Dissertations / Theses on the topic 'Ouabaina'

Ouabain and other cardiotonic steroids are known to inhibit Na + ,K + -ATPase (NKA), theion pump responsible for the ionic gradient across the plasma membrane. These steroidsdisplay a selective toxicity towards several tumour cells in comparison to primary humancells, however, the mechanism behind this is not yet understood. Here, we examined theouabain toxicity in renal epithelial cells, proximal tubular cells (PTCs) of different origin. Weinvestigated the relative cytotoxicity in cancer cells (A-498) and papilloma virus-transformedPTCs (HK-2) as well as to primary human PTCs (hPTC) to validate key components in theeffect. In exposure to ouabain, we examined the cell viability and density by MTT and CrystalViolet assays, and cell migration by a scratch assay. The cytotoxic effect was also studied invarious pH, glucose and potassium ion concentrations. In addition, apoptosis was examinedby the TUNEL assay, and if ouabain kills cancer cells through activation of thevolume-regulated anion channel VRAC channel via NKA. We found that there is a decrease in viable cells when cells are exposed to ouabain ≥ 10nM, however, the effect was not seen to be selective towards cancer cells, nor due toapoptosis and the activation of VRAC. The cytotoxic effect was greater in more acidicextracellular pH ~6.8, but independent of glucose concentration in the medium. Interestingly,the effect was also reversed at an increased extracellular concentration of potassium, andouabain did selectively inhibit the cancer cells to migrate. Thus, there could be potential forouabain to act as an anti-cancer agent for renal cancer and to inhibit tumour metastasization.
Ouabain och andra kardiotoniska steroider är kända för att inhibera Na + ,K + -ATPas (NKA),membranpumpen som är ansvarig för den aktiva jontransporten av natrium och kalium ochjongradienten över plasmamembranet. De har påvisat en selektiv toxicitet mot vissatumörceller i jämförelse med primära humana celler, men det är dock inte förstått hurmekanismen bakom denna företeelse fungerar. I denna studien undersökte vi ouabainstoxicitet i njurcancerceller (A-498) och papillomavirustransformerade proximala tubuliceller(hPTC) för att identifiera effektens nyckelkomponenter. Vid exponering av ouabain undersökte vi cellviabiliteten och -densiteten genom MTT- ochkristallviolett-analyser, samt cellmigrering genom scratch-analys. Den cytotoxiska effektenstuderades också under olika pH-förhållanden samt glukos- och kaliumkoncentrationer.Dessutom undersöktes det om apoptos orsakar celldöd genom TUNEL-analys, och omouabain dödar njurcancerceller genom aktivering av den volymreglerade anjonkanalen(VRAC) via NKA. Vi fann minskning av cellernas livskraft vid exponering av ≥ 10 nM ouabain, men effektentycktes dock inte se ut att vara selektiv gentemot cancerceller, inte heller på grund av apoptosoch aktivering av VRAC. Den cytotoxiska effekten var större vid lägre pH, men oberoendeav mediets glukoskoncentrationen. Intressant nog motverkades också effekten vid förhöjdkoncentration av kaliumjoner, och ouabain hämmade selektivt cancercellerna att migrera.Således finns det en viss potential för ouabain att kunna fungera som ett anticancermedel motnjurcancer och att hämma metastasutveckling.

Made available in DSpace on 2015-05-14T12:59:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 2299557 bytes, checksum: 01deb75646894a343a19a53f79cf2519 (MD5) Previous issue date: 2012-02-15
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
Ouabain (OUA), a potent inhibitor of the Na+,K+-ATPase pump, was identified as an endogenous substance of human plasma. In recent years, ouabain was shown to affect various immunological processes. Mechanisms that involve cellular differentiation, proliferation, activation and migration, as well as inflammatory mediators release, are activated during inflammation and homeostasis is usually reestablished. This study demonstrated the modulatory ability of OUA on inflammatory process. Aim: This study aimed to evaluate ouabain immunomodulatory role on acute inflammatory process using a murine model. Methods: Initially, a dose and time-response curve was performed with OUA (0.10 mg/kg, 0.31 mg/kg and 0.56 mg/kg) intraperitoneally administered on the paw edema induced by zymosan (10 mg/mL). Mice were also intraperitoneally (i.p.) stimulated with zymosan (2 mg/mL). After 4h, the peritoneal fluid was removed for total and differential cell counts. Neutrophils and macrophages population, as well as cell viability, were analyzed using an annexin KIT by flow cytometry. The concentrations of the cytokines IL-1β, TNF-α, IL-6 and IL-10 in peritoneal lavage fluids were assayed using ELISA kit. Ouabain influence in the vascular permeability increase was determined using evans blue dye. OUA, in vitro, influence on nitric oxide (NO) production was also studied. Results: It was observed that OUA 0,56 mg/kg injected for three consecutive days prevented zymosan edema formation . After induction of inflammation, treatment with OUA led to a 42% reduction in the total cell numbers in the peritoneal cavity, as a reflex of the inhibition of polymorphonuclear leukocytes (54%), which was not due to cell apoptosis. Ouabain also decreased zymosan-induced plasma exudation (33%). Furthermore, OUA decreased the levels of TNF-α (64%) and IL-1β (63%), without interference on IL-6 and IL-10 levels. It was also demonstrated, using peritoneal macrophages, that ouabain did not interfere on LPS induced NO production. Conclusion: Ouabain modulated the acute inflammatory response induced by zymosan. However, further studies are necessary to elucidate the mechanisms involved
A ouabaína (OUA), um potente inibidor da Na+/K+-ATPase, foi identificada como uma substância endógena presente no plasma humano. Nos últimos anos, foi evidenciado que a OUA é capaz de interferir em diversos aspectos do sistema imunológico. Durante o processo inflamatório, são ativados mecanismos que envolvem a diferenciação, proliferação, ativação e migração celular, além da liberação de mediadores inflamatórios, e geralmente, ocorre o retorno à homeostasia. Este trabalho demonstrou a capacidade moduladora da OUA no processo inflamatório. Objetivo: Avaliar o papel imunomodulador da OUA na inflamação aguda em modelo murino. Métodos: Inicialmente, foi realizada uma curva de tempo e dose-resposta com a OUA (0,10 mg/kg; 0,31 mg/kg e 0,56 mg/kg) administrada de forma intra-peritoneal (i.p.) no modelo de edema de pata induzido por zimosan (10mg/mL). Os camundongos também foram estimulados com zimosan i.p.(2mg/ml). Após 4h, o fluido peritoneal foi removido para a contagem total e diferencial das células. Foi realizada a análise das populações de neutrófilos e macrófagos, além da viabilidade celular utilizando o kit anexina por citometria de fluxo. As concentrações das citocinas IL-1β, TNF-α, IL-6 e IL-10 no fluido peritoneal foram testadas por ELISA. Foi determinada a interferência do tratamento com a OUA no aumento da permeabilidade vascular. Também foi estudado, in vitro, o efeito de diferentes concentrações de OUA (10 nM, 100 nM e 1000 nM) na produção de óxido nítrico (NO). Resultados: No modelo do edema de pata, observamos que são necessários três dias consecutivos de tratamento na dose de 0,56 mg/kg para que a atividade anti-inflamatória da OUA seja identificada. No modelo de peritonite induzida por zimosan, o pré-tratamento com a OUA reduziu em 42% no número total de células na cavidade peritoneal, como um reflexo da inibição de leucócitos polimorfonucleares (54%). No entanto, este fenômeno não esta associado a apoptose destas células. A OUA também diminuiu o extravasamento de plasma induzido por zimosan (33%) e reduziu os níveis de TNF-α (64%) e IL-1β (63%), sem alterar os níveis de IL-6 e IL-10. Na cultura de macrófagos peritoneais, a OUA não interferiu na produção de NO. Conclusão: Este conjunto de dados sugere que a OUA possui uma atividade anti-inflamatória. No entanto, mais estudos são necessários para elucidar os mecanismos envolvidos.

Tem sido demonstrado que na hipertensão arterial ocorre aumento de ouabaína plasmática, um inibidor da Na+K+-ATPase. Em 1998, Ferrari et al. desenvolveram uma molécula denominada de rostafuroxina, a qual é capaz de antagonizar os efeitos da ouabaína por deslocar a ligação desse glicosídeo com a Na+K+-ATPase. Dentro desse contexto, parece razoável sugerir que um anti-hipertensivo capaz de antagonizar os efeitos da ouabaína possa representar uma nova ferramenta farmacológica para o tratamento da hipertensão arterial. Baseado em tais premissas, o presente estudo avaliou o papel da ouabaína por meio do tratamento com rostafuroxina sobre: a pressão arterial, a reatividade vascular em artérias de resistência e a atividade simpática de ratos DOCA-sal. Os resultados demonstraram que os animais DOCA-sal tratados com rostafuroxina apresentaram redução da pressão arterial sistólica e da hiperatividade simpática e melhora na função vascular. Assim, sugere-se que a ouabaína seja um possível alvo para o tratamento da hipertensão arterial dependente de volume.
It has been shown that some types of hypertension have increased plasma levels of ouabain, a factor inhibitor of Na+K+-ATPase. In 1998, Ferrari et al. developed a molecule called rostafuroxin that antagonizes the effects of ouabain. In this context, it seems reasonable to suggest that an antihypertensive capable of antagonizing the effects of ouabain might be a new and specific pharmacological tool for the treatment of hypertension. In so doing, the present study aimed to evaluate the role of endogenous ouabain by treatment with rostafuroxin on blood pressure, vascular reactivity in resistance arteries and sympathetic activity of DOCA-salt rats. Our data have shown that the treatment with rostafuroxin decreased the systolic blood pressure and sympathetic activity and improve the vascular function of the DOCA-salt rats. Thus, it is suggested that ouabain is a putative target for the treatment of volume-dependent hypertension.

A ouabaína (OUA) promoveu hipertensão arterial (HA) após 5, 10 e 20 semanas de tratamento e modificou a função vascular de artérias mesentéricas de resistência (AMR). O tratamento por 5 semanas com OUA aumentou o óxido nítrico (NO) e a expressão protéica da isoforma neuronal de óxido nítrico (nNOS), ao passo que diminuiu os prostanóides vasoconstritores. Além disso, reduziu a expressão protéica da Cu-Zn superóxido dismutase (SOD) e aumentou a atividade funcional da Na+K+-ATPase. Já o tratamento por 10 semanas com OUA aumentou NO e prostanóides vasodilatadores, enquanto diminuiu a expressão protéica da nNOS e da COX-2. O tratamento por 20 semanas reduziu o NO e a expressão protéica da nNOS. Porém, aumentou o ânion superóxido, o tromboxano A2 e a expressão protéica de ambas: a SOD e a COX-2. Em conclusão, o tratamento com OUA promoveu HA e alterações funcionais em AMR, sendo estas dependentes do tempo analisado, pois no tratamento durante 5 e 10 semanas estas alterações não contribuem para a manutenção da HA, enquanto que o tratamento durante 20 semanas contribui.
Ouabain treatment (OUA) developed hypertension after 5, 10 and 20 weeks and modified the vascular function in mesenteric resistance arteries (MRA). 5-weeks treatment with OUA increased nitric oxide (NO) and neuronal isoform of nitric oxide (nNOS) protein expression. On the other side, this treatment reduced vasoconstrictors prostanoids. Besides decreased Cu-Zn superoxide dismutase (SOD) protein expression and increased functional activity of Na+K+-ATPase. 10-weeks treatment enhance NO and vasodilators prostanoids but reduced both nNOS and COX-2 protein expression. 20-weeks treatment reduced NO and nNOS protein expression. Nevertheless increased anion superoxide, tromboxan A2 and both SOD and COX-2 protein expression. In conclusion, OUA treatment induced HA and functional alterations in MRA that are time-dependents, because in 5 and 10 weeks of treatment these alterations are not likely to maintenance of HA, but the changes observed in the treatment during 20 weeks contributes.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-07-07T15:09:57Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1854233 bytes, checksum: 535d273c615cebce265419e27f74439a (MD5)
Made available in DSpace on 2017-07-07T15:09:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1854233 bytes, checksum: 535d273c615cebce265419e27f74439a (MD5) Previous issue date: 2016-10-17
Ouabain is a cardiotonic steroid initially described as a substance of plant origin. In 1991, the endogenous production of higher mammals was identified and since then their physiological actions have been studied. Work of our group have demonstrated that ouabain modulates the acute inflammatory response induced by different phlogistic agents, also being able to interfere negatively in inflammatory profile triggered by Leishmania (L.) amazonensis. Acute lung injury (ALI) is a serious inflammatory disease characterized by acute inflammation, extensive accumulation of polymorphonuclear leukocytes and accumulation of proinflammatory mediators, which culminates with diffuse alveolar damage and which may cause the patient died due to severe hypoxemia. There is no data in the literature on the effects of ouabain in ALI. Objectives: Evaluate the immunomodulatory effect of ouabain in a murine model of ALI induced by LPS. Methods: BALB / c mice were treated intraperitoneally with ouabain at a dose of 0.56 mg / kg for a period of three consecutive days, 1 hour after the last treatment the animals were challenged intranasally with 40μl of an LPS solution (2 5 mg / kg); 24 hours after challenge, the animals were euthanized, the collected biological sample and inflammatory parameters, including cell migration, protein exudates, cytokine production, TLR4 expression and histopathological changes were then evaluated. Data were analyzed by PRISMA software. Results: The treatment with ouabain decreased total leukocytes migration to the inflamed site (48,84%), this event associated with decreased neutrophil migration (70,71%) and independent of macrophage migration. The ouabain also decreased the exudate protein in the broncho-alveolar region (26,32%) and production of the cytokines TNF-α (14,80%), IL-6 (47,07%) and IL1-β (33,59%), however this reduction in the production of these mediators was not related to the expression of TLR4. Additionally, the ALI histopathology changes were also reduced by treatment with ouabain. Conclusions: The results show that ouabain has anti-inflammatory action in ALI induced by LPS.
A Ouabaína é um esteroide cardiotônico inicialmente descrito como uma substância de origem vegetal. Em 1991, a sua produção endógena por mamíferos superiores foi identificada e desde então suas ações fisiológicas vêm sendo estudadas. Trabalhos do nosso grupo demonstraram que a ouabaína modula a resposta inflamatória aguda induzida por diferentes agentes flogísticos, sendo também capaz de interferir negativamente no perfil inflamatório desencadeado pela Leishmania (L.) amazonensis. A lesão pulmonar aguda (LPA) é uma doença inflamatória caracterizada por inflamação aguda e extenso acúmulo de polimorfonucleares e de mediadores pró-inflamatórios, que culmina com dano alveolar difuso podendo levar o paciente a óbito por hipoxemia severa. Não há dados na literatura sobre os efeitos da ouabaína na LPA. Objetivos: Avaliar o efeito imunomodulador de ouabaína em modelo murino de LPA induzida por LPS. Métodos: Camundongos BALB/c machos foram tratados via intraperitoneal com ouabaína na dose de 0,56 mg/Kg por um período de três dias consecutivos, 1h após o último tratamento os animais foram desafiados via intranasal com LPS (2,5 mg/Kg); 24h após o desafio, os animais foram eutanásiados, as amostras biológicas coletadas e os parâmetros inflamatórios, incluindo migração celular, exsudato proteico, produção de citocinas, expressão de TLR4 e alterações histopatológicas foram então avaliados. Os dados foram analisados pelo software PRISMA. Resultados: O tratamento com a ouabaína diminuiu a migração de leucócitos totais para o sítio inflamado (48,84%), evento este, associado a diminuição da migração de neutrófilos (70,7%) e independente da migração de macrófagos. Ouabaína também diminuiu o exsudato proteico na região bronco-alveolar (26,32%) e a produção das citocinas TNF-α (14,80%), IL-6 (47,07%) e IL1-β (33,59%), entretanto essa redução na produção desses mediadores não mostrou relação com a expressão do TLR4. Adicionalmente, as alterações histopatológicas características da LPA também foram reduzidas pelo tratamento com ouabaína. Conclusões: Os resultados obtidos demonstram que ouabaína possui ação anti-inflamatória na LPA induzida por LPS.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2017-03-30T13:07:06Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3105346 bytes, checksum: 743a49eb2c327b5bb4a178343286d03e (MD5)
Made available in DSpace on 2017-03-30T13:07:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3105346 bytes, checksum: 743a49eb2c327b5bb4a178343286d03e (MD5) Previous issue date: 2016-06-16
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
Ouabain (OUA), a potent Na+/K+ ATPase inhibitor, was identified as an endogenous substance present in human plasma. It was shown that OUA is able to interfere in several aspects of the immune system and inflammation, but the effect of this substance in allergic lung inflammation had not been previously investigated. Lower airways inflammation process is characterized by cell migration and bronchial hyperresponsiveness, as a result of sensitization by protein antigens such as ovalbumin (OVA). Aim: Evaluate the effect of ouabain on the model of allergic pulmonary inflammation induced by OVA. Methods: BALB/c mice (n = 6) were sensitized and challenged with OVA and pretreated intraperitoneally (ip) with OUA (0.56 mg/kg) two days before the sensitization and one hour before them, or dexamethasone (2 mg/kg) subcutaneously 1 hour before to each challenge. Allergic inflammation parameters, such as cell migration, and production of cytokines in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), mucus production and pulmonary histopathologic remodeling, and IgE quantitation were analyzed posteriorly. Results: Ouabain reduced (60%) BALF cells as a reflex of polymorphonuclear leukocyte inhibition and T CD3+ lymphocytes, as well as it reduced the production of Th2 profile cytokines, IL-4 and IL-13. Furthermore, ouabain also reduced histopathologic parameters of inflammation, such as hyperplasia of goblet cells and with consequent mucus decrease, besides it reduced OVA-specific IgE titer. Conclusion: These results suggests that OUA presents anti-inflammatory effect on pulmonary allergic inflammation, modulating Th2 phenotype parameters.
A ouabaína (OUA), um potente inibidor da Na+/K+ ATPase, foi identificada como uma substância endógena presente no plasma humano. Nos últimos anos, foi evidenciado que a OUA é capaz de interferir em diversos aspectos do sistema imunológico e em diferentes modelos de inflamação, porém o seu efeito na inflamação alérgica pulmonar não tinha sido investigado previamente. Processos inflamatórios alérgicos das vias aéreas inferiores são caracterizados por migração celular e hiperresponsividade brônquica, em decorrência da sensibilização por antígenos proteicos como a ovalbumina (OVA). Objetivo: Avaliar o efeito da ouabaína no modelo de inflamação alérgica pulmonar induzida por OVA. Métodos: Camundongos BALB/c fêmeas (n = 6) foram sensibilizados e desafiados com OVA e pré-tratados via intraperitoneal (i.p.) com OUA (0,56 mg/kg) dois dias antes das sensibilizações e uma hora antes destas, ou com dexametasona (2 mg/kg) subcutânea 1 hora antes de cada desafio. Parâmetros da inflamação alérgica, como migração celular e produção de citocinas no fluido do lavado broncoalveolar (BALF), produção de muco e remodelamento histopatológico pulmonar quantificação de IgE sérica, foram analisados posteriormente. Resultados: A ouabaína reduziu em 60% o número total de células presentes no BALF como um reflexo da inibição de leucócitos polimorfonucleares e linfócitos T CD3+, bem como a produção de citocinas do fenótipo Th2, IL-4 e IL-13. Ademais, a ouabaína reduziu os parâmetros inflamatórios histopatológicos, como hiperplasia das células caliciformes com consequente diminuição de muco, além de reduzir o título de OVA-IgE específica. Conclusão: Estes dados sugerem que a OUA apresenta efeito anti-inflamatória no modelo de inflamação alérgica pulmonar, modulando parâmetros do fenótipo Th2.

Contexte: La réponse synchrone des fibres auditives, évaluée à partir de l'onde I des potentiels d'action évoqués auditifs (PEA), ou à partir du potentiel d'action composite (PAC) du nerf auditif, est l'élément clé du dépistage des neuropathies auditives. De récentes études ont toutefois montré que le seuil et l'amplitude de cette réponse pouvaient être absolument normaux malgré une perte importante de fibres du nerf auditif. Dans ce travail de thèse, nous proposons une nouvelle méthode d'exploration fonctionnelle, potentiellement applicable à l'homme, rendant mieux compte du nombre et de l'intégrité des fibres du nerf auditif. Cette méthode a été évaluée à l'aide d'un modèle pharmacologique de neuropathie physiologiquement pertinent.Matériel et méthodes: Chez des gerbilles, une perte sélective de fibres auditives a été induite par application d'une faible concentration d'ouabaïne dans la niche de la fenêtre ronde de la cochlée. Cette neuropathie a ensuite été caractérisée par des comptages de synapses (immunohistochimie/imagerie confocale 3D) et l'enregistrement de l'activité unitaire de fibres du nerf auditif. Les PAC et l'activité soutenue du nerf ont été enregistrés 6 jours après l'application d'ouabaïne, à l'aide d'une électrode de recueil disposée dans la niche de la fenêtre ronde. Résultats: L'application d'ouabaïne induit une perte spécifique des fibres à basse activité spontanée (AS<0,5 potentiel d'action/sec) comme observé au cours du vieillissement et après une surexposition sonore. La disparition de cette population de fibres est indétectable à l'aide du PAC car leur réponse unitaire est à la fois retardée et désynchronisée. Par contre, l'amplitude de la réponse soutenue du nerf se révèle être un bien meilleur indicateur de la perte des fibres à basse activité spontanée. Pour aller plus loin, nous avons mis au point une méthode qui permet d'observer l'activité synchrone et soutenue du nerf auditif dans une même réponse. Cette approche rend compte des trois mécanismes de fusion vésiculaire (libération rapide, lente et soutenue) de la première synapse auditive.Conclusion: L'analyse de la réponse soutenue du nerf auditif est une approche fiable pour déterminer le nombre et le phénotype fonctionnel des fibres qui composent le nerf auditif. Cette méthode, applicable à l'homme, devrait améliorer le dépistage des neuropathies, avec une meilleure différenciation des atteintes d'origine synaptique et/ou neuronale.Mots clés: Cochlée, nerf auditif, potentiel d'action composite, activité soutenue du nerf auditif, enregistrement unitaires, ouabaïne, neuropathie
Background: The synchronous activation of the auditory nerve fibers (ANFs), is commonly studied through the compound action potential (CAP), or the auditory brainstem responses (ABR), to probe deafness in experimental and clinical settings. Recent studies have shown that substantial ANF loss can coexist with normal hearing threshold, and even unchanged CAP amplitude, making the detection of auditory neuropathies difficult. In this study, we took advantage of the round window neural noise (RWNN) to probe ANF loss in a physiologically-relevant model of neuropathy.Material and methods: ANF loss was induced by the application of ouabain onto the round window niche. CAP and RWNN of the gerbil's cochlea were recorded through an electrode placed onto the round window niche, 6 days after the ouabain application. Afferent synapse counts and single-unit recordings were carried-out to determine the degree and the nature of ANF loss, respectively. Results: Application of a low ouabain-dose into the gerbil RW niche elicits a specific degeneration of low spontaneous rate (SR) fibers, as shown by single-unit recordings. Simultaneous recordings (CAP/single-unit) demonstrate that low-SR fibers have a weak contribution to the CAP amplitude because of their delayed and broad first spike latency distribution. However, the RWNN amplitude decreases with the degree of synaptic loss. The RWNN method is therefore more sensitive than CAP to detect low-SR fiber loss, most probably because it reflects the sustained discharge rate of ANFs. Based on these data, we proposed a far-field method (Peri-stimulus time response-PSTR) to assess the fast, slow, and sustain vesicular release at the first auditory synapse.Conclusion: The round window neural noise is a faithful proxy to probe the degree and the SR-based nature of fiber loss. This method could be translated into the clinic to probe hidden hearing loss and orient the practitioner toward synaptopathy and/or neuropathy.Key words: Cochlea, auditory nerve, compound action potential, round window neural noise, single fiber recording, ouabain-induced neuropathy

Preconditioning is the phenomenon whereby tolerance to lethal insults is induced by exposing the tissue to a prior sublethal stimulus. This exists in several forms, such as ischaemic preconditioning, adenosine preconditioning and excitotoxic preconditioning. Adenosine preconditioning is known to be mediated by activation of A1 receptors and ATP-sensitive potassium channels whilst excitotoxic preconditioning mainly involves stimulation of NMDA receptors, nitric oxide and most likely ATP-sensitive potassium channel activation. ATP-sensitive potassium channel openers such as pinacidil and diazoxide are also known to exert preconditioning against various types of insults. There have been several models of ischaemia used to study preconditioning in vivo and in vitro leading to some confusion over the effects of preconditioning agents. High concentrations of glutamate or NMDA have been used as models of excitotoxicity in many experimental paradigms. Some molecular changes are associated with preconditioning phenomena, the most prominent being an increased expression of heat shock protein 72 (HSP72). The aims of the current study were to: 1) investigate the effects of exogenous glutamate and other depolarizing agents in the slice preparation and their validity for use as toxic agents 2) examine any potential preconditioning neuroprotection induced by adenosine against various depolarizing agents and elucidate the underlying mechanisms where relevant 3) examine the excitotoxic preconditioning phenomenon and possible underlying mechanisms 4) look at the effectiveness of other known preconditioning agents e.g. ATP-sensitive potassium channel openers against depolarizing agents and identify the underlying mechanisms of protection 5) identify any molecular changes that may occur during acute models of chemical ischemia or acute preconditioning. The rat hippocampal slice preparation was used to investigate the effects of depolarizing agents and preconditioning paradigms upon the extracellularly evoked field epsps, orthodromic and antidromic population spikes. Western blotting was used to detect any changes in the levels of HSP72 in the slices that may have occurred as a result of the depolarizing agents or the preconditioning treatments. It was first established that 5mM and 10mM glutamate induced depressions in the amplitudes of orthodromic population spikes which recovered to a stable plateau. The degree of recovery of the spikes depended partially upon the initial size of the response. As adenosine is known to be released in response to glutamate receptor stimulation, the effects of 5mM glutamate upon the orthodromic spikes were studied in the presence of the A1 receptor antagonist, DPCPX. It was observed that DPCPX did not attenuate the depression of the response during glutamate perfusion but there was a significant elevation in the post-glutamate recovery of the response. This effect was not observed when the protocol was applied to antidromic population spikes and field epsps, both of which showed a depression in response during 5mM glutamate perfusion but recovered fully when glutamate was removed. The field epsps showed a trend whereby smaller epsps recovered to a far greater degree than population spikes. Although this effect was not significant, the NMDA receptor blocker, MK-801, was co-perfused with glutamate during epsp recordings to examine this further. The degree to which MK-801 alone affected the response correlated with the post-glutamate recovery. To study this effect, isolated NMDA-receptor mediated epsps were recorded and the effects of 5mM glutamate upon them were studied. There was a similar tendency for small NMDA-receptor mediated epsps to recover to a higher level following glutamate treatment compared with larger potentials. In the presence of DPCPX, the larger potentials showed a significant elevation in recovery following treatment with glutamate. It was also shown that the post-5mM glutamate recovery of the orthodromic population spikes was elevated by the presence of the A2a receptor antagonist, SCH 58261. Further experiments using the ATP-sensitive potassium channel blocker, glibenclamide, indicated that this effect may be due to increasing the opening of these channels. Adenosine preconditioning was attempted using 10mM glutamate as an insult. It was shown that adenosine could not precondition against this effect in antidromic or orthodromic population spikes. The effects of the sodium-potassium ATPase inhibitor, ouabain, upon the evoked responses were studied as an alternative insult. It was shown that ouabain induced depressions in field epsps, orthodromic and antidromic population spikes. The antidromic population spikes showed significantly smaller depressions than the orthodromic responses. Further experiments using the glutamate receptor antagonist, kynurenic acid, showed that glutamate receptors mediated the effects of ouabain upon the orthodromic population spikes but not the antidromic spikes. Adenosine preconditioning was attempted against ouabain. It was shown that adenosine preconditioned against the effects of ouabain upon orthodromic and antidromic population spikes but not field epsps. Further experiments were conducted using antidromic population spikes. It was shown using various antagonists, that adenosine protection against ouabain was mediated by A1 receptors, ATP-sensitive potassium channels, NMDA receptors and nitric oxide. To extend these results further, preconditioning using the ATP-sensitive potassium channel opener, pinacidil, was attempted against 10mM glutamate and ouabain. It was shown that pinacidil was able to precondition the antidromic population spike against either insult. Using the NMDA receptor antagonist, DL-AP5, showed that the preconditioning effect of pinacidil against ouabain was mediated by NMDA receptors. Another preconditioning paradigm was attempted to see if glutamate could precondition against ouabain. It was shown that pre- treatment with glutamate resulted in enhancing the depressant effect of ouabain upon field epsps and antidromic population spikes. To further examine the effects of ouabain upon antidromic population spikes, ouabain was co-perfused in the presence of the intracellular calcium chelator, BAPTA-AM. This resulted in enhancing the depressant effect of ouabain upon the response. A similar result was observed when the calcium concentration in the perfusion medium was lowered to 0.5mM from 2.5mM whereas increasing the concentration to 5mM attenuated the depressant effect. Ouabain was also co-perfused in the presence of charybdotoxin, a blocker of large-conductance calcium activated potassium channels. It was observed that charybdotoxin enhanced the effect of ouabain upon the antidromic spikes. No changes were detected in HSP72 expression in the slices in response to ouabain treatment, 10mM glutamate treatment, pinacidil preconditioning treatment or glutamate preconditioning. The present results show that glutamate and ouabain can induce depressions in the evoked responses from the rat hippocampal slice and that the effects of 5mM glutamate can be attenuated by adenosine receptor antagonists. In addition, adenosine can precondition against ouabain but not glutamate and this effect involves A1 receptors, NMDA receptors, nitric oxide and ATP-sensitive potassium channels. It has also been observed that pinacidil can precondition against ouabain or glutamate and NMDA receptors may be involved in this effect. The inability of glutamate to precondition against ouabain in evoked responses was also demonstrated. The study highlights the effectiveness of preconditioning agents against different depolarizing agents and the interactions between adenosine and glutamate receptors which play a role in preconditioning.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:37:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3228_Tese Alessandra Alessandra Simão Padilha.pdf: 963850 bytes, checksum: a85c8f44768801716650239de18b99c2 (MD5) Previous issue date: 2007-04-04
A ouabaína (OUA), um inibidor da Na+K+-ATPase, está presente em concentrações nanomolares (nM) no plasma de vários mamíferos. Em ratos hipertensos, concentrações nM dessa substância, de forma aguda, são capazes de aumentar a pressão arterial (PA) e a sensibilidade do músculo liso vascular à agonistas -adrenérgicos, via liberação de angiotensina II (Ang II). No entanto, não se sabe se o efeito de concentrações maiores de OUA já conhecidas por aumentar a PA e amplificar a reatividade vascular a esses agonistas, tanto em ratos normotensos quanto em hipertensos, também são dependentes da liberação de Ang II. Por outro lado, os efeitos agudos da OUA parecem ser distintos dos seus efeitos crônicos. A hipertensão induzida por administração crônica de OUA por 5 semanas é acompanhada de alterações compensatórias dos fatores endoteliais sobre a reatividade vascular. Porém, ainda não se sabe se essas alterações já se iniciam em estágios mais precoces dessa hipertensão. Neste estudo avaliamos as ações agudas de 18 μg/Kg (i.v.) de OUA na PA de ratos hipertensos (SHR) e normotensos (Wistar e WKY), bem como os efeitos de 1 μM de OUA na reatividade vascular à fenilefrina (FE) no leito vascular caudal desses animais. Também investigamos, em ratos Wistar, o efeito do tratamento crônico por 15 dias com OUA (25 μg/Kg) sobre a resposta a contrátil à FE em artérias mesentéricas de resistência (AMR). A administração de 18 μg/Kg de OUA elevou a pressão arterial diastólica (PAD) e a pressão arterial sistólica (PAS) em ratos Wistar e SHR, mas não em WKY. A administração de losartan preveniu o efeito pressor da OUA sobre a PAD de ratos Wistar, mas não alterou os demais parâmetros. No leito vascular caudal dos ratos Wistar, WKY e SHR, 1μM de OUA foi capaz de aumentar a resposta à FE. Esse aumento foi atribuído à liberação local de Ang II, já que a co-perfusão com Losartan e OUA, não modificou a resposta à FE. Nos SHR, somente parte dessa resposta foi abolida pela administração de losartan. Esses dados sugerem que a OUA amplifica a resposta à FE em ratos normotensos, via liberação de Ang II. Já nos hipertensos, outras vias endoteliais, além da Ang II parecem estare envolvidas. O tratamento crônico com OUA por 15 dias elevou a PAS, PAD e freqüência cardíaca em ratos Wistar. No entanto, a reatividade vascular à FE em AMR foi similar em ratos tratados e não tratados. A incubação das AMR com L-NAME aumentou a resposta a FE nos dois grupos, embora esse efeito tenha sido maior nos ratos tratados. Essa resposta não foi acompanhada de aumento na expressão protéica da eNOS, nem de alterações no relaxamento à acetilcolina. A co-incubação de Indometacina e L-NAME deslocou a curva concentração-resposta à FE para a esquerda nos ratos não tratados similar àquele obtido somente com L-NAME, sugerindo a ausência da participação dos prostanóides em resposta à FE. Já em ratos tratados, a incubação dos dois fármacos não desviou a curva concentração-resposta à FE, indicando a participação de prostanóides vasoconstritores. Nos ratos tratados esse resultado foi acompanhado de aumento na expressão protéica de COX-2. A pré-incubação das artérias com Indometacina, L-NAME e TEA, promoveu um desvio adicional da curva concentração-resposta a FE somente em AMR de ratos não tratados. Esses dados sugerem que estágios iniciais da hipertensão induzida por OUA são acompanhados de aumento da liberação de NO e prostanóides vasoconstritores, e redução de EDHF, que em conjunto, apesar de não modificar a reatividade vascular à FE, podem contribuir para a manutenção da hipertensão induzida por OUA.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Neurociências.
Made available in DSpace on 2012-10-24T04:20:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 249817.pdf: 674568 bytes, checksum: 025894c3794d5b84ab3f99e0d735c6ef (MD5)
Mood disorders are chronic and severe mental disorders. Many compounds, as agmatine, have been investigated regarding their effects and underlying mechanisms in major depression and bipolar disorder. The administration of agmatine, an endogenous cationic amine, elicits an antidepressant-like effect in the mouse forced swimming test (FST) by a mechanism dependent on the inhibition of the NMDA receptors and the L-arginine-nitric oxide (NO) pathway. Since it has been reported that the NO can activate different types of potassium (K+) channels in several tissues, the present study investigated the possibility of synergistic interactions between different types of K+ channel inhibitors and agmatine in the FST. Treatment of mice by i.c.v. route with subeffective doses of tetraethylammonium (a non specific inhibitor of K+ channels, 25 pg/site), glibenclamide (an ATP-sensitive K+ channel inhibitor, 0.5 pg/site), charybdotoxin (a large- and intermediate-conductance calciumactivated K+ channel inhibitor, 25 pg/site) or apamin (a small-conductance calcium-activated K+ channel inhibitor, 10 pg/site), augmented the effect of agmatine (0.001 mg/kg, i.p.) in the FST. Furthermore, the administration of agmatine and the K+ channel inhibitors, alone or in combination, did not affect locomotion in the open-field test. Moreover, the reduction in the immobility time elicited by an active dose of agmatine (10 mg/kg, i.p.) in the FST was prevented by the pretreatment of mice with the K+ channel openers cromakalim (10 ìg/site, i.c.v.) and minoxidil (10 ìg/site, i.c.v.), without affecting locomotion. These results raise the possibility that the antidepressant-like effect of agmatine in the FST is related to its modulatory effects on neuronal excitability, via inhibition of K+ channels. Furthermore, we investigated the effect of agmatine in the ouabain-induced hyperactivity in rats, an animal model of mania. In this study, the pretreatment of the animals with agmatine (0.1, 1 and 10 mg/kg, p.o. administered twice a day for 7 days) was able to attenuate the behavioral and neurochemical changes elicited by acute administration of ouabain, a Na,K-ATPase-inhibiting compound, given by i.c.v. route, in Wistar rats. Ouabain (10 ìM/site) significantly increased motor activity in the open-field test. The pretreatment with lithium chloride (LiCl, 45 mg/kg, p.o.) for seven days completely prevented the hyperactivity, but agmatine (0,1-10 mg/kg) partially prevented the ouabain-induced hyperlocomotion. Ouabain treatment elicited lipid peroxidation (increased TBARS levels) and reduced the glutathione peroxidase (GPx) activity in the hippocampus and glutathione reductase (GR) activity in the cerebral cortex and hippocampus, effects that were completely prevented in rats pretreated with agmatine and LiCl. These results show that agmatine, in a way similar to LiCl, is able to prevent the neurochemical alterations observed in the ouabain-induced model of mania in rats, but was able to reverse only partially the uabain-induced hyperlocomotion. Together, these results suggest that agmatine has not only antidepressant-like effects through an interaction with K+ channels, but also antimanic propierties. Investigar o envolvimeto dos canais de K+ no mecanismo de ação da agmatina no teste do nado forçado e o efeito da agmatina em um modelo animal de mania induzido por ouabaína e sua relação com o estresse oxidativo.

The microvasculature plays a significant role in the regulation of blood pressure and regional blood supply. Cardiotonic steroids like the adrenal cortical hormone (ouabain) have been proposed to play a role in some forms of hypertension. The purpose of this study was to determine the effect of different agonists on arteriolar diameter in the presence and absence of ouabain. In Vitro studies on isolated intact rat mesenteric arterioles were performed by administering different concentrations of the vasoconstrictor norepinephrine (NE) and the vasorelaxant acetylcholine (Ach) in the presence and absence of ouabain. NE induced constriction was not significantly enhanced in the presence of ouabain. Ach completely reversed NE-induced constriction without ouabain, which was significantly impaired in ouabain presence (p+Channel blockade almost completely abolished Ach-induced relaxation in presence and absence of ouabain.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:58:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3502_Dissertação Eduardo Frizera Meira.pdf: 657529 bytes, checksum: 2252a7b7713ffa1c8eb71889fd71c40c (MD5) Previous issue date: 2009-08-31
A ouabaína é um glicosídeo endógeno presente em concentrações nanomolares no plasma de pacientes hipertensos, participando da gênese e/ou manutenção da hipertensão arterial. O tratamento crônico com ouabaína por 5 semanas produz hipertensão arterial, além de efeito inotrópico positivo e aumento da expressão da isoforma α1 e α2 da bomba de sódio em ventrículos esquerdos de ratos. No entanto, estudos sobre a contratilidade cardíaca no estágio inicial da hipertensão induzida por ouabaína ainda não foram desenvolvidos. Para isso, foram utilizados ratos Wistar com três meses de idade. Os animais foram tratados com veículo (óleo de soja, 0,1mL) ou OUA (25μg/kg/dia) durante 15 dias. Após o tratamento, os animais foram anestesiados com uretana (1.2 g/Kg, i.p), submetidos à canulação da artéria carótida direita para registros de pressão arterial média, pressão arterial diastólica, pressão arterial sistólica, freqüência cardíaca, pressão sistólica intraventricular esquerda, pressão diastólica final esquerda e primeira derivada temporal de pressão positiva e negativa. Após os registros hemodinâmicos, os animais foram submetidos à toracotomia e os corações removidos e perfundidos através do coto aórtico para a retirada dos músculos papilares do ventrículo esquerdo. A preparação foi montada em câmaras (20ml) contendo solução Krebs-Henseleit (26ºC), gaseificada com mistura carbogênica. Foram analisados, nesta preparação, a contração após a pausa (PRC), contrações tetânicas do músculo cardíaco (CT), pico de força isométrica (F), a potenciação relativa após pausas de 15, 30 e 60s (PR), curva de freqüência (CF) e a resposta β-adrenérgica ao isoproterenol (ISO). Também foram analisados, in vitro, a atividade da bomba de sódio (NKA), através da técnica de hidrólise de ATP, além das expressões protéicas do trocador Na+/Ca2+(NCX), Ca2+ ATPase do retículo sarcoplasmático (SERCA), fosfolambam (PBL), receptor de angiotensina II AT1 e das isoformas α1 e α2 Na+-K+ ATPase, através da técnica de Western blot. Os animais tratados com OUA apresentaram uma elevação significativa em todos os parâmetros hemodinâmicos avaliados exceto na PdfVE quando comparados com o veículo. O tratamento com OUA por 15 dias diminuiu o pico de força isométrica (veículo: 0,56 ± 0,055 vs ouabaína:0,35 ± 0,043 p<0,05). Os parâmetros de PR e a CF não se alteraram após o tratamento. Também não se observou alterações na resposta β-adrenérgica ao ISO, nas contrações tetânicas e na PRC. O tratamento com OUA aumentou a atividade da NKA (veículo: 151,85 ± 7.60 vs ouabaína: 191,03 ± 11,41, p<0,05) e diminuiu as expressões protéicas da isoforma α1 da NKA (veículo: 0,98 ± 0,06 vs ouabaína: 0,76 ± 0,06, p<0,05), do trocador Na+/Ca2+ (veículo:1,96±0,13 vs ouabaína 0,78±0,06, p<0,05) e do receptor AT1 (veículo: 1,19 ± 0,18 vs ouabaína: 0,72 ± 0,08, p<0,05) quando comparado com o grupo veículo. Em conclusão, os resultados demonstram que o tratamento crônico com ouabaína por 15 dias, em ratos normotensos produz um efeito inotrópico negativo. Esse efeito pode estar associado ao aumento da atividade da bomba de sódio, redução da expressão protéica da isoforma α1 da Na+-K+ ATPase e redução do trocador Na+/Ca2+. Além disso, o tratamento com ouabaína reduziu a expressão protéica do receptor AT1, sugerindo um envolvimento do sistema renina-angiotensina na hipertensão induzida pela ouabaína.

Thesis (M.S.)--University of Toledo, 2009.
"In partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in Biomedical Science." Title from title page of PDF document. Bibliography: p. 39-48.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Doutora em Ciências da Saúde.
Bipolar disorder (BD) presents a complex alternating clinical course with recurrent mood switches including manic and depressive episodes making the development of an adequate animal model challenging. Ouabain, a potent Na+K+ATPase inhibitor, intracerebroventricular (i.c.v) administration in preclinical models has been suggested as a model of mania. However, to date, there are no models that mimic mood episodes, mania and depression, in the same animal. The aim of our study was to evaluate manic- and depressive-like behaviors and cognitive, physiological and neurochemical alterations after a single ouabain i.c.v administration in Wistar rats. Moreover, evaluate the effects of the mood stabilizers, lithium (Li) and valproate (VPA), and the antidepressant imipramine (IMI) on behavioral, physiological and neurochemical alterations induced by ouabain. Spontaneous locomotor activity behavior in rats was significantly increased 7 days after ouabain injection compared to control, while Li and VPA reversed this ouabaininduced manic-like behavior. Locomotor activity returned to its basal levels 14 days after ouabain injection. However, 14 days after ouabain injection, was observed depressive-like behavior in the animals, such as increase in the immobility time in the forced-swimming test and decrease in the sucrose consumption. The IMI treatment and the adjunctive treatment of Li or VPA with IMI reversed the depressive-like behavior induced by ouabain. However, Li or VPA, per se, partially reversed these behavioral alterations induced by ouabain. Additionally, depressive-like animals showed cognitive impairment in the inhibitory avoidance task and in the object recognition task. The adrenal gland weight was increased after ouabain administration, which was accompanied by an ACTH serum level increased in the depressive-like animals. Li, VPA or the adjunctive treatment of Li or VPA with IMI were able to reverse the adrenal weigh increased induced by ouabain. The mood stabilizers and the adjunctive treatment of mood stabilizer, Li or VPA plus IMI reversed the ACTH levels increased induced by ouabain. Ouabain decreased the levels of pro-BDNF, BDNF, TrkB and CREB in the brains of rats after i.c.v administration; however this effect varies depending of the experimental protocol and the brain region evaluated. The ouabain administration induced oxidative damage and antioxidant enzymes alterations in the frontal cortex and hippocampus of rats, and Li was able to reverse these impairments. We propose that the ouabain i.c.v administration in preclinical models may be not only a model for manic episodes but also for depressive ones because our results strongly support that ouabain administration leads to a depressive-like phenotype. Another important point is that the proposed model in this study mimics important neurochemical changes, such as oxidative stress and BDNF pathway alterations, which are also seen in bipolar patients.
O transtorno bipolar (TB) é uma condição psiquiátrica complexa, caracterizada por mudanças recorrentes do humor, incluindo episódios maníacos, depressivos e mistos. Este complexo curso clínico faz com que o desenvolvimento de um modelo animal de TB adequado seja um desafio para os pesquisadores da área. Dentre outros modelos, a administração intracerebroventricular (i.c.v) de ouabaína, um potente inibidor da enzima Na+K+ATPase, em ratos tem sido considerado um bom modelo animal de mania. Entretanto, ainda não existem modelos de experimentação que mimetizam sintomas de ambos os polos do humor, mania e depressão, em um mesmo animal. O objetivo do presente estudo foi avaliar comportamentos tipo-maníaco e tipo-depressivo e alterações cognitivas, neuroquímicas e fisiológicas após a administração i.c.v de ouabaína em ratos Wistar. Além disso, avaliar os efeitos dos estabilizadores do humor, lítio (Li) e valproato (VPA) e do antidepressivo imipramina (IMI) sobre as alterações comportamentais, neuroquímicas e fisiológicas induzidas pela ouabaína. Nossos resultados mostraram que, 7 dias após a administração i.c.v de ouabaína, os animais apresentaram hiperlocomoção no teste do campo aberto e que o tratamento com Li ou VPA reverteu este efeito.Posteriormente, foi demonstrado que 14 dias após a administração i.c.v de ouabaína, não houve alteração locomotora dos animais no teste do campo aberto, porém os animais apresentaram comportamento tipo-depressivo, indicado pelo aumento do tempo imobilidade no teste do nado forçado e diminuição do consumo de sacarose no teste de anedonia. O tratamento com Li, VPA, IMI ou o tratamento combinado IMI com Li ou VPA reverteram as alterações comportamentais tipo-depressivas induzidas pela ouabaína, exceto o tratamento com Li ou VPA que reverteram parcialmente o comportamento tipo-anedônico nos animais. A ouabaína causou dano cognitivo tanto no teste da esquiva inibitória quanto no teste de reconhecimento de objetos, 14 dias após a administração i.c.v de ouabaína. Além disso, houve um aumento do peso da glândula adrenal, bem como um aumento dos níveis de hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) no soro destes animais. Li, VPA, IMI ou o tratamento adjunto de Li ou VPA com IMI reverteram a diminuição dos níveis de ACTH induzida pela ouabaína. Enquanto que somente Li, VPA ou o tratamento combinado dos estabilizadores do humor, Li ou VPA, com IMI conseguiram reverter o aumento da glândula adrenal induzida pela ouabaína. A ouabaína diminuiu os níveis de pró-BDNF, BDNF, receptor TrkB e pCREB; entretanto, essas alterações variaram de acordo com o protocolo experimental e com a estrutura cerebral avaliada. A ouabaína, em ambos os protocolos experimentais, aumentou o dano oxidativo, a proteínas e a lipídeos, e alterou a atividade das enzimas antioxidantes no cérebro dos animais. O tratamento com Li reverteu todos os danos oxidativos e as alterações nas enzimas antioxidantes induzidas pela ouabaína. Juntos os resultados do presente estudo indicam que a administração i.c.v de ouabaína em modelos pré-clínicos pode ser não somente um modelo para episódios tipo-maníacos, mas, também para episódios tipo-depressivos, já que a administração de ouabaína induz também o fenótipo tipo-depressivo. Outro ponto importante é que o modelo proposto no presente estudo também mimetiza alterações neuroquímicas importantes, como o estresse oxidativo e alterações na via de BDNF, ambos vistos em pacientes bipolares.

Tese de Doutorado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Doutor em Ciências da Saúde.
Bipolar Mood Disorder (BMD) is a chronic and debilitating illness which includes alternate episodes of depression and mania. There is an emerging body of data suggesting that bipolar disorder is associated with impairments in neuroplasticity and cell survival, incluindo DNA damage, changes in brain-derived neurotrophic factor (BDNF) levels and Oxidative stress mechanisms. Several studies have found direct and indirect evidence for a mood-state related decrease in the activity of the Na+/K+ATPase. Objective: In this study, we assessed the behavioral and neurochemical parameters in rats submitted to an animal model of mania induced by ouabain (OUA), a specific Na+/K+ATPase inhibitor. Methods: Animals received a single intracerebroventricular (ICV) injection of OUA or artificial cerebrospinal fluid (aCSF), and in different periods at seven days after injection. The behavior was assessed motor activity through the Open Field Test. The data were studied neurochemical markers involved in DNA damage, oxidative stress and the level of BDNF in neuroanatomical structures: hippocampus, amygdala and prefrontal cortex.To investigate predictive validity of the model, the effects of the lithium (Li) and valproate (VPT) were evaluated in BDNF levels and markers of oxidative stress. In the reversal model, animals received a single ICV injection of OUA or aCSF. From the day following the ICV injection, the rats were treated for 6 days with intraperitoneal (IP) injections of saline (SAL), Li or VPT twice a day. In the maintenance treatment (prevention model), the rats received IP injections of Li, VPT, or SAL twice a day for 12 days. In the 7th day of treatment the animals received a single ICV injection of either OUA or aCSF. Finally the effects of BDNF ICV administration on oxidative damage to lipid and protein in the brains of rats submitted to animal model of mania induced by OUA. Results: Our findings demonstrated that OUA induced hyperlocomotion in the openfield test, and this response remained up to 7 days following a single ICV injection. Li and VPT reversed OUA-related hyperactive behavior in both reversal and maintenace model. We observed increased hipocampal and peripheral index of early DNA damage. Showed a significant reduction in BDNF levels in amygdala and hippocampus. Li treatment, but not VPT reversed and prevented the impairment in BDNF expression after OUA administration in these cerebral áreas. OUA induced oxidative stress in prefrontal and hippocampus. Li and VPT treatment reversed and prevented the OUA induced damage, however this effect varies depending on the brain region and treatment regimen. The BDNF was unable to reverse the ouabain-induced hyperactivity. Nevertheless, BDNF treatment protects the OUA-induced damage in the brain of rats. Conclusion: Our results suggest that the present model fulfills adequate face, construct and predictive validity as an animal model of mania, supporting the Na+/K+ATPase hypothesis for BMD.
O Transtorno do Humor Bipolar (THB) é uma doença crônica e debilitante que inclui episódios alternados de depressão e mania. Há um conjunto emergente de dados que sugerem que o THB está associado com alterações na neuroplasticidade e sobrevivência celular, incluindo danos ao DNA, mudanças no fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e mecanismos de estresse oxidativo. Vários estudos encontraram evidências diretas e indiretas para alterações no estado de humor relacionado com a atividade da Na+/K+ATPase no THB. Objetivo: O presente estudo tem como objetivo avaliar parâmetros comportamentais e neuroquímicos, em ratos submetidos a um modelo animal de mania induzido por ouabaína (OUA), um inibidor específico da Na+/K+ATPase. Métodos: os animais receberam uma única dose intracerebroventricular (ICV) de OUA ou fluido cerebrospinal artificial (aCSF), e foram avaliados em diferentes períodos até sete dias após a injeção. O comportamento avaliado foi a atividade motora, através do teste de campo aberto. Os dados neuroquímicos estudados foram os marcadores envolvidos no dano ao DNA, estresse oxidativo e níveis de BDNF, nas estruturas neuroanatômicas: hipocampo, amígdala e córtex pré-frontal. Para investigar a validade preditiva do modelo, foram avaliados os efeitos do lítio (Li) e valproato (VPT) em níveis BDNF e marcadores de estresse oxidativo. No modelo de reversão, os animais receberam uma injeção única de ICV de OUA ou aCSF. Desde o dia após a injeção ICV, os ratos foram tratados durante 6 dias com injeções intraperitoneal (IP) de solução salina (SAL), Li ou VPT duas vezes por dia. No tratamento de manutenção (modelo de prevenção), os ratos receberam injeções IP de Li, VPT, ou SAL duas vezes ao dia por 12 dias. No sétimo dia de tratamento, os animais receberam uma injeção ICV de OUA ou aCSF. Finalmente, foram avaliados os efeitos da administração ICV de BDNF, sobre o dano oxidativo à lipídios e proteínas, no cérebro de ratos submetidos ao modelo animal de mania. Resultados: Os achados demonstraram que a OUA induziu hiperlocomoção, e esta resposta permaneceu até 7 dias após a sua administração. Li e VPT controlaram o comportamento hiperativo induzido pela OUA em ambos os modelos: reversão e manutenção. Observou-se aumento do índice de dano ao DNA no hipocampo induzido por OUA. Foi demonstrado uma redução significativa nos níveis de BDNF no hipocampo e na amígdala. O uso de Li, mas não VPT, reverteu e impediu a redução da expressão de BDNF após administração de OUA, nessas mesmas estruturas. A OUA induziu a formação do estresse oxidativo nas estruturas córtex pré-frontal e hipocampo. A administração IP de Li e VPT reverteram e impediram o dano induzido por OUA, no entanto, este efeito varia dependendo da região do cérebro e regime de tratamento. O BDNF foi incapaz de reverter a hiperlocomoção induzida pela OUA. No entanto, o tratamento com BDNF protegeu o dano oxidativo induzido por OUA no cérebro de ratos. Conclusão: Os resultados sugerem que o modelo atual apresenta adequada validade de face, construto e valor preditivo como um modelo animal de mania, apoiando a hipótese de disfunção da Na+/K+ATPase no THB.

The mechanisms mediating the hypertension of preeclampsia (PE) are unclear. Endogenous digitalis-like factors (EDLFs) are specific sodium pump (SP) inhibitors implicated in essential and experimental hypertension, but they have not been fully explored in the setting of PE. This study uses a digoxin antibody Fab fragment to address the question of whether such factors are present and increased in PE, to investigate a possible treatment of PE, and to isolate and characterize all EDLFs present in PE. Sera and placenta from women with PE did show a significant increase in SP inhibition in comparison to women with normal pregnancy and Digibind® was found to bind EDLFs and essentially block or reverse SP inhibition. Sera were collected in a Phase II, double-blind, placebo controlled clinical study in which women with severe preeclampsia were dosed with Digibind®, as a therapeutic, and the SP activity measured. Sera and placenta from women with PE was also investigated for their inhibitory effects on the SP. Known candidates for EDLFs were investigated for their SP inhibitory effects, as well as how digitalis antibody immune Fab fragments, Digibind® and DigiFab™, bound them and affected the SP activity. Digibind® is also a sufficient affinity material used to isolate and purify PE EDLFs. Additionally, the placentas of preeclamptic women have high levels of similar EDLFs. These studies provide evidence for the existence of EDLFs that circulate in women with PE, and Digibind® is an effective and novel tool to bind, isolate and purify EDLFs in PE.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde.
No transtorno bipolar (TB) ocorre a alternância entre episódios de depressão, mania ou hipomania. O Lítio (Li) é o fármaco mais utilizado como tratamento para o TB. Diversos anticonvulsivantes, como o valproato (VPA), possuem aplicação no tratamento do TB. Estudos mostram que disfunções da Na+K+ ATPase estão envolvidas na fisiopatologia do TB. A administração intracerebroventricular (ICV) ouabaína (OUA) (inibidor da Na+K+ ATPase) em ratos tem sido considerado um bom modelo animal de mania. A glicogênio sintase quinase-3 (GSK-3) é uma serina/treonina-quinase, geralmente ativa nas células, sendo desativada por sinais originados de vias de sinalização distintas, como a da PI3K/Akt e a da MAPK. Estudos tem demonstrado que Li e VPA inibem diretamente a ação da GSK-3. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação do Li ou do VPA sobre a via de sinalização de PI3K/Akt/GSK-3 em um modelo animal de mania induzido pela OUA. Foram utilizados ratos Wistar machos adultos. Os animais foram submetidos a uma cirurgia estereotáxica, em que foi introduzida uma cânula no ventrículo lateral. No primeiro protocolo, os animais receberam injeções ICV de OUA ou de líquido cefalorraquidiano artificial (aCSF). Em seguida foram tratados com Li, VPA ou salina durante sete dias. A avaliação da atividade locomotora foi realizada através do teste do campo aberto, sete dias após a administração de OUA. Foram avaliados os níveis de proteínas de vias da GSK-3 [MAPK, PI3K, AKT e GSK-3β totais e fosforiladas (p)], através das técnicas de Western Blotting. No segundo protocolo, os animais receberam injeções ICV de OUA, de aCSF, de AR-A014418 (inibidor de GSK-3) ou OUA+AR-A014418. Sete dias após, esses animais foram submetidos ao teste do campo aberto. O Li e o VPA reverteram a hiperatividade induzida pela OUA. Adicionalmente, OUA diminuiu a fosforilação de PI3K, de Akt e de GSK-3β. O Li e o VPA reverteram essas disfunções da via de sinalização da GSK-3β induzidas pela OUA. Além disso, AR-A014418 reverteu o comportamento do tipo maníaco induzido por OUA. Esses resultados sugerem que os efeitos do tipo maníaco induzidos pela OUA estão associados com a ativação da GSK-3β (e inibição da PI3K e Akt), e Li e VPA exercem efeitos antimaníacos através da modulação desta via de sinalização. Portanto, sugerem-se mais estudos sobre essa via de sinalização e seu envolvimento no TB.

Partindo do pré-suposto que o tratamento crônico de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) com ouabaína (OUA) amplifica a hipertensão arterial (HA) e aumenta a sensibilidade à fenilefrina em anéis de artéria caudal, buscou-se avaliar se esse tratamento modifica a reatividade vascular em artérias mesentéricas de resistência (AMR) e os mecanismos envolvidos. SHR foram tratados por 5 semanas com: veículo (CT) ou OUA (30 mg/kg/dia) ou co-tratados com ácido acetilsalicílico (AAS 100 mg/kg/dia) ou nimesulida (NID 20 mg/kg/dia). OUA aumenta a contração à noradrenalina (NOR) nas AMR dos SHR quando comparado aos CT. Na presença dos inibidores da ciclooxigenase 2 (COX-2), da sintase do tromboxano A2 (TXA2), e do antagonista do receptor TP a contração à NOR foi reduzida apenas nas AMR do grupo OUA. Os co-tratamentos com AAS e NID preveniram a potencialização da HA e a hiper-reatividade à NOR nas AMR dos SHR tratados com OUA. Conclui-se que a OUA via ativação da COX-2 aumenta a síntese de TXA2, o qual via receptor TP potencializa a contração à NOR em AMR e eleva a HA em SHR.
It is well known that chronic ouabain (OUA) treatment of spontaneously hypertensive rats (SHR) increases hypertension (HA) and the sensitivity to phenylephrine in caudal artery rings, thus, the aim of this study was to evaluate if OUA modifies vascular reactivity in mesenteric resistance (MRA) from SHR as well as the possible mechanisms involved. Male, SHR were treated for 5 weeks with: vehicle (CT) or OUA (30 mg/kg/day) or co-treated with acetylsalicylic acid (ASA 100 mg/kg/day) or nimesulide (NID 20 mg/kg/day). OUA increased norepinephrine (NOR)-induced contraction in the MRA when compared to CT. In the presence of the cyclooxygenase 2 (COX-2) and thromboxane A2 synthase (TXA2) inhibitors, and the TP-receptors antagonist NOR-induced contraction was reduced only in the MRA of OUA group. Co-treatment with ASA and NID prevented the increase in HA and the hyperreactivity to NOR in MRA of OUA treated SHR. The results suggested that OUA activates COX-2 that through TXA2/TP-receptors increases NOR-induced contraction and potentiates HA in SHR.

Na+ sensitive hypertension in Dahl salt sensitive rats (Dahl S) or spontaneously hypertensive rats (SHR) is linked to intrinsic changes in the brain that favour increased Na+ entry into the cerebrospinal fluid (CSF) followed by increases in sympathetic hyperactivity and hypertension (Huang et al 2004). Similar responses are observed in salt resistant and Wistar rats that receive an intracerebroventricular (icv) infusion of Na+ rich artificial cerebrospinal fluid (aCSF) (Huang et al 2001, 2006). Downstream to increased CSF[Na+], a pathway has been described involving mineralocorticoid receptors (MRs), benzamil sensitive Na+ channels, “ouabain”, and angiotensin II type 1 receptors (AT1-R) (Huang et al 1998, Zhao et al 2001, Wang and Leenen 2003, Huang et al 2008). Blood pressure (BP) responses to increased CSF[Na+] may involve activation of AT1-R in the subfornical organ (SFO) as the BP response to injection of NaCl into a lateral ventricle can be blocked by AT1-R blockade in the SFO (Rohmeiss et al 1995a). The role of aldosterone and AT1-R in the SFO was investigated in mediating the BP and heart rate (HR) response to increases in CSF[Na+] and local [Na+]. Results show that infusion of 0.45M and 0.6M Na+ rich aCSF into the SFO increases BP but not HR. The BP is unchanged by infusion of a mannitol solution osmotically equivalent to 0.6M Na+ rich aCSF indicating that the SFO is Na+ sensitive. The BP response to a lower concentration of Na+ (0.45M) is enhanced by prior infusion of aldosterone while BP response to 0.6M is not further enhanced suggesting that the SFO may have maximal responsiveness to acute increases in [Na+] at 0.6M. The BP responses to Na+ rich aCSF in the SFO and the enhancement of those responses by aldosterone can be blocked by infusion of the AT1-R blocker Candesartan in the SFO. This response appears therefore to be mediated in the SFO through AT1-R activation, likely through Ang II release in the SFO. ICV infusion of Na+ rich aCSF increases BP but not HR and this response is partially blocked by infusion of the AT1-R blocker Candesartan in the SFO. This indicates that nearly half the BP responses to icv infusion of Na+ rich aCSF is mediated through AT1-R activation in the SFO. Lastly, contrary to icv, PVN and MnPO studies (Huang and Leenen 1996, Budzikowski and Leenen 2001, Gabor and Leenen 2009) ouabain in the SFO does not increase BP or HR. In conclusion, these results show that the SFO is Na+ sensitive and mediates half the BP responses to changes in CSF[Na+] through a mechanism that involves AT1-R activation. The SFO is further sensitized to Na+ by aldosterone presumably through its genomic effects. Lastly, ouabain in the SFO does not increase BP or HR suggesting that endogenous ouabain in the SFO is not involved in modulating BP or HR responses.

Epigenetics continues to be redefined and new discoveries are likely to revolutionise the field still further. This thesis explores different aspects of how epigenetic regulation of gene expression contributes to human disease. Paper I explores the function of the IKKα kinase in regulating gene expression through the nuclear retinoic acid receptor (RAR). We define a set of genes requiring IKKα for their expression and found recruitment of IKKα to the RAR dependent on structural motifs in its protein sequence. This interplay between the NFκB pathway and nuclear receptor regulated transcription is important to consider when designing therapeutic strategies. Papers II and III focus on the plasma cell malignancy multiple myeloma (MM) and define a gene regulatory circuit defining an underexpressed gene profile in MM dependent on the Polycomb proteins. We provide proof-of-principle that the use of small chemical inhibitors may be operational in reactivating genes silenced by H3K27me3 and that this leads to decreased tumour load and increased survival in the 5T33 in vivo model of MM. We explored the genome-wide distribution of H3K27me3 and H3K4me3, and defined their association with gene expression in freshly-isolated malignant plasma cells from MM patients. Importantly, H3K27me3-marked genes in MM associated with more aggressive stages of the disease and less favourable survival. We present evidence that gene targeting by H3K27me3 is likely to not only involve a small population of tumour cells, but rather represent a common MM profile and further provide a rationale for evaluating epigenetic therapeutics in MM. Paper IV shows that pro-inflammatory gene expression in monocytes of psychiatric patients can be induced in vitro by sodium pump inhibitors, as the steroid hormone ouabain. We suggest that the ouabain-induced gene expression is regulated by an intricate network involving microRNAs, Polycomb and the H3K27me3 demethylase JMJD3. Our data indicates that epigenetic regulators play a role in transmitting cues between intrinsic and/extrinsic stimuli and gene expression in psychiatric illness. This thesis provides novel insights on how seemingly unrelated pathways may converge on transcriptional regulation and evidence that epigenetic modifiers contribute to the pathogenesis of human complex diseases such as multiple myeloma and mood disorders.

Made available in DSpace on 2018-08-01T22:58:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_3229_Dissertação Priscila Rossi de Batista.pdf: 727608 bytes, checksum: 2981384dec8584ca287de001a1550904 (MD5) Previous issue date: 2009-05-26
A ouabaína é um glicosídeo cardíaco presente no plasma de mamíferos em concentrações nanomolares, que podem estar elevadas em diversos modelos de hipertensão arterial, sugerindo uma associação à gênese e/ou manutenção da mesma. No entanto, estudos de reatividade vascular em estágios iniciais da hipertensão arterial induzida por ouabaína ainda não foram desenvolvidos em artérias de condutância. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tratamento por 15 dias com ouabaína na reatividade vascular do segmento proximal da artéria caudal de ratos que, por sua vez, comporta-se como um vaso de condutância. Foram utilizados ratos Wistar (n = 68, 250 350g), divididos em grupo controle e tratados com ouabaína, na concentração de 25μg/kg/dia, durante 15 dias. Os animais foram anestesiados com uretana (1,2g / Kg; i.p.) e heparinizados. Após 10 minutos, medidas hemodinâmicas in vivo foram realizadas. Em seguida, o segmento proximal da artéria caudal foi canulado com cateter preenchido com solução nutridora. A cauda foi, então, seccionada em seu terço proximal e perfundida com solução de Krebs sob fluxo constante (2,5 ml/min) à 36°C. O sistema de perfusão foi conectado a um transdutor de pressão ligado a um sistema de aquisição de dados, conectado a um computador para registros contínuos de pressão de perfusão média. A preparação foi submetida à estabilização de 45 minutos para que fosse dado início os protocolos experimentais. A reatividade vascular à fenilefrina (FE) (0,001-100µg, in bolus) foi avaliada na presença e na ausência do endotélio. A participação dos fatores endoteliais foi analisada através das curvas dose-resposta à FE antes e após administração de L-NAME (100mM), de tetraetilamônio (TEA, 5 mM), de indometacina (10mM), da co-administração com indometacina e L-NAME e, por fim, com deferoxamina (300 mM), com o intuito de investigar, respectivamente, óxido nítrico (NO), fator hiperpolarizante derivado do endotélio (EDHF), prostanóides, bem como a interação de NO e prostanóides. A atividade funcional da Na+K+ATPase foi analisada através da curva de relaxamento ao KCl. As curvas dose-resposta à FE foram analisadas através da diferença da área abaixo da curva (%dAUC). Os dados estão apresentados como média ± EPM. Para análise estatística foi utilizado teste t pareado e não pareado, sendo p < 0,05 considerado estatisticamente significante. O tratamento com ouabaína produziu aumento de pressão arterial sistólica, pressão arterial diastólica e pressão arterial média, porém não modificou a reatividade vascular à FE, nem a modulação endotelial avaliada pela porcentagem da diferença da área abaixo das curvas de FE na presença e ausência do endotélio. A infusão com L-NAME aumentou a reatividade vascular à FE nos dois grupos estudados, porém esse aumento foi maior no grupo tratado com ouabaína. Este comportamento também foi observado diante da perfusão com TEA, sugerindo maior liberação de NO e EDHF nos animais tratados com ouabaína. A perfusão com indometacina não provocou mudanças na reatividade, no entanto, a co-perfusão com L-NAME e indometacina promoveu aumento de reatividade a FE nos dois grupos estudos. Todavia, somente no grupo tratado com ouabaína, esse aumento de reatividade a FE foi menor do que aquele obtido somente após perfusão com L-NAME, sugerindo liberação de prostanóides vasoconstritores. O tratamento com ouabaína também foi capaz de promover aumento do relaxamento ao KCl. A administração de concentrações nanomolares de ouabaína, por 15 dias, leva ao aumento das pressões arteriais sistólica, diastólica e média, bem como da freqüência cardíaca, porém não promove alteração de reatividade vascular nas artérias de condutância estudadas. Entretanto, aumenta a liberação endotelial de NO, EDHF e prostanóides vasoconstritores, além de sugerir um aumento da atividade da bomba de sódio. Sendo assim, acredita-se que a liberação de fatores vasodilatadores e vasoconstritores se contrabalanceiam entre si, inalterando a reatividade vascular. Os resultados obtidos neste estudo sugerem modificações da participação dos fatores endoteliais no início da hipertensão arterial induzida pela ouabaína.

La surdité est l'un des déficits sensoriels les plus fréquents dans nos sociétés industrialisées. Parmi les pathologies de l'audition, les surdités de perception ou neurosensorielles sont les plus répandues. Les surdités de perception sont dues à un dysfonctionnement de la cochlée impliquant l'homéostasie ionique, la perte des cellules sensorielles et des neurones ganglionnaires. Alors qu'une altération de l'homéostasie ou que la perte de cellules sensorielles entraine immanquablement la survenue d'une surdité, l'impact de la perte de neurones ganglionnaires est mal connu.L'objet de cette thèse était d'évaluer l'impact des pertes neuronales sur l'audition. Pour ce faire, nous avons développé un outil pharmacologique capable de créer une perte sélective de neurones auditifs primaires, sans endommager les structures pré-synaptiques telles que les cellules sensorielles et la strie vasculaire. Pour ce faire, nous avons appliqué des doses croissantes de ouabaïne sur la membrane de la fenêtre ronde chez la gerbille. Les tests électrophysiologiques (produits de distorsions acoustiques, potentiel endocochléaire et potentiel d'action composite du nerf auditif) ont été réalisés avant et 6 jours après l'application de ouabaïne. A la fin des explorations fonctionnelles, les cochlées étaient prélevées et préparées pour réaliser des évaluations morphologiques en microscopie confocale et en microscopie électronique à transmission.Jusqu'à 80 µM, la ouabaïne n'entrainait aucun changement significatif des produits de distorsions acoustiques ce qui reflétait le bon fonctionnement des cellules ciliées externes, ni du potentiel endocochléaire témoin du fonctionnement normal de la strie vasculaire. En revanche, les mêmes concentrations de ouabaïne provoquaient une diminution dose-dépendante de l'amplitude du potentiel d'action composite du nerf auditif, étroitement associée à une perte de neurones ganglionnaires et de synapses afférentes. Si l'amplitude du potentiel d'action composite du nerf auditif constitue un bon indicateur du nombre et de l'état fonctionnel des neurones ganglionnaires et des synapses afférentes, ce n'est donc pas le cas pour les seuils audiométriques. En effet, ce n'était qu'avec une perte de 75 % des synapses afférentes et supérieure à 55 % des neurones ganglionnaires, qu'une élévation des seuils audiométriques était observée, après une perfusion de 80 µM de ouabaïne. A 100 µM de ouabaïne, l'élévation des seuils auditifs résultait de la perte cumulée des cellules sensorielles et de l'altération de la strie vasculaire, se surajoutant aux dommages neuronaux et synaptiques.L'ensemble de nos résultats montrait que l'application de ouabaïne sur la membrane de la fenêtre ronde chez la gerbille constitue un excellent modèle pour étudier l'impact de la perte sélective des neurones ganglionnaires sur la fonction auditive. Il apparaît aussi nécessaire de développer des outils d'investigation plus précis que le simple audiogramme pour évaluer les pertes neuronales chez l'homme
Deafness is one of the most frequent sensory deficits in our industrialized societies. Among the auditory pathologies, sensorineural deafness is the most wide-spread. Sensorineural deafness is due to a dysfunction of the cochlea involving the ionic homeostasis, loss of sensory cells and spiral ganglion neurons. While an alteration of the homeostasis or the loss of sensory cells induce inevitably the appearance of deafness, the impact of spiral ganglion neuron loss is unknown.The object of this thesis was to estimate the impact of spiral ganglion neuron losses on the auditory function. We developed a pharmacological tool capable of creating a selective loss of spiral ganglion neurons, without damaging the presynaptic structures such as the sensory cells and the stria vascularis. To do this, we applied increasing doses of ouabain to the round window membrane in the gerbil. Electrophysiological evaluations such as the distortion product otoacoustic emissions, the endocochlear potential and the compound action potentials of the cochlear nerve were recorded before and 6 days after application of ouabain. At the end of the functional evaluations, the cochlea were removed and prepared for morphological evaluations using confocal microscopy and transmission electron microscopy.Our results showed that up to a concentration of 80 µM, ouabain did not induce any significant change of the amplitude of the distortion product otoacoustic emissions, which indicated a normal functional state of the outer hair cells, nor of the endocochlear potential which reflected an intact stria vascularis. On the other hand, the same concentrations of ouabain led to a dose-dependent decrease of the amplitude of the compound action potentials, which was strictly associated with a loss of spiral ganglion neurons and afferent synapses, as assessed by morpho-anatomical analyses. If the amplitude of the compound action potentials constitutes a good indicator of the number and the functional state of the spiral ganglion neurons and the afferent synapses, it is not the case for the audiometric thresholds. Indeed, a loss of 75 % of afferent synapses and more than 55 % loss of the ganglion neurons was necessary before an elevation of the audiometric thresholds was observed in the cochleae perfused with 80 µM ouabain. At 100 µM ouabain, the elevation of the auditory thresholds may result from the accumulated loss of sensory cells, damage to the stria vascularis, in addition to the loss of the spiral ganglion neurons and afferent synapses. All these results indicate that the application of ouabain onto the round window membrane in the gerbil is an excellent model to study the impact of the selective loss of the spiral ganglion neurons on hearing function. More generally, this study points towards the necessity of developing more precise tools, beyond the simple audiogram, for the investigation of auditory neuron loss in humans

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico
O status epilepticus (SE) à uma forma comum de emergÃncia clÃnica potencialmente letal. O avanÃo na terapia antiepilÃptica nas Ãltimas dÃcadas nÃo modificou as taxas de responsividade a tratamento desta condiÃÃo, bem como das epilepsias em geral. A regulaÃÃo para baixo da tividade de Na+,K+-ATPase (NKA) tem sido implicada na fisiopatologia de diversas doenÃas neurodegenerativas, inclusive epilepsias. No presente trabalho, foram induzidas crises epilÃpticas por ouabaÃna via intracerebroventricular (i.c.v.), um modelo com valor preditivo para crises tÃnico-clÃnias generalizadas. Foram delineadas as caracterÃsticas etolÃgicas do SE com vistas à semiologia de valor localizatÃrio e mediram-se indicadores neuroquÃmicos: lipoperoxidaÃÃo, TBARS; concentraÃÃo de glutationa, GSH; nitrito, NO2- nas Ãreas cerebrais cÃrtex prÃ-frontal (F), hipocampo (H), corpo estriado (E), tÃlamo (T) e mesencÃfalo (M). Cerca de ~85% dos animais que recebem 29,23 Âg de ouabaÃna via i.c.v. exibiram um comportamento consistente de duas crises procursivas intercaladas por freezing seguidas de clono parcial que evolui com clono generalizado e perda do reflexo de endireitamento com fenÃmenos tÃnicos tardios. Este padrÃo à altamente sugestivo de ictogÃnese primÃria multifocal em Ãreas lÃmbica (H) e de tronco encefÃlico (colÃculo inferior) seguidas de generalizaÃÃo. A lipoperoxidaÃÃo esteve significativamente aumentada em relaÃÃo ao controle em todas as Ãreas estudadas: F, E e H (p<0,0001); T (p<0,001); M (p<0,01). A [GSH] esteve significativamente reduzida apenas em F (p<0,01) e E (p<0,0001). A [NO2-] esteve aumentada em T e M (p<0,01). Valores de p<0,05 foram considerados significativos. A neuroquÃmica evidencia grave dano oxidativo, nomeadamente nas membranas lipÃdicas. O aumento da [NO2-] em estruturas caudais corrobora com a literatura sobre o modelo audiogÃnico. Fornece-se ainda uma hipÃtese sobre a fisiopatologia do modelo da ouabaÃna i.c.v. que pode agregar-lhe relevÃncia patomecanÃstica enquanto construto teÃrico. Ademais, aportam-se amplas possibilidades para a pesquisa e desenvolvimentos de medicamentos atravÃs da implantaÃÃo do protocolo de via de administraÃÃo i.c.v. crÃnica.
O status epilepticus (SE) à uma forma comum de emergÃncia clÃnica potencialmente letal. O avanÃo na terapia antiepilÃptica nas Ãltimas dÃcadas nÃo modificou as taxas de responsividade a tratamento desta condiÃÃo, bem como das epilepsias em geral. A regulaÃÃo para baixo da tividade de Na+,K+-ATPase (NKA) tem sido implicada na fisiopatologia de diversas doenÃas neurodegenerativas, inclusive epilepsias. No presente trabalho, foram induzidas crises epilÃpticas por ouabaÃna via intracerebroventricular (i.c.v.), um modelo com valor preditivo para crises tÃnico-clÃnias generalizadas. Foram delineadas as caracterÃsticas etolÃgicas do SE com vistas à semiologia de valor localizatÃrio e mediram-se indicadores neuroquÃmicos: lipoperoxidaÃÃo, TBARS; concentraÃÃo de glutationa, GSH; nitrito, NO2- nas Ãreas cerebrais cÃrtex prÃ-frontal (F), hipocampo (H), corpo estriado (E), tÃlamo (T) e mesencÃfalo (M). Cerca de ~85% dos animais que recebem 29,23 Âg de ouabaÃna via i.c.v. exibiram um comportamento consistente de duas crises procursivas intercaladas por freezing seguidas de clono parcial que evolui com clono generalizado e perda do reflexo de endireitamento com fenÃmenos tÃnicos tardios. Este padrÃo à altamente sugestivo de ictogÃnese primÃria multifocal em Ãreas lÃmbica (H) e de tronco encefÃlico (colÃculo inferior) seguidas de generalizaÃÃo. A lipoperoxidaÃÃo esteve significativamente aumentada em relaÃÃo ao controle em todas as Ãreas estudadas: F, E e H (p<0,0001); T (p<0,001); M (p<0,01). A [GSH] esteve significativamente reduzida apenas em F (p<0,01) e E (p<0,0001). A [NO2-] esteve aumentada em T e M (p<0,01). Valores de p<0,05 foram considerados significativos. A neuroquÃmica evidencia grave dano oxidativo, nomeadamente nas membranas lipÃdicas. O aumento da [NO2-] em estruturas caudais corrobora com a literatura sobre o modelo audiogÃnico. Fornece-se ainda uma hipÃtese sobre a fisiopatologia do modelo da ouabaÃna i.c.v. que pode agregar-lhe relevÃncia patomecanÃstica enquanto construto teÃrico. Ademais, aportam-se amplas possibilidades para a pesquisa e desenvolvimentos de medicamentos atravÃs da implantaÃÃo do protocolo de via de administraÃÃo i.c.v. crÃnica.
O status epilepticus (SE) à uma forma comum de emergÃncia clÃnica potencialmente letal. O avanÃo na terapia antiepilÃptica nas Ãltimas dÃcadas nÃo modificou as taxas de responsividade a tratamento desta condiÃÃo, bem como das epilepsias em geral. A regulaÃÃo para baixo da tividade de Na+,K+-ATPase (NKA) tem sido implicada na fisiopatologia de diversas doenÃas neurodegenerativas, inclusive epilepsias. No presente trabalho, foram induzidas crises epilÃpticas por ouabaÃna via intracerebroventricular (i.c.v.), um modelo com valor preditivo para crises tÃnico-clÃnias generalizadas. Foram delineadas as caracterÃsticas etolÃgicas do SE com vistas à semiologia de valor localizatÃrio e mediram-se indicadores neuroquÃmicos: lipoperoxidaÃÃo, TBARS; concentraÃÃo de glutationa, GSH; nitrito, NO2- nas Ãreas cerebrais cÃrtex prÃ-frontal (F), hipocampo (H), corpo estriado (E), tÃlamo (T) e mesencÃfalo (M). Cerca de ~85% dos animais que recebem 29,23 Âg de ouabaÃna via i.c.v. exibiram um comportamento consistente de duas crises procursivas intercaladas por freezing seguidas de clono parcial que evolui com clono generalizado e perda do reflexo de endireitamento com fenÃmenos tÃnicos tardios. Este padrÃo à altamente sugestivo de ictogÃnese primÃria multifocal em Ãreas lÃmbica (H) e de tronco encefÃlico (colÃculo inferior) seguidas de generalizaÃÃo. A lipoperoxidaÃÃo esteve significativamente aumentada em relaÃÃo ao controle em todas as Ãreas estudadas: F, E e H (p<0,0001); T (p<0,001); M (p<0,01). A [GSH] esteve significativamente reduzida apenas em F (p<0,01) e E (p<0,0001). A [NO2-] esteve aumentada em T e M (p<0,01). Valores de p<0,05 foram considerados significativos. A neuroquÃmica evidencia grave dano oxidativo, nomeadamente nas membranas lipÃdicas. O aumento da [NO2-] em estruturas caudais corrobora com a literatura sobre o modelo audiogÃnico. Fornece-se ainda uma hipÃtese sobre a fisiopatologia do modelo da ouabaÃna i.c.v. que pode agregar-lhe relevÃncia patomecanÃstica enquanto construto teÃrico. Ademais, aportam-se amplas possibilidades para a pesquisa e desenvolvimentos de medicamentos atravÃs da implantaÃÃo do protocolo de via de administraÃÃo i.c.v. crÃnica.
O status epilepticus (SE) à uma forma comum de emergÃncia clÃnica potencialmente letal. O avanÃo na terapia antiepilÃptica nas Ãltimas dÃcadas nÃo modificou as taxas de responsividade a tratamento desta condiÃÃo, bem como das epilepsias em geral. A regulaÃÃo para baixo da tividade de Na+,K+-ATPase (NKA) tem sido implicada na fisiopatologia de diversas doenÃas neurodegenerativas, inclusive epilepsias. No presente trabalho, foram induzidas crises epilÃpticas por ouabaÃna via intracerebroventricular (i.c.v.), um modelo com valor preditivo para crises tÃnico-clÃnias generalizadas. Foram delineadas as caracterÃsticas etolÃgicas do SE com vistas à semiologia de valor localizatÃrio e mediram-se indicadores neuroquÃmicos: lipoperoxidaÃÃo, TBARS; concentraÃÃo de glutationa, GSH; nitrito, NO2- nas Ãreas cerebrais cÃrtex prÃ-frontal (F), hipocampo (H), corpo estriado (E), tÃlamo (T) e mesencÃfalo (M). Cerca de ~85% dos animais que recebem 29,23 Âg de ouabaÃna via i.c.v. exibiram um comportamento consistente de duas crises procursivas intercaladas por freezing seguidas de clono parcial que evolui com clono generalizado e perda do reflexo de endireitamento com fenÃmenos tÃnicos tardios. Este padrÃo à altamente sugestivo de ictogÃnese primÃria multifocal em Ãreas lÃmbica (H) e de tronco encefÃlico (colÃculo inferior) seguidas de generalizaÃÃo. A lipoperoxidaÃÃo esteve significativamente aumentada em relaÃÃo ao controle em todas as Ãreas estudadas: F, E e H (p<0,0001); T (p<0,001); M (p<0,01). A [GSH] esteve significativamente reduzida apenas em F (p<0,01) e E (p<0,0001). A [NO2-] esteve aumentada em T e M (p<0,01). Valores de p<0,05 foram considerados significativos. A neuroquÃmica evidencia grave dano oxidativo, nomeadamente nas membranas lipÃdicas. O aumento da [NO2-] em estruturas caudais corrobora com a literatura sobre o modelo audiogÃnico. Fornece-se ainda uma hipÃtese sobre a fisiopatologia do modelo da ouabaÃna i.c.v. que pode agregar-lhe relevÃncia patomecanÃstica enquanto construto teÃrico. Ademais, aportam-se amplas possibilidades para a pesquisa e desenvolvimentos de medicamentos atravÃs da implantaÃÃo do protocolo de via de administraÃÃo i.c.v. crÃnica.
Status epilepticus (SE) is a common and potentially lethal form of clinical emergency. The advances in antiepileptic therapy in the last decades failed to change the rates of treatment responsiveness in that condition, as well as in epilepsies. Down regulation of Na +, K + -ATPase (NKA) activity has been implicated in the pathophysiology of various neurodegenerative diseases, including epilepsy. In the present study, epileptic seizures were induced through intracerebroventricular (i.c.v.) ouabain, a model with predictive value for generalized tonic-clonic seizures. The ethological characteristics of the seizures were outlined regarding the localizing semiology. Neurochemical analysis were also performed: lipoperoxidation, TBARS; reduced glutathione (GSH) concentration; and nitrite (NO2-) concentration in prefrontal cortex (F), hippocampus (H), striatum (E), thalamus (T) and mesencephalon (M). About ~ 85% of the animals receiving 29.23 μg of i.c.v. ouabain exhibited a behavior consisting of two procursive seizures intercalated by freezing and followed by partial clonus evolving as generalized clonus with loss of the righting reflex and late tonus. This pattern is highly suggestive of primary multifocal ictogenesis in limbic (H) and brainstem (lower colliculus) areas followed by secondary generalization. Lipoperoxidation was significantly increased in relation to control in all studied areas: F, E and H (p <0.0001); T (p <0.001); M (p <0.01). GSH concentration was significantly reduced only in F (p <0.01) and E (p <0.0001). NO2- concentration was increased in T and M (p <0.01); Values of p <0.05 were considered significant. Neurochemistry evidences severe oxidative damage, mainly in lipid membranes. The increase in NO2- in caudal structures corroborates with literature about the audiogenic model. A hypothesis that may aggregate pathomechanistic relevance to the model as theoretical construct is thrown. Furthermore, the implementation of an i.c.v administration protocol offers ample possibilities for the research and drug development.
Status epilepticus (SE) is a common and potentially lethal form of clinical emergency. The advances in antiepileptic therapy in the last decades failed to change the rates of treatment responsiveness in that condition, as well as in epilepsies. Down regulation of Na +, K + -ATPase (NKA) activity has been implicated in the pathophysiology of various neurodegenerative diseases, including epilepsy. In the present study, epileptic seizures were induced through intracerebroventricular (i.c.v.) ouabain, a model with predictive value for generalized tonic-clonic seizures. The ethological characteristics of the seizures were outlined regarding the localizing semiology. Neurochemical analysis were also performed: lipoperoxidation, TBARS; reduced glutathione (GSH) concentration; and nitrite (NO2-) concentration in prefrontal cortex (F), hippocampus (H), striatum (E), thalamus (T) and mesencephalon (M). About ~ 85% of the animals receiving 29.23 μg of i.c.v. ouabain exhibited a behavior consisting of two procursive seizures intercalated by freezing and followed by partial clonus evolving as generalized clonus with loss of the righting reflex and late tonus. This pattern is highly suggestive of primary multifocal ictogenesis in limbic (H) and brainstem (lower colliculus) areas followed by secondary generalization. Lipoperoxidation was significantly increased in relation to control in all studied areas: F, E and H (p <0.0001); T (p <0.001); M (p <0.01). GSH concentration was significantly reduced only in F (p <0.01) and E (p <0.0001). NO2- concentration was increased in T and M (p <0.01); Values of p <0.05 were considered significant. Neurochemistry evidences severe oxidative damage, mainly in lipid membranes. The increase in NO2- in caudal structures corroborates with literature about the audiogenic model. A hypothesis that may aggregate pathomechanistic relevance to the model as theoretical construct is thrown. Furthermore, the implementation of an i.c.v administration protocol offers ample possibilities for the research and drug development.
Status epilepticus (SE) is a common and potentially lethal form of clinical emergency. The advances in antiepileptic therapy in the last decades failed to change the rates of treatment responsiveness in that condition, as well as in epilepsies. Down regulation of Na +, K + -ATPase (NKA) activity has been implicated in the pathophysiology of various neurodegenerative diseases, including epilepsy. In the present study, epileptic seizures were induced through intracerebroventricular (i.c.v.) ouabain, a model with predictive value for generalized tonic-clonic seizures. The ethological characteristics of the seizures were outlined regarding the localizing semiology. Neurochemical analysis were also performed: lipoperoxidation, TBARS; reduced glutathione (GSH) concentration; and nitrite (NO2-) concentration in prefrontal cortex (F), hippocampus (H), striatum (E), thalamus (T) and mesencephalon (M). About ~ 85% of the animals receiving 29.23 μg of i.c.v. ouabain exhibited a behavior consisting of two procursive seizures intercalated by freezing and followed by partial clonus evolving as generalized clonus with loss of the righting reflex and late tonus. This pattern is highly suggestive of primary multifocal ictogenesis in limbic (H) and brainstem (lower colliculus) areas followed by secondary generalization. Lipoperoxidation was significantly increased in relation to control in all studied areas: F, E and H (p <0.0001); T (p <0.001); M (p <0.01). GSH concentration was significantly reduced only in F (p <0.01) and E (p <0.0001). NO2- concentration was increased in T and M (p <0.01); Values of p <0.05 were considered significant. Neurochemistry evidences severe oxidative damage, mainly in lipid membranes. The increase in NO2- in caudal structures corroborates with literature about the audiogenic model. A hypothesis that may aggregate pathomechanistic relevance to the model as theoretical construct is thrown. Furthermore, the implementation of an i.c.v administration protocol offers ample possibilities for the research and drug development.
Status epilepticus (SE) is a common and potentially lethal form of clinical emergency. The advances in antiepileptic therapy in the last decades failed to change the rates of treatment responsiveness in that condition, as well as in epilepsies. Down regulation of Na +, K + -ATPase (NKA) activity has been implicated in the pathophysiology of various neurodegenerative diseases, including epilepsy. In the present study, epileptic seizures were induced through intracerebroventricular (i.c.v.) ouabain, a model with predictive value for generalized tonic-clonic seizures. The ethological characteristics of the seizures were outlined regarding the localizing semiology. Neurochemical analysis were also performed: lipoperoxidation, TBARS; reduced glutathione (GSH) concentration; and nitrite (NO2-) concentration in prefrontal cortex (F), hippocampus (H), striatum (E), thalamus (T) and mesencephalon (M). About ~ 85% of the animals receiving 29.23 μg of i.c.v. ouabain exhibited a behavior consisting of two procursive seizures intercalated by freezing and followed by partial clonus evolving as generalized clonus with loss of the righting reflex and late tonus. This pattern is highly suggestive of primary multifocal ictogenesis in limbic (H) and brainstem (lower colliculus) areas followed by secondary generalization. Lipoperoxidation was significantly increased in relation to control in all studied areas: F, E and H (p <0.0001); T (p <0.001); M (p <0.01). GSH concentration was significantly reduced only in F (p <0.01) and E (p <0.0001). NO2- concentration was increased in T and M (p <0.01); Values of p <0.05 were considered significant. Neurochemistry evidences severe oxidative damage, mainly in lipid membranes. The increase in NO2- in caudal structures corroborates with literature about the audiogenic model. A hypothesis that may aggregate pathomechanistic relevance to the model as theoretical construct is thrown. Furthermore, the implementation of an i.c.v administration protocol offers ample possibilities for the research and drug development.

LUSTOSA, I. R. Avaliação do modelo de status epilepticus por ouabaína: da administração intracerebroventricular à análise de parâmetros comportamentais e indicadores de dano cerebral. 2016. 118 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016.
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Status epilepticus (SE) is a common and potentially lethal form of clinical emergency. The advances in antiepileptic therapy in the last decades failed to change the rates of treatment responsiveness in that condition, as well as in epilepsies. Down regulation of Na +, K + -ATPase (NKA) activity has been implicated in the pathophysiology of various neurodegenerative diseases, including epilepsy. In the present study, epileptic seizures were induced through intracerebroventricular (i.c.v.) ouabain, a model with predictive value for generalized tonic-clonic seizures. The ethological characteristics of the seizures were outlined regarding the localizing semiology. Neurochemical analysis were also performed: lipoperoxidation, TBARS; reduced glutathione (GSH) concentration; and nitrite (NO2-) concentration in prefrontal cortex (F), hippocampus (H), striatum (E), thalamus (T) and mesencephalon (M). About ~ 85% of the animals receiving 29.23 μg of i.c.v. ouabain exhibited a behavior consisting of two procursive seizures intercalated by freezing and followed by partial clonus evolving as generalized clonus with loss of the righting reflex and late tonus. This pattern is highly suggestive of primary multifocal ictogenesis in limbic (H) and brainstem (lower colliculus) areas followed by secondary generalization. Lipoperoxidation was significantly increased in relation to control in all studied areas: F, E and H (p <0.0001); T (p <0.001); M (p <0.01). GSH concentration was significantly reduced only in F (p <0.01) and E (p <0.0001). NO2- concentration was increased in T and M (p <0.01); Values of p <0.05 were considered significant. Neurochemistry evidences severe oxidative damage, mainly in lipid membranes. The increase in NO2- in caudal structures corroborates with literature about the audiogenic model. A hypothesis that may aggregate pathomechanistic relevance to the model as theoretical construct is thrown. Furthermore, the implementation of an i.c.v administration protocol offers ample possibilities for the research and drug development.
O status epilepticus (SE) é uma forma comum de emergência clínica potencialmente letal. O avanço na terapia antiepiléptica nas últimas décadas não modificou as taxas de responsividade a tratamento desta condição, bem como das epilepsias em geral. A regulação para baixo da tividade de Na+,K+-ATPase (NKA) tem sido implicada na fisiopatologia de diversas doenças neurodegenerativas, inclusive epilepsias. No presente trabalho, foram induzidas crises epilépticas por ouabaína via intracerebroventricular (i.c.v.), um modelo com valor preditivo para crises tônico-clônias generalizadas. Foram delineadas as características etológicas do SE com vistas à semiologia de valor localizatório e mediram-se indicadores neuroquímicos: lipoperoxidação, TBARS; concentração de glutationa, GSH; nitrito, NO2- nas áreas cerebrais córtex pré-frontal (F), hipocampo (H), corpo estriado (E), tálamo (T) e mesencéfalo (M). Cerca de ~85% dos animais que recebem 29,23 µg de ouabaína via i.c.v. exibiram um comportamento consistente de duas crises procursivas intercaladas por freezing seguidas de clono parcial que evolui com clono generalizado e perda do reflexo de endireitamento com fenômenos tônicos tardios. Este padrão é altamente sugestivo de ictogênese primária multifocal em áreas límbica (H) e de tronco encefálico (colículo inferior) seguidas de generalização. A lipoperoxidação esteve significativamente aumentada em relação ao controle em todas as áreas estudadas: F, E e H (p<0,0001); T (p<0,001); M (p<0,01). A [GSH] esteve significativamente reduzida apenas em F (p<0,01) e E (p<0,0001). A [NO2-] esteve aumentada em T e M (p<0,01). Valores de p<0,05 foram considerados significativos. A neuroquímica evidencia grave dano oxidativo, nomeadamente nas membranas lipídicas. O aumento da [NO2-] em estruturas caudais corrobora com a literatura sobre o modelo audiogênico. Fornece-se ainda uma hipótese sobre a fisiopatologia do modelo da ouabaína i.c.v. que pode agregar-lhe relevância patomecanística enquanto construto teórico. Ademais, aportam-se amplas possibilidades para a pesquisa e desenvolvimentos de medicamentos através da implantação do protocolo de via de administração i.c.v. crônica.

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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior
A desnutrição intra-uterina tem sido correlacionada com o desenvolvimento de doenças cardiovasculares e renais, que estão vinculadas ao balanço de Na+ alterado. No presente estudo, investigamos se a má-nutrição materna eleva o estresse oxidative placentário com impacto subseqüente nos transportadores renais de Na+ dependentes de ATP, na prole. A mánutrição materna foi induzida durante a gestação através de uma dieta multicarenciada, também denominada dieta básica regional. O estresse oxidativo foi avaliado pela mensuração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico, os quais estavam 35-40% maiores nas mães malnutridas. As bombas de sódio foram avaliadas nos ratos controle e intra-uterinamente malnutridos (MalN) (25 e 90 dias de vida). A atividade da (Na++K+)ATPase foi idêntica nos grupos aos 25 dias (~150 nmol Pi×mg-1×min-1); aumentou 40% com o desenvolvimento nos ratos controle, mas permaneceu constante na prole de mães malnutridas. Em contraste, nos ratos em idade juvenil, a atividade da Na+-ATPase foi maior nos animais MalN do que nos controles (70 vs 25 nmol Pi×mg-1×min-1). Contudo, ela não acompanhou o desenvolvimento renal e corpóreo: aos 90 dias ela era 50% menor no MalN do que no controle. A estimulação máxima da Na+-ATPase pela angiotensina II foi 35% menor no MalN do que nos ratos controle e foi deflagrada apenas com doses bem maiores do peptídeo (10-10M), quando comparadas aos animais controles (10-14M). A atividade da proteína kinase C, que é um mediadora dos efeitos da angiotensina II na Na+-ATPase, atingiu um terço do valor normal. Podemos concluir que o estresse oxidativo placentário induzido má-nutrição altera o controle fino da manipulação renal de Na+ na prole e contribui para a programação de distúrbios tardios da homeostase de Na+