma, neoplasia maligna originada nos melanócitos da pele ou mucosas que apresenta alto índice de metástases e é resistente à quimioterapia. A linfangiogênese (formação de novos vasos linfáticos) é iniciada pela liberação de fatores de crescimento que induzem a proliferação e aumento de permeabilidade das células endoteliais linfáticas. Os fatores de crescimento VEGF-C e VEGF-D e seus receptores VEGFR-2 e VEGFR-3 estão relacionados com a progressão tumoral. Existe uma correlação positiva entre a linfangiogênese e a presença de metástase em linfonodos sentinela e uma correlação inversa com a sobrevida livre de doença, o que indica que vasos linfáticos representam um alvo para avaliação do prognóstico ou terapia contra metástases. Em trabalho recente realizado por nosso grupo, foi demonstrado que o tratamento de camundongos portadores de melanomas intraperitoneais causados pela injeção de células B16-F10 com orlistat reduziu em 50% o número de metástases para linfonodos mediastínicos. Como não há informação na literatura sobre a relação de FASN e linfangiogênese, nosso trabalho teve comoobjetivo principal estudar o efeito da inibição da enzima FASN na neoformação linfática em modelos experimentais, através da injeção de células de melanoma murino B16-F10 nas orelhas de camundongos C57Bl6 e indução de reação inflamatória através de feridas circulares nas orelhas de camundongos Balb-C. Por meio de microlinfangiografia fluorescente, técnica que permite a visualização de vasos linfáticos através da injeção intradérmica de uma solução de dextrano a 1% marcado com FITC e avaliação da rede linfática no programa Scion Image, foi observado que a densidade de vasos linfáticos nas orelhas dos camundongos Balb-C e C57Bl6 tratados com orlistat aumentou em relação ao grupo controle. Em resumo nossos resultados mostram que a inibição de FASN com orlistat aumenta a extensão, ramificação e/ou permeabilidade dos linfáticos em região peritumoral (ou ao redor de feridas cirúrgicas).
Abstract: Fatty acid synthase (FASN) is the metabolic enzyme responsible for the endogenous biosynthesis of fatty acids. FASN is overexpressed in several malignant neoplasms and its activity seems to be necessary for the synthesis of membrane phospholipids in the tumor cells. The drug orlistat (Xenical ®), which is clinically used for the treatment of obesity, have shown anti-cancer properties in prostate and breast cancer and melanoma due to its ability to specifically block FASN activity. It was recently demonstrated that treatment of endothelial cells with orlistat blocks the synthesis of fatty acids and inhibits the proliferation and neovascularization. The lymphatic system is the component of the blood circulation responsible for the drainage of interstitial fluid, what is essential to the function of the immune system. Lymphatic vessels are also the primary route of metastasis in several malignancies such as melanoma, wich is originated in the skin or mucous membranes and shows high rates of metastasis and resistency to chemotherapy. Lymphangiogenesis is initiated by the release of growth factors that induce the proliferation and increased permeability of lymphatic endothelial cells. The growth factors VEGF-C and VEGF-D and their receptors VEGFR-2 and VEGFR-3 have been related with tumor progression. There is a positive correlation between lymphangiogenesis and the presence of metastasis in sentinel lymph nodes. An inverse correlation between lymphangiogenesis and disease-free survival has also been described, suggesting that lymphatic vessels could be a target against metastasis. We have shown, in a recent study done by our group, that the orlistat treatment was able to reduced by 50% the number of experimental melanoma metastasis to mediastinal lymph nodes. Since there is no information in the literature about the effect of FASN inhibition on lymphangiogenesis, the purpose of this work was to study the consequences of the orlistat treatment in lymphatic neoformation by using two experimental models. In the first, B16-F10 murine melanoma cells were injected in the ears of C57Bl6 mice in order to inducelynphangiogenesis around the tumors. In the second model, circular wounds were done in the ears of Balb-C mice to induce a local inflammatory reaction and lymphangiogenesis. Lymphatics vessels were observed with the aid of fluorescent microlymphangiography, that allows the observation of the lymphatic vessels by intradermal injection of a solution of 1% of FITC- conjugated dextran. The extension of the lymphatic network was determined by using the Scion Image software. The density of lymphatic vessels significantly increased in both Balb-C and C57Bl6 mice treated with orlistat in comparison to the controls. Moreover, the size of the primary tumors and metastastic lymph nodes were measured and their volumes calculated. In summary, our results show that the inhibition of FASN with orlistat increases the extension, branching and/or permeability of the lymphatics vessels in the peritumoral region and around surgical wounds.
Mestrado
Patologia
Mestre em Estomatopatologia
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Dias, João Leonardo Rodrigues Mendonça. "Terapia celular do linfedema murino induzido utilizando células-tronco de membrana amniótica humana." Universidade de São Paulo, 2016. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-22032017-113929/.
Full textAbstract:
Linfedema é uma condição crônica que predispõe a uma substancial morbidade e perda da função do órgão ou tecido afetado. Ele não tem cura e em longo prazo leva a dificuldades físicas e psicológicas ao paciente, tornando-se um grande desafio para os médicos. Infelizmente, é triste constatar que aproximadamente 400 anos após a descoberta dos vasos linfáticos, não há cura para o linfedema, sendo o tratamento baseado em drenagem linfática manual através de massagem e limitadas intervenções de fisioterapia, ambas visando redução do volume de edema, o que fornece alívio parcial para os indivíduos afetados que não garantem o desaparecimento da fibrose, aparentemente irreversível. Por isso, estudos que proporcionem novas intervenções, como a terapia celular com células-tronco, são de grande interesse. Neste trabalho tivemos como objetivo realizar terapia celular de linfedema murino utilizando células-tronco da membrana amniótica. Em um primeiro momento, a obtenção do modelo de insuficiência linfática foi feita com base em Tabibiazar et al., 2006 onde uma microablação de 2 mm em toda a circunferência foi feita na cauda do animal. Entretanto, após 30 dias de indução uma regressão espontânea foi observada inviabilizando a utilização deste modelo. Após vasta pesquisa na literatura outro modelo de indução de linfedema (Shimizu et al., 2012) foi encontrado, onde os autores fazem uma microablação cirúrgica, mantendo um flap de 4 mm na região ventral. Neste trabalho os autores obtiveram um linfedema estável por no mínimo 30 dias. Com base nestes achados, o modelo de linfedema murino induzido baseado em Shimizu foi realizado e após a comprovação desta estabilidade por 60 dias, esse modelo foi utilizado para indução do linfedema. Após esta caracterização, os animais que tiveram o linfedema induzido foram submetidos a terapia celular utilizando 0,5X106 células-tronco da membrana amniótica humana (MAh) ou saco vitelino canino (SVc) no momento da indução. Animais sem lesão, com lesão (SHAM) e tratados apenas com solução fisiológica (placebo) também foram analisados. O monitoramento do linfedema na cauda foi feito através de acompanhamento clínico, registro fotográfico e mensura do diâmetro caudal a cada 2-3 dias. Ao final do estudo, os animais foram eutanasiados, tiveram suas caudas removidas e foram submetidos a avaliação dos efeitos terapêuticos da terapia celular através de análise do exsudato, análises histológicas (HE, picrossírius) e imuno-histoquímicas. A histológica obtida por coloração de HE além de apresentar o melhor resultado quando comparado com as demais técnicas, possibilitou avaliar as alterações patológicas pertinentes de cada amostra, revelando efeitos benéficos da terapia quando comparados com SHAM e placebo. Já, a coloração Picrossírius permitiu visualizar além das alterações estruturais, a inversão da predominância da expressão de colágeno do tipo I, por colágeno do tipo III nos tecidos estruturalmente comprometidos. O resultado do conjunto de análises das amostras apresentou o padrão linfedematoso esperado para os grupos SHAM e placebo, porém também mostrou um processo inflamatório muito menor e mais curto nos grupos MAh, e SVc, permitindo sugerir que a terapia celular causou um impacto favorável e os animais apresentaram resultados muito próximos aos padrões exibidos pelo grupo controle.Lymphedema is a chronic condition, which predisposes to substantial morbidity and loss of function of the affected organ or tissue. It has no cure and, in the long term, leads patients to physical and psychological problems, which is a major challenge for doctors. Unfortunately, it is sad to realize that, approximately 400 years after the discovery of the lymphatic vessels, there is no cure for lymphedema. The treatment is based on manual lymphatic drainage through massage and limited physiotherapy interventions. Both techniques aim at reducing the volume of the edema, which provides partial relief for affected individuals, but do not guarantee the disappearance of the fibrosis, which is, apparently, irreversible. Therefore, studies that provide new interventions, such as stem cell therapy, are of great interest. In this study, we carried out induced murine lymphedema using human amniotic membrane stem cells. At first, we obtained the model of lymphatic insufficiency based on Tabibiazar et al., 2006, in which a 2 mm microablation throughout the circumference was made in the tail of the animal. However, after 30 days of induction, a spontaneous regression was observed, making this model unusable. After extensive literature research, another model of lymphedema induction (Shimizu et al., 2012) was found. In this model, the authors perform a surgical microablation, maintaining a 4 mm flap in the ventral region. The authors obtained stable lymphedema for at least 30 days. Based on these findings, the model of induced murine lymphedema, based on Shimizu et al., 2012, was performed and, after proving this stability for 60 days, this model was used for the induction of murine lymphedema. After this characterization, the animals that have had induced lymphedema were subjected to cell therapy using 0.5X106 human amniotic membrane stem cells (MAh) or canine yolk sac (SVc) at the time of induction. Animals without lesion, with lesion (SHAM) and treated only with solution were also analyzed. The monitoring of lymphedema in the tail was done through clinical follow-up, photographic record and caudal diameter measurement every 2-3 days. At the end of the study, the animals were euthanized, had their tails removed, and were subjected to evaluation of the therapeutic effects of the cell therapy through exudate analysis, histological analysis (HE, picrosirius) and immunohistochemistry analysis. The histological obtained by HE staining, besides presenting the best result when compared to the other techniques, allowed to evaluate the pertinent pathological alterations of each sample, revealing beneficial effects of the therapy when compared to SHAM and placebo. Picrosirius staining allowed to visualize, in addition to the structural alterations, the reversal of the predominance of type I collagen expression by type III collagen in structurally compromised tissues. The result of the sample analysis showed the expected lymphomatoid pattern for the SHAM and placebo groups, but also showed a much shorter and shorter inflammatory process in the MAh and SVc groups, suggesting that the cell therapy had an impact and the animals presented results very close to the standards presented by the control group.
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Accetturi, Beatriz Golegã. "Avaliação do papel dos hormônios sexuais femininos em modelo murino de asma experimental." Universidade de São Paulo, 2014. http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42136/tde-12122014-092623/.
Full textAbstract:
Mulheres asmáticas na pós-menopausa podem apresentar piora dos sintomas, portanto neste trabalho investigamos o papel dos hormônios sexuais femininos (HSF) sobre a inflamação alérgica pulmonar. A re-exposição ao antígeno exacerbou a inflamação alérgica pulmonar e a liberação de mediadores no pulmão dos animais alérgicos ovariectomizados (OVx). O valor da reatividade traqueal foi semelhante ao observado nos animais alérgicos Sham/OVx. O tratamento com estrógeno exacerbou a inflamação pulmonar, mas atenuou a reatividade das vias aéreas. O tratamento com progesterona não alterou o número de células do lavado broncoalveolar e atenuou a reatividade das vias aéreas, apesar acentuar a produção de muco e de colágeno. O tratamento com estrógeno em associação com a progesterona atenuou a inflamação pulmonar aos valores encontrados nos animais alérgicos Sham/OVx. Nossos estudos apontam para uma possível dissociação entre os efeitos moduladores dos HSF sobre a resposta inflamatória, notadamente no recrutamento celular e as alterações de mecânica respiratória.Asthmatic postmenopausal women may experience worsening of symptoms, so in this work we investigated the role of female sex hormones (HSF) on pulmonary allergic inflammation. The re-exposure to antigen exacerbated allergic lung inflammation and release of mediators in the lungs of ovariectomized allergic mice (OVX ) . The value of tracheal reactivity was similar to that observed in allergic Sham/OVx . Treatment with estrogen exacerbated pulmonary inflammation but attenuated airways reactivity. Treatment with progesterone did not alter the number of cells in bronchoalveolar lavage and attenuated airways reactivity, although enhance mucus production and collagen. Treatment with estrogen in combination with progesterone attenuated lung inflammation to the values found in allergic animals Sham/OVx. Our studies point to a possible dissociation between the modulatory effects of HSF on the inflammatory response, especially on cell recruitment and alterations in respiratory mechanic.