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Dissertations / Theses on the topic 'Peptidases – Synthèse'
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Gaucher, Bérangère. "Prodrogues d'inhibiteurs de la protéase du virus de l'immunodéficience humaine (VIH) : synthèse et évaluation de leurs propriétés pharmacologiques." Nice, 2002. http://www.theses.fr/2002NICE5717.
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2
Rocheblave, Luc. "Conception, synthèse et évaluation antivirale de nouveaux dérivés pseudopeptidiques, inhibiteurs de la protéase du VIH-1, contenant le motif (2-phenylsulfanyl-1-hydroxyethyl) sulfonamide." Aix-Marseille 2, 2000. http://www.theses.fr/2000AIX22079.
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3
Charbonnier-Gérardin, Christine. "Nouvelles applications en synthèse des acides 2-dialkylphosphonoalcanoique : préparation de phosphonopeptides inhibiteurs de peptidases." Nancy 1, 1991. http://www.theses.fr/1991NAN10063.
Full textAbstract:
Une conception générale de synthèse de phosphonopeptides renfermant un motif phosphore du cote c-terminal ou du cote n-terminal est proposée à partir d'un même substrat acide 2-dialkylphosphonoalcanoique. L'objectif est de préparer des inhibiteurs de peptidases présentant une activité thérapeutique. L'approche la plus efficace pour introduire le motif phosphonate sous forme enantiomeriquement pure dans les phosphonopeptides n-terminaux consiste à utiliser la chaine peptidique chirale pour induire une asymétrie sur le carbone directement lié au phosphore. Le couplage peptidique a également été mis au point entre l'acide phosphonoacetique et l'acide 6-aminopenicillanique dans le but de préparer de nouveaux antibiotiques. L'étude du comportement des phosphonopeptides n-terminaux en tant que réactifs de Honer a été abordée pour préparer des peptides insaturés, substituts possibles de peptides à usage thérapeutique. Enfin, la réactivité de thiols sur les chlorures d'acides 2-dialkylphosphonoalcanoiques constitue une voie de synthèse de dialcoxyphosphorylalcane thioates de s-alkyle, qui conduisent eux-mêmes par réaction de Horner à des thioesters éthyléniques, cette réaction des généralisable aux dérivés chrysanthemiques
4
Rolland, Valérie. "Synthèse peptidique en milieu organique par une endoprotéase modifiée et supportée." Montpellier 2, 1990. http://www.theses.fr/1990MON20113.
Full textAbstract:
Ce travail a pour but d'elaborer une methodologie originale permettant d'acceder au couplage de fragments peptidiques en eliminant tout risque de racemisation et la protection des chaines laterales des acides amines. Dans une premiere partie l'alpha-chymotrypsine endoprotease specifique vis-a-vis des acides amines aromatiques, est modifiee par des fonctions acryliques et copolymerisee avec des agents de reticulation et de maille a base de polyethylene glycols eux aussi fonctionnalises. Dans une deuxieme partie nous avons etudie les capacites de ce biocatalyseur supporte dans des couplages peptidiques en milieu organiques ou les phenomenes d'hydrolyse secondaire, constates dans la synthese enzymatique en milieu aqueux, sont quasiment elimines. Le biocatalyseur supporte permet l'obtention de produits optiquement purs avec des rendements tres satisfaisants. L'interet economique et industriel d'un tel catalyseur est son recyclage: il peut catalyser plusieurs cycles de reactions sans perdre son activite
5
Elhilali, Abdellah. "Synthèse et cyclisation de tétra N-hydroxy peptides." Montpellier 2, 1992. http://www.theses.fr/1992MON20144.
Full textAbstract:
Les recherches effectuees sont centrees sur la synthese de tetra n-hydroxypeptides, incluant la n-hydroxyphenylalanine en vue de leur cyclisation. L'oxydation de la base de schiff de l'ester methylique de la phenylalanine par le mmpp, suivi de l'ouverture de l'oxaziridine conduit au phe(n-oh)ome. Deux types de n-hydroxypeptides sont obtenus: 1) les peptides possedant une liaison n-hydroxyamide dont la formation est etudiee. Le reactif retenu pour les couplages est de dppcl; 2) les peptides possedant la substitution oh sur l'azote terminal qui sont synthetises en presence de dcc/hobt. La deprotection des peptides n-proteges est discutee et les conditions sont etudiees pour eviter le clivage de la liaison n-oh. L'introduction du n-oh permet la cyclisation du tetrapeptide phe-phe(n-oh)-phe-phe par le dppa en cyclotetrapeptide
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Richard, Jean-Alexandre. "Synthèse de sondes luminescentes utilisant un bras réactif auto-immolable : application à la détection de peptidases." Thesis, Rouen, INSA, 2008. http://www.theses.fr/2008ISAM0011.
Full textAbstract:
L’imagerie optique est actuellement en train de révolutionner le diagnostic pré-clinique et le développement des médicaments. Dans ce contexte, la société QUIDD développe des sondes intelligentes capables de mettre en évidence des processus biologiques impliqués dans les maladies. Ainsi, cette thèse a pour objectif le développement d’une méthode générale pour la synthèse de sondes luminescentes visant la détection de peptidases. Pour cela, des sondes composées d’un substrat peptidique et d’une espèce luminescente phénolique reliés entre eux par un bras réactif auto-immolables ont été développées. Deux approches ont été envisagées : une stratégie utilisant des pro-fluorophores à phénol dont l’émission de fluorescence est éteinte lorsque leur fonction phénol est substituée. Une autre stratégie a consisté en l’utilisation de 1,2-dioxétanes dont la libération dans le milieu engendre une émission spontanée de lumière. Cette thèse présente tout d’abord la validation de cette stratégie, notamment pour la détection de la caspase-3, une enzyme fortement impliquée dans le processus apoptotique. La deuxième partie de ce travail relate les efforts effectués afin de permettre l’utilisation de ces sondes en imagerie in vivoOptical imaging is currently revolutionizing pre-clinic diagnosis and drug development. In that context, QUIDD develops smart probes able to follow biological events involved in biological disorders. The aim of this PhD work was to provide a general method for the synthesis of luminescent probes able to detect proteases. For that purpose, probes composed of a peptide substrate and a phenolic luminescent moiety connected by a self-immolative linker were developed. Two strategies were investigated: a first strategy involved phenolic pro-fluorophores, whose fluorescence is quenched when their phenol functionality is substituted. A second strategy took advantage of 1,2-dioxetanes whose liberation in the medium results in a spontaneous light emission. The first objective of this work was to provide a proof of concept of these strategies, especially for the detection of caspase-3, a key enzyme involved in the apoptotic process. The second part of this work was devoted to the extension of the strategy to in vivo imaging
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Bouifraden, Samira. "Synthèses stéréosélectives de glycosyl-alpha-aminoesters et de glycopeptides dérivés." Montpellier 2, 1996. http://www.theses.fr/1996MON20228.
Full textAbstract:
Le travail que nous decrivons avait pour but de developper de nouvelles syntheses de glycosyl-aminoacides et glycopeptides derives dans lesquels le sucre et l'aminoacide sont lies par une liaison carbone-carbone. Nous avons mis au point une condensation de differents enolates de glycine sur le carbonyle en position 3 de l' -d-ribohexofuranos-3-ulose convenablement protege. La diastereoselectivite de ces reactions est dans l'ensemble assez remarquable. Elle implique une double induction asymetrique et depend a la fois des groupements de la fonction ester et de la nature des groupements protecteurs de la fonction amine. Apres deprotection selective des fonctions amine ou acide, ces composes ont pu etre couples avec d'autres aminoacides pour donner les glycopeptides attendus
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Drouot, Cyrille. "Synthèse combinatoire de pseudopeptides inhibiteurs de l'activité "Bêta" sécrétase impliquée dans la maladie d'Alzheimer. Synthèse en phase solide du peptide amyloi͏̈de 1-42 et d'analogues du peptide intestinal vasoactif." Montpellier 2, 1998. http://www.theses.fr/1998MON20142.
Full textAbstract:
Ce travail se situe a l'interface de la chimie et de la biologie. La chimie peptidique et pseudopeptidique a comme principal objectif la synthese d'outils pharmacologiques indispensables a la comprehension des phenomenes cellulaires complexes. Au cours de ce travail nous avons aborde, la synthese d'inhibiteurs necessaires pour la caracterisation d'une activite enzymatique, et la synthese d'analogues peptidiques afin de decrire les relations structure fonction d'un peptide et de son recepteur. Le depot amyloide de peptide a est sans doute l'evenement central qui rend compte de l'etiologie de la maladie d'alzheimer. La synthese d'inhibiteurs d'une des activites enzymatiques impliquee dans la liberation de ce peptide a ete l'objectif de ce travail. Cette activite appelee secretase pourrait appartenir a la famille des protease acide ou des metalloproteases. L'utilisation de la chimie combinatoire a conduit a la synthese d'une librairie pseudopeptidiques incorporant un motif chimique specifique des proteases acides. Les resultats biologiques obtenus nous ont conduit ensuite a la synthese de pseudopeptides inhibiteurs d'enzymes de type metalloprotease. D'autre part la synthese de ce peptide a long de 42 amino acides a ete effectuee en phase solide. Cette strategie est rapide et efficace et permet d'obtenir le produit final avec une purete satisfaisante. La derniere partie de ce travail concerne la synthese d'analogues du peptide intestinal vasoactif. L'incorporation d'une alanine sur chacune des 28 positions des acides amines constitutifs du vip, nous a permis d'obtenir des informations sur la relation structure fonction de ce peptide vis a vis de ses deux sous-types de recepteurs.
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Yaouancq, Loïc. "Méthodologie de synthèse et applications des glycines α-hétérosubstituées." Paris 5, 2002. http://www.theses.fr/2002PA05P602.
Full textAbstract:
Ce manuscrit décrit, dans sa 1ère partie, la méthodologie de synthèse des α-alkylamino glycines orthogonalement protégées au niveau de deux amines. La méthode mise au point permet en deux étapes seulement d 'obtenir ces analogues d acides aminés directement utilisables en synthèse peptidique. Avec cette méthode un grand nombre d' analogue d' acides minés a été synthétisé, seuls les analogues de la cystéine et de l' aspartate étant non synthétisable car intrinsèquement instable. Nous avons testé ces pseudo peptides en synthèse peptidique en stratégie Cbz- / Boc-. Malheureusement , la déprotection des groupes Boc- entraîne la dégradation des produits déprotégé à cause de la fra gilité de la liaison carbone α-azote dans des conditions acides. Néanmoins cela démontre la possibilité d utiliser ces glycines α-aminosubstituées en synthèse peptidique. Dans la seconde partie du manuscrit les synthèses d' un substrat chrom ogène et de trois substrats suicides, inhibiteurs irréversibles de l' enzyme VanX sont décritsThis thesis described in the first part. The methodology for the synthesis of the orthogonally protected α-alkylamino glycines. The method developed in our laboratory permit to obtain in two steps theses aminoacids analogs directly usable in peptide synthesis. With this method a large quantity of analogs has been synthesized, only the analogs of cystein and aspartate are not synthesisable due to their intrinsic instability. We have tested different aminoacid analogues in peptide synthesis in Cbz-/Boc- strategy. Unfortunately, the deprotection of the Boc- group is not possible without degradation of the unprotected product due to labile carbon α-nitrogen bond under acidic condition used for the deprotection. Nevertheless, it demonstrates the capability to use theses orthogonally protected a-amino substituted glycines in peptide synthesis. The second part of the PhD concern the design and the synthesis of one new chromogenic substrate and three mechanismbased inhibitor of the D-Analyl-D-Alanine aminopeptidase (VanX)
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Bore, Christian. "Utilisation d'ammonia-lyases de "Rhodotorula glutinis" et "Escherichia coli" pour la synthèse d'acides aminés non-naturels et exotiques." Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20220.
Full textAbstract:
La synthese d'acides l amines aromatiques proteiques ou non-proteiques par la phenylalanine ammonia-lyase de rhodotorula glutinis a ete realisee par addition d'ammoniaque sur des derives et des analogues de l'acide trans cinnamique. Dans un premier temps le milieu de culture pour l'obtention d'une activite enzymatique maximale a ete realisee par l'utilisation de peptone de caseine. Dans un deuxieme temps differents acides amines aromatiques ou pseudo-aromatiques ont ete prepares. D'autre part l'utilisation de l'aspartate ammonia-lyase d'escherichia coli a permis de synthetiser quelques acides l amines non naturels a chaines alkyles. Ainsi une nouvelle voie de synthese de la l norvaline a pu etre realisee
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Olivier, Christophe. "Synthèse et étude pharmacologique d'inhibiteurs des kallicréines plasmatique et tissulaire." Montpellier 2, 2000. http://www.theses.fr/2000MON20052.
Full textAbstract:
Les kallicreines sont des proteases a serine responsables de la liberation de peptides vasoactifs : les kinines (bradykinine et kallidine) par hydrolyse des kininogenes lors des phenomenes inflammatoires. Depuis une dizaine d'annees, la generation des kinines par les kallicreines est consideree comme cruciale dans les maladies inflammatoires. Ainsi un certain nombre d'antagonistes des recepteurs des kinines sont actuellement en developpement. En revanche, la strategie visant a empecher la formation des kinines reste peu etudiee. Ainsi, a partir de la sequence des substrats naturels de ces proteases (les kininogenes) nous avons synthetise des molecules de petites tailles et de nature non peptidiques. Pour cela nous avons utilise un motif contraint non peptidique (une benzothiazepinone) remplacant le dipeptide pro-phe present dans la sequence c-terminale des kinines. L'introduction de divers groupements chimiques de part et d'autre de ce motif nous a permis d'obtenir une molecule tete de serie. Apres avoir mis au point les tests pharmacologiques permettant l'evaluation de l'activite inhibitrice des molecules synthetisees, nous avons realise une etude de relation structure activite a partir de notre tete de serie et obtenu des inhibiteurs des kallicreines plasmatique et tissulaire humaines dont les activites sont inferieures au micromolaire. Ces composes sont en majorite selectifs de la kallicreine plasmatique. Une etude par modelisation moleculaire a egalement ete realisee sur deux molecules presentant une forte homologie de sequence mais ayant une activite inhibitrice tres differente sur la kallicreine tissulaire. Cette etude nous a permis d'envisager un certain nombre de modifications pour ameliorer l'activite inhibitrice de nos inhibiteurs.
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Paloque, Lucie. "De l'identification de composés antileishmaniens à la recherche de nouvelles cibles thérapeutiques : optimisation du criblage de molécules de synthèse, et étude des cystéine-peptidases MCA et Raptor au cours de la mort cellulaire programmée chez Leishmania." Thesis, Aix-Marseille, 2013. http://www.theses.fr/2013AIXM5502.
Full textAbstract:
Au cours de ce travail de thèse, les deux approches permettant la caractérisation de nouveaux agents antileishmaniens ont été suivies : d’une part identification de molécules de synthèse originales et actives, par des méthodes de criblage, et d’autre part recherche de nouvelles cibles thérapeutiques leishmaniennes, faisant appel à des outils de biologie moléculaire, et de protéomique.Dans une première partie consacrée à l’optimisation du criblage antileishmanien de molécules de synthèse, nous avons notamment mis au point et validé une nouvelle méthode applicable aux formes promastigotes. Cette méthode reposant sur le principe de la bioluminescence, s’est avérée précise, rapide, répétable, sensible, automatisable et applicable à des isolats cliniques. Nous nous sommes également intéressés à la recherche d’une nouvelle méthode de criblage sur les formes amastigotes intracellulaires remplissant ces mêmes critères.Dans une seconde partie consacrée au lien entre la mort cellulaire programmée et les cystéines peptidases (métacaspase et Raptor) chez Leishmania, nous avons mis en évidence un lien possible entre métacaspase et autophagie chez L. infantum. De plus, nous avons identifié, in vivo, plusieurs substrats protéiques potentiels de ces peptidases : HSP70, ARN-Hélicase ATP-Dépendante et Lmjf09.1010 pour la métacaspase ; NDPKb et la protéine associée à l’ADN du kinétoplaste pour Raptor. Ces différents résultats ont permis de proposer un modèle conciliant les rôles possibles des cystéine-Peptidases métacaspase et Raptor au cours de l’autophagie et de l’apoptose chez Leishmania, rôles potentiellement dus au clivage de substrats protéiques spécifiquesDuring this thesis work, two approaches affording the characterization of new antileishmanial agents were followed: on the one hand, the identification of new original antileishmanial synthetic drugs, through screening assays and on the other hand, research of new parasitic therapeutic targets by using molecular biology and proteomic tools. In the first part, dedicated to the optimization of the antileishmanial screening of synthetic compounds, we set up and validated a new bioluminescence-Based screening method for studying anti-Promastigote compounds. This method appears accurate, rapid, repeatable, sensitive and is also transposable to automats and usable on clinical isolates. In parallel, we investigated new screening protocols aiming at improving the screening in intracellular amastigotes which could meet the same criteria. In the second part focusing on the link between programmed cell death and cystein peptidases (metacaspase and Raptor) in Leishmania, our study first highlighted a possible link between metacaspase and autophagy in L. infantum. Moreover, we identified in vivo several potential subtrates for both peptidases: HSP70, ATP-Dependent RNA-Helicase and Lmjf09.1010 for the metacaspase; NDPKb and kinetoplast-DNA-Associated-Protein for Raptor. These results allowed us to propose a model reconciling the possible roles of cystein peptidases metacaspase and Raptor during autophagy and apoptosis in Leishmania, roles potentially due to the cleavage of specific proteic subtrates
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Serval, Valérie. "Synthèse et propriétés pharmacologiques d'inhibiteurs du métabolisme de l'acide N-Acetyl-Aspartyl-Glutamique (NAAG)." Paris 6, 1991. http://www.theses.fr/1991PA066677.
Full textAbstract:
En 1991, trois récepteurs du neurotransmetteur excitateur qu’est l’acide glutamique ont été caractérisés grâce à la synthèse d’agonistes et d’antagonistes sélectifs : les deux récepteurs ionotropiques (ou ionotropes) NMDA et AMPA et le récepteur métabotropique (ou métabotrope). Le dipeptide NAAG (N alpha Acetyl-L-aspartyl-L-glutamique) endogène du système nerveux central de vertébrés est aussi un candidat potentiel au rôle de neurotransmetteur ou bien au rôle de précurseur du neurotransmetteur glutamatergique. Le NAAG est hydrolysé en acide glutamique et en acide N-acétyl-aspartique par une peptidase: la NAALADase. Le but de ce travail a été de synthétiser des inhibiteurs spécifiques de la NAALADase dépourvus d’autres propriétés pharmacologiques en particulier sans effets sur les récepteurs des neurotransmetteurs excitateurs. En effet, l’acide quisqualique, seul inhibiteur connu de la NAALADse à ce jour, est aussi un agoniste des récepteurs glutamatergiques AMPA et métabotropique. Nous avons étudié l’activité enzymatique de la NAALADase in vitro, à partir de synaptosomes de cerveau de rat avec le substrat NAAG radioactif et les analogues non radioactifs en immobilisant les membranes sur un support et in vivo, au niveau du striatum de rat. Nous avons montré que le dipeptide L‐Aspartyl‐L‐glutamate est hydrolysé plus rapidement que le NAAG, ce qui suggère que le groupement acétyl n’est pas essentiel pour la spécificité de l’activité NAALADase. En partant de l’hypothèse que l’enzyme était une métallopeptidase, trois analogues ayant des propriétés inhibitrices ont été synthétisés avec succès, désignés par les nombres 33 (dipeptide beta-NAAG), 73 et 74. Nous avons mis en évidence une protection presque totale par les trois inhibiteurs 33, 73 et 74 de la dégradation in vivo du NAAG. L’affinité des analogues, comme celle du substrat NAAG pour l’enzyme, est de l’ordre du micromolaire. Les analogues contenant un acide glutamique et de nombreuses fonctions acides carboxyliques, les effets de ces molécules sur les trois types de récepteurs NMDA, AMPA et métabotropiques ont été comparés à ceux de l’acide quisqualique. La recherche de meilleurs inhibiteurs de la NAALADase (affinité nanomolaire) nécessite de comprendre comment le dipeptide alpha-NAAG est un substrat tandis que les analogues 33 (beta-NAAG),73 et 74 sont des inhibiteurs. Une préparation d’enzyme purifiée et la connaissance de la séquence de la NAALADase permettront d’y parvenir. Le rôle physiologique de la NAALADase sera clarifié lorsque les réponses biologiques induites par le dipeptide NAAG seront caractérisées puis potentialisées par exemple, en présence des inhibiteurs de l’enzymeIn 1991, NMDA, AMPA and metabotropic receptors of glutamate / glutamic acid, a main excitatory amino acid neurotransmitter of the brain, have been identified following the synthesis of selective agonist and antagonists. The endogenous dipeptide N-acetyl-L-aspartyl-L-glutamate (NAAG) present in vertebrate CNS fulfills several criteria corresponding to a neurotransmitter or glutamate precursor. NAAG inactivation may proceed through enzymatic hydrolysis into N-acetyl-L-aspartate and glutamate by an N-acetylated-alpha-linked acidic dipeptidase (NAALADase). The purpose of our work was to synthesize specific inhibitors of NAALADase with no pharmacological properties on glutamate receptors. Quisqualic acid/ quisqualate, the only known inhibitor of NAALADase to date, is indeed an AMPA and metabotropic glutamate receptor agonist. NAALADase activity has been studied in vitro using immobilized membranes from rat brain synaptosomes and with radioactive NAAG and non radioactive synthetized analogues of NAAG, and in vivo, in the rat striatum. L-Aspartyl-L-glutamate was hydrolyzed faster than NAAG, suggesting that the acetylated moiety was not essential for NAALADase specificity. On the assumption that the peptidase should be a metallopeptidase, three analogues that are inhibitors have been successfully synthesized which have been named 22 (dipeptide beta-NAAG), 73 et 74. Almost full enzymatic in vivo degradation protection of NAAG was achieved by all three inhibitors 33, 73 and 74. Analogues affinities, like NAAG substrate itself, were in the micromolar range. Since analogues contain a glutamic acid and other carboxylic functions, the effect of these on the three types of receptors ie. NMDA, AMPA and metabotropic have been compared to those of quisqualic acid. The search for NAALADase inhibitors with affinity in the nanomolar range requires to understand how alpha-NAAG dipeptide acts as a substrate whereas analogues 33 (beta-NAAG), 73 and 74 act as inhibitors. In the future, this should be achieved thanks to the availability of a purified enzyme preparation and the knowledge of the NAALADase sequence. NAALADase physiological role will be clarified when biological responses induced by NAAG dipeptide will be characterized and then potentiated with enzyme inhibitors
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Willand, Nicolas. "Conception et synthèse de chimiothèques généralistes et focalisées : applications à plusieurs modèles biologiques et structuraux." Lille 1, 2003. https://ori-nuxeo.univ-lille1.fr/nuxeo/site/esupversions/93f99bde-0eae-4409-aa6a-870d1848acc5.
Full textAbstract:
Un premier travail s'est articulé autour de la synthèse et de la conception d'inhibiteurs d'une enzyme : la Dipeptidyl Peptidase IV, reconnue comme nouvelle cible thérapeutique dans le traitement du diabète de type 2. Nous avons utilisé les techniques de la synthèse en phase homogène et sur support solide afin de proposer deux nouvelles voies d'accès au NVP-DPP-728, inhibiteur de référence de l'enzyme. Nous avons appliqué les principes de la chimie combinatoire et de la synthèse parallèle pour préparer une chimiothèque focalisée de 384 composés, construits autour du motif tétrahydroisoquinoléine. Cette étude nous a permis d'identifier des inhibiteurs actifs sur l'enzyme et d'émettre des hypothèses sur les interactions enzyme-substrats de certains composés, à partir de la structure radiocristallographique de la DPP-IV. Un second travail nous a amenés à concevoir une stratégie de modulation de la structure d'un antagoniste du récepteur GnRH, à sept domaines transmembranaires, couplé à une protéine G. De cette étude, une chimiothèque focalisée de 480 acylisothiourées a été synthétisée et a permis le criblage du récepteur, dans un test fonctionnel et dans un test d'inhibition de la liaison du ligand à son récepteur. Enfin, dans un troisième volet, nous présentons une toute autre approche, consistant à concevoir et à synthétiser des chimiothèques généralistes, construites autour de la structure originale spiro[1,5-benzoxazépine-2,4'-pipéridine], dite " privilégiée ". Ce travail nous a conduits à mettre au point différents protocoles en phase homogène, permettant la pharmacomodulation de ce motif. L'étude de la structure par RMN et radiocristallographie d'un composé a été réalisée, et la synthèse d'une chimiothèque de 480 composés nous a permis de valider ce concept par la découverte d'un composé actif sur un récepteur 7TM, présentant toutes les caractéristiques d'un candidat médicament.
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Hua, The Duc. "Recherche d'abzymes en vue de la synthèse peptidique à partir de banques combinatoires de fragments d'anticorps exprimés à la surface des phages." Montpellier 2, 1995. http://www.theses.fr/1995MON20174.
Full textAbstract:
Le but de ce travail est la selection d'anticorps catalytiques capables de catalyser une liaison peptidique. La reaction choisie est le couplage entre la glycine et la leucine. En respectant les hypotheses enoncees par pauling en 1946, et par jencks en 1969 nous avons synthetise un analogue stable de l'etat de transition de la reaction etudiee. L'analogue couple a une proteine porteuse est utilise pour l'immunisation de souris et pour la selection d'anticorps specifiques. Cette selection a ete realisee a partir de trois banques, une banque combinatoire de fragments scfv de souris, une banque combinatoire naive de fab humains et une banque naive de fragments de vh humain chamelises. Bien que plusieurs clones exprimant des fragments d'anticorps specifiques de l'haptene aient ete isoles aucun fragment d'anticorps specifique de l'analogue de l'etat de transition ne possede l'activite catalytique attendue. Nous avons suggere que les methodes classiques de detection disponibles ne permettent pas de deceler l'activite catalytique recherchee. Tout d'abord, la sensibilite de detection est insuffisante et le turnover des reactions catalysee par les abzymes est encore relativement modeste. De plus, les methodes de detection d'activite sont souvent indirectes en etant basees sur l'affinite de l'anticorps pour l'analogue de l'etat de transition et non pas sur la catalyse. Pour pallier a ces limites, nous avons mis au point de nouveaux tests de detection directe de l'activite catalytique applicable a de nombreuses reactions bi-moleculaire
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Hellio, Florence. "Synthèse peptidique par catalyse enzymatique : application nouvelle à la radiosynthèse totale d'une hormone, la leucine-enképhaline tritiée, à l'aide de la carboxypeptidase Y." Compiègne, 1986. http://www.theses.fr/1986COMPD040.
Full textAbstract:
Dans ce mémoire nous présentons une nouvelle méthode de marquage au tritium d'hormones peptidiques. Cette méthode fait appel à une protéase, la carboxypeptidase Y qui catalyse la formation de liaisons peptidiques, pourvu que les conditions thermodynamiques soient favorables. L'action réversible de la CPD-Y a été appliquée à la synthèse totale d'un pentapeptide, la Leucine-enképhaline, tritié sur chaque acide aminé, et dont la radioactivité spécifique est de 139 Ci/mmole. Le peptide obtenu présente, en outre, des propriétés biologiques (liaison aux récepteurs et immunoréactivité) identiques à celles de Leucine-enképhaline nativeIn this thesis we present a new tritium-labelling method of peptidic hormones. This method uses a proteolytic enzyme, carboxypeptidase Y, to catalyse peptide bonds. It has been applicated to stepwise synthesis of tritiated Leucine-enkephalin. The pentapeptide, labelled on each amino acid, has a specific radioactivity of 139 Ci/mmole. Moreover its biological properties (immunoreactivity and binding to specific receptors) are identical to native Leucine-enkephalin
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Meyer, Yves. "Conception et développement de bras réactifs auto-immolables pour la synthèse de sondes pro-fluorescentes : applications à la détection de peptidases dans un contexte in-vivo." Thesis, Rouen, INSA, 2010. http://www.theses.fr/2010ISAM0018.
Full textAbstract:
L'objectif de cette thèse est la conception et le développement de bras espaceurs auto-immolables originaux situés entre le substrat peptidique et un fluorophore à phénol. Une première partie de ces travaux porte sur le développement de bras réactifs auto-immolables adaptés à la détection d'exopeptidases et à leur application pour la synthèse de sondes destinées à l'imagerie in-vivo de la caspase 3, une enzime impliquée dans le processus apoptotique. La seconde partie de ce travail relate les efforts effectués afin d'étendre l'utilisation des bras réactifs auto-immolables à la détection des endopeptidases, notamment les MMPs, une famille d'enzimes fortement impliquée dans la progression cancéreuseThe aim of this PhD work is the design and development of novel self-immolative species linking a peptide susbstrate to a phenolic fluorophore. A first part was dedicated to the development of self-immolative linkers for exopeptidases detection and their incorporation in caspase 3 probes to stain the apoptotic process. A second part was devoted to the extension of the strategy to endopeptidases, especially MMPs, an enzyme family mainly involved in cancer progression
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Nedjar, Boutora Salima. "Immobilisation de peptides modèles et de la caséine kappa : Application à l'étude de la spécificité de coupure de la chymosine." Nancy 1, 1989. http://www.theses.fr/1989NAN10390.
Full textAbstract:
Ce travail concerne l'étude de l'activité de la chymosine sur des substrats immobilisés (cytochrome C, chaine B de l'insuline, caséine K et peptides synthétisés au laboratoire). Une première partie a porté sur la recherche d'une méthode optimale d'immobilisation sur 4 résines commerciales (CNBR-, AH-, CH-, et CH-sépharose-activée). Les résines AH et CH-sépharose activées par l'hexafluorophosphate de N, N benzotriazolyl-tetramethyl uronium (H. B. T. U. ) et par la carbodiimide donnent de bons rendements d'immobilisation du cytochrome C. Un meilleur rendement est obtenu avec la CH-sépharose-activée. En deuxième partie l'étude du modèle cytochrome C/chymosine a permis de mettre au point le réacteur enzymatique. La séparation par C. L. H. P. Des produits de dégradation du cytochrome C immobilisé sur deux résines différentes a mis en évidence l'intérêt de l'utilisation d'une résine à bras espaceur. Une troisième partie est consacrée à l'étude de la spécificité de coupure sur la chaîne B de l'insuline immobilisée. L'analyse chromatographique des produits de la réaction montre une hydrolyse rapide dès les premières minutes de la réaction. Ainsi, 8 sites de coupure ont pu être identifiés après séparation par C. L. H. P. Et identification. Enfin la dernière partie de ce travail a porté sur l'hydrolyse de la caséine K, substrat naturel de l'enzyme. La séparation des produits d'hydrolyse par C. L. H. P. Montre 1 pic non aromatique qui pourrait correspondre au caséino-macropeptide. Contrairement aux autres substrats l'heptapeptide synthétisé s'est montré résistant à l'action de la chymosine dans ces conditions réactionnelles
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Pugnière, Martine. "Protéases sur complexes alumine-phosphate : immobilisations : activités en milieu non-aqueux : utilisations en chimie et technologie des acides alpha-aminés." Montpellier 2, 1991. http://www.theses.fr/1991MON20268.
Full textAbstract:
La mise en evidence d'une interaction specifique entre l'alumine et la fonction phosphate po#3h#2 nous a conduit a preparer des complexes insolubles alumine-phosphate fonctionnalies chimiquement pour immobilser les enzymes par liaisons covalentes. Les methodologies d'immobilisation proposees sont souples et adaptables a un grand nombre d'enzyme. En particulier, les proteases ainsi insolubilisees se caracterisent par une forte resistance par rapport a l'action des solvants organiques et ceci a permis leur etude dans un milieu a teneur limitee en eau. Sur un aspect fondamental, nous avons etudie l'effet des solvants organiques (nature et concentration) sur le mode d'action, la specificite et la stereospecificite des proteases. Cette etude a permis de demontrer le role important joue par la composition du milieu reactionnel sur l'activite de l'enzyme. Sur un aspect biotechnologique, nous avons examine les possibilites d'applications des proteases immobilislees sur alumine dans la technologie des acides -amines. L'usage des solvants organiques a permis de catalyser enzymatiquement des reactions de transesterifications, de syntheses peptidiques et de resolutions optiques de melanges racemiques
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Hamdaoui, Bassou. "Inhibiteurs de la cathepsine D : synthèse et évaluation biochimique de phosphomannosyles associés à la pepstatine A." Montpellier 2, 1993. http://www.theses.fr/1993MON20003.
Full textAbstract:
La cathepsine d est une protease lysosomale dont la surproduction est liee a l'apparition de metastases dans le cancer du sein. Au cours de ce travail nous avons decrit la synthese et l'evaluation biologique de composes bifonctionnels susceptibles d'inhiber la cathepsine d. D'autre part nous avons prepare une neoglycoproteine utilisee comme ligand du recepteur mannose-6-phosphate. Ces composes comportent d'une part le groupement mannose-6-phosphate permettant leur penetration cellulaire par l'intermediaire des recepteurs membranaires et d'autre part la pepstatine puissant inhibiteur de la cathepsine d. Le couplage de la pepstatine a un mannose-6-phosphate a ete realise par amination de la position anomerique du sucre par la pepstatine preassociee au 1,3-diaminopropane utilise comme bras de jonction. La pepstatine couplee a deux entites mannose-6-phosphate a ete preparee reaction de thiocarbamoylation de la diamine peptide (derivee de la pepstatine) par l'isothiocyanate de phenyloxy-mannose-6-phosphate. Ce dernier a ete prepare a partir du p-nitrophenyl-d-mannopy rannose par phosphorylation selective en 6, suivie d'une reduction en amine et transformation de celle-ci en isothiocyanate. La serum albumine bovine (bsa) portant une trentaine de groupements mannose-6-phosphate a ete preparee par traitement de la bsa en milieu alcalin par l'isothiocyanate de phenyloxymannose-6-phosphate. Les produits synthetises ont presente des resultats biologiques significatifs. La pepstatine couplee a deux entites mannose-6-phosphate inhibe la proliferation et le pouvoir invasif des cellules cancereuses. La neoglycoproteine inhibe significativement la migration des cellules metastatiques a travers la membrane basale reconstituee.
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Mugherli, Laurent. "Microarrays fonctionnels de gouttes : de la synthèse chimique combinatoire au criblage de molécules bioactives." Phd thesis, Université Joseph Fourier (Grenoble), 2006. http://tel.archives-ouvertes.fr/tel-00174806.
Full textAbstract:
Les microarrays, assemblages organisés d'entités chimiques, biologiques ou cellulaires sont en pleine expansion, car ils présentent un potentiel élevé en recherche fondamentale et appliquée. La mise en œuvre de la technologie microarray repose sur trois méthodes essentielles : la chimie de surface pour la fonctionnalisation des supports, l'utilisation de technologies de précision micrométrique pour fabriquer les microarrays et la détection. Parmi toutes les applications, les microarrays visant à détecter l'activité enzymatique ont connus un développement rapide car ils permettent de tester l'efficacité d'un grand nombre de substrats ou d'inhibiteurs en parallèle. Les protéases, enzymes indispensables aux organismes vivants, et cibles thérapeutiques reconnues, sont des modèles biologiques de choix pour les études d'activité enzymatique sur microarray. La synthèse chimique sur puce n'est en revanche pas très développée.La technologie développée au sein du laboratoire nous permet de former sur quelques cm2 des microarrays de centaines de microgouttes constituant chacune un microréacteur indépendant. Le but de cette thèse est d'appliquer pour la première fois cette technologie à la synthèse chimique et à l'étude de l'activité protéolytique, avant de combiner de manière novatrice les deux approches pour réaliser un criblage.
L'application de ces microarrays en synthèse chimique a été utilisée avec succès pour la synthèse d'une banque de molécules chimiques et pour la recherche combinatoire de nouveaux fluorophores. En ce qui concerne l'enzymologie, l'observation de la protéolyse a été validée en utilisant trois types de substrats fluorogènes, dans un premier temps avec la papaïne, puis avec une métalloprotéase, et enfin avec la protéase virale NS3 du virus de l'hépatite C. Finalement, l'utilisation séquentielle de la synthèse chimique et de la biochimie sur un même microarray, qui constitue une approche inédite, a été dédiée à la recherche de nouveaux inhibiteurs de la protéase virale NS3. Ce criblage a conduit à la découverte de molécules potentiellement intéressantes comme agents antiviraux.
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Bonnart, Chrystelle. "Etude fonctionnelle de LEKTI et de sa nouvelle cible, l'élastase 2 pancréatique." Toulouse 3, 2007. http://thesesups.ups-tlse.fr/698/.
Full textAbstract:
Le syndrome de Netherton (SN) est une maladie génétique cutanée rare et sévère de l'enfant, caractérisée par une érythrodermie desquamative congénitale, une dysplasie pilaire spécifique et une atopie sévère. Notre équipe a identifié le gène dont les mutations sont responsables de la maladie, SPINK5, qui code pour LEKTI, un inhibiteur de protéase à sérine exprimé dans la couche granuleuse de l'épiderme. Afin de mieux comprendre la fonction de LEKTI dans l'homéostasie épidermique, nos travaux ont porté sur la caractérisation structurale et fonctionnelle de LEKTI. Nous avons montré que LEKTI était produit sous la forme de trois précurseurs rapidement clivés par la furine en de nombreux fragments qui présentent des capacités d'inhibition spécifiques vis-à-vis des kallikréines épidermiques (KLKs) 5, 7 et 14. Afin de mieux comprendre la physiopathologie du SN, nous avons généré un modèle murin Spink5-/-. Les nouveaux-nés KO présentent des érosions cutanées résultant d'une dégradation excessive des composants des jonctions intercellulaires due à l'hyperactivité de KLK5 et KLK7. Nous avons identifié par spectrométrie de masse une troisième protéase hyperactive, l'élastase 2 pancréatique (Ela2), dont l'expression épidermique n'était pas connue. Afin de comprendre son implication spécifique dans le développement du phénotype SN, nous avons généré des souris transgéniques pour Ela2. L'analyse de ces souris révèle qu'Ela2 joue un rôle essentiel dans la formation de la barrière cutanée et est impliquée dans le développement de nombreux aspects phénotypiques du SN. Ce travail identifie ainsi une nouvelle cible thérapeutique potentielle pour le traitement de cette maladie orphelineNetherton syndrome (NS) is a severe autosomal recessive skin condition characterized by congenital erythoderma, a specific hair shaft defect (Trichorrhexis invaginata) and a broad range of atopic manifestations. In 2000, we identified SPINK5 as the defective gene in NS. SPINK5 encodes LEKTI, a Kazal-type protease inhibitor, which is expressed in the granular layer of the epidermis. In order to understand the role of LEKTI in skin homeostasis, we undertook structural and functional studies. We showed that LEKTI is expressed as three high molecular weight precursors rapidly cleaved by furin in the intracellular compartment of keratinocytes prior to its secretion. Proteolytic maturation of LEKTI gives rise to a panel of proteolytic fragments carrying their own inhibitory capacity profile against epidermal kallikreins (KLK) 5, 7 and 14. In order to investigate the role of LEKTI in vivo, and to understand the pathophysiological events underlying NS, we have genetically engineered mice with a targeted disruption of Spink5. Spink5 deficient newborn mice suffer from severe skin erosions due to excessive desmosomal component cleavage by unregulated KLK5 and KLK7. In addition, we have identified by mass spectrometry a new epidermal proteinase, pancreatic elastase 2 (Ela2), which is hyperactive in the absence of LEKTI. In order to understand its biological role and to investigate its specific contribution to the development of the NS phenotype, we engineered Ela2 transgenic mice. The study of these mice demonstrates that Ela2 is involved in several aspects of the NS phenotype, and thus identifies Ela2 as a novel potential therapeutic target for the treatment of this orphan disease
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Terrier, Victor. "Synthèse biomimétique et automatisée de peptides crypto-thioester pour la ligation chimique native : application à des peptides naturels riches en cystéine." Thesis, Orléans, 2016. http://www.theses.fr/2016ORLE2016/document.
Full textAbstract:
Les peptides Cα-thioester jouent un rôle central dans la synthèse de protéines par voie chimique : ils sont des partenaires clés dans la ligation chimique native (NCL), réaction qui a révolutionné ce domaine. L’accès à ces peptides par Fmoc-SPPS, méthode largement utilisée dans les laboratoires, est encore restreint à des experts. Cette limitation représente à l’heure actuelle un frein à la démocratisation de la synthèse de protéines par NCL. Le premier volet de cette thèse décrit la conception et le développement d’une nouvelle méthode bioinspirée de synthèse de précurseurs de peptides thioester, fondée sur un dispositif de thioestérification intramoléculaire de type N-(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)-cystéine (N-Hnb-Cys). La synthèse des peptides portant ce dispositif a été totalement automatisée à partir de réactifs peu couteux et ne requière pas d’étapes post-SPPS avant la NCL. La conception biomimétique du dispositif –ce dernier opérant via un réarrangement par transfert d’acyle N→S–, résulte en des cinétiques de NCL rapides à pH neutre. Un large éventail de précurseurs de thioester a été synthétisé, ceci nous a permis d’explorer le potentiel et les limites de la méthodologie, tout en soulignant son efficacité même pour des « séquences difficiles » et de longs peptides. Cette approche a été appliquée à la synthèse par ligation d’une gamme représentative de peptides naturels riches en cystéines, issus du venin d’un serpent, de mollusques, de primates ou encore de plantes. En particulier, nous avons décrit la première synthèse d’une Big-défensine (93 acides aminés), issue de l’huitre et dont l’activité biologique est en cours d’évaluation. Par ailleurs, une voie synthétique originale pour accéder à des peptides comprenant une cystéine C-terminale a été proposée. Elle repose sur l’introduction de cet acide aminé par NCL, évitant les réactions secondaires inhérentes aux approches existantes. Nous avons également appliqué notre approche à la synthèse par NCL intramoléculaire du squelette peptidique cyclique de plusieurs produits naturels, avec des rendements remarquables. L’ensemble de nos résultats est extrêmement encourageant pour la généralisation de notre approchePeptide Cα-thioesters play a prominent role in the chemical synthesis of proteins: they are key partners in native chemical ligation (NCL), a reaction that has revolutionized the field. Nonetheless, access to such peptides via the widely used Fmoc-SPPS is still limited to experts. This limitation is currently an obstacle to further popularization of NCL-based protein synthesis. The first part of this thesis describes the design and optimization of a new bio-inspired methodology for the synthesis of peptide thioester precursors, based on an N-(2-hydroxy-5-nitrobenzyl)-cysteine intramolecular thioesterification device (N-Hnb-Cys). Synthesis of peptides bearing this device was fully automated, starting from inexpensive materials. Importantly, no post-SPPS steps are required prior to NCL. The biomimetic design of the device –that operates through an N→S acyl shift–, results in fast NCL kinetics at neutral pH. A broad range of thioester precursors has been synthesized; this allowed us to explore the scope and limitation of the methodology, while stressing its efficiency even for demanding sequences and long peptides. This approach has been applied to the ligation-based synthesis of a representative variety of naturally occurring disulfide-rich peptides (DRP) sequences, from snake venom, molluscs, primates and plants. In particular, we have described the first synthesis of a Big-defensin (93 amino acids), discovered in oyster and whose biological activity is currently under evaluation. Furthermore, an original method for the synthesis of C-terminal cysteine-containing DRP has been proposed. It is based on the introduction of this amino acid through NCL, avoiding side reactions inherent to existing approaches. We have also applied our approach to the intramolecular NCL-based synthesis of the cyclic backbone of several DRP, with remarkable yields. Altogether, our results are extremely encouraging for the generalization of this methodology
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Waibel, Michael. "Design and Synthesis of Molecules to Probe Peptidase Activity." Lyon, École normale supérieure (sciences), 2008. http://www.theses.fr/2008ENSL0503.
Full textAbstract:
Une première partie décrit le développement d'inhibiteurs de la protéase VIH-1, qui possèdent une structure hydrazine urée. Nous avons développé une voie de synthèse efficace et convergente pour accéder à des composés énantiopurs à partir de deux "building blocks" : l'un est un dérivé d'acides aminés, l'autre peut être facilement obtenu à partir d'amines secondaires. Les composés ont ensuite été testés avec la protéase VIH-1 dans un test basé sur la technologie FRET. Dans une seconde partie, nous avons développé une sonde fluorogène pour la détection d'activités enzymatiques. Dans cette molécule, le fluorophore 2-(2'-hydroxyphenyl)-4(3h)-quinazolinone (HPQ) est couplé par un epaceur auto-effondrable avec une unité dipeptidique qui peut être clivée par une enzyme. Nous avons pu démontrer que le site de clivage dipeptidique est coupé par la leucyl aminopeptidase, ce qui conduit à un auto-effondrement rapide de l'epaceur, résultant dans la génération d'un signal fluorescentThe first part of this Ph. D thesis describes the development of several HIV-1 peptidase inhibitors having a hydrazino-urea core. We have developed an efficient, convergent synthetic route to enantiopure compounds generated from two independent building blocks, one derived from amino acids, the other one from easily accessible hydrazines. All compounds were tested with HIV-1 peptidase in a FRET based enzyme assay. In a second part, we have developed a fluorogenic probe for the detection of peptidolyic activity. In this molecule, the fluorophore 2-(2'-hydroxyphenyl)-4(3h)-quinazolinone (HPQ) is coupled via a self-immolative spacer to an amide function that can be cleaved by an enzyme. We could demonstrate that the amide group is cleaved by commercial leucyl aminopeptidase which leads to rapid fragmentation of the spacer unit resulting in the generation of an intensly fluorescent signal
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Schmidt, Jörn. "Synthese und inhibitorische Eigenschaften von Peptidyl-Pyridinium-Methylketon-Derivaten Studien zur spezifischen Inhibierung prolinsezifischer Peptidasen /." [S.l. : s.n.], 1999. http://deposit.ddb.de/cgi-bin/dokserv?idn=956297226.
Full text
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Cougnoux, Antony. "Escherichia Coli producteurs de colibactine et croissance tumorale, du mécanisme à la prévention." Thesis, Clermont-Ferrand 1, 2013. http://www.theses.fr/2013CLF1MM01/document.
Full textAbstract:
La colibactine est une toxine largement distribuée chez Escherichia coli. Sa synthèse est assurée par des enzymes codés par un îlot génomique appelé pks. Elle provoque des cassures double brin de l'ADN, des mutations, d'important remaniements chromosomiques et favorise l'émergence de tumeurs intestinales en modèle murin. Par ailleurs, les E. coli producteurs colonisent fréquemment les tumeurs de patients atteints de cancer colorectal. Nos travaux montrent que les bactéries productrices de colibactine induisent la sénescence cellulaire et stimulent de façon indirect la prolifération cellulaire in vitro et la croissance tumorale in vivo. L'action pro-proliférative des cellules rendues sénescentes par les E. coli producteurs de colibactine est liée à la production du facteur de croissance HGF. L'étude de la signalisation cellulaire responsable montre l'implication du facteur de transcription c-Myc, l'activation de la transcription d'un microARN qui en ciblent la peptidase SENP1, et une modification de la SUMOylation des protéines de l'hôte, notamment p53, un effecteur connu de la sénescence cellulaire. Cette voie de signalisation et les transcripts codant HGF ont été analysés dans des tumeurs de patients atteints de cancer colorectal colonisés ou non par des E. coli producteurs de colibactine. Les résultats obtenus soutiennent les résultats obtenus in vitro et dans le modèle murin. L'ensemble suggère que les bactéries productrices de colibactine favorisent l'émergence d'un micro-environnement tumoral sénescent susceptible de favoriser la croissance tumorale via la sécrétion de HGF. En parallèle, nous avons caractérisé sur le plan structural et fonctionnel la protéine ClbP de l'îlot pks. Les résultats obtenus montrent que ClbP est une peptidase à serine active dont le site actif est extracytoplasmique et indispensable à l'activité biologique de l'îlot pks. Des inhibiteurs « drug-like » de ClbP ont été identifiés à l'aide d'approches structurales, biochimiques, cellulaires et microbiologiques. Ces molécules se lient au site actif de ClbP avec une affinité nanomolaire et bloquent les activités génotoxiques et pro-tumorales des E. coli producteurs de colibactine. ClbP constitue donc une cible thérapeutique potentielle permettant de bloquer les effets délétères des E. coli producteurs de colibactineThe colibactin toxin is widely distributed in Escherichia coli. Its synthesis is performed by enzymes encoded by the genomic island pks. It causes DNA double-strand breaks, mutations, chromosomal rearrangements in host cells and contributes to tumorigenesis in a mouse model. In addition, colibactin-producing E. coli are frequently isolated from tumors of patients with colorectal cancer. Our work shows that colibactin-producing bacteria induce cellular senescence and, consequently, can indirectly stimulate cell proliferation in vitro and tumor growth in vivo. The pro-proliferative effect mediated by these senescent cells is due to the secretion of growth factors, in particular HGF. The cell signaling responsible for cellular senescence shows the involvement of the transcription factor c-Myc, the transcription of a microRNA targeting the peptidase SENP1, and a modification of protein SUMOylation, including p53, a well-known effector of cellular senescence. This signaling pathway and HGF-encoding transcripts were analyzed in tumors of patients with colorectal cancer colonized or not by colibactin-producing E. coli. The results support the findings obtained in vitro and in the mouse model. Taken together, the results suggest that, in tumors, colibactin-producing bacteria promote the emergence of a senescent microenvironment, which can stimulate tumor growth via the secretion of HGF. In parallel, we determined the structure and function of the pks-encoded protein ClbP. The results show that ClbP is an active serine peptidase, whose active site is extracytoplasmic and essential to the biological activity of pks island. "Drug-like" inhibitors of ClbP were identified using structural, biochemical, cellular and microbiological approaches. These molecules bind to the active site of ClbP with nanomolar affinity and block the genotoxic and pro-tumoral activities of colibactin-producing E. coli. ClbP is therefore a potential therapeutic target to block the deleterious effects of bacteria-producing colibactin
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Le, Saux Olivier. "La Pyrrolidone carboxyle peptidase : site actif et régulation de sa synthèse chez pseudomonas fluorescens. Caractérisation biochimique de l'enzyme de type I de foie de bovin." Aix-Marseille 1, 1997. http://www.theses.fr/1997AIX11043.
Full textAbstract:
Les pyrrolidone carboxyle pepsidases (pcp) sont des aminopeptidases (bc 3. 4. 11. 8) catalysant le clivage des residus pyroglutamyles situes a l'extremite n-terminale de certains peptides. Les pcp de pseudomonas fluorescens est un polypeptide de 213 acides amines (22,4 kda) presentant de fortes similitudes de sequence avec les pcp de streptococcus pyogenes, bacillus subtilis, bacillus amyloliquefaciens et staphilococcus aureus. C'est sur cette base que les acides amines pouvant etre impliques dans le mecanisme catalytique de la pcp de p. Fluorescens ont ete localises puis identifies par mutagenese dirigee. Ainsi, des proteines modifiees ont ete surexprimees chez escherichia coli puis, purifiees afin d'estimer d'un part, leur conformation apparente, et, d'autre part, leurs proprietes catalytiques. Les resultats obtenus ont permis l'identification de deux residus essentiels a la catalyse, la cysteine 144 et l'histidine 166. Un troisieme acide amine de nature acide (asp ou glu) ayant aussi un role dans la catalyse n'a pu etre identifie. Toutefois, il ne peut s'agir des residus glu10, glu22 ou asp89. Ces experimentations nous ont conduit a proposer les pcp comme une nouvelle classe d'aminopeptidase a cysteine. La regulation de la synthese de la pcp de p. Fluorescens a ete egalement etudiee grace a l'obtention d'un souche mutante depourvue d'activite pcp et porteuse d'une fusion transcriptionnelle entre le gene pcp et un gene rapporteur codant la b-glucuronidase. L'analyse de l'expression du gene sauvage et de la fusion transcriptionnelle dans differentes conditions a montre l'existence de deux effecteurs modulant l'expression du gene pcp chez p. Fluorescens. Il s'agit de l'acide pyroglutamique et du fer. Ces resultats laissent supposer un role, pour cette enzyme, dans la degradation des pyroglutamylepeptides provenant de la degradation de la caseine. Les enzymes du type pcp sont presentes dans la plupart des organismes vivants, des bacteries jusqu'a l'homme. Ceci suggere un role important pour cette enzyme. La pcp 1 de foie de boeuf presente des proprietes similaires aux pcp bacteriennes a l'exception d'une structure monomerique pour une masse moleculaire de 27 kda.
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El, Badaoui Khalid. "Contribution à l'étude des protéases de quelques champignons ectomycorhiziens." Nancy 1, 1988. http://www.theses.fr/1988NAN10123.
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Lang, Kristina Verfasser], Robert [Akademischer Betreuer] [Steinfeld, Blanche [Gutachter] Schwappach, Silvio [Gutachter] Rizzoli, Ralf [Gutachter] Dressel, Hubertus [Gutachter] Jarry, and Nuno [Gutachter] Raimundo. "Exosomes as Potential Transport Vehicles of Tetrahydrobiopterin, 6-Pyrovyoltetrahydrobiopterin-Synthase and Tripeptidyl-Peptidase I / Kristina Lang ; Gutachter: Blanche Schwappach, Silvio Rizzoli, Ralf Dressel, Hubertus Jarry, Nuno Raimundo ; Betreuer: Robert Steinfeld." Göttingen : Niedersächsische Staats- und Universitätsbibliothek Göttingen, 2018. http://d-nb.info/1201160936/34.
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Lang, Kristina [Verfasser], Robert [Akademischer Betreuer] Steinfeld, Blanche [Gutachter] Schwappach, Silvio [Gutachter] Rizzoli, Ralf [Gutachter] Dressel, Hubertus [Gutachter] Jarry, and Nuno [Gutachter] Raimundo. "Exosomes as Potential Transport Vehicles of Tetrahydrobiopterin, 6-Pyrovyoltetrahydrobiopterin-Synthase and Tripeptidyl-Peptidase I / Kristina Lang ; Gutachter: Blanche Schwappach, Silvio Rizzoli, Ralf Dressel, Hubertus Jarry, Nuno Raimundo ; Betreuer: Robert Steinfeld." Göttingen : Niedersächsische Staats- und Universitätsbibliothek Göttingen, 2018. http://d-nb.info/1201160936/34.
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Lang, Kristina. "Exosomes as Potential Transport Vehicles of Tetrahydrobiopterin, 6-Pyrovyoltetrahydrobiopterin-Synthase and Tripeptidyl-Peptidase I." Doctoral thesis, 2018. http://hdl.handle.net/11858/00-1735-0000-002E-E53B-8.
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Schmidt, Jörn [Verfasser]. "Synthese und inhibitorische Eigenschaften von Peptidyl-Pyridinium-Methylketon-Derivaten : Studien zur spezifischen Inhibierung prolinsezifischer Peptidasen / von Jörn Schmidt." 1999. http://d-nb.info/956297226/34.
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