Dissertations / Theses on the topic 'Periodontal tissue regeneration'

Mestrado em Ciência e Engenharia de Materiais
Periodontal diseases induce a loss of soft and hard tissues surrounding the teeth after inflammation. Defects created by the infection would be replaced by the synthetic scaffold allowing progressive tissue regeneration. Mineralized PLGA (poly(lactic-­‐co-­‐glycolic acid)) nanofibers developed by electrospinningor jet spraying techniques are efficient biomaterials to maintain temporarily a physical structure and to enhance biocompatibility for hard tissue regeneration. The aim of this work was to mineralize PLGA nanofibers by two different methods: Simulated Body Fluid (SBF) immersion and projection by jet spraying (JS). SBF method consists in soaking PLGA matrices intohigh ions concentrated solutions (SBFx1 or SBFx5) to deposit mineral layers. With the new JS technique, we target a formation of a nanocomposite of PLGA and hydroxyapatite nanoparticles (nHA): first with the help of a blend solution (PLGA + nHA) directly projected (JS) and then with a simultaneous co projection of PLGA solution and nHA suspension in water (Co-­‐JS). From material characterization perspective, samples produced by SBFx1 protocol showed a very weak mineral deposition, low crystalline sodium chloride whereas SBFx5 solutions allowed the formation of a consequent CaP mineral layer on electrospun PLGA matrices. SEM images allowed the observation of different mineral structures strongly depending on SBF concentration and immersion time. XRD patterns confirmed the presence of HA into JS PLGA matrices. Morphologically, JS scaffolds varied with the concentration of HA nanoparticles incorporated into the initial mixture. HA nanoparticles were successfully incorporated inside the polymer fibers with the first Jet spraying technique (JS) whereas nHAs were successfully deposited on the surface of the PLGA fibers with Co JS method.
A doença periodontal induz uma inflamação que pode levar à destruição dos tecidos de suporte do dente. A degradação provocada pela doença pode ser tratada com o recurso a suportes sintéticos que permitam a regeneração progressiva dos tecidos. As nanofibras de ácido polilactico co-­‐glicolico (PLGA), mineralizadas, produzidas por electrofiação ou pela técnica de pulverização por jacto, são biomateriais adequados para funcionarem como suporte físico temporário e assegurarem a biocompatibilidade necessária à regeneração de tecidos. O presente trabalho tem como objetivo o estudo da mineralização de nano-­‐fibras de PLGA para optimizar a regeneração de tecidos duros. São propostos dois métodos de mineralização: o método baseado no fluido fisiológico simulado (SBF) e o método baseado na pulverização por jacto (JS). A técnica de SBF consiste em mergulhar matrizes de PLGA, produzidas por electrofiação, numa solução concentrada de sais ao passo que a técnica de JS consiste em pulverizar uma suspensão preparada com nanopartículas de hidroxiapatite (Ca5(PO4)3(OH), HA) e uma solução polimérica. Os materiais produzidos foram caracterizados por difração de Raios-­‐ X e por microscopia electrónica de varrimento (MEV).Para as amostras processadas pela técnica de SBF os resultados de DRX evidenciaram a presença de fosfatos de cálcio de baixa ristalinidade, correspondentes à fase de hidroxiapatite. As imagens de MEV permitiram observar a formação de estruturas minerais fortemente dependentes do tempo de imersão. Nas matrizes de PLGA tratadas por JS, a DRX confirmou a presença de HA e a MEV revelou que a morfologia das amostras depende da concentração das nanopartículas de HA adicionadas à solução polimérica inicial. O método de SBF permitiu uma deposição superficial de fosfatos de cálcio ao passo que, pelo método de JS, foi possível incorporar nanopartículas de HA no seio da matriz polimérica. A combinação dos dois métodos parece pois ser uma técnica promissora para fabricar suportes mineralizados para regeneração de tecido periodontal.

Orientadores: Enilson Antonio Sallum, Antonio Wilson Sallum
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-07-26T05:10:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_SergioLuisdaSilva_D.pdf: 3339204 bytes, checksum: 5e8546b985b4441bbc62f16e7bbb50a7 (MD5) Previous issue date: 1999
Resumo: O objetivo deste trabalho foi comparar, histológica e histometricamente, o processo de cura de defeitos tipo deiscência tratados pela técnica de regeneração tecidual guiada (RTG) com membranas reabsorvíveis de ácido poliláctico e não reabsorvíveis de politetrafluoroetileno expandido (PTFE-e). Seis cães adultos fêmeas de raça indefinida foram utilizados. Defeitos ósseos tipo deiscência foram criados cirurgicamente nas raízes distais dos terceiros e quartos pré molares mandibulares de ambos os lados e expostos ao acúmulo de placa por 3 meses. Após este período, os defeitos foram aleatoriamente designados para um dos tratamentos: RTG com membrana reabsorvível de ácido poliláctico (Grupo 1), RTG com membrana não reabsorvível de PTFE-e (Grupo 2), raspagem e alisamento radicular manual com acesso cirúrgico (Grupo 3) e não tratado (Grupo 4). Após 3 meses do segundo procedimento cirúrgico, os cães foram sacrificados e os espécimes processados para permitir análise histológica e histométrica, incluindo. os seguintes parâmetros: extensão linear do epitélio sulcular e juncional, adaptação do tecido conjuntivo, novo cemento, extensão vertical do novo osso e nova área óssea. Uma extensão linear de novo cemento estatisticamente superior (P<0.05) foi observada nos sítios tratados pela RTG, independente do tipo de membrana utilizada, em comparação com o Grupo 3. Não houve diferença estatisticamente significante entre o Grupo 1 e 2 em todos os parâmetros avaliados, exceto em relação à área de novo osso. O grupo 1 apresentou uma área de novo osso estatisticamente superior a dos outros grupos (P<0.05). Dentro dos limites deste estudo pôde-se concluir que ambas as membranas foram igualmente efetivas em promover nova formação cementária e que a membrana reabsorvível de ácido poliláctico (não-suturada) providenciou uma maior área óssea em relação à membrana não reabsorvível de PTFE-e
Abstract: The goal of this investigation was to compare histollogically and histometrically the healing process of dehiscence-type defects treated by guided tissue regeneration (GTR) with resorbable polylactic acid membranes and nonresorbable ePTFE membranes. Six mongrel dogs were used. Buccal osseous dehiscences were surgically created on the distal roots of the mandibular third and fourth premolars. The defects were exposed to plaque accumulation for 3 months. After this period, the defects were randomly assigned to one ofthe treatments: GTR with resorbable membrane (GTR1), GTR with nonresorbable membrane (GTR2), open flap debridement (OFD) and non-treated control (NTC). After 3 months of healing, the dogs were sacrificed and the blocks were processed. The histometric parameters evaluated included: length of sulcular and junctional epithelium, connective tissue adaptation, new cementum, new bone (vertical component) and new bone area. A superior length of new cementum was observed in the sites treated by GTR, regardless of the type of barrier used (P<0.05), in comparison with OFD. No statistically significant differences were found between GTRl and GTR2 in all the parameters with the exception ofbone area. GTRl presented a greater bone area (P<0.05) when compared to GTR2, OFD and NTC. Within the limits of this study, it can be concluded that both batriers are equally effective for new cementum formation. The resorbable membrane (non-sutured) may provide a better osseous response than the nonresorbable membrane
Doutorado
Periodontia
Doutor em Clínica Odontológica

Projeto de Pós-Graduação/Dissertação apresentado à Universidade Fernando Pessoa como parte dos requisitos para obtenção do grau de Mestre em Medicina Dentária
A doença periodontal afeta grande parte da população, e a sua progressão pode levar à perda de inserção dos tecidos conetivos do periodonto assim como perda óssea. O tratamento periodontal procura essencialmente dois objetivos: impedir a progressão da doença e reconstruir os tecidos periodontais perdidos. O tratamento regenerativo surge como método para alcançar este segundo objetivo. Neste âmbito, ao longo do tempo têm sido desenvolvidas diversas técnicas regenerativas, sendo as proteínas de matriz de esmalte e a regeneração tecidular guiada as mais investigadas em ensaios clínicos. A revisão bibliográfica inicialmente foi realizada no motor de busca PubMed recorrendo a palavras-chave como: “Periodontal Regeneration”, “Intrabony Defects”, “Guided Tissue Regeneration” e “Enamel Matrix Proteins” tendo por base meta-análises publicadas, maioritariamente, nos últimos 10 anos. Posteriormente foram incluídos artigos como base litúrgica para abordar a parte teórica deste trabalho, sendo estes publicados entre 1958 e 2015.
Periodontal disease affects a large population and its progression may lead to the loss of attachment of periodontal connective tissue as well as bone loss. The periodontal treatment essentially seeks two objectives: preventing disease progression and rebuild the lost periodontal tissues. The regenerative treatment arises as a method to achieve this second goal. In this context, from time to time there have been developed several regenerative techniques, being the proteins of enamel matrix and guided tissue regeneration, the most investigated in clinical trials. The literature review was conducted initially in the search engine PubMed using keywords like "Periodontal Regeneration", "Intrabony Defects", "Guided Tissue Regeneration" and "Enamel Matrix Proteins" on the basis of published meta-analysis, mostly in the last 10 years. Later there were included items as a liturgical basis for in order to adress the theoretical part of this study, which were published between 1958 and 2015.

Orientador: Enilson Antonio Sallum
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-26T23:34:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franca_IsabelaLima_M.pdf: 1330190 bytes, checksum: 6782efacdca31e69f907222817356c7c (MD5) Previous issue date: 2015
Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar, clinicamente, a utilização do Retalho Semilunar Posicionado Coronariamente (RSPC) para tratamento de recessões gengivais, com ou sem associação à proteína derivada da matriz do esmalte (EMD). Foram selecionados 30 pacientes, que foram randomizados e alocados em dois grupos: teste (RSPC + EMD) e controle (RSPC sozinho). Para serem incluídos no estudo, os indivíduos deveriam apresentar recessões gengivais vestibulares localizadas classe I de Miller com altura maior ou igual a 2,0mm e menor que 4,0 mm, em caninos ou pré-molares superiores. Parâmetros clínicos avaliados: altura da recessão gengival (ARG), largura da recessão gengival (LRG), nível de inserção clínica (NIC), profundidade de sondagem (PS), altura de tecido queratinizado (ATQ), espessura de tecido queratinizado (ETQ) e altura (AP) e largura (LP) das papilas mesial e distal, além de índice de placa (IPL) e índice gengival (IG). Estes parâmetros foram medidos nos seguintes períodos: baseline, 90 dias e 180 dias após o procedimento cirúrgico. Nenhuma diferença estatisticamente significante foi observada entre os grupos em relação à redução da retração gengival com 6 meses de acompanhamento, embora tenha sido encontrada maior porcentagem de cobertura radicular no grupo RSPC+EMD (91%), quando comparado ao RSPC (87%) (p>0,05). Cobertura radicular completa foi obtida em 60% dos sítios no RSPC enquanto no grupo RSPC+EMD foi observada em 66,67% dos sítios. Dentro dos limites do presente estudo pôde-se concluir que o RSPC, associado ou não a EMD, levou a redução da recessão gengival, sem diferença estatística entre os grupos, após 6 meses de acompanhamento pós-operatório
Abstract: The aim of this study was to evaluate clinically the use of the Semilunar Coronally Positioned Flap (SCPF) for the treatment of gingival recessions, with or without Enamel Matrix Derivative (EMD). Thirty patients were selected, randomized and allocated in two groups: test (SCPF + EMD) and control (SCPF alone). To attend the study, subjects should present buccal Miller class I gingival recessions with height greater than or equal to 2.0 mm and less than to 4.0 mm in maxillary canines or premolars. Clinical parameters evaluated: gingival recession height (GRH), gingival recession width (GRW), clinical attachment level (CAL), probing depth (PD), height (HKT) and thickness (TKT) of keratinized tissue and papillas height (HP) and width (LP), as well as plaque and gingival index. These data were collected at baseline, 90 days and 180 days after surgery. No statistically significant difference was observed between the groups regarding the reduction of gingival recession after 6 months of follow-up, although a higher percentage of root coverage was found in SCPF + EMD group (91%), when compared to the SCPF (87%) (p> 0.05). Complete root coverage was observed in 60% of the sites of the control group (SCPF alone) and in 66,67% of the sites of the test group (SCPF+EMD). Within the limits of this study it was concluded that SCPF, associated or not with EMD may provide a reduction in gingival recession, with no statistical difference between groups
Mestrado
Periodontia
Mestra em Clínica Odontológica

Orientadores: Francisco Humberto Nociti Junior, Marcio Zaffalon Casati
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba
Made available in DSpace on 2018-08-05T21:22:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_PatriciaFurtado_D.pdf: 1584484 bytes, checksum: 320d77faa174f7b65746904c2c6166c6 (MD5) Previous issue date: 2006
Resumo: Tendo sido demonstrada a possibilidade de preservação do cemento como forma alternativa de tratamento da doença periodontal, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do cemento dental na regeneração periodontal. Foram utilizados nove cães, sem raça definida, que receberam ligaduras de fio de algodão nos terceiros pré-molares inferiores, bilateralmente, para produzir lesões de bifurcação classe III. Após o levantamento de retalhos mucoperiosteais, os defeitos foram aleatoriamente escolhidos para receber um dos seguintes tratamentos: (A) remoção do tecido de granulação e uma cuidadosa raspagem e alisamento radicular, utilizando curetas e brocas, objetivando a remoção dos depósitos duros e moles e do cemento radicular, e polimento radicular com taças de borracha e pasta profilática; (B) somente a remoção do tecido de granulação e polimento radicular com taças de borracha e pasta profilática, objetivando a preservação do cemento radicular. Em ambos os grupos, os defeitos foram tratados com o princípio da Regeneração Tecidual Guiada (membranas reabsorvíveis - RESOLUT XT®) e os retalhos foram posicionados coronariamente e suturados. Após quatro meses os animais foram sacrificados para uma análise histomorfométrica. No grupo B, houve uma maior extensão (3,59±1,67 e 6,20±2,26mm para os grupos A e B, respectivamente; p=0,004) e espessura (18,89±9,47 e 52,29±22,48µm para os grupos A e B, respectivamente; p=0,001) de novo cemento, uma maior extensão de novo osso (1,86±1,76 e 4,62±3,01mm para os grupos A e B, respectivamente; p=0,002), além de uma maior extensão de regeneração periodontal, quando comparado ao grupo A (p<0,05 ¿ Wilcoxon). Observou-se ainda, no grupo B, uma menor formação de tecido epitelial/conjuntivo sobre a superfície radicular (2,77±0,79 e 1,10±1,48mm para os grupos A e B, respectivamente; p=0,009), além de uma maior porcentagem de preenchimento da área do defeito (80,95±17,46 e 94,50±10,27 para os grupos A e B, respectivamente; p<0,05), com uma maior proporção de novo osso e uma menor proporção de tecido epitelial/conjuntivo (p<0,05). Dentro dos limites deste estudo, conclui-se que o cemento dental pode modular a regeneração periodontal
Abstract: The aim of the present study was to histometrically evaluate, in dogs, the effect of root cementum on periodontal regeneration. Nine mongrel dogs were used to obtain bilateral chronic class III furcation defects by placing cotton ligatures around both third mandibular premolars. The teeth were randomly assigned to receive one of the following treatments: (A) Scaling and root planning, by means of hand and rotatory instruments, in order to remove soft and hard deposits as well as all root cementum; (B) Removal of only soft microbial deposits, by polishing the root surface with rubber cups and polishing paste, aiming at maximum root cementum preservation. Both groups were treated with Guided Tissue Regeneration (GTR), with the use of resorbable poliglycolic-lactic-acid membranes (RESOLUT XT®) covering the buccal e lingual aspects of the furcation defect, and the flaps coronally positioned. Four months after the treatment, the animals were sacrificed and the histological sections obtained. Data analysis showed that a superior length (3.59±1.67 vs. 6.20±2.26mm; p=0.004) and a thicker layer (18.89±9.47 vs. 52.29 ±22.48µm; p=0.001) of new cementum were observed for group B (p<0.05). Additionally, group B presented and a superior length of new bone (1.86±1.76 vs. 4.62±3.01mm; p= 0.002) and less soft tissue along the root surface (2.77±0.79 vs. 1.10±1.48mm; p=0.009), and a larger proportion of periodontal regeneration when compared to control (p<0.05). A larger area of new bone (p=0.018) and a smaller area of soft tissue (p=0.024) were also observed for group B (p<0.05 - Wilcoxon). Within the limits of this study, it can be concluded that root cementum may modulate periodontal regeneration
Doutorado
Periodontia
Doutor em Clínica Odontológica

A periodontite é uma doença inflamatória crônica, multifatorial, altamente prevalente na população que compromete os tecidos de suporte dos dentes gerando sequelas de difícil resolução, mesmo com as mais modernas técnicas regenerativas. A terapia tecidual parece ser uma alternativa promissora e as células indiferenciadas do ligamento periodontal (PDL) tem demonstrado grande potencial terapêutico. No entanto, o PDL necessita de estímulos adequados de biomodificadores para que a diferenciação ocorra de forma coordenada. As proteínas da matriz do esmalte (EMD) é um tipo de biomodificador que promove formação de novo cemento. Apesar de ser utilizada clinicamente, a sua associação com células frescas do PDL ainda não foi explorada. Este é um estudo da expressão gênica e proteica do PDL com finalidade de reaproveitamento do tecido recém-extraído, estimulado por EMD, tendo em vista a regeneração periodontal. Os resultados da expressão gênica apresentam VEGF (p=0.5194) com diferença entre medianas de -0.201 e FGF-2 (p = 0,0059) com diferença entre medianas de -0.4167. No estudo de citocinas, VEGF-A (p<0,0001) com diferença entre medianas de 60,93, enquanto VEGF-D (p=0.0049) com entre medianas de 2,45. Através dos resultados da expressão gênica baseada em FGF-2 e proteica baseada em VEGF-A, foi possível observar que as EMD modularam a resposta tecidual ex-vivo no período de 10 minutos tendo em vista o padrão angiogênico. Essa combinação poderá servir como uma proposta terapêutica, visando a aplicação clínica futura de tecidos comumente descartados após exodontia, como o PDL.
Periodontitis is a chronic inflammatory disease, multifactorial and highly prevalent in the world population that affects the teeth of the supporting tissues, generating sequels difficult to solve even with the most modern regenerative techniques. Tissue therapy appears to be a promising alternative and undifferentiated cells of the periodontal ligament (PDL) have shown great therapeutic potential. However, the PDL needs to appropriate stimuli biomodificatores that differentiation occurs in a coordinated fashion. The enamel matrix proteins (EMP) are a type of biomodificator that promotes new cementum formation. Despite being used clinically, its association with PDL fresh cells has not yet been explored. This is a study of gene and protein expression of PDL with reuse purpose of the newly extracted tissue stimulated by EMD, with a view to periodontal regeneration. The results show VEGF gene expression (p = 0.5194) difference in median -001 and FGF-2 (p = 0.0059) difference in medians of -0.4167. In the study of cytokines, VEGF-A (p <0.0001) with the difference between medians of 60.93, whereas VEGF-D (p = 0.0049) with from 2.45 medians. Through the results of the FGF-2-based gene expression and protein-based VEGF-A, it was observed that the EMD modulated the tissue response ex vivo in the 10-minute period considertingthe standard angiogenic. This combination may serve as a therapeutic approach aimed at future clinical application of tissues commonly discarded after extraction, such as the PDL.

Experimental grade III furcation defects were developed bilaterally at the second and fourth premolars in 18 conditioned, laboratory-source, adult Beagles and maintained for 12 weeks. All defects were treated with debridement and mucoperiosteal flap repositioning alone, or with the addition of autologous fibrinogen, Resolut® barrier membrane, or autologous fibrinogen and Resolut® barrier membrane. The defects were analyzed by digital subtraction radiography, histopathologic, and histomorphometric analysis of healing at 1, 3, and 6 months post-treatment to determine: percent increase in defect bone volume, height and area, and length of periodontal regeneration along the perimeter of the defect. Comparisons at post-treatment intervals indicated significantly (P < 0.05) greater healing of debridement and autologous fibrinogen treated defects at 3 months, however by 6 months there were no significant differences in defect healing for all histomorphometric parameters. Defects receiving Resolut® were associated with significantly less root ankylosis. Defects receiving debridement alone had significantly greater increases in bone volume, as calculated with digital subtraction radiography, at 6 months post-treatment compared with groups receiving Resolut®. There was a significant correlation between regenerated bone area, bone volume, and periodontal regeneration for all treatments at 3 and 6 months post-treatment. In this study autologous fibrinogen and Resolut® barrier membrane did not enhance the amount of periodontal healing compared with debridement only. However, Resolut® treated defects were essentially absent of root ankylosis. Therefore, canine periodontitis causing grade III furcation involvement may respond equally well to conservative periodontal surgery compared with guided tissue regenerative techniques. However, the prevention of root ankylosis may provide a substantial benefit favoring this latter methodology.
Master of Science

Orientador: Álvaro Francisco Bosco
Banca: Maria José Hitomi Nagata
Banca: Valdir Gouveia Garcia
Banca: Mário Taba Júnior
Banca: Marcio Zaffalon Casati
Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar histológica e histometricamente a cicatrização de defeitos de deiscência periodontal associados ao aplainamento radicular tratados com enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETC) ou Membrana Bioabsorvível (MB), cada qual comparado ao tratamento com Retalho Posicionado Coronal (RPC). Foram utilizados 12 cães, divididos em dois grupos de 6. Defeitos de deiscência óssea (6x8 mm) e o aplainamento radicular foram realizados nos caninos superiores e os grupos divididos, seguindo um modelo de boca dividida de acordo com o tratamento. Os caninos esquerdos serviram como controle (RPC), onde o retalho foi somente posicionado coronalmente. Os caninos direitos receberam os tratamentos com ETC ou MB. Após 3 meses pósoperatórios os animais foram submetidos à eutanásia e os blocos processados para análise histológica e histométrica. Os parâmetros histométricos avaliados incluíram extensão de tecido epitelial (TE), extensão da nova inserção de tecido conjuntivo (NITC) e extensão da aposição de tecido conjuntivo (ATC), extensão de novo cemento (NC) e extensão de novo osso (NO). Histologicamente, o grupo MB mostrou significativamente maiores NC, NO e NITC (4.12±1.24; 2.44±0.78; 1.80±0.39, respectivamente) em comparação ao grupo RPC (1.04±0.43; 0.93±0.23; 0.71±0.45, respectivamente) (P<0.05) e significativamente menor ATC (0.29±0.33) comparado aos grupos RPC (2.79±1.74) e ETC (2.62±1.52) (P<0.05). A NITC no grupo ETC (0.71±0.36) foi significativamente menor, enquanto a ATC (2.62±1.52) e TE (1.70±0.53) foram significativamente maiores comparado ao grupo MB (1.80±0.39; 0.29±0.33; 1.00±0.35, respectivamente) (P<0.05). Dentro dos limites deste estudo, concluiuse que o grupo MB mostrou melhores resultados histológicos de nova inserção de tecido conjuntivo, formação de novo osso e novo cemento em relação aos grupos RPC e ETC.
Abstract: The aim of the present study was to evaluate histologically and histometrically the healing of periodontal dehiscence defects associated to root planing treated with subepithelial connective tissue graft (CTG) or Bioabsorbable Membrane (BM), each one compared to the treatment with Coronally Positioned Flap (CPF). Twelve dogs were used, divided into two groups of six elements. Bone dehiscence defects (6x8 mm) and root planing were accomplished in the upper canine and the groups were divided, following a model of divided mouth according to the treatment used. Left canine were used as control (CPF), where the flap was only coronally positioned. Right canine received treatments with CTG or BM. After three postoperative months, the animals were euthanized and the blocks were processed for histological and histometrical analysis. The evaluated histometric parameters included lenght of epithelial tissue (TE), new attachment (NACT) and connective tissue aposition (CTA), new cementum (NC), and new bone (NB). Histologically, group BM showed significant higher values of NC, NO and NITC (4.12±1.24; 2.44±0.78; 1.80±0.39, respectively) in comparison to the group CPF (1.04±0.43; 0.93±0.23; 0.71±0.45, respectively) (P<0.05) and significant lower values of ATC (0.29±0.33) in comparison to the groups CPF (2.79±1.74) and CTG (2.62±1.52) (P<0.05). NITC in group CTG (0.71±0.36) was significantly lower, while ATC (2.62±1.52) and TE (1.70±0.53) were significantly higher in comparison to group BM (1.80±0.39; 0.29±0.33; 1.00±0.35, respectively) (P<0.05). Within the limits of this study, it can be concluded that group BM showed better histological results of connective tissue new attachment, new bone and new cementum formation in comparison to groups CPF and CTG.
Doutor

Orientador: Maria José Hitomi Nagata
Banca: Álvaro Francisco Bosco
Banca: Sonia Regina Panzarini Barioni
Resumo: Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães.
Abstract: This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs.
Mestre

Orientador: Ricardo Samih Georges Abi Rached
Banca: Silvana Regina Perez Orrico
Banca: Regina Maria Barretto Cicarelli
Banca: Francisco Humberto Nociti Junior
Banca: Márcio Zafallon Casati
Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGF- beta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-b pelo teste ELISA empregando a técnica "sandwich". Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-b atuaram de maneira dose-dependente no estímulo à proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs e redução para as metalproteases e modulação da síntese deles próprios.
Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-ß was verificated by ELISA method, using a "sandwich" techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-ß influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis.
Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-31Bitstream added on 2014-06-13T20:05:23Z : No. of bitstreams: 1 martins_tm_dr_araca.pdf: 622083 bytes, checksum: b164d76ff1eb9d604ddcefbda1146d1a (MD5)
O objetivo do presente estudo foi avaliar histológica e histometricamente a cicatrização de defeitos de deiscência periodontal associados ao aplainamento radicular tratados com enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (ETC) ou Membrana Bioabsorvível (MB), cada qual comparado ao tratamento com Retalho Posicionado Coronal (RPC). Foram utilizados 12 cães, divididos em dois grupos de 6. Defeitos de deiscência óssea (6x8 mm) e o aplainamento radicular foram realizados nos caninos superiores e os grupos divididos, seguindo um modelo de boca dividida de acordo com o tratamento. Os caninos esquerdos serviram como controle (RPC), onde o retalho foi somente posicionado coronalmente. Os caninos direitos receberam os tratamentos com ETC ou MB. Após 3 meses pósoperatórios os animais foram submetidos à eutanásia e os blocos processados para análise histológica e histométrica. Os parâmetros histométricos avaliados incluíram extensão de tecido epitelial (TE), extensão da nova inserção de tecido conjuntivo (NITC) e extensão da aposição de tecido conjuntivo (ATC), extensão de novo cemento (NC) e extensão de novo osso (NO). Histologicamente, o grupo MB mostrou significativamente maiores NC, NO e NITC (4.12±1.24; 2.44±0.78; 1.80±0.39, respectivamente) em comparação ao grupo RPC (1.04±0.43; 0.93±0.23; 0.71±0.45, respectivamente) (P<0.05) e significativamente menor ATC (0.29±0.33) comparado aos grupos RPC (2.79±1.74) e ETC (2.62±1.52) (P<0.05). A NITC no grupo ETC (0.71±0.36) foi significativamente menor, enquanto a ATC (2.62±1.52) e TE (1.70±0.53) foram significativamente maiores comparado ao grupo MB (1.80±0.39; 0.29±0.33; 1.00±0.35, respectivamente) (P<0.05). Dentro dos limites deste estudo, concluiuse que o grupo MB mostrou melhores resultados histológicos de nova inserção de tecido conjuntivo, formação de novo osso e novo cemento em relação aos grupos RPC e ETC.
The aim of the present study was to evaluate histologically and histometrically the healing of periodontal dehiscence defects associated to root planing treated with subepithelial connective tissue graft (CTG) or Bioabsorbable Membrane (BM), each one compared to the treatment with Coronally Positioned Flap (CPF). Twelve dogs were used, divided into two groups of six elements. Bone dehiscence defects (6x8 mm) and root planing were accomplished in the upper canine and the groups were divided, following a model of divided mouth according to the treatment used. Left canine were used as control (CPF), where the flap was only coronally positioned. Right canine received treatments with CTG or BM. After three postoperative months, the animals were euthanized and the blocks were processed for histological and histometrical analysis. The evaluated histometric parameters included lenght of epithelial tissue (TE), new attachment (NACT) and connective tissue aposition (CTA), new cementum (NC), and new bone (NB). Histologically, group BM showed significant higher values of NC, NO and NITC (4.12±1.24; 2.44±0.78; 1.80±0.39, respectively) in comparison to the group CPF (1.04±0.43; 0.93±0.23; 0.71±0.45, respectively) (P<0.05) and significant lower values of ATC (0.29±0.33) in comparison to the groups CPF (2.79±1.74) and CTG (2.62±1.52) (P<0.05). NITC in group CTG (0.71±0.36) was significantly lower, while ATC (2.62±1.52) and TE (1.70±0.53) were significantly higher in comparison to group BM (1.80±0.39; 0.29±0.33; 1.00±0.35, respectively) (P<0.05). Within the limits of this study, it can be concluded that group BM showed better histological results of connective tissue new attachment, new bone and new cementum formation in comparison to groups CPF and CTG.

Introdução: As periodontites agressivas (PAg) compõem um grupo de formas rapidamente progressivas da doença periodontal. A restauração do periodonto é um objetivo da terapia periodontal, sendo a regeneração tecidual guiada (RTG) e o uso de substitutos ósseos técnicas bem documentadas. Em pesquisas recentes, foi demonstrado o envolvimento de uma cadeia de 15 aminoácidos do colágeno (P-15) na diferenciação celular de fibroblastos e osteoblastos. A associação de matriz óssea inorgânica bovina com o P-15 (MOI/P-15) tem apresentado bons resultados. O objetivo dessa pesquisa foi avaliar a eficácia da MOI/P-15 no tratamento de defeitos periodontais infra-ósseos em pacientes com periodontite agressiva, tendo como controle o uso de membrana de PTFEe com reforço de titânio Metodologia: Foram selecionados 15 pacientes com PAg, com pelo menos dois defeitos periodontais infra-ósseos (profundidade de sondagem (PS)≥4mm e componente infra-ósseo≥3mm). Foi adotado o modelo boca dividida, sendo realizadas cirurgias regenerativas com MOI/P-15 (GT) de um lado e membrana de PTFEe (GC) do outro. As medidas clínicas de PS, nível de inserção relativo (NIR) e recessão gengival (RG) foram registradas no exame inicial e após 6 meses. Exames radiográficos padronizados foram feitos no exame inicial e após 3 e 6 meses e radiografias de subtração foram realizadas. Medidas lineares e de área foram registradas. Foram colhidas amostras do fluido gengival antes da cirurgia e aos 3 e 6 meses pós-operatórios e a presença de interleucina 1 beta (IL-1β) e interleucina 6 (IL-6) foi quantificada através de ensaio imunoenzimático. Resultados: Houve redução significativa na PS, de 2,27±0,96 mm (P<0,001) para o GT e de 2,57±1,06 mm para o GC (P<0,001); aumento significativo no NIR, de 1,87±0,94 mm (P<0,001) para o GT e 2,09±0,88 mm (P<0,001) para o GC; e aumento significativo na RG, de 0,58±0,29 mm (P<0,001) para GT e 0,64±0,47 mm (P<0,001) para o GC. Não foram observadas diferenças estatisticamente significantes entre os grupos em nenhum dos parâmetros, tanto no exame inicial quanto após 6 meses. Na análise radiográfica, as radiografias de subtração apresentaram ganho médio de área radiopaca em relação ao defeito inicial de 93,16% para o GT, contra 62,03% para o GC. O preenchimento radiográfico do defeito foi maior (P=0,002). para GT (2,49 mm) que para GC (0.,73 mm). Houve um aumento progressivo da densidade radiográfica para ambos os grupos, sem diferenças estatisticamente significantes. Na análise das citocinas, não foram observadas diferenças estatisticamente significantes nas comparações intra e entre os grupos. Conclusão: No tratamento de defeitos infra-ósseos em pacientes com PAg-G, em um período de 6 meses, não foram observadas diferenças significantes entre as duas modalidades terapêuticas avaliadas (MOI/P-15 e RTG) quanto aos parâmetros clínicos e quantificação de citocinas. GT apresentou preenchimento radiográfico do defeito superior ao apresentado por GC.
Background: Intrabony periodontal defects present a particular treatment problem, especially in patients with Generalized Aggressive Periodontitis (G-AgP).Researches have been performed in order to improve the results of regenerative procedures. Material and Methods: The aim of this study was to compare outcomes of intrabony periodontal defects following treatment with anorganic bone matrix/cell binding peptide (ABM/P-15) to guided tissue regeneration (GTR) in patients with GAgP. Fifteen patients, with two infrabony defects ≥3 mm deep, were selected for the present study. Patients were allocated randomly to be treated with ABM/P-15 or GTR. At baseline and at 6 months after surgery, clinical and radiographic parameters and IL-1β and IL-6 gingival fluid concentrations were recorded. Results: There was a significant PD reduction (P<0.001) for both groups (2.27±0.96 mm for ABM/P-15 group and 2.57±1.06 mm for GTR group) A CAL gain (1.87±0.94 mm for ABM/P-15 group and 2.09±0.88 mm for GTR group) was observed. In between-group comparisons, there were no statistical significant differences in clinical parameters. The radiographic bone fill was more expressive in ABM/P-15 group (2.49 mm) than in GTR group (0.73 mm). In subtraction radiographs, the areas representing gain in density were 93.16% of the baseline defect for ABM/P-15 group versus 62.03% in GRT group. There were no statiscally significant differences in between and intra-group comparison with regard to IL-1β and IL-6 quantification. Conclusion: Treatment of infrabony periodontal defects in patients with G-AgP with ABM/P-15 and GTR significantly improved clinical outcomes. The use of ABM/P-15 promoted a better radiographic bone fill.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-06-06Bitstream added on 2014-06-13T19:23:26Z : No. of bitstreams: 1 ruiz_kgs_dr_arafo.pdf: 357284 bytes, checksum: 93541a495590ca3b701f6cf9ef876131 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da combinação do fator de crescimento de fibroblastos básico (b-FGF) e fator de transformação de crescimento beta (TGF- beta) na proliferação, expressão de genes para colágeno tipos I e III, metaloproteases -1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, e na síntese destes próprios fatores de crescimento pelas células do ligamento periodontal de humanos. A avaliação da proliferação celular foi realizada após os períodos de 24 e 48h na presença dos fatores de crescimento, através da mensuração do nível de MTS reduzido a formazan pelas células viáveis, e a síntese de b-FGF e TGF-b pelo teste ELISA empregando a técnica sandwich. Conclui-se que as associações do bFGF e do TGF-b atuaram de maneira dose-dependente no estímulo à proliferação celular, o aumento na expressão de genes para colágeno e TIMPs e redução para as metalproteases e modulação da síntese deles próprios.
The aim of this study was to evaluate the effect of association of basic fibroblast growth factor and transforming growth factor beta on the proliferation, expression of colagen type I e III, matrix metalloproteinases-1 e -2 e TIMPs 1, 2 e 3, and on the modulation of the syntheses oh these growth factors by humans periodontal ligament cells. The cellular proliferation was evaluated to 24 and 48 hours of incubation by the colorimetric method. The synthese of bFGF and TGF-ß was verificated by ELISA method, using a sandwich techinique, and mRNA expression by Real Time - PCR. In conlusion, the associations of bFGF e TGF-ß influenced of dose-dependent manner on the cellular proliferation, on the increasing of the expression to collagen and TIMPs, and on the reduction to metaloproteinases and, the modulation of these own synthesis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-27Bitstream added on 2014-06-13T19:57:15Z : No. of bitstreams: 1 esper_la_me_araca.pdf: 415604 bytes, checksum: 36bcb3441620df6465aef668552a719f (MD5)
Este estudo avaliou histomorfometricamente o processo de cicatrização em defeitos de fenestração periodontal, criados cirurgicamente em cães e tratados com Plasma Rico em Plaquetas (PRP) associado ou não ao uso de barreira de membrana. Defeitos de fenestração periodontal com 5 mm de diâmetro foram cirurgicamente criados nos caninos superiores de 12 cães. Os dentes foram divididos em 4 grupos: C (controle) - defeito preenchido somente com coágulo sangüíneo; M - defeito preenchido com coágulo sangüíneo e protegido com uma membrana de politetrafluoretileno expandido (PTFE-e) com reforço de titânio; PRP - defeito preenchido com PRP; PRP/M - defeito preenchido com PRP e protegido com uma membrana de PTFE-e com reforço de titânio. Os animais foram eutanasiados após 4 semanas. Medidas lineares e de área da cicatrização periodontal foram avaliadas e calculadas como porcentagem do defeito original. Os dados foram submetidos à análise estatística (análise de variância, p < 0,05). Nenhum espécime regenerou-se completamente com osso ou cemento. Formação de novo cemento foi significativamente maior nos Grupos PRP e PRP/M quando comparados ao Grupo C. Observou-se, também, significativa maior formação de novo cemento no Grupo PRP/M que no Grupo M. Dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que o PRP favoreceu a formação de novo cemento. A Regeneração Tecidual Guiada (RTG) não proporcionou efeitos adicionais ao uso do PRP no tratamento de defeitos de fenestração periodontal em cães.
This study histomorphometrically analyzed the healing of periodontal fenestration defects surgically created in dogs and treated with Platelet-Rich Plasma (PRP) with or without a barrier membrane. A 5 mm diameter periodontal fenestration defect was made in each upper canine of 12 dogs. The teeth were divided into 4 groups: C (control) - defect filled with blood clot only; M - defect filled with blood clot and covered by a titanium-reinforced expanded polytetrafluoroethylene membrane (ePTFE); PRP - defect filled with PRP; PRP/M - defect filled with PRP and covered by a titanium-reinforced ePTFE. All animals were euthanized at 4 weeks post-operative. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Data were statistically analyzed (analysis of variance, p < 0.05). No defect completely regenerated with either bone or cementum. Cementum formation was significantly greater in groups PRP and PRP/M when both groups were compared to Group C. A significant greater cementum formation was also observed in Group PRP/M than in Group M. Within the limits of this study, it can be concluded that the PRP favored cementum formation. Guided Tissue Regeneration (GTR) did not promote any additional benefit to the use of PRP in the treatment of periodontal fenestration defects in dogs.

Periodontal diseases are chronic inflammatory conditions affecting the supporting tissues of teeth caused by the prolonged accumulation of micro-organisms in the biofilm that forms on tooth surfaces. Conventional non-surgical and surgical treatments aim to halt disease progression and repair the lost periodontal tissues. Surgical therapies such as open flap debridement are aimed to replace the lost alveolar bone and guided tissue regeneration (GTR) is also used to treat this disease. Whilst the regeneration of lost support is an aim of periodontal treatment, the outcomes of current approaches to periodontal regeneration (PR) are unpredictable. Consequently, significant laboratory and clinical research has been undertaken to explore the possibilities of improving the outcomes of treatment over the past few decades. In this respect chitosan (CH), a well-known biopolymer holds promise to be fabricated in various forms. The aim of the project was to fabricate a trilayered functionally graded GTR membrane by fabricating surface and core layers of non-porous and porous morphologies with complete physiochemical and biological characterisation. Solvent Casting, Freeze gelation (FG) and Electrospinning was performed on CH alone and in combination with Hydroxyapatite (HA). Membranes were characterized with Scanning electron Microscopy, Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), tensile testing, long term degradation and swelling studies were also performed. Cell culturing was performed using human osteosarcoma and progenitor cell line. Sirius red and Alizarin red assays were conducted to assess matrix deposition. Amongst the non-porous membranes fabricated by solvent casting, with Low molecular weight (LMw) CH:HA ratio of 30:70 showed better biocompatibility, and amongst the porous membranes made up of FG, ASa (ascorbic acid) :CH:HA (50:50) showed better stability and biocompatibility after in-vitro analysis. Histology of FG membranes conducted after in-vivo studies showed ASa:CH:HA to have higher cellular infiltration after 30 days of implantation. Electrospun fibres obtained in both aligned and random orientations were conducive to cellular attachment and mineralized matrix deposition with time. FTIR analysis showed strong co-ordination bond formation in between CH and HA. HA incorporated samples treated with simulated body fluid (SBF) showed an embryonic layer formation of hydroxyl carbonated apatite. Membranes can be combined together in different ways to achieve structural and functionally graded structures. A template was prepared using solvent casting and freeze gelation techniques to achieve functional gradients. Furthermore; CH and HA composite membranes could possibly be used for GTR applications in periodontal lesions and in addition these techniques could be further tuned to achieve desirable characteristics of a GTR membrane for PR and also holds promise to be used in other biomedical applications.

Periodontal diseases are chronic inflammatory conditions affecting the supporting tissues of teeth caused by the prolonged accumulation of micro-organisms in the biofilm that forms on tooth surfaces. Conventional non-surgical and surgical treatments aim to halt disease progression and repair the lost periodontal tissues. Surgical therapies such as open flap debridement are aimed to replace the lost alveolar bone and guided tissue regeneration (GTR) is also used to treat this disease. Whilst the regeneration of lost support is an aim of periodontal treatment, the outcomes of current approaches to periodontal regeneration (PR) are unpredictable. Consequently, significant laboratory and clinical research has been undertaken to explore the possibilities of improving the outcomes of treatment over the past few decades. In this respect chitosan (CH), a well-known biopolymer holds promise to be fabricated in various forms. The aim of the project was to fabricate a trilayered functionally graded GTR membrane by fabricating surface and core layers of non-porous and porous morphologies with complete physiochemical and biological characterisation. Solvent Casting, Freeze gelation (FG) and Electrospinning was performed on CH alone and in combination with Hydroxyapatite (HA). Membranes were characterized with Scanning electron Microscopy,Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR), tensile testing, long term degradation and swelling studies were also performed. Cell culturing was performed using human osteosarcoma and progenitor cell line. Sirius red and Alizarin red assays were conducted to assess matrix deposition. Amongst the non-porous membranes fabricated by solvent casting, with Low molecular weight (LMw) CH:HA ratio of 30:70 showed better biocompatibility, and amongst the porous membranes made up of FG, ASa (ascorbic acid) :CH:HA (50:50) showed better stability and biocompatibility after in-vitro analysis. Histology of FG membranes conducted after in-vivo studies showed ASa:CH:HA to have higher cellular infiltration after 30 days of implantation. Electrospun fibres obtained in both aligned and random orientations were conducive to cellular attachment and mineralized matrix deposition with time. FTIR analysis showed strong co-ordination bond formation in between CH and HA. HA incorporated samples treated with simulated body fluid (SBF) showed an embryonic layer formation of hydroxyl carbonated apatite. Membranes can be combined together in different ways to achieve structural and functionally graded structures. A template was prepared using solvent casting and freeze gelation techniques to achieve functional gradients. Furthermore; CH and HA composite membranes could possibly be used for GTR applications in periodontal lesions and in addition these techniques could be further tuned to achieve desirable characteristics of a GTR membrane for PR and also holds promise to be used in other biomedical applications.

Orientador: Eliana Aparecida de Resende Duek
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecanica
Made available in DSpace on 2018-08-10T00:47:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_LucasAlves_M.pdf: 3634046 bytes, checksum: 536a898e97f786f07e4ccf738d9d67e5 (MD5) Previous issue date: 2007
Resumo: A regeneração tecidual guiada (RTG) é uma técnica utilizada na Periodontia para permitir a neoformação de um novo aparato de inserção periodontal do dente (osso alveolar, ligamento periodontal e cemento). Na Periodontia, a utilização de polímeros biorreabsorvíveis vem ganhando confiabilidade e importância devido a não necessidade de uma segunda intervenção cirúrgica para remover a membrana, porém poucas membranas atendem a todos os critérios da RTG, que são biocompatibilidade, exclusão celular, manutenção do espaço a ser regenerado, integração à atividade tecidual, facilidade de utilização e atividade biológica. Um polímero biorreabsorvível muito estudado é o poli (L-ácido láctico) (PLLA), porém ele é polímero semicristalino muito rígido e com longo período de degradação, contudo ao se adicionar em sua composição um plastificante, o tri-etil-citrato, a membrana resultante seria mais flexível, microporosa e teria seu tempo de degradação reduzido. Esta pesquisa avaliou, através de estudo in vivo, a resposta inflamatória e a manutenção de um espaço vital para a regeneração óssea sob membranas de PLLA/tri-etil-citrato, em três diferentes proporções polímero/plastificante, implantadas na calota craniana de coelhos, analisando, assim, a capacidade destas membranas em se adaptar aos critérios da RTG periodontal. Paralelamente ao estudo in vivo, foram realizados estudos da degradação in vitro, com ensaios mecânicos de tração, de microscopia eletrônica de varredura e de calorimetria diferencial de varredura (DSC). Notou-se que as membranas de concentração PLLA/tri-etil-citrato de 85/15 apresentaram características mais adequadas para a RTG periodontal tanto no estudo in vivo quanto no in vitro
Abstract: Guided tissue regeneration (GTR) is a technique used in the periodontal practice to allow the neoformation of a new apparatus of teeth periodontal attachment (alveolar bone, periodontal ligament and cementum). In Periodontology, the use of bioresorbable polymers is gaining trustworthiness and importance due the non required second surgical intervention to remove the membrane, however few membranes fit in all GTR criteria, which are biocompatibility, cellular exclusion, space maintainer, integration to tissue activity, easy usage and biological activity. A bioresorbable polymer very studied is poly(L-lactic acid) (PLLA), however it is a very rigid semicrystalline polymer and with a long degradation period, but by adding in its composition a plasticizer, the tri-ethyl-citrate, the resultant membrane would be more flexible, microporous and would have its degradation time reduced. This research evaluated, through in vivo study, the inflammatory response and the maintenance of a vital space for bone regeneration under PLLA/tri-ethyl-citrate membranes, in three different polymer/plasticizer proportions, implanted in rabbits calvarial bone, analyzing, thus, the capacity of these membranes in adapting to the criteria of periodontal GTR. Simultaneously to this study, it had been carried out studies of in vitro degradation, with mechanical testing, scanning electronic microscopy and differential scanning calorimetry (DSC). It was observed, that the highest concentration membranes PLLA/tri-ethyl-citrate (85/15) showed themselves more adequate characteristics for the periodontal GTR on in vivo study as well on in vitro
Mestrado
Materiais e Processos de Fabricação
Mestre em Engenharia Mecânica

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-02-09Bitstream added on 2014-06-13T20:36:53Z : No. of bitstreams: 1 silva_vc_me_arafo.pdf: 1730174 bytes, checksum: ce33d44b50196aca4d9f0d95f23a7f81 (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
Este trabalho teve como objetivo determinar as reações teciduais em lesões de furca Grau II em 2ºs pré-molares de cães após tratamento com matriz mineral óssea bovina e membrana absorvível e movimentação ortodôntica de translação para mesial. Foram criadas lesões de furca Grau II nos 2º pré-molares superiores de 4 cães, totalizando 8 lesões. Após 75 dias, estas foram tratadas pela técnica de Regeneração Tecidual Guiada com membrana absorvível associada ao preenchimento com matriz mineral óssea bovina. Deu-se início ao controle de placa com gel de clorexidina 0,2% 5 vezes por semana até o final do estudo. Após 2 meses do tratamento, os 2ºs pré-molares foram divididos aleatoriamente em dois grupos (teste e controle) e foi instalado aparelho ortodôntico em ambos os lados, sendo os 3ºs pré-molares e caninos superiores usados como ancoragem. No lado teste a movimentação ortodôntica foi realizada durante 3 meses. Os animais foram sacrificados, e os 2ºs pré-molares removidos em bloco e processados para análise histológica. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos em relação a área total de preenchimento ósseo, de biomaterial e extensão linear de regeneração periodontal na superfície radicular. Porém, houve uma tendência do grupo teste apresentar maior quantidade óssea e menor quantidade de biomaterial, além de deslocamento do biomaterial para o lado de pressão na região de furca, no grupo teste.
The aim of this study was to establish the tissue reactions on Degree II furcation lesions in the 2nd premolars of dogs after treatment with bovine osseous mineral source, absorbable membrane and orthodontic movement of translation to mesial and also evaluate the effect of movement on the grafting material used. It was produced Degree II furcation lesions in upper second premolars of 4 dogs, resulting in 8 lesions. After75 days, they were treated by the method of Guided Tissue Regeneration with absorbable membrane associated with bovine osseous mineral source. The plaque control was started with 0,2% chlorhexidine gel, 5 times a week until the end of the study. After 2 months of treatment, the second premolars were randomly divided in two groups (test and control) and it was installed orthodontic appliance in both sides, using the third premolars and upper canine as anchorage. The orthodontic movement was achieved only in the test side, during 3 months. The animals were sacrificed and the second premolars were removed in block and processed for histological analysis. There weren't any differences that were statistically significant among the groups with relation to the total area of osseous filling, biomaterial and linear periodontal regeneration. However, there was a trend of the group to present more osseous amount and less biomaterial amount, besides the dislocation of the biomaterial for the furcation pressure side. The orthodontic movement could be done without intercurrences. Key- words: Periodontics; Guided tissue regeneration; Biocompatible materials; Orthodontic.

O princípio da regeneração tecidual guiada (RTG) baseia-se na utilização de membranas biocompatíveis com a finalidade de impedir a migração dos tecidos conjuntivo e epitelial para a ferida, permitindo que células do ligamento periodontal repovoem a superfície radicular e regenerem o aparato de inserção do dente. A RTG tem sido utilizada em diversas situações clínicas para facilitar o reparo de defeitos ósseos e periodontais, sendo as membranas de politetrafluoretileno expandido (e-PTFE) as mais utilizadas. O objetivo deste estudo foi avaliar a biocompatibilidade in vitro de uma nova membrana do compósito de poli(vinilideno-trifluoretileno)/titanato de bário (P(VDF-TrFE)/BT). Para isso, osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos, células com as quais a membrana entrará em contato durante o processo de RTG, foram cultivados sobre membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE (controle). Os seguintes parâmetros foram avaliados: 1) adesão celular por contagem em hemocitômetro; 2) proliferação celular por MTT e 3) adesão e morfologia celular por fluorescência, para as linhagens osteoblástica, fibroblástica e de queratinócitos; 1) medida do conteúdo de proteína total; 2) medida da atividade de fosfatase alcalina (ALP) e 3) formação de matriz mineralizada, para as linhagens osteoblástica e fibroblástica; 1) imunolocalização de ALP por fluorescência; 2) detecção histoquímica in situ da atividade de ALP e 3) expressão dos genes Runx2, Colágeno I (COL I), Ostepontina (OPN), ALP, Sialoproteína óssea (BSP), Osteocalcina (OC), Bax, Bcl-2 e Survivina (SUR) por PCR em tempo real, para a linhagem osteoblástica; 1) expressão dos genes Periostin (PRT), Periodontal Ligament Specific 17 (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulina (FBM), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem fibroblástica e 1) expressão dos genes Involucrina (IVL), Queratina 1 (QRT-1), Queratina 10 (QRT-10), Queratina 14 (QRT-14), Bax, Bcl-2 e SUR por PCR em tempo real, para a linhagem de queratinócitos. Os dados quantitativos foram submetidos ao teste estatístico Mann-Whitney (nível de significância: 5%). A adesão de células osteoblásticas foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de células osteoblásticas foi maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1, 7 e 10 dias (p<0,05). A epifluorescência indicou que as células osteoblásticas estavam aderidas e mais espraiadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 4 e 24 h. A imunofluorescência revelou presença de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias. O conteúdo de proteína total foi semelhante entre as duas membranas em 10 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve diferença estatisticamente significante para atividade de ALP em 7 dias (p>0,05), entretanto em 10 e 14 dias (p<0,05) a atividade de ALP foi maior em culturas sobre o P(VDFTrFE)/ BT. A detecção histoquímica in situ revelou atividade de ALP apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT, tanto aos 7 quanto aos 14 dias. A formação de matriz mineralizada ocorreu apenas em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. A expressão dos genes Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax e SUR foi maior em células cultivadas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). Não houve expressão de Bcl-2 em culturas sobre as duas membranas. A adesão de células fibroblásticas foi semelhante entre P(VDFTrFE)/ BT e PTFE em 30 min (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 2 e 4 h (p<0,05). A proliferação de células fibroblásticas foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 3 dias (p>0,05) e maior em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 1 e 7 dias (p<0,05). Os ensaios de fluorescência direta revelaram que as células fibroblásticas estavam aderidas sobre as duas membranas, porém em estágios mais avançados de espraiamento sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 30 min, 2 e 4 h. O conteúdo de proteína total foi maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 10, 14 e 21 dias (p<0,05). Não se observou atividade de ALP em culturas fibroblásticas sobre as membranas de P(VDF-TrFE)/BT e PTFE aos 7 dias. Contudo, em 14 dias (p>0,05) a atividade de ALP foi semelhante entre as duas membranas e em 21 dias (p<0,05) foi estatisticamente significante em culturas crescidas sobre o P(VDF-TrFE)/BT. Aos 21 dias não se notou formação de matriz mineralizada em ambas as membranas. A expressão dos genes PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax e SUR foi maior em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em células fibroblásticas cultivadas sobre o PTFE em 7 e 14 dias (p<0,05). A adesão de queratinócitos foi semelhante entre P(VDF-TrFE)/BT e PTFE em 30 min, 2 e 4 h (p>0,05). A proliferação de queratinócitos foi estatisticamente semelhante entre as duas membranas em 4, 7, 10 e 14 dias (p>0,05) e maior sobre culturas crescidas sobre P(VDF-TrFE)/BT em 1, 17 e 21 dias (p<0,05). Por fluorescência direta notou-se que células cultivadas sobre ambas as membranas exibiam morfologia predominantemente arredondada em 30 min, 4 e 24 h. A expressão do gene IVL foi semelhante em culturas crescidas sobre as duas membranas em 7 dias (p>0,05) e maior sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 14 dias (p<0,05). Os genes QRT-1, QRT -10 e QRT -14, Bax e SUR estavam mais expressos em culturas sobre o P(VDF-TrFE)/BT em 7 e 14 dias (p<0,05). A expressão de Bcl-2 foi maior em queratinócitos crescidos sobre o PTFE em 7 dias (p<0,05) e semelhante entre as duas membranas em 14 dias (p>0,05). Por favorecer eventos relacionados ao desenvolvimento tecidual, como a adesão, proliferação e diferenciação celular, a membrana de P(VDF-TrFE)/BT pode representar uma boa alternativa ao PTFE para procedimentos de RTG.
The principle of guided tissue regeneration (GTR) is based on the use of physical barrier to isolate periodontal defects of the gingival connective and epithelial tissues so that bone, periodontal ligament, and cementum can be regenerated from their own cells. RTG procedure has been used in many clinical situations to promote bone and periodontal regeneration. Membranes of expanded polytetrafluoroethylene (e-PTFE) are the most commonly used material for GTR. However, several membranes have been tested to be applied in GTR. The purpose of this study was to evaluate the in vitro biocompatibility of the membrane of poly(vinylidene-trifluoroethylene/barium titanate (P(VDF-TrFE)/BT) composite. For that, osteoblasts, fibroblasts and keratinocytes, cells that will interact with the membrane during RTG, were culture P(VDF-TrFE)/BT and PTFE (control) membranes for up to 21 days. The following parameters were evaluated: 1) cell adhesion by counting in hemocytometer, 2) cell proliferation and 3) cell morphology by fluorescent labeling, for osteoblastic, fibroblastic and keratinocyte lineages; 1) total protein content; 2) alkaline phosphatase (ALP) activity and 3) mineralized bone-like nodule formation, for osteblastic and fibroblastic lineages; 1) immunolocalization of ALP by fluorescent labeling; 2) histochemistry detection in situ of ALP activity and 3) gene expression of Runx2, Collagen I (COL I), Ostepontin (OPN), ALP, Bone Sialoprotein (BSP), Osteocalcin (OC), Bax, Bcl-2 and Survivin (SUR) by real-time PCR, for osteoblastic lineage; 1) gene expression of Periostin (PRT), Periodontal ligament specific (PDLs17), Calcium-binding protein (S100A4), Fibromodulin (FBM), Bax, Bcl-2 and SUR by real-time PCR, for fibroblastic lineage; 1) gene expression of Involucrin (IVL), Keratin-1 (QRT-1), Keratin-10 (QRT-10), Keratin-14 (QRT- 14), Bax, Bcl-2 and SUR days by real-time PCR, for keratinocyte lineage. Data were submitted to Mann-Whitney test (level of significance: 5%). The adhesion of osteoblastic cells was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Cell proliferation was higher in ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 7 and 10 days (p<0.05). Epifluorescence showed that osteoblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Immunofluorescence revealed the presence of ALP only in osteogenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days. Total protein content was similar between the membranes at 10 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no differences in ALP activity at 7 days (p>0.05). However, ALP activity was higher in osteogenic cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 10 and 14 days (p<0.05). The histochemistry reveals that only ostegenic cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT had ALP activity in situ at 7 and 14 days. Bone-like nodule formation occurred only in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 21 days. Gene expression of Runx2, COL I, OPN, ALP, BSP, OC, Bax and SUR was higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). There was no expression of Bcl-2 in cultures on both membranes. The adhesion of fibroblastic cells was similar between P(VDFTrFE)/ BT and PTFE at 30 min (p>0.05) and greater in fibroblastic cultures on P(VDFTrFE)/ BT at 2 and 4 h (p<0.05). Cell proliferation was similar in fibroblastic cultures grown on both membranes at 3 days (p>0.05) and higher in cultures on P(VDF-TrFE)/BT at 1 and 7 days (p<0.05). Epifluorescence showed that fibroblastic cells grown on P(VDF-TrFE)/BT were more adhered and more spread compared to PTFE at 30 min, 4 and 24 h. Total protein content was greater on P(VDF-TrFE)/BT at 10, 14 and 21 days (p<0.05). There was no ALP activity in fibroblastic cultures grown on both membranes at 7 days. The ALP activity was similar between P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 14 day (p>0.05) and higher on P(VDFTrFE)/ BT at 21 days (p<0.05). Bone-like nodule formation was not observed in fibroblastic cultures on both membranes at 21 days. Gene expression of PRT, PDLs17, S100A4, FBM, Bax and SUR was higher in cultures on the P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl- 2 expression was higher in fibroblastic cultures on the PTFE at 7 and 14 days (p<0.05). Keratinocyte adhesion was similar for P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 30 min, 2 and 4 h (p>0.05). Keratinocyte proliferation was statistically similar on both membranes at 4, 7, 10 and 14 days (p>0.05) and higher in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT at 1, 17 and 21 days (p<0.05). Keratinocytes displayed a round morphology and was not observed any evidence of cell spreading at 30 min, 4 and 24 h. The gene expression of IVL was similar in cultures grown on P(VDF-TrFE)/BT and PTFE at 7 days (p>0.05) and higher on the P(VDF-TrFE)/BT at 14 days (p<0.05). Genes expression of QRT-1, QRT-10, QRT-14, Bax and SUR was greater in keratinocytes grown on P(VDF-TrFE)/BT at 7 and 14 days (p<0.05). Bcl-2 expression was higher in keratinocytes cultured on PTFE at 7 days (p<0.05) and similar on both membranes at 14 days (p>0.05). Our study indicates that P(VDF-TrFE)/BT membrane promote events related to tissue development/regeneration, such as cell adhesion, proliferation and differentiation. Thus, the membrane of P(VDF-TrFE)/BT could be used as an advantageous alternative to PTFE in GTR procedures.

Orientador: Joni Augusto Cirelli
Banca: José Eduardo Cezar Sampaio
Banca: Elton Gonçalves Zenóbio
Resumo: Este trabalho teve como objetivo determinar as reações teciduais em lesões de furca Grau II em 2ºs pré-molares de cães após tratamento com matriz mineral óssea bovina e membrana absorvível e movimentação ortodôntica de translação para mesial. Foram criadas lesões de furca Grau II nos 2º pré-molares superiores de 4 cães, totalizando 8 lesões. Após 75 dias, estas foram tratadas pela técnica de Regeneração Tecidual Guiada com membrana absorvível associada ao preenchimento com matriz mineral óssea bovina. Deu-se início ao controle de placa com gel de clorexidina 0,2% 5 vezes por semana até o final do estudo. Após 2 meses do tratamento, os 2ºs pré-molares foram divididos aleatoriamente em dois grupos (teste e controle) e foi instalado aparelho ortodôntico em ambos os lados, sendo os 3ºs pré-molares e caninos superiores usados como ancoragem. No lado teste a movimentação ortodôntica foi realizada durante 3 meses. Os animais foram sacrificados, e os 2ºs pré-molares removidos em bloco e processados para análise histológica. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos em relação a área total de preenchimento ósseo, de biomaterial e extensão linear de regeneração periodontal na superfície radicular. Porém, houve uma tendência do grupo teste apresentar maior quantidade óssea e menor quantidade de biomaterial, além de deslocamento do biomaterial para o lado de pressão na região de furca, no grupo teste.
Abstract: The aim of this study was to establish the tissue reactions on Degree II furcation lesions in the 2nd premolars of dogs after treatment with bovine osseous mineral source, absorbable membrane and orthodontic movement of translation to mesial and also evaluate the effect of movement on the grafting material used. It was produced Degree II furcation lesions in upper second premolars of 4 dogs, resulting in 8 lesions. After75 days, they were treated by the method of Guided Tissue Regeneration with absorbable membrane associated with bovine osseous mineral source. The plaque control was started with 0,2% chlorhexidine gel, 5 times a week until the end of the study. After 2 months of treatment, the second premolars were randomly divided in two groups (test and control) and it was installed orthodontic appliance in both sides, using the third premolars and upper canine as anchorage. The orthodontic movement was achieved only in the test side, during 3 months. The animals were sacrificed and the second premolars were removed in block and processed for histological analysis. There weren't any differences that were statistically significant among the groups with relation to the total area of osseous filling, biomaterial and linear periodontal regeneration. However, there was a trend of the group to present more osseous amount and less biomaterial amount, besides the dislocation of the biomaterial for the furcation pressure side. The orthodontic movement could be done without intercurrences. Key- words: Periodontics; Guided tissue regeneration; Biocompatible materials; Orthodontic.
Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T19:15:54Z : No. of bitstreams: 1 deliberador_tm_me_araca.pdf: 2630912 bytes, checksum: a0347c4bc88ad360bdf74a6658873848 (MD5)
Universidade Estadual Paulista (UNESP)
O objetivo deste estudo foi avaliar, histologicamente, o processo de cicatrização de defeitos de furca Classe II, criados cirurgicamente em cães e tratados com enxerto de osso autógeno (OA) associado ou não à barreira de sulfato de cálcio (SC). Os segundos, terceiros e quartos pré-molares mandibulares de 6 cães foram usados neste estudo. Defeitos de furca Classe II (5 mm de altura x 2 mm de profundidade) foram criados cirurgicamente e imediatamente tratados. Os dentes foram aleatoriamente divididos em 3 grupos: Grupo C (controle): o defeito foi preenchido somente com coágulo sanguíneo; Grupo OA (osso autógeno): o defeito foi preenchido com enxerto de OA; Grupo OA/SC (osso autógeno/sulfato de cálcio): o defeito foi preenchido com enxerto de OA e coberto com barreira de SC. Os retalhos foram suturados de forma a cobrir totalmente os defeitos. A eutanásia dos animais foi realizada aos 90 dias pós-operatórios. Foram obtidos cortes histológicos seriados mésio-distais, corados com HE ou Tricrômico de Masson. Cinco cortes de cada dente foram selecionados para análises histológica e histométrica. Foram avaliadas medidas lineares e medidas de área da cicatrização periodontal. Esses parâmetros foram apresentados como porcentagem do defeito original e transformados em arcoseno para análise estatística (ANOVA, p < 0,05). A regeneração periodontal ocorreu de forma similar nos três grupos, não sendo observada completa neoformação óssea e de tecido conjuntivo na maioria dos espécimes. Diferenças estatisticamente significativas não foram constatadas entre os três grupos em nenhum dos parâmetros avaliados. A cicatrização periodontal foi similar após o tratamento de defeitos de furca Classe II com enxerto de OA, enxerto de OA com barreira de SC ou debridamento cirúrgico somente.
The purpose of this study was to histologically analyze the healing of surgically created Class II furcation defects treated using an autogenous bone (AB) graft with or without a calcium sulfate (CS) barrier. The second, third and fourth mandibular premolars of 6 mongrel dogs were used in this study. Class II furcation defects (5 mm in height x 2 mm in depth) were surgically created and immediately treated. Teeth were randomly divided into 3 groups: Group C (control): the defect was filled with blood clot; Group AB: the defect was filled with AB graft; Group AB/CS: the defect was filled with AB graft and covered by a CS barrier. Flaps were repositioned to cover all defects. The animals were euthanized at 90 days postoperative. Mesio-distal serial sections were obtained and stained with either H&E or Masson's Trichrome. Histometric, using image analysis software, and histologic analyses were performed. Linear and area measurements of periodontal healing were evaluated and calculated as a percentage of the original defect. Percentage data were transformed into arccosine for statistical analysis (ANOVA, p<0.05). Periodontal regeneration in the 3 groups was similar. Regeneration of bone and connective tissue in the furcation defects was incomplete in most of the specimens. Statistically significant differences were not found in any of the evaluated parameters among the groups. Periodontal healing was similar wheter using surgical debridement alone, AB graft, or AB graft with a CS barrier in the treatment of Class II furcation defects.

Orientador: Elcio Marcantonio Junior
Banca: Joni Augusto Cirelli
Banca: Enilson Antonio Sallum
Banca: Luis Carlos Spolidorio
Banca: Paulo Tambasco de Oliveira
Resumo: Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito de biomateriais associados ao PRP na formação óssea em defeitos padronizados de rádio e avaliar o efeito de PRP+RTG+enxerto ósseo autógeno para tratamento de lesões de furca grau II em cães. Para tal, em um primeiro estudo, foram confeccionados 5 defeitos de 5mm em cada rádio (direito e esquerdo) em 05 cães, constituindo assim espaços para preenchimento com os enxertos ou substitutos ósseos avaliados, totalizando 50 cavidades. Os materiais testados foram DFDBA, vidro bioativo, osso autógeno e osso mineral bovino, associados ou não ao PRP. Estes grupos foram avaliados e comparados com os grupos representados por coágulo sangüíneo e PRP. Ao final de 60 dias, foi realizada biópsia e preparo laboratorial para avaliação histológica e histomorfométrica. Os grupos que apresentaram melhores resultados foram coágulo, PRP e osso autógeno associado ou não a PRP; e a utilização do PRP não promoveu maior formação óssea em relação aos demais grupos, com exceção do vidro bioativo+PRP que apresentou os melhores resultados. No segundo estudo, foram criados cirurgicamente defeitos periodontais de furca nos quartos pré-molares mandibulares, bilateralmente em 5 cães, cronificados por um período de três meses e tratados por PRP/RTG/enxerto ósseo autógeno (grupo experimental) ou RTG/enxerto ósseo autógeno (grupo controle). Quatro meses após o tratamento, os cães foram sacrificados. Na área de furca, houve maior preenchimento ósseo e extensão linear de novo cemento, nova adaptação conjuntiva e regeneração periodontal no grupo experimental (p<0.005) e maior extensão linear de epitélio no grupo controle (p<0.005). A associação do PRP a RTG e enxerto ósseo autógeno proporcionou maior regeneração dos tecidos periodontais. Portanto, o PRP promoveu melhores resultados na formação óssea somente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo).
Abstract: The aims of this study were to evaluate the effect of biomaterials in association to PRP on bone formation, in padronized defects of radius, and evaluate the effect of PRP/GTR/autogenous bone graft in the treatment of Class II furcation lesions in dogs. For that, in a first study, five defects of 5mm each were produced in each radius (left and right) in 5 dogs, so creating spaces to be filled with grafts or the bone substitutes under study, totalling 50 cavities. The biomaterials tested were DFDBA, bioglass, autogenous bone and bovine mineral bone grafts, associated, or not, with PRP. These biomaterials were compared with coagulum and PRP. At the end of 60 days biopsy was done and histological laminas were prepared. Under the experimental condictions, coagulum, PRP and autogenous bone associated or not to PRP presented the best results, with more new bone formation; and no difference was observed between the groups with biomaterials, associated or not with PRP, excepting bioactive glass/PRP which showded the best results. In the second study, periodontal furcation defects were surgically produced bilaterally in the fourth mandibular premolars in 5 dogs, cronified for 3 months and treated with PRP/GTR/autogenous bone graft (experimental group) or GTR/autogenous bone graft (control group). Four months after the treatment, the dogs were sacrified. In the furcation area, more bone filling and linear extension of new cement, new conjunctive adaptation and periodontal regeneration were observed to occur in the experimental group (p<0.005) and more linear extension of epitelium in the control group (p<0.005). The association PRP/GTR/autogenous bone graft was observed to produce more regeneration of periodontal tissues. Therefore, the PRP association showed the best results in bone formation only at bioactive glass group; and... (Complete abstract, click electronic address below).
Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-08-31Bitstream added on 2014-06-13T19:44:16Z : No. of bitstreams: 1 marcaccini_am_dr_arafo.pdf: 3610599 bytes, checksum: 65fbbd0cb1b0657f1b361bf4e461a54e (MD5)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)
Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito de biomateriais associados ao PRP na formação óssea em defeitos padronizados de rádio e avaliar o efeito de PRP+RTG+enxerto ósseo autógeno para tratamento de lesões de furca grau II em cães. Para tal, em um primeiro estudo, foram confeccionados 5 defeitos de 5mm em cada rádio (direito e esquerdo) em 05 cães, constituindo assim espaços para preenchimento com os enxertos ou substitutos ósseos avaliados, totalizando 50 cavidades. Os materiais testados foram DFDBA, vidro bioativo, osso autógeno e osso mineral bovino, associados ou não ao PRP. Estes grupos foram avaliados e comparados com os grupos representados por coágulo sangüíneo e PRP. Ao final de 60 dias, foi realizada biópsia e preparo laboratorial para avaliação histológica e histomorfométrica. Os grupos que apresentaram melhores resultados foram coágulo, PRP e osso autógeno associado ou não a PRP; e a utilização do PRP não promoveu maior formação óssea em relação aos demais grupos, com exceção do vidro bioativo+PRP que apresentou os melhores resultados. No segundo estudo, foram criados cirurgicamente defeitos periodontais de furca nos quartos pré-molares mandibulares, bilateralmente em 5 cães, cronificados por um período de três meses e tratados por PRP/RTG/enxerto ósseo autógeno (grupo experimental) ou RTG/enxerto ósseo autógeno (grupo controle). Quatro meses após o tratamento, os cães foram sacrificados. Na área de furca, houve maior preenchimento ósseo e extensão linear de novo cemento, nova adaptação conjuntiva e regeneração periodontal no grupo experimental (p<0.005) e maior extensão linear de epitélio no grupo controle (p<0.005). A associação do PRP a RTG e enxerto ósseo autógeno proporcionou maior regeneração dos tecidos periodontais. Portanto, o PRP promoveu melhores resultados na formação óssea somente... .
The aims of this study were to evaluate the effect of biomaterials in association to PRP on bone formation, in padronized defects of radius, and evaluate the effect of PRP/GTR/autogenous bone graft in the treatment of Class II furcation lesions in dogs. For that, in a first study, five defects of 5mm each were produced in each radius (left and right) in 5 dogs, so creating spaces to be filled with grafts or the bone substitutes under study, totalling 50 cavities. The biomaterials tested were DFDBA, bioglass, autogenous bone and bovine mineral bone grafts, associated, or not, with PRP. These biomaterials were compared with coagulum and PRP. At the end of 60 days biopsy was done and histological laminas were prepared. Under the experimental condictions, coagulum, PRP and autogenous bone associated or not to PRP presented the best results, with more new bone formation; and no difference was observed between the groups with biomaterials, associated or not with PRP, excepting bioactive glass/PRP which showded the best results. In the second study, periodontal furcation defects were surgically produced bilaterally in the fourth mandibular premolars in 5 dogs, cronified for 3 months and treated with PRP/GTR/autogenous bone graft (experimental group) or GTR/autogenous bone graft (control group). Four months after the treatment, the dogs were sacrified. In the furcation area, more bone filling and linear extension of new cement, new conjunctive adaptation and periodontal regeneration were observed to occur in the experimental group (p<0.005) and more linear extension of epitelium in the control group (p<0.005). The association PRP/GTR/autogenous bone graft was observed to produce more regeneration of periodontal tissues. Therefore, the PRP association showed the best results in bone formation only at bioactive glass group; and... (Complete abstract, click electronic address below).

Tese de Doutoramento em Engenharia de Tecidos, Medicina Regenerativa e Células Estaminais.
The destruction of periodontal tissue as consequence of periodontitis, a prevalent infection of gingiva, is a major clinical issue that ultimately results in teeth loose. Current clinical treatments enable to halt the disease, but the resulting repair outcomes are fairly variable and do not restore the periodontal tissue function. Periodontal tissue engineering aims at regenerating the periodontal wound by: 1) stimulating the self-heling ability of periodontium, providing an optimal combination of cells and biochemical stimuli; 2) providing a stable matrix to drive the regrowth of both soft and hard periodontal tissue; 3) preventing of soft gingival tissue collapse into the periodontal wound. The present thesis proposes the use of structured compartmentalized systems for addressing such requirements and explores the application of platelet lysate (PL), as a new tool in the design of periodontal tissue engineering approaches. Specifically, under this thesis, PL was studied either as a sole source of multiple growth factors involved in periodontal tissue repair/regeneration or as a potential “raw material” for the production of stable constructs with the ability to simultaneously deliver cells and/or growth factors. These various functionalities/hypothesis were assessed in vitro, together with other components of the envisioned bi-layer compartmentalized system, namely hyaluronic acid microspheres developed by a new methodology, that were used as a vehicle for the incorporation of PL in calcium phosphate cement composites (work described in Chapter III, IV and V). Subsequently, the developed materials were assembled as compartments of the bi-layered system, with or without cells, and implanted in relevant animal models to answer fundamental questions regarding the potential of the proposed approaches, specifically concerning its ability to regenerate bone (assessed in Chapter VI) or periodontal wounds (as described in chapter VII and VIII). Finally, in chapter IX, it was assessed the ability of a radially oriented multi-patterned device as a suitable tool for selecting the most adequate topography to be casted in PL based constructs aiming at periodontal therapy. Overall, results obtained under this thesis clearly demonstrate the versatility of PL as a source of bioactive signals prone to orchestrate the healing of periodontal wound. Moreover, the stabilization of platelet-origin proteins over the exposed root surface was proved to be of utmost importance for the predictable regeneration of periodontal tissue. Simultaneously, PL emerged as a potential raw material for the development of multifunctional tissue engineering devices.
A destruição de tecidos periodontais como consequência da periodontite, uma infecção prevalente de gengiva, é um grande problema clínico que pode resultar na perda dos dentes. Os tratamentos clínicos atuais permitem deter a doença, contudo o processo de reparação dos tecidos é bastante variável e não restaura a função do tecido periodontal. A engenharia de tecidos periodontais visa regenerar a ferida periodontal através da: 1) estimulação da capacidade de auto-regenerativa do periodonto, proporcionando uma combinação óptima de células e estímulos bioquímicos; 2) provissão de uma matriz estável que conduza o crescimento de tecidos periodontais moles e duros; 3) prevenção do colapso dos tecidos moles gengivais para a ferida periodontal. A presente tese propõe o uso de sistemas compartimentados estruturados para abordar esses requisitos e explora a aplicação de lisado de plaquetas (PL), como uma nova ferramenta na concepção de abordagens de engenharia de tecidos periodontais. Especificamente, nesta tese, o PL foi estudado quer como uma fonte única de múltiplos factores de crescimento envolvidos na reparação/regeneração do tecido periodontal quer como uma potencial "matéria-prima" para a produção de construções estáveis com a capacidade de libertar simultaneamente células e/ou factores de crescimento. Estas diferentes funcionalidades/hipóteses foram avaliadas in vitro, bem como os outros componentes do sistema compartimentado em bicamada proposto, nomeadamente microesferas de ácido hialurónico, que foram utilizados como um veículo para a incorporação de PL em compósitos de cimento de fosfato de cálcio (trabalho descrito nos Capítulos III, IV e V). Posteriormente, os materiais desenvolvidos foram montados como compartimentos do sistema bi-camada, com ou sem células, e implantados em modelos animais relevantes para responder a perguntas fundamentais sobre o potencial das abordagens propostas, especificamente quanto à sua capacidade de regeneração óssea (avaliados no Capítulo VI) ou de defeitos periodontais (como descrito no Capítulo VII e VIII). Finalmente, no capítulo IX, foi avaliada a capacidade de um dispositivo multi-padrão orientado radialmente como uma ferramenta apropriada para a seleccção da topografia mais adequada para construções à base de PL visando a terapia periodontal. No geral, os resultados obtidos no ambito da presente tese demonstram claramente a versatilidade do PL, como uma fonte de sinais de bioactivos propensas para orquestrar a cura da ferida periodontal. Além disso, a estabilização de proteínas com origem em plaquetas sobre a superfície radicular exposta foi provado ser de extrema importância para a regeneração previsível dos tecidos periodontais. Simultaneamente, PL emergiu como uma matéria prima potencial para o desenvolvimento de dispositivos de engenharia de tecidos multifuncionais.

碩士
亞東技術學院
材料與纖維應用科技研究所
103
The aim of this study is to develop a novel material with fish scale. In this study, the native structure of fish scale was maintained finally. The untreated fish scales were removed film and thinned by purification process. The fish scale film were fabricated at 37 ℃ and 60 ℃ to form film with dense collagen layer structure. Analysis of physical properties with thickness, moisture content, contact angle, mechanical properties, thermal properties, degradation test were performed for fish scale film. The feasibility of periodontal regeneration membrane application was also evaluated through cytotoxicity, cell attachment, cell migration. The results revealed that thickness and moisture content were achieve 351.2 μm and 85.1 %, contact angle were less than 90∘, belong hydrophilic structural materials; then suture tension and tensile strength were 0.033 MPa and 0.059 MPa in average. Cell morphology showed well cell adhesion, growth and division on fish scale film, it revealed that fish scale film provided nontoxic and biocompatible environment for cell growth. WST-8 results indicated cell viability achieve 70% over. It reveals the material is provided with nontoxic and biocompatibility. Cell migration test results indicate cells are no fall in a few days, the reason dense structure makes the cells cannot penetrate. The ultimate degradation achieve 28 days. It’s expected to apply to repair periodontal regeneration membrane.

Please read the abstract in the front section of this document
Dissertation (MChD (Periodontics and Oral Medicine))--University of Pretoria, 2007.
Oral Pathology and Oral Biology
unrestricted

Faculty of Health sciences School of Medicine 0420338r juneteare@yahoo.co.uk
This study, in non-human primates (Papio ursinus), evaluated the healing potential of recombinant human transforming growth factor-3 (rhTGF-3) when implanted in exposed periodontal furcation defects either by direct application to the defect or by transplantation of rhTGF-3-instigated heterotopic bone as source of autogenous bone. Class II furcation defects were surgically created bilaterally in the first and second molars of both the mandible and the maxilla of four clinically healthy adult baboons. Simultaneously, autogenous bone was induced bilaterally within the rectus abdominis muscle of the baboons using rhTGF-3. Forty days later, the periodontal defects were implanted with rhTGF-3 in Matrigel® as delivery system, or rhTGF-3 plus muscle tissue in Matrigel®, or with the harvested rhTGF-3-induced autogenous bone. Sixty days after periodontal implantation, the animals were euthanased and the molars harvested together with the surrounding tissue. Histological analysis was performed by light microscopy and digital imaging computer software. The extent of regeneration was assessed by measuring area and volume of new alveolar bone, height of new alveolar bone and height of new cementum. The results, compared to controls, showed pronounced periodontal tissue regeneration in experimental defects. The most noteworthy healing was observed in defects implanted with heterotopically induced autogenous bone as well as those implanted with rhTGF-3 plus muscle tissue. The findings of this study suggest that rhTGF-3 applied directly to a defect, or rhTGF-3-induced autogenous bone, transplanted to a defect, have significant regenerative capabilities in periodontal tissue regeneration of nonhuman primates Papio ursinus.

The role of tissue engineering in regenerative medicine has been evolving in the past decades, with biomedical technological developments allowing for an increasing number of medical applications. One of such developments has been to combine biomaterials with micropatterning techniques for guided tissue regeneration. In fact, studies have found that using biomaterials with micropatterned surfaces helps promoting cell growth and differentiation. Those results have generated high expectations regarding the treatment of worldwide impactful conditions such as spinal cord injury and periodontal disease. Regarding these progresses and potential, this thesis looked towards assessing the hypothesis of using micropatterned silk fibroin (SF) membranes for applications in guided tissue regeneration. The membranes were produced by solvent casting and micropatterning was made via soft lithography by combining both microcontact printing (μCP) and microfluidic patterning techniques. The first objective was to obtain a controlled micropatterned topography in the SF membranes. Then it was important to characterize the micropatterned materials (MP) and compare their behaviour to non-patterned materials. MP displayed lower wettability, higher thickness and yet behaved equally in terms of mechanical performance. Finally, human derived adipose stem cells (hASCs) and periodontal ligament cells (hPDLs) were seeded on the different membranes to compare their capacity for cell adhesion and organization. Results showed successful adhesion and viability of both cell types to the membrane samples, particularly, in hPDLs samples, although cell organization was not observed in neither samples.
O papel da engenharia de tecidos na medicina regenerativa tem vindo a evoluir nas últimas décadas devido ao desenvolvimento de novas tecnologias para aplicações médicas. De entre tais desenvolvimentos, a combinação entre biomateriais e tecnologias de micro padrões tem vindo a ganhar um papel de destaque na regeneração tecidual orientada. Estudos permitiram apurar que a utilização de biomateriais com superfícies micro padronizadas potencia o crescimento e diferenciação celular. Deste modo, estes resultados têm gerado grandes expectativas em relação ao tratamento de condições de impacto global, tais como lesão medular e doença periodontal (periodontite). Com base neste potencial e progressos científicos, esta tese visou avaliar a hipótese de utilizar membranas à base de fibroína de seda (SF) com micro padrões para aplicação em regeneração tecidual orientada. As membranas foram produzidas através do método de solvent casting e os micro padrões foram conseguidos por soft lithography, combinando as técnicas de microcontact printing (μCP) e microfluidic patterning. O objetivo primário foi a obtenção de uma topografia com micro padrões específicos nas membranas SF. Seguidamente, caracterizaram-se os materiais com micro padrões (MP) e compararam-se com os materiais sem padrão, resultando na observação de menor molhabilidade e maior espessura em MP, porém o comportamento mecânico foi semelhante. Por fim cultivaram-se nas diferentes membranas, células estaminais de derivadas de tecido adiposo humano (hASC) e células do ligamento periodontal humano (hPDL), de forma a tecer a comparação entre as capacidades adesivas e de organização das células nos materiais. Os resultados foram bem sucedidos no contexto da adesão e viabilidade de ambos os tipos de células nas amostras de membranas, particularmente, no caso das amostras com hPDL, porém não foi possível observar-se uma organização bem definida em nenhuma das amostras.

Periodontitis is one of the most common inflammatory diseases and a leading cause of tooth loss in adults, being characterized by progressive destruction of the tooth-supporting apparatus. Guided Tissue Regeneration (GTR) and Guided Bone Regeneration (GBR) procedures were established as basic techniques in periodontal regenerative medicine due to its promising results. These procedures are based, typically, on a membrane, that is placed between the gingiva and the alveolar bone in which the regenerative process will take place. However, the commercial available membranes present limitations at structural, mechanical and biofunctional level demonstrating the need for developing clinically effective materials. In this work a new generation of GTR/GBR membranes is presently being proposed using a natural-based material. Bombyx mori silk fibroin(SF)-based membranes have been developed using glycerol (GLY) and poly (vinyl alcohol) (PVA) as plasticizers to improve the flexibility and enhanceSF stabilization. The developed membranes, designed to be in contact with the gingiva, aim at providing an effective solution for mild periodontitis (the most prevalent form worldwide) by helping to restore the anatomy and function of lost or damaged periodontal tissues. Purified SF solution was mixed with GLYor PVA at weight ratios of 0, 10, and 30%. The membranes were obtained by casting the final solutions into Petri dishes and dried at 85 ºC in the oven for 6 hours some and 12 hours others for further characterization. A comparative study was undertaken using the pure SF membrane as control. The SF-based membranes were characterized in terms of their morphology, physical integrity, chemical structure, mechanical and thermal properties, swelling capability and in vitro degradation behavior. Membranes dried for 6 and 12 hours presented similar aspect and microstructure. Scanning electronmicroscopy (SEM) micrographs suggested that GLY is well distributed in SF matrix while PVA presented phase separation between the two polymers. Atomic force microscopy (AFM) revealed that the surface nanotopography and the average roughness of the SF-based membranes are affected by the exposure time and by the percentage of additive content. Contact angle measurements showed a decrease of water contact angle with GLY and PVA increasing, indicating that the surfaces become more hydrophilic. Attenuated infrared spectroscopy (ATR-FTIR) analysis demonstrated that the thermal treatment induced SF b-sheet conformation for both exposure periods. However, only the membranes dried for 12 hours were water stable for more than 24 hours. These membranes reached equilibrium hydration degree after 3 hours. With the addition of the synthetic polymers, the hydration capacity increased together with the weight loss both in PBS and PBS with enzyme. The mechanical properties revealed that GLY and PVA had a plasticizing effect on the membrane which became more ductile without compromising its mechanical strength. The developed membranes demonstrated to be promising systems to be used in a guided tissue regeneration approach for periodontal regeneration.
A periodontite é uma das doenças inflamatórias mais comuns e uma das principais causas de perda dentária em adultos, sendo caracterizada por uma destruição progressiva das estruturas que suportam o dente. Procedimentos como a Regeneração Tecidular Guiada (RTG) e a Regeneração Óssea Guiada(ROG) foram estabelecidos como técnicas chave na medicina regenerativa periodontal devido aos seus resultados promissores. Estes procedimentos baseiam-se, tipicamente, numa membrana que é colocada entre a gengiva e o osso alveolar onde o processo regenerativo terá lugar. No entanto, as membranas comercialmente disponíveis apresentam limitações a nível estrutural, mecânico e biofuncional demonstrando a necessidade de se desenvolverem materiais clinicamente mais eficazes. Neste trabalho, propõe-se uma nova geração de membranas RTG/ROG utilizando um material de origem natural. Assim, desenvolveram-se membranas à base de fibroína de seda (FS), extraída de casulos Bombyx mori, plasticizadas com glicerol (GLY) e álcool polivinílico (PVA) de modo a melhorara sua flexibilidade e estabilização. As membranas produzidas, desenhadas para estarem em contato com a gengiva, visam fornecer uma solução eficaz para a periodontite moderada (o tipo de periodontite mais prevalente no mundo), ajudando a restaurar a anatomia e a função dos tecidos periodontais perdidos ou lesados. Soluções purificadas de FS foram misturadas com GLY ou PVA em proporções de 0, 10 e 30% em peso. As membranas foram obtidas pelo método de “solvent casting” e secas a 85°C durante 6 e 12 horas para posterior caracterização. Como controlo foi utilizada uma membrana deFS pura. As membranas foram caracterizadas em termos de morfologia, integridade física, estrutura química, propriedades mecânicas e térmicas, capacidade de inchamento e perfil de degradação in vitro. As membranas secas durante 6 e 12 horas apresentaram aspeto e microestrutura semelhante. As micrografias de microscopia eletrónica de varrimento (MEV) sugerem que o GLY está bem distribuído na matriz da FS enquanto o PVA apresenta separação de fases entre os dois polímeros. A microscopia de força atómica (MFA) revelou que a nanotopografia superficial e a rugosidade média das membranas são afetadas pelo tempo de exposição ao tratamento térmico e pela percentagem de polímero sintético. As medições de ângulo de contato mostraram uma diminuição do mesmo com a quantidade crescente de GLY e PVA, indicando que as superfícies se tornam mais hidrofílicas. As análises de espectroscopiade infravermelho com transformada de Fourier demonstraram que o tratamento térmico induziu a conformação “b-sheet” para ambos os períodos de exposição. Contudo, apenas as membranas secas por 12 horas apresentaram estabilidade por mais de 24 horas em água, atingindo o máximo grau de hidratação após 3 horas. Com a adição dos polímeros sintéticos, a capacidade de hidratação aumentou juntamente com a perda de peso tanto em PBS como em PBS com enzima. As propriedades mecânicas revelaram que o GLY e o PVA possuem um efeito plasticizante, tornando as membranas mais flexíveis e dúcteis sem comprometer a resistência mecânica necessária para esta aplicação. As membranas desenvolvidas demonstraram ser sistemas promissores para aplicação em regeneração guiada de tecido periodontal.

Huang, Li.
Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2013.
Includes bibliographical references (leaves 162-194).
Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web.
Abstract also in Chinese.

碩士
國立陽明大學
口腔生物研究所
88
Abstract Periodontitis will result in the destruction of periodontal tissues. Guided tissue regeneration (GTR) procedure is an important part in curing periodontal destruction. This thesis was to investigate periodontal ligament (PDL) cells attachment on Gore-Tex, Resolut XT and BioMend GTR membranes by an in vitro model, and compare the PDL cells attachment on three GTR membranes contaminated with two oral pathogens, Strepotococcus mutants, or Actinobacillus actinomycetemcomitans and incorporated with two different antibiotics, tetracycline or amoxicillin. First of all, we confirmed the osteogenic characteristics of primary PDL cell cultured by applying alkaline phosphatase (ALP) activity assay and von Kossa staining. MTT (3-﹝4,5-dimethylthiazol-2-yl﹞-2,5 diphenyltetrazolium bromide) test was used to analyze the number of cells attached onto GTR membranes. Scanning electronic microscopy (SEM) was also used to observe the morphology of cells and to quantitate the number of cells attached onto GTR membranes. The data indicated that Gore-Tex membrane was the worst substrate for PDL cells attachment. The number of cells attached onto GTR membranes was significantly decreased when GTR membranes were contaminated with S. mutants or A. actinomycetemcomitans. Antibiotic bioassay was used to analyze the amount of antibiotics released from three different membranes incorporated with two different antibiotics. The data indicated that antibiotics could be incorporated and released efficiently from antibiotics-loaded GTR membranes which were prepared by the drop method. Antibiotics-loaded GTR membrane did not affect the cells attachment. The effects of S. mutants or A. actinomycetemcomitans on cellular attachment were reduced on antibiotics-loaded GTR membranes. These findings may provide reference to select and apply GTR membranes and antibiotics for GTR therapy.

碩士
國立陽明大學
臨床牙醫學研究所
90
The aim of guided tissue regeneration (GTR) is to get regeneration of alveolar bone and periodontal attachment. Bacterial contamination of GTR membranes often affects surgical outcomes. Some antimicrobial agents, including antibiotics or chlorhexidine (CHX), are used after surgery. The purposes of this study were to incorporate CHX onto Gore-Tex® membranes, Resolut XT or BioMend® and to observe the attachment of periodontal ligament (PDL) cells on CHX-incorporated GTR membranes at the presence of Actinobacillus actinomycetemcomitans. The effects of CHX on PDL cells and gingival fibroblasts (GF) were examined by MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide) assay or trypan blue staining. The antibacterial effects of CHX on Streptococcus mutans and A. actinomycetemcomitans were detected by the inhibitory zones formed in bacteria-containing agar plates. Ten micrograms/0.8×0.8 cm2 of CHX were dropped on three kinds of GTR membranes. The release of CHX from the membranes was determined. In addition, the attachment of PDL cells on the GTR membranes in the presence of A. actinomycetemcomitans was evaluated by scanning electronic microscope (SEM). The results showed that approximately 12.5~15 μg/ml of CHX solution decreased 50% of viability of PDL cells and GF. The minimal inhibition concentration of CHX to A. actinomycetemcomitans or S. mutans was 4 μg/ml or 2 μg/ml, respectively. Concentration of CHX (0.78、1.56、3.13、6.25 μg/ml) improved attachment of PDL cells on culture plates when A. actinomycetemcomitans was present. CHX was incorporated on GTR membranes, and the release of CHX was about 0.34~0.41 μg (95% confidence interval). The release of CHX was not significantly different among three types of membranes. The numbers of PDL cells attached onto the Gore-Tex® membranes were lower than Resolut XT or BioMend®(p = 0.001).The CHX-incorporated GTR membranes (10μg/0.8×0.8 cm2) did not affect the attachment of PDL cells (p > 0.05). However, A. actinomycetemcomitans reduced the attachment of PDL cells on the GTR membranes (p < 0.0001). CHX-incorporated GTR membranes improved the attachment of PDL cells at the presence of A. actinomycetemcomitans (p = 0.005). The inhibitory effects of CHX on Gore-Tex®, Resolut XT and BioMend® were similar. In conclusion, the study showed that CHX-incorporated Gore-Tex® membranes, Resolut XT and BioMend® decreased the number of A. actinomycetemcomitans on the GTR membranes, and reduces the inhibitory effects of A. actinomycetemcomitans on attachment of PDL cells. High amounts of CHX on the GTR membranes may lead to cellular damage. The information generated in this study provides another possible choice in using antibacterial agents during GTR surgery.

Trabalho final do 5º ano com vista à atribuição do grau de mestre no âmbito do ciclo de estudos de Mestrado Integrado em Medicina Dentária apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra.
ntrodução: A regeneração óssea periodontal é atualmente um objeto de estudo de grande importância na área da Periodontologia, na tentativa de restituir a arquitetura e função dos tecidos periodontais de suporte perdidos, nomeadamente em defeitos periodontais infra-ósseos. Esta modalidade terapêutica tem recorrido à utilização isolada e combinada de diversos biomateriais. Neste sentido, o sulfato de cálcio revela-se como um material com vantagens na terapêutica regenerativa de defeitos ósseos, tais como biocompatibilidade, angiogénese, prevenção do colapso de tecidos vizinhos promovendo assim, uma neoformação óssea. Este material pode ser utilizado isoladamente ou em associação a outros, como por exemplo os xenoenxertos. Objetivo: Avaliar a eficácia do uso do sulfato de cálcio, em monoterapia ou combinado com xenoenxertos, na regeneração de defeitos periodontais infra-ósseos e defeitos de furca. Material e Métodos: Foi realizada uma pesquisa recorrendo às bases de dados primárias: MEDLINE (Pubmed), EBSCO library (EBSCOhost) e a B-on. Os idiomas foram limitados ao Inglês, Português e Espanhol e os limites temporais estabelecidos entre 1998 e 2012 (Maio). Resultados: Foram selecionados 13 artigos, dos quais 2 artigos são estudos animais, 9 artigos são estudos clínicos e 2 artigos são revisões sistemáticas. Conclusão: Perante os resultados obtidos após a avaliação de todos os estudos incluídos, julga-se ser necessário a realização de mais estudos no sentido de evidenciar a eficácia do sulfato de cálcio em defeitos ósseos periodontais, o seu comportamento a longo prazo e as associações de materiais que poderão ser mais efetivas para o sucesso do tratamento. Introduction: The periodontal bone regeneration is currently an important subject in the Periodontology field, in an attempt to restore the architecture and function of support of the lost periodontal tissues, particularly in infrabony periodontal defects. This therapy has appealed to the use of isolated and combined biomaterials. Regarding that, calcium sulfate, has been presented as a material with advantages in the treatment of bone defects, such as biocompatibility, angiogenesis, preventing the collapse of the surrounding tissues, therefore promoting bone formation. This material can be used alone or in combination with others, such as bone-graft substitutes. Objective: To evaluate the efficacy of calcium sulfate, alone or combined with bone-graft substitutes, in the regeneration of periodontal infrabony defects and furcation defects. Materials and Methods: A research was carried out using the primary databases: MEDLINE (Pubmed), EBSCO library (EBSCOhost) and B-on. The language was limited to English, Portuguese and Spanish and the time limits established between 1998 and 2012 (May). Results: Thirteen articles were selected, in which two are animal studies, nine are clinical trials and two are systematic reviews. Conclusion: Given the results obtained after the evaluation of all included studies, it is believed to be necessary to carry out more studies to demonstrate the effectiveness of calcium sulfate in periodontal defects, its long-term behavior and the associations of materials that may be more effective to obtain a successful treatment.

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias
O periodonto é o órgão que envolve e sustenta o dente, sendo constituído pelo osso alveolar que forma o alvéolo dentário, o cemento que envolve a raiz do dente, o ligamento periodontal que estabelece a ligação entre os dois tecidos anteriores formando uma articulação e a gengiva. A periodontite é uma doença inflamatória de elevada prevalência em cães e seres humanos e que, quando não tratada, pode conduzir à esfoliação dentária e colocar em risco a vida do doente devido às manifestações sistémicas decorrentes pela dispersão sanguínea de mediadores inflamatórios e microrganismos patogénicos. Os tratamentos que atualmente se usam para tratar esta patologia revelam-se muitas vezes ineficazes. A Engenharia de Tecidos emergiu, recentemente, como uma potencial terapia alternativa. Esta abordagem consiste no fornecimento de um biomaterial de suporte semeado com células estaminais que visa a regeneração ad integrum da arquitetura e da função biológica do tecido afetado. As células estaminais mesenquimatosas de origem oral e dentária têm a capacidade de regenerar os tecidos periodontais. No entanto, as células provenientes destes locais pressupõem uma morbilidade significativa associada ao local da colheita e possuem um baixo rendimento celular em comparação com fontes não-orais, como por exemplo o tecido adiposo. As células estaminais derivadas do tecido adiposo (ASCs) possuem um grande potencial de aplicação em terapias celulares devido à sua facilidade de colheita e baixa morbidade associada, ao alto rendimento de células isoladas e à capacidade demonstrada para se diferenciarem em inúmeras linhagens celulares. O principal objetivo da presente Tese consistiu no desenvolvimento de uma nova abordagem de Engenharia de Tecidos para o tratamento de defeitos periodontais com base numa matriz biodegradável combinada com ASCs. Partindo do conhecimento de que o cão é o modelo animal mais relevante para estudar a doença periodontal em humanos, pretende validar-se esta estratégia de Engenharia de Tecidos em modelo canino antes da aplicação translacional para a Medicina Humana, sem descuidar nunca que esta doença assume também grande importância na Medicina Veterinária. Tendo isto em consideração, o trabalho desenvolvido nesta Tese teve como principais objetivos:  Otimizar a colheita e o isolamento de ASCs caninas (cASCs) provenientes de diferentes regiões anatómicas e caracterizar a sua estaminalidade e o seu potencial osteogénico em diferentes passagens;  Avaliar a resposta à implantação de cASCs em modelo subcutâneo de murganho saudável;  Desenvolver e caracterizar um material de suporte (scaffold) biodegradável de dupla camada que vise a regeneração de defeitos periodontais;  Avaliar o potencial in vitro do scaffold de dupla camada desenvolvido para uso em Engenharia de Tecidos através da sua cultura com cASCs;  Avaliar a funcionalidade in vivo do scaffold para a regeneração óssea, utilizando um modelo de defeito mandibular em rato. A fim de alcançar os objetivos propostos, numa primeira etapa, as amostras de tecido adiposo canino foram colhidas a partir de duas localizações anatómicas diferentes, a saber, tecido subcutâneo e tecido omental, e o isolamento das cASCs foi posteriormente otimizado. A estaminalidade destas células e o potencial de diferenciação osteogénica foram analisadas ao longo das diferentes passagens através de RT-PCR em tempo real e histologia. Posteriormente, as mesmas cASCs foram xenotransplantadas em murganho, a fim de avaliar a resposta xenogénica do hospedeiro contra as mesmas. Concomitantemente, desenvolveu-se um scaffold composto por uma mistura de amido e poli-ε-caprolactona e compreendendo duas camadas: uma malha tridimensional de fibras (“fiber mesh”) funcionalizadas com grupos silanol para promover a osteogénese ao nível do osso alveolar, e uma membrana obtida por evaporação de solvente com o intuito de atuar como barreira contra a migração de epitélio gengival para o interior do defeito periodontal. Os scaffolds obtidos foram extensivamente caracterizados quanto às suas propriedades mecânicas, ao comportamento de degradação e à eficácia da técnica de funcionalização. De seguida, os scaffolds foram semeados com cASCs a fim de avaliar a funcionalidade in vitro das construções obtidas. Como forma de avaliar a capacidade dos scaffolds desenvolvidos para promover a regeneração óssea, estes foram implantados num defeito circular de tamanho crítico induzido na mandíbula do rato, e a formação de novo osso foi determinada após oito semanas de implantação. Em geral, a estaminalidade e o potencial de diferenciação osteogénica das cASCs decresceu ao longo de passagens. Além disso, demonstrou-se também que a origem anatómica do tecido adiposo tem um efeito significativo nas duas características analisadas. Após a injeção de cASCs num hospedeiro xenogénico (murganho), não foi observada nenhuma resposta inflamatória local exuberante contra as mesmas. A caracterização físico-química do scaffold desenvolvido demostrou que esta matriz apresenta uma morfologia, composição da superfície, comportamento de degradação e propriedades mecânicas adequadas para auxiliar a regeneração periodontal. Os estudos biológicos com cASCs revelaram o potencial que ambas as camadas têm de permitir a adesão e proliferação celular, bem como de promover a diferenciação osteogénica na malha funcionalizada. Nos defeitos mandibulares experimentais, o scaffold funcionalizado com grupos silanol induziu uma maior formação de osso novo em comparação com a membrana comercial de colagénio e com os defeitos vazios. Além disso, a face composta pela membrana evitou o crescimento do tecido epitelial e conjuntivo para o interior do defeito, o qual é um dos requisitos para o sucesso da regeneração guiada de tecidos. Em resumo, este trabalho demonstrou que o tecido adiposo canino fornece uma fonte alternativa de células estaminais com capacidade de diferenciação osteogénica e que estas não induzem uma resposta inflamatória exuberante no hospedeiro xenogénico. Estes resultados, juntamente com o potencial observado do scaffold desenvolvido para acomodar a proliferação e diferenciação das cASCs cultivadas e para promover a regeneração de osso in vivo, permite propor esta construção como uma alternativa às técnicas atualmente utilizadas na regeneração periodontal, tanto no homem como no cão.
Periodontium is the organ which involves and sustains the tooth and it is constituted by the alveolar bone which forms the dental alveolus, the cementum which surrounds the tooth root, the periodontal ligament, which connects them and form a joint, and the gingiva. Periodontitis is an inflammatory pathology highly prevalent in both dogs and humans that, when not treated, can lead to tooth exfoliation and also to life threatening systemic implications due to the blood dispersion of inflammatory mediators and pathogenic microorganisms. The routine clinical therapies currently used to treat periodontal defects are often ineffective. Tissue Engineering has emerged as a valuable alternative approach aiming to regenerate ad integrum the architecture and the biological function of the damaged tissue by providing the repair site with a suitable supportive biomaterial seeded with stem cells. Mesenchymal stem cells from oral and dental origin have the ability to regenerate the periodontium; however, harvesting cells from these sites implies significant local tissue morbidity and low cell yield, as compared to non-oral sources, such as the adipose tissue. Adipose-derived stem cells (ASCs) hold a great potential in cell based therapies for their easiness of harvesting with low morbidity, generating high yields of cells with capacity to differentiate into several lineages. The main goal of this Thesis was to develop a new Tissue Engineering approach for the treatment of periodontal defects, based on an innovative biodegradable supportive matrix combined with ASCs. As the dog is the most relevant animal model to study human periodontal disease and, simultaneously, an important subject in Veterinary Medicine, we envisioned to validate this Tissue Engineering strategy in a canine model prior to the translation of this strategy for human application. With this in mind, the work aimed to achieve the following distinct objectives:  Optimize harvesting and isolation of canine ASCs (cASCs) from different anatomical regions and characterize their stemness and osteogenic potential at different passages;  Evaluate the response to the implantation of cASCs in a healthy mice subcutaneous model;  Develop and characterize a double layer biodegradable scaffold meeting the requirements to achieve different functionalities, targeting regeneration of periodontal defects;  Evaluate the potential of the developed double layer scaffold for Tissue Engineering by culturing it with cASCs,  Assess the in vivo functionality of the scaffold for bone regeneration, using a rat mandibular defect model. In order to achieve the proposed objectives, in a first stage, canine adipose tissue samples were harvested from two different anatomical sites, namely subcutaneous and omental adipose tissue, and the isolation of cASCs was optimized. The stemness and the osteogenic differentiation potential of these cells were analyzed along passages using real time RT-PCR and staining procedures. Subsequently, the same stem cells were xenotransplanted (into a mouse model) in order to evaluate the response of the xenogenic host against the cASCs. Concomitantly, a double layer scaffold made of a blend of starch and poly (ε-caprolactone) was designed, comprising a 3D fiber mesh functionalized with silanol groups to promote osteogenesis and a solvent casting membrane aiming to act as a barrier against the migration of gingival epithelium into the periodontal defect. The obtained scaffolds were extensively characterized regarding their mechanical properties, degradation behaviour and effectiveness of the functionalization. Ultimately, the scaffolds were seeded/cultured with cASCs to assess the in vitro functionality of the obtained constructs. Finally, to assess the ability of the developed scaffold to promote bone regeneration, these were implanted in a circular critical size defected induced in rat mandible, and the formation of new bone was quantified after 8 weeks of implantation. In general, the stemness and osteogenic differentiation potential of the cASCs was found to decrease along increasing passages. Additionally, it was shown that the anatomical origin of the adipose tissue has a significant effect in the osteogenic differentiation ability of these cells. After the injection of cASCs in a xenogenic host (mouse), it was proved that no significant local immunogenic response was detected against them. The physicochemical characterization of the newly developed double layer scaffold showed that this matrix presents a morphology, surface composition, degradation behaviour and mechanical properties suitable for assisting periodontal regeneration. The biological studies with cASCs revealed the potential of both layers to allow cellular adhesion and proliferation, and also to promote the osteogenic differentiation on the functionalized fiber mesh. In the induced mandibular defect, the functionalized scaffold with silanol groups was shown to enhance higher new bone formation in comparison to a collagen commercial membrane and to empty defects. Moreover, the membrane layer was observed to avoid the epithelial and connective tissue ingrowth, which is one of the main requirements for guided tissue regeneration. In summary, this work demonstrated that the canine adipose tissue provides an alternative source of stem cells with the ability to differentiate into different cellular lineages and which do not induce an in vivo inflammatory response in the xenogeneic host. These findings together with the observed potential of the developed scaffold to accommodate the proliferation and differentiation of the cultured cASCs and to enhance in vivo bone regeneration allows to propose this tissue-engineered matrix for periodontal regeneration as an alternative to the techniques currently used in the dentistry field, both in human and in veterinary medical practice.

Trabalho final do 5º ano com vista à atribuição do grau de mestre no âmbito do ciclo de estudos de Mestrado Integrado em Medicina Dentária apresentado à Faculdade de Medicina da Universidade de Coimbra.
São dois os objetivos primários da presente monografia. O primeiro é avaliar a evidência existente respeitante à eficácia de diferentes abordagens regenerativas, em monoterapia, no tratamento de defeitos de furcas, comparativamente ao desbridamento cirúrgico simples, através da realização de uma revisão sistemática da literatura. O segundo objetivo é a documentação de casos clínicos, dando ênfase a algumas abordagens cirúrgicas de regeneração de furcas. Pretende-se proceder a uma análise crítica correlacionando os dados da literatura e o contexto clínico. Para responder à questão “Quais os procedimentos regenerativos mais eficazes comparativamente ao OFD, em doentes com periodontite crónica ou agressiva no envolvimento de furca, considerando um follow-up ≥ 6 meses?”, recorreu-se à base de dados primária MEDLINE e obtiveram-se artigos de revisão, relativos a estudos em humanos, publicados entre 2000 e 2016, em inglês e português. No que diz respeito à abordagem cirúrgica, foram selecionados dois pacientes que frequentavam a consulta de Periodontologia da Área de Medicina Dentária da FMUC. Os critérios de seleção foram os seguintes: indivíduos com periodontite crónica ou agressiva, motivados para o tratamento, com defeitos de furca em molares e que se encontrassem em condições de acesso à fase cirúrgica, nomeadamente um controlo efetivo do índice de placa e do índice de hemorragia. O recurso a regeneração guiada de tecidos, enxertos ósseos e proteínas da matriz de esmalte, individualmente, contribui para melhores resultados clínicos quando comparado com o desbridamento cirúrgico simples. As características radiográficas, no tempo de follow-up selecionado, parecem não ser significativamente diferentes antes e depois da aplicação de técnicas regenerativas. A literatura é escassa no que concerne a resultados histológicos e relativos ao bem-estar e perceção do doente. Relativamente aos casos clínicos, verificou-se uma boa aceitação do procedimento por parte dos pacientes, um adequado conforto e ausência de complicações relevantes no pós-operatório. Em situações de envolvimento de furcas permeáveis com pior prognóstico, parece que a aplicação de materiais de enxerto ósseo possibilita uma alternativa clínica viável, ao proporcionar uma manutenção de espaço, uma boa estabilidade da ferida operatória associada a retalhos de preservação da papila e conforto no pós-operatório imediato dos pacientes. This monograph has two primary goals. The first is the evaluation of the existing evidence regarding the effectiveness of different approaches in regenerative monotherapy in the treatment of furcations defects compared to open flap debridement, by conducting a systematic review of the literature. The second objective is the documentation of clinical cases, emphasizing some surgical approaches of furcation regeneration. It is intended to carry out a critical analysis correlating the literature data and the clinical context. To answer the question "What are the most effective regenerative procedures compared to OFD, in patients with chronic or aggressive periodontitis in the furcation involvement, considering a follow-up ≥ 6 months?", It was used the primary database MEDLINE and were obtained review articles relating to human studies, published between 2000 and 2016, in English and Portuguese. Regarding the surgical approach, it was selected two patients who attended Periodontology consultation of Dentistry Area of FMUC. The selection criteria were as follows: individuals with chronic or aggressive periodontitis, motivated for treatment, with furcation defects in molars and who were in a position to access the surgical phase, including effective control of plaque index and index bleeding. The use of guided tissue regeneration, bone grafts and enamel matrix proteins individually contributes to better clinical results when compared with the simple surgical debridement. The radiographic characteristics, the selected follow-up time were not significantly different before and after the application of regenerative techniques. The literature is scarce regarding the histological results and for the well-being and patient perception. For clinical cases, there was a good acceptance of the procedure by patients, adequate comfort and absence of significant complications in the postoperative period. In furcation involvement situations permeable with worse prognosis, it appears that the application of bone graft materials enable a viable clinical alternative, to provide maintenance space, a good stability of the surgical wound associated with preservation of the papilla and comfort flaps post instant-operative patients.

碩士
高雄醫學大學
牙醫學研究所
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Regarding the cognition and the treatment of Periodontitis, dentists have explored and pursuit for a century since the argument between the over- loading theory and the bacterial etiology. How to release the symptoms of anodontia, Periodontitis, and deficient tooth-space tissue, or even the occlusion disaggregation, and further to cure and preserve the damaged teeth as well as rehabilitate the mouth functions, dentition, and aesthetic have been the difficult problem for dentists in divisions of periodontitis, prosthodontics, orthodontics, and oral surgery. With the dental implant supporting the new supportive units, perio-prosthodontic treatment has been stimulated. The “strategic tooth removal”, the so-called “hopeless tooth”, will be re-evaluated because of the introduction of dental implant. Nevertheless, can dental implant be the body of supporting occlusal loading, provide the periodontitis and trauma occlusion teeth with a structural shelter, and give the “hopeless” teeth a chance to regenerate? In the development of periodontal regeneration technology and materials, the consideration might have provided another opportunity. In this study, nine clinical cases are proposed. From single dental implant and slight periodontitis symptoms to serious periodontitis and large tissue damage, different periodontitis degrees, deficiency of occlusal support, tissue deficiency, tooth mobility and misplace arch and tooth profile are evaluated to make the treatment plan. The goal of remaining to regenerate efficacious abutment teeth is applied to clinic treatments, and clinically effective treatments are looked for. Furthermore, the effectiveness of this kind of treatment is evaluated by the tagging and tracing as well as maintenance treatment.