Academic literature on the topic 'Phagocytose – Réponse immunitaire'

Afin d’étudier les lésions de la microvasculature cérébrale dans la cowdriose, 14 chèvres tanzaniennes ont été infectées par inoculation intraveineuse avec le stock Ball-3 de Cowdria ruminantium. Elles ont été suivies sur le plan clinique pendant la période d’incubation et la réaction fébrile, et sacrifiées lorsque les températures ont commencé à baisser. Cinq chèvres saines ont été utilisées pour déterminer la meilleure procédure pour la fixation du cerveau par perfusion et pour servir de témoins. La perfusion a été effectuée par l’artère carotide sous anesthésie générale au pentobarbitone, utilisant du glutaraldehyde de pH 7,4 à 3 p.100, à 500 mOsm. Des prélèvements de tissu cérébral ont été pris pour microscopie classique et électronique. Des signes variables de désordres du système nerveux central et un hydropéricarde peu important se sont développés chez toutes les chèvres infectées. Deux changements neuropathologiques différents ont été observés : des colonies de Cowdria dans des cellules endothéliales vasculaires, sans autres changements, et des petites infiltrations périvasculaires de cellules mononucléaires. Aucun signe de vasculite ou d’une perméabilité vasculaire anormale n’a été observé. Plusieurs phagocytes périvasculaires renfermaient des inclusions cytoplasmiques inhabituelles, se présentant comme des agrégations de particules irrégulièrement arrondies, associées à une membrane, de 0,25 à 0,4 µm de diamètre, ayant dans quelques cas une structure interne évocatrice de mitochondries partiellement dégradées. Néanmoins, ces agrégations ne semblaient pas enfermées de façon convaincante à l’intérieur de membranes, comme il est à à prévoir en cas d’autophagocytose. Une autre interprétation hypothétique est qu’elles représentent des stades abortifs de C. ruminantium qui tentent de se développer en dehors des vaisseaux et qu’une réponse immunitaire cellulaire, développée pendant et après la période d’incubation, limite ce deuxième cycle dans l’hôte et provoque des infiltrations périvasculaires mononucléaires.

RésuméCet écrit se veut une synthèse des principales trouvailles afférentes aux études de terrain conduites annuellement de 1997 à 2006 en zones intertidales du fjord du Saguenay, et de celles situées autour de sa confluence avec l’estuaire du Saint-Laurent, dans le but de mieux comprendre les stress anthropiques auxquels est soumise la mye commune (Mya arenaria), bivalve ubiquiste de ces habitats sédimentaires. À l’aide d’une batterie variée de biomarqueurs, lesquels ont fait l’objet de mesures chez l’animal entier, certains de ses tissus ou cellules, nous avons pu mettre en évidence divers effets écotoxiques qui sont vraisemblablement imputables aux sources (urbaines, industrielles, portuaires, diffuses ou atmosphériques) de contamination chimique impactant le Saguenay. Dépendant du site et de ses caractéristiques pollutionnelles, nous avons noté des dérèglements de santé chez la mye qui incluent des effets sur son système reproducteur (divers types de perturbation endocrine associés aux substances estrogéniques, aux métaux ou aux TBT), sur son système immunitaire (stimulation ou dépression d’immunocompétence jaugée par la capacité de phagocytose d’hémocytes), ainsi que des effets cumulatifs de polluants qui se traduisent par des réponses, à la hausse ou à la baisse, de biomarqueurs de défenses (e.g., métallothionéines, CYP1A1, glutathione S-transférases), de dommages (e.g., augmentation de brins d’ADN, augmentation de l’activité de cyclo-oxygénase témoignant d’inflammation, peroxydation des lipides) et morphologiques (e.g., inhibition de croissance, baisse d’indice gonado-somatique). Nous démontrons aussi une plus grande dépense en énergie au niveau mitochondrial (transport d’électrons mitochondrial dans la gonade ou glande digestive) chez les myes de zones impactées, laquelle semble pouvoir être exacerbée en conditions de stress thermiques que laissent présager les changements climatiques à venir. Au final, ce bilan d’études de biomarqueurs confirme l’utilité du modèle bivalveMya arenariacomme bio-indicateur de la qualité hydrique du Saguenay et il renseigne sur les divers affronts que subissent ces invertébrés dans ce milieu toujours aux prises avec des sources de contamination variées. D’autres études envisagées affineront nos connaissances au sujet des risques cumulatifs liés à la contamination chimique du fjord.

Le développement des organismes multicellulaires, la morphologie de leurs organes, la formation de connections nerveuses ou même la réponse immunitaire conduisent à la formation de cellules dont la mort a été programmée, ces cellules sont en apoptose. Les corps apoptotiques générés sont éliminés par phagocytose, que l'on peut ainsi considérer comme l'étape ultime du programme apoptotique. Cette élimination, assurée soit par des phagocytes professionnels ou des cellules environnantes est très efficace et peu de cellules en apoptose sont observées dans les différents tissus et organes. Deux familles de protéines, ELMO et DOCK, sont connues pour être au centre d'une voie de signalisation impliquée dans l'activation de la petite GTPase Rac et le remodelage du cytosquelette d'actine permettant l'internalisation de corps apoptotiques, mais la manière dont ELMO est activée par la reconnaissance des corps apoptotique reste largement méconnue. Récemment, ELMO a été identifiée comme cible de la kinase hématopoïétique Hck. La phosphorylation d'ELMO constitue un signal d'activation de la voie de phagocytose. Nous avons pu montrer que les domaines N et C-terminaux d'ELMO sont impliqués dans l'interaction avec le domaine SH3 de Hck. Contrairement au SH3 de DOCK, l'interaction du domaine C-terminal avec le SH3 de Hck est strictement dépendante de la présence du polyproline. Les données obtenues sur les cellules transfectées suggère l'interaction in cellulo du motif polyproline avec le domaine SH3 de Hck. La différence dans le comportement du domaine C-terminal d'ELMO avec les deux SH3 nous a mené à identifier un complexe ternaire entre les trois protéines. Le motif polyproline d'ELMO est adjacent à l'une des 5 tyrosines phosphorylées par Hck, la tyrosine 720, nos résultats montrent que la phosphorylation de cette tyrosine défavorise l'interaction entre le domaine C-terminal et le SH3 de Hck. Cette phosphorylation pourrait être à l'origine d'un effet régulateur de Hck sur le complexe ELMO/DOCK
Multicellular organisms development, tissue organization and morphogenesis, nerve connection network or even immune response lead to programmed cell death or apoptosis. Phagocytosis is the mean for the engulfment of the apoptotic corpses and can thus be considered as the final step of the apoptotic pathway. Both non-professional and professional phagocytic cells are implicated to achieve an efficient clearance of the apoptotic cells and debris, and very little dead cells are actually present in tissues under normal circumstances, preventing secondary necrosis and further inflammation. Two family of proteins, ELMO and DOCK have been identified as major characters in the signaling pathway leading to the activation of the small GTPase Rac, and actin remodeling, that eventually leads to engulfment. Nevertheless, very little is yet known about the upstream events leading to ELMO activation. Recently, ELMO has been characterized as a target for the hematopoietic cell kinase Hck, and consequent phosphorylation participates in ELMO activation. In the course of the present work, we demonstrated that both N- and C-terminal domains of ELMO are binding the SH3 domain of Hck. In contrast with the SH3 domain of DOCK, the SH3 domain of Hck binding to the C-terminal of ELMO is strictly dependent upon the polyproline motif. Our data obtained using transfected cells, further suggest the polyproline dependent interaction also occurs in cells. Taking into account the differential behavior of both SH3 domains from DOCK and Hck we next demonstrated a ternary complex formation between ELMO and both partners in vitro. Finally, we investigated the possible role for the Hck phosphorylation of Y720 located at the edge of the polyproline motif of ELMO and demonstrated that this phosphorylation clearly increases the Kd of ELMO/Hck interaction suggesting this phosphorylation could be part of a regulation loop in Hck dependent ELMO activation

Spiroplasma citri est une bactérie phytopathogène transmise par la cicadelle Circuliferhaematoceps. L'absence de symptômes malgré la multiplication de S. citri dans l'hémolymphe, suggèreque le système immunitaire joue un rôle important dans la tolérance de la cicadelle vis-à-vis duspiroplasme.Le but de cette thèse a donc été d'étudier la réponse immunitaire de C. haematoceps aucours de l'infection par S. citri.Notre étude sur le système immunitaire de la cicadelle a montré la présence dans le plasma d'uneactivité antibactérienne et d'une activité phénoloxidase. Parmi les principaux types d'hémocytes unephagocytose des bactéries par les granulocytes et les plasmatocytes a été observée. Les gènessusceptibles d'être impliqués dans ces processus ont été recherchés par une approche par hybridationsoustractive. De manière étonnante, aucun gènes codant des récepteurs ni d'effecteurs connus del'immunité n'ont été identifiés. En revanche certains gènes (23 en tout) codent des protéines ayantpotentiellement un rôle immunitaire. Six de ces 23 gènes ont été retenus pour suivre leur expressionau temps précoce d'une infection bactérienne. Les résultats ont montré que les gènes codantI'Hexamérine, la DDBPl et la Thiorédoxine peroxydase étaient surexprimés lors de l'infection par 5.citri. Une approche fonctionnelle d'interférence par ARN a montré d'une part que I'Hexamérine étaitimpliquée dans l'activité phénoloxidase et d'autre part qu'elle jouait un rôle important dans la surviede C. haematococeps au cours de l'infection par 5. citri. En parallèle, le suivi de l'activité phénoloxidaseet de la phagocytose au cours de l'infection a montré que 5. citri était capable de s'adapter à laréponse immunitaire de l'insecte et d'y échapper. Ces résultats rejoignent ceux obtenus chez ladrosophile concernant S. poulsonii
Spirop/asma citri is phytopathogenic bacteria transmitted by the leafhopper Circuliferhaematoceps. The absence of symptoms despite the multiplication of S. citri in the hemolymph,suggests that the immune system plays an important role in the tolerance of the leafhopper towardsthe spiroplasma infection. The purpose of this thesis was to study the immune response of C.haematoceps during the infection by 5. citri.The characterization of the immune system of the leafhopper showed that an antibacterial activity anda phenoloxidase activity were present in the plasma. The main types of hemocytes were identified.Among them, granulocytes and plasmatocytes are capable to phagocyte bacteria. The genes involvedin these immune processes were searched using subtractive hybridization method. lnterestingly, noneof the genes known to encode receptors or effectors of the immune system were identified. On theother hand 23 putative immune genes were identified. Six of these genes were retained to follow theirexpression in the early time of a bacterial infection. The results showed that the genes encodingHexamerin, DDBPl and Thioredoxin peroxidase were up-regulated during the infection by 5. citri. Afunctional approach by gene silencing showed that Hexamerin was involved in the phenoloxidaseactivity and played an important role in the survival of C. haematoceps during the infection by S. citri.Finally, the follow-up of the phenoloxidase activity and phagocytosis by hemocytes showed anadaptation and an evasion of S. citri from the immune response of the insect, according to the resultsobtained for 5. pou/sonii-infected drosophila.Keywords : 5piroplasma citri, phenoloxidase, phagocytosis, hemocytes, gene silencing, Hexamerine,subtractive hybridization

Au cours de la réponse immunitaire, la phagocytose est utilisée pour internaliser et dégrader des microorganismes. Elle est induite par l'activation de récepteurs comme les récepteurs Fc (FcR) ou les récepteurs au complément (CR3). Quelle que soit la voie d'activation, la formation du phagosome dépend de réorganisations locales et coordonnées de l'actine corticale, et de la membrane plasmique. Le but de cette étude était d'analyser le rôle dans la phagocytose du cytosquelette de microtubules (MTs) et des protéines associées aux extrémités (+) des MTs (les +TIPs). Nous avons montré que la dynamique des MTs est nécessaire à la phagocytose induite par les récepteurs CR3. De plus, nous avons mis en évidence le recrutement de CLIP-170 dans les coupes phagocytaires et son importance pour une phagocytose efficace, cela indépendamment d'autres +TIP comme EB1 ou EB3. De façon intéressante, inhiber CLIP-170 empêche le recrutement du nucléateur d'actine mDia1 et ainsi la polymérisation d'actine au site de phagocytose. Nous avons observé la formation d'un complexe entre CLIP-170 et la formine mDia1 dans les macrophages, qui est régulé pendant la phagocytose. Parallèlement, nous avons montré l'importance de la protéine pro-inflammatoire Bcl10 en aval des FcR dans la polymérisation d'actine. En conclusion, l'ensemble de ces travaux a permis d'identifier de nouveaux rôles pour CLIP-170 et Bcl10 dans les réorganisations d'actine lors de la phagocytose et une nouvelle coopération entre le cytosquelette de microtubules et d'actine.

Dans l’environnement, les bactéries vivent le plus souvent attachées à une surface, en un mode de vie communautaire pluricellulaire, le biofilm. Pseudomonas aeruginosa est un pathogène humain opportuniste à Gram négatif, responsable d’infections nosocomiales et d’infections respiratoires chez les patients atteints de mucoviscidose. La vie communautaire chez cette bactérie est un moyen de persistance chez l'hôte qu'il colonise et constitue un mécanisme passif ou actif de résistance aux molécules antimicrobiennes. L’établissement de P. Aeruginosa sous forme communautaire est le fait de machineries macromoléculaires, dont la voie « chaperone-usher » (CU). Mon travail de thèse a consisté à caractériser les systèmes CU, CupB et CupC de P. Aeruginosa. Ces deux systèmes sont fonctionnels et assemblent des fimbriae de façon spécifique au travers de leur protéine de membrane externe, le « usher ». Le cluster cupB code pour deux chaperones périplasmiques CupB2 et CupB4 dont nous montrons qu’elles adressent respectivement la piline majeure CupB1 et l’adhésine CupB6 à la protéine usher CupB3. Le cluster cupB code également pour un substrat des systèmes TPS, CupB5 dont la sécrétion est assurée par le « P-usher », résultant de la fusion d’un domaine POTRA et d’un domaine usher. Le « P-usher » est une protéine bi-fonctionnelle capable d’assembler un fimbriae CU et de sécréter un substrat TPS. Le cluster cupB de P. Aeruginosa aurait subi au cours de l’évolution un réarrangement génétique aboutissant à la disparition du gène tpsB et à la création du gène hybride cupB3 codant pour le « P-usher », hypothèse confirmée par la sécrétion de la protéine TPS de P. Aeruginosa par la protéine de membrane externe TpsB de P. Fluorescens présente dans le cluster cupB de cette bactérie. L’étude de ces fimbriae CupB et CupC a montré leur implication dans la formation du biofilm et la réponse de la cellule hôte, plus particulièrement la protéine CupB5 qui joue un rôle dans la phagocytose
In the environment, bacteria live mostly attached to a surface in a sedentary and multicellular community called biofilm. Pseudomonas aeruginosa is a human opportunistic Gram negative pathogen, responsible for nosocomial infections and respiratory infections of cystic fibrosis patients. This bacterial lifestyle represents a strategy to persist in colonized hosts and constitutes a passive or active mechanism of resistance towards antimicrobial molecules. The establishment of P. Aeruginosa in biofilm is due to macromolecular machines of the “chaperone-usher” (CU) family. My thesis work consisted in the characterisation of P. Aeruginosa CupB and CupC systems of the CU family. These two systems are functional and specifically assemble fimbriae through their own outer membrane protein, the usher. The cupB cluster encodes two periplasmic chaperones CupB2 and CupB4, which are respectively responsible for the capture in the périplasme and targeting of the major pilin CupB1 and the adhesin CupB6, respectively, to the CupB3 usher protein. The cupB cluster encodes a TpsA substrate of the two partner secretion system (TPS), CupB5, which secretion occurs through the “P-usher”. The “P-usher” is therefore a bi-functional protein capable of both the assembly of CupB fimbriae and the secretion of CupB5 protein. The “P-usher” results from the fusion of a POTRA domain and of an “usher” domain, highlighting a genetic rearrangement in the P. Aeruginosa cupB gene cluster. This is strongly supported by the restoration of the P. Aeruginosa TPS substrate (CupB5) secretion, in the absence of the “P-usher”, by the introduction of the heterologous TpsB outer membrane protein from the P. Fluorescens cupB cluster. The study of the fimbriae CupB and CupC fimbriae showed their implication in biofilm formation and host cell response, particularly of the CupB5 protein which plays a role in phagocytosis

La majorité des infections débute par contact muqueux et l’administration d’un vaccin au site de pénétration de l’agent pathogène est souvent nécessaire à l’induction d’une immunité protectrice. Notre travail porte sur la conception de vecteurs polymériques microparticulaires chargé avec un antigène d’intérêt, la glycoprotéine purifiée recombinante E2 (rE2) destinés à une vaccination mucosale. Dans ce contexte, nous avons évalué le potentiel vaccinal de la rE2 après microencapsulation au sein de microsphères de copolymères d’acides lactique et glycolique (PLGA) chez le lapin par différentes voies d’administration (intramusculaire, orale et nasale). L’administration nasale engendre une production d’anticorps sériques spécifiques moins variable et plus intense que l’administration orale. Afin d’optimiser l’accessibilité aux cellules immunocompétentes, nous avons étudié l’influence du greffage de différents ligands (WGA, motif RGD, mannose) sur la capture de microsphères de PLGA par des macrophages. Ce travail a montré que le greffage de ligands augmente de manière significative la capture des microsphères. Nous avons également observé l’implication de deux phénomènes simultanés, un phénomène actif, spécifique et un phénomène passif, non spécifique. La contribution relative de chacun de ces phénomènes sur la capture totale est variable selon le ligand et est dépendante du ratio particules/cellules
The majority of infections starts with mucosal contact and the administration of vaccine directly at the site of pathogen entry is often necessary to induce a protective immunity. Our study focused on the design of polymeric microparticles loaded with a purified recombinant glycoprotein E2 (rE2) for mucosal vaccination. For that purpose, we evaluated the vaccine potential of rE2 loaded in PLGA microspheres in rabbits after administration by different routes (intramuscular, oral and nasal). The nasal administration induced the production of specific serum antibodies which is less variable and more significant than after oral administration. To optimize the accessibility to immunocompetent cells, we studied the influence of ligand grafting (WGA, an RGD containing-peptide and mannose-PEG3-NH2) on the rate and intensity of uptake of PLGA microparticles by macrophages. This work showed that ligand grafting enhanced the uptake of microparticles. We also observed the simultaneous presence of two phenomena, i. E. , a specific and a non-specific process. The relative contribution of specific and non-specific processes to the overall uptake varied greatly according to the ligands, and was dependent on the particle-to-cell ratio

Avec un taux de mortalité élevé, le sepsis reste un problème majeur de santé publique. Il résulte d'une dérégulation de la réponse immunitaire face à l'invasion de l'organisme par un pathogène. Ce travail de thèse avait pour but d'identifier de nouveaux acteurs de la régulation de la réponse immunitaire qui pourraient être des cibles thérapeutiques potentielles au cours du sepsis. Au stade précoce de l'infection, la réponse pro-inflammatoire doit être finement régulée afin d'éradiquer l'agent infectieux sans pour autant entraîner de lésions d'organes. Les régulateurs négatifs des Toll-like récepteurs (TLR) jouent un rôle important dans le contrôle de la réponse inflammatoire et de la clairance bactérienne. Nous avons rapporté que l'ionosine monophosphate déshydrogénase II, cible du traitement immunosuppresseur mycophénolate mofétil (MMF), est un régulateur négatif du facteur de transcription NF-kB après activation de TLR2. Le rôle du MMF au cours du sepsis a cependant été très peu étudié. Nous avons infecté en intra péritonéal des souris C57BL/6J par S. aureus, bactérie gram positif qui active TLR2, et les avons traitées avec du MMF (20mg/kg/j pendant 5 jours), dose n'ayant pas d'effet sur les sous-populations lymphocytaires mais augmentant l'activité de NF-kB. Nous avons observé que le MMF améliorait la survie et la clairance bactérienne à J1 de l'infection. Le MMF augmentait également la capacité de phagocytose des macrophages péritonéaux, et diminuait la sécrétion des cytokines pro-inflammatoires. Ces résultats suggèrent que le MMF améliore le pronostic dans notre modèle de sepsis en renforçant la défense anti-infectieuse, évitant ainsi une exacerbation de la réponse inflammatoire. L'intérêt de la régulation de la réponse immunitaire à la phase précoce du sepsis est aussi d'empêcher l'apparition d'un état d'immunosuppression post-infectieuse (ISPI) responsable d'infections secondaires. Plusieurs études suggèrent que cette ISPI, caractérisée par des anomalies quantitatives et fonctionnelles des cellules de l'immunité innée et adaptative, résulte de modifications épigénétiques à type de modifications répressives d'histones induites au moment du sepsis. Nous avons donc fait l'hypothèse que des drogues épigénétiques données au moment du sepsis pourraient moduler l'ISPI. Afin de tester cette hypothèse, nous avons étudié l'effet de la trichostatine A (TSA), inhibiteur d'histone déacétylases (HDACs), dans un modèle murin relevant d'ISPI. Nous avons traité ou non des souris C57BL/6J avec de la TSA (2 mg/kg ip) 30 min avant d'induire un sepsis par ligature et ponction caecale (CLP), puis nous avons réalisé une instillation intra trachéale de P. aeruginosa (2.10^6 UFC) 8 jours après chez les souris survivantes. Alors que le traitement par TSA ne modifiait pas la survie après la CLP, il améliorait la survie et la clairance bactérienne à l'infection secondaire. L'étude des phénotypes cellulaires par cytométrie en flux a permis d'observer que la TSA réduisait significativement la déplétion splénique en lymphocytes T (LT) 8 jours secondaire au sepsis en empêchant leur apoptose à J1 ; La surexpression de PD-1 et de PDL-1 normalement observée au niveau des lymphocytes T au cours du sepsis était aussi inhibée. Sur le plan épigénétique, nous avons observé que la TSA augmentait l'acétylation globale de l'histone 3 dans les LT post-septiques et l'analyse transcriptomique des ces cellules à 8 jours du sepsis à montré que TSA empêchait la diminution de l'expression de gènes impliqués dans la réponse immunitaire induite par le sepsis. Ces résultats suggèrent que les inhibiteurs d'HDACs pourraient limiter le phénomène d'ISPI en empêchant les modifications phénotypiques des cellules T induites par le sepsis. Nos résultats apportent de nouvelles perspectives dans la physiopathologie du sepsis et suggèrent des applications thérapeutiques potentielles
Sepsis remains a leading cause of critical illness and mortality worldwide despite recent advances in supportive care. It has been recently redefined as life-threatening organ dysfunction that is caused by a dysregulated host response to infection. After invasion with a pathogen, the immune response fails to return to homeostasis, thus culminating in a pathological syndrome that is characterized by sustained excessive inflammation and immune suppression. The objective of this thesis was to identify mechanisms of immune response regulation in order to find new therapeutic targets in sepsis. At the early stage of infection, a tight regulation of the pro-inflammatory response is necessary to tip the balance toward efficient phagocytosis while avoiding organ failure. Negative regulators of Toll-like receptors (TLR) signaling pathway play an important role in the control of the pro-inflammatory response that contributes to sepsis-induced tissue injury. Inhibition of these regulators can potentiate NF-κB activation and improve bacterial clearance. We have reported that ionosine monophosphate dehydrogenase II, the target of immunosuppressant drug mycophenolate mofetil (MMF), is a negative regulator of NF-κB after TLR2 activation. Whether low-dose MMF has an impact on survival and on innate immune response in sepsis, with a limited effect in adaptive immunity is unknown. In order to answer to this question, we infected C57BL/6J mice intraperitonealy with 108 CFU of S. aureus, and treated them or not with low dose of MMF (20mg/kg OD during 5 days). We observed that MMF-treated mice exhibited improved survival compared to non-treated ones. MMF treatment also improved local and systemic bacterial clearance leading to a significant cytokines secretion decrease. MMF treatment was associated with improved phagocytosis activity of peritoneal macrophages, suggesting that MMF could improve fatal outcome during S.aureus sepsis by increasing pathogen killing and therefore avoiding tissue injury. At the early stage of sepsis, anti-inflammatory response must also be tightly regulated in order to avoid sepsis-induced immunosuppression (SIIS) that is responsible of fatal secondary infections. Several studies have indicated that immunological defects that define SIIS including quantitative and functional defects of both innate and immune cells, resulted from sepsis-induced epigenetic alterations. Indeed, a shift toward repressive histone modifications is observed in patients with SIIS. We therefore made the hypothesis that epigenetic drugs could prevent SIIS. In order to test this hypothesis, we investigated the effect of trichostatin A (TSA), histone deacetylases (HDACs) inhibitor, in a relevant murine model of SIIS. We treated or not C57BL/6J mice treated with TSA (2 mg/kg ip) 30 min before induction of sepsis by cecal ligation and puncture (CLP) and surviving mice underwent intratracheal instillation of 2.106 CFU of Pseudomonas aeruginosa 8 days after CLP. Whereas treatment with TSA did not change survival after CLP, TSA improved survival and bacterial clearance in the bronchoalveolar lavage after pneumonia. We observed effect of TSA on T-cells was responsible of this phenotype. Indeed, treatment with TSA significantly reduced T-cell depletion 8 days after sepsis by preventing sepsis-induced T-cell apoptosis 1 day after CLP. TSA also prevented sepsis-induced T-cell overexpression of PD1 and PDL-1 one day after sepsis. Histone 3 acetylation was increased in these cells and after transcriptomic analysis 8 days after sepsis, we observed TSA prevented sepsis-induced down-regulation of genes implicated in immune response. These results suggest that HDAC inhibitor could reduce SIIS by preventing sepsis-induced T-cell abnormalities. Our results provide new insights in the pathophysiology of sepsis and suggest potential therapeutic applications

Les nouveau-nés (enfants, ruminants) sont particulièrement sensibles à l’infection intestinale par le parasite Cryptosporidium parvum car leur système immunitaire est encore en cours de développement. Peu de solutions de contrôle existent à ce jour. Il n’existe pas de vaccin et seule une molécule l’Halocur™ possède une AMM pour les veaux mais l’utilisation du traitement est contraignante et il peut présenter une toxicité pour l’animal. Le développement de nouvelles alternatives immunoprophylactiques requiert de mieux comprendre les mécanismes immunitaires mis en jeux lors de l’infection. L’immunité innée joue un rôle prépondérant pour le contrôle de la phase aigüe de l’infection et nous avions montré au laboratoire que les phagocytes mononucléés CD11c+ sont des acteurs déterminant dans le processus protection. Lors de cette thèse nous avons confirmé le rôle des cellules dendritiques (DC) CD103+ en utilisant des souriceaux BatF3-/- chez qui le développement des deux sous-populations CD103+CD11b+ et CD103+CD11b- est altéré au niveau intestinal ce qui rend les animaux beaucoup plus sensibles à l’infection
Newborns (children, ruminants) are particularly susceptible to intestinal infection by the parasite Cryptosporidium parvum because their immune system is still developing. To date, parasite control methods are limited. There is no vaccine and the only molecule which possess a marketing authorization for calves, Halocur ™, presents toxicity at 2 times the therapeutic dose. The development of new immunoprophylactic methods requires better understanding of the immune mechanisms occurring during infection. Innate immunity plays a major role in controlling the acute phase of infection and we previously demonstrated in the laboratory that intestinal mononuclear phagocytes CD11c+ are key players in the protection process. In this thesis, we confirmed the role of dendritic cells (DC) CD103+ using mice BatF3-/- in which the development of the two DC subsets CD103+CD11b+ and CD103+CD11b- is altered in the intestine making these animals more susceptible to infection. This high susceptibility can be partially mitigated by preventive administration of IL-12 to Batf3-/- neonatal mice. Batf3-/- adult mice which are only deficient for the CD103+CD11b- DC subset were transiently susceptible to infection in contrast to conventional mice that are highly resistant

Nous avons mis en évidence la présence des phagocytes exprimant le lysozyme dans les Plaque de Peyer chez l’Homme et montré que, comme chez la souris, elles sont principalement localisées dans le SED et sont distinctes des cDC. Dans un deuxième temps, nous avons étudié dans les PP de souris la fonction des différentes populations de phagocytes nouvellement caractérisées. Nous avons en particulier étudié l’impact de la détection d’un acide nucléique d’origine virale par les phagocytes en utilisant un agoniste synthétique du TLR7 : le R848. Bien que TLR7 soit exprimé par les cellules dérivées de monocytes et les DC plasmacytoïdes mais pas par les cDC, nous avons mis en évidence un processus d’activation rapide des cDC impliquant le TNF. Celui-ci conduit à une migration des cDC depuis les villosités adjacentes au dôme vers les IFR et à une forte augmentation de l’expression du CMH-II, des molécules co-stimulatrices ainsi que des gènes dépendants de l’interféron. L’activation du TLR7 induit également une forte expression de la sous unité p40 de l’IL-12 par les LysoDC et certains macrophages. De manière intéressante, nous avons également observé une forte expression d’IL-12 p40 par les LysoDC et certains macrophages peu de temps après le sevrage. Cela nous a conduits à étudier le rôle de cette cytokine dans la mise en place de la réponse immunitaire mucosale. Notre étude a donc des répercussions sur la compréhension des mécanismes conduisant à la mise en place de la réponse immunitaire mucosale en réponse à l’implantation du microbiote intestinal peu de temps après la naissance
In this study, we first showed that lysozyme expressing cells are found in human PP and share features with their mouse counterpart, such as location and origin. Then, we investigated the behaviour of mouse PP phagocytes upon TLR7 stimulation, using the small synthetic agonist, R848. In PP TLR7 is expressed by monocyte derived cells and plasmacytoid DC, but not by cDC. Nevertheless, TLR7 stimulation triggers a quick activation of cDC. This activation relies on TNF secretion and leads to a massive migration of cDC from the dome associated villi to the IFR and to an increase of MHCII, co-stimulatory molecules and interferon-stimulated gene expression. Stimulation by TLR7 also induces a massive production of IL12p40 by LysoDC and some macrophages. Interestingly, we observed a similar increase of IL-12 p40 production by LysoDC and macrophages shortly after weaning. We thus investigated the impact of Il-12 p40 secretion on the development of the mucosal immune response. Therefore, our study provides clues on the mechanisms involved in the establishment of the mucosal immune response following microbiota colonization

Les adénovirus humains (HAdV) provoquent un large spectre de maladies cliniques chez les patients immunodéprimés et immunocompétents et sont également des outils polyvalents pour le transfert de gènes et la vaccination. L’immunité humorale acquise peut être en partie responsable des réactions indésirables envers les vecteurs AdV révélées dans plusieurs essais cliniques de vaccination. De plus, plusieurs protéines de l'hôte comme le facteur X de coagulation de la souris (FX) ou les immunoglobulines de type G se lient aux HAdV et exacerbent la réponse pro-inflammatoire. L’évaluation des risques précliniques se fait souvent chez la souris, même s’il existe plusieurs différences entre les humains et les souris dans l'interaction avec les HAdV. La liaison de FX aux HAdV active une réponse pro-inflammatoire chez la souris par l'intermédiaire des récepteurs Toll-like 4. Dans un autre scénario clinique pertinent, le complexe immun HAdV (IC-HAdV-C5) induit une activation plus forte de l’inflammasome dans les phagocytes humains que l’HAdV-C5 non complexé, mais par un mécanisme inconnu. Dans ce contexte, j’ai participé à deux études. Premièrement, nous avons étudié le rôle potentiel de FX et de TLR4 dans la réponse innée à l ‘HAdV-C5 en utilisant uniquement des cellules et des protéines d’origine humaine. Nous avons constaté qu'il n'y a pas d’activation de la voie de signalisation via TLR4 chez l’homme en présence de FX-HAdV. De plus, le FX n'a pas affecté la forte réponse immunitaire innée induite par IC-HAdV-C5 dans les phagocytes humains. Deuxièmement, nous avons abordé le mécanisme sous-jacent de l'inflammation induite par IC-HAdV-C5. Nous avons démontré que l‘IC-HAdV-C5 induit la formation de l’inflammasome dans les cellules dendritiques dérivées de monocytes et cela dépend de l’échappement endosomal dépendant de la protéine VI et de l'activation des récepteurs cytosoliques de l’inflammasome. Nos résultats nous aident à mieux comprendre les différences entre les tests précliniques réalisés chez la souris et les essais cliniques réalisés chez l'homme. De plus, cela nous permet de mieux comprendre comment l’immunité préexistante façonne la réponse immunitaire innée face aux HAdV, afin d’améliorer le traitement des maladies liées aux HAdV ainsi que l’efficacité des vecteurs HAdV
Human adenoviruses (HAdV) cause a broad spectrum of clinical diseases in immunocompromised and –competent patients and are also versatile tools for gene transfer and vaccination. Pre-existing humoral immunity may be in part responsible for the adverse responses towards AdV vectors seen in several clinical vaccine trials. Furthermore, a variety of host proteins like mouse coagulation factor X (FX) or immunoglobulin G bind HAdV exacerbate the pro-inflammatory response. Pre-clinical risk assessment is often done in mice, albeit there are multiple differences between human and mice in the interaction with HAdV. The binding of FX to HAdV activates a pro-inflammatory response in mouse via Toll-like receptor 4. In another clinical relevant scenario, immune complexed-HAdV (IC-HAdV-C5) induces more inflammasome activation in human phagocytes than HAdV-C5 alone but by unknown mechanism. In this regard, I participated in two studies. First, we investigated a potential role of FX and TLR4 in the innate response to HAdV-C5 by using only human components. We found that there is no detectable FX-HAdV-TLR4 axis in human and FX did not affect the innate immune response elevated by IC-HAdV-C5 in human phagocytes.Second, we addressed the underlying mechanism of IC-HAdV-C5-induced inflammation. We found that IC-HAdV-C5 induces inflammasome formation in monocyte-derived dendritic cells and this is dependent on pVI-mediated endosomal escape and activation of cytosolic inflammasome sensors. Our findings help us to better understand the differences in preclinical testing in mice and clinical use in humans and how pre-existing immunity shapes the innate immune response to HAdV to improve treatment for HAdV diseases and HAdV vector effectiveness