Dissertations / Theses on the topic 'Paludisme – Physiopathologie'

Les formes graves du paludisme sont associées à la séquestration parasitaire. Les protéines de surface des hématies parasitées (HP) sont à la fois les ligands de cette séquestration et les cibles de la réponse immunitaire. Elles représentent donc des candidats potentiels pour le développement d'une stratégie antipaludique. La cytoadhérence placentaire des HP matures est régie par l'interaction du DBLy3 de PfEMP1 avec la CSA alors que RSP2 est le ligand des formes jeunes. La production d'anticorps conformationnels contre les antigènes mineurs représente un obstacle majeur. Pour outrepasser cela, nous avons développé la technique d'immunisation des souris précédemment rendues tolérantes. Ainsi, nous avons produit des anticorps monoclonaux qui reconnaissent des conformations natives du DBLy3 (CSA) et RSP2. Après l'expression de DBLy3 (CSA) fonctionnelle dans le système d'expression des cellules d'insectes, nous avons produit des anticorps anti_DBLy3 (CSA) inhibant la cytoadhérence chez le singe et la souris. Ces anticorps nous ont permis de montrer que le DBL contient des épitopes conservés malgré sa diversité des séquences primaires. Les anticorps anti-RSP2 inhibent la cytoadhérence des formes jeunes des HP (CSA) et l'invasion des mérozoi͏̈tes. Ces anticorps nous ont permis de montrer que l'expression de RSP2 commence au stade trophozoi͏̈te, et qu'elle est accumulée dans les rhoptries avant d'être transportée à la surface du mérozoi͏̈te. RSP2 est transférée à la surface de l'hématie lorsque le mérozoi͏̈te s'y attache, sans que l'invasion ne soit nécessaire. Réunis, ces résultats promeuvent l'élaboration d'une stratégie thérapeutique anti- séquestration contre le paludisme gestationnel, et plus généralement contre la cytoadhérence des HP (CSA)
Sequestration of Plasinodium falciparum-infected erythrocytes is associated with severe malaria. Plasmodium falc parasites express variant adhesion molecules on the surface of infected erythrocytes (lE) which act as targets for natural protection. It was shown that sequestration in placenta is mediated by binding to CSA via DBLy3 domain of PfEMP1 for the mature IE and by RSP2 for rIE. Conventional immunization procedures rarely result in the successful production of monoclonal antibodies (mAbs) against such conformational vaccine candidates. Here we have produced the anti-DBLy3 (CSA) by rendering mice tolerant to normal red blood cells and CHO745. This procedure has permitted us to develop the anti-RSP2 too. Moreover we have produced the simian and murine anti-DBLy3 from recombinant DBLy3 (CSA) We have shown that a anti-DBLy3 (CSA) cross-reactive specifically with the mature IE (CSA) surface, suggesting that the DBLy3 (CSA) induce a pan-reactive immune response. Then the anti-recombinant DBLY3 (CSA) antibodies inhibit the CSA specific binding of parasites. The anti-RSP2 mAbs inhibit the rIE (CSA) cytoadhesion and merozoi͏̈te invasion. We shown that RSP2 is express during all parasite cycle but is localization on the erythrocyte surface is exclusive to the 20 first hour of cycle. During schizont stage, RSP2 is translated on the merozoi͏̈te surface via the rhoptries. It is transferred on the erythrocyte surface during merozoi͏̈te attachment without necessary entry parasite. Together, these results are the important step toward the development of a anti cytoadhesion vaccine that could protect against lE (CSA) sequestration and in particulary pregnant women

De nombreux arguments sont en faveur d’un contrôle génétique complexe de la résistance au paludisme, mais les gènes impliqués restent encore mal connus. Afin d’identifier de nouveaux gènes de résistance et de prédisposition et de contribuer à une meilleure compréhension des mécanismes physiopathologiques du paludisme à Plasmodium falciparum, nous avons mené conjointement chez l’homme et la souris différentes approches génétiques et génomiques. Ainsi, dans une première partie, une approche par clonage positionnel couplée à une approche « gène candidat » nous a permis de mettre en évidence chez l’homme, dans un premier temps, une liaison génétique entre la région 6p21-p23 et les formes simples du paludisme, et dans un deuxième temps, les associations des gènes TNF et NCR3 avec plusieurs phénotypes liés aux formes simples du paludisme, tels que le risque d’accès palustre et la parasitémie. L’implication potentielle du gène NCR3, codant pour un récepteur activateur des cellules NK, dans le contrôle génétique du paludisme a suggéré le rôle déterminant que pouvait jouer la réponse immune innée, et dans un sens plus large, la réponse précoce à l’infection palustre, dans le déterminisme du devenir de l’infection. Ainsi, dans une deuxième partie, nous avons analysé, notamment au temps précoce, le transcriptome cérébral de souris résistantes et de souris sensibles au neuropaludisme induit par Plasmodium berghei ANKA. L’analyse cinétique a révélé l’existence d’une réponse précoce à l’infection discriminant significativement les souris résistantes des souris sensibles. L’étude fonctionnelle des profils d’expression géniques caractérisant cette réponse précoce a permis de proposer différents mécanismes physiopathologiques potentiellement impliqués dans le développement du syndrome neurologique murin. Les gènes candidats et les voies physiologiques ainsi identifiés dans le modèle murin ont contribué à proposer de nouvelles hypothèses de travail à tester chez l’homme. Ces résultats illustrent le potentiel des approches génétiques et génomiques dans la compréhension des mécanismes protecteurs et pathologiques impliqués dans le paludisme humain
There is a growing body of evidence for genetic factors controlling the outcome of malaria infection. However, few malaria resistance genes have been identified. In order to identify new genes and physiological mechanisms controlling resistance or susceptibility to malaria, we have used genetic and genomic approaches in humans and mice. Thus, we have combined, in a first part, a positional cloning approach and a “candidate gene” approach in humans. This revealed a genetic linkage between human chromosome 6p21-p23 and mild malaria and the association of both TNF and NCR3 genes with several phenotypes related to mild malaria, such as risk of developing malaria attack or parasitemia. The potential involvement of NCR3 gene, which encodes a NK cell activating receptor, in the genetic control of malaria suggests that innate immunity and, in a larger view, early host responses to the parasite play a major role in the outcome of infection. In a second part, we have analysed, notably at the early stages of infection, the brain transcriptome in well-defined genetically cerebral malaria (CM)-resistant and CM-susceptible mice infected by Plasmodium berghei ANKA. A kinetic analysis revealed the existence of an early host response to infection that significantly discriminated between CM-susceptible and CM-resistant mice. The functional study of the genes identified allowed us to propose several physiopathological mechanisms potentially involved in the development of the neurological murine syndrome. Also, our results allowed us to propose new working hypotheses that should be tested in humans. These results emphasize the power of genetic and genomic approaches that should help in identifying/understanding both protective and pathological mechanisms involved in human malaria

Le paludisme pernicieux tue 1. 4 a 2. 6 millions de personnes par an. Les etudes realisees en zone endemique montrent qu'un cas clinique peut etre declenche par un ou plusieurs clones paraitaires, et que la pathologie est associee a la presence de cytokines pro-inflammatoires. Une meilleure connaissance du role de ce polymorphisme parasitaire dans la genese du neuropaludisme et de la cascade de cytokines impliquees devrait permettre de mieux comprendre cette pathologie. Le travail que nous avons realise est constitue de deux parties : 1) une etude de la virulence de plasmodium berghei anka a partir d'une lignee polyclonale et de quatres clones qui en sont issus 2) deux modeles murins de neuropaludisme experimental induit par plasmodium berghei anka. Nous avons evalue d'une part le role de l'interferon-gamma par le biais des souris deficientes pour le recepteur de cette cytokine, et d'autre part l'activite cytotoxique grace aux souris beige. Nous montrons que les clones induisent un taux variable de neuropaludisme chez la souris c57bl/6, et que cette variation depend de la taille de l'inoculum. Avec le modele de souris deficientes pour le recepteur de l'interferon-gamma, nous avons montre que l'absence de cette cytokine supprime chez des souris genetiquement sensibles, tout neuropaludisme. Nous montrons aussi que l'expression de icam-1 est independante du taux de tnf-alpha. Le modele des souris beige nous a permis de confirmer le role essentiel de l'activite cytotoxique dans la neuropathogenese.

Ce travail met en évidence une association entre le paludisme grave et des facteurs liés à l'enfant et son environnement familial à Bamako, une zone urbaine mésoendémique. Nos résultats valident des indicateurs robustes de mauvais pronostic et montrent que le neuropaludisme et l'anémie palustre grave ont des facteurs de risques et un pronostic distincts. Nous avons trouvé une agrégation familiale significative du neuropaludisme et de l'anémie palustre grave, reflétant vraisemblablement l'expression de facteurs génétiques. Les effets de l'environnement familial avec, au premier plan, les connaissances, attitudes et pratiques des mères, paraissent trop modestes pour expliquer l'agrégation familiale des cas dans la population d'étude. Pour conclure, nous soulignons la nécessité de cibler les études à venir sur des phénotypes précis pour progresser dans la compréhension de la physiopathologie ou le traitement des formes potentiellement mortelles du paludisme de l'enfant africain
This work intended to uncover risk factors, either related to the child or its household, associated with severe malaria in Bamako, a mesoendemic urban setting. Independently of age, our results validate robust prognostic indicators and evidence that cerebral malaria and severe malarial anemia have distinct risk factors and prognoses. We detected a significant familial aggregation of both cerebral malaria and severe malarial anemia. This familial aggregation is probably chiefly related to genetic factors rather than to shared environment, since household related factors, the most important of which were associated to the mothers' knowledge, attitude, and practices, had only relatively marginal effects on the risk of developing severe malaria in the study population. We conclude that focusing on very precise phenotype should be mandatory in further studies aiming to illuminate the pathophysiology or improve the treatment of lifethreatening malaria in African children

L'adherence des hematies parasitees par p. Falciparum (hp) a des recepteurs endotheliaux humains est un element cle de la physiopathologie du paludisme. La sequestration des hp pendant la deuxieme moitie du cycle intra-erythrocytaire est liee a l'expression de la proteine parasitaire polymorphe pfemp1 (specifiee par la famille multigenique var). La sequestration placentaire des hp pendant la premiere grossesse, par adherence sur la chondroitine sulfate a (csa), permet la proliferation d'un nouveau variant antigenique. Ce paludisme gestationnel entraine une anemie maternelle et une mortalite infantile accrue. La selection in vitro de populations parasitaires isogeniques de phenotype de cytoadherence defini, nous a permis de montrer que la regulation d'expression de la famille var est epigenetique (commutation in situ), et que le controle transcriptionnel en deuxieme moitie de cycle est mutuellement exclusif : une population de phenotype defini n'exprime qu'un seul gene var. Le ligand proteique exprime par une population adherant exclusivement a la csa, est un membre unique de la famille pfemp1. L'expression des 8 domaines de cette proteine a la surface de cellules cho a permis d'identifier le domaine implique dans l'interaction avec la csa : le dbl3. Nous avons participe a la description recente de la cytoadherence d'hp en premiere moitie de cycle. Ce nouveau phenotype, bien que lie a la cytoadherence des hp sur la csa en deuxieme moitie de cycle, est opere par un couple recepteur endothelial/ligand parasitaire encore inconnu. Deux nouvelles proteines parasitaires immunogenes, presentes a la surface des hp uniquement en premiere moitie de cycle (rsp-1 et rsp-2) sont les operateurs putatifs de la cytoadherence en premiere moitie de cycle et expliqueraient la discordance entre les densites parasitaires placentaire (elevee) et peripherique (faible ou nulle) pendant la grossesse. Ces resultats font esperer le developpement d'un vaccin contre le paludisme gestationnel.

Récemment la phagocytose des EPs via le récepteur CD36 exprimé à la surface des cellules phagocytaires a été mise en évidence. Cette phagocytose a la particularité de ne pas produire de TNF-a. Le premier objectif du travail présenté a été d'étudier, sur les monocytes humains, les variations d'expression du CD36 et de la production du TNF-a au cours du paludisme. Nous avons ainsi pu démontrer à la fois in vivo et in vitro une diminution de l'expression du CD36 à la surface des monocytes et leur moindre capacité de production de TNF-a. Le deuxième objectif a été l'étude des médiateurs physiologiques. Nous avons montré que l'IL-13 surexprimait le CD36 à la surface des monocytes humains et que la voie de signalisation de cette surexpression passait par l'activation du récepteur nucléaire PPAR-g. Ces résultats suggèrent qu'au cours du paludisme, la production de cytokines Th2 (IL-13 et IL-4) augmenteraient la clairance parasitaire et diminueraient la production de TNF-a
Recently, phagocytosis of PEs via CD36 receptor expressed on the surface of phagocytic cells has been proven. The first objective of the present work was to study, during malaria infection, the variations of CD36 expression and TNF-α production in human monocytes. A decrease of CD36 expression on monocytes surface, along with a lesser production of TNF-α. The second objective was to study Th2-type cytokines. IL-13, another major cytokine of TH2 response, was found able to elicit an overexpression of CD36 on human monocyte surface. Moreover, it was demonstrated that the signalization pathway for this overexpression was linked with activation of PPARγ nuclear receptor. These results suggest than, during the course of malaria infection, the production of Th2 cytokines, namely IL-4 and IL-13, that can induce an overexpression of CD36 receptor on human monocyte surface via an activation of PPARγ nuclear receptor, would increase parasite clearance but would decrease TNF-α production

Le paludisme est l'une des maladies infectieuses les plus dévastatrices qui a affecté environ 214 millions de personnes dans le monde. Elle est causée par l'infection par le parasite plasmodium, dont P. falciparum et P. vivax sont les plus représentés. Le développement asexué du parasite dans le sang provoque la physiopathologie de la maladie dont l'évolution passe du paludisme simple au paludisme grave, notamment le neuropaludisme. Nos travaux ont d'abord porté sur l'analyse du transcriptome, par la technologie des microarrays, des cellules sanguines d'une cohorte constituée au Sénégal. L'analyse des résultats a permis d'identifier un ensemble de gènes dont l'expression permettait de distinguer le profil transcriptomique du neuropaludisme de ceux du paludisme simple et des autres formes de paludisme grave. Ces gènes sont enrichis en voies biologiques impliquées dans l'activation des récepteurs des lymphocytes B et T mais aussi des TLR et des récepteurs Fcgamma. On y trouve aussi plusieurs gènes candidats qui ont déjà été testés pour leur résistance au paludisme, dont RNASE3 et IL18R. Nous avons aussi réalisé, avec une partie de cette même cohorte sénégalaise, une étude d’association cas-contrôles qui n’a pas permis de détecter d’association entre le polymorphisme NCR3-412 et le paludisme sévère. Enfin l’approche basée sur une métaanalyse a permis de confirmer son implication dans le paludisme simple, ainsi que celle du polymorphisme LTA+252 dans le paludisme sévère, contrairement au LTA+80, au TNF-238 et au TNF-308. L’ensemble des travaux contribuent à une meilleure compréhension des facteurs génétiques et génomiques impliqués dans la résistance de l’hôte au paludisme
Malaria is one of the most devastating infectious diseases that has affected an estimated 214 million people worldwide and caused nearly 600,000 deaths in 2015. It is caused by infection with the plasmodium parasite, P. falciparum and P. vivax are the most represented. The asexual development of the parasite in the blood causes the pathophysiology of the disease which can evolve from mild malaria to severe malaria, including cerebral malaria. Our work first focused on the analysis of the microarray transcriptome of blood cells of a cohort composed in Senegal. The analysis of the results allow to identify a set of genes whose expression permit to distinguish the transcriptomic profile of cerebral malaria from those of mild malaria and other forms of severe malaria. These genes are enriched in biological pathways involved in the activation of B and T lymphocyte receptors also TLRs and Fcgamma receptors. These genes also include several candidate proteins that have already been tested for resistance to malaria, including RNASE3 and IL1RN

Le paludisme, responsable du décès d’un million de personnes chaque année, reste un problème majeur de santé publique. Des études récentes ont évoqué des mécanismes immunopathologiques communs entre les manifestations allergiques et le paludisme, soutenus par l’existence d’un homologue parasitaire du facteur de relargage d’histamine humain (PfTCTP). Notre objectif était de déterminer l’implication des acteurs de la réponse allergique dans la gravité de l’accès palustre, et la capacité de la PfTCTP à moduler ces réponses.Trois groupes de sujets ont été recrutés dans des structures de santé à Dakar. Les patients infectés présentaient des taux élevés d’IgE totales et spécifiques, par rapport aux sujets sains, mais sans corrélation avec la gravité. A l’aide d’un test d’activation des basophiles basé sur l’expression du CD203c, nous avons montré que les basophiles de patients en accès simple présentaient un niveau d’activation basal significativement réduit. Ces mêmes patients présentaient des concentrations plasmatiques élevées en IL-10, suggérant un meilleur contrôle de leur réponse inflammatoire. Les basophiles de patients en accès grave présentaient une hyperréactivité à l’hémozoïne, ainsi qu’à des stimulations IgE-dépendantes (anti-IgE). Enfin, la présence de PfTCTP circulante a été associée à une plus grande réactivité des basophiles, tandis que l’acquisition d’anticorps contre cette protéine est associée à une protection envers une trop grande réactivité cellulaire.En conclusion, nos travaux soutiennent l’hypothèse d’une activation allergique excessive au cours du paludisme grave. Ce travail ouvre la voie à de nouvelles approches thérapeutiques
Malaria is responsible of the death of a million person each year and remains a major public health problem. Recent studies have suggested the existence of common immunopathologic mechanisms between allergic manifestations and malaria, supported by the existence of a parasite homolog of the human histamine releasing factor (PfTCTP). Our objective was to determine i) the implication of allergic response actors in the severity of malaria, and ii) the ability of PfTCTP to modulate these responses.Three groups of subjects were recruited in health structures in Dakar. Infected patients presented high levels of total and specific IgE, compared to healthy controls, although not correlated with severity. With a basophil activation test based on CD203c expression, we demonstrated that basophils from mild malaria patients presented a significantly reduced basal level of activation which paralleled higher levels of IL-10, thus suggesting a better control of their inflammatory responses. Basophils from severe malaria patients showed an hyperreactivity to haemozoin and to IgE-dependent stimulations (anti-IgE). Finally, presence of circulating PfTCTP was associated with a higher basophil reactivity, whereas acquisition of anti-PfTCTP antibodies was associated with protection towards excessive cellular reactivity.In conclusion, our results support the hypothesis of an excessive allergic activation during severe malaria. This work might open the way to new therapeutic approaches

La phase érythrocytaire du cycle de Plasmodium est caractérisée par une hémolyse importante et la libération d’hème chez l’hôte. Grâce à ses activités pro-oxydantes et immunomodulatrices, l’hème contribuerait au dysfonctionnement de la réponse immune observée durant le paludisme grave. Ainsi, ce travail de thèse avait pour but de clarifier le rôle de l’hème sur la réponse des lymphocytes T et des cellules gliales au cours du neuropaludisme et de l’anémie palustre sévère dans des modèles murins de paludisme. De plus, nous avons étendu nos études au paludisme chez des patients infectés par P. falciparum manifestant différents phénotypes cliniques. D‘après nos résultats l’hème diminue la réponse délétère de type 1 des lymphocytes T CD4 et des microglies chez les modèles murins. Alors que cette réponse est essentielle à la clairance du parasite, le prétraitement des souris BALB/c avec l’hème induit une parasitémie plus faible, en comparaison au groupe non traité, qui est également associée à une anémie liée à une dysérythropoïèse. Cependant, l’injection d’hème chez des souris C57BL/6 pendant l’infection les protège du neuropaludisme en diminuant le recrutement des lymphocytes T, la réponse de type M1 des microglies et la production de cytokines pro-inflammatoires dans le cerveau. Par l’étude réalisée dans l’Odisha en Inde nous avons corroboré l’ensemble de ces résultats avec des données cliniques, et montrons que les niveaux plasmatiques d’hème augmentent chez les patients atteints de neuropaludisme et corrèlent positivement avec les cytokines IP-10, IL-10, TNF-alpha et MCP-1. Nous soulignons dans notre étude la complexité de la physiopathologie du paludisme grave
During the erythrocytic phase of the parasite Plasmodium, large amounts of heme are release in circulation. Due to its pro-oxidant, and immunomodulating activities, heme might be responsible for the alterations of the immune response that were reported during severe malaria. Thus, the objectives of this work were to clarify the impact of heme on the response of T lymphocytes and glial cells in rodent models of severe malarial anemia, and cerebral malaria. In addition, we have also looked at the relationship between heme levels and malaria severity in a human cohort of P. falciparum-infected patients manifesting mild and severe malaria. Heme decreased the pro-inflammatory type 1 response of CD4 T lymphocytes and microglia cells in rodent models. Despite the essential role of this response for the elimination of the parasite, BALB/c mice that were preconditioned with heme before infection had lower parasitemia compared to the untreated group. However, heme induced stronger anemia during the infection that was concomitant with alterations in erythropoiesis. In addition, heme injection during infection protected partly C57BL/6 mice from developing cerebral malaria by preventing T cell recruitment to the brain, the M1 response of microglia cells, and the production of pro-inflammatory cytokines by brain cells. Interestingly, we show from our field study in Odisha, India, that plasma heme levels increased with the severity of malaria, and more specifically during cerebral malaria, and correlated positively with the plasma levels of four cytokines: IP-10, IL-10, TNF-alpha and MCP-1. Herein we underscore the complexity of the pathophysiology of severe malaria

Le paludisme demeure la maladie parasitaire la plus meurtrière à travers le monde. La mise en place de nouvelles approches thérapeutiques dans la lutte contre ce pathogène semble indispensable. Les macrophages via le récepteur CD36 jouent un rôle crucial dans la reconnaissance et l'élimination des hématies infectées par P. Falciparum. Ainsi, le maintien d'un niveau élevé d'expression du récepteur CD36 à la surface des macrophages est un élément capital dans la lutte contre le parasite. L'établissement de l'infection est toujours associé à une production excessive de médiateurs pro-inflammatoires. Dans ce travail, nous montrons in vitro que les processus inflammatoires régulent négativement l'expression du récepteur CD36 à la surface des macrophages humains et murins et diminuent la clairance des hématies infectées. Dans ces conditions inflammatoires, nous démontrons que les ligands du récepteur nucléaire PPARgamma sont inefficaces pour promouvoir l'expression du récepteur CD36, phénomène directement associé à un défaut d'expression et d'activation de PPARgamma. Cependant, nous mettons en évidence pour la première fois que l'activation du facteur de transcription Nrf2 permet de restaurer indépendamment de PPARgamma l'expression et les fonctions antiplasmodiales du récepteur CD36. L'ensemble de ces résultats ont été reproduits in vivo dans un modèle de paludisme murin où seulement les activateurs de Nrf2 et non les ligands de PPARgamma contribuent à améliorer l'évolution de l'infection. Ces données soulignent le rôle important du facteur de transcription Nrf2 dans le traitement du paludisme via la modulation d'expression du récepteur CD36 des macrophages
Malaria remains the deadliest parasitic disease in the world. The introduction of new pharmacological approaches in the fight against this pathogen is essential. Macrophages through the expression of CD36 receptor play a crucial role in the recognition and the elimination of P. Falciparum infected erythrocytes. Therefore, maintaining an elevated level of CD36 receptor on the surface of macrophages is a crucial element in the struggle against the parasite. The establishment of malaria infection is always associated with an excessive production of pro-inflammatory mediators. In this work, we show in vitro that inflammatory processes negatively regulate the expression of CD36 receptor on the surface of human and mouse macrophages and hence decrease the clearance of parasitized erythrocytes. In these inflammatory conditions, we demonstrate that PPARgamma activators are ineffective to promote CD36 expression on macrophages, a phenomenon directly associated with a defect of both PPARgamma expression and activation. However, we highlight here for the first time that the activation of the Nrf2 transcription factor controls independently of PPARgamma the expression of CD36 receptor and its antiplasmodial function. All these results have been reproduced in vivo in a murine malaria model where only Nrf2 activators and not PPARgamma ligands contribute to improve the outcome of infection. Collectively, these data highlight the important role of the Nrf2 transcription factor in the control of malaria through the modulation of CD36 expression on macrophages

Le paludisme est une maladie tropicale causée par un parasite du genre Plasmodium. Chez l’Homme, un niveau élevé de phospholipase A2 sécrétée de groupe IIA humaine (hGIIA) est mesuré dans le plasma des patients impaludés. Cette enzyme est connue pour son rôle antibactérien et pro-inflammatoire. Cependant, son rôle dans le paludisme n’a jamais été exploré. Pour comprendre le rôle in vivo de la hGIIA dans cette pathologie, nous avons entrepris la caractérisation hématologique, histopathologique et immunohistochimique de l’infection de souris C57BL/6, transgéniques (Tg+) pour l’enzyme humaine, par l’espèce murine Plasmodium chabaudi chabaudi 864VD. Ce modèle reproduit un paludisme non létal. Nos résultats ont permis d’établir que les souris Tg+ ont un meilleur contrôle de l’infection au moment du pic de crise parasitaire (J14 post-inoculation), avec une diminution de 27% de la parasitémie, comparé aux souris « littermates » non transgéniques (Tg-). L’injection de hGIIA recombinante aux jours 12, 13 et 14 p.i. (0,125 mg/kg deux fois par jour) à des souris C57BL/6 wild-type (WT) infectées par P. c. chabaudi 864VD provoque une diminution d’environ 19% de la parasitémie à J14 p.i., démontrant un rôle direct de la hGIIA dans la diminution de la population parasitaire. Les données hématologiques montrent que l’infection chez la souris Tg+ provoque une anémie plus durable que chez la souris Tg- et une élévation nettement plus importante du nombre de leucocytes, en particulier des polynucléaires neutrophiles. Chez la souris Tg+ parasitée, on observe aussi l’activation d’un nombre important de lymphocytes et une activation spécifique des monocytes avant le pic de crise. Chez la souris Tg- infectée, les données histologiques mettent en avant une meilleure récupération des lésions histopathologiques du foie et une hyperplasie des lymphocytes B dans la rate, tandis que les souris Tg+ infectées présentent des lésions hépatiques tardives et une hématopoïèse extramédullaire splénique. Les résultats des analyses par RT-qPCR suggèrent que l’ARNm de la hGIIA augmente au pic parasitaire dans le foie des souris Tg+ infectées, mais diminue dans la rate et les cellules sanguines. L’injection de hGIIA recombinante au début de la phase patente est sans effet sur la parasitémie, ce qui laisse supposer que des événements plus tardifs dans l’infection sont nécessaires à l’activité antiparasitaire de l’enzyme. L’étude du rôle des lipoprotéines oxydées comme substrat potentiel de l’activité antiparasitaire de l’enzyme, basée sur des résultats in vitro, est abordée. En conclusion, nos études ont permis de dresser un tableau large de l’infection à Plasmodium chez la souris exprimant la hGIIA, et ouvrent de nouvelles perspectives dans l’analyse du rôle de l’enzyme dans la physiopathologie du paludisme
Malaria is a tropical disease caused by a parasite of the Plasmodium genus. High levels of circulating human group IIA secreted phospholipase A2 (hGIIA) have been reported in malaria patients. The enzyme is well known for its bactericidal and pro-inflammatory actions. However, so far its role in malaria is unknown. In order to address the in vivo role of hGIIA in malaria, we performed a hematological, histopathological and immunohistochemical characterization of C57BL/6 hGIIA transgenic mice (Tg+ mice) infected with P. chabaudi chabaudi (864VD strain), a murine Plasmodium species and strain which causes non-lethal chronic malaria. Infected Tg+ mice present a 27% reduction of parasitaemia at the peak of infection (D14 post-inoculation, p.i.) compared to infected non-transgenic littermates (Tg- mice). Intraperitoneal injection of recombinant hGIIA at D12, D13 and D14 p.i. (0.125 mg/kg twice a day) into P. chabaudi 864VD-infected WT C57BL/6 mice leads to a 19% reduction of the parasitaemia at D14 p.i., demonstrating the direct and acute role of hGIIA in lowering parasite population and presumably ruling out a potential effect linked to chronic overexpression of hGIIA in Tg+ mice. Hematological data show a durable anemia in Tg+ mice compared to Tg- mice during the infection and an important increase of leucocytes, especially of polynuclear neutrophils. The parasitized Tg+ mouse also presents a higher activation of lymphocytes and a specific activation of monocyte cells at the pic of crisis. In the infected Tg- mouse, histological data show a better histopathological recovery in the liver and B cells hyperplasia in the spleen, whereas the infected Tg+ mouse presents late hepatic injuries and splenic extra-medullar hematopoiesis. RT-qPCR analyses suggest that hGIIA mRNA increases at the pic of infection in the liver of infected Tg+ mice, but decreases in spleen and blood. Intraperitoneal injection of recombinant hGIIA at the patent phase is without effect on parasitaemia, which suggests that later infection events are needed for the enzyme antiparasitic activity. Involvement of oxidized-lipoproteins as potential hGIIA substrates, based on in vitro studies, is discussed. In conclusion, our studies allowed us to elaborate a larger picture of the infection of Plasmodium in the mice expressing hGIIA and open new perspectives in the analysis of the role of the enzyme in malaria pathophysiology

Le paludisme ou malaria est une maladie parasitaire due à un protozoaire. Il est transmis principalement à l'homme par la piqûre de la femelle d'un moustique du groupe des anophèles. La transfusion sanguine représente la 3e voie potentielle de transmission de Plasmodium. L'incidence du paludisme a entraîné une augmentation de la proportion des donneurs de sang ayant été en contact avec le parasite. Le premier objectif de ce travail de thèse est d'analyser l'immune-réactivité de marqueurs biologiques de dépistage de Plasmodium dans les poches de sang pour prévenir le paludisme transfusionnel et plus spécifiquement, il s'agit de déterminer par goutte épaisse (GE) et Enzyme Linked lmmunosorbent Assay {ELISA), la prévalence du paludisme asymptomatique chez les donneurs de sang au Sud du Bénin. Le second objectif est de répertorier les marqueurs moléculaires les plus adéquats pour la recherche d'antigène et d'anticorps de Plasmodium, utilisables en dépistage de masse dans les centres de transfusion sanguine
Malaria is a disease due a protozoan. lt is transmitted to humans by the bite of a mosquito form Anopheles group. Blood transfusion is the third potential way of malaria transmission. Incidence of Malaria has increased the proportion of blood donors suspected to be contaminated by Plasmodium sp. The goal of that study is to determine the immunoreactivity of some biomarkers that could be used for the prevention of the blood transfusion transmitted malaria. For that purpose we used thick and thin blood film microscopical determination and an Enzyme Linked lmmunoSorbent Assay technology detecting malaria antigen (pan-pLDH) and malaria antibodies. These methods were used for the screening of 2515 blood donors during ten following months insouthern-Benin, sample were separated in the 4 following seasons observed in Western Africa