Academic literature on the topic 'Peptide synthétases'

La colistine, antibiotique appartenant à la famille des polymyxines, est un polypeptide cyclique, cationique, ciblant les membranes bactériennes. Elle est produite par Paenibacillus polymyxa via des complexes multi-enzymatiques appelés Non-Ribosomal Peptides Synthétases (NRPS). Dans le cas de la mucoviscidose, et malgré des effets secondaires importants, la colistine est utilisée comme ultime recours pour lutter contre les bactéries Gram-négatives multirésistantes responsables d’infections pulmonaires dont Pseudomonas aeruginosa. Jusqu’ici les systèmes génétiques à l’origine de la production de la colistine étaient peu connus. Au cours de cette étude, nous avons caractérisé par LC-MS haute résolution des molécules antimicrobiennes, dont des colistines, produites par un nouveau Paenibacillus. Afin d’identifier et de cloner le cluster de gène responsable de la production de ces antibiotiques, une banque d’ADN génomique a été construite et criblée par homologie de séquence avec des systèmes de production déjà connus. Ce criblage a permis de sélectionner quatre clones d’intérêt. L’étude in silico de leurs séquences a permis d’identifier les différents modules d’un nouveau cluster NRPS qui serait à l’origine de la synthèse de variants de la colistine. À terme, cette découverte pourrait permettre de mieux contrôler la production de la colistine et d’obtenir des composés plus actifs et/ou présentant des effets secondaires amoindris. En parallèle à ce premier travail, nous avons également recherché la présence de nouvelles NRPS chez une centaine de micro-organismes issus d’une station d’étude environnementale du laboratoire (vasière intertidale). Ce travail a permis de découvrir des nouvelles séquences et d’isoler un nouveau micro-organisme producteur d’antibiotique(s)
Colistin is a cationic cyclic polypeptide antibiotic belonging to the polymyxin family and targeting bacterial membranes. It is produced by Paenibacillus polymyxa through a Nonribosomal Peptide Synthetase (NRPS) mechanism. In the context of cystic fibrosis (CF), colistin is used for the treatment of lung infections caused by multiresistant Gram-negative bacteria including Pseudomonas aeruginosa. Unfortunately, this molecule is also known for its strong side effects. So far, genetic systems controlling the production of polymyxins were little known. In this study we characterized by High-resolution LC-MS the antimicrobial molecules, including colistins, of a new Paenibacillus. A genomic library of this strain was constructed and screened to identify genes involved in the production of these antibiotics. A degenerated PCR screening was performed and allowed to select four clones in the genomic library. In silico study allowed to identify a new NRPS gene cluster responsible for the biosynthesis of colistin variants. In the future, this work might allow the harnessing of the production of colistin derived structures, more active and/or showing fewer side effects. In parallel, a second investigation was performed in order to find new NRPS genes in a collection of one hundred intertidal mudflat bacterial isolates. This work has allowed the identification of new sequences and the characterization of a new antimicrobial producing strain

La résistance développée par les bactéries aux antibiotiques est un problème d'échelle mondiale qui a récemment attiré beaucoup d'intérêt. En effet, particulièrement chez les bactéries à Gram-négatif, on constate une depletion rapide de la quantité d'antibiotiques efficaces. De nos jours, les programmes de recherche de nouveaux antibiotiques commencent souvent par le criblage de cibles cellulaires. Les enzymes Mur, impliquées dans la biosynthèse de la paroi, sont uniques aux cellules bactériennes et nécessaires à leur survie. Le présent mémoire décrit l'utilisation des méthodes de bio-informatique structurale pour mettre en lumière un possible mécanisme d'action pour deux inhibiteurs des Mur ligases précédemment découverts : MurDpl etMurFpl. De plus, les recherches ici présentées ont permis de découvrir une grande similarité entre MurDpl et une famille de peptides antimicrobiens naturels, les tigerinines. Leur capacité à pénétrer les cellules bactériennes et la difficulté pour les bactéries de développer une résistance aux peptides antimicrobiens en général en font des composés de départ prometteurs. Nous suggérons que MurD pourrait être une cible intracellulaire des tigerinines et proposons un mécanisme d'action. De plus, par des moyens informatiques, nous évaluons les possibilités de raffiner MurDpl, MurFpl et les tigerinines de façon à augmenter leur activité.

Je présente dans ce mémoire de HDR le travail pionnier de la bio-informatique pour les peptides non-ribosomiques (PNR). Ces recherches ont été initiées sur Lille en 2006 et ont abouti à l'unique plate-forme d'analyse bio-informatique des PNR appelée Norine, dont je suis un des membres fondateurs. Les peptides non-ribosomiques font partie des petites molécules produites par les micro-organismes, bactéries et fungi, pour coloniser leur milieu. Ces peptides particuliers ont l'avantage d'avoir une grande variété de structures. En effet, ils peuvent être linéaires, mais aussi contenir des cycles et/ou des branchements et sont composés de plus de 500 briques de base différentes. Cette variété provient de leur synthèse réalisée par de gros complexes enzymatiques, les synthétases peptidiques non-ribosomiques (PNRS). Ceux-ci sélectionnent les acides aminés et d'autres composés, appelés monomères, puis les assemblent en formant des liaisons peptidiques et d'autres liaisons. Ainsi, les peptides non-ribosomiques présentent une grande diversité d'activités telles que antibiotique, anti-cancéreux ou immuno-suppresseur. Certains, comme la pénicilline, sont des médicaments employés fréquemment. Dans une première partie, je propose un regard différent sur les synthétases en associant les particularités des peptides aux fonctions enzymatiques nécessaires à les réaliser. Puis, je décris les principales étapes nécessaires à la conception d'un outil d'analyse des séquences protéiques de PNRS en précisant les particularités des outils existants. Ensuite, je présente ma contribution à l'exploration du potentiel de synthèse de PNR à partir de séquences génomiques ou protéiques à travers ma participation à la mise au point d'un protocole d'analyses bio-informatiques et à l'annotation de plusieurs génomes. Dans une seconde partie, je commence par préciser les apports de la plate-forme Norine sur la compréhension de la diversité des peptides non-ribosomiques, complétés par une étude de la chimie de ces molécules. Ensuite, je présente les quelques bases de données et outils en relation avec ces peptides, qui sont développés par ailleurs. Puis, je présente la plate-forme Norine en exposant mes contributions et en proposant la modernisation du processus de collecte des données et l'évolution des fonctionnalités d'interrogation via les structures peptidiques. Je termine par la présentation d'une nouvelle perspective : la chémo-informatique dédiée aux peptides non-ribosomiques avec pour objectif la prédiction d'une ou plusieurs synthétases capables de produire un peptide ayant une activité cible.

Les aminoacyl-transférases Fem catalysent une étape essentielle de la biosynthèse du peptidoglycane bactérien et sont considérées comme des cibles attractives pour le développement de nouveaux antibiotiques. FemX extraite de la souche Weissela viridescens (FemXWv) a été choisie comme enzyme modèle des aminoacyl-transférases. Elle transfert le résidu L-Ala de l’Ala-ARNtAla sur l’amine de la L-Lys du précurseur du peptidoglycane UDP-Mur-NAc-pentapeptide (UM5K). Les structures cristallographiques de l’apo-enzyme et du complexe UM5K/FemXWv ont été résolues mais la co-cristallisation avec l’Ala-ARNtAla n’a pas été obtenue. Pour concevoir de nouveaux outils biochimiques pour la co-cristallisation de FemXWv, nous avons développé l’hémi-synthèse d’aminoacyl-ARNt hautement modifiés et de conjugués peptidyl-ARN qui intéragissent spécifiquement avec l’enzyme. Les analogues d’Ala-ARNtAla contenant une liaison amide à la place de la liaison ester naturelle facilement hydrolysable, ont été synthétisés et une étude de l’influence de la conformation du ribose terminal sur le transfert d’aminoacyl a été effectuée par étude RMN. Un analogue d’intermédiaire réactionnel comportant un motif carbamate a été synthetisé pour mimer l’attaque nucléophile du carbonyle de l’Ala-ARNtAla par la chaine latérale du résidu L-Lys. Une autre approche pour obtenir des analogues d’aminoacyl-ARNt a été d’introduire un azoture sur l’ARNt et un alcyne sur l’UM5K pour synthétiser des conjugués peptidyl-ARN dans lesquels l’ARNt est lié de manière covalente au précurseur du peptidoglycane par la cycloaddition de Meldal-Huisgen-Sharpless catalysée au Cu(I). Les analogues préparés ont été testés en tant qu’inhibiteurs de FemXWv (collaboration avec le LRMA) et ont révélés de bons IC50 qui varient de 5. 8 µM à 25 pM. Par ces approches, nous avons conçu des outils biochimiques pour la co-cristallisation de FemXWv. Les informations obtenues sur la structure du site actif et le mécanisme catalytique de FemXWv devraient fournir les informations nécessaires pour le design de molécules actives sur les cibles enzymatiques de type Fem. Plus généralement, ces outils pourraient ête utilisés pour étudier les enzymes ARNt-dépendantes
Aminoacyl-transferases Fem catalyse an essential step of peptidoglycan biosynthesis in pathogenic bacteria and are considered as attractive targets for the development of novel antibiotics. FemX from Weissela viridescens, the model enzyme of the family, transfers L-Ala from Ala-tRNAAla to the ε-amino group of L-Lys in the peptidoglycan precursor UDP-Mur-NAc-pentapeptide (UM5K). The crystal structures of the apo-enzyme and of UM5K/FemX complex have been determinated but co-crystallization with Ala-tRNAAla has not been obtained. To design biochemical tools for co-crystallization of FemXWv, we developed the semi-synthesis of highly modified aminoacyl-tRNAs and peptidyl-RNA conjugates that interact specifically with the enzyme. Analogues of Ala-tRNAAla containing an amide linkage, instead of the natural hydrolysable ester function, were synthesized and a study on the influence of the terminal ribose conformation on the aminoacyl transfer was done by NMR studies. Reactional intermediate analogue containing a carbamate moiety was designed to mimic the nucleophilic attack of the carbonyl of Ala-tRNAAla by the lateral chain of L-Lys. Another approach of obtaining aminoacyl-tRNA analogues was to introduce an azide onto tRNA and an alkyne onto UM5K to design peptidyl-RNA conjugates, containing the tRNA covalently linked to the peptidoglycan precursor, by Meldal-Huisgen-Sharpless Cu(I) catalyzed cycloaddition. The analogues were tested as inhibitors of FemXWv (LRMA collaboration) and revealed very good IC50 values wich range from 5. 8 µM to 25 pM. By these approaches, we designed biochemical tools for co-crystallization of FemXWv. The information gathered on the structure of its active site and on the catalytic mechanism of FemXWv, should provide the critical information for the rationale design of drugs active on Fem targets. More generally, these tools could also be used to study tRNA-dependent enzymes

Cette thèse a porté sur l’étude de la biosynthèse d’un lipopeptide antifongique, la mycosubtiline, produit par Bacillus subtilis ATCC6633 sous la forme d’un mélange d’isoformes qui varient selon la longueur et l’isomérie de leur chaine d’acide gras. La nature de l’acide gras influence l’activité biologique du lipopeptide. La corrélation entre la synthèse des isoformes de mycosubtiline et d’acides gras cellulaires a été étudiée en faisant varier des conditions de culture telles que l’osmolarité, la température et la source d’azote. Les variations du profil d’acides gras influencent dans la majorité des cas le profil des mycosubtilines obtenues confirmant le rôle important de ces précurseurs pour la synthèse du lipopeptide. Les effets de la modification génétique de deux gènes intervenant dans la synthèse de ces précurseurs ont été également caractérisés. La surexpression du gène ilvA codant pour la thréonine déshydratase et intervenant donc dans la synthèse de l’isoleucine augmente la synthèse de la mycosubtiline anteisoC17 alors que l’interruption d’un gène régulateur pléiotropique codY favorise la formation de la forme isoC16. Une souche monoproductrice constitutive de mycosubtiline, obtenue par optimisation génétique de la souche ATCC 6633 a également été caractérisée. Enfin, une première approche de purification des synthétases impliquées dans la synthèse de la mycosubtiline a été réalisée. Ces études ont contribuées à une meilleure compréhension des paramètres influençant « in vivo » cette synthèse, ainsi qu’à l’amélioration de la production de mycosubtiline, et à la définition des conditions optimales d’obtention des isoformes les plus actives
This thesis is about the study of an antifungal lipopeptide , the mycosubtilin produced by Bacillus subtilis ATCC 6633 as a co-production of isoforms which vary according to the length and the isomery of the fatty acids chain (mostly nC16, isoC16, nC17, isoC17 and anteisoC17). The nature of fatty acid chain influences the biological activity of the lipopeptide. The relationship between the mycosubtilin isoforms synthesis and the fatty acids synthesis was studied by the variation of growth parameters like osmolarity, temperature and nitrogen source. The important role of fatty acids precursors for the lipopeptides synthesis was confirmed by the influence of fatty acids pattern variations on the mycosubtilines pattern. The effects of genetic modification of two genes involved in synthesis of fatty acids precursors were also characterized. The overexpression of ilA coding for threonine deshydratase, involved in isoleucine synthesis increase the mycosubtilin anteisoC17 production while the knock-out of the pleitropic regulator gene codY improves the isoC16 mycosubtilin synthesis. Moreover, a mycosubtilin constitutive monoproductive strain, obtained by genetic optimization of ATCC 6633 strain was also characterized. Then, a preliminary purification approach of synthetases implied in mycosubtilin synthesis was realized. Those studies contribute to a better understanding of parameters influencing in vivo synthesis as well as the improvement of mycosubtilin production and the definition of optimal conditions to obtain the most active isoforms

Les peptides non-ribosomiaux sont des molécules produites par les micro-organismes et présentant un large éventail d’activités biologiques et pharmaceutiques. Par exemple, ils peuvent présenter des activités antibiotiques, immuno-modulatrices ou anti-tumorales. Ces peptides sont synthétisés par de grands complexes multi-enzymatiques, appelés synthétases ou NRPS (NonRibosomal Peptide Synthetases). Deux traits caractéristiques distinguent ces peptides des peptides ribosomiaux classiques : le premier est que leur structure primaire n’est pas toujours linéaire mais peut être totalement ou partiellement cyclique, branchée voir même poly-cyclique, et le second est la diversité des monomères incorporés au sein de ces peptides qui dépasse largement les vingt acides aminés protéogéniques. Nous avons développé Norine, la première ressource publique entièement dédiée aux peptides nonribosomiaux. Norine contient actuellement plus de 1 000 peptides, modélisés par des graphes étiquetés non-orientés, ainsi que des outils informatiques permettant leur analyse, comme la comparaison de compositions en monomères, la recherche de motifs structuraux ou la recherche par similarité. Des analyses statistiques sur les données contenues dans Norine ont permis de mettre en évidence des caractéristiques biologiques intéressantes comme la spécificité des monomères en fonction de l’activité biologique qui nous a conduit à l’élaboration d’un outil d’aide à la prédiction de la fonction biologique d’un peptide à partir de sa composition monomérique. En trois ans, Norine est devenue la ressource internationale pour les peptides non-ribosomiaux
Nonribosomal peptides are molecules produced by microorganisms and displaying a broad spectrum of biological activities and pharmaceutical applications. They can harbor anti-microbial, immunomodulating or anti-tumor activities. These peptides are synthesized by huge multi-enzymatic complexes, called NonRibosomal Peptide Synthetases. Two main structural traits distinguish these peptides from the ribosomally synthesized ones : first, their primary structure is not always linear but is often cyclic (partially or totally), branched or poly-cyclic, and second, the diversity of monomers incorporated into nonribosomal peptides extends far beyond the 20 proteogenic amino acids residues. We have developed Norine, the first public resource entirely dedicated to nonribosomal peptides. Norine currently contains more than 1 000 peptides, modeled by non-oriented labeled graphs, and computational tools allowing their analysis, such as monomer composition comparison, structural pattern matching or similarity search. Statistical analysis of Norine data highlighted interesting biological properties such as a specific monomer composition depending on the biological activity, that led us to develop a tool for helping the prediction of peptide activity from its monomeric composition. In three years, Norine became the international resource for nonribosomal peptides

Cette thèse présente la découverte de nouveaux inhibiteurs de l’amidotranférase ARNt-dépendante (AdT), et résume les connaissances récentes sur la biosynthèse du Gln-ARNtGln et de l’Asn-ARNtAsn par la voie indirecte chez la bactérie Helicobacter pylori. Dans le cytoplasme des eucaryotes, vingt acides aminés sont liés à leur ARNt correspondant par vingt aminoacyl-ARNt synthétases (aaRSs). Ces enzymes sont très spécifiques, et leur fonction est importante pour le décodage correct du code génétique. Cependant, la plupart des bactéries, dont H. pylori, sont dépourvues d’asparaginyl-ARNt synthétase et/ou de glutaminyl-ARNt synthétase. Pour former le Gln-ARNtGln, H. pylori utilise une GluRS noncanonique nommée GluRS2 qui glutamyle spécifiquement l’ARNtGln ; ensuite, une AdT trimérique, la GatCAB corrige le Glu-ARNtGln mésapparié en le transamidant pour former le Gln-ARNtGln, qui lira correctement les codons glutamine pendant la biosynthèse des protéines sur les ribosomes. La formation de l’Asn-ARNtAsn est similaire à celle du Gln-ARNtGln, et utilise la même GatCAB et une AspRS non-discriminatrice. Depuis des années 2000, la GatCAB est considérée comme une cible prometteuse pour le développement de nouveaux antibiotiques, puisqu’elle est absente du cytoplasme de l’être humain, et qu’elle est encodée dans le génome de plusieurs bactéries pathogènes. Dans le chapitre 3, nous présentons la découverte par la technique du « phage display » de peptides cycliques riches en tryptophane et en proline, et qui inhibent l’activité de la GatCAB de H. pylori. Les peptides P10 (CMPVWKPDC) et P9 (CSAHNWPNC) inhibent cette enzyme de façon compétitive par rapport au substrat Glu-ARNtGln. Leur constante d’inhibition (Ki) est 126 μM pour P10, et 392 μM pour P9. Des modèles moléculaires ont montré qu’ils lient le site actif de la réaction de transmidation catalysée par la GatCAB, grâce à la formation d’une interaction π-π entre le résidu Trp de ces peptides et le résidu Tyr81 de la sous-unité GatB, comme fait le A76 3’-terminal de l’ARNt. Dans une autre étude concernant des petits composés contenant un groupe sulfone, et qui mimiquent l’intermédiaire de la réaction de transamidation, nous avons identifié des composés qui inhibent la GatCAB de H. pylori de façon compétitive par rapport au substrat Glu-ARNtGln. Cinq fois plus petits que les peptides cycliques mentionnés plus haut, ces composés inhibent l’activité de la GatCAB avec des Ki de 139 μM pour le composé 7, et de 214 μM pour le composé 4. Ces inhibiteurs de GatCAB pourraient être utiles pour des études mécanistiques, et pourraient être des molécules de base pour le développement de nouvelles classes d’antibiotiques contre des infections causées par H. pylori.
This thesis describes the discovery of inhibitors of a tRNA-dependent amidotransferase (AdT) and summarizes the present state of our knowledge about the two-step biosynthesis of Gln-tRNAGln and Asn-tRNAAsn in Helicobacter pylori. In eukaryotic cytoplasm, twenty amino acids (aa) are generally attached to their cognate tRNAs by twenty corresponding aminoacyl-tRNA synthetases (aaRSs). These enzymes have a high specificity, and their function is important to the proper decoding of mRNA. However, in a number of bacteria including H. pylori, GlnRS and/or AsnRS are absent. To synthesize Gln-tRNAGln, H. pylori first uses a noncanonical GluRS2 which is specific for tRNAGln to form Glu-tRNAGln; then the trimeric AdT (GatCAB) transforms Glu-tRNAGln into Gln-tRNAGln which is proper for protein biosynthesis. In a similar manner, the biosynthesis of Asn-tRNAAsn also takes place in H. pylori by using the same GatCAB and a canonical nondiscriminating AspRS. The widespread use of these indirect pathways among prominent human pathogens, and their absence in the mammalian cytoplasm, identify AdT as a promising target for the development of new and highly specific antimicrobial agents. By using phage display, we discovered several cyclic peptides rich in tryptophan and proline that inhibit H. pylori GatCAB. Peptides P10 (CMPVWKPDC) and P9 (CSAHNWPNC) are competitive inhibitors of GatCAB with respect to its substrate Glu-tRNAGln. The inhibition constants (Ki) of P10 and P9 are 126 and 392 μM, respectively. Their docking models revealed that they bind to the transamidation active site of GatB via π-π stacking interactions with Tyr81, as does the 3’-terminal A76 of tRNA. We also discovered two small dipeptide-like sulfone-containing inhibitors of H. pylori GatCAB by mimicking the intermediate of its transamidation reaction. Although they are much smaller than the cyclic peptides mentioned above, they are competitive inhibitors of GatCAB with respect to GlutRNAGln, with Ki values of 139 μM for compound 7 and 214 μM for compound 4. These inhibitors could be useful not only to study the reaction mechanisms of GatCAB, but also could be lead compounds for the development of a new class of antibiotics to treat infections caused by H. pylori.

L'holocarboxylase synthetase catalyse l'incorporation covalente de biotine sur differentes carboxylases, essentielles au metabolisme cellulaire, en permettant leur activation. Les enzymes biotinylees ont ete etudiees chez de nombreux organismes. Chez les vegetaux superieurs, nous avons montre l'existence d'une activite holocarboxylase synthetase, par une methode de dosage enzymatique utilisant de la d-#3hbiotine et de l'apo-bccp bacterienne, comme substrats. La reaction catalysee par l'hcs d'un extrait de plante est atp-dependante. Les valeurs de k#m apparents de l'enzyme de pois pour la biotine et l'atp sont respectivement de 28 nm et 184 m. D'autre part, en utilisant des protoplastes fractionnes de feuilles de pois et des organites purifies, nous avons localise specifiquement l'activite hcs dans le cytosol, les chloroplastes et les mitochondries. Ces resultats suggerent l'existence de plusieurs isoformes de l'hcs impliquees dans la biotinylation des carboxylases dependantes de la biotine actives dans differents compartiments de la cellule. Par complementation fonctionnelle d'un mutant bacterien avec une banque d'adnc d'a. Thaliana, un adnc complet codant pour l'hcs a ete isole. La proteine codee contient des regions specifiques d'homologie avec les autres biotine ligases connues. La region nh#2-terminale de l'hcs d'a. Thaliana possede toutes les caracteristiques d'un peptide de transit. L'enzyme recombinante surproduite a ete purifiee a homogeneite, permettant ainsi l'etude de ses proprietes cinetiques et de son mecanisme reactionnel. En utilisant des anticorps polyclonaux diriges contre l'hcs recombinante purifiee, l'enzyme codee par cet adnc a ete localisee specifiquement dans les chloroplastes de pois. Ce resultat a ete confirme par des experiences d'immuno-cytochimie sur des coupes fines de tabacs, transformes par la sequence codante complete de l'adnc de l'hcs, via agrobacterium tumefaciens. Les autres isoformes de plante seront caracterisees.

Les champignons microscopiques du genre trichoderma biosynthétisent des peptides antibiotiques actifs contre les bactéries a gram positif et les mycoplasmes, la cible étant la membrane plasmique. Ces peptides linéaires hydrophobes, nommes peptaibols, sont riches en acide alpha-aminoisobutyrique (AIB), bloques par un acétyle n-terminal et un amino alcool c-terminal. Ils résultent d'une voie de biosynthèse non ribosomale utilisant des protéines multifonctionnelles, les peptide-synthétases. Nous avons étudié deus souches : I)- T. Longibrachiatum qui produit des peptaibols de 20 résidus, les longibrachines LGA (GLN 1 8), II)- T. Harzianum qui conduit à des peptaibols neutres de 18 résidus (trichorzines PA) et 14 résidus (harzianines pc). Par RMN et modélisation moléculaire, nous avons montre que la structure tridimensionnelle de la longibrachine LGA i est une hélice droite mixte (alpha/3 1 0), présentant dans la région 10-13 un coude du a la proline 14. Ces hélices amphipathiques sont connues pour s'associer dans les bicouches phospholipidiques. La biosynthèse dirigée in vivo par apport exogène d'acides amines (aib, arg, glu) au milieu standard de culture conduit, pour les deux souches, a la simplification des mélanges peptidiques. T. Harzianum fournit ainsi quatre nouveaux peptaibols, dont les séquences ont été déterminées par spectrométrie de masse. La peptide-synthétase de T. Longibrachiatum a été purifiée en cinq étapes. Pour suivre l'activité enzymatique, nous avons mis au point deux tests reposant sur des mesures de radioactivité, l'échange atp- 3 2pppi et la formation d'un thioester avec la valine tritiee. La longibrachine-synthétase est caractérisée par un point isoélectrique de 5,5 et une masse moléculaire de 1920 KDA déterminée par ultracentrifugation (sédimentation a l'équilibre). Cette enzyme est ainsi la peptide-synthétase de plus haute masse moléculaire isolée et caractérisée jusqu'a présent.